Добірка наукової літератури з теми "Syndrome des plaquettes grises"

Le syndrome de Kasabach-Merritt (SKM) est une affection rare et grave qui associe une lésion vasculaire (hémangiome), un syndrome hématologique dominé par une thrombopénie, souvent profonde, exposant à un syndrome hémorragique et une coagulopathie de consommation plus ou moins marquée ; le traitement est souvent difficile. Nous rapportons le cas d’un nouveau-né admis à j6 de vie pour un SKM compliquant un hémangiome cutané inopérable. Le traitement reposant initialement seulement sur la corticothérapie n’a amené aucune amélioration, puis l’association de la vincristine a permis une augmentation rapide du taux sanguin des plaquettes ainsi qu’une nette régression du volume de l’hémangiome. Par son action antimitotique inhibitrice de l’angiogenèse, la vincristine semble être un traitement efficace et bien toléré du SKM ; elle permet de contrôler la coagulopathie et d’éradiquer la tumeur vasculaire.

INTRODUCTION : La leucémie lymphoïde chronique (LLC) est une néoplasie lymphoïde mature B et le syndrome lymphoprolifératif chronique le plus fréquent chez l’adulte. Les objectifs étaient d'analyser les aspects épidémiologiques, diagnostiques, pronostiques et évolutifs observés dans nos pratiques de prise en charge de la LLC. MATERIELS ET METHODES : Une étude rétrospective (1er Janvier 2018 au 3 Juillet 2020), descriptive menée au service d’Hématologie Clinique de l’Hôpital Dalal Jamm, a inclus les patients suivis pour une LLC confirmée par l’immunophénotypage (score de Matutes ≥4). Les aspects socio-épidémiologiques, cliniques, paracliniques, thérapeutiques et évolutifs ont été analysés. RESULTATS : Nous avons colligé 31 dossiers de 20 hommes et 11 femmes qui avaient un âge moyen de 61,96 ± 10,03 ans. Les circonstances révélatrices étaient le syndrome tumoral dans 51,6 % des cas et l’hyperlymphocytose dans 29,03% des cas. Une comorbidité était notée dans 29,03% des cas. L’hémogramme montrait un taux moyen de globules blancs à 184 ± 83,8 G/l, de lymphocytose à 183 ± 54,8 G/l, d’hémoglobine 9,3 ± 2,5 g/dl et de plaquettes à 182,8 ± 107,6 G/L. Les malades avaient une anémie hémolytique auto-immune dans 16% des cas associée à une thrombopénie auto-immune dans 6,5% et une hypo-gammaglobulinémie dans 33,3% des cas. Sur le plan pronostic, les malades étaient au stade avancé dans 80,64% des cas (Binet B et C) et le CD38 était exprimé dans 22,58% des cas. Des anomalies cytogénétiques additionnelles ont été notées dans 32,25% des cas (délétion 13q : quatre cas, trisomie 12 : deux cas, double délétion : deux cas). Sur le plan thérapeutique, 26 patients étaient éligibles au traitement dont 30,7% sous protocole chloraminophène, 30,7% sous CHOP, 11,5% sous RCHOP et 12,9% sous RFC. La rémission complète n’avait été obtenue que dans 9,6% des cas. CONCLUSION : La LLC demeure une hémopathie maligne du sujet âgé, révélée le plus souvent à un stade avancé de la maladie par le syndrome tumoral. La non disponibilité des thérapies innovantes constitue un frein dans sa prise en charge, ce qui grève la survie des patients.

