Дисертації з теми "Herpèsvirus équin de type 1"
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Carnet, Flora. "Amélioration des protocoles vaccinaux contre la grippe équine et la rhinopneumonie : apport de l’iPPVO en tant qu’adjuvant dans le modèle équin, nouvelle approche de la mesure des anticorps neutralisants." Electronic Thesis or Diss., Normandie, 2023. http://www.theses.fr/2023NORMC413.
Анотація:
Les virus influenza équin (EIV) et herpèsvirus équin-1 (EHV-1) sont fréquemment décrits dans de nombreux pays et sont deux pathogènes endémiques au sein de la population équine française. Ces maladies infectieuses ont d’importantes conséquences aussi bien au niveau santé et bien-être animal qu’en terme d’impact économique. La lutte contre ces virus repose essentiellement sur la mise en place de mesures préventives telles que la vaccination. Malgré cela, les épizooties d’EIV et d’EHV-1 sont régulièrement observées en France et dans le monde. Les anticorps neutralisants, synthétisés en réponse à l’infection ou après immunisation, représentent une ligne de défense majeure. L’amélioration des vaccins et l’enrichissement du panel d’outils de mesure des anticorps neutralisants peuvent constituer un apport stratégique dans la lutte contre ces virus. Afin d’améliorer l’efficacité de la réponse vaccinale en amplitude et dans le temps, l’utilisation d’adjuvants constitue une des voies de recherche prometteuse. Ce travail de thèse a consisté, dans un premier temps, à établir la preuve de concept de l’utilisation de l’iPPVO en tant qu’adjuvant innovant in vivo chez le cheval dans le cadre de la vaccination contre l’EIV. Pour cela, les anticorps ont été mesurés par SRH, méthode pour laquelle des corrélats de protection sont associés au taux d’anticorps mesuré. L’ajout d’iPPVO lors de la vaccination a permis d’augmenter significativement le niveau d’anticorps contre l’EIV ainsi que le niveau de protection des chevaux jusqu’à 6 mois après l’immunisation. Dans un second temps, une méthode de mesure des anticorps anti-EIV faisant appel à l’impédancemétrie a été développée afin d’enrichir les méthodes actuelles et faciliter l’analyse à haut débit. Cette méthode de séroneutralisation a présenté une bonne corrélation avec les valeurs de titres SRH. Une seconde étude a testé, le potentiel adjuvant de l’iPPVO in vivo chez le cheval dans un modèle de vaccination contre l’EHV-1,4. La réponse en anticorps mesurée par séroneutralisation a été augmentée jusqu’à 5 mois suivant l’immunisation. Enfin, des résultats préliminaires sur le mécanisme d’action de l’iPPVO sur les cellules mononucléées du sang périphérique a permis de mettre en évidence l’importance de la réponse interféronEquine influenza virus (EIV) and equine herpesvirus-1 (EHV-1) are frequently described in many countries and are two endemic pathogens in the French equine population. These infectious diseases have important consequences both in terms of animal health and welfare and in terms of economic impact. The fight against these viruses is essentially based on the implementation of preventive measures such as vaccination. Despite this epizootics of EIV and EHV-1 are regularly declared in France and throughout the world. Neutralising antibodies, synthesised in response to infection or after immunisation, represent the main line of defence against these viruses. Improved vaccines and a wider range of tools to measure neutralising antibodies can be a valuable strategy in the fight against these viruses. In order to improve the efficacy of the vaccine response, both in magnitude and duration, the use of adjuvants is one way to improve immunogenicity. This thesis consisted, in the first instance, in establishing the proof of concept of the use of iPPVO as an innovative adjuvant in vivo in horses in the context of vaccination against EIV. For this purpose, antibodies were measured by SRH, a method for which the correlates of protection are well defined. The addition of iPPVO at vaccination significantly increased the antibody level to EIV and protection in horses up to 6 months after immunisation. In a second step, a new method for measuring EIV antibodies in serum based on impedancemetry was developed to improve on current methods and facilitate high throughput analysis. This neutralisation test correlated well with SRH test. Another study was performed, which demonstrated the adjuvant potential of iPPVO in horses during vaccination against EHV-1,4. The antibody response measured by serum neutralisation increased up to 5 months after immunisation. Finally, preliminary results on the mechanism of action of iPPVO on peripheral blood mononuclear cells demonstrated the importance of the interferon
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Geoffroy, Marie-Claude. "Réactivation de l'expression du gène rep de l'Adeno-Associated Virus de type 2 par la protéine ICP0 de l'Herpès Simplex de type 1." Nantes, 2005. http://www.theses.fr/2005NANT16VS.
Анотація:
L'adeno-associated virus de type 2 (AAV-2) est un parvovirus humain qui nécessite la présence d'un virus auxiliaire tel que l'herpès simplex de type I (HSV-1) pour effectuer un cycle réplicatif complet. En absence de virus auxiliaire, son génome viral associé à la chromatine est alors sensible à un mécanisme de répression cellulaire qui éteint la transcription de ses gènes rep et cap. Actuellement, quatre gènes précoces de l'HSV-1, codant pour le complexe hélicase primase (UL5/8/52) et la protéine DBP (UL29) ont été définis comme étant essentiels pour permettre la synthèse des formes réplicatives de l'AAV-2. Toutefois, aucun d'entre eux ne possèderait de fonctions transactivatrices capables d'activer l'expression du gène rep. De ce fait, l'objectif de ce travail de thèse a été d'investiguer les protéines de l'HSV-1 qui permettent d'activer l'expression du gène rep, à partir d'une forme latente intégrée de l'AAV-2. Dans ce contexte, les promoteurs de l'AAV-2 sont silencieux, en particulier, le promoteur p5, point de départ de la transcription des gènes rep et cap. Ainsi, nous avons montré que la protéine ICP0 permettait de lever la répression exercée au niveau du promoteur p5, en agissant au niveau transcriptionnel. Cet effet serait dépendant de son activité E3 ubiquitine ligase, conférée par son domaine RING Finger et de l'activité protéolytique du protéasome, suggérant qu'ICP0 pourrait induire la dégradation de facteurs cellulaires participant à la répression du p5. De plus, nous avons montré que la localisation d'ICP0 dans les structures ND10 et par conséquent, leur désorganisation ne serait pas nécessaire pour activer l'expression du gène rep. Enfin, USP7, une protéase clivant les motifs ubiquitine conjugués sur ICP0 participerait indirectement à l'effet transactivateur d'ICP0 sur le promoteur p5, en contribuant, notamment, à la stabilité d'ICP0. Dans l'ensemble, cette étude a permis de démontrer que ICP0 serait un facteur clé pour l'activation des gènes de l'AAV-2 et devrait ainsi contribuer à la définition des fonctions auxiliaires de l'HSV-1Adeno-associated virus type 2 (AAV-2) is a human parvovirus that requires the presence of a helper virus, such as the herpes simplex virus type 1 (HSV-1) to accomplish a complete productive cycle. In the absence of helper virus, AAV-2 can establish a latent infection that is characterized by the absence of expression of viral genes. So far, four HSV-1 early genes, UL5/8/52 (helicase primase complex), and UL29 (ssDBP), were defined as sufficient for AAV replication when cells were transfected with a plasmid encoding for the wild type AAV-2 genome. However, none of these viral products was shown to behave as a transcriptional factor able to activate AAV gene expression. Our study provides the first evidence that the immediate-early HSV-1 protein ICP0, can promote rep gene expression in cells latently infected with wild type AAV-2. This ICP0-mediated effect occurs at the transcriptional level and involves the ubiquitin-proteasome pathway. Furthermore, using deletion mutants we demonstrate that the localization of ICP0 to ND10 and their disruption is not required for the activation of the rep promoter. Finally, ubiquitin-specific protease USP7 plays an indirect role in the reactivation of rep gene expression. Altogether, this study indicates that ICP0 is a key helper factor for AAV gene activation and thus contributes to the definition of the HSV-1 helper activities
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Pronost, Stéphane. "Apports des outils de génétique moléculaire à la connaissance de deux infections virales du cheval : herpèsvirus équin 1 et artérite virale équine." Caen, 2010. http://www.theses.fr/2010CAEN3120.
Анотація:
De nombreux virus sont responsables de maladies chez le cheval et peuvent entraîner des épizooties et des entraves aux échanges commerciaux. Parmi ceux-ci l’herpèsvirus 1 et le virus de l’artérite virale équine sont particulièrement surveillés. Des méthodes de détection et de caractérisation moléculaires ont été développées. Nous avons étudié la relation entre les différentes formes d’expression clinique des infections à HVE-1 et le génotype des souches circulant en France. Nous avons ainsi pu confirmer que l’HVE 1 était un des pathogènes abortifs majeurs et qu’il pouvait également être responsable de formes neurologiques sporadique ou épidémique. L’étude par SNP-PCR de la présence de la mutation A/G2254 de l’ORF30 codant l’ADN polymérase a montré que des souches dites «non neuropathogènes» pouvaient être détectées lors de formes paralytiques et qu’à l’inverse des souches dites « neuropathogènes» étaient détectées lors de formes abortives. Ceci suggère l’intervention d’autres facteurs liés au cheval et à son environnement dans l’expression des formes de la maladie. La caractérisation, par analyse phylogénétique des ORF2a à 7, des souches françaises du virus de l’artérite virale, a permis de montrer l’apparition en France d’une souche de type nord américain en 2003. L’épizootie d’artérite virale équine de l’été 2007 décrite dans ce travail a montré qu’une souche Européenne du sous-groupe 2, particulièrement virulente, était responsable de la mort de sept chevaux et d’un avortement. Les perspectives consistent en une approche du séquençage complet du génome d’HVE-1 et une étude phylogénétique d’autres souches d’intérêt pour l’AVE afin de déterminer l’origine de l’épizootieMany viruses are responsible of equine pathologies and may involve both outbreaks and trade limitations. Among them, equid herpesvirus -1 (EHV-1) and equine arteritis virus (EAV) are monitored closely. Methods of detection and molecular characterisation were developed. We investigated the relationships between the different clinical expressions of EHV-1 infection and genotype of the strains being present in France. We could confirm EHV-1 being both a major abortive agent and also responsible of either sporadic or epidemic neurological diseases. Determining by SNP-PCR the presence/absence of mutation A/G2254 in ORF 30, coding for DNA polymerase, allowed to precise that non-neuropathogenic strains could be detected during paralytic forms, and conversely, neuropathogenic strains could be detected during abortive forms of the disease. This suggests that other factors related to horse and environment also are interfering with the clinical expression of the syndrome. Characterisation of the French strains of EAV, by phylogenetic analyses of ORF 2a-7, allowed demonstrating the emergence in 2003 of a North American strain. The outbreak of equine viral arteritis being described in this paper, revealed an European strain from subgroup 2 (highly virulent) to be responsible of one abortion and death of seven horses. Perspectives are based on the complete sequencing of EHV-1 genome as well as phylogenetic study of other EAV strains in order to determine the origin of the outbreak
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Zaupa, Cécile. "Développement et utilisation de nouveaux outils biologiques basés sur l'emploi du système de recombinaison Cre/loxP afin de produire des vecteurs amplicons non cytotoxiques dérivés du virus de l'Herpès Simplex de type I." Lyon 1, 2003. http://www.theses.fr/2003LYO10035.
