Добірка наукової літератури з теми "Lymphocytes innés"

Cet article présente comment des situations de stress aigu (un transport, un regroupement) ou chronique (conditions de logement contraignantes) affectent la fonction immunitaire chez les animaux d’élevage. La réponse de stress est caractérisée par l’activation de l’axe corticotrope, dont les hormones inhibent l’activité des leucocytes, et la libération de nombreuses autres hormones et neuromédiateurs immunoactifs et immunosuppresseurs (hormone de croissance, prolactine, enképhalines…). Ainsi, l’augmentation transitoire du ratio neutrophiles / lymphocytes dans le sang et l’inhibition de la capacité des lymphocytes sanguins à proliférer sont des indicateurs d’une réponse de stress. D’autres tests sont plus informatifs car ils mesurent les effets du stress sur des fonctions immunitaires précises. Des fonctions relevant de l’immunité innée, première ligne de défense de l’organisme, sont sensibles au stress. Ainsi, la cytotoxicité des cellules tueuses naturelles sanguines est inhibée et des données chez les rongeurs montrent que la réponse inflammatoire peut être fortement déréglée. Certains facteurs de stress favorisent la production de cytokines inflammatoires et augmentent la sensibilité de l’organisme aux chocs septiques, tandis que d’autres inhibent la migration des polynucléaires vers un site d’infection, limitant ainsi la réponse inflammatoire et retardant le phénomène de cicatrisation. Les lymphocytes, vecteurs de l’immunité acquise, constituent la seconde ligne de défense. Le stress peut inhiber le développement de la réponse lymphocytaire à un antigène, par exemple une réponse vaccinale. Il inhibe les réponses de type cellulaire mais affecte peu, voire même parfois stimule, la production d’anticorps. L’altération des réponses innées et acquises diminue la résistance des animaux aux infections virales ou bactériennes.

Les tiques sont les vecteurs les plus importants de pathologies en médecine humaine et vétérinaire. Acariens strictement hématophages, ils produisent une salive riche en molécules bioactives qui ciblent la pharmacologie et l’immunité de l’hôte. Ce processus est absolument vital pour elles, car les tiques dures prennent des repas sanguins de plusieurs jours et doivent éviter leur rejet par l’hôte. Tous les acteurs de l’immunité sont ciblés par cette salive : l’immunité innée en lien avec les cellules résidentes de la peau et les cellules immunitaires et l’immunité adaptative liée aux lymphocytes T et B. La peau constitue donc un site particulier dans les maladies à transmission vectorielle. Au cours de leur longue co-évolution avec les tiques, les agents infectieux prennent avantage de cet environnement favorable pour être transmis efficacement dans la peau et se multiplier, pour ensuite se développer chez les hôtes vertébrés. La salive constitue pour ces microorganismes un véritable facteur de virulence qui augmente fortement leur pathogénicité.

Le rôle protecteur de la réponse immunitaire adaptative de l’hôte au cours de l’infection par le SARS-CoV-2 est devenu une question critique en l’absence d’un traitement spécifique, d‘un vaccin préventif ou d’une immunothérapie. Au cours de l’infection par le SARS-CoV-2, la réponse immunitaire contribuerait à la défense de l’hôte dans la majorité des cas, mais serait responsable de sa pathogénèse chez certains malades. Notamment, au cours des formes sévères, un déséquilibre entre les réponses immunitaires innée et adaptative pourrait être fatal. Au cours de la COVID-19, de nombreuses questions se posent sur la génération de l’immunité spécifique contre les diverses protéines du virus, la cinétique, la fonction des anticorps, ainsi que la qualité des réponses des lymphocytes effecteurs CD4+ et CD8+ pour la protection de l’hôte. L’étude bio-informatique des épitopes T et B des coronavirus a soulevé la question de l’immunité croisée entre le SARS-COV-2 et d’autres coronavirus sources d’infection bénigne ou responsables de pneumopathies graves telles que le MERS-CoV et le SARS-CoV. Dans cette revue, nous faisons le point sur les réponses immunitaires adaptatives au cours de la COVID-19 et leurs rôles potentiels dans la protection des personnes infectées.

Monoclonal antibodies are monospecific in nature and are produced by B-lymphocytes that are cloning of the same cell with exclusive affinity and specificity for a single antigen epitope. Medicines based on monoclonal antibodies are the most common, high-tech, sold and promising segment of the domestic pharmaceutical market. The article considers the possibilities and possibilities of the market for new biosimilar drugs in the dosage form of lyophilisate. The purpose of the work is to study the potential opportunities for localizing the production in the Russian Federation of drugs based on monoclonal antibodies in the dosage form of lyophilisate. The search was carried out by international non-proprietary names (INN) and anatomical-therapeutic-chemical classification (ATC) codes. In the study, methods of marketing analysis and the method of statistical data processing were applied. A study of the market for medicinal products based on monoclonal antibodies in lyophilic form produced in the territory of the Russian Federation showed its significant growth over the period from 2016 to 2020. In monetary terms, production increased from 1.997 to 7589 billion rubles, which amounted to 20% and 45%, respectively. As a result of the analysis, it was found that as of March 2022, the patent protection period for the following INNs has expired: basiliximab, infliximab, omalizumab, trastuzumab. An analysis of the structure of the LP wound based on monoclonal antibodies was carried out. All drugs based on monoclonal antibodies are included in the list of vital and essential drugs, the pricing of which is regulated by the state. The absolute volume of state financing of drugs based on monoclonal antibodies increased from 9,928 to 16,801 million rubles from 2016 to 2020. The dynamics of sales of medicines based on monoclonal antibodies has been studied. There is an increase in sales in physical and monetary terms of localized drugs based on monoclonal antibodies in lyophilic form, however, the potential for localization remains significant. A portfolio of drugs based on monoclonal antibodies in the dosage form «lyophilisate» has been formed, promising for localization of production in the Russian Federation in terms of the criteria for the expiration of patent protection and the level of sales in the Russian Federation.