Rifampin-induced thrombocytopenia has been recognized as an immunological reaction associated with intermittent high-dose therapy, and rarely seen with daily low-dose regimens. Our patient was a 33-year-old male with Marfan's syndrome who was given rifampin 600 mg/d po along with intravenous vancomycin for the treatment of Staphylococcus epidermidis endocarditis. His platelet count dropped from a baseline of 519000/mm3 to 4000/mm3 after four doses of rifampin. Petechiae were present on the lower extremities without the presence of other bleeding sites. Rifampin, low-dose aspirin, and dipyridamole were discontinued. His platelet count returned to normal nine days after discontinuation of therapy. With the increasing use of rifampin for the treatment of nontuberculosis infections, clinicians should recognize the possibility of this drug causing such serious immunological reactions as thrombocytopenia, hemolytic anemia, acute renal failure, and shock with daily or intermittent therapy. Extracto Rifampin es un agente antibacteriano el cual es utilizado ampliamente en el tratamiento de tuberculosis y de otras infecciones bacterianas. El fármaco puede causar reacciones inmunológicas severas que pueden resultar en trombocitopenia púrpura, anemia hemolítica, insuficiencia renal, y shock. Estas están usualmente asociadas a dosis altas administradas en una manera intermitente, y la descontinuación del fármaco usualmente resulta en resolución de la reacción. Los autores describen el caso de un hombre de 33 años de edad con el Síndrome de Marfan que desarrolla una trombocitopenia severa luego de la administración de 600 mg diarios de rifampin para el tratamiento de endocarditis causado por Staphylococcus epidermidis. El paciente recibió también conjuntamente con rifampin, vancomicina 1 gm iv q 12h, aspirina 600 mg po qd, dipyridamole 25 mg po tid, y propranolol 80 mg po q12h. Cuatro horas luego de la cuarta dosis de rifampin (Día numero 4) el paciente desarrolló petequias en las extremidades inferiores, y el contaje de plaquetas obtenido inmediatamente reveló una concentración de 4000/mm3, el cual refleja una disminución significativa en comparación con el contaje obtenido ocho días antes de 519000/mm3. Tanto rifampin como aspirina y dipyridamole fueron descontinuados. Una marcada trombocitopenia y petequias perduraron por una semana, otras fuentes de sangramiento fueron descartadas y no hubo ningún cambio significativo en el estado de coagulación o en el recuento sanguíneo. Las plaquetas regresaron a un nivel normal nueve días después de descontinuado el rifampin. Aunque las plaquetas aumentaron de 11000/mm3 a 36000/mm3 el día en que propranolol fue descontinuado, los autores expresan que esta respuesta es muy rápida para considerar a éste como el agente causante. Aunque no se puede establecer con certeza que la trombocitopenia fuera causada por rifampin o aspirina solamente, o por un efecto sinergístico de ambos, rifampin parece ser el agente causante más probable. Es importante reconocer el potencial que posee rifampin para causar reacciones adversas serias como trombocitopenia, anemia hemolítica, insuficiencia renal aguda, y shock. La terapia con rifampin debe de descontinuarse si alguna de estas ocurren y otras causas no se pueden identificar. Resume Les thrombocytopénies associées avec la rifampicine sont reconnues comme des réactions immunologiques rencontrées particulièrement avec des thérapies à hautes doses. Le cas décrit par les auteurs est celui d'un patient mâle agé de 33 ans présentant un syndrome de Marfan à qui on a administré 600 mg de rifampicine en dose unique quotidienne en combinaison avec vancomycine iv pour le traitement d'une endocardite à Staphylococcus epidermidis. Le décompte plaquettaire a chuté d'une valeur de 519000/ml à 4000/ml seulement quatre heures après la dose de rifampicine. Des pétéchies étaient apparentes au niveau des jambes en absence de saignements à d'autres sites. Rifampicine, acide acétylsalicylique à faible dose, et dipyridamole furent suspendus. Les plaquettes sont revenus a leur niveau normal neuf jours apres l'arrêt de la thérapie. Devant l'augmentation de l'utilisation de la rifampicine pour le traitement des infections non-tuberculeuses, les cliniciens devront reconnaître le potentiel de ce medicament à causer des réactions immunologiques sévères telles que thrombocytopénie, anémie hémolytique, insuffisance rénale et choc.

