Дисертації з теми "Myosine1g"
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Janardhana, Kurup Akshai. "Étude de la myosine nonconventionelle myosine1g dans l'asymétrie droite-gauche du poisson zèbre." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2022. http://www.theses.fr/2022COAZ6028.
Анотація:
L'asymétrie Droite-Gauche (DG) fait référence au placement asymétrique des organes par rapport à la ligne médiane du corps. Des dérèglements de l'établissement de l'asymétrie DG au cours du développement peuvent conduire à des organes mal placés - une situation qui peut être mortelle.J'utilise le poisson zèbre pour étudier les mécanismes qui établissent l'asymétrie DG. Chez le poisson, un organe cilié - la vésicule de Kupffer (KV) agit comme Organisateur central de l'asymétrie DG (ODG). Le ligand nodal Southpaw (Spaw) et son antagoniste Dand5 sont initialement exprimés de manière symétrique autour de l'ODG. Le battement de cils dans l'ODG établit un flux directionnel qui réprime Dand5 à gauche, permettant à Spaw de se propager à gauche par auto-induction et de diriger ainsi la latéralité du cœur, du cerveau et des viscères.Contrairement à de nombreux vertébrés, la drosophile établit l'asymétrie DG indépendamment de cils en utilisant un remodelage cellulaire chiral contrôlé par la myosine Myo1D. Notre groupe a montré précédemment que chez le poisson zèbre Myo1D régule l'asymétrie DG en orientant les cils de la KV pour permettre la formation du flux de fluide brisant la symétrie. En plus de myo1d, le génome du poisson zèbre code pour le gène étroitement apparenté myo1g. L'objectif de ma thèse a été d'étudier l'importance de Myo1G pour l'établissement de l'asymétrie DG.La KV agit comme un ODG central contrôlant la latéralité de différents organes. En conséquence, les mutants myo1d qui ont un flux de l'ODG altéré présentent des défauts DG au niveau du cœur, du cerveau et des viscères. En revanche les mutants myo1g présentent des anomalies DG dans le cœur et le cerveau, mais pas dans les viscères, ce qui suggère que myo1g exerce une fonction indépendante du flux.Pour tester directement cette hypothèse j'ai inactivé myo1g chez des mutants dnaaf1 dépourvus de motilité ciliaire et ne présentant donc pas de flux de l'ODG. Alors que le mouvement asymétrique des précurseurs cardiaques est randomisé vers le côté gauche ou droit chez les simple mutants dnaaf1, le mouvement asymétrique des cellules précurseurs est totalement perdu dans des double mutants myo1g ; dnaaf1, démontrant que myo1g fonctionne effectivement indépendamment du flux ciliaire.Mon travail révèle que Myo1G est nécessaire pour le transfert de l'information de latéralité de l'ODG vers les différents tissus cibles par la Spaw. Chez les mutants myo1g, l'expression de Spaw reste limitée à la partie postérieure de l'embryon ce qui permet d'établir correctement la latéralité des viscères postérieurs, alors que le cœur et le cerveau antérieurs ne parviennent pas à établir la latéralité.Spaw se lie à un complexe de récepteurs formé par Acvr2, Alk4 et le co-récepteur Oep. Les interactions ligand/récepteur déclenchent la phosphorylation des facteurs de transcription Smad2/3, qui sont ensuite transportés dans le noyau pour activer les gènes cible. La transduction du signal Nodal induit Spaw lui-même (qui se propage donc par auto-induction) ainsi que son antagoniste Lefty1.Lorsque j'ai injecté des quantités égales d'ARN de Spaw et évalué l'activation de lefty1, les mutants myo1g ont affiché une réponse plus faible que les animaux WT, indiquant ainsi une altération de la transduction du signal Nodal. En revanche, un variant constitutivement activé de Smad2 produit des réponses équivalentes chez les deux types d'animaux.Des études antérieures ont impliqué les Myosine1 dans le transport subcellulaire de récepteurs TGFβ. Différentes voies d'endocytose favorisent la transduction du signal ou au contraire, déclenchent la dégradation des récepteurs. Mes travaux montrent que les mutants myo1g présentent une diminution du nombre d'endosomes positifs aux récepteurs de Spaw, suggérant ainsi que Myo1G pourrait réguler l'asymétrie LR en contrôlant le trafic des récepteurs TGFβLeft-Right (LR) asymmetry refers to the asymmetric placement of organs across the midline. Dysregulation of LR asymmetry establishment during animal development can lead to misplaced organs - a situation that can be lethal.I use zebrafish as a model to study the mechanisms that establish LR asymmetry. In zebrafish, a ciliated organ - Kupffer's Vesicle (KV) acts as a central LR organizer (LRO). The Nodal ligand Southpaw (Spaw) and its antagonist Dand5 are initially expressed in a symmetric fashion around the LRO. The beating of cilia in the LRO establishes a directional fluid flow that represses Dand5 on the left, allowing Spaw to spread on the left side through auto-induction and thereby direct the laterality of heart, brain and viscera.In contrast to many vertebrates, Drosophila establishes LR asymmetry independently of cilia using chiral cell remodeling controlled by the unconventional Myosin Myo1D. Our group showed previously that zebrafish Myo1D regulates LR asymmetry by orienting KV cilia and promoting the formation of a symmetry-breaking fluid flow. In addition to myo1d, the zebrafish genome encodes the closely related gene myo1g. The objective of my PhD work has been to study the contribution of Myo1G to the establishment of zebrafish LR asymmetry.KV acts as a central LRO that controls the laterality of the different organs of the animal. Accordingly, myo1d mutants that have an altered LRO flow present LR defects at the level of the heart, brain and viscera. In contrast, myo1g mutants present LR defects in heart and brain but not viscera, suggesting that myo1g may exert a flow-independent function in LR asymmetry.In order to directly test this hypothesis, I inactivated myo1g in dnaaf1 mutants which lack ciliary motility and present therefore no LRO flow. While the asymmetric movement of cardiac precursors is randomized to either the left or right side in dnaaf1 single mutants, asymmetric precursor cell movement is altogether lost in myo1g ; dnaaf1 double mutants, demonstrating thereby that myo1g functions indeed independently of the LRO flow.My work reveals that in contrast to Myo1D which regulates LRO cilia orientation, Myo1G is required for the Nodal-mediated transfer of laterality information from the central LRO to different target tissues. In myo1g mutants, spaw expression remains limited to the posterior of the embryo, properly guiding the laterality establishment of the posterior viscera, whereas the anterior heart and brain fail to establish laterality.In the context of the establishment of Zebrafish LR asymmetry, the Nodal ligand Spaw binds to a receptor complex formed by Acvr2, Alk4 and the co-receptor Oep. Productive ligand/receptor interactions trigger the phosphorylation of the downstream transcription factors Smad2/3, which then translocate into the nucleus to activate downstream genes. Nodal signal transduction induces spaw itself (which therefore propagates through auto-induction) as well the Nodal antagonist lefty1.When I injected equal amounts of spaw mRNA in WT and myo1g mutants and assessed the response by monitoring lefty1 activation, myo1g mutant embryos displayed a weaker response to spaw overexpression than their WT siblings, indicating thereby an impairment in Nodal signal transduction. In contrast, misexpression of constitutively activated smad2 produced equivalent responses in WT and myo1g mutant animals.Of particular interest, previous studies have implicated Myosin1 proteins in the endocytic trafficking of TGFβ receptor molecules. Different endocytic pathways have been shown to either promote TGFβ receptor signal transduction or conversely trigger receptor degradation. My work shows that myo1g mutants present a decrease in the number of Nodal-receptor positives endosomes, suggesting thereby that Myo1G may regulate LR asymmetry by controlling TGFβ receptor trafficking
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El, Bahloul Amel. "Caractérisation fonctionnelle et structurale de trois myosines non conventionnelles : la myosine VI, la myosine VIIa et la myosine IB d'Acanthamoeba." Paris 11, 2004. http://www.theses.fr/2004PA112138.
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Harricane-Vors, Marie-Cécile. "Etudes in vitro de l'interaction entre l'actine et des protéines associées : gelsoline, caldesmone, myosine." Montpellier 1, 1990. http://www.theses.fr/1990MON11303.
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Lheureux, Karine. "Transduction mécano-chimique dans le muscle squelettique : étude comparative des complexes acto-myosine à l'état monomérique et filamenteux." Montpellier 1, 1995. http://www.theses.fr/1995MON1T015.
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Bonafé, Nathalie. "Structure et régulation du complexe actine-myosine dans le muscle squelettique." Montpellier 1, 1994. http://www.theses.fr/1994MON1T009.
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Stordeur, Jean-Marc. "Evaluation de la taille de l'infarctus du myocarde thrombolysé par le dosage de la myosine plasmatique." Montpellier 1, 1991. http://www.theses.fr/1991MON11213.
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Seyer, Pascal. "Etude de l'implication directe de l'activité mitochondriale dans la régulation de la différenciation des myoblastes." École nationale supérieure agronomique (Montpellier), 2005. http://www.theses.fr/2005ENSA0027.
Анотація:
De nombreuses données indiquent que, parallèlement à son rôle dans le métabolisme énergétique, l'activité mitochondriale intervient également dans l'induction de l'apoptose, ainsi que dans la régulation de la prolifération et de la différenciation cellulaires. Il existe en particulier une véritable régulation de la différenciation myogénique par l'activité mitochondriale. En effet, une inhibition de l'activité mitochondriale par le chloramphénicol abroge la différenciation des myoblastes. Réciproquement, cette dernière est potentialisée par une stimulation de l'activité de l'organite induite par surexpression du récepteur mitochondrial de la T3. Cette régulation est indépendante de la production d'ATP par l'organite, et implique le contrôle de l'expression de myogénine et de l'activité des facteurs myogéniques. Dans ce travail, nous avons étudié les mécanismes impliqués dans l'influence myogénique de l'activité mitochondriale. Dans une première partie, nous avons démontré que l'expression du proto-oncogène cMyc, est respectivement stimulée ou diminuée par une inhibition ou une stimulation de l'activité mitochondriale. Cette régulation s'effectue au niveau de la transcription et de la stabilité du messager, ainsi qu'au niveau de la localisation nucléaire de la protéine c-Myc. De plus, la surexpression de cMyc reproduit très exactement les effets d'une inhibition de l'activité mitochondriale: i) abrogation de la différenciation terminale; ii) inhibition de l'expression du facteur de différenciation myogénique myogénine, sans altération de l'expression de myoD; iii) blocage de l'aptitude des facteurs myogéniques à induire la différenciation; iv) inhibition de la sortie des myoblastes du cycle cellulaire. Ces résultats démontrent que cMyc est une cible importante de l'activité mitochondriale qui est impliquée dans l'influence de l'organite sur la différenciation des myoblastes. Dans une seconde partie, nous avons mis en évidence l'existence d'un autre gène-cible de l'organite: la phosphatase calcium-dépendante calcineurine. Son expression est respectivement inhibée ou stimulée par l'inhibition ou la stimulation de l'activité mitochondriale. De plus, l'expression d'une forme constitutivement active de calcineurine stimule la différenciation des myoblastes et l'expression de Myogénine, alors que ces deux événements sont bloqués par l'expression d'un ARN antisens calcineurine. Enfin, la stimulation de l'activité mitochondriale, comme l'expression d'une forme constitutivement active de calcineurine, stimule spécifiquement l'expression de l'isoforme lente des chaînes lourdes de myosine. Ces données démontrent que, en partie via l'expression de calcineurine, l'activité mitochondriale régule non seulement la différenciation des myoblastes mais détermine également le type contractile des fibres musculaires.
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Guimard, Laurent. "Modélisation et synthèse de peptides interagissant avec une protéine cible : application au complexe calmoduline-RS20." Montpellier 1, 1995. http://www.theses.fr/1995MON1T037.
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Barjot, Catherine. "Propriétés in vitro des cellules satellites des muscles lents et rapides de lapin, et modalités de la régénération musculaire in vivo." Montpellier 1, 1995. http://www.theses.fr/1995MON1T036.
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Rauzi, Matteo. "Mapping Subcellular Forces Controlling Morphogenesis." Thesis, Aix-Marseille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010AIX22025.
