Дисертації: "Voie de signalisation du stress"

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Dubacq, Caroline. "Laprotéine kinase Snf1 et le facteur de transcription Mig3 sont impliqués dans une nouvelle voie de réponse aux stress génotoxiques chez la levure Saccharomyces cervisiae." Paris 11, 2003. http://www.theses.fr/2003PA112187.

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Les stress génotoxiques provoquent des dommages de l'ADN ou un blocage de la réplication cellulaire. Chez S. Cerevisiae, la voie de signalisation permettant l'arrêt du cycle cellulaire afin de réparer ces lésions comprend deux kinases essentielles Mec1 et Rad53, homologues des kinases ATR et Chk2 de Mammifères. Nous avons mis en évidence une interaction génétique entre l'allèle toxique RAD53-GFP et le gène MIG3 qui code pour un répresseur transcriptionnel de la famille MIG. La kinase Snf1, homologue des AMPK de Mammifères, est activée en absence de glucose dans le milieu et inactive le facteur Mig1. Nos résultats suggèrent que l'activité basale de la kinase Snf1 est nécessaire pour une tolérance optimale à l'hydroxyurée, un inhibiteur des ribonucléotide réductases (RNR), au méthyl méthanesulfonate (MMS), un agent alkylant de l'ADN, ou au cadmium, un métal génotoxique. La kinase Snfl n'est pas essentielle pour l'arrêt du cycle cellulaire ou l'induction des gènes RNR2-4 dépendante de Mec1 et Rad53. Par contre, Snf1 pourrait jouer un rôle dans la réparation de l'ADN ou la reprise de la réplication. Mig3 est une des cibles de Snf1 dans la réponse à ces composés génotoxiques ou lors d'une privation en glucose et les modifications post-traductionnelles de Mig3 sont en corrélation avec le degré d'activation de Snf1 selon les conditions. Une étude transcriptomique indique que les facteurs de transcription Yap1 et Aft1 semblent activés en présence d'hydroxyurée, favorisant probablement le maintien de l'homéostasie redox ou du fer. Nous supposons que la kinase Snf1 est nécessaire pour restaurer la fonctionnalité des RNR en présence d'hydroxyurée, de MMS ou de cadmium. D'autres éléments suggèrent que l'activité de la kinase participe aux remaniements de la structure chromatinienne ou à la régulation transcriptionnelle de gènes impliqués dans les fonctions vacuolaires, la dégradation spécifique des protéines ou la synthèse des lipides lors d'un stress génotoxique
Genotoxic stresses induce DNA damage or DNA replication block that can impair the transmission of genetic information. In the budding yeast S. Cerevisiae, the signal transduction pathway allowing cell cycle arrest and DNA repair is under the control of the essential Mec1 and Rad53 kinases, homologues of the ATR and Chk2 mammalian kinases. We show here a genetic interaction between a toxic RAD53-GFP allele and the MIG3 gene, encoding a transcriptional repressor of the MIG family. The Snf1 kinase, homologous to the mammalian AMPK, is activated during glucose starvation and is partly responsible for derepression of glucose repressed genes through phosphorylation of the Mig1 repressor. We demonstrate that the basal activity of Snf1 is required for an optimal tolerance to hydroxyurea, an inhibitor of ribonucleotide reductases (RNR) and thus DNA replication, to methyl methanesulfonate (MMS), a DNA alkylating agent, or to cadmium, a genotoxic metal. Snf1 is not required for cell cycle arrest or RNR2-4 transcriptional activation mediated by the Mec1 pathway. The Snf1 kinase may participate in DNA repair or in replication resumption. The Mig3 repressor is among the Snf1 targets in response to genotoxic stress or during glucose privation and dissimilar post-traductional modifications of Mig3 correlate with Snf1 kinase activity levels in both conditions. We determined through DNA microarray analysis that the Yap1 and Aft1 transcription factors seem to be activated during hydroxyurea exposure, probably enhancing redox and iron homeostasis that are two conditions required for RNR function. We suggest that Snf1 could be required to restore RNR function during hydroxyurea, MMS or cadmium induced genotoxic stress. Some evidence also suggests that Snf1 kinase activity is implicated in chromatin structure remodelling or in the transcriptional regulation of genes involved in vacuolar functions, in protein targeted degradation, or in membrane lipid synthesis during genotoxic stress

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Deny, Ludovic. "Nouveaux inducteurs covalents de la voie de signalisation Keap1/Nrf2/ARE." Thèse, Université de Sherbrooke, 2016. http://hdl.handle.net/11143/9858.

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Le stress électrophile et oxydant est un souci grandissant pour la santé avec l'évolution de nos modes de vie. L'exposition aux ultraviolets, à la pollution, aux substances carcinogènes, à la fumée de cigarette et la pratique intensive d'activités sportives sont autant de causes de stress oxydant pour l'organisme. Ces dommages sont associés à plusieurs maladies et conditions pathologiques telles que cancers, diabètes, infections pulmonaires et maladies neurodégénératives. L'élément de réponse antioxydant (ARE) est un des composants principaux des défenses de la cellule contre ce phénomène. Ce promoteur agit sous le contrôle de Nrf2 (Nuclear factor erythroid 2-related factor 2). Une stratégie populaire pour l'activation de ce mécanisme est l'utilisation d'inducteurs covalents. Ces molécules agissent par la formation de liens covalents avec les nombreux résidus cystéine de Keap1 (Kelch-like ECH-associated protein 1), une protéine chaperonne qui contrôle l'activité de Nrf2. Cette thèse présente la synthèse, les propriétés biologiques et l'étude des relations structure-activité d'une librairie d'électrophiles capables d'induire la transcription des gènes cibles de la voie de signalisation Keap1/Nrf2/ARE. Le premier volet fait état de la comparaison d'une variété d'électrophiles simples pour étudier les préférences de la cible. Le deuxième volet montre que la présence d'une seconde fonction capable de piéger un résidu cystéine fournit des analogues très puissants.

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Gouaze, Valérie. "Rôle de la glutathion peroxydase-1 dans la signalisation cytotoxique : relations stress oxydant-voie du céramide." Toulouse 3, 2001. http://www.theses.fr/2001TOU30124.

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Bedel, Aurélie. "Signalisation mitogène des agents pro-athérogènes, implication de la voie béta-caténine." Toulouse 3, 2010. http://www.theses.fr/2010TOU30149.

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Les maladies cardiovasculaires constituent un problème majeur de santé publique. L'athérosclérose en est la principale étiologie. La prolifération des cellules musculaires lisses (CML) vasculaires est un des éléments clé du processus complexe de l'athérogenèse. Dans ce travail, nous mettons en évidence l'implication de la voie de signalisation E-cadhérine/beta-caténine dans l'effet mitogène des LDL oxydées sur les CML d'aorte humaine. Nous proposons plusieurs mécanismes d'activation de cette voie : clivage de la E-cadhérine, dissociation du complexe E-cadhérine/ beta-caténine et inhibition de la dégradation protéasomale de la beta-caténine. Les métalloprotéases matricielles, les tyrosine kinases et la sphingosine-1-phosphate sont impliquées. L'analyse de l'expression de la ß-caténine dans des plaques d'endartérectomies humaines confirme l'implication de cette voie de signalisation dans l'athérogenèse en montrant sa forme active dans les plaques. Par ailleurs, nous montrons l'implication d'un complexe multiprotéique composé de uPAR, MT1-MMP, MMP-2 et de l'intégrine avß3 dans la signalisation mitogène de l'uPA. L'ensemble de ces travaux nous permet de mieux comprendre certains aspects de la physiopathologie de l'athérosclérose
Cardiovascular diseases are an important healthcare problem. Atherosclerosis is the main etiology. During atherogenesis, vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation, and fibrous cape build-up are essential. In this study, we show for the first time E-cadherin/beta-catenin/Tcf4 pathway implication in human VSMC proliferation elicited by oxidized LDL. We highlight several mechanisms for ß-catenin activation by oxidized LDL: E-cadherin shedding, and dissociation of beta-catenin/E-cadherin complex and decrease of its proteasomal degradation. Metalloproteinases, sphingolipids pathway and tyrosine kinases, known to be activated by oxidized LDL, are implicated in this activation. These results on cell cultures are strengthening by immunohistochemistry staining with anti-active ß-catenin antibody on human carotid endarterectomies. These results establish an important role for ß-catenin activation in atherogenesis. In addition, we focus on mitogenic property of uPA, implicated in atherogenesis. We report that neutral sphingomyelinase-2 activation by uPA is mediated in a multi-protein complex with uPAR, MT1-MMP, MMP-2 and avß3 integrin. This complex formation seems to be necessary for ERK1/2 activation and cell proliferation induced by uPA. These data help us to better understand some aspects of atherosclerosis physiopathology

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Desquiret, Valérie. "Mitochondrie et stress énergetique : voies de signalisation et adaptations cellulaires." Phd thesis, Université d'Angers, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00433520.

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La mitochondrie est un centre de régulation métabolique à la fois intégrateur de signaux (visant à ajuster son fonctionnement selon les besoins énergétiques cellulaires) et initiateur de voies rétrogrades (permettant une réponse cellulaire à des changements d'états fonctionneles de la mitochondrie). Ce travail s'intéresse plus particulièrement au métabolisme oxydatif mitochondrial et aux voies de signalisation activées, dans les cellules HepG2, lors de deux situations de stress énergétique : le découplage mitochondrial constitue un signal conduisant les cellules à développer leur métabolisme oxydatif sans modifier la glycolyse (notamment par activation de la transcription de gènes codant pour des protéines mitochondriales). La mitochondrie est également une des cibles du traitement par glucocorticoïdes, ces hormones induisant à la fois des effets à court terme et à long terme. les effets rapides (modification de l'activité des complexes I, II et III de la chaîne respiratoire mitochondriale) sont non génomiques et impliquent la fixation de la dexamethasone sur un récepteur membranaire. Ces effets sont médiés par l'activation calcium-dépendante de la protéine p38MAPK. Les effets à long terme (augmentation de la capacité de la chaîne respiratoire) sont transcriptionnels et nécessitent le recrutement du récepteur intracellulaire classique aux glucocorticoïdes. Les modifications du fonctionnement de la chaîne respiratoire mitochondriale par les glucocorticoïdes sont induites par le recrutement graduel de différents sites de liaison aux glucocorticîdes (membranaire et intracellulaire).

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Wang, Lili. "Etude de la régulation de la voie de signalisation AMPc-PKA chez Saccharomyces cerevisiae : effet des stress sur le facteur d'échange Cdc25p." Paris 11, 2001. http://www.theses.fr/2001PA112370.

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Cdc25p, un facteur d'échange pour Ras, est un des éléments de la voie AMPc-PKA chez Saccharomyces cerevisiae. Nous avons montré que cette protéine interagit avec les chaperons Hsp70 et Hsp90 in vitro et in vivo. De plus, nos résultats suggèrent que la protéine Cdc25p et la voie AMPc-PKA sont soumises au contrôle des ces chaperons. Les facteurs de transcription, Msn2p et Msn4p, sont activés par les divers stress. L'étude de la localisation nucléaire et de l'état de la phosphorylation de Msn2p, a montré que la voie AMPc-PKA est impliquée dans la signalisation du stress osmotique. La voie AMPc-PKA fonctionne alors, de façon redondante avec la voie HOG pour contrôler la réponse de Msn2p. De plus, ces deux voies agissent différemment sur la résistance au stress osmotique. En réponse au choc thermique, la quantité de Cdc25p diminue, par contre, sa transcription, sa localisation et son état de la phosphorylation ne présentent pas de modification significative. La diminution de la quantité de Cdc25p a été observée également dans le stress oxydant et le stress à l'éthanol. Chez la souche sauvage, le niveau intracellulaire d'AMPc est faible en absence des stress et augmente lorsque la souche est soumise aux stress. Par contre, en absence des stress, la concentration d'AMPe est beaucoup plus élevée chez les mutants tpk^w qui ont perdu le rétrocontrôle de la PKA sur le niveau de l'AMPc, elle diminue dans ces souches en réponse aux différents stress. On en conclut donc que la voie AMPc-PKA est impliquée dans la signalisation du stress. Celle-ci pourrait être contrôlée par une réduction de la quantité de Cdc25p provoquée par la dissociation du complexe de Cdc25p et des chaperons Hsp70 et Hsp90
Cdc25p, an exchange factor for Ras, is one of the upstream elements of the cAMP-PKA pathway in Saccharomyces cerevisiae. We showed that this protein interacted with the chaperones Hsp70 and Hsp90 in vitro and in vivo. Moreover, the results suggested that the protein Cdc25p and the cAMP-PKA pathway were under the control of these chaperones. The transcriptional factors, Msn2p et Msn4p, are activated by diverses stress. Using parameters, such as nuclear localization and the state of phosphorylation of Msn2p, we demonstrated that the cAMP-PKA pathway was involved in the signalization of osmotic stress. Under this condition, the cAMP-PKA pathway played a redundant role with the HOG pathway on the control of the response of Msn2p. Furthermore, these two pathways had different contributions on the resistance to osmotic stress. In response to heat shock, the quantity of Cdc25p decreased, whilst on the contrary, its transcription, localization and state of phosphorylation did not show any significant modification. Such a decrease in quantity of Cdc25p was also observed under oxidative and high ethanol concentration stress. In the wildtype strain, the intracellular level of cAMP was quite low under normal conditions and increased a little in response to stress. In contrast, in the tpk^w strain, the level was much higher in the cells without stress and exhibited a decrease in response to stress. In conclusion, the cAMP-PKA pathway is involved in the signalization of stress. A decrease in the level of Cdc25p, provoked by dissociation with the chaperones Hsp70 and Hsp90, might be important for this involvement

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Genot, Baptiste. "Functional characterization of the stress-activated Arabidopsis MAP Kinase MPK3 using gain-of-function mutations." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016SACLE010.

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Les plantes détectent les pathogènes dans leur environnement et s’y adaptent pour survivre. Le groupe Stress Signalling de l’IPS2 cherche à décrire les mécanismes cellulaires mis alors en jeu et à proposer des stratégies permettant de développer des cultures plus résistantes aux stress. Les modules Mitogen-Activated Protein Kinases (MAPKs) semblent être des acteurs clés de la transduction du signal: ils sont en effet très rapidement activés par de nombreux stress et notamment par les Pathogen-Associated Molecular Patterns (PAMPs). Des approches de génétique, utilisant des mutants perte-de-fonction, ont montré que ces modules MAPKs régulaient de nombreux aspects de l’adaptation des plantes à leur environnement.Dans notre laboratoire, nous avons précédemment identifié des mutations capables de rendre les MAPKs de la plante modèle Arabidopsis thaliana constitutivement actives (CA). L’objectif de mon projet était de clarifier les rôles spécifiques des MAPKs activées par le PAMP flg22 à l’aide de ce nouvel outil. Pour cela, j’ai créé des plantes exprimant des CA MAPKs et j’ai caractérisé leur phénotype en conditions normales de croissance ou lors d’interactions avec des pathogènes. Je me suis particulièrement intéressé à la MAPK MPK3. J’ai montré que des plantes exprimant une version CA de MPK3 avaient un phénotype d’auto-immunité caractérisé par un nanisme associé à la mort cellulaire spontanée et à une accumulation de formes activées de l’oxygène. Des études métabolomiques, transcriptomiques et de génétique ont permis de préciser les réponses régulées par cette MAPK. J’ai en particulier montré que le phénotype des plantes CA-MPK3 était dépendant de la protéine EDS1 (Enhanced Disease Susceptibility 1), un régulateur primordial des réponses aux pathogènes, et partiellement dépendant de l’acide salicylique. J’ai également créé et caractérisé des plantes exprimant des formes CA de MPK6 et MPK11.En conclusion, mon travail tirant partie des mutations CA a permis de proposer de nouveaux rôles spécifiques pour certaines MAPKs activées par le stress. Mes résultats préliminaires suggèrent également que les plantes exprimant des CA MAPK peuvent présenter une meilleure résistance aux pathogènes
Plants can detect pathogens in their environment and adapt to survive it. The Stress Signalling group in IPS2 aims to decipher cellular mechanisms occurring after pathogens detection and to propose strategies to develop stress-resistant crops. Mitogen-Activated Protein Kinases (MAPKs) modules define key actors of signal transduction. MAPKs are indeed quickly activated in response to various stresses including pathogens-associated molecular patterns (PAMPs). Genetic approaches using loss-of-function mutants showed that MAPK modules regulate many aspects of plant adaptation to their environment.In our laboratory, we previously identified mutations which render MAPKs constitutively active (CA) in the plant model Arabidopsis thaliana.The main objective of my thesis was to clarify the specific roles of MAPKs activated by the PAMP flg22 using this new tool. For this, I created plants expressing CA MAPKs and characterized them in normal growth conditions or after pathogen infections. I mainly focused my project on the MAPK MPK3. I showed that plants expressing a CA version of MPK3 had an auto-immune phenotype characterized by a severe dwarfism, spontaneous cell death and accumulation of reactive oxygen species. Transcriptomic, metabolomic and genetic studies were performed to understand which pathways are regulated by this MAPK. This work demonstrates that MPK3 is a positive regulator of plant immunity, whose function depends on EDS1 (Enhanced Disease Susceptibility 1), a key regulator of pathogens responses, and partially depends on the phytohormone salicylic acid. I also created and characterized plants expressing constitutively active MPK6 and MPK11. In conclusion, CA mutations allowed us to reveal new specific roles for several stress-activated MAPKs. My preliminary results also suggest that plants expressing CA MAPK may have a better resistance to pathogens

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Absalon, Cédric. "Identification des cibles du couple Prkc/Prpc et analyse du rôle de la GTPase associée CPGA chez Bacillus subtilis." Paris 11, 2007. http://www.theses.fr/2007PA112171.

