Добірка наукової літератури з теми "Régulateurs d'Actine"

Le programme d'aide aux Inuit pour leurs activités de chasse, de pêche et de piégeage présente une caractéristique unique par rapport aux innombrables plans gouvernementaux qui s'adressent aux autochtones de l'Arctique québécois: il est le seul à laisser aux communautés locales une aussi vaste latitude dans l'utilisation des subventions provinciales. Un examen conduit à deux conclusions. Premièrement, parce que la collectivité dispose depuis vingt ans d'une marge d'autonomie exceptionnelle dans l'implantation du programme, elle a pu le subordonner à des normes d'action sociale qui respectent au moins partiellement son identité ; mais, deuxièmement, parce que le programme est une création de l'État, les décisions mêmes extrêmement décentralisées trahissent une intégration fondamentale de phénomènes régulateurs de l'action qui dominent la société québécoise en général et qui concourent en même temps à marquer l'identité des Inuit du Grand Nord.

La motilité cellulaire est impliquée dans plusieurs fonctions biologiques critiques, et sa dérégulation peut conduire à des maladies graves comme le cancer. Il est donc essentiel d'étudier les mécanismes moléculaires qui régissent la formation des structures impliquées dans la motilité cellulaire. La première étape de la migration cellulaire de type mésenchymateuse est la formation du lamellipode, protrusion membranaire supportée par un réseau de filaments d’actine et propulsée vers l’avant par la polymérisation de l'actine. La coordination spatio-temporelle des régulateurs de l’actine dans le lamellipode détermine la polarité, l'architecture et les mouvements du réseau de filaments d’actine. Ces régulateurs sont notamment le complexe WAVE (WRC) et le complexe Arp2/3. L'activation du WRC est l'événement moléculaire qui déclenche l'activation du complexe Arp2/3 et donc l'initiation de la formation du réseau de filaments d’actine dans le lamellipode. L'activation du WRC repose sur la libération du domaine WCA activateur du complexe Arp2/3, situé à l'extrémité C-terminale de la sous-unité WAVE. Des études in vitro montrent que deux domaines WCA sont nécessaires pour activer efficacement le complexe Arp2/3.Mais on ne sait pas comment l'organisation spatiale du WRC à l’échelle moléculaire est traduite en activation du complexe Arp2/3 déclenchant la formation du lamellipode. En d'autres termes, la stœchiométrie et la distribution spatiale requise pour traduire l'activation conformationnelle du WRC en une activation efficace du complexe Arp2/3 sont des informations essentielles manquantes.L'utilisation récente de la microscopie de super-résolution (SRM) et du suivi de particules uniques (SRM) a permis de repenser radicalement les assemblages macromoléculaires, en particulier les structures impliquées dans la migration cellulaire telle que le lamellipode. En suivant les protéines individuelles et en fournissant des images avec une résolution spatiale inférieure à la limite de diffraction de la lumière, ces techniques donnent accès à l'organisation et à la dynamique à l'échelle nanométrique des complexes protéiques dans les cellules.Pour révéler l’organisation moléculaire du WRC, nous avons utilisé le DNA-PAINT, une technique de SRM avec une résolution spatiale inférieure à 10 nm. Le DNA-PAINT est basé sur l'hybridation de brins d'ADN complémentaires, l'un situé sur la protéine cible (brin d'amarrage) et l'autre sur le fluorophore (brin d’imagerie). Le DNA-PAINT permet le comptage moléculaire des protéines (qPAINT) et l'imagerie de super-résolution multicouleurs (Ex-PAINT). Cela nous a permis d'évaluer la stœchiométrie, les colocalisations et la composition des complexes protéiques dans le lamellipode.Des expériences de qPAINT ont montré que la stœchiométrie du WRC à l'extrémité du lamellipode est de une ; tandis que l'imagerie en direct par nanoscopie RESOLFT a révélé que ces WRCs uniques forment des clusters isolés à l'extrémité du lamellipode. La SRM multicouleur du corps du WRC et de son domaine WCA a montré que l’activation conformationnelle du WRC induit une libération du domaine WCA dans un rayon de 40 nm. En utilisant des protrusions stéréotypées