AbstractA 66-year-old male presented to internal medicine clinic with a 2-year history of an urticarial-like rash with fatigue, decreased appetite, chills, and 45 pounds of weight loss. He had a history of ulcerative colitis diagnosed in 1972, but has not required medication to control his disease for many years. His clinical exam revealed an erythematous blanchable urticarial rash on his trunk and extremities, but was otherwise unremarkable. Investigations revealed leukocytosis of 21.7 × 10 e9/L with neutrophilia 19.4 × 10 e9/L. Microcytic anemia was present with a hemoglobin of 119 g/L, MCV 75.1 fL, TSAT 6%, iron 2.6 umol/L, TIBC 44.9 umol/L, and ferritin 1082 ug/L. Thrombocytosis was present with platelets 523 × 10 e9/L. Serum protein electrophoresis revealed an M-spike of 4.5 g/L in the gamma globulin region, with immunofixation revealing it to be a monoclonal IgM-type kappa. Given the history of ulcerative colitis and microcytic anemia, the patient underwent a colonoscopy and EGD which were both normal. Skin biopsy performed by dermatology demonstrated urticarial neutrophilic dermatosis. Given the constellation of findings, in consultation with rheumatology and dermatology, the diagnosis of Schnitzler’s syndrome was made as per the Strasbourg criteria. The patient has had improvement of his clinical symptoms on colchicine and is pending provincial approval for use of the IL-1 receptor antagonist Anakinra. Due to the association of the syndrome with lymphoproliferative disorders, the patient underwent a bone marrow biopsy and lymph node biopsy, which demonstrated possible low-grade lymphoma, and the patient is actively followed by hematology for the same. RésuméUn homme de 66 ans se rend à la clinique de médecine interne présentant des antécédents d’éruption cutanée urticarienne depuis deux ans ainsi que de la fatigue, une perte d’appétit, des frissons et une perte de poids de 20 kg (45 lb). Il a reçu un diagnostic de colite ulcéreuse en 1972, mais n’a eu besoin d’aucun médica-ment pour maîtriser cette affection pendant de nombreuses années. L’examen physique révèle la présence d’une urticaire érythémateuse sur le tronc et les membres qui blanchit au toucher, mais qui est par ailleurs sans particularité. Les examens de laboratoire révèlent une leucocytose de 21,7 × 109/l et une neutrophilie de 19,4 × 109/l. Une anémie microcytaire est présente, appuyée par un taux d’hémoglobine de 119 g/l, un volume globulaire moyen (VGM) de 75,1 fL, un coefficient de saturation de la transferrine (CST) de 6 %, un taux de fer de 2,6 µmol/l, une capacité totale de fixation du fer de 44,9 µmol/l et un taux de ferritine de 1082 µg/l. Une concentration de plaquettes de 523 × 109/l indique la présence d’une thrombocytose. L’électrophorèse des protéines sériques révèle un pic monoclonal de 4,5 g/l dans la région des gammaglobulines, l’immunofixation révélant qu’il s’agit une IgM monoclonale de type kappa. Compte tenu des antécédents de colite ulcéreuse et de la présence d’anémie microcytaire, le patient a subi une coloscopie et une endoscopie digestive haute qui se sont avérées normales. Une biopsie cutanée effectuée par le service de dermatologie révèle une dermatose neutrophilique urticarienne. Compte tenu de la multitude de résultats, en consultation avec les services de rhumatologie et de dermatologie, le diagnostic de syndrome de Schnitzler a été posé selon les critères de Strasbourg. Le patient a montré une amélioration de ses symptômes cliniques par la prise de colchicine et est en attente d’une approbation provinciale pour l’utilisation d’Anakinra, un antagoniste du récepteur de l’IL-1. En raison de l’association de ce syndrome à des troubles lymphoprolifératifs, le patient a subi une biopsie de la moelle osseuse et des ganglions lymphatiques, révélant la présence possible d’un lymphome à faible risque, et le patient est suivi de près en hématologie en ce sens.

Des mutations récessives de NBEAL2 ont été décrites chez des patients atteints du syndrome des plaquettes grises (SPG). Ce syndrome se caractérise par une macro-thrombopénie, avec des plaquettes dénuées de granules-alpha, conduisant à des troubles de la coagulation, souvent associés à une splénomégalie. Ainsi, NBEAL2 a un rôle crucial dans le trafic des granules-alpha plaquettaires. En outre, notre laboratoire a montré que les patients avec un déficit en NBEAL2 peuvent présenter des caractéristiques cliniques semblables aux syndromes lymphoprolifératifs auto-immuns ; suggérant un rôle de NBEAL2 dans l'homéostasie immunitaire et la tolérance. Une cohorte internationale plus large de patients SPG a confirmé et décrit de nouvelles anomalies immunitaires chez ces patients (maladies auto-immunes, autoanticorps, lymphopénies). Si le rôle de NBEAL2 dans le trafic des granules est souvent étudié, le mécanisme exact conduisant au développement des manifestations auto-immunes chez les patients SPG reste inconnu. NBEAL2 appartient à une famille de protéines, impliquées dans le trafic vésiculaire, et possédant toutes un domaine BEACH conservé. Dans cette famille de protéines à domaine BEACH, une des protéines les plus proche de NBEAL2 est LRBA. LRBA est impliqué dans le recyclage de CTLA-4, un checkpoint immunitaire inhibiteur. CTLA-4 joue un rôle crucial dans la régulation des réponses immunitaires et la tolérance. Des mutations récessives de LRBA conduisent à des caractéristiques cliniques semblables aux déficiences partielles en CTLA-4 : auto-immunité, infiltrations lymphocytaires et lymphopénie B progressive. En condition physiologique, LRBA empêche la dégradation lysosomale de CTLA-4 et permet son recyclage à la membrane plasmatique. Par analogie avec LRBA, nous avons étudié l'importance de NBEAL2 dans le trafic intracellulaire des checkpoints immunitaires et nous avons apporté un nouveau regard sur son rôle dans les lymphocytes. NBEAL2 est ainsi une protéine d'échafaudage, se liant à LRBA, et impliquée dans le trafic de CTLA-4 ainsi que le trafic vésiculaire en général. Ces travaux apportent de nouvelles connaissances sur la régulation de CTLA-4 dans les lymphocytes T activés, une nouvelle liste de partenaires pour la protéine NBEAL2 ainsi qu'un nouveau modèle pour le trafic vésiculaire dans lequel est impliqué NBEAL2. Enfin, une meilleure compréhension des mécanismes conduisant à l'auto-immunité chez les patients atteints du syndrome des plaquettes grises pourrait conduire à un diagnostic plus précoce et un traitement adapté
