Статті в журналах з теми "Modèles in cellulo et in vivo"

Le développement de drogues anti-cancéreuses à visée thérapeutique nécessite leur évaluation. Ces drogues candidates sont généralement testées in vitro, sur des lignées cellulaires ou sur des cellules isolées à partir de patients, et, in vivo, dans des modèles de xénogreffe chez la souris immunodéprimée. Depuis quelques années, les contraintes réglementaires (règle des 3R : réduire, raffiner, remplacer) imposent de mettre en place des modèles alternatifs qui se substituent aux modèles murins ou, au moins, en limitent l’utilisation. Parmi les modèles alternatifs proposés, la greffe sur membrane chorio-allantoïdienne d’embryon de poule semble performante. Elle permet de suivre et de quantifier la croissance tumorale et d’autres paramètres associés, comme la néo-angiogenèse, l’invasion et la migration tumorales. Elle permet aussi le criblage de drogues. Ce modèle semble également adapté à la médecine personnalisée en cancérologie. Nous présentons dans cette revue la technique et ses avantages.

En raison de sa simplicité d’utilisation, la culture cellulaire reste le matériel de choix pour l’étude des mécanismes impliqués dans le cancer. Toutefois, la mise en culture des cellules est souvent responsable de la perte de certaines de leurs caractéristiques et de l’acquisition de nouvelles propriétés. Aussi, les modèles animaux sont essentiels à l’étude des phénomènes physiologiques et pathologiques comme la tumorigenèse. Parmi les modèles animaux utilisés en cancérologie, le poisson zèbre apparaît comme un modèle particulièrement pertinent. En effet, la facilité et les faibles coûts d’élevage du poisson zèbre, tout comme le large éventail de possibilités en termes de manipulation génétique et d’imagerie in vivo classent ce modèle vertébré parmi les outils les plus remarquables pour l’étude du cancer. Cette revue a pour objectif de faire le point sur les apports et le potentiel du poisson zèbre dans la lutte contre le cancer.

Asphodelus microcarpus(A.m.) est une plante largement utilisée en médecine traditionnelle marocaine pour ses propriétés médicinales qui restent variées et générales. Une extraction des principes actifs contenus dans les feuilles d’A.m. a été réalisée par macération à froid au méthanol. L’extrait obtenu a fait l’objet d’une étude in vitro de cytotoxicité qui a révélé un effet cytotoxique sur un modèle de cellules myéloïdes d’origine humaine (IC50 = 7,81 μg/ml). Par ailleurs, l’évaluation de l’extrait quant à son activité antioxydante par la méthode du réactif DPPH s’est révélée positive (IC50 = 310 μg/ml), et l’étude de sa toxicité aiguë in vivo sur un modèle animal (souris Swiss) lui confère une totale innocuité (DL50 > 5 000 mg/kg). Ces études ont été complétées par un criblage phytochimique afin de mettre en évidence les familles de métabolites secondaires majoritaires identifiées ici comme des anthracénosides, tannins et phénols ; les alcaloïdes sont peu présents. Ainsi, la faible toxicité in vivo et l’éventuel pouvoir antiprolifératif de l’extrait fixe d’A.m. in vitro justifieraient son évaluation future sur différents modèles tumoraux.

Le virus herpétique humain associé au sarcome de Kaposi (KSHV) est l’agent étiologique du lymphome primitif des séreuses (PEL) dans lequel le virus d’Epstein-Barr (EBV) est aussi très souvent présent. Jusqu’à présent, seuls des modèles cellulaires permettaient d’explorer l’interaction des deux virus conduisant à la transformation des cellules. Un modèle de co-infection de souris humanisées, développé récemment permet désormais d’explorer ce phénomène in vivo. Il démontre que la co-infection par EBV et par KSHV augmente la persistance de KSHV et favorise la transformation cellulaire via la stimulation de la réplication de l’EBV par KSHV. Il s’agit du premier modèle de PEL chez le petit animal. Cette avancée ouvre ainsi des perspectives intéressantes pour de futures études de ce lymphome.

Pour éclairer la série que nous vous proposons, il nous a semblé important de rappeler les règles définissant ce que sont les organismes-modèles ainsi que la réglementation en vigueur quant à leur utilisation en recherche biomédicale. Les études in vitro ou ex vivo, sur cellules ou tissus, ou les analyses in silico ne permettent pas d’aborder des problématiques complexes. Elles sont certes utiles pour des analyses mécanistiques, mais ne permettent pas l’étude de réponses biologiques intégrées qui nécessitent l’analyse d’un organisme entier. Ces organismes sont soumis à une réglementation stricte. Elle les distingue selon qu’ils sont vertébrés ou invertébrés. Si les mammifères modélisent nombre de pathologies humaines, certains organismes simples permettent également de mener ce type d’études et de répondre à des questions liées à la génétique. Leur intérêt est leur rapidité et leur capacité de reproduction qui facilitent les expérimentations. Le poisson zèbre en est un bon exemple avec les nombreuses versions de morphants qui ont été développés et qui ont permis de révéler les conséquences d’altérations génomiques sur un phénotype particulier. Cet organisme-modèle est donc particulièrement utilisé pour l’étude de pathologies monogéniques ou pour déterminer le rôle d’un gène dans l’étiologie de diverses pathologies. La transparence du poisson zèbre rend de plus les investigations plus faciles. Caenorhabditis elegans est également un excellent modèle d’organisme simple et qui, contrairement au poisson zèbre, ne relève pas de la réglementation concernant l’expérimentation animale. Son utilisation est ainsi, comme pour les insectes, plus aisée. Connaître les différences entre les organismes-modèles, leurs avantages et leurs limites, et les règles dictant leur utilisation est donc primordial pour la réalisation d’expérimentations qui restent nécessaires à l’acquisition de nouvelles connaissances dans le domaine de la biologie et de la santé.

La prolactine (PRL), hormone de la lactation par excellence, est majoritairement synthétisée et sécrétée par les cellules lactotropes de l’antéhypophyse. Ses actions sont médiées par le récepteur transmembranaire de la prolactine (PRLR). Alors que plus de 300 fonctions différentes ont été attribuées à cette hormone selon les espèces, son rôle chez l’Homme reste limité au développement de la glande mammaire et à l’allaitement. Les pathologies en lien avec la PRL sont essentiellement celles rencontrées en cas d’hypersécrétion de cette hormone. En effet, l’hyperprolactinémie entraîne l’altération du fonctionnement de l’axe gonadotrope chez l’homme comme chez la femme. Ainsi, l’hyperprolactinémie est une étiologie fréquente d’hypogonadisme hypogonadotrope acquis et l’une des principales causes d’anovulation et d’infertilité chez la femme. Ces dernières années, les études de modèles murins invalidés pour le PRLR, de manière globale ou conditionnelle dans l’hypophyse, ont permis d’apporter de nouveaux éléments dans la compréhension de la régulation des axes gonadotrope et lactotrope. Il est maintenant démontré que la prolactine exerce des actions autocrines ou paracrines sur les cellules lactotropes in vivo. Une des avancées majeures a été de mieux comprendre, à l’aide des modèles murins, l’impact de l’hyperprolactinémie sur l’axe gonadotrope. C’est ainsi qu’il a pu être établi que, comme chez les rongeurs, l’hypogonadisme hypogonadotrope chez les patientes atteintes d’hyperprolactinémie est médié par un déficit de sécrétion de kisspeptine hypothalamique, et que l’axe gonadotrope peut être restauré par l’administration intraveineuse de kisspeptine. Les mécanismes de tumorigenèse lactotrope des animaux Prlr −/− restent cependant incomplètement compris et transposables dans l’espèce humaine, puisque, jusqu’à présent, l’unique patiente porteuse d’une mutation bi-allélique perte de fonction du PRLR ayant fait l’objet d’une publication présentait une imagerie hypophysaire sans anomalie.