en forme de vague, nous avons corrélé l'organisation moléculaire du WRC avec leur vitesse de déplacement. Nous avons montré que la distance entre les WRCs individuels est inférieure au rayon de leur dépliage conformationnel dans des régions de protrusion rapide du lamellipode, augmentant la possibilité de rencontre des domaines WCA et donc l’activation du complexe Arp2/3. Ainsi, le WRC, fonctionnant comme un complexe isolé, doit être espacé d'une distance inférieure à son dépliage conformationnel pour activer efficacement le complexe Arp2/3 dans le lamellipode. Dans l'ensemble, nos résultats montrent qu'en plus de l'activation biochimique des circuits de signalisation, l'organisation spatiale des protéines est cruciale pour le contrôle de leur fonction dans les cellules
Cell motility is involved in critical biological functions, and dysregulation of adhesion, migration and of the actin cytoskeletal can lead to severe disease like cancer. Therefore, it is essential to study the molecular mechanism driving the formation of sub-cellular structures involved in cell motility. The first step in mesenchymal cell migration is the forward protrusion of the lamellipodium which is a thin sheet of membrane-enclosed actin filaments (F-Actin) networks propelled by actin polymerization. The spatiotemporal coordination of F-actin regulators in the lamellipodium determines the polarity, architecture and movements of branched F-actin networks. This includes two interacting nanomachines, the WAVE regulatory complex (WRC) and the Arp2/3 complex. WRC activation is the central molecular event triggering Arp2/3 complex activation and thus, the initiation and formation of a branched F-actin network in the lamellipodium. WRC activation relies on the exposure of the cryptic Arp2/3-activating WCA domain located at the C-terminal extremity of the WAVE subunit tail. In vitro studies showed that two WCA domains are needed to efficiently activate the Arp2/3 complex.But how the local spatial organization of WRC at the molecular level translate into activation of the Arp2/3 complex triggering the morphogenesis of the lamellipodium is unknown. In other words, the stoichiometry and the spatial distribution required to translate WRC conformational activation to an efficient activation of Arp2/3 complex are essential missing information.The recent application of super-resolution microscopy (SRM) and single particle tracking (SRM) lead to a drastic rethinking of macromolecular assemblies, in particular structures involved in cell migration, including the lamellipodium. By tracking individual proteins and delivering images with spatial resolutions below the diffraction limit of light, these techniques give access to the nanoscale organization and dynamics of protein complexes in live cells.To reveal the molecular organization of WRC, we use DNA-PAINT, a SRM technique which allows spatial resolution below 10 nm. DNA-PAINT is based on hybridization of complementary DNA strands, one located on the target protein (docking strand) and the other on the dye (imager strand). DNA-PAINT enable absolute molecular counting in protein complexes (Quantitative-PAINT) and multi-color super-resolution imaging (Exchange-PAINT). This allowed us to assess stoichiometries, colocalizations and composition of nanomachines in the lamellipodium.Using Quantitative-PAINT, we showed that the stoichiometry of WRC at the lamellipodium tip of migrating mouse melanoma cell (B16) is one; while live super-resolution imaging based on RESOLFT nanoscopy revealed that these single WRC form discrete foci at the lamellipodium tip. Multicolor Exchange-PAINT super-resolution microscopy of the WRC core and its WCA domain, showed that its conformational activation induces the release of the WCA domain in a radius of 40 nm away from its core. Using stereotyped waveform protrusions, we correlated WRC molecular organization with the rate of membrane protrusions. We showed that the spatial distribution of individual WRC is below the radius of its conformational unfolding in regions of faster lamellipodial protrusion, increasing the possibility of WCA domain dimerization and thus activation of the Arp2/3 complex. This way, the WRC, functioning as an isolated complex, must be spaced at a distance less than its conformational unfolding to activate efficiently the Arp2/3 complex in the lamellipodium. Altogether, our results show that besides biochemical activation of signaling circuitry, the spatial organization of proteins is crucial for controlling their function in cells

