Добірка наукової літератури з теми "Voies oncogènes"

Background: The epidemiology of human papillomavirus (HPV) infection and the pattern of HPV genotype distribution are parameters needed to assess the risk of cervical cancer. Oncogenic HPV types are well-known pathogen for lower genital tract neoplasias, representing the primary cause of cancer death in Africa and the second in Cameroon. This study was conducted to identify the various genotypes particularly the high-risk HPV types in normal and abnormal cervical cytology from women in Yaoundé, Cameroon. Methodology: This was a hospital-based, analytical cross-sectional study carried out on 226 symptomatic women wherein cervico-vaginal samples were obtained during gynaecological examination for Pap smears, HPV-DNA and genotype detection with linear array HPV strip, conducted from November 2019 to January 2021. Results: From the 226 women whose cervical samples were collected for Pap smears, 71 (31.4%) had abnormal cytology results while 155 (68.6%) had normal results. The overall HPV prevalence in the study population was 34.1% (77/226). The HPV prevalence in women with abnormal Pap smears was 100% (71/71) and are distributed in following descending order; LSIL (21.1%, 15/71), HSIL (21.1%, 15/71), ASC-US (19.7%, 14/71), ICC (19.7%, 14/71) andothers (18.4%, 13/71). HPV-DNA was positive in 6 (3.9%) of the 155 women with normal cytology results, 4 (2.6%) of whom were high-risk HPV. There is statistically significant difference in the HPV prevalence between women with abnormal and normal Pap smear results (OR=3289, 95% CI=182.62-59235, p<0.0001). The frequently identified oncogenic HPV types were type 16 (31.2%, 24/77), type 45 (14.3%, 11/77) and type 18 (10.4%, 8/77). Conclusion: It is evident from our study that symptomatic women with normal Pap smear can have HR-HPV infection and should therefore be screened for HPV and followed up with periodic Pap smears to detect any abnormal change in cervical cytology results, to prevent cervical cancer development. Women should be encouraged to take up cervical screening, through Pap smears, because it is a non-invasive and cost-effective method for early detection of preinvasive lesions. French title: Répartition comparative des génotypes du VPH chez les femmes ayant une cytologie cervicale normale et anormale à Yaoundé, Cameroun Contexte: L'épidémiologie de l'infection par le virus du papillome humain (VPH) et le schéma de distribution des génotypes du VPH sont des paramètres nécessaires pour évaluer le risque de cancer du col de l'utérus. Les types de VPH oncogènes sont des agents pathogènes bien connus des néoplasies des voies génitales inférieures, représentant la première cause de décès par cancer en Afrique et la deuxième au Cameroun. Cette étude a été menée pour identifier les différents génotypes, en particulier les types de VPH à haut risque dans la cytologie cervicale normale et anormale chez les femmes de Yaoundé, au Cameroun. Méthodologie: Il s'agissait d'une étude transversale analytique en milieu hospitalier menée sur 226 femmes symptomatiques dans laquelle des échantillons cervico-vaginaux ont été obtenus lors d'un examen gynécologique pour les frottis Pap, l'ADN du VPH et la détection du génotype avec une bandelette VPH à réseau linéaire, menée à partir de novembre 2019 à janvier 2021. Résultats: Sur les 226 femmes dont les échantillons cervicaux ont été prélevés pour les frottis Pap, 71 (31,4%) avaient des résultats cytologiques anormaux tandis que 155 (68,6%) avaient des résultats normaux. La prévalence globale du VPH dans la population étudiée était de 34,1% (77/226). La prévalence du VPH chez les femmes ayant des frottis de Pap anormaux était de 100 % (71/71) et est répartie dans l'ordre décroissant suivant ; LSIL (21,1 %, 15/71), HSIL (21,1%, 15/71), ASC-US (19,7%, 14/71), ICC (19,7%, 14/71) et autres (18,4%, 13/71). L'ADN du VPH était positif chez 6 (3,9%) des 155 femmes ayant des résultats cytologiques normaux, dont 4 (2,6%) étaient des VPH à haut risque. Il existe une différence statistiquement significative dans la prévalence du VPH entre les femmes ayant des résultats de frottis anormaux et normaux (OR=3289, IC à 95%=182,62-59235, p<0,0001). Les types de VPH oncogènes fréquemment identifiés étaient le type 16 (31,2%, 24/77), le type 45 (14,3%, 11/77) et le type 18 (10,4%, 8/77). Conclusion: Il ressort de notre étude que les femmes symptomatiques avec un frottis de Pap normal peuvent avoir une infection HR-HPV et doivent donc être dépistées pour le VPH et suivies de frottis de Pap périodiques pour détecter tout changement anormal dans les résultats de la cytologie cervicale, afin de prévenir le développement du cancer du col de l'utérus. Les femmes devraient être encouragées à entreprendre un dépistage cervical, par le biais de frottis vaginaux, car il s'agit d'une méthode non invasive et rentable pour la détection précoce des lésions pré-invasives.