Le potentiel des plantes connues pour leurs vertus médicinales suscite un grand intérêt dans un contexte mondial de réduction des risques d’antibiorésistance. Dans le cadre de la nutrition animale, l’usage des extraits de plantes se positionne dans une démarche de gestion intégrée de la santé des animaux dans le but de favoriser la construction de leur immunité et de limiter l’apparition des maladies. Le soutien des fonctions immunitaires par l’apport d’extraits de plantes est un moyen de renforcer les capacités d’adaptation des poulets, notamment chez le poussin. Pour mettre en œuvre leur usage, cela nécessite de disposer de méthodologies complémentaires, adaptées et fiables pour s’assurer de la qualité et de la valeur ajoutée fonctionnelle des extraits pour la santé des poulets. Les étapes décrites, indépendantes et complémentaires, ont permis d’élaborer et de valider une méthodologie globale, pertinente et robuste pour sélectionner, caractériser et évaluer la qualité et les effets des extraits de plantes sur l’immunité des poulets en situation d’élevage. Des grilles d’analyse ont été rassemblées en un outil d’aide à la décision (CHECK’MEX). Les extraits de plantes sélectionnés comme la mélisse et le ginseng ont été testés pour évaluer leurs capacités à stimuler l’immunité innée des volailles dans des modèles cellulaires ou des modèles d’inflammation et de stress oxydant développés ex vivo sur cellules de poulet. Les extraits ont ensuite été évalués chez le poulet dans des conditions expérimentales proches du terrain permettant de valider leurs effets et de réaliser une analyse multicritère incluant des indicateurs de santé, de bien-être et de zootechnie. Cette démarche est applicable à tous types d’extraits de plantes et elle peut être adaptée pour d’autres espèces animales ou d’autres effets biologiques.

Les vésicules extracellulaires interviennent dans un nombre croissant de processus physiopathologiques et constituent des outils cliniques prometteurs pour le diagnostic et le traitement de diverses maladies. Leur petite taille a longtemps entravé leur étude in situ, ce qui a limité leur caractérisation in vivo et leur utilisation en clinique. Les avancées récentes en imagerie permettent à présent d’examiner et de suivre les vésicules extracellulaires dans différents modèles animaux, en temps réel et à l’échelle de la vésicule unique. Le poisson zèbre apparaît notamment comme un organisme modèle pertinent pour explorer le cycle de vie de ces vésicules in vivo et évaluer leurs potentialités thérapeutiques.

Des avancées majeures révèlent l’hétérogénéité intra-tumorale des cancers d’origine épithéliale, incluant des cellules initiatrices de tumeurs qui ressemblent aux cellules souches adultes. Les cellules souches normales et tumorales partagent en effet leur plasticité entre phénotypes épithéliaux et mésenchymateux, progressant par une série d’états intermédiaires, réversibles. Si un cœur de régulateurs (Snail, Zeb, …) est bien connu pour déclencher la transition épithélio-mésenchymateuse (TEM), les facteurs OvoL/Shavenbaby sont récemment apparus comme des stabilisateurs épithéliaux. La balance entre facteurs pro-TEM et OvoL pourrait ainsi réguler la plasticité phénotypique et le potentiel métastatique des tumeurs. Nous abordons cette question chez la drosophile, un modèle pour disséquer in vivo la fonction de Shavenbaby. Nos travaux montrent que Shavenbaby est un régulateur clé de l’homéostasie des cellules souches adultes. Shavenbaby est indispensable à leur survie, agissant en interaction directe avec la voie Hippo pour protéger les cellules souches de la mort cellulaire programmée.

Deux souches de virus de la variole des dromadaires (CPV) isolées de dromadaires affectés d'altérations cutanées généralisées ont été soumises à des passages en série de cellules Vero. Différentes caractéristiques phénotypiques furent étudiées in vivo comme in vitro et comparées à celle des souches sauvages correspondantes. A beaucoup d'égards, aucune différence ne put être constatée. Toutefois, dans un modèle de souris, les deux souches soumises au passage s'avèrent sensiblement atténuées. De plus, ces souches ne sont pas en mesure de se reproduire dans une culture dérivée de cellules cutanées de dromadaire. Par comparaison des cartes génomiques physiques établies pour les enzymes HindIII et XhoI, des délétions totalisant 22 kilobasepaires furent constatées pour l'une des souches atténuées. Le génome de la deuxième souche ne comportait que des altérations mineures.

En raison des incertitudes épidémiologiques relatives aux maladies à prions, il est urgent de découvrir et de développer des thérapeutiques anti-prions chez l’homme. L’efficacité des molécules candidates est essentiellement testée in vitro sur des cellules de neuroblastome. Pour plusieurs molécules, dont la quinacrine, il a été observé une discordance entre l’effet anti-prion in vitro et l’absence d’efficacité clinique dans le traitement de la maladie de Creutzfeldt-Jakob. Pour documenter l’hypothèse selon laquelle l’absence d’efficacité de la quinacrine était d’ordre pharmacocinétique (et donc prévisible), la disposition de la quinacrine (disparition de la quinacrine du compartiment sanguin, qui résulte par exemple de processus de distribution et d’élimination du principe actif) a été étudiée à la fois in vivo et in vitro afin de déterminer les doses qu’il conviendrait d’administrer in vivo pour obtenir des concentrations efficaces dans la biophase. Le modèle de brebis naturellement atteintes de tremblante a été utilisé. Dans un premier temps, un essai thérapeutique contrôlé sur des brebis en phase clinique de tremblante a permis de confirmer ce qui était connu chez l’homme, c’est-à-dire l’absence d’efficacité clinique de la quinacrine. Sur le modèle in vitro reproduisant les conditions princeps de culture pour lesquelles 50 % de l’effet anti-prion avait été observé, avec une concentration nominale de quinacrine de 300 nM (nanomoles par litre), nous avons redéterminé les EC50 (concentration qui permet d’inhiber à 50 % la formation de PrP pathogène) pour les biophases potentielles de l’action anti-prion en mesurant sélectivement, par HPLC (chromatographie liquide haute performance), les véritables concentrations extracellulaire (120 nM) et intracellulaire (6700 nM) de quinacrine dans les neuroblastomes en culture. Les concentrations de quinacrine dans le Liquide Cérébro-Spinal (LCS) et le tissu nerveux cérébral, représentatifs in vivo respectivement des biophases extracellulaire et intracellulaire, ont été mesurées chez la brebis après une administration de quinacrine. Les concentrations de quinacrine dans le liquide cérébro-spinal (< 2,1 nM et 55 nM, obtenues respectivement pour des doses thérapeutique et toxique) sont restées très inférieures aux concentrations nécessaires pour obtenir in vitro un effet antiprion (120 nM). Les concentrations totales de quinacrine dans le tissu nerveux (1040 nM) après une dose thérapeutique sont restées inférieures aux concentrations de quinacrine actives in vitro (6700 nM) et, seule une dose toxique de quinacrine a permis d’atteindre des concentrations intracellulaires actives (53800 nM). En définitive, quelle que soit la biophase intra- ou extracellulaire, les schémas posologiques non toxiques sont incapables de maintenir des concentrations antiprion efficaces de quinacrine. A l’avenir, pour éviter des études in vivo dont on peut prévoir d’emblée qu’elles sont vouées à l’échec, notamment chez l’homme, il est recommandé de mesurer les EC50 anti-prions dans les biophases in vitro, pour évaluer si les effets anti-prion observés in vitro sont extrapolables in vivo.