Le concept d’opéron, défini en 1960 par Jacob et Monod comme étant un groupe de gènes transcrits ensemble et dont les produits concourent à la réalisation d'une même fonction physiologique, est resté jusqu’à tout récemment pratiquement inchangé. Selon ce modèle, toute régulation génétique a lieu au niveau transcriptionnel et est médiée par des facteurs protéiques. Cependant, au cours de la dernière décennie, une révolution a eu lieu alors qu’il fut démontré que des petites molécules d'ARN, appelés sRNAs (small RNAs), sont capables de réprimer de manière post-transcriptionnelle l’expression d’ARN messagers (ARNm) chez les procaryotes. Leur mécanisme d'action consiste généralement à inhiber la traduction d'un ARNm en compétitionnant avec la liaison des ribosomes sur le site de liaison des ribosomes (SLR) situé dans la région 5' non traduite d’un ARNm. Cette inhibition de la traduction s’accompagne généralement d'une dégradation rapide de l’ARNm cible. Les recherches que j'ai effectuées au cours de mes études de 2e et 3e cycle ont permis de découvrir des mécanismes alternatifs par lesquels les sRNAs peuvent réprimer l’expression d’ARNm cibles. J'ai tout d’abord démontré que l’expression du petit ARN RyhB lors d'une carence en fer entraîne la dégradation seulement partielle de l’ARNm polycistronique iscRSUA. De plus, j'ai participé à l’élucidation du mécanisme de dégradation d'un ARNm par l’action d'un sRNA. En effet, nous démontrons que le site de clivage de la RNase E se situe plusieurs centaines de nucléotides en aval dans le cadre de lecture de la cible et que l'arrêt de la traduction n'est pas suffisant à l’obtention d'une dégradation rapide d'un ARNm cible. Finalement, j'ai caractérisé un nouveau mécanisme par lequel un sRNA peut réprimer la traduction d’un ARNm en s’appariant loin en amont du SLR par le recrutement de la protéine chaperon Hfq. Nous démontrons que c'est la protéine qui joue le rôle principal dans la compétition avec les ribosomes.

Le tamoxifène (TAM) est un antiœstrogène triphényléthylénique de synthèse largement utilisé en clinique dans le traitement des cancers hormono-dépendants, cependant son mécanisme d'action reste encore largement méconnu. Chez la Caille le TAM présente une activité œstrogène antagoniste pure sur la prolifération des cellules de la muqueuse de l'oviducte et une activité œstrogène agoniste sur la synthèse de macromolécules spécifiques tel que le récepteur de la progestérone. Contrairement à l’œstradiol, le TAM induit une augmentation durable du taux intracellulaire d'AMPc en inhibant l'AMPc-phosphodiestérase. Nous avons séparé et caractérisé deux formes isoenzymatiques de l'AMPc-phosphodiestérase dans l'oviducte, une forme calmoduline dépendante et une forme calmoduline indépendante et montré que le TAM est un inhibiteur compétitif de la calmoduline dans l'activation de l'isoforme calmoduline dépendante. Nous avons aussi mis en évidence, par différentes techniques, une liaison spécifique du TAM à la calmoduline qui est calcium dépendante. L'utilisation de différents antiœstrogènes de synthèse nous a permis de montrer que leur activité anti proliférative n'est pas corrélée avec leur affinité pour le récepteur des œstrogènes mais qu'elle est par contre bien corrélée avec leur capacité à inhiber l'AMPc-phosphodiestérase calmoduline dépendante. Enfin, la comparaison de l'effet du TAM sur la métabolisme de l'AMPc dans deux modèles où son activité sur la prolifération des cellules de la muqueuse est totalement différente : l'oviducte de caille (œstrogène antagoniste) et l'utérus de souris (œstrogène agoniste) confirme que l'interaction du TAM avec l'isoforme calmoduline dépendante de l'AMPc-phosphodiestérase et l'augmentation durable du taux intracellulaire d'AMPc qui en résulte peut être l'un des mécanismes responsables de l'activité antitumorale de cette molécule.