Les récepteurs tyrosine kinase (RTK) sont des pro-oncogènes impliqués dans la pathogénèse de nombreuses tumeurs digestives. Nous avons mené plusieurs travaux de recherche translationnelle et fondamentale sur le RTK KIT et les tumeurs stromales gastro-intestinales (GISTs). Les GISTs avec la delWK557-558 et celles avec une délétion emportant les deux résidus tyrosine de l'exon 11 de KIT semblaient avoir le même pronostique. Les GISTs homozygotes étaient par contre plus souvent malignes que les GISTs hétérozygotes. Les GISTs homozygotes seraient secondaires à une perte d’heterozygotie sans perte de matériel génétique. A partir de lignées cellulaires, nous avons démontré que la biologie de KIT dans les cellules hétérozygotes était plus proche de celle des cellules hémizygotes KIT non muté que des hémizygotes KIT muté. Le statut hémizygote/hétérozygote d'une part et la perte ou non des résidus tyrosine de l'exon 11 de KIT d'autre part étaient associés à des profils d'expression d'ARNm et de miARN spécifiques. Enfin, nous avons pu décrire trois familles avec une mutation germinale de l'exon 13 de KIT et proposer des recommandations pour leur prise en charge
Receptor tyrosine kinases (RTKs) are pro-oncogenes involved in the pathogenesis of many gastrointestinal tumors. We conducted several studies of translational and basic research on the RTK KIT and the gastrointestinal stromal tumors (GISTs). GISTs with delWK557-558 and those with a deletion carrying the two tyrosine residues in KIT exon 11 had the same prognosis. Homozygous GISTs appear more often malignant than heterozygous GISTs. We then reported that homozygous GISTs may be secondary to loss of heterozygosity without loss of genetic material. From cell lines, we demonstrated that the biology of KIT in heterozygous cells was closer to that hemizygous unmutated KIT cells that hemizygous mutated KIT. The hemizygous/heterozygous status on the one hand and the loss or non-tyrosine residues of the KIT exon 11 on the other hand were associated with specific expression profiles of mRNA and miRNAs. Finally, we have described three families with a germline mutation in exon 13 of KIT, and we proposed recommendations for their management

L'identification du réarrangement du gène RARα comme en étant le mécanisme moléculaire responsable de la Leucémie Aiguë à Promyélocytes (LAP) a conduit à la première thérapie ciblée visant à réorienter les cellules tumorales vers une différenciation normale, grâce au traitement par l'acide rétinoïque (AR). Alors que nous avions mis en évidence l'existence d'une hétérogénéité de réponse in vitro des cellules de patients LAP à CAR qui corrélait avec une certaine hétérogénéité de réponse clinique, nous avons engagé des travaux dans deux directions complémentaires. -Nous avons participé à une étude montrant que certains types de mutations du gène de fusion PML-RARα sont retrouvés chez des patients de pronostic défavorable. Nous avons également pu montrer que l'analyse de la maladie résiduelle des patients par RT-PCR quantitative pouvait permettre une meilleure détection des patients à risque de rechute. Enfin nous avons montré que la présence de corps d'Auer en grandefréquence dans les cellules LAP au moment du diagnostic était corrélée avec une moins bonne réponse à l'AR et un moins bon pronostic. -Nous avons également tenté de comprendre comment des signaux extracellulaires de deux types différents (signal membranaire venant d'une cytokine comme le G-CSF et signal nucléaire venant de l'AR) pouvaient s'interconnecter et être synergiques pour permettre une différenciation optimale de cellules LAP. En utilisant un modèle de cellules résistantes à l'AR nous avons montré que la voie ERK1/2 est capable de restaurer les fonctions trancriptionnelles de l'AR via le recrutement de RARα, CBP/P300 et d'histones acétylées sur les promoteurs de gènes cibles de l'AR