Анотація:
Les vecteurs de type amplicon, dérivés du virus de l'herpès simplex de type I, constituent un outil de choix pour le transfert de gène. Ils permettent de véhiculer un ADN de très grande taille dans de nombreux types cellulaires sans que cet ADN s'intègre dans le génome cellulaire. Ces vecteurs sont des particules herpétiques défectives ayant pour génome un concatémère d'unités plasmidiques, dont les seules séquences virales sont les signaux en cis nécessaires à sa réplication et à son encapsidation. Les fonctions nécessaires en trans à leur production sont fournies par un virus ou génome auxiliaire. Il en résulte une population virale constituée de vecteurs amplicons et de virus auxiliaires. La présence d'un grand nombre de virus auxiliaires, même défectifs, rendait ces vecteurs difficilement utilisables en thérapie génique. Pour remédier à ce problème, nous avons construit un virus auxiliaire, HSV-1 LaL J, qui est défectif et dont les séquences en cis essentielles à son clivage-encapsidation, encadrées par deux sites loxP en orientation parallèle, sont spécifiquement délétées par la recombinase Cre. En parallèle, nous avons établi une lignée transcomplémentante permettant la production de ce virus, ainsi qu'une lignée cellulaire transcomplémentante exprimant la recombinase Cre, qui permet l'expression du virus HSV-1 LaL J, mais inhibe son encapsidation. Aussi, les protéines nécessaires à la production de vecteurs amplicons sont toujours synthétisées, mais le virus auxiliaire n'est plus produit. Nous avons alors utilisé le virus HSV-1 LaL J et ces nouvelles lignées cellulaires, pour produire des vecteurs amplicons. Nous avons, ainsi, montré que des titres élevés de vecteurs amplicons, dont le taux de contamination par un virus auxiliaire non pathogène est très faible, pouvaient être aisément obtenus. Les vecteurs ainsi produits sont non cytotoxiques pour les cellules infectées. Enfin, nous avons étudié, in vitro, l'expression de ces vecteurs.
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Morency, Eric. "The protein of herpes simplex virus Type 1 : from centromeres to the interphase centromere damage response." Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10317.
Анотація:
Cette étude se focalise sur l'activité de la protéine ICP0 du virus Herpès Simplex de type 1. Dans le contexte de ses activités nucléaires, nous avons découvert une nouvelle réponse cellulaire suite à des dommages centromériques induits par ICP0. [. . . ]
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Beitia, Ortiz de Zárate Igor. "Etude du transport intracellulaire de la Glycoproteine B de HSV-1 et de son impact sur l'infection virale." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077071.
Анотація:
Le virus Herpès simplex de type 1 (HSV-1) est un pathogène humain capable d'envahir le système nerveux central et de provoquer des encéphalites. La glycoprotéine B (gB), un composant d'HSV-1 nécessaire à l'entrée du virus dans les cellules, a été impliquée dans la neuroinvasion. Son domaine cytoplasmique présente des motifs conservés similaires à des motifs de transport intracellulaire. Afin de déterminer leur rôle dans le transport intracellulaire et la maturation de la gB, nous avons tronqué ou muté ces motifs et caractérisé les modifications occasionnées. Nos résultats montrent qu'une région incluant le motif di-acide ERTE est nécessaire à la maturation glycosidique complète de la protéine, à son expression à la surface cellulaire et à la production de particules infectieuses dans un test de complémentation d'un virus gB-défectif. Deux motifs, YTQV et LL, participent à son transport rétrograde de la surface cellulaire au TGN. Le motif YTQV est nécessaire à l'endocytose de la gB depuis la surface, tandis que le motif LL participerait à une étape plus tardive du transport, puisque sa modification n'empêche pas l'internalisation de la gB, mais retarde son accumulation dans le TGN et favorise son recyclage à la membrane plasmique. La modification de ces motifs entraîne aussi une diminution de l'infectiosité virale et des effets sur le phénotype d'infection (notamment, la modification du motif LL favorise la formation de syncytia). Ces résultats confortent un modèle selon lequel HSV-1 acquiert ses glycoprotéines dans le TGN et suggèrent que le transport rétrograde de la gB joue un rôle important dans la diffusion du virus de cellule à cellule et dans l'infectiosité viraleHerpes simplex virus type 1 (HSV-1) is a human pathogen which infects neurons and can reach the central nervous System (CNS), causing encephalitis. Glycoprotein B (gB), a main component of HSV-1 necessary for entry into host cells, has been involved in neuroinvasion. Its cytoplasmic domain contains highly conserved motifs, similar to motifs involved in intracellular sorting of transmembrane proteins. To determine their role in the intracellular transport and maturation of gB, we deleted or mutated these motifs, and characterized the subsequent modifications in transfected and infected cells. We identified a region that includes the di-acidic motif ERTE, which is essential for the maturation and cell surface expression of gB, and for complementation of a gB-null virus. Two other motifs, YTQV and LL, participate in the retrograde transport of gB from the cell surface to the TGN. Whereas YTQV is essential for internalization of gB from the cell surface, LL most likely participates in a further step of this transport, since mutation of the LL motif does not prevent internalization of gB, but delays its accumulation in the TGN, while enhancing its recycling to the cell surface. Modification of these motifs leads to a decrease in virus infectivity and to changes in the phenotype of infection in cell culture (disruption of the LL motif enhances syncytium formation and the opposite is observed when the YTQV motif is modified). Altogether, these results favor a model in which HSV-1 gets its glycoproteins and final envelope at the TGN, and suggest that retrograde transport of gB, albeit non essential, might play an important role in cell-to-cell spread and infectivity of the virus
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Cuchet, Delphine. "Développement de vecteurs dérivés du virus de l'herpès simplex de type (HSV-1) pour le traitement des tumeurs cérébrales." Lyon 1, 2004. http://www.theses.fr/2004LYO10114.
Анотація:
Les vecteurs dérivés du virus HSV-1 sont des outils intéressants pour l'oncolyse virale ou la thérapie génique par gène suicide des tumeurs cérébrales. Les vecteurs herpétiques recombinants atténués sont utilisés en oncolyse virale. Nous avons construit et développé un vecteur herpétique recombinant qui porte une cassette d'expression transgénique, biscistronique et auto-inductible. Les vecteurs défectifs de type amplicon sont des outils à fort potentiel de transfert d'ADN de grande taille dans de nombreux types cellulaire. Nous avons construit et développé un vecteur amplicon portant le gène codant pour la protéine herpétique ICP0. L'infection de cellules issues de glioblastome humain par ce vecteur induit l'arrêt de leur prolifération et aboutit à leur mort. A contrario, il ne montre aucun effet cytotoxique sur des cellules qui ne prolifèrent pas. Nous avons aussi étudié l'expression d'un autre transgène et établi qu'elle est dépendante du type cellulaire et qu'ICP0 peut l'augmenterHSV-1 derived vectors are promising tools for viral oncolysis or gene therapy by suicide gene of brain tumors. Attenuated recombinant vector are used for viral oncolysis. We have constructed and characterized a recombinant vector which carries a transgenic, biscistronic and auto-inductible expression unit. Defectif amplicon type vectors are tools with good potential for transfer of large size DNA in variety of cell types. We have constructed and developed an amplicon vector which carries the gene encoding the herpetic ICP0 protein. Human glioblastoma cells infected with this vector stop proliferating, resulting in cell death. No toxic effects were observed in non proliferaing infected cells. We have studied the expression of a second transgene carried by amplicon vectors and showed that though its expression is cell type dependent, simultaneous ICP0 expression could significantly increased it
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Mahiet, Charlotte. "Caractérisation du génome de l'herpès simplex virus de type 1." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077069.
Анотація:
HSV-1 est un virus affectant l'humain et qui communément provoque des lésions oraux-faciales récurrentes. Même s'il y a des thérapies efficaces qui bloquent la réplication du virus, il n'est jamais éradiquer de son hôte. Ainsi, Cellectis a pour objectif de développer les méganucleases qui clivent spécifiquement au niveau du génome viral. La question initiale posée durant cette thèse a été de déterminer comment prouver l'efficacité et la sûreté d'une telle thérapie. Pour cela, nous avons proposé d'utiliser la technologie de Peignage Moléculaire pour la visualisation directe et l'analyse de molécules uniques par l'hybridation de sondes spécifiques sur de l'ADN irréversiblement fixé et étiré. Nous avons été confrontés à la complexité du génome HSV-1. En effet, ce génome de 152 kb est organisé en deux fragments, composés de séquences uniques entourés de séquences inversées répétés. Par recombinaison homologue entre les séquences répétées, quatre isomers sont générés. Nous avons testé l'hypothèse que quelque soit les cellules infectées ou la souche utilisée, les quatre isomers étaient répartis de façon équivalente. L'analyse par peignage moléculaire a révélé des distributions statistiquement non équivalentes en fonction de la souche et des cellules analysées. Nous avons également détectés des concatemères de réplication aussi long que 10 génomes équivalents ; De façon intéressante, les isomers étaient systématiquement répartis de façon équivalente dans ces concatemères suggérant que la différence de distribution survient au niveau du processus d'encapsidcation. Enfin, une proportion considérable d'éléments non canoniques a étés observés in vitro et in vivoHSV-1 is a prevalent human pathogen that commonly leads to recurrent facialoral lesions. Although there are efficient drugs to block its replication, HSV-1 is never clear of the host Within this context, the company Cellectis aims to develop a new class of therapeutic agent (the meganucleases) that specifically cleaves into the HSV-1 genome of infected cells, thus allowing its eradication. The first question addressed during this thesis was how to assess the efficacy and safety of such a therapy. We proposed molecular combing for the direct visualization and analysis of single DNA molecules through hybridization of specific probes on uniformly and irreversibly stretched HSV-1 DNA. Following technical improvements, we successfully detected the genomes in viral particles and infected cell DNA extracts, as well as in DNA extracts from mouse, rabbit and human cornea. We were confronted to the complexity of the organization of HSV-1 genomes. Indeed, its 152 kb genome is organized in two covalently linked-segments. Each segment is composed of a unique sequence flanked by inverted repeated sequences. During replication, four HSV-1 genome isomers are produced by homologous recombination between the inverted repeats. We tested the hypothesis that the process of isomerization systematically results in a random distribution no matter which cell or strain is considered. Using HSV-1 probes, we were able to distinguish between the four isomers through molecular combing analysis. Interestingly, both in vitro and in vivo, we found imbalanced distribution functions of the strain, cell or tissue considered. In the DNA extract of infected cells, concatemeric molecules as long as 10 equivalent genomes were detected. Strikingly, among these, the isomers distribution was always equivalent. This suggests that any such imbalance may occur during encapsidation. A considerable proportion of non-canonical assortments were detected in vitro and in vivo
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Savard, Nathalie. "Production de vecteurs rétroviraux à l'aide de vecteurs herpétiques de type amplicon." Lyon 1, 1996. http://www.theses.fr/1996LYO10299.
