Дисертації з теми "Voies oncogènes"
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Bachet, Jean-Baptiste. "Récepteurs tyrosine-kinase, voies de signalisation et tumeurs digestives." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2013. http://www.theses.fr/2013VERS0019.
Анотація:
Les récepteurs tyrosine kinase (RTK) sont des pro-oncogènes impliqués dans la pathogénèse de nombreuses tumeurs digestives. Nous avons mené plusieurs travaux de recherche translationnelle et fondamentale sur le RTK KIT et les tumeurs stromales gastro-intestinales (GISTs). Les GISTs avec la delWK557-558 et celles avec une délétion emportant les deux résidus tyrosine de l'exon 11 de KIT semblaient avoir le même pronostique. Les GISTs homozygotes étaient par contre plus souvent malignes que les GISTs hétérozygotes. Les GISTs homozygotes seraient secondaires à une perte d’heterozygotie sans perte de matériel génétique. A partir de lignées cellulaires, nous avons démontré que la biologie de KIT dans les cellules hétérozygotes était plus proche de celle des cellules hémizygotes KIT non muté que des hémizygotes KIT muté. Le statut hémizygote/hétérozygote d'une part et la perte ou non des résidus tyrosine de l'exon 11 de KIT d'autre part étaient associés à des profils d'expression d'ARNm et de miARN spécifiques. Enfin, nous avons pu décrire trois familles avec une mutation germinale de l'exon 13 de KIT et proposer des recommandations pour leur prise en chargeReceptor tyrosine kinases (RTKs) are pro-oncogenes involved in the pathogenesis of many gastrointestinal tumors. We conducted several studies of translational and basic research on the RTK KIT and the gastrointestinal stromal tumors (GISTs). GISTs with delWK557-558 and those with a deletion carrying the two tyrosine residues in KIT exon 11 had the same prognosis. Homozygous GISTs appear more often malignant than heterozygous GISTs. We then reported that homozygous GISTs may be secondary to loss of heterozygosity without loss of genetic material. From cell lines, we demonstrated that the biology of KIT in heterozygous cells was closer to that hemizygous unmutated KIT cells that hemizygous mutated KIT. The hemizygous/heterozygous status on the one hand and the loss or non-tyrosine residues of the KIT exon 11 on the other hand were associated with specific expression profiles of mRNA and miRNAs. Finally, we have described three families with a germline mutation in exon 13 of KIT, and we proposed recommendations for their management
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Cassinat, Bruno. "Etude de l'interconnexion des voies de signalisation du G-CSF avec la voie des récepteurs nucléaires retinoïques : identification de voies synergiques et application à la différenciation de cellules leucémiques." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077045.
Анотація:
L'identification du réarrangement du gène RARα comme en étant le mécanisme moléculaire responsable de la Leucémie Aiguë à Promyélocytes (LAP) a conduit à la première thérapie ciblée visant à réorienter les cellules tumorales vers une différenciation normale, grâce au traitement par l'acide rétinoïque (AR). Alors que nous avions mis en évidence l'existence d'une hétérogénéité de réponse in vitro des cellules de patients LAP à CAR qui corrélait avec une certaine hétérogénéité de réponse clinique, nous avons engagé des travaux dans deux directions complémentaires. -Nous avons participé à une étude montrant que certains types de mutations du gène de fusion PML-RARα sont retrouvés chez des patients de pronostic défavorable. Nous avons également pu montrer que l'analyse de la maladie résiduelle des patients par RT-PCR quantitative pouvait permettre une meilleure détection des patients à risque de rechute. Enfin nous avons montré que la présence de corps d'Auer en grandefréquence dans les cellules LAP au moment du diagnostic était corrélée avec une moins bonne réponse à l'AR et un moins bon pronostic. -Nous avons également tenté de comprendre comment des signaux extracellulaires de deux types différents (signal membranaire venant d'une cytokine comme le G-CSF et signal nucléaire venant de l'AR) pouvaient s'interconnecter et être synergiques pour permettre une différenciation optimale de cellules LAP. En utilisant un modèle de cellules résistantes à l'AR nous avons montré que la voie ERK1/2 est capable de restaurer les fonctions trancriptionnelles de l'AR via le recrutement de RARα, CBP/P300 et d'histones acétylées sur les promoteurs de gènes cibles de l'ARThe identification of RARa gene rearrangement as the molecular origin of Acute Promyelocytic Leukemia (APL) led to the first targeted therapy aiming at reinducing normal differentiation of tumour cells using retinoic Acid (RA). Because we previously identified a level of heterogeneity in in vitro response of patients' cells to the RA induced differentiation which was correlated to the heterogeneity in clinical response, we developed several studies: -we collaborated to a study which allowed to identify certain mutations of the PML-RARα gene in APL patients with an adverse prognostic. We have also shown in another study that the minimal residual disease analysis using quantitative RT-PCR allowed to better identify patients that will relapse. We also demonstrated that a high frequency of Auer rods in APL cells at diagnosis is correlated to a poorer clinical outcome. -We have analysed whether extracellular signalling of 2 different origins (membrane signalling induced by the G-CSF and nuclear signalling induced by RA) may be interconnected and become synergistic to induce the differentiation of APL cells. In a model of APL cells resistant to the differentiation effect of RA we demonstrated that ERK1/2 pathway can restore transcriptional activation by RA via RARα, CBP/P300 and acetylated histone H3 recruitment on RA target gene promoters
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Mahé, Mélanie. "Caractérisation des voies de signalisation des oncogènes FGFR3 muté et FGFR3-TACC3 dans les carcinomes de vessie." Thesis, Paris 11, 2015. http://www.theses.fr/2015PA11T020/document.
Анотація:
Les tumeurs de vessie suivent deux voies de progression tumorale. La voie des carcinomes in situ (CIS) qui progressent pour envahir la membrane basale puis le muscle, et la voie des tumeurs papillaires de bas grade qui progressent peu mais qui récidivent fréquemment. Environ 65% des tumeurs papillaires de bas grade présentent une mutation du gène FGFR3 et récemment des protéines de fusion FGFR3-TACC3 ont été observées dans les tumeurs de vessie (dans 10% des tumeurs invasives). Le rôle oncogénique du récepteur FGFR3 muté et de FGFR3-TACC3 a été démontré in vivo et in vitro. Cependant, les voies de signalisation du récepteur FGFR3 muté ou de FGFR3-TACC3 sont à l’heure actuelle très peu caractérisées. Dans ce contexte, deux approches ont été mises en place pour caractériser ces voies de signalisation. La première s’appuie sur l’étude de la phosphorylation des protéines p38, AKT et ERK1/2 par le récepteur FGFR3 muté (S249C) ou sauvage dans la lignée cellulaire fibroblastique NIH3T3, et a permis d’identifier les protéines p38 et AKT comme activées par le récepteur FGFR3 muté et nécessaire pour induire la transformation cellulaire. L’étude de l’activation de ces deux voies de signalisation a été réalisée dans des lignées cellulaires dérivées de tumeurs de vessie exprimant le récepteur FGFR3 muté ou FGFR3-TACC3 de manière endogène et a montré que leur activation était dépendante de celle du récepteur FGFR3. De plus nous avons montré que les protéines p38 et AKT sont impliquées dans le maintien d’une boucle de rétro-contrôle positive entre FGFR3 et MYC : l’activation de FGFR3 induit une surexpression de MYC qui en retour promeut l’expression de FGFR3. La seconde approche est basée sur une étude visant à identifier les partenaires protéiques de FGFR3 par spectrométrie de masse après immunoprécipitation de celui-ci qui avait été réalisée précédemment au laboratoire. L’analyse des données a permis l’obtention d’une liste de 60 protéines identifiées comme partenaires protéiques de FGFR3 avec une grande confiance. La construction d’un réseau à partir de cette liste n’a pas été possible (trop peu d’interactions existant entre ces protéines), nous avons donc développé un algorithme (PEPPER) en collaboration avec un étudiant en bio-informatique au laboratoire, Rémy Nicolle, pour proposer un réseau de signalisation de FGFR3.Les deux approches mises en place au cours de cette thèse nous ont permis de mieux caractériser les voies de signalisation du récepteur FGFR3. L’identification d’une boucle de rétrocontrôle entre FGFR3 et MYC a permis de mieux comprendre pourquoi le récepteur FGFR3 possède des propriétés oncogéniques, et de proposer les protéines p38 et AKT comme cibles thérapeutiques potentielles pour traiter les tumeurs de vessie exprimant le récepteur FGFR3 altéré. La construction du réseau de signalisation de FGFR3 via PEPPER donne une vue d’ensemble des voies de signalisation de FGFR3 et ouvre de nouvelles pistes à étudierBladder cancer progression can be divided in two main pathways. The pathway of In Situ Carcinoma (CIS) which progress through an invasion of the basement membrane and then the muscle and the pathway of Ta papillary tumors which change little but recur frequently after tumor resection. Approximately 65% of Ta papillary tumors harboring a FGFR3 mutation and recently FGFR3-TACC3 fusion proteins have been observed in bladder tumors (about 10% of bladder tumors). The oncogenic role of the mutated FGFR3 receptor and of the FGFR3-TACC3 fusion protein has been demonstrated in vivo and in vitro. However signaling pathways activated by the mutated FGFR3 receptor or by the FGFR3-TACC3 fusion protein are currently poorly characterized.In this context, two approaches have been developed to characterize these signaling pathways. The first is based on the study of p38, AKT and ERK1/2 phosphorylation by the mutated receptor (S249C) or the wild type receptor in the NIH3T3 fibroblastic cell line. This study allowed identifying p38 and AKT as activated by the mutated FGFR3 receptor. Moreover, activation of p38 and AKT by the mutated receptor is critical for cell transformation. Study of the activation of these two signaling has been realized in human bladder cancer cell lines endogenously expressing the mutated FGFR3 receptor or the FGFR3-TACC3 fusion protein. Moreover, we showed that p38 and AKT are involved in the maintenance of a FGFR3/MYC feedback positive loop: FGFR3 activation induce MYC over expression which in turns promotes FGFR3 expression. The second approach is based on a study whose aim was to identify FGFR3 proteins partners by mass spectrometry after a FGFR3 immunoprecipitation, which has been previously realized in the lab. Data analyze led to the obtaining of a list of 60 proteins identified has FGFR3 protein partners with a high confidence. Construction of a FGFR3 network with this list was not possible (too little interactions existing between these proteins), so we developed an algorithm (PEPPER) in collaboration with a student in bioinformatics in the lab, Remy Nicolle, to propose a FGFR3 signaling network.The two approaches developed during this thesis allowed us to better characterize the FGFR3 signaling pathways. Identification of a FGFR3/MYC feedback loop allowed us to better understand why the altered FGFR3 has oncogenic properties and to propose p38 and AKT as news promising therapeutic targets, to treat human bladder tumors harboring the altered FGFR3 receptor. Construction of the FGFR3 signaling network with the algorithme PEPPER give an overview of the FGFR3 signaling pathways and open new tracks to explore
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Lemaire, Frédéric. "Caractérisation de l'expression génique des tumeurs des voies aérodigestives supérieures : perspectives diagnostiques et thérapeutiques." Paris, Institut national d'agronomie de Paris Grignon, 2004. https://pastel.archives-ouvertes.fr/pastel-00000629.
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Dormoy, Valérian. "Du développement au cancer : implication des voies néphrogéniques dans la croissance du carcinome à cellules rénales humain." Strasbourg, 2010. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2010/DORMOY_Valerian_2010.pdf.
Анотація:
Le cancer du rein est résistant aux thérapies existantes. Des acteurs intervenant dans l’homéostasie peuvent être réexprimés par des cellules cancéreuses. Nous avons recherché ici si la cancérogenèse et la progression tumorale font appel à des voies/marqueurs développementaux. Nos investigations se sont portées spécifiquement sur la voie développementale du sonic hedgehog et par la suite sur le facteur de transcription néphrogénique Lim1. L’accès aux tumeurs humaines et l’exploitation de lignées cellulaires nous a permis d’analyser l’expression de cette voie signalétique et de ce marqueur néphrogénique dans le carcinome à cellules rénales. Des inhibiteurs pharmacologiques ainsi que l’utilisation de transfections de siRNA/cDNA ont été utilisés pour évaluer l’effet in vitro de ces acteurs du développement sur la prolifération et l’apoptose des cellules cancéreuses. La migration a été étudiée par l’utilisation de chambres de Boyden et l’activation/interaction d’autres voies oncogéniques a été recherchée par Western blot. Finalement une approche in vivo a permis une validation pré-clinique du bloquage de ces voies. Nous avons montré que la voie HH et que Lim1 sont réexprimés dans les tumeurs et dans l’ensemble des lignées humaines. Leur inhibition entraine une diminution importante de la prolifération ainsi que de la migration cellulaires. In vivo, une inhibition de la croissance tumorale a été observée en ciblant cette voie et ce marqueur. Le ciblage de voies impliquées dans le développement peut constituer une innovation thérapeutique importante dans le traitement des cancers du rein et pose une pièce supplémentaire dans le puzzle moléculaire des mécanismes cancéreuxKidney cancer remains resistant to therapies. Several genes play essential roles in human development, particularly during nephrogenesis. The concept suggesting that these actors could be expressed by cancer cells has recently emerged. In our studies, we investigated if cancerogenesis and tumor growth in renal cell carcinoma are linked to the developmental pathways. For this purpose, we focussed particularly on the developmental sonic hedgehog pathway, and then on the nephrogenic transcription factor Lim1. The expression of the SHH pathway and of Lim1 in RCC were analysed on RCC cell lines and tumors from human RCC. The proliferative and apoptosis effects of the SHH pathway and of Lim1 on kidney cancer cells were evaluated in vitro. Their involvement in kidney cancer cells migration and invasion were also studied, as well as their interaction with oncogenic pathways by Western blot. Focussed on the description of therapeutical innovation, we used xenografted mice to analyze the effects of the inhibition of these developmental pathways/markers in vivo. Our results demonstrate that the SHH pathway and Lim1 are reexpressed in RCC cell lines and in human tumors. The inhibition of these actors led to a radical decrease of cancer cells proliferation and migration. In vivo, targeting these pathways/markers, that we showed to participate to the regulation of oncogenic pathways, induced a decrease of tumor growth and even marked tumor regression. The developmental pathways implicated in RCC growth could constitute an important therapeutical innovation in the treatment of this cancer, and allow us to put an additional piece in the molecular puzzle of molecular cancer mechanisms
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Denoyelle, Christophe. "La protéine RhoA et ses voies de signalisation : Perspectives d'une nouvelle stratégie thérapeutique dans le traitement des cancers du sein agressifs." Rouen, 2003. http://www.theses.fr/2003ROUES005.