The identification of RARa gene rearrangement as the molecular origin of Acute Promyelocytic Leukemia (APL) led to the first targeted therapy aiming at reinducing normal differentiation of tumour cells using retinoic Acid (RA). Because we previously identified a level of heterogeneity in in vitro response of patients' cells to the RA induced differentiation which was correlated to the heterogeneity in clinical response, we developed several studies: -we collaborated to a study which allowed to identify certain mutations of the PML-RARα gene in APL patients with an adverse prognostic. We have also shown in another study that the minimal residual disease analysis using quantitative RT-PCR allowed to better identify patients that will relapse. We also demonstrated that a high frequency of Auer rods in APL cells at diagnosis is correlated to a poorer clinical outcome. -We have analysed whether extracellular signalling of 2 different origins (membrane signalling induced by the G-CSF and nuclear signalling induced by RA) may be interconnected and become synergistic to induce the differentiation of APL cells. In a model of APL cells resistant to the differentiation effect of RA we demonstrated that ERK1/2 pathway can restore transcriptional activation by RA via RARα, CBP/P300 and acetylated histone H3 recruitment on RA target gene promoters

Les tumeurs de vessie suivent deux voies de progression tumorale. La voie des carcinomes in situ (CIS) qui progressent pour envahir la membrane basale puis le muscle, et la voie des tumeurs papillaires de bas grade qui progressent peu mais qui récidivent fréquemment. Environ 65% des tumeurs papillaires de bas grade présentent une mutation du gène FGFR3 et récemment des protéines de fusion FGFR3-TACC3 ont été observées dans les tumeurs de vessie (dans 10% des tumeurs invasives). Le rôle oncogénique du récepteur FGFR3 muté et de FGFR3-TACC3 a été démontré in vivo et in vitro. Cependant, les voies de signalisation du récepteur FGFR3 muté ou de FGFR3-TACC3 sont à l’heure actuelle très peu caractérisées. Dans ce contexte, deux approches ont été mises en place pour caractériser ces voies de signalisation. La première s’appuie sur l’étude de la phosphorylation des protéines p38, AKT et ERK1/2 par le récepteur FGFR3 muté (S249C) ou sauvage dans la lignée cellulaire fibroblastique NIH3T3, et a permis d’identifier les protéines p38 et AKT comme activées par le récepteur FGFR3 muté et nécessaire pour induire la transformation cellulaire. L’étude de l’activation de ces deux voies de signalisation a été réalisée dans des lignées cellulaires dérivées de tumeurs de vessie exprimant le récepteur FGFR3 muté ou FGFR3-TACC3 de manière endogène et a montré que leur activation était dépendante de celle du récepteur FGFR3. De plus nous avons montré que les protéines p38 et AKT sont impliquées dans le maintien d’une boucle de rétro-contrôle positive entre FGFR3 et MYC : l’activation de FGFR3 induit une surexpression de MYC qui en retour promeut l’expression de FGFR3. La seconde approche est basée sur une étude visant à identifier les partenaires protéiques de FGFR3 par spectrométrie de masse après immunoprécipitation de celui-ci qui avait été réalisée précédemment au laboratoire. L’analyse des données a permis l’obtention d’une liste de 60 protéines identifiées comme partenaires protéiques de FGFR3 avec une grande confiance. La construction d’un réseau à partir de cette liste n’a pas été possible (trop peu d’interactions existant entre ces protéines), nous avons donc développé un algorithme (PEPPER) en collaboration avec un étudiant en bio-informatique au laboratoire, Rémy Nicolle, pour proposer un réseau de signalisation de FGFR3.Les deux approches mises en place au cours de cette thèse nous ont permis de mieux caractériser les voies de signalisation du récepteur FGFR3. L’identification d’une boucle de rétrocontrôle entre FGFR3 et MYC a permis de mieux comprendre pourquoi le récepteur FGFR3 possède des propriétés oncogéniques, et de proposer les protéines p38 et AKT comme cibles thérapeutiques potentielles pour traiter les tumeurs de vessie exprimant le récepteur FGFR3 altéré. La construction du réseau de signalisation de FGFR3 via PEPPER donne une vue d’ensemble des voies de signalisation de FGFR3 et ouvre de nouvelles pistes à étudier