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Mes études ont concerné un système de signalisation de fonction inconnue, composé d’une kinase senseur de type eucaryote, d’une phosphatase et d’une GTPase, codées par un groupe de gènes, conservé chez un grand nombre de bactéries à Gram +. Nous avons fait l’hypothèse que PrkC, PrpC et CpgA constitue une voie unique de signalisation liée à la biogénèse de la paroi cellulaire – présence d’un domaine externe PASTA dans PrkC. Ceci s’appuie sur l’implication de CpgA dans la production de peptidoglycane (PG). Ainsi, les cellules déplétées pour CpgA présentent des formes anormales, un dépôt non uniforme de la paroi et l’accumulation de précurseurs tardifs du PG. Une part majeure de mes travaux a porté sur l’identification des cibles de PrkC et PrpC. Tout d’abord, j’ai démontré que CpgA est un substrat de PrkC et de PrpC in vitro, apportant ainsi un argument solide à la relation fonctionnelle des trois protéines. La structure cristalline de CpgA suggérait fortement son rôle comme facteur de traduction. Nous avons donc proposé que CpgA contrôle la synthèse de protéines, capable de coordoner l’expansion de la couche de PG à la synthèse des protéines. Cette hypothèse s’appuie sur ma démonstration que EF-Tu est aussi une cible de PrkC et PrpC. Enfin, j’ai pu identifier une troisième cible de PrkC/PrpC, in vitro et in vivo, YezB, une protéine de fonction inconnue. YezB est un composant du stressosome, connu pour transduire les signaux qui émanent de stress environnementaux, impliqué dans la réponse au stress général, en activant le régulon dépendant de sigma B. La fonction de YezB pourrait être de transduire l’expansion inappropriée du peptidoglycane ou son endommagement, via la phosphorylation par PrkC
My studies have concerned a signalling system of unknown function composed of a eukaryote-like sensor kinase, a phosphatase and a GTPase, encoded by a gene cluster, conserved in many Gram positive bacteria. We hypothesised that PrkC PrpC and CpgA constitute a single signalling pathway concerned cell wall biogenesis – the external PASTA domain of PrkC binds penicillin or peptidoglycan (PG). This was supported by my demonstration that CpgA is implicated in the biogenesis of PG. Thus, cells depleted for CpgA displayed bizarre shapes, non-uniform deposition of the cell wall and accumulation of late PG precursors. A major part of my work also involved identification of targets of PrkC and PrpC. First, the co-ordinated function of the 3 proteins was supported by demonstrating that CpgA is a substrate for PrkC and PrpC in vitro. The crystal structure of CpgA previously indicated a role as a translation factor. Thus we proposed that CpgA controls the synthesis of proteins, including morphogenic factors, or factors coupling the expansion of the PG layer with protein synthesis. This hypothesis is supported by my demonstration that EF-Tu is also a target for PrkC and PrpC. The third target of PrkC/PrpC identified was YezB, a protein of unknown function. YezB is apparently a component of the stressosome that is known to transduce signals, emanating from environmental stress or energy limitation, to activate the sigma B dependent general stress regulon. YezB could conceivably function as a transducer of inappropriate expansion of or damage to the peptidoglycan, via phosphorylation by PrkC

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Chaouki, Ghita. "Etude du rôle de la voie de signalisation eIF2αATF4 au cours des états inflammatoires, dans le cadre du stress mitochondrial et de l’anorexie associée à la pathologie". Electronic Thesis or Diss., Université Clermont Auvergne (2021-...), 2022. http://www.theses.fr/2022UCFAC109.

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La voie de signalisation eIF2α-ATF4 est activée dans les cellules en réponse à un large éventail de stress cellulaires. Son activation conduit à une inhibition de la synthèse protéique globale et la régulation de l’expression de gènes cibles du facteur de transcription ATF4. Cette voie est sollicitée en réponse au déficit en acides aminés indispensables, au stress mitochondrial, au stress du réticulum endoplasmique ou encore aux infections virales. Elle déclenche des mécanismes adaptatifs, à l’échelle cellulaire (tels que l’inhibition de la synthèse protéique et l’augmentation du niveau d’autophagie) et de l’organisme entier (comme la régulation du métabolisme, l’inflammation, l’immunité et la prise alimentaire). Les résultats précédents générés par notre laboratoire ainsi que les données de la littérature nous ont amenés à étudier le rôle de la signalisation eIF2α-ATF4 dans deux contextes différents. Dans une première partie, nous avons exploré le rôle de la signalisation eIF2α-ATF4 dans l’anorexie associée aux pathologies cataboliques inflammatoires (sepsis et cancer). Nous avons émis l’hypothèse que cette voie de signalisation pourrait contribuer à l’inhibition de prise alimentaire par une action directe au niveau central et/ou en stimulant l’expression de cytokines anorexigènes, dont GDF15, en périphérie (foie, intestin). Nous avons utilisé deux modèles expérimentaux reproduisant une anorexie associée à la pathologie chez la souris : un modèle d’inflammation systémique aigue de type sepsis (administration unique de lipopolysaccharide bactérien) et un modèle de souris porteuses d’une tumeur de cellules de carcinome de colon C26. Ces deux modèles ont été caractérisés en phase précoce de l’anorexie, par une inflammation aux niveaux périphérique et central (hypothalamus), une augmentation des niveaux circulants d’IL-6 et de GDF15, une profonde modification du métabolisme des acides aminés, et une activation de la voie de signalisation eIF2α-ATF4 dans l’hypothalamus et dans le foie. Ensuite, la réponse de modèles inductibles de perte de fonction d’ATF4 a été testée dans le modèle de sepsis. L’invalidation d’ATF4 au niveau du foie et de l’intestin n’a pas eu d’impact ni sur l’anorexie, ni sur l’induction de la production de GDF15. L’invalidation constitutive de GDF15 a également été sans effet sur l’inhibition de prise alimentaire induite par l’administration de LPS. Le rôle de la fonction ATF4 au niveau central n’a pas pu être testée et devra faire l’objet d’expérimentations futures. L’analyse des échantillons des souris invalidées pour la fonction d’ATF4 au niveau hépatique nous permettra d’évaluer son implication dans les réorientations du métabolisme des AA (transport, biosynthèse, autophagie). Dans le modèle de cancer C26, le passage du stade de pré-anorexie au stade de début d’anorexie a été associé à une activation de la voie signalisation eIF2αATF4 aux niveaux hépatique et hypothalamique, et une approche fonctionnelle pharmacologique sera prochainement mise en place à l’aide de l’ISRIB (ISR Inhibitor) pour étudier son implication dans la régulation de l’appétit et du métabolisme des AA (dans ce modèle les invalidations géniques ne sont pas possibles). Dans une deuxième partie, nous nous sommes intéressés au dysfonctionnement mitochondrial, qui représente une menace majeure pour l'homéostasie cellulaire, favorise l'apparition de nombreux troubles métaboliques et joue un rôle crucial dans la pathogenèse du sepsis. Compte-tenu du rôle joué par la voie de signalisation eIF2α-ATF4 dans la réponse adaptative au stress mitochondrial, nous avons cherché à savoir si un prétraitement activateur de cette voie pourrait être un moyen d'augmenter la résilience du pool mitochondrial lors d'événements stressants ultérieurs. (...)
The eIF2α-ATF4 signaling pathway is activated in cells in response to a wide range of cellular stresses. Its activation leads to the inhibition of the global protein synthesis and the regulation of the transcription factor ATF4 target genes expression. This pathway is activated in response to essential amino acid deficiency, mitochondrial stress, endoplasmic reticulum stress or viral infections. Its activation triggers adaptive mechanisms, both at the cellular level (such as inhibition of protein synthesis and increased autophagy) and at the whole organism level (such as regulation of metabolism, inflammation, immunity and food intake). Previous results generated by our laboratory as well as data from the scientific literature led us to investigate the role of eIF2α-ATF4 signaling in two different contexts. Firstly, we explored the role of eIF2α-ATF4 signaling in anorexia associated with catabolic inflammatory pathologies (sepsis and cancer). We hypothesized that this signaling pathway could contribute to the inhibition of food intake by its direct action at the central level and/or by stimulating the expression of anorectic cytokines, including GDF15, in the periphery (liver, intestine). We used two experimental models reproducing pathology-associated anorexia in mice: a sepsis model of acute and systemic inflammation (single administration of bacterial lipopolysaccharide) and a model of mice carrying a C26 colon carcinoma cell tumor. Both models were characterized in the early phase of anorexia by inflammation at the peripheral and central (hypothalamus) levels, increased circulating levels of IL-6 and GDF15, profound alterations in amino acid metabolism, and activation of the eIF2αATF4 signaling pathway in the hypothalamus and liver. Afterwards, the response of inducible models of ATF4 loss-of-function was tested in the sepsis model. ATF4 knock-out in the liver and intestine had no impact on either anorexia or the induction of GDF15 production. Constitutive invalidation of GDF15 also had no effect on the inhibition of food intake induced by LPS administration. The role of ATF4 function at the central level could not be tested and should be the subject of future experiments. The analysis of samples from mice knocked-out for ATF4 at the hepatic level, will allow us to evaluate ATF4 involvement in the reorientation of AA metabolism (transport, biosynthesis, autophagy). In the C26 cancer model, the transition from pre-anorexia to early anorexia was associated with an activation of the eIF2α-ATF4 signaling pathway at the hepatic and hypothalamic levels, and a pharmacological approach using ISRIB (ISR Inhibitor) will soon be implemented to study the involvement of the ISR in the regulation of appetite and AA metabolism (in this model, genes knock-out is not possible) Secondly, we focused on mitochondrial dysfunction, which represents a major threat to cellular homeostasis, promotes the development of many metabolic disorders and plays a crucial role in the pathogenesis of sepsis. Given the role played by the eIF2α-ATF4 signaling pathway in the adaptive response to mitochondrial stress, we investigated whether a pretreatment activating this pathway could be a way to increase the resilience of the mitochondrial pool during subsequent stressful events. We demonstrated in mice that a pretreatment activating the GCN2-eIF2α-ATF4 pathway upstream of inflammatory stress (LPS administration) counteracted some of the effects of this stress on mitochondrial homeostasis in the liver, an organ playing a major role in the metabolic and immune response to endotoxic stress. These results are presented as an article that will be submitted soon for publication

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Delcroix, Vanessa. "Rôle de Klotho dans la chimiosensibilisation des liposarcomes dédifférenciés : étude des voies de signalisation impliquées." Thesis, Bordeaux, 2017. http://www.theses.fr/2017BORD0837/document.

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La protéine Klotho (KL) possède des propriétés anti-vieillissement et anti-cancer. Les données cliniques montrent que l’expression de KL est associée à une meilleure survie des patients atteints de liposarcome. De plus, elle est réduite par rapport au tissu sain dans les liposarcomes dédifférenciés (DDLPS), un type de tumeur maligne rare mais de mauvais pronostic. Nos résultats montrent que KL sensibilise les DDLPS aux chimiothérapies (gemcitabine, navitoclax). L’abondance de KL dans les tumeurs pourrait donc servir de biomarqueur pour prédire l’efficacité des chimiothérapies et mettre en place une médecine plus personnalisée. De plus, des médicaments utilisés pour d’autres pathologies et connus pour stimuler l’expression de KL (Cozaar) pourraient être testés en association avec la chimiothérapie. Enfin, inspirés par le mode d’action de KL, nous avons testé la combinaison de la gemcitabine avec le navitoclax, qui s’est révélée très efficace sur les DDLPS
Klotho (KL) is both an anti-ageing and anti-cancer protein. Analysis of clinical data highlights that high expression of KL is associated with a better overall survival of liposarcoma patients. Moreover, its expression in downregulated in dedifferentiated liposarcomas (DDLPS), a rare type of tumor associated with a poor prognosis due to high chemoresistance. Our results show that KL sensitizes DDLPS cells to chemotherapeutic agents (gemcitabine, navitoclax). So, abundance of KL in tumoral tissues could serve as a biomarker for predicting gemcitabine efficacy and so, could help for establishing personalized therapy. Moreover, drugs increasing KL expression could be tested in combination with chemotherapy. Based on KL mechanism of action, we also highlight that the combination between gemcitabine and navitoclax is very effective for killing DDLPS cells

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Derbré, Frédéric. "Etude des voies de signalisation impliquées dans la sarcopénie : rôle du stress oxydant et de l'inactivité physique." Phd thesis, Université Rennes 2, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00652764.

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La sarcopénie est considérée comme un syndrome gériatrique se caractérisant par une diminution de la masse musculaire qui en s'aggravant sera à l'origine d'une détérioration de la force musculaire et des performances physiques. La sarcopénie est évidemment imputable au processus de vieillissement, mais son développement peut être accéléré sous l'effet de facteurs pathologiques et comportementaux. Depuis un siècle à peine, le comportement de l'homme moderne, en matière d'activité physique, a radicalement changé avec un mode de vie de plus en plus inactif. Cette inactivité chronique est apparue trop soudainement pour permettre à notre génotype de s'adapter, et contribue ainsi à accélérer ledéveloppement de la sarcopénie. Néanmoins, des interrogations subsistent concernant les mécanismes cellulaires et moléculaires par lesquels l'inactivité physique favoriserait ce syndrome gériatrique. L'objectif de ce travail de thèse était donc de déterminer certains de ces mécanismes en se centrant tout particulièrement sur le rôle des espèces dérivées del'oxygène (ERDO). En s'appuyant sur différents modèles expérimentaux d'activité (entraînement en endurance) et d'inactivité (suspension par la queue) chez le rongeur, nos travaux ont mis en évidence le rôle essentiel de la surproduction chronique d'ERDO (qu'elle soit liée à l'âge et/ou l'inactivité) dans l'activation de certains facteurs de transcription et kinases redox-sensibles impliqués dans la sarcopénie (i.e. NF-κB, p38 MAPK). Nos travaux démontrent également que l'avance en âge (et probablement l'inactivité chronique) induit une perte de réactivité de PGC-1α, un facteur de transcription redoxsensible régulant un certain nombre de mécanismes cellulaires impliqués dans la sarcopénie. Cette perte deréactivité pourrait s'expliquer par la surproduction chronique d'ERDO dans le muscle âgé

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Kilani, Jaafar. "Décryptage des cascades de signalisation liées au stress par phosphoprotéomique et génétique fonctionnelle chez Botrytis cinerea." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS050/document.

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La perception et l’adaptation à l’environnement sont des processus indispensables pour la survie des organismes vivants. Le champignon phytopathogène Botrytis cinerea peut ainsi percevoir différents types de signaux qu’ils soient chimiques ou physiques. La voie de signalisation de la MAPK Sak1 est impliquée dans l’adaptation au stress osmotique, oxydatif et pariétal, mais aussi dans la sporulation et le pouvoir pathogène en régulant la pénétration de la plante et le développement des nécroses. Afin d’approfondir les connaissances existantes sur la voie de Sak1, nous avons réalisé des études globales basées sur des techniques de protéomique et phosphoprotéomique. L’analyse de protéomique comparative entre la souche sauvage et les mutants de signalisation ∆bos1 et ∆sak1 a notamment mis en évidence que la MAPK Sak1 régule l’abondance de protéines impliquées dans la voie des protéines G et la voie calcique. Cette connexion avec les protéines G a été confirmée par une baisse de la concentration en AMPc chez le mutant ∆sak1. L’utilisation du fludioxonil comme signal de l’activation de la MAPK Sak1 pour l’analyse par phosphoprotéomique a mis en évidence des modifications de l’état de phosphorylation de protéines. Parmi ces protéines différentiellement phosphorylées, la présence de PKAR (sous-unité régulatrice de la protéine kinase A) et du facteur de transcription CRZ1, indiquent respectivement une action sur la voie via protéines G et la voie calcique, validant les résultats obtenus par protéomique. Le phosphoprotéome a révélé une « phosducin-like protein », PhnA. Sa caractérisation fonctionnelle montre son rôle dans l’adaptation aux stress, la sporulation et la germination, ainsi que dans le pouvoir pathogène mettant ainsi en évidence un nouveau facteur de pathogénicité chez B. cinerea. Notre étude a permis de révéler des interactions entre Sak1 et d’autres voies de signalisation non suspectées, agissant aussi bien sur la production de certains composants (régulations transcriptionnelles et traductionnelles) que sur la phosphorylation (modifications post-traductionnelles). Nos résultats constitueront la base de nouvelles recherches pour compléter nos connaissances sur ces interactions impliquant l’adaptation au stress et la pathogénie de B. cinerea
Perception and adaptation to the environment are essential processes for the survival of living organisms. The phytopathogenic fungus Botrytis cinerea can thus perceive different types of signals, whether they are chemical or physical. The signalling pathway of the Sak1 MAPK is involved in the adaptation to osmotic, oxidative and cell wall stress, but also in sporulation and pathogenicity by regulating plant penetration and necrosis development. In order to deepen existing knowledge of the Sak1 pathway, we have carried out global studies based on proteomics and phosphoproteomics techniques. A comparative proteomics analysis between the wild type and the signalling mutants ∆bos1 and ∆sak1 showed, among others, that Sak1 regulates the abundance of proteins involved in the G-protein pathway and calcium pathway. This connection with G-proteins was confirmed by a decrease in cAMP concentration in the ∆sak1 mutant. Using fludioxonil as signal for the activation of Sak1 for a phosphoproteomic analysis revealed changes in the state of protein phosphorylation. Among these differentially phosphorylated proteins, the presence of PKAR (regulatory subunit of protein kinase A) and the transcription factor CRZ1, indicates an action on the G-protein and calcium pathway respectively, validating the results obtained by proteomics. Phosphoproteomics revealed a phosducin-like protein, PhnA. Its functional characterization reveals its role in stress adaptation, sporulation and germination, as well as in pathogenicity, thus demonstrating a new pathogenicity factor in B. cinerea. Our study revealed interactions between Sak1 and other unsuspected signalling pathways, affecting both the production of certain components (transcriptional and translational regulations) and phosphorylation (post-translational modifications). Our results will create the basis for new research questions to complement our understanding of these interactions involving adaptation to stress and pathogenesis of B. cinerea

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Perego, Jessica. "Modulation pharmacologique des voies de signalisation des TLRs par le Guanabenz, un inhibiteur de la réponse au stress." Thesis, Aix-Marseille, 2016. http://www.theses.fr/2016AIXM4066.

