Дисертації з теми "GTP Homeostasis"
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Zolle, Lapuente Olga C. "Cyclic GMP and calcium homeostasis in endothelial cells." Thesis, University of Liverpool, 1998. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.367654.
Повний текст джерелаAbrahamsson, Niclas. "On the Impact of Bariatric Surgery on Glucose Homeostasis." Doctoral thesis, Uppsala universitet, Institutionen för medicinska vetenskaper, 2016. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:uu:diva-276381.
Повний текст джерелаLusche, Daniel Felix. "Cyclic GMP in the development of the social amoeba Dictyostelium discoideum regulation of calcium homeostasis by cGMP. /." [S.l. : s.n.], 2004. http://www.bsz-bw.de/cgi-bin/xvms.cgi?SWB11482073.
Повний текст джерелаSchmitt, Charlotte. "Implication du transporteur intestinal GLUT2 dans l'absorption des sucres et la fonction entéroendocrine." Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066465.
Повний текст джерелаThe constantly renewing intestinal epithelium handles various essential functions including nutrient absorption and persistence of a barrier between our internal and external environments. Several transporters mediate sugar absorption in the proximal intestine. Among them, GLUT2, a very efficient glucose, fructose and galactose transporter and receptor, is located at the membranes of enterocytes and enteroendocrine cells. The enteroendocrine L-cells produce GLP-1, a strong activator of glucose-induced insulin secretion. This thesis aimed to further decipher the role of intestinal GLUT2 in sugar absorption and enteroendocrine cell function. To address this question, mice lacking GLUT2 specifically in intestinal epithelial cells have been generated and studied. Intestinal GLUT2 invalidation alters intestinal glucose absorption and delays glucose biodistribution to peripheral tissues. This spatial and temporal sugar absorption delay provokes intestinal dysbiosis, favoring gut microbiota having a protective impact on gut homeostasis. Surprisingly, intestinal GLUT2 deletion leads to a strong loss in enteroendocrine L cell density, with no impact on GLP-1 plasma levels. This study highlights critical roles for GLUT2 in sugar absorption and enteroendocrine cell function management. The use of specific GLUT2 inhibitors could be considered to limit body weight gain and metabolic disorders induced by sugar rich diets
Berbel, Luciane Celeste Lazari. "Influência da variação genotípica Glu354Gln do receptor para o GIP sobre a homeostase glicêmica e a sensibilidade insulínica em indivíduos sadios." Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2014. http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000189459.
Повний текст джерелаThe potential variability in hormonal physiological response after feeding, related to the elevation of postprandial GIP between individuals, arouse interest to evaluate the influence of polymorphisms in the gene for glucose-dependent insulinotropic polypeptide receptor (GIPR) in glucose homeostasis and in pancreatic beta cell function. Altogether 25 adults (12 women, 13 men) with BMI <30 and without metabolic syndrome related diseases were studied. After diet containing 58g of carbohydrates and 28g of lipids, blood samples at baseline (T0) and every 30 minutes until the T150 were collected for measurement of insulin and glucose. The polymorphic GIPR variant Glu354Gln, rs1800437 (SNP-GIPR) was studied in peripheral blood sample through PCR-RFLP. Glucose homeostasis in fasting and postprandial was assessed by calculating HOMA-IR, HOMA-B, area under the curve (AUC) of insulin and glucose, AUCi/AUCg ratio, insulinogenic index (IGI) at each time relative to baseline and IGI/HOMA-IR ratio. In the postprandial curve, 72% of subjects showed glucose peaks and 64% insulin until the T60, with mean of 107 mg/dl and 42.1 IU/mL, respectively. The SNP-GIPR study revealed presence of C allele (C+) in 7 individuals, with 72% of the genotypes GG, 24% GC and 4%CC. There was a significant difference between C + or the group without C allele (C-) in HOMA-B (100 +/- 26 vs. 160 +/- 89 % respectively; p = 0.04).There was no significant difference in the following parameters: AUCg, AUCi, HOMA-IR, IGI, AUCi/AUCg and IGI/HOMA-IR. However, the IGI was higher in the C+ allele group at all time-points (T30, 189%; T60, 147%; T90, 1066%; T120, 29% and T150, 93%), while a similar trend occurred for the IGI/HOMA-R ratio, except in T150. Furthermore, family history of diabetes was positive in 42.9% of C+ subjects, compared with 22.2% from C- group (p = 0.29). In conclusion, we have studied the fasting and postprandial variation of glucose and insulin, including insulin secretions 1st and 2nd phases of healthy subjects; our sample presented genotype distribution similar to the reported population in the literature. C+ and C- euglycemic subjects had similar parameters of beta cell function and insulin sensitivity. In other way, we found variation in HOMA-B according to the genotype, suggesting a reduction in beta cell function related to GIPR polymorphism, without change in insulin sensitivity. The reduction in HOMA-B in healthy individuals, regardless of family history of diabetes, suggests further study of this SNP-GIPR as a possible early marker for the risk of pancreatic failure associated with type 2 diabetes.