Homéostasie et mécanisme d’action in vivo des lymphocytes T régulateurs CD4+CD25+Foxp3+ chez la souris Parmi les différentes sous populations de cellules T, les cellules T régulatrices CD4+CD25+ (Tregs), gouvernées par le facteur de transcription Foxp3, représentent un lignage unique de cellules dédiées au maintien de la tolérance immune au soi. Des travaux préalables au sein du laboratoire avaient pu montrer leur potentialité dans le cadre de protocoles d’induction de tolérance à long terme en thérapie génique ou cellulaire vis-à-vis d’un antigène donné chez la souris. Les travaux présentés ici ont porté sur divers aspects fondamentaux du mécanisme d’action et de l’homéostasie de ces cellules in vivo dans ces modèles murins non lymphopéniques. Dans un premier temps, nous avons pu montrer que l’action de Tregs spécifiques de l’antigène de rejet, dans les deux modèles étudiés, passait par une altération profonde de l’activation de la réponse T CD8+, conduisant à une inhibition presque totale de la prolifération et de la différentiation de ces cellules in vivo. Nous avons ensuite étudié les modes de recrutement possible in vivo de Tregs spécifiques d’un antigène et nous avons pu montrer que la simple injection par voie intraveineuse d’un peptide restreint aux molécules du CMH de classe II suffisait à induire l’activation et l’accumulation sélective de T CD4+ CD25+ spécifiques de cet antigène en périphérie. Enfin, nous avons tiré profit d’un modèle murin de souris Foxp3eGFP, développé en collaboration avec le laboratoire du Dr Bernard MALISSEN (CIML Marseille) et dans lequel la protéine GFP a été insérée en aval du locus foxp3 endogène, pour mettre en évidence pour la première fois un phénomène de conversion périphérique de T naïf en Treg dans un répertoire polyclonal.

La principale limite à la transplantation d'organe réside dans l'initiation d'une forte réponse immune dirigée contre le greffon. Si l'utilisation de drogues immunosuppressives a largement permis de contrôler l'apparition du rejet aigu, de nombreux patients souffrent d'un rejet chronique qui conduit inévitablement à la destruction de l'organe transplanté. L'induction d'une tolérance immunologique vis-à-vis des antigènes du greffon pourrait permettre de s'affranchir du rejet ainsi que de la nécessité d'un traitement à vie avec des drogues immunosuppressives. Une tolérance similaire existe déjà à l'état physiologique vis-à-vis des antigènes du soi. Elle est médiée en périphérie par une sous population lymphocytaire douée de propriétés immunosuppressives : les lymphocytes T régulateurs CD4+ CD25+. Lors de ce travail de thèse, j'ai pu montrer que, chez des souris irradiées à des doses cliniquement applicables, l'injection de cellules régulatrices CD4+CD25+Foxp3+ stimulées in vitro avec des alloantigens, induit une tolérance durable et spécifique vis-à-vis d'une greffe de moelle osseuse et, par la suite, de cœur ou de peau. Les Tregs spécifiques pour les antigènes présentés par la voie directe d'alloreconnaissance inhibent uniquement le développement du rejet aigu, en dépit de l'état de chimérisme induit. En revanche, des Tregs spécifiques pour les antigènes présentés par les voies directe et indirecte de reconnaissance préviennent l'apparition des phases de rejet aigu et chronique. Nos résultats démontrent ainsi le fort potentiel des Tregs, activés de manière appropriée, pour de futures approches de thérapie cellulaire, dans le but d'induire une tolérance durable aux greffes allogéniques
A major challenge in transplantation medicine is controlling the very strong immune responses to foreign antigens that are responsible for graft rejection. Although immunosuppressive drugs efficiently inhibit acute graft rejection, a substantial proportion of patients suffer chronic rejection that ultimately leads to functional loss of the graft. Induction of immunological tolerance to transplants would avoid rejection and the need for lifelong treatment with immunosuppressive drugs. Tolerance to self-antigens is ensured naturally by several mechanisms ; one major mechanism depends on the activity of regulatory T lymphocytes. We showed that in mice treated with clinically acceptable levels of irradiation, regulatory CD4+CD25+Foxp3+ T cells stimulated in vitro with alloantigens induced long-term tolerance to bone marrow and subsequent skin and cardiac allografts. Regulatory T cells specific for directly presented donor antigens prevented only acute rejection, despite hematopoietic chimerism. By contrast, regulatory T cells specific for both directly and indirectly presented alloantigens prevented both acute and chronic rejection. Our findings demonstrate the potential of appropriately stimulated regulatory T cells for future cell-based therapeutic approaches to induce lifelong mmunological tolerance to allogeneic transplants