Анотація:
Pendant le développement d’un embryon, le remodelage des tissus amène un changement de forme: les tissu peuvent s’allonger, s’envaginer, s’étirer etc. Différentes voies de signalisation règlent ces comportements dans le temps et l’espace à travers le contrôle du cytosquelette d’actine et des tensions produites par ce dernier en interaction avec le moteur moléculaire Myosine-II.Quelle est la distribution des forces subcellulaires qui contrôlent la morphogenèse des tissus? Quelle est la nature des forces engendrée set pour finir, quelle est l’origine de ces forces? Voici les questions pour lesquelles ma thèse cherche des réponses. J’utilise l’élongation de la bande germinale de l’embryon de Drosophile comme système modèle afin d’investiguer la mécanique de la morphogenèse des tissusDuring embryonic development tissue remodeling leads to shape changes: for example, tissues can elongate, invaginate, and stretch. Distinct signaling pathways regulate in space and time these behaviors through the control ofthe actin cytoskeleton and of myosin-based tension required for cell shapechange. What is the spatiotemporal pattern of subcellular forcesthat orient tissue morphogenesis? What is the nature of the generated forces and finally, what lies at the origin of such forces? These are the main questions that my thesis tries to illuminate. I use the germbandelongation of the Drosophila embryo as a model system to investigate themechanics of tissue morphogenesis
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Vigouroux, Clémence. "Regulation of actin assembly and mechanotransduction in cell-matrix adhesion complexes by the protein RIAM The PIP2-talin-RIAM-VASP pathway controls actin polymerization and organisation Talin dissociates from RIAM and associates to vinculin sequentially in response to the actomyosin force Integrin-bound talin head inhibits actin filament barbed-end elongation." Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASL015.
Анотація:
Lors de la migration cellulaire, les complexes d’adhérence contrôlent la production de force et l’adaptation aux propriétés mécaniques de l’environnement. Le but de ce projet était de comprendre les mécanismes moléculaires par lesquels ces complexes contrôlent la force produite par l’assemblage du cytosquelette d’actine et codent une information mécanique en réaction biochimique. La première étude montre que les protéines taline, RIAM et VASP s’assemblent à la surface d’une membrane pour stimuler l’assemblage de l’actine par un nouveau mécanisme. La deuxième partie est basée sur la reconstitution de la machinerie mécano-sensible des complexes d’adhérence avec des protéines pures sur une surface micro-imprimée observée en microscopie. L’étude montre que la protéine étirable taline échange son partenaire RIAM contre la vinculine en réponse à la force du cytosquelette. La taline code donc l’information mécanique en recrutant les partenaires qui correspondent à son degré d’étirementDuring cell migration, adhesion complexes control the production of force and the adaptation to the mechanical properties of the environment. The aim of this project was to understand the molecular mechanisms by which these complexes control the force produced by actin assembly and encode mechanical information into biochemical reactions. The first study shows that the proteins talin, RIAM and VASP assemble on the surface of a membrane to stimulate actin assembly by a novel. mechanism The second part is based on the reconstitution of the mechanosensitive machinery of the adhesion complexes with pure proteins on a micropatterned surface observed in microscopy. The study reveals that the stretchable protein talin exchanges its partner RIAM for vinculin in response to the force transmitted by the actin cytoskeleton. Talin thus codes mechanical information by recruiting partners that correspond to its degree of stretch
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Blanchoin, Laurent. "Interaction actine-myosine. Caracterisation des complexes formes entre l'actine et le sous-fragment-1 de la myosine." Paris 6, 1996. http://www.theses.fr/1996PA066044.
Анотація:
L'interaction actine-myosine est la base moleculaire du phenomene de la contraction musculaire. Nous avons caracterise les complexes formes entre l'actine et le sous-fragment-1 de la myosine (s#1). Nous avons d'abord choisi comme modele l'etude de l'interaction entre l'actine monomerique (actine-g) et le sous-fragment-1 de la myosine. Nos etudes de cinetiques rapides, en fluorescence, montrent qu'en solution le sous-fragment-1 de la myosine peut interagir soit avec une molecule d'actine pour former un complexe binaire (gs), soit avec deux molecules d'actine pour former un complexe ternaire (g#2s) suivant le rapport actine-g/s#1. La formation de ces complexes resulte d'une etape d'isomerisation precedee d'un pre-equilibre rapide. La vitesse de formation du complexe g#2s (50s#-#1) est proche de celle du complexe filament d'actine (actine-f)-s#1 (20s#-#1). Gs et g#2s sont dissocies par les nucleotides atp et adp avec des vitesses differentes. Les cinetiques et le mecanisme de dissociation de g#2s par l'atp sont tres proches de ceux observes pour la dissociation du complexe actine-f-s#1 par le nucleotide. G#2s semble donc un bon modele pour l'etude de l'interface actine-f-s#1. L'orientation des deux molecules d'actine dans g#2s est probablement tres proche de celle des deux sous-unites longitudinales adjacentes du filament d'actine en interaction avec la tete de myosine. L'interaction actine-f-s#1 a ete etudiee dans des conditions physiologiques. La constante de vitesse d'association du s#1 avec l'actine-f est une fonction du nombre de s#1 fixes par actine dans le polymere. Les resultats sur l'interaction de l'actine-g ou -f avec le sous-fragment-1 de la myosine suggerent que differentes proprietes mecaniques lors de l'interaction actine-myosine peuvent etre correlees avec differentes orientations de la tete de myosine et differents rapports actine/myosine
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Dürrbach, Antoine. "Role des myosines 1 dans le transport intracellulaire." Paris 6, 1997. http://www.theses.fr/1997PA066070.
Анотація:
L'endocytose est une etape essentielle de la vie cellulaire impliquee dans l'homeostasie de l'individu, la maturation des antigenes au cours de la reponse immunitaire, la degradation et la regulation de signaux transmis au niveau de la membrane plasmique par des ligands extracellulairs. Au cours de l'endocytose dependant de recepteurs, les molecules extra-cellulaires sont internalisees dans les endosomes puis sont ensuite dirigees vers le compartiment de degradation, ou recyclees a la membrane plasmique. Ces differentes etapes necessitent des modifications dynamiques des membranes cellulaires aboutissant a la formation de compartiments d'endocytose de morphologie variee. Les filaments d'actine forment un reseau tres dynamique qui sous-tend la membrane plasmique. Le lien etroit entre les filaments d'actine et la membrane plasmique suggere qu'ils puissent participer aux modifications dynamiques des membranes cellulaires telles qu'on les observe au cours de l'endocytose et dans l'organisation du domaine apical des cellules epitheliales polarisees. Le but de ce travail a ete de preciser le role du cytosquelette d'actine au cours de l'endocytose dependant de recepteurs et d'etudier le role de mecano-enzyme associe a l'actine, les myosines i dans ce transport intracellulaire. Pour determiner les differentes etapes de l'endocytose impliquant l'organisation dynamique des microfilaments, les cellules ont ete incubees en presence d'un agent desorganisant les microfilaments (la cytochalasine d). Les cinetiques d'entree, de recyclage et de degradation des ligands ont ete determinees dans les cellules traitees ou non en presence de cytochalasine d. Nous avons observe que les microfilaments d'actine sont impliques dans deux etapes de l'endocytose dependant de recepteurs : l'internalisation de ligands au niveau de la membrane plasmique et egalement le transfert de ligands du compartiment d'endocytose tardif vers les lysosomes (j. Cell sciences, 1996, 457-465). Nous avons determine si des mecano-enzymes, les myosines i, interagissant avec les microfilaments et les membranes cellulaires pouvaient egalement etre impliquees dans certaines de ces etapes en produisant dans des lignees stables d'hepatomes en culture et dans les cellules epitheliales polarizees caco-2, la myosine i de la bordure en brosse, et differentes formes tronquees de cette proteine. Les resultats obtenus dans les cellules non polarisees (hepatomes) suggerent que la myosine i de la bordure en brosse est impliquee dans la regulation du transport membranaire des endosomes vers les lysosomes (proc. Natl. Acad. Usa. 1996, 93, 7053-7058). Dans les cellules epitheliales polarisees de l'intestin, il a ete propose que la myosine i de la bordure en brosse participe a l'organisation structurale de la bordure en brosse et au transport de proteines de l'appareil de golgi vers le domaine apical de ces cellules. En produisant la myosine i de la bordure en brosse et differentes formes tronquees de cette proteines dans les cellules epitheliales caco-2, nous avons observe qu'elle n'etait pas impliquee dans ces fonctions mais qu'elle participait a l'organisation des compartiments d'endocytose et de degradation. Les resultats de ce travail suggerent que les filaments d'actine et des mecano-enzymes associes a l'actine, les myosines i regulent differentes etapes du transport le long de la voie d'endocytose dans differents types cellulaires.
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Dürrwang, Ulrike. "Funktionelle Charakterisierung unkonventioneller Myosine aus Dictyostelium discoideum." [S.l. : s.n.], 2003. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=967265800.
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Lagny, Thibaut. "Myosine 1b – Mécanique membranaire et dynamique cellulaire." Thesis, Paris Sciences et Lettres (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018PSLET007.
Анотація:
La myosine 1b, un moteur moléculaire non-conventionnel, est impliquée dans une variété de processus cellulaires, contrôlant, par exemple la morphologie endomembranaire, le développement des axones et la ségrégation cellulaire. Le mécanisme par lequel la myosine 1b est capable de remplir ses fonctions dans une variété de régions cellulaires reste inconnu à ce jour, mais les phénotypes décrits suggèrent un rôle de la myosine 1b à l'interface entre les membranes et l'actine. Notamment, elle est nécessaire pour une ségrégation cellulaire efficace après l'activation du récepteur EphB2 qui induit la contraction cellulaire.Cette thèse présente une caractérisation détaillée des effets de la myosine 1b sur (1) les propriétés mécaniques de la membrane cellulaire, étudiées par tirage de tubes membranaires à l’aide d’une pince optique, et (2) la dynamique du cytosquelette d'actine et des protéines transmembranaires, étudiées à l’aide d’une variété de méthodes basées sur l’imagerie microscopique.Dans cette thèse nous montrons que les myosines de classe 1 ne changent pas généralement la tension membranaire effective dans les cellules adhérentes, probablement en raison de mécanismes de compensation efficaces. De plus, nous montrons que la friction entre le cortex d'actine et la membrane plasmique dépend de la densité totale des liens entre membrane et cortex et de la fraction relative des protéines liées. L’inefficacité de la contraction cellulaire observée en absence de la myosine 1b est donc indépendante d'un changement global et persistant de la tension membranaire effective.Dans la deuxième partie de cette thèse, nous montrons que la myosine 1b ne modifie pas la dynamique du récepteur EphB2, c'est-à-dire son comportement de diffusion et de clustering, dans la membrane plasmique.Enfin, en utilisant la microscopie TIRF-SIM et une description quantitative des flux d'actine, nous révélons que la myosine 1b a un effet intrigant mais non-intuitif sur la dynamique de l'actine à la surface ventrale des cellules.En conclusion, même si le mécanisme par lequel la myosine 1b change la réponse cellulaire après stimulation des récepteurs EphB2 reste encore inconnu, nous avons finalement été en mesure de lier sa fonction à une observation bien définie et quantifiable, à savoir la modification de la dynamique des flux d'actine. Les expériences futures seront en mesure de répondre à cette observation et de disséquer son mécanisme sous-jacent. Cela permettra de conclure si la myosine 1b a un effet commun qui régit tous ses rôles biologiques décritsThe unconventional motor protein myosin 1b is involved in a variety of cellular processes, controlling, e.g. endomembrane shape, axon development, and cell segregation. The mechanism by which myosin 1b is able to fulfil its functions in a variety of cellular locations remains unknown to date, yet the described phenotypes suggest a role of myosin 1b at the interface between membranes and actin. Notably, it is required for efficient cell segregation after activation of the EphB2 receptor which induces cell contraction.This thesis presents a detailed characterization of the effects of myosin 1b on (1) the mechanical properties of the cell membrane, studied by membrane tether pulling with an optical tweezer, and (2) the dynamics of the actin cytoskeleton and transmembrane proteins, studied by a variety of microscopy-based methods.Here we show that class 1 myosins do not generally change effective membrane tension in adherent cells, likely due to efficient compensation mechanisms. Furthermore, we show that friction between the actin cortex and the plasma membrane depends on the total density of membrane-cortex linkers and the relative fraction of bound proteins. The observed deficiency in cell contraction in absence of myosin 1b is thus independent of a persistent, global change in effective membrane tension.In the second part of this thesis, we show that myosin 1b likely does not change EphB2’s receptor dynamics in the plasma membrane, i.e. its diffusion and clustering behavior.Finally, using TIRF-SIM imaging and quantitative description of actin flows, we reveal that myosin 1b has an intriguing yet non-intuitive effect on actin dynamics at the cellular ventral surface.In conclusion, even if the mechanism by which myosin 1b changes cellular response to EphB2 stimulation still remains unknown, we have finally been able to pinpoint its function to a well-defined and quantifiable observation, i.e. changed actin flow dynamics. Future experiments will be able to address this observation and dissect its underlying mechanism. This will allow concluding on whether myosin 1b has a common effect that governs all its described biological roles
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Coureux, Pierre-Damien. "Etudes structurales d'un moteur moléculaire : la myosine." Paris 11, 2004. http://www.theses.fr/2004PA112073.