L’administration de toute substance chimique à l’animal doit se faire sans risque pour sa santé et doit préserver totalement la santé du consommateur. Pour satisfaire à ces critères exigeants de sécurité, il est devenu primordial de prédire, avec précision, le devenir de ces substances dans l’organisme et d’en apprécier les capacités toxiques. Nous évoquerons les plus récents apports des biosciences permettant d’atteindre cet objectif. Nous présentons des modèles biologiques génétiquement optimisés (in vitro et in vivo) particulièrement adaptés à ces tâches.

L’immunotoxicologie est l’étude des effets toxiques de toute substance sur le système immunitaire et ses fonctions. Dans les différents domaines d’application, cette science est cadrée par divers textes réglementaires et lignes directrices. Les études sont basées sur des techniques in vitro, ex vivo et in vivo et sont observationnelles ou fonctionnelles, permettant respectivement de démontrer un effet et de décrire les mécanismes en jeu. Dans cette revue, nous présentons les différents tests à effectuer dans le domaine biomédical, avec une attention particulière au test d’évaluation de la réponse thymo-dépendante (TDAR). Nous discutons également brièvement des évolutions à suivre dans ce domaine cherchant entre autres une approche plus éthique comme la limitation de l’utilisation des animaux de laboratoire. Ces évolutions sont notamment représentées par le développement de modèles cellulaires pertinents.

Dans le cadre d’un partenariat avec médecine/sciences, et pour la seconde année, des étudiants du module d’immunologie virologie et cancer du Master de cancérologie de Lyon présentent une analyse d’articles scientifiques récents faisant état d’observations innovantes et importantes. Ce travail a été encadré par des chercheurs confirmés du département d’immunologie, virologie et inflammation du CRCL. Le master de cancérologie de Lyon (Lyon1-VetAgroSup) accueille chaque année 30 à 40 étudiants en M1 et en M2. Ce master dit « d’excellence » assure aux étudiants de M1 une formation à la cancérologie reposant sur un socle de base commun (biologie cellulaire, moléculaire, immunologie, bio-statistique…) En M2, les étudiants peuvent choisir l’une des trois spécialités suivantes : le Master recherche « Recherche en cancérologie », le Master recherche et professionnel « Technologie haut débit en cancérologie » et enfin le Master recherche et professionnel « Innovations thérapeutiques en cancérologie ». Le Master de cancérologie de Lyon repose sur une forte implication des chercheurs et enseignants-chercheurs du laboratoire d’excellence en développement et cancérologie (LabEx DEVweCAN), ainsi que sur un partenariat solide avec plusieurs instituts dont le MIT (Massachusetts Institute of Technology, Cambridge, États-Unis), l’université d’Harvard (Boston, États-Unis), l’université Johns Hopkins (Baltimore, États-Unis), l’Imperial College of London (Royaume-Uni), les universités de Jiao Tong (République Populaire de Chine) et de Tokyo (Japon), entre autres. Pour plus d’information : http://devwecan.universite-lyon.fr/formation/

Les traumas spinaux induisent des déficits moteurs et sensoriels. La mise au point de thérapies visant à rétablir les fonctions altérées à la suite d’une lésion de la moelle épinière est donc nécessaire. La stimulation magnétique répétée (SMr) est une thérapie innovante et non invasive utilisée pour moduler l’activité de réseaux neuronaux dans diverses maladies neurologiques, telles que la maladie de Parkinson, ou psychiatriques, telles que le trouble bipolaire. Son utilisation chez les personnes atteintes de traumas spinaux pourrait avoir des effets fonctionnels bénéfiques. Des études réalisées in vitro, in vivo et ex vivo ont permis de comprendre en partie les mécanismes sous-jacents à la modulation de l’activité neuronale induite par les protocoles de SMr. Son utilisation dans des modèles précliniques de lésion médullaire a de plus montré des effets bénéfiques fonctionnels. Ainsi, la SMr pourrait potentialiser la récupération des fonctions perdues après un trauma spinal.

L’extrait hydrométhanolique des parties aériennes d’Origanum glandulosum Batt. et Trab. a été étudié pour sa composition chimique par analyse CLHP et ses activités antioxydante, anti-inflammatoire et cytotoxique. L’analyse chromatographique a révélé la présence de trois acides phénoliques et de huit flavonoïdes. Les résultats de pouvoir anti-oxydant qui ont été réalisé par la méthode de DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) et de β-carotène–acide lino-léique indiquent que l’extrait possède une forte activité. Les résultats ont montré aussi que l’extrait de la plante a une excellente activité anti-inflammatoire dans les deux modèles in vivo (l’œdème de la patte induit par la carragénine et l’œdème de l’oreille induit par l’huile de croton). De plus, cet extrait a été trouvé comme possédant une bonne toxicité contre les larves d’Artémia (LC50 = 17,64 μg/ml).