Les protéines de liaison aux ARNms ou mRBPs participent à la régulation, à la coordination et au couplage des étapes post-transcriptionnelles de l'expression des gènes. Des modifications de la régulation de leur expression et de leur activité dans les cancers pourraient contribuer au développement tumoral. Nos travaux se sont accès sur l'étude d'une mRBP régulatrice de la traduction, hnRNP A1, dans les cellules tumorales mammaires. Nous avons montré que l'activité traductionnelle de hnRNPA1 pouvait être régulée par sa relocalisation cytoplasmique dans certaines conditions de stress. Nous avons observé qu'une localisation cytoplasmique de hnRNPA1 était associée à des rechutes métastatiques et à un mauvais pronostic dans des tumeurs du sein, et précisé l'effet de cette relocalisation cytoplasmique sur la tumorigenèse. Cette étude suggère que la régulation de la traduction par relocalisation subcellulaire d'une mRBP puisse être déterminante dans les cancers
MRNA binding proteins or mRBPs are involved in the regulation, the coordination and the coupling of post-transcriptional gene expression. Modifications in the regulation of their expression and/or activity in cancer contribute to the tumoral development. Our work focused on the study of the translational regulator, hnRNP A1,. We have shown that the translational activity of hnRNP A1 is regulated by its cytoplasmic relocalization upon different stress conditions. We have also observed that a cytoplasmic localization of hnRNP A1 is associated with metastatic relapse and bad prognosis in breast tumors, and we have initiated a study of the effects of this cytoplasmic relocalization on tumorigenesis. This work suggests that regulation of translation by subcellular relocalization of an mRBP may be determinant in cancer

Campylobacter jejuni est une epsilon-protéobactérie microaérophile responsable d'un grand nombre de gastro-entérites d'origine alimentaire dans les pays occidentaux. Chacune des niches écologiques que C. Jejuni peut contaminer a ses propres caractéristiques, stress et contraintes auxquelles C. Jejuni doit s'adapter. L'exposition à l'oxygène, le système immunitaire des hôtes et l'activité métabolique peuvent générer un stress oxydant, qui constitue une contrainte majeure en perturbant l’équilibre rédox de la cellule. Pour s'adapter à ces contraintes, C. Jejuni ne possède que peu de régulateurs connus de l'expression des gènes, dont un seul de type LysR, Cj1000. Nous avons muté le gène cj1000 et démontré son rôle dans la régulation de la réponse au stress oxydant et dans la régulation des voies respiratoires. Nous avons également mis en évidence l’importance de Cj1000 dans la colonisation des hôtes de C. Jejuni. Pour lutter contre la contamination des aliments par C. Jejuni, une alternative possible aux antibiotiques est l'utilisation de molécules naturelles aux propriétés antimicrobiennes et sans danger pour l'Homme. Les isothiocyanates sont des molécules d’origine végétale anticancéreuses aux propriétés pro-oxydantes et antibactériennes. Dans cette étude, nous avons évalué la sensibilité de différents isolats de C. Jejuni aux isothiocyanates. À partir du profil transcriptomique de C. Jejuni après exposition au benzylisothiocyanate et d'expériences complémentaires, nous avons prouvé que les isothiocyanates provoquaient l'agrégation de protéines, induisaient un stress oxydant et perturbaient le métabolisme énergétique et la respiration
Campylobacter jejuni is a microaerophile epsilon-proteobacteria which is responsible for many food-borne gastroenteridis in western countries. C. Jejuni must adapt to stressful conditions to colonise various environments. Oxygen exposure, metabolic activity and the host immune system are potential sources of oxidative stress that disrupts the redox balance. Transcriptional regulation mediates adaptation of pathogens to environmental conditions and stress. C. Jejuni possess only few regulators, including the sole LysR-type regulator Cj1000. We constructed a cj1000 mutant strain and we demonstrated the role of Cj1000 in the regulation of the oxidative stress response and respiratory pathways. Additionally, we highlighted the crucial role of Cj1000 in host colonisation. Natural, safe antibacterial molecules are possible alternatives to antibiotics for food preservation. Isothiocyanates are plant-derived anticancerous and antibacterial molecules that display pro-oxidant properties. In this study, we assayed the sensitivity of several C. Jejuni isolates to isothiocyanates. The transcriptomic profile of C. Jejuni exposed to benzylisothiocyanate and additional experiments demonstrated that isothiocyanates induced protein aggregation, generated an oxidative stress and disrupted energy metabolism and respiration