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On a récemment mis en évidence l'existence d'une étroite interconnexion entre la perception d'éléments d'origine microbienne (qui se fait à travers les récepteurs de l’immunité innée tels que les TLRs) et l'homéostasie du réticulum endoplasmique. En situation de stress, une grande quantité de protéines mal repliées s'accumule dans le réticulum, déclenchant une série de réponses cellulaires connues sous le nom de "Unfolded Protein Response" (UPR). On a découvert que l'activation de l'UPR contribue à la réponse inflammatoire, en particulier chez les cellules dendritiques. GADD34/PP1 est un complexe protéique qui dé-phosphoryle eIF2α et participe à la restauration de la synthèse protéique. On a démontré que GADD34 a aussi un rôle dans le contrôle de l’expression des cytokines pro-inflammatoires, en particulier l'interféron de type I. Le but de cette thèse est de clarifier comment la voie de signalisation des TLRs et le UPR s'intercroisent et comment est-ce qu'on peut exploiter cette interaction dans des cas pathologiques J’ai pu démontrer, à l'aide de cellules dendritiques d’origine humaine et murine, que le guanabenz (GBZ), un inhibiteur du complexe GADD34/PP1, est capable de bloquer l'activation des récepteurs TLRs endosomaux. Cet inhibiteur est également capable de bloquer le choc septique dépendent de TLR9 et de baisser le niveau d’autoanticorps dans un modèle lupique. En conclusion, j'ai pu démontrer, aussi bien in vitro que in vivo, que le guanabenz est capable d'inhiber les TLRs endosomaux à travers un nouveau mécanisme d’inhibition sur CH25H, une enzyme du métabolisme du cholestérol, qui a été récemment découvert comme faisant partie de l'immunité innée
Sustained immune reaction is strictly interconnected to pathogenic situations. For this reason, the activation of immune cells is controlled by multiple pathways. A cross-talk between microbial sensing and Endoplasmic Reticulum (ER) homeostasis has been discovered. Abnormal accumulation of proteins in the ER is a sign of cellular malfunction and triggers emergency rescue pathways, collectively known as the Unfolded Protein Response (UPR). UPR induction triggers or amplifies inflammatory signals by dendritic cells (DCs). GADD34/PP1 is a holophosphatase complex that dephosphorylates eIF2α and participates in the UPR feedback loop, by restoring protein translation. It has been shown that GADD34 plays an important role in controlling the expression of pro-inflammatory cytokines, especially type I interferon. In dendritic cells (DCs), pathogens are sensed by Pathogen Recognition Receptors (PRRs); the better characterised class of PRRs being the Toll-Like Receptors (TLRs). Thus, the aim of my thesis is to investigate how TLRs and ER-signalling pathways intersect and how this can be used to control pathogenic states, with particular attention for the GADD34/PP1 complex. Using both human and mouse DCs, we show that guanabenz (GBZ), an inhibitor of the GADD34/PP1 complex, blocks endosomal TLRs activation. The same inhibitor rescues mice viability in a TLR-dependent septic shock model and controls the circulating autoantibodies in a lupus model. Our studies show that TLR9 is particularly sensitive to GBZ. We show also that GBZ has a previously unidentified effect on CH25H, an enzyme that hydroxylates the cholesterol in 25-hydroxycholesterol, recently linked to TLRs signaling

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Combes, Adrien. "Influence des perturbations métaboliques sur des voies de signalisation impliquées dans la biogenèse mitochondriale." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S045/document.

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L’évolution des populations occidentales s’accompagne d’une augmentation de la sédentarité et des maladies métaboliques qui accroissent les problèmes de santé. Ces évolutions ont des répercussions sur le muscle squelettique qui voit sa capacité à produire de l’énergie aérobie diminuer. Néanmoins, le muscle squelettique est très plastique et les capacités oxydatives musculaires s’améliorent rapidement par l'activité physique. Les mitochondries sont des éléments majeurs des capacités oxydatives musculaires et la compréhension des mécanismes moléculaires qui régissent la biogenèse et la fonction mitochondriale est nécessaire pour prescrire au mieux l’activité physique.L’exercice intermittent semble être de plus en plus utilisé dans la pratique. Plusieurs arguments sont mis en avant pour préconiser cette modalité : 1) le temps passé à haute consommation d’oxygène, 2) la haute intensité et 3) les perturbations métaboliques induites par les variations d’intensité au cours de l’exercice. Cependant, l’influence des perturbations métaboliques sur les capacités oxydatives musculaires n’a pas encore été clairement démontrée. L’objet des mes travaux de thèse s’est donc focalisé sur ces perturbations métaboliques et leurs effets sur les voies de signalisation impliquées dans la biogenèse mitochondriale. Afin de caractériser l’implication des perturbations métaboliques dans la stimulation des voies de signalisation de la biogenèse mitochondriale, nous avons comparé l’influence d’exercices aigus sur ces voies de signalisation. Deux protocoles nous ont permis d’investiguer l’influence des variations métaboliques. Le premier a consisté, lors d’un exercice de intermittent, à identifier la durée du cycle induisant les plus grandes perturbations métaboliques et à caractériser les effets de la modalité d’exercice sur un exercice de 30 minutes de pédalage à 70%WRpic. Le second protocole visait à déterminer l’influence de la répétition des perturbations métaboliques sur les voies de signalisation régulant la biogenèse mitochondriale.Afin d’identifier la durée de cycle produisant le plus de variations métaboliques, nous avons analysé l’évolution de la consommation d’oxygène et quantifié les variations métaboliques. Pour cela nous avons utilisé trois paramètres : 1) un paramètre quantitatif, 2) un paramètre qualitatif et 3) un index associant les paramètres quantitatif et qualitatif. La comparaison de trois durées de cycle différentes (30s d’effort:30s de récupération passive ; 60s:60s et 120s:120s) nous a permis de mettre en évidence que la modalité 60s:60s est celle qui induit le plus de variations métaboliques et cela pour une dépense énergétique identique pour les trois modalités.Notre seconde étude a consisté à comparer 30 minutes de pédalage à 70%WRpic sous deux modalités différentes : continue (1 bloc de 30min) et intermittente (30 bloc de 1min entrecoupés de 1min). La répétition de phase d’exercice et de repos lors de l’exercice intermittent créée plus de perturbation du métabolisme et entraîne une phosphorylation supérieure de l'AMPK, CaMKII et p38 MAPK. Ces kinases sont situées en amont de PGC-1α, un important régulateur de la biogenèse mitochondriale dans le muscle squelettique. Ces résultats mettent donc en évidence un effet spécifique des perturbations métaboliques sur les voies de signalisation contrôlant la biogenèse mitochondriale.Ces travaux ouvrent de nouvelles perspectives sur les méthodes de réentraînement de personnes sédentaires ou atteintes de pathologie chronique. Les futurs travaux viseront à confirmer nos résultats lors d’interventions chroniques et d’explorer ces effets chez différentes populations
Western life evolution is associated with an increase in sedentary behaviours and metabolic diseases leading to health alteration. This evolution affects the skeletal muscle, which is characterized by a decrease in its ability to produce aerobic energy. However, skeletal muscle is a highly malleable tissue, capable of considerable metabolic adaptations in response to physical activity. Mitochondria produce the aerobic energy within the skeletal muscle. Understanding the molecular mechanisms that regulate mitochondrial biogenesis and its function is necessary to improve physical activity prescription.The intermittent exercise is currently used in rehabilitation programs. Several arguments are put forward to utilizing this method: 1) the time spent at high oxygen consumption, 2) the high intensity of exercise and 3) the metabolic disturbances induced by variations of intensity during exercise. However, the influence of metabolic disturbances on muscle oxidative capacity has not been clearly demonstrated. The purpose of my thesis work has therefore focused on these metabolic perturbations and their effects on signalling pathways involved in mitochondrial biogenesis. In order to characterize the influence of metabolic disturbances on the signalling pathways involved in mitochondrial biogenesis, we compared the influence of acute exercises. We realized two protocols to investigate the influence of metabolic disturbances. The first study compared three intermittent exercises in order to identify the optimal duty-cycle duration to induce the biggest metabolic disturbances and to compare metabolic responses of intermittent and continuous exercise performed at 70%WRpic. The second protocol evaluated the influence of the repetition of metabolic disturbances on signalling pathways involved in mitochondrial biogenesis.In order to identify the duty-cycle duration producing more metabolic fluctuations, we analysed the changes of oxygen consumption and quantified metabolic variations. We used three parameters: 1) a quantitative parameter, 2) a qualitative parameter, and 3) an index combining quantitative and qualitative parameters. Comparison of three different duty-cycle durations (30s work:30s passive recovery; 60s:60s, and 120s:120s) revealed that the 60s:60s modality induces more metabolic fluctuations for a same energy expenditure.Our second study compared 30 minutes of pedalling at 70%WRpic realized by two different modalities: continuous (30min 1 block) and intermittent (30 1min block interspersed by 1min of passive recovery). Repetition of transitions from rest to exercise during the intermittent exercise creates higher metabolic disturbances and leads to a higher phosphorylation of AMPK, p38 MAPK and CaMKII. These kinases are upstream of PGC-1α, an important regulator of mitochondrial biogenesis in skeletal muscle. All together, these results demonstrate that metabolic disturbances are involved in mitochondrial signalling pathways activation.This work opens up new perspectives on exercise training prescription for sedentary or chronic pathology people. Future work will aim to confirm our results in chronic interventions and explore these effects in different populations

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Launay, Nathalie. "Voies de signalisation et rôle de l'αB-cristalline suite à la désorganisation du cytosquelette". Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066375.

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Le premier objectif de ce travail de recherche a été d’identifier les voies de signalisation impliquées dans la transduction du signal engendré par la perturbation/désorganisation spécifique des trois principales structures du cytosquelette au sein du système musculaire. Ces stress spécifiques se caractérisent par l’induction de la phosphorylation spécifique de l’B-cristalline, modification qui induit des changements de localisation et régulerait les fonctions de la protéine en augmentant son affinité pour certains éléments du cytosquelette. Dans un deuxième temps, le rôle de la phosphorylation de l’B-cristalline a été étudié dans le phénomène de résistance de cellules de carcinomes mammaires vis-à-vis des traitements anti-tumoraux altérant le cytosquelette. Lors de ce travail, nous avons mis en évidence que la phosphorylation du résidu sérine 59 de l’B-cristalline jouerait un rôle clé dans la régulation des propriétés anti-apoptotiques de la protéine
The first aim of this research was to identify the pathways involved in the signal transduction induced by specific cytoskeletal stresses in the muscular system. Cytoskeletal network disruption trigger the specific B-crystallin phosphorylation which may protect or stabilize the actin microfilaments and interfere with formation of IF aggregates during stresses exerted at the cytoskeleton. The second aim of this project was to study the role of phosphorylation in the regulation of the αB-crystallin anti-apoptotic function in chemotherapy resistance phenomenon in breast epithelial adenocarcinoma cells. We demonstrate that Ser59 phosphorylation of B-crystallin plays a crucial role in vinblastine-induced apoptosis in MCF7 cells, by down-regulating the anti-apoptotic function of B-crystallin. These results introduce the possibility of regulating the protective status of sHsp in cancer through modifying their state of phosphorylation

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Delormel, Tiffany. "Étude du rôle de CPK5 et CPK6 dans les voies de signalisation de stress via l’identification de leurs substrats chez Arabidopsis thaliana." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS536.

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Dans leur environnement naturel, les plantes doivent continuellement s’adapter pour survivre aux diverses stimuli auxquels elles sont confrontées. La salinité est responsable de fortes pertes de rendements et une meilleure compréhension des mécanismes capables d’induire la tolérance de la plante est nécessaire. Au niveau cellulaire, les stress biotique et abiotique perçus induisent la production de messagers secondaires ce qui active des voies de signalisation faisant intervenir différentes familles de protéines kinases dont les protéines kinases dépendantes du calcium, les CDPKs. Lorsqu’elles sont activées, elles vont phosphoryler des substrats permettant la mise en place des réponses spécifiques au stress perçu.CPK5 et CPK6 sont des régulateurs positifs de la tolérance au stress salin et également de la résistance aux bactéries, notamment par l’induction de gènes de réponses. L’identification de 25 nouveaux substrats putatifs par une approche phosphoprotéomique pourraient permettre une meilleure compréhension du rôle de CPK5 et CPK6 dans la réponse aux stress. Parmi les candidats étudiés dans ce manuscrit, six ont été validées in vitro, notamment deux ubiquitine ligases E3 dont la mutation d’un site conservé inhibe la phosphorylation par CPK5 et CPK6. Bien que l’étude des mutants knock-out n’ait pas permis de leur attribuer un rôle dans la tolérance à la salinité, certains pourraient agir en aval de CPK5/6 dans la réponse aux pathogènes
Plants are subjected to several environmental stimuli and must adapt to survive. A better understanding of the mechanisms involved in plant tolerance is necessary to find solution to the salt stress that is responsible for important yield loss. At the cellular level, the perception of biotic and abiotic stress leads to the accumulation of secondary messengers that activate protein kinases involved in different signaling pathways as calcium-dependent protein kinases (CDPKs). Once they are activated, CDPKs can phosphorylate substrates which are able to induce appropriate responses to the stimuli.CPK5 and CPK6 are positive regulators of salt stress and biotic stress, notably through the induction of response genes. To better understand their roles in plant stress response, a phosphoproteomic approach was conducted and could identify 25 new putative substrates for CPK5. Six of the studied candidates were validated in vitro for phosphorylation by CPK5 and CPK6. Among them, two ubiquitin E3 ligases are not phosphorylated anymore by CPK5 and CPK6 when mutated on a conserved phosphosite. Unfortunately, the knock-out mutants of the substrates in salt condition did not show any phenotype. However some of them are known to play a role in response to pathogen and could act downstream of CPK5 and CPK6

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Dimnet, Laura. "Etude de la topoisomérase VI et de l'interacteur TFIIFalpha dans les voies de signalisation rétrograde de l'oxygène singulet et antérograde impliquant les protéines PPR chez Arabidopsis thaliana." Thesis, Aix-Marseille, 2018. http://www.theses.fr/2018AIXM0409.

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Chez les plantes, les stress biotiques et abiotiques causent la surproduction d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) dans les chloroplastes et les mitochondries. Ces ROS provoquent des dommages parfois irrémédiables pour la cellule ou déclenchent des voies de signalisation rétrogrades qui induisent la tolérance au stress. En parallèle, le génome nucléaire contrôle le développement et l’activité des organites grâce à la signalisation antérograde. Dans ce contexte, le complexe nucléaire Topoisomérase VI (Topo VI) a été étudié chez Arabidopsis thaliana. Topo VI est un régulateur des gènes de réponse à la signalisation rétrograde de la ROS oxygène singulet ; toutefois, les mécanismes qui régissent cette régulation sont inconnus. Afin de les déterminer, des interacteurs de la Topo VI ont été mis en évidence dont la sous-unité alpha du facteur général de transcription TFIIF (TFIIFα). Après caractérisation de l’expression du gène TFIIFα et des isoformes protéiques codées, des analyses transcriptomiques réalisées en condition standard de croissance et en condition de stress photo-oxydant ont montré que Topo VI et TFIIFα co-régulent la majorité des gènes de réponse à ce stress. De plus, ces interacteurs ont un rôle opposé dans la régulation de l’expression de gènes « PentatricoPeptide Repeat » (PPR). Les protéines PPR sont adressées aux chloroplastes et aux mitochondries dans lesquels elles participent à la régulation post-transcriptionnelle ; chez des mutants tfIIfα, des gènes PPR impliquées dans l’édition des ARN sont réprimés et l’édition de sites cibles associés est parfois altérée. Les conséquences de ces altérations sont discutées par l’analyse de fonctions chloroplastiques
Under biotic and abiotic stress, plants overproduce reactive oxygen species (ROS) in plastids and mitochondria. ROS can cause damages sometimes definitive for cells or trigger retrograde signalling pathways to the nucleus that provide stress tolerance. Concurrently, the nuclear genome controls the development and the activity of organelles through anterograde signalling. In this context, the nuclear complex Topoisomerase VI (Topo VI) is studied in Arabidopsis thaliana. Topo VI is a regulator of stress responsive genes in the retrograde signalling triggered by the singlet oxygen ROS; nevertheless, the mechanisms controlling this regulation are still unknown. To determine them, Topo VI interactors were found out, including the alpha subunit of the general transcription factor TFIIF (TFIIFα). TFIIFα gene expression and the encoded protein isoforms were first characterized and then, transcriptomic analysis in standard growth conditions and under photo-oxidative stress showed that Topo VI and TFIIFα co-regulate most of stress responsive genes. Moreover, these interactors have an opposite role in the expression of "PentatricoPeptide Repeat" (PPR) genes. PPR proteins are targeted to plastids or mitochondria in which they contribute to post-transcriptional regulation mechanisms; in tfIIfα mutants, PPR genes involved in organellar RNA editing are down-regulated, and the editing of associated target sites was sometimes impaired. Possible consequences of this impairment were discussed through the analysis of plastidial functions

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Guéritat, Jordan. "Exercice physique et progression du cancer de la prostate : effets combinés avec la prise d’antioxydants naturels ou la radiothérapie externe : identification de voies de signalisation redox-dépendantes." Thesis, Rennes 2, 2015. http://www.theses.fr/2015REN20012/document.

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Le cancer de la prostate est un problème de santé publique majeur. L’exercice physique régulier fait désormais partie des moyens bien décrits pour améliorer la qualité de vie des patients atteints de cancer. Une activité physique quotidienne est donc recommandée pendant et après le traitement. Toutefois, aucune étude ne s’est intéressée aux interactions potentielles entre l’exercice physique, la consommation d’antioxydants et la radiothérapie. L’absence de connaissances sur les mécanismes moléculaires associés à ces stratégies connues pour moduler le stress oxydant, un facteur crucial dans l’évolution de la carcinogenèse prostatique, soulève aujourd’hui une question majeure : l’exercice physique influence-t-il la progression tumorale ? Les objectifs de ce travail de thèse étaient de déterminer les effets de l’exercice physique, combinée ou non à d’autres stratégies, sur la progression du cancer de la prostate et d’identifier des mécanismes moléculaires notamment redox-sensibles impliqués dans ces effets. En s’appuyant sur différentes études in vitro et in vivo, nos travaux ont mis en évidence que l’exercice physique prévient la progression du cancer de la prostate via la régulation du statut redox et de voies de signalisation redox-dépendantes, ou via une modulation de la cholestérolémie ou encore du profil d’expression des miRNAs. Nos travaux démontrent également que l’exercice physique associé à la prise d’antioxydants alimentaires inhibe les effets antiprolifératifs de ces stratégies isolées, et inversement, que l’exercice physique potentialise l’efficacité de la radiothérapie
Prostate cancer is a major public health problem. It has now been widely recognized that regular physical exercise improves the quality of life of cancer patients. Thirty minutes of physical activity a day is recommended during and after treatment. However, potential interactions of physical exercise, dietary antioxidant intake and radiotherapy have not yet been studied. The lack of knowledge on molecular mechanisms associated with these strategies known to modulate oxidative stress, a key factor in prostate cancer evolution, raises a question: does physical exercise influence the efficiency of patient management and tumor evolution? The objectives of this work was to determine the effects of physical exercise, combined or not with others strategies, on prostate cancer progression and to identify redox sensitive-molecular mechanisms involved in these effects. We used different in vitro and in vivo approaches to achieve these aims. Our researches underline the essential role of physical exercise in prevention of prostate tumor progression, through a redox state and signaling pathways regulation, but also through a modulation of cholesterol levels or miRNA expression profiles. We also demonstrate that physical exercise associated to dietary antioxidant consumption limits anti-proliferative effects of these isolated treatments. Inversely, we reported that regular physical exercise enhances radiotherapy efficiency

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Sall, Salimata Ousmane. "Rôle des voies de signalisation des dommages à l'ADN dans le contrôle de l'architecture du génome et du méthylome en réponse aux stress génotoxiques chez Arabidopsis thaliana." Electronic Thesis or Diss., Strasbourg, 2023. http://www.theses.fr/2023STRAJ134.