Анотація:
Les moteurs moléculaires sont des protéines capables de produire une force : elles peuvent hydrolyser un nucléotide, l'ATP, et convertir l'énergie chimique libérée en énergie mécanique. Cette caractéristique intéressante est partagée par trois grandes familles de moteurs moléculaires, les myosines, les kinésines et les dynéines. Les myosines, notre famille préférée, interviennent dans une kyrielle de fonctions cellulaires comme la contraction musculaire, l'oui͏̈e, la vue, la pigmentation de la peau, la digestion, le développement cérébral, le trafic intracellulaire, la division cellulaire ou bien la phagocytose. Pour comprendre les bases de leur génération de force, et pour à plus long terme utiliser les moteurs moléculaires comme cible thérapeutique, les myosines de classe II et V ont été étudiées pour leurs caractéristiques particulières. Ces myosines partagent le même mécanisme de production de force, même si elles possèdent des fonctions très différentes dans la cellule. Les résultats cinétiques et structuraux de ces deux classes de myosines ont permis de mieux comprendre le cycle catalytique de la myosine avec son partenaire, l'actine. De nouveaux états conformationnels de myosine V, isolés par cristallographie, ont permis de décrire les éléments structuraux responsables de l'interaction forte de la myosine et de l'actine, ainsi que l'effet du nucléotide sur le complexe actomyosine. Les études menées sur différents mutants de myosine II ont de plus apporté quelques éléments de réponse sur une étape clé de la production de force des myosines ; la libération de l'un des produits d'hydrolyseMolecular motors are proteins that are able to produce a force : they convert the chemical energy released from ATP hydrolysis into mechanical force. This interesting feature is shared among three molecular motors families : myosins, kinesins and dyneins. Myosins, our favorite family, are involved in a litany of cellular functions as muscular contraction, hearing, vision, skin pigmentation, digestion, brain development, intracellular traffic, cellular division or phagocytosis. To understand the basis of force generation, and one day to use molecular motors as therapeutic targets, class II and V myosins were studied for their interesting features. These myosins share the same production force mechanism, but they have totally different functions in the cell (one forms filaments and contracts muscular fibers whereas the other is a dimer and carries vesicules). Kinetic and structural results on those two myosins classes helped to better understand the catalytic cycle of myosin with its partner, actin. Some new conformational states of myosin V, isolated by crystallography, allowed us to describe the structural elements responsible of the strong interaction between myosin and actin, and the effect of the nucleotide on the actomyosin complex. The studies lead on different myosin II mutants gave some parts of answer on a key step on myosin production force ; one of the hydrolysis products release. These mutants participated to a better understanding of the aim of some residues in the kinetic differences within the myosin superfamily
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Isabet, Tatiana. "Etudes structurales d'un moteur moleculaire : la myosine." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066319.
Анотація:
Les moteurs moléculaires sont des protéines capables de produire une force : elles peuvent hydrolyser l'ATP en ADP + phosphate inorganique, et convertir l'énergie chimique libérée en énergie mécanique. Cette thèse se focalise sur l’étude d’une famille de moteurs moléculaires, les myosines qui se déplacent le long des filaments d’actine et assurent d’importantes fonctions cellulaires. La myosine VI est une myosine très particulière par la direction et la variabilité de ses pas. Plusieurs structures ont permis de mieux comprendre son mécanisme de motilité en révélant l’existence d’une flexibilité au sein du sous-domaine qui amplifie les réarrangements du domaine moteur, nommé bras de levier. Les réarrangements au sein de son domaine moteur est cependant similaire à ceux qu’effectuent les autres moteurs de directionalité opposée. La cristallisation de la myosine VI dans des états structuraux encore non décrits pour d’autres membres de cette superfamille a permis de mieux comprendre (1) comment l’hydrolyse peut avoir lieu dans le site actif et (2) comment la myosine évite des cycles futiles en piégeant efficacement le phosphate après sa génération (3) comment l’actine favorise la transition vers un autre état dans lequel une porte de sortie est ouverte pour laisser le phosphate s’échapper. L’analyse de mutants ponctuels a permis de valider les hypothèses émises par la visualisation de ces nouvelles structures.
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Bhat, Alka. "Les dynamiques d'agrégats de myosine et leurs rôles dans les fermetures d'epithelia." Thesis, Strasbourg, 2019. http://www.theses.fr/2019STRAJ070.
Анотація:
Les agrégats de myosine ont été observés dans plusieurs systèmes : chez la Drosophile, C. elegans, ou encore dans des expériences avec des cytosquelettes reconstitués in vitro. Cependant, leur intégration dans un cadre général manque. En théorie, les filaments d’actine et les moteurs de myosine suivent des lois génériques d’auto-organisation. Des découvertes récentes du laboratoire montrent que la dynamique de ces agrégats à l’intérieur d’un anneau de cytokinèse sont en effet associés à des fonctions biologiques : la génération de stress lorsque leurs mouvements sont radiaux, et au transport lorsque leurs déplacements sont tangentiels. Dans ce travail de thèse, nous montrons que ces règles simples sont conservées lors du processus de cicatrisation par l’anneau d’acto-myosine dans les monocouches de cellules épithéliales. En utilisant la microfabrication, la biologie cellulaire, l’imagerie quantitative et la physique théorique, nous établissons que les agrégats radiaux et tangentiels sont respectivement associés à une fermeture locale ou à un arrêt de l’anneau. La conservation de ce mécanisme entre les systèmes uni- et multi-cellulaires suggère que la dynamique de ces agrégats de myosine pourrait être utilisée comme la lecture générique pour cartographier et prédire les changements de formes des embryons en développementMyosin clusters have been reported in a variety of systems, such as Drosophila, C. elegans, and acto-myosin in vitro assays. However, their integration in a general framework is still lacking. In theory, actin filaments and myosin motors are predicted to follow generic rules of self-organisation. Recent findings from the laboratory reported that cluster dynamics within cytokinetic rings are associated with biological functions, i.e. stress generation when radial, and transport when tangential. In this study, we show that these simple rules hold as well for acto-myosin ring wound closure in epithelial monolayers. By using microfabrication, cell biology, quantitative imaging and theoretical physics, we report that radial and tangential clusters are related to local closures and stalled portions of rings, respectively. This conserved mechanism between single and multi-cellular system suggests that these myosin clusters dynamics could be used as generic read-out for mapping and predicting changes in shapes in developing embryos
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Plaçais, Pierre-Yves. "Propriétés mécaniques de la myosine II in vitro : de la molécule unique aux effets collectifs." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00410100.
Анотація:
Les fibres musculaires et les touffes ciliaires mécanosensibles de l'oreille interne des vertébrés sont deux systèmes complexes capables de développer une activité mécanique spontanément oscillatoire, dans des conditions où, au niveau moléculaire, des groupes de moteurs moléculaires opèrent au voisinage de leur force d'arrêt et sont soumis à une force de rappel élastique.Nous avons construit un dispositif reproduisant in vitro une configuration semblable. Nous avons observé qu'une assemblée de myosines II musculaires, consommant de l'ATP en interagissant avec un filament d'actine, et soumise à une force de rappel élastique exercée par une pince optique, est un système minimal capable d'osciller spontanément. La relation force-vitesse du système présente un comportement non-monotone lié à l'activité des moteurs. Cette propriété fournit un mécanisme pour interpréter les oscillations spontanées, comme il l'a été suggéré par différentes études théoriques antérieures.
Par ailleurs, des expériences préliminaires à l'échelle de la molécule individuelle indiquent que la raideur de l'accrochage actine-myosine II pourrait dépendre de la tension imposée au filament d'actine. Cette propriété pourrait expliquer les écarts entre les raideurs mesurées in vitro et estimées à partir d'expériences sur les fibres musculaires.
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Masson, d'Autume Adèle de. "Lymphocytes B régulateurs dans la GVH chronique humaine et rôle de la myosine 18A dans la cytotoxicité des lymphocytes NK." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCC177/document.
Анотація:
L’allogreffe de cellules souches hématopoïétiques allogéniques (HSCT, hematopoietic stem cell transplantation) reste le seul traitement curatif pour de nombreux patients atteints d’hémopathies malignes. Dans près d’un cas sur deux, l’allogreffe se complique de réaction chronique du greffon contre l'hôte (GVH (graft-versus-host) chronique). Les lymphocytes B régulateurs sont une population de lymphocytes B sécrétant de l’interleukine (IL)-10 et capables d’inhiber les réactions inflammatoires. Nous avons montré que chez l’homme atteint de GVH chronique active, la fréquence des lymphocytes B régulateurs est diminuée dans le sang périphérique. Les lymphocytes B régulateurs sont principalement enrichis dans la population B de phénotype mémoire et plasmablastique. Une augmentation de la fréquence des plasmablastes et une diminution du nombre de lymphocytes B de phénotype mémoire chez les patients allogreffés atteints de GVH chronique active suggèrent des altérations de la différenciation terminale des lymphocytes B. Nos travaux ont également porté sur les lymphocytes NK qui ont un rôle cytotoxique. Nous avons identifié l’un des récepteurs de surface des lymphocytes NK, CD245, comme étant la myosine 18A. La myosine 18A est impliquée dans l’organisation du cytosquelette et constitue un récepteur du surfactant A. Nous avons montre qu’il s’agissait d’un récepteur co-activateur de la cytotoxicité NK et que cette augmentation de cytotoxicité pourrait être liée à la stimulation de l’expression de la molécule de stimulation CD137 (4-1BB) à la surface du lymphocyte NK. Ces résultats suggèrent un potentiel rôle thérapeutique de l’utilisation d’anticorps agonistes spécifiques de CD245Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) remains the only curative treatment for many patients with haematological malignancies. In almost half of the cases, it is complicated by chronic graft-versus-host disease (cGVHD). Regulatory B cells are a population of B cells secreting interleukin (IL)-10 that can inhibit the immune responses. We have shown that in patients with active cGVHD, the frequency of regulatory B cells is decreased in the peripheral blood. Regulatory B cells are enriched in the memory B cell and plasmablast B cell pools. Increased plasmablasts frequencies and decreased memory B cells frequencies were found in patients with active cGVHD, suggesting alterations in the terminal differentiation of B cells. Our work also focused on NK cells that have a cytotoxic role. We identified one surface receptor of NK cells, CD245, as myosin 18A. Myosin 18A is involved in the organization of the cytoskeleton and is a receptor of the surfactant A. We have shown that myosin 18A was a coactivating receptor of the NK cytotoxicity and that this increase in cytotoxicity could be linked to the stimulation of the expression of CD137 (4-1BB) on the surface of the NK lymphocyte. These results suggest a potential therapeutic role of the use of specific CD245 agonist antibodies
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Hartmann, Falk Alexander Karl. "Molekulare Grundlagen der Regulation und Modulation der Motorfunktion von Myosinen." Hannover Technische Informationsbibliothek und Universitätsbibliothek Hannover, 2010. http://d-nb.info/1000893731/34.
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Brandstaetter, Hemma. "Cellular function of the myosin1c motor protein in membrane trafficking." Thesis, University of Cambridge, 2012. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.609957.
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Cormery, Bruno. "Adaptations fonctionnelles des unités motrices à la suite d'une paralysie complète induite par l'application chronique de tetrodotoxine sur le nerf sciatique." Aix-Marseille 2, 2000. http://www.theses.fr/2000AIX22065.
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Korfage, Joannes Antonius Maria. "Myosin heavy chain composition of the human jaw muscles." [S.l. : Amsterdam : s.n.] ; Universiteit van Amsterdam [Host], 2004. http://dare.uva.nl/document/75060.
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Planelles, Herrero Vicente José. "Bases mécanistiques et structurales de la régulation de l'activité des myosines." Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066465.