Анотація:
Nous avons montré que les inhibiteurs de l'HMG-CoA réductase (statines) utilisés classiquement en clinique comme hypocholestérolémiant préviennent la formation de géranylgéranylpyrophosphate (GGPP) et réduisent la fixation membranaire (=activation) de RhoA ce qui conduit in vitro et in vivo à l'inhibition de prolifération et d'invasion des cellules agressives de cancer du sein. D'autres mécanismes impliqués dans l'activité anti-cancéreuse des statines (action sur les CDKi, les protéases et Wnt-5a) ont été identifiés au niveau moléculaire en utilisant des micro-puces à ADN. Enfin, nous avons montré que les bisphosphonates, qui ont une bio-disponibilité supérieure à celle des statines, préviennent également la fixation membranaire de RhoA ce qui conduit à une diminution de l'invasion et du chémotactisme des cellules cancéreuses. En conclusion, l'inhibition des voies de signalisation dirigées par RhoA semble être une bonne stratégie pour lutter contre les cancers agressifsWe have shown that HMG-CoA reductase inhibitors (statins) currently used in the treatment of hypercholesterolemia prevent the formation of geranylgeranylpyrophosphate (GGPP) and reduce the membrane localisation (=activation) of RhoA leading to the inhibition of cell proliferation and invasion of aggressive breast cancer cells in vitro and in vivo. Other mechanisms involved in the anticancer activity of statins (action on CDKi, proteases, Wnt-5a) were identified at molecular level using microarray. Finally, we have shown that bisphosphonates, which have a biodisponibility higher than statin, prevent also the membrane localisation of RhoA leading to the reduction of both cell invasion and chemotactic effect of cancer cells. To conclude, the inhibition of RhoA cell signalling pathways seems to be a good strategy to fight aggressive cancers
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Lemaire, Frédéric Jean Laurent. "Caractérisation de l'expression génique des tumeurs des voies aérodigestives supérieures: perspectives diagnostiques et thérapeutiques." Phd thesis, INAPG (AgroParisTech), 2004. http://pastel.archives-ouvertes.fr/pastel-00000629.
Анотація:
Les cancers des voies aérodigestives supérieures (VADS) sont le 5ème cancer le plus commun dans le monde et représentent 780'000 cas nouveaux par an. Malgré des recherches de nouveaux protocoles thérapeutiques la survie à 5 ans des patients n'a pas été significativement améliorée lors des trois dernières décennies. L'utilisation de marqueurs pronostiques individuels est insuffisante à ce jour et les grade histopronostique de la tumeur (TNM, index de différenciation) est à ce jour le seul indicateur pronostique avancé. De manière à générer une collection aussi exhaustive que possible de gènes différentiellement exprimés dans les tumeurs VADS, nous avons analysé le transcriptome de tumeurs hypopharyngées de stade précoce et de stade plus avancé, présentant ou non une propension à la métastase. Nous avons comparé l'expression des gènes pour les tissus tumoraux ainsi que les tissus normaux issus du même patient. La technique du Differential Display (DD), entreprise à grande échelle (56 amorces arbitraires) nous a permis d'isoler une collection de 1'200 gènes potentiellement différentiellement exprimés dans les tumeurs. Un sous-groupe de 70 gènes a été mise en évidence comme différentiellement exprimé avec une sonde complexe (Lemaire et al., 2003). L'étude de la valeur pronostique de l'ensemble de notre collection DD est en cours sur une cinquantaine de patients. La technique du DD a été utilisée de manière à isoler des gènes indépendamment de leur niveau absolu d'expression, afin d'isoler des gènes inconnus ou des gènes-clés, régulateurs exprimés à faible niveau. La technique des puces à ADN Affymetrix (Cromer et al., 2003) a été utilisée de manière à effectuer un criblage supplémentaire essentiellement orienté sur le criblage des gènes connus, pouvant posséder une valeur pronostique. ExonHit Therapeutics SA a mis en oeuvre la technique brevetée DATAS de façon à isoler les transcrits de l'épissage alternatif exprimés dans les tumeurs de différents types tumoraux. La caractérisation de l'expression de 4 gènes favoris (1 sous exprimé et 3 surexprimés dans les tumeurs) a été entreprise par diverses techniques (Virtual Northern blot, Northern blot, PCR, immunocytochimie, hybridation in situ et immunohistochimie). Les séquences codantes de ces gènes ont été clonées dans des vecteurs d'expression pour une caractérisation fonctionnelle par transfection en orientation sens et antisens avec les techniques de FACS, des tests de clonogénicité, et de Western blot. L'étude de ces gènes est poursuivie dans le but d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques.
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Goormachtigh, Gautier. "Etude de LMP1, oncogène majeur du virus d'Epstein-Barr : autorégulation de son expression par les effets antagonistes des voies de signalisation cellulaire JNK et NFkB." Lille 2, 2006. http://www.theses.fr/2006LIL2S011.
Анотація:
Le virus d'Epstein-Barr (EBV) est un herpèsvirus humain qui infecte une très grande majorité de la population mais, ces infections restent, pour la plupart, asymptomatiques. Cependant, la capacité d'EBV à transformer in vitro des lymphocytes B normaux en lignées cellulaires lymphoblastoïdes (LCL), ainsi que sa détection fréquente dans bon nombre de tumeurs humaines, incluant les lymphomes de Burkitt, des patients immunodéprimés, T ou NK, la maladie de Hödgkin et les carcinomes du nasopharynx, de l'estomac ou même du sein, nous montre que ce virus peut également contribuer à certains processus de cancérisation. LMP1 (Latent Membrane Protein 1), une des protéines fréquemment exprimées lors de ces différentes pathologies malignes, a été décrite comme une molécule clé pour la transformation cellulaire et l'effet oncogène d'EBV. Cependant, dans la grande majorité des cancers associés au virus, EBV exprime un programme de latence de type II. Or, aucune preuve directe de l'importance de LMP1 dans des cellules transformées par EBV et présentant une latence de type II n'a été apportée. Dans notre laboratoire, deux lignées celullaires présentant cette latence virale ont été obtenues à partir de cellules sanguines infectées par EBV. Ces cellules sont de deux types : une dérive d'un lymphocyte T (NC5) alors que l'autre est d'origine monocytaire (TE1). Au début de mon travail de thèse, grâce à l'emploi d'oligonucléotides antisens, nous avons pu montrer que la lignée TE1 était dépendante de LMP1 pour sa survie et sa prolifération. Les propriétés oncogènes de LMP1 sont liées à sa capacité d'activer de façon chronique des voies de signalisation cellulaire. En effet, LMP1 est une protéine membranaire fonctionnellement apparentée à la famille des récepteurs du TNF, mais aussi des récepteurs de l'IL-1 et les " Toll-like receptors ". Cette parenté se caractérise par l'utilisation d'adaptateurs (TRAFs, TRADD, RIP. . . ), de médiateurs (IRAK1, TAK1. . . ) et de voies de signalisation cellulaire (NFB, JNK, IRFs. . . ) communes. La région C-terminale (CT) cytosolique de LMP1, via des domaines TES1 (Transforming Effector Site 1) et TES2, permet la fixation de ces adaptateurs et de l'activation de ces voies de signalisation cellulaire. Nous avons développé et caractérisé un mutant dérivé de LMP1 en fusionnant sa partie CT en aval de la proteine fluorescente GFP. Par des approches de transactivation, de co-immunoprécipitation et de microscopie confocale, nous avons démontré que ce mutant LMP1-CT était capable de séquestrer les adaptateurs TRAF et TRADD dans le cytosol et ainsi d'inhiber la signalisation de LMP1. Grâce à de dominant négatif, nous avons pu montrer que notre autre lignée infectée par EBV et présentant une latence de type II (NC5) était, elle aussi, dépendante de LMP1 pour sa survie et sa prolifération. Avec tous ces " outils " cellulaires et moléculaires, nous avons enfin cherché à savoir quelle était l'origine de l'expression de LMP1 lors du programme de latence de type II d'EBV. En effet, lors de cette latence, c'est à dire en l'absence du principal transactivateur viral (EBNA2), le mécanisme responsable de l'expression de LMP1 n'a pas été expliqué. Nous avons tout d'abord étudié la possibilité d'une autoactivation de LMP1 grâce à des cotransfections transitoires en cellules épithéliales (HEK 293). Nous avons alors établi que LMP1 était capable d'activer son propre promoteur via l'induction par le domaine TES2 du module MKK7 de la voie. JNK, mais aussi de l'inhiber via l'induction de la voie NFB. Grâce à l'utilisation d'inhibiteurs pharmacologiques des voies de signalisation NFB et JNK, nous avons également pu conforter ce modèle d'autorégulation sur l'expression endogène de LMP1 dans les cellules TE1 (latence de type II, i. E. Absence d'EBNA2) mais également, dans des LCLs, où EBNA2 est pourtant l'inducteur majeur. De plus, en exprimant de façon inductible le dominant négatif LMP1-CT dans nos lignées NC5 et TE1, nous avons pu mettre en évidence le rôle majoritaire du signal émis par LMP1 pour le maintien de sa propre expression lors des latences de type II d'EBV. En conclusion, cette étude nous a permis de (i) développer des modèles physiologiques de cellules infectées et immortalisées par EBV ayant une latence virale de type II, (ii) d'apporter la démonstration du rôle essentiel de LMP1 lors de cette latence et, (iii) d'expliquer le mécanisme permettant le maintien de son expression lors de cette même latence. Ce travail soulève aussi le problème de l'inhibition pharmacologique de la seule voie NFB lors d'approches thérapeutiques des cancers associés à EBV mais, apporte également des éléments intéressants pour le développement de molécules dérivées de LMP1 pouvant inhiber ses effets.
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Lefevre, Gaëlle. "Identification des voies de signalisation participant à la tumorigénèse du mélanome choroïdien humain : implications thérapeutiques." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077232.
Анотація:
Le mélanome de l'uvée est la tumeur primaire intraoculaire la plus fréquente chez l'adulte. Bien que ce cancer ait une faible incidence, son caractère agressif et l'absence de stratégies thérapeutiques satisfaisantes pour le traiter nous ont poussé à nous intéresser à sa physiopathologie. Nous avons comparé l'expression de 120 protéines dans des mélanocytes uvéaux sains et tumoraux. Cette étude a révélé la dérégulation de la voie ERK. Nous avons confirmé, par des expériences complémentaires, l'importance de cette dérégulation dans l'induction de la prolifération et de la transformation tumorale. Nous avons également identifié deux altérations, au moins, qui sont à l'origine de la suractivation de la voie ERK dans les cellules de mélanomes uvéaux : 1) la présence du mutant B-RafV599E et 2) l'existence d'une boucle autocrine SCF/c-Kit. L'inhibition de cette dernière par le STI571 a d'ailleurs montré des résultats in vitro encourageants en vue d'une éventuelle application thérapeutiqueUveal melanoma is the most frequent intraocular primary tumour in adults. Although this cancer has a low incidence, its aggressive character as well as the absence of current satisfactory therapeutics to treat it lead us to study its physiopathology. We compared the expression levels of 120 proteins in both normal and tumoral melanocytes. We found that the ERK pathway was deregulated. We further confirmed that this deregulation was a major trait in uveal melanoma cells and that it was important for both the proliferation and transformation of these cells. We also identified two alterations responsible for the overactivation of the ERK pathway: 1) the presence of mutant B-Rafv599E and 2) the existence of an autocrine loop of activation by SCF/c-Kit. Inhibition of this latter with STI571 demonstrated promising in vitro results for future therapeutic application
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Medyouf, Hind. "Identification et étude de voies moléculaires oncogéniques dans les lymphomes et leucémies lymphoïdes." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077042.
Анотація:
Au cours de cette étude nous nous sommes intéressé à l'implication potentielle de la serine threonine phosphatase calcineurine, dans le développement des leucémies lymphoïdes. Au cours de ce travail nous avons montré que la calcineurine est activée de façon soutenue dans tous les modèles murins de leucémie lymphoblastique T aiguë étudiés, parmis lesquelles les leucémies induites par le domaine intracellulaire de NOTCH1 ou l'oncoprotéine de fusion TEL-JAK2. Ces modèles sont extrêmement pertinents pour la modélisation des pathologies lymphoïdes humaines. En effet, la dérégulation de la voie de signalisation JAK/STAT a été rapporté dans de nombreux cas de LAL humaines (Leucémies lymphïdes aiguës), et plus récemment, des mutations activatrices de NOTCH1 ont été identifiées chez plus de 50% des patients atteints de LAL-T. Des essais pré cliniques chez la souris, nous ont permis de montrer que l'inhibition in vivo de la calcineurine par la CsA ou le Tacrolimus, deux inhibiteurs de la calcineurine couramment utilisés en médecine humaine en tant qu'agents immunosuppresseurs, induisent l'apoptose des cellules leucémique, la régression rapide des leucémies, et prolonge statistiquement la survie des souris. Par ailleurs, l'expression d'un mutant constitutivement activé de la calcineurine dans les cellules leucémiques les rend plus agressives et favorise la progression tumorale, suggérant ainsi que la calcineurine joue un rôle intrinsèque dans les cellules leucémiques. L'analyse de lignées cellulaires établies à partir de LAL-T ou lymphomes B agressifs humains ainsi que d'échantillons provenant de biopsies de patients atteints de lymphomes B ou T , nous a permis de montrer que la calcineurine est également activée de façon soutenue dans les lymphomes/leucémies lymphoïdes humaines. De plus le traitement de ces lignées cellulaires humaines in vitro par la CsA ou le FK506 inhibe leur prolifération et induit l'apoptose de ces cellules. Ces résultats montrent que l'activation soutenue de la calcineurine est critique pour le maintien du phenotype leucémique, et que son ciblage thérapeutique dans les pathologies lymphoïdes humaines pourrait constituer une nouvelle approche thérapeutiqueIn this study we were interested in evaluating the importance of calcineurin activation, a serine threonine phosphatase, in leukemia développement. We demonstrate that sustained calcineurin activation is observed in ail mouse models of T-cell malignancies tested among which, activated Notchl(ICN1)- or TEL-JAK2-induced T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL). Thèse models are highly relevant to human malignancies. Indeed, deregulation of the JAK/STAT pathway has been reported in a number of ALL, and more recently, it has been shown that activating-mutations of Notchl are found in over 50% of T-ALL patients. We further show that in vivo inhibition of calcineurin activity in these two mouse models by CsA or Tacrolimus, two well known inhibitors of calcineurin currently used in human medicine as immunosuppressant, induced apoptosis of leukemic cells, rapid tumor clearance and signifïcantly prolonged mouse survival. Conversely, ectopic expression of a constitutively activated mutant of calcineurin favored leukemia progression, suggesting that calcineurin plays an intrinsic role in leukemic cells. We extended our study to human samples and human derived cell lines and show that similarly to what is observed in mouse models, ail samples obtained from aggressive B- and T-cell lymphoma patients, as well human leukemia (B and T) derived cell lines exhibit a sustained activation of calcineurin. In vitro treatment of these cell lines with CsA or Tacrolimus impaired their proliferation and induced apoptosis. From these results, we conclude that, calcineurin activation is critical for the maintenance of the leukemic phenotype in vivo, identifying this pathway as a potential novel therapeutic target in lymphoid malignancies
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Marsolier, Justine. "La transformation lymphocytaire bovine induite par Theileria annulata : un modèle unique et innovant pour identifier de nouvelles oncoprotéines et voies oncogéniques." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077083.