Анотація:
Le travail rapporte dans ce memoire concerne la mise au point d'un nouveau systeme de production de vecteurs retroviraux a partir de vecteurs herpetiques de type amplicon. Pour ceci, une unite de transcription retrovirale, contenant les genes gag, pol et env de momlv sous le controle de sequences activatrice, promotrice et de polyadenylation herpetiques, a ete construite. Cette unite, deletee des deux ltrs, des sites pbs et ppt ainsi que du signal d'encapsidation, mais conservant les sites accepteur et donneur d'epissage, a ete clonee dans un plasmide vecteur herpetique de type amplicon. Des amplicons vecteurs (ou vecteurs gpe) ont ete produits en utilisant un virus auxiliaire hsv-1 defectif, sur des cellules transcomplementantes. La population virale heterogene, constituee de vecteurs gpe et de virus hsv-1 auxiliaires, a ete utilisee pour infecter des cellules te, contenant un provirus integre porteur du gene lacz, (les cellules te-lac2), et le surnageant de ces cellules infectees a ete preleve et filtre a differents temps post-infection. Ces surnageants contiennent des particules retrovirales lacz ecotropes, capables de transduire une activite -galactosidase dans des cellules murines nih3t3, mais non dans des cellules humaines te671. L'arn viral de ces vecteurs a ete detecte et caracterise par rt-pcr. Le titre de vecteurs retroviraux produits apres infection des cellules te-lac2 par les amplicons gpe augmente avec la quantite d'amplicons utilises. La production de vecteurs retroviraux est fortement inhibee par une surinfection des cellules te-lac2 avec le virus hsv-1 auxiliaire, indiquant que la co-infection par le virus auxiliaire perturbe la production de vecteurs retroviraux induite par les amplicons gpe. Les particules retrovirales semblent donc etre produites seulement dans les cellules te-lac2 qui recoivent uniquement l'amplicon gpe. L'induction de la production de vecteurs retroviraux par les amplicons gpe est neutralisee par des anticorps anti-hsv-1 mais pas par des anticorps anti-momlv. La transduction de l'activite -galactosidase par le surnageant des cellules te-lac2 infectees par les vecteurs gpe est, quant a elle, neutralisee par les anticorps anti-momlv. Ces resultats montrent qu'un vecteur de type amplicon, porteur de l'unite retrovirale gpe, peut permettre la production de maniere transitoire de vecteurs retroviraux. Une des applications possible de ce nouveau systeme de production serait d'utiliser ces amplicons gpe afin de remobiliser un genome vecteur retroviral integre dans une cellule, aussi bien in vivo qu'in vitro
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Bataille, Dominique. "Analyses de la structure des intermédiaires de la réplication de l'ADN du virus Herpes simplex de type 1." Lyon 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LYO10146.
Анотація:
Le theme de cette these est l'etude des intermediaires de la replication du virus herpes simplex de type 1 (hsv-1), dans le but de mieux caracteriser le mecanisme par lequel ce virus synthetise son adn. Lors de l'initiation de ce travail, il etait admis que hsv-1 repliquait son adn selon le modele du cercle roulant, generant de longs concatemeres lineaires. Cependant, ce modele n'avait pas ete demontre directement en raison de la grande taille du genome hsv-1. La technique d'electrophorese en champs pulses m'a permis de separer l'adn des unites genomiques de celui constituant les intermediaires de replication, afin d'analyser ces derniers. Les resultats obtenus confirment que les structures replicatives sont sous forme de concatemeres. Cependant des inversions de composantes l adjacentes sont retrouvees en proportion equimolaire au sein des concatemeres. L'etude de souches hsv-1 mutantes montre que ces inversions se produisent tot dans le cycle viral et sont responsables du phenomene d'isomerisation genomique. De plus, les analyses en pfge revelent que la majeure partie des intermediaires de replication se trouve sous la forme d'une structure complexe, non lineaire, probablement constituee d'adn branche. L'ensemble de ces observations concernant la structure des intermediaires de replication ne peut etre explique par le mecanisme du cercle roulant classique, qui doit donc etre revu, et implique probablement que des phenomenes de recombinaison soient constitutivement lies a la synthese de l'adn viral. Le role dans le cycle viral des topoisomerases de type i et ii cellulaires a aussi ete evalue. Ces enzymes apparaissent necessaires a la production de particules infectieuses, probablement en intervenant sur differentes etapes de la maturation de l'adn. Cependant, aucune d'entre elles ne semble strictement requise ni pour la formation des inversions genomiques, ni pour la resolution des structures complexes.
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Epstein, Alberto-Luis. "Le virus de l'Herpes simplex de type 1 : étude des facteurs viraux et cellulaires en relation avec l'infection abortive in vitro." Lyon 1, 1985. http://www.theses.fr/1985LYO10029.
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Simonin, Denis. "Régulation post-transcriptionnelle de l'expression génique dans les cellules infectées par le virus de l'herpès simplex de type 1." Lyon 1, 1995. http://www.theses.fr/1995LYO1T101.
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Lamigeon, Cyrile. "Amélioration de la capacité antioxydante de différentes cellules du système nerveux central après transfert du gène codant pour la glutamate décarboxylase." Lyon 1, 2002. http://www.theses.fr/2002LYO1T236.
Анотація:
La 4e de couverture indique : "Pour pallier un excès de glutamate qui peut être toxique pour les cellules du système nerveux central, et en particulier pour les neurones, nous avons transféré le gène codant pour l'isoforme de 67 kDa de la glutamate décarboxylase (GAD67) soit dans des astrocytes par transduction avec un rétrovirus, soit dans des neurones primaires ou des cellules PC12 avec un virus herpes défectif. L'expression de GAD67 dans les astrocytes a permis d'améliorer la survie de neurones primaires non différenciés en présence de glutamate et de cellules PC12 cultivées en absence sérum ou traitées à l'eau oxygénée. Dans ces astrocytes, l'activité GAD67 s'accompagne d'une stimulation du métabolisme énergétique et d'une libération de glutathion, parallèlement à une diminution des activités alanine et aspartate aminotransférases (ALAT et ASPAT) au profit des enzymes du " shunt " à GABA. Par ailleurs, ces astrocytes sont capables de bloquer la croissance de cellules tumorales (C6) nécessitant du glutamate pour leur croissance. L'infection de neurones primaires non différenciés et de cellules PC12 par un virus herpes défectif GAD67 a permis également d'améliorer directement la survie de ces cellules respectivement en présence de glutamate ou d'eau oxygénée. Des modifications du métabolisme du glutamate comme observées dans les astrocytes GAD67 ont été mises en évidence. Un effet complémentaire du virus, qui stimule à la fois les activités ALAT et ASPAT ainsi que la voie des pentoses, augmentant de ce fait, la quantité de NADPH nécessaire au recyclage du glutathion, a été démontré. Ainsi, l'expression de GAD67 dans des neurones et des astrocytes s'avère être un moyen d'augmenter la survie cellulaire dans des conditions de stress oxydatif et/ou d'hypométabolisme énergétique. Enfin, une stratégie utilisant la thymidine kinase herpétique sous promoteur inductible par un transactivateur chimérique a permis de détruire des cellules tumorales productrices de glutamate après traitement au ganciclovir. "
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Fournel-Garcia, Sandrine. "Mise au point et analyse de vecteurs herpétiques de type amplicon destinés au transfert de gène dans les cellules eucaryotes." Lyon 1, 1996. http://www.theses.fr/1996LYO10085.
Анотація:
Nous avons construit un plasmide, pa-sf1, permettant de generer des vecteurs de genes amplicons, derives du virus de l'herpes hsv-1. Ce plasmide contient le transgene s:h-lacz (phleor et activite b-galactosidase), l'origine de replication oris du virus hsv-1 ainsi que sa sequence a de clivage et d'encapsidation. La surinfection par un virus hsv-1 auxiliaire de cellules transfectees prealablement par ce plasmide permet d'obtenir des amplicons infectieux, vecteurs du transgene. Leur genome est constitue par un concatemere d'unites plasmidiques pa-sf1 repetees et encapsidees dans un virion fourni par l'auxiliaire. Les vecteurs amplicons produits permettent l'expression du transgene dans des cellules post-mitotiques (neurones, myotubes) ou proliferatives (vero, cos7, myoblastes). L'impossibilite de separer physiquement les amplicons des virus auxiliaires aboutit a la production de populations heterogenes de vecteurs. Par une dilution adequate de cette population infectieuse, une cellule cible peut ne recevoir qu'un vecteur amplicon. Dans ce cas le vecteur apporte un nombre reduit de facteurs pathogenes et la cellule cible reste capable de continuer a proliferer (cos7) a se differencier (myoblaste) tout en presentant l'activite transgenique b-galactosidase. L'expression du transgene s'effectue cependant a condition qu'il soit place sous controle d'un promoteur non regule par des facteurs herpetiques, tels que les promoteurs ie-hcmv ou ie3-hsv-1. A l'oppose, lorsque le transgene est place sous controle d'un promoteur hsv-1 de classe beta (tk) ou de classe gamma (gc), des conditions de co-infection de la cellule cible par l'amplicon et le virus auxiliaire sont alors necessaires a l'expression transgenique. La possibilite de co-infecter une cellule cible par l'amplicon et le virus auxiliaire, malgre la toxicite cellulaire resultante, peut etre utilisee pour obtenir une complementation entre un virus hsv-1 defectif du gene essentiel ul42 et un amplicon porteur de l'allele sauvage, permettant ainsi la propagation du virus defectif dans des cellules non permissives
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Masse, Thierry. "Régulation traductionnelle de l'expression génétique dans des cellules infectées par le virus Herpes simplex de type 1 : définition d'un modèle expérimental." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO10150.
Анотація:
Apres infection de cellules permissives par le virus herpes simplex de type 1, les ribosomes sont modifies de facon sequentielle par le virus qui: utilise une voie metabolique preexistante pour stimuler la phosphorylation de s6, en absence de serum et egalement en absence d'expression du genome viral; induit de nouvelles activites kinasiques specifiques de proteines ribosomiques habituellement non phosphorylees; entraine l'association aux ribosomes de proteines phosphorylees d'origine virale probable. Ces modifications des ribosomes sont correlees avec les changements de la synthese proteique survenant au cours du cycle viral. Le cycle des phosphatidyl inositols est stimule tres tot apres infection, pendant la phase d'adsorption et de penetration. La stimulation viro-induite de la phosphorylation de s6 passerait exclusivement par cette voie d'activation mitogenique, mais independamment de l'activation de la proteine kinase c. Enfin, le blocage de cette voie metabolique par un inhibiteur ou par l'oncogene ras entraine le maintien de la synthese proteique cellulaire apres infection ainsi qu'une inhibition de la multiplication de hsv-1. La stimulation de cette voie mitogenique lors de l'infection par hsv-1 semble donc participer a la preparation de la cellule pour le developpement du cycle de multiplication viral. Le role de l'extremite 5 non traduite d'un arn messager d'hsv-1 a ete analyse dans un systeme permettant l'expression d'arnm constitues de tout ou partie de l'extremite 5 non traduite de l'arnm d'icp-22 et de la partie traduite de l'arnm codant pour la chloramphenicol acetyl transferase bacterienne. Ce modele experimental a permis de demontrer que la sequence 5 non traduite d'un arnm tres precoce d'hsv-1 est impliquee dans la regulation de l'expression de ce gene
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Cloutier, Nathalie. "Rôle des protéines de latence du virus humain herpès-8 sur la synthèse d'interféron de type 1." Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27219/27219.pdf.