Анотація:
Les moteurs moléculaires sont des protéines capables de produire une force : elles transforment l'énergie chimique de l'hydrolyse de l'ATP en énergie mécanique. Cette thèse se focalise sur l'étude d'une famille de moteurs moléculaires, les myosines, qui se déplacent le long des filaments d'actine et assurent d'importantes fonctions cellulaires.La myosine VI est une myosine très particulière car elle est la seule à se déplacer vers l'extrémité négative des filaments d'actine. Elle est produite dans la cellule sous forme auto-inhibée, inactive. Dans la cellule, son activité est également régulée par plusieurs protéines interagissant avec la queue C-terminale de la myosine VI. Ces protéines, présentes à des endroits précis de la cellule, recrutent la myosine VI et dictent l'action qu'elle doit effectuer. Des analyses de SAXS, de dispersion de la lumière, de microscopie, d'interaction et de mutagénèse ont permis de mieux comprendre le mécanisme régulant l'adoption de l'état auto-inhibé, ainsi que son activation par le calcium. L'interaction avec différents partenaires a été caractérisée. GIPC1, le partenaire le plus étudié, promeut de façon indirecte la dimérisation et l'activation de la myosine VI.Pendant ma thèse, j'ai également été impliqué dans deux autres projets qui s'inscrivent dans la logique du projet de thèse et qui ont mené à la publication de quatre articles. Deux chapitres, plus brefs, sont donc dédiés à ces projets. Le deuxième chapitre porte sur la régulation de l'activité de la myosine VII par ses partenaires cellulaires. Finalement, le troisième chapitre est dédié à l'étude de la modification allostérique de l'activité des myosines par des petites moléculesMolecular motors are essential agents of force production in the cells: they convert the chemical energy released by the hydrolysis of ATP into mechanical work. This thesis focuses on myosins, a family of molecular motors responsible for actin-based motility. Myosin VI is unique among all of the myosin superfamily members in that it moves in the opposite direction of all other known myosins. Previous work revealed myosin VI tail ability to fold back, constituting a potential auto-inhibited state that prevents motor activity. Several myosin VI partners, binding to the C-terminal tail of the myosin, have been identified and shown to recruit the motor for different functions. In the first chapter of this thesis, the mechanism allowing the regulation of myosin VI activity has been studied using biochemical and biophysical analysis (SAXS, light scattering, microscopy, binding assays and mutagenesis). GIPC1, the most studied myosin VI partners, promotes myosin dimerization and activation. During my PhD, I have been also involved in two other projects, in line with my thesis project, that have led to the publication of four articles. Two shorter chapters are therefore devoted to these projects. The second chapter of my thesis explores myosin VII activity regulation by its cellular partners. Finally, the third chapter is devoted to the allosteric regulation of myosins activity by small molecules
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Planelles, Herrero Vicente José. "Bases mécanistiques et structurales de la régulation de l'activité des myosines." Electronic Thesis or Diss., Paris 6, 2017. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2017PA066465.pdf.
Анотація:
Les moteurs moléculaires sont des protéines capables de produire une force : elles transforment l'énergie chimique de l'hydrolyse de l'ATP en énergie mécanique. Cette thèse se focalise sur l'étude d'une famille de moteurs moléculaires, les myosines, qui se déplacent le long des filaments d'actine et assurent d'importantes fonctions cellulaires.La myosine VI est une myosine très particulière car elle est la seule à se déplacer vers l'extrémité négative des filaments d'actine. Elle est produite dans la cellule sous forme auto-inhibée, inactive. Dans la cellule, son activité est également régulée par plusieurs protéines interagissant avec la queue C-terminale de la myosine VI. Ces protéines, présentes à des endroits précis de la cellule, recrutent la myosine VI et dictent l'action qu'elle doit effectuer. Des analyses de SAXS, de dispersion de la lumière, de microscopie, d'interaction et de mutagénèse ont permis de mieux comprendre le mécanisme régulant l'adoption de l'état auto-inhibé, ainsi que son activation par le calcium. L'interaction avec différents partenaires a été caractérisée. GIPC1, le partenaire le plus étudié, promeut de façon indirecte la dimérisation et l'activation de la myosine VI.Pendant ma thèse, j'ai également été impliqué dans deux autres projets qui s'inscrivent dans la logique du projet de thèse et qui ont mené à la publication de quatre articles. Deux chapitres, plus brefs, sont donc dédiés à ces projets. Le deuxième chapitre porte sur la régulation de l'activité de la myosine VII par ses partenaires cellulaires. Finalement, le troisième chapitre est dédié à l'étude de la modification allostérique de l'activité des myosines par des petites moléculesMolecular motors are essential agents of force production in the cells: they convert the chemical energy released by the hydrolysis of ATP into mechanical work. This thesis focuses on myosins, a family of molecular motors responsible for actin-based motility. Myosin VI is unique among all of the myosin superfamily members in that it moves in the opposite direction of all other known myosins. Previous work revealed myosin VI tail ability to fold back, constituting a potential auto-inhibited state that prevents motor activity. Several myosin VI partners, binding to the C-terminal tail of the myosin, have been identified and shown to recruit the motor for different functions. In the first chapter of this thesis, the mechanism allowing the regulation of myosin VI activity has been studied using biochemical and biophysical analysis (SAXS, light scattering, microscopy, binding assays and mutagenesis). GIPC1, the most studied myosin VI partners, promotes myosin dimerization and activation. During my PhD, I have been also involved in two other projects, in line with my thesis project, that have led to the publication of four articles. Two shorter chapters are therefore devoted to these projects. The second chapter of my thesis explores myosin VII activity regulation by its cellular partners. Finally, the third chapter is devoted to the allosteric regulation of myosins activity by small molecules
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Porquet, Nicolas. "Caractérisation du rôle non ciliaire de la Kinésine-2 dans l'établissement de l'axe droite/gauche chez Drosophila melanogaster." Electronic Thesis or Diss., Nice, 2013. http://www.theses.fr/2013NICE4112.
Анотація:
Chez Drosophila melanogaster, l’orientation horaire (dextrale) des organes est déterminée par un gène unique codant la Myosine non conventionnelle de type ID (MyoID). Un crible génétique modificateur en contexte sensibilisé pour myoID nous a permis d’identifier klp64D comme un gène interagissant génétiquement avec myoID. Celui-ci code l’une des sous-unités motrices du complexe moteur hétérotrimérique Kinésine-2 (Kin-2) constitué d’une autre sous-unité motrice Klp68D et d’une sous-unité adaptatrice Kap3. Nous montrons que klp68D interagit génétiquement avec myoID lors de la mise en place de l’axe D/G. Ceci suggère donc un rôle de l’ensemble du complexe Kin-2 dans l’asymétrie D/G. Chez les vertébrés, Kin-2 participe à l’assemblage des cils impliqués dans la détermination D/G lors de la gastrulation. Or, chez la drosophile, les cils ne sont pas requis dans la détermination D/G. MyoID et Kin-2 sont requis de manière synchrone dans la voie dextrale lors de la détermination D/G. En outre, Kin-2 joue un rôle important dans la rotation horaire du génitalia et l’enroulement dextral de l’intestin postérieur adulte (hindgut). Kin-2 est requise dans l’organisateur D/G de l’hindgut adulte pour l’orientation biaisée des cellules qui n’expriment pas MyoID. Par ailleurs, nos résultats suggèrent que l’activité de Kin-2 n’est pas requise dans le sous-ensemble de cellules qui exprime MyoID. Enfin, le rôle joué par Kin-2 dans l’asymétrie D/G semble indépendant de la polarité apico-basale et des jonctions adhérentes. Kin-2 pourrait donc jouer un rôle non ciliaire dans la phase de propagation de l’information directionnelle induite par MyoIDIn nature most of the bilateralia are left/right (L/R) asymmetric. In Drosophila, asymmetry is apparent in the directional looping of gut and terminalia. Dextral orientation of organs is controlled by the activity of a single gene myosin ID (myoID) whose mutation induces a fully inverted L/R axis. To date little is known of how the initial L/R cue induced by MyoID is propagated and maintained through the rest of the architecture of the L/R organizer. Here we present the identification of klp64D and klp68D as new myoID interacting genes. These genes encodes the two motor sub-units of the Drosophila Kinesin-2 motor complex. Interestingly, this microtubule-based motor plays a ciliary function in vertebrate L/R morphogenesis. However, we show that in Drosophila cilia are not involved in L/R asymmetry. We demonstrate that Kinesin-2 acts during L/R determination in the dextral pathway. Furthermore Kinesin-2 is required for proper L/R patterning both of male genitalia and of adult hindgut. L/R activity of Kinesin-2 is restricted to cells that do not express MyoID suggesting a role for this motor in propagation of the L/R cue. Our findings show for the first time a non ciliary role for Kinesin-2 in L/R axis determination. Thus, these results shed light on an evolutionary conservation between Drosophila and vertebrate L/R determination
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Cordonnier, Marie-Neige. "Etude du rôle de la Myosine I alpha dans l'endocytose." Paris 6, 2001. http://www.theses.fr/2001PA066408.
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Lavie, Julie. "Approche des mécanismes de différenciation du muscle lisse vasculaire par l'étude de la régulation de la transcription des gènes VCAM-1 et sm-MHC." Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR28682.
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Aubry, Aurélie. "Recherche d'interacteurs de Myosine II au cours de l'intercalation cellulaire chez l'embryon de Drosophila melanogaster." Thesis, Aix-Marseille 2, 2011. http://www.theses.fr/2011AIX22117/document.
Анотація:
Un tissu épithélial est composé de cellules polarisées, étroitement liées les unes aux autres par des jonctions adhérentes. La perte de ces jonctions adhérentes est la première étape dans le développement des cancers au niveau des tissus épithéliaux. Il est donc important de comprendre les mécanismes d’attachement inter-cellulaire. Pour étudier ces interactions, nous utilisons comme modèle l’embryon de drosophile, où une fine régulation des jonctions adhérentes est requise pour l’une des étapes précoces de développement. Durant cette étape du développement, les cellules épithéliales changent de voisines le long de l’axe antéro-postérieur sans perdre leur adhérence cellulaire. Ce processus d’intercalation cellulaire est dû au recrutement polarisé du moteur moléculaire Myosine II au niveau des jonctions qui se désassemblent. Il a été mis en évidence qu’au cours de ce processus la perte de fonction de la voie JAK/STAT perturbe la localisation de la Myosine II. Au cours de ma thèse, j’ai réalisé un crible génétique dans un contexte mutant pour le ligand de la voie JAK/STAT pour me permettre d’identifier des interacteurs potentiellement impliqués dans le contrôle spatial de Myosine II. J’ai pu mettre en évidence plusieurs gènes pouvant être impliqués dans cette intercalation. Parmi ces candidats, je me suis focalisée sur celui montrant le plus fort phénotype : le gène CG13992. La caractérisation de ce gène a fut la seconde étape de mon travail de thèse (car seules les séquences nucléotidiques et protéiques étaient connues). Les résultats obtenus ont permis de mettre en évidence l’implication de ce gène dans la localisation de la Myosine II mais ils restent à confirmerEpithelial tissue is composed of polarized cells, which are closely attached to each other by adherens junctions. The loss of adherens junctions is often a key step in the development of cancer in epithelial tissues. It is therefore important to understand the mechanisms of attachment between the cells. To study such epithelial plasticity, we use the Drosophila embryo as a model system, where a fine regulation of adherens junctions is required for one of the early processes of development: germ band elongation. During this process, epithelial cells change their neighbors along the anterior-posterior axis (cell cell intercalation) without loss of cell adhesion. Polarized recruitment of the molecular motor Myosin II at the junctions, that disassemble and reassemble, underlies the intercalation process. In part, intercalation relies on the normal activity of the the JAK / STAT pathway that is crucial for the spatial control of Myosin II. During my PhD, I conducted a genetic screen, in a mutant for the ligand of the JAK / STAT pathway, designed to identify second site interactors for Myosin II control. I identified several genes that appear to be involved in the intercalation process. Among these candidates, I focused on one with the strongest phenotype: the gene CG13992. The functional characterization of this gene was the second stage of my thesis (because only the nucleotide and the protein sequences were known). Preliminary results highlight the involvement of this gene in the localization of Myosin II that remain to be confirmed
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Mercadier, Jean-Jacques. "Expression des isomyosines cardiaques : modifications au cours des surcharges hémodynamiques chroniques du cœur de rat et du cœur humain." Paris 11, 1985. http://www.theses.fr/1985PA112211.