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Les plantes, organismes sessiles, sont constamment exposées à divers facteurs environnementaux et doivent donc mettre en place des mécanismes moléculaires sophistiqués afin d’assurer efficacement leur survie et leur adaptation. Les stress génotoxiques, peuvent entrainer des réarrangements chromosomiques et des modifications de l’épigénome, entraînant des conséquences sur les programmes transcriptionnels et développementaux. Il est donc important, d’étudier la relation entre la dynamique du génome et celle de l’épigénome en réponse à un stress génotoxique. Dans ce projet de thèse, Arabidopsis thaliana a été utilisée comme plante modèle pour étudier la structure du génome et le profil du méthylome en condition de stress génotoxiques ionisant (protons) et non ionisant (UVB et UVC). Le rôle des deux protéines kinases (Ataxia Telangiectasia Mutated/ATM et Ataxia Telangiectasia mutated RAD3-related/ATR), impliquées dans la DDR (DNA Damage Repair), a été étudié dans le maintien de l’intégrité du génome et celui du méthylome. Une approche de séquençage ONT (Oxford Nanopore Technology), a permis de révéler que le stress génotoxique entraine des variations structurales (VS) majoritairement constituées de délétions et d’insertions, situées dans les régions hétérochromatiniennes riches en éléments transposables (TE) et en régions intergéniques (RI). Nous avons mis en évidence qu’ATM et ATR protègent le génome contre des VS au stade végétatif et en réponse à un stress génotoxique. En effet, les TE et les gènes sont les principales entités génétiques ciblées par ATM pour leur protection contre des VS, en condition de stress. Nous avons pu déterminer que la voie du c-NHEJ (classical Non Homologous End-Joining) est prédominante pour la réparation des cassures doubles brins (DSB) par rapport à la voie MMEJ (Microhomology-Mediated End Joining) et qu’ATM/ATR préviennent l’utilisation de longue séquences MH (Microhomology) conduisant à de longues délétions lors de la réparation par la voie du MMEJ. Les profils de méthylation de l’ADN ont été déterminés par séquençage au Bisulfite et/ou ONT. Nous avons pu identifier des changements du niveau de méthylation de l’ADN principalement aux niveaux des TE, dans le contexte CHH en réponse à des stress génotoxiques. Nous avons également mis en évidence l’implication d’ATR et surtout d’ATM dans le maintien de l’intégrité du méthylome aux niveaux des gènes et des TE respectivement dans les contextes CG et CHH
Plants, sessile organisms, are constantly exposed to various environmental factors and therefore need to develop sophisticated molecular mechanisms to ensure their survival and adaptation. Genotoxic stresses can lead to chromosomal rearrangements and changes in the epigenome, impacting transcriptional and developmental programs. It is thus important to study the relationship between genome and epigenome dynamics in response to genotoxic stress. In this thesis project, Arabidopsis thaliana was used as a model plant to study genome structure and methylome profile under ionizing (proton) and non-ionizing (UVB and UVC) genotoxic stress conditions. The role of two protein kinases (Ataxia telangiectasia mutated or ATM and Ataxia telangiectasia mutated RAD3-related or ATR), involved in DDR (DNA damage Repair), have been studied in genome integrity and methylome maintenance. Using an ONT (Oxford Nanopore Technology) sequencing approach, we revealed that genotoxic stress leads to structural variations (SV) consisting mainly in deletions and insertions, located in heterochromatin regions rich in transposable elements (TE) and intergenic regions (RI). We demonstrated that ATM and ATR protect the genome against SV at the vegetative stage and in response to genotoxic stress. In fact, TEs and genes are the main genetic entities targeted by ATM for their protection against SV, under stress conditions. We have determined that c-NHEJ (classical Non-Homologous End-Joining) is the predominant pathway for DSB repair compared to MMEJ (Microhomology-mediated end joining) and that ATM/ATR prevent the use of long MH (Microhomology) sequences leading to long deletions during MMEJ repair. DNA methylation profiles were determined by Bisulfite sequencing and/or ONT. We were able to identify changes in DNA methylation levels mainly at the TE level, in the CHH context in response to genotoxic stresses. We also demonstrated the involvement of ATR and especially ATM in the maintenance of methylome integrity at the gene and TE levels in the CG and CHH contexts respectively

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Pillon, Nicolas. "Rôle des hydroxy-alkénals, dérivés de peroxydation lipidique, dans la physiopathologie de l'insulino-résistance : effets du 4-hydroxy-2-hexénal et du 4-hydroxy-2-nonénal sur les voies de signalisation et la fonction biologique de l'insuline." Lyon, INSA, 2010. http://theses.insa-lyon.fr/publication/2010ISAL0065/these.pdf.

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Le stress oxydant semble impliqué dans le développement de la résistance périphérique à l'insuline conduisant au diabète de type 2. Les membranes biologiques, par leur richesse en acides gras polyinsaturés, constituent des cibles privilégiées pour les espèces oxydantes. La peroxydation des membranes biologiques est ainsi à l'origine de la production de nombreuses espèces réactives parmi lesquelles les aldéhydes 4-hydroxy-2-hexénal (HHE) et 4-hydroxy- 2- nonénal (HNE), dérivant respectivement de la peroxydation des acides gras polyinsaturés des familles omega-3 et omega-6. La présente étude démontre que la concentration plasmatique de HHE est augmentée chez l'homme et chez le rat au cours du diabète et qu'une injection intraveineuse de HHE conduit au développement d'une résistance à l'insuline chez le rat. Sur des lignées de cellules musculaires (L6C5) et d'adipocytes (3T3-Ll) en culture, HHE et HNE provoquent une carbonylation massive des protéines cellulaires et induisent une insulino-résistance en perturbant le transport de glucose ainsi que les voies de signalisation de l'insuline. Ces effets délétères peuvent être contrecarrés par une augmentation du glutathion réduit ou par des traitements antioxydants. HHE et HNE peuvent également former des adduits covalents sur l'insuline, diminuant ainsi son effet hypoglycémiant in vivo et la stimulation du transport de glucose in vitro. HHE et HNE sont impliqués dans le développement de l'insulino-résistance en perturbant à la fois les voies intracellulaires de signalisation et la fonction biologique de l'insuline. Ils constituent donc des cibles pharmacologiques potentielles pour la prévention du diabète de type 2
Oxidative stress appears to be involved in the development of peripheral insulin resistance leading to type 2 diabetes. Biological membranes, because of their high polyunsaturated fatty acids, are prime targets for oxidant species. Peroxidation of biological membranes is responsible for the production of many reactive species including aldehydes 4- hydroxy-2-hexenal (HHE) and 4-hydroxy-2-nonenal (HNE), respectively derived from the peroxidation of omega-3 and omega-6 polyunsaturated fatty acids. This study demonstrates that plasma concentration of HHE is increased in humans and rats during diabetes, and that intravenous injection of HHE lead to the development of insulin resistance in rats. In muscle cells (L6C5) and adipocytes (3T3-Ll), HHE and HNE cause massive carbonylation of cellular proteins and induce insulin resistance by disrupting glucose transport and the signaling pathways of insulin. These disorders can be reversed by an increase of reduced glutathione or by antioxidant treatment. HHE and HNE can also form covalent adducts on insulin, thereby reducing its hypoglycemic effect in vivo and stimulation of glucose transport in vitro. HHE and HNE are involved in the development of insulin resistance by disrupting both the intracellular signaling pathways and biological function of insulin. They are therefore potential drug targets for the prevention of type 2 diabetes

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Fouchs, Audrey. "Stress osmotique et activation des MAP Kinases ERK1/2 chez les hépatocytes de turbot, Scophthalmus maximus : implication des voies de signalisation intracellulaire du processus de RVD." Brest, 2011. http://www.theses.fr/2011BRES2045.

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Parmi les voies de signalisation intracellulaire, les MAPK (Mitogen-Activated Protein I: Kinases) ERK1/2 (Extracellular-signal-Regulated Kinase 1/2) jouent un râle central : elles sont activées par une grande variété de facteurs environnementaux et sont impliquées dans de nombreuses fonctions cellulaires. Chez les hépatocytes de turbot, un choc hypo-osmotique, contrairement à un choc hyper-osmotique, entraîne une augmentation rapide de la phosphorylation de ERK1/2, qui se maintient ensuite pendant au moins 50 minutes. Malgré leur activation rapide, les protéines MAP kinases ERK1/2 ne semblent pas impliquées dans le processus de RVD mis en place par les cellules pour contrer le gonflement cellulaire induit par les conditions aniso-osmotiques. Il existe toutefois un lien très étroit entre ces deux mécanismes, les voies de signalisation impliquées dans le RVD étant capables de moduler le signal ERK1/2. En effet, chez les hépatocytes de turbot, l’activation de ERK1/2 se produit en deux temps : une activation à très court terme (de O à 5 minutes après le choc hypo-osmotique) et une activation à plus long terme (10 minutes après le choc). Celle activation à plus long terme est dépendante de I’ATP, du calcium, de kinases comme PKC, Pl3K ou PTK, du cytosquelette et des canaux SAC mécanosensibles, toutes des voies majeures du RVD
Amongst intracellular signalling pathways, the MAPK (Mitogen-Activated Protein Kinases) ERK1/2 (Extracellular-signal-Regulated Kinase 1/2) play a central role: they are activated by a wide range of environmental factors and can be involved in many cellular functions. In turbot hepatocytes, a hypo-osmotic shock, but not a hyper-osmotic shock, induces a rapid increase in ERK1/2 phosphorylation, maintained for at least 50 minutes. Despite being rapidly activated by a decrease in extracellular osmolality, the ERK1/2 do not seem to play a role in the RVD process established to counteract the volume changes induced by the aniso-osmotic conditions. However, there is a strong link between these two mechanisms, the signaling pathways involved in RVD being able to modulate the ERK1/2 signal. Indeed, in turbot hepatocytes, the ERK1/2 activation occurs in two stages: a transient activation (from O to 5 minutes after the hypo-osmotic shock) and a sustained activation (10 minutes after the shock). This sustained activation is dependent on ATP, calcium, cytoskeleton, stretch activated channels and protein kinases such as PKC, PI3K or PTK, all of the aforementioned being major signaling pathways of the RVD process

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Ghars, Mohamed Ali. "Étude de la variabilité physiologique de la réponse au sel et caractérisation de voies de signalisation impliquées dans la régulation du métabolisme de la proline en réponse à des contraintes hydriques chez Thellungiella halophila et Arabidopsis thaliana." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066157.

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En réponse à des contraintes saline ou hyperosmotique, la plupart des plantes accumulent des osmolytes, tels que la proline, qui joue un rôle dans l’adaptation de la plante. Le métabolisme de la proline est relativement bien caractérisé au niveau moléculaire mais les mécanismes de transduction du signal stress hydrique conduisant à la synthèse de la proline restent encore peu décrits. L’objectif de ce travail a été d’identifier et de caractériser les voies de signalisation impliquées dans la régulation du métabolisme de la proline en réponse à des contraintes hydriques. Nous avons ciblé notre travail sur deux modèles végétaux, Arabidopsis thaliana, une plante glycophyte, et Thellungiella halophila, une plante halophyte. Dans un premier temps, nous nous sommes intéressés à l’étude de la variabilité de la réponse éco-physiologique chez deux espèces cultivées sur sable inerte, irrigué d’une solution comportant des concentrations croissantes en NaCl. Les résultats obtenus montrent que T. Halophila est l’espèce la plus tolérante au sel tandis que le mutant d’A. Thaliana eskimo1 est le plus sensible malgré la suraccumulation de proline. Ceci démontre que cet acide aminé a lui seul est insuffisant pour conférer à ce mutant une tolérance à la contrainte. La tolérance de T. Halophila est due à plusieurs processus adaptatifs qui reposent sur une forte accumulation de la proline et une haute sélectivité d’absorption racinaire de K+ par rapport à Na+. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons étudié les voies de signalisation lipidiques impliquées dans la régulation du métabolisme de la proline. A cet effet, de jeunes plantes d'A. Thaliana et de T. Halophila ont été soumises à des inhibiteurs spécifiques des voies de signalisation médiées par les phospholipases D (PLDs) et les phospholipases C (PLCs). Chez A. Thaliana quand l’activité des PLDs est détournée, les plantes montrent un niveau plus élevé en proline. En revanche, les PLDs n'ont aucun effet sur l'accumulation de la proline dans les conditions de non-stress chez T. Halophila. Lors de contrainte hydrique, les PLDs n’ont aucun effet sur le métabolisme de la proline chez A. Thaliana alors que les niveaux de proline sont diminués chez T. Halophila. Les résultats montrent que les phospholipases D sont des régulateurs négatifs du métabolisme de la proline en l’absence de stress chez A. Thaliana et régulent positivement la biosynthèse de cet acide aminé en condition de stress chez T. Halophila. D'autre part, nous avons pu montrer que les PLCs exercent un contrôle positif chez A. Thaliana en présence de 200 mM NaCl ainsi que chez T. Halophila en présence de 400 mM NaCl ou de mannitol. En absence de stress ou en présence d’un stress salin modéré, les PLCs exercent un contrôle négatif sur la voie de biosynthèse de la proline chez T. Halophila. En conclusion, nos données suggèrent l'implication des PLCs et des PLDs dans la régulation du métabolisme de la proline chez A. Thaliana et T. Halophila, mais d'une façon opposée. Ce travail nous permet de présenter un modèle original de régulation du métabolisme de la proline chez ces deux plantes modèles.

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Fortier, Anne-Marie. "Relation entre les kératines et les voies de signalisation pro-apoptotique de fas et anti-apoptotique de akt dans la réponse des cellules hepg2 au stress induit par la griséofulvine /." Thèse, Trois-Rivières : Université du Québec à Trois-Rivières, 2007. http://www.uqtr.ca/biblio/notice/resume/30023637R.pdf.

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Fortier, Anne-Marie. "Relation entre les kératines et les voies de signalisation pro-apoptotique de fas et anti-apoptotique de akt dans la réponse des cellules hepg2 au stress induit par la griséofulvine." Thèse, Université du Québec à Trois-Rivières, 2007. http://depot-e.uqtr.ca/1912/1/030023637.pdf.

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DA, SILVA CORREIA JEAN. "Les voies de signalisation intracellulaires mediees par les proteines kinases activees par les facteurs de stress, p38 et jnk : caracterisation, biologie et role dans la regulation de la transcription (doctorat : pharmacologie et pharmacochimie)." Strasbourg 1, 1998. http://www.theses.fr/1998STR15081.

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Chaput, Carole. "Therapeutic functionalization of a rare neurodevelopmental and monogenic disease model based on the contribution of the HSF2 stress pathway." Electronic Thesis or Diss., Université Paris Cité, 2024. http://www.theses.fr/2024UNIP5190.

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Les troubles neurodéveloppementaux (TND) touchent environ 10 % des enfants et constituent une source majeure d'invalidité tout au long de la vie. Caractérisés par un développement défectueux du cerveau et une grande variabilité du tableau clinique des patients, qui compromet le diagnostic et l'émergence de solutions thérapeutiques, ils représentent un coût humain, sociétal et économique important. L'objectif de ce projet est de mieux comprendre une caractéristique commune des TND - la dérégulation des voies de réponse au stress - qui constituerait une clef de lecture pour comprendre ces pathologies. L'intégration des processus déclenchés par le stress est régie par les facteurs de transcription du choc thermique (HSF), qui sont fortement dérégulés dans plusieurs TND. Cela a deux conséquences : une altération de la réponse au stress des cellules neurales qui entraîne des défauts dans le développement du cerveau. Nous avons participé a montré que ces HSF sont essentiels au bon développement du cerveau. Plus précisément, l'équipe a démontré que HSF2 joue un rôle clef dans la régulation de la prolifération des cellules progénitrices et la migration neuronale dans le cortex en modulant l'expression de gène impliqués dans l'adhésion cellulaire. La modulation pharmacologique de cette voie pourrait donc offrir de nouvelles possibilités thérapeutiques. Dans une première étude, les mécanismes sous-jacents à la dérégulation des HSF ont été étudiés dans les cellules de patients atteints du syndrome de Rubinstein-Taybi (RSTS), un TND rare d'origine génétique causé par des mutations dans les gènes CREBBP ou EP300. Notre étude a montré une diminution des niveaux protéiques de HSF2 dans les fibroblastes et dans les modèles neuraux (2D et 3D) dérivés à partir de cellules souches pluripotentes induites (iPSC) provenant de patients RSTS. Cette diminution des niveaux protéiques de HSF2 résultait d'un défaut d'acétylation par CBP ou EP300, conduisant à l'ubiquitination et à la dégradation par le protéasome. En conséquence, les cellules RSTS présentaient une altération de la réponse au stress et une réduction de l'expression de gènes essentiels au développement neural, en particulier la N-cadhérine. La restauration des niveaux de HSF2, soit par l'inhibition du protéasome, soit par des mutations imitant l'acétylation, a permis de rétablir à la fois la réponse au stress et l'expression des gènes du neurodéveloppement. Nous avons constaté que la perturbation de la voie CBP/EP300-HSF2-N-cadhérine est récapitulée dans les modèles neuraux RSTS, qui présentent des anomalies de prolifération liées à une altération de l'adhésion cellule-cellule, en particulier dans la voie de la N-cadhérine. Sur la base de ces résultats et en collaboration avec Ksilink, mon projet de thèse CIFRE vise à développer un modèle cellulaire de TND basé sur les patients RSTS. Ce modèle permettra d'explorer comment les perturbations de la voie HSF pourraient contribuer à divers TND. Pour atteindre cet objectif, j'ai d'abord généré un mutant HSF2 qui mime la forme acétylée de la protéine dans les iPSC dérivés de fibroblastes de patients RSTS. En utilisant ce modèle isogénique comme référence, j'ai développé et validé un modèle de culture neural bidimensionnel et identifié de nouvelles cibles et phénotypes dépendants de HSF2 via une approche multiparamétrique allant de la transcriptomique à haut débit à des analyses morphologiques des cellules. Cette approche a permis d'identifier le facteur pro neuronal, ASCL1, et un phénotype morphologique, la formation de rosettes, comme clefs de lecture pour l'analyse par imagerie à haut contenu. Sur la base de ces deux phénotypes, j'ai utilisé le modèle neural pour cribler une sélection de molécules à potentiel thérapeutique par imagerie à haut contenu. Ces travaux ouvriront la voie à de nouvelles approches thérapeutiques visant à moduler les voies de réponse au stress, offrant ainsi de nouvelles possibilités de traitement des TND
Neurodevelopmental disorders (NDD) affect around 10% of children and are a major source of lifelong disability. Characterised by defective brain development and great variability in the clinical picture of patients, which compromises diagnosis and the emergence of therapeutic solutions, they represent a significant human, societal and economic cost. The aim of this project is to gain a better understanding of a common feature of NDDs - the deregulation of stress response pathways - which could provide a readout to understanding these pathologies. The integration of processes triggered by stress is governed by heat shock transcription factors (HSFs), which are strongly deregulated in several NDDs. This has two consequences: an altered stress response in neural cells leading to defects in brain development. We have helped to show that these HSFs are essential for proper brain development. More specifically, the team demonstrated that HSF2 plays a key role in regulating the proliferation of progenitor cells and neuronal migration in the cortex by modulating the expression of genes involved in cell adhesion. Pharmacological modulation of this pathway could therefore offer new therapeutic possibilities. In a first study, the mechanisms underlying HSF deregulation were investigated in cells from patients with Rubinstein-Taybi syndrome (RSTS), a rare genetic NDD caused by mutations in the CREBBP or EP300 genes. Our study showed a decrease in HSF2 protein levels in fibroblasts and in neural models (2D and 3D) derived from induced pluripotent stem cells (iPSCs) from RSTS patients. This decrease in HSF2 protein levels resulted from a defect in acetylation by CBP or EP300, leading to ubiquitination and degradation by the proteasome. As a result, RSTS cells showed an altered stress response and reduced expression of genes essential for neural development, in particular N-cadherin. Restoration of HSF2 levels, either by proteasome inhibition or by acetylation-mimicking mutations, restored both the stress response and the expression of neurodevelopmental genes. We found that disruption of the CBP/EP300-HSF2-N-cadherin pathway is recapitulated in RSTS neural models, which display proliferation abnormalities linked to altered cell-cell adhesion, particularly in the N-cadherin pathway. On the basis of these results and in collaboration with Ksilink, my CIFRE thesis project aims to develop a cellular model of NDD based on RSTS patients. This model will enable us to explore how perturbations in the HSF pathway could contribute to various NDDs. To achieve this objective, I first generated an HSF2 mutant that mimics the acetylated form of the protein in iPSCs derived from RSTS patient fibroblasts. Using this isogenic model as a reference, I developed and validated a two-dimensional neural culture model and identified new HSF2-dependent targets and phenotypes using a multiparametric approach ranging from high-throughput transcriptomics to cell morphological analyses. This approach made it possible to identify the pro-neuronal factor, ASCL1, and a morphological phenotype, rosette formation, as key readouts for analysis by high-content imaging. On the basis of these two phenotypes, I used the neural model to screen a selection of molecules with therapeutic potential using high-content imaging. This work will pave the way for new therapeutic approaches aimed at modulating stress response pathways, thereby opening up new possibilities for the treatment of NDD