Introduction : Le remplacement des empreintes par des caméras intra-orales constitue un changement de paradigme. Mais aucune étude in vivo indépendante n'a encore comparé la précision des empreintes analogiques avec celle de trois systèmes d'empreintes numériques. La précision des empreintes par caméra intra-orale est-elle suffisante pour notre usage orthodontique ? Matériels et méthodes : Cinq empreintes de l'arcade maxillaire et mandibulaire d'un même sujet ont été réalisées en vinylpolysiloxane, coulées en plâtre de type IV puis numérisées par un scanner de laboratoire (groupe VPS). Un modèle en plâtre (maxillaire et mandibulaire) constitue la référence. Cinq numérisations de l'arcade maxillaire et mandibulaire du modèle référence (groupe EXO) et du sujet en intra-oral (groupe INTRA) ont été réalisées successivement par les caméras Lythos™ (Ormco) version 1, iTero® (AlignTech) version 1 et Trios® (3shape) version 2. Les modèles numériques de chaque groupe ont été découpés puis superposés par technique Best Fit aux modèles références. Résultats : Les images du groupe INTRA présentent une précision inférieure de 18 μm (p = 3,88 10−08) par rapport aux images du groupe EXO et VPS. L'arcade maxillaire présente une fidélité supérieure de 6 μm par rapport à l'arcade mandibulaire pour les trois systèmes (p = 0,002). La technique de prise d'empreinte (analogique ou numérique) et le modèle de caméra – malgré une différence sur le nombre de points enregistrés – n'a pas d'influence statistiquement significative sur la précision. Conclusion : Effectuée dans les conditions idéales, la précision des caméras, certes inférieure aux empreintes classiques VPS, est suffisante pour un usage clinique. Cependant, la réduction du temps d'acquisition risque d'affecter cette précision, lisser les erreurs et contracter les arcades.

Les langues finno-ougriennes sont souvent citées comme parangon de langues «agglutinantes», alors que, dans le détail de leur diversité et de leur variation dialectale, il n’en est rien. C’est une tradition de pensée tantôt positiviste, idéaliste, évolutionniste et réductionniste qui a imposé cette vue, qu’on prend souvent pour argent comptant, à l’aune des variétés littéraires de langues comme le finnois ou le hongrois. On fait plus rarement référence à des langues comme l’estonien, le live ou le vote, langues fenniques méridionales dont la morphologie a muté de manière massive pour se nicher désormais en grande partie dans leur (morpho)phonologie. Dans le présent article, les prémisses qui définissent l’agglutinance sont passées au crible d’une épistémologie critique, sur le plan empirique: transparence, univocité, concaténativité, etc. Nous appliquons ensuite une modélisation inférentialiste (Paradigm Function Morphology) aux classes flexionnelles de langues fenniques, comme le finnois, envisagé dans sa variation dialectale, l’estonien, le live et le vote. Nous montrons que ces langues et/ou variétés répondent davantage à une logique de grammaire inférentielle qu’au mécanicisme univoque de l’agglutinance. Au terme de ce survol empirique, nous aboutissons à la conclusion que l’agglutinance gagne à être déconstruite à la lumière des faits et des modèles de la grammaire générative. Celle-ci offre un dispositif d’analyse des fonctions paradigmatiques qui permet de transcender les projections aprioristiques (positivistes, idéalistes, romantiques) sur les grammaires des langues. Dans une telle approche, seuls les concepts d’incrémentialité et d’inférentialité s’avèrent heuristiques, et permettent d’amplifier l’horizon de découverte des systèmes et des structures linguistiques in vivo.

Bien que le lithium soit le traitement de première ligne pour la prévention des rechutes dans le trouble bipolaire seuls 30 % des patients sont de bons répondeurs. Ainsi, un sous-groupe important des patients, traités avec du lithium, présente des taux élevés de rechute. En l’absence de marqueurs cliniques prédictifs de réponse il reste difficile de prédire avec précision quels patients répondront en évitant de les soumettre à de longues périodes de traitements au lithium. L’identification de biomarqueurs prédictifs est donc un enjeu majeur pour améliorer la prise en charge des patients bipolaires. Le mécanisme d’action du lithium est complexe car il exerce une action inhibitrice ou activatrice sur plusieurs voies de signalisation cellulaires. L’ensemble de ces cibles et effecteurs contribuent aux effets neuroprotecteurs dans le cerveau et de stabilisation de l’humeur et complexifient la compréhension de la réponse prophylactique au lithium. Les études visant à identifier une corrélation entre la réponse au lithium et des mutations de gènes ont produit des résultats controversés. Afin de mieux comprendre la variabilité de la réponse au lithium, une approche complémentaire aux études génétiques, consiste à étudier les effets moléculaires induits par un traitement aigu ou chronique au lithium. Il a ainsi été montré que le lithium module les niveaux d’expression de gènes au niveau des ARN messagers, des protéines aussi des miRNA dans plusieurs modèles in vivo et in vitro. Ces études ouvrent de nouvelles voies de recherche pour identifier des biomarqueurs de la réponse prophylactique au lithium pouvant être transférés en clinique afin d’éviter de longues périodes de traitement inefficace au lithium et élaborer des stratégies de traitement plus personnalisées.

N 6-methyladenosine (m6A) represents the most abundant and prevalent internal modification in eukaryotic mRNA. Fat mass and obesity-associated protein (FTO) was identified as the first RNA demethylase that can remove m6A from RNA. Recently, we have reported that FTO is highly expressed in acute myeloid leukemia (AML) patients, and plays a critical role in leukemogenesis as an m6A demethylase (Li Z et al., Cancer Cell, 2017). Subsequently, we showed that FTO is a target of R-2-hydroxyglutarate (R-2HG; a metabolite produced IDH1/2 mutants), and by suppression of FTO activity, R-2HG displays intrinsic and broad ant-leukemia effects (Su R et al., Cell, 2018). Thus, our data suggest that FTO is a promising and druggable target in leukemia. To discover highly effective and selective inhibitors targeting FTO protein for AML therapy, we conducted a structure based virtual screening from NCI DTP compound library with more than 260,000 compounds (Fig. 1A). The top 370 candidates were requested from NCI and tested for their anti-leukemic efficacy in MONOMAC6 AML cell line (harboring t(9;11)/MLL-AF9) via MTT cell proliferation/viability assay. Then, the top 20 compounds with prominent inhibitory effects on AML cell viability (Fig. 1B) were chosen for further validations. First, we validated their anti-leukemia effects in two additional AML cell lines NOMO-1 (carrying MLL-AF9) and U937 (non-MLL-rearranged). Second, we assessed their potential suppressive efficacy on the demethylase activity of FTO protein in cell-free system. Finally, we found two compounds, namely CS1 and CS2, displayed consistently potent anti-leukemic effects in all the AML cell lines we tested, and also showed the most significant effects on inhibition of FTO's m6A demethylase activity (Fig. 1C). Besides our CS1 and CS2, FB23-2 (Huang Y et al., Cancer Cell, 2019) and MO-I-500 (Zheng G et al., ACS Chem Neurosci, 2014) were also reported as FTO inhibitors. Thus, we compared the anti-leukemic activity of the four FTO inhibitors together in AML cells. CS1 and CS2 displayed much higher activity in inhibiting cell viability, with IC50 values 10 to 30 times lower than FB23-2 or MO-I-500 (Fig. 1D). Through Drug Affinity Responsive Target Stability (DARTS, Fig. 1E) and Cellular Thermal Shift Assay (CETSA, Fig. 1F), we demonstrated the direct interactions between CS1/CS2 and FTO protein in cellulo. CS1 and CS2 treatment induced global increased m6A abundance at mRNA levels in various AML cell lines. Via RNA sequencing, we found that CS1 and CS2 exert their anti-leukemic effects through manipulating FTO-associated signaling pathways, such as MYC pathways. Moreover, gene-specific Cross-linking immunoprecipitation (CLIP)-qPCR results also demonstrated CS1 and CS2 treatment significantly inhibited the binding of FTO to its target mRNAs, such as MYC, CEBPA, and RARA. To assess the therapeutic effects of FTO inhibitors, CS1 (packaged in Micells) and CS2, in AML in vivo, we utilized xenograft mouse model with MA9.3ITD AML cells, patient-derived xenograft (PDX) AML mouse model, and secondary bone marrow transplantation (BMT) mouse model with primary MLL-AF9 (MA9) cells. Through bioluminescence imaging, we observed that treatment with either CS1 or CS2 remarkably inhibited leukemia progression and constantly reduced leukemia burden (Fig. 1G), and dramatically prolonged survival (P&lt;0.0001 for either CS1 or CS2) in AML mice (Fig. 1H). In a PDX model (xeno-transplanted with a human relapsed primary AML sample), both CS1 and fCS2 showed more potent anti-AML efficacy than FB23-2, while all three significantly prolonged survival relative to the control (Ctrl) group (Ctrl vs CS1, P&lt;0.0001; Ctrl vs CS2, P&lt;0.0001; Ctrl vs FB23-2, P=0.0057; CS1 vs FB23-2, P&lt;0.0001; CS2 vs FB23-2, P&lt;0.0001) (Fig. 1I). Similarly, CS1 and CS2 significantly delayed onset of leukemia and prolonged overall survival in mice transplanted with MA9-induced murine AML cells (Ctrl vs CS1, P&lt;0.0001; Ctrl vs CS2, P=0.0002). Our further studies discovered that our FTO inhibitors also sensitize AML cells to other therapeutic drugs, such as decitabine, tyrosine kinase inhibitor, and IDH2mut inhibitor, and overcome the corresponding drug resistance. Taken together, here we have identified two potent small-molecule FTO inhibitor compounds (i.e., CS1 and CS2), effectively and selectively targeting FTO protein and showing potent therapeutic efficacy in treating leukemia. Figure Disclosures Chen: Genovel Biotech Corp: Other: scientific founder and Chairman.