Анотація:
Grâce à son pouvoir de catalyse de l’hydrolyse de l’ATP et aux changements conformationnels qui y sont associés, la myosine représente la principale protéine de la contraction musculaire. Elle existe, au niveau du ventricule du rat, sous trois isoformes, V1, V2 et V3, par ordre d’activité ATPasique décroissante, la forme V1 étant majoritaire chez l’adulte. On observe, lors des surcharges chroniques de travail hémodynamique, parallèlement à l’hypertrophie cardiaque, une redistribution des isoformes marquée par une accumulation de la forme V3 et une diminution parallèle de la forme V1. Cette redistribution, au moins en partie responsable de la diminution des performances contractiles du muscle, améliore le rendement de la contraction, ce qui en fait un authentique mécanisme d’adaptation. L’oreillette humaine, également constituée, de façon prédominante, d’une myosine de type V1, est également le siège d’une telle redistribution tandis que le ventricule, déjà composé principalement d’une myosine de type V3, n’est pas concerné par ce mécanisme. La redistribution des isoformes de la myosine cardiaque au cours des surcharges hémodynamiques chroniques représente le premier exemple d’une régulation de la contractilité du muscle cardiaque par l’expression différentielle d’une famille multigénique de protéinesOwing to its ability to hydrolyze ATP and to the associated conformational changes, myosin is the most important protein of muscle contraction. Pyrophosphate gel electrophoresis under non denaturing conditions separates rat ventricular myosin in three isoforms V1, V2 and V3 in order of decreasing electrophoretic mobility and ATPase activity, V1 being the predominant form in the adult animal. During chronic hemodynamic overload of the rat ventricle, a myosin isoenzymic redistribution is observed in parallel with ventricular hypertrophy, with an accumulation of the V3 isoform and a parallel decrease in the V1 isoform. This redistribution is, at least in part, responsible for the decrease in the speed of muscle shortening observed with hypertrophy. Moreover, improving the efficiency of muscle contraction, it can be regarded as a truly adaptational mechanism. The myosin isoenzymic redistribution is also observed in chronic overload of the human auricle, also predominantly composed of a “V1-like” isoform. By contrast, the human ventricle already almost exclusively composed of a “V3-like” isoform, is scarcely concerned by this phenomenon. Myosin isoenzymic redistribution observed with chronic hemodynamic overload represents the first example of the regulation of myocardial muscle contractility by differential expression of a family of multigenic proteins
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Diagana, Thierry. "Analyse fonctionnelle de la région promotrice du gène murin codant pour la chaîne lourde de la myosine musculaire MyHC IIB." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05S033.
Анотація:
Les isoformes des chaînes lourdes de la myosine (MyHC) sont d'excellents marqueurs du développement et de la physiopathologie du tissu musculaire strié. L'isoforme MyHC IIB, caractéristique des fibres squelettiques à métabolisme glycolytique, est exprimée tardivement au cours du développement. Son expression est soumise à de nombreuses régulations physiologiques telles que l'activité contractile ou le taux circulant d'hormones thyroi͏̈diennes. Nous avons isolé la totalité du gène MyHC IIB de souris ainsi que son promoteur. Pour identifier les séquences déterminantes pour la régulation de ce gène, nous avons cloné en amont d'un gène rapporteur CAT, différents fragments de la région promotrice. Des expériences de co-transfection, avec des vecteurs d'expression pour les facteurs myogéniques, dans des cellules musculaires murines C2 nous ont permis de mettre en évidence une activation du promoteur MyHC IIB, par les facteurs myogéniques. Cette activation en trans est indépendante de l'intégrité d'une boîte E proximale qui est un site de fixation potentiel pour les facteurs de la famille MyoD. Trois motifs nucléotiques sont importants pour le fonctionnement de ce promoteurs dans les cellules C2 : les régions mAT1 et mAT2 (riches en nucléotides A et T et pouvant fixer les facteurs MEF2 et Oct-1) et la boîte TATA. Les techniques classiques de biologie moléculaire, mutagenèse, étude des protéines affines à l'ADN et transfection, nous ont permis de définir les rôles de ces différents éléments dans la régulation de l'expression du gène MyHC IIB.
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Bertet, Claire. "Rôle et régulation du recrutement de la myosine-II au cours de la morphogénèse épithéliale chez l'embryon de drosophile." Aix-Marseille 2, 2008. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2008AIX22047.pdf.
Анотація:
Pendant ma thèse, j’ai utilisé l’allongement de la bandelette germinale de l’embryon de drosophile comme modèle d’étude de la morphogénèse épithéliale. Cet allongement repose sur un processus d’intercalation cellulaire au cours duquel les cellules changent de voisines le long de l’axe antéropostérieur de l’embryon. J’ai montré que pour s’intercaler, les cellules remodèlent leurs jonctions adhérentes d’une façon organisée et polarisée dans le plan de leur tissu. La Myosine-II est le moteur moléculaire qui orchestre ce remodelage polarisé : elle est enrichie de façon polarisée, spécifiquement au niveau des jonctions devant être remodelées. Un crible génétique de délétions m’a permis d’identifier un nouveau mécanisme contrôlant le recrutement de la Myo-II. Ce mécanisme est basé sur la régulation de l’architecture du réseau des filaments d’actine. La voie JAK/STAT et une voie encore inconnue contrôlant la polarité planaire utilisent ce mécanisme pour réguler le recrutement de la Myo-IIDuring my PhD, I have used drosophila germband extension as a model to study epithelial morphogenesis. This process relies on epithelial cell intercalation during which cells exchange neighbors along the anteroposterior axis of the embryo. I have shown that to intercalate, cells rearrange their adherens junctions in a highly organized and polarized pattern within the plane of the tissue. The Myosin-II molecular motor orchestrates this polarized remodeling. Myo-II is specifically enriched at the level of disassembling junctions. A deletion genetic screen has allowed me to identify a new mechanism controlling Myo-II recruitment. This mechanism is based on regulating the actin network organization. Using this mechanism, the JAK/STAT signaling pathway and a still unknown planar polarity pathway control Myo-II recruitment during germband elongation
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Tetaert, Daniel. "Structure et rôle de la chaîne légère dite alcaline de la myosine ventriculaire de coeur de porc." Lille 1, 1988. http://www.theses.fr/1988LIL10017.
Анотація:
Étude de la structure primaire d'une chaîne légère dite alcaline (ALC) de la myoxine ventriculaire de coeur de porc. Une série de clivages spécifiques et de protocoles de purification a été utilisée. La région terminale est très riche en résidus de proline et en alanine. Les études prévisionnelles, de conformation et d'hydrophobie, le dichroisme cuculaire ont permis d'absorber la structure secondaire, d'apporter les infirmations nécessaires à l'élaboration d'un modèle moléculaire. Les chaînes ALC ont un rôle fondamental dans la contraction musculaire lors de l'augmentation du flux calcique.
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Spéder, Pauline. "Asymétrie droite-gauche chez la drosophile : étude d'un mutant Situs inversus." Nice, 2007. http://www.theses.fr/2007NICE4038.
Анотація:
Établir une asymétrie Droite-Gauche (DG) invariante est crucial pour l’organisation structurale et fonctionnelle des organes, comme le cœur. Des études menées sur les Deutérostomes ont proposé des modèles élégants de brisure de la symétrie, fondés sur un flux nodal ou des flux ioniques. Cependant, l’identité des déterminants responsables de l’orientation DG (choix du situs) reste méconnue, de même que la conservation des mécanismes DG précoces au cours de l’évolution. Notre étude a identifié chez la Drosophile le gène codant pour une myosine non conventionnelle de type ID (Myo31DF) comme un gène Situs inversus, dont les mutations inversent la torsion dextrale du genitalia adulte, et la position de l’intestin embryonnaire. Une analyse génétique mosaïque identifie le segment A8 du disque génital larvaire comme un organisateur DG, et révèle une compartimentation antéro-postérieur de la fonction de Myo ID, qui dirige le développement dextral (A8p) et réprime une asymétrie sinistrale par défaut (A8a). Comme attendu d’un déterminant DG, Myo ID a une fonction d’initiateur, une expression endogène symétrique, et sa surexpression symétrique n’entraîne pas de défauts DG. De plus, Myo ID interagit et co-localise avec la b–caténine, comme le seul autre gène Situs inversus à avoir été moléculairement identifié, Inversin chez la souris, suggérant que les gènes Situs inversus pourraient établir l’axe DG via les jonctions adhérentes. Cette étude a établi l’existence d’un axe DG chez la Drosophile, et identifié un moteur moléculaire lié à l’actine, Myo ID, comme un déterminant DG contrôlant le choix du situs, et ainsi l’établissement d’une asymétrie invariante chez un protostomeThe establishment of a fixed and invariant Left-Right (LR) asymmetry is crucial for both the structural organization of the body and for organ’s functions, like the heart. Studies led on deuterostomes have proposed elegant models for symmetry breaking, involving Nodal flow or ion flows. However, the molecular nature of the determinant(s) responsible for the LR orientation (situs choice) remains largely unknown, as well as the conservation of early mechanisms during evolution. Our study has identified the conserved type ID unconventional myosin gene (Myo31DF) as a Situs inversus gene in Drosophila. Myo31DF mutations reverse both the dextral looping of genitalia, a prominent LR marker in adult flies, and the positioning of embryonic gut. Genetic mosaic analysis identifies the A8 segment of the genital disc, the precursor of adult genitalia, as a LR organizer, and reveals an anterior–posterior compartmentalization of Myo ID function that directs dextral development (A8p) and represses a sinistral default asymmetry (A8a). As expected of a LR determinant, Myo ID has a trigger-like function, as well as an endogenous symmetric expression, and its symmetric overexpression doesn’t lead to LR defects. We also showed that Myo ID interacts and colocalizes with β-catenin, like the only other molecularly identified Situs inversus gene, the mouse Inversin. It suggests that Situs inversus genes could direct LR development through the adherens junction. We demonstrate here the existence of a LR axis in Drosophila, and identify an actin-dependant molecular motor, Myo ID, as a dextral determinant controlling situs choice, and thus establishment of an invariant asymmetry in a protostome
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Ripoll, Léa. "Role of myosin VI and actin dynamics in membrane remodeling during pigmentation." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCB102.
Анотація:
Le trafic intracellulaire consiste en la formation et le transport de vésicules ou tubules qui acheminent des composants protéiques et lipidiques entre les différents organites ou avec la membrane plasmique. L’élaboration de ces tubulo-vésicules est initiée par le remodelage local d’une membrane, tout d’abord en générant une courbure puis un bourgeon qui, s’allongeant, forme la tubulo-vésicule. Enfin, la rupture de la membrane, ou scission, libère le transporteur nouvellement formé. Ces étapes repose sur un sculptage profond de la membrane. Ceci requière des forces générées par des moteurs moléculaires, lesquels s’associent aux cytosquelettes comme les microtubules ou les filaments d’actine. Afin de mieux comprendre comment le cytosquelette et leurs moteurs façonnent ces transporteurs, nous avons examiné le rôle de l’actine et de la myosine VI dans la formation de tubules membranaires aux mélanosomes. Les mélanosomes sont des organites apparentés aux lysosomes, générés dans les mélanocytes de la peau et de la choroïde de l’œil, et qui sont le lieu de synthèse et de stockage d’un pigment, la mélanine. Dans l’épiderme, ces compartiments spécialisés évoluent par différentes étapes de maturation qui aboutissent à leurs transferts aux cellules voisines, les kératinocytes. Les mélanosomes sont des organites dynamiques qui reçoivent et recyclent constamment des composants membranaires, comme la SNARE VAMP7. Nous résultats montrent que la myosine VI et son adapteur optineurine se localisent à un sous-domaine spécifique de la membrane des mélanosomes, ou elles contrôlent la scission de tubules. En effet, l’activité motrice de la myosine VI et le réseau d’actine branchée, dépendant des complexes Arp2/3 et WASH, permettent la constriction des membranes du tubule et son détachement du mélanosome. Un défaut de scission de ces tubes engendre des mélanosomes plus pigmentés, enrichis en cargos et au pH plus acide. L’altération de l’homéostasie du mélanosome affecte sa fonction, comme sa capacité à être sécrété et transféré aux kératinocytes. Nos résultats démontrent que la myosine VI en coopération avec le cytosquelette d’actine permet la constriction et fission de membranes aux mélanosomes. Les intermédiaires de transport ainsi formés recyclent des protéines cargos pour leur possible réutilisation, et participent ainsi au maintien de l’homéostasie et de la fonction de ces organitesIntracellular transport among organelles and the plasma membrane occurs through the formation and transport of vesicular and tubular membrane carriers. The formation of these carriers requires first the bending of membrane and the generation of a bud, followed by its elongation to form the tubule-vesicle. Lastly, the carrier is released from the membrane source by the scission of the membrane. Importantly, all these different steps need an accurate orchestration to properly deform the membrane. The actions exerted by molecular motors onto microtubule and actin cytoskeletons provide forces onto membrane that contribute to its remodeling during the biogenesis of carrier. Actin filaments (F-actin) and myosins are thought to participate in the initiation and the fission of carriers. However, the role of actin machinery during carrier biogenesis remains elusive. We thus decided to address the role of F-actin and the actin-based motor myosin VI in the formation of tubular intermediates at melanosome. Melanosomes are lysosome-related organelles of skin melanocytes and eye pigment cells that function in the synthesis and storage of the melanin pigment. Melanosomes originate from endosomes and progressively mature into fully pigmented compartments, which fate is to be secreted and transferred to neighboring keratinocytes. Melanosomes are dynamic organelles that constantly receive, but also recycle proteins such as the SNARE VAMP7 through the formation and release of tubular intermediates. Our work reveals that myosin VI, together with Arp2/3- and WASH-mediated branched actin localize at specific melanosomal subdomains where they promote the constriction and scission of tubular intermediates. This fission event allows the export of components such as VAMP7 from melanosomes and promotes their maturation and subsequent transfer to keratinocytes. Altogether, our results uncover a new role for myosin VI and F-actin in the constriction and scission of membrane tubules at melanosome that is required for organelle homeostasis and function
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Marion, Sabrina. "Rôle de la myosine IB durant la phagocytose chez Entamoeba histolytica." Paris 11, 2004. http://www.theses.fr/2004PA112142.