Ayari, Sami. "Implication des récepteurs nucléaires HNF-4α et HNF-4γ dans la fonction entéroendocrine et la susceptibilité à l'obésité et au diabète de type II". Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066380.
Повний текст джерелаObesity and type 2 diabetes (T2D) are metabolic pathologies associated with glucose and energy homeostasis perturbations. Enterohormones are important players in the regulation of the mechanisms disturbed during these pathologies. Among these enterohormones, GLP-1, secreted by enteroendocrine L cells in response to a meal, potentiates insulin secretion by pancreatic β cells and inhibits food intake. The aim of my thesis was to characterize the role of the nuclear receptor HNF-4γ in the energy homeostasis and the endocrine function of the intestine.By using a total and constitutive HNF-4γ knock-out mouse model, our team has highlighted that the loss of hnf-4γ induces an improved glucose tolerance. This effect is due to an increased GLP-1 cell number and GLP-1 plasma levels in response to glucose. All together these data demonstrate for the first time a role of HNF-4γ in glucose homeostasis through a modulation of the enteroendocrine lineage specific for GLP-1 and suggest that its absence could protect mice from the T2D establishment.The loss of HNF-4γ protects mice from body weight gain and glucose intolerance normally induced by six weeks of a high-fat/high-fructose diet demonstrating its involvement in obesity and T2D. HNF-4γ -/- mice are protected from obesity by a greater energy loss in faeces mainly due to lipid malabsorption. These results demonstrate that HNF-4γ is necessary for the intestinal fatty acids uptake.In conclusion, this study highlights the role of the intestinal nuclear receptor HNF-4γ in enteroendocrine function and susceptibility to obesity and T2D
Domingues, Ana Sofia Jesus. "A reporter system to study the role of tRNA modifying enzymes in human proteostasis." Master's thesis, Universidade de Aveiro, 2016. http://hdl.handle.net/10773/21083.
Повний текст джерелаA síntese proteica é um processo essencial para que todos os organismos mantenham a homeostasia celular. Os tRNAs são elementos cruciais na síntese proteica, uma vez que codificam a informação genética presente no mRNA. A linha celular HeLa, utilizada neste estudo, foi primeiramente isolada de uma mulher com cancro do colo do útero e desde então tem sido bastante usada na investigação, sendo muito importante no estudo das bases moleculares de muitas doenças. De modo a monitorizar a agregação proteica nesta linha celular, um sistema repórter foi desenvolvido utilizando uma fusão entre HspB1 (Hsp27) e a GFP. HspB1 é um chaperone molecular com capacidade de recrutar outros chaperones e restabelecer a conformação ideal das proteínas em situações de stress. A GFP é uma proteína fluorescente que marca certas condições biológicas de interesse. Para perceber o impacto dos erros da tradução na agregação de proteínas e no surgimento das doenças, o principal objetivo deste estudo foi desenvolver uma linha celular estável (HeLa) expressando um sistema repórter HspB1-GFP, de modo a monitorizar os erros no enovelamento das proteínas em resposta ao stress proteotóxico. Ao longo deste estudo o sistema repórter expressando HspB1-GFP foi desenvolvido com sucesso, permitindo assim a sua utilização para identificar situações fisiológicas e patológicas em que a agregação de proteínas ocorre em células de mamífero.