Deux grandes classes de cellules composent le pool de lymphocytes T (LT) CD8 mémoires. D'une part, les LT CD8 mémoires conventionnels sont générés via la reconnaissance spécifique d'antigènes dérivés de pathogènes ou de tumeurs. D'autre part, les LT CD8 mémoires innés sont générés via différents mécanismes impliquant de fortes stimulations par des cytokines γc indépendamment de la reconnaissance d'antigènes du non soi. Le phénotype extrêmement similaire de ces deux populations cellulaires ne permet pas de les distinguer in vivo. En conséquence, la population de LT CD8 mémoires innés est relativement peu caractérisée. Mon travail de thèse comportait donc deux objectifs majeurs : 1 / Identifier des marqueurs permettant de distinguer in vivo ces deux classes de LT CD8 mémoires. 2/ Caractériser la population de LT CD8 mémoires innés. Dans cette étude, nous démontrons qu'au sein du pool de LT CD8 mémoires, seules les cellules conventionnelles expriment la chimiokine CCL5 et le récepteur NKG2D. Ces deux biomarqueurs permettent ainsi pour la première fois de distinguer les LT CD8 mémoires innés et conventionnels in vivo, à la fois chez la souris et chez l'homme. Grâce à l'expression de NKG2D, nous démontrons que ces LT CD8 mémoires innés possèdent des caractéristiques typiques de cellules mémoires, notamment une réactivité augmentée ainsi qu'un programme génétique comparable à celui des LT CD8 mémoires conventionnels. Néanmoins, cette population cellulaire conserve certaines caractéristiques de cellules naïves. Ainsi, le répertoire TCR diversifié de cette population cellulaire permet à ces cellules de participer à des réponses immunitaires primaires contre différents pathogènes. Enfin, dans un contexte inflammatoire, les LT CD8 mémoires innés présentent un défaut d'accès au tissu pulmonaire comparé aux LT CD8 mémoires conventionnels. Ceci corrèle avec un déficit d'expression de certaines intégrines par les LT CD8 mémoires innés. L'ensemble de nos résultats démontre que les LT CD8 mémoires innés, caractérisés par l'absence d'expression de CCL5 et NKG2D, constituent une population cellulaire hybride, à la frontière entre cellules naïves et cellules mémoires conventionnelles
The pool of memory CD8 T cells is composed of two major cell classes. On one hand, conventional memory CD8 T cells are generated consequently to the specific recognition of pathogen or tumor derived antigens. On the other hand, innate memory CD8 T cells are generated through several mechanisms involving strong yc cytokine stimulation in the absence of cognate antigen recognition. However, these cell classes harbor a very similar phenotype. As a consequence, innate memory CD8 T cell population remains poorly characterized. This PhD has two main objectives : 1 / Identify new biomarkers that enable the discrimination between memory CD8 T cell classes 2/ Characterize the population of innate memory CD8 T cells in physiological condition Our results show that among the pool of memory CD8 T cells, only the conventional ones express the chemokine CCL5 and the NK receptor NKG2D. These two biomarkers enable for the first time the discrimination of memory CD8 T cell classes in physiological settings, in both mouse and human. Thanks to these new tools, we show that innate memory CD8 T cells hold typical memory features, such as an increased reactivity compared to naïve cells and a genetic program similar to the one of conventional memory cells. Nevertheless, this cell population also retains some features typical of naïve cells. The diversified TCR repertoire of this cell population allows it to participate to primary immune responses against various intracellular pathogens. Moreover, like naïve cells, innate memory CD8 T cells fail to access peripheral tissues upon local inflammation, which correlate with an absence of expression of some integrins. Altogether, these results demonstrate that innate memory CD8 T cells, characterized by the absence of expression of CCL5 and NKG2D, represent a hybrid cell population, at the boundary between naïve cells and conventional memory cells

Nous avons récemment identifié chez l’Homme une nouvelle sous population lymphocytaire T constituée par les lymphocytes T (LT) CD8 innés. Ils possèdent un TCRαβ, expriment le facteur de transcription Eomesodermine, les récepteurs membranaires KIR/NKG2A et sont dotés de fonctions de type « Natural Killer » (NK-like). Leurs caractéristiques phénotypiques et fonctionnelles sont compatibles avec leur définition comme potentiel équivalent humain des LT CD8 « innate memory » décrits chez la souris, dont la génération dépend de la sécrétion de l’IL-4 par les LT exprimant le facteur de transcription « promyelocytic leukemia zinc finger protein » (PLZF), notamment les lymphocytes « invariant Natural Killer T » (iNKT). Nous avons pris appui sur le modèle physiopathologique de la leucémie myéloïde chronique (LMC) pour tester l’implication potentielle des LT CD8 innés dans l’immunosurveillance antitumorale chez l’Homme. Ce choix repose sur le fait qu’en matière de cancers, la LMC constitue un modèle d’étude du rôle du système immunitaire, comme l’attestent les données de la littérature documentant que les lymphocytes sont capables de contrôler la maladie.La LMC est une hémopathie maligne de la famille des syndromes myéloprolifératifs qui résulte de la formation d’un gène chimérique BCR-ABL1, lequel est responsable de l’expression d’une protéine dont l’activité tyrosine kinase est dérégulée. Le traitement de la LMC repose sur une thérapie ciblée non curative : les inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK) dont le chef de file est l’imatinib. Nous avons précédemment montré que les lymphocytes iNKT, une sous population T innée dont l’implication dans l’immunosurveillance antitumorale est clairement établie chez l’Homme et la Souris, sont anergiques chez les patients en LMC au diagnostic de la maladie. Leur défaillance fonctionnelle, notamment en termes de sécrétion d’IL-4, est corrigée chez les patients obtenant une rémission cytogénétique complète sous traitement par imatinib. Tout comme pour les lymphocytes iNKT, nos résultats montrent au diagnostic de la maladie un déficit numérique profond des LT CD8 innés, auquel s’ajoute une altération sévère de leurs