Анотація:
Entamoeba histolytica, parasite de l'homme, est l'agent étiologique de l'amibiase. Plusieurs caractéristiques jouent un rôle majeur dans la dissémination de ce parasite dans l'organisme, comme sa mobilité ou sa capacité à ingérer les cellules humaines par phagocytose. Nos travaux de recherche visent d'une part, à comprendre les mécanismes par lesquels E. Histolytica reconnaît la cellule humaine et active le processus de phagocytose et d'autre part, à identifier les molécules parasitaires qui interviennent durant ce phénomène. Nous nous sommes plus particulièrement intéressés à comprendre la régulation de la myosine IB, le moteur moléculaire qui fournit l'énergie permettant la formation de la vacuole de phagocytose. Nous avons montré que la myosine IB, par une activité de pontage des filaments d'actine, joue un rôle majeur de structuration du réseau d'actine. Cette activité paraît réguler la densité du cytosquelette cortical et ainsi, la flexibilité de la membrane plasmique lors de l'émission des pseudopodes de phagocytose. D'autre part, nous avons purifié les phagosomes à l'étape transitoire de vacuole de phagocytose. Les protéines présentes sur les phagosomes précoces des souches sauvages et surproduisant la myosine IB (MyoIB+) ont été identifiées par spectroscopie de masse en tandem. Cette étude a permis de définir les acteurs moléculaires chez E. Histolytica participant aux événements de signalisation et à l'activité du cytosquelette d'actine durant le processus d'internalisation. De plus, la comparaison entre les phagosomes des souches sauvages et MyoIB+ a permis d'identifier des protéines dont l'activité serait liée à celle de la myosine IB durant la phagocytosePhagocytosis of human cells by the human parasite E. Histolytica is a crucial activity for the invasive process of the host tissues. Myosin IB, the unique unconventional myosin of E. Histolytica, is the molecular motor providing forces to deform the plasma membrane to engulf human cells. During my PHD, I characterized the biophysical properties of myosin IB in living parasites and showed that this molecule can cross-link actin filaments and thereby regulate the viscoelastic properties of the cortical actin gel. This property appeared important for the dynamics of the membrane deformation at the first step of the phagocytic process. Furthermore, I used a proteomic approach to dissect the early signaling events involved in the activity of the cytoskeleton during phagocytosis. I purified phagosome at different time point of the uptake process and identified the phagosomal proteins by mass spectroscopy. We identified 600 proteins involved in cytoskeleton activity, signaling pathways, lytic factors and new putative receptors. Furthermore, comparing the phagosomal proteins of early phagosomes purified from the wild type cells and parasites that overproduce myosin IB, we identified putative candidates, which the activity is linked to myosin IB function during the first steps of the phagocytic process in E. Histolytica
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Chauca, Espinoza Karen Lorena. "Study of the dynamics of cortical myosin in the early embryo of the nematode C. elegans." Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2023. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2023SORUS411.pdf.
Анотація:
La myosine II non musculaire est un acteur clé dans la morphogenèse cellulaire et tissulaire. La dynamique corticale de la myosine sous forme de minifilaments in vivo reste cependant mal comprise. Ici, nous utilisons la microscopie SIM-TIRF dans un embryon en développement pour mieux comprendre les mécanismes et la structure de l’assemblage des minifilaments bipolaires. En combinant la microscopie SIM-TIRF et TIRF à molécule unique, nous avons d'abord caractérisé la structure des minifilaments, en particulier leur taille et leur stœchiométrie, à plusieurs stades du début de l'embryon. À l'aide de films SIM-TIRF à haute résolution temporelle, nous avons ensuite caractérisé une gamme diversifiée de comportements des minifilaments de myosine, des événements de division de minifilaments, des alignements de plusieurs minifilaments sur de longues distances (que nous avons appelés fibres de protostress), des événements de déliaison partielle et, de manière surprenante, des événements de déliaison et rereliure séquentielles au cortex. En utilisant des mutants du domaine moteur de la myosine, nous avons testé comment ces comportements reposaient sur l'activité motrice de la myosine. Nos données suggèrent que l'unité fonctionnelle de l'assemblage de la myosine peut être composée d'un ou de plusieurs minifilaments bipolaires de myosine, mais également que les minifilaments ne se désassemblent pas complètement lors de leur déliaison et de leur diffusion dans le cytoplasme. Pour tester la stabilité globale des assemblages bipolaires, nous avons ainsi utilisé des expériences de photoconversion et montré que les minifilaments de myosine sont bien recyclés sur de longues distances et temps de diffusion dans le cytoplasme sous forme d'unités minifilamentaires, qui ne se dissolvent pas lors de leur déliaison. Nos travaux mettent ainsi en lumière la manière dont les minifilaments de myosine interagissent avec le cortex, mais offrent une nouvelle perspective sur la manière dont ils s'assemblent, se désassemblent et sont recyclés au cours de la morphogenèse cellulaireNon-muscle myosin II is a key player in cell and tissue morphogenesis. The cortical dynamics Myosin as minifilaments in vivo however remain poorly understood. Here, we use SIM-TIRF microscopy in a developing embryo to gain further insights into the mechanisms and structure of bipolar minifilaments assembly. Combining SIM-TIRF and TIRF single-molecule microscopy, we first characterized the structure of minifilaments, specifically size and stoichiometry, at multiple stages in the early embryo. Using high temporal-resolution SIM- TIRF movies, we then characterized a diverse range of behaviors of myosin minifilaments, minifilament split events, alignments of multiple minifilaments over long distances (which we called protostress fibers), partial unbinding events and, surprisingly, events of sequential unbinding and rebinding to the cortex. Using mutants of the myosin motor domain, we tested how these behaviors relied on the myosin motor activity. Our data suggest that the functional unit of myosin assembly may be composed of one or multiple myosin bipolar minifilaments, but also that minifilaments do not fully disassemble upon unbinding and diffusing in the cytoplasm. To test the overall stability of bipolar assemblies, we thus used photoconversion experiments and show that the myosin minifilaments are indeed recycled over long distances and diffusion times in the cytoplasm as minifilamentous units, that do not dissolve upon unbinding. Our work thus sheds light on how myosin minifilaments interact with the cortex, but offers a new perspective on how they assemble, disassemble and are recycled during cell morphogenesis
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Chougule, Anil Mahaveer. "Rôle des régulateurs de l'actine dans la mise en place de l'asymétrie gauche-droite chez la Drosophile : la formine DAAM est essentielle pour l’asymétrie gauche-droite." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019AZUR4007.
Анотація:
Quoiqu’apparemment symétriques vus de l’extérieur, la plupart des animaux montrent des asymétries droite-gauche (DG) au niveau de leurs organes internes. L’asymétrie des organes viscéraux est contrôlée par des voies de signalisation dont la dérégulation entraine des désordres congénitaux sévères. L’asymétrie DG chez les vertébrés et les invertébrés est régulée par différents éléments du cytosquelette : les vertébrés utilisent les microtubules et des cils motiles, alors que les invertébrés, dont la Drosophile, emploient le cytosquelette d’actine. Quoique le cytosquelette d’actine soit considéré comme important pour l’asymétrie DG, à ce jour, les régulateurs de l’actine impliqués dans ce processus n’ont pas été identifiés. Chez la Drosophile, l’asymétrie dextrale est déterminée par un seul gène, codant pour la myosine conservée Myosin1D (Myo1D), découverte par l’équipe de S. Noselli. myo1Dest un gène situs inversus et déterminant DG unique. La perte de fonction de myo1Dentraine une inversion totale de l’asymétrie DG, aboutissant à un phénotype sinistral. Les bases génétiques du développement sinistral sont inconnues. Des études chez le zebrafish et le xénope ont montré que l’orthologue de myo1D contrôle aussi l’asymétrie chez les vertébrés, la fonction de myo1D étant ainsi conservée évolutivement. Des travaux récents du laboratoire ont montré que myo1D est non seulement nécessaire mais aussi suffisant pour induire l’asymétrie DG de novo à toutes les échelles biologiques. Cette activité nait d’une interaction chirale entre Myo1D et l’actine filamenteuse, comme montré in vitro dans un modèle non cellulaire. Afin de définir le mécanisme d’action de Myo1D in vivo, il est donc essentiel de comprendre le rôle de l’actine et de ses régulateurs dans l’asymétrie DG. Dans ce but, j’ai réalisé un crible RNAi afin de tester le rôle du cytosquelette dans les voies dextrale et sinistrale. Mon travail a permis d’identifier le gène DAAM, codant pour un nucléateur d’actine de la famille des formines, comme un facteur essentiel pour l’asymétrie DG chez la Drosophile. Des mouches mutantes pour DAAM deviennent symétriques. De façon intéressante, j’ai pu montrer que DAAM est nécessaire aux deux voies dextrale et sinistrale. L’analyse génétique révèle que le développement dextral requiert un réseau de F-actine assemblé par l’activité coordonnée des formines Diaphanous et DAAM. De plus, DAAM est requis pour l’asymétrie DG de novo, suggérant que le réseau d’actine assemblé par DAAM est essentiel à la chiralité induite par Myo1D. La surexpression de DAAM amplifie la chiralité induite par Myo1D, suggérant que DAAM est un facteur limitant pour l’asymétrie DG. Les résultats montrent aussi que DAAM interagit avec l’homologue Drosophile de la Profiline, Chickadee (Chic), et que la réduction de l’activité de chic mime celle de DAAM. Par ailleurs, le crible a permis de mettre en évidence le rôle de nouveaux facteurs de régulation de l’actine dans l’asymétrie DG, à savoir fli, Lg(2)l, Tec29, Dizzy, βPS mys, rheaetRap1, agissant dans un réseau régulant l’asymétrie. Dans leur ensemble, ces résultats originaux montrent le rôle fondamental de l’actine et de la formine DAAM dans le contrôle de l’asymétrie DG, révélant ainsi de nouveaux mécanismes de régulation contrôlant l’asymétrie chez les animauxBesides their external bilateral symmetry, most of the animals display left-right (LR) asymmetry of their internal organs. The asymmetric shapes and positions of the visceral organs are regulated by LR asymmetry signaling pathways and their disturbance results in severe congenital disorders. LR patterning in vertebrates and in invertebrates is regulated by different cytoskeletal elements: vertebrates employ microtubules and cilia, while in invertebrates, including Drosophila, the actin cytoskeleton has a prominent role. The actin system has long been proposed to play important role in animal LR asymmetry. To date, the proteins that are directly involved in the regulation of actin dynamics in establishing LR asymmetry have not been identified. In Drosophila, dextral anatomical handedness is determined by a single gene, the conserved type 1D myosin (Myo1D), discovered by the Noselli laboratory. myo1D is a unique situs inversus gene and a key LR determinant. Loss of myo1D function leads to a totally inverted LR organ asymmetry in flies (Sinistral). The genetic and developmental basis of sinistral asymmetry is unknown. Studies in zebrafish and Xenopus have shown that the myo1D orthologs control LR asymmetry indicating its evolutionarily conserved function in LR patterning in Drosophila and vertebrates. Further recent work by the Noselli laboratory has discovered that Myo1D is not only necessary for establishing LR asymmetry in Drosophila but also sufficient to generate de novo LR asymmetries at multiscale levels. This de novo asymmetry is assumed to result from a chiral interaction of Myo1D and actin filaments based on noncell-based assays. Defining this mechanism in vivo is critical to understanding the role of actin and its regulators as a reinforcing link between Myo1D and the actin cytoskeleton in animal LR asymmetry. To characterize the role of actin cytoskeleton in LR asymmetric development, I performed an RNA interference-based genetic screen down-regulating the functions of cytoskeletal genes in both Dextral and Sinistral genetic backgrounds. My study identifies the main actin nucleator formin DAAM as an essential component for LR asymmetry determination in Drosophila. Flies lacking DAAM show symmetrical morphogenesis of LR organs indicating the loss of LR asymmetry. Notably, DAAM is required for both dextral and sinistral development in Drosophila. In addition, genetic analysis revealed that dextral development requires the F-actin network constructed by coordinated activities of the formins Diaphanous and DAAM. Moreover, DAAM is also required for de novo formation of LR asymmetry, suggesting that the DAAM nucleated F-actin network acts as an essential structural component required for chirality determination involving Myo1D activity. DAAM overexpression enhances these asymmetries further adding an extra chiral twist, reflecting that a pool of DAAM decorated actin filaments acts as limiting factor for organ looping in LR asymmetry. In this setting, DAAM molecularly interacts with the Drosophila homolog of Profilin, chickadee (chic) and silencing chic mimics the DAAM loss-of-function phenotype. I also uncovered roles for a subset of actin regulators fli, Lg(2)l, Tec29, Dizzy, βPS mys, rhea and Rap1 in LR asymmetry, indicating they functionally act in the same actin regulatory pathway. Altogether, these original findings clearly demonstrated the fundamental role of actin and its regulation by formins in LR asymmetry and provide insight into the molecular basis underlying animal asymmetry
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Chen, Yolande. "Mécanismes de la thrombocytopénie chez les patients atteints de maladies liées au gène MYH9." Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCC107.