Protein synthesis is essential for all organisms to maintain cell homeostasis. tRNAs are crucial elements in protein synthesis as they decode the genetic information organized in the mRNA codons. A HeLa cell line, used in this study, was first isolated from a woman with cervical cancer and since then was highly used in biological studies, being extremely important in the study of the molecular basis of several diseases. In order to monitor protein aggregation in this cell line, a reporter system was developed using an HspB1 (Hsp27) and a GFP fusion. HspB1 is a small heat shock protein that, in stress situations, recruits other proteins in order to restore the conformation of the proteins. GFP is a biosensor that reports several cellular conditions of interest. To understand the impact of translation errors on protein aggregation and on the disease arising, the main goal of this study was to develop a stable cell line (HeLa) expressing a reporter system HspB1-GFP to monitor the protein misfolding in response to proteotoxic stress. During this study, the reporter system expressing HspB1-GFP was developed successfully, allowing the identification of physiological and pathological situations where protein aggregation occurs in mammalian cells.
Gupta, Kuldeepkumar Ramnaresh. "(p)ppGpp and c-di-GMP : A Tale of Two Second Messengers in Mycobacterium smegmatis." Thesis, 2015. http://etd.iisc.ac.in/handle/2005/4117.
Повний текст джерелаMaida, Adriano. "Effects of Enteroendocrine Hormones on Beta-cell Function and Glucose Homeostasis." Thesis, 2011. http://hdl.handle.net/1807/29800.
Повний текст джерелаChiang, Yu-ting. "The Role of p21-activated Protein Kinase 1 in Metabolic Homeostasis." Thesis, 2014. http://hdl.handle.net/1807/44107.
Повний текст джерелаMarques, Filipa Carvalhal. "Mechanisms of aging: neuronal orchestration of stress resistance and protein homeostasis in the nematode Caenorhabditis elegans." Doctoral thesis, 2016. http://hdl.handle.net/10316/29393.
Повний текст джерелаO envelhecimento é um processo complexo que ocorre em todos os organismos, da levedura ao Homem. Apesar de um século de pesquisa e discussão científica, os factores subjacentes à progressão do envelhecimento permanecem por clarificar. Mas os ângulos sob os quais este processo é visto sofreram grandes mudanças com o tempo. As primeiras teorias sugeriam que o envelhecimento decorre da acumulação estocástica de danos nas macromoléculas, levando ao mal funcionamento dos organismos e, por fim, à morte dos mesmos. Esta área de investigação foi radicalmente transformada nas últimas décadas por uma série de estudos pioneiros em diferentes modelos animais que mostraram claramente que o envelhecimento pode ser alterado através da manipulação de várias vias metabólicas e genéticas. Estas descobertas sugeriram que o nível de protecção de um organismo contra danos estocásticos pode ser regulado e, consequentemente, também o período de vida durante o qual o mesmo permanece saudável. No entanto, à medida que o conhecimento acerca destes mecanismos foi maturando, tornou-se evidente que a duração de vida, a resistência a stress e a homeostase proteica, aspectos que são regulados pelas vias que regulam o envelhecimento, podem ser desacopladas sem se influenciarem mutuamente. Mais recentemente, o processo de envelhecimento revelou possuir um nível adicional de complexidade quando se mostrou que pode ser coordenado por diferentes tecidos ao nível do organismo. Neste trabalho, o nosso interesse focou-se nos princípios subjacentes à orquestração do envelhecimento ao nível do organismo, bem como na dissociação entre duração de vida, resistência a stress e homeostase proteica. De modo a abordar estes temas, usámos o nemátode Caenorhabditis elegans (C. elegans), modelo animal que oferece inúmeras vantagens no estudo do envelhecimento. Começámos por investigar os mecanismos de comunicação entre tecidos que regulam a heat shock response (HSR) a nível do organismo no modelo C. elegans, procurando, mais concretamente, esclarecer que receptores neuronais estão envolvidos neste mecanismo de sinalização e em que neurónios desempenham a sua função. Para responder a estas questões, empregámos nemátodes geneticamente modificados que apresentam hipersensibilidade a RNA de interferência (RNAi) no tecido nervoso e identificámos um presumível receptor acoplado a proteínas G (GPCR) como sendo um componente-chave deste mecanismo. Este gene, a que atribuímos o nome gtr-1, é