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Laurent, Anne-Marie. "Régulation traductionnelle de l'expression génique cellulaire et virale après infection par le virus herpes simplex de type 1." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO1T043.
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Crépin, Sophie. "Comparaison de modèles murins de la maladie herpétique selon la souche virale et le site d'inoculation." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA114805.
Анотація:
Le virus herpès simplex de type 1 a la capacité d'entrer en latence dans le système nerveux après une primo-infection orale. Dans certaines conditions, le virus peut se réactiver depuis son site de latence et reprendre un cycle viral. Les mécanismes responsables de la balance entre latence et réactivation ne sont pas encore complètement compris. Au sein du laboratoire, l'utilisation d'un modèle murin oro-oculaire de l'infection herpétique avec la souche virale SC16 a permis d'observer que la quantité des LAT (Latency-Associated transcripts) et des transcrits ICPO non épissés, codant la protéine impliquée dans l'initiation de la réactivation, s'accumulaient dans le ganglion trigéminé lors de la latence, alors que leur quantité diminuait dans les autres tissus. Cette différence entre les types de neurones est partiellement retrouvée dans le modèle de scarification cornéenne de l'infection herpétique. Mais, les caractéristiques classiques de la latence, à savoir l'extinction complète de l'expression des gènes viraux précoces et tardifs ne sont pas retrouvés dans ce modèle, surtout avec la souche virale KOS. Ces résultats suggèrent que la latence dépend du type de neurones, de la souche virale et du modèle animalHerpes simplex virus type 1 (HSV 1) is able to establish latent infection in neuronal tissues after a oral primary infection. Spontaneously or upon stimuli, HSV1 can reactive and induce ocular disease. The mechanisms involved in balance between latent infection and reactivation are not completely understood. In oro-ocular murin model of HSV1 (strain SC16) infection, the amounts of Latent-Associated Transcripts (LATs) and non-sliced ICPO transcripts, which encodes a protein involved in the reactivation process, have a similar pattern of evolution from the acute to the latent stage of infection, with an accumulation in trigeminal ganglia and a decrease in other latency sites. Such striking difference between types of neurones was partially found in the corneal scarification model of HSV1 infection. But, classical patterns of HSV1 latency, i. E. Complete extinction of early and late viral genes expression was not obtained in this model, especially with the KOS strain of HSV1. These results suggest that the biological patterns of HSV1 latency depend on the type of neurons, the viral strain and the murin model
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Cassar, Olivier. "Epidémiologie et variabilité génétique des virus HTLV-1 et HHV-8 dans l'archipel du Vanuatu : contribution à l'étude des migrations humaines en Mélanésie." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077024.
Анотація:
CE TRAVAIL ABORDE L'EPIDEMIOLOGIE DESCRIPTIVE ET MOLECULAIRE DE L'INFECTION PAR L'HTLV-1 ET L'HHV-8 AU VANUATU EN MELANESIE. A PARTIR DE 4 500 INDIVIDUS NOUS AVONS IDENTIFIE 4l NOUVELLES SOUCHES HTLV-1 APPARTENANT AU SOUS-TYPE C MELANESIEN, DEMONTRE POUR LA PREMIERE FOIS LA PRESENCE DE L'HTLV-1 AU VANUATU ET CONFIRME L'ENDEMIE EN MELANESIE, PUISQUE LE VIRUS ETAIT PRESENT EN PAPOUASIE NOUVELLE-GUINEE (PNG), DANS LES ÎLES SALOMON ET EN AUSTRALIE. LA SEROPREVALENCE GLOBALE HTLV-l (0,62%) AUGMENTE AVEC L'AGE ET LA TRANSMISSION DU VIRUS PERSISTE AU SEIN DE FOYERS FAMILIAUX DANS AU MOINS 3 ILES DE L'ARCHIPEL. L'ANALYSE PHYLOGENETIQUE D'UNE PORTION DU GENE D'ENVELOPPE REVELE QUE LES SOUCHES DU VANUATU SONT PLUS PROCHES DES SOUCHES DES SALOMON QUE DE PNG ou D'AUSTRALIE ET UNE ANALYSE D'HORLOGE MOLECULAIRE SUGGERE QUE LES SOUCHES DU VANUATU ET DES SALOMON ONT EMERGE A PARTIR D'UN ANCETRE COMMUN IL Y A 10 000 ANS. APRES LA DECOUVERTE D'UN VARIANT MOLECULAIRE DU SOUS-TYPE D « ASIE-PACIFIQUE » CHEZ UN POLYNESIEN ORIGINAIRE DE L'ILE DE WALLIS, NOUS AVONS MIS EN EVIDENCE L'ENDEMIE DE L'HHV-8 (45% DANS LA POPULATION AGEE DU VANUATU (>65 ANS) ET LA CIRCULATION DU VIRUS AU SEIN DE 13 FAMILLES. LA VARIABILITE DU GENE Kl, MONTRE QUE LES 30 SEQUENCES SE REPARTISSENT AU SEIN DU SOUS-TYPE D SELON 3 CLADES DISTINCTS ET TEMOIGNENT D'UNE ORIGINE A LA FOIS « POLYNESIENNE », « TAÏWANAISE » OU « AUSTRALIENNE » DES SOUCHES. CETTE REPARTITION REFLETE L'ORIGINE MULTIPLE DES ANCETRES DES HABITANTS DU VANUATU ET DOIT ETRE CONFRONTEE A DES DONNEES CONCERNANT LE FOND GENETIQUE (ADN MITOCHONDRIAL ET CHROMOSOME Y) DES POPULATIONS INFECTEES, AFIN DE MIEUX COMPRENDRE L'ORIGINE DU PEUPLEMENT DE CETTE REGIONIn this study we demonstrate, for the first time, by molecular analysis the presence 0f htlv-1 genome in 41 htlv-1 seropositive vanuatu inhabitants. The sequence analysis clearly showed that these strains belong to the divergent molecular subtype c. These htlv-1 variants should be representative of the strains present in whole vanuatu population. Molecular clock analysis showed that these strains were probably introduced during ancient migration of the original settlers, 10 000 years ago. We also show human herpesvirus 8 with diverse molecular subtype d variants to be highly endemic among the vanuatu populations. Most kl genes were nearly identical to polynesian strains, although a few clustered with australian or taiwanese strains. Taken together, these results suggest diverse origins of the vanuatu populations and raise questions about the ancient human population movments in melanesia. Further molecular studies about mitochondrial dna of the infected populations are now ongoing and well help us to reconstruct the patterns of human dispersal into oceania
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Chapgier, Ariane. "Human STAT1 deficiencies." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077079.
Анотація:
L'activateur de transcription « Signal Transducer and Activator of Transcription 1 » (STAT1) est activé en réponse aux Interférons (IFNs). En réponse à l'IFN-γ, STAT1 forme l'activateur de transcription « Gamma Activating Factor » (GAF). En réponse à l'IFN-α, STAT1 forme avec STAT2 et ISGF3γ l'activateur de transcription: « Interferon Séquence Gène Factor 3 » (ISGF3). Premièrement ce travail de thèse démontre clairement le rôle de GAF activé par l'IFN-γ dans l'immunité anti-mycobactérienne et le rôle d'ISGF3 activé par ITFN-ot dans l'immunité anti-virale. Deuxièmement, ce travail caractérise toutes les mutations humaines de STAT1. Il démontre qu'il n'y a pas d'haploinsuffisance de STAT1 pour l'activation de GAF et ISGF3. Les patients homozygotes pour des mutations de STAT1 présentent des infections mycobactériennes et virales. Ces mutations sont toutes associées à un défaut d'expression de STAT1 entraînant un défaut d'activation de GAF et ISGF3. Les patients hétérozygotes pour des mutations de STAT1 présentent seulement des infections mycobactériennes. Leurs mutations respectives ne sont pas associées à un défaut d'expression de STAT1, mais à des défauts de phosphorylation ou de liaison à l'ADN en réponse aux IFNs. Ces allèles mutés sont associés à un défaut d'activation uniquement de GAF dans les cellules hétérozygotes des patients. Ces allèles mutés sont donc dominants pour l'activation de GAF induit par l'IFN-y et pour l'immunité anti-mycobactérienne d'une part ; et récessifs pour l'activation d'ISGF3 induit par ITFN-a et pour l'immunité antivirale d'autre part au niveau cellulaire et clinique par différents mécanismes. Troisièmement ce travail insiste ainsi sur l'importance dans l'approche gène candidat que l'organisme étudié soit hétérozygote ou homozygote pour la mutation. Il insiste également sur le fait que le phénotype ne dépend pas seulement du gène affecté mais surtout de la mutation dans ce gèneThe Signal Transducer and Activator of Transcription 1 (STAT1) is activated in response to Interferons (IFNs) stimulations. In response to IFN-y, STAT1 homodimerizes to form an activator of transcription: theche gamma activating factor (GAF). In response to IFN-α, STAT1 heterotrimerizes with STAT2 and ISGF3γ to form an activator of transcription: the interferon sequence gene factor 3 (ISGF3). This thesis work first clearly demonstrates the role of the IFN-γ-induced-GAF complexes in anti-mycobacterial immunity and the role of IFN-α-induced-ISGF3 complexes in the anti-viral immunity. Second, this work characterizes all STAT1 human mutations and demonstrates there was no haploinsufficiency of STAT1 for GAF and ISGF3 activations. Patients homozygous for STAT1 mutations present mycobacterial and viral diseases. These mutations are ail associated with defect of STAT1 expression leading to defects in both GAF and ISGF3 activations. Patients heterozygous for STAT1 mutations present only mycobacterial diseases. Their respective mutations are not associated with defects of STAT1 expression, but of its inducible phosphorylation or DNA binding activity upon IFNs stimulations. These mutated alleles are associated with defects in only GAF activation in patient's heterozygous cells. They are dominant for the IFN-y-induced-GAF mediated anti-mycobacterial immunity and recessive for the IFN-α-induced-ISGF3 mediated anti-viral immunity at the cellular and clinical level by different mechanisms. Therefore, this work thirdly highlights the importance in the candidate gene approach of whether the organism studied is heterozygous or homozygous for the mutation. It also highlights the fact that a phenotype depends not only of the affected gene but mainly of the mutation in this gene
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Lussignol, Marion. "Caractérisation d’une nouvelle fonction de la protéine Us11 dans l’échappement à l’autophagie par le virus Herpès Simplex de type 1." Thesis, Paris 11, 2013. http://www.theses.fr/2013PA114807.