Recessive NBEAL2 mutations have been reported in patients with Gray Platelet Syndrome (GPS). This syndrome is characterized by a macro-thrombocytopenia, with platelets lacking alpha-granules, leading to bleeding disorders, often associated with splenomegaly. Thus, NBEAL2 plays a crucial role in the trafficking of alpha-granules in platelets. Moreover, our lab has also described NBEAL2 deficiencies in patients presenting clinical features of the autoimmune lymphoproliferative syndrome, suggesting a role of NBEAL2 in immune homeostasis and tolerance. A broader international cohort of GPS patients has been described, revealing immune system abnormalities (autoimmune diseases, autoantibodies, lymphopenia). If the role of NBEAL2 in the traffic of granules is often investigated, the exact mechanism leading to the development of autoimmune manifestations in GPS patients remains unknown. NBEAL2 belongs to a protein family involved in vesicular trafficking, all of which possess a conserved BEACH domain. Within this BEACH-domain containing proteins family, one of the closest members to NBEAL2 is LRBA. LRBA is involved in the recycling of CTLA-4, an inhibitory immune checkpoint. CTLA-4 plays a crucial role in the regulation of immune responses and tolerance. Recessive mutations of LRBA lead to similar clinical features as partial CTLA-4 deficiency: autoimmunity, lymphocytic infiltrations, and progressive B lymphopenia. Physiologically, LRBA prevents the lysosomal degradation of CTLA-4 and allows its recycling to the membrane. By analogy with LRBA, we investigated the importance of NBEAL2 in immune checkpoints intracellular trafficking and we brought new insights on its role in lymphocytes. Thus, NBEAL2 is a scaffold protein, binding LRBA, and involved in CTLA-4 trafficking as well as in vesicular trafficking in general. This work brings new knowledge to the regulation of CTLA-4 in activated T lymphocytes, a list of new partners for NBEAL2 protein and a new model of vesicular trafficking in which NBEAL2 is involved. Finally, a better understanding of the mechanisms leading to autoimmunity in patients with gray platelets syndrome could lead to better diagnosis and treatment management

FMRP est une protéine cytoplasmique possédant des domaines consensus de liaison à l'ARN. Dans tous les tissus ou types cellulaires étudiés jusqu'à présent, elle est majoritairement retrouvée associée aux polysomes en se liant à l'ARN messager. FMRP jouerait donc un rôle dans le métabolisme de l'ARN. Toutefois, sa fonction précise reste encore inconnue. Notre hypothèse est que l'étude des plaquettes sanguines, où la synthèse protéique est très faible, pourrait permettre de découvrir une nouvelle fonction pour FMRP qui est habituellement camouflée par son importante association avec les polyribosomes dans les autres types cellulaires. Mon objectif de recherche est d'étudier la localisation subcellulaire de FMRP dans les plaquettes quiescentes et activées afin de mieux comprendre sa fonction. Différentes approches biochimiques et biophysiques ont été utilisées afin d'étudier la distribution subcellulaire de FMRP dans les plaquettes sanguines. Nous avons confirmé par des immunobuvardages faits sur des extraits totaux de plaquettes que la protéine détectée se présente sous forme d'isoformes comparables aux autres cellules. La technique de bombe à l'azote montre une localisation cytoplasmique de FMRP. Alors qu'en immunofluorescence, nous observons une colocalisation de FMRP avec des protéines impliquées dans le métabolisme de l'ARN. Toutefois, les résultats de centrifugations différentielles de plaquettes quiescentes suggèrent que FMRP possède une distribution subcellulaire différente de celle observée dans les autres types cellulaires. Elle a un coefficient de sédimentation entre 6-10S alors que celui observé dans les autres types cellulaires varient entre 150-500S. Bien que FMRP soit retrouvée dans la fraction soluble dans les plaquettes quiescentes, ce type cellulaire est néanmoins métaboliquement peu actif. L'activation des plaquettes par des agonistes enclenche une myriade de mécanismes. Suivant l'activation, FMRP est redistribuée dans la fraction du cytosquelette. La concentration ionique affecte cette distribution, suggérant une association protéine-protéine et/ou protéine-ARN.En conclusion, le profil d'expression de FMRP semble distinct dans les plaquettes et leur activation modifierait dynamiquement cette distribution. FMRP semble donc avoir une fonction dans les plaquettes puisqu'elle est affectée par le processus d'activation. L'étude de l'association au cytosquelette pourrait s'avérer une voie intéressante dans la détermination de la fonction de FMRP dans les plaquettes.