Bladder cancer progression can be divided in two main pathways. The pathway of In Situ Carcinoma (CIS) which progress through an invasion of the basement membrane and then the muscle and the pathway of Ta papillary tumors which change little but recur frequently after tumor resection. Approximately 65% of Ta papillary tumors harboring a FGFR3 mutation and recently FGFR3-TACC3 fusion proteins have been observed in bladder tumors (about 10% of bladder tumors). The oncogenic role of the mutated FGFR3 receptor and of the FGFR3-TACC3 fusion protein has been demonstrated in vivo and in vitro. However signaling pathways activated by the mutated FGFR3 receptor or by the FGFR3-TACC3 fusion protein are currently poorly characterized.In this context, two approaches have been developed to characterize these signaling pathways. The first is based on the study of p38, AKT and ERK1/2 phosphorylation by the mutated receptor (S249C) or the wild type receptor in the NIH3T3 fibroblastic cell line. This study allowed identifying p38 and AKT as activated by the mutated FGFR3 receptor. Moreover, activation of p38 and AKT by the mutated receptor is critical for cell transformation. Study of the activation of these two signaling has been realized in human bladder cancer cell lines endogenously expressing the mutated FGFR3 receptor or the FGFR3-TACC3 fusion protein. Moreover, we showed that p38 and AKT are involved in the maintenance of a FGFR3/MYC feedback positive loop: FGFR3 activation induce MYC over expression which in turns promotes FGFR3 expression. The second approach is based on a study whose aim was to identify FGFR3 proteins partners by mass spectrometry after a FGFR3 immunoprecipitation, which has been previously realized in the lab. Data analyze led to the obtaining of a list of 60 proteins identified has FGFR3 protein partners with a high confidence. Construction of a FGFR3 network with this list was not possible (too little interactions existing between these proteins), so we developed an algorithm (PEPPER) in collaboration with a student in bioinformatics in the lab, Remy Nicolle, to propose a FGFR3 signaling network.The two approaches developed during this thesis allowed us to better characterize the FGFR3 signaling pathways. Identification of a FGFR3/MYC feedback loop allowed us to better understand why the altered FGFR3 has oncogenic properties and to propose p38 and AKT as news promising therapeutic targets, to treat human bladder tumors harboring the altered FGFR3 receptor. Construction of the FGFR3 signaling network with the algorithme PEPPER give an overview of the FGFR3 signaling pathways and open new tracks to explore

Le cancer du rein est résistant aux thérapies existantes. Des acteurs intervenant dans l’homéostasie peuvent être réexprimés par des cellules cancéreuses. Nous avons recherché ici si la cancérogenèse et la progression tumorale font appel à des voies/marqueurs développementaux. Nos investigations se sont portées spécifiquement sur la voie développementale du sonic hedgehog et par la suite sur le facteur de transcription néphrogénique Lim1. L’accès aux tumeurs humaines et l’exploitation de lignées cellulaires nous a permis d’analyser l’expression de cette voie signalétique et de ce marqueur néphrogénique dans le carcinome à cellules rénales. Des inhibiteurs pharmacologiques ainsi que l’utilisation de transfections de siRNA/cDNA ont été utilisés pour évaluer l’effet in vitro de ces acteurs du développement sur la prolifération et l’apoptose des cellules cancéreuses. La migration a été étudiée par l’utilisation de chambres de Boyden et l’activation/interaction d’autres voies oncogéniques a été recherchée par Western blot. Finalement une approche in vivo a permis une validation pré-clinique du bloquage de ces voies. Nous avons montré que la voie HH et que Lim1 sont réexprimés dans les tumeurs et dans l’ensemble des lignées humaines. Leur inhibition entraine une diminution importante de la prolifération ainsi que de la migration cellulaires. In vivo, une inhibition de la croissance tumorale a été observée en ciblant cette voie et ce marqueur. Le ciblage de voies impliquées dans le développement peut constituer une innovation thérapeutique importante dans le traitement des cancers du rein et pose une pièce supplémentaire dans le puzzle moléculaire des mécanismes cancéreux