Анотація:
L’autophagie est un mécanisme vacuolaire de dégradation de matériel cytoplasmique permettant le maintien de l’homéostasie cellulaire, mais elle peut être également activée par de nombreux stress, comme l’infection virale. Le virus de l’Herpès Simplex de type 1 (HSV 1) est capable de contrecarrer ce mécanisme de défense antivirale. HSV-1 possède une protéine ICP34.5 capable d’inhiber l’autophagie en se liant à Beclin 1, une protéine de la machinerie autophagique. Nous avons mis en évidence une deuxième protéine d’HSV-1 capable d’inhiber l’autophagie, la protéine tardive Us11, qui pourrait avoir un rôle complémentaire à celui d’ICP34.5 dans le contrôle de l’autophagie par le virus.Nous montrons que l’expression ectopique d’Us11 permet de bloquer l’autophagie induite par différents stimuli, et ce de manière similaire à ICP34.5. De plus, dans un contexte viral, l’expression précoce d’Us11 dans des cellules infectées par un virusICP34.5 permet un contrôle de l’autophagie comparable à celui d’un virus sauvage. Nous avons ensuite recherché le mécanisme d’action d’Us11. La protéine Us11 a été décrite comme pouvant interagir avec la kinase dépendante de l’ARN double brin PKR, empêchant ainsi la phosphorylation de son substrat eIF2, un facteur d’initiation de la traduction. Nous avons observé qu’en l’absence de PKR, Us11 n’est plus capable d’inhiber l’autophagie. Nous avons pu confirmer qu’Us11 a besoin de se lier à PKR pour exercer son activité inhibitrice par la construction de formes tronquées d’Us11, permettant de montrer l’importance de son domaine d’interaction avec PKR dans l’inhibition de l’autophagie. L’étude des formes tronquées d’Us11 a soulevé le fait que le domaine N-terminal était également nécessaire. Aucune interaction de ce domaine avec une protéine cellulaire n’a été identifiée à ce jour, mais il pourrait permettre l’interaction d’Us11 avec une autre protéine de la machinerie autophagique. Cependant, nous avons montré qu’Us11 n’interagissait pas avec Beclin 1 et n’avait pas d’effet sur la kinase mTOR, une autre voie importante de l’autophagie. Enfin, nous avons étudié la modulation de la voie PKR/eIF2 lors de la stimulation de l’autophagie par la carence, et nos résultats suggèrent que cette voie joue un rôle sous-estimé dans la réponse à la carence.Le mécanisme d’action de la protéine Us11, qui consiste en un blocage de l’autophagie en inhibant PKR, n’avait jamais été décrit auparavant. Ce travail ouvre de nombreuses perspectives dans l’étude de la voie PKR/eIF2 vis à vis de la régulation de l’autophagie, ainsi que dans la compréhension de l’implication de l’autophagie dans la neurovirulence d’HSV-1Autophagy is an evolutionary conserved vacuolar mechanism allowing to degrade cytoplasmic components and to maintaining cellular homeostasis, but it can also be triggered by a variety of stress-related conditions, including viral infection. The herpes simplex virus 1 (HSV-1) is able to counteract this antiviral mechanism. Notably, HSV-1 encodes a protein, IPC34.5, which inhibits autophagy through its interaction with the autophagy machinery protein Beclin 1. In the present work, we uncovered a second anti-autophagic protein from HSV-1, the late protein Us11, which likely plays a complementary role to ICP34.5 regarding the inhibition of autophagy by the virus. We demonstrated that ectopic expression of Us11 inhibited autophagy triggered by different stimuli, as observed for ICP34.5. Moreover, during viral infection, early expression of Us11 was sufficient to block autophagy in cells infected with a ICP34.5 virus, similarly to the wild-type virus. We then explored the mechanism of action of Us11. Us11 has been described as capable of interacting with the dsRNA-dependent kinase PKR, therefore preventing it to phosphorylate its substrate eIF2, a translation initiation factor. We demonstrated that Us11 was no longer able to inhibit autophagy when expressed in PKR-deficient cells. We confirmed that Us11 binding to PKR was necessary for its function by constructing various truncated forms of Us11 that showed that the PKR-binding domain was crucial. We also unveiled the importance of a domain located within the N-terminal part of Us11. This domain has no cellular molecular partner known, but it can allow Us11 to interact with another protein of the autophagy machinery. However, we further showed that Us11 did not interact with Beclin 1 nor affected the kinase activity of mTOR, another important pathway regulating autophagy. In our work, we also gained insights into regulatory mechanisms of starvation-induced autophagy.The inhibition of autophagy through the specific blockade of PKR by Us11 had never been previously described. This work thus paves the way for studying the involvement of PKR/eIF2 pathway in the regulation of autophagy and for exploring the role of autophagy in HSV-1 neurovirulence
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Aouacheria, Abdel. "Transformation cellulaire par l'oncogène v-Src et caractérisation des homologues de la protéine de survie Nr-13." Lyon 1, 2002. http://www.theses.fr/2002LYO1T110.
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Pourchet, Aldo Decio. "Développement de virus HSV-1 (virus de l’herpes simplex de type 1) oncolytiques ciblés pour traiter les carcinomes hépatocellulaires." Thesis, Lyon 1, 2010. http://www.theses.fr/2010LYO10155/document.
Анотація:
Le premier objectif a été de sélectionner des promoteurs de gènes cellulaires actifs spécifiquement dans les HCC à l’aide d’une recherche bibliographique puis en utilisant la base de donnée UniGene. Leur activité a été vérifiée par RT-qPCR et CHIP dans des lignées modèles HCC et dans des hépatocytes. Ces promoteurs ont été clonés en amont de la luciférase dans la région intergénique 20 du génome HSV-1 afin d’étudier leur force d’activité, 2 types de cinétiques et leur activité différentielle en fonction du type cellulaire et dans le contexte d’une infection virale. Le deuxième objectif a été de construire des virus oncolytiques ciblés pour l’expression de la protéine Us3, une protéine virale impliquée dans le contrôle de la réponse apoptotique induite par HSV-1. L’expression de la protéine Us3 est placée sous contrôle d’un promoteur cellulaire spécifique d’HCC. L’hypothèse est qu’en l’absence d’activité du promoteur cellulaire dans les cellules non HCC, la protéine Us3 ne sera pas synthétisée et, par conséquent, l’apoptose qui ne sera pas réprimée, inhibera le cycle de réplication et par conséquent, la production virale dans les cellules saines. Dans les cellules HCC, le promoteur actif permettra la réplication virale aboutissant à la destruction de lamasse tumorale. Un virus HSV-1 Us3- a été construit en utilisant la technique de recombinaison en plasmide BAC (Bacterial artificial chromosome), puis 2 virus oncolytiques en réintroduisant le gène Us3 sous contrôle du promoteur ANGPTL3 ou du promoteur HRE (hypoxia responsive element). Leur comportement oncolytique a été étudié en réalisant des courbes de croissance sur lignées cellulaires d’HCC et cellules hepatocyte-likeOur long-term purpose is to develop transcriptionally targeted oncolytic vectors, derived from herpes simplex virus type 1 (HSV-1), designed to eradicate hepatocellular carcinomas (HCC). We have identified several HCC-specific promoters, as well as other cancer-specific promoters, that maintain their specificity when expressed from the virus genome. More precisely, we have demonstrated that these promoters are able to drive reporter gene (luciferase) expression from the virus genome in HCC-derived cells, both in cultured cells and in nude mice, but not in fresh human hepatocytes or in the WRL38 hepatocyte-like cells. HSV-1 infection induces, but then inhibits, a cellular antiviral apoptotic response, and the early virus protein US3 is a key actor in inhibiting apoptosis. We have hypothesized that inhibition of US3 expression in hepatocytes should led to early apoptotic death of these cells, therefore precluding virus multiplication and spread. In contrast, expression of US3 in cancer cells is expected to block apoptosis, leading to the achievement of the virus life cycle, cell lysis, and virus spread within the tumours. We report in this communication the construction and properties of two different potentially oncolytic HSV-1 vectors. One of them expresses US3 protein under the control of the HCC-specific promoter ANGPTL3, while the second promoter contains 9 repeats of the hypoxia responsive elements of vascular-endothelial growth factor (VEGF) (9xHRE promoter). Growth curves of these viruses were performed on different HCC cell lines to show their oncolytic properties
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Maillet, Séverine. "Étude de l'expression des gènes IE110 et LAT (Latency Associated Transcript) du virus herpes simplex de type 1 (HSV1) lors de la phase de latence dans le modèle murin de primo-infection herpétique orale." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114829.
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Masy, Eric. "Rôle de la protéine LMP-1 du virus d'Epstein-Barr (EBV) dans la prolifération de cellules présentant une latence virale de type II : caractérisation d'une lignée monocytaire transformée par le virus." Lille 2, 2002. http://www.theses.fr/2002LIL2P006.
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Berry, Noémie. "Le stress mitochondrial induit par le Virus de l’Herpès Simplex de type 1 entraîne la surexpression de la cytidine désaminase APOBEC3A." Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS185.
Анотація:
L’ADN cytosolique constitue un signal de danger pour la cellule. L’ADN mitochondrial (ADNmt) en tant que DAMPs stimule les senseurs à ADN et induit la production de cytokines pro-inflammatoires (interférons). La cytidine désaminase humaine APOBEC3A (A3A), sensible à une réponse IFN, induit la désamination des cytidines en uraciles dans l’ADN simple brin entraînant la dégradation de l’ADN muté et l’extinction du signal de danger. Dans une première partie, nous avons montré le rôle de la voie de signalisation ARN polymérase III / RIG-I dans la détection de l’ADNmt et la surexpression d’A3A en réponse à la production d’IFN I. Nous avons confirmé que A3A induit le catabolisme de l’ADNmt cytosolique en entraînant cependant des mutations de type GC vers AT et des cassures double-brin dans le génome nucléaire. La seconde partie a mis en évidence dans un modèle cellulaire humain que le Virus de l’Herpès Simplex de type 1 (VHS-1) entraîne un relargage d’ADNmt. Une fragmentation du réseau mitochondrial semble être à l’origine de ce relargage qui s’accompagne d’une production d’IFN I et d’une surexpression de A3A. Si nous avons confirmé le rôle de la voie ARN polymérase III / RIG-I, il semble que la voie de signalisation cGAS-STING soit aussi impliquée. Ces travaux ont donc montré dans un modèle humain que le stress mitochondrial induit par le VHS-1 contribue à la surexpression de A3AThe presence of DNA in the cytosol represents a danger signal. Mitochondrial DNA (mtDNA) has been recognized as a DAMP (damage-associated molecular-pattern molecule), able to induce the production of pro-inflammatory cytokines (interferons). The human cytidine deaminase APOBEC3A (A3A), upregulated by IFN, catalyzes the deamination of cytidine to uridine in single stranded DNA substrates leading to the catabolism of the mutated DNA sequence and the suppression of the signal. First, we demonstrated the role of the RNA polymerase III / RIG-I signaling in the upregulation of A3A expression in response to IFN production. We also confirmed the mtDNA catabolism induced by A3A. However, its overexpression leads to GC vers AT mutations and double-strand DNA breaks in the nuclear genome. The second part of my thesis highlighted the release of mtDNA within the cytosol upon Herpes Simplex Virus Type 1 (HSV-1) infection in a human cellular model, probably triggered by a fragmentation of the mitochondrial network. We demonstrated that this mtDNA release is associated with a strong production of IFN and the overexpression of A3A. While we confirmed the role of the RNA polymerase III / RIG-I signaling, the cGAS-STING pathway should be also involved. Finally, in this thesis, we have shown in a human model that the mitochondrial stress induced by HSV-1 contributes to the overexpression of A3A
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Rousseau, Antoine. "Cinétique des effecteurs immunologiques impliqués dans la protection contre le virus Herpès simplex type 1 (HSV1) après primo-infection par une autre souche non neurovirulente : vers un modèle vaccinal." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS339.