Les anévrysmes se définissent par une dilatation de l'artère qui conduit à une perte de parallélisme des berges vasculaires. L'implication de la composante sanguine a longtemps été négligée dans ces pathologies. Mon travail de thèse s'est concentré sur l'étude d'un lien entre les anévrysmes de l'aorte chez l'homme et le sang. Les anévrysmes de l'aorte abdominale s'accompagnent d'un thrombus non occlusif qui forme une interface active entre le sang et la paroi. Nous avons montré le rôle actif de ce thrombus dans les AAA. Les thrombi forment un réservoir de protéases qui agressent la paroi et empêchent la cicatrisation du thrombus. J'ai également montré que le renouvellement de ces thrombi est responsable de l'enrichissement en PMN via l'exposition constante de P-sélectines par les plaquettes. Ces résultats ont été validés in vivo sur un modèle expérimental d'anévrysmes. J'ai ensuite montré pour la première fois une activation plaquettaire et une génération de thrombine chez les porteurs d'un anévrysme de l'aorte ascendante, par dosage et détection de biomarqueurs. Le développement de ces anévrysmes ne s'accompagne pas de la formation d'ur thrombus. Ces résultats originaux suggèrent un rôle pour l'activation plaquettaire et de Ia prothrombine sur l'évolution de cette maladie. En conclusion, mes travaux mettent en évidence pour la 1ere fois, le rôle des plaquettes et de Ia coagulation dans les maladies anévrysmales. Mes résultats conduisent à une meilleun compréhension des mécanismes de cette pathologie dont l'évolution inéluctable est la rupture permettant d'envisager de nouvelles applications cliniques, en thérapeutique et en imageriefonctionnelle
Aneurysms are defined by a dilation of the artery which leads to a loss of parallelism of the vascular wall. The implication of the blood component was neglected a long time in these pathologies. My work during my PhD concentrated on the study of a bond between aortic aneurysms of the aorta and the blood components. The abdominal aortic aneurysms are accompanied by a nonocclusive thrombus which forms an active interface between blood and arterial wall. We showed the active role for this thrombus in the AAA. The thrombi form a tank of proteases which attack the wall and prevent the cicatrization of the thrombus. I also showed that the renewal of these thrombi is responsible for enrichment in PMI1 via the constant exposure of P-selectin by activated platelets. These results were validated in vivo on an experimental model of aneurisms. I then showed for the first time a state of platelet activation and a generation of thrombin in patient with thoracic ascending aortic aneurysm, by detection of biomarkers. The development of these aneurisms is not accompanied by the formation of a thrombus. These original results suggest ; role for platelet activation and of the prothrombin on the evolution of this disease. In conclusion, my work highlights for the 1st time, the role of the platelets and coagulation cascade in the aneurysmal diseases. My results lead to a better understanding of this pathology whose inescapable evolution is the rupture, allowing to consider new clinical applications, into therapeutic and functional imagery

La transfusion sanguine permet de sauver des vies et réduit la morbidité pour un grand nombre de maladies et d'affections cliniques, mais elle n'est pas exempte de complications. Un incident néfaste lié à une transfusion, également appelé Effet Indésirable Receveur (EIR), est un incident défavorable survenant chez un patient pendant ou après une transfusion sanguine. Parmi eux, le TRALI est considéré comme l’une des réactions inflammatoires les plus critiques. Cette pathologie se développe généralement dans les 6 heures après transfusion. On en reconnaît deux types, les TRALI immunologiques et les TRALI non-immunologiques. En France, les premiers sont presque entièrement prévenus par une politique de sécurité des produits sanguins, tandis que la fréquence des seconds augmente. La physiopathologie du TRALI reste mal connue. Tandis que certains y accordent une place importante aux plaquettes sanguines du patient transfusé, d’autres les considèrent comme pas réellement impliquées. Le but de ce travail de thèse a été, dans un premier temps, d’investiguer le potentiel inflammatoire des plaquettes sanguines conservées dans les concentrés plaquettaires et l’influence de cette inflammation sur l’endothélium vasculaire général. Ensuite, sera évalué le rôle des plaquettes sanguines de l’organisme, notamment par l’intermédiaire de leurs produits de sécrétion, dans la pathogénie de cette complication transfusionnelle. Pour cela, un ALI (mimant un TRALI) a été déclenché, dans un modèle in vivo, par une injection d’anticorps anti-CMH I chez des souris préalablement stimulées avec du LPS. L’ensemble de nos résultats confirme le potentiel inflammatoire des plaquettes sanguines, au sein des concentrés plaquettaires, pouvant probablement assumer l’entière responsabilité du déclenchement d’un TRALI non-immunologique, ainsi qu’un rôle secondaire des plaquettes sanguines de l’organisme, participant activement à l’amplification de la sévérité de la pathologie. Cette thèse s’inscrit dans la continuité logique des études menées, au sein du laboratoire GIMAP-EA3064, investiguant la place des plaquettes sanguines au sein de l’inflammation, ouvrant ainsi de nouvelles perspectives dans la sécurité transfusionnelle