Kidney cancer remains resistant to therapies. Several genes play essential roles in human development, particularly during nephrogenesis. The concept suggesting that these actors could be expressed by cancer cells has recently emerged. In our studies, we investigated if cancerogenesis and tumor growth in renal cell carcinoma are linked to the developmental pathways. For this purpose, we focussed particularly on the developmental sonic hedgehog pathway, and then on the nephrogenic transcription factor Lim1. The expression of the SHH pathway and of Lim1 in RCC were analysed on RCC cell lines and tumors from human RCC. The proliferative and apoptosis effects of the SHH pathway and of Lim1 on kidney cancer cells were evaluated in vitro. Their involvement in kidney cancer cells migration and invasion were also studied, as well as their interaction with oncogenic pathways by Western blot. Focussed on the description of therapeutical innovation, we used xenografted mice to analyze the effects of the inhibition of these developmental pathways/markers in vivo. Our results demonstrate that the SHH pathway and Lim1 are reexpressed in RCC cell lines and in human tumors. The inhibition of these actors led to a radical decrease of cancer cells proliferation and migration. In vivo, targeting these pathways/markers, that we showed to participate to the regulation of oncogenic pathways, induced a decrease of tumor growth and even marked tumor regression. The developmental pathways implicated in RCC growth could constitute an important therapeutical innovation in the treatment of this cancer, and allow us to put an additional piece in the molecular puzzle of molecular cancer mechanisms

Nous avons montré que les inhibiteurs de l'HMG-CoA réductase (statines) utilisés classiquement en clinique comme hypocholestérolémiant préviennent la formation de géranylgéranylpyrophosphate (GGPP) et réduisent la fixation membranaire (=activation) de RhoA ce qui conduit in vitro et in vivo à l'inhibition de prolifération et d'invasion des cellules agressives de cancer du sein. D'autres mécanismes impliqués dans l'activité anti-cancéreuse des statines (action sur les CDKi, les protéases et Wnt-5a) ont été identifiés au niveau moléculaire en utilisant des micro-puces à ADN. Enfin, nous avons montré que les bisphosphonates, qui ont une bio-disponibilité supérieure à celle des statines, préviennent également la fixation membranaire de RhoA ce qui conduit à une diminution de l'invasion et du chémotactisme des cellules cancéreuses. En conclusion, l'inhibition des voies de signalisation dirigées par RhoA semble être une bonne stratégie pour lutter contre les cancers agressifs
We have shown that HMG-CoA reductase inhibitors (statins) currently used in the treatment of hypercholesterolemia prevent the formation of geranylgeranylpyrophosphate (GGPP) and reduce the membrane localisation (=activation) of RhoA leading to the inhibition of cell proliferation and invasion of aggressive breast cancer cells in vitro and in vivo. Other mechanisms involved in the anticancer activity of statins (action on CDKi, proteases, Wnt-5a) were identified at molecular level using microarray. Finally, we have shown that bisphosphonates, which have a biodisponibility higher than statin, prevent also the membrane localisation of RhoA leading to the reduction of both cell invasion and chemotactic effect of cancer cells. To conclude, the inhibition of RhoA cell signalling pathways seems to be a good strategy to fight aggressive cancers

Les cancers des voies aérodigestives supérieures (VADS) sont le 5ème cancer le plus commun dans le monde et représentent 780'000 cas nouveaux par an. Malgré des recherches de nouveaux protocoles thérapeutiques la survie à 5 ans des patients n'a pas été significativement améliorée lors des trois dernières décennies. L'utilisation de marqueurs pronostiques individuels est insuffisante à ce jour et les grade histopronostique de la tumeur (TNM, index de différenciation) est à ce jour le seul indicateur pronostique avancé. De manière à générer une collection aussi exhaustive que possible de gènes différentiellement exprimés dans les