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Serra, Anne-Antonella. "Réponses écophysiologiques et moléculaires des plantes aux stress xénobiotiques complexes de faible intensité : implications dans les capacités de protection environnementale des bandes enherbées." Thesis, Rennes 1, 2015. http://www.theses.fr/2015REN1S005/document.

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Les pollutions par les xénobiotiques, en particulier les pesticides, et les métaux lourds issus des activités agricoles présentent une grande complexité de composition chimique et de dynamique spatio-temporelle. La présence de bandes enherbées entre les parcelles cultivées et les cours d’eau permet une limitation de la diffusion de ces pollutions résiduelles vers les milieux naturels. Le compartiment végétal de ces bandes enherbées peut jouer de multiples rôles dans ce contexte de protection environnementale. L’étude comparative réalisée in situ et en conditions contrôlées de laboratoire a permis de mettre en évidence le rôle biologique du compartiment végétal avec son implication directe dans les processus in planta d’absorption, de stockage et/ou de dégradation au moins partielle. Un tel rôle phytoremédiateur est dépendant de la capacité des plantes à se maintenir sur ces milieux pollués, qui diffère selon l’espèce considérée et structure ainsi les communautés végétales des bandes enherbées. L’étude intégrative en conditions contrôlées des réponses des plantes aux interactions avec les xénobiotiques à faibles doses, à différentes échelles de complexité du fonctionnement végétal, a permis de montrer les effets de ces stress chimiques chez l’espèce modèle Arabidopsis thaliana et chez l’espèce prairiale Lolium perenne. Les xénobiotiques et les métaux lourds à des doses subtoxiques ont induit d’importants bouleversements métabolomiques et moléculaires chez ces espèces, avec des effets cryptiques de ces polluants et de leurs produits de dégradation. L’analyse en conditions de multi-pollution, qui reflètent de manière réaliste les pollutions péri-agricoles, a montré la complexité et la difficulté de prédiction des interactions entre les effets des contaminants en mélange. Ces mécanismes de réponses diffèrent selon l’espèce et le polluant et laissent supposer des divergences en termes de perception et/ou de transport des polluants, ou de coordination des réponses moléculaires et métaboliques. Arabidopsis a ainsi présenté une coordination de ses réponses orientée vers une augmentation des métabolites de stress, et une diminution des métabolites carbonés (sucres solubles), en parallèle de modifications de l’expression de gènes impliqués dans les défenses antioxydantes, les défenses contre les stress xénobiotiques, ou dans la dynamique des phytohormones. Le stress chimique a entraîné chez Lolium des modifications majeures du métabolisme azoté, ainsi qu’un remaniement des processus de photorespiration. L’analyse transcriptomique de cette espèce a de plus montré que la majorité des gènes identifiés sont impliqués dans des voies de transduction de signal, montrant ainsi la complexité des mécanismes de réponse et les couplages qui existent entre les signaux métaboliques, en particulier liés aux sucres, les voies de signalisation associées aux phytohormones, les signaux de stress et la photosynthèse
Environmental pollutions by xenobiotics, especially by pesticides and heavy metals derived from agricultural activities, show an important complexity of chemical composition and of spatiotemporal dynamic. Vegetative filter strips between cultivated fields and streams limit the diffusion of these residual pollutions to natural environments. However, the exact biological role of plant in these buffer strips is poorly understood in this context of environmental and ecological protection. A comparative study carried out in situ and in controlled conditions highlighted the role of plant compartment in the processes of absorption, storage and/or partial degradation of pollutants in planta. Such capability of phytoremediation depends on the maintenance of a vegetal cover in area subjected to recurring flow of pesticides, it varies according to species and leads to the structuration of vegetative filter strip communities. An integrative study in controlled conditions of plant responses to low doses of pollutants allowed to analyze at different levels of complexity the impacts of chemical stresses on the model species Arabidopsis thaliana and the grassland species Lolium perenne. Low and sublethal doses of xenobiotics, associated degradation products and heavy metals induced cryptic perturbations at metabolic and molecular levels. Multi-pollution analyses, which reflect realistic conditions of environmental exposure, highlighted complex interactive effects between pollutants in mixture and the difficulty to predict them. The mechanisms of response to these chemical stresses differ according to the species and the pollutant, and suggest differences in term of perception and/or transport of pollutants, or of coordination of molecular and metabolic responses. Arabidopsis presented a coordination of its responses toward an increase of stress metabolites, a decrease of carbon metabolites (soluble carbohydrates), in parallel with modifications of gene expressions implicated on antioxidant defences, defence against xenobiotic stresses, or phytohormone dynamic. Chemical stress leads to major modifications of nitrogen metabolism in Lolium, and perturbations of processes of photorespiration. De novo transcriptomic analysis of Lolium therefore showed that a majority of identified genes are related to signal transduction pathways, highlighting the complexity of response mechanisms and the links between metabolic signals, especially linked to carbohydrate, hormonal signaling pathways, stress signals and photosynthesis. Subtoxic chemical stress induced cryptic re-engineering of plant processes that may explain the development of tolerance for some species and their persistence in area affected by residual pollution

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Moretti, Julien. "Déubiquitinations dans la voie de signalisation Notch." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00726110.

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La signalisation Notch est une voie extrêmement conservée depuis Caenorhabditis elegans jusqu'aux mammifères en passant par Drosophila melanogaster. Elle est requise dès le développement embryonnaire et contrôle de nombreux processus comme la différenciation et le choix du destin cellulaire, la prolifération, ou encore le maintien de stocks de cellules souches et l'apoptose. La voie est basée sur l'activité du récepteur Notch, un hétérodimère transmembranaire qui est activé lors de contacts intercellulaires par la liaison de ses ligands qui sont également des protéines transmembranaires. Suite à cette activation, le récepteur subit une série de deux clivages protéolytiques internes, respectivement catalysés par une métalloprotéase ADAM et par le complexe multi-protéique γ-secrétase. Ce dernier clivage libère le domaine intracellulaire de Notch dans le cytoplasme, cette forme étant ensuite transportée dans le noyau où elle active directement la transcription des gènes cibles de la voie Notch en se liant à ses co-facteurs de transcription, CSL et Mastermind. Le récepteur Notch est régulé à diverses étapes par des processus d'ubiquitination : la monoubiquitination du récepteur Notch activé contrôle son clivage γ-secrétase, la polyubiquitination du récepteur Notch non activé et endocytosé contrôle sa dégradation dans les lysosomes. Les processus d'ubiquitination sont réversiblement contrôlés par la déubiquitination. Or, aucune déubiquitination n'a été identifiée dans la voie de signalisation Notch. Mon projet consistait à identifier les déubiquitinases - les enzymes responsables de la déubiquitination - impliquées dans les deux processus d'ubiquitination décrits précédemment. Nous avons pour cela mis au point deux cribles en immunofluorescence permettant de tester une banque de shRNA qui cible l'expression des 91 déubiquitinases connues ou putatives du génome humain. Le premier crible m'a permis d'identifier eIF3f, une sous-unité du facteur d'initiation de la traduction eIF3, comme une nouvelle protéine portant une activité déubiquitinase. eIF3f est recrutée au récepteur Notch via l'E3 ubiquitine ligase Deltex, et régule positivement la voie de signalisation Notch en déubiquitinant le récepteur Notch activé avant le clivage γ-secrétase, favorisant ainsi la production de la forme transcriptionnellement active de Notch. Par ailleurs, le deuxième crible a identifié plusieurs déubiquitinases candidates, dont le rôle dans la régulation du trafic intracellulaire du récepteur Notch non activé est en cours de validation.

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Moretti, Julien. "Deubiquitinations dans la voie de signalisation Notch." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066365.

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La signalisation Notch est une voie extrêmement conservée, requise dès le développement embryonnaire et contrôlant le choix du destin cellulaire au cours de nombreux processus. Elle est basée sur l’activité du récepteur transmembranaire Notch qui est activé lors de contacts intercellulaires par ses ligands également transmembranaires. Le récepteur subit alors deux clivages protéolytiques, par une métalloprotéase ADAM puis par le complexe multi-protéique γ-secrétase, qui libèrent le domaine intracellulaire de Notch dans le cytoplasme, forme qui est ensuite transportée dans le noyau où elle active la transcription de ses gènes cibles. Le récepteur Notch est régulé par divers processus d’ubiquitination : la monoubiquitination du récepteur Notch activé contrôle son clivage γ-secrétase, la polyubiquitination du récepteur Notch non activé contrôle sa dégradation lysosomiale. L’ubiquitination est réversiblement contrôlée par la déubiquitination. Or, aucune déubiquitination n’a été identifiée dans la voie de signalisation Notch. Mon projet consistait à identifier les déubiquitinases – enzymes catalysant la déubiquitination – impliquées dans les deux processus d’ubiquitinationde Notch, en utilisant deux cribles permettant de tester une banque de shRNA qui cible l’expression des 91 déubiquitinases humaines. Le premier m’a permis d’identifier eIF3f, une sous-unité du facteur d’initiation de la traduction eIF3, comme une nouvelle déubiquitinase qui agit sur Notch activé avant le clivage γ-secrétase. Par ailleurs, le deuxième crible a identifié plusieurs candidates, parmi lesquelles USP12 dont le rôle dans la régulation du trafic de Notch non activé est en cours de validation

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Fouillade, Charles. "Voie de signalisation Notch3 dans les artères cérébrales." Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05T043.

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Le gène Notch3 code pour un récepteur transmembranaire hétérodimérique exprimé principalement dans les cellules musculaires lisses des petites artères. Les travaux de ces dernières années ont montré que le récepteur Notch3 joue un rôle clé dans la physiologie et la pathologie des petites artères. Chez la souris, Notch3 est requis pour l’intégrité structurale et fonctionnelle des artères de résistance en contrôlant l’identité artérielle, la maturation postnatale des cellules musculaires lisses et le tonus myogénique des artères de résistance. Chez l’Homme, les maladies des petites artères cérébrales (MPAC) regroupent un ensemble hétérogène de maladies parmi lesquelles un petit pourcentage, probablement encore sous-estimée, est héréditaire. A ce jour, très peu de gènes responsables de formes familiales de MPAC ont été identifiés. CADASIL est la forme familiale la plus fréquente de MPAC causée par des mutations du gène NOTCH3. Il s’agit de mutations extrêmement stéréotypées siégeant dans les répétitions EGF qui constituent le domaine extracellulaire de Notch3. Les résultats du laboratoire suggèrent fortement que l’effet pathogène de ces mutations résulte de l’acquisition par le récepteur muté d’une nouvelle fonction. Les deux objectifs de ce travail ont été : 1°) Tester l’hypothèse qu’il existe des maladies des petites artères cérébrales causées directement par une modification de l’activité du récepteur Notch3 2°) Identifier les effecteurs du récepteur Notch3 dans le contexte du développement et de la maturation des artères cérébrales Nous avons identifié chez une patiente présentant une MPAC distincte de CADASIL une nouvelle mutation siégeant dans le domaine d’hétérodimérisation du récepteur Notch3. In vitro, la mutation L1515P induit une activation ligand indépendante du récepteur Notch3. L’analyse biochimique suggère que cette activation est causée par une déstabilisation du domaine d’hétérodimérisation de Notch3.Nous avons réalisé une analyse du transcriptome des artères caudales de souris Notch3-/- et Notch3+/+. Cette analyse a permis d’identifier un groupe de 17 gènes régulés par Notch3 dans l’artère caudale ou les artères cérébrales. L’invalidation du facteur de transcription CSL/RBPJK dans les cellules musculaires lisses, pendant la période postnatale immédiate, phénocopie les altérations structurales et moléculaires observées chez les souris Notch3-/-. L’administration chez la souris d’un inhibiteur pharmacologique de la voie Notch a permis d’identifier 6 gènes (Grip2, Nrip2, Kv1.5, Pgam2, Susd5, Xirp1), en plus de Notch3, dont l’expression dans les artères cérébrales est rapidement diminuée par ce traitement. Nous avons ensuite concentré nos efforts sur le gène Grip2 dont l’expression était la plus fortement diminuée dans les différents modèles d’inactivation de la voie Notch. Grip2 était jusqu’alors connu pour son interaction avec les récepteurs au glutamate dans les neurones. Nous avons montré que Grip2 était également exprimé dans les cellules musculaires lisses vasculaires et identifié une isoforme vasculaire régulée spécifiquement par Notch3/CSL/RBPJK. L’analyse des souris Grip2neo/neo, exprimant une protéine Grip2 tronquée dans sa partie N-terminale, a révélé une atteinte sélective du tonus myogénique des artères cérébrales.En conclusion, nous avons démontré l’existence d’une mutation activatrice de NOTCH3 associée à une MPAC chez l’Homme. Nos résultats indiquent que dans le contexte de la maturation des artères cérébrales, la fonction de Notch3 est médiée par le facteur de transcription CSL/RBPJK dans les cellules musculaires lisses durant la période postnatale immédiate. Nous avons identifié plusieurs nouveaux effecteurs potentiels de Notch3 et validé l’un d’entre eux, Grip2, pour son implication dans les réponses myogéniques des artères cérébrales. Nous proposons que des mutations dans les gènes codant pour ces effecteurs puissent rendre compte de certaines formes monogéniques de MPAC
Notch3 encodes a transmembrane receptor primarily expressed in arterial smooth muscle cells. Human and mouse genetics studies demonstrated that Notch3 is a key player in physiology and diseases of small vessels. Studies in mice revealed that Notch3 is required to generate functional arteries in regulating arterial differentiation, maturation of vascular smooth muscle cells and myogenic tone. Cerebral Autosomal Dominant Arteriopathy with Subcortical infarcts and Leukoencephalopathy (CADASIL) is the most frequent hereditary small vessels disease in human adults caused by NOTCH3 mutations. Pathogenic mutations lead to an odd number of cysteine residues within the NOTCH3 extracellular domain. Data from the laboratory suggest a model that invokes novel pathogenic roles from the mutant NOTCH3 protein. The main goals of this work are: 1°) To determine if there is small vessels disease caused by modification of Notch3 activity 2°) To identify Notch3 effectors involved in development and maturation of cerebral arteries We identified a novel heterozygous missense mutation (L1515P) in the heterodimerization domain of NOTCH3 in a patient with cerebral small vessel distinct from CADASIL. In vitro analysis showed that the L1515P mutant exhibits increased canonical NOTCH3 signaling in a ligand-independent manner. Biochemical analysis suggests that the mutation renders NOTCH3 hyperactive through destabilization of the heterodimer. Transcriptome analysis using tail arteries of Notch3-/- and Notch3+/+ mice identified a core set of 17 novel Notch3-regulated genes confirmed in tail or brain arteries. Postnatal deletion of RBP-Jκ in smooth muscle cells recapitulated the structural, functional, and molecular defects of brain arteries induced by Notch3 deficiency. Transient in vivo blockade of the Notch pathway with γ-secretase inhibitors uncovered, in addition to Notch3, 6 immediate responders, including the voltage-gated potassium channel Kv1.5, which opposes to myogenic constriction of brain arteries, and the glutamate receptor-interacting protein-2, with no previously established role in the cerebrovasculature. We identified a vascular smooth muscle cell isoform of Grip2. We showed that Notch3-RBP-Jκ specifically regulates this isoform. Finally, we found that cerebral arteries of glutamate receptor-interacting protein-2 mutant mice, which express an N-terminally truncated glutamate receptor-interacting protein-2, exhibited selective attenuation of pressure-induced contraction. In conclusion, we have demonstrated the existence of a NOTCH3 activating mutation associated with small vessels disease in human. Our results show that, in the context of cerebral arteries maturation, Notch3 functions are mediated by CSL/RBPJK transcription factor. We have identified several new Notch3 effectors and validated Grip2 as a novel regulator of myogenic tone in cerebral arteries. One can expect that mutations in these Notch3-regulated genes could be responsible of some monogenic form of small vessel diseases of the brain

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Moutal, Aubin. "CRMP5 dans les glioblastomes : fonction et voie de signalisation." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01056757.