expresso em neurónios quimiosensoriais e desempenha um papel fundamental na indução de genes que codificam proteínas de heat shock nos tecidos somáticos após exposição a temperaturas elevadas, apesar de não ser necessário à percepção de calor. Surpreendentemente, o knockdown do gtr-1 através de RNAi tem um efeito protector em nemátodes que expressam nos músculos Aβ3-42 (um péptido com tendência agregativa associado à doença de Alzheimer), mas não influencia a duração de vida, a resistência a outros stresses ou funções associadas ao desenvolvimento. Na segunda parte deste trabalho pretendemos fazer uma caracterização mais detalhada dos elementos downstream à via de sinalização da insulina/IGF-1 (IIS) que estão directamente envolvidos na regulação da toxicidade proteica em C. elegans. Com este objectivo, procurámos genes previamente citados na literatura como reguladores da homeostase proteica e identificámos o tor-2 como sendo regulado ao nível da transcrição pela via IIS. Nesta tese mostramos que a expressão do tor-2 é induzida após a supressão desta via pelos factores de transcrição DAF-16 e SKN-1. Este gene revelou-se importante na resistência a temperaturas elevadas mas não na regulação do tempo de vida do animal ou na resistência a outros tipos de stress tais como exposição a bactérias patogénicas ou a radiação UV. Curiosamente, o tor-2 parece ser importante no combate à toxicidade proteica em neurónios, onde se mostrou anteriormente que este gene é expresso, ao passo que o seu knockdown protege os nemátodes que expressam proteínas agregativas tóxicas nos músculos. Este estudo oferece novas ideias: (1) que os neurónios quimiosensoriais desempenham um papel importante nos mecanismos que regulam a HSR no nemátode; (2) que o tempo de vida e a resistência a heat shock são separáveis; (3) consolida o conceito emergente de que a habilidade para responder o calor existe em detrimento da manutenção da proteostase; e (4) sugere que a homeostase proteica pode ser diferencialmente regulada de tecido para tecido por um único gene.
Aging is a complex process that occurs in organisms ranging from yeast to humans. The factors underlying the progression of aging still elude us, despite a century of scientific inquiry and discussion. Nevertheless, the angles from which aging was perceived have greatly changed over time. Early theories suggested that aging results from the accumulation of stochastic damage to macromolecules, leading to organismal malfunction and ultimately death. The field was however revolutionized over the last decades by a series of pioneering studies carried out in model organisms that showed that aging can actually be altered by the modification of several metabolic and genetic pathways. These findings suggested that the level of protection against stochastic damage can be regulated and, hence, the length of time an organism remains healthy. However, as the knowledge on these mechanisms matured, it became evident that lifespan, stress resistance, and protein homeostasis (proteostasis), aspects that are regulated by the aging-modulating pathways, can be uncoupled without influencing one another. The aging process revealed another level of complexity when it was shown to be coordinated by different tissues in an organismal-fashion. In this work, we were interested in the principles underlying the orchestration of aging at the organismal level, as well as in the uncoupling between lifespan, stress resistance, and proteostasis. To address these questions, we employed the nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans), which offers key advantages in the study of aging. We started by focusing on the inter-tissue communication mechanisms that regulate the heat shock response (HSR) at the organismal level in C. elegans and attempted to clarify which neuronal receptors are required for this signaling mechanism and in which neurons they function. To answer these questions, we employed worms that were engineered to exhibit RNA interference (RNAi) hypersensitivity in neurons and identified a putative G protein-coupled receptor (GPCR) as a novel key component of this mechanism. This gene, which we termed GPCR thermal receptor 1 (gtr-1), is expressed in chemosensory neurons and has no role in heat sensing but is critically required for the induction of genes that encode heat shock proteins in non-neural tissues upon exposure to heat. Surprisingly, the knockdown of gtr-1 by RNAi protected worms