Анотація:
Le cancer est une maladie évolutive impliquant la perturbation de voies de signalisation importantes pour le maintien de l homéostasie cellulaire. Il est primordial de comprendre le fonctionnement de ces voies de signalisation afin d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques. Dans ce but, nous disposons d'un modèle de transformation lymphocytaire bovine induite par Theileria annulata, qui est un parasite eucaryote apicomplexe. Suite à l'infection, les cellules sont transformées. Après l'élimination spécifique du parasite, les cellules traitées perdent leurs capacités de prolifération et d'invasion acquises après l infection. L'objectif de ces travaux est de comprendre les mécanismes impliqués dans la transformation cellulaire induite par Theileria. 1- Les gènes de l'hôte : cette étude nous a permis de mettre en évidence que T. Annulata induit l'expression de l oncomiR miR155, qui réprime la traduction de DET1, ce qui permet la stabilisation protéique de c-Jun, qui ne peut plus être ubiquitiné et dégradé via le protéasome. Cette stabilisation de c-Jun permet l'expression continue de miR155, créant une boucle de régulation positive essentielle à la transforamtion des cellules infectées. 2- Les gènes du parasite : à partir du génome séquence de T. Annulata, nous avons identifié une protéine sécrétée par le parasite dans la cellule hôte bovine, essentielle à la transformation cellulaire. Cette protéine, une phospho-spécifique peptidyl prolyl cis-trans isomérase, TaPIN, manipule la machinerie de l'hôte pour induire sa transformation notamment en régulant la stabilité de c-Jun et en participant au « Warburg like effect »Cancer is a progressive disease that involves a chain of cellular and molecular events, which threaten individual survival It is fundamental to understand signaling pathways involved in cancer formation and propagation, to improve treatment of this disease. My projects focused on a bovine disease induced by an eukaryote parasite: Theileria annulata. Parasite infected cells acquire a cancer phenotype. This tumor phenotype is curable with a theilericide, which specifically kills the parasite. I developed two projects aimed at understanding how T. Annulata manipulates the host cell to induce its transformation. 1- Host genes: We found that miR155 was regulated by the parasite. We also identified a new miR155 target: transcripts encoding the DET1 protein, which is involved in targeting c-Jun for degradation by ubiquitination. Thus, miR155 expression leads to DET1 down-regulation, accumulation of the c-Jun protein and activation of the miR155 promoter. This feedback loop is essential for the host cell transformation. 2. Parasite genes: Based on T. Annulata genome analysis, we identified a Peptidyl-Prolyl c/s- trans Isomérase (PPIase): TaPIN, which is secreted in bovine infected cells and plays a role in parasite induced host cell transformation. We then demonstrated that TaPIN interacts with FBW7, a ubiquitin ligase which induces c-Jun degradation via ubiquitination. In parallel, we found that, by stabilizing PKM2, TaPIN up-regulates glycolytic enzymes expression and host cell metabolism leading to a « Warburg like effect ». In conclusion, by targeting two different pathways (overexpression of miR155 and secretion of TaPIN), Theileria induces host cell transformation
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Daubon, Thomas. "Mobilité cellulaire induite par les chimères Bcr-Abl : un nouveau modèle pour l'exploration des voies effectrices des petites protéines G de la famille Rho." Poitiers, 2008. http://theses.edel.univ-poitiers.fr/theses/2008/Daubon-Thomas/2008-Daubon-Thomas-These.pdf.
Анотація:
Les chimères Bcr-Abl sont dues à une translocation réciproque entre les chromosomes 9 et 22, entrainant la fusion des gènes bcr et abl. La seule différence structurale entre p190bcrabl, associé avec la Leucémie Aigue Lymphoblastique, et p210bcr-abl, responsable de la Leucémie Myéloïde Chronique, réside dans le domaine DH/PH présent uniquement dans p210bcr-abl. Nous avons montré précédemment que Rac1 était activée dans les cellules exprimant p190bcr-abl et p210bcr-abl alors que RhoA n’est activé que dans les cellules exprimant p210bcr-abl (Harnois et al. , Oncogene, 2003). Les cellules Ba/F3 parentales ne sont pas spontanément mobiles contrairement aux cellules Ba/F3p210 and Ba/F3p190. Les cellules exprimant p210bcr-abl présentent des mouvements amoeboïdes typiques alors que les cellules exprimant p190bcr-abl utilisent une mobilité de type roulement (rolling-type). Les résultats obtenus en utilisant des mutants des domaines GEF de Vav ou p210bcr-abl nous ont permis de proposer un modèle dans lequel Vav, en complexe avec Bcr-Abl, est responsable à travers l’activation de Rac1 du déclenchement de la motilité des cellules exprimant Bcr-Abl. Le GEF de p210bcr-abl, spécifique de l’activation de RhoA, est indispensable pour la formation des mouvements amoeboïdes dans les cellules Ba/F3, mais ne joue pas de rôle dans le déclenchement de la mobilité spontanée de ces cellules (Daubon et al. , Oncogene, 2008). Nous avons ensuite caractérisé une voie passant par Rac1/PAK1/LIMK1/cofiline1 dans laquelle chaque élément est essentiel pour le déclenchement de la motilité dite rolling-type. Nous avons montré que la voie classique RhoA/ROCK/MLC était seulement partiellement impliquée dans l’induction de la motilité amoeboïde dans les cellules Ba/F3p210. De façon surprenante, nous avons trouvé que RhoA et ROCK1 induisent l’activation de l’isoforme ADF/destrine de la famille des « Actin Depolymerizing Factors », à travers la régulation négative de la LIMK2 au niveau transcriptionnel mais aussi par une dégradation protéasome-dépendante. Cette voie de signalisation originale permet une meilleure caractérisation des mécanismes moléculaires menant aux mouvements amoeboïdes en 3 dimensionsBcr-Abl chimeras are produced by a reciprocal t(9;22) chromosomal translocation that fuses varying amounts of the bcr with the abl genes. The only structural difference between p190bcr-abl, associated with acute lymphoid leukaemia, and p210bcr-abl, responsible for chronic myelogenous leukaemia, resides in a DH/PH domain only present in p210bcr-abl. We previously showed that Rac1 was activated in both p190bcr-abl- and p210bcr-abl-expressing cells whereas RhoA was activated in p210bcr-abl-expressing cells only (Harnois et al. , Oncogene, 2003). Ba/F3 cells were not spontaneously motile in 3D matrigel while Ba/F3p210 and Ba/F3p190 cells moved spontaneously. P210bcr-abl-expressing cells presented typical amoeboid movements in contrast to 190bcr-abl-expressing cells, which showed a rolling-type mobility. The results obtained using mutated GEF domain of Vav or p210bcr-abl allowed to propose a model in which Vav, in complex with Bcr-Abl, is responsible through Rac1 activation for triggering the motility of Bcr-Abl expressing cells. The GEF of p210bcr-abl specific of RhoA does not trigger motility by itself, but RhoA activation is crucial for committing leukaemic cells to amoeboid movements (Daubon et al. , Oncogene, 2008). Bcr-Abl-expressing cells represent then a powerful model to explore the still un-understood amoeboid motility. Then, we characterized a Rac1/PAK1/LIMK1/Cofilin pathway in which each element is critical for triggering the rolling-type motility. We also showed that the classical RhoA/ROCK/MLC pathway was only partially involved in the amoeboid motility of the Ba/F3p210 cells. Surprisingly, we found that RhoA and ROCK1 induced the activation of the ADF/destrin isoform of the Actin Depolymerizing Factor family, through the specific down-regulation of LIMK2 both at the transcriptional level and by proteasome-dependent degradation. This original pathway drives to characteristic amoeboid movements. Taken together, these results on the Ba/F3 cells motility improve the understanding of the molecular mechanisms leading to these 3 dimensional motility modes
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Redon, Richard. "Contribution au modèle génétique de progression tumorale des cancers des voies aéro-digestives supérieures : Application de la technologie des puces à ADN au criblage génomique des tumeurs." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2002. http://www.theses.fr/2002STR13105.
Анотація:
Nous avons mis en évidence par hybridation génomique comparative (CGH) un profil simple et spécifique d'aberrations chromosomiques pour des stades cliniques précoces de cancers VADS, qui n'implique de manière récurrente que les chromosomes 3, 8 et 11. Le déséquilibre chromosomique le plus fréquent est le gain partiel ou total du chromosome 3q, détecté dans 67 % des cas. Dans la région consensus de gain 3q26-qter, deux oncogènes candidats émergent de la littérature par leurs fonctions liées à la cancérogenèse : PIK3CA en 3q26 et p63 en 3q28. Nous avons montré, par RT-PCR quantitative, que seules des tumeurs ayant un gain en 3q26 présentent une sur-expression significative de PIK3CA par rapport à des tissus normaux alors que p63 est fortement exprimé dans la majorité des tumeurs, indépendamment du nombre de copies du locus 3q28. PIK3CA, contrairement à p63, semble donc participer à la progression des tumeurs VADS en conséquence d'un gain en 3q. Afin de cartographier à haute résolution les amplifications en 3q dans les cancers VADS, nous avons mis en place au laboratoire une méthode développée récemment, la CGH-array. Nous avons détecté par cette méthode une amplification de haut niveau et de petite taille en 3q25. 3 dans une lignée cellulaire de cancer VADS. Nous avons montré, sur puce d'ADNc et par RT-PCR quantitative, que 4 gènes amplifiés en 3q25. 3 sont sur-exprimés en conséquence dans cette lignée. Seul un de ces gènes, cyclin L, est également sur-exprimé de façon significative dans une population de 20 tumeurs primitives comparées aux tissus normaux correspondants. Ce gène code pour une cycline potentiellement impliquée dans l'entrée en cycle cellulaire. Nous proposons donc cyclin L comme candidat à la fonction d'oncogène dans les cancers VADS. Notre résultat illustre l'intérêt de l'analyse simultanée des génomes et des transcriptomes tumoraux sur puces à ADN pour isoler de nouveaux oncogènes candidats, amplifiés et sur-exprimés dans les cellules néoplasiques.
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Synnott, Geneviève. "Mode d'action antiprolifératif des Nutlins dans les cellules tumorales et son application dans l'évaluation des mécanismes de contrôle du cycle cellulaire et des voies de signalisation de p53." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24146/24146.pdf.
Анотація:
La protéine MDM2 lie la protéine suppresseur de tumeur p53 avec une grande affinité et module négativement son activité. Les Nutlins peuvent lier MDM2 en bloquant le compartiment de liaison pour p53 et ainsi activer la voie de p53 dans les cellules cancéreuses, menant à l’arrêt du cycle cellulaire et à l’apoptose. L’effet cytotoxique de la Nutlin a été confirmé dans différentes lignées tumorales du colon (HCT-116) portant un gène p53 sauvage, tandis qu’aucun effet n’est observé dans les cellules p53-/-. La Nutlin révèle un effet d’inhibiteur intermédiaire dans le clone HCT-116 p21-/-. Des analyses par FACS indiquent que la surexpression de p21 médiée par p53 active les voies pro-apoptotiques, tandis que l’action p21-indépendante du suppresseur de tumeur p53 détermine la mort cellulaire via la nécrose. La plupart des lignées cancéreuses traitées avec la Nutlin subissent un arrêt du cycle cellulaire en phases G1+G2. Cependant, un des clones HCT-116 montre un arrêt en phase G1. Des analyses par microarray ont été exécutées afin d’élucider les mécanismes moléculaires de l’action antiproliférative et cytotoxique de la Nutlin. Différents gènes impliqués dans le contrôle du cycle cellulaire et la prolifération cellulaire sont sous-exprimés, alors que certains gènes de la voie pro-apoptotique p53 sont sur-exprimés. La comparaison de l’expression génique des cellules HCT-116 bloquant en G1+G2 avec celles bloquant en G1 a indiqué une implication possible de plusieurs gènes régulateurs du cycle cellulaire. Nos résultats confirment le fort potentiel thérapeutique de la Nutlin pour les tumeurs préservant une p53 de type sauvage.
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Hussenet, Thomas. "Toward the identification of oncogenes by high resolution mapping of gene amplifications of the 3q25-qter region in malignant fibrous histiocytoma and squamous cell carcinoma." Strasbourg 1, 2005. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2005/HUSSENET_Thomas_2005.pdf.
Анотація:
L’approche de clonage positionnel a été appliquée à la cartographie haute résolution des aberrations du chromosome 3 dans différents types tumoraux afin d’identifier de nouveaux candidats oncogènes du bras long du chromosome 3 (3q), amplifiés et sur-exprimés en conséquence. Une première partie a été dédiée aux Fibro-Histiocytomes Malins (MFH). Des amplicons chevauchants du locus 3q28 ont été caractérisés dans une lignée cellulaire et deux tumeurs de MFH. A ce locus, nous avons identifié un oncogène candidat, hsa-miR-28, codant pour un microARN ainsi que trois de ses cibles, impliquées dans la régulation du cycle cellulaire. Une seconde partie concerne les carcinomes épidermoïdes (SCC). Nous avons analysé les aberrations du chromosome 3 dans 25 SCC du poumon par hybridation génomique comparative sur puces à ADN (CGH array) et défini une région consensus de 2 Mb au locus 3q26. 3 amplifiée à haut niveau dans 20% des cas. L’analyse des conséquences transcriptionnelles pour 9 gènes a montré que la plupart sont sur-exprimés de manière récurrente mais deux, SOX2 et SOX2OT, représentent vraisemblablement les cibles des amplifications du locus. Nous avons également isolé le gène cyclin L1 au locus 3q25. 3 comme oncogène candidat dans les SCC des Voies Aéro-Digestives Supérieures (VADS). Le nombre de copies du gène est très fréquemment augmenté dans ces tumeurs et le gène surexprimé. Finalement, nous avons caractérisé par CGH array différentes amplifications du 3q dans une série de 25 SCC des VADS, définissant une région commune avec les SCC du poumon suggérant ainsi que des gènes similaires du locus 3q26. 3 sont impliqués dans les SCC indépendamment de leur localisation. En conclusion, nous avons isolé sur le bras long du chromosome 3 différents candidats oncogènes dans plusieurs types tumoraux, ce qui illustre la puissance de l’approche de clonage positionnel appliquée aux génomes tumoraux. Des travaux sont encore nécessaires pour vérifier leur statut oncogéniqueThis thesis work specifically applied the positional cloning strategy to the high resolution mapping of chromosome 3 aberrations in different tumour types to identify new candidate oncogenes located at 3q, amplified and consequently over-expressed. A first part was dedicated to Malignant Fibrous Histiocytomas (MFH). We first characterized overlapping amplicons at 3q28 in a MFH cell line and two other MFH primary tumours. From this region, we identified a microRNA encoding gene, hsa-miR-28 as an oncogene candidate and further identified three targets of miR-28 which all play roles in cell cycle regulation. A second part was dedicated to Squamous Cell Carcinoma (SCC). We analyzed chromosome 3 aberrations in a series of 25 lung SCC using array CGH and delineated a common region of high-level amplifications at 3q26. 3 for 20% of the tumours. Further high-resolution mapping pinpoint a 2 Mb consensus region. Analyses of the transcriptional consequences of these high-level amplifications were carried out for 9 genes. Most of them are recurrently over-expressed but two, SOX2 and SOX2OT, likely represent the 3q26. 3 amplification driver genes. Our strategy also enabled us to isolate cyclin L1 (CCNL1) gene at 3q25. 3 as a candidate oncogene in head and neck SCC (HNSCC). Investigations of CCNL1 gene alterations in a large series of HNSCC revealed consistent copy number gains and over-expression. Using array CGH we finally delineated several high-level amplifications at 3q in a series of 25 analyzed HNSCC, defining a common region overlapping with the consensus region defined for lung SCC thus suggesting that similar genes at 3q26. 3 may be involved in SCC pathogenesis independently of the localization. In conclusion we were able to isolate several candidate oncogenes located at 3q in different tumour types, illustrating the power of the positional cloning strategy applied to tumour genomes. Further investigations are needed to assess their oncogenic status
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Ambroise, Gorbatchev. "Caractérisation de nouvelles voies régulant l’expression et l’activité des protéines Mcl-1 et PUMA." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015SACLS079/document.