BackgroundOur ongoing clinical trial for the treatment of melanoma with TGF-β-resistant tumor-infiltrating lymphocytes (TIL) [TGF-β dominant negative receptor 2 (TGFβDNR2) transduced-TIL] has yielded long-term responses in checkpoint refractory patients (NCT01955460). Building on this success, we sought to extend the impact of TGF-β–resistant TIL therapy to additional cancers while optimizing a non-viral alternative to transduction with a TGFβDNR2. Ovarian cancer (OvCa), which is characterized by an abundance of TGF-β, a dysfunctional immune infiltrate, and a paucity of novel treatment options, is an ideal candidate for TGF-β–resistant TIL therapy. Here, we present an optimized and clinically-scalable method for CRISPR/Cas9-mediated deletion of the TGF-β receptor (TGFBR2) in OvCa TIL.MethodsOvCa TIL were generated from tumor fragments1 and subjected to CRISPR-mediated knockout of TGFBR2 before going through a rapid expansion protocol. Resistance of TGFBR2-knockout TIL to TGF-β signaling was evaluated via quantification of downstream SMAD-2/-3 phosphorylation, global transcriptional changes upon TGF-β exposure, and cytokine release following TCR stimulation in the presence of TGF-β. The impact of CRISPR modification on TIL expansion and TCR clonal diversity was evaluated. Finally, the risk of off-target CRISPR activity throughout the genome was evaluated using Target Enriched GUIDE-seq (TEG-seq)2 followed by next generation sequencing (NGS) validation of putative off-target sites.ResultsUsing five TGFBR2-directed guide RNAs (gRNAs), we achieved gene disruption efficiencies ranging from 48%–90%, which correlated inversely with the degree of SMAD phosphorylation after TGF-β exposure (r=-0.9440, p=0.0158, n=4 donors) (figure 1A-C). TGF-β exposure induced a strong transcriptional response in wild-type TIL but had little to no effect on TGFBR2-knockout TIL (figure 2). TGFBR2-knockout TIL functioned well in the presence of exogenous TGF-β as evidenced by equally strong secretion of pro-inflammatory cytokines in the presence and absence of TGF-β (figure 3). CRISPR-modification did not hamper the ex vivo expansion efficiency nor the TCR clonal diversity of expanded OvCa TIL (figure 4). Using TEG-seq, we identified ≤5 low-probability off-target sites for gRNA-#3 and gRNA-#4, each of which were attributed to background sequencing artifacts upon further validation by NGS of specific amplicons (figure 5).Abstract 172 Figure 1(A) Genomic-level TGFBR2 knockout efficiency using 5 different gRNAs as evidenced by NGS of specific amplicons (n=1 TIL donor). (B) SMAD-2 and SMAD-3 phosphorylation in TGFBR2 knockout TIL vs. control TIL after 30 min exposure to TGF-β1. The left panel shows representative histograms of phospho-SMAD staining, and the right panel shows quantification of cells positive for phospho-SMAD-2/-3 after TGF-β exposure (n=4 TIL donors). The statistical significance of each experimental condition compared to the non-transfected control is shown. (C) Inverse correlation of TGFBR2 knockout efficiency and TGF-β-mediated SMAD phosphorylation.Abstract 172 Figure 2Top 100 differentially expressed genes in non-transfected (WT) TIL exposed to TGF-β. TGFBR2 knockout (KO) TIL display minimal gene expression changes upon TGF-β exposure (n=3 technical replicates).Abstract 172 Figure 3TIL were collected after 14 days of expansion and re-stimulated with 300 ng/mL plate-bound anti-CD3 in the presence of 3000 IU/mL IL2 and 10 ng/mL human TGF-β1 or vehicle. Cell culture supernatant was collected after 72 hrs of stimulation and assayed for the presence of 10 proinflammatory cytokines (IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, and TNF-α). For TIL with intact TGFBR2 (non-transfected and Cas9 mock transfected TIL), the production of many pro-inflammatory cytokines decreased significantly in the presence of TGF-β. Conversely, TGFBR2 knockout TIL (generated using gRNA #3 or gRNA #4) retain cytokine secretion in the presence of TGF-β. IL-12p70 was below the limit of detection in this assay and is therefore not presented.Abstract 172 Figure 4(A) Control and CRISPR-modified OvCa TIL expand with equal efficiency during a 14-day rapid expansion protocol. Fold expansions ranging from 1000× - 3000× were observed across 4 independent patient samples. (B) The TCR clonal diversity of TIL after 14-day expansion was assessed by TCRB sequencing. Productive Simpson Clonality was equivalent in CRISPR-modified TIL compared to control TIL samples.Abstract 172 Figure 5TEG-seq revealed 3 putative off-target sites for gRNA #3 and 5 putative off-target sites for gRNA #4. The aligned sequences show similarities and differences between the gRNA sequence and the reference genome site. Dots represent exact matches in the reference genome compared to the gRNA sequence. Dashes represent missing bases, lower-case letters represent extra bases, and upper-case letters represent a base mismatch. Validation by NGS of specific amplicons confirmed the presence of TEG-seq Tag integration and large indels at the on-target cleavage sites for gRNA #3 and #4, indicating successful Cas9 editing and Tag integration in our experiment. NGS validation revealed that all putative low probability off-target sites were background artifacts as evidenced by the lack of Tag identification and lack of large indels.ConclusionsCRISPR/Cas9-mediated knockout of TGFBR2 is feasible and efficient in patient-derived OvCa TIL using clinically-scalable methods that yield little to no evidence of off-target activity. This study lays the groundwork for clinical translation of CRISPR-modified, TGF-β-resistant TIL for OvCa treatment, which will not only provide a novel immunotherapy for OvCa patients but also a platform for engineering more potent TIL therapies in general.ReferencesSakellariou-Thompson D, Forget MA, Hinchcliff E, Celestino J, Hwu P, Jazaeri AA, et al. Potential clinical application of tumor-infiltrating lymphocyte therapy for ovarian epithelial cancer prior or post-resistance to chemotherapy. Cancer Immunology, Immunotherapy: CII 2019;68(11):1747–57.Tang PZ, Ding B, Peng L, Mozhayskiy V, Potter J, Chesnut JD. TEG-seq: an ion torrent-adapted NGS workflow for in cellulo mapping of CRISPR specificity. Bio Techniques 2018;65(5):259–67.Ethics ApprovalAll procedures performed were in accordance with the 1975 Helsinki declaration. Ethical approval and tissue from surgical resections used to expand TIL were both obtained under protocols (PA16-0912 and LAB02-188) approved by the Institutional Review Board of The University of Texas MD Anderson Cancer Center. Written informed consent was obtained from all individual participants included in the study for their specimens and data to be used in research and for publication.