expressing the Alzheimer's-disease-linked aggregative peptide Aβ3-42 in their body-wall muscles from protein toxicity (proteotoxicity) but had no effect on lifespan, resistance to other stresses, or developmental functions. In the second part, we aimed at better characterizing the insulin/IGF-1 signaling (IIS)-downstream components involved in the direct regulation of protein toxicity (proteotoxicity) in the C. elegans model. For this, we searched for genes that are known regulators of proteostasis and identified tor-2 as a transcriptional target of the IIS pathway. Here we show that tor-2 is upregulated upon suppression of the IIS by both DAF-16 and SKN-1transcription factors. This gene is important for the resistance to heat shock but has no role in the determination of lifespan or in the resistance to other acute stresses such as exposure to pathogenic bacteria or to UV radiation. Interestingly, tor-2 seems to be important to counteract proteotoxicity in neurons, previously shown to be its main site of expression, whereas its knockdown protects worms that express toxic, aggregative-proteins in their body-wall muscles. In this work we provide several novel insights: (1) we show that chemosensory neurons play important roles in the nematode's HSR-regulating mechanism; (2) that lifespan and heat stress resistance are separable; (3) we strengthen the emerging notion that the ability to respond to heat comes at the expense of proteostasis; and (4) suggest that proteostasis can be differentially regulated in a tissue-specific manner by a sole gene.
FCT - SFRH/BD/70502/2010
Correia, Ana Catarina Silva. "Expression of obesity-related genes in testes and sperm of rats subjected to caloric restriction and to GLP-1 administration." Master's thesis, 2021. http://hdl.handle.net/10773/32843.
Повний текст джерелаA restrição calórica (CR), pelo seu balanço energético negativo e o GLP-1, por ser uma incretina, constituem dois protocolos de perda de peso, que permanecem pouco investigados, principalmente no que toca ao seu impacto na função reprodutiva masculina, cujo correto funcionamento depende de uma homeostase energética equilibrada. Essa homeostase energética tem sido relacionada a genes ligados ao controlo do metabolismo energético, nomeadamente os genes relacionados à obesidade (ORGs), como gene de obesidade e de massa de gordura associada (FTO), recetor de melanocortina-4 (MC4R), glucosamina-6-fosfato desaminase 2 (GNPDA2) e proteína transmembranar 18 (TMEM18). Assim, este projeto teve como objetivo utilizar um modelo animal para estudar o potencial da CR e da administração de GLP-1 na regulação da expressão desses ORGs nos testículos e esperma de ratos Wistar e verificar se há impacto na qualidade espermática. Primeiramente, observamos que a CR promoveu menor ganho de peso e diminuição da resistência à insulina. Por outro lado, a administração de GLP-1, além do esperado aumento nos níveis de GLP-1 ativo, não promoveu qualquer alteração no metabolismo da glucose, no perfil hormonal e consequentemente no peso corporal. Para além disso, a CR promoveu um aumento nos defeitos da cabeça dos espermatozoides, enquanto a administração de GLP-1 melhorou a morfologia espermática. Em relação aos ORGs, observamos a presença de transcritos de FTO, MC4R e TMEM18 em testículos de ratos e identificamos esses transcritos, pela primeira vez, em esperma de ratos. Além disso, identificamos, pela primeira vez, a presença de transcritos GNPDA2 em testículos e esperma de ratos. As proteínas correspondentes também foram identificadas em testículos de ratos, sendo que todas apresentavam localizações celulares distintas. A CR e a administração de GLP-1 promoveram um aumento na expressão dos ORGs nos testículos, porém no esperma a expressão não foi alterada. Também identificamos a presença de transcritos de NFE2L2 (codifica para um importante fator de transcrição antioxidante) em testículos e esperma de ratos e verificamos que sua abundância é aumentada nos testículos, pela CR e administração de GLP-1. Em seguida, exploramos, individualmente, o papel dos ORGs nos níveis testicular e espermático, nomeadamente na resposta à CR e à administração de GLP-1 e obtivemos algumas pistas relacionadas com o envolvimento potencial de cada um dos ORGs na função reprodutiva masculina. No geral, pudemos perceber que as duas intervenções promoveram uma associação geral de todos os ORGs com uma melhoria no estado oxidativo dos testículos e esperma.