Анотація:
Le cancer est un problème majeur de santé public, tuant chaque année plusieurs millions de personnes. L’inhibition de la mort cellulaire programmée, l’apoptose, est considérée comme l’un des paramètres principaux impliqués dans son initiation et son développement. La régulation de la voie intrinsèque (mitochondriale) de l’apoptose est régulée par la famille Bcl-2. Jusqu’à maintenant, on pensait que la protéine PUMA, une protéine pro-apoptotique, était principalement exprimée au niveau mitochondrial. Nous avons montré qu’à l’état basal, PUMA était exprimé au niveau du cytosol des lymphocytes B humains. Cependant, suite à un signal apoptotique, PUMA est capable de transloquer du cytosol à la mitochondrie, de façon indépendante des caspases mais dépendante de l’activation de la MAPKinase p38, permettant ainsi son interaction avec les protéines anti-apoptotiques Bcl-2 et Mcl-1 dont l’inhibition conduit à l’apoptose. Les protéines anti-apoptotiques, Mcl-1 notamment, sont souvent surexprimées dans les tumeurs. Mcl-1 est une protéine à courte demi-vie, rapidement dégradée par le protéasome. Cette dégradation dépend de son ubiquitination réalisée par des E3 ligases (E3). Quelques E3 et une déubiquitinase (DUB), hydrolysant les chaînes d’ubiquitine, régulant l’expression de Mcl-1 ont été décrites. Cependant, ces protéines sont soit très peu exprimées, soit leur inhibition n’a pas d’impact sur l’expression de Mcl-1 dans notre modèle. Nous avons donc entrepris de caractériser de nouvelles E3 et DUB régulant l’ubiquitination de Mcl-1. Après une immunoprécipitation de Mcl-1 dans nos cellules, suivie d’une analyse par spectrométrie de masse, nous avons identifié la DUB USP14. Lorsque son expression est diminuée, l’expression et la stabilité de Mcl-1 augmentent de façon sélective. Nos résultats pourraient contribuer à une approche à double-tranchant dans le traitement du cancer, en retirant les freins à l’apoptose via une diminution de l’expression de Mcl-1 d’une part et en l’activant via PUMA de l’autreCancer is a major public health issue, killing millions of people worldwide each year. The inhibition of apoptosis, a programmed cell death, in its onset and development has been well documented, making it one of the hallmarks of cancer. The regulation of the intrinsic (mitochondrial) pathway of apoptosis is regulated by the Bcl-2 (B cell lymphoma-2) family. Up until now, PUMA, a pro-apoptotic protein, was thought to be mainly expressed at the mitochondria, based on experiments where it had been overexpressed. We showed that endogenous PUMA is mainly expressed in the cytosol of activated or resting B cells. However, upon apoptotic stress, PUMA was able to translocate from the cytosol to the mitochondria, in a caspase-independent but p38-dependent manner, allowing PUMA to bind and inhibit the anti-apoptotic proteins Bcl-2 and Mcl-1, and thereby leading to cell death. The anti-apoptotic proteins, especially Mcl-1, are often overexpressed in tumors. Mcl-1 is a protein with a short half-life, degraded rapidly by the proteasome. This degradation is ubiquitin-dependent, requiring E3 ligases (E3). A handful of E3s and one deubiquitinase (DUB), that hydrolyses the ubiquitin chains, have been reported to regulate Mcl-1 expression. However, they were either very poorly expressed or their inhibition had no impact on Mcl-1 expression in our model. We thus undertook to characterize new E3s and DUBs mediating Mcl-1 ubiquitination. After an immunoprecipitation of Mcl-1 in our cells, followed by a mass spectrometry analysis, we identified the DUB USP14. When knockdown, Mcl-1 expression was selectively increased and its stability enhanced. Our results could help build “double-edge” therapies, removing the breaks on apoptosis on one hand via Mcl-1 downregulation while activating it on the other via PUMA translocation
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Yassine, May. "Analyse de l'intérêt pronostique du profil moléculaire dépendant de la sortiline nucléaire dans le cancer de poumon." Electronic Thesis or Diss., Limoges, 2023. http://www.theses.fr/2023LIMO0099.
Анотація:
La sortiline, une glycoprotéine de la famille Vps10, est largement reconnue pour son rôle déterminant dans le tri des protéines. Cependant, son double rôle en oncologie, tantôt promoteur, tantôt suppresseur de tumeurs, a suscité de nombreux débats. Dans le cadre du cancer du poumon non à petites cellules (NSCLC), et plus précisément de l’adénocarcinome (LUAD), une corrélation inverse a été observée entre l'expression de la sortiline et la croissance tumorale ainsi que la gravité de la tumeur. Identifiée comme un nouvel inhibiteur membranaire, la sortiline pourrait remodeler le trafic de l'EGFR. Elle offre une voie prometteuse pour limiter la signalisation proliférative et contrecarrer la résistance aux inhibiteurs de l'EGFR, spécialement dans les NSCLC porteurs de mutations de l'EGFR. Cette perspective suggère son implication majeure dans la modération de l'agressivité des tumeurs. Devant l'absence de données concernant la localisation nucléaire et le rôle de la sortiline à ce niveau, notre équipe a mis en lumière une colocalisation de celle-ci avec l’EGFR dans le noyau. De plus, une interaction avec la chromatine et une compétition de la sortiline avec l'EGFR ont été observées sur les sites d'initiation de la transcription (TSS) des gènes ciblés par l’EGFR. Ceci pointe vers une influence potentielle de la sortiline sur la transcription génique, notamment par son intervention dans le recrutement de l'ARN polymérase II. Dans la présente étude, nous montrons que la sortiline joue un rôle nucléaire bien plus prépondérant que ce qui était précédemment admis, ce qui complète son rôle connu de suppresseur de tumeurs. Nos analyses transcriptomiques, menées sur des lignées de LUAD, ont révélé que la sortiline régule à la baisse un vaste ensemble de gènes impliqués dans des voies oncogéniques, outre les gènes cibles de l’EGFR. Ce rôle semble être intrinsèquement lié à la régulation de la transcription de l’ADN et à l'organisation chromatinienne orchestrée par la sortiline. La sortiline serait aussi capable de s'associer à des protéines clés impliquées dans ces mécanismes au niveau du noyau. Ces résultats remettent en question la vision traditionnelle de la sortiline, qui dépasse désormais le simple cadre du tri protéinique. Ils mettent en lumière ses fonctions variées dans diverses tumeurs. Plus encore, la sortiline se profile comme une cible thérapeutique d'intérêt pour élaborer des stratégies innovantes contre le LUADSortilin, a glycoprotein of the Vps10 family, is widely recognized for its key role in protein sorting. However, its dual role in oncology, as either tumor promoter or tumor suppressor, has given rise to much debate. In non-small cell lung cancer (NSCLC), and more specifically in adenocarcinoma (LUAD), an inverse correlation was observed between sortilin expression and tumor growth, as well as tumor grade. Identified as a novel membrane inhibitor, sortilin promises to remodel EGFR trafficking. It provides a promising pathway for limiting proliferative signaling and counteracting resistance to EGFR inhibitors, especially in LUAD with EGFR mutations. This perspective suggests its major involvement in moderating tumor aggressiveness. In the absence of data concerning the nuclear localization and role of sortilin at this level, our team has highlighted its colocalization with EGFR in the nucleus. Furthermore, sortilin interacted with chromatin and competed with EGFR at the transcription initiation sites (TSS) of EGFR-targeted genes. This points to a potential influence of sortilin on gene transcription, notably through its involvement in the recruitment of RNA polymerase II. In the present study, we show that sortilin plays a much more prominent nuclear role than previously recognized, adding to its known role as a tumor suppressor like. Our transcriptomic analyses, carried out in LUAD lines, revealed that sortilin down-regulates a large set of genes involved in oncogenic pathways, in addition to EGFR target genes. This role appears to be intrinsically linked to the regulation of DNA repair, transcription and chromatin organization orchestrated by sortilin. Sortilin would also associate with key proteins involved in these mechanisms at the nuclear level. These results challenge the traditional view of sortilin, which extends beyond the simple framework of protein sorting. Its highlight its varied functions in various tumors. Moreover, sortilin is emerging as a therapeutic target of interest for developing innovative strategies against LUAD
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Vasseur, Romain. "Etude de la régulation de la mucine MUC4 par l’oncogene K-ras dans le cancer du pancréas." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S051/document.
Анотація:
L’oncogène K-ras est une petite GTPase de la super famille RAS, fréquemment impliquée dans les cancers, en particulier celui du pancréas, l’un des plus mortels dans les pays occidentaux. Les mutations de l’oncogène K-ras sont considérées comme l’un des événements initiateurs de la cancérogenèse pancréatique et son activité oncogénique est un élément indispensable à la progression tumorale. Cependant, le ciblage thérapeutique de K-ras reste inefficace, à ce jour. Se focaliser sur les cibles précoces de son activité oncogénique semble ainsi être une stratégie alternative intéressante. La mucine membranaire MUC4 est une glycoprotéine de haut poids moléculaire fréquemment dérégulée dans les cancers. Dans le cancer du pancréas, MUC4 est néo-exprimée dès les stades prénéoplasiques et est impliquée dans les propriétés biologiques permettant la progression tumorale et la chimiorésistance. La régulation de MUC4 par K-ras dans la cancérogenèse pancréatique reste à décrypter. En utilisant le modèle murin de cancérogenèse pancréatique Pdx1-Cre; LStopL-K-rasG12D, nous avons mis en évidence que la néo-expression précoce de la mucine Muc4, dans les lésions pancréatiques prénéoplasiques intraépithéliales (PanINs) formées suite à la présence du K-ras muté, est corrélée avec l’activation des voies de signalisation ERK, JNK and NF-κB. In vitro, la transfection de mutants constitutivement activés de K-rasG12V dans les cellules tumorales humaines induit une augmentation de l’expression de MUC4. Cette activation intervient au niveau transcriptionel par le recrutement des facteurs de transcription AP-1 et NF-κB via les voies MAPK, JNK and NF-κB et au niveau post-transcriptionel par un mécanisme impliquant la RalB GTPase. Ensemble, ces résultats démontre que MUC4 est une cible transcriptionelle et post-transcriptionelle de l’activité oncogénique de K-ras dans le cancer du pancréas. Ces résultats ouvrent de nouvelles pistes pour développer des stratégies ciblant les étapes précoces de ce cancerK-ras oncogene is a small GTPase of the RAS superfamily, highly implicated in cancer, mainly in pancreatic cancer, one of the most deadly cancers in occidental countries. K-ras mutations are considered as an initiating event of pancreatic carcinogenesis and K-ras oncogenic activities are necessary components of cancer progression. However, K-ras clinical targeting remains ineffective until now. Focus on early downstream K-ras signalling may thus appear as an interesting strategy target in this cancer. The membrane-bound mucin MUC4 is a high molecular weight glycoprotein frequently deregulated in cancer. In pancreatic cancer, MUC4 is neo-expressed in the preneoplastic stages and thereafter is involved in cancer cell properties leading to cancer progression and chemoresistance. MUC4 regulation by K-ras in pancreatic carcinogenesis remains unknown. Using the Pdx1-Cre; LStopL-K-rasG12D mouse model of pancreatic carcinogenesis, we show that the in vivo early neo-expression of the mucin Muc4 in pancreatic intraepithelial neoplastic lesions (PanINs) induced by mutated K-ras is correlated with the activation of ERK, JNK and NF-ΚB signalling pathways. In vitro, transfection of constitutively activated K-rasG12V in human pancreatic cancer cells led to the transcriptional upregulation of MUC4. This activation was shown to be mediated at the transcriptional level by AP-1 and NF-ΚB transcription factors via MAPK, JNK and NF-ΚB pathways and at the post-transcriptional level by a mechanism involving the RalB GTPase. Altogether, these results identifies MUC4 as a transcriptional and post-transcriptional target of K-ras in pancreatic cancer. This opens avenues in developing new approaches to target the early steps of this deadly cancer
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Genest, Mallory. "Rôle de la surexpression des flotillines dans l'activation de voie de signalisation oncogéniques induisant la transition épithélio-mésenchymateuse." Thesis, Montpellier, 2019. http://www.theses.fr/2019MONTT001.
Анотація:
L’invasion cellulaire est un phénomène clé du développement tumoral au cours duquel les cellules réalisent une transition épithélio-mésenchymateuse (TEM) caractérisée par des changements d’expression de gènes clés dans la régulation de l’adhérence et de la morphologie cellulaire. L’expression de ces gènes est sous le contrôle de voies de signalisation, qui lors du processus de tumorigenèse sont dérégulées. La dérégulation de ces voies est multifactorielle et peut-être initiée par une activation de récepteurs présents à la membrane plasmique.Dans ce contexte, nous avons mis en évidence que les flotillines sont d’importants régulateurs de l’activation de ces récepteurs et des voies de signalisation en aval qui conduisent à l’induction de la TEM. Les flotillines 1 et 2 sont des protéines ubiquitaires très conservées. Le niveau d’expression des flotillines est accru dans de nombreux cancers invasifs et ceci est un facteur de mauvais pronostic. En condition physiologique, non surexprimées, les flotillines sont majoritairement à la membrane plasmique. Surexprimées les flotillines induisent la formation d’endolysosomes ayant une faible activité de dégradation, dans lesquels elles sont retrouvées.Mes travaux montrent que l’augmentation de l’expression des flotillines dans des cellules normales mammaires est suffisante pour induire le processus de TEM, processus clé de l’invasion tumorale. De plus nous montrons que la surexpression des flotillines génère une voie de trafic vésiculaire que nous nommons UFIT (Upregulated flotillin Induced Trafficking pathway) et qui affecte le trafic de plusieurs récepteurs membranaires connus pour participer à l’activation des voies oncogéniques inductrices de la TEM. Dans le cas particulier d’un de ces récepteurs, AXL, cible thérapeutique dans les cancers du sein, nous montrons que la surexpression des flotillines régule son endocytose et l’adresse dans les endosomes de signalisation riches en flotillines tout en le protégeant de la dégradation. Ces travaux apportent donc des explications nouvelles quant au rôle des flotillines dans le processus d’invasion cellulaire conduisant à la formation des métastasesTumor cell invasion and consecutive metastasis formation are the main cause of death in cancer patients. One crucial process of tumor cell invasion is the epithelial to mesenchymal transition (EMT), a reversible process during which polarized epithelial cells convert into motile mesenchymal cells. This process is characterized by gene expression changes involved, in particular, in the perturbation of cell adhesion, polarity and cytoskeletal structures.Flotillin 1 and 2 are two ubiquitous and highly conserved membrane proteins that assemble in large oligomers, known to participate in membrane protein clustering and endocytosis. Flotillins are upregulated in many invasive cancers and are considered as markers of poor prognosis. At physiological expression level, flotillins are mainly located at the plasma membrane. The cellular distribution of upregulated flotillins is dramatically modified with a strong enrichment in vesicular compartments that we characterized as non-degradative-endolysosomes.During my PhD project, we identified that flotillins are key EMT inducer. We upregulated flotillins in normal mammary cells and demonstrated that it is sufficient to promote EMT. Using several global comparative analyses (transcriptomic, phosphokinase arrays), we showed that flotillin upregulation activates key oncogenic signaling pathways and plasma membrane receptors. We identified that flotillin overexpression induces a trafficking pathway that we named UFIT-pathway (Upregulated flotillin Induced Trafficking pathway), which promotes the endocytosis of several cargos, amongst them membrane receptors involved in the activation of oncogenic pathways.Our results suggest that the UFIT pathway generates flotillin-positive endolysosomes acting as as “signalosome compartments” involved in the activation of signaling pathways stimulating EMT and cellular invasion
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Bonetta, Anaëlle. "Exploration de nouvelles voies thérapeutiques contre le cancer du col de l'utérus : approche combinée par adénovirus et ARN interférence." Phd thesis, Université de Strasbourg, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00870000.
