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Дисертації з теми "Récepteur lectine"
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Gouget, Anne. "Etude fonctionnelle d'un récepteur lectine kinase (LecRK79) potentiel partenaire dans les contacts paroi-plasmalemme chez Arabidopsis thaliana." Toulouse 3, 2006. http://www.theses.fr/2006TOU30285.
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Les contacts paroi-plasmalemme d'A. Thaliana, sont rompus à l'aide de peptides contenant le motif RGD (Arg-Gly-Asp). Il est montré que le domaine extracellulaire de type lectine de LecRK79, un récepteur kinase, interagit avec les motifs RGD et RGE de peptides synthétiques et de la protéine IPI-O de Phytophthora infestans. Une forte expression de LecRK79 est observée dans les racines: apex et stèle des racines primaires et latérales, primordia, racines adventives. Un mutant insertionnel n'exprimant plus le gène possède un phénotype racinaire, caractérisé par un dédoublement de l'endoderme. Une induction rapide et transitoire de LecRK79 est observée après inoculation de souches avirulentes de la bactérie pathogène P. Syringae pv. Tomato. L'ensemble des résultats indique que LecRK79 est capable de participer à des interactions protéine-protéine afin d'établir des contacts paroi-plasmalemme. LecRK79 peut être impliquée dans le développement racinaire et les interactions plantes-pathogènes. Les contacts paroi-plasmalemme d'A. Thaliana, sont rompus à l'aide de peptides contenant le motif RGD (Arg-Gly-Asp). Il est montré que le domaine extracellulaire de type lectine de LecRK79, un récepteur kinase, interagit avec les motifs RGD et RGE de peptides synthétiques et de la protéine IPI-O de Phytophthora infestans. Une forte expression de LecRK79 est observée dans les racines: apex et stèle des racines primaires et latérales, primordia, racines adventives. Un mutant insertionnel n'exprimant plus le gène possède un phénotype racinaire, caractérisé par un dédoublement de l'endoderme. .Plasma membrane – cell wall contacts in A. Thaliana are disrupted by addition of RGD (Arg-Gly-Asp) containing peptides or proteins. Here we show that the extracellular legume-lectin domain of LecRK79, a receptor kinase, is able to interact with RGD- or RGE-containing peptides or proteins: the RGD motif of IPI-O, a protein from Phytophthora infestans, is also recognized. A strong expression of LecRK79 was observed in roots: apex and stele of apical and lateral roots, primordia, adventive roots. LecRK79 knock-out plants revealed that the endodermis layer splits into two rows of cells starting at the apex of apical and lateral roots. The induction of LecRK79 expression was detected in response to avirulent strains of Pseudomonas syringae pv. Tomato. Altogether, our results indicate that LecRK79 is able to mediate protein-protein interactions to possibly establish plasma membrane – cell wall contacts. They suggest LecRK79 is involved in root development and in plant-pathogen interactions. .
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Sutkeviciute, Ieva. "Développement de glycomimétiques antagonistes du récepteur lectine de type C, DC-SIGN : une nouvelle stratégie préventive anti-HIV." Phd thesis, Université de Grenoble, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00819832.
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L'immunité, un système de défense incroyable, protège la plupart des organismes vivants des pathogènes nuisibles. Les composantes innée et acquise de l'immunité travaillent ensemble pour assurer une protection efficace de l'homme ainsi que de tous les autres vertébrés à mâchoires. Les cellules dendritiques, la composante de l'immunité innée, passent régulièrement en revue les tissus périphériques, capturent et traitent les agents pathogènes envahisseurs et enfin, présentent les antigènes aux lymphocytes T pour stimuler les réponses immunitaires adaptatives spécifiques. Ces cellules reconnaissent les organismes étrangers à l'aide de plusieurs "Pattern Recognition Receptors" (PRRs), qui se lient spécifiquement à des molécules à la surface des agents pathogènes, dits "Pathogen Associated Molecular Patterns (PAMPs). Parmi les PRR, les récepteurs lectine de type C (CLRs) ont un rôle important dans la reconnaissance et dans la capture des pathogènes. Cependant, DC-SIGN, l'un de ces CLR, peut être détourné par de nombreux agents pathogènes dangereux, y compris le VIH, afin de promouvoir leur infection. Ce travail vise à développer des antagonistes de DC-SIGN, qui serait en mesure de bloquer l'utilisation de ce récepteur par des agents pathogènes. Pour atteindre cet objectif, la stratégie du développement de ligands glycomimétique de DC-SIGN et la présentation multivalente des glycomimétiques monovalents sélectionnés a été employée. Les études présentées ont été réalisées en collaboration avec plusieurs groupes de chimistes, qui ont conçu et synthétisé différents composés glycomimétiques ainsi que différentes plates-formes multivalentes. Des ligands monovalents de DC-SIGN basés sue le mannose, le fucose et sur les composés C-glycosidiques ont été explorés et différentes plates-formes de valence avec différents modes de présentation dans l'espace ont été étudiées. En utilisant la résonance plasmonique de surface (SPR), l'activité des composés à inhiber DC-SIGN a été estimée. De plus, les composés ont été évalués pour leur sélectivité pour DC-SIGN par rapport à la Langerine, un autre CLR ayant un rôle protecteur contre l'infection par le VIH. Certains de ces composés ont été caractérisés par cristallographie aux rayons X et par spectrométrie RMN. Les études de SPR de composés multivalents ont confirmé l'amélioration de l'activité, mais a également révélé des complications possibles. Dans l'ensemble, ces études ont permis d'identifier les deux meilleurs nouveaux composés et de suggérer des perspectives pour l'amélioration de ces composés et des plates-formes de présentation multivalentes.
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Bellande, Kévin. "Étude fonctionnelle d'un récepteur lectine kinase, LecRK-I.9 : un contrôle de la dynamique des parois chez Arabidopsis thaliana." Thesis, Toulouse 3, 2018. http://www.theses.fr/2018TOU30213.
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La paroi donne une enveloppe rigide à la cellule végétale. Elle renferme des polysaccharides (cellulose, hémicelluloses, pectines), des lignines dans certains types cellulaires, des protéines structurales et enzymatiques. La paroi est une structure dynamique: les parois sont modifiées au cours du développement et en réponse aux contraintes environnementales. Les protéines sont des acteurs de cette dynamique en participant à l'assemblage et au remodelage des polysaccharides, à la signalisation cellulaire. La paroi permet notamment aux cellules de résister à la pression de turgescence, force motrice de l'élongation cellulaire: les étapes de relaxation, d'intégration de nouveaux constituants et de consolidation de la paroi doivent être parfaitement coordonnées pour maintenir les structures pariétales. Un système de surveillance et des senseurs du statut de la paroi pourraient assurer cette coordination. Nous sommes intéressés par un récepteur lectine-kinase (LecRK-I.9) d'Arabidopsis thaliana dont le domaine extracellulaire est de type lectine de Légumineuses. Il est un acteur potentiel d'un système de surveillance du statut de la paroi. Les questions posées dans ce travail sont: (i) dans quels processus de développement LecRK-I.9 peut-il être impliqué ? (ii) quelles sont les régulations que ciblent LecRK-I.9 ? (iii) quelle est la nature des ligands de LecRK-I.9 ? L'expression de LecRK-I.9 est prépondérante dans les tissus racinaires et nous avons pu montrer que LecRK-I.9 est impliqué dans les processus d'initiation et d'émergence des racines latérales et adventives pour lesquels des remodelages pariétaux sont nécessaires. Il apparaît comme régulateur négatif de ces processus. En effet, chez les plantes lecrk-I.9, l'expression de gènes codant des peptides pariétaux CEP, régulateurs précoces de l'initiation des racines latérales, est dérégulée, de même pour de nombreuses enzymes travaillant de façon concertée à un relâchement des structures pariétales. Les plantes lecrk-I.9 présentent ainsi des parois modifiées dans leur composition en polysaccharides. Un dommage causé à la paroi a été obtenu par un traitement inhibiteur de la biosynthèse de cellulose. En particulier, des dépôts de lignine ectopique se mettent en place dans les apex racinaires sous le contrôle de l'acide jasmonique (JA) et des espèces réactives de l'oxygène (ROS). Nous avons pu montrer que LecRK-I.9 contrôle les teneurs en JA dans ce processus. De plus, via la régulation JA, LecRK-I.9 contrôle l'expression de gènes codant des protéines et des peptides pariétaux, mais également des protéines de détoxification des ROS. L'ensemble des résultats suggèrent que LecRK-I.9 est un régulateur de la dynamique pariétale avec pour cibles, les teneurs en JA, l'homéostasie des ROS, les enzymes de remodelage des polysaccharides. Le travail s'oriente maintenant vers les conséquences de modifications de la composition pariétale sur la nutrition minérale en fer. En effet, les plantes lecrk-I.9 montrent une forte accumulation de fer pariétal. Enfin, LecRK-I.9 est associé aux brins d'Hecht, en particulier dans les points d'ancrage pariétaux. L'interaction entre domaines lectine et composés pariétaux à l'aide de puces à oligosaccharides pourrait déterminer la participation de LecRK-I.9 à une continuité structurale entre paroi et plasmalemmeCell walls are complex structures of cellulose, hemicelluloses, pectins and proteins secreted by the cell, so setting up a rigid and continuous structure within the tissue of plants. Cell walls are dynamic structures that are continuously modified in the course of development and in response to environmental cues: cell wall proteins play a primarily role by assembling and remodelling polysaccharides, and by participating to cell signalling. In particular, cell walls are designed to handle turgor pressure, the driving force of cell elongation: the loosening of polysaccharide networks, the addition of new components and stiffening should be tightly coordinated to maintain the cell wall structures. A sensory complex to monitor the cell wall status should provide this coordination in an effective manner. We are interested in an Arabidopsis thaliana lectin receptor kinase (LecRK-I.9) with a Legume lectin-type extracellular domain. It is hypothesized that LecRK-I.9 is part of a cell wall surveillance system. The questions asked in this work are: (i) in which developmental processes is LecRK-I.9 involved? (ii) what are the regulations targeted by LecRK-I.9? (iii) what are the ligands for LecRK-I.9? LecRK-I.9 expression was primarily found in root tissues and, LecRK-I.9 was shown to be involved in the processes of adventitious and lateral root initiation and emergence. Both processes require large cell wall remodelling. LecRK-I.9 was defined as a negative regulator of the processes. Indeed, the cell wall peptides CEP are early regulators of lateral root initiation: genes encoding CEP were up-regulated in lecrk-I.9 seedlings. In the same way, genes encoding cell wall remodelling enzymes working together for cell wall loosening are also up-regulated. Finally, lecrk-I.9 seedlings showed modified cell walls in their polysaccharide content. Cellulose biosynthesis inhibition was employed to impair the cell wall structures. In particular, jasmonic acid (JA)- and reactive oxygen species (ROS)- mediated signalling may regulate ectopic lignin deposits in root apices induced by cell wall damage. LecRK-I.9 was shown to control the JA levels during the process of ectopic lignin deposition. Moreover, through JA tuning, LecRK-I.9 regulates the expression of genes encoding cell wall proteins and peptides, but also proteins for detoxifying ROS. Our results suggest that LecRK-I.9 regulates cell wall dynamics in roots by targeting JA levels, ROS homeostasis and remodelling enzymes for polysaccharides. Future prospects include relationships between cell wall composition and mineral nutrition for iron. Indeed, lecrk-I.9 seedlings showed an enhanced accumulation of iron in cell walls. Finally, LecRK-I.9 was found to be associated to Hechtian strands particularly in the cell wall anchor points. Interactions between lectin domains and cell wall polysaccharides are currently searched using glycoarrays for cell wall polysaccharides: LecRK-I.9 could be the linker to establish a physical connection between cell wall and plasma membrane
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Jacquemin, Godefroy. "Implication des monocytes-macrophages dans le développement de l'inflammation colique et de la carcinose péritonéale d'origine colorectale : rôle des récepteurs lectine de type-c et des récepteurs nucléaires PPARy et LRH-1." Thesis, Toulouse 3, 2021. http://www.theses.fr/2021TOU30277.
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Implication des monocytes/macrophages dans le développement de l’inflammation colique et de la carcinose péritonéale d’origine colorectale : Rôle des récepteurs lectine de type-C et des récepteurs nucléaires PPARγ et LRH-1.Les monocytes et les macrophages, cellules clés de l’immunité innée, expriment un large panel de récepteurs membranaires et nucléaires leur permettant de moduler leurs phénotypes et leurs fonctions en réponse aux stimuli présents dans leur environnement. Du fait de cette adaptabilité cellulaire, les monocytes/macrophages contrôlent la réponse immunitaire innée et adaptative. Ainsi, ces cellules jouent un rôle central dans le développement de nombreuses pathologies, et par conséquent, représentent des cibles thérapeutiques pertinentes. Dans ce travail de thèse, nous nous sommes, dans un premier temps, intéressés au rôle des récepteurs lectine de type-C des macrophages dans le contrôle de l’inflammation colique. Nous montrons grâce à l’utilisation de deux modèles murins spécifiquement invalidés pour Dectine-1 et le récepteur mannose (RM) dans la lignée myéloïde, que Dectine-1 participe au développement de l’inflammation intestinale, tandis qu’inversement, le RM la prévient. En effet, dans un modèle de colite induite au DSS (Dextran Sodium Sulfate), le récepteur Dectine-1 des macrophages induit une augmentation du recrutement de monocytes inflammatoires dans le colon de façon CCL2-dépendante. Nous mettons également en évidence que Dectine-1 est impliqué dans la polarisation des macrophages du colon vers un phénotype pro-inflammatoire. En effet, Dectine-1 favorise la synthèse du leucotriène B4 (LTB4) qui à son tour induit la sécrétion de l’interleukine-1β (IL-1β). Ces résultats mettent en évidence l’implication délétère de l’axe Dectine-1/CCL2/LTB4/IL-1β dans le développement de l’inflammation colique et attribuent, inversement, un rôle protecteur au RM dans ce contexte. Ces données ont été corrélées avec une augmentation de l’expression de Dectine-1 et une diminution de l’expression du RM au niveau du colon de patients atteints de maladies inflammatoires chroniques de l’intestin (MICI). Ce travail est publié dans Cell Reports 2020 : Divergent Roles for Macrophage C-type Lectin Receptors, Dectin-1 and Mannose Receptors, in the Intestinal Inflammatory Response. Cell Rep. 30, 4386-4398.e5Dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés aux rôles des récepteurs nucléaires PPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor) et LRH-1 (Liver receptor homolog-1) des macrophages dans le développement d’une carcinose péritonéale d’origine colorectale (CPCR). Nous avons mis en évidence pour la première fois, en utilisant deux modèles murins délétés pour LRH-1 ou PPARγ spécifiquement dans la lignée myéloïde, que ces récepteurs nucléaires jouent un rôle majeur dans la différenciation des précurseurs myéloïdes en cellules immunosuppressives dérivées de la lignée myéloïde (MDSC) au cours de la CPCR. En effet, l’absence de LRH-1 et de PPARγ dans les cellules myéloïdes inhibe la différenciation des MDSC et favorise la réactivation du système immunitaire anti-tumoral. En association à cette réactivation immunitaire, les souris présentent une forte diminution de la charge tumorale, identifiant LRH-1 et PPARγ comme des cibles thérapeutiques innovantes capables de lever l’immunosuppression. A l’aide d’un modèle in vitro de différenciation des MDSC, nous avons montré l’interdépendance de LRH-1 et PPARγ dans la différenciation des MDSC via l’activation de l’axe LRH-1/15-HETE/PPARγ. Parallèlement, nous avons mis en évidence la capacité d’un agoniste inverse de LRH-1 (ML-180) à inhiber le développement de la CPCR, la différenciation des MDSC et la prolifération des cellules tumorales de colonInvolvement of monocytes/macrophages in the development of colonic inflammation and peritoneal carcinomatosis of colorectal origin: Role of C-type lectin receptors and nuclear receptors PPARγ and LRH-1.Monocytes and macrophages, key cells of innate immunity, express a large panel of membrane and nuclear receptors allowing them to modulate their phenotypes and functions in response to environmental stimuli. Due to this cellular adaptability, monocytes/macrophages control the innate and adaptive immune responses. Thus, these cells play a central role in the development of many pathologies, and consequently, represent relevant therapeutic targets. In this work, we first focused on the role of macrophage C-type lectin receptors in the control of colonic inflammation. We show, using two mouse models specifically invalidated for Dectin-1 and mannose receptor (MR) in the myeloid lineage, that Dectin-1 participates in the development of intestinal inflammation, whereas MR prevents it. Indeed, in a DSS (Dextran Sodium Sulfate)-induced colitis model, the Dectin-1 receptor on macrophages induces an increase in the recruitment of inflammatory monocytes in the colon in a CCL2-dependent manner. We also demonstrate that Dectin-1 is involved in the polarization of colonic macrophages towards a pro-inflammatory phenotype. Indeed, Dectin-1 promotes the synthesis of leukotriene B4 (LTB4) which, in turn, induces the secretion of interleukin-1β (IL-1β). These results highlight the involvement of the Dectin-1/CCL2/LTB4/IL-1β axis in the development of colonic inflammation and conversely assign a protective role to MR in this context. These data were correlated with an increase in Dectin-1 expression and a decrease in MR expression in the colon of inflammatory bowel disease (IBD) patients. This work is published in Cell Reports 2020: Divergent Roles for Macrophage C-type Lectin Receptors, Dectin-1 and Mannose Receptors, in the Intestinal Inflammatory Response. Cell Rep. 30, 4386-4398.e5In a second step, we investigated the roles of the nuclear receptors PPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor) and LRH-1 (Liver receptor homolog-1) of macrophages in the development of peritoneal carcinomatosis of colorectal origin (PCR). We have demonstrated for the first time, using two mouse models deleted for LRH-1 or PPARγ specifically in the myeloid lineage, that these nuclear receptors play a major role in the differentiation of myeloid precursors into myeloid-derived suppressor cells (MDSC) during PCR. Indeed, the absence of LRH-1 and PPARγ in myeloid cells inhibits MDSC differentiation and promotes the reactivation of the anti-tumor immune system. Associated with this immune reactivation, the mice show a strong decrease in tumor burden, identifying LRH-1 and PPARγ as novel therapeutic targets capable of removing immunosuppression. Using an in vitro model of MDSC differentiation, we demonstrated the interdependence of LRH-1 and PPARγ in MDSC differentiation via the activation of the LRH-1/15-HETE/PPARγ axis. In parallel, we demonstrated the ability of an LRH-1 inverse agonist (ML-180) to inhibit PCR development, MDSC differentiation and colon tumor cell proliferation. This work identifies the nuclear receptor LRH-1 as a key element in PCR progression and opens new therapeutic perspectives allowing both to remove immunosuppression by blocking MDSC differentiation and to directly inhibit colon tumor cell proliferation. This work is in progress
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Blot, Lauriane. "Rôle de CLEC12B dans l'immunité de la peau." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2023. https://intranet-theses.unice.fr/2023COAZ6034.
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CLEC12B a été identifié pour la première fois comme étant un récepteur inhibiteur exprimé par les cellules myéloïdes qui neutralise la cytotoxicité médiée par les cellules NK. CLEC12B est un récepteur de lectine de type C (CLR) possédant un domaine ITIM, mais dont la signalisation en aval et le ou les ligands restent en grande partie inconnus. Au cours des 30 dernières années, une fonction de présentation d'antigène des mélanocytes a émergé en raison de leur nature dendritique, de leur position stratégique dans la peau et de leur capacité phagocytaire. Dans un contexte de vitiligo, notre équipe a montré que l'activation de CXCR3B, le récepteur des chimiokines immunitaires CXCL9, CXCL10 et CXCL11, induit l'apoptose des mélanocytes humains en culture. Les mélanocytes restants, activés par la production d'IFNγ, expriment des marqueurs de costimulation, déclenchant ainsi la prolifération des lymphocytes T et l'immunité anti-mélanocytaire qui en résulte. De récents résultats de notre équipe ont montré que CLEC12B est principalement exprimé par les mélanocytes humains et joue un rôle important dans la régulation de la pigmentation cutanée, mais également dans la prolifération du mélanome.Dans ce projet, nous avons cherché à déterminer le rôle de CLEC12B dans l'immunité de la peau en utilisant des mélanocytes humains primaires provenant de donneurs sains. Nous démontrons ici que CLEC12B est essentiel à la production d'IFNγ et des chimiokines innées CXCL9, CXCL10 et CXCL11 par les mélanocytes, comme le montre la modulation de l'expression de CLEC12B à l'aide de techniques de surexpression ou d'extinction génique. Cette régulation se fait via la phosphorylation du domaine ITIM de CLEC12B, comme le montre la forme mutée du gène CLEC12B. De plus, CLEC12B peut non seulement moduler la production de chimiokines mélanocytaires, mais il est également capable d'augmenter directement le chimiotactisme des cellules immunitaires de la peau et donc de déclencher une immunité adaptative à long terme. D'un point de vue signalisation, nous montrons que CLEC12B module la voie de signalisation de l'IFNγ via l'axe STAT1/IRF1. De plus, CLEC12B potentialise l'effet de l'IFNγ dans les mélanocytes activés, induisant ainsi une plus grande production de chimiokines innées et in fine une plus grande chimio-attraction des cellules immunitaires. Nous avons également démontré que CLEC12B interagit directement avec Staphylococcus aureus et Escherichia coli et module une réponse immunitaire innée contre ces bactéries opportunistes présentes sur la peau via l'axe STAT1/IRF1/CXCL9. Enfin, nous avons montré que CLEC12B détecte des motifs présents sur les mélanocytes, les fibroblastes et les macrophages pro- et anti-inflammatoires, mais son ou ses ligands restent encore à être identifiés. Dans l'ensemble, ces résultats démontrent que CLEC12B est un acteur important dans l'immunité cutanée innée en modulant la production d'IFNγ et de chimiokines immunitaires, mais également dans l'immunité adaptative en modulant le chimiotactisme des cellules immunitaires via la phosphorylation de son domaine ITIM. Ce mécanisme présente un grand intérêt car l'IFNγ et le recrutement de cellules immunitaires sont des étapes initiales clés impliquées dans l'inflammation de nombreuses pathologies de la peau, faisant de ce récepteur une cible thérapeutique intéressante pour le traitement de maladies infectieuses, des troubles cutanés inflammatoires et pigmentaires, ainsi que du cancer ; tout cela pouvant être directement immuno-régulé par CLEC12B dans les mélanocytes. Cette nouvelle perspective prometteuse reste encore à être testée dans de futures étudesCLEC12B was first identified as an inhibitory receptor on myeloid cells that counteracts NK cells-mediated cytotoxicity. CLEC12B is a C-type Lectin Receptor (CLR) which possesses an ITIM domain, but ligand and downstream signaling are largely unknown. Over the past 30 years, an antigen-presenting function of melanocytes has emerged due to their dendritic nature, their strategic position in the skin and their phagocytic capacity. In a vitiligo context, our team has shown that CXCR3B activation, the receptor for immune chemokines CXCL9, CXCL10 and CXCL11, induces apoptosis of cultured human melanocytes. The remaining melanocytes, activated by the IFNγ production, express co-stimulatory markers which trigger T cell proliferation and subsequent anti-melanocytic immunity. Recent results from our team have shown that CLEC12B is mainly expressed in human melanocytes and plays an important role in the regulation of skin pigmentation, but also in melanoma proliferation.In this project, we set out to determine the role of CLEC12B in skin immunity using primary human melanocytes from healthy donors. We demonstrate that CLEC12B is critical in production of IFNγ and innate chemokines CXCL9, CXCL10 and CXCL11 by melanocytes, as shown by our regulation of CLEC12B expression using silencing or overexpression techniques. This regulation was driven by the phosphorylation of CLEC12B's ITIM domain as shown using CLEC12B mutated form of the gene. Furthermore, not only can CLEC12B drive melanocyte chemokine production, but it is also capable of directly increase chemoattraction of immune cells in the skin and therefore trigger a long-term adaptative immunity. From a signaling point of view, we show that CLEC12B modulates IFNγ signaling pathway through the STAT1/IRF1 axis. Moreover, CLEC12B potentiates the effect of IFNγ in primed melanocytes, thus inducing a larger production of innate chemokines and subsequent greater chemoattraction of immune cells. In addition, we have demonstrated that CLEC12B directly interacts with Staphylococcus aureus and Escherichia coli and modulates an innate immune response against these opportunistic bacteria found on the skin through the STAT1/IRF1/CXCL9 axis. Finally, we have shown that CLEC12B senses motifs present on melanocytes, fibroblasts, and both pro- and anti-inflammatory macrophages, but its exact ligand(s) still remains to be identified. Together, these results demonstrate that CLEC12B is an important player in innate skin immunity by modulating the production of IFNγ and immune chemokines, and in adaptative immunity by modulating the migration ability of immune cells through the phosphorylation of its ITIM domain. This mechanism is of great interest as IFNγ and cellular recruitment are key initial steps involved in inflammation of many skin pathologies, making this receptor an interesting therapeutic target for the treatment of infectious diseases, inflammatory and pigmentary skin disorders, as well as cancer; all which may be able to be directly immuneregulated by CLEC12B on melanocytes. This exciting novel prospect remains to be tested in future studies
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Cedile, Oriane. "Expression physiologique et pathologique dans le SNC adulte de Rae-1, ligand du récepteur activateur NKG2D exprimé par les cellules NK potentiellement régulatrices dans l'EAE." Aix-Marseille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009AIX20683.
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RAE-1 est un ligand du récepteur activateur NKG2D exprimé par les cellules NK, impliquées dans les pathologies tumorales, infectieuses et auto-immunes. Les transcrits de Rae-1 sont exprimés dans l'embryon et sont réprimés pendant le développement sauf au niveau de la zone sous-ventriculaire (SVZ), principale zone de neurogenèse. Ils sont surexprimés dans le tissu nerveux après l’induction de l’EAE et dans les bulbes olfactifs après axotomie des afférences olfactives. Les neurosphères, issues de cellules souches neurales, expriment RAE-1 et l’expression disparait dès leur différenciation en cellules neurales, reproduisant ainsi la situation développementale. RAE-1 joue un rôle nonimmun dans la prolifération cellulaire des neurosphères. La souche C57BL/6 possède 2 protéines RAE-1 : RAE-1δ et RAE-1ε. RAE-1ε est caractérisée par une affinité plus élevée pour NKG2D que RAE-1δ. On observe des différences d’expression des transcrits de Rae-1δ et Rae-1ε en fonction des lignées cellulaires, des cultures primaires et des tissus que nous avons analysés. Ces différences s’expliquent notamment par un contrôle de la transcription par des régions promotrices différentes. L’expression de Rae-1 en condition pathologique corrèle avec un recrutement de cellules immunes exprimant NKG2D et NKp46, marqueur spécifique des cellules NK. La déplétion des cellules NK avant l’immunisation induit une phase aigüe plus sévère. Celle au moment du pic inhibe la rémission. Le nombre de cellules NK, très limité au moment de la phase aigüe, augmente pendant la phase de rémission. Nous proposons que les cellules NK jouent un rôle protecteur dans l’EAE soit en agissant sur les étapes de la réponse immune en périphérie, soit en interagissant localement avec des cellules exprimant RAE-1 comme les cellules souches neurales, les cellules macrophagiques recrutées ou la microglie activée.
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Bulteau, François. "Ciblage in vivo des tumeurs via l'antigène Tn : Développement d'un cluster de Macrophage Galactose Lectine Human Macrophage Galactose-Type Lectin (MGL) Recognizes the Outer Core of Escherichia coli Lipooligosaccharide." Thesis, Université Grenoble Alpes, 2020. http://www.theses.fr/2020GRALV048.
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L’ensemble des cellules, qu’elles soient procaryotes ou eucaryotes, est doté d’une couche de glycosylation externe riche et diversifiée, composant la face dominante immédiate en relation à leur environnement. Elles résultent de processus enzymatiques complexes liant les sucres entre eux et sur des protéines ou lipides. Des variations du « glycome » peuvent apparaître dans certaines pathologies. Les cancers sont les pathologies les plus fréquentes présentant des anomalies de ces glycosylations. Ces altérations sont quasi systématiques à la surface des cellules cancéreuses. Parmi celles-ci, l’antigène Thomsen-nouveau (Tn), un N-acétylgalactosamine (GalNAc) sur une sérine ou une thréonine, est fortement exprimé dans 90% des carcinomes mammaires ainsi que dans les cancers de la vessie, du col de l’utérus, de l’ovaire, du colon, de l’estomac et de la prostate. L’omniprésence de l’antigène Tn dans de nombreux cancers, associés à son absence dans les cellules saines, en fait une cible de choix pour la thérapie ciblée ou des vaccins synthétiques antitumoraux. Aucun anticorps ciblant l’antigène Tn n’est à ce jour disponible du fait de la difficulté à développer un anticorps avec une telle spécificité. Ainsi, nous nous sommes intéressés à une autre stratégie de ciblage, basée sur l’utilisation d’une molécule capable de reconnaître l’antigène Tn. Les lectines de type C sont une famille de protéines capables de se lier spécifiquement et de façon réversible à certains glucides, en présence de calcium. La macrophage galactose lectine (MGL) est une lectine de type C ayant une affinité très importante pour le GalNac et ses dérivés comme l’antigène Tn. Ce travail a consisté, dans un premier temps, à l’utilisation d’une forme recombinante soluble de la MGL pour valider le potentiel de cet outil pour le ciblage des cellules cancéreuses. Les différentes expériences, in vitro et in vivo, impliquant la MGL, ont démontré la capacité de cette dernière à cibler spécifiquement les tumeurs humaines via l’antigène Tn. La partie extracellulaire de la MGL est de ce fait un très bon candidat de vecteur pour le diagnostic et l’imagerie de tumeurs humaines et potentiellement pour l’administration de médicaments. Dans un deuxième temps, diverses stratégies de développement d’un outil bifonctionnel exploitant cette lectine ont été exploré. Le but était de créer une plateforme peptidique fonctionnalisable d’une part avec plusieurs domaines lectines, afin de contrôler l’affinité de reconnaissance, et d’autre part des groupements fonctionnels variable selon l’application recherché (diagnostique, thérapeutique, ...). Les différentes stratégies de couplage employées nous ont permis d’accrocher plusieurs CRD de lectine sur un support peptidique, cela en conservant l’état tridimensionnel et fonctionnel des protéines. Les caractérisations effectuées démontrent une importante augmentation de l’affinité directement fonction du nombre de lectine ajouté sur la plateforme. Ce travail ouvre la voie vers de nouveaux systèmes de ciblage des sucres modulable à façonAll cells, whether prokaryotic or eukaryotic, have a rich and diversified external glycosylation layer, forming the immediate dominant face in relation to their environment. They result from complex enzymatic processes linking sugars to each other and to proteins or lipids. Variations of the "glycome" can appear in certain pathologies. Cancers are the most frequent pathologies with abnormalities in these glycosylations. These alterations are almost systematic on the surface of cancer cells. Among them, the Thomsen-new antigen (Tn), an N-acetylgalactosamine (GalNAc) on a serine or threonine, is strongly expressed in 90% of mammary carcinomas as well as in cancers of the bladder, cervix, ovary, colon, stomach and prostate. The ubiquitous presence of the Tn antigen in many cancers, combined with its absence in healthy cells, makes it a target of choice for targeted therapy or synthetic anti-tumor vaccines. No antibody targeting the Tn antigen is currently available because of the difficulty in developing an antibody with such specificity. Thus, we were interested in an alternative targeting strategy, based on the use of a molecule capable of recognizing the Tn antigen. C-Type lectins are a family of proteins capable of specifically and reversibly binding to certain carbohydrates in the presence of calcium. Macrophage galactose lectin (MGL) is a C-type lectin with a high affinity for GalNac and its derivatives such as the Tn antigen. This work consisted, initially, in the use of a soluble recombinant form of MGL to validate the potential of this tool for the targeting of cancer cells. The different experiments, in vitro and in vivo, involving MGL, demonstrated the latter's ability to specifically target human tumors via the Tn antigen. The extracellular portion of MGL is therefore a very good vector candidate for the diagnosis and imaging of human tumors and potentially for drug delivery. In a second step, various strategies for the development of a bifunctional tool exploiting this lectin were explored. The goal was to create a peptide platform that could be functionalized on one hand with several lectin domains, in order to control recognition affinity, and on the other hand with functional groups that could be variable according to the application (diagnostic, therapeutic, ...). The different coupling strategies employed allowed us to attach several lectin CRDs to a peptide support, while preserving the three-dimensional and functional state of the proteins. The characterizations carried out show a significant increase in affinity directly related to the number of lectins added to the platform. This work paves the way to new customizable sugar-targeting systems
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Gohier, Arnaud. "Facettes de modélisation moléculaire, application à : étude des interactions lectines de légumineuses-glucides, méthodologie de construction des récepteurs couplés aux protéines G : études des interactions hydrophiles/hydrophobes des hélices de la bactériorhodopsine : étude structure-activité sur des ligands du récepteur kappa opiacé." Grenoble 1, 1999. http://www.theses.fr/1999GRE10183.
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L'approche par le recepteur et l'approche par les ligands sont les deux techniques utilisees classiquement dans l'industrie pharmaceutique pour rationaliser la conception de nouveaux medicaments. Par le biais de la modelisation des deux lectines de legumineuses ulex europaeus et lima bean et de l'etude de leurs interactions avec leur glucide respectif, le fucose et le n-acetyl-d-galactosamine, cette these illustre les differentes techniques utilisables pour modeliser une proteine globulaire par homologie et pour decrire les interactions proteine-ligand. Dans le cas des recepteurs couples aux proteines g, cette approche par le recepteur est confrontee a la difficulte de modeliser le recepteur. Afin d'apporter des elements de reflexion supplementaires sur les caracteristiques de ce type de recepteur, nous avons tente de qualifier les interactions hydrophiles/hydrophobes entre les helices de la bacteriorhodopsine. Pour le cas du recepteur kappa opiace, l'approche par le ligand illustree par une analyse qsar-comfa semble donner de meilleurs resultats que l'approche par le recepteur : bien que les ligands etudies soient flexibles, une relation structure-activite a ete obtenue apres une etude conformationelle des ligands.
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Musset, Murielle. "Nature des récepteurs (intégrines et lectines) et des signaux de transduction impliqués dans l'adhérence des cellules Hep G2." Paris 5, 1997. http://www.theses.fr/1997PA05S018.
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Au même titre que les hormones, les facteurs de croissance et les autres cellules, la matrice extracellulaire exerce un rôle fondamental dans le contrôle des fonctions cellulaires. Les informations codées par la matrice sont transmises à la cellule par des récepteurs membranaires, via des interactions entre le cytosquelette et des protéines kinases. Notre étude a porté sur la caractérisation de l'adhérence des cellules hep g2 sur différents composes matriciels, l'identification des signaux émis et des récepteurs impliqués lors de cette adhérence. Les cellules hep g2 adhèrent de façon similaire sur la fn, la lm, les collagènes i et iv, mais elles adoptent des morphologies différentes. Contrairement à l'hypothèse généralement admise, nous avons montre que, quelle que soit la matrice, l'adhérence de ces cellules implique des signaux de même nature : protéines kinases c (pkc), protéines tyrosine kinases (ptk) et protéines kinases ca 2 +/calmoduline-dépendantes (camk). Les ptk et les camk sont indispensables pour entrainer l'attachement cellulaire, tandis que les pkc sont impliquées dans la phase d'étalement et la réorganisation du cytosquelette. Les intégrines sont des récepteurs membranaires de la matrice, connus pour permettre la transmission de signaux de la matrice vers la cellule. Nous avons déterminé que les cellules hep g2 expriment et utilisent de nombreux récepteurs intégrines (11, 21, 31, 51, 61, v3), spécifiques d'un ou plusieurs ligand(s) matriciel(s). Ceci montrait que, (1) les signaux émis ne dépendaient pas d'une intégrine particulière a une matrice, et que (2) d'autres types de récepteurs étaient impliques pour permettre l'adoption de morphologies cellulaires spécifiques. Notre étude a permis de démontrer la présence membranaire de deux lectines de spécificité n-acetylglucosamine, capables d'interagir avec la laminine. Ces lectines n'ont pas un rôle direct dans l'adhérence cellulaire, mais sont recrutées dans les sites focaux.
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Niveau, Camille. "Impact des glycans tumoraux sur les propriétés phénotypiques, fonctionnelles et métaboliques des cellules dendritiques (cDC2, pDC, cDC1) humaines en contexte de mélanome." Electronic Thesis or Diss., Université Grenoble Alpes, 2024. http://www.theses.fr/2024GRALV022.
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Les cellules dendritiques (DCs), comprenant les cDC2s BDCA1+, les cDC1s BDCA3+ et les pDCs BDCA2+ sont les chefs d’orchestre des réponses immunitaires. Leur plasticité joue un rôle crucial dans l’orientation des réponses immunitaires, notamment en contexte de cancer. Cependant, l’échappement à la surveillance immunitaire est une étape essentielle dans le développement des tumeurs. En contexte de mélanome, les DCs trouvées dans la tumeur ont une fonctionnalité altérée, influençant négativement l’évolution clinique des patients. Les mécanismes employés par le mélanome pour moduler l’immunité ne sont que partiellement élucidés. L’immuno-métabolisme émerge comme un facteur décisif pour l’orientation des réponses immunes en contexte de cancer. Parallèlement, les cellules tumorales présentent à leur surface une glycosylation aberrante des protéines et lipides qui peut être reconnue par les lectines, récepteurs exprimés par les DCs. Parmi eux, les récepteurs lectines de type C (CLR) sont cruciaux pour la plasticité des DCs et le façonnement des réponses immunitaires, et leur expression est perturbée sur les DCs des patients mélanome. De plus, le glycocode des cellules tumorales de mélanome est corrélé avec la fonction des DCs et l’évolution clinique des patients. Néanmoins, l’impact des différents motifs de glycosylation dans le mélanome sur le phénotype, la fonction et le métabolisme des DCs n’est pas connu.Nous avons étudié les interactions des sous-types de DCs avec six glycans présents à la surface des cellules de mélanome (Gal, Man, GalNAc, s-Tn, Fuc, GlcNAc). Nous avons analysé l’impact de ces glycans sur le phénotype (état d’activation, points de contrôle immunitaires (ICP)) et la fonction (cytokines/chimiokines) des DCs. Afin de mieux comprendre la dérégulation de la fonction des DCs dans le mélanome, nous avons exploré leur métabolisme chez les patients grâce à la technique SCENITH, et mis en relation leur profil métabolique avec leur phénotype, leur fonction et l’évolution clinique des patients. Nous avons aussi évalué l’impact des cellules tumorales et du glycocode sur le métabolisme des DCs, et évalué la possibilité de moduler les voies métaboliques afin de réverser l’impact des glycans sur la fonction des DCs.Les DCs sont capables d’interagir avec et d’internaliser les glycans étudiés, à différentes intensités selon le sous-type de DCs et la nature du glycan. Le fucose induit un remodelage de l’expression des ICPs et une augmentation des molécules d’activation, et provoque la sécrétion de cytokines/chimiokines associées à l’inflammation et à la progression tumorale. Après activation des DCs, leur sécrétome est complètement remodelé par l’exposition aux glycans, particulièrement avec le fucose. Parallèlement, nous avons mis en évidence des perturbations métaboliques majeures des DCs dans le sang et la tumeur des patients mélanome par rapport aux donneurs sains. L’expression de marqueurs d’activation et d’ICPs par les DCs ainsi que l’évolution clinique des patients sont liés au profil métabolique des DCs. De plus, le métabolisme des DCs en co-culture avec des cellules de mélanome est corrélé avec l’expression de certains glycans tumoraux. En accord avec ces résultats, les glycans étudiés modulent directement le métabolisme des DCs en plus de leur phénotype et de leur fonction. Le blocage du transporteur de lactate MCT-1 permet de restaurer la fonctionnalité des DCs altérée par les glycans.Cette étude révèle l’importance des motifs glycosylés dans la modulation et la régulation des DCs. L’axe glycan-lectine-DC émerge comme un nouveau point de contrôle immunitaire dans le mélanome, lié au métabolisme et qui pourrait permettre la restauration de l’immunité anti-tumorale en empêchant les interactions des DCs avec les glycans ou en modulant leur métabolisme. Cet axe ouvre la voie au développement de nouvelles stratégies thérapeutiques afin d’améliorer l’évolution clinique des patients atteints de mélanomeDendritic cells (DCs), mostly consisting of BDCA1+ cDC2s, BDCA3+ cDC1s, and BDCA2+ pDCs are the conductors of immune responses. Their plasticity plays a crucial role in the orientation of immune responses, especially in the context of cancer. However, escape from immune surveillance is a key step for tumor development. In the context of melanoma, tumor-infiltrating and circulating DCs harbor an altered functionality, negatively linked with the clinical outcome of patients. The mechanisms employed by melanoma to modulate immunity are only partially deciphered. Immuno-metabolism emerges as a decisive factor for the orientation of immune responses in cancer. In parallel, tumor cells display aberrant glycans on surface protein and lipids that can be recognized by lectin receptors, expressed by DCs. Among them, C-type lectin receptors (CLRs) are crucial for DCs’ plasticity and the modeling of immune responses, and their expression is perturbed on DCs from melanoma patients. In addition, the tumor cells’ glycocode correlates with DC function and clinical outcome of patients. Nevertheless, influence of the various glycosylation motifs on immunity remains unknown in melanoma.We investigated the interactions of DC subsets with six glycans present on the surface of melanoma tumor cells (Gal, Man, GalNAc, s-Tn, Fuc, GlcNAc). We analyzed the effect of these glycans on the phenotype (activation status, immune checkpoints (ICP)), and the function (cytokines/chemokines) of DCs. In order to better understand DCs dysregulation in melanoma, we explored their metabolism among patients thanks to the SCENITH technique, and analyzed the correlation with their phenotype, their function and the clinical outcome of patients. We also assessed the impact of tumor cells and their glycocode on DCs’ metabolism, and we evaluated the possibility to modulate metabolic pathways with the aim of reverting the impact of glycans on DCs’ function.DCs are able to interact with and to internalize the studied glycans, at different intensities according to the DC subset and to the nature of the glycan. Fucose induces a remodeling of ICP expression and increases activation molecules, in addition to trigger the secretion of pro-inflammatory and pro-tumoral cytokines/chemokines. After activation, DC’s secretome is completely reshaped by glycan exposure, particularly with fucose. In parallel, we highlight major metabolic disturbances in DCs from patients’ blood and tumor compared to healthy donors. The expression of activation markers and ICPs by DCs as well as the clinical outcome of patients are linked with the metabolic profile of DCs. Moreover, DCs’ metabolism in co-culture with melanoma cells correlates with the expression of particular tumor glycans. Coherently, the studied glycans directly modulate DCs’ metabolism in addition to their phenotype and function. The blockade of the MCT-1 lactate transporter allows restoring DCs’ function altered by glycans.This study unveils the importance of glycan motifs in the modulation and regulation of DCs. The glycan-lectin-DC axis emerges as a new immune checkpoint in melanoma, linked with metabolism, and which could enable the restoration of anti-tumor immunity by preventing DC-glycan interactions or by acting on their metabolism. This axis opens the way for the development of new therapeutic strategies with the aim of improving clinical success for melanoma patients
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Lajaunias, Frédéric. "Rôle de CD22 et son ligand dans le lupus érythémateux disséminé." Paris 7, 2002. http://www.theses.fr/2002PA077214.
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Wilczewski, Marie. "Les interactions multivalentes : leurs rôles dans les processus de reconnaissance biomoléculaire et leur application dans la construction d'assemblage supramoléculaire." Phd thesis, Grenoble 1, 2007. http://www.theses.fr/2007GRE10253.
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Ce travail décrit une étude quantitative de plusieurs systèmes de reconnaissance biomoléculaire impliquant des interactions multivalentes. Deux chapitres sont axés sur l’utilisation de plateformes supramoléculaires cyclodécapeptidiques appelées RAFT (Regioselectively Adressable Functionnalized Template) permettant la présentation multiple de ligand saccharidique ou cyclopeptidique. Une étude cinétique et thermodynamique des interactions entre les ligands RAFT-saccharide et une lectine modèle, la concanavaline A, a permis de démontrer que deux mécanismes moléculaires sont à l’origine de la meilleure affinité des RAFT multivalents par rapport à leurs homologues monovalents : d’une part un effet de « proximité-statistique » dû à la concentration locale élevée en motif sucre et d’autre part la capacité des RAFT multivalents à se lier à plusieurs lectines selon un effet « cluster ». Des études préliminaires ont également concerné l’analyse de l’interaction entre RAFT-RGD et des récepteurs cellulaires. Dans un dernier chapitre, nous avons démontré, pour la première fois, la formation de films multicouches grâce à des interactions de type hôte-invité entre deux -cyclodextrinebiopolymères de chitosane, l’un fonctionnalisés par des cavités et l’autre par des entités adamantane. Bien que la stabilité de l’assemblage soit assurée par des interactions de complexation multivalentes, la croissance de l’assemblage, quant à elle, dépend de la disponibilité des sites de complexation offerts par chacune des couches. De plus, les deux polymères chargés positivement confèrent à l’assemblage des propriétés de gonflement-dégonflement en réponse à des variations de force ionique et pHThis work deals with a quantitative study of several biomolecular recognition systems involving multivalent interactions. Two chapters focuse on the use of supramolecular cyclodecapeptidic platform called RAFT (Regioselectively Addressable Functionnalized Template), which allows the presentation of multiple carbohydrate or cyclopeptidic ligands. Kinetic and thermodynamic studies of the interaction between the ligands RAFT-carbohydrate and a model lectin, concanavalin A, have demonstrated that two molecular mechanisms are responsible for the better affinity of multivalent RAFT molecule compared to their monovalent counterparts: on one hand a "proximity-statistical" effect due to the high local concentration of sugar entities and on the other hand thanks to a "cluster effect" which confers the ability of multivalent RAFT to bind several lectins. Preliminary studies have also involved the analysis of the interaction between RAFT-RGD and integrin cell receptors. In a last chapter, we have demonstrated, for the first time, polymer multilayer formation based on host-guest interaction between two derivatized chitosans biopolymers, one, with -cyclodextrin cavities and the other with adamantyl moieties. While stability of the self-assembly is conferred by multivalent complexation occuring at each step of the construction, the assembly growth is mainly governed by the availability of the complexation sites offered by each layer. Moreover, the two positively charged polymers confer to the assembly swelling/deswelling properties in response to changes in ionic strength and pH
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Wilczewski, Marie. "Les interactions multivalentes : leurs rôles dans les processus de reconnaissance biomoléculaire et leur application dans la construction d'assemblage supramoléculaire." Phd thesis, Université Joseph Fourier (Grenoble), 2007. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00196867.
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Ce travail décrit une étude quantitative de plusieurs systèmes de reconnaissance biomoléculaire impliquant des interactions multivalentes.Deux chapitres sont axés sur l'utilisation de plateformes supramoléculaires cyclodécapeptidiques appelées RAFT (Regioselectively Adressable Functionnalized Template) permettant la présentation multiple de ligand saccharidique ou cyclopeptidique. Une étude cinétique et thermodynamique des interactions entre les ligands RAFT-saccharide et une lectine modèle, la concanavaline A, a permis de démontrer que deux mécanismes moléculaires sont à l'origine de la meilleure affinité des RAFT multivalents par rapport à leurs homologues monovalents : d'une part un effet de « proximité-statistique » dû à la concentration locale élevée en motif sucre et d'autre part la capacité des RAFT multivalents à se lier à plusieurs lectines selon un effet « cluster ». Des études préliminaires ont également concerné l'analyse de l'interaction entre RAFT-RGD et des récepteurs cellulaires.
Dans un dernier chapitre, nous avons démontré, pour la première fois, la formation de films multicouches grâce à des interactions de type hôte-invité entre deux biopolymères de chitosane, l'un fonctionnalisés par des cavités Β-cyclodextrine et l'autre par des entités adamantane. Bien que la stabilité de l'assemblage soit assurée par des interactions de complexation multivalentes, la croissance de l'assemblage, quant à elle, dépend de la disponibilité des sites de complexation offerts par chacune des couches. De plus, les deux polymères chargés positivement confèrent à l'assemblage des propriétés de gonflement-dégonflement en réponse à des variations de force ionique et pH.
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Fournier, Nathalie. "Les familles de récepteurs à ITAM et à ITIM : caractérisation des molécules DCIR et FDF03 exprimées par les cellules dendritiques humaines." Lyon 1, 2000. http://www.theses.fr/2000LYO1T009.
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Achilli, Silvia. "Production recombinante de récepteurs lectines de type C et identification de ligands sélectif : de nouveaux outils pour la modulation du système immunitaire." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018GREAV014/document.
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Les lectines de type C (CLRs) sont des récepteurs impliqués dans la reconnaissance d’oligosaccharides et principalement exprimés à la surface des cellules présentatrices d’antigène (APCs) et notamment des cellules dendritiques (DCs), véritable sentinelle de notre système immunitaire. Elles sont impliquées dans la reconnaissance de motifs spécifiques exprimés à la surface d’agents pathogènes et sont capables de stimuler le système immunitaire afin de déclencher une réponse adaptée. Ce rôle crucial joué par les CLRs dans l’équilibre de la réponse immunitaire confère aux interactions CLR/glycane des perspectives d’applications pharmaceutiques. L’objectif à long-terme du projet de recherche dans lequel cette thèse s’intègre consiste à utiliser ces CLRs pour modeler les réponses du système immunitaire. A cette fin, des néoglycoconjugués spécifiques de chaque CLR doivent être développés. Au cours de cette thèse, 9 CLRs ont été produits BDCA2, DC-SIGN, DC-SIGNR, dectin-1, dectin-2, langerin, LSECtin, MCL and Mincle. Différentes stratégies de production ont été testées en parallèle, incluant des techniques d’adressage au périplasme en vue d’obtenir des protéines solubles et fonctionnelles et de l’expression cytoplasmique, sous forme de corps d’inclusion suivie d’étapes de renaturation qui s’est révélé la plus efficace au final. Une stratégie permettant de construire des tétramères artificiels de CLRs, appelés TETRALEC, a été mise au point. Cet outil permettant le criblage et la caractérisation des lectines a été obtenu avec DC-SIGNR par un marquage spécifique de la lectine. Le complexe TETRALEC a été caractérisé au niveau structural et des tests fonctionnels ont été menés sur des puces à glycanes et des cellules pathogènes. La série de CLRs que nous avons produites a été utilisée pour cribler des puces à glycanes et à glycomimétiques. Ces études nous ont permis de mettre en évidence des interactions dépendantes de l’environnement du glycane et d’identifier de nouveaux glycanes ou glycomimétiques spécifiques de certains CLRs. En effet, de manière étonnante, plusieurs des CLRs testés sont capables, pour un glycane donné, de discriminer des isomères de position ouvrant ainsi de nouveaux questionnements sur la signification biologique de cette sélectivité. De plus des glycomimétiques reconnaissant préférentiellement dectin-2 par rapport à DC-SIGN, DCSIGNR et langerin ont été identifiés. Le choix des glycomimétiques et l’évaluation des étapes de leur optimisation ont été permis par diverses études biophysiques qui ont quantifié la force et la spécificité des interactions. Ceci a permis le développement d’un ligand optimisé sélectif de DC-SIGN. La co-cristallisation de la protéine avec ce ligand a révélé un intéressant mode de liaison qui amène également de nouvelles questions. Simultanément à l’optimisation de ligands monovalents, un premier pas a été réalisé vers la conception d’une molécule pour permettre une vaccination contre le cancer médiée par les CLRs. Les résultats de SPR ont identifié des candidats potentiellement intéressants et des tests biologiques préliminaires ont été réalisésC-type Lectin Receptors (CLRs) are carbohydrate-binding proteins mainly expressed on Antigen Presenting Cells (APCs), including dendritic Cells (DCs), the sentinel of the innate immune system. They recognize pathogens or damaged cells by interacting with glycan features and the encounter between the CLR and its ligand constitutes a necessary step for the activation of the adaptive immune system. This crucial role played by CLRs in the balance of immune responses offers to CLR-glycan interactions pharmaceutical applications. The long-term objective of the research project in which this PhD is included is to use these CLRs as modulators in order to tailor the immune system responses. To do so, neoglyco-conjugates selective to each individual CLR have to be developed.Nine different CLRs were produced in this work: BDCA2, DC-SIGN, DC-SIGNR, dectin-1, dectin-2, langerin, LSECtin, MCL and Mincle.Several approaches have been explored in parallel for CLR production, ranking from bacterial periplasmic targeting, aiming to express soluble and functional protein, to inclusion bodies production into the bacterial cytoplasm, with subsequent protein refolding. Our collection of CLRs were used to screen glycan and glycomimetic arrays, highlighting context-dependent binding and identifying natural ligands or glycomimetics selective to each CLRs. Thus, several CLRs were surprisingly able to differentiate between positional isomers of a given N-Glycan, which opens new questions regarding the biological significance. Moreover, glycomimetics with a selectivity towards dectin-2 over DC-SIGN, DC-SIGNR and langerin CLRs have been identified.To guide the choice of the glycomimetics and estimate their optimisation, diverse biophysical studies were performed to evaluate the strength and specificity of the interaction. This enabled the development of an ultimate ligand selective towards DC-SIGN. A co-crystallised structure of the protein with this ligand revealed an interesting binding mode that also opens new questions.Simultaneously to monovalent ligand optimization, a first step towards the design of a highly defined molecule for cancer vaccination by CLR targeting was made. SPR results revealed potential candidates to exploit and preliminary biological assays were performed. Finally, a strategy for tetrameric lectin engineering as been explored, termed TETRALEC. This tool for screening and lectin characterization, has been obtained with one the lectin of the study, DC-SIGNR, by a site-specific labelling of the lectin. The TETRALEC complex was structurally characterised and functional assays were performed on glycan array and pathogen cells
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Ilias, Wassila. "Etude des mécanismes d'expression des ligands de NKG2D lors des syndromes lymphoprolifératifs." Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAJ051.
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Des lésions de l’ADN sont impliquées dans les mécanismes de l’oncogenèse. De plus, la prolifération incontrôlée des cellules tumorales induit l’accumulation d’aberrations géniques. En réponse à ce stress génotoxique, les cellules en transformation expriment les ligands NKG2D MICA et MICB, molécules du CMH de classe I non conventionnelles qui activent une réponse cytotoxique T et NK contre cette transformation. Dans les syndromes lymphoprolifératifs chroniques, les mécanismes de la leucémogenèse reposent essentiellement sur une stimulation antigénique ou une activation des voies du récepteur à l’antigène (BCR) qui induit la prolifération cellulaire. De plus, les ligands MICA/B ne sont pas retrouvés à la surface de ces cellules. Les objectifs de cette thèse sont (i) rechercher si l’activation de la prolifération lymphocytaire peut induire l’expression de MICA/B et (ii) étudier les mécanismes induisant cette expression et leurs liens avec les voies de lésions/réparations de l’ADN. Pour cela, nous avons mis en place des conditions d’activation du récepteur à l’antigène permettant d’obtenir une prolifération (objectivée après marquage par CFSE) de lymphocytes B sains et de lymphocytes issus de patients porteurs de leucémie lymphoïde chronique (LLC), la plus fréquente des leucémie de l’adulte. L’expression des ligands MICA et MICB a ensuite été évaluée par qPCR, cytométrie en flux, western blots et ELISA. L’implication des différentes voies de signalisation en aval du récepteur à l’antigène a été analysée, ainsi que la cinétique d’apparition des lésions de l’ADN durant ce processus. Mes résultats montrent que MICA/B ne sont pas exprimés à la surface des lymphocytes B issus de donneurs sains ou de patients porteurs de LLC. Cependant, l’activation de la prolifération lymphocytaire induit une activation transcriptionnnelle de MICA ainsi que son expression à la surface de ces cellules. Cette expression est induite par différentes voies du récepteur à l’antigène ainsi que par la voie JAK/STAT et est indépendante des lésions de l’ADN qui surviennent plus tardivement dans la cellule. Au total, l’activation du récepteur à l’antigène qui induit la prolifération lymphocytaire induit également l’expression du ligand MICA (et non MICB) à la surface des lymphocytes sains et cette capacité d’expression est conservée dans les cellules de LLC qui ne l’expriment pas. Ces résultats suggèrent que MICA pourrait jouer un rôle crucial aux stades précoces de l’immunité anti-proliférative, ce qui ouvre la voie à de potentielles applications thérapeutiquesTumor cell’s uncontrolled proliferation induces an accumulation of genetic aberrations. In response to this genotoxic stress, most cells in transformation express NKG2D ligands (not expressed on resting cells), including MICA and MICB, which are non-conventional MHC class I molecules that could induce a cytotoxic T and NK response against the transformed cell. In chronic lymphoproliferative conditions, leukemogenic mechanisms rely in part on antigenic stimulations and/or activation of the B cell antigen receptor (BCR) pathways that induce cell proliferation. My thesis aims at studying : (i) the induction of MICA/B expression during lymphocyte proliferation and (ii) the mechanisms inducing this expression and their relationship with the DNA damage/repair pathways.I did generate BCR activation conditions to obtain B cells proliferation from healthy control individuals and from patients suffreing from chronic lymphocytic leukemia (CLL), the most common leukemia in adults. MICA and MICB expression was assessed by quantitative PCR, flow cytometry, Western blotting and ELISA after activation of B-cell proliferation. The different signaling pathways downstream BCR were analyzed, as were the kinetics of the DNA damage during this process. The results show that MICA/B aren’t expressed on cell surface of B cells from healthy control individuals or CLL patients before activation. Lymphoproliferative stimulation however up-regulates both MICA mRNA and surface protein in these same cells. This expression was induced by several BCR and by JAK/STAT pathways and seems to be indpendant of DNA damage. In conclusion, antigen receptor activation that induces lymphocyte proliferation also induces MICA expression (but not MICB) on B cells surface from healthy control individuals and this expression capacity is conserved in B cells from patients suffering from CLL. These results suggest that MICA may play a crucial role in the early stages of anti-proliferative immunity, which opens the avenue for therapeutic interventions
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Valladeau, Jenny. "Caractérisation de récepteurs d'endocytose exprimés par les cellules dendritiques humaines et identification de la molécule Langerine." Lyon 1, 2000. http://www.theses.fr/2000LYO1T062.
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Porkolab, Vanessa. "Développement de ligands multivalents de nature glycomimétiques dirigés contre les récepteurs lectines de type-C." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016GREAV013/document.
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Les composantes innée et acquise de l'immunité travaillent ensemble pour assurer une protection efficace de l'organisme. Les cellules dendritiques, cellules sentinelles de l’immunité capturent via des récepteurs de surface les agents pathogènes et les présentent aux lymphocytes T pour stimuler les réponses immunitaires adaptatives spécifiques. Une famille de ces récepteurs, nommée Récepteurs Lectines de type C (CLRs) ont un rôle important dans la reconnaissance de motifs oligosaccharides des pathogènes. Leurs fonctions sont parfois détournées par certains pathogènes à leur avantage et notamment le VIH. La reconnaissance du virus par DC-SIGN, une des CLRs, favorise la dissémination du virus. A l’inverse, la langerine, autre CLR, est considérée comme une barrière naturelle au VIH. Ainsi, DC-SIGN est devenue une cible thérapeutique prometteuse mais sa reconnaissance des ligands osidiques est largement partagée par la langerine.Ce travail vise à développer des antagonistes de DC-SIGN spécifiques et de hautes affinités permettant de rivaliser avec la présentation multivalente des glycosylations de gp120 du VIH avec DC-SIGN. Une approche rationnelle a été employée dans le développement de ligands glycomimétiques hautement sélectifs pour DC-SIGN à partir de l’étude du site de liaison des deux CLRs. Puis, des plates-formes de présentations de ces glycomimétiques, de valences et de géométries différentes, sont comparées par SPR. Les améliorations spectaculaires d'affinités parfois observées sont liées à différents mécanismes d’interactions multivalentes responsables d’un phénomène d’avidité.Sur une des architecture de présentation sélectionnée (RODs), un travail de caractérisation fine des mécanismes responsables de ce gain d’affinité et/ou d’avidité a été conduit par la combinaison de plusieurs techniques biophysiques (SPR, ITC, polarisation de fluorescence et AUC). L’influence de la topologie de cette structure sur les mécanismes d’interactions est ainsi mise en évidence. Par les travaux menés, plusieurs ligands multivalents ont montré des affinités sans précédent pour DC SIGN atteignant des affinités du nanomolaire et représentant les meilleurs inhibiteurs connus à ce jour.Associé au développement d’antagonistes multivalents, une CLR (DCIR) a été identifiée récemment comme impliquée dans la dissémination du VIH, comme DC¬SIGN. Dans une perspective future de développement de glycomimétique, des travaux ont été menés sur la caractérisation structurale et fonctionnelle de ce nouvel acteur dans la problématique VIHThe innate and acquired immunity components work together to provide efficient protection of organisms. Dendritic cells, sentinel cells of the immunity, are able to capture pathogens through their receptors on the surface and they can present the antigens to lymphocytes T in order to stimulate specific adaptive immune responses. Among these receptors, there is a family named C-type lectin receptors (CLRs), which has an important role in the recognition of pathogenic oligosaccharide motifs. CLRs can be hijacked by many pathogens including HIV. DC-SIGN, one of the CLRs, interacts with the virus and promotes its dissemination. Unlike DC-SIGN, langerin, another CLR, has a protective role against the HIV infection. In this context, DC-SIGN became a promising therapeutic target but it shares ligand specificities with langerin.This work aims to develop highly specific antagonists against DC-SIGN in order to compete with the multivalent glycosylated gp120 protein of HIV. Using the study of the two lectins binding sites as starting point, a rational approach has been exploited to develop highly selective glycomimetics against DC SIGN. The SPR technique was used to investigate multivalent platforms with different valencies as well as ligand presentation in space. The amazing improvement of the affinity observed in some cases can be linked to different mechanisms of multivalent interactions, leading to an avidity phenomenon. On a selected scaffold (RODs), we characterized the different mechanisms responsible for the affinity and/or avidity gains, using a combination of different biophysical techniques (SPR, ITC, fluorescence polarization, AUC). In this work, we highlighted that the topology of this structure can influence the mechanisms of interactions. Overall, different multivalent ligands showed unique affinities for DC-SIGN, reaching the nanomolar affinity range, and they represent the best inhibitors to date.Finally, another CLR has been recently identified as one of the protein involved in the HIV infection as well as DC-SIGN. In a future perspective of glycomimetic development, structural and functional characterization has been done on this new actor involved in the HIV issue
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Choteau, Laura. "Le rôle de la Mannose-binding lectin dans l'homéostasie intestinale et dans l'élimination de Candida albicans." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S006/document.
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La maladie de Crohn (MC) est une maladie inflammatoire chronique de l’intestin qui peut être expliquée par une dysbiose et une dérégulation de la réponse immunitaire. La mannose-binding lectin (MBL), récepteur lectinique et les Toll-like récepteurs jouent un rôle crucial dans la défense contre les pathogènes et dans le développement de la réponse inflammatoire. Ils peuvent reconnaitre de nombreux micro-organismes dont Candida albicans. Cette levure commensale est un immunogène des anticorps anti-Saccharomyces cerevisiae (ASCA), anticorps utilisés dans le diagnostic de la MC. Une association entre un déficit en MBL et des taux élevés d’ASCA a été montrée chez les patients atteints de MC. Ce déficit en MBL est fréquemment associé à un phénotype sévère de la maladie. Le récepteur TLR2, associé à TLR1 ou à TLR6, est également impliqué dans la reconnaissance de C. albicans et le maintien de la barrière intestinale. L’objectif de ce projet a été d’étudier le rôle de la MBL et des récepteurs TLR2/TLR1/TLR6 dans l’homéostasie intestinale et l’élimination de C. albicans du tube digestif. Pour cela, nous avons exploré, les effets de la MBL et des TLR sur la colonisation intestinale à C. albicans et l’inflammation intestinale. Par ailleurs, nous avons déterminé, chez l’homme, l’influence des polymorphismes du gène MBL2 sur la modulation de l’activité et des taux de MBL au cours de la MC.A l’aide d’un modèle murin, nous avons mis en évidence l’expression de MBL-A et de MBL-C par les cellules épithéliales intestinales et leur implication dans l’homéostasie intestinale. Un déficit en MBL favorise la colonisation par C. albicans et une dissémination de la levure, en présence d’une colite chimio-induite. Les récepteurs TLR1 et TLR2 participent également dans la défense contre la colonisation par C. albicans, sans pour autant que leurs déficits n’entrainent de dissémination de la levure. A l’inverse, le récepteur TLR6 favorise la colonisation par C. albicans. La MBL et les récepteurs TLR1/TLR2/TLR6 régulent aussi l’expression des cytokines pro-inflammatoires impliquées dans les réponses Th1 et Th17. Ces résultats expérimentaux ont incité à envisager la poursuite de notre travail en approfondissant l’étude clinique sur des variations quantitatives et qualitatives de la MBL chez les patients atteints de MC et leur lien éventuel avec la persistance de l’inflammation intestinale. L’étude sur la cohorte de patients MC a montré que le gène MBL2 était associé à un déficit quantitatif en MBL et un déficit qualitatif du complexe MBL-MASP chez les sujets sains et les patients. Ce polymorphisme est également associé à des taux élevés d’ASCA chez les patients MC (p<0.05) de la maladie et il est fréquemment associé aux formes sévères de la maladie. De plus, le variant rs2066844 du gène NOD2, variant associé à la MC, est significativement corrélé à une diminution de l’activité fonctionnelle du complexe MBL-MASP, sans diminution quantitative des taux de MBL.Ces données montrent, pour la première fois, la production intestinale de MBL, qui est modulée par la colonisation par C. albicans. Elles confirment le rôle de la MBL et des récepteurs TLR dans l’homéostasie intestinale et dans la défense contre C. albicans. De plus, l’étude clinique sur la cohorte de patients MC révèle un défaut d’activité fonctionnelle du complexe MBL-MASP chez les patients MC ayant des polymorphismes des gènes MBL2 et NOD2, pouvant mener à un phénotype sévère de la maladie. Ces études expérimentales et cliniques apportent des nouvelles données sur le lien entre les récepteurs de l’immunité innée et la maladie de Crohn ainsi que la colonisation/infection fongique et ouvrent des nouvelles perspectives sur le lien entre la persistance de la colonisation fongique et le déficit quantitatif/qualitatif de la MBL chez les patients MCCrohn’s disease (CD) is an inflammatory bowel disease characterized by a dysregulation of the inflammatory response caused by dysbiosis and immune system disorders. Mannose Binding Lectin (MBL) and Toll like receptors (TLR) are involved in recognition of microorganisms and inflammatory response. They can recognize different patterns on the surface of the pathogens including Candida albicans. This pathogenic yeast is an immunogen for anti-Saccharomyces cerevisiae antibody (ASCA), diagnostic marker of CD. An association between MBL-deficiency and ASCA is observed in CD, and this MBL deficiency is frequently associated with a severe clinical phenotype of CD. In addition to MBL, TLR2, which forms heterodimers with either TLR1 or TLR6, have a major role in the innate immune defense against C. albicans and promotes intestinal homeostasis. In this project, we studied the role of MBL, TLR1, TLR2, and TLR6 in intestinal homeostasis and elimination of C. albicans in the intestinal tract. In the first part this study; we assessed the effect of either MBL or TLR deficiencies on C. albicans colonization and intestinal inflammation in a murine model. In the second part of this study, we assessed the role of MBL polymorphisms in the modulation of MBL level and activity in CD patients.In murin model, we showed that MBL is locally produced by the epithelial cells in response to C. albicans sensing and to intestinal inflammation and this lectin is required for the intestinal homeostasis. MBL-deficient mice had a higher level of colonization than wild-type mice. DSS-induced colitis promoted a high C. albicans colonization and dissemination to the kidneys and lungs of MBL-deficient mice. MBL-deficient mice exhibited reduced expression of Il-1β and IL-6 and elevated expression of IL-17, IL-23, dectin-1 and TLR-4. In terms of mice deficient in TLRs, DSS treatment and C. albicans oral challenge induced greater weight loss, worse clinical signs of inflammation, higher histopathologic scores, and increased mortality rates in TLR1-/- and TLR2-/- mice when compared to TLR6-/- and wild-type mice. Cytokine expression (TNF, IL-1β, IL-10, and IL-17A) was significantly increased in TLR1-/- and TLR2-/- mice, while they were decreased in TLR6-/- mice. In addition to the experimental studies, we observed in the clinical cohort of CD patients that MBL2 variant rs5030737 (codon 52) was associated with a low level of MBL that leads to impaired MBL-MASP functional activities in both CD patients and healthy subjects. Furthermore, this variant was also associated with a higher level of ASCA in CD patients (p<0.05). Increased ASCA levels were found in CD patients with stricture formation and penetrating disease complications, 42% and 21% respectively. Besides, we observed that NOD2 variant rs2066844, associated with susceptibility to CD, is significantly correlated with the impairment of the functional activity of MBL-MASP complex.Overall, this study emphasizes the role of MBL and TLR in intestinal homeostasis and host defense against C. albicans and shows for the first time that MBL could be produced locally in the intestinal epithelial cells in response to C. albicans sensing. In terms of the clinical study, we observed that CD patients with a severe clinical phenotype have an impairment in MBL-MASP functional activity, and that this defect is associated with MBL2 and NOD2 polymorphisms These experimental studies contribute to understand the link between innate immunity receptors, Crohn’s disease and fungal colonization/infection. Finally, this study leads to new objectives which are to study the link between intestinal microbiota and MBL variation in Crohn’s disease patients
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Truong-Maurice, Tu-anh Marie-José. "Les molécules fixant l'IgE et leur implication dans les fonctions effectrices des polynucléaires éosinophiles et neutrophiles." Lille 1, 1993. http://www.theses.fr/1993LIL10101.
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La participation des éosinophiles dans les maladies allergiques et dans les parasitoses nous a conduit à la caractérisation des récepteurs pour l'IgE des éosinophiles. Des études de fluorométrie et de northern blot ont permis de confirmer la faible expression du cd23 par les éosinophiles. La fixation de l'IgI et la cytotoxicité IgE-dépendante des éosinophiles sont inhibées par tous les anticorps anti-cd23 testés. Ces résultats nous ont conduit à utiliser l'adnc du cd23 comme sonde pour cribler une banque d'adnc d'éosinophiles. Cette stratégie n'a pas abouti à l'obtention de clone correspondant au cd23 mais a permis le clonage d'une molécule hla de classe i non classique, hla-e. Ces résultats suggéraient qu'au niveau des éosinophiles : 1) l'arnm cd23 soit très faiblement représenté ; et 2) les molécules liant l'IgE puissent être différentes du cd23. Notre intérêt s'est ainsi porté sur les lectines mac-2/IgEbp fixant les carbohydrates et l'IgE. Nous avons démontré que les eosinophiles expriment l'arnm mac-2/IgEbp ainsi que la protéine correspondant de 29 kd. Les anticorps anti-mac-2 inhibent, de manière dose-dépendante, la fixation de l'IgE et l'adcc IgE-dépendante des éosinophiles. Ces résultats indiquent qu'en plus des molécules cd23, les lectines mac-2/IgEbp jouent également un rôle dans les mécanismes d'adcc. Nous avons pu aussi identifier un nouveau mécanisme d'activation cellulaire mettant en jeu les neutrophiles. En effet, les interactions récepteurs-ligands (IgE-anti-IgE, anticorps IgE-antigène) induisent une augmentation du métabolisme oxydatif des neutrophiles via mac-2. Ces résultats ouvrent ainsi de nouvelles perspectives sur le rôle des neutrophiles dans les maladies à IgE
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Seignole, Didier. "Contribution à l'étude des récepteurs responsables de l'adhésion des Escherichia coli K88 et K99 à l'épithélium intestinal de porcelet." Limoges, 1993. http://www.theses.fr/1993LIMO0215.
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Les escherichia coli enterotoxinogenes porteurs des lectines k88 (ab, ac et ad) provoquent des diarrhees severes chez le porcelet. Des interactions lectine-glycoconjugues membranaires intestinaux sont responsables de la colonisation de l'intestin. Chez le porcelet, les recepteurs des lectines k88ab et ac sont transmis genetiquement. Il existe de ce fait des animaux de phenotype adhesif et de phenotype non adhesif. E. Coli k88ab#+ s'attache a 7 glycoproteines ayant des masses moleculaires comprises entre 30 et 94 kda et e. Coli k88ac#+ a deux glycoproteines 220 et 260 kda membranaires de type mucine. La lectine k88ac reconnait les structures gal1-4glcnac et gal1-3galnac qui sont retrouvees dans les mucines et les groupes sanguins. Il est a noter que les interactions etablies entre la glycoproteine receptrice et la lectine mettent en jeu egalement le fucose et l'acide sialique. L'acide sialique n'intervient pas dans la liaison quand l'oligosaccharide est separe de la partie proteique. L'hypothese de la liaison entre les recepteurs et les structures de groupes sanguins a, h et lewis est envisagee. Il a ete mis en evidence deux phenotypes d'adhesion vis-a-vis d'e. Coli k99#+ chez le porcelet. Un rapport acides sialiques/oses neutres superieur chez le phenotype adhesif semble etre responsable de l'attachement par l'apport de charges negatives. La sequence neuac2-3gal dans les glycoproteines etablit des interactions specifiques avec la lectine k99. Celle-ci reconnait specifiquement les glycolipides et notamment le gm#3gc et le spggc. Nous demontrons que la presence des glycolipides polysialyles: gd, gt et gq est reliee au type adhesif alors que les animaux de type non adhesif n'expriment que des gangliosides monosialyles de type gm#2. Le controle genetique des voies de biosynthese est examine
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Lucas, Hervé. "Etude des glycoprotéines pellucidaires fucosylées et de leurs récepteurs spermatiques." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05CD12.
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La zone pellucide (ZP) est une enveloppe acellulaire transparente qui entoure l'ovocyte et l'embryon de mammifère jusqu'à son implantation. Au cours de l'interaction gamètique, elle intervient dans la reconnaissance et la fixation des spermatozoi͏̈des, dans le déclenchement de la réaction acrosomique ainsi que dans le blocage de la polyspermie. Trois glycoprotéines appelées ZP1, ZP2 et ZP3 composent la zone pellucide murine mais la composition de la zone pellucide humaine est encore imparfaitement connue. C'est pourquoi nous avons cherché à caractériser la structure pellucidaire humaine en électrophorèse après biotinylation des protéines et avons étudié ses glycoconjugués, en blot et en cytochimie, à l'aide de lectines et d'anticorps anti-oligosaccharides. La zone pellucide humaine se compose de trois protéines majoritaires appelées ZP1, ZP2 et ZP3 ainsi que d'une glycoprotéine polymérique minoritaire de 180 kDa. Les glycoconjugués Lewis b, sialyl-Lewis a et sialyl-Lewis x se retrouvent également dans la composition des chaînes saccharidiques des zones pellucides humaines. D'autre part, nous avons testé les lectines AAL et LTA ainsi que les anticorps anti-Lewis b, anti-sialyl-Lewis a et anti-sialyl-Lewis x dans le cadre de tests de fixation pellucidaire des spermatozoi͏̈des. Ces deux lectines ainsi que les anticorps anti-Lewis b et anti-sialyl-Lewis a inhibent significativement la fixation des spermatozoi͏̈des. De même, les néoglycoconjugués Lewis b, sialyl-Lewis a et syalyl-Lewis x inhibent significativement la fixation des spermatozoi͏̈des aux ZP. Nous avons pu localiser la fixation du néoglycoconjugué Lewis b sur la portion acrosomique des spermatozoi͏̈des humains. Avec cette même localisation, un anticorps anti L-sélectine marquait les spermatozoi͏̈des capacités. L'ensemble de ces résultats permet de mieux définir la composition protéique et saccharidique de la ZP humaine et nous avons identifié des glycoconjugués intervenant dans la fixation des spermatozoi͏̈des par l'intermédiaire de récepteurs qui restent à caractériser.
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Grange, Philippe. "Les récepteurs intestinaux des ECET K88 dans l'espèce porcine : caractérisation d'une glycoprotéine reconnue par la lectine K88ab." Limoges, 1995. http://www.theses.fr/1995LIMO0008.
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Les e. Coli porteurs des fimbriae k88 provoquent des diarrhees chez le porcelet. E. Coli reconnait des glycoconjugues du mucus intestinal et de la surface des enterocytes. La sensibilite a l'infection se transmet selon une segregation mendelienne aboutissant a des phenotypes sensibles (dominants) et resistant (recessif) se traduisant pour le premier par l'adhesion des bacteries aux enterocytes. Nous avons etudie les recepteurs d'e. Coli k88ab sur une population porcine f#2 issus de large white et meishan. Des glycoproteines du mucus, de 42 a 49 kda, sont plus fortement reconnues chez les porcelets resistants que chez les porcelets sensibles. Elles pourraient contribuer a l'elimination des bacteries par le peristaltisme intestinal. En revanche, une glycoproteine de 74 kda, fortement liee a la membrane des enterocytes, est reconnue par e. Coli k88ab, exclusivement chez les porcelets adhesifs ; ce recepteur est une transferrine et elle participe a la definition du phenotype de l'animal. Chez les animaux de phenotype adhesif, la proteine possede un glycanne monosialyle et monofusosyle de type n-acetyllactosaminique alors que la chaine glycannique des serotransferrines sont des hybrides complexes. Ainsi, la glycosylation des transferrines depend du tissu
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Pitarque, Sylvain. "Bases moléculaires de la liaison des mycobactéries au récepteur DC-SIGN." Toulouse 3, 2006. http://www.theses.fr/2006TOU30220.
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M. Tuberculosis se lie aux cellules dendritiques par l'intermédiaire d'une lectine de type C (DC-SIGN). Des études antérieures ont suggéré que DC-SIGN puisse différencier une espèce mycobactérienne pathogène M. Tuberculosis d'une espèce non pathogène M. Smegmatis. Ce phénomène semblait être attribué à une structure particulière des coiffes mannosylées du lipoarabinomannane (ManLAM). Durant ma thèse, nous avons montré que DC-SIGN est capable de différencier les espèces appartenant au complexe tuberculosis des autres espèces. Cependant, nos résultats indiquent que la discrimination par DC-SIGN n'est pas due à une structure particulière des coiffes ou à la localisation du ManLAM, et que d'autres ligands pourraient intervenir dans la liaison, telles que les glycoprotéines. Ainsi, la liaison entre DC-SIGN et les espèces du complexe tuberculosis semble plus compliqué que se que l'on avait imaginé et résulterait de la liaison coopérative de plusieurs ligandsM. Tuberculosis binds to dendritic cells through a C-type lectin (DC-SIGN: dendritic cell-specific ICAM-3 Grabbing Non integrin). Previous studies suggested that DC-SIGN differentially binds to the pathogenic M. Tuberculosis and the non-pathogenic M. Smegmatis. This feature has been tentatively attributed to differencies in the LAM cap structures. During my thesis, we enlarged this finding by showing that DC-SIGN is able to discriminate M. Tuberculosis complex species from others species whatever their pathogenic status. Furthermore, we showed that this differential binding cannot be associated to LAM cap structures or localization, but rather to the presence of other potential ligands including glycoproteins. Thus the binding between DC-SIGN and the M. Tuberculosis complex species appears to de more complicated then previously suspected and seems to be due to cooperative interaction of DC-SIGN with several ligands
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Lefèvre, Lise. "Rôle de la polarisation M2 des macrophages dans le contrôle d'infections fongiques et parasitaires : implication des récepteurs nucléaires PPARgamma et LRH-1 et des récepteurs lectine de type C." Toulouse 3, 2013. http://www.theses.fr/2013TOU30088.
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Les macrophages, cellules clés de la réponse immune innée, possèdent une remarquable plasticité phénotypique et fonctionnelle qui leur permet de s'adapter aux différents signaux présents dans leur microenvironnement. Parmi ces éléments, l'état inflammatoire général et métabolique de l'individu, ainsi que la présence d'agents étrangers potentiellement pathogènes vont influencer l'état de polarisation des macrophages. Dans ce travail de thèse, nous nous sommes plus particulièrement intéressés à deux types de facteurs environnementaux (i) le diabète de type 2, caractérisé par une inflammation à bas bruit et une susceptibilité accrue aux infections fongiques (ii) une infection parasitaire, la leishmaniose viscérale. Nous avons montré qu'une insulino-résistance engendrée par un régime hyperlipidique induit une polarisation inflammatoire M2b des macrophages associée à une susceptibilité accrue à une infection candidosique gastro-intestinale. Nous avons ensuite démontré que des ligands du récepteur nucléaire PPAR? orientent la polarisation M2b vers un phénotype M2a, efficace pour l'élimination de Candida albicans. Cette différenciation est caractérisée par la surexpression des récepteurs membranaires Dectine-1 et Mannose (MR), deux récepteurs lectine de type C impliqués dans l'internalisation de cette levure par le macrophage et dans la production d'intermédiaires réactifs de l'oxygène. Ce travail est publié dans PLoS One 2010 Sep 20;5(9):e12828. Doi: 10. 1371/journal. Pone. 0012828. Ainsi, approfondir les voies de signalisation conduisant à l'activation de PPARgamma présente un intérêt thérapeutique majeur. Lors de ce travail de thèse, nous nous sommes intéressés au récepteur nucléaire LRH-1, connu pour réguler l'expression d'enzymes impliquées dans la synthèse de dérivés d'acides gras, ligands potentiels de PPARgamma. Nous avons démontré l'implication de LRH-1 dans la polarisation M2. LRH-1 serait impliqué dans la production de ligands endogènes de PPARgamma et ainsi dans son activation. Nous avons également montré que les souris déficientes pour LRH-1 spécifiquement dans les macrophages présentent une susceptibilité accrue aux infections candidosiques avec des fonctions microbicides associées à la polarisation M2 altérées. Ces résultats suggèrent que LRH-1 pourrait être une nouvelle cible thérapeutique dans le traitement des infections fongiques en favorisant la production de ligands de PPARgamma et une polarisation M2 bénéfique pour l'hôte. Ce travail est actuellement en cours de soumission. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons étudié l'influence d'une leishmaniose viscérale sur la polarisation des macrophages. De façon originale, nous avons montré l'induction d'un phénotype M2b-like des macrophages en présence de Leishmania infantum, associé à une surexpression de trois récepteurs lectine de type C (Dectine-1, MR et SIGNR3/DC-SIGN). Nous avons également démontré que ces récepteurs influençaient le devenir de l'infection à L. Infantum. Ainsi, les récepteurs Dectine-1 et MR interviennent dans l'entrée de Leishmania dans les macrophages et la production d'intermédiaires réactifs de l'oxygène et de médiateurs inflammatoires lipidiques et cytokiniques, tels que le leucotriène B4 (LTB4) et l'interleukine 1beta, qui permettent l'élimination du parasite. Inversement, SIGNR3/DC-SIGN participe à la phagocytose de Leishmania et favorise la prolifération du parasite en inhibant l'activité microbicide des macrophages. Ce travail réalisé sur des souris invalidées pour ces récepteurs lectine a été confirmé dans des macrophages humains et mettent en évidence le rôle divergent de ces lectines de type C et des voies de signalisation qui leur sont associées dans la pathogenèse de la leishmaniose viscérale. Ce travail démontre l'importance de l'axe lectines/LTB4/LXA4 dans le contrôle de la production de médiateurs inflammatoires responsables de l'élimination des parasites, axe qui constitue donc une cible de premier ordre pour le traitement et la prévention de la leishmaniose viscérale. Ainsi, la modulation de ces facteurs cellulaires et moléculaires pourrait permettre d'orienter l'interaction Leishmania-macrophage pour le bénéfice du patient. Ce travail est publié dans Immunity, 2013, May 23;38(5):1038-49. Doi: 10. 1016/j. Immuni. 2013. 04. 010Macrophages are key cells of the innate immune response and have phenotypic and functional plasticity which allows them to adapt to their microenvironment. Among these signals, the inflammatory and metabolic states, as well as the pathogenic agents, will influence the macrophage polarization. In this work, we focused on two environmental factors (i) the type 2 diabetes, characterized by a low grade inflammation and an increased susceptibility to fungal infections (ii) a parasitic infection, the visceral leishmaniasis. We have shown that a high fat diet induced-insulin resistance promoted an inflammatory M2b polarization of macrophages associated with an increased susceptibility to gastrointestinal candidiasis. We then demonstrated that ligands of the nuclear receptor PPARgamma shift the M2b polarization toward M2a phenotype, effective to eliminate Candida albicans. This macrophage polarization is characterized by the overexpression of Dectin-1 and Mannose (MR), two membrane macrophage C-type lectin receptors involved in the yeast internalization and in the production of reactive oxygen intermediates (ROS). This work is published in PLoS One, 2010, September 20, 5 (9): e12828. Doi: 10. 1371/journal. Pone. 0012828. Thus, the study of the signaling pathways leading to PPAR? activation could be of therapeutic interest during fungal infections. Therefore, we focused on the LRH-1 nuclear receptor, known to regulate the expression of enzymes involved in the synthesis of potential PPARgamma ligands. Here, we demonstrated for the first time the involvement of LRH-1 in the M2 macrophage polarization. Indeed, LRH-1 is implicated in the production of PPARgamma endogenous ligands and hence in its activation. We also showed that mice deficient for LRH-1 specifically in macrophages exhibit increased susceptibility to Candida albicans infection, associated with altered M2 polarization related-candidacidal functions. These results suggest that LRH-1 could be a novel therapeutic target in the treatment of fungal infections, promoting M2 polarization favorable for the host. This work is currently under submission. In the second part of this work, we studied the influence of visceral leishmaniasis on the macrophage polarization. Interestingly, we report that the macrophage response in vivo against Leishmania infantum is characterized by a M2b-like phenotype displaying a C-type lectin receptors signature composed of Dectin-1, MR and the DC-SIGN homologue SIGNR3. We also demonstrated that these receptors influenced the outcome of L. Infantum infection. Indeed, Dectin-1 and MR are involved in the L. Infantum internalization by macrophages and in the production of ROS, inflammatory bioactive lipids, and cytokines such as leukotriene B4 (LTB4) and interleukin 1beta, which enable parasite elimination. By contrast, SIGNR3/DC-SIGN favors parasite resilience through inhibition of the microbicidal functions of macrophages. Confirmation of these results in primary human macrophages highlights the divergent role for these C-type lectin receptors to the pathogenesis of Leishmania infantum. This work demonstrates the importance of lectins/LTB4/LXA4 axis in the control of the inflammatory mediator's production responsible for parasite elimination. Our findings suggest that effective modulation of these cellular and molecular factors might shift the Leishmania-macrophage interaction for the benefit of the patient. This work is published in Immunity, 2013, May 23;38(5):1038-49. Doi: 10. 1016/j. Immuni. 2013. 04. 010
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Giamarchi, Aurélie. "Les récepteurs-canaux polycystines : assemblage moléculaire et fonctions." Aix-Marseille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009AIX20681.
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Brument, Sami. "Ligands multivalents pour l'interaction par effet chélate avec les récepteurs nicotiniques et les lectines AFL et DC-SIGN." Thesis, Nantes, 2016. http://www.theses.fr/2016NANT4029.
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Les reconnaissances cellulaires sont souvent promues par des interactions multiples et simultanées entre des ligands et leurs récepteurs spécifiques. Ce principe de multivalence a inspiré la communauté scientifique pour accroitre l’affinité d’un ligand synthétique son récepteur. Différents effets de multivalence ont été identifiés parmi lesquels l’effet chélate basé sur l’interaction simultanée d’un ligand avec plusieurs sites de reconnaissance d’une protéine. Nous avons développé durant cette thèse trois séries ligands multivalents pour obtenir un effet chélate avec trois cibles : les récepteurs nicotiniques et les lectines AFL et DC-SIGN. Aspergillus fumigatus est un pathogène adhérant aux récepteurs fucosylés via la lectine hexavalente AFL. Nous avons développé des fucosides di-, hexa- et polyvalent dont les affinités pour AFL ont été évaluées par microcalorimétrie et par test cellulaire. Cela nous a permis d’identifier un ligand hexavalent capable d’inhiber l’adhésion cellulaire des spores d’ A. fumigatus à des concentrations micromolaires. DC-SIGN est une lectine tétramérique reconnaissant les motifs mannose et utilisée comme voie d’entrée infectieuse par le cytomégalovirus. Plusieurs structures à faible et haute valence (2, 4 et 89) de mannose nous ont permis d’obtenir des composés très affins pour cette lectine avec des IC50 de l’ordre du nanomolaire lors de tests d’adhésion cellulaire. Enfin, nous avons développé des séries de composés multivalents pour l’interaction avec les récepteurs nicotiniques pour une application potentielle aux maladies neurodégénératives. Ces ligands ont montré des propriétés antagonistes de l’acétylcholine sur des récepteurs de type α7Cell recognitions are often promoted by multiple and simultaneous interactions between ligands and their specific receptors. This concept of multivalency has inspired the scientific community to increase the affinity of a synthetic ligand for his receptor. Various effects of multivalency have been identified, including the chelate binding mode based on the simultaneous interactions of a ligand with several binding sites of a protein. During this thesis, we have developed three families of multivalent structures to reach a chelate binding mode with three proteins: the nicotinic receptors and the DCSIGN and AFL lectins. Aspergillus fumigatus is a pathogen adhering to the fucosylated receptors through the hexavalent lectin AFL. We have developed di-, hexa and polyvalent fucosides whose affinities for AFL were evaluated by microcalorimetry and cellular assays. We identified a hexavalent ligand able to inhibit the cell adhesion of A. fumigatus spores at micromolar concentrations. DC-SIGN is a tetrameric lectin binding to mannose units, used in an infectious pathway by the cytomegalovirus. Several structures at low and high valency (2, 4 and 89) of mannose allowed us to reach high affinity for this lectin with IC50 in nanomolar range in the cell adhesion tests. Finally, we developed a series of multivalent compounds to interact with the nicotinic receptors for an application in neurodegenerative diseases. These ligands have shown antagonist properties on acetylcholine α7 type receptor
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Miquel, Fabre Françoise. "Propriétés érythroagglutinantes et mitogéniques d'une lectine (DLA) extraite de Dolichos Lablab L. Caractérisation de ses récepteurs membranaires impliqués dans la stimulation lymphocytaire." Montpellier 1, 1989. http://www.theses.fr/1989MON13504.
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Flan, Benoît. "La glycosyl-daunorubicine, un modèle d'étude pour le ciblage cellulaire de medicaments." Lille 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LIL10059.
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L'existence dans le règne animal de lectines membranaires conduisant à l'endocytose de leur ligand et à son hydrolyse dans les lysosomes, a permis d'envisager le couplage sur le ligand d'un principe actif afin de diriger celui-ci dans l'organisme et de lui permettre d'atteindre sa cible endocellulaire après libération dans le lysosome. Afin d'envisager l'utilisation des glycannes dans le ciblage des médicaments par glycosylation, nous démontrons que ceux-ci interagissent avec le récepteur du galactose des hépatocytes de rat de la même manière que les glycoprotéines et les glycopeptides et que cette interaction entraîne leur endocytose. La mise au point de la synthèse et de la purification de conjugués de la daunorubicine ou DNR (substance anticancéreuse dont la cardiotoxicité limite l'usage en thérapeutique) à des oligosaccharides nous permet de preparer un conjugue de DNR au lactose dont l'action sur les cellules d'hépatome humain hepG2 qui possèdent le récepteur membranaire du galactose a été étudiée. Nos travaux montrent que le conjugué « lactityle-DNR » est capable de pénétrer à l'intérieur des cellules hepG2 et exerce un effet cytostatique mis en évidence par les techniques des courbes de survie, de l'incorporation de thymidine tritiée et de la cytofluorometrie de flux, comparable à celui de la DNR. Ils suggèrent la possibilité d'une interaction spécifique de ce conjugué avec le récepteur du galactose. Les intérêts potentiels de ce conjugué sont discutés
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Lopez, Robles Maria Dolores. "Étude de CLEC-1, un récepteur lectin-like de type C dans la fonction des cellules dendritiques et la tolérance immune." Thesis, Nantes, 2017. http://www.theses.fr/2017NANT1025.
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Les cellules dendritiques (DCs) sont essentielles pourconnecter l'immunité innée et adaptative et orienter lesréponses des lymphocytes T. Les récepteurs Lectin de type-Cprésents dans les DCs sont activés par des ligands exogènes etendogènes, ce qui dicte la réponse aux agents pathogènes parla modulation de la réponse T immunitaire. Nous avons déjàdécrit chez le rat, l'expression de CLEC-1 dans les DCs etnous avons démontré in vitro son rôle inhibiteur dansl'activation de la réponse T helper (Th17) ). Dans cette étude,nous avons examiné l'expression et la fonction de CLEC-1dans les DCs humaines et nous avons montré son expression àla surface cellulaire de la sous-population de DCs CD16- dansle sang et sur les DCs dérivées des monocytes (moDCs).L'expression de CLEC-1 sur les moDCs est diminuée par desstimuli inflammatoires et renforcée par le TGF-β. De plus,nous avons démontré que CLEC-1 est un récepteurfonctionnel sur les moDCs humains et que, bien qu'il nemodule pas la voie classique d’activation du facteur detranscription NFкB lié à la protéine kinase Syk, il réprime laréponse ultérieure Th17. De façon très importante, en utilisantdes rats déficients pour CLEC-1, nous avons montré que laperturbation de la signalisation de CLEC-1 conduit à unesurexpression de la sous-unité Il-12p40 dans les DCs, et à uneexacerbation des réponses CD4+ Th1 et Th17 in vitro et invivo. Collectivement, nos résultats établissent le rôleinhibiteur de CLEC-1 dans les DCs, capable d'amortir leuractivation et la réponse ultérieure Th17. CLEC-1 peutreprésenter une cible thérapeutique utile pour moduler lesréponses immunitaires T dans un contexte cliniqueDendritic cells (DCs) represent essential antigen-presentingcells that are critical for linking innate and adaptive immunity,and influencing T-cell responses. Among pattern recognitionreceptors, DCs express C-type lectin receptors triggered byboth exogenous and endogenous ligands, therefore dictatingpathogen response, and also shaping T-cell immunity. Wepreviously described in rat, the expression of the orphan Ctypelectin-like receptor-1 (CLEC-1) by DCs anddemonstrated in vitro its inhibitory role in downstream Thelper 17 (Th17) activation. In this study,we examined theexpression and functionality of CLEC-1 in human DCs, andshow a cell-surface expression on the CD16+ subpopulation ofblood DCs and on monocytederived DCs (moDCs). CLEC-1expression on moDCs is downregulated by inflammatorystimuli and enhanced by TGF- β. Moreover, we demonstratethat CLEC-1 is a functional receptor on human moDCs andthat although not modulating the spleen tyrosine kinase (Syk)dependent canonical nuclear factor-kB (NFкB) pathway,represses subsequent Th17 responses. Importantly, usingCLEC-1–deficient rats, we showed that disruption of CLEC-1signaling led to an enhanced Il-12p40 subunit expression inDCs, and to an exacerbation of downstream in vitro and invivo CD4+ Th1 and Th17 responses. Collectively, our resultsestablish a role for CLEC-1 as an inhibitory receptor in DCsable to dampen activation and downstream effector Thresponses. As a cell-surface receptor, CLEC-1 may representa useful therapeutic target for modulating T-cell immuneresponses in a clinical setting
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Ala, Eddine Mohamad. "Impact de l'IL-13 dans l'acquisition des fonctions tumoricides des macrophages : rôle des récepteurs lectine de type-C et implication dans la progression d'un lymphome T." Thesis, Toulouse 3, 2016. http://www.theses.fr/2016TOU30065.
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Les macrophages associés aux tumeurs (TAMs) proviennent des monocytes circulants attirés par l'inflammation chronique due à la tumeur. Ces monocytes vont se différencier en une variété de macrophages en fonction des médiateurs présents dans le microenvironnement tumoral. Ainsi, il est admis que les macrophages peuvent stimuler la croissance tumorale (macrophages classiquement appelés M2), mais peuvent aussi reconnaitre et éliminer spécifiquement les cellules transformées (macrophages M1). Cette dichotomie fonctionnelle est dépendante du stade de développement cancéreux et plus spécifiquement de l'évolution du microenvironnement tumoral. De manière générale, l'infiltration et la densité élevée des TAMs au niveau de la tumeur sont corrélées à un mauvais pronostic et de ce fait les TAMs sont considérés comme une cible thérapeutique importante. Dans ce travail de thèse, nous nous sommes attachés dans un premier temps à caractériser le phénotype et les fonctions des macrophages au cours de l'évolution de la tumeur. La mise en place d'un modèle murin préclinique de lymphome T (cellules EL4) nous a permis de montrer que les macrophages présents à un stade tardif du développement tumoral, sont capables de stimuler la prolifération des cellules tumorales. Ces macrophages produisent des facteurs pro-angiogéniques, comme le TGF-ß, et immunosuppresseurs, comme l'IL-6, l'IL-10 et l'Indoléamine dioxygénase (IDO). De manière intéressante, nous avons démontré la capacité de l'IL-6, sécrétée en grande quantité dans l'ascite tumorale, à induire la différenciation des macrophages résidents en macrophages M2 pro-tumoraux. Inversement, nous avons montré que des macrophages murins résidents activés par l'IFN-? ou l'IL-13, cytokines non présentes dans l'ascite tumorale, acquièrent un phénotype anti-tumoral. Alors que l'IFN-? est connu pour induire un macrophage M1 présentant un puissant potentiel tumoricide, nous montrons que l'IL-13, qui polarise les macrophages vers un phénotype alternatif (M2), peut aussi différencier les macrophages vers un phénotype anti-tumoral. Dans ce contexte, nous avons étudié les mécanismes anti-tumoraux des macrophages polarisés par l'IL-13 vis-à-vis des cellules lymphoblastoïdes T. De façon originale, nous avons montré que les macrophages activés par l'IL-13 induisent la nécrose des cellules EL4, en produisant des radicaux libres oxygénés (RLO) et en déplétant l'arginine par l'augmentation de l'activité arginase. Nous avons également montré que les récepteurs Mannose et Dectine-1(Récepteurs Lectine de type-C), fortement exprimés par les macrophages activés par l'IL-13, reconnaissent les cellules tumorales et déclenchent la production des RLO en activant la voie Syk-P47phox. Ils induisent aussi la surexpression de l'arginase en activant la libération d'acide arachidonique et la production des HETEs (acide hydroxy-eicosatétraénoïque), agonistes naturels du récepteur nucléaire PPAR?. De plus, nous avons pu valider, in vivo, la capacité de l'IL-13 à reprogrammer les macrophages pro-tumoraux associés au lymphome T vers un phénotype anti-tumoral et à induire une régression de la tumeur. Ces résultats ont été confirmés par la diminution de la charge tumorale des souris porteuses de lymphome T, après un transfert adoptif des macrophages activés par l'IL-13. Enfin, nous avons établi que l'IL-13 active aussi les fonctions anti-tumorales des macrophages dérivés de monocytes humains contre diverses cellules tumorales humaines. Ce travail illustre la complexité du paradigme M1/M2 dans la description des fonctions pro- et anti-tumorales des macrophages. Ainsi, nos travaux démontrent la capacité de l'IL-13 à stimuler les défenses anti-tumorales des macrophages dans le cadre d'un lymphome T. Ce travail montre également que la modulation efficace des récepteurs Mannose et Dectine-1 par l'IL-13 pourrait permettre d'orienter l'interaction " cellules tumorales-macrophages " pour le bénéfice de l'hôteTumor-associated macrophages (TAMs) are derived from circulating monocytes attracted by the chronic inflammation in the tumor. These monocytes differentiate into a variety of macrophages according to the mediators present in tumor microenvironment. Thus, it is known that macrophages can stimulate tumor growth (usually called M2 macrophages) but may also, in other circumstances, specifically recognize and eliminate transformed cells (M1 macrophages). This functional dichotomy is dependent on the stage of cancer development and specifically on tumor microenvironment. In general, the infiltration and the high density of TAMs in the tumor are associated with poor prognosis and consequently, TAMs might be an important therapeutic target. In this work, we first focused on the phenotype and the functions of the macrophages associated to tumor progression. The use of a preclinical mouse model of T-cell lymphoma (EL4 cells) has shown that macrophages associated to the late stage of tumor development stimulate EL4 tumor cell proliferation. These macrophages produce pro-angiogenic factors like TGF-ß and immunosuppressive mediators, such as IL-6, IL-10 and Indoleamine dioxygenase (IDO). Interestingly, we have shown that IL-6, highly secreted in tumor ascites, can improve protumoral functions of resident macrophages. Conversely, murine resident macrophages activated by IFN-? or IL-13, cytokines not detected in the tumor ascites, acquire an antitumor phenotype. While IFN-? is known to induce M1 macrophages with a powerful tumoricidal potential, we report that IL-13, which stimulate alternative phenotype (M2) of macrophages, can induce antitumor functions of macrophages. In this context, we studied the antitumor mechanisms of IL-13-activated macrophages against T-lymphoma cells. We report that IL-13-activated macrophages exert antitumor activity by promoting T-lymphoma cell necrosis through ROS release and arginase induced-L-arginine depletion. In fact, L-arginine degrading enzymes have been suggested as antitumor agents against multiple tumor lineages auxotrophic for L-arginine. We have also shown that the activation of IL-13-activated macrophages antitumor functions is dependent on the tumor cell recognition by mannose and dectin-1 receptors (C-type Lectin Receptors). Indeed, after recognition, these receptors that are overexpressed by IL-13-activated macrophages, activate Syk-P47phox pathway for ROS production and arachidonic acid-HETEs (hydroxy-eicosatetraenoic acid)-PPAR? axis for arginase activity. Moreover, IL-13 improves T-cell lymphoma regression in tumor-bearing mice through its ability to reprogram TAMs toward cytotoxic effectors. This was supported by a decrease of tumor burden in tumor-bearing mice after adoptive transfer of IL-13-activated macrophages. Finally, we established that IL-13 activates human monocyte-derived macrophages to become tumoricidal against various human tumor cells. This work shows the complexity of the M1/M2 paradigm in the description of pro- and antitumor functions of macrophages. Thus, our findings demonstrate the ability of IL-13 to stimulate macrophage antitumor activities, in the context of T-cell lymphoma. This work also suggests that effective modulation of mannose and dectin-1 receptors by IL-13 might shift the "tumor cells-macrophages" interaction for the host benefit
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Navarro-Sanchez, Martha-Erika. "La lectine de surface DC-SIGN (CD209) des cellules dendritiques myéloïdes a un rôle essentiel dans la pathogénie de la dengue." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077143.
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Le virus de la dengue (VDEN) est un flavivirus transmis par le moustique vecteur qui peut causer une fièvre hémorragique chez l'Homme. Dans le cycle naturel d'infection, le VDEN est introduit dans la peau humaine par l'intermédiaire du moustique vecteur infecté et pourrait cibler les cellules dendritiques immatures lors de la première étape de l'infection. Nous montrons que DC-SIGN fixe le VDEN dérivé des cellules de moustique et permet la réplication virale. Des preuves de l'implication de DC-SIGN dans l'infection par la VDEN ont été obtenues par inhibition de l'infection virale avec des anticorps anti-DC-SIGN et avec l'ectodomaine tétramérique soluble de DC-SIGN. Nos données montrent que les interactions entre la protéine E du VDEN, l'unique glycoprotéine mannosylée présente sur les particules virales, et DC-SIGN sont essentielles pour l'infection des DCs par le VDEN. La fixation des N-glycanes mannosylés de la protéine E du VDEN à DC-SIGN déclenche une internalisation efficace et rapide de la glycoprotéine virale. Cependant, nous avons observé que les mutants de DC-SIGN défectifs pour l'endocytose permettent la réplication efficace du VDEN, indiquant que l'endocytose de DC-SIGN n'est pas indispensable pour l'étape d'internalisation lors de l'entrée virale. Nos données fournissent les preuves que les premières interactions du VDEN avec DC-SIGN pourraient faciliter les interactions suivantes du VDEN avec un récepteur cellulaire spécifique qui permet l'internalisation du virusDengue virus (DV) is a mosquito borne flavivirus that causes hemorrhagic fever in humans In the natural infection, DV is mtroduced into human skin by an infected mosquito vector where is believed to target immature dendritic cells. We show that the DC-specific ICAM-3 grabbing non-integrin (DC-SIGN) molécule binds moquito-cell-derived DV and allows viral replication. Conlusive evidence of the involvement of DC-SIGN in DV infection was obtained by the inhibition of viral infection by anti-DC-SIGN antibodies and by soluble tetrameric ectodomain of DC-SIGN dur data show, that the interactions between DV E protein the sole mannosylated glycoprotein present on DV particles and DC-SIGN are essential for DV infection of DCs. Binding of mannosylated N-glycans on DV E protein to DC-SIGN triggers a rapid and efficient mternalization of the viral glycoprotein. However, we observed that endocytosis-defective DC-SIGN molecules allows efficient DV replication, indicating that DC-SIGN endocytosis is dispensable for the internalizaton step m DV entry. Dur data provide evidences that the initial interactions of DV with DC-SIGN may facilitate subsequent interactions of DV with a specific cellular receptor that ultimately accounts for virus internalization. Key-words: Dengue virus, dendritic cells, DC-SIGN, E protein, virus internalization
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Ben, Merzoug Leila. "Les souris Ncr1greeCre : un nouveau modèle murin pour l'étude de la biologie des cellules Natural Killer." Paris 7, 2014. http://www.theses.fr/2014PA077037.
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Les cellules Natural Killer (NK) appartiennent au système immunitaire inné et exercent un rôle de sentinelle, au sein de l'organisme, contre les tumeurs et les pathogènes. Elles sont capables de cytotoxicité directe et de produire des cytokines et des chimiokines, participant au recrutement et à l'activation d'autres cellules du système immunitaire inné et adaptatif. La lignée des cellules NK se démarque par sa diversité. En effet, le pool de cellules NK périphériques est hétérogène et comporte plusieurs sous-populations, dont le développement et la fonction sont modulés par des facteurs intrinsèques et environnementaux (interactions avec les cellules accessoires). Les récentes études tendent à démontrer que les cellules NK hépatiques CD49b- se développent indépendamment des cellules NK de la moelle osseuse. Ces cellules NK hépatiques CD49b- se définissent par l'expression de l'intégrine CD49a. Or, notre analyse des cellules NK, présentes dans les organes lymphoïdes et non lymphoïdes, révèle la présence de quatre souspopulations de cellules NK, définies par leur expression des intégrines CD49a versus CD49b. Les relations entre ces sous-populations, ainsi que leur fonction, restent à être déterminées. Les cellules NK CD49a+ sont, également, présentes dans les intestins, le thymus et les glandes salivaires. De plus, les cellules. NK CD49a+, dans le thymus et les glandes salivaires, co-expriment l'intégrine CD49b. Malgré cette hétérogénéité, le développement de l'ensemble de ces sous-populations NK est dépendant du facteur de transcription Nfi13. Pour pouvoir étudier, spécifiquement, le développement et le rôle biologique de ces différentes sous-populations de cellules NK, nous avons généré un nouveau modèle de souris transgénique, la souris NcrlgreenCre, dans lequel la protéine de fusion GFP-Cre recombinase est sous le contrôle du promoteur Ncr 1. La Cre recombinase est spécifiquement exprimée et active dans les cellules NKp46+. Grâce au développement. De souris Ncrlgreencre 112%m, nous avons montré que l'homéostasie des cellules NKp46+, présentes dans les différents organes analysés, y compris les cellules NK CD49a+ du foie et des intestins, est dépendante de la chaîne yc. Ainsi, les souris NcrIgreenc' Il2Rgf" représentent un modèle murin déficient en cellules NKp46+. Ces souris ont permis de montrer que la perte spécifique des cellules NKp46+, dans un environnement, par ailleurs, intact, entraîne une perte de la protection contre le développement métastatique pulmonaire B16, et influence la réponse immune adaptative. Finalement, grâce aux souris NcrlgreenCre prdml", Hobit''', and NcrleeenCre prdmlflifi Hobit''', nous avons étudié le rôle des facteurs de transcription Blimp-1 et Hobit dans les cellules NK. Bien que ces facteurs soient homologues, seul Blimp-1 est nécessaire à leur différenciation et à leur fonction dans des conditions basales et dans la réponse immune anti-tumorale B16. Il apparaît, ainsi, que Hobit ne peut pas compenser la perte de Blimp-1 dans les cellules NK. Nous avons, également, montré que Blimp-1 est important pour la réponse des cellules NK à l'infection par le cytomégalovirus murinNK cells are lymphocytes of the innate immune system, engageai in the surveillance against tumors and pathogens. They can kill directly target cells by cytotoxicity and, also, produce cytokines and chemokines to recruit and activate other innate and adaptative immune cells. The NK cell lineage is heterogeneous and harbors several subsets, vvhose development and function are modulated by intrinsic and environmental factors (interaction with accessory cells). Recent studies suggest the CD49b- hepatic NK cells represent a separate NK cell lineage distinct from bone marrow NK cells. These hepatic NK cells were defined by the expression of the CD49a and lack of the CD49b (DX5) integrin. Yet, our analyses of NK cells, in lymphoid and non-lymphoid tissues, revealed the presence of four NK cell subsets defined by the differential expression of CD49a and CD49b, whose relations and functions are still unclear. CD49a+ NK cells were also present in gut, thymus and salivary glands. Yet, CD49a+ NK cells in the thymus and salivary glands co-expressed CD49b. Notwithstanding this heterogeneity, the development of all these subsets depends on the transcription factor Nfi13. In order to study gene functions specifically for NK cells we have generated a new transgenic mouse model, NcrlgreenCre, in which the gene fusion eGFP-Cre recombinase is under the control of the Ncr 1 promoter. The Cre recombinase is specifically expresséd and active in NKp46+ cells. We have generated NcrlgreenCre mice and show that all NKp46+ from all organs analyzed, and including CD49a expressing subsets in the gut¬associated lymphoid tissues, depend on yc for their homeostasis. As such, Ncrlg'cre 112%m mice represent a NKp46+ cell deficient mouse model. We used these mice to show that specific loss of NKp46+ cells in an otherwise intact environment results in the loss of protection against pulmonary metastatic B16 development and impacts on the regulation of the adaptative immune response to B16. Finally, using Ncrlg""cre prdmlfl fl, Hobit e", and Ncrlgreenc' prdmlwfl Hobit mice, we have studied the role of the transcription factors Blimp-1 and Hobit in NK cells. Although these factors are homologues, only Blimp-1 is required for NK cell differentiation and function under steady-state conditions and during anti¬tumor (B16) immune responses indicating that Hobit cannot compensate for loss of Blimp 1 in NK cells. We also found that Blimp 1 was important for the NK cell response to infection with mouse cytomegalovirus
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Gil, Sophie. "Régulation de l'endocytose des asialoglycoprotéines médiée par une lectine transmembranaire de l'hépatocyte : étude sur hépatocytes de rat à l'aide d'une pathologie in vivo (le diabète insulino-dépendant) et de drogues in vitro (la monensine et la vasopressine)." Paris 11, 1992. http://www.theses.fr/1992PA114809.
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Almahmood, Salman. "Contribution à l'étude des récepteurs parietaux impliqués dans la floculation de la levure kluyveromyces bulgaricus." Nancy 1, 1988. http://www.theses.fr/1988NAN10062.
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Deguine, Jacques. "Dynamiques cellulaires de l'activité cytotoxique des cellules Natural Killer et T CD8+ au cours de réponse immunitaires anti-tumorales." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077237.
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Les cellules Natural Killer (NK) et les cellules T CD8+ sont toutes deux capables de lyser certaines cellules tumorales, notamment grâce à l'exocytose de granules cytotoxiques au contact avec leur cible. Toutefois, leurs mécanismes de reconnaissance sont différents, les cellules T CD8+ pouvant reconnaître certains antigènes tumoraux alors que les cellules NK possèdent des récepteurs comme NKG2D, capables de reconnaître des "ligands de stress". Afin de déterminer comment l'engagement de ce récepteur affecte les dynamiques des cellules NK, nous avons visualisé leur comportement au sein de tumeurs EL4 exprimant Rae-ß par microscopie biphotonique. Ce ligand NKG2D induit l'accumulation de cellules NK mobiles au sein des tumeurs, alors que seul un faible nombre de cellules NK immobiles infiltre les tumeurs EL4 en l'absence de Rae-lp. De manière intéressante, la majorité des cellules NK établit des contacts de courte durée avec les cellules EL4 Rae-l|3, alors que les cellules T CD8+ forment des contacts de longue durée avec des cellules exprimant un antigène modèle. In vitro, les contacts formés entre les cellules NK et leurs cibles sont cytotoxiques mais n'induisent pas de flux calciques importants ou d'adhésion forte, alors que les contacts formés par les cellules T CD8+ sont remarquablement stables mais nécessitent un influx calcique pour être maintenus. Les données présentées ici indiquent que bien que les cellules NK et T CD8+ utilisent les mêmes molécules cytotoxiques, leurs dynamiques sont remarquablement différentes. Les stratégies distinctes utilisées par les cellules NK et T CD8+ ouvrent notamment la voie à l'étude d'approches utilisant cette forme de complémentaritéNatural Killer (NK) and CD8+ T cells, respectively of the innate and adaptive immune System, can both participate in tumor cell lysis through the exocytosis of lytic granules during interactions with their targets. However, while CD8+ T cells are specific for given tumor antigens, NK cells more broadly recognize stress through receptors such as NKG2D, whose ligands are expressed upon cellular stress. To understand how NKG2D receptor engagement influences intratumoral NK cell dynamics, we performed intravital two-photon imaging on solid EL4 tumors expressing the ligand Rae-lp. Expression of this ligand induced a sharp increase in intratumoral NK cell density and motility, whereas only a few immotile NK cells could be observed within a control EL4 tumor. Strinkingly, most NK cells established transient contacts with EL4 Rae-ß tumor cells, while CD8+ T cells interactions with related tumor cells expressing a recognized antigen were stable and long-lasting. We also performed in vitro conjugation experiments to characterize the underlying mechanism of NK and CD8+ T cell behavior and found that while NK cells can eliminate their targets efficiently, their adhesion to targets and the calcium influx during this process were limited. On the other hand, T cell conjugation to a tumor cell expressing a specific antigen induced a robust calcium influx that was critical for the strong adhesion. Altogether, we demonstrate here that while NK and CD8+ T cells use the same molecular effectors during cytotoxicity, they do so with remarkably distinct dynamics. These different behaviors might open the way to immunotherapeutic strategies exploiting the potential synergy of these two cell types
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Rahabi, Mouna. "Les macrophages dans l'inflammation colique, approches expérimentale et translationnelle : impact des récepteurs Dectine-1 et mannose et des peptides Naticol(r)Gut." Thesis, Toulouse 3, 2020. http://www.theses.fr/2020TOU30104.
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La maladie de Crohn (MC) et la rectocolite hémorragique (RCH) sont les deux formes principales des maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI) et sont le résultat de réactions inflammatoires excessives au niveau du système digestif. Bien qu'elles partagent certaines caractéristiques, ces deux entités se distinguent par des différences concernant la prédisposition génétique, les facteurs de risque, et les caractéristiques cliniques, endoscopiques et histologiques. Dans un premier temps, nous nous sommes intéressés au rôle des récepteurs lectines de type C dans l'inflammation colique. Nous montrons que dans un contexte de colite, l'absence de Dectine-1 prévient l'inflammation intestinale, tandis que l'absence du récepteur mannose (RM), l'exacerbe. Ceci a été confirmé dans un modèle expérimental d'exposition au DSS sur souris déficientes pour le RM chez qui nous avons relevé une augmentation marquée de l'expression de Dectine-1. Dectine-1 participe au recrutement des monocytes sanguins, précurseurs des macrophages, sur le site inflammatoire de la muqueuse colique et favorise la production d'IL-1ß de façon leucotriène B4- dépendante. Nous associons donc l'inflammation colique à une activation de l'axe Dectine-1/CCL2/LTA4H et à une régulation négative du RM sur les macrophages de patients atteints de MICI. Par ailleurs, la deuxième partie de notre travail montre que les peptides de collagène de poisson, dont les propriétés anti- inflammatoires ont été décrites dans d'autres contextes pathologiques tels que l'arthrite ou les dérégulations métaboliques, ont un effet bénéfique dans un contexte d'inflammation colique. Le Naticol(r)Gut, nom commercial des peptides de collagène de poisson que nous avons étudiés, régule l'inflammation par effet direct sur la polarisation des macrophages coliques vers un phénotype anti-inflammatoire et anti-oxydant. Par conséquent, nous avons montré que l'administration de Naticol(r)Gut module l'équilibre Th1/Th2 des cellules T CD4 en faveur d'une réponse Th2 et limite l'activation des cellules T CD8 cytotoxiques. L'atténuation du statut inflammatoire de l'intestin généré par l'administration de Naticol(r)Gut entraîne une eubiose intestinale subséquente caractérisée par une limitation du développement des espèces pathobiontes au profit des espèces probiotiques. De plus, nous observons des contributions similaires du Naticol(r)Gut dans la restauration du phénotype anti-inflammatoire, anti-oxydant et immuno-tolérant des monocytes humains de sujets atteints de MICI. Ces deux études appuient le rôle crucial que joue la polarisation des macrophages dans la physiopathologie de l'inflammation colique. Enfin, ce dernier travail appuierait l'effet protecteur du RM, récepteur au collagène, dans la coliteCrohn's disease (CD) and ulcerative colitis (UC) are the two main forms of chronic inflammatory bowel disease (IBD) and are the result of excessive inflammatory reactions in the digestive system. Although they share some characteristics, they are distinguished by differences in genetic predisposition, risk factors, and clinical, endoscopic and histological features. First, we have focused on the role of C-type lectin receptors in colonic inflammation. We show that in a colitis context the absence of Dectin-1 prevents intestinal inflammation, while the absence of the mannose receptor (MR) exacerbates it. This was confirmed in an experimental model of DSS exposure in MR-deficient mice in which we found a marked increase in the expression of Dectin-1. Dectin-1 is involved in the recruitment of blood monocytes, precursors of macrophages, to the inflammatory site of the colonic mucosa and promotes the production of IL-1ß in a leukotriene-B4-dependent manner. We therefore associate colonic inflammation with the activation of the Dectin1/CCL2/LTA4H axis and with a negative regulation of MR in macrophages from IBD patients. In addition, the second part of our work shows that fish collagen peptides, whose anti-inflammatory properties have been described in other pathological contexts such as arthritis or metabolic deregulation, have a beneficial effect in a context of colonic inflammation. Naticol(r)Gut, the trade name of the fish collagen peptides we studied, regulates inflammation by direct effect on the polarization of colonic macrophages towards an anti-inflammatory and antioxidant phenotype mediated by the recognition by the MR thereby supporting its protective effect. Therefore, we have shown that Naticol(r)Gut administration modulates the Th1/Th2 balance of CD4 T cells in favor of a Th2 response and limits the activation of cytotoxic CD8 T cells. The attenuation of the intestinal inflammatory status generated by the administration of Naticol(r)Gut subsequently leads to intestinal eubiosis characterized by a limitation of the development of pathobiontic species in favor of probiotic species. In addition, we observe similar contributions of Naticol(r) in restoring the anti-inflammatory, antioxidant and immunotolerant phenotype of human monocytes from subjects with IBD. These two studies support the crucial role of macrophage polarization through the C-type lectin receptors in the pathophysiology of colonic inflammation. Finally, the latter work supports the protective effect of the MR collagen receptor in colitis
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Gavlovsky, Pierre-Jean. "Polymorphisme et diversité des protéines MICA : caractérisation de nouvelles isoformes de MICA et rôle du variant MICA A5.1 en transplantation rénale." Nantes, 2015. https://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show/show?id=7162c0ec-4c49-487d-a7d3-97e656a2d262.
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Les molécules du CMH de classe I « like » MICA jouent un rôle important dans l'activation de cellules effectrices de l'immunité innée et adaptative, principalement comme ligands du récepteur activateur NKG2D. Le gène MICA est polymorphe (102 allèles décrits) ; ce polymorphisme favorise l'induction d'une réponse humorale participant au rejet en transplantation. Cependant la contribution des différents allèles à une diversité de protéines MICA reste mal connue. Notre étude montre que les allèles MICA*015 et MICA*017 codent pour un panel de 5 isoformes MICA-A, MICA-B1, MICA-B2, MICA-C et MICA-D correspondant à des protéines MICA délétées des domaines α3 et pour certaines α2. Ces protéines résultent d'un épissage alternatif issu d'une délétion dans l'intron 4 observée pour ces deux allèles. Trois isoformes (MICA-B1, MICAB2 et MICA-D) possèdent une affinité, modeste, pour NKG2D. MICA-B2 est un nouveau ligand agoniste capable d'activer NKG2D. MICA-D est capable de lier NKG2D sans induire ni modulation ni activation du récepteur mais possède un effet antagoniste/inhibiteur pour l'activation de NKG2D par un ligand agoniste. Ces travaux apportent de nouvelles données sur la relation structure/fonction des protéines MICA et en particulier sur l'importance du domaine α3 et des sites de Nglycosylation pour l'interaction et l'activation de NKG2D. Ce travail décrit aussi l'expression restreinte et localisée de MICA dans les cellules épithéliales des tubules proximaux et distaux et les cellules de l'endothélium micro- et macrovasculaire du rein. Ces cellules sont les cibles privilégiées du BK virus suggérant un rôle spécifique de MICA dans l'infection ou le contrôle de l'infection par ce virus qui reste à explorerFunctionnal and morphological alterations of the enteric neuro-glio-epithelial unit (NGEU) have been consistently reported in digestive disorders such as irritable bowel syndrome or inflammatory bowel disease. There is mounting evidence that Parkinson's disease (PD) is not only a brain disease but also a gut disorder. Gastrointestinal involvement is a frequent and early event in the course of PD, and it may be critically involved in the early development of the disease. As in PD the enteric neurons accumulate a-synuclein, and thus are showing PD specific pathological features, we undertook the present PhD work to investigate whether the enteric glia in PD become reactive by assessing the expression and phosphorylation levels of GFAP protein in colonic biopsies. In parallel we investigated whether changes in the intestinal epithelial barrier (IEB) function and/or morphology occur in PD by measuring the para- and transcellular permeabilities in colonic biopsies and by assessing the expression and localization of the two tight junctions protein ZO-1 and occludin. As compared to control subjects, patients with PD had significant higher enteric GFAP expression levels whereas the phosphorylation at serine 13 was significantly lower. The para- and transcellular permeabilities were not different between PD patients and controls. The expression of occludin, but not ZO-1, was significantly lower in colonic samples from PD patients as compared to controls and the cellular distribution of both proteins was altered in PD patients. Our findings provides evidence that the NGEU is altered in PD via accumulation of a- synuclein in enteric neurons, enteric glial reaction and IEB morphological impairments. This PhD work further reinforce the potential role of the gastrointestinal tract in the initiation and/or the progression of the disease
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Sippelli, Simona. "Nouvelle Voie d'isolement du RM6P : Biosynthèse et synthèse de dérivés du M6P." Thesis, Montpellier, 2015. http://www.theses.fr/2015MONTS157.
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Le récepteur cation-indépendant du mannose-6-phosphate (CI-RM6P) est une glycoprotéine transmembranaire impliquée dans de nombreux processus biologiques comme le transport des enzymes lysosomales vers les lysosomes et aussi dans le phénomène connu comme l’angiogenèse. Les analogues du M6P se sont avérés être des effecteurs de l’angiogenèse tumorale. La synthèse des nouveaux dérives bidentés, fonctionnalisés avec des analogues du M6P, ouvre la voie à une nouvelle méthode pour isoler le CI-RM6P.Ces “antennes biologiques” seront ainsi utilisées pour étudier leurs affinités vis-à-vis du CI-RM6P. En perspective, une nouvelle classe de dérivés de Sepharose, fonctionnalisée par nos ligands bidentés, vont être générée pour leurs emplois dans les traditionnels techniques de purifications des protéinesThe cation-indipendent mannose-6-phosphate receptor (CI-MPR) is a trans membrane glycoprotein implicated in numerous biological processes such as the transporting of the lysosomal enzymes to the lysosomes and in the phenomenon known as angiogenesis.The analogues of M6P have proven themselves to be effectors of tumour angiogenesis.The synthesis new bidentates derivatives, functionalised with analogues derivatives of M6P, opens the way to a new method to isolate the CI-MPR.These “biological antennae” will be used to study binding affinity with the receptor CI-MPR. In prospective, a new class of Sepharose derivatives, functionalised with ours bidentates ligands, will be generated to be used in the traditional technique of purifying proteins
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Moreno, Nieves Uriel Yojanan. "Study of Natural killer cell responses induced by the HIV-1 vaccine candidate, MVAHIV." Paris 7, 2014. http://www.theses.fr/2014PA077143.
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Les fonctions et le répertoire des cellules tueuses naturelles (NK) ont été associés à la protection de l'acquisitior du VIH et à la progression de la maladie. La capacité des vecteurs vaccinaux à stimuler les cellules NK pour contrôler l'infection virale n'a pas été étudiée. Nous avons donc testé la capacité du candidat-vaccin MVAVIH et des protéines S100A9 à stimuler l'activité anti-VIHdes cellules NK. Nous avons développé un système de co-culture in vitro permettant l'amorçage des cellules NK par des cellules dendritiques (DCs) autologues infectées par MVAval. Nous avons observé que les cellules NK amorcées par MVAVIHcontrôlent plus efficacement l'infection VIH par rapport aux cellules NK amorcées par MVAWT, que l'activité antivirale est spécifique pour le VIH, et que NKp46, NKG2D et l'lL-15 membranaire sont impliquées dans l'amorçage de cellules NK. Auparavant, nous avons démontré que les cellules NK CD85j± contrôlent l'infection VIH dans des DCs autologues et que les protéines S100A9 sont des ligands de CD85j. Ici, nous avons montré'que la stimulation des cellules NK par les tétramères S100A9 augmente le contrôle de l'infection VIH dans des cellules T CD4+, que l'activité anti-VIII induite par les tétramères S100A9 est préservée pendant l'amorçage des cellules NK par MVAvlli. Dans l'ensemble, nous avons observé que les cellules NK amorcées par MVAviii contrôlent efficacement et de manière spécifique l'infection VIH. Puisque les tétramères S100A9 stimulent l'activité anti-VIH des cellules NK seuls ou en combinaison avec un candidat-vaccin, nous suggérons qu'ils pourraient être considérés comme adjuvants pour augmenter le contrôle de l'infection VIH par les cellules NKNatural Killer (NK)-cell functions and repertoire have been associated with protection from HIV acquisition and disease progression. The capacity of viral vaccine vectors to stimulate NK cells to control infection has not been addressed. We therefore tested the ability of the HIV vaccine candidate MVAHIV and S100A9 proteins to stimulate the anti-HIV activity of NK cells. We developed an in vitro co-culture system allowing the priming of NK cells by autologous DCs infected by MVAHIV. Using this system, we observed that MVAWT-primed NK cells more efficiently control HIV infection compared to MVAWT-primed NK cells, that the enhanced antiviral activity is HIV-specific, and that NKG2D, NKp46 and membrane-bound IL-15 are implicated in the priming of NK cells. Previously we demonstrated that CD85j+ NK cells naturally control HIV infection in autologous DCs and that S100A9 proteins are ligands of CD85j. Here, we found that stimulation of NK cells by S100A9 tetramers enhances the control of HIV infection in CD4+ T cells, and that the anti-HIV activity induced by S100A9 tetramers is preserved during the priming of NK cells by MVAHIV. Overall, we observed that MVAHIV-primed NK cells efficiently and specifically control HIV infection. As S100A9 tetramers stimulate the anti-HIV activity of NK cells alone or in combination with a vaccine-candidate, we suggest that they might be considered as adjuvants to enhance the control of HIV infection by NK cells
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Chirica, Mircea. "Analyse de la réponse immunitaire anti-tumorale selon les caractéristiques oncogénétiques du cancer colorectal." Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCC082.
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Les cancers colorectaux (CCR) se développent en face d'un système immunitaire important associé à la muqueuse intestinale. Les avancées récentes en immunologie tumorale ont mis en évidence le rôle de la réponse immunitaire dans le développement, l'évolution et le pronostic des cancers. Le système immunitaire est capable de modifier activement les cellules précancéreuses à fur et à mesure qu'elles apparaissent dans les tissus. La qualité de la réponse immunitaire contre la tumeur est un facteur pronostique important chez les patients atteints de CCR. Différents types de mutations génétiques impliqués dans le CCR ont étés décrites. Certaines sont associées à un meilleur pronostic (instabilité des microsatellites, MSI) et d'autres à un mauvais pronostic (BRAF). Ces résultats s'expliquent par la capacité de la tumeur à modeler la réponse immunitaire anti tumorale. D'autres biomarqueurs prédictifs ont été décrits tels les mutations des gènes KRAS, NRAS, PIK3CA et TP53 mais leur rôle pronostique reste incertain. Dans ce travail, nous avons étudié de façon comparative les lymphocytes T infiltrant la tumeur (TIL), la muqueuse non tumorale et les lymphocytes T du sang périphérique. Nous avons observé que les TIL ont un phénotype activé, avec engagement de la voie NKG2D dans des LT CD8. Nous montrons l'expansion d'une sous population de LT CD4 exprimant NKG2D qui présentent des fonctions cytotoxiques parmi les TIL et dans la muqueuse non tumorale. Enfin, nous montrons que les caractéristiques ontogénétiques des CCR influencent la réponse immunitaire à l'intérieur de la tumeur car les populations de TIL différent selon le statut MSI et de la présence d'une mutation KRAS ou NRASColorectal cancers (CRC) develop in the face of an important immune system associated with the intestinal mucosal tissue. Recent advances in tumor immunology have highlighted the role of the immune response in the development, evolution and outcome of cancers. The immune system is thought to actively edit out pre-cancerous tells in tissues as they appear. The quality of the immune response against the tumor has emerged as an important prognostic factor in patients with CRC. Several studies have highlighted the different type of mutations and developmental processes involved in CRC. Some of these mutations are associated with better prognosis (microsatellite instability, MSI) and other with poor outcome (BRAF mutations). Some studies suggest that part of these differential outcomes is driven by the capacity of the tumor to induce a strong immune response. Several other predictive biomarkers have been described including mutations of the KRAS, NRAS, PIK3CA and TP53 genes but their prognostic role remains uncertain. In this study T tells infiltrating the tumor were compared to tells populating the unaffected neighboring mucosal tissue and tells from the peripheral blood. We observed that T tells from the tumor harbor an activated phenotype, with engagement of the NKG2D pathway in CD8 T tells. We show that mucosal and tumor-infiltrating T tells are enriched in NKG2D CD4 T tells, which exhibit cytotoxic functions. Finally, the oncogenic status of the cancer appears to influence the immune response within the tumor as T tell populations differ in MSI compared to MSS tumors and KRAS/NRAS mutated tumors compared to their wild type counterparts
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Guillaume-De, Menthon Mathilde. "Expansion aberrante de la lymphocytes T CD4+ "NK-LIKE" au cours de la granulomatose de Wegener : rôle de l'IL-15." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T036.
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Les lymphocytes NK participent à la réponse immunitaire innée. Leur activation résulte de l'action coordonnée de récepteurs activateurs et inhibiteurs. Quelques récepteurs NK (NKR) activateurs sont présents à la surface des cellules T CD8+, où ils peuvent fournir un signal de costimulation. L'expansion anormale de lymphocytes T CD4+CD28-NKR+ a été notée en pathologie, notamment au cours de la maladie de Wegener (MW). Le but de notre travail a été de mieux caractériser ces cellules au cours de la MW. Nos résultats mettent en évidence une population de lymphocytes T CD4+CD28-NKR+ au cours de la MW, ayant un phénotype et des capacités « NK-like ». Cette population pourrait jouer une rôle délétère, en exerçant sa cytotoxicité contre les cellules endothéliales et en participant à la vascularite. L'activité cytotoxique de ces cellules pourrait être liée à l'expression anormale de la molécule adaptatrice DAP12, normalement absente chez les CD4 et semble s'expandre sous le contrôle de l'IL-15NK cells participate in innate immune response. Their activation depends on coordonate stimulation of activating and inhibitory receptors. Some activating NK receptors (NKR) are also present on CD8+T cells, where they play the role of co stimulatory molecules. Abnormal expression of activating NKR have been described on CD4+CD28- T cells in pathologies such as Wegener's granulomatosis (WG). Our goal in this work was to further characterize those cells. Our results show the aberrant expansion of CD4+CD28-NKR+ T cells in WG patients, with « NK-like » phenotype and properties. This population could be delerious to vascular endothelial cells and participate to vasculitis. Cytotoxicity could be consecutive to abnormal expression of DAP12, an adaptator molecule that is usually not expressed on CD4+T cells. Those unusual cells develop under abnormal IL-15 signaling
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Levasseur, Franck. "Mécanismes d'échappement à la réponse immune innée de l'hôte au cours de l'infection chronique par le virus de l'hépatite C (VHC)." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T040.
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Comprendre comment le VHC enraye l'immunité innée de l'hôte est d'une grande importance dans l'espoir de développer des thérapies efficaces. Nous montrons ici, qu'après la stimulation du TLR4 par la protéine NS5A du VHC, les monocytes sécrètent de fort taux de TGFβ qui downrégulent l'expression membranaire du récepteur NKG2D à la surface des NK et altèrent leurs fonctions effectrices médiées par NKG2D. L'interaction NS5A/TLR4 induit un déséquilibre inflammatoire puisqu'elle déclenche via les molécules de signalisation P38 MAPK et Pi3K, une forte sécrétion d'IL-10, qui induit ultérieurement la production de TGF-β et l'inhibition du relargage d'IL-12. L'utilisation du système de culture de cellules Huh7. 5. 1 répliquant la souche JFH1 du VHC a permis de mettre en évidence le relargage de NS5A par les cellules infectées en apoptose. Enfin, l'apport exogène d'IL-15 peut restaurer l'expression de NKG2D à des niveaux normaux et induire une reprogrammation fonctionnelle des cellules NKUnderstanding how hepatitis C virus (HCV) induces and circumvents innate and adaptive immunity of the host is of critical importance in efforts to design effective therapeutics. We report here the decreased expression of the NKG2D activating receptor as a novel strategy adopted by HCV to evade NK-cell mediated responses. We show that, upon TLR4 stimulation by the HCV NS5A protein, monocytes secrete high amounts of TGFβ that downmodulates NKG2D expression on NK cells, leading to their impaired lytic potential and IFNy production. Using the JFH1-replicating Huh7. 5. 1 cell system, we provide evidence that NS5A released from apoptotic infected cells binds to monocytes. NS5A-induced signaling through TLR4 elicits p38- and PI3 kinase-dependent IL-10 production, which in turn triggers TGFβ release while inhibiting IL-12 production. Exogenous IL-15 can rescue NKG2D expression at normal levels and induce functional reprogramming of NK cells
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Maalouli, Nazek. "Développement d’un banc plasmonique en goutte et conception de nouvelles interfaces appliquées à la biodétection." Thesis, Lille 1, 2012. http://www.theses.fr/2012LIL10111/document.
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Les capteurs basés sur la résonance plasmonique de surface (SPR) sont devenus des outils très importants pour une détection sensible, sans marquage et en temps réel des interactions biochimiques et biologiques. Dans cette thèse, différents aspects de la plasmonique ont été étudiés tels que la configuration du système de détection et la façon dont les molécules sont attachées aux interfaces SPR. Dans la première partie de ce travail, l’intérêt d’un banc SPR en configuration "goutte" est présenté. Ce banc a permis d’étudier expérimentalement, pour la première fois, l’excitation des plasmons de surface par une "lame à réseaux", un dispositif intégré sans prisme. Dans la deuxième partie, différentes stratégies de fonctionnalisation de surface ont été développées sur différents types d’interfaces SPR hybrides. Une lame d’argent couverte par un film fin de silicium amorphe carboné (Ag/a-Si0.63C0.37) a été modifiée avec de l’acide nitrilotriacétique (NTA) terminé amine pour chélater les ions Cu2+. L’interaction avec les peptides his-tagués peut être suivie, d’une façon simple, par le banc SPR en "goutte". L’intérêt de l’interaction glycane-lectine a motivé le développement des interfaces SPR modifiées avec des glycanes. En utilisant l’approche de la chimie "click", les sucres mannose/lactose terminés alcyne ont été attachés d’une façon covalente sur une lame d’or/oxyde de silicium (Au/SiOx) fonctionnalisée azide. La détection de deux différents lectines (Lens culinaris et Peanut Agglutinin) par ces puces à glycanes a été validée. En parallèle, le greffage des sucres mannose/lactose "non modifiés" à l’interface Au/SiOx modifiée par l’acide tetrafluoro-azidobenzoïque (ATFBA) via le photocouplage a été analysé. Cette stratégie a montré une efficacité dans la reconnaissance spécifique des lectines comparable à celle obtenue dans le cas de la chimie "click"Surface plasmon resonance (SPR) based biosensors have become very important tools for a sensitive, label-free and real-time detection of biochemical and biological interactions. Different aspects for plasmonic-based sensor have been investigated in this thesis such as the detection system configuration and the way molecules are linked to the SPR interfaces. In the first part of this thesis, the interest of a droplet-based SPR set-up was shown. This approach has allowed studying experimentally, for the first time, the excitation of surface plasmons by a diffraction grating chip, without integrated prisms. In the second part, different surface functionalization strategies have been developed on different thin film of a hybrid SPR interfaces. It was shown that silver-based SPR interfaces post-coated with amorphous silicon-carbon alloy (Ag/a-Si0.63C0.37) could be modified with amine-terminated nitrilotriacetic acid (NTA), a strong chelating agent for Cu2+ ions. The interaction with his-tagged peptides could be followed, in an easy manner, by the droplet-based SPR set-up. Motivated by the interest of the glycane-lectin interaction, glycan-modified SPR chips were developed. Alkynyl-terminated mannose/lactose were covalently linked to azide functionalized gold/silicon oxide (Au/SiOx) interfaces using a "click" chemistry approach, the sensing of two different lectins (Lens culinaris and Peanut Agglutinin) was validated. In parallel, "unmodified" glycans were covalently linked to azide-tetrafluorobenzoic acid by a photocoupling strategy. This strategy showed high efficiency in the specific recognition of lectins comparable to the one obtained in the case of "clicked" sugar
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Trimaglio, Giulia. "An orthotopic syngeneic mouse model to study the role of DCIR in colorectal cancer." Thesis, Toulouse 3, 2020. http://www.theses.fr/2020TOU30053.
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Le cancer colorectal (CCR) est le troisième cancer le plus fréquent et le deuxième cancer le plus mortel dans le monde. En conséquence, de nouveaux biomarqueurs diagnostiques ainsi qu’une amélioration des traitements actuels sont nécessaires. Les tumeurs se développent dans des microenvironnements complexes où les cellules cancéreuses interagissent et modulent la réponse immunitaire locale pour persister et se multiplier. Les lectines de type C, exprimées notamment par les cellules de l’immunité, régulent la réponse anti-cancéreuse, et donc le développement tumoral. Parmi elles, l'immunorécepteur des cellules dendritiques (DCIR), a été montré comme jouant un rôle immunitaire majeur au cours des maladies infectieuses et auto-immunes. À l’inverse, son rôle dans l'immunité tumorale reste méconnu. L'analyse des données transcriptomiques de deux cohortes de patients atteints de CCR a révélé un lien entre une expression élevée de DCIR et une meilleure survie des patients. Dans ce contexte, l'objectif principal de ma thèse était de déterminer l'impact de DCIR sur le développement du CCR et la réponse immunitaire associée. Dans ce but, j’ai établi un modèle murin préclinique, orthotopique et syngénique du CCR consistant en l'injection intracaecale de cellules tumorales MC38 exprimant la luciférase (MC38-fLuc+) dans des souris C57BL/6. Le suivi de la croissance tumorale par bioluminescence a montré que, malgré l’acquisition initiale de tumeurs solides par toutes les souris, seulement 30% des souris ont développé un CCR progressif et mortel, tandis que les autres animaux ont spontanément rejeté leurs tumeurs. Aucun rejet des tumeurs CCR MC38 n'a été observé en l'absence d'immunité adaptative, ni lors de l'injection de cellules MC38 dans d'autres sites anatomiques. L'immunophénotypage par transcriptomique et cytométrie de flux a révélé que les souris développant des tumeurs progressives présentaient une réponse immunitaire pro-tumorale, définie par une signature caractéristique des lymphocytes T régulateurs, détectable peu après l'implantation tumorale, et par une infiltration de cellules myéloïdes suppressives connues pour favoriser la croissance tumorale. En revanche, les souris rejetant les tumeurs présentaient une signature pro-inflammatoire précoce et un microenvironnement anti-tumoral enrichi en lymphocytes T CD8+. Ainsi, nos résultats démontrent un rôle du microenvironnement spécifique du côlon dans la régulation de l'équilibre entre les réponses immunitaires anti- ou pro-tumorales et souligne l'importance d'utiliser des modèles murins orthotopiques pour les études in vivo. Dans la seconde partie de ma thèse, j’ai utilisé ce modèle murin de CCR pour comparer le développement tumoral dans des souris C57BL/6 de type sauvage ou des souris déficientes pour l’expression de mDcir1 (mDcir1-KO), un homologue murin du DCIR humain. Bien que l'absence de mDCIR1 n'ait aucune incidence sur le pourcentage de souris développant ou rejetant les tumeurs du CCR, nous avons observé que les animaux mDcir1-KO développaient des tumeurs plus importantes que les sauvages En accord avec ce résultat, nous avons constaté une infiltration plus faible de lymphocytes CD8+ cytotoxiques et une activation moindre des lymphocytes T CD4+ et CD8+ (c'est-à-dire T-BET+, CD44haut, CTLA-4+) dans les tumeurs des souris mDcir1-KO par rapport aux souris sauvages. Ainsi, nos données indiquent un rôle protecteur et anti-tumoral de DCIR pendant le développement du CCR, probablement dû à une dérégulation de l'équilibre existant entre la tumeur et la réponse immunitaire. Dans l'ensemble, cette étude ouvre la voie à la mise au point éventuelle de biomolécules pharmacologiques ciblant DCIR pour déclencher une réponse immunitaire anti-tumorale efficace dans le contexte du CCR et au-delàColorectal cancer (CRC) is the third most common and second deadliest cancer worldwide accounting for 900.000 deaths in 2018. Consequently, there is a strong need for new biomarkers as well as an improvement of the current treatments. Tumors develop in complex microenvironments where cancer cells constantly crosstalk with, and modulate, the local immune response to persist and replicate. C-type lectins receptors, expressed in particular by immune cells, actively regulate the immune response to cancer cells and, therefore, tumor development. Dendritic cell immunoreceptor (DCIR), a C-type lectin expressed by myeloid cells, has been shown to play a major role in immunity to infectious and autoimmune diseases. Yet, the role played by DCIR in tumor immunity remains unknown. Analysis of publicly available transcriptomic data from two cohorts of CRC patients revealed an association between high DCIR gene expression and improved survival of patients. In this context, the principal objective of my PhD thesis was to determine the role played by DCIR in the immune response during CRC development. First, I developed an orthotopic syngeneic pre-clinical CRC mouse model consisting in the intra-caecal injection of engineered MC38 tumor cells expressing firefly luciferase (MC38-fLuc+) in C57BL/6 mice. Monitoring of the tumor growth by bioluminescence revealed that, despite an initial growth of solid tumors in all the mice, only 30% of mice developed a progressive lethal CRC, while the remaining animals spontaneously rejected their solid tumor and survived more than 100 days. No rejection of tumors was observed in the absence of adaptive immunity, nor when MC38-fLuc+ cells were injected in other anatomical locations (i.e., liver and skin). Immunophenotyping by transcriptomic and flow cytometry showed that mice with progressive CRC tumors exhibited a pro-tumor immune response, characterized by a regulatory T cell pattern, discernible shortly post-tumor implantation, as well as myeloid suppressor cells that are well-known to favor tumor growth. By contrast, tumor-rejecting mice presented an early pro-inflammatory response and an anti-tumor microenvironment enriched with CD8+ T cells. Taken together, our results demonstrate a preponderant role of the colon-specific microenvironment in regulating the balance between anti- or pro-tumor immune responses and underline the importance of using orthotopic mouse models for in vivo studies. In a second part of my thesis, we used this CRC mouse model to compare the tumor development in wild-type (WT) C57BL/6 mice or mice deficient for mDcir1 (mDcir1-KO), a murine homologue of human DCIR. While the lack of mDCIR1 has no impact on the percentage of mice developing or rejecting CRC tumors, we observed that mDcir1-KO animals developed bigger tumors than their WT counterparts. In line with this result, we found a lower infiltration of cytotoxic CD8+ and decreased activation of both CD4+ and CD8+ T cells (i.e., T-BET+, CD44high, CTLA-4+) in CRC tumors from mDcir1-KO mice compared to WT mice. Altogether, our data point to a protective and anti-tumor role of DCIR during CRC development, probably due to a dysregulation of the balance existing between the tumor and the immune response. Overall, this study paves the way for the potential future development of pharmacological biomolecules targeting DCIR to trigger an efficient anti-tumor immune response in the context of CRC and beyond
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Aouar, Besma. "Altération de la production d'interféron de type I par les cellules plasmacytoïdes dendritiques : ciblage de la voie de signalisation BCR-like." Thesis, Aix-Marseille, 2015. http://www.theses.fr/2015AIXM5021.
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Les cellules dendritiques plasmacytoïdes sont les productrices majeures d’IFN de type I dans l’organisme humain. Durant les infections virales chroniques, telles que l’infection par le Virus de l’Hépatite C, les pDCs sont fonctionnellement altérées. L’efficacité dans plus de 50% des cas du traitement par IFN-α, utilisé jusqu’à récemment, suggère que la modulation de la fonction des pDCs serait une cible intéressante pour le traitement HCV. Les pDCs reconnaissent l’ARN du HCV par les récepteurs Toll-like, et disposent de plus d’un set de récepteurs dits régulateurs qui régulent la production d’IFN-I. L’activation de ces RR inhibe la production d’IFN-I par les pDCs stimulées par les agonistes de TLR7/9. Nous montrons ici que la glycoprotéine d’enveloppe E2 du HCV est un nouveau ligand des RR BDCA2 et DCIR des pDCs, et que cette liaison est responsable de l’inhibition d’IFN-I via l’activation de la voie de signalisation BCR-like. Nous avons ensuite voulu restaurer la production d’IFN-I dans les pDCs en ciblant les kinases décrites de la voie BCR-like, Syk et Mek. En inhibant Syk, l’IFN-I n’a été que partiellement restauré par les concentrations subliminales de l’inhibiteur; les concentrations élevées de cet inhibiteur ont bloqué la production d’IFN-I, suggérant l’implication de Syk dans la voie TLR7/9 comme montré pour l’activation des TLR dans les macrophages. En inhibant MEK, la restauration d’IFN-I est efficace. Les mécanismes de cette restauration sont explorés. Le ciblage pharmacologique de la signalisation BCR-like constituerait une nouvelle approche intéressante pour étudier les mécanismes de modulation de l’activation des pDCs dans les conditions physiopathologiquesPlasmacytoid dendritic cells are major producers of type I IFN in human organism. During chronic viral infections, such as Hepatitis C Virus infection, pDCs are functionally impaired. More than 50% efficiency of IFN-α treatment, until recently used, suggested that modulation of pDC function could be an important target for HCV treatment. pDCs recognize HCV RNA by Toll-like receptors, and dispose of a set of so-called regulatory receptors that regulate IFN-I production. Crosslinking of these RR such as BDCA-2 and ILT7 has been shown to inhibit IFN-I production by pDCs stimulated with TLR7/9 agonists. In this work we show that HCV envelope glycoprotein E2 is a novel ligand of pDC RR, BDCA-2 and DCIR, and that this binding is responsible for IFN-I inhibition via the activation of the BCR-like pathway. Then we assayed to restore IFN-I in pDCs with crosslinked RR by targeting well-known kinases of BCR-like pathway, Syk and Mek. When inhibiting Syk, IFN-I was only partially restored by subliminal concentrations of Syk inhibitor; high concentrations of Syk inhibitor effectively blocked IFN-I production, suggesting involvement of Syk in the TLR7/9 pathway as it was already demonstrated in TLR activation in macrophages. When inhibiting MEK, the restoration of type I IFN was effective. The underlying mechanisms leading to the restoration are further explored. Pharmacological targeting of BCR-like signaling may constitute an attractive new approach to study mechanisms of modulation of pDC activation in pathophysiological conditions
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Sacco, Emmanuelle. "Identification et caractérisation de 3-hydroxyacyl déshydratases/2-trans-enoyl hydratases (R)-spécifiques potentiellement impliquées dans la biosynthèse de lipides chez le bacille tuberculeux." Toulouse 3, 2007. http://www.theses.fr/2007TOU30010.
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L'un des problèmes majeurs dans la lutte contre la tuberculose est l'apparition de souches de Mycobacterium tuberculosis résistantes aux antibiotiques. Les 3-hydroxyacyl déshydratases/2-trans-enoyl hydratases (R)-spécifiques, enzymes clés du métabolisme lipidique, représentent des cibles pharmacologiques potentielles, notamment chez les mycobactéries. Par des approches complémentaires, nous avons identifié et caractérisé plusieurs de ces enzymes, appartenant à la sous-famille hydratase 2. En particulier, les données enzymologiques suggèrent que trois d'entre elles, associées en deux hétérodimères distincts, seraient impliquées dans un système Fatty Acid Synthase de type II, participant à la biosynthèse des acides mycoliques, composants essentiels à la survie des mycobactéries. Ces protéines présentent des perspectives intéressantes pour le développement d'antibiotiques antituberculeuxTuberculosis is still a major health concern in the world. Lipids play a major role in the pathogenic character of the tubercle bacillus and their biosynthesis requires the involvement of (R)-specific 3-hydroxyacyl dehydratases/trans-2-enoyl hydratases which have not been identified so far in this organism. These enzymes represent a sink of potential new antituberculosis targets. We report the identification and the characterization in Mycobacterium tuberculosis of several of these proteins that belong to the hydratase 2 subfamily. In particular, the enzymatic data suggest that three of them, associated into two distinct heterodimers, would belong to a type II Fatty Acid Synthase complex, which is involved in the mycolic acid biosynthesis, components essential for the survival of mycobacteria. These enzymes represent very interesting targets for antituberculous drug development
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Bennabi, Meriem. "Caractéristiques immunogénétiques et immuno-inflammatoires des troubles du spectre autistique (TSA)." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCC017.
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Les troubles du spectre autistique (TSA) sont un ensemble de pathologies neurodéveloppementales dont la prévalence est en constante augmentation. Ils sont caractérisés par des déficits de la communication et des interactions sociales, et par des comportements répétitifs et stéréotypés. A l’origine d’un handicap sévère, ces troubles se manifestent dès la petite enfance et persistent chez l’adulte. Cette entité recouvre des profils cliniques très hétérogènes, tant par le spectre de sévérité des symptômes que par la variété des comorbidités psychiatriques et somatiques associées sous tendues, en partie, par des dysfonctionnements immunitaires. Dans ce contexte, nous nous sommes de ce fait intéressés à l’identification et à la caractérisation de biomarqueurs à valence immunogénétique et immunologique afin d’en étudier l’implication physiopathologique et d’en déterminer les corrélats cliniques.De manière plus précise, nous avons évalué l’implication de la diversité génétique de molécules intervenant dans l’immunité innée (PRR, CLR, Dectin-1) et l’immunité adaptative (système HLA) dans le but d’apprécier le poids du terrain immunogénétique sur le développement de ces troubles. Puis, nous avons analysé les caractéristiques phénotypiques et fonctionnelles des cellules Natural Killer de patients atteints de TSA afin d’en déterminer l’influence potentielle sur l’état inflammatoire permanent rapporté chez certains patients TSA.Sur le plan immunogénétique, nous avons montré que la diversité génétique de Dectin-1 (CLEC7A), candidat sélectionné en raison de son implication dans la modulation de pathologies microbiennes intestinales, était associé à une forme particulière de TSA, le syndrome d’Asperger. Nous avons observé que le génotype CLEC7A rs2078178 GG ainsi que l’haplotype rs2078178/rs16910631 GG/GG étaient non seulement plus fréquents chez les Asperger mais aussi associées aux scores de quotient intellectuel (QI). Dans le cadre de l’analyse de la diversité génétique du système HLA, nous avons identifié un haplotype à risque (HLA-DRB1 *11-DQB1*07) et un haplotype de protection (HLA-DRB1 *17-DQB1*02). L’haplotype à risque étant également associé avec la sévérité de la maladie, reflétée par des scores défavorables dans les échelles cliniques psychiatriques testées.Dans la seconde partie de cette thèse nous avons exploré les modifications phénotypiques et fonctionnelles des cellules NK CD3- CD56+ chez les patients atteints d’autisme de haut niveau. Nous avons observé un état d’activation cellulaire permanent concomitant avec une capacité de dégranulation spontanée, une production soutenue d’IFN-?, et un état hypofonctionnel/épuisement cellulaire après stimulation in vitro. De plus, nous avons identifié un cluster spécifique de cellules NK, basé sur les paramètres HLA-DR, NKG2C, et KIR2DL1, et nous avons observé une augmentation inattendue des cellules NK NKG2C+ chez les sujets TSA en dehors de toute piste infectieuse connue. Enfin, nous avons observé que l’expression de KIR2DL1 et de HLA-DR était respectivement corrélée aux scores de QI et à ceux évaluant les CCA-LS et SAWR.Pris dans leur ensemble, ces données pourraient permettre de contribuer à une meilleure connaissance des mécanismes physiopathologiques associés au système immunitaire dans les TSA et par conséquent à une meilleure catégorisation des groupes de patients susceptibles de bénéficier de stratégies thérapeutiques immunologiques cibléesAutism spectrum disorders (ASD) are severe neurodevelopmental conditions characterized by deficits in communication and social interactions, and by repetitive and stereotyped behaviors and exhibiting a constant increase in terms of prevalence. Affecting ages ranging from the early post-natal period to adulthood, ASD are clinically heterogeneous and often associated with psychiatric and somatic comorbidities underlying, in part, by immune dysfunctions. In this context, we thus focused our attention on the analysis of immunogenetic and immunological characteristics potentially implicated in the disease risk and/or in the modulation their clinical phenotype. More precisely, we evaluated the potential implication of the genetic diversity of molecules involved in innate (PRR, CLR, Dectin-1) and adaptive (HLA) immune responses in disease risk. We then analyzed the phenotypic and functional characteristics of Natural Killer cells in patients with ASD, investigating their influence on the permanent inflammatory state often reported in ASD settings.On the immunogenetic point of view, we found that the genetic diversity of Dectin-1 (CLEC7A), a candidate selected because of its involvement in the modulation of intestinal microbial disorders, was associated with Asperger syndrome, a clinical form of ASD. We observed that the CLEC7A genotype rs2078178 GG and the rs2078178 / rs16910631 GG /GG haplotype were not only more frequent in Asperger but also associated with IQ scores.In terms of HLA diversity, we identified a risk haplotype (HLA-DRB1 * 11-DQB1 * 07) and a protective haplotype (HLA-DRB1 * 17-DQB1 * 02). The risk haplotype was also found to be associated with disease’s severity as reflected by unfavorable scores in the psychiatric clinical scales tested.In the second part of this thesis, we explored the phenotypic and functional modifications of CD3-CD56 + NK cells in patients with high-functioning autism. We observed a permanent cell activation state concomitant with spontaneous degranulation capacity, sustained IFN-? production and cellular hypofunction /exhaustion after in vitro stimulation. In addition, we identified a specific cluster of NK cells, based on the HLA-DR, NKG2C, and KIR2DL1 parameters, and we observed an unexpected increase of NK NKG2C + cells in ASD subjects independent of CMV infection. Finally, we observed that the expression of KIR2DL1 and HLA-DR were respectively correlated with the scores of IQ and those evaluating the CCA-LS and SAWR scales.Taken together, these data could contribute to a better knowledge of the pathophysiological mechanisms associated with the immune system in ASD and consequently to a better categorization of the groups of patients likely to benefit from targeted immunological therapeutic strategies
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Massoud, Amir Hossein. "The anti-inflammatory properties of intravenous immunoglobulin in a murine model of allergic airway disease ; effects on the development of regulatory T-cells." Thèse, 2013. http://hdl.handle.net/1866/9890.
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Les immunoglobulines intraveineuses (IVIg) constituent une préparation polyclonale d’IgG
isolée et regroupée à partir du plasma sanguin de multiples donneurs. Initialement utilisé comme
traitement de remplacement chez les patients souffrant d’immunodéficience primaire ou
secondaire, les IVIg sont maintenant largement utilisées dans le traitement de plusieurs
conditions auto-immunes, allergiques ou inflammatoires à une dose élevée, dite immunomodulatrice.
Différents mécanismes d’action ont été postulés au fil des années pour expliquer
l’effet thérapeutique des IVIg dans les maladies auto-immunes et inflammatoires. Entre autre, un
nombre grandissant de données issues de modèles expérimentaux chez l’animal et l’humain
suggère que les IVIg induisent l’expansion et augmentent l’action suppressive des cellules T
régulatrices (Tregs), par un mécanisme qui demeure encore inconnu. Également, les patients
atteints de maladies auto-immunes ou inflammatoires présentent souvent un nombre abaissé de
Tregs par rapport aux individus sains. Ainsi, une meilleure compréhension des mécanismes par
lesquels les IVIg modulent les cellules T régulatrices est requise afin de permettre un usage plus
rationnel de ce produit sanguin en tant qu’alternative thérapeutique dans le traitement des
maladies auto-immunes et inflammatoires.
Par le biais d’un modèle expérimental d’allergie respiratoire induite par un allergène, nous avons
démontré que les IVIg diminuaient significativement l’inflammation au niveau des voies
aériennes ce, en association avec une différenciation des Tregs à partir des cellules T non
régulatrices du tissu pulmonaire. Nous avons également démontré qu’au sein de notre modèle
expérimental, l’effet anti-inflammatoire des IVIg était dépendant des cellules dendritiques
CD11c+ (CDs) pulmonaires, puisque cet effet pouvait être complètement reproduit par le transfert adoptif de CDs provenant de souris préalablement traitées par les IVIg. À cet effet, il est
déjà établi que les IVIg peuvent moduler l’activation et les propriétés des CDs pour favoriser la
tolérance immunitaire et que ces cellules seraient cruciales pour l’induction périphérique des
Tregs. C’est pourquoi, nous avons cherché à mieux comprendre comment les IVIg exercent leur
effet sur ces cellules. Pour la première fois, nous avons démontré que la fraction d’IgG riche en
acide sialique (SA-IVIg) (constituant 2-5% de l’ensemble des IgG des donneurs) interagit avec
un récepteur dendritique inhibiteur de type lectine C (DCIR) et active une cascade de
signalement intracellulaire initiée par la phosphorylation du motif ITIM qui est responsable des
changements observés en faveur de la tolérance immunitaire auprès des cellules dendritiques et
des Tregs. L’activité anti-inflammatoire de la composante SA-IVIg a déjà été décrite dans des
études antérieures, mais encore une fois le mécanisme par lequel ce traitement modifie la
fonction des CDs n’a pas été établi. Nous avons finalement démontré que le récepteur DCIR
facilite l’internalisation des molécules d’IgG liées au récepteur et que cette étape est cruciale
pour permettre l’induction périphérique des Tregs.
En tant que produit sanguin, les IVIg constitue un traitement précieux qui existe en quantité
limitée. La caractérisation des mécanismes d’action des IVIg permettra une meilleure utilisation
de ce traitement dans un vaste éventail de pathologies auto-immunes et inflammatoires.Intravenous immunoglobulin (IVIg) is a therapeutic preparation of normal human polyclonal IgG derived from pooled plasma from a large number of healthy donors. Initially used as replacement therapy for patients with primary and secondary immune deficiencies, IVIg is now also widely used for the treatment of a variety of autoimmune, allergic and systemic inflammatory disorders, at high immunomodulatory doses. The beneficial effect of IVIg in autoimmune and inflammatory diseases has been attributed to different mechanisms. Increasing evidence shows that IVIg induces expansion and enhances the suppressive function of regulatory T cells (Tregs) in different experimental animal models and human subjects, through an unknown mechanism. Human inflammatory and autoimmune diseases are known to be associated with Treg deficiency. Therefore, a more precise understanding of the mechanisms by which IVIg modulate Treg populations seems to be needed for more rational use of this compound as an alternative therapy in context of various inflammatory and autoimmune disorders. Using a robust antigen-driven model of allergic airway disease, we have demonstrated that IVIg markedly attenuates airway inflammation and this effect is associated with the induction of Tregs from non-regulatory T cells in pulmonary tissues. We have also demonstrated that the antiinflammatory actions of IVIg, in our model are dependent on a population of pulmonary CD11c+ dendritic cells (DCs), as the action of IVIg could be completely replicated by adoptive transfer of CD11c+ DCs from IVIg-treated mice. we have shown that tolerogenic DCs involve in the peripheral induction of Tregs. Given the requirement of DCs in the induction of Tregs, we explored the mechanism by which IVIg interacts and modulate these cells and for the first time demonstrated that the purified sialylated fraction of human IgG (SA-IVIg) (that consists 2-5% of whole IgG) interacts with an inhibitory C-type lectin receptor on dendritic (DCIR) and this interaction triggers an ITIM intracellular signaling cascade. This subsequently results in rendering tolerogenic activities to DCs and peripheral induction of Tregs. The anti-inflammatory activity of SA-IVIg has been shown in previous studies, but the mechanism by which it modulates DCs functions is not well understood. We also demonstrated that DCIR facilitates the internalization of IgG molecules into DC and this internalization appears to be a crucial step for induction of Tregs. IVIg is a costly therapeutic compound. Characterization of the mechanism of action of IVIg can lead to a better application of this plasma based therapy in a wide range of autoimmune and inflammatory diseases.