Mestrado em Bioquímica
STELITANO, VALENTINA. "Enzymes or signals? Functional characterization of Pseudomonas aeruginosa HD-GYP phosphodiesterases involved in the homeostasis of the second messenger c-di-GMP." Doctoral thesis, 2013. http://hdl.handle.net/11573/918076.
Повний текст джерелаHsiao, Po-Yuan, and 蕭柏元. "Analysis of protein-protein interaction of the phosphate homeostatsis-related proteins by using tripartite split-GFP complementation assay in planta." Thesis, 2018. http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/7629xd.
Повний текст джерела國立清華大學
生物資訊與結構生物研究所
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ABSTRACT Tripartite split-GFP complementation assay is a new protein-protein interaction technique improved from bimolecular fluorescence complementation (BiFC). Tripartite split GFP system is composed of a larger fragment, GFP1-9 (residues 1–193), and two shorter β-strands : GFP10 (residues 194–212) and GFP11 (residues 213–233). There are some disadvantages of BiFC because BiFC is based on bulky fragments that may increase the difficulty of protein folding and interfere with protein function. To test whether tripartite split-GFP is a useful tool in planta, we first chose two proteins involved in the phosphate starvation reponse: the phosphate starvation response 1 (PHR1) and the SPX domain-containing protein 1 (SPX1) proteins. The PHR1 and SPX1 sandwitch proteins (GFP10-PHR1-GFP11 and GFP10-SPX1-GFP11) were used for transient expression in tobacco leaves and localized in the nucleus. Next, we confirmed the previous results that PHR1 interacts with SPX1 using tripartite split-GFP system. This assay showed that PHR1 and SPX1 can form homo-dimer/oligomers itself. We used the Arabidopsis nitrogen limitation adaptation (NLA/BAH1) to verify the specificity of the interaction between PHR1 and SPX1. Our results showed that NLA interacts with both PHR1 and SPX1. In addition, we chose the other PHR1 family protein PHR1-like 3 (PHL3) to test the interaction of PHL3 with PHR1 and SPX1 respectively. The signal strength between PHR1, SPX1 and PHL3 are different. From the strongest to the weakest is PHR1 and PHL3, PHR1 dimer, SPX1 and PHR1, and then the signal of SPX1 and PHL3 was the strongest. Furthermore, we generated and obtained the Arabidopsis transgenic liens overexpessing GFP10-PHR1, SPX1-GFP11 and GFP1–9. Confonal analysis of these lines showed few signals in the root hair of seedlings, indicating that the tripartite spli-GFP system used in transgenic plants of Arabidopsis needs to be improved.
Lusche, Daniel Felix [Verfasser]. "Cyclic GMP in the development of the social amoeba Dictyostelium discoideum : regulation of calcium homeostasis by cGMP = Die Rolle von cGMP für die Entwicklung der sozialen Amöbe Dictyostelium discoideum / Daniel Felix Lusche." 2004. http://d-nb.info/972598480/34.
Повний текст джерелаAraujo, Renata Sandres de Souza. "Controlling the effect of injection in the hypothalamus of diet induced obese mice." Master's thesis, 2020. http://hdl.handle.net/10400.1/17181.