Анотація:
Le cancer du col de l'utérus est le troisième cancer le plus fréquent chez la femme, dont l'agent étiologique majeur est l'infection par les papillomavirus humain (notamment HPV-16 et 18), qui sont de petits virus infectant les épithéliums muqueux et cutanés, et pouvant induire la formation de tumeurs. L'inducteur majeur du processus oncogène est le processus d'intégration des régions codantes pour les oncoprotéines E6 et E7, au sein de la cellule hôte suite à l'infection. Elles interférent avec le cycle cellulaire et induisent notamment l'immortalisation, voire la transformation des cellules. Les fonctions les plus connue de ces deux oncoprotéines sont la dégradation des suppresseurs de tumeur p53 et pRb, respectivement. Mon travail de thèse à consisté en la mise au point des vecteurs adénoviraux exprimant des miARN dirigés contre l'oncoprotéine E6. Exprimés in vitro ils induisent l'induction de la mort cellulaire par apoptose des cellules tumorales traitées, via l'activation de la voie de caspases, et in vivo permettent le ralentissement de la croissance de tumeurs xénogreffées à des souris Nude. De plus, la stratégie thérapeutique adénovirale a montré ses extensions possibles sur d'autres types de cancers HPV-positifs, mais également via l'expression de différentes moléculaires thérapeutiques, visant à empêcher l'interaction des oncoprotéines telles qu'E6 avec leurs partenaires cellulaires et ainsi les empêcher d'exercer les activités biologiques impliquées dans le développement de cancers. Pour finir, les adénovirus peuvent également être vu comme des outils d'extinction fonctionnels d'E6 et permettant d'étudier les répercutions sur d'autres processus cellulaires.
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Morel, Marion. "Les récepteurs venus kinase (VKRs) de schistosoma mansoni : étude des voies de signalisation de SmVKR1 et rôle de la protéine adaptatrice SmShb." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S003/document.
Анотація:
La schistosomiase est une parasitose causée par un ver plat trématode du genre Schistosoma. Cette pathologie, responsable de près de 300 000 décès par an, est essentiellement due à la forte fécondité des vers et à l’accumulation des œufs dans les tissus de l’hôte. Pour lutter contre la pathologie, un seul traitement efficace, le Praziquantel, est utilisé en masse dans les régions endémiques. Afin de parer à l’apparition de résistances au Praziquantel, le développement de molécules régulant la ponte du parasite fait partie des solutions alternatives envisagées.Les récepteurs Venus Kinase (VKRs) forment une famille de récepteurs tyrosine kinase (RTKs) spécifique des invertébrés découverte au laboratoire chez le parasite Schistosoma mansoni. Les VKRs possèdent une structure atypique associant un domaine extracellulaire de fixation au ligand de type Venus Flytrap (VFT) associé à un domaine Tyrosine Kinase (TK) intracellulaire. Deux VKRs sont exprimés chez S. mansoni : SmVKR1 et SmVKR2. Ces deux récepteurs activent les voies de signalisation ERK, Akt et JNK et jouent un rôle dans la reproduction du parasite.Du fait de leur absence dans le génome de l’Homme, et de leur rôle potentiel dans la modulation de la reproduction et du développement des parasites, les SmVKRs constituent des cibles intéressantes pour lutter contre la schistosomiase.La première partie de mon travail de thèse expose les données acquises quant au rôle des RTKs dans la régulation de la reproduction des schistosomes. Nous avons pu montrer que la conservation des domaines catalytiques des différents RTKs ouvre la voie à l’élaboration de molécules pouvant inhiber simultanément plusieurs RTKs de schistosomes afin de lutter contre la schistosomiase en agissant sur la ponte du parasite.La seconde partie de mon travail met en évidence qu’en plus d’agir directement sur l’activité des RTKs, il est possible d’inhiber les voies qu’ils activent. En effet, un criblage d’inhibiteurs de protéines kinases a permis d’identifier les composants de la voie Akt comme cibles potentielles pour lutter contre la schistosomiase : des doses très faibles (de l’ordre du nM) de certains inhibiteurs d’Akt sont capables d’inhiber l’appariement des schistosomes et la ponte.Dans la dernière partie, nous montrons que la protéine adaptatrice SmShb interagit spécifiquement avec SmVKR1 phosphorylé. Cette interaction se fait par la liaison du domaine SH2 de SmShb sur une Tyrosine phosphorylée spécifique, située dans la région juxtamembranaire du récepteur (pY979). La formation de ce complexe induit la phosphorylation de SmShb et dirige le signal de SmVKR1 spécifiquement vers la voie JNK. Des expériences d’hybridation in situ ont mis en évidence une colocalisation des transcrits de SmShb avec ceux de Smvkr1 au niveau des organes reproducteurs des vers adultes, notamment au niveau des ovocytes matures et des testicules. Le knock-down de SmShb par ARN interférence conduit à une accumulation de spermatozoïdes dans les testicules des vers mâles. Parallèlement, un criblage par la technique du triple hybride, en utilisant SmShb phosphorylé par SmVKR1 comme appât, a permis l’identification de diverses protéines partenaires de SmShb. En raison des résultats précédents, notre attention s’est portée sur deux protéines partenaires pour lesquelles l’interaction avec SmShb a été confirmée. 1) La GTPase RhoU, qui possède des fonctions potentielles dans la signalisation JNK et sur la dynamique du cytosquelette. 2) Une chaine légère de la dynéine TcTex-1 possédant un rôle potentiel dans la motilité des spermatozoïdes. L’ensemble de ces résultats suggère un rôle de SmShb dans la régulation de l’activité de SmVKR1 en permettant la formation d’un complexe multi-protéique incluant des protéines impliquées dans l’organisation du cytosqueletteSchistosomiasis is a parasitic disease caused by trematode flatworm species belonging to the genus Schistosoma. Responsible for about 300,000 deaths per year, the disease is mainly due to the high fertility of the worms and to encystment of eggs in host tissues. In order to fight against schistosomiasis, a single drug (Praziquantel) is efficient and massively distributed in endemic areas. To deal with the emergence of resistance to Praziquantel, one alternative is to consider the design of molecules that target parasite reproduction.Venus Kinase Receptors (VKRs) constitute an invertebrate Receptor Tyrosine Kinase (RTK) family initially discovered in the parasite Schistosoma mansoni. VKRs are atypical RTKs formed by an extracellular Venus Fly Trap (VFT) ligand binding domain associated via a transmembrane domain with an intracellular tyrosine kinase (TK) domain. Two VKRs are expressed in S. mansoni: SmVKR1 and SmVKR2. They both activate Erk, Akt and JNK signaling pathways and act on the parasite reproduction.As they are absent from the human genome and as they have potential roles in the modulation of reproductive processes and development of parasites, SmVKRs appear as attractive targets to fight schistosomiasis.The first part of my thesis work sets known data concerning the role of RTKs in schistosome reproduction. Here, we show that the catalytic domains are conserved across various RTKs and we open the perspective to design drugs which could inhibit several RTKs at the same time to control egg laying by schistosomes.The second part of my work describes the importance of using an alternative strategy of inhibiting downstream partners of RTKs. By screening a kinase inhibitor library, we defined the Akt pathway components as potential targets to fight schistosomiasis. Nanomolar doses of Akt inhibitors can inhibit schistosome pairing and egg laying.In the last part, we present the specific interaction of the adaptor protein SmShb with the phosphorylated form of SmVKR1. This binding occurs between the SH2 domain of SmShb and a phosphotyrosine residue (pY979) located in the juxtamembrane region of the receptor. That interaction leads to the phosphorylation of SmShb and promotes the signal of SmVKR1 towards a JNK pathway. In situ hybridization experiments highlighted that SmShb and Smvkr1 transcripts were both located in mature oocytes and testes of adult worms. RNA interference experiments using double-stranded RNA targeting SmShb led to an accumulation of mature sperm in testes of male worms. Finally, a yeast three hybrid screening, using SmShb phosphorylated by SmVKR1 as prey, allowed us to identify various protein partners. Taking advantage of previous results, we focused on two partners and confirmed their interaction with SmShb. 1) RhoU GTPase which has potential functions in JNK signalling and cytoskeleton dynamic. 2) The dynein light chain TcTex-1, with potential role in sperm motility. Altogether, this results argue for a potential role of SmShb in the regulation of the SmVKR1 activity by forming a multiprotein complex including proteins with various roles in cytoskeleton reorganization
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Voltz, Emilie. "Apoptose tumeur-spécifique : Mécanisme et potentiel thérapeutique de la voie de signalisation de TRAIL." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2006. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2006/VOLTZ_Emilie_2006.pdf.
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Sartelet, Hervé. "L'activation de la voie AKT dans le neuroblastome et son implication thérapeutique." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA11T009.
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Mendoza-Gaviria, José-Andrés. "Impact de l'expression de la protéine E6 des papillomavirus humains oncogènes de type 5 et 8 sur la voie de signalisation cellulaire du TGF-BETA." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077008.
Анотація:
Certains génotypes de papillomavirus humains (PVH) sont responsables de cancers anogénitaux (PVH16 et 18) et de carcinomes cutanés (PVH5 et 8) (chez les patients atteints d'épidermodysplasie verruciforme [EV]). Le potentiel oncogène des PVH est lié à l'activité des protéines E6 et E7. Dans le cas des PVH génitaux à haut risque (PVH16 et 18), ces oncoprotéines dégradent les protéines inhibitrices du cycle cellulaire p53 (E6) et pRb (E7). En revanche, les propriétés biologiques des oncoprotéines du PVH5 et 8 sont peu connues. Notre objectif a été d'étudier le rôle de l'oncoprotéine E6 des PVH5 et 8. Nous avons identifié des protéines cellulaires partenaires d'E6 par criblage en double hybride chez la levure. Les interactions ont été validées par des méthodes de biologie moléculaire et cellulaire. Nos études ont montré l'interaction d'E6 avec la protéine SMAD3 qui joue un rôle central dans la voie de transduction du TGF-bêta. Cette association est spécifique des PVH5 et 8 et conduit à la dégradation du complexe SMAD3/4. L'impact fonctionnel de cette interaction a été étudié par la régulation d'un gène rapporteur luciférase. Nous avons également montré la fixation d'E6 sur SnoN, un inhibiteur des protéines SMAD. Cette association semble avoir un rôle synergique pour la dégradation des SMAD. La voie du TGF-bêta induit la synthèse de protéines qui bloquent le passage de la phase G1 à S du cycle cellulaire. La levée de ce blocage par E6 peut constituer une étape cruciale pour la réplication virale. Le fait qu'il s'agisse des protéines E6 des PVH de l'EV oncogènes suggère que la voie du TGF-bêta est une cible privilégiée dans l'immortalisation des kératinocytes infectésSome human papillomavirus (HPV) genotypes are responsible of ano-genital cancers (HPV16 and 18) and cutaneous carcinomas (HPV5 and 8) (in patients suffering epidermodysplasia verruciformis [EV]). The oncogenic potentiel of HPVs is mainly related to the activity of E6 and E7 early proteins. In the case of genital high risk HPVs (HPV16 et 18), thèse oncoproteins induce degradation of p53 (E6) and pRb (E7), two key inhibitor proteins of thé cell cycle. In contrast, the biological properties of thèse two oncoproteins from HPVS and 8 are poorly understood. Our aim was to study the role of the oncoprotein E6 from HPVS and 8. We identified cellular partners of E6 by yeast two-hybrid screening. The interactions found were validated by diverse molecular and cellular biology methods. Our work allowed us to show the interaction between E6 and SMAD3, a cellular protein that plays a central role in TGF-beta signaling pathway. This association is specific of HPVS and 8 and induces degradation of SMAD3/4 complexes. The functional impact of this interaction was studied by regulation of a luciferase reporter gene. We equally identified fixation of E6 on SnoN, a cellular inhibitor of SMAD proteins. This association seems to synergize for dégradation of SMADs. The TGF-beta transduction pathway is crucial for the synthesis of proteins that block cell cycle passage from phase G1 to S. Thus, the inhibition of TGF-beta signaling by E6 may constitute a crucial step towards viral replication. Moreover, the interaction specificity of E6 proteins from EV HPVs suggests that TGF-beta signaling may be a privileged target in the way of immortalizing keratinocytes upon viral infection
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Ben, Khalifa Youcef. "Etude de la modulation du transcriptome par les oncogènes des papillomavirus humains dans le cancer du col de l'utérus : Identification et caractérisation d'une nouvelle voie E6/p63." Paris 11, 2008. http://www.theses.fr/2008PA11T074.
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Rolloy, Caroline. "Altération de la voie du TGF-β par la protéine E6 de papillomavirus humain cutané de type 5". Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077045.
Анотація:
Les papillomavirus humains (HPV) sont de petits virus icosaédriques à ADN. Plus de 150 génotypes ont été identifiés et sont pour la plupart responsables de lésions hyperprolifératives bénignes cutanées ou muqueuses. L'infection par certains génotypes considérés à haut risque (HPV-HR) est associée à la transformation maligne comme les cancers anogénitaux (HPV16, 18) dans la population générale ou les carcinomes cutanés (HPV5, 8) dans le contexte d'une génodermatose autosomique récessive l'épidermodysplasie verruciforme (EV). Leur potentiel oncogène repose principalement sur l'activité des oncoprotéines E6 et E7. L'activité transformante des protéines E6 des HPV muqueux à haut risque met enjeu la dégradation du suppresseur de tumeur p53. En revanche, peu de données sont disponibles concernant les propriétés des protéines E6 des HPV cutanés oncogènes. 11 a été montré précédemment dans le laboratoire que l'oncoprotéine E6 de HPV5 (5E6) interagit avec la protéine SMAD3 de la voie de signalisation du TGF-beta. Cette cascade est impliquée dans de nombreux processus cellulaires tels que la prolifération, la différenciation, l'apoptose et est connue pour être dérégulée dans de nombreux cancers. L'objectif de cette thèse était de comprendre les mécanismes d'inhibition de la voie du TGF-beta par la protéine 5E6. Nous avons tout d'abord caractérisé le domaine minimal d'interaction de SMAD3 sur 5E6. Puis des études interactomiques ont mis en évidence le ciblage redondant de la voie du TGF-β par 5E6 en interagissant non seulement avec SMAD3 mais aussi avec deux régulateurs clés de la voie : SnoN et Arkadia. Une méthode de détection de complexe ternaire développée au laboratoire nous a conduit à montrer qu'en plus de la dégradation protéasome-dépendante du complexe SMAD3/SMAD4, 5E6 parvient à recycler la répression transcriptionnelle induite par SnoN au profit du virus. Nos résultats suggèrent que l'inhibition de cette voie, favorisant la prolifération cellulaire des kératinocytes en voie de différenciation, facilite le cycle viral et contribue au potentiel oncogène des HPV cutanésHuman papillomaviruses (HPVs) are non-enveloped DNA viruses of icosahedral symmetry. More than 150 HPVs genotypes have been described so far. Most of them cause benign skin or mucosal hyperproliferative lesions. Infections with certain genotypes of HPVs are associated with malignant transformation such as ano-genital cancer (HPV 16, 18) in the general population or cutaneous carcinoma (HPV 5, 8) in the context of the inherited disorder epidermodysplasia verruciformis (EV). These HPVs are considered as "high-risk" genotypes because of their tight association with cancer. Their oncogenic potential mainly relies on the activity of the two early viral oncoproteins, E6 and E7. The transforming activity of E6 protein of mucosal high-risk HPVs clearly implicates the tumor suppressor p53 degradation. In contrast, little is known on the functional properties of E6 oncoproteins from oncogenic cutaneous HPVs. Previous studies in the laboratory had shown the interaction between oncogenic HPV5 E6 (5E6) and the SMAD3 protein of the TGF-beta signalling pathway. This pathway is involved in many cellular events as control of cellular prolifération, differentiation, apoptosis and is known to be misregulated in numerous cancers. Our goal in this thesis was to dissect TGF-beta pathway rewired by E6 protein from oncogenic HPV 5. Combining deletion mutagenesis and linker scanning approaches we mapped on E6 N-terminal half the SMAD3 interacting area. Then, interactomic studies showed a redundant targeting of the TGF-beta by 5E6 that not only interact with SMAD3 but also with SnoN and Arkadia, two key regulators. To better understand the consequences of these interactions, we developed a ternary complex detection assay that leads us to show that besides proteosomal degradation of SMAD3/4 complexes, 5E6 also recycles SnoN-mediated repression to rewire the TGF-beta signaling pathway for viral benefit. Our results support the hypothesis that inhibition of this pathway, by eliciting cell proliferation in differenciating layers of epidermis, facilitates the viral cycle and accordingly, contributes to the oncogenic potential of E6 proteins from cutaneous HPVs
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Gaiffe, Emilie. "Les cellules apoptotiques vecteurs d'oncogènes viraux : Une voie alternative de la carcinogenèse associée aux HPV." Thesis, Besançon, 2011. http://www.theses.fr/2011BESA3006/document.