De nombreuses études ont démontré l'importance de la digestion et du microbiote intestinal dans la nutrition et la santé des chiens. Les systèmes digestifs artificiels représentent une alternative pertinente aux essais in vivo, en accord avec la règlementation européenne des 3Rs. Aujourd’hui, une dizaine de modèles in vitro statiques ou dynamiques reproduisant une ou plusieurs parties du tractus gastro-intestinal du chien ont été développés, en prenant en compte les paramètres physico-chimiques, mécaniques et/ou microbiens de la digestion canine. Ces modèles permettent d’étudier en laboratoire le devenir de produits alimentaires et vétérinaires dans l'environnement digestif du chien, notamment en termes de digestibilité des macronutriments, bioaccessibilité de micronutriments, survie et activité de microorganismes ou pharmacocinétique des médicaments. Afin d’élargir leurs potentiels, ces modèles pourront dans un futur proche être couplés à des modèles cellulaires ou être adaptés pour reproduire des conditions pathologiques comme l’obésité. Mots clés : modèle digestif in vitro, chien, nutrition, santé, microbiote

Contexte : Le développement de phytomédicaments ou médicaments traditionnels améliorés en Afrique sub-saharienne connait un succès grandissant. En Côte d’Ivoire, diverses unités artisanales de fabrication de phytomédicaments se développent mais restent peu évalués pour leur efficacité, innocuité et qualité. Justificatif : Parmi toutes les pathologies affectant la population subsaharienne, le paludisme occupe une place importante étant la première cause de maladie infectieuse parasitaire, et la 3ème cause de maladies infectieuses. Les produits de santé des tradithérapeutes restent peu évalués pour leur efficacité, innocuité et qualité. Les chercheurs et enseignants chercheurs au sein des universités ont emboîté le pas dans plusieurs pays. En Côte d’Ivoire aucune université n’a franchi le pas de la production à l’échelle d’unité industrielle pilote. Objectif : L’objectif de ce travail visait à sélectionner des plantes pour la mise au point de phytomédicaments antipaludiques de qualité de catégorie 2 OMS. Méthodologie : La sélection des plantes à l’essai a concerné celles ayant fait l’objet de travaux de recherche des Universités en Côte d’Ivoire. Parmi ces derniers, ceux évaluant l’effet sur des extraits aqueux de parties aériennes des plantes. De ces extraits ceux présentant les meilleures inhibitions de croissance du Plasmodium selon les critères de Wilcox, ont été retenues pour la mise au point de phytomédicaments de catégorie 2 OMS. Les essais de pré formulation er formulation galénique à l’échelle de laboratoire ont permis de mettre en œuvre le procédé de fabrication adéquat. Une transposition à l’échelle pilote a été ensuite réalisée pour démontrer la reproductibilité de la fabrication industrielle de la forme galénique mise au point. Résultats : Ces résultats issus des travaux de chercheurs des universités ivoiriennes ont permis de recenser 58 plantes médicinales étudiées pour leur activité antiplasmodiale depuis 1996. Parmi ces plantes 38 ont fait l’objet d’extraits aqueux, décoctés ou infusés. Sept extraits aqueux présentant de CI50 <5µg/ml ont été retenues entre autres. Cependant la majorité des études scientifiques portant sur les plantes médicinales potentiellement antipaludiques ont été réalisées dans des modèles in vitro, rare sont celle réalisés in vivo, dans des modèles murins. Les résultats des essais pharmacologiques, de formulation et de transposition à l’échelle pilote ont permis de disposer de gélules à base de granulés de plantes issus d’une granulation humide. Conclusion : Les travaux scientifiques des Universités de Côte d’Ivoire offre un large éventail de plantes médicinales à potentiel antimalarial pour la conception de phytomédicaments de qualité de catégorie 2 OMS. Des essais préliminaires réalisés in vivo ont permis d’obtenir un brevet d’invention.