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CRMP5 appartient à la famille des Collapsin Response Mediator Protein. Ces protéines sont très exprimées dans le cerveau en développement et les zones de neurogénèse chez l'adulte. Dans un contexte tumoral, l'expression des messagers de CRMP5 émergent dans un cluster de gènes associés à la plus faible survie des 20 patients suivis, et à la prolifération (Liang et al., 2005). Nous avons confirmé ces résultats dans une série rétrospective de 183 GBM où la forte expression protéique de CRMP5 est corrélée à une plus faible survie des patients (7.14 mois vs 10 mois) ; de plus les tumeurs exprimant fortement CRMP5 présentent un index mitotique 2 fois plus important (p = 0.0009) que les tumeurs exprimant faiblement CRMP5. Dans des cultures primaires ou lignées cellulaires de GBM nous montrons que la prolifération des glioblastomes est dépendante de l'expression de CRMP5 et de la voie de signalisation Notch. Des analyses en western blot démontrent que CRMP5 protège les récepteurs Notch de la dégradation lysosomale. Nous avons approfondi ce mécanisme et montré une nouvelle voie de régulation de Notch par CRMP5 qui par une interaction protéique avec Numb, l'inhibiteur de Notch empêche la dégradation du récepteur. Parallèlement, l'analyse en immunohistochimie sur les biopsies de GBM montrent une forte expression Notch et sa cible Hes1 dans les tumeurs exprimant fortement CRMP5. Ces résultats montrent la corrélation entre l'expression de CRMP5 dans les GBM, l'activation de la voie Notch et la faible survie des patients. Le ciblage de l'interaction CRMP5-Numb est une stratégie potentielle pour un traitement ciblé des glioblastomes

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Girardin, Stephen. "Régulation de la voie de signalisation intracellulaire JNK/SAPK." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2001. http://www.theses.fr/2001STR13179.

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Moreau, Manon. "Analyse de la voie de signalisation TOR chez arabidopsis thaliana." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA112328.

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TOR (Target Of Rapamycin) est une protéine kinase de la famille des PIKK (PhosphatidylInositol Kinase-related Kinases), essentielle à la survie, et très conservée entre les organismes eucaryotes. TOR fonctionne sous forme de deux complexes multiprotéiques, TORC1 et TORC2, intégrant des signaux environnementaux (les facteurs de croissance, l’état énergétique, les stress, la disponibilité en nutriments) et régulant la croissance via le contrôle de différentes fonctions cellulaires (la traduction, la biogenèse des ribosomes, la transcription, l’autophagie, le cycle cellulaire, le métabolisme, l’organisation du cytosquelette d’actine). TORC1 et TORC2 sont composés de protéines partenaires différentes et ont des rôles distincts au sein de la cellule. TORC1 comprend principalement les protéines TOR, RAPTOR et LST8, et TORC2 est composé de TOR, LST8 et RICTOR. Le génome d’Arabidopsis contient un gène Tor, deux gènes Lst8 et deux gènes Raptor mais pas d’orthologue du gène Rictor, ce qui remet en cause l’existence d’un complexe TORC2 chez les plantes. L’objectif de ma thèse est d’étudier les éléments en amont et en aval de la voie de signalisation TOR, et l’organisation du complexe TOR chez Arabidopsis. L’étude de la protéine LST8 a révélé un rôle très important de cette protéine dans la croissance, le développement, l’induction de la floraison, le métabolisme azoté et l’adaptation à des conditions de jour long. En parallèle, l’étude, via différentes approches, de lignées d’Arabidopsis permettant une inactivation inductible par l’éthanol de l’expression du gène Tor a permis de mettre en évidence des cibles et des fonctions cellulaires potentielles du complexe TOR chez Arabidopsis
The TOR (Target Of Rapamycin) protein is a serine/threonine kinase related to the PIKK (PhosphatidylInositol Kinase-related Kinases) family, which is essential for survival and highly conserved between eukaryotes. TOR functions in two multiprotein complexes, TORC1 and TORC2 which integrate various environmental signals like growth factors, energy level, stress, and nutrient availability, thus regulating growth by controlling translation, transcription, ribosome biogenesis, autophagy, cell cycle, metabolism, and actin cytoskeleton organization. TORC1 and TORC2 are composed of different protein partners and play different roles in cells. TORC1 is composed of TOR, RAPTOR and LST8 while TORC2 is formed by TOR, LST8 and RICTOR. The Arabidopsis genome contains a single Tor gene, two Raptor genes, and two Lst8 genes but no obvious ortholog of Rictor gene which raises the question of the presence of a second TOR complex in plants. The goal of my thesis is to better understand the upstream and downstream components of the TOR signalization pathway as well as organization of the TOR complex in Arabidopsis. The LST8 protein study revealed that LST8 plays an important role in growth, development, flowering, nitrogen metabolism and long-day acclimatation. We also used ethanol inducible Tor RNAi lines to perform transcriptomic, translatomic, metabolomic and cytologic studies and unveiled potential targets and cellular functions of the TOR complex in Arabidopsis

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Boutet, Nathalie. "Etudes moléculaires de la voie de signalisation Hedgehog chez l'homme." Bordeaux 2, 2003. http://www.theses.fr/2003BOR20990.

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Les hedgehogopathies regroupent un ensemble de syndromes dysmorphiques héréditaires caractérisés par une altération de la voie de signalisation Hedgehog (Hh). Dans cette voie, le gène patched code pour un récepteur qui agit en opposition à la protéine Hh. En l'absence d'une protéine PTCH fonctionnelle, les facteurs de transcription GLI sont surexprimés. Chez l'homme, ptch1 est muté dans le syndrome de Gorlin ou Naevomatose baso-cellulaire, et gli3 est muté dans les syndromes de Greig (GCPS) et de Pallister-Hall (PHS). Nous avons étudié le spectre des mutations géniques dans 151 échantillons de patients atteints du qyndrome de Gorlin et 52 échantillons de patients présentant les syndromes GCPS et PHS, par différentes techniques dont la dHPLC. 27 mutations du gène ptch1 ont été identifiées, dont une mutation récurrente dans l'exon 8, et 5 mutations du gène gli3. Alors qu'il semble exister une corrélation génotype/phénotype dans les syndromes de Greig et Pallister-Hall, aucune corrélation n'a été identifiée dans le syndrome de Gorlin. Les patients atteints du syndrome de Gorlin développent des carcinomes baso-cellulaires (CBC), dans lesquels la protéine GLI1 est surexprimée. Nous émettons l'hypothèse que des oligonucléotides leurres, contenant le site de fixation de GLI1 sur l'ADN, pourraient capturer GLI1, empêchant la transactivation de gènes essentiels de la voie Hh et inhiber ainsi la prolifération. Nous avons construit un système expérimental in vitro basé sur la transactivation d'un gène rapporteur, la luciférase, par l'expression des prtéines GLI1 et GLI3, permettant ainsi de visualiser la fixation de GLI sur l'ADN. Malheureusement les essais d'inactivation de la surexpression de GLI1 par les oligonucléotides leurres se sont révélés négatifs
"Hedgehogopathy" defines in human a group of hereditary dysmorphic syndromes with an alteration of the Hedgehog (Hh) pathway. In this pathway, the patched gene encodes a receptor that acts in opposition to Hh protein. In the absence of a functional PTCH protein, GLI transcription factors are overexpressed. In human, ptch1 gene mutations are involved in Gorlin syndrome or Nevoid Basal Cell Carcinoma Syndrome, and gli3 is mutated in Greig syndrome (GCPS) and Pallister-Hall syndrome (PHS). We have studied gene mutations spectrum in 151 patients cases of Gorlin syndrome, 52 cases of Greig and Pallister-Hall syndromes, with different techniques including dHPLC. 27 ptch1 mutations have been identified, where one recurrent mutation in exon 8, and 5 gli3 mutations. While a phenotype-genotype correlation seems to exist in Greig and Pallister-Hall syndromes, no correlation was found in the Gorlin syndrome. Patients affected by Gorlin syndrome generally develop basal cell carcinoma (BCC), in which GLI1 protein is overexpressed. We hypothesize that decoy oligonucleotides containing the GLI1 DNA binding site would effectively bind GLI1, preventing the transactivation of essential genes of the Hh pathway and thereby inhibiting proliferation. In this way, we design an experimental in vitro system, based on the transactivation of a reporter gene, the luciferase, which allows the visualisation of GLI DNA binding. However we were unable to demonstrate any inactivation of GLI1 by using decoy oligonucleotides

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Assi, Mohamad. "L'impact de l'activité physique et des antioxydants sur le dialogue entre la tumeur et le muscle squelettique dans le cancer : déchiffrage de voies de signalisation impliquées dans la croissance de la tumeur et l'atrophie musculaire." Thesis, Rennes 2, 2016. http://www.theses.fr/2016REN20055/document.

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Les espèces réactives de l’oxygène (ERO) contrôlent plusieurs aspects de la carcinogenèse, étant donné leur capacité àpromouvoir la prolifération mais aussi à induire la sénescence et l’apoptose. Dans les stades avancés de cancer, les EROpeuvent également participer au développement de l’atrophie musculaire, engendrant une détérioration de la qualité de viedes patients. L’activité physique (AP), connue pour augmenter les défenses antioxydants de l’organisme et lasupplémentation en antioxydants sont considérées comme deux stratégies susceptibles de moduler la croissance tumorale, d’améliorer la performance physique et de réduire les effets secondaires liés à la maladie et aux traitements anticancéreux. Néanmoins, plusieurs questions restent aujourd’hui sans réponse. En effet, bien que l’AP puisse réduire la progression du cancer du sein, du colon et de la prostate, son impact sur les cancers se développant au sein du muscle (ex : le liposarcome), donc soumis aux contractions musculaires répétées, reste méconnu. En utilisant des approches in vivo et in vitro, nous avons démontré que maintenir une AP régulière accélère la croissance du liposarcome intramusculaire, probablement, via la réduction des taux circulants d’insuline et l’inhibition de la voie « P38 MAPK-P21 ». Pour les patients ne pouvant pas pratiquer d’AP, la consommation d’antioxydants pourrait être un moyen de réduire les ERO tumorales et musculaires et ainsi être prometteuse. Toutefois, les études actuelles restent très controversées. Nos travaux ont montré dans un modèle murin de cachexie cancéreuse que des doses nutritionnelles d’un produit antioxydant commercialisé en France, étaient suffisantes pour accélérer la croissance de la tumeur colique, favoriser la perte de masse corporelle totale et musculaire et engendrer la mort prématurée des souris. L’ensemble de nos résultats suggère que la pratique d’AP et la consommation en antioxydants peuvent induire des effets différents selon le type de tumeur et leur implantation, nécessitant une prise en charge individualisée des patients. En effet, (1) les patients atteints d’un LS intramusculaire devraient éviter de pratiquer une AP durant la période préopératoire mais ces résultats doivent être confirmés par une étude clinique, (2) les patients avec un stade avancé de cancer devraient être vigilants quant à l’utilisation de suppléments antioxydants ; une telle pratique pouvant avoir des répercussions dangereuses sur leur santé
Reactive oxygen species (ROS) control several aspects of carcinogenesis as they can either promote tumor growth andprogression or senescence and apoptosis. In advanced stages of cancer, ROS can also drive the development of other cancerrelated complications like, muscle wasting. Physical activity (PA) and antioxidant supplementation have been proposed as two adjuvant strategies to better control tumor growth, ameliorate performance and alleviate secondary symptoms related to cancer itself or to the heavy anticancer therapies. However, several issues remain to be elucidated. First of all, although PA could reduce colon, breast and prostate cancer growth and progression, its impact remains unknown on orthotopic intramuscular tumors like liposarcoma, which directly affect the musculoskeletal apparatus and reduce physical function. Secondly, given the limitedness of PA application in some advanced stages of cancer, patients may increase their dependency on nutritional and antioxidant complements as an alternative strategy, but such practice has spark a lot of polemic and inconsistent results. In this thesis, we have addressed the effectiveness of PA and antioxidants in two distinct animal models of cancer. Using in vivo and in vitro approaches, we found that voluntary PA accelerated the growth of intramuscular liposarcoma tumors and exacerbated skeletal muscle dysfunction, mainly, by decreasing circulating insulin levels and the subsequent activation of the tumor suppressor pathway “P38 MAPK-P21”. We also demonstrated that nutritional doses of commercial antioxidants enhanced colon tumor growth, total body/skeletal muscle weight loss and caused premature death of mice. Such mechanism was due to selective changes in oxidative damage profiles, which decreased in tumor but increased in skeletal muscle, in a way driving tumor growth and skeletal muscle wasting/dysfunction. Clinically, it seems that (1) patients with intramuscular liposarcoma may, at least, not increase their levels of PA or undergo hospital-supervised exercise program, during the preoperative period; until the confirmation of our findings with clinical data and (2) patients with advanced stages of cancer must be very careful against the use of antioxidants as it could lifethreatening. Accordingly, health agencies in France, Europe and USA prohibit the use of synthetic antioxidant supplements without dietary counseling by a cancer patient’s physician and/or nutritionist

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Nivlet, Laure. "Etude de la voie de signalisation Artn/Gfrɑ3 dans le pancréas". Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ087/document.

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L’identification de signaux impliqués dans la formation des cellules endocrines pancréatiques permettra d’apporter de nouvelles connaissances sur les mécanismes régissant la différenciation des cellules endocrines et de nouvelles applications dans le domaine de la génération de cellules sécrétrices d’insuline afin de traiter des patients atteints de diabète. C’est dans ce contexte que nous avons étudié l’expression et la fonction du récepteur membranaire Glial cell line derived neurotrophic factor Family Receptor α 3 (Gfrα3) et de son ligand Artemin au cours du développement du pancréas et dans le pancréas adulte chez la souris. Des techniques de PCR quantitatives, d’hybridations in situ et d’immunofluorescences nous ont permis de caractériser l’expression de Gfrα3, d’Artn mais aussi d’autres ligands et récepteurs de cette famille. Nous avons aussi utilisé un modèle de souris perte de fonction et générer un modèle de souris transgénique sur exprimant Artn dans le pancréas afin d’étudier la fonction de la voie de signalisation Artn/Gfrα3 dans le pancréas. Nous avons ainsi découvert que le récepteur Gfrα3 est exprimé au cours du développement du pancréas par les progéniteurs endocrines, les cellules insulines-positives et glucagon-positives ainsi que les cellules embryonnaires neuronales. Au stade adulte, Gfrα3 n’est pas exprimé par les cellules à insuline et est exprimé par quelques cellules à glucagon. A ce stade, son expression est aussi observée au niveau des cellules gliales, ainsi que des neurones du système nerveux sympathique et parasympathique. Les différentes expériences de perte et de gain de fonction réalisées afin de comprendre le rôle pancréatique de Gfrα3, ont révélé que ce récepteur n’est pas essentiel à la différenciation et au maintien des cellules endocrines, ni à la formation et au maintien de l’innervation endocrine. En conclusion, nous avons découvert et caractérisé un nouveau marqueur de surface exprimé dans les cellules endocrines pancréatiques en développement. Cette caractéristique pourrait s’avérer utile pour purifier par cytométrie en flux et étudier des sous populations cellulaires générées au cours des protocoles de différentiation in vitro visant à générer de nouvelles cellules sécrétrices d’insuline pour une thérapie cellulaire du diabète
The generation of therapeutic ß-cell from human embryonic stem cells relies on the identification of growth factors that faithfully mimic pancreatic ß-cell development in vitro. In this context, the aim of the study was to determine the expression and function of a novel endocrine progenitor surface marker, the Glial cell line derived neurotrophic factor receptor α3 (Gfrα3) and its ligand Artemin in islet cell development and function.RT-PCR, In situ hybridization and immunochemistry were used to characterize the expression of Gfra3 and Artn mRNAs and proteins as well as of other members of the GDNF receptor and ligand family. We used Gfra3-deficient mice to study Gfrα3 function and generated a transgenic mice over expressing Artn in the embryonic pancreas to study Artn function. We found that Gfrα3 is expressed at the surface of a subset of Ngn3-positive endocrine progenitors as well as of embryonic α- and ß-cells, while Artn is found in the pancreatic mesenchyme. Adult ß-cell lack Gfrα3, but rare ß cell express the receptor. Gfrα3 is also found in parasympathetic and sympathetic intra islets neurons as well as in glial cell in the embryonic and adult pancreas. The loss of Gfrα3 or overexpression of Artn has no impact on Ngn3-and islet cell formation and maintenance in the embryo. Islet organisation and innervation as well as glucose homeostasis is normal in Gfrα3-deficient mice. Our data show that Gfrα3 is dispensable for islet cell differentiation and innervation suggesting functional redundancy. Gfrα3 could be instrumental as a surface marker for antibody–mediated sorting and characterization of relevant cell population during islet cell differentiation

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Munier-Bousseton, Fabienne. "Neuroblastome, résistance in vivo à l'irinotecan et voie de signalisation ALK." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00829102.

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Les neuroblastomes, même de haut risque répondent bien à la chimiothérapie initiale mais deviendront fréquemment résistants au traitement. Les inhibiteurs de topoisomérase I représentent un outil thérapeutique important dans la prise en charge des neuroblastomes réfractaires. Pour étudier la résistance aux inhibiteurs de topoisomérase I acquise dans un contexte thérapeutique, un modèle murin de neuroblastome résistant au CPT-11 a été développé. La chimiorésistance est connue comme un phénomène multifacoriel. Nous avons donc utilisé plusieurs approches pour mieux caractériser les mécanismes à l'origine de la résistance dans notre modèle. Une approche génomique a permis d'identifier la dérégulation de la voie de signalisation formée du récepteur ALK et de deux ligands PTN et MDK. Alors que ALK est décrit comme gène majeur de prédisposition au neuroblastome, principalement par le biais de mutations activatrices, nous avons démontré que l'activation du récepteur survenait par des mécanismes alternatifs aux mutations dans une large majorité de cas et participerait à l'initiation de la maladie. En revanche, nous n'avons pas pu prouver l'implication de ce récepteur dans la progression de la maladie ou dans sa réponse au traitement. Il semble que la régulation de ALK soit complexe et le rôle exact de ce récepteur dans la progression du neuroblastome reste à établir. En revanche, nous avons démontré l'importance du ligand MDK dans la régulation de l'expression et de l'activation de ALK ainsi que dans le contrôle de la survie des cellules neuroblastiques. Inhiber cette cytokine représente une stratégie thérapeutique intéressante, complémentaire des thérapies anti-ALK, actuellement en développement clinique dans le neuroblastome. D'autre part, la caractérisation phénotypique du modèle a permis de mettre en évidence une signalisation altérée des dommages à l'ADN associée à une instabilité génétique accrue dans les tumeurs résistantes. Celles-ci présentent également une modification de progression dans le cycle cellulaire et une proportion plus importante de cellules quiescentes. Au final, ce travail a permis d'identifier différents mécanismes de résistance qui représentent des marqueurs de réponse au traitement et des cibles thérapeutiques intéressantes dans le neuroblastome.