Анотація:
Chez les mammifères, les cellules apoptotiques peuvent être complètement dégradées par des cellules phagocytaires spécialisées ou servir de vecteur d'ADN Le transfert d'oncogènes via les cellules apoptotiques aboutit à la transformation des cellules receveuses uniquement si celles-ci sont déficientes en p53. Sachant que Fniicogène E6 des papillomavirus humains (HPV) à haut risque induit la dégradation de p53, il est concevable que son transfert par la cellule apoptotique soit à l'origine d'un mécanisme alternatif de carcinogenèse associée aux HPV. Afin de confirmer cette hypothèse, l'apoptose de cellules dérivées de cancer du col de l'utérus, abriiam ou non des séquences d'HPV, a été induite. En collaboration avec l'équipe de Patrick Sandoz du laboratoire d'optique de FEMTO-ST, nous avons adapté leur inicr;système référencé en position à l'observation automatisée de Finternalisation des cellules apoptotiques. Nous avons aussi déterminé que les cellules apoptotiques son! phagocytées par les fîbroblastes quel que soit leur statut virologique. Seules les cellules apoptotiques dérivées de cellules abritant de l'ADN d'HPV transforment les cellules receveuses. L'expression de l'ADN viral, dont E6, dans les fîbroblastes transformés ainsi que la perte d'expression des protéines p53 et p21 suggère que les oncogènes d'HPV pourraient être à l'origine de la transformation. Les résultats présentés dans ces travaux mettent en évidence un nouveau mécanisme de carcinogenèse associée aux HPV via la phagocytose des cellules apoptotiques, potentiellement impliqué dans la transformation de cellules primaires et la progression des tumeurs associées aux HPVApoptotic cells in mammals may be completely degraded by specialized phagocytic cells or serve as a DNA vector. The oncogene transfer via apoptotic cells leads to the transformation of récipient cells but only when they are p53 deficient. As the E6 oncogene of high-risk human papillomavirus (HPV) leads to p53 dégradation, its transfer from apoptotic cells may be the cause of an alternative mechanism of HPV-associated carcinogenesis. To confirm this hypothesis, we induced apoptosis of cervical cancer cells that may harbor HPV sequences. In collaboration with Patrick Sandoz's team at the FEMTO-ST optical laboratory, we used their position-referenced microsystem for the automated observation of apoptotic cell internalization. We also found that apoptotic cells are phagocytized by fibroblasts regardless of their virological status. Only apoptotic cells from cells harboring HPV DNA transform recipient cells. Viral DNA expression, including E6, in transformed fibroblasts and the loss of p53 and p21 protein expression suggest that HPV oncogènes may cause transformation. These results highlight a new mechanism of HPV-associated carcinogenesis via apoptotic cell phagocytosis. This mechanism may be involved in thé transformation of primary cells and the progression of HPV-associated tumors
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Zhao, Yajie. "Étude du rôle des voies de signalisation des Activines dans l'initiation et la progression du cancer du pancréas." Thesis, Lyon, 2019. http://www.theses.fr/2019LYSE1159.
Анотація:
L'adénocarcinome canalaire pancréatique (PDAC) est une maladie agressive dans le monde. En raison du manque d'outils de détection hautement sensibles et spécifiques à un stade précoce de la maladie et de traitements peu curatifs, la plupart des patients sont diagnostiqués à un stade incurable avec une mortalité élevée. Comprendre la pathologie moléculaire, en particulier le stade précoce de cette maladie mortelle, est d’une importance capitale pour améliorer les bons pronostics de ces patients. La première et principale partie de mes travaux reposait sur une analyse de profilage génétique dans laquelle ils mettaient en évidence le rôle de la signalisation TGFβ / Activine et du récepteur ALK4 au cours du développement de la PDAC, en plus des quatre gènes oncogéniques courants (KRAS, CDKN2A, TP53 et SMAD4). ). D'autre part, INHBA (codant pour ActivinA) en tant que membre clé des ligands de la superfamille TGFβ est une cible de l'activation oncogénique de Kras dans les cellules du canal pancréatique et a été désigné comme composant potentiel de la SASP par une analyse au sécrétome de cellules subissant une sénescence induite par Kras. . Le but de mes travaux est donc d’étudier l’impact de la signalisation ActivinA lors de l’initiation de la PDAC. Dans la première partie de mon projet, j'ai démontré qu'ActivinA était un facteur SASP protecteur de la tumeur, produit par les cellules sénescentes d'ADM / PanIN, qui limitent leur prolifération et leur expansion dans les lésions hautement prolifératives via son récepteur ALK4 lors de l'initiation du PDAC. De plus, nos travaux ont révélé que les cellules sénescentes Dclk1 + limitent l'expansion des lésions prénéoplasiques et ont un impact partiel sur le composant stromal soutenu par la signalisation ActivinA. En outre, j'ai également exploré les fonctions autocrines et paracrines de la signalisation ActivinA au dernier stade de la PDAC. Nous avons constaté que le manque de signalisation ActivinA-ALK4 chez la souris entraînait une augmentation de la capacité de prolifération des cellules tumorales et une accumulation réduite de cellules stromales, ce qui pourrait aider à expliquer leurs métastases variées et un temps de survie relativement plus long. En conclusion, mon travail donne un autre aperçu de la signalisation ActivinA et Dclk1 dans l'initiation de la PDAC et leur existence dans des cellules sénescentes au sein de lésions précurseurs pancréatiques de bas grade devrait être considérée comme une étape cruciale pour développer de nouvelles stratégies diagnostiques et thérapeutiques pour les patients atteints de PDACPancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is an aggressive disease worldwide and remains the ranking of 7th leading cause of cancer related death in the past 5 years. Because of the lack of highly sensitive and specific detective tools in an early stage of this disease and low curative treatments, most of the patients are diagnosed in an incurable stage and end up with a high mortality. Understanding the molecular pathology especially the early stage of this lethal disease is of great importance to improve the outcome of these patients. The first and major part of my work was based on gene profiling analysis in which they emphasized the role of TGFβ/Activin signalling and ALK4-receptor during the development of PDAC in addition to the four common oncogenic genes (KRAS, CDKN2A, TP53 and SMAD4). On the other hand, INHBA(encoding for ActivinA) as a key member of TGFβ-superfamily ligands is a target of Kras oncogenic activation in pancreatic duct cell and has been pointed a potential SASP candidate component through a secretome analysis of cells undergoing Kras induced senescence. Therefore, the aim of my work is to investigate the impact of ActivinA-signalling during PDAC initiation. In the first part of my project, I demonstrated that ActivinA as a tumour-protecting SASP factor, produced by ADM/PanINs senescent cells, that limit their proliferation and expansion into highly proliferative lesions through its ALK4 receptor in the initiation of PDAC. Furthermore, our work revealed that senescent Dclk1+ cells limit the expansion of preneoplastic lesions and partly impact the stromal component which is sustained by ActivinA-signalling. Besides, I also explored the autocrine and paracrine functions of ActivinA-signalling in the late stage of PDAC. We found that lack of ActivinA-ALK4 signalling in mice leads to an increased proliferative capacity in tumor cells and a reduced accumulation of stromal cells, which might help to explain their diverse metastasis and a relative longer survival time. To conclude, my work gives another insight of ActivinA-signalling and Dclk1 in the onset of pancreatic cancer and their existence in senescent cells within low grade pancreatic precursor lesions should be considered a crucial step for developing novel diagnostic and therapeutic strategies for PDAC patients
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König, Sandra. "Voie de signalisation MAP kinase/ERK et second messager AMPc dans le système nerveux : contribution de la régulation de la protéine B-Raf par la PKA." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T068.
Анотація:
Les protéines B-Raf, Raf-1 et A-Raf forment une famille de sérine/thréonine kinases cytoplasmiques, éléments centraux d'une voie de signalisation intracellulaire aboutissant à la régulation des protéines MAP kinases de la sous-famille ERK. Contrairement à Raf-1 qui est exprimée de manière ubiquiste chez la souris adulte, les protéines B-Raf et A-Raf présentent des profils d'expression plus restreints, en particulier aux systèmes nerveux et urogénitaux respectivement. Si les protéines Raf-1 et B-Raf sont exprimées dans les mêmes aires du cerveau, elles peuvent présenter des localisations subcellulaires différentes. Bien que fortement conservées les protéines B-Raf et Raf-1 peuvent intégrer des signaux initiés par les stimuli extracellulaires de manière différente, possédant ainsi la capacité de réguler différentiellement l'activité des protéines ERK. En particulier, cette spécificité des protéines Raf semble rendre compte des effets contradictoires du second messager AMPc notamment sur la croissance, la différenciation et la survie de différents types cellulaires. Il a été montré que l'inhibition des protéines MAPK/ ERK1/2 observée en réponse à l'augmentation du taux intracellulaire d'AMPc résulte de l'inhibition de la protéine Raf-1. Elle-même consécutive à la phosphorylation de la kinase par la PKA. Dans les neurones et certaines lignées neuronales (PC12, CATH. A), ce second messager entraîne au contraire la stimulation de la voie de signalisation, qui dépend alors de l'activation de la protéine B-Raf. L'hypothèse à l'origine de ce travail de thèse prévoyait que la phosphorylation des isoenzymes Raf par la PKA puisse permettre la régulation différentielle des protéines ERK1/2 en réponse à l'augmentation du taux intracellulaire d'AMPc. Nous avons vérifié que la protéine B-Raf pouvait être directement phosphorylée par la PKA, avant d'entreprendre l'identification de différents sites de phosphorylation. L'établissement de cartes phosphopeptidiques bidimensionnelles de la protéine phosphorylée in vitro par la PKA nous a permis de conclure à la présence de cinq sites de phosphorylation. La nature des résidus phosphorylés a été proposée grâce à l'identification de motifs consensus de phosphorylation par la PKA. La mutagénèse dirigée de ces résidus nous a permis de montrer que la PKA phosphoryle la protéine B-Raf sur quatre résidus sérine en positions équivalentes à des sites régulateurs de Raf-1 préalablement décrits, ainsi que sur un site spécifique de l'isoenzyme (sérine 429). L'augmentation du taux intracellulaire d'AMPc dans les cellules PC12 (phéochromocytome de rat) et CATH. A (tumeur du cerveau de souris) induit essentiellement la phosphorylation de ce dernier site. L'analyse des conséquences de la mutation de ce site nous a permis de conclure que la phosphorylation de la sérine 429 a un effet inhibiteur sur l’activité des protéines ERK1/2. Ces résultats suggèrent que la phosphorylation de la protéine B-Raf par la PKA ne contribue pas à la simulation de la voie de signalisation, mais participe plutôt à l’atténuation du signal en réponse à des simulations qui perdurent.
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Gilbert, Marie. "Etude des mécanismes moléculaires impliqués dans la régulation de TTF-1 et recherche de nouvelles cibles thérapeutiques dans le carcinome papillaire de la thyroïde : rôle de l'oncogène RET/PTC1 et de la voie Wnt/Bêta-caténine." Paris 11, 2010. http://www.theses.fr/2010PA114827.
Анотація:
Le carcinome papillaire de la thyroïde (PTC) représente 80% des tumeurs de la thyroïde et se caractérise principalement par un oncogène de fusion RET/PTC1 et par l’expression de TTF-1. La voie Wnt/β-caténine est particulièrement étudiée en raison de ses rôles multiples notamment au cours du développement. Elle a aussi été très étudiée dans de nombreux cancers et joue un rôle fondamental. Le but des travaux de thèse a été de montrer le rôle de ces voies afin de justifier une approche thérapeutique ciblée. Nos travaux montrent que TTF-1 est un gène régulé par la voie Wnt/β-caténine dans le PTC. De plus, nous avons pu construire un siRNA spécifique et efficace contre la jonction RET/PTC1 qui a été vectorisé sous forme de nanoparticules de squalène pour une utilisation in vivo. Nous avons également montré un effet inducteur du siRNA RET/PTC1 sur TTF-1 qui devrait être pris en considération dans le cas d’une utilisation thérapeutique dans des PTC agressifs ou résistantsThe papillary thyroid carcinoma (PTC) represents 80% of thyroid tumors and is characterized by a RET/PTC1 fusion oncogene (60-70% of cases) and the expression of the TTF-1 transcription factor. This factor leads to the expression of specific proteins of the thyroid as thyroglobulin and is found in many papillary cancers. The Wnt /β-catenin pathway is particularly studied because of its multiple roles in particular during development. It has also been extensively studied in many cancers and plays a fundamental role. These pathways were the subject of the work and the aim of the thesis was to show their roles and justify a targeted therapeutic approach. Our studies show that TTF-1 gene is regulated by the Wnt /β-catenin pathway in the PTC. In addition, we designed a specific and effective siRNA against the RET/PTC1 junction. The siRNA was vectorized with nanoparticles of squalene for a therapeutic use. We also showed that the siRNA induce TTF-1 expression and could be considered in the case of its therapeutic use in aggressive or resistant PTC
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Teissier, Sébastien. "Importance de la voie E2F dans la régulation transcriptionnelle du papillomavirus de type 18 et dans la modification du transcriptome des cancers associés." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077168.
Анотація:
Dans un épithélium sain, les kératinocytes cessent de se diviser pour se différencier. Les facteurs E2F sont des facteurs de transcription régulés négativement par pRb et qui jouent un rôle capital dans la régulation du cycle cellulaire. La différenciation des kératinocytes implique un arrêt du cycle caractérisé par un remplacement des E2F activateurs par le complexe répresseur E2F5/p130. Les papillomavirus humains (HPV) infectent les cellules basales des épithéliums et leur réplication requiert une prolifération cellulaire et donc un contournement de l'arrêt programmé du cycle. Les HPV à haut-risque, responsable de l'apparition de cancer du col utérin, expriment deux oncogènes : E6 et E7 induisant respectivement la dégradation de p53 et l'inhibition de pRb. Dans ce travail, j'ai mis en évidence un détournement du complexe répresseur E2F5/p130 par E7 qui le transforme en activateur de la transcription de HPV18. L'action de E7, à la fois sur E2F5/p130 et sur l'activation de la voie E2F via l'inhibition de pRb, permet d'expliquer le contrôle du cycle cellulaire par HPV-18 à la fois dans les cancers et dans le cycle viral. De plus, des études comparatives du transcriptome en puces à ADN de cellules de carcinome cervical HeLa associées à HPV18 dans des conditions d'expression ou de répression de E6 et E7 a permis de découvrir un grand nombre de cibles cellulaires modulées par E6 et E7 via p53 et pRb. Parmi ces gènes, un grand nombre de gènes mitotiques cibles de E2F ont été mis en évidence dont certains sont fortement modulés dans les biopsies de carcinome cervicaux, indiquant que certains de ces gènes pourraient être utilisés pour le diagnostic ou le pronostic de ces cancersIn the normal epithelium, keratinocytes stop to divide to differenciate. The E2F family members are transcription factors negatively regulated by pRb that play a crucial role in the cellular cell cycle. Differentiation of the keratinocytes implies a cell cycle arrest due to the replacement of the E2F activators by the E2F5/p130 repressor complex. These viruses infect the basal cell layers of the epithelium and their replication requires a cell proliferation that needs to bypass the programmed cell-cycle arrest. The high risk HPV are the causal agents of the cervical cancer and express two oncogenes E6 and E7 that degrade p53 and inactivate pRb respectively. I have shown a hijack of thé E2F5/p130 repressor complex into an activator of HPV-18 transcription through E7. The roles of E7 played on E2F5/p130 and on the activation of the E2F pathway by the modulation of pRb could explain the take over of the cell-cycle control by HPV-18 in cancer and in the viral cycle. In micro-arrays analyses of the cervical carcinoma HeLa cells transcriptome expressing E6 and E7 or not allowed us to find out a number of cellular genes controlled by E6 and E7 through the p53 and pRb pathways Among these genes, we identified many mitotic genes that are controlled by E2F and that are modulated in cervical cancer biopsies indicating that these genes could be used for diagnosis and prognosis of cervical cancer
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Amarir, Samira. "L' activation constitutive de la voie Notch supprime la transformation induite par v-Src : implication de la signalisation TGF-β". Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077010.