fonctions NK-like (capacité de sécrétion d’IFN-γ en réponse à une combinaison de cytokines pro-inflammatoires IL-12+IL-18 et de cytotoxicité via CD16). De manière intéressante, nous avons observé chez les patients traités par imatinib et en rémission moléculaire majeure (RMM), une restauration numérique et fonctionnelle partielle en termes de sécrétion d’IFN-γ de type inné des LT CD8 innés. Les données collectées chez les témoins sains, les patients au diagnostic de la maladie et en RMM sous ITK, en mettant en évidence une association entre la fréquence des lymphocytes iNKT et celle des LT CD8 innés, renforcent l’hypothèse de l’existence chez l’Homme, à l’instar de chez la Souris, d’un axe iNKT/ LT CD8 innés. Pour éprouver notre hypothèse que les LT CD8 innés participent au contrôle de la LMC, nous avons analysé leur statut chez des patients en rémission prolongée après arrêt de leur ITK en dépit de la persistance d’une maladie résiduelle tumorale. Chez ces patients, un taux significativement plus élevé de LT CD8 innés est mis en évidence comparativement aux patients en RMM sous ITK et aux témoins sains. Leurs capacités fonctionnelles sont, de plus, restaurées de manière complète en référence aux sujets sains. L’ensemble de ces résultats qui plaide en faveur d’une implication des LT CD8 innés dans l’immunité anti-leucémique au cours de la LMC, nous conduits à émettre l’hypothèse qu’ils pourraient constituer un biomarqueur potentiel du succès d’arrêt du traitement par ITK dans la LMC et nous encouragent à explorer des stratégies d’immunothérapie antitumorale visant à valoriser leurs propriétés fonctionnelles
We have recently identified a new subset of innate T cells in humans, which we have termed « innate CD8 T-cells ». These cells express TCRαβ along with the transcription factor Eomesodermine (Eomes) and KIR/NKG2A membrane receptors. Innate CD8 T-cells share functional and phenotypic features with “innate memory” CD8 T-cells discovered in mice in the early 2000s. The development of these cells depends on the secretion of IL-4 by the T cells expressing the transcription factor Promyelocytic Leukemia Zinc Finger (PLZF), and particularly iNKT, also called « invariant Natural Killer T-cells ». We have used the physiopathological model of chronic myeloid leukemia (CML) to study the potential role of innate CD8 T -cells in anticancer immunity in humans. Indeed, CML is considered to be one of the cancers most sensitive to immunological manipulation. CML is a malignant hemopathy that belongs to the family of myeloproliferative neoplasms characterized by the presence of the BCR-ABL1 oncogene. This oncogene is responsible for expression of the oncoprotein BCR-ABL with deregulated tyrosine kinase activity. Tyrosine kinase inhibitors (TKI) represent the standard of care for CML patients, of which the first in class was Imatinib. This targeted therapy has dramatically improved outcomes CML patients' outcomes, but they cannot achieve a cure. We previously reported that iNKT lymphocytes, a sub-population of innate T cells of which the implication into anti-tumoral immunosurveillance has been clearly demonstrated in human and in mouse models, are anergic in CML patients at diagnosis. Although these cells are functionally impaired, particularly in terms of IL-4 secretion, we have shown that their functional deficiencies are totally restored in CML patients in complete cytogenetic remission upon Imatinib therapy. Similarly to the iNKT lymphocytes, we presently show a major defect in the innate CD8 T-cells during the chronic phase in CML patients compared to those of healthy donors (HD) or patients in major molecular remission (MMR). This numerical defect is associated with a loss of NK-like functions (interferon-γ expression after innate stimulation by IL-12+IL-18 cytokines and with a loss of degranulation after stimulation via CD16). Interestingly, we have observed in patients in MMR under Imatinib a numeric and functional restoration that is at least partial, in terms of interferon-γ secretion after innate stimulation, of the innate CD8 T-cells. In analysis of cohorts of HD, CML patients at diagnosis and those in MMR under TKI, we have observed a correlation between Eomes expression by innate T CD8 T-cells and PLZF expression by iNKT cells. This finding underscores a possible dynamic process of generation of innate CD8 T-cells in humans that would depend on iNKT cells, as is the case in mice. To test the hypothesis that innate CD8 T-cells contribute to the control of CML, we have analyzed their status in a cohort of CML patients who, in spite of a persistent minimal residual disease, had maintained remission (MMR) more than two years after TKI discontinuation. In these patients, we demonstrate a dramatic increase of functional active innate CD8 T-cells as compared to HD and patients in MMR under TKI. All in all, these results underscore the major role of innate CD8 T-cells in anti-leukemic immunity during CML disease. We believe and we will test the hypothesis that the numeric and functional restoration of this subset might constitute a potential biomarker of successful TKI cessation in CML. We will also investigate whether innate CD8 T-cells could be a target for immunotherapy-based strategy

Les lymphocytes intraépithéliaux (LIE) résident entre les cellules épithéliales (CE) intestinales et sont donc les premières cellules immunitaires à entrer en contact avec les agents pathogènes. En plus de répondre rapidement à l'infection, ils régulent l'homéostasie intestinale et maintiennent la barrière épithéliale. Ces fonctions sont assurées par différentes sous-populations de lymphocytes T et innés. Les LIE innés ont été identifiés récemment. Ils sont majoritaires dans l'épithélium intestinal à la naissance et lorsque l'immunité adaptative est compromise. Leur rôle dans la réponse immunitaire contre les pathogènes intestinaux reste cependant peu étudié.Au cours de ma thèse, j'ai étudié le rôle des LIE innés dans l'infection à Cryptosporidium, un parasite opportuniste qui infecte l'épithélium intestinal. L'infection est bénigne chez les individus immunocompétents, mais peut être sévère chez les individus immunodéprimés et les enfants.Pour étudier le rôle spécifique des LIE innés, nous avons développé un modèle in vitro qui consiste à co-cultiver des organoïdes intestinaux murins infectés par C parvum avec des LIE innés de souris RAG2-/-. Grâce à ce modèle original, nous avons démontré que les LIE innés contrôlent la prolifération du parasite et bien qu’ils sécrètent l'IFN-ƴ en réponse à C parvum, cette sécrétion n’est pas suffisante pour inhiber la prolifération du parasite. L'effet protecteur des LIE innés est en fait médié par un mécanisme cytotoxique dépendant des granzymes. L’analyse du transcriptome a révélé que les CE infectées régulent négativement la serpinb9b, un inhibiteur de granzyme, et pourraient ainsi être plus sensibles aux attaques cytotoxiques