Introduction : En milieu traditionnel, les feuilles d’Elaeis guineensis sont utilisées pour la prise en charge des plaies. L’objectif de cette étude était de mettre en évidence l'activité cicatrisante des feuilles de cette plante, sur un modèle de brûlure expérimentale de second degré profond, chez le rat de souche Wistar. Matériel et méthodes : Le matériel végétal était constitué d’une poudre de feuilles d’E. guineensis récoltées en Casamance, dans la région Sud du Sénégal. Des rats de souche Wistar provenant de l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie de la Faculté de Médecine, de Pharmacie et d’Odonto-Stomatologie de l’Université Cheikh Anta DIOP de Dakar ont été utilisés pour l’étude pharmacologique. La vaseline officinale pure a servi d’excipient, le benzoate de sodium est ajouté comme conservateur. La Sulfadiazine a été utilisée comme cicatrisant de référence. La poudre de feuilles d’E. guineensis a été extraite avec des solvants de polarité différente (Hexane/Acétate d’éthyle/Méthanol). Une caractérisation de groupes phytochimiques majeurs de la fraction méthanolique a été réalisée sur tube. A partir de la poudre de la fraction méthanolique des feuilles d’E. guineensis, deux pommades à 3 et 10 % dans la vaseline ont été préparées (Qsp 50 g). Le benzoate de sodium a été utilisé à raison de 1,5 g pour 1000 g de pommade. Le benzoate de sodium et la poudre de la fraction méthanolique ont été triturés dans un mortier à l’aide d’un pilon. La vaseline officinale pure a été ajoutée progressivement en triturant légèrement jusqu’à homogénéisation du mélange. L’étude pharmacologique a été menée sur un modèle in-vivo de brûlure expérimentale du second degré profond chez le rat de souche Wistar. Les brûlures expérimentales ont été induites à l'aide d’un cylindre métallique de 3 cm de diamètre et chauffé pendant 3 min. Le cylindre a été appliqué pendant 10 secondes en appuyant un peu sur la surface de la peau rasée des rats, sous anesthésie, afin de provoquer une brûlure de second degré profond. Les pommades ont été appliquées quotidiennement pendant 28 jours. L’activité cicatrisante a été évaluée selon la méthode de KAMOSHIDA avec des scores allant de 1 à 5 selon l’importance de la brûlure et confirmée par des coupes histologiques. Résultats : La caractérisation phytochimique a mis en évidence la présence de composés phénoliques tels que les flavonoïdes et les tanins dans la fraction méthanolique. L’application quotidienne de la vaseline seule ne s’associe pas à une réparation tissulaire. Celle de la pommade à 3 % correspond à un score de 2 à J14 c’est-à-dire, une reconstruction tissulaire des lésions. La cicatrisation est effective au 25ème jour de traitement avec un score de 0,5. La réparation tissulaire est complète au bout de 20 jours d’application et la ré-épithélialisation est complète est observée après 18 jours de traitement. Conclusion : Les feuilles d’E. guineensis sont cicatrisante sur des modèles in-vivo. Ces effets pourraient être dus aux flavonoïdes et tanins présents dans cette fraction.

