Дисертації з теми "Extraction en phase solide – Purification"
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Bartuma, Ninorta. "Optimizing purification of oligonucleotides with reversed phase trityl-on solid phase extraction." Thesis, Örebro universitet, Institutionen för naturvetenskap och teknik, 2019. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:oru:diva-76844.
Анотація:
Oligonucleotides are synthetic strings of DNA or RNA used mostly for biochemical analysis and diagnostics. For them to be useful in these fields, a purity over 90% is most often required. However, when synthesizing these sequences, many “failures” (shorter sequences) are made in the step-wise process. The synthesized oligonucleotides need to therefore be purified. This is most often done with gel electrophoresis or liquid chromatography. These methods are, on the other hand, very time-consuming and laborious. Solid phase extraction (SPE) is a much faster purification method if optimized and it can be done with the standard cartridges as well as 96-well plates, that allow many samples to efficiently be run at the same time. With reversed phase (RP) SPE, the dimethoxytrityl (DMT) group, that is attached to the target at the final synthesis step, can be used for stronger retention to the bed sorbent and leaving only the target at the final eluting stage. The impurities without a DMT-on group, that do not adsorb to the sorbent, are washed away in earlier steps. The purpose of this study is to optimize an SPE method for purification of oligonucleotides. Two different cartridges, Clarity QSP (Phenomenex) and Glen-Pak (Glen Research) were used. The purity analysis and oligonucleotide identification were done using anion exchange - high performance liquid chromatography (AIE-HPLC) and time-of-flight mass spectrometry (TOF MS). To conclude, Clarity QSP achieved, at the most, a purity of 68.8% with the recommended SPE steps by Phenomenex. Alterations in the extraction procedure resulted in similar purity or lower. Glen-Pak reached a peak purity of 78.8% when doing a double salt wash of 5% ACN in 2 M sodium chloride and another double wash after detritylation with 1% acetonitrile. This method has to be further optimized in order to reach a purity of at least 90% to be useful in industrial settings.
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Maury, Delphine. "Méthodes de purification des signaux impliqués dans la mise en place de la symbiose endomycorhizienne." Toulouse 3, 2007. http://www.theses.fr/2007TOU30241.
Анотація:
Les travaux de recherche menés s'inscrivent dans le « développement durable » du secteur agronomique. Favoriser les interactions naturelles plantes-microorganismes du sol permet de diminuer les apports excessifs d'engrais, nuisibles à l'environnement. Parmi elles, figurent les endosymbioses racinaires dont les plus répandues sont les symbioses fixatrice d'azote et mycorhizienne. Dans le cas de la symbiose fixatrice d'azote, le signal symbiotique est un facteur nod (lipochito-oligomère). Envisager une similitude dans la signalisation de ces deux symbioses, permet d'imaginer l'existence de facteurs « myc ». L'objectif de la thèse est la recherche, la purification et voire in fine, l'isolement de tels composés. Avec a priori de structure, la technique de l'empreinte moléculaire a été utilisée. Un marquage à la 2-aminobenzamide par ailleurs a été développé. Enfin, des extractions sur milieux biologiques, sans a priori de structure, ont été réalisées. Des phases polymères présentant une affinité pour les facteurs nod ont été obtenues. La purification de fractions actives contenant des composés d'origine « fongique » a ouvert des voies sur de rassurantes perspectivesEThe research tasks undertaken in this thesis lie within the scope of “durable development” and more especially in the agronomic sector. Indeed, one of the possible methods to decrease the excessive contributions of manures, often harmful with the environment, is to support the installation of the plant-microorganism natural interactions. Among them, the endosymbioses including nitrogen fixing and mycorhizal appear. The molecular dialogue between the two partners highlights the presence of a symbiotic signal in the case of the nitrogen fixing symbiosis, called nod factor, which is not other than a lipochito-oligomer. By considering a similarity in the signalising of the two symbioses, it is possible to imagine the existence of a “myc” factor with structure closed to the factor nod one. Nevertheless, the corresponding structure of “myc” factor still remains unspecified. The objective of this thesis is to seek these myc factors to even purify them and in fine, to isolate them. Work was completed according to three approaches. One the basis of an a priori of structure with the nod factor, the molecular imprinting technique was used around a lipochito-oligomer. Then a protocol of labelling with the 2-aminobenzamide was developed. Last, without an a priori of structure, a series of extractions of biological media according to a more traditional biochemical approach was carried out and the activity of the residual fractions was tested directly on the plants. The results from these various approaches made it possible to purify fractions containing compounds of “fungic” origin and to open the way to promising prospects
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Simmons, Steven Tyler. "Commercial Applicability of an Innovative Anthocyanin Purification Technique, Utilizing Mixed-Mode Solid-Phase Extraction." The Ohio State University, 2012. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1332267706.