Intraepithelial lymphocytes (IEL) reside between intestinal epithelial cells and thus are the first immune cells to contact intestinal pathogens. In addition to respond rapidly to infection, they regulate intestinal homeostasis and maintain the epithelial barrier. This wide range of functions is achieved by distinct subsets of T and innate lymphocytes. Innate IEL which share many features with NK/ILC1 cells have been identified recently. These cells dominate the gut epithelium at birth and when the adaptive immunity is compromised. Their role in the immune response against intestinal pathogens remains however poorly studied.During my PhD thesis, I have investigated the role of innate IEL subsets in Crysptosporidium infection. Crysptosporidium is a common parasite that infects the gut epithelium. The infection is self-limiting in immunocompetent individuals, but it can be severe in immunocompromised individuals and children in whom innate IEL dominate.To study the specific role of innate IEL, we have developed an in vitro model that consist to co-culture mice 3D intestinal organoids infected with C parvum with innate IELs from RAG2-/- mice. Thanks to this original model, we demonstrated that innate IELs control parasite proliferation. We further showed that although innate IEL secrete IFN-ƴ in response to C parvum infection, the IFN-ƴ secretion was not sufficient to inhibit parasite proliferation. The protective effect of innate IELs was in fact mediated by a cytotoxic, granzyme-dependent mechanism. Moreover, transcriptomic analysis revealed that infected epithelial cells down regulated serpinb9b, a granzyme inhibitor, and thus may be more sensitive to cytotoxic attack

Les lymphocytes T (LT) CD8 innés sont une population de LT non conventionnels récemment décrits dans le laboratoire. On les qualifie de « non conventionnels » car ils possèdent des caractéristiques de l’immunité acquise (facteur de transcription Eomesodermine et phénotype T mémoire) mais aussi de l’immunité innée (récepteurs des cellules NK, réponse à une stimulation cytokinique de type inné). Les fonctions de ces cellules sont encore peu connues, même s’il existe un faisceau d’argument en faveur de leur implication dans l’immunité anti-infectieuse et anti-tumorale.Il a été décrit que l’immuno-sénescence et/ou la stimulation antigénique chronique (induite par exemple par les infections virales chroniques au cytomégalovirus ou CMV) entraîne(nt) l’expression de marqueurs NK par les LT. Ce phénotype se rapproche donc de celui de nos cellules d’intérêt. Pour étudier l’effet de la stimulation antigénique chronique sur le compartiment LT CD8, et spécialement sa composante innée, nous avons choisi comme modèle la transplantation d’organe. Dans ce domaine, la recherche s’intéresse aux populations immunitaires susceptibles de jouer un rôle dans la tolérance ou le rejet du greffon. Parmi elles, les LT CD8 innés méritent une attention spéciale, ceci du fait de leurs fonctions innées effectrices/cytotoxiques. Nous avons présumé leur (re)programmation par la stimulation antigénique chronique (du greffon et/ou virale) pendant la transplantation. Cette hypothèse a été testée à partir d’une cohorte de patients transplantés rénaux depuis plus de dix ans, sous traitement immunosuppresseur minimisé (ciclosporine A (CsA) en monothérapie), en l’absence de signe clinico-biologique de rejet. Notre travail a d’abord permis de révéler dans les LT CD8 innés issus des donneurs sains (DS) un phénotype sénescent accentué (fréquence de cellules CD27(-)CD28(-) augmentée) que les LT CD8 conventionnels. En outre, la fréquence de cette population T innée, contrairement aux LT CD8 conventionnels, ne corrélait pas avec l’âge. Dans la cohorte de patients transplantés, nous avons observé une augmentation de la fréquence des LT CD8 innés, accompagnée d’un phénotype sénescent et effecteur terminal (CD45RA(+)CCR7(-)) exacerbé, comparativement aux cellules des DS. Les patients présentant une sérologie positive pour le CMV avaient un phénotype sénescent accru par rapport aux patients présentant une sérologie négative.En altérant la signalisation du TCR, le traitement immunosuppresseur CsA pourrait faciliter la (re)programmation des LT CD8 en faveur de leur versant inné. En accord avec cette hypothèse, une modélisation in vitro des effets de la CsA sur les LT CD8 provenant de DS en présence d’une stimulation du TCR et d’IL-15 a permis de documenter une augmentation du pool de LT CD8 innés au détriment du pool de LT naïfs, laquelle est accompagnée d’une valorisation de leurs fonctions (production innée d’IFN-γ). A l’inverse, chez les patients, les LT CD8 innés étaient dysfonctionnels, avec une production innée d’IFN-γ diminuée qui pourrait résulter de leur expression membranaire diminuée du récepteur de l’IL-15, cytokine indispensable aux LT CD8 innés. Ce dysfonctionnement, qui ne peut être attribué à un programme d’exhaustion ni être relié à un antécédent de cancer, pose la question du rôle de la stimulation allo-spécifique chronique. De façon générale, ce travail suggère que le contexte d’allogreffe rénale entraîne une reprogrammation et un phénotype de type « vieillissement » des LT CD8 innés, liés au moins en partie au traitement immunosuppresseur. Cette hypothèse devra être confortée par une analyse fine de l’allo-spécificité des LT CD8 innés dirigée contre le greffon