tumeurs VADS, nous avons analysé le transcriptome de tumeurs hypopharyngées de stade précoce et de stade plus avancé, présentant ou non une propension à la métastase. Nous avons comparé l'expression des gènes pour les tissus tumoraux ainsi que les tissus normaux issus du même patient. La technique du Differential Display (DD), entreprise à grande échelle (56 amorces arbitraires) nous a permis d'isoler une collection de 1'200 gènes potentiellement différentiellement exprimés dans les tumeurs. Un sous-groupe de 70 gènes a été mise en évidence comme différentiellement exprimé avec une sonde complexe (Lemaire et al., 2003). L'étude de la valeur pronostique de l'ensemble de notre collection DD est en cours sur une cinquantaine de patients. La technique du DD a été utilisée de manière à isoler des gènes indépendamment de leur niveau absolu d'expression, afin d'isoler des gènes inconnus ou des gènes-clés, régulateurs exprimés à faible niveau. La technique des puces à ADN Affymetrix (Cromer et al., 2003) a été utilisée de manière à effectuer un criblage supplémentaire essentiellement orienté sur le criblage des gènes connus, pouvant posséder une valeur pronostique. ExonHit Therapeutics SA a mis en oeuvre la technique brevetée DATAS de façon à isoler les transcrits de l'épissage alternatif exprimés dans les tumeurs de différents types tumoraux. La caractérisation de l'expression de 4 gènes favoris (1 sous exprimé et 3 surexprimés dans les tumeurs) a été entreprise par diverses techniques (Virtual Northern blot, Northern blot, PCR, immunocytochimie, hybridation in situ et immunohistochimie). Les séquences codantes de ces gènes ont été clonées dans des vecteurs d'expression pour une caractérisation fonctionnelle par transfection en orientation sens et antisens avec les techniques de FACS, des tests de clonogénicité, et de Western blot. L'étude de ces gènes est poursuivie dans le but d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques.

Le virus d'Epstein-Barr (EBV) est un herpèsvirus humain qui infecte une très grande majorité de la population mais, ces infections restent, pour la plupart, asymptomatiques. Cependant, la capacité d'EBV à transformer in vitro des lymphocytes B normaux en lignées cellulaires lymphoblastoïdes (LCL), ainsi que sa détection fréquente dans bon nombre de tumeurs humaines, incluant les lymphomes de Burkitt, des patients immunodéprimés, T ou NK, la maladie de Hödgkin et les carcinomes du nasopharynx, de l'estomac ou même du sein, nous montre que ce virus peut également contribuer à certains processus de cancérisation. LMP1 (Latent Membrane Protein 1), une des protéines fréquemment exprimées lors de ces différentes pathologies malignes, a été décrite comme une molécule clé pour la transformation cellulaire et l'effet oncogène d'EBV. Cependant, dans la grande majorité des cancers associés au virus, EBV exprime un programme de latence de type II. Or, aucune preuve directe de l'importance de LMP1 dans des cellules transformées par EBV et présentant une latence de type II n'a été apportée. Dans notre laboratoire, deux lignées celullaires présentant cette latence virale ont été obtenues à partir de cellules sanguines infectées par EBV. Ces cellules sont de deux types : une dérive d'un lymphocyte T (NC5) alors que l'autre est d'origine monocytaire (TE1). Au début de mon travail de thèse, grâce à l'emploi d'oligonucléotides antisens, nous avons pu montrer que la lignée TE1 était dépendante de LMP1 pour sa survie et sa prolifération. Les propriétés oncogènes de LMP1 sont liées à sa capacité d'activer de façon chronique des voies de signalisation cellulaire. En effet, LMP1 est une protéine membranaire fonctionnellement apparentée à la famille des récepteurs du TNF, mais aussi des récepteurs de l'IL-1 et les " Toll-like receptors ". Cette parenté se caractérise par l'utilisation d'adaptateurs (TRAFs, TRADD, RIP. . . ), de médiateurs (IRAK1, TAK1. . . ) et de voies de signalisation cellulaire (NFB, JNK, IRFs. . . ) communes. La région C-terminale (CT) cytosolique de LMP1, via des domaines TES1 (Transforming Effector Site 1) et TES2, permet la fixation de ces adaptateurs et de l'activation de ces voies