Анотація:
Chez l’homme, la primo-infection par le vírus Herpès simplex de type 1 (HSV-1) a lieu au niveau de la muqueuse oro-pharyngée. Après une phase de réplication, les virions pénètrent les terminaisons axonales et migrent vers le ganglion trijumeau ipsilatéral (TG), puis vers le TG controlatéral. Le virus entre alors dans un état de latence dans les 2 TG. Les réactivations d’HSV-1 dans ces neurones sont responsables des kératites herpétiques (KH), unilatérales et survenant toujours du même côté chez un patient donné.En utilisant un modèle murin oro-oculaire, qui reproduit les aspects essentiels de la maladie chez l’homme, nous avons précédemment démontré que l’inoculation virale latéralisée d’un côté de la bouche entraine une réplication virale dans la lèvre, suivie d’une KH ipsilatérale à l’inoculation 6 jours plus tard. De manière concomitante, le virus se propage aux 2 TG, mais les réactivations ne surviennent que du côté ipsilatéral à l’inoculation. Nous avons également observé qu’après une primo-infection dans une lèvre avec une souche d’HSV-1 non-neurovirulente, les souris étaient protégées contre les signes de la maladie et contre la réactivation d’une souche sauvage pleinement virulente inoculée secondairement dans l’autre lèvre (souche ré-infectante). Afin de comprendre les mécanismes immunitaires en jeu dans cet état de protection, nous avons combiné une analyse en cytométrie en flux multiparamétrique à des tests immunologiques, pour quantifier et définir l’infiltrat immunitaire hématopoïétique et les chémokines inflammatoires au site d’inoculation et dans les TG. Nous avons démontré qu’après une inoculation unique avec la souche sauvage virulente, un infiltrat immun riche en cellules pro-inflammatoires, survenaient de manière retardée dans les lèvres inoculées, et persistaient dans les TG. A l’opposé, l’infiltrat immunitaire était plus précoce dans les tissus réinfectés (après une primo-infection par la souche non neurovirulente), plus riche en cellules de l’immunité adaptative, et associé à des concentrations moindres de chémokines inflammatoires. En outre, cet infiltrat s’estompait plus rapidement, avec une disparition concomitante des chémokines inflammatoires. Ces données permettent de mieux comprendre la nature et la cinétique de la réponse immunitaire anti-HSV-1, et pourront être utiles pour le développement futur de stratégies vaccinales anti-HSV-1In humans, Herpes simplex virus type 1 (HSV-1), primary infection occurs in the oral mucocutaneous tissues. Virions replicated here penetrate sensitive neuronal axons, migrate to both trigeminal ganglion (TG) where it established a lifelong latency. Reactivations of HSV-1 in the TG neurons induce clinical recurrences in the connected peripheral tissues. This process is involved in herpes simplex keratitis (HSK), a condition that, strikingly, occurs almost exclusively in the same eye for a given patient. Based on an experimental oro-ocular (OO) model of HSV-1 infection, that recapitulates most of these human clinical features, we previously demonstrated that a virus inoculation on one side of the mouth, leads to viral replication in the lip, followed by HSK. Virus concomitantly disseminates to both TG, but reactivation only occurs in the TG ipsilateral to the inoculation site. We also observed that after a primary inoculation with a non-neurovirulent strain of HSV-1 in one lip, mice are protected against both acute phase disease and reactivation after a superinfection with a fully virulent wild-type strain of HSV-1 in the contralateral lip.In order to understand the underlying mechanisms involved in this state of protection, we combined high resolution flow cytometry and bead-based immunoassays, to quantify hematopoietic subsets and inflammatory chemokines in the site of inoculation and in the TG. We demonstrated that after a single inoculation with the wild-type strain, a delayed immune infiltrate, boasting more proinflammatory subsets, occurred in the lip and persisted in the TG. In contrast, the immune infiltrate occurred earlier in the superinfected lip and ipsilateral TG, with less inflammatory chemokines but more adaptive immune subsets. Moreover, cellular infiltrate resolved faster, correlating with nullification of inflammatory chemokines locally. These data show that immune response kinetics influence the development of natural immunity to HSV-1, and can be harnessed to protect against disease and reactivations
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Hippocrate, Aurélie. "Modulation de l'autophagie lors de la réactivation de l'EBV par le TGF β1". Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077182.
Анотація:
Le virus d'Epstein-Barr (EBV) est un virus ubiquitaire appartenant à la sousfamille des gamma-herpesvirinae et est le premier virus humain à avoir été associé à des tumeurs. L'EBV est associé à des lymphoproliférations malignes et des carcinomes. Des travaux ont montré que la réactivation du virus semble essentielle au développement tumoral mais les mécanismes impliqués sont mal connus. Il a été démontré in vitro que le Transforming Growth Factor bêta 1 (TGF-P1 pouvait déclencher la réactivation de TEBV. Il est essentiel de caractériser les effets de la réactivation de l'EBV sur la cellule hôte afin de comprendre son implication dans la lymphomagénèse. Nous avons observé lors de la réactivation de l'EBV par le TGF-pl une activation de signaux de survie inhibiteurs de l'apoptose, tels que la voie PI3K/Akt (régulateur négatif de l'autophagie). De plus, nous avons constaté une inhibition de la protéine kinase dépendante des ARN double brins (PKR), qui est une protéine virale clé de l'immunité induite par les interférons. La PKR est également un régulateur positif de l'autophagie et de l'apoptose. L'autophagie est un processus qui est associé au contrôle de l'instabilité génétique et à la progression tumorale. Nous avons observé lors de la réactivation virale une inhibition de l'autophagie et de l'apoptose. Ces résultats suggèrent que le virus semble moduler l'autophagie et l'apoptose et contrer la réponse immune lors de sa réactivation par le TGF-PL Ces modulations pourraient contribuer au développement et/ou à la progression des lymphomes malinsThe Epstein-Barr virus (EBV) is a persistent gamma herpesvirus, which is associated with malignancies. The requirement of lytic gene expression for outgrowth of lymphoproliferations in a SCID mouse model, suggests the importance of reactivation for EBV pathogenesis. Transforming Growth Factor beta 1 (TGF-pl) induces EBV reactivation. During TGF-pl-mediated EBV reactivation, an autophagy inhibitor, PI3K/Akt, was activated, and an autophagy inducer, the interferon-inducible protein kinase activated by double-stranded RNA (PKR), was inactivated. This prompted us to investigate the effect of TGF-pl-mediated viral reactivation on the autophagy process. Autophagy markers were decreased after treatment by TGF-pl of EBV-infected Burkitt's lymphoma (BL) cell lines and not in EBV negative BL cells showing an EBV-dependent inhibition of autophagy during TGF-pl mediated EBV reactivation. The autophagic pathway is a cellular defence process involving the bulk degradation of cellular contents by autophagosomes/lysosomes during starvation or viral infection and autophagy is postulated to play a role in antiviral innate immunity. Inhibition of autophagy might prevent cellular antiviral defence. Elucidating the molecular mechanisms which lead to EBV reactivation (deregulation of autophagy, apoptosis and signals involved) will be important to understand its association with the development and / or progression of malignant lymphomas
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Nagy, Héléna Juliana. "Traitement des tumeurs hépatiques et ovariennes expérimentales par transfert de gène codant pour la thymidine kinase du virus herpès simplex de type 1." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05CD03.
Анотація:
Les progrès réalisés au cours de la dernière décennie en biologie moléculaire permettant aujourd'hui, grâce à la thérapie génique, d'envisager une nouvelle approche dans le traitement des cancers. Dans cette étude nous nous proposons d'etudier l'effet de la thérapie génique par le transfert rétroviral du gène suicide codant pour la thymidine kinase du virus herpès simplex de type 1 (TK-HSV1) dans deux modèles expérimentaux de cancer, l'hépatocarcinome (HC) et l'adénocarcinome de l'ovaire. Le principe général de la thérapie génique est d'introduire un gène étranger dans une cellule cible à l'aide de vecteurs, notamment rétroviraux. Nous avons utilisé dans notre étude le transfert rétroviral du gène de la TK-HSV1. Il agit indirectement en transformant un analogue nucléosidique comme le ganciclovir (GCV) en forme monophosphate, qui est transformée ensuite en forme triphosphate toxique pour la cellule tumorale. La destruction de tumeurs contenant le gène de la TK-HSV1, après traitement par le GCV, peut déclencher un effet amplificateur (" effet bystander ") par transfert de métabolites toxiques et par une stimulation de l'immunité antitumorale. Dans cette étude, nous avons développé deux modèles expérimentaux syngéniques et orthotopiques, un d'HC (MCA-RH8994) et un autre d'adénocarcinome de l'ovaire chez le rat (DMBA-OC-1). Avec ces deux modèles, nous avons étudié le potentiel de l'utilisation du gène de la TK-HSV1 dans le traitement de ces tumeurs, ainsi que l'effet immunitaire à distance observé lors du traitement. Nous avons aussi développé des protocoles plus proches de la clinique comme la transduction in vivo des tumeurs ovariennes et le traitement adjuvant post-opératoires du cancer de l'ovaire pour la prévention de récidives et des métastases. L'étude in vitro de différentes lignées cancéreuses (cancers coliques, hépatocarcinomes de rat et adénocarcinomes de l'ovaire de rat et humainses) a montré que toutes étaient efficacement transduites par le vecteur rétroviral, avec des variations selon la lignée et le surnageant utilisé. Les lignées tumorales TK+ produites ont été de 300 à 7000 fois plus sensibles au GCV que leur lignée mère respective. Avec les deux modèles de tumeurs exprimant le gène de la TK, l'étude a permis d'observer une réduction significative du volume tumoral dans le groupe traité par le GCV (à la dose de 75mg/kg ;2x par jour) par rapport au groupe témoin (HC : p<0. 02 ; cancer de l'ovaire : p<0. 001), avec une toxicité minimale. L'étude de la survie prolongée des rats, avec le modèle d'HC, a montré une augmentation significative de la survie des rats traités par GCV (p<0. 001). Néanmoins, une repousse tumorale après arrêt du GCV, à partir de tumeurs résiduelles, a été observée dans 60% des cas, soulignant l'importance probable d'un traitement répété. Une regression quasi complète des tumeurs TK+ a été aussi observée dans le modèle bifocal ovarien (TK- dans un ovaire/TK+ dans l'autre) traité par GCV (p<0. 0001). Simultanément, nous avons aussi observé une réduction tumorale significative des tumeurs TK- localisées sur l'ovaire controlatéral (p<0. 014), avec augmentation de la nécrose (p<0. 01), des polynucléaires (p<0. 004) et des lymphocytes (p<0. 03) infiltrant la tumeur. L'étude immunohistochimiques de ces tumeurs a montré une augmentation des lymphocytes T (LT) CD4+ (p<0. 01), LT CD8+ (p<0. 006), " natural killer " (NK) (p<0. 006) et macrophages (NS). Nous avons aussi observé, dans les tumeurs de l'ovaire, une transduction in vivo du gène marqueur LacZ faible après injection de cellules productrices décongelées, indiquant l'importance de la récupération post-décongélation sur l'efficacité de la transduction in vivo. Finalement, nous avons développé un modèle de survie post-opératoire des tumeurs ovariennes plus proche de la clinique. L'étude préliminaire des traitements post-chirurgicaux, basés sur l'injection des cellules productrices de rétrovirus TK-HSV1 (M11) ou de lignées tumorales TK+ décongelées, n'a pas montré cependant un effet significatif sur la survie. Dans cette étude nous avons montré la faisabilité du traitement des hépatocarcinomes et des cancers de l'ovaire expérimentaux par l'approche TK-HSV1/GCV. Nous avons aussi montré que l'effet bystander, amplifiant l'effet antitumoral du système TK/GCV, peut exister à distance dans la cavité péritonéale, avec la participation de l'immunité T dépendante et de l'immunité naturelle. Dans une perspective clinique, cette observation d'un effet antitumoral significatif locale et à distance est très encourageant
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Thieulent, Côme. "Criblage in vitro de molécules antivirales contre l'herpèsvirus équin-1 par impédancemétrie et évaluation clinique de l'effet du valganciclovir Screening and evaluation of antiviral compounds against Equid alpha-herpesviruses using an impedance-based cellular assay Identification of antiviral compounds against equid herpesvirus-1 using real-time cell assay screening: Efficacy of decitabine and valganciclovir alone or in combination Screening of potential antiviral molecules against equid herpesvirus-1 using cellular impedance measurement: dataset of 2,891 compounds New EHV-1 variant identified | Veterinary Recordvir réduit les signes cliniques, l'excrétion virale et la virémie chez des poneys infectés expérimentalement par la nouvelle souche C2254 d'herpèsvirus équin 1 Oral administration of valganciclovir reduces clinical signs, virus sheedind and cell-associated viremia in ponies experimentally infected with the new variant C2254 of equid herpesvirus-1." Thesis, Normandie, 2020. http://www.theses.fr/2020NORMC421.