Innate CD8 T-cells are a non-conventional αβ-T-cell population recently described in our laboratory. We call them “non-conventional” because of their expression of markers from both adaptive immunity (transcription factor Eomesodermin and memory T-cell phenotype) and innate immunity (Natural Killer cell receptors, response to innate-like cytokine stimulation). The functions of innate CD8 T-cells are not well-known, although there are strong arguments for their involvement in anti-infectious and anti-tumor immunity.It has been reported that immunosenescence and/or chronic antigenic stimulation (induced, for example, by chronic viral cytomegalovirus (CMV) infections) result(s) in NK marker expression by T-cells. This phenotype is therefore similar to that of our cells of interest. To study the influence of chronic antigen stimulation on CD8 T-cells, and especially their innate component, we chose organ transplantation as a model. In this domain, research has been focused on immune cell populations that may play a role in graft tolerance or rejection. Among them, innate CD8 T-cells deserve special attention due to their effector/cytotoxic innate functions. We presumed their being reprogrammed by graft and/or viral chronic stimulation during organ transplantation. This hypothesis was tested in a cohort of patients with kidney-transplants for more than ten years, under minimized immunosuppressive treatment (ciclosporin A (CsA) monotherapy), without any clinical and biological sign of rejection. First, our work revealed a more accentuated senescent phenotype (increased frequency of CD27(-)CD28(-) cells) in innate CD8 T-cells from healthy donors (HD) than in their conventional counterpart. Moreover, the frequency of the innate T-cell population, unlike that of conventional CD8 T-cells, did not correlate with age.In the cohort of transplant patients, we observed an increased frequency of innate CD8 T-cells, accompanied by an exacerbated senescent and terminal effector (CD45RA(+)CCR7(-)) phenotype, compared to HD cells. Patients with positive CMV serology had an increased senescent phenotype compared to patients with negative serology.By altering TCR signaling, CsA immunosuppressive therapy could also facilitate the (re)programming of CD8 T-cells in favor of their innate counterpart. In agreement with this hypothesis, in vitro modeling of CsA effects on CD8 T-cells from HD in the presence of IL-15 and TCR stimulation enabled us to document an increased innate CD8 T-cell pool to the detriment of the naive CD8 T-cell pool, accompanied by an enhancement of their functions (innate production of IFN-γ).Conversely, in transplant patients, innate CD8 T-cells were dysfunctional, with decreased innate IFN-γ production, which may result from their decreased membrane expression of the IL-15 receptor, a cytokine essential for innate CD8 T-cells. This dysfunction, which cannot be attributed to cellular exhaustion or cancer history, raises the question of the role of chronic allo-specific stimulation.All in all, this work suggests that the context of renal allogenic transplantation leads to reprogramming and aging-like phenotype of innate CD8 T-cells, linked (at least partially) to immunosuppressive treatment. This hypothesis requires confirmation by a precise analysis of the direct allo-specificity of innate CD8 T-cells against the graft

Dès la naissance, un très grand nombre de micro-organismes commensaux tels que bactéries, levures et virus colonise le tractus gastro-intestinal humain. Ce microbiote intestinal est essentiel pour développer les défenses immunitaires de l'hôte contre les infections, permettre une réparation tissulaire et un métabolisme nutritionnel adéquat. Les lymphocytes T gamma-delta, ou lymphocytes T innés sont des cellules T résidentes dans les tissus, impliquées dans l’inflammation intestinale telle que les maladies inflammatoires chroniques de l’intestin (MICI). Placée à l’interface entre l’immunité innée et adaptative, cette population présente des capacités d’activation et des propriétés fonctionnelles qui lui confère des fonctions à la fois bénéfiques et délétères. Décoder leur régulation est cruciale pour prévenir les réponses immunes inappropriées sans compromettre les mécanismes protecteurs intrinsèques. Au cours de ma thèse, nous avons mis en évidence que les acides gras à chaine courte (AGCC), métabolites produits par le microbiote intestinal, sont capables d’inhiber la production d’IL-17 et d’IL-22 par les lymphocytes T innés in vitro et in vivo en diminuant l’activité des histones déacétylases (HDACs) (Dupraz et al. soumis). Ces résultats contribuent à une meilleure compréhension de la physiologie intestinale ainsi que des mécanismes environnementaux impliqués dans les MICI, ce qui ouvre potentiellement des perspectives thérapeutiques
From birth, a very large number of commensal microorganisms such as bacteria, yeasts and viruses colonize the human gastrointestinal tract. This gut microbiota is essential to develop the immune defences of the host against the infections, to allow a tissue repair and an adequate nutritional metabolism. Gamma-delta T lymphocytes, or innate T lymphocytes, are resident T cells in tissues, implicated in intestinal inflammation such as inflammatory bowel disease (IBD). Placed between innate and adaptive immunity, this population has activation capacities and functional properties, that give it functions both beneficial and deleterious. Decoding their regulation is crucial to prevent inappropriate immune responses without compromising intrinsic protective mechanisms. During my PhD, we have highlighted that short chain fatty acids (SCFA), metabolites producted by the gut microbiota, inhibit IL-17 and IL-22 productions by innate T cells, in vitro and in vivo by decreasing histone deacetylases (HDACs) (Dupraz et al. submit). These data contribute to a better understanding of the intestinal physiology as well as the environmental mechanisms involved in IBD and thus will open potentially new therapeutic perspectives