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Sahyoun, Wissam. "Analyse de pesticides dans les fruits et légumes : développement analytique et application de méthode QuEChERS, d-SPE et GC-MS/MS." Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2022-....), 2022. http://www.theses.fr/2022ULILR082.
Анотація:
En raison de l'utilisation généralisée des pesticides, une fraction de résidus pesticides sont présents dans les fruits et légumes. La contamination des aliments par les pesticides est devenue un des problèmes sérieux. La consommation mondiale de pesticides a augmenté au cours de la dernière décennie en raison de la croissance démographique constante et de l'urbanisation rapide. Les pesticides sont très toxiques et l'exposition long terme à ces produits chimiques provoque des risques pour la santé incluant les maladies neurologiques et respiratoires.Cette étude se concentre sur l'évaluation de la concentration de 34 pesticides dans 60 légumes et fruits issus de culture conventionnelle et biologique provenance de diverses origines. Parmi ces échantillons, certains ont été étudiés sous différentes formes, avec et sans lavage, avec et sans peau. Cette dernière est pour but d'évaluer s'il y a un geste simple pour réduire la teneur de pesticides dans les fruits et légumes et réduire ainsi les impacts sanitaires de consommateur.Les travaux se focalisent premièrement sur l'optimisation de méthode d'extraction, de purification et d'analyse finale des extraits. La méthode d'extraction QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Rugged, Effective and Safe) et de purification d-SPE (dispersive Solide Phase Extraction) ont été utilisées. Les extraits finals ont été analyse par la chromatographie en phase gazeuse couplée à un spectromètre de masse en tandem (GC-MS/MS) pour l'identification et la quantification de chaque pesticide. L'ensemble de procédures a été optimisé et il fournit une bonne sensibilité, sélectivité, un bon rendement qui varie de 70% à 120%, et une bonne précision avec RSD <20%. L'application de la méthode sur les échantillons réels permet de déterminer la présence de pesticides dans 85 % des échantillons. Les concentrations de pesticides détectés dans les légumes et fruits ne dépassent pas les limites maximales de résidus (LMR) pour la majorité de pesticides. Cependant, quelques pesticides ont été trouvés à des niveaux supérieurs à LMR pour les fruits et légumes provenant d'Akkar au Nord de Liban. De plus parmi des pesticides détectés à des niveaux élevés figurent ceux qui ont été déjà interdis comme le cas de l'Endosulfan. Les résultats ont montré que certains gestes simples permettent de réduire les teneurs de résidus de pesticides dans les fruits et légumes. En effet, le lavage à l'eau du robinet et l'épluchage permet de réduire significativement les résidus de pesticides dans les fruits et légumes. Les fruits et légumes issus de l'agriculture biologiques présents des concentrations de pesticides plus basses que ceux issus de l'agriculture conventionnelle. De très faibles concentrations des pesticides ou dans certains cas des concentrations en dessous de limite de quantification ont été déterminés pour les fruits et légumes issus de cultures biologiquesDue to the widespread use of pesticides, a fraction of pesticide residues are present in fruits and vegetables. Pesticide contamination of food has become one of the serious problems. Global pesticide consumption has increased over the past decade due to continued population growth and rapid urbanization. Pesticides are highly toxic and long-term exposure to these chemicals causes health risks including neurological and respiratory diseases.This study focuses on the evaluation of the concentration of 34 pesticides in 60 conventionally and organically grown vegetables and fruits from various origins. Among these samples, some were studied in different forms, with and without washing, with and without skin. The purpose of the latter is to evaluate whether there is a simple gesture to reduce the content of pesticides in fruits and vegetables and thus reduce the health impacts of consumers.The work focuses firstly on the optimization of the extraction method, purification and final analysis of the extracts. The extraction method QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Rugged, Effective and Safe) and the purification method d-SPE (dispersive Solid Phase Extraction) were used. The final extracts were analyzed by gas chromatography coupled to a tandem mass spectrometer (GC-MS/MS) for the identification and quantification of each pesticide. The set of procedures has been optimized and it provides good sensitivity, selectivity, good yield that varies from 70% to 120%, and good precision with RSD <20%. The application of the method on real samples allows the determination of pesticides in 85% of the samples. The concentrations of pesticides detected in vegetables and fruits did not exceed the maximum residue limits (MRLs) for the majority of pesticides. However, some pesticides were found at levels above MRLs for fruits and vegetables from Akkar in Northern Lebanon. Moreover, among the pesticides detected at high levels are those that have already been banned as in the case of Endosulfan. The results showed that some simple gestures can reduce the levels of pesticide residues in fruits and vegetables. Indeed, washing with tap water and peeling significantly reduce pesticide residues in fruits and vegetables. Organically grown fruits and vegetables have lower pesticide concentrations than conventionally grown ones. Very low pesticide concentrations or in some cases concentrations below the limit of quantification were determined for organically grown fruits and vegetables