Анотація:
Neuf herpèsvirus sont connus pour infecter les équidés. Parmi eux, l’herpèsvirus équin 1 (HVE-1) induit les formes de la maladie les plus graves. En effet, ce virus provoque des troubles respiratoires, des avortements, des morts néonatales et des troubles nerveux qui mènent souvent à l’euthanasie de l’animal. La prophylaxie, reposant sur les bonnes pratiques sanitaires et la vaccination, demeure le meilleur moyen de lutte contre l’ensemble des herpèsvirus équins. Des vaccins qui réduisent efficacement les troubles respiratoires et la dissémination de l’HVE-1 ont été développés. Cependant, ces derniers ne préviennent pas les avortements et n’ont aucun effet démontré contre la forme nerveuse. De plus, la couverture vaccinale demeure insuffisante en France. Les traitements aux antiviraux constituent donc une approche complémentaire dans la lutte contre l’HVE-1. Cependant, trop peu d’études ont évalué l’effet de molécules contre ce virus, limitant les perspectives d’utilisation. Pour répondre à cette problématique, nous avons développé un protocole de criblage à moyen/haut débit à l’aide de la technologie RTCA xCELLigence®, basée sur la mesure d’impédance cellulaire. Suite au criblage de 2891 molécules, 21 candidats ont été identifiés pour leur efficacité contre l’HVE-1. Parmi ceux-ci, l’aphidicoline, la décitabine, le ganciclovir, l’idoxuridine, le pritelivir et le valganciclovir ont présenté les meilleurs effets. L’activité de ces molécules a été confirmée sur différents modèles cellulaires en présence de différentes souches d’HVE-1. Cette étude a conduit à l’identification et à l’étude du mode d’action d’une nouvelle molécule efficace contre l’HVE-1, la décitabine. Cet analogue de la déoxycitidine a également montré un effet synergique in vitro lorsqu’elle est associée au valganciclovir. Lors de la seconde phase de ce travail, nous avons testé l’efficacité d’un traitement au valganciclovir lors d’un challenge expérimental avec infection par nébulisation d’une souche d’HVE-1 (C2254) récemment isolée au cours de l’épizootie de 2018. Cette étude a permis de démontrer qu’une dose de 6,5 mg/kg de valganciclovir, administrée 2 fois par jour, permettait de maintenir un bon niveau de protection avant la mise en place de la réponse immunitaire humorale. En effet, ce traitement permet de réduire les signes cliniques, l’excrétion virale et la virémie cellulaire induits par l’HVE-1. Ces travaux réalisés in vivo démontrent l’efficacité du valganciclovir contre l’HVE-1 et le criblage réalisé in vitro ouvre de nouvelles perspectives de traitement, en particulier avec des associations de moléculesNine herpesviruses are known to infect the equine population. Among them, the equid herpesvirus 1 (EHV-1) induces the most severe forms of diseases. Indeed, this virus causes respiratory symptoms, abortions, neonatal foal deaths and nervous diseases, often leading to their euthanasia. Prophylaxis, relying on good sanitary practices and vaccination remains the best way to avoid epizooties of herpesviruses. Vaccines reducing efficiently respiratory disorders and EHV-1 dissemination are currently available. However, they do not prevent abortions and have no proven effect against nervous symptoms. In addition, the vaccine coverage is insufficient in France. Antiviral therapy is therefore an interesting complementary approach in the fight against EHV-1. However, there is a lack of studies evaluating the antiviral effect of compounds against EHV-1, limiting the prospects of use. To resolve this issue, we have developed a medium/high throughput screening protocol using the RTCA xCELLigence® technology based on cell impedance measurements. Following the screening of 2891 compounds, 21 candidates were identified for their efficacy against EHV-1. Among them, aphidicolin, decitabine, ganciclovir, idoxuridine, pritelivir and valganciclovir showed the best efficacy. The activity of these compounds was confirmed on different cell lines in the presence of different EHV-1 strains. This study led to the identification and the understanding of the mode of action of decitabine. This deoxycitidine analogue, also showed a synergistic effect when combined with valganciclovir. In the second part of this work, we evaluated the effect of valganciclovir treatment during an experimental infection by nebulisation with a new EHV-1 strain (C2254) recently isolated during the epizootic of 2018. This study demonstrated that a dose of 6.5 mg/kg body weight of valganciclovir, administrated orally twice a day, allowed to maintain a good protection prior the establishment of the humoral immune response. Indeed, this treatment allows to reduce significantly clinical signs, viral excretion and cell-associated viremia induced by EHV-1 on ponies. This work carried out in vivo demonstrated the efficiency of valganciclovir treatment against EHV-1, while the in vitro screening opens up new perspectives of treatment, in particular with compounds association
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Zhang, Shen-Ying. "Herpes simplex encephalitis in children : deficiences in Toll-Like receptor 3 signalling pathway." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05T016.
Анотація:
Herpes simplex virus (HSV)-l encephalitis (HSE) is the most common sporadic viral encephalitis in western countries, the pathogenesis of HSE remains elusive. We hypothesized that HSE may result, in at least some children, from an unidentified form of primary immunodeficiency, associated with a Mendelian susceptibility to HSV-1, with impaired IFN-a-, -ft- and -A-mediated immunity. Our identification of autosomal recessive UNC-93B deficiency in two otherwise healthy HSE patients and autosomal dominant TLR3 deficiency in other two otherwise healthy HSE patients provided the first two genetic aetiologies of isolated HSE. The production of IFN-P and -A, in UNC-93B-deficient and TLR3-heterozygous fibroblasts was impaired upon poly(LC) stimulation and viral infections including HSV-1. Higher virus titres and enhanced cell mortality upon HSV-1 and VSV infection were observed in both UNC93B-deficient and TLR3-heterozygous fibroblasts, rescued with IFN-a, -0 and -A, treatment, indicating a plausible pathogenesis of HSE. However the patients'' blood dendritic cells (DCs) and keratinocytes produced IFNs in response to poly(LC), and most other viruses induced IFNs in a TLR3-independent manner, providing the first clue for the lack oil other severe viral infections in these patients. Human UNC-93B-TLR3-IFNs pathway is thus suggested to be critical for anti-HSV-1 immunity in the CNS, at least in some circumstances, but redundant in host defense to most other virus infections.
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Gross, Sylvain. "Etude de la déstabilisation des structures protéique et chromatinienne des centromères par la protéine ICP0 du virus Herpes Simplex de Type 1." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00838586.
Анотація:
Le virus Herpes Simplex de type 1 (HSV-1) possède un mode d'infection particulier dit bimodal. Il peut soit se répliquer de manière active lors d'une phase dite lytique soit migrer dans les neurones et rester en latence. Il peut réactiver pour rétablir une infection lytique. Une protéine virale majeure dans la réactivation de HSV-1 est ICP0. C'est une protéine nucléaire à activité E3 ubiquitine ligase, qui possède la particularité d'induire la dégradation par le protéasome de plusieurs protéines centromériques constitutives, ce qui provoque une déstabilisation du centromère interphasique. Mon équipe a découvert une réponse cellulaire à l'instabilité centromérique, induite par la protéine ICP0, et nommée iCDR (pour interphase Centromere Damage Response.). L'objectif général de ma thèse est de déterminer les modifications structurales que subissent les centromères endommagés par ICP0 à l'origine de l'iCDR et probablement de la réactivation. J'ai pu démontrer qu'ICP0 affectait toute la structure protéique étroitement associée aux centromères durant l'interphase. Suite à ces résultats, j'ai pu démontrer, par des analyses de digestion de chromatine à la nucléase microccocale (MNAse), que l'occupation nucléosomique de la chromatine centromérique suite à l'activité d'ICP0 était affectée de façon significative. Une étude in vivo effectuée à partir de tissus nerveux provenant de souris infectées de manière latente, a permis de démontrer une co-localisation entre les génomes HSV-1 latents et les centromères. Cette co-localisation est associée à une répression transcriptionnelle du virus. Les résultats de ma thèse montrent donc que les effets d'ICP0 sur la déstabilisation des centromères sont en relation avec un rôle de ces centromères durant la latence. Ceci suggère fortement une implication de la déstabilisation des centromères dans le processus de réactivation contrôlé par ICP0.
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Albaret, Marie Alexandra. "Rôle potentiel du virus herpes simplex de type I dans la maladie d'Alzheimer." Thesis, Lyon 1, 2009. http://www.theses.fr/2009LYO10117.