de signalisation cellulaire. Nous avons développé et caractérisé un mutant dérivé de LMP1 en fusionnant sa partie CT en aval de la proteine fluorescente GFP. Par des approches de transactivation, de co-immunoprécipitation et de microscopie confocale, nous avons démontré que ce mutant LMP1-CT était capable de séquestrer les adaptateurs TRAF et TRADD dans le cytosol et ainsi d'inhiber la signalisation de LMP1. Grâce à de dominant négatif, nous avons pu montrer que notre autre lignée infectée par EBV et présentant une latence de type II (NC5) était, elle aussi, dépendante de LMP1 pour sa survie et sa prolifération. Avec tous ces " outils " cellulaires et moléculaires, nous avons enfin cherché à savoir quelle était l'origine de l'expression de LMP1 lors du programme de latence de type II d'EBV. En effet, lors de cette latence, c'est à dire en l'absence du principal transactivateur viral (EBNA2), le mécanisme responsable de l'expression de LMP1 n'a pas été expliqué. Nous avons tout d'abord étudié la possibilité d'une autoactivation de LMP1 grâce à des cotransfections transitoires en cellules épithéliales (HEK 293). Nous avons alors établi que LMP1 était capable d'activer son propre promoteur via l'induction par le domaine TES2 du module MKK7 de la voie. JNK, mais aussi de l'inhiber via l'induction de la voie NFB. Grâce à l'utilisation d'inhibiteurs pharmacologiques des voies de signalisation NFB et JNK, nous avons également pu conforter ce modèle d'autorégulation sur l'expression endogène de LMP1 dans les cellules TE1 (latence de type II, i. E. Absence d'EBNA2) mais également, dans des LCLs, où EBNA2 est pourtant l'inducteur majeur. De plus, en exprimant de façon inductible le dominant négatif LMP1-CT dans nos lignées NC5 et TE1, nous avons pu mettre en évidence le rôle majoritaire du signal émis par LMP1 pour le maintien de sa propre expression lors des latences de type II d'EBV. En conclusion, cette étude nous a permis de (i) développer des modèles physiologiques de cellules infectées et immortalisées par EBV ayant une latence virale de type II, (ii) d'apporter la démonstration du rôle essentiel de LMP1 lors de cette latence et, (iii) d'expliquer le mécanisme permettant le maintien de son expression lors de cette même latence. Ce travail soulève aussi le problème de l'inhibition pharmacologique de la seule voie NFB lors d'approches thérapeutiques des cancers associés à EBV mais, apporte également des éléments intéressants pour le développement de molécules dérivées de LMP1 pouvant inhiber ses effets.

Le mélanome de l'uvée est la tumeur primaire intraoculaire la plus fréquente chez l'adulte. Bien que ce cancer ait une faible incidence, son caractère agressif et l'absence de stratégies thérapeutiques satisfaisantes pour le traiter nous ont poussé à nous intéresser à sa physiopathologie. Nous avons comparé l'expression de 120 protéines dans des mélanocytes uvéaux sains et tumoraux. Cette étude a révélé la dérégulation de la voie ERK. Nous avons confirmé, par des expériences complémentaires, l'importance de cette dérégulation dans l'induction de la prolifération et de la transformation tumorale. Nous avons également identifié deux altérations, au moins, qui sont à l'origine de la suractivation de la voie ERK dans les cellules de mélanomes uvéaux : 1) la présence du mutant B-RafV599E et 2) l'existence d'une boucle autocrine SCF/c-Kit. L'inhibition de cette dernière par le STI571 a d'ailleurs montré des résultats in vitro encourageants en vue d'une éventuelle application thérapeutique
Uveal melanoma is the most frequent intraocular primary tumour in adults. Although this cancer has a low incidence, its aggressive character as well as the absence of current satisfactory therapeutics to treat it lead us to study its physiopathology. We compared the expression levels of 120 proteins in both normal and tumoral melanocytes. We found that the ERK pathway was deregulated. We further confirmed that this deregulation was a major trait in uveal melanoma cells and that it was important for both the proliferation and transformation of these cells. We also identified two alterations responsible for the overactivation of the ERK pathway: 1) the presence of mutant B-Rafv599E and 2) the existence of an autocrine loop of activation by SCF/c-Kit. Inhibition of this latter with STI571 demonstrated promising in vitro results for future therapeutic application