Chez rhizobium meliloti, bacterie symbiotique de la luzerne, l'expression des genes de fixation de l'azote est regulee par les proteines fixl et fixj en reponse aux conditions de microaerobiose prevalant dans le nodule. Les proteines fixl et fixj appartiennent a la famille des systemes regulateurs a deux composants. De tels systemes sont impliques dans la transduction de signaux en reponse a une grande variete de stimuli externes. Le mecanisme de base de ces systemes implique la phosphorylation d'une proteine regulatrice par une proteine captrice en presence du stimulus. La forme phosphorylee de la proteine regulatrice est normalement la forme active: ainsi la forme phosphorylee du regulateur fixj active-t-elle la transcription des genes de fixation de l'azote. Les systemes a deux composants presentent un caractere modulaire: ainsi fixj peut-il se decomposer en un domaine regulateur phosphorylable fixjn, et un domaine activateur transcriptionnel fixjc. Le domaine regulateur fixjn inhibe l'activite du domaine fixjc a l'interieur de la proteine fixj, et cette inhibition est levee par phosphorylation de fixjn. De plus, la phosphorylation provoque la dimerisation de fixj, le site de dimerisation etant localise dans fixjn. Le domaine activateur fixjc presente de l'homologie avec la region 4 des facteurs sigma impliquee dans la reconnaissance de la sequence -35 des promoteurs bacteriens. Nous avons recherche l'implication fonctionnelle de cette homologie en construisant des facteurs sigmas tronques ou chimeriques. Nos resultats indiquent que fixjc ne joue pas un role strictement equivalent a celui de la region 4 du facteur sigma dans l'activation de la transcription. De plus, nous demontrons que l'activation de la transcription par fixj fait intervenir la region 4 de sigma ainsi que le domaine c-terminal de la sous-unite alpha de l'arn polymerase

Malgré l’infiltration des tumeurs de sein par les acteurs du système immunitaire, leur rejet spontané est rarement documenté. Nos travaux sur les lymphocytes T régulateurs CD4+CD25high (Treg), cellules inhibitrice de la réponse immune, pourraient expliquer cette apparente contradiction. En effet, des Treg fonctionnels sont présents en fortes proportions dans les tumeurs primaires de sein et ont un impact négatif sur la survie des patientes. Cet impact sur la survie n’est observé que lorsque les Treg sont présents en périphérie de la tumeur dans les agrégats lymphoïdes au contact de cellules dendritiques (DC) matures, où ils sont activés et en prolifération, mais pas lorsqu’ils se trouvent dans le lit tumoral. Nous avons par ailleurs démontré le rôle crucial du récepteur CCR4 et d’un de ses ligands, CCL22, dans le recrutement des Treg dans la tumeur. Les DC plasmacytoïdes (pDC), cellules productrices d’interféron-α du sang lors d’infections virales, sont également retrouvées dans les tumeurs de sein et notre équipe a précédemment démontré que leur présence a un impact négatif sur la survie des patientes. Les pDC infiltrant les tumeurs expriment des marqueurs d’activation, répondent in vitro à des signaux d’activation mais leur capacité à produire de l’interféron-α est très fortement altérée. Nous montrons que les cytokines TNF-α et TGF-β produites dans l’environnement tumoral sont impliquées dans cette inhibition. Les perspectives de ce travail sont d’identifier les mécanismes de suppression utilisées par les Treg ainsi que l’importance de leur interaction avec les pDC dans le but de restaurer une réponse immunitaire anti-tumorale effectrice via la neutralisation des Treg et la réactivation des pDC dans les cancers du sein
Despite the infiltration of tumors by the immune competent cells, spontaneous rejection of breast tumors is rarely documented. Our work on CD4+CD25high regulatory T cells (Treg), cells inhibiting the immune response, might reconciliate this apparent discrepancy. Indeed, functional Treg are present in high proportions in primary breast tumors and have a negative impact on patient’s survival. This negative impact occurs only when Treg are present in the periphery of the tumor in the lymphoid aggregates in contact with mature Dendritic Cells (DC), where they are activated and proliferate, but not in the tumor area. Regarding their intra-tumoral recruitment, we have demonstrated the importance of the CCR4 receptor and one of its ligands CCL22. Plasmacytoid DC (pDC), circulating interferon-α producing cells during viral infection, are also present in breast tumors and their presence has a negative impact on patients’ survival as previously demonstrated by our team. Tumor-infiltrating pDC express activation markers, respond in vitro to activation signals, but their ability to produce interferon-α is strongly impaired. We showed that two cytokines, TGF-β and TNF-α produced within tumor microenvironment are involved in this inhibition. The perspectives of this work are to identify the mechanisms of Treg mediated suppression and the importance of their interaction with pDC. Our goal is to understand how to neutralize Treg and reactivate pDC in breast cancer in order to restore an anti tumor immune response

HLA-G est une molécule du CMH de classe I dite non classique qui se caractérise par ses propriétés tolérogènes. A l'interface fœto-maternelle, HLA-G joue un rôle de protection du fœtus contre le système immunitaire de sa mère. L'expression de HLA-G par des greffons allogéniques est associée à une meilleure acceptation du transplant. Exprimée par les tumeurs, HLA-G leur confère une résistance à l'immunité antitumorale. La compréhension des mécanismes cellulaires ainsi que des structures impliquées dans les fonctions inhibitrices de HLA-G représente donc un véritable enjeu sur le plan thérapeutique et diagnostique. En premier lieu, j'ai étudié les mécanismes cellulaires d'inhibition par HLA-G par trogocytose et démontré que les monocytes capturent HLA-G1 par trogocytose à partir de cellules tumorales. Au contraire des lymphocytes T et des cellules NK, les monocytes ayant capturé HLA-G 1 ne se comportent pas en cellules régulatrices, mais sont capables de le re-transférer à d'autres effecteurs (trogocytose en série). J'ai également démontré que les lymphocytes T sont capables d'acquérir le récepteur ILT2 par trogocytose à partir de monocytes, ce qui leur permet de devenir sensibles à HLA-G 1. Mon deuxième objectif a porté sur l'étude des structures de HLA-G fonctionnelles in vivo. J'ai démontré l'existence de dimères de HLA-G2, G4 et G6, mis au point une méthode de détection utilisant les récepteurs ILT2 et ILT4 et déterminé les structures de HLA-G reconnues par ces récepteurs. J'ai en particulier démontré que le récepteur ILT4 reconnaît l'isoforme HLA-G6. Finalement, j'ai comparé les efficacités de structures de HLA-G in vivo dans un modèle murin de greffe de peau allogénique
HLA-G is a non-classical HLA class I molecule characterized by its tolerogenic properties. At the feto-maternal interface, HLA-G plays a key role in protecting the fetus against the immune System of the mother. The expression of HLA-G in allogeneic grafts is associated with better acceptance. Expressed by tumors, HLA-G endows them with a resistance to anti-tumor immunity. Understanding the cellular mechanisms and structures involved in the inhibitory fonctions of HLA-G is therefore a real therapeutic and diagnostic challenge. First, I studied the cellular mechanisms of inhibition by HLA-G mediated by trogocytosis and demonstrated that monocytes capture HLA-G 1 by trogocytosis from tumor cells. Unlike T lymphocytes and NK cells, monocytes that have captured HLA-G 1 do not behave as regulatory cells, but are able to transfer again HLA- Gl to other effectors (serial trogocytosis). I also showed that T cells are able to acquire the ILT2 receptor by trogocytosis from monocytes, which enables them to become sensitive to HLA-G 1. My second objective was to study the HLA-G structures that are functional in vivo. I demonstrated the existence of dimers of HLA-G2, G4 and G6, developed a detection method using ILT2 and ILT4 receptors, and determined the HLA-G structures recognized by these receptors. In particular, I demonstrated that thé ILT4 receptor recognizes the HLA-G6 isoform. Finally, T compared the efficiencies of HLA-G structures in vivo in a murine model of allogeneic skin graft