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He, Jian. "Isolation of Anthocyanin Mixtures from Fruits and Vegetables and Evaluation of Their Stability, Availability and Biotransformation in The Gastrointestinal Tract." The Ohio State University, 2008. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1222108733.
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Leong, Yoong Kit. "Extraction and purification of green polymers using aqueous two-phase extraction (ATPE)." Thesis, University of Nottingham, 2018. http://eprints.nottingham.ac.uk/48807/.
Анотація:
Due to the increasing concern towards depleting petroleum resource and pollutions done by conventional plastics, polyhydroxyalkanoates (PHAs) which have diverse structure variability and rapid biodegradation have gained increasing attentions as potential replacement for plastics. However, PHAs have a much higher production cost compared to that of conventional plastics due to expensive carbon source and downstream processing. Aqueous two-phase extraction (ATPE) outshines other PHAs purification techniques by having the advantages of providing a mild environment for bioseparation, being green and non-toxic, and easily scaled-up. Henceforth, this research aimed to study on the purification and recovery of PHAs using thermoseparation-based ATPE. Firstly, cloud point extraction technique which based on thermoseparating polymers (TSP)/water two phase system was employed. The recovery yield of 94.8 % and purification factor (PF) of 1.41 fold was achieved under the conditions of 20 wt/wt % ethylene oxide-propylene oxide (EOPO) with 3900 g/mol MW and 10 mM of NaCl addition at thermoseparating temperature of 60 °C. TSPs have also been coupled with ammonium sulfate to form a two-phase system. Under the condition of 14 wt/wt % of both EOPO 3900 and (NH4)2SO4 at pH 6, yield and purity up to 72 % and 60 % can be achieved. Without the need of additional TSPs top-up, recycling and reutilization of phase-forming polymers can be done at least twice with satisfying yield and PF. Using two-level full factorial design, the statistical analysis demonstrated that the phosphate and thermoseparating polymer concentration are the most significant parameters due to their individual influence and synergistic interaction between them on all response variables. Utilizing the two significant parameters, the purification and recovery of PHAs were further optimized using central composite design and achieved recovery yield as high as 99.9 %. The optimum PF of 1.431 fold was obtained at 17.12 wt/wt % of phosphate salts and 18.52 wt/wt % of EOPO 3900. Using the addition of fresh phase-forming components, a total of 4 successive purification cycles with satisfying yield and PF were demonstrated. Utilizing the carbon source screened by the preliminary integrated economic and environmental assessment developed, the feasibility of extractive bioconversion of PHAs under the influence of different parameters was studied. The strategy successfully achieved a yield and PF of 97.6 % and 1.36 fold respectively under the condition of 5 wt/wt % EOPO 3900 concentration, 30 °C fermentation temperature and pH 6. The scaling-up to 2 L bioreactor proved that the scale-up of ATPE can be predicted reliably from laboratory-scale experimental data. In the final section, the evaluation of economic and environmental performance of two processes (which are with and without thermoseparating ATPE as primary purification step) were performed. With the basis of 9,000 tons PHAs production per year and 7,920 operating hours, the process with thermoseparating ATPE as primary purification step standout in terms of both economic and environmental performance. PHA production cost of 5.77 US$/kg with a payback period of fewer than 4 years and ROI of 25.2 % was achieved. The research proved that thermoseparating ATPE is a powerful and potential technique for PHAs purification and recovery as the technique showed a much higher PHAs recovery yield (approximately 2 times) in comparison with the literature (Divyashree and Shamala, 2010). In conclusion, this opens promising standpoints for utilizing thermoseparating ATPE as the primary step in the isolation and purification of PHAs from fermented broth.