Les LT γδ contribuent à l'immunité anti-tumorale au sein du microenvironnement tumoral dans divers cancers. Malgré leurs fonctions effectrices bien décrites, de récentes études ont corrélé leur présence dans le microenvironnement tumoral à une meilleure progression des tumeurs solides, suggérant que les LT γδ peuvent présenter des activités pro-tumorales. Mon projet visait à caractériser ces LT γδ présentant des activités tumorales et à déchiffrer leur rôle dans le cancer. Nous avons démontré in vitro que les signaux inflammatoires favorisent le développement d'une sous-population de LT γδ régulateurs caractérisée par l'expression de CD73 et affichant des fonctions immunosuppressives par la production de molécules immunosuppressives telles que l'IL-10, l'adénosine et le facteur angiogénique et chimiotactique IL-8. Le défi associé à la caractérisation des LT γδ CD73+ réside dans l'évaluation de leur existence in vivo ainsi que de leur pertinence dans les cancers humains. Nous avons montré dans le cancer du sein que ~20% des lymphocytes γδ infiltrant la tumeur (γδ TILs) expriment CD73 et présentent les mêmes fonctions immunosuppressives que celles décrites in vitro, suggérant qu'ils pourraient favoriser le développement tumoral via ces mécanismes. En accord avec ces observations, nous avons montré que la présence de γδ TILs est associée à des grades tumoraux tardifs dans le cancer du sein. Nous avons étendu ces observations au cancer ovarien et montré que la densité des CD73+ γδ TILs est négativement corrélée à la survie des patients, suggérant que la densité des γδ TILs CD73+ pourrait être utilisée comme facteur pronostic en clinique. En utilisant l'imagerie par cytométrie de masse, nous avons étudié les réseaux cellulaires des γδ TILs régulateurs (CD73+) et de leurs homologues effecteurs (CD73-) dans les tumeurs d’ovaire afin de mieux comprendre leur rôle dans le cancer. Nos données montrent des écosystèmes immédiats différents pour les γδ TILs CD73+ par rapport aux CD73 renforçant l'idée que les LT γδ CD73+ et CD73- sont fonctionnellement différents.Dans l'ensemble, ces données améliorent nos connaissances sur l'immunobiologie des LT γδ dans le développement du cancer chez l’Homme, avec notamment la caractérisation approfondie du ce nouvel sous-ensemble de LT γδ régulateurs, leur localisation et leurs fonctions au sein du microenvironnement tumoral
Γδ T cells contribute to the anti-tumor immunity within the tumor microenvironment in various cancers. Despite their well-described effector functions, recent studies correlated their presence in the tumor microenvironment with solid tumor progression suggesting that γδ T cells may display pro-tumor activities. My project aimed to characterize those regulatory γδ T cells and decipher their role in cancer.We demonstrated in vitro that inflammatory signals promote the development of a regulatory γδ T cell sub-population characterized by the expression of CD73 and displaying immunosuppressive functions through the production of immunosuppressive molecules such as IL-10, adenosine and the angiogenic and chemotactic factor IL-8. The challenge associated with the characterization of CD73+ γδ T cells resides in assessing their existence in vivo as well as their relevance in human cancers. We showed in human breast cancer that ~20% of tumor infiltrating γδ T lymphocytes (TILs) expressed CD73 and displayed the same immunosuppressive functions as described in vitro, suggesting that they could promote tumor development via these mechanisms. In line with these observations, we showed that the presence of γδ TILs is associated with late tumor grades in breast cancer. We extended such observations to ovarian cancer and showed that the density of CD73+ γδ TILs negatively correlates with patient survival, suggesting that CD73+ γδ TILs density could be used as a prognosis factor. Using Imaging by Mass Cytometry, we investigated the cellular networks of regulatory γδ TILs (CD73+) and their effector counterpart (CD73-) in breast and ovarian tumors to better understand their role in cancer. Our data show different ecosystems for CD73+ compared to CD73- γδ TILs reinforcing the idea that CD73+ and CD73- γδ T cells are functionally different.Altogether, these data improve our knowledge on human γδ T cell biology during cancer development, with the in-depth characterization of the new regulatory γδ T cell subset, their localization and their functions within the tumor microenvironment

Le cancer du poumon est la première cause de mortalité par cancer. Bien qu’ayant bénéficié des nombreuses avancées médicales dans la prévention, le diagnostic et le traitement des cancers, la survie des patients souffrants de cancer du poumon reste médiocre avec une survie à 5 ans d’environ 20%, tous stades confondus. L’influence du système immunitaire sur le contrôle et la progression tumorale est maintenant clairement établie. De nombreuses études ont démontré que la composition en cellules immunitaire du microenvironnement tumoral a un fort impact pronostique et prédictif de la réponse aux traitements. Dans ce contexte, l’immunothérapie ciblant notamment l’axe PD1/PD-L1 et CTLA4 a connu une croissance rapide, mais seulement 20% de patients vont bénéficier de ce traitement dans le cancer pulmonaire. Au delà de la densité des cellules immunitaires, l’influence mutuelle des cellules immunitaires impacte probablement leurs fonctions anti-tumorales et cet élément doit être pris en compte dans l’analyse des tumeurs. Ceci expliquerait les discordances observées entre la densité d’un sous-type cellulaire, la survie attendue et la survie réelle. Les travaux de l’équipe ont montré la présence de proximités cellulaires entre différentes cellules immunitaires du stroma tumoral. Dans ce travail, nous avons déterminé l’impact de ces contacts et les mécanismes cellulaires impliqués. Nous avons quantifié, par une approche d’immunohistochimie multiplexe, les interactions spatiales entre les lymphocytes T CD8+, les lymphocytes T FoxP3+ et les neutrophiles CD66b+ dans le microenvironnement tumoral de 3 cohortes de patients souffrant de cancers broncho-pulmonaires non à petites cellules (CBNPC), traités ou non par immunothérapie, radiothérapie et leurs impacts pronostiques et prédictifs de la réponse aux traitements. Nous avons complété notre étude par des analyses en cytométrie de flux, d’expression de gènes et de protéomique et transcriptomique spatiale. Un Index d’interaction normalisé (IND) a été calculé pour normaliser la densité des interactions entre 2 types cellulaires par rapport à leurs densités respectives. Nous avons montré l’impact pronostique de l’IND, en particulier l’IND CD66b-FoxP3, sur la survie globale. Par cytométrie en flux nous avons