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Bousseton, Munier. "Neuroblastome, résistance in vivo à l'irinotecan et voie de signalisation ALK." Thesis, Paris 11, 2012. http://www.theses.fr/2012PA11T025/document.

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Les neuroblastomes, même de haut risque répondent bien à la chimiothérapie initiale mais deviendront fréquemment résistants au traitement. Les inhibiteurs de topoisomérase I représentent un outil thérapeutique important dans la prise en charge des neuroblastomes réfractaires. Pour étudier la résistance aux inhibiteurs de topoisomérase I acquise dans un contexte thérapeutique, un modèle murin de neuroblastome résistant au CPT-11 a été développé. La chimiorésistance est connue comme un phénomène multifacoriel. Nous avons donc utilisé plusieurs approches pour mieux caractériser les mécanismes à l'origine de la résistance dans notre modèle. Une approche génomique a permis d'identifier la dérégulation de la voie de signalisation formée du récepteur ALK et de deux ligands PTN et MDK. Alors que ALK est décrit comme gène majeur de prédisposition au neuroblastome, principalement par le biais de mutations activatrices, nous avons démontré que l'activation du récepteur survenait par des mécanismes alternatifs aux mutations dans une large majorité de cas et participerait à l'initiation de la maladie. En revanche, nous n'avons pas pu prouver l'implication de ce récepteur dans la progression de la maladie ou dans sa réponse au traitement. Il semble que la régulation de ALK soit complexe et le rôle exact de ce récepteur dans la progression du neuroblastome reste à établir. En revanche, nous avons démontré l'importance du ligand MDK dans la régulation de l'expression et de l'activation de ALK ainsi que dans le contrôle de la survie des cellules neuroblastiques. Inhiber cette cytokine représente une stratégie thérapeutique intéressante, complémentaire des thérapies anti-ALK, actuellement en développement clinique dans le neuroblastome. D’autre part, la caractérisation phénotypique du modèle a permis de mettre en évidence une signalisation altérée des dommages à l'ADN associée à une instabilité génétique accrue dans les tumeurs résistantes. Celles-ci présentent également une modification de progression dans le cycle cellulaire et une proportion plus importante de cellules quiescentes. Au final, ce travail a permis d'identifier différents mécanismes de résistance qui représentent des marqueurs de réponse au traitement et des cibles thérapeutiques intéressantes dans le neuroblastome
Neuroblastoma, including high-risk cases, show a good initial response to chemotherapy but will frequently become resistant to treatment. Topoisomerase I inhibitors represent an important therapeutic option for refractory neuroblastoma. To study the reisitance to topoisomerase I inhibitors acquired in a therapeutic setting, we developed in vivo a resistant model to irinotecan (CPT-11). Chemoresistance is known as a multifactorial phenomenon. We have therefore used several approaches to better characterize mechanisms leading to resistance in our model. A genomic approach enabled us to identify the deregulation of a signaling pathway, constituted with a receptor (ALK) and two lignads (PTN and MDK). While ALK is decsribed as a major neuroblastoma predisposition gene, mainly through activating mutations, we demonstrated that the activation of ALK occurs via mechanisms others than mutation in a large majority of cases. Moreover ALK activation is an important event in the initiation of the disease. However, we couldn’t prouve the implication of the receptor in the progression of the disease or in its response to treatment. It seems that the regulation of ALK is complex and its precise role in the progression of neuroblastoma remains to be precisely defined. Nevertheless, we have demonstrated the importance of MDK, one of ALK ligands in the regulation of the expression and activation of ALK as well as in the control of the neuroblastoma cells survival. The inhibition of the cytokine, MDK represents an interesting therapeutic strategy, complementary to anti-ALK therapies, currently in clinical development in neuroblastoma. On another hand, the phenotypic characterization of the model, showed an alteration of the signaling of DNA damage and an increased genomic instability in the resistant tumors. Those tumors also harbor a modification in the cell cycle progression, particularly an increased proportion of quiescent cells. Finally, this work enables us to identify several resistance mechanism that represent markers of response to chemotherapy and relevant therapeutic targets in neuroblastoma

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Guillemain, Ghislaine. "Étude des premières étapes d'une nouvelle voie de signalisation du glucose." Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077252.

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PELICANO, LUIS. "Modulation de la voie de signalisation des interferons par l'acide retinoique." Paris 6, 1998. http://www.theses.fr/1998PA066278.

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Les ifn, essentiellement connus pour leur activite antivirale, possedent egalement des effets antiproliferatifs, immunoregulateurs et differenciants dont les proprietes ont ete utilisees dans le traitement de la tricholeucocytose. L'acide retinoique (atra) est utilise dans l'induction de remissions chez des patients atteints de leucemie aigue promyelocytaire (lam3) et pour l'acne grave. Ces donnees ont conduit a tester l'effet de la combinaison des deux sur differentes lignees cellulaires. Les effets biologiques observes lors d'un traitement combine ont ete superieurs par rapport aux monotraitements dans des lignees d'origine diverse (myeloide, renale, uterine, mammaire). Afin de comprendre les bases de la cooperation entre ifn et atra, nous avons analyse les mecanismes moleculaires potentiellement impliques. L'etude sur deux lignees cellulaires (hl-60, wish) a montre que le niveau de l'activite 2-5 synthetase (2-5oas), pml, sp100, pkr est accru en presence d'atra. L'atra seul induit un effet antiproliferatif et un effet antiviral vis-a-vis du vsv. Un double traitement est accompagne d'un effet cooperatif sur les trois phenomenes. L'utilisation d'anticorps anti-ifn a permis de montrer que l'arta induit la secretion d'ifn-. Les donnees publiees suggerent qu'irf-1, un candidat au role d'inducteur d'ifn, est directement induit par l'atra. Nous avons donc etudie le promoteur d'irf-1. Un site gas est decrit et un site potentiel de reponse a l'atra a ete localise en amont du site gas. Nos resultats suggerent que le site gas est suffisant pour expliquer l'effet de l'atra sur le promoteur d'irf-1. Des experiences de retards sur gel montrent que le pretraitement a l'atra augmente la fixation de complexes stat 1 sur un site gas. Cela s'explique par l'induction de stat 1 par l'atra. Par ailleurs, nous avons montre que la proteine pml, impliquee dans la translocation t(15 ; 17) qui fusionne une partie de son gene avec celui du recepteur aux retinoides rar, est inductible par les ifn. Le gene chimere pml/rar est sous le controle du promoteur de pml, et donc inductible par les ifn. Cette donnee permet de mettre en garde contre un traitement combine atra/ifn dans le cas particulier de la lam3, soulignant ainsi le role complementaire des test cliniques et des etudes in vitro.

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Amsellem-Ouazana, Delphine. "Implications de la voie de signalisation ERBB dans la carcinogénèse urothéliale." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N13S.

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Le cancer de la vessie, 5è cause de mortalité par cancer en France et 4è aux Etats-Unis, voit son incidence croître depuis 30 ans 1-3. Le carcinome à cellules transitionnelles, forme la plus fréquente des cancers de vessie, prédomine nettement chez l’homme. Les tumeurs vésicales se répartissent en tumeurs superficielles (60 à 70 % des cas lors du diagnostic) et en tumeurs infiltrantes. Les tumeurs superficielles posent deux problèmes évolutifs différents mais pouvant s’associer : le risque de récidive et/ou de progression. Les tumeurs superficielles sont cependant, dans l’immense majorité des cas, accessibles à un traitement conservant la vessie 4, 5. Aux tumeurs superficielles on peut opposer les tumeurs infiltrantes de vessie. Celles-ci sont soit infiltrantes au moment du diagnostic (20 à 30 % des cas), soit résultent de l’évolution vers l’infiltration d’une tumeur
ERBB-driven growth pathway has been implicated in most human epithelial malignancies including transitional cell carcinoma (TCC) of the bladder. Using quantitative real-time RTPCR we showed the interest of simultaneously quantifying the mRNA expression levels of the four ERBB and their eleven ligand genes in a series of bladder TCC. We were able to show an excellent correlation between TT-PCR results and immunohistochemistry for the evaluation of ErbB2 overexpression. We also confirmed that in bladderTCC,ERBB2 gene amplification only accounts for a small number of protein

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Fattet, Laurent. "TIF1gamma, nouveau régulateur négatif de la voie de signalisation du TGFbeta." Thesis, Lyon 1, 2013. http://www.theses.fr/2013LYO10038/document.

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Le TGFbeta intervient dans la régulation de nombreux processus cellulaires comme la prolifération, la différenciation, la migration, l'apoptose, du développement embryonnaire jusqu'à la vie adulte. Le TGFbeta est aujourd'hui bien décrit pour son rôle de suppresseur de tumeur de par ses activités anti-prolifératives et pro-apoptotiques, en particulier sur les cellules épithéliales. Cependant, au cours de la progression tumorale, le TGFbeta devient un promoteur de tumeur en favorisant l'angiogenèse, l'échappement de la tumeur vis-à-vis du système immunitaire et en induisant la transition épithélio-mésenchymateuse. Après fixation du ligand TGFbeta , le complexe de récepteurs active les protéines cytoplasmiques Smad2 et Smad3 qui s'associent à Smad4 pour former le complexe transcriptionnel qui se transloque alors dans le noyau pour réguler la transcription de nombreux gènes cibles. Récemment, la protéine TIF1gamma a été décrite pour intervenir dans la régulation négative de la voie du TGFbeta , en monoubiquitinant Smad4 ou en interagissant avec Smad2/3 en compétition avec Smad4. Cette voie de signalisation devant être finement contrôlée pour cibler son action en fonction du contexte cellulaire, nous analysons ici la régulation des interactions fonctionnelles entre la voie canonique du TGFbeta et la protéine TIF1gamma. Dans cette étude, nous montrons que TIF1gamma agit comme un régulateur négatif des fonctions de Smad4 dans la voie de signalisation du TGFbeta au cours du processus de transition épithélio-mésenchymateuse et au cours de la différenciation terminale des cellules épithéliales mammaires et de la lactation. Nous étudions également la SUMOylation de TIF1gamma comme nouveau niveau de régulation de la réponse cellulaire au TGFbeta . Nous avons ainsi caractérisé les sites fonctionnels de SUMOylation de TIF1gamma et montré que cette modification post-traductionnelle inhibe la formation du complexe transcriptionnel Smad et est nécessaire pour réguler temporellement la résidence de Smad4 au niveau du promoteur de gènes cibles du TGFbeta . Nos résultats montrent le rôle important de la SUMOylation de TIF1gamma dans la régulation de la transition épithélio-mésenchymateuse induite par le TGFbeta . En conclusion, notre travail met en avant le rôle majeur de TIF1gamma dans la régulation de la réponse transcriptionnelle au TGFbeta . De plus, nous montrons que la SUMOylation de TIF1gamma est nécessaire à son activité répressive sur Smad4
The cytokine TGFbeta regulates several cellular processes such as proliferation, differentiation, migration and apoptosis, from embryonic development to adulthood. TGFbeta is well described for its tumor suppressor role through antiproliferative and proapoptotic activities, in particular in epithelial cells. During tumor progression however, TGFbeta becomes a tumor promotor, favoring angiogenesis, immune suppression and inducing the epitheliomesenchymal transition. Binding of TGFbeta ligand to its receptors activate cytoplasmic messenger Smad2 and Smad3 to complex with Smad4 and shuttle into the nucleus to regulate TGFbetatarget genes expression. Recently, TIF1gamma has been described as a new negative regulator of TGFbeta signaling, through monoubiquitination of Smad4 or direct competition with Smad4 to bind activated Smad2/3. This signaling pathway has to be finely tuned to target an action dependent on a cellular context, which is why we analyze here the regulation of functional interactions between the TGFbeta canonical signaling and TIF1gamma. In this study, we show that TIF1gamma acts as a negative regulator of Smad4 functions in TGFbetasignaling during the epithelio-mesenchymal transition and during terminal differentiation of mammary epithelial cells and lactation. We are also interested in studying TIF1gamma SUMOylation as additional level of regulation of cell response to TGFbeta. Thus we characterized four functional SUMOylation sites in TIF1gamma and we found that this post-translational modification inhibits the formation of Smads transcriptional complex and is needed to temporally restrict Smad4 residence on the promoter of TGFbetatarget genes. Our results show the critical role of TIF1gamma SUMOylation in the regulation of TGFbeta- induced epithelio-mesenchymal transition. As a conclusion, our study unveils the major role of TIF1gamma in the regulation of TGFbeta transcriptional responses. Moreover, we show that TIF1gamma requires SUMOylation to exert its repressive activity on TGFbetasignaling

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Barrier, Marjorie. "Intérêt thérapeutique de la voie de signalisation STAT3 dans l'hypertension artérielle pulmonaire." Thesis, Université Laval, 2014. http://www.theses.ulaval.ca/2014/30208/30208.pdf.

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L’hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est une pathologie affectant les artères pulmonaires distales, qui s’obstruent progressivement. Cette obstruction est à l’origine d’une augmentation de la résistance vasculaire pulmonaire et de la pression artérielle pulmonaire qui entrainent alors une hypertrophie ventriculaire droite, puis une défaillance cardiaque droite, dont la majorité des patients HTAP décèdent. Les traitements restent inefficaces pour améliorer la survie des patients. L’obstruction des artères pulmonaires est principalement due à la prolifération et une résistance à l’apoptose des cellules musculaires lisses des artères pulmonaires (CMLAP). Ce phénotype n’est pas sans rappeler un phénotype cancéreux. D’ailleurs, le laboratoire a montré qu’un facteur connu pour être surexprimé dans le phénotype cancéreux, NFATc2, est aussi impliqué dans l’HTAP. Ce facteur joue en effet un rôle dans la prolifération et dans la résistance à l’apoptose, en régulant le taux de calcium intracellulaire, le courant potassique (prolifération) et le potentiel de membrane mitochondrial (résistance à l’apoptose). Des travaux plus récents ont également montré le rôle de STAT3 dans l’implication de la surexpression de NFATc2. Nous avons montré dans le chapitre 2 que la molécule d’origine végétale plumbagin (PLB), connue comme étant un inhibiteur de la voie STAT3 dans certaines lignées cellulaires cancéreuses, permet d’inhiber l’augmentation de l’expression et de l’activation de STAT3 des CMLAP. Cette inhibition entraine également la diminution de l’expression et de l’activation de NFATc2, une diminution de la prolifération et de la résistance à l’apoptose. Les mêmes résultats ont pu être répétés sur 2 modèles différents d’HTAP (monocrotaline -MCT- et SUGEN 5416+hypoxie). En effet, le traitement au PLB per os permet de prévenir (MCT) et de renverser (MCT et SU5416) l’HTAP, en diminuant la prolifération et la résistance à l’apoptose. Durant ces travaux de doctorat, j’ai ainsi pu mettre en évidence que le ciblage de la voie STAT3/NFATc2 par le PLB pourrait grandement bénéficier aux patients souffrant d’HTAP de par son effet sur la prolifération, la résistance à l’apoptose et probablement aussi par l’inhibition de l’effet Warburg dans les CMLAP de patients HTAP ainsi que dans 2 modèles pertinents d’HTAP, en prévention et en réversion.
Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease affecting distal pulmonary arteries, which progressively display obstruction. This obstruction is due to the increase of vascular pulmonary resistance and pulmonary arterial hypertension, which thus lead to a right ventricular dysfunction and then to a right heart failure from which most of the patients die. Treatments are still inefficient to improve patients’ outcome. Pulmonary arteries’ obstruction is mainly due to the proliferation and the apoptosis resistance of the pulmonary arteries smooth muscle cells (PASMC), reminding cancer phenotype. Interestingly, the laboratory has demonstrated that NFATc2, a well known overexpressed transcription factor in cancer, is involved in pulmonary arterial hypertension as well. This factor is involved in both proliferation and apoptosis resistance by regulating intracellular calcium rate, potassium current (proliferation) and mitochondrial membrane potential (apoptosis resistance). Earlier results showed that STAT3 is responsible for the overexpression of NFATc2. In Chapter 2, we demonstrated that the vegetal molecule plumbagin (PLB) inhibits STAT3 pathway overexpression and over-activation in PASMC. This inhibition leads to the decrease of the overexpression and over-activation of NFATc2, a proliferation and apoptosis resistance decrease. The same experiments were done in 2 different models of PAH, (monocrotaline –MCT- and SUGEN 5416+hypoxie). Indeed, per os PLB treatment prevents (MCT) and reverses (MCT and SU5416) PAH, by decreasing the proliferation and the apoptosis resistance. During my doctorate work, I was able to highlight that targeting STAT3/NFATc2 by PLB could greatly benefit to PAH patients, by its action on proliferation, apoptosis resistance and probably on the Warburg effect in the human PASMC as well as in 2 relevant PAH animal models, in prevention and reversion.

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Morice, Sarah. "Rôle de la voie de signalisation Hippo dans le développement des ostéosarcomes." Thesis, Nantes, 2019. http://www.theses.fr/2019NANT1037.