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Jajuli, Maizatul Najwa. "Extraction liquid-liquide modulée électrochimiquement et microextraction en phase solide de composés pharmaceutiques sélectionnés." Electronic Thesis or Diss., Université de Lorraine, 2019. http://www.theses.fr/2019LORR0127.
Анотація:
Les méthodes classiques de préparation d'échantillons pour la détermination de composés polaires, telles que l'extraction liquide-liquide (LLE) et l'extraction en phase solide (SPE), ne sont généralement pas efficaces en raison de multiples étapes, d’une faible récupération et d’une consommation élevée de solvants organiques. Cette thèse traite du développement de nouvelles méthodes de préparation d’échantillons, à savoir l’extraction par voie liquide-liquide modulée électrochimiquement (EMLLE) et l’extraction bar-micro en phase solide (bar-μ-SPE) afin de déterminer les composés pharmaceutiques metformine (MET), buformine (BUF), phénformine (PHEN) et propranolol (PROP). Dans la méthode EMLLE, un champ électrique a été appliqué pour extraire les composés pharmaceutiques ionisés à travers l’interface entre deux solutions électrolytiques non miscibles (ITIES). Des ITIES se forment lorsque deux solvants en vrac en phase aqueuse (chlorure de lithium) et en phase organique (I, 2-dichloroéthane), contenant l’électrolyte, sont mis en contact. Le potentiel de transfert pour chaque analyte a été analysé par voltamétrie. Le potentiel de transfert varie avec leur lipophilie; propranolol Conventional sample preparation methods for the determination of polar compounds such as liquid-liquid extraction (LLE) and solid phase extraction (SPE) are generally not effective because of their multiple steps, low recovery and high consumption of organic solvents. Thus, this thesis deals with the development of new sample preparation methods, i.e, electrochemically modulated liquid-liquid extraction (EMLLE) and bar-micro solid phase extraction (bar-μ-SPE) to determine selected pharmaceutical compounds, i.e., metformin (MET), buformin (BUF), phenformin (PHEN), and propranolol (PROP) having varied lipophilicity in biological samples. In the EMLLE method, the aid of electric field was utilized to extract the pharmaceutical compounds across the interface between two immiscible electrolyte solutions (ITIES). ITIES formed when two bulk solvents aqueous phase (lithium chloride) and organic phase (I,2-dichloroethane), both containing electrolytes are brought into contact. Transfer potential for each analyte was analysed by voltammetry. The trend of transfer potential followed their lipophilicity; propranolol < phenformin < phenyl biguanide < metformin. Extraction of the analytes was performed by applying fixed potential to the biphasic system using potentiostat for 15 mins. The extraction performance was poor. Design of another ITIES cell and imposing interfacial potential by chemical polarization was done to enhance the extraction performance of this method. Thus, the EMLLE technique based on application of interfacial potential due to the presence of different concentrations of tetramethylammonium ion (TMA+) as common ion in each phase was studied. The optimum extraction conditions for this method are, [TMA+]o = 10 mM, [TMA+]w = 0.001 mM, Vorg = 2 mL, pHsample = 9, rotation speed = 900 rpm, extraction time = 600 s. The optimised parameters for back-extraction are: [TMA+]back = 50 mM, Vfinal = 0.1 mL, pHback = 2 . Nearly 100 % extraction of targeted analytes was achieved, and the enrichment factor obtained was up to ~ 60 for biguanide compounds. In the bar-μ -SPE method, adsorbent and a tiny metal rod was placed in a polypropylene membrane bag. Among the various adsorbents studied, graphene and zeolite showed some potential. Thus, extraction conditions were optimised for each adsorbent and adsorbent mixture. Despite the optimisations, the extraction was low (5.03-39.2 %). Nevertheless, enrichment factors of 1.49 -14.9 were obtained. Both proposed methods were applied to the determination of the analytes in urine. On the whole, the newly proposed methods are simple and markedly reduced consumption of organic solvents
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Balasubramaniam, Deepa. "Lysozyme Separation from Tobacco Extract by Aqueous Two-Phase Extraction." Thesis, Virginia Tech, 2003. http://hdl.handle.net/10919/31272.