Au cours de cette étude nous nous sommes intéressé à l'implication potentielle de la serine threonine phosphatase calcineurine, dans le développement des leucémies lymphoïdes. Au cours de ce travail nous avons montré que la calcineurine est activée de façon soutenue dans tous les modèles murins de leucémie lymphoblastique T aiguë étudiés, parmis lesquelles les leucémies induites par le domaine intracellulaire de NOTCH1 ou l'oncoprotéine de fusion TEL-JAK2. Ces modèles sont extrêmement pertinents pour la modélisation des pathologies lymphoïdes humaines. En effet, la dérégulation de la voie de signalisation JAK/STAT a été rapporté dans de nombreux cas de LAL humaines (Leucémies lymphïdes aiguës), et plus récemment, des mutations activatrices de NOTCH1 ont été identifiées chez plus de 50% des patients atteints de LAL-T. Des essais pré cliniques chez la souris, nous ont permis de montrer que l'inhibition in vivo de la calcineurine par la CsA ou le Tacrolimus, deux inhibiteurs de la calcineurine couramment utilisés en médecine humaine en tant qu'agents immunosuppresseurs, induisent l'apoptose des cellules leucémique, la régression rapide des leucémies, et prolonge statistiquement la survie des souris. Par ailleurs, l'expression d'un mutant constitutivement activé de la calcineurine dans les cellules leucémiques les rend plus agressives et favorise la progression tumorale, suggérant ainsi que la calcineurine joue un rôle intrinsèque dans les cellules leucémiques. L'analyse de lignées cellulaires établies à partir de LAL-T ou lymphomes B agressifs humains ainsi que d'échantillons provenant de biopsies de patients atteints de lymphomes B ou T , nous a permis de montrer que la calcineurine est également activée de façon soutenue dans les lymphomes/leucémies lymphoïdes humaines. De plus le traitement de ces lignées cellulaires humaines in vitro par la CsA ou le FK506 inhibe leur prolifération et induit l'apoptose de ces cellules. Ces résultats montrent que l'activation soutenue de la calcineurine est critique pour le maintien du phenotype leucémique, et que son ciblage thérapeutique dans les pathologies lymphoïdes humaines pourrait constituer une nouvelle approche thérapeutique
In this study we were interested in evaluating the importance of calcineurin activation, a serine threonine phosphatase, in leukemia développement. We demonstrate that sustained calcineurin activation is observed in ail mouse models of T-cell malignancies tested among which, activated Notchl(ICN1)- or TEL-JAK2-induced T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL). Thèse models are highly relevant to human malignancies. Indeed, deregulation of the JAK/STAT pathway has been reported in a number of ALL, and more recently, it has been shown that activating-mutations of Notchl are found in over 50% of T-ALL patients. We further show that in vivo inhibition of calcineurin activity in these two mouse models by CsA or Tacrolimus, two well known inhibitors of calcineurin currently used in human medicine as immunosuppressant, induced apoptosis of leukemic cells, rapid tumor clearance and signifïcantly prolonged mouse survival. Conversely, ectopic expression of a constitutively activated mutant of calcineurin favored leukemia progression, suggesting that calcineurin plays an intrinsic role in leukemic cells. We extended our study to human samples and human derived cell lines and show that similarly to what is observed in mouse models, ail samples obtained from aggressive B- and T-cell lymphoma patients, as well human leukemia (B and T) derived cell lines exhibit a sustained activation of calcineurin. In vitro treatment of these cell lines with CsA or Tacrolimus impaired their proliferation and induced apoptosis. From these results, we conclude that, calcineurin activation is critical for the maintenance of the leukemic phenotype in vivo, identifying this pathway as a potential novel therapeutic target in lymphoid malignancies