Анотація:
L'étiologie de la forme sporadique de la maladie d'Alzheimer (AD) reste largement inconnue. Toutefois, une adéquation entre des facteurs environnementaux et génétiques est fortement probable. C'est ainsi que de nombreux arguments suggèrent que le virus herpes simplex de type 1 (HSV1) en infectant et en se répliquant dans le système nerveux central, puisse être un co-facteur impliqué dans le déclenchement et le développement de l'AD. Pour éprouver cette hypothèse, nous avons développé un modèle cellulaire constitué de neurones de rat infectés par HSV1 pour analyser les modifications viro-induites de leur expression génique. Il a été mis en évidence dans les neurones infectés : i) une augmentation de la production du peptide amyloïde Aβ42 et de Tau phosphorylée, ainsi que leur agrégation dans un agrésome intracellulaire ; ii) des variations du niveau de transcription de nombreux gènes très similaires à celles observées chez des patients AD. Par ailleurs, l'étude des mécanismes moléculaires de l'apoptose viro-induite dans ce modèle original a permis de mettre en évidence une corrélation entre l'activation des caspases et la production d'Aβ42 et une corrélation entre le phénomène d'apoptose avortée (abortosis) et la formation d'agrésome. De l'ensemble des ces résultats, il apparait que ce modèle cellulaire est représentatif de certains aspects des stades précoces de l'AD et conforte l'hypothèse qu'HSV1 serait un co-facteur dans la maladie d'AlzheimerThe origin of the sporadic form of the Alzheimer's disease (AD) remains still widely unknown. However, an adequacy between environmental and genetic factors is highly probable. Numerous arguments suggest that the virus herpes simplex of type 1 (HSV1) by infecting and replicating in the central nervous system, could be a co-factor involved in the AD process. To evaluate this hypothesis, we set up a model made of rat neurons infected by HSV1 in order to analyse the virally-induced modifications of their gene expression. Using this model we have shown: i) an over-production of the amyloid peptide Aß42 and of phosphorylated form of Tau accompanied by their concentration within an intracellular aggresome; ii) variations of the transcription levels of numerous genes equivalent to that observed in AD patients. Furthermore, the study of the molecular mechanisms underlying the virally-induced apoptosis allowed to point out a correlation between caspase activation and Aß42 production as well as a correlation between abortosis and aggresome formation. All together these results demonstrate that this cellular model represents, at least in part, some aspects of the early stages of AD and bring evidences that HSV1 could be a co-factor in the AD process
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Thevenin, Thomas. "Pouvoir virucide de désinfectants à l'encontre de coxsackievirus B4 et d'autres virus en suspension ou en surface." Thesis, Lille 2, 2011. http://www.theses.fr/2011LIL2S052.
Анотація:
La résistance au séchage des virus dépend de plusieurs facteurs : le type de support, la température, l'humidité et la composition de l'enveloppe ou de la capside. Un virus déposé sur une surface peut conserver son pouvoir infectieux pendant plusieurs jours voire plusieurs mois si les conditions sont réunies. Inactiver des virus présents sur différentes surfaces est un enjeu majeur dans la lutte contre la propagation des maladies nosocomiales. Cette problématique est importante et elle nécessite de réaliser des travaux pour connaître davantage la sensibilité des virus aux substances et produits utilisés dans ce but. [...] Dans le cadre de cette thèse des méthodes ont été développées pour comparer l'activité virucide de désinfectants sur des virus en suspension ou sur une surface (acier inoxydable ou support non tissé-fonctionnalisé). Deux approches ont été mises en oeuvre : la première afin de tester l'activité virucide de supports préalablement fonctionnalisés, la seconde afin de comparer l'activité virucide de produits sous forme liquide ou diffusés par voie aérienne à l'encontre de virus en suspension ou séchés sur un support solide. [...]The resistance of viruses to drying relies on several factors : the type of surface, temperature, humidity and the compositon of the viral envelope or capsid. A virus adsorbed on a surface can remain infectious for several days or months if the conditions are met. [...] In this thesis, methods were developed to compare the virucidal activity of disinfectants towards viruses in suspension and on surfaces (stainless steel or non-woven fuctionalized textiles). Two approaches were implemented : the first to test the virudical activity of functionalized surfaces
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Firquet, Swan. "Inactivation virale par méthodes physiques." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S048/document.
Анотація:
Les profils de viabilité sur surface, de virus non enveloppés : murine minute virus (MVM), coxsackievirus B4 (CVB4), virus simien 40 (SV40), et de virus enveloppés : virus de grippe A (H1N1), et virus herpès simplex de type 1 (HSV-1), ainsi que la résistance à la chaleur et aux ultraviolets C (UVc) de ces virus ont été étudiés.Pour déterminer la viabilité de MVM, CVB4, H1N1 et HSV-1 sur surface, 50 µL de suspension virale ont été déposées sur des couvercles de boites de Pétri et séchés sous un flux d’air avant d’être récupérés et titrés sur des lignées cellulaires appropriées. Les virus enveloppés ont persisté moins de 5 jours alors que CVB4 et MVM restent infectieux pendant plusieurs semaines. Cependant, les cycles répétés de séchage et de remise en suspension ont eu un effet plus virucide sur CVB4 que sur H1N1 et HSV-1. Aucun effet des répétitions de ces cycles n’a été observé sur le titre infectieux du MVM. Quand il est exposé au séchage, les concentrations initiales d’albumine de sérum bovin, de sérum de veau fœtal et de chlorure de sodium, ont un impact sur la survie de CVB4. Dans un milieu riche en protéines, CVB4 a été plus facilement inactivé par le séchage, alors qu’en présence de chlorure de sodium le pouvoir virucide du séchage a été réduit. Ces résultats montrent que la résistance des virus vis-à-vis du séchage, n’est pas due à une hétérogénéité de populations virales, mais peut être influencée par la composition du milieu et la concentration des composants.Nous avons évalué la résistance thermique de MVM, CVB4, H1N1 et HSV-1 contenus dans des gouttelettes. Quatre microlitres de suspension virale ont été déposés sur une surface chauffée et exposés à des températures comprises entre 70 et 130°c pendant 0 à 90min, selon le virus, avant d’être titrés. Clairement, MVM a été plus résistant que H1N1, lui-même plus résistant que HSV-1 et CVB4. Pour la première fois, l’inactivation de particules virales contenues dans des gouttelettes exposées à des températures supérieures à 100°C a été étudiée. Il apparaît que le chauffage peut provoquer un effet plus rapidement virucide que décrit précédemment.La résistance aux UVc (254nm) de MVM, CVB4, H1N1, HSV-1 et SV40 contenus dans des gouttelettes a été évaluée. Les virus à ADN double brins (HSV-1 et SV40) restaient infectieux après une exposition à 60mJ/cm² d’UVc, tandis que les virus à ARN (H1N1 et CVB4) et un virus à ADN simple brin (MVM) ont été totalement inactivés par une exposition inférieure ou égale à 35mJ/cm² d’UVc. De plus l’effet des UVc combiné à la chaleur sur la viabilité de MVM a été déterminé. Le titre infectieux de MVM, contenu dans une gouttelette a été totalement inactivé après une exposition à 27mJ/cm² d’UVc. Le chauffage (20s à 100°C) a provoqué une réduction modérée du titre viral de MVM (-1.8 log10TCID50), alors que le chauffage suivi par une exposition à 17mJ/cm² d’UVc entraine une inactivation complète.En conclusion, nos études montrent que les virus peuvent persister pendant des jours voire des semaines sur une surface hydrophobe. Le profil de résistance des virus vis-à-vis du séchage, n’est pas dû à une hétérogénéité de populations virales, comme l’ont montré les résultats obtenus avec CVB4. De plus, dans la mesure où la composition du milieu joue un rôle dans la viabilité des virus exposés au séchage, la persistance des virus devrait être étudiée dans des milieux naturels plutôt que dans des milieux définis. L’impact de temps d’exposition courts à la chaleur sur les virus contenus dans de petits volumes de suspension a été déterminé. La résistance thermique de H1N1 jusqu’à 100°C, supérieure à celle d’HSV-1, un autre virus enveloppé, et à celle de CVB4 un virus non-enveloppé a été observée. Une inactivation virale efficace peut être obtenue en combinant une exposition aux UVc et à la chaleur comme le montrent les résultats obtenus avec MVMThe pattern of viability of non-enveloped viruses, minute virus of mice (MVM), coxsackievirus B4 (CVB4), and simian virus 40 (SV40) and enveloped-viruses, influenza A virus (H1N1), and herpes simplex virus type 1 (HSV-1) onto surfaces and their resistance to heating and to ultraviolet C (UVc) exposure have been investigated. To determine the viability of MVM, CVB4, H1N1 and HSV1 on surface, fifty microliters of viral suspension were applied onto petri dish lids and dried under air flow of biosafety cabinet. The recovered viral preparations were titered on appropriate cell cultures. Enveloped viruses persisted for less than 5 days while CVB4 and MVM persisted for weeks. However, repetitive cycles of drying and resuspension had more virucidal effect on CVB4 than on H1N1 and HSV-1. No effect of these repetitive cycles on infectious titer of MVM was recorded. When exposed to drying, initial concentrations of bovine serum albumin, foetal calf and sodium chloride (NaCl) had an impact on the viability of CVB4. In a protein rich medium, CVB4 was more likely inactivated by drying whereas in presence of NaCl, the impact of drying was reduced. Thus, it appears that the resistance of viruses toward drying is not due to a heterogeneity of viral populations, but it can be influenced by media composition and components concentrations.Heat inactivation of viruses was reported, however, the thermal resistance of viruses in droplets has not been studied. We evaluated the pattern of heat resistance of MVM, CVB4, H1N1 and HSV1 contained in droplets. Four microliters droplets containing viruses were applied onto warmed surface obtained by using a self-made heating device. Viral suspensions were exposed to temperatures ranging from 70 to 130°C for 0 to 90 min depending on the virus, and then the recovered viral preparations were titered. Clearly, MVM was more resistant than H1N1 that was more resistant than HSV-1 and CVB4. For the first time, the inactivation of viral particles contained in drops exposed to temperatures higher than 100°C has been investigated. It appears that heating can have an unexpected faster virucidal effect than previously described. The resistance to ultraviolet C (UVc) (254nm) of MVM, CVB4, H1N1, HSV-1 and SV40 contained in droplets has been evaluated. Double-stranded DNA viruses (HSV-1 and SV40) were still infectious after exposure to 60 mJ/cm² UVc, while RNA viruses H1N1, CVB4 and single-stranded DNA virus MVM were fully inactivated when they were exposed to a dose equal to or lower than 35 mJ/cm² UVc. Moreover the effect of UVc (254 nm) combined with heating onto the viability of MVM was determined. The infectious level of MVM suspension droplets applied onto petri dish lids was fully inactivated when exposed to 27 mJ/cm² UVc. Heating (100°C for 20s) provoked a moderate reduction of infectious level (-1.8 log10TCID50) of MVM, whereas heating followed by UVc exposure (17 mJ/cm²) resulted in a full inactivation.In conclusion, our studies show that viruses can persist for days or even weeks on dry hydrophobic surfaces. The pattern of resistance of viruses toward drying is not due to a heterogeneity of viral population as shown by results obtained with CVB4. In so far as media composition play a role in the viability of viruses exposed to drying, the persistence of viruses in natural media (clinical or environmental), instead of defined media, should be investigated. The impact of short time exposure to heat onto the infectivity of viruses contained in a small volume of suspension has been determined. The thermal resistance of H1N1 up to 100°C, higher than the one of HSV1 another enveloped virus, and CVB4 a non-enveloped virus has been observed. An efficient viral inactivation can be obtained by combining UVc exposure and heating as shown by results obtained with MVM