Анотація:
Tobacco has long been considered as a host to produce large quantities of high-valued recombinant proteins. However, dealing with large quantities of biomass with a dilute concentration of product is a challenge for down-stream processing. Aqueous two-phase extraction (ATPE) has been used in purifying proteins from various sources. It is a protein-friendly process and can be scaled up easily. ATPE was studied for its applicability to recombinant protein purification from tobacco using egg white lysozyme as the model protein. Separate experiments with polyethyleneglycol(PEG)/salt/tobacco extract, and PEG/salt/lysozyme were carried out to determine the partition behavior of tobacco protein and lysozyme, respectively. Two level fractional factorial designs were used to study the effects of factors such as PEG molecular weight, PEG concentration, the concentration of phase forming salt, sodium chloride concentration, and pH on protein partitioning. The results showed that PEG/sodium sulfate system was most suitable for lysozyme purification. Detailed experiments were conducted by spiking lysozyme into the tobacco extract. The conditions with highest selectivity of lysozyme over native tobacco protein were determined using a response surface design. The purification factor was further improved by decreasing the phase ratio along the tie line corresponding to the phase compositions with the highest selectivity. Under selected conditions the lysozyme yield was predicted to be 87% with a purification factor of 4 and concentration factor of 14. The binodial curve and tie line corresponding to the optimal condition for lysozyme recovery for the PEG 3400/sodium sulfate system were developed. The selectivity at the optimal condition was experimentally determined to be 47 with a lysozyme yield of 79.6 % with a purification factor of 10 and a concentration factor of 20. From this study, ATPE was shown to be suitable for initial protein recovery and partial purification from transgenic tobacco.Master of Science
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Samatou, Joachim [Verfasser]. "Modelling and Simulation of Antibody Purification by Aqueous Two-Phase Extraction / Joachim Samatou." München : Verlag Dr. Hut, 2013. http://d-nb.info/1035049988/34.
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Holste, Angela Sarah. "Développement des méthodes bio analytique pour l’analyse quantitative et qualitative des peptides et protéines marqués par le couplage de la chromatographie et la spectrométrie de masse." Thesis, Pau, 2014. http://www.theses.fr/2014PAUU3004/document.
Анотація:
Cette thèse est le résultat d’une cotutelle entre l'Université de Pau et des Pays de l'Adour (UPPA) à Pau, en France et l'Université Christian Albrecht (CAU) à Kiel, en Allemagne. Dans le cadre de cette collaboration internationale, des méthodes bio-analytiques sont développées pour analyser quantitativement et qualitativement des peptides et protéines marquées par le couplage de la chromatographie avec la spectrométrie de masse. Les peptides et les digestats des protéines sont marquées selon un protocole optimisé par des lanthanides en utilisant des composés à base de DOTA. La séparation des peptides est réalisée par IP-RP-nanoHPLC. Des données complémentaires sont acquises par MALDI-MS pour l'identification et par ICP-MS pour la quantification. Dans ce contexte, une étape de pré-nettoyage en ligne est développée et mise en œuvre dans le protocole de séparation par nanoHPLC. Cette étape permet l'élimination efficace des réactifs appliqués en excès et ainsi la diminution du bruit de fond lié à la présence de métaux lors des analyses par ICP-MS. Les données obtenues sont alors plus facile à interpréter, la sensibilité des signaux des peptides n’étant par ailleurs pas modifié. L'extraction en phase solide (SPE) appliquée comme alternative entraîne des pertes importantes de peptides et peut être considérée comme inadaptée pour l'analyse quantitative. Des additifs pour éluants de nanoHPLC, tels que l'EDTA et le HFBA sont testés et jugés non bénéfiques pour l'analyse des échantillons peptidiques normaux. HFBA peut être reconsidéré pour une application spéciale sur des peptides très hydrophiles. Des peptides marqués sont développés. Leur utilisation en quantité connue pourrait permettre la quantification rapide et simple d'un échantillon de digestat à faible complexité. De