Повний текст джерелаA epidemia do excesso de peso e obesidade representa um dos mais importantes problemas de saúde pública do século XXI. A obesidade induzida por dieta causa um processo inflamatório central no cérebro, mais especificamente no núcleo arqueado do hipotálamo. O núcleo arqueado é uma região especial do cérebro responsável pela regulação da homeostasia energética corporal, possuindo uma importância crucial na manutenção do equilíbrio entre consumo e gasto energético. Na obesidade há disfunção hipotalâmica e esta disfunção pode alterar substancialmente a homeostasia do colesterol no cérebro. O cérebro é um dos órgãos mais ricos em colesterol e a sua homeostasia do colesterol é muito importante para manter a fisiologia cerebral saudável e também influencia diretamente a homeostasia do resto do organismo. Além disso, o facto de os distúrbios metabólicos estarem correlacionados com diferentes doenças neurodegenerativas, como: doença de alzheimer, doença de Parkinson e doença de Huntington. O colesterol no cérebro é convertido principalmente em 24S-hidroxicolesterol pela enzima Cyp46a1. Alterações no metabolismo do oxisterol foram correlacionadas com a obesidade. Estudos do nosso laboratório identificaram o CYP46A1 como um alvo terapêutico relevante, não apenas para a doença Machado de Joseph, mas também para outras doenças neurodegenerativas. Um desses estudos, revelou que o silenciamento da expressão do gene Cyp46a1 (utilizando-se AAV5-shCyp46A1), no hipotálamo (núcleo arqueado), de morganhos C57BL/6J alimentados com dieta com baixo teor de gordura (Chow – low fat control diet) (dieta controlo) e com uma dieta com alto teor de gordura (HFD – high fat diet), tem impacto profundo na desregulação de todo o processo fisiológico da homeostasia corporal destes ratinhos. Tem ainda grande impacto no perfil fisiológico dos órgãos metabólicos e alterações na morfologia estrutural de cada um deles, como: WAT, BAT, fígado, pâncreas, entre outros. Desta forma, os resultados deste estudo sugerem que o silenciamento do Cyp46a1 nos animais Chow AAV5-shCyp46a1 e HFD AAV-shCyp46a1 resulta em um fenótipo de obesidade, alterações nos níveis de oxisteróis cerebrais e diabetes mellitus tipo 2; além de modificações significativas no comportamento. Os resultados sugerem o papel importante do gene Cyp46a1 na manutenção do metabolismo do colesterol no cérebro e no controlo da homeostasia energética corporal. Diante destas observações, estudos adicionais tornaram-se necessários para comprovar o efeito do silenciamento do gene Cyp46a1 no núcleo arqueado, descartando o efeito do procedimento cirúrgico. Desta forma, neste estudo, o nosso principal objetivo foi controlar o efeito do silenciamento de Cyp46a1 no hipotálamo (núcleo arqueado). Para tal, por meio de cirurgia estereotáxica foi realizada a injeção de um gene controlo (GFP) mediado por vetores AAV no núcleo arqueado; tanto em morganhos alimentados com dieta Chow, como em morganhos alimentados com dieta HFD. A hipótese do projeto é que a proteína GFP não interfere na fisiologia do hipotálamo e consequentemente no metabolismo de todo o corpo, independentemente da dieta. Este estudo foi conduzido durante um período de 12 semanas; no início do estudo os morganhos (C57BL/6J) foram divididos aleatoriamente em dois grupos: Chow (controlo) e HFD. A partir deste momento, cada grupo foi alimentado com a dieta específica por 12 semanas. Na quarta semana do estudo, os dois grupos foram submetidos a injeção estereotáxica bilateral no núcleo arqueado. Os resultados demonstraram que a proteína GFP não interferiu na fisiologia do hipotálamo (núcleo arqueado) e que as injeções estereotáxicas (AAVGFP) não causaram inflamação comprometedora que tenha alterado a fisiologia e o fenótipo alcançado através exclusivamente da dieta administrada (Chow e HFD) aos grupos dos morganhos utilizados. O fenótipo obeso foi previsivelmente alcançado pela indução de dieta gordurosa apenas nos morganhos HFD, assim como, a alteração da morfologia de vários tecidos metabólicos (WAT, BAT, pâncreas e fígado) e houve uma grande acumulação de lípidos nos órgãos. Os morganhos controlo (dieta Chow) não desenvolveram obesidade, não apresentaram alterações na morfologia dos tecidos metabólicos (WAT, BAT, pâncreas e fígado) e também não apresentaram modificações no acúmulo lipídico dos órgãos. Como este estudo é um controlo importante para o projeto de silenciamento do gene Cyp46a1 realizado anteriormente, os resultados aqui apresentados confirmam que a cirurgia estereotáxica e a expressão de GFP não alteram a homeostasia do hipotálamo e consequentemente não há alteração no metabolismo corporal dos morganhos.
van, Rysewyk SP. "Pain is mechanism." Thesis, 2013. https://eprints.utas.edu.au/16767/2/whole_excl-images-vanrysewyk-thesis-2013.pdf.
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