Анотація:
L'hypothèse selon laquelle il serait possible de supprimer le phénotype transformé de cellules tumorales, en induisant leur différenciation, a été validée dans un modèle ex vivo, développé au laboratoire. Nous avons montré que l'activation constitutive de la voie Notch, impliquée dans la différenciation de la rétine, supprimait la transformation des cellules de neurorétine de caille, induite par l'oncoprotéine v-Src (QNR/v-src). Cette réversion phénotypique est corrélée avec la perte du caractère indifférencié de ces cellules et leur engagement dans la différenciation gliale. Elle résulte de la modulation, par la signalisation Notch, des voies de signalisation JNK et Rho/Rac GTPAses, essentiellement impliquées dans le contrôle de la morphologie et l'organisation du cytosquelette. Cette réversion phénotypique est, au moins partiellement, due à un mécanisme auto/paracrine. En effet, les cellules, ayant réverté vers un phénotype normal, sécrètent un facteur capable d'inhiber la transformation des cellules QNR/v-src. La comparaison du transcriptome des cellules QNR/v-src et QNR/v-src/Notch a mis en évidence l'augmentation des messagers codant le ligand TGFβ3 dans les cellules QNR/v-src/Notch. Cette augmentation est associée à une activation de la signalisation TGF-β dans ces cellules. Des expériences d'activation de la signalisation TGF-p dans les cellules QNR/v-src par une protéine TGFβ3 recombinante ou d'inhibition chimique de cette voie dans les cellules QNR/v-src/Notch ont montré que la signalisation TGF-β est impliquée dans la restauration d'une morphologie normale et la réorganisation du cytosquelette mais aussi dans la mise en place des programmes de différenciationUnderstanding how disruption of differentiation contributes to the cancer cell phenotype is required to identify alterations essential for malignant transformation and provide experimental basis for their correction. We have been using quail neuroretina cells transformed by v-Sr6 (QNR/v-src), as an ex vivo model to study this question. We report that stable activation of Notch signalling, which is involved in retina differentiation, suppresses v-Src-induced transformation of QNR cells. This phenotypic reversion coincides with a major switch in cell identity, since these undifferentiated cells acquire glial differentiation traits. Cells restored to a normal and differentiated phénotype hâve undergone changes in the functioning of JNK and Rho/Rac GTPases pathways, which essentially regulate cell morphology and cytoskeleton organization. This phenotypic reversion is partially mediated by an auto/paracrine mechanism, since revertant cells secrete a factor, which inhibits transformation properties of QNR/v-src cells. Transcriptome anlaysis revealed an increase of TGFβ3 RNA in QNR/v-src/Notch cells. This increase is associated with an activation of TGFβ signalling in these cells. Treatment of QNR/v-src cells with a TGFβ3 recombinant protein or chemical inhibition of TGFβ signaling in QNR/v-src/Notch showed that TGFβ signalling is involved in restoration of normal morphology and cytoskeleton organization but also, in part, in commitment to glial differentiation
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Yahiaoui-Bentounsi, Ouardia Imene. "Analyse de l'activation de la voie PI3K/AKT dans le lymphome folliculaire." Thesis, Aix-Marseille, 2014. http://www.theses.fr/2014AIXM5060.
Анотація:
La voie PI3K/AKT est impliquée dans la progression de divers cancers humains, et semble jouer un rôle majeur dans le développement de tumeurs lymphoïdes. Elle pourrait être impliquée dans la pathogénie du lymphome folliculaire (LF) par certains mécanismes non identifiés. Les travaux de thèse portent sur l'étude des anomalies de la voie PI3K/AKT dans le LF, dans le but d'apporter une nouvelle cible thérapeutique. 38 biopsies tissulaires de LF humain ont été étudiées pour une analyse mutationnelle du gène PIK3CA dans les exons 9 et 20 par séquençage. Les mêmes échantillons ont été analysés par western blot et immunohistochimie pour détecter l'expression des protéines AKT, AKT phosphorylée (pAKT), et PTEN. Deux cas de lymphadénite ont été utilisés comme témoins.Les résultats obtenus montrent que l'expression d'AKT était présente dans tous les cas de LF et lymphadénite, et 14/38 (37%) échantillons de LF et 2/2 cas de lymphadénite exprimaient pAKT. 9/38 (24%) échantillons de LF ont montré un niveau élevé d'expression de pAKT, alors que 5/38 (13%) cas de LF, et 2/2 échantillons de lymphadénite montraient un faible niveau d'expression de pAKT. L'expression de PTEN a été observée dans 30/38 (79%) cas de LF et 2/2 cas de lymphadénite, tandis que 8/38 (21%) cas ont montré une perte d'expression de PTEN. En outre, 3 cas qui expriment pAKT montrent une perte d'expression de PTEN. Aucune mutation du gène PIK3CA n'a été détectée dans les échantillons étudiés. Ces données suggèrent que la voie PI3K/AKT peut être activée dans certains cas de LF, soit en raison de la phosphorylation d'AKT, soit en raison d'une perte d'expression de PTEN, en absence de mutations de PIK3CAThe phosphoinositide 3- kinase (PI3K) pathway is involved in the growth of various human cancers, including lymphoid malignancies. However its role in the pathogenesis of follicular lymphoma (FL) has not been yet described.The PhD work focuses on the study of alterations in the PI3K/AKT pathway in follicular lymphoma, in order to provide a new therapeutic target.To clarify this point, biopsy tissue samples from 38 human FL cases were investigated for PIK3CA somatic mutations in exons 9 and 20 using Sanger sequencing. The same samples were analyzed using western blotting and immunohistochemistry to detect expression of AKT, phosphorylated AKT (pAKT), and PTEN proteins. Two cases of benign lymphadenitis were used as controls. AKT expression was present in all FL and lymphadenitis cases. 14/38 (37%) FL and 2/2 lymphadenitis cases expressed pAKT. 9/38 (24%) FL samples showed high level of pAKT, whereas 5/38 (13%) FL cases and 2/2 benign lymphadenitis samples expressed pAKT at low level. PTEN expression was observed in 30/38 (79%) FL and 2/2 benign lymphadenitis cases, whereas 8/38 (21%) of FL cases showed loss of PTEN expression. In addition, 3 cases with positive pAKT did not express PTEN. PIK3CA mutations were not detected in any sample. These data suggest that the PI3K/AKT signaling pathway could be activated in a subset of FL cases, due to either AKT phosphorylation or PTEN downregulation, in the absence of PIK3CA mutations
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Gibault, Floriane. "Conception, synthèse et évaluation d’inhibiteurs du complexe protéique YAP-TEAD à visée anticancéreuse." Thesis, Lille 1, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL10097.
Анотація:
La voie Hippo, découverte chez la Drosophile et conservée chez les mammifères, a été identifiée comme un élément essentiel dans le contrôle de la taille des organes. Cette cascade de kinases régule la phosphorylation de l’effecteur terminal YAP (ou de son paralogue TAZ), un coactivateur transcriptionnel reconnu comme oncogène. Sa fonction est médiée par sa translocation nucléaire et son interaction avec les facteurs de transcription TEAD, pour former le complexe YAP-TEAD qui active l’expression des gènes cibles responsable de la prolifération cellulaire et de la croissance des organes. La surexpression des protéines YAP/TAZ/TEAD dans de nombreux cancers perturbe l’équilibre de la voie Hippo et favorise la formation du complexe protéique causant une hyperprolifération et la propagation des cellules cancéreuses. Inhiber cette interaction protéine-protéine est une cible thérapeutique prometteuse pour concevoir de nouveaux anticancéreux. Dans cette optique, le laboratoire a considéré deux stratégies. La première consiste à cibler la protéine YAP en synthétisant des dipyrrines, représentant des fragments de la Vertéporfine dans le but de définir le motif minimal requis pour conserver l’activité biologique. Une seconde approche implique la synthèse de ligands de TEAD capable de se positionner au sein de l’interface 3. Basée sur des études de modélisation moléculaire, une famille avec un noyau central triazolique a été optimisée pour établir des relations structure-activité. Les molécules synthétisées sont actuellement en cours d’évaluation, grâce à la mise au point des tests biologiques et physicochimiques, et les premiers résultats ont permis d’identifier un composé prometteurThe Hippo pathway, firstly described in Drosophila and highly conserved in mammals, has been demonstrated to play a crucial role in the organ size control. This kinase cascade regulates the phosphorylation of the downstream effector YAP (or its paralogue TAZ), a transcriptional coactivator with oncogenic activity. Its function is mediated by its nuclear translocation and interaction with the transcriptional factor TEAD, to form YAP-TEAD complex which activates the genes expression in charge of cell proliferation triggering organ growth. Overexpression of YAP/TAZ/TEAD protein in several cancers disrupts the Hippo pathway balance and urges on YAP-TEAD complex formation causing excessive proliferation and cancer development. Inhibiting this protein-protein interaction is thus a promising therapeutic target for the design of new anti-cancer drugs. In this goal, the laboratory has considered two strategies. The first one consists in targeting the YAP protein by synthesizing dipyrrins, representing Verteporfin fragments to define the minimal requirement yielding the expected biological activity. A second approach involves synthesizing TEAD ligands able to fit in specific interface 3. Based on molecular modeling, a triazole scaffold family was optimized to establish structure-activity relationship. Thanks to the biological and binding tests development, synthesized molecules evaluation is still in progress and the present first results have already allowed identifying a promising compound
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Narbonnet, Stéphane. "Mécanismes de rétrocontrôle de l'activité de l'oncoprotéine LMP1 du virus d'Epstein-Barr." Toulouse 3, 2006. http://www.theses.fr/2006TOU30088.
Анотація:
Le virus d'Epstein-Barr est associé à différentes pathologies tumorales humaines d'origine lymphoïde ou épithéliale. Le gène BNLF1 est considéré comme l'oncogène majeur du virus et code l'oncoprotéine LMP1 qui présente des activités divergentes : elle induit de nombreuses voies de signalisation, comme la voie NF-kB, mais bloque aussi la division cellulaire ou les synthèses protéiques. Au cours de cette thèse, nous avons mis en évidence une nouvelle propriété de la LMP1 et montré qu'elle inhibe très efficacement l'activité de certains promoteurs naturels complexes, viraux ou cellulaires. Nous avons aussi décrit une nouvelle isoforme de la LMP1, In89LMP1, et montré que celle-ci est capable d'inhiber l'induction de la voie NF-kB par la LMP1 pleine taille. Nous avons donc identifié deux nouveaux mécanismes de rétrocontrôle de l'activité de l'oncoprotéine LMP1, qui pourraient être requis pour la survie des cellules qui l'exprimentThe Epstein-Barr virus is associated to different human lymphoid or epithelial tumour pathologies. The BNLF1 gene is considered as the main viral oncogene and encodes the LMP1 which displays numerous activities: induction of various signalling pathways (like the NF-kB pathway) but also blocking of cell division or protein synthesis. In this thesis, we have described a new property of LMP1 and shown that it very efficiently inhibits the activity of several natural complex promoters, of viral or cellular origin. We have also described a new LMP1 isoform, In89LMP1, and shown that it was able to inhibit the activity of the full length LMP1 on the NF-kB pathway. Thus, we have identified two novel retrocontrol mechanisms acting on LMP1, that could be required for long term survival of LMP1 expressing cells
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Pène, Sabrina. "L’oncoprotéine Tax du HTLV-1 et la voie NF-κB : une histoire de conjugaison : nouvelle exploration du rôle des machineries de SUMOylation et d’ubiquitinylation dans l’activation de la voie NF-κB par Tax". Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015PA05T020/document.