observé une diminution de l’expression des checkpoints immunitaires CTLA-4, TIM-3 et LAG-3 et une augmentation de l’expression de PD-1 sur les lymphocytes T CD8+, mais pas sur les lymphocytes T CD4+ lorsque l’IND est élevé. Une analyse d’expression de gènes dans le microenvironnement tumoral a montré que l’IND était lié à un environnement tumoral immunosuppresseur, avec une diminution de l’expression des gènes impliqués dans l’activation et la différenciation des cellules immunitaires, et une surexpression de gènes du versant épithélial de la transition épithélio-mésenchymateuse. Nous avons confirmé ces résultats par Digital Spatial Profiling en analysant l’expression de protéines de l’immunité à l’échelle paucicellulaire. Nous avons observé une augmentation de l’expression des protéines de co-stimulation et d’activation sur les lymphocytes T CD8+ dans les régions d’interaction, comparé aux régions de CD8 « libres ». L’utilisation d’une base de données en ligne de transcriptomique spatiale à l’échelle cellulaire (CosMx) a permis de confirmer la régulation des fonctions immunitaires dans les interactions cellulaires comparé aux cellules « libres » d’interaction. Ces interactions cellulaires influencent la réponse aux thérapies conventionnelles, notamment l’IND CD66b-FoxP3, mais ne parait pas modifier l’efficacité des immunothérapies. L’ensemble de ces résultats suggère que les interactions entre les neutrophiles et les lymphocytes T FoxP3+ favorisent l’activation des lymphocytes T CD8+ et une réponse anti-tumorale efficace, soulignant la complexité de l’immunité anti-tumorale, dont son organisation et les interactions cellulaires présents
Lung cancer is the leading cause of cancer death. Although having benefited from numerous medical advances in the prevention, diagnosis and treatment of cancers, survival of patients suffering from lung cancer remains poor with a 5-year survival of approximately 20%, all stages combined. Nowadays, the immune system influence on tumor control and progression is clearly established. Numerous studies have shown that the immune cell composition of the tumor microenvironment has a strong prognostic and predictive impact on the anti-tumor treatment response. In this context, immunotherapy targeting the PD1/PD-L1 and CTLA4 axis has experienced rapid growth, but only 20% of patients will benefit from this treatment in lung cancer. Beyond the density of immune cells, the mutual influence of immune cells probably affects their anti-tumor functions, thus this factor must be taken into account in the analysis of tumors. This would explain the discrepancies observed between the density of a cell subtype, the expected survival and the observed survival. The team's work has shown the presence of cellular proximities between different immune cells in the tumor stroma. In this work, we determined the impact of these contacts and the cellular mechanisms involved. We quantified, by multiplex immunohistochemistry, the spatial interactions between CD8+ T lymphocytes, FoxP3+ T lymphocytes and CD66b+ neutrophils in the tumor microenvironment of 3 cohorts of patients suffering from non-small cell lung cancer (NSCLC ), treated or not by immunotherapy, radiotherapy and their prognostic and predictive impacts of response to treatment. We completed our study using flow cytometry, gene expression and spatial proteomic and transcriptomic. A Normalized Interaction Index (IND) was calculated to normalize the density of interactions between 2 cell types according to their respective densities. We have shown the prognostic impact of IND, particularly IND CD66b-FoxP3, on overall survival. By flow cytometry, we observed a decrease in the expression of immune checkpoints CTLA-4, TIM-3 and LAG-3 and an increase in the expression of PD-1 on CD8+ T lymphocytes, but not on CD4+ T lymphocytes when IND is high. An analysis of gene expression in the tumor microenvironment showed that IND was related to an immunosuppressive tumor environment, with decreased expression of genes involved in immune cell activation and differentiation, and overexpression of genes from the epithelial side of the epithelial-mesenchymal transition. We confirmed these results by Digital Spatial Profiling by analyzing the expression of immunity proteins at the paucicellular level. We observed an increase in the expression of co-stimulatory and activation proteins on CD8+ T cells in interaction regions, compared to the “free” CD8-enriched regions. The use of an online database of spatial transcriptomic at cellular scale (CosMx) made it possible to confirm the regulation of immune functions in cellular interactions compared to cells “free” of interaction. These cellular interactions influence the response to conventional therapies, notably IND CD66b-FoxP3, but do not seem to modify the efficacy of immunotherapy. Taken together, these results suggest that interactions between neutrophils and FoxP3+ T cells promote CD8+ T cell activation and an effective anti-tumor response, highlighting the complexity of anti-tumor immunity, its organization and the presence of cellular interactions

Ma thèse a porté sur la caractérisation des origines de cellules pouvant produire de l'IL-17 et appelées les Th17. Ces cellules semblent être impliquées aussi bien dans les maladies auto-immunes que dans certaines infections bactériennes. Dans ces différentes pathologies, deux types cellulaires connus comme cellules immunitaires non conventionnelles : les Tregs et les cellules T γδ jouent un rôle primordial. Les premières données obtenues chez la souris suggéraient que ces deux sous populations étaient capables de produire de l'IL-17. J'ai donc employé plusieurs techniques afin de caractériser les cellules immunitaires humaines capables de produire de l'IL-17 et les conditions nécessaires à cette production. Premièrement, j'ai réalisé un travail sur les cellules du sang périphérique en conditions non infectées. Ces travaux m'ont permis de démontrer la capacité des cellules Tregs et particulièrement des cellules MTregs à se polariser en Th17. J'ai mis en évidence que la présence d'IL-1, d'IL-2 et d'un signal TCR permet au MTreg de se polariser en cellules Th17 et que celles-ci perdent leur capacité suppressive ainsi que l'expression de