plus, cet ensemble de peptides permet la superposition fiable des chromatogrammes, et ainsi de comparer des données complémentaires obtenues par l’analyse d’échantillon par ICP-MS et MALDI-MS. Expériences d'application avec le couplage laser femtoseconde avec ICP-MS sont effectuées sur des plaques métalliques de MALDI MS et montrent des résultats très prometteurs. Pour cela, les échantillons préalablement identifiés par MALDI-MS sont analysés par fsLA-ICP-MS. Les premières tentatives de quantification sur la plaque en acier modifiée sont satisfaisantes et donnent des résultats répondant aux attentes. L’optimisation des paramètres de MALDI-MS facilite l’identification des peptidesThis PhD thesis was a Cotutelle between the Université de Pau et des Pays de l’Adour (UPPA) in Pau, France and the Christian-Albrechts University (CAU) in Kiel, Germany. In the course of this international collaboration, bio-analytical methods for the quantitative and qualitative analysis of labelled peptides and proteins were developed, which were based on the hyphenation of chromatography with mass spectrometry. Peptides and protein digests were lanthanide labelled using DOTA-based compounds according to an optimised protocol. Separation on the peptide level was performed using IP-RP-nanoHPLC. Complementary data sets were acquired using MALDI-MS for identification and ICP-MS for quantification. In this context, an online precleaning step was developed and implemented in the nanoHPLC separation routine, which allowed for effective removal of excess reagents. This lead to lowered metal backgrounds during ICP-MS measurements and thus better data interpretability, while guarding peptide recovery at a maximum level. An alternative offline purification using solid phase extraction (SPE) resulted in important peptide losses and can be considered unsuitable for quantitative analysis. Additives to the nanoHPLC eluents, such as HFBA and EDTA were tested and not deemed beneficial for the analysis of normal peptide samples. HFBA can be reconsidered for special application on very hydrophilic peptide species. A set of labelled peptides was developed, which due to application of known quantities could be employed for quick and simple quantification of a low complexity digest sample. In addition this peptide set allowed for the reliable superposition of chromatograms, enabling sample comparability especially for complementary ICP-MS and MALDI-MS data. Experiments for application of fsLA-ICP-MS on MALDI-MS target plates were conducted and showed very promising results. For this purpose, samples that were already identified using MALDI-MS were supposed to be remeasured using fsLA-ICP-MS. First quantification attempts on the modified steel target plate were successful and in the range of expectance. Adjusted parameters for MALDI-MS allowed for proper peptide identifications
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Guéhenneux, Gaëlle. "Etude des composés organiques semi-volatils en milieux extrêmes par micro-extraction en phase solide." Université Joseph Fourier (Grenoble), 2003. http://www.theses.fr/2003GRE10161.
Анотація:
Parmi les sources potentielles d'énergie, la biomasse pourrait constituer 25 % de nos besoins énergétiques pour les transports, sous réserve du développement de procédés performants permettant sa valorisation. Parmi les voies possibles, la valorisation par production d'H2 et CO qui peuvent être utilisés, sous conditions, pour la synthèse de biocarburants, semble être scientifiquement et économiquement prometteuse. Cet objectif peut être atteint en utilisant des réactions de thermolyse mais la production de goudrons constitue le principal obstacle à ce procédé et il est nécessaire de pousser les études dans ce domaine afin de limiter ou d'inhiber leur formation. La technique SPME (Micro Extraction en Phase Solide) est l'outil de prélèvement que nous avons décidé d'optimiser pour le dosage des HAP. Cette technique a été testée en zones peu polluées au Québec et au Svalbard. Ces études ont montré l'efficacité de la SPME à des concentrations très faibles et ont permis d'identifier des sources locales de COSV, comme par exemple l'utilisation des motoneiges par les autochtones. Enfin, la dernière partie du travail de thèse a porté sur l'application de la SPME lors des réactions de pyrolyse de la biomasse.
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Mündges, