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Implication des monocytes/macrophages dans le développement de l’inflammation colique et de la carcinose péritonéale d’origine colorectale : Rôle des récepteurs lectine de type-C et des récepteurs nucléaires PPARγ et LRH-1.Les monocytes et les macrophages, cellules clés de l’immunité innée, expriment un large panel de récepteurs membranaires et nucléaires leur permettant de moduler leurs phénotypes et leurs fonctions en réponse aux stimuli présents dans leur environnement. Du fait de cette adaptabilité cellulaire, les monocytes/macrophages contrôlent la réponse immunitaire innée et adaptative. Ainsi, ces cellules jouent un rôle central dans le développement de nombreuses pathologies, et par conséquent, représentent des cibles thérapeutiques pertinentes. Dans ce travail de thèse, nous nous sommes, dans un premier temps, intéressés au rôle des récepteurs lectine de type-C des macrophages dans le contrôle de l’inflammation colique. Nous montrons grâce à l’utilisation de deux modèles murins spécifiquement invalidés pour Dectine-1 et le récepteur mannose (RM) dans la lignée myéloïde, que Dectine-1 participe au développement de l’inflammation intestinale, tandis qu’inversement, le RM la prévient. En effet, dans un modèle de colite induite au DSS (Dextran Sodium Sulfate), le récepteur Dectine-1 des macrophages induit une augmentation du recrutement de monocytes inflammatoires dans le colon de façon CCL2-dépendante. Nous mettons également en évidence que Dectine-1 est impliqué dans la polarisation des macrophages du colon vers un phénotype pro-inflammatoire. En effet, Dectine-1 favorise la synthèse du leucotriène B4 (LTB4) qui à son tour induit la sécrétion de l’interleukine-1β (IL-1β). Ces résultats mettent en évidence l’implication délétère de l’axe Dectine-1/CCL2/LTB4/IL-1β dans le développement de l’inflammation colique et attribuent, inversement, un rôle protecteur au RM dans ce contexte. Ces données ont été corrélées avec une augmentation de l’expression de Dectine-1 et une diminution de l’expression du RM au niveau du colon de patients atteints de maladies inflammatoires chroniques de l’intestin (MICI). Ce travail est publié dans Cell Reports 2020 : Divergent Roles for Macrophage C-type Lectin Receptors, Dectin-1 and Mannose Receptors, in the Intestinal Inflammatory Response. Cell Rep. 30, 4386-4398.e5Dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés aux rôles des récepteurs nucléaires PPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor) et LRH-1 (Liver receptor homolog-1) des macrophages dans le développement d’une carcinose péritonéale d’origine colorectale (CPCR). Nous avons mis en évidence pour la première fois, en utilisant deux modèles murins délétés pour LRH-1 ou PPARγ spécifiquement dans la lignée myéloïde, que ces récepteurs nucléaires jouent un rôle majeur dans la différenciation des précurseurs myéloïdes en cellules immunosuppressives dérivées de la lignée myéloïde (MDSC) au cours de la CPCR. En effet, l’absence de LRH-1 et de PPARγ dans les cellules myéloïdes inhibe la différenciation des MDSC et favorise la réactivation du système immunitaire anti-tumoral. En association à cette réactivation immunitaire, les souris présentent une forte diminution de la charge tumorale, identifiant LRH-1 et PPARγ comme des cibles thérapeutiques innovantes capables de lever l’immunosuppression. A l’aide d’un modèle in vitro de différenciation des MDSC, nous avons montré l’interdépendance de LRH-1 et PPARγ dans la différenciation des MDSC via l’activation de l’axe LRH-1/15-HETE/PPARγ. Parallèlement, nous avons mis en évidence la capacité d’un agoniste inverse de LRH-1 (ML-180) à inhiber le développement de la CPCR, la différenciation des MDSC et la prolifération des cellules tumorales de colon
Involvement of monocytes/macrophages in the development of colonic inflammation and peritoneal carcinomatosis of colorectal origin: Role of C-type lectin receptors and nuclear receptors PPARγ and LRH-1.Monocytes and macrophages, key cells of innate immunity, express a large panel of membrane and nuclear receptors allowing them to modulate their phenotypes and functions in response to environmental stimuli. Due to this cellular adaptability, monocytes/macrophages control the innate and adaptive immune responses. Thus, these cells play a central role in the development of many pathologies, and consequently, represent relevant therapeutic targets. In this work, we first focused on the role of macrophage C-type lectin receptors in the control of colonic inflammation. We show, using two mouse models specifically invalidated for Dectin-1 and mannose receptor (MR) in the myeloid lineage, that Dectin-1 participates in the development of intestinal inflammation, whereas MR prevents it. Indeed, in a DSS (Dextran Sodium Sulfate)-induced colitis model, the Dectin-1 receptor on macrophages induces an increase in the recruitment of inflammatory monocytes in the colon in a CCL2-dependent manner. We also demonstrate that Dectin-1 is involved in the polarization of colonic macrophages towards a pro-inflammatory phenotype. Indeed, Dectin-1 promotes the synthesis of leukotriene B4 (LTB4) which, in turn, induces the secretion of interleukin-1β (IL-1β). These results highlight the involvement of the Dectin-1/CCL2/LTB4/IL-1β axis in the development of colonic inflammation and conversely assign a protective role to MR in this context. These data were correlated with an increase in Dectin-1 expression and a decrease in MR expression in the colon of inflammatory bowel disease (IBD) patients. This work is published in Cell Reports 2020: Divergent Roles for Macrophage C-type Lectin Receptors, Dectin-1 and Mannose Receptors, in the Intestinal Inflammatory Response. Cell Rep. 30, 4386-4398.e5In a second step, we investigated the roles of the nuclear receptors PPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor) and LRH-1 (Liver receptor homolog-1) of macrophages in the development of peritoneal carcinomatosis of colorectal origin (PCR). We have demonstrated for the first time, using two mouse models deleted for LRH-1 or PPARγ specifically in the myeloid lineage, that these nuclear receptors play a major role in the differentiation of myeloid precursors into myeloid-derived suppressor cells (MDSC) during PCR. Indeed, the absence of LRH-1 and PPARγ in myeloid cells inhibits MDSC differentiation and promotes the reactivation of the anti-tumor immune system. Associated with this immune reactivation, the mice show a strong decrease in tumor burden, identifying LRH-1 and PPARγ as novel therapeutic targets capable of removing immunosuppression. Using an in vitro model of MDSC differentiation, we demonstrated the interdependence of LRH-1 and PPARγ in MDSC differentiation via the activation of the LRH-1/15-HETE/PPARγ axis. In parallel, we demonstrated the ability of an LRH-1 inverse agonist (ML-180) to inhibit PCR development, MDSC differentiation and colon tumor cell proliferation. This work identifies the nuclear receptor LRH-1 as a key element in PCR progression and opens new therapeutic perspectives allowing both to remove immunosuppression by blocking MDSC differentiation and to directly inhibit colon tumor cell proliferation. This work is in progress

Les macrophages, cellules clés de la réponse immune innée, possèdent une remarquable plasticité phénotypique et fonctionnelle qui leur permet de s'adapter aux différents signaux présents dans leur microenvironnement. Parmi ces éléments, l'état inflammatoire général et métabolique de l'individu, ainsi que la présence d'agents étrangers potentiellement pathogènes vont influencer l'état de polarisation des macrophages. Dans ce travail de thèse, nous nous sommes plus particulièrement intéressés à deux types de facteurs environnementaux (i) le diabète de type 2, caractérisé par une inflammation à bas bruit et une susceptibilité accrue aux infections fongiques (ii) une infection parasitaire, la leishmaniose viscérale. Nous avons montré qu'une insulino-résistance engendrée par un régime hyperlipidique induit une polarisation inflammatoire M2b des macrophages associée à une susceptibilité accrue à une infection candidosique gastro-intestinale. Nous avons ensuite démontré que des ligands du récepteur nucléaire PPAR? orientent la polarisation M2b vers un phénotype M2a, efficace pour l'élimination de Candida albicans. Cette différenciation est caractérisée par la surexpression des récepteurs membranaires Dectine-1 et Mannose (MR), deux récepteurs lectine de type C impliqués dans l'internalisation de cette levure par le macrophage et dans la production d'intermédiaires réactifs de l'oxygène. Ce travail est publié dans PLoS One 2010 Sep 20;5(9):e12828. Doi: 10. 1371/journal. Pone. 0012828. Ainsi, approfondir les voies de signalisation conduisant à l'activation de PPARgamma présente un intérêt thérapeutique majeur. Lors de ce travail de thèse, nous nous sommes intéressés au récepteur nucléaire LRH-1, connu pour réguler l'expression d'enzymes impliquées dans la synthèse de dérivés d'acides gras, ligands potentiels de PPARgamma. Nous avons démontré l'implication de LRH-1 dans la polarisation M2. LRH-1 serait impliqué dans la production de ligands endogènes de PPARgamma et ainsi dans son activation. Nous avons également montré que les souris déficientes pour LRH-1 spécifiquement dans les macrophages présentent une susceptibilité accrue aux infections candidosiques avec des fonctions microbicides associées à la polarisation M2 altérées. Ces résultats suggèrent que LRH-1 pourrait être une nouvelle cible thérapeutique dans le traitement des infections fongiques en favorisant la production de ligands de PPARgamma et une polarisation M2 bénéfique pour l'hôte. Ce travail est actuellement en cours de soumission. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons étudié l'influence d'une leishmaniose viscérale sur la polarisation des macrophages. De façon originale, nous avons montré l'induction d'un phénotype M2b-like des macrophages en présence de Leishmania infantum, associé à une surexpression de trois récepteurs lectine de type C (Dectine-1, MR et SIGNR3/DC-SIGN). Nous avons également démontré que ces récepteurs influençaient le devenir de l'infection à L. Infantum. Ainsi, les récepteurs Dectine-1 et MR interviennent dans l'entrée de Leishmania dans les macrophages et la production d'intermédiaires réactifs de l'oxygène et de médiateurs inflammatoires lipidiques et cytokiniques, tels que le leucotriène B4 (LTB4) et l'interleukine 1beta, qui permettent l'élimination du parasite. Inversement, SIGNR3/DC-SIGN participe à la phagocytose de Leishmania et favorise la prolifération du parasite en inhibant l'activité microbicide des macrophages. Ce travail réalisé sur des souris invalidées pour ces récepteurs lectine a été confirmé dans des macrophages humains et mettent en évidence le rôle divergent de ces lectines de type C et des voies de signalisation qui leur sont associées dans la pathogenèse de la leishmaniose viscérale. Ce travail démontre l'importance de l'axe lectines/LTB4/LXA4 dans le contrôle de la production de médiateurs inflammatoires responsables de l'élimination des parasites, axe qui constitue donc une cible de premier ordre pour le traitement et la prévention de la leishmaniose viscérale. Ainsi, la modulation de ces facteurs cellulaires et moléculaires pourrait permettre d'orienter l'interaction Leishmania-macrophage pour le bénéfice du patient. Ce travail est publié dans Immunity, 2013, May 23;38(5):1038-49. Doi: 10. 1016/j. Immuni. 2013. 04. 010
Macrophages are key cells of the innate immune response and have phenotypic and functional plasticity which allows them to adapt to their microenvironment. Among these signals, the inflammatory and metabolic states, as well as the pathogenic agents, will influence the macrophage polarization. In this work, we focused on two environmental factors (i) the type 2 diabetes, characterized by a low grade inflammation and an increased susceptibility to fungal infections (ii) a parasitic infection, the visceral leishmaniasis. We have shown that a high fat diet induced-insulin resistance promoted an inflammatory M2b polarization of macrophages associated with an increased susceptibility to gastrointestinal candidiasis. We then demonstrated that ligands of the nuclear receptor PPARgamma shift the M2b polarization toward M2a phenotype, effective to eliminate Candida albicans. This macrophage polarization is characterized by the overexpression of Dectin-1 and Mannose (MR), two membrane macrophage C-type lectin receptors involved in the yeast internalization and in the production of reactive oxygen intermediates (ROS). This work is published in PLoS One, 2010, September 20, 5 (9): e12828. Doi: 10. 1371/journal. Pone. 0012828. Thus, the study of the signaling pathways leading to PPAR? activation could be of therapeutic interest during fungal infections. Therefore, we focused on the LRH-1 nuclear receptor, known to regulate the expression of enzymes involved in the synthesis of potential PPARgamma ligands. Here, we demonstrated for the first time the involvement of LRH-1 in the M2 macrophage polarization. Indeed, LRH-1 is implicated in the production of PPARgamma endogenous ligands and hence in its activation. We also showed that mice deficient for LRH-1 specifically in macrophages exhibit increased susceptibility to Candida albicans infection, associated with altered M2 polarization related-candidacidal functions. These results suggest that LRH-1 could be a novel therapeutic target in the treatment of fungal infections, promoting M2 polarization favorable for the host. This work is currently under submission. In the second part of this work, we studied the influence of visceral leishmaniasis on the macrophage polarization. Interestingly, we report that the macrophage response in vivo against Leishmania infantum is characterized by a M2b-like phenotype displaying a C-type lectin receptors signature composed of Dectin-1, MR and the DC-SIGN homologue SIGNR3. We also demonstrated that these receptors influenced the outcome of L. Infantum infection. Indeed, Dectin-1 and MR are involved in the L. Infantum internalization by macrophages and in the production of ROS, inflammatory bioactive lipids, and cytokines such as leukotriene B4 (LTB4) and interleukin 1beta, which enable parasite elimination. By contrast, SIGNR3/DC-SIGN favors parasite resilience through inhibition of the microbicidal functions of macrophages. Confirmation of these results in primary human macrophages highlights the divergent role for these C-type lectin receptors to the pathogenesis of Leishmania infantum. This work demonstrates the importance of lectins/LTB4/LXA4 axis in the control of the inflammatory mediator's production responsible for parasite elimination. Our findings suggest that effective modulation of these cellular and molecular factors might shift the Leishmania-macrophage interaction for the benefit of the patient. This work is published in Immunity, 2013, May 23;38(5):1038-49. Doi: 10. 1016/j. Immuni. 2013. 04. 010

Les macrophages sont la première ligne de défense de l'organisme et participent à l'orchestration de l'immunité adaptative. Cette population cellulaire issue des monocytes est caractérisée par sa plasticité phénotypique et fonctionnelle en réponse à des signaux du microenvironnement. Actuellement, les macrophages sont classés en différents sous-types compris entre les extrêmes de polarisations M1 et M2 qui peuvent être associés à la persistance ou à la résolution de l'infection. Ce travail de thèse repose sur 3 projets de recherche ayant pour objectif de déterminer les mécanismes qui sous-tendent la réponse des macrophages face au virus de l'hépatite C (VHC) ou face à Candida albicans, in vitro et in vivo. Nous mettons en évidence que les monocytes des patients ayant spontanément éradiqué le VHC ont un profil fonctionnel particulier avec une production d'IL-10 et de TNF-a, après stimulation par la protéine de capside virale Core ou les LPS, plus faible que celle des autres groupes. Notre travail sur les candidoses digestives a porté sur deux modèles, des animaux dont le gène du récepteur lectine Dectine-1 est spécifiquement invalidé dans les phagocytes et un modèle de diabète de type 2 induit par un régime hyperlipidique. Nous avons établi que l'expression de Dectine-1 sur les macrophages est dépendante de PPARgamma. D'autre part, l'utilisation de souris Dectine-1-/- montre clairement que Dectine-1 est indispensable aux fonctions candidicides in vitro et in vivo. Ainsi, l'activation alternative des macrophages par les ligands de PPARgamma permet de réduire significativement une infection à C. Albicans y compris dans un contexte de susceptibilité accrue liée au diabète de type 2
Macrophages are the first line of host defense and are involved in orchestrating adaptive immunity. Monocytes and Macrophages display a remarkable functional and phenotypic plasticity in response to environmental signals. Currently, macrophages are classified into different sub-types, covering a spectrum of activation on which M1 macrophages represent one extreme and M2 macrophages represent the other. This study is based on 3 research projects aimed at determine the mechanisms underlying the response of macrophages to hepatitis C virus (HCV) or against Candida albicans in vitro and in vivo in a context of type 2 diabetes. As regards the polarization of monocytes of patients infected with HCV, we find that the monocytes of spontaneous clearers have a particular functional profile, with dramatically low productions of IL-10 and TNF-a in response to stimulation with either the HCV Core protein or LPS. Moreover, we studied the susceptibility to C. Albicans gastrointestinal infection on two models, Dectin-1 receptor conditional knockout mice, in which Dectin-1 was selectively disrupted in phagocyte cells and a model of type 2 diabetes induced by fat diet. We first established that the expression of Dectine-1 on macrophages is dependent of PPARgamma. Then, the use of macrophage-specific Dectin-1 deficient mice shows that Dectin-1 is essential both to control C. Albicans infection in vitro and in vivo. Moreover, the alternative activation of macrophages by PPARgamma ligands significantly reduces C. Albicans infection in a context of increased susceptibility related to type 2 diabetes

Les cellules dendritiques (DCs) sont essentielles pourconnecter l'immunité innée et adaptative et orienter lesréponses des lymphocytes T. Les récepteurs Lectin de type-Cprésents dans les DCs sont activés par des ligands exogènes etendogènes, ce qui dicte la réponse aux agents pathogènes parla modulation de la réponse T immunitaire. Nous avons déjàdécrit chez le rat, l'expression de CLEC-1 dans les DCs etnous avons démontré in vitro son rôle inhibiteur dansl'activation de la réponse T helper (Th17) ). Dans cette étude,nous avons examiné l'expression et la fonction de CLEC-1dans les DCs humaines et nous avons montré son expression àla surface cellulaire de la sous-population de DCs CD16- dansle sang et sur les DCs dérivées des monocytes (moDCs).L'expression de CLEC-1 sur les moDCs est diminuée par desstimuli inflammatoires et renforcée par le TGF-β. De plus,nous avons démontré que CLEC-1 est un récepteurfonctionnel sur les moDCs humains et que, bien qu'il nemodule pas la voie classique d’activation du facteur detranscription NFкB lié à la protéine kinase Syk, il réprime laréponse ultérieure Th17. De façon très importante, en utilisantdes rats déficients pour CLEC-1, nous avons montré que laperturbation de la signalisation de CLEC-1 conduit à unesurexpression de la sous-unité Il-12p40 dans les DCs, et à uneexacerbation des réponses CD4+ Th1 et Th17 in vitro et invivo. Collectivement, nos résultats établissent le rôleinhibiteur de CLEC-1 dans les DCs, capable d'amortir leuractivation et la réponse ultérieure Th17. CLEC-1 peutreprésenter une cible thérapeutique utile pour moduler lesréponses immunitaires T dans un contexte clinique
Dendritic cells (DCs) represent essential antigen-presentingcells that are critical for linking innate and adaptive immunity,and influencing T-cell responses. Among pattern recognitionreceptors, DCs express C-type lectin receptors triggered byboth exogenous and endogenous ligands, therefore dictatingpathogen response, and also shaping T-cell immunity. Wepreviously described in rat, the expression of the orphan Ctypelectin-like receptor-1 (CLEC-1) by DCs anddemonstrated in vitro its inhibitory role in downstream Thelper 17 (Th17) activation. In this study,we examined theexpression and functionality of CLEC-1 in human DCs, andshow a cell-surface expression on the CD16+ subpopulation ofblood DCs and on monocytederived DCs (moDCs). CLEC-1expression on moDCs is downregulated by inflammatorystimuli and enhanced by TGF- β. Moreover, we demonstratethat CLEC-1 is a functional receptor on human moDCs andthat although not modulating the spleen tyrosine kinase (Syk)dependent canonical nuclear factor-kB (NFкB) pathway,represses subsequent Th17 responses. Importantly, usingCLEC-1–deficient rats, we showed that disruption of CLEC-1signaling led to an enhanced Il-12p40 subunit expression inDCs, and to an exacerbation of downstream in vitro and invivo CD4+ Th1 and Th17 responses. Collectively, our resultsestablish a role for CLEC-1 as an inhibitory receptor in DCsable to dampen activation and downstream effector Thresponses. As a cell-surface receptor, CLEC-1 may representa useful therapeutic target for modulating T-cell immuneresponses in a clinical setting

Les troubles du spectre autistique (TSA) sont un ensemble de pathologies neurodéveloppementales dont la prévalence est en constante augmentation. Ils sont caractérisés par des déficits de la communication et des interactions sociales, et par des comportements répétitifs et stéréotypés. A l’origine d’un handicap sévère, ces troubles se manifestent dès la petite enfance et persistent chez l’adulte. Cette entité recouvre des profils cliniques très hétérogènes, tant par le spectre de sévérité des symptômes que par la variété des comorbidités psychiatriques et somatiques associées sous tendues, en partie, par des dysfonctionnements immunitaires. Dans ce contexte, nous nous sommes de ce fait intéressés à l’identification et à la caractérisation de biomarqueurs à valence immunogénétique et immunologique afin d’en étudier l’implication physiopathologique et d’en déterminer les corrélats cliniques.De manière plus précise, nous avons évalué l’implication de la diversité génétique de molécules intervenant dans l’immunité innée (PRR, CLR, Dectin-1) et l’immunité adaptative (système HLA) dans le but d’apprécier le poids du terrain immunogénétique sur le développement de ces troubles. Puis, nous avons analysé les caractéristiques phénotypiques et fonctionnelles des cellules Natural Killer de patients atteints de TSA afin d’en déterminer l’influence potentielle sur l’état inflammatoire permanent rapporté chez certains patients TSA.Sur le plan immunogénétique, nous avons montré que la diversité génétique de Dectin-1 (CLEC7A), candidat sélectionné en raison de son implication dans la modulation de pathologies microbiennes intestinales, était associé à une forme particulière de TSA, le syndrome d’Asperger. Nous avons observé que le génotype CLEC7A rs2078178 GG ainsi que l’haplotype rs2078178/rs16910631 GG/GG étaient non seulement plus fréquents chez les Asperger mais aussi associées aux scores de quotient intellectuel (QI). Dans le cadre de l’analyse de la diversité génétique du système HLA, nous avons identifié un haplotype à risque (HLA-DRB1 *11-DQB1*07) et un haplotype de protection (HLA-DRB1 *17-DQB1*02). L’haplotype à risque étant également associé avec la sévérité de la maladie, reflétée par des scores défavorables dans les échelles cliniques psychiatriques testées.Dans la seconde partie de cette thèse nous avons exploré les modifications phénotypiques et fonctionnelles des cellules NK CD3- CD56+ chez les patients atteints d’autisme de haut niveau. Nous avons observé un état d’activation cellulaire permanent concomitant avec une capacité de dégranulation spontanée, une production soutenue d’IFN-?, et un état hypofonctionnel/épuisement cellulaire après stimulation in vitro. De plus, nous avons identifié un cluster spécifique de cellules NK, basé sur les paramètres HLA-DR, NKG2C, et KIR2DL1, et nous avons observé une augmentation inattendue des cellules NK NKG2C+ chez les sujets TSA en dehors de toute piste infectieuse connue. Enfin, nous avons observé que l’expression de KIR2DL1 et de HLA-DR était respectivement corrélée aux scores de QI et à ceux évaluant les CCA-LS et SAWR.Pris dans leur ensemble, ces données pourraient permettre de contribuer à une meilleure connaissance des mécanismes physiopathologiques associés au système immunitaire dans les TSA et par conséquent à une meilleure catégorisation des groupes de patients susceptibles de bénéficier de stratégies thérapeutiques immunologiques ciblées
Autism spectrum disorders (ASD) are severe neurodevelopmental conditions characterized by deficits in communication and social interactions, and by repetitive and stereotyped behaviors and exhibiting a constant increase in terms of prevalence. Affecting ages ranging from the early post-natal period to adulthood, ASD are clinically heterogeneous and often associated with psychiatric and somatic comorbidities underlying, in part, by immune dysfunctions. In this context, we thus focused our attention on the analysis of immunogenetic and immunological characteristics potentially implicated in the disease risk and/or in the modulation their clinical phenotype. More precisely, we evaluated the potential implication of the genetic diversity of molecules involved in innate (PRR, CLR, Dectin-1) and adaptive (HLA) immune responses in disease risk. We then analyzed the phenotypic and functional characteristics of Natural Killer cells in patients with ASD, investigating their influence on the permanent inflammatory state often reported in ASD settings.On the immunogenetic point of view, we found that the genetic diversity of Dectin-1 (CLEC7A), a candidate selected because of its involvement in the modulation of intestinal microbial disorders, was associated with Asperger syndrome, a clinical form of ASD. We observed that the CLEC7A genotype rs2078178 GG and the rs2078178 / rs16910631 GG /GG haplotype were not only more frequent in Asperger but also associated with IQ scores.In terms of HLA diversity, we identified a risk haplotype (HLA-DRB1 * 11-DQB1 * 07) and a protective haplotype (HLA-DRB1 * 17-DQB1 * 02). The risk haplotype was also found to be associated with disease’s severity as reflected by unfavorable scores in the psychiatric clinical scales tested.In the second part of this thesis, we explored the phenotypic and functional modifications of CD3-CD56 + NK cells in patients with high-functioning autism. We observed a permanent cell activation state concomitant with spontaneous degranulation capacity, sustained IFN-? production and cellular hypofunction /exhaustion after in vitro stimulation. In addition, we identified a specific cluster of NK cells, based on the HLA-DR, NKG2C, and KIR2DL1 parameters, and we observed an unexpected increase of NK NKG2C + cells in ASD subjects independent of CMV infection. Finally, we observed that the expression of KIR2DL1 and HLA-DR were respectively correlated with the scores of IQ and those evaluating the CCA-LS and SAWR scales.Taken together, these data could contribute to a better knowledge of the pathophysiological mechanisms associated with the immune system in ASD and consequently to a better categorization of the groups of patients likely to benefit from targeted immunological therapeutic strategies

RAE-1 est un ligand du récepteur activateur NKG2D exprimé par les cellules NK, impliquées dans les pathologies tumorales, infectieuses et auto-immunes. Les transcrits de Rae-1 sont exprimés dans l'embryon et sont réprimés pendant le développement sauf au niveau de la zone sous-ventriculaire (SVZ), principale zone de neurogenèse. Ils sont surexprimés dans le tissu nerveux après l’induction de l’EAE et dans les bulbes olfactifs après axotomie des afférences olfactives. Les neurosphères, issues de cellules souches neurales, expriment RAE-1 et l’expression disparait dès leur différenciation en cellules neurales, reproduisant ainsi la situation développementale. RAE-1 joue un rôle nonimmun dans la prolifération cellulaire des neurosphères. La souche C57BL/6 possède 2 protéines RAE-1 : RAE-1δ et RAE-1ε. RAE-1ε est caractérisée par une affinité plus élevée pour NKG2D que RAE-1δ. On observe des différences d’expression des transcrits de Rae-1δ et Rae-1ε en fonction des lignées cellulaires, des cultures primaires et des tissus que nous avons analysés. Ces différences s’expliquent notamment par un contrôle de la transcription par des régions promotrices différentes. L’expression de Rae-1 en condition pathologique corrèle avec un recrutement de cellules immunes exprimant NKG2D et NKp46, marqueur spécifique des cellules NK. La déplétion des cellules NK avant l’immunisation induit une phase aigüe plus sévère. Celle au moment du pic inhibe la rémission. Le nombre de cellules NK, très limité au moment de la phase aigüe, augmente pendant la phase de rémission. Nous proposons que les cellules NK jouent un rôle protecteur dans l’EAE soit en agissant sur les étapes de la réponse immune en périphérie, soit en interagissant localement avec des cellules exprimant RAE-1 comme les cellules souches neurales, les cellules macrophagiques recrutées ou la microglie activée.

Les fonctions et le répertoire des cellules tueuses naturelles (NK) ont été associés à la protection de l'acquisitior du VIH et à la progression de la maladie. La capacité des vecteurs vaccinaux à stimuler les cellules NK pour contrôler l'infection virale n'a pas été étudiée. Nous avons donc testé la capacité du candidat-vaccin MVAVIH et des protéines S100A9 à stimuler l'activité anti-VIHdes cellules NK. Nous avons développé un système de co-culture in vitro permettant l'amorçage des cellules NK par des cellules dendritiques (DCs) autologues infectées par MVAval. Nous avons observé que les cellules NK amorcées par MVAVIHcontrôlent plus efficacement l'infection VIH par rapport aux cellules NK amorcées par MVAWT, que l'activité antivirale est spécifique pour le VIH, et que NKp46, NKG2D et l'lL-15 membranaire sont impliquées dans l'amorçage de cellules NK. Auparavant, nous avons démontré que les cellules NK CD85j± contrôlent l'infection VIH dans des DCs autologues et que les protéines S100A9 sont des ligands de CD85j. Ici, nous avons montré'que la stimulation des cellules NK par les tétramères S100A9 augmente le contrôle de l'infection VIH dans des cellules T CD4+, que l'activité anti-VIII induite par les tétramères S100A9 est préservée pendant l'amorçage des cellules NK par MVAvlli. Dans l'ensemble, nous avons observé que les cellules NK amorcées par MVAviii contrôlent efficacement et de manière spécifique l'infection VIH. Puisque les tétramères S100A9 stimulent l'activité anti-VIH des cellules NK seuls ou en combinaison avec un candidat-vaccin, nous suggérons qu'ils pourraient être considérés comme adjuvants pour augmenter le contrôle de l'infection VIH par les cellules NK
Natural Killer (NK)-cell functions and repertoire have been associated with protection from HIV acquisition and disease progression. The capacity of viral vaccine vectors to stimulate NK cells to control infection has not been addressed. We therefore tested the ability of the HIV vaccine candidate MVAHIV and S100A9 proteins to stimulate the anti-HIV activity of NK cells. We developed an in vitro co-culture system allowing the priming of NK cells by autologous DCs infected by MVAHIV. Using this system, we observed that MVAWT-primed NK cells more efficiently control HIV infection compared to MVAWT-primed NK cells, that the enhanced antiviral activity is HIV-specific, and that NKG2D, NKp46 and membrane-bound IL-15 are implicated in the priming of NK cells. Previously we demonstrated that CD85j+ NK cells naturally control HIV infection in autologous DCs and that S100A9 proteins are ligands of CD85j. Here, we found that stimulation of NK cells by S100A9 tetramers enhances the control of HIV infection in CD4+ T cells, and that the anti-HIV activity induced by S100A9 tetramers is preserved during the priming of NK cells by MVAHIV. Overall, we observed that MVAHIV-primed NK cells efficiently and specifically control HIV infection. As S100A9 tetramers stimulate the anti-HIV activity of NK cells alone or in combination with a vaccine-candidate, we suggest that they might be considered as adjuvants to enhance the control of HIV infection by NK cells