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L'ostéosarcome (OS) est la tumeur osseuse primitive maligne la plus fréquente chez les enfants et les adolescents dont le pronostic reste mauvais, surtout lorsque des métastases sont présentes au diagnostic. Des analyses transcriptomique de biopsies de patients atteint d’OS révèlent la présence d’une signature génique de la voie de signalisation Hippo dans l’OS. Son principal effecteur, YAP, est connu pour son rôle oncogène dans un certain nombre de cancer. Afin d’étudier son rôle dans le développement de l’OS, nous avons développé une approche moléculaire en surexprimant une protéine YAP capable ou non d’interagir avec son facteur de transcription TEAD. Des expériences in vitro et in vivo révèlent le rôle crucial de TEAD dans la prolifération cellulaire et la croissance tumorale médiée par YAP. De plus nous avons montré que la surexpression de YAP augmente la migration cellulaire in vitro et la dissémination métastatique in vivo, indépendamment de son interaction avec TEAD. Des analyses transcriptomique ont montré un enrichissement de gènes liés à la transition épithéliaux-mésenchymateuse, à la migration cellulaire et au TGF-β dans les cellules surexprimant YAP, quel que soit sa capacité à interagir avec TEAD. Des expériences de PLA et d’immunoprécipitation montrent une interaction YAP/Smad3, le principal effecteur de la voie du TGF-β. A l’aide d’un inhibiteur spécifique du TGF-β, le SD-208, nous montrons le rôle essentiel de la signalisation TGF-β/Smads dans la dissémination métastatique médiée par YAP. Ces résultats ont défini le rôle spécifique de TEAD et Smad3 dans la progression tumorale de l’OS, et identifié YAP comme un acteur central du développement de l’OS. Ainsi, YAP pourrait être une cible thérapeutique prometteuse dans l’OS
Osteosarcoma (OS) is the most common primary malignant bone tumour in children and adolescents for whom the prognosis remains poor, especially when metastases are present at diagnosis. Transcriptomic analyses of biopsies from OS patients reveal the presence of an Hippo signalling pathway gene signature in the OS. Its main effector, YAP, is known for its oncogenic role in a number of cancers. In order to study its role in the development of OS, we developed a molecular approach by overexpressing YAP that could or not interact with its transcription factor TEAD. In vitro and in vivo experiments revealed the crucial role of TEAD in cell proliferation and tumor growth mediated by YAP. In addition, we showed that overexpression of YAP increases cell migration in vitro and metastatic dissemination in vivo, regardless of its interaction with TEAD. Transcriptomic analysis showed a genes enrichment related to epithelial-mesenchymal transition, cell migration and TGF-β in cells overexpressing YAP, regardless of its ability to interact with TEAD. PLA and immunoprecipitation experiments showed YAP/Smad3 interaction, the main effector of the TGF-β pathway. Using a specific inhibitor of TGF-β, SD-208, we demonstrated the essential role of TGF- β/Smads signalling in YAP-mediated metastatic dissemination. These results defined the specific role of TEAD and Smad3 in the tumor progression of OS, and identified YAP as a central actor in the development of OS. Thus, YAP could be a promising therapeutic target in OS

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Ragot, Hélène. "Rôle de la voie de signalisation de Notch3 dans le myocarde adulte." Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066323/document.

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Notch3, récepteur exprimé dans les cellules musculaires lisses (CML), est impliqué dans la maturation des artères de résistance. La délétion de Notch3 aggrave les atteintes cardiaques induites par une hypertension artérielle (HTA), mais les mécanismes impliqués sont inconnus. Mes objectifs étaient de déterminer le rôle de la voie Notch3 dans le myocarde lors du remodelage cardiovasculaire induit par une surcharge de pression ou de débit. Nous avons étudié l'impact de l'absence de Notch3 lors l'HTA induite par l'Angiotensine II via deux modèles de souris (1- Notch3 KO et 2- invalidation induite de cette voie dans les CML, via RBPJk). Nous montrons que la voie Notch3-RBPJk est nécessaire à l'intégrité coronaire à l'âge adulte. Lors d'une HTA, son absence altère la réponse vasculaire et la microcirculation conduisant à un stress oxydant et une inflammation cardiaque. Puis, nous avons exploré les conséquences d'une surcharge de débit (exercice physique chez le mâle ou gestation chez la femelle Notch3-/-). Les mâles Notch3-/- ne présentent pas de signes de réponse angiogénique après 5 semaines de course, mais ce protocole a un effet bénéfique sur l'hypertrophie cardiaque. En parallèle, l'analyse des coeurs femelles Notch3-/- montre un défaut artériolaire similaire aux mâles Notch3-/-, mais sans hypertrophie ventriculaire. En post-partum, la densité capillaire augmente chez ces souris. Alors que le c¿ur post-partum se caractérise par un environnement anti-angiogénique, ces voies ne sont pas activées chez les femelles Notch3-/-. Ces résultats démontrent que la voie Notch3 est nécessaire à la réponse adaptative du réseau coronaire en réponse à une surcharge de pression ou de débit
Notch3, a receptor expressed in the smooth muscle cells (SMC), is involved in the maturation of resistance arteries. Notch3 knockout aggravates cardiac disorders induced by hypertension (HT), however mechanisms are unknown. My objectives were to determine the role of Notch3 signaling during cardiovascular remodeling induced by pressure or volume overload. First, we studied the Angiotensin II-induced HT consequences on two mouse models (1- congenital: Notch3 KO or 2- induced invalidation of Notch signaling in SMC via RBPJκ). We showed that Notch3-RBPJκ signaling is required for the maintenance of coronary structure in the adult. During HT, Notch3 signaling defect impaired the media hypertrophic response and the microvasculation leading oxidative stress and inflammation. Then we aimed to define the consequences of volume overload (moderate exercise training in males or pregnancy in female Notch3-/- mice). The Notch3-/- males doesn’t exhibit any signs of angiogenic responses in the microvascular compartment after 5 weeks of exercise training, however this protocol had positive effect on the basal hypertrophy. In parallel, female Notch3-/- mice exhibited the same arteriolar defect as males, without ventricular hypertrophy, suggesting a better adaptation. The post-partum hearts showed a microvascular adaptation in these mice. While cardiac status in post-partum is characterized by an anti-angiogenic environment leading to a physiological hypertrophy regression, these signaling pathways didn’t seem to be active in the Notch3-/- mice. These results showed that Notch3 signaling pathway was necessary to the adaptive coronary network response to pressure or volume overload

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Dadone-Montaudié, Bérengère. "La voie de signalisation FGF/FGFR : nouvelle cible thérapeutique dans les liposarcomes." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2020. http://www.theses.fr/2020COAZ6024.

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Les sarcomes, tumeurs conjonctives malignes, constituent un groupe hétérogène de tumeurs en fonction de la ligne de différenciation. Les liposarcomes (LPS), de différenciation adipocytaire, représentent une classe de sarcomes de tissus mous fréquente chez l’adulte. Parmi les LPS, on distingue deux types histologiques majoritaires : les tumeurs lipomateuses atypiques (TLA) ou liposarcomes bien différenciés (LBD) et les liposarcomes dédifférenciés (LDD). Alors que les TLA/LBD sont de malignité intermédiaire c’est-à-dire d’agressivité essentiellement locale, les LDD ont un potentiel métastatique et leur taux de mortalité à 5 ans est de l’ordre de 30%. Les chimiothérapies standard ou les nouveaux agents cytotoxiques demeurent peu efficaces. Les TLA/LBD et LDD sont caractérisés par une amplification de la région 12q incluant notamment les gènes MDM2, HMGA2, CDK4 et FRS2. Cette amplification récurrente des oncogènes MDM2 et CDK4 a conduit au développement de nouvelles thérapies anti-MDM2 ou anti-CDK4. Par ailleurs en oncologie, la dérégulation fréquente de la voie du Fibroblast Growth Factor (FGF)/ Fibroblast Growth Factor Receptor (FGFR) constitue une cible d’intérêt dans la prise en charge thérapeutique de nombreux cancers. Or, le gène FRS2 qui se trouve amplifié dans les TLA/LBD code pour une protéine adaptatrice cruciale de la voie de signalisation FGF/FGFR. Peu d’études ont exploré l’implication de cette voie de signalisation dans la tumorigenèse des TLA/ LBD et LDD. Nos objectifs étaient d’évaluer l’implication de la voie FGF/FGFR dans la liposarcomagenèse et d’étudier les effets d’un inhibiteur pan-FGFRs très spécifique, le JNJ42756493 (erdafitinib) seul ou en association avec d’autres molécules sur la tumorigénicité des cellules de LPS in vitro et in vivo.Nous avons démontré qu’un sous-groupe de LBD et LDD présentait une surexpression de FGFR1 et/ou FGFR4 et que cette surexpression était corrélée à un mauvais pronostic, sur une série de 694 cas de LBD/LDD. Nous avons mis en évidence les effets anti-tumorigeniques du JNJ42756493 ainsi que la synergie de la combinaison JNJ42756493 + RG7388 (un antagoniste de MDM2 de la classe des nutlines) sur la viabilité cellulaire, l’apoptose, le cycle cellulaire, la survie à long terme et l’activation des voies de signalisation en aval des FGFRs. Ces effets synergiques in vitro étaient confirmés in vivo, sur un modèle de xénogreffe de souris. De plus, l’efficacité du JNJ42756493 (erdafitinib) a été testée chez un patient atteint d’un LDD métastatique, réfractaire à plusieurs lignes de chimiothérapie et a permis une stabilisation de la maladie pendant 12 semaines. En conclusion, nous avons mis en évidence que la voie de signalisation FGF/FGFR était impliquée dans la liposarcomagenèse avec un potentiel thérapeutique pour un sous-groupe de LBD/LDD et que l’expression de FGFR1 et/ou FGFR4 pouvait constituer un puissant biomarqueur pour sélectionner les patients à inclure dans des essais cliniques
Liposarcoma is the most common soft tissue sarcoma in adults. Effective treatments for metastatic dedifferentiated liposarcoma (DDLPS) patients are lacking. We aimed to evaluate the therapeutic potential of the pan-FGFR inhibitor erdafitinib for these patients. We assessed FGFRs expression and their prognostic value in a series of 694 samples of well-differentiated/dedifferentiated liposarcoma (WDLPS/DDLPS). We investigated the effect of erdafitinib -alone or in combination with other antagonists- on tumorigenicity was evaluated in vitro and in vivo. We detected overexpression of FGFR1 and/or FGFR4 in a subset of WDLPS/DDLPS and demonstrated correlation of this expression with poor prognosis. Erdafitinib treatment induced a decrease in cell viability, cell cycle arrest in G1, apoptosis and strong inhibition of the ERK1/2 pathway. The association of erdafitinib with the PI3K/mTOR antagonist BEZ235 was not synergistic. Combining erdafitinib with the MDM2 antagonist RG7388 exerted a synergistic effect on viability, apoptosis and clonogenicity in three WDLPS/DDLPS cell lines. Efficacy of this combination was confirmed in vivo on DDLPS xenograft. Importantly, we report the efficacy of erdafitinib in one patient with metastatic DDLPS refractory to four prior lines of treatment showing disease stabilization for 12 weeks.In conclusions, we provided evidence that the FGFR pathway had therapeutic potential for a subset of DDLPS and that FGFR1 and FGFR4 expression might constitute a powerful biomarker to select patients for FGFR inhibitor clinical trials. In addition, we showed that combining erdafitinib with RG7388 is a promising strategy for patients with DDLPS that deserves further investigation in the clinical setting

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Jabrani, Amira. "Régulation de la voie Hedgehog : Étude structurale et fonctionnelle de protéines de signalisation." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00737495.

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La voie de signalisation HH joue un rôle crucial dans le contrôle de la prolifération et la différenciation cellulaires. Le dérèglement de cette voie est responsable de nombreux cancers. J'ai ainsi mis en place les outils moléculaires nécessaires pour identifier des régions importantes dans les interactions protéines-protéines au sein du complexe intracellulaire de la voie qui vont permettre de mieux comprendre les mécanismes de régulation du facteur de transcription CI en fonction de l'état d'activation de la voie. Mes travaux ouvrent la voie à de nombreuses études structurales et fonctionnelles de ces protéines jusqu'ici peu étudiées.

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Bernard, Florent. "La voie de signalisation activée par les acides aminés extracellulaires chez Saccharomyces cerevisiae." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2001. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/211613.

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Sèdes, Lauriane. "Voie de signalisation et gènes cibles de l'AMH dans le tractus génital femelle." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2014. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00989662.

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L'hormone anti-Müllerienne (AMH) est un membre de la famille TGF-β impliquée dans la différenciation du tractus reproductif mâle. Elle est aussi exprimée par les cellules de la granulosa de l'ovaire adulte. Cependant, son rôle physiologique chez la femelle n'a pas encore été entièrement établi. Mon projet de thèse a pour objectif d'élucider le(s) rôle(s) de l'AMH dans le tractus reproductif femelle. L'AMH transduit ses effets par l'intermédiaire de deux récepteurs transmembranaires sérine/thréonine kinase : un récepteur de type II qui lui est spécifique (AMHR-II) et un récepteur de type I (ActR-IA, BMPR-IA, BMPR-IB) qu'elle partage avec les BMPs. Après fixation de l'hormone sur le récepteur de type II, celui-ci recrute et phosphoryle le récepteur de type I. Ce dernier phosphoryle à son tour les Smads spécifiques (Smad1, 5 et 8) qui s'associent à la Smad commune, Smad4. L'ensemble transloque dans le noyau et en association avec des facteurs de transcription régule les gènes cibles de l'hormone. L'utilisation de souris KO conditionnelles pour les récepteurs Acvr1 et Bmpr1a et d'une technique de siRNA dirigés contre chacun des trois récepteurs de type I a permis de mettre en évidence que le récepteur BMPR-IA est un acteur essentiel de la voie de signalisation de l'AMH dans les cellules de la granulosa. Pour déterminer la ou les Smad(s) impliquées, une technique de gènes rapporteurs, Smad-Gal4/UAS-luciférase, a été utilisée. Nous avons pu montrer que les Smad1 et 5 sont importantes pour la transduction du signal de l'AMH dans les cellules de la granulosa. Récemment des corécepteurs aux BMPs, les Repulsive Guidance Molecule (RGMs), ont été mis en évidence. L'AMH partageant sa voie de signalisation avec les BMPs, nous avons cherché à déterminer si ces corécepteurs pouvaient également intervenir dans la voie de signalisation de l'AMH. Il existe 3 types de RGMs: RGMa, RGMb et RGMc. Nous avons montré en q-PCR que seul RGMb est exprimé dans les cellules de la granulosa alors que les 3 RGMs sont exprimés dans l'ovaire. L'utilisation de siRNA dirigés contre RGMb a permis de montrer que ce récepteur n'est pas nécessaire à la transduction du signal de l'AMH. Actuellement, seuls deux gènes cibles de l'AMH sont connus dans les cellules de la granulosa : l'aromatase et le récepteur LH. Nous avons réalisé des analyses de puces à ADN (ou micro-array) pour décrire de nouveaux gènes cibles de l'AMH. L'analyse des puces a permis de décrire de nouveaux gènes régulés par cette hormone tels qu'Ovgp1 ou Kcnj2. La dernière partie de mon projet visait à déterminer un rôle potentiel de l'AMH dans l'utérus. En effet, le récepteur de cette hormone est exprimé dans le myomètre utérin de souris permettant de supposer qu'elle peut agir sur cet organe. Nous avons pu mettre en évidence une expression faible du gène de l'Amh dans l'utérus. En revanche, l'expression et la localisation de la protéine restent encore à définir. Une expérience de PCR-array a permis de montrer que de nombreux gènes sont différentiellement exprimés entre l'utérus Wt et l'utérus KO Amh. Ceci indique que l'AMH jouerait un rôle sur la régulation de la fonction utérine qu'elle soit exprimée ou non dans cet organe.

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Jouannet, Stéphanie. "Compartimentation membranaire d’ADAM10 par les tétraspanines : conséquences pour la voie de signalisation NOTCH." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T066/document.

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Il est maintenant reconnu que la ségrégation latérale des composants de la membrane plasmique, ou compartimentation membranaire, joue un rôle important dans la régulation de la fonction de nombreuses protéines membranaires. Les tétraspanines constituent une famille de protéines intégrales à quatre régions transmembranaires possédant une capacité unique à s’associer entre elles et avec des nombreuses autres molécules de surface pour former un réseau d'interactions moléculaires, le « tetraspanins web ». Il a été proposé que via l’organisation de ce réseau, les tétraspanines joueraient un rôle dans la compartimentation membranaire des protéines auxquelles elles s’associent. Elles jouent également un rôle dans la compartimentation cellulaire en contrôlant le trafic de certaines des protéines associées. Le laboratoire a précédemment démontré que six tétraspanines conservées (Tspan5, 10, 14, 15, 17 et 33) de la sous-Famille des TspanC8 (caractérisées par la présence de huit cystéines dans le grand domaine extracellulaire) interagissent directement avec la métalloprotéase ADAM10 et régulent sa sortie du réticulum endoplasmique. Cette protéase ancrée à la membrane est responsable du clivage protéolytique de l'ectodomaine de diverses molécules de surface et est indispensable pour l'activation de la voie de signalisation NOTCH. Nous démontrons que Tspan5 et Tspan14 sont des régulateurs positifs de la voie de signalisation Notch et que Tspan15 est un régulateur négatif, agissant en amont de la γ-Sécrétase. Cette régulation négative est associée à un changement d’environnement membranaire ainsi qu’à une dynamique différente d’ADAM10 comme le montre un suivi de la protéase à l’échelle de la molécule unique. Par ailleurs, l’analyse par spectrométrie de masse quantitative a montré que la capacité d’ADAM10 à s’associer à des composants connus du réseau de tétraspanines était influencée par son interaction avec ces tétraspanines. Enfin, nous avons identifié une région de la cellule enrichie en CD9 qui contenait également ADAM10 lorsque Tspan5 est exprimée, mais ce n’est pas le cas avec Tspan15. Cette étude démontre que les différentes TspanC8 influencent différemment la capacité d’ADAM10 à cliver certains de ses substrats et illustre la capacité des tétraspanines à réguler l’activité de leurs protéines partenaires en contrôlant leur compartimentation membranaire
It is now recognized that the lateral segregation of components of the plasma membrane or membrane compartmentalization, play an important role in the regulation of many membrane proteins functions. Tetraspanins are a family of integral membrane proteins with four transmembrane domains with a unique ability to associate with one another and with many other surface molecules to organize a molecular interactions network, the “tetraspanins web”. It was suggested that via the organization of this network, the tetraspanin play a role in membrane compartmentalization of proteins to which they associate. Tetraspanins also play a role in cellular compartmentalization by controlling the trafficking of some associated proteins. In the lab, it has been shown that six conserved tetraspanin (Tspan5, 10, 14, 15, 17 et 33) of the TspanC8 subgroup (characterized by the presence of eight cysteines in the large extracellular domain) interact directly with the metalloproteinase ADAM10 et mediates its exit from the endoplasmic reticulum. This membrane-Anchored metalloprotease mediated ectodomain shedding of various integral molecules and is essential for Notch signaling pathway activation. We demonstrate that both Tspan5 and Tspan14 are positive regulators of Notch signaling pathway, whereas Tspan15 appears as negative regulator, acting in upstream γ-Secretase. This downregulation is associated with a modification of membrane environment as well as different dynamics of ADAM10, as shown by monitoring of protease using single molecule tracking. Furthermore, quantitative mass spectrometry analysis revealed that ADAM10 ability to associate with known components of “tetraspanin web” was influenced by its interaction with these tetraspanins. Finally, we have identified a CD9 enriched cell area which also contained ADAM10 when Tspan5 is expressed but not with Tspan15.This study demonstrates that different TspanC8 influence differently the ADAM10 ability to cleave some of its substrates and illustrate the ability of tetraspanins to regulate the activity of their proteins partners by controlling their membrane compartmentalization

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