Blood transfusion saves lives and reduces morbidity for many diseases and clinical conditions, but it is not without complications. A transfusion-related adverse event, also known as the Adverse Reaction (AR), is an incident occurring in a patient during or after a blood transfusion. Among them, TRALI is considered as one of the most critical inflammatory reactions. This pathology usually occurs within 6 hours after transfusion. Two types are recognized: immune TRALI and non-immune TRALI. In France, the first is almost completely prevented by a blood product safety policy, while the frequency of the second increases. The pathophysiology of TRALI remains poorly understood. While some scientists give an important function of patient blood platelets, others consider them dispensable. The aim of this thesis was, first, to investigate the inflammatory potential of blood platelets stored in platelet concentrates and its impact on the general vascular endothelium. Next, the role of patient blood platelets, including their secretory products, in the pathogenesis of this transfusion complication will be evaluated. For it, an ALI (mimicking a TRALI) was triggered, in an in vivo model, by an injection of anti-MHC I antibody in mice previously stimulated with LPS. Our results confirm the inflammatory potential of blood platelets in platelet concentrates, which can probably assume the entire responsibility for triggering a non-immune TRALI, and a secondary role for patient blood platelets in the amplification of the severity of this pathology. This thesis is the continuity of studies conducted in the laboratory GIMAP-EA3064, investigating the function of blood platelets in inflammation, thus opening up new perspectives in transfusion safety

Le syndrome du X fragile est la première cause monogénique de déficience intellectuelle héréditaire affectant un garçon sur 5161 et une fille sur 6000. La maladie résulte de mutations dynamiques dans le gène FMR1 (expansion de trinucléotides CGG et méthylation du gène) conduisant à l'absence ou à la diminution importante d'expression de la protéine FMRP (Fragile X Mental Retardation Protein).Le syndrome du X fragile est difficile à identifier étant donné la grande variabilité des manifestations cliniques entre les individus. La déficience intellectuelle est variable et elle est moins profonde chez les femmes et les individus mosaïques.Le phénotype atténué chez ces patients serait dû à la présence d'un allèle fonctionnel permettant la synthèse de la protéine FMRP dans une portion des cellules. Ainsi, il est suggéré qu'une relation existerait entre la quantité de synthèse de FMRP au cerveau et le phénotype cognitif des individus avec le syndrome du X fragile.Le but de notre projet de recherche est de développer un test diagnostique pour le syndrome du X fragile, basé sur la mesure quantitative de la protéine FMRP dans les plaquettes sanguines. D'abord, les niveaux de FMRP ont été mesurés dans une population d'individus sans déficience intellectuelle d'âge et de sexe différents. Nos résultats montrent que les niveaux mesurés suivent une distribution normale et ne seraient pas influencés par le sexe ou l'âge. Ensuite, ces niveaux de FMRP ont été comparés avec ceux mesurés chez les individus diagnostiqués avec le syndrome du X fragile. Comme attendu, les niveaux de FMRP des individus avec le X fragile sont inférieurs à ceux des contrôles et permettent d'établir une valeur seuil pour le diagnostic de la maladie. En combinant les résultats obtenus chez les femmes et hommes avec la maladie, une relation positive entre FMRP, le quotient intellectuel et le comportement adaptatif a été observée. Dans le groupe des femmes avec le syndrome du X fragile, la relation entre FMRP et le comportement adaptatif demeure statistiquement significative. L'approche que nous proposons permet non seulement de détecter les cas de syndrome du X fragile, mais également de donner des informations prédictives des capacités cognitives des individus atteints. Ce nouvel outil diagnostique pourrait avoir des impacts significatifs dans l'investigation et la prise en charge des individus avec le syndrome du X fragile.

Les plaquettes sanguines jouent un rôle majeur dans le maintien de l’intégrité vasculaire. Elles sont les premiers éléments à intervenir lors d’une brèche vasculaire afin d’arrêter le saignement par la formation d’un thrombus. La plaquette est également un acteur critique dans la survenue d’évènements thrombotiques associées à certaines pathologies comme par exemple le syndrome métabolique, ce qui en fait une cible pharmacologique majeure. Au cours de ma thèse, je me suis focalisée sur deux axes de recherche : (i) l’étude de l’activation plaquettaire dans le syndrome de Noonan (SN) et le syndrome de Noonan avec Lentigines Multiples (SNLM) et (ii) la caractérisation du rôle des plaquettes dans le développement des maladies hépatiques non alcooliques (NAFLD). Dans un premier temps, motivée par le fait que les patients atteints du SN présentent des troubles de l’hémostase encore inexpliqués, mes travaux de recherche ont eu pour but de caractériser l’activation plaquettaire dans le SN et le SNLM causés respectivement par une hyper- ou une hypo-activation de la protéine tyrosine phosphatase SHP2. Nous avons tout d’abord observé que les plaquettes de patients Noonan présentent in vitro une agrégation fortement diminuée en réponse à de faibles doses d’un ligand du récepteur GPVI, le collagène, associée ex vivo à une réduction significative de la formation de thrombi en condition de flux artériel sur matrice de collagène. Le modèle murin mimant phénotypiquement le SN présente également un défaut d’agrégation plaquettaire in vitro induite par de faibles doses d’agonistes de GPVI associé à une diminution de la signalisation en aval de GPVI. La formation de thrombi plaquettaire ex vivo en condition de flux artériel mais aussi in vivo à la suite d’une lésion de la carotide est aussi significativement altérée. L’hémostase primaire des souris Noonan est aussi très fortement affectée, comme montré par une augmentation significative du temps de saignement à la queue. A l’opposé, le modèle murin de SNLM est responsable d’une hyper-activation plaquettaire induite par la stimulation de GPVI et présente un phénotype prothrombotique ex vivo en condition de flux artériel. De façon intéressante, cette hyperactivation plaquettaire est également observée chez les patients atteints du SNLM et est exacerbée dans des conditions de flux à haute vitesse. Ainsi, cette étude permet de mettre en lumière deux nouvelles thrombopathies associées à un dysfonctionnement de la signalisation plaquettaire, ce qui permet une meilleure compréhension et prise en charge des potentiels risques hémorragiques/thrombotiques des patients SN et SNLM. D’un point de vue moléculaire, cette étude a permis de préciser le rôle de SHP2 dans l’activation plaquettaire. Dans un second temps, je me suis intéressée au rôle des plaquettes dans le développement de la NAFLD. Pour ce faire, plusieurs modèles murins ont été mis sous régimes hyperlipidiques mimant différents stades de la pathologie. De façon intéressante, nous avons montré un rôle protecteur des plaquettes sur le statut glucido-lipidique du foie en inhibant le stockage de lipides, mais également sur l’état inflammatoire et fibrotique hépatique en protégeant de l’infiltration des cellules inflammatoires et de l’installation de la fibrose. Ce rôle est associé à un recrutement de plaquettes dans les sinusoïdes hépatiques durant l’installation de la pathologie. De plus, nous démontrons que la délétion de Vps34 plaquettaire permet de ralentir le développement de la NAFLD. Ainsi, ces résultats ont permis de mettre un jour pour la première fois un nouveau rôle protecteur des plaquettes sur le développement de la NAFLD et pourrait permettre d’identifier de potentielles pistes thérapeutiques permettant de réduire ou prévenir la NAFLD. En conclusion, mes travaux de thèse apportent de nouvelles données quant au rôle des plaquettes dans différents contextes pathologiques : le SN, le SNLM et la NAFLD
Blood platelets play a major role in the maintenance of vascular integrity. They are the first blood cells recruited after vessel injury to stop bleeding by thrombus formation. Platelet hyper-activation is also a critical element in thrombotic events associated to several pathologies such as metabolic syndrome, which makes them major pharmacologic targets. My thesis work was focused on two main axis: (i) analysis of platelet activation in Noonan syndrome (NS) and Noonan syndrome with multiple lentigines (NSML) and (ii) characterization of the role of platelets in non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Firstly, motivated by the occurrence of bleeding anomalies frequently reported in NS, we focused on characterizing platelet activation in NS and NSML caused respectively by a gain or a loss of function of the protein tyrosine phosphatase SHP2. We observed that platelets from NS patients display a defective in vitro aggregation to low concentrations of collagen, a GPVI agonist, associated to a decrease in thrombus growth ex vivo on a collagen surface under arterial shear stress. The mouse model phenocopying NS also exhibit a significant reduction in in vitro platelet aggregation induced by low concentrations of GPVI agonists, which is associated to a deficiency in GPVI signalling. The thrombus formation ex vivo under arterial shear stress as well as in vivo following a local carotid injury was also significantly affected. Primary haemostasis is also defective in NS mice as shown by a significant increase in mouse tail bleeding time. In contrast, NSML mouse platelets exhibited an increased activation after GPVI stimulation and an enhanced platelet thrombotic phenotype on collagen matrix under arterial shear stress. Interestingly, this platelet hyper-activation is also observed in blood samples from NSML patients ex vivo in arterial shear rate and exacerbated in high shear rate condition. This study allows the discovery of two new thrombopathies linked to platelet signalling defects and provides important information for the medical care of patient with NS or NSML in risk of bleeding or thrombosis situations. Besides, this study brings new insights into the understanding of SHP2 function in platelet activation. Secondly, I studied the role of platelets in NAFLD development. Using mouse models fed with different hyperlipidic diets mimicking different step of the NAFLD, we showed a protective role for platelets in hepatic glucidic and lipidic metabolism by inhibition of lipid storage. Furthermore, platelets protect against hepatic inflammation and fibrosis by decreasing inflammatory cells recruitment and fibrosis development. This protective role is associated to the presence of platelet aggregates in liver sinusoids. Interestingly, we demonstrate that platelet Vps34 deletion allows to slow down NAFLD development. Thereby, these innovative results highlight a new protective role of platelet in NAFLD development and could allow the identification of potential pharmacologic targets for preventing or limiting the disease. In conclusion, my thesis work brings new data on the role of platelets in different physiopathologic conditions: NS, NSML and NAFLD