SANOGO Rokia1,2, DEMBELE Daouda L1, DOUMBIA Sékou1, Aichata B. A. MARIKO1, FOFANA Mohamed Yacine3, Introduction : Au Mali, le succès de la recherche du Département Médecine Traditionnelle (DMT), de l’ex-Institut National de Recherche en Santé Publique (INRSP) a permis la mise au point de 14 Médicaments Traditionnels Améliorés (MTA) qui ont eu une Autorisation de Mise sur le Marché (AMM) depuis 1983 dont 7 sont sur la Liste Nationale des Médicaments Essentiels (LNME) du Mali (1 sirop, de 5 tisanes, 1 pommade). Le DMT a mis au point de nouveaux MTA sous forme de pommade. L’objectif de cette communication, est de passer en revue les études précliniques, cliniques, la formulation et la production des MTA surs- efficaces-de qualité et accessibles. Matériel et méthodes : Différents échantillons de plantes ont été récoltés, séchés, pulvérisés. Le contrôle de qualité a été effectué, les extraits ont été préparés, les études phytochimiques, pharmacologiques et de toxicité ont été réalisées. Des extraits ont été utilisés pour formuler une pommade avec différents excipients notamment le beurre de karité. Dans certains cas, les pommades ont été soumises aux essais cliniques. Résultats et Discussion : Les principales pommades sont : i) MITRADERMINE pommade à base de Mitracarpus scaber utilisée dans la prise en charge de dermatoses ; ii) SECUDOL pommade à base de Securidaca longipedunculata, indiqué contre les manifestations douloureuses et inflammatoires articulaires ; iii) OPICICA pommade de base de Opilia celtidifolia, comme cicatrisante ; iv) LAFIA Pommades, à base de Fagara zanthoxyloides, Securidaca longepedunculata et de Capsicum annuum, utilisées dans la prise en charge de la douleur. Dans l’ensemble, les pommades de bonne qualité, ont présenté une consistance semi solide, une bonne homogénéité et de différentes couleurs et odeurs. Ces pommades doivent présenter les mêmes propriétés des extraits qui ont servis de principes actifs. En perspective, il faudra améliorer les pommades avec l’incorporation de la cire d’abeille et vérifier leur tolerabilité et l’efficacité, notamment mener une investigation clinique pour compléter le dossier de demande d’autorisation mise sur le marché des pommades. Elles peuvent être proposées pour la prise en charge médicale de la douleur notamment au niveau local. Expérience n°2 : Potentiel de développement de Phytomédicaments antipaludiques pour Phytomed CI. Professeur KOUAKOU SIRANSY, UFR Sciences Pharmaceutiques et Biologiques ; Côte d’Ivoire Contexte : Le développement de phytomédicaments ou médicaments traditionnels améliorés en Afrique sub-saharienne connait un succès grandissant. En Côte d’Ivoire, diverses unités artisanales de fabrication de phytomédicaments se développent mais restent peu évalués pour leur efficacité, innocuité et qualité. Justificatif : Parmi toutes les pathologies affectant la population subsaharienne, le paludisme occupe une place importante étant la première cause de maladie infectieuse parasitaire, et la 3ème cause de maladies infectieuses. Les produits de santé des tradithérapeutes restent peu évalués pour leur efficacité, innocuité et qualité. Les chercheurs et enseignants chercheurs au sein des universités ont emboîté le pas dans plusieurs pays. En Côte d’Ivoire aucune université n’a franchi le pas de la production à l’échelle d’unité industrielle pilote. Objectif : L’objectif de ce travail visait à sélectionner des plantes pour la mise au point de phytomédicaments antipaludiques de qualité de catégorie 2 OMS. Méthodologie : La sélection des plantes à l’essai a concerné celles ayant fait l’objet de travaux de recherche des Universités en Côte d’Ivoire. Parmi ces derniers, ceux évaluant l’effet sur des extraits aqueux de parties aériennes des plantes. De ces extraits ceux présentant les meilleures inhibitions de croissance du Plasmodium selon les critères de Wilcox, ont été retenues pour la mise au point de phytomédicaments de catégorie 2 OMS. Les essais de pré formulation er formulation galénique à l’échelle de laboratoire ont permis de mettre en œuvre le procédé de fabrication adéquat. Une transposition à l’échelle pilote a été ensuite réalisée pour démontrer la reproductibilité de la fabrication industrielle de la forme galénique mise au point. Résultats : Ces résultats issus des travaux de chercheurs des universités ivoiriennes ont permis de recenser 58 plantes médicinales étudiées pour leur activité antiplasmodiale depuis 1996. Parmi ces plantes 38 ont fait l’objet d’extraits aqueux, décoctés ou infusés. Sept extraits aqueux présentant de CI50 <5µg/ml ont été retenues entre autres. Cependant la majorité des études scientifiques portant sur les plantes médicinales potentiellement antipaludiques ont été réalisées dans des modèles in vitro, rare sont celle réalisés in vivo, dans des modèles murins. Les résultats des essais pharmacologiques, de formulation et de transposition à l’échelle pilote ont permis de disposer de gélules à base de granulés de plantes issus d’une granulation humide. Conclusion : Les travaux scientifiques des Universités de Côte d’Ivoire offre un large éventail de plantes médicinales à potentiel antimalarial pour la conception de phytomédicaments de qualité de catégorie 2 OMS. Des essais préliminaires réalisés in vivo ont permis d’obtenir un brevet d’invention. Expérience n°3 : Processus de Recherche-Développement (R&D) et production d’un phytomédicament destiné au traitement de la drépanocytose : FACA Dr Salfo OUEDRAOGO, PharmD, M.Sc. Pharma, PhD, Maître de Recherche en Pharmacie Galénique et Industrielle, Chef de service Production CNRST/IRSS/MEPHATRA/PH, Pharmacien chef de l’Unité de Production Pharmaceutique (U-PHARMA), Tel : (+226) 70 45 89 36/78 41 54 64 Résumé : Depuis l’antiquité, l’humanité a toujours recours aux plantes médicinales comme moyens de traitement adéquat, préventifs ou curatifs, plus ou moins efficaces qui sont perfectionnés sous le coup de recherches. Malgré les grands progrès observés dans la médecine moderne au cours des dernières décennies, les plantes médicinales jouent toujours un rôle clé dans la prise en charge des maladies. Certaines plantes utilisées au XVIIIe siècle sont toujours au cœur de la médecine et pharmacopée après que leur efficacité ait été scientifiquement démontrée. Dans ce contexte, plusieurs programmes sont développés par de nombreux centres pour la recherche de nouvelles molécules mais aussi pour la mise au point de médicaments à base de plantes. Ce travail repose sur un retour d’expérience d’un praticien de la médecine traditionnelle qui utilisait une combinaison de deux plantes médicinales ((Zanthoxylum Zanthoxyloïdes Lam. (Rutaceae) Calotropis procera Ait. (Asclepiadaceae)) pour traiter la drépanocytose. L’approche repose sur une démarche de la pharmacologie inverse. La première étape a consisté à réaliser une étude pharmacoclinique comparée à un traitement standard qui est la dihydroergotoxine (HYDERGINE®) chez des enfants en crise drépanocytaire. Les propriétés antifalciformantes ont été confirmés par des études in vitro. La deuxième étape a concerné les études chimiques et biologiques in vitro et in vivo qui ont permis la mise en évidence de la sécurité d’emploi ainsi que des propriétés (anti falciformantes, anti-œdémateuses, analgésiques, antipyrétiques, myorelaxantes, vaso-dilatatrices, etc.) liées à la physiopathologie de la maladie. La troisième étape a abouti à la formulation et à la standardisation suite à l’identification de molécules traceurs qui sont des dérivés d’acide vanillique (burkinabines » A, B et C). Des études de validation du procédé de fabrication suivi de stabilité ont été réalisées avant la production et la commercialisation après autorisation de mise sur le marché. Cette démarche a permis la mise au point d’un phytomédicament qui suscite un grand espoir pour le traitement de la drépanocytose au regard des résultats de l’étude de pharmacovigilance Expérience n°4 : The Role of Quality Management Systems in the Advancement of the Herbal Medicine Industry in Ghana Caleb Mawuli AGBALE Department of Biochemistry, School of Biological Sciences, University of Cape Ghana Research and Development Department, Centre of Awareness Research and Manufacturing Company Limited (COA RMCL), Cape Coast, Ghana Plant Extracts Process Engineering Unit, McHammah Engineering Company Ltd, Accra Ghana Correspondence: Cell: +233 208 232 659 Email: magbale@ucc.edu.gh The herbal medicine industry holds great potential in the quest to transform the healthcare systems and economies within sub-Saharan Africa. Although the herbal medicine sector has made significant strides in Ghana over the last 3 decades there remain significant challenges to be addressed to achieve the expected benefit outlined in health policies and sustainable development strategies. This presentation will take a critical look at these challenges and how these could be addressed through the adoption of quality management systems and investment in research and development using the examples of COA- RMCL, Kantanka Herbal and Pharmaceutical Research Centre and startups like DaySpring Phytoceuticals. These examples demonstrate that the effective implementation of QMS ensures operational consistency, ease of traceability of products batches, continuous improvement and evidence- based decision making. Finally, strategies that could be adopted to ensure that herbal medicine plays a dominant role in the healthcare system across the sub region are discussed. Expérience n°5 : Développement de MelaK@ crème pour le traitement des brûlures chez l’enfant (Expérience du CEA-CFOREM) UNIVERSITE JOSEPH KI ZERBO (UJKZ) Centre de Formation, de Recherche et d’Expertises en sciences du Médicament (CEA-CFOREM) Tél. : (+226) 75 55 20 20 ; Email : cea.cforem.ujkz@gmail.com Pr. Rasmané Semdé, CEA-CFOREM, École doctorale sciences et santé (ED2S), UFR - Sciences de la santé (UFR/SDS), Université Joseph KI-ZERBO, 03 BP 7021 Ouagadougou, Burkina Faso Les brûlures cutanées figurent parmi les problèmes de santé majeurs en Afrique, avec plus de 17 millions de victimes chaque année. Au Burkina Faso, l’incidence est en croissance avec 13,7% des enfants de moins de 5 ans. La prise en charge précoce et appropriée aide à minimiser la douleur, à prévenir les complications et à favoriser une guérison rapide. Elle peut nécessiter une urgence médico-chirurgicale, une réanimation ou juste un traitement local utilisant des produits importés sont souvent financièrement inaccessibles aux populations africaines. MelaK@ crème est une émulsion Huile dans Eau constituée du miel et du beurre de karité, fournis à des prix abordables par des producteurs sélectionnés du Burkina Faso. Elle visait à créer un effet synergique entre les propriétés anti-inflammatoire, cicatrisante et antimicrobienne du miel et celles régénératrice et photoprotectrice du beurre de karité. Le travail de développement a permis d’obtenir un produit d’application aisée, homogène et stable sous certaines conditions de conservation. Après avoir démontré son efficacité comparée aux traitements modernes conventionnels par des tests in vivo sur des rats de laboratoire, puis confirmée par une étude clinique en 2020chez des brulés de 2nd degré, l’émulsion a été brevetée à l’Organisation Africaine de la Propriété intellectuelle (OAPI) le 13/07/2020, sous le N°19447. MelaK@ crème est présentée dans des tubes en aluminium verni de 45 g et de 75 g pour application locale destinés aux traitements des brûlures. Demandée comme préparation magistrale à travers les officines pharmaceutiques privées par les chirurgiens pédiatres des CHU du Burkina Faso, plus de 1500 tubes préparés à l’échelle du laboratoire ont déjà permis de traiter plus de 250 enfants brulés. Face à la demande croissante des praticiens hospitaliers et du grand public, un business plan démontre sa rentabilité, le dossier de demande d’AMM d’un médicament traditionnel amélioré (MTA) de catégorie II a déjà été déposé à l’ANRP du Burkina Faso.