Анотація:
Certaines mutations du gène MYH9 sont à l'origine de maladies autosomales dominantes. Elles associent macrothrombocytopénie à diverses anomalies d'organes. Les mécanismes causant la formation de plaquettes géantes sont encore mal compris. Le but de ce travail est d'étudier la formation des proplaquettes de mégacaryocytes (MKs) cultivés in vitro, chez 11 patients atteints de macrothrombocytopénies liées au gène MYH9, en comparaison avec celle de témoins. La formation des proplaquettes de MKs de patients en culture fut étudiée en présence ou absence de blebbistatine ou de Y27632, un inhibiteur de ROCK. La distribution de myosine IIA et d'actine fut étudiée au cours de l'étalement de mégacaryocytes sur différentes surfaces par analyse confocale. Nous avons trouvé que les MKs obtenus chez 11 patients forment moins de proplaquettes in vitro que les mégacaryocytes de témoins. Les MKs de patients ont un étalement anormal sur polylysine, fibronectine et collagène, avec un réseau d'actine désorganisé et une augmentation de la formation de fibres de stress. Des études de force de traction ont montré que les MKs mutants ont une augmentation de forces contractiles lors de l'adhésion. La blebbistatine, ainsi que le Y27632, corrigent la formation de proplaquettes et normalisent l'ultrastructure des MKs mutants. Mous montrons qu'au cours des macrothrombocytopénies liées au gène MYH9, les mutations modifient la function globale de MYH9 et causent un défaut de formation de proplaquettes par excès de contractilité de l'actomyosine des MKs en cours d'étalement. Ces résultats suggèrent de nouvelles stratégies thérapeutiques réduisant la contractilité d'actomyosine chez les patientsMutations in the MYH9 gene cause autosomal dominant MYH9-related diseases (MYH9-RD) that associate macrothrombocytopenia with various other clinical conditions. The mechanisms giving rise to giant platelets remain poorly understood. The aim was to study the proplatelet formation (PPF) derived from megakaryocytes (MKs) generated in vitro from 11 patients with MYH9-RD with different mutations, compared with controls. Proplatelet formation from cultured patients' MKs was evaluated with or without blebbistatin or the ROCK inhibitor Y27632. Myosin HA and actin distribution were studied in spreading MKs on different surfaces by immunoconfocal analysis. Kinetic studies of contractility were performed on spreading MKs and the impact of blebbistatin on the maturation of the patients' MKs was evaluated by electron microscopy. We show that in vitro MKs of 11 patients formed significantly fewer proplatelets than controls. MKs from MYH9-RD displayed an abnormal spreading on polylysine, fibronectin and collagen, with a disorganized actin network and a marked increase in stress fiber formation. Traction force microscopy studies demonstrated an elevated level of contractile forces in adherent mutated MKs. The myosin II inhibitor blebbistatin and the ROCK inhibitor Y27632 both rescued the proplatelet formation defect and normalized the ultrastructural characteristics of MYH9-RD MKs. Altogether, our results show that in MYH9-RD, mutations modify the overall MYH9 function and provoke a proplatelet defect through an excess of actomyosin contractility in spreading MKs. These results may promote new therapeutic strategies aimed at reducing this actomyosin contractility
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Lepine, Priscilla. "Rôle de la myosine 1b dans la ségrégation cellulaire et le développement intestinal induits par la signalisation EphB/éphrineB." Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066367.
Анотація:
L’interaction des récepteurs tyrosine kinase transmembranaires EphB avec leurs ligands les éphrinesB induit une signalisation régulant la migration et la prolifération cellulaires. La signalisation EphB/éphrineB induit des changements morphologiques comme une contraction cellulaire et la formation de filopodes. En contrôlant la migration cellulaire, la signalisation EphB/éphrineB guide aussi les cellules progénitrices vers un environnement adéquat et régule indirectement leur prolifération. Au cours de cette étude, nous avons voulu comprendre le mécanisme qui couple la membrane plasmique au cytosquelette d’actine à la base de la migration cellulaire lors de la signalisation EphB/éphrineB. Nous avons montré qu’EphB2 interagit avec la myosine 1b (Myo1b) et induit sa phosphorylation. Myo1b est impliquée dans la ségrégation cellulaire induite par la signalisation EphB2/éphrineB1 et les protéines ephb2 et myo1b contrôlent le développement de l’épithélium intestinal de poisson zèbre en régulant la prolifération cellulaire. Ces deux processus dépendent de la migration cellulaire, du remodelage du cytosquelette d’actine et du couplage entre le réseau cortical d’actine et les récepteurs EphB2 à la membrane plasmique. Les myosines 1 sont de bons candidats pour coupler la membrane plasmique au réseau cortical d’actine. L’activité motrice de Myo1b et sa phosphorylation sont nécessaires à la formation de filopodes et de câbles actomyosines induite par la signalisation EphB/éphrineB. Ces observations suggèrent qu’en couplant la membrane plasmique au réseau cortical d’actine, Myo1b est un effecteur de la signalisation EphB2/éphrineB1 et participe au développement de l’intestinInteraction of EphB transmembrane tyrosine kinase receptors with their ligands ephrinB triggers signaling that regulates cell migration and proliferation and contributes to the formation of tissues boundaries. Changes in cell morphology including cell contraction and formation of protrusions have been reported during this process. By controlling cell migration EphB/ephrinB signaling is also required to guide progenitor cells to an appropriate environment and indirectly regulates their proliferation. The mechanisms controlling cell migration induced by EphB/ephrinB signaling are not fully characterized. We aimed to understand the mechanism that couples plasma membrane to the cortical actin network upon EphB/ephrinB signaling. We found that the activated EphB2 receptors interact with myosin 1b (Myo1b) and promote its phosphorylation. Myo1b is required for cell segregation mediated by EphB2/ephrinB1 signaling and both ephb2 and myo1b proteins also control the intestinal epithelium development in zebrafish by regulating cell proliferation. Both cell segregation and proliferation rely on directed cell migration, actin cytoskeleton remodeling and coupling between the cortical actin network and the EphB2 receptors at the plasma membrane. Myosins 1 which mechanically couple membranes to actin cytoskeleton can fulfill this function. We observed that Myo1b motor activity and its phosphorylation are required for protrusions and actomyosine cables formation upon EphB/ephrinB signaling. These data suggest that by coupling the plasma membrane to the underlying cortical actin network Myo1b conveys EphB2 signaling and contributes to cell segregation and intestinal epithelium development
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Petzoldt, Astrid G. "DE-cadherin regulates unconventional myosin ID through myosin IC in Drosophila melanogaster." Nice, 2009. http://www.theses.fr/2009NICE4048.
Анотація:
L’établissement précis de l’asymétrie G/D stéréotypée, qui est contrôlé par un programme génétique, est crucial pour le fonctionnement d’un organisme. Ce n’est que depuis récemment que le mécanisme de l’établissement de l’asymétrie G/D est étudié chez l’invertébré Drosophila Melanogaster (Hozumi et al. , 2006 ; Speder et al. , 2006). La Myosine non conventionnelle de type ID (MyoID) a été caractérisée comme un déterminant de la rotation dextrale de la plaque génitale mâme pendant le stade pupal. Afin d’identifier de nouveaux effecteurs de MyoID, nous nous sommes concentrés sur son plus proche homologue, MyoIC, car sa surexpression mime le phénotype perte de fonction de MyoID, ce qui entraîne une inversion de l’axe G/D et une rotation sinistrale des organes génitaux. Nous présentons des évidences que ce situs inversu phénotype es entraîné par l’inhibition de la fonction de MyoID par MyoIC, conséquemment nous définirons MyoIC comme un facteur anti-dextral. Il a été montré que la queue de MyoID pourrait interagir physiquement avec la beta-Catenine, (Speder et al. , 2006). Nos expériences de perte et gain de fonction de la DE-Cadhérine, un composant majeur des jonctions adhérentes, avons révélées une interaction linéaire entre DE-Cadherine et les deux Myosines. DE-Cadhérine est capable de contrôler l’expression de MyoIC en agissant comme inhibiteur de MyoIC. Car la fonctionnalité de MyoID est de réguler par l’expression de MyoIC. MyoIC fonctionne comme médiateur entre DE-Cadhérine et MyoID. Nous proposons un nouveau réseau de régulation pour l’établissement de l’asymétrie G/D dans lequel la DE-Cadhérine affecte l’activité de MyoID à travers la régulation de l’expression de LyoICThe accurate establishment of stereotyped L/R asymetry is subject to a strict genetic program and crucial for the functionality of the organism. It is only recently that the mechanism of L/R asymmetry establishment is exploited in the invertebrate species Drosphophila melanogaster (Hozumi et al. , 2006 ; Speder et al. , 2006). The unconventional type ID myosin (MyoID) has been characterised as a dextral determinant accountable for the clockwise (dextral) rotation of the male genital plate during pupae stage. In our attempt to isolate new components of the L/R mechanism, we first focussed on MyoIC, the closest homologue of genitalia, thus L/R axis inversion. We provide evidence that this situs inversus phenotype is du to an inhibition of MyoID function through MyoIC and consequently define MyoIC as an anti-dextral effector of MyoID. An interaction between MyoID and adherents junctions had been suggested by Speder et al. (2006) as the authors could show by two-hybrid screen and GST pull down that MyoID tail and beta-catenin cal physically interact. Our DE-cadherin loss and gain of function studies revealed a linear interaction between DE-cadherin zand the unconventional myosins MyoID and MyoIC. DE-cadherin controls MyoIC expression, acting as inhibitor of MyoIC. As MyoID functionality is regulated by MyoIC expression, myoIC functions as a mediator between DE-cadherin and myoID. In summary, we present in this study a new regulatory network of L/R asymmetry establishment, where DE-cadherin affects MyoID activity through regulation of MyoIC protein expression
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Bouvagnet, Patrice. "Polymorphisme de la myosine et étude de la régulation de sa transcription." Montpellier 2, 1989. http://www.theses.fr/1989MON20112.
Анотація:
Avec des anticorps monoclonaux specifiques de la chaine lourde de myosine cardiaque humaine, nous avons mis en evidence 3 isoformes: alpha, beta et beta. Nous avons localise les epitopes de ces anticorps par western blot et microscopie electronique et montre la presence de regions specifiques et non-specifiques s'isoforme ainsi que l'existence d'heterodimeres. Nous etudions la distribution de ces isoformes dans l'oreillette et le ventricule de curs humains normaux, hypertrophies et au cours du developpement. Certains de ces anticorps detectent des fragments de myosine chez des patients souffrant d'infarctus du myocarde. La cinetique de la liberation de ces fragments est decrite. Pour determiner les sequences qui sont impliquees dans la regulation de la transcription du gene squelettique embryonnaire de chaine lourde de myosine de rat, nous avons construit une serie de plasmides minigenes et avec le gene cat. Des elements 5 multiples (positifs et negatifs) et un element specifique du tissu controlent l'expression specifique de tissu de ce gene
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Boyer, Cécile. "Etude de la gelification thermique de la myosine : incidence du polymorphisme musculaire." Clermont-Ferrand 2, 1995. http://www.theses.fr/1995CLF21725.