Mise en contexte : Le syndrome du X fragile (SXF) résulte de la perte d’expression de la protéine FMRP. L’absence de FMRP est responsable d’une série de perturbations signalétiques, notamment une hyperactivation de la voie MAPK/ERK. La lovastatine, un médicament hypocholestérolémiant, possède comme effet pléiotrope la capacité d’inhiber la voie MAPK/ERK et a permis de corriger certains phénotypes pathologiques clés du modèle murin du SXF, mettant en lumière son potentiel thérapeutique chez l’humain. Ainsi, nous avons réalisé en 2013 une étude ouverte visant à étudier l’effet d’un traitement de 12 semaines à la lovastatine sur les troubles cognitifs et comportementaux des enfants et des adultes avec SXF. La plupart des individus ont présenté des améliorations cognitives et comportementales, telles qu’évaluées par les échelles cliniques Vineland-II Adaptive Behavior Scale (VABS-II) et Aberrant Behavior Checklist-Community (ABC-C), respectivement. Ces échelles remplies par les tuteurs et les soignants sont toutefois évaluateur-dépendantes et sujettes à l’effet expérimentateur. Ces variables parasites, qui s’ajoutent à l’effet placebo inhérent à la conception ouverte de l’essai thérapeutique, peuvent ainsi avoir faussé l’évaluation de la réponse au traitement. Nous avons donc étudié si les cascades signalétiques des plaquettes sanguines peuvent être utilisées comme biomarqueurs objectifs pour surveiller la réponse au traitement. Méthode : Des échantillons sanguins des 15 individus SXF ayant participé à l’essai clinique ont été recueillis au début et à la fin de l’étude afin d’évaluer par Western Blot l’effet in vivo de la lovastatine sur l’activité de ERK dans les plaquettes sanguines, et ainsi de pouvoir corréler les réponses biologiques et cliniques. L’état de phosphorylation de ERK a également été étudié dans les plaquettes d’une cohorte contrôle. Résultats : Nos résultats démontrent une augmentation significative de près du double de la phosphorylation basale de ERK dans les plaquettes sanguines des individus avec SXF en comparaison avec les sujets contrôles (p=0,002). De plus, nous avons observé une normalisation de la phosphorylation de ERK chez 13 des 15 individus SXF après le traitement de 12 semaines à la lovastatine (p=0,007). Notre étude fournit ainsi les premières évidences d’un effet bénéfique de la lovastatine dans le SXF chez l’humain. Nous avons également démontré que les changements de la phosphorylation de ERK étaient partiellement corrélés à la réponse clinique, et ce, pour le score total et les scores des sous-domaines ‘socialisation’ et ‘compétences de la vie quotidienne’ de l’échelle VABS-II (p=0,003). Conclusion : De façon générale, ces résultats suggèrent que les cascades signalétiques plaquettaires peuvent être utilisées comme biomarqueurs pour évaluer de façon objective la réponse au traitement lors de futurs essais thérapeutiques.
Abstract: Background: Fragile X syndrome (FXS) results from loss of FMRP expression, which causes several signaling dysregulations, including the hyperactivation of the Mitogen-activated protein kinase (MAPK)/Extracellular signal-regulated kinase (ERK) pathway. Lovastatin, a drug used for the treatment of hypercholesterolemia, pleiotropically inhibits the MAPK/ERK cascade and has successfully corrected key pathological phenotypes in the FXS mouse model, underscoring its ‘disease-modifying’ potential. Thereby, we conducted in 2013 the first open-label clinical trial investigating the effect of a 12-week lovastatin regimen on cognitive and behavioral disabilities in FXS. Most individuals presented subtle positive cognitive changes as assessed by the Vineland-II Adaptive Behavior Scale (VABS-II) as well as behavior improvements using the widely used scale Aberrant Behavior Checklist-Community (ABC-C). The latter two scales are filled up by caregivers making them rater-dependent and prone to observer-expectancy effect. This might result in a placebo effect which is inherent to the open-label design of the trial. We therefore investigated whether blood platelets’ signaling cascades may be used as objective biomarkers to monitor treatment response. Methods: Blood samples were gathered from 15 FXS individuals during the trial in order to evaluate by quantitative Western Blotting the in vivo effect of lovastatin on ERK activity in blood platelets, and to correlate clinical and biological responses. The basal phosphorylation status of ERK was also assessed in platelets from a control cohort. Results: Our results showed a more than two-fold significant increase in FXS blood platelet basal ERK phosphorylation as compared to controls (p=0.002). Of note, we found that this hyperphosphorylation was normalized following the 12-week lovastatin trial (p=0.007) in 13 of the 15 FXS individuals enrolled in the trial. This represents the first evidence for a beneficial effect of lovastatin in human FXS. The extent of changes in ERK phosphorylation was also found to partly correlate with the clinical response scales’ scores, especially for the VABS-II. Indeed, the composite total score and the ‘daily living skills’ as well as the ‘socialization’ subscales scores of the VABS-II were correlated with the biological response (p=0.03). In comparison, no correlation was observed with the ABC-C scale. Conclusion: Broadly, these results suggest that platelets’ signaling cascades could be used as biomarkers to objectively assess treatment response during future clinical trials.