Анотація:
Le virus T lymphotrope humain de type 1 (HTLV-1, Human T-cell Leukemia Virus type 1) est le premier rétrovirus oncogène humain à avoir été découvert. Sa protéine régulatrice Tax est la principale responsable du processus d’immortalisation et de transformation des lymphocytes T, cibles préférentielles d’HTLV-1 in vivo, qui est associé au développement de leucémies à cellules T de l’adulte. Ce mécanisme oncogénique est dû à la capacité de Tax à interagir avec de nombreux acteurs cellulaires, détournant ainsi différentes voies qui contrôlent notamment la prolifération et la survie des cellules. L’un des événements majeurs de ce mécanisme est l’activation constitutive de la voie NF-κB induite par Tax. Notre laboratoire ainsi que d’autres équipes ont montré que l’ubiquitinylation de Tax, notamment avec des chaînes liées en K63, est nécessaire pour que Tax recrute et active le complexe IKK (IκB Kinase), en se liant à sa sous-unité régulatrice NEMO dans le cytoplasme. Par ailleurs, il a également été décrit que Tax est SUMOylée ce qui lui permet de recruter les dimères NF-κB dans des corps nucléaires pour activer la transcription de leurs gènes cibles. Toutefois, de nombreuses interrogations persistent autour de l’implication et du mode d’action de chacune de ces modifications post-traductionnelles de Tax dans l’activation de la voie NF-κB. L’importance de la SUMOylation de Tax a en effet été remise en cause par notre laboratoire, suscitant une controverse qui nous décida à réexaminer complètement son rôle dans l’activation de la voie NF-κB. Pour cela, nous avons élaboré une nouvelle stratégie basée sur l’inhibition de la machinerie de SUMOylation endogène, grâce au blocage de l’unique enzyme E2 identifiée dans ce processus, l’enzyme Ubc9. Nous avons prouvé qu’une protéine Tax non SUMOylée, mais toujours ubiquitinylée, active la transcription à partir de promoteurs dépendants de NF-κB, qu’ils soient transfectés, intégrés stablement dans la chromatine cellulaire ou endogènes, démontrant ainsi que la SUMOylation de Tax n’est pas nécessaire à l’activation de la voie NF-κB, contrairement à son ubiquitinylation. Un autre point de questionnement concerne l’association de Tax au complexe NEMO/IKKα/IKKβ, pour laquelle l’ubiquitinylation de Tax est essentielle. Nous avons étudié l’implication de l’enzyme TRAF5 dans ces mécanismes, qui semblait être une potentielle E3 ligase de Tax, celle-ci restant encore inconnue. Grâce au blocage de TRAF5, nous avons montré que cette protéine interagit avec Tax et qu’elle est nécessaire à son ubiquitinylation, notamment avec des chaînes K63, sans toutefois que son activité ligase n’entre en jeu, excluant donc son rôle en tant qu’E3 ligase de Tax. Nous avons également découvert que TRAF5 induit la formation du complexe Tax/IKKα/IKKβ, mais n’est pas impliquée dans l’association Tax/NEMO, dessinant alors un nouveau modèle pour le recrutement et l’activation du complexe IKK par Tax. Ce travail permet donc d’apporter un nouvel éclairage sur l’impact de la SUMOylation et de l’ubiquitinylation de Tax dans l’activation de la voie NF-κB et de décrypter les étapes de cet événement crucial dans le mécanisme oncogénique déclenché par la protéine Tax du virus HTLV-1The Human T-cell Leukemia Virus type I is the first human oncoretrovirus discovered. The regulatory Tax protein is the main responsible of the immortalization process of primary CD4+ T lymphocytes, the preferential target cells of HTLV-1 in vivo, which is associated with adult T-cell leukemia/lymphoma (ATLL), a highly aggressive malignant proliferation of CD4+ T lymphocytes. The oncogenic property of Tax is mainly due to its capacity to interact with many different cellular proteins belong to several pathways which control cell proliferation and survival. Constitutive activation of the NF-κB pathway induced by Tax plays a crucial role in this oncogenic mechanism. Our laboratory, and others, demonstrated that Tax ubiquitination, notably with K63-linked ubiquitin (Ub) chains, is required for the activation of the cytoplasmic IκB kinase (IKK) complex by directly interacting with the regulatory subunit NEMO. Moreover, in previous studies, we and others describe that Tax is also conjugated to either SUMO-1 or SUMO-2/3 molecules which facilitates its interaction with the NF-κB dimers in particular structures named Tax nuclear bodies, inducing promoter activation of target genes in the nucleus. However, many questions remain concerning the exact role of each Tax post-translational modification in the NF-κB pathway activation process. In the laboratory, we recently reconsidered the importance of Tax SUMOylation, provoking a controversy in our field. So, we decided to reexamine the role of this modification on NF-κB activation. To do this, we designed a novel strategy based on the inhibition of the endogenous SUMOylation machinery by blocking or silencing Ubc9, the unique E2-conjugating enzyme involves in this process. We found that an ubiquitinated but not SUMOylated Tax protein is still able to activate a transfected, an integrated or an endogenous NF-κB promoters, demonstrating that Tax SUMOylation is not required for Tax induced NF-κB pathway activation contrary to its ubiquitination. Another interrogation concerning the formation of the Tax/NEMO/IKKα/IKKβ complex, in which Tax ubiquitination is critical. We studied the role of TRAF5 in these mechanisms because this enzyme could be a potential Ub E3-ligase of Tax, which remains unknown. Thanks to the blockage of TRAF5, we showed that this protein interacts with Tax and that TRAF5 is necessary for Tax ubiquitination, notably with K63-linked Ub chains. However, TRAF5 is not the direct E3-ligase of Tax since we demonstrated that its ligase activity is not involved in Tax conjugation to ubiquitin. We also discovered that TRAF5 induces the formation of the Tax/ IKKα/IKKβ complex but not the association between Tax and NEMO, showing a new model for the recruitment and the activation of the IKK complex by Tax. In conclusion, our results led us to propose a new light on the impact of Tax SUMOylation and ubiquitination in the NF-κB pathway activation and to figure out the different steps of this process, which is crucial for the oncogenic mechanism induced by the HTLV-1 Tax protein
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Lanzarotti, Nina. "Régulation de la réponse immunitaire T par l’apoptose et hyperactivation de la voie RAS." Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05T038/document.
Анотація:
L'apoptose lymphocytaire joue un rôle essentiel dans le contrôle de la réponse immunitaire et de la prolifération cellulaire. De nombreuses voies interviennent dans sa régulation, dont certaines dépendantes de l’oncogène RAS. Un défaut d'apoptose lymphocytaire induit l'apparition de maladies auto-immunes et lympho-prolifératives comme l'Autoimmune LymphoProliferative Syndrome (ALPS). L'ALPS fait suite à des anomalies du principal récepteur membranaire de mort FAS, pivot de l'apoptose lymphocytaire. Le RAS-Associated Lymphoproliferative Disease (RALD) est une entité décrite récemment, se rapprochant de l'ALPS par la symptomatologie et la physiopathologie sous-jacente. Cependant, dans le RALD, le défaut d'apoptose lymphocytaire n’est pas lié à des mutations de FAS mais à une hyperactivation de la voie RAS, mettant ainsi en lumière le rôle essentiel de cette voie dans la régulation du processus en question. Dans les Leucémies Myélo-Monocytaires Juvéniles Chroniques (JMML), les mêmes mutations que celles observées dans les RALD sont trouvées, sur les mêmes populations cellulaires. Il existe une hétérogénéité clinique et biologique au sein des JMML, certaines étant indolentes (LS-JMML) et d'autres sévères (S-JMML). A cette hétérogénéité au sein même des JMML s'ajoute celle observée entre JMML et RALD. L'objectif de ce travail a été de comprendre les tenants des différences phénotypiques observées, au travers du scope de l'apoptose des lymphocytes T activés, en comparant les trois entités résultant de mutations activatrices de RAS dans des cellules pluripotentes hématopoïétiques : RALD, LS-JMML et S-JMML. Nous rapportons des conséquences distinctes pour des mutations identiques ou équivalentes, avec différentes voies de l'apoptose touchées, différenciant les phénotypes induits. Ce travail a permis de démontrer que l’hyperactivation de la voie RAS seule n’entraîne pas nécessairement une dérégulation de la réponse immunitaire T. Des événements additionnels aux mutations présentes sont nécessaires au développement des symptômes. Ces événements ont bien des conséquences sur l'apoptose lymphocytaire, au niveau post-traductionnel, qu’ils concernent la voie RAS ou non. Les différences observées entre les trois phénotypes sur le plan expérimental pourraient être une aide au pronostic. De plus, ce travail ouvre la voie à l'identification en détails des facteurs additionnels et voies défaillantes et permettrait ainsi d'obtenir des thérapeutiques spécifiques actuellement inexistantesLymphocytes apoptosis is essential in maintaining homeostasis and avoiding abnormal proliferation. When defective, autoimmune diseases as the Autoimmune LymphoProliferative Syndrome (ALPS), due to mutations of the death receptor FAS, can occur. Several pathways are important actors influencing the apoptosis cascade, including the RAS proto-oncogene signaling. The RAS Associated Lymphoproliferative Disease (RALD) is a newly described entity, similar to ALPS but with RAS mutations instead of FAS mutations, enlightening the primary role of RAS in apoptosis regulation. Interestingly, the same RAS mutations as observed in RALD are also the cause of a malignant proliferation, the Juvenile Myelo Monocytic Leukemia (JMML). In the case of JMML, RAS mutations can lead either to a mild (LS-JMML) or a severe (S-JMML) phenotype. Thus, three different phenotypes can be caused by the same oncogenic RAS mutations. In order to better understand and characterize the influence of oncogenic RAS mutations in lymphocytes’ apoptosis we studied it in patients presenting with RALD, LS-JMML and JMML. We showed that isolated RAS hyperactivity is not sufficient to induce an immune deregulation. Additional factors are required to do so. These factors influence both mitochondrial and extrinsic apoptosis pathways at a post-transcriptional level. They are due to probable genetic events, and their identification can lead to new therapeutic strategies. Furthermore, activated lymphocytes’ in vitro apoptosis assessment can help differentiating the three phenotypes and thus facilitate prognosis prediction
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Schrepfer, Emilie. "Détermination des fonctions du gène E4F1 dans la voie p53 : caractérisation d’un nouveau niveau de régulation impliquant l’oncoprotéine Mdm2." Thesis, Montpellier 1, 2012. http://www.theses.fr/2012MON13516.
Анотація:
La protéine multifonctionnelle E4F1 fut initialement identifiée comme une cible de l'oncoprotéine virale E1A au cours de l'infection par l'adénovirus. Nos données, ainsi que celles d'autres laboratoires, montrent qu'E4F1 intervient à de multiples niveaux de régulation de la voie p53, une voie de signalisation très fréquemment inactivée au cours de la tumorigenèse. Au cours de ma thèse, j'ai mis en évidence et caractérisé un nouveau niveau de régulation impliquant la protéine E4F1 et un autre régulateur important de la voie p53 : l'oncoprotéine Mdm2. Mes travaux ont permis de montrer, pour la première fois, qu'E4F1 et Mdm2 sont présents dans un même complexe multiprotéique associé à la chromatine et dont le recrutement est indépendant de p53. La formation du complexe E4F1-Mdm2 est sous la dépendance de certains stress cellulaires, telle que la réponse aux stress oxydatifs. De plus, Mdm2 et E4F1 sont capables de s'ubiquitinyler mutuellement sans promouvoir leur protéolyse. Nos résultats préliminaires suggèrent que ce complexe chromatinien Mdm2-E4F1 est impliqué dans le contrôle d'un programme transcriptionnel apparenté à une réponse au stress oxydatif. L'ensemble de ces données suggère des fonctions de Mdm2 au niveau de la chromatine, indépendantes de sa fonction bien décrite de régulateur du suppresseur de tumeur p53E4F1 is a multifunctional protein that was first identified as a cellular target of the viral oncoprotein E1A during adenoviral infection. We, and others, have shown that E4F1 impinges at different level of the p53 pathway, which is frequently inactivated during tumorigenesis. During my PhD, I have highlighted and characterized a novel level of regulation implicating E4F1 and an other key regulator of the p53 pathway: the Mdm2 oncoprotein.My work have shown for the first time that Mdm2 and E4F1 directly interact in a same multiprotein complex associated with chromatin, and this recruitment occurs independently of p53. The Mdm2-E4F1 complex formation is dependant of some cellular stresses, such as oxidative stresses reponses. Our preliminary data also indicate that E4F1 and Mdm2 ubiquitylate each other without promoting their proteolysis, and influence their stability on chromatin. Our preliminary results indicate that this Mdm2-E4F1 chromatinian complex is involved in the regulation of a transcriptional program dependant of oxidative stresses. These data support the notion that Mdm2 presents unexpected functions on chromatin, independently of its very well described p53 regulation
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Cizkova, Magdalena. "Pronostic and Predictive Markers in Breast Cancer - PI3K Signaling Pathway." Thesis, Paris 11, 2013. http://www.theses.fr/2013PA11T021.
Анотація:
Les résultats des projets actuels apportent une information, sur différents aspects des rôles de la voie PI3K, dans le développement du cancer du sein, et la réponse au traitement. Les projets particuliers couvrent des sujets liés à la voie aux niveaux concernant les récepteurs de la famille HER, activant la voie PI3K, ainsi que PI3K et les effecteurs en découlant. Les effets pronostic et prédictif de la dérégulation de PI3K sont les sujets centraux de la recherche décrite ici. Une baisse d’expression de PI3KR1 est associée à une survie réduite dans notre cohorte de patients. Une attention particulière a été portée aux mutations de PIK3CA communes dans le cancer du sein. Tandis que les mutations de PIK3CA agissent comme des marqueurs de bon pronostic chez les patients anti-HER2-naïfs, ces mutations agissent au contraire comme prédicteurs négatifs de la réponse au traitement par trastuzumab. Les résultats décrits mènent un peu plus vers l’implication de plusieurs voies moléculaires altérées, en particulier la voie de signalisation Wnt, dans la tumorigénèse des cancers du sein PIK3CA mutés. De plus, nous avons testé les taux de lapatinib plasmatique montrant une augmentation pertinente dans les périodes d’état d’équilibre du traitement. Par ailleurs, nous avons démontré des incohérences dans l’évaluation de l’EGFR et proposé des approches pour l’interprétation des comptages d’immunohistochimie et de FISH. Tous ces sujets sont connectés par la 170 voie PI3K, et le besoin d’approfondir les connaissances actuelles, et d’apporter de nouvelles informations utiles applicables dans le futur dans les pratiques cliniquesResults of the presented research projects bring information about several aspects of the PI3K signaling pathway roles in breast cancer development and treatment response. The particular projects covered the subjects connected with the signaling pathway, ranging from the HER family receptors activating the pathway, and PI3K to the downstream levels of signalisation. The prognostic and predictive effect of PI3K deregulation was the central subject of the described research. The decreased expression of PIK3R1 associated with reduced survival of our patients. A special focus was put on the PIK3CA mutations which are common in breast cancer. Whereas the PIK3CA mutations act as a good prognostic marker in patients non-treated with the HER2 inhibitors, these mutations predict a negative response to trastuzumab treatment. The described results, furthermore, draw attention to the role of several altered molecular signaling pathways in breast cancer development, especially to the Wnt signaling pathway. The lapatinib plasma levels showing the relevant increase in comparison with the already described efficient steady-state levels were also described in one of the projects. Moreover, various modifications to EGFR status assessment were compared and showed that EGFR FISH and IHC count interpretation depended significantly on method and thresholds used. All these subjects are connected by the PI3K pathway, the need to deepen current knowledge and bring new useful information applicable in future clinical practice
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Poirson, Juline. "Interactome des oncoprotéines E6 et E7 des HPV : du système ubiquitine-protéasome à la voie de signalisation Hippo." Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAJ052.
Анотація:
Les papillomavirus humains (HPV) constituent l’archétype des virus à ADN oncogènes. Les HPV muqueux à haut risque (principalement HPV16) sont les principaux agents étiologiques du cancer du col utérin. Les protéines virales E6 et E7 sont des acteurs cruciaux de la cancérogenèse induite par HPV. Nous avons construit une ressource composée de 600 ADNc codant les effecteurs humains du système ubiquitine-protéasome (UPS) et identifié de nouvelles cibles potentielles des protéines E6 et E7 en utilisant une méthode basée sur la complémentation protéique de la Gaussia princeps luciférase (GPCA). HPV16 E6 lie les motifs LxxLL présents dans E6AP et IRF3. Nous avons résolu la structure cristallographique des complexes E6/LxxLL de E6AP/p53 et E6/LxxLL de IRF3. Par ailleurs, nous avons montré que les HPV ciblent une nouvelle voie suppresseur de tumeurs, la voie Hippo, avec ses deux médiateurs clef YAP et TAZ. Nous avons généré une banque d’ADNc codant 265 domaines PDZ humains et identifié de nouveaux partenaires potentiels des protéines YAP/TAZ en utilisant la méthode GPCA. Les résultats obtenus permettent de mieux comprendre la biologie des HPV et leur pouvoir oncogèneThe human papillomavirus (HPVs) are the archetype of DNA oncogenic viruses. High-risk mucosal HPVs (mainly HPV16) are the main causative agents of cervical cancer and are also involved in other cancers. HPV oncogenic properties are mainly due to the expression of E6 and E7 proteins. We built a resource composed of 600 cDNA encoding the human ubiquitin-proteasome system (UPS) effectors and identified novel E6 and E7 potential targets by using a method based on the complementation of the Gaussia princeps luciferase (GPCA). HPV16 E6 binds to specific LxxLL motifs present in E6AP and IRF3. We have solved the crystallographic structure of the E6/E6AP LxxLL/p53 and E6/IRF3 LxxLL complexes. Furthermore, HPV may target a novel tumour suppressor pathway, the Hippo signalling pathway with its two main mediators YAP and TAZ. We have built a cDNA library dedicated to the 265 human PDZ domains and identified news potential partners of YAP and TAZ proteins by using the GPCA. The results provide novel insights on HPV biology and their oncogenic property
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Carbonneau, Mélissa. "Activation de la voie oncogénique mTOR par les formes mutées de l'isocitrate déshydrogénase 1/2 retrouvées chez les gliomes." Thèse, 2015. http://hdl.handle.net/1866/13693.