Анотація:
L'objet de ce travail etait de caracteriser precisement les proprietes viscoelastiques et l'ultrastructure des gels de myosine en relation avec son etat d'association initial, son degre de purete et son origine musculaire. Les gels ont ete prepares a partir de quatre fractions myofibrillaires extraites des muscles psoas major (type iib) et semimembranosus proprius (type i) de lapin. La mise en place d'un reseau proteique tridimensionnel structure et ordonne, indispensable a l'obtention de gels resistants et stables, necessite une phase de solubilisation prealable des molecules. La mise en place d'un gel de myosine est alors obtenue soit par abaissement graduel de la force ionique, soit par chauffage direct, soit par combinaison de ces deux processus. Quelle que soit la fraction proteique consideree, les gels thermiques mis en place a faible force ionique sont plus rigides que les gels correspondants obtenus a force ionique elevee, c'est-a-dire a partir de molecules a l'etat monomerique. Ce dernier type de gel presente une structure de nature agregee alors que les gels formes a faible force ionique presentent des structures filamenteuses. Quelles que soient les conditions salines, les gels formes a partir de l'isoforme rapide de myosine sont plus rigides que les gels correspondants formes a partir de l'isoforme lente. Les differences de comportement au chauffage des isoformes lente et rapide de myosine peuvent etre reliees a leurs differences d'hydrophobicite et de solubilite. Ainsi, l'hydrophobicite de surface superieure des myosines de type lent pourrait expliquer leur solubilite plus faible, leur thermostabilite plus elevee et leur faible capacite gelifiante. Par contre, l'hydrophobicite superieure des myosines de type rapide, denaturees par la chaleur, est en accord avec leurs proprietes thermogelifiantes elevees
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NOZAIS, MURIEL. "Stabilite des tetes globulaires et de la queue fibreuse de la myosine." Paris 11, 1993. http://www.theses.fr/1993PA112418.
Анотація:
Nous nous sommes interesses au processus de denaturation-renaturation in vitro de la tete globulaire (ou s-1), et de la queue fibreuse d'une proteine contractile: le myosine. La denaturation du sous-fragment 1 (s-1) par le chlorure de guanidine se traduit par une perte precoce de l'activite enzymatique suivie de la dissociation entre la chaine legere et la chaine lourde. Cette dissociation entraine l'agregation des chaines lourdes separees de leur chaine legere. Cette reaction parallele d'agregation empeche toute renaturation. L'etude cinetique de la denaturation du s-1 revele que l'activite atpasique est rapidement perdue ainsi que la structure secondaire. L'agregation s'effectue selon un processus complexe impliquant la formation d'agregats de petite taille qui evoluent lentement vers des molecules agregees de plus grande taille. Le processus de denaturation-renaturation de la queue fibreuse par le chlorure de guanidine est totalement reversible. La non-coincidence entre les courbes de transition obtenues par fluorescence, dichroisme circulaire et par chromatographie liquide a haute pression a montre que ce processus se deroulait en plusieurs etapes. La denaturation et la dissociation des deux helices du rod ne s'effectuent pas simultanement. La queue fibreuse se denature progressivement jusqu'a formation d'un intermediaire dans lequel les deux helices ne sont plus associees que par quelques segments structures. Dans l'ultime etape de la denaturation, les deux chaines lourdes se separent en deux monomeres
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BETTACHE, NADIR. "Interactions de la g-actine avec la tete globulaire de la myosine." Paris 6, 1991. http://www.theses.fr/1991PA066418.
Анотація:
Nous avons prepare un derive d'actine non polymerisable en presence de sels et de myosine-s1. Cette propriete est due a l'etablissement de ponts intramoleculaires induits par un agent heterobifonctionnel: le m-maleimidobenzoyl-n-hydroxysuccinimide ester (mbs). Le derive proteique (mbs-g-actine) a ete caracterise et utilise comme analogue soluble et stable de la f-actine pour etudier et definir, pour la premiere fois, les proprietes d'interaction en solution entre la g-actine et la tete globulaire de la myosine. L'etude physico-chimique de la mbs-g-actine suggere que les proprietes structurales et fonctionnelles de la g-actine ne sont pas alterees par la modification chimique. Plusieurs approches experimentales ont permis de mettre en evidence la formation des complexes binaire et ternaire mbs-g-actine-s1 et dnase 1-mbs-g-actine-s1, respectivement. La production de ce dernier permet d'envisager l'etude cristallographique du complexe actomyosine. Enfin, pour la premiere fois, la condensation covalente de la mbs-actine avec le s1, par l'intermediaire de son bras maleimide, implique directement le thiol sh1 situe au niveau du domaine 20 kda qui forme un site unique avec la region covalemment liee a la mbs-actine au niveau du domaine 50 kda
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Paduano, Vanessa. "Regulation of Myosin-II activation and planar polarity during epithelial morphogenesis in Drosophila embryo." Thesis, Aix-Marseille, 2015. http://www.theses.fr/2015AIXM4102.
Анотація:
Les épithéliums jouent le rôle de barrière physique et chimique chez les Métazoires. Les épithéliums subissent des remodelages pendant l’embryogénèse. La morphogénèse des tissus est dirigée par des déformations cellulaires coordonnées fonctionnant grâce à des réseaux contractiles intracellulaires constitués d’actine et de myosine. Ce réseau d’actomyosine peut être soit pulsatile, soit stable. Un exemple est l’élongation de l’ectoderme ventro-latéral par intercalation cellulaire, le long de l’axe antéro-postérieur (AP) de l’embryon de la Drosophile. Les jonctions parallèles à l’axe dorso-ventral (DV) rétrécissent et forment de manière irréversible de nouvelles jonctions parallèles à l’axe AP. Des pulsations de myosine-II (Myo-II) médio-apicale se déplacent de manière anisotrope vers les jonctions parallèles à l’axe DV. Ceci provoque le rétrécissement graduel des jonctions, rétrécissement stabilisé par une population de Myo-II polarisée dans le plan du tissu et enrichie au niveau de ces jonctions. Les mécanismes cellulaires qui régulent la pulsatilité, la stabilité et la polarité de la Myo-II restent à élucider. Lors de ma thèse, j’ai identifié de nouveaux effecteurs régulant l’activation et la polarité planaire de la voie Rho1-Rok-Myo-II aux niveaux des jonctions. J'ai d'abord caractérisé le rôle de la kinase Misshapen dans l’activation polarisée de la voie Rho1 au niveau des jonctions. Misshapen agit en aval de la signalisation GPCR afin de favoriser l’activation de Rho1 et contrôle la polarisation de cette activation en transmettant l’information des récepteurs Toll. Puis j'ai identifié Pebble comme la RhoGEF régulant Rho1 et l'accumulation de Myo-II aux jonctionsEpithelial build up strong mechanical and chemical barriers in Metazoans. Epithelia can be dramatically remodeled during embryogenesis. Tissue morphogenesis is driven by coordinated cellular deformations which are powered by intracellular contractile networks constituting actin and Myosin. Actomyosin networks can either be pulsatile or stable. One example is the elongation of the ventral-lateral ectoderm by cell intercalation, along antero-posterior (AP) axis of Drosophila embryo. Junctions parallel to the dorso-ventral (DV) axis shrink and form new junctions along AP axis. Medial apical Myosin-II (Myo-II) pulses flow anisotropically towards junctions aligned in DV axis, resulting in steps of junction shrinkage which are stabilized by a planar-polarized pool of Myo-II enriched at these junctions. Sequential deformation and stabilization drive irreversible tissue deformations akin to a ratchet. The cellular mechanisms that regulate Myo-II pulsatility, stability and polarity remained to be unfurled. During my PhD, I identified new regulators for Rho1-Rok-Myo-II pathway at junctions, and Myo-II planar polarity. On the one hand, I characterized the function of Misshapen kinase in polarized activation of Rho1 pathway at junctions. Misshapen acts downstream GPCR signaling to enhance Rho1 activation, and controls the polarization of this activation by transducing information from Toll receptors. Also, I identified Pebble as RhoGEF regulating Rho1 at junctions and Myo-II accumulation
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Pochitaloff-Huvalé, Marie. "Auto-organisation de faisceaux d'actine oscillants dans un systeme minimal d'actomyosine." Thesis, Sorbonne université, 2018. http://www.theses.fr/2018SORUS318/document.
Анотація:
L’interaction d’assemblées de moteurs et de filaments du cytosquelette donne naissance à des comportements actifs qui demeurent peu compris, malgré la large caractérisation de leurs molécules individuellement. En contrôlant la géométrie de polymérisation de l’actine via des micropatrons surfaciques de nucléation, nous avons observé in vitro l’émergence de battements de faisceaux de filaments parallèles d’actine en présence de myosines en solution (myosine V ou HMM II (Heavy MeroMyosine II)). La forme du battement est similaire pour les deux types de moteurs, mais avec des oscillations un ordre de grandeur plus rapides avec la myosine II qu’avec la myosine V. Dans les deux cas, une onde de déformation transverse se propage à vitesse uniforme de la base à la pointe du faisceau d’actine. Avec la polymérisation, les faisceaux d’actine s’allongent à vitesse constante : la période croît, mais la vitesse de l’onde mécanique reste inchangée. L’utilisation de myosines-GFP a révélé un pic de concentration et un recrutement localisé des myosines au sein du faisceau d’actine, avant qu’une onde de concentration ne se propage vers la pointe de concert avec l’onde mécanique de l’actine. Ces résultats présentent une nouvelle forme de couplage entre l’affinité des myosines à l’actine et la forme du faisceau d’actine. Ce travail de thèse décrit l’émergence de battements actifs imitant ceux des flagelles comme une propriété intrinsèque de l’interaction de filaments polaires et de moteurs moléculaires. Le contrôle de la structure lors du processus d’auto-organisation fournit des informations clés pour étudier les principes physiques génériques du battement flagellaireThe emergent active behaviors of molecular motors assemblies and cytoskeletal filaments systems remain poorly understood, though individual molecules have been extensively characterized. By controlling the geometry of actin polymerization with surface micropatterns of a nucleation promoting factor, we were able to demonstrate in vitro the emergence of flagellar-like beating of bundles of parallel actin filaments in the presence of myosin motors. We worked with both myosin V and heavy-meromyosin II. The waveform of oscillation was similar for the two types of motors, but oscillations with myosin II were one order of magnitude faster than with myosin Va. In both cases, a bending wave traveled at a uniform speed from the anchored base of the actin bundle towards the tip. As polymerization occurred, the actin bundle elongated at a constant speed, resulting in an increase of the oscillation period, but the speed of the traveling bending wave remains constant. GFP-tagged myosin V revealed the presence of a myosin concentration peak within the actin bundle. Strikingly, myosin V motors were locally recruited within the actin bundle, before a concentration wave propagated towards the bundle’s tip in concert with the actin bending wave. These results revealed a novel form of coupling between the myosin affinity for actin and the actin bundle shape. Our work demonstrates that active flagellar-like beating emerges as an intrinsic property of polar bundles of filaments in interaction with molecular motors. Structural control over the self-assembly process provides key information to clarify the underlying physical principles of flagellar-like beating
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Logé, Cédric. "Conception et synthèse d'inhibiteurs de la rho-kinase." Lille 2, 2002. http://www.theses.fr/2002LIL2P007.
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Pernelle, Jean-Jacques. "Expression de différentes protéines myofibrillaires au cours de la myogénèse in vitro de cellules musculaires humaines normales et dystrophiques." Paris 11, 1989. http://www.theses.fr/1989PA112369.
Анотація:
Ce travail porte sur la caractérisation des anomalies d'expression des protéines musculaires par les cellules satellites en culture provenant de sujets atteints de myopathie de Duchenne et ceci dans le but de mieux comprendre les phénomènes impliqués dans la myogénèse normale et pathologique. Le développement et le perfectionnement d'une nouvelle technique de séparation électrophorétique en double dimension, utilisant un gradient immobilisé de pH en première dimension, nous a permis de caractériser les différentes formes de chaînes légères de myosine et d'en établir une carte très précise. Nous avons pu montrer que les chaînes légères de type 2, lentes et rapides présentent chacune 2 isoformes distinctes, phosphorylables et phosphorylées. La caractérisation des différentes formes exprimées à différents stades du développement embryonnaire et fœtal nous a permis de disposer d'un ensemble de marqueurs permettant d'analyser un système de cultures in vitro. Par la suite, lors de la découverte du gène responsable de la dystrophie de Duchenne, nous avons pu démontrer que la nébuline, candidat alors proposé comme étant le produit de ce gène, ne pouvait pas l'être.