Foxp3. Dans un deuxième temps, je me suis intéressée à cette cytokine dans un contexte pathologique : la Tuberculose. Pour réaliser ce projet, j'ai utilisé un modèle de formation de granulome humain in vitro mis au point par F. Altare et son équipe. J'ai ainsi pu mettre en évidence la présence d 'IL-17 au sein du granulome mycobactérien aussi bien in vitro que sur des coupes histologiques issues de biopsies de patients. De plus, la population la plus apte à se polariser en cellules productrices d'IL-17 au sein du granulome est la population LT γδ. Chez l'homme, il existe deux sous populations de LT γδ : Vδ2- ou Vδ2. Seule la sous population de δ2- semble être capable de produire de l'IL-17 dans le contexte du granulome mycobactérien humain. J'ai aussi pu mettre en évidence que cette production d'IL-17 survient tardivement, dans les stades avancés de granulomes. Enfin il semble exister un lien entre la présence d"IL-17, des cellules δ1 et de la nécrose, puisque ces cellules sont retrouvées uniquement sur les coupes de patients à lésions nécrotiques et que ceci est associé à la présence d'IL-17 au sein de ces mêmes biopsies
During my PhD, I characterized the cells producing the pro-inflammatory cytokine: IL-17. These cells seem to be implicated in autoimmune diseases and some bacterial infections. In these pathologies, the immune system plays an important role and particularly two cell subsets: Treg and γδ T cells. During a first period, I investigated these cells in uninfected PBMCs. During this work I demonstrated the capacity of Treg to polarise into Th17. I also demonstrated that Treg could produce IL-17 when they are activated via the TCR combined with IL-1 and IL-2. Moreover when these cells produce IL-17 they loose the expression of Foxp3 and their suppressive capacity. During a second period, I studied this cytokine in a pathologic context: human tuberculosis. To develop this project, I used an in vitro granuloma model developed by F. Altare’s team. During this work, I demonstrated the presence of IL-17 within characteristic structure of human tuberculosis: the granuloma. This cytokine is present in vitro and in sample biopsies of human granuloma. Moreover, within granuloma, γδ T cells have the best capacity to polarise. In Humans, the γδ T cells are composed of two subset: δ1 and δ2. The δ2 cells are mainly found within epithelia, whereas δ1 are mainly circulating. During my study, I could demonstrate that δ1 cells are the only  cells to be able to produce IL-17 within human granulomas. This production is only displayed in late stage of granuloma. A relationship seems to exist between IL-17, δ1 and the necrosis present in the middle of granuloma, because these cells are present only in necrotic biopsies thus strongly suggesting a direct role of δ1-induced IL-17 in necrosis induction

Le diabète de type 1 (T1D) est une maladie auto-immune caractérisée par la destruction des cellules β du pancréas par les lymphocytes T auto-réactifs. Durant ma thèse, nous nous sommes intéressés au rôle des cellules de l’immunité innée dans le T1D à l’aide d’un modèle murin de la maladie : la souris NOD. Au contraire des cellules du système adaptatif (lymphocytes T et B), les cellules de l’immunité innée constituent la première ligne de défense de l’organisme lors d’une infection. Cette population est constituée entre autre de neutrophiles, cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC), macrophages, mais aussi de lymphocytes T et B non conventionnels tel que les cellules iNKT et B-1a. Précédemment, notre laboratoire a mis en lumière le rôle des lymphocytes iNKT dans le développement du T1D. Durant la première partie de ma thèse, nous avons démontré que les lymphocytes iNKT17, une sous-population des lymphocytes iNKT, ont un rôle délétère dans le T1D chez la souris NOD. Ces cellules infiltrent le pancréas et y produisent de l’IL-17, une cytokine pro-inflammatoire. Grâce à des expériences de transferts, nous avons mis en évidence que les lymphocytes iNKT17 exacerbent la maladie via la production d’IL-17. Dans la deuxième partie de ma thèse, nous nous sommes intéressés aux mécanismes qui induisent l’activation des lymphocytes T auto-réactifs. Nous avons observé chez la souris NOD, que la mort physiologique des cellules β conduit à l’activation de cellules de l’immunité innée : les neutrophiles, les lymphocytes B-1a et les pDC. La coopération entre ces cellules conduit à l’activation des pDC qui produisent de l’IFNα. Cette cytokine active les lymphocytes T auto-réactifs qui vont détruire les cellules β du pancréas. Nos résultats montrent que l’immunité innée est un acteur important dans la physiopathologie du diabète sucré
The type 1 diabetes ( T1D ) is an autoimmune disease characterized by the destruction of β cells in the pancreas by autoreactive T lymphocytes. During my thesis, we are interested in the role of cells of innate immunity in T1D using a mouse model of the disease: NOD mice. In contrast to cells of the adaptive system (T and B lymphocytes ) cells of innate immunity is the first line of defense of the body during infection . This population consists of neutrophils , among other , plasmacytoid dendritic cells ( pDC ) , macrophages , T lymphocytes but not conventional B as iNKT cells and B -1a.Previously, our laboratory has highlighted the role of iNKT cells in the development of T1D . During the first part of my thesis , we demonstrated that iNKT17 cells, a subpopulation of iNKT cells, have a deleterious role in T1D in NOD mice . These cells infiltrate the pancreas and there produce IL -17 , a proinflammatory cytokine. Through transfer experiments , we demonstrated that lymphocytes iNKT17 exacerbate disease through the production of IL-17 . In the second part of my thesis , we investigated the mechanisms that induce the activation of autoreactive T lymphocytes. We observed in NOD mice , the physiological death of β cells leads to activation of innate immunity cells : neutrophils, lymphocytes B- 1a and pDCs . The cooperation between these cells leads to activation of pDC that produce IFNa . This cytokine activates autoreactive T cells which will destroy the β cells of the pancreas. Our results show that innate immunity is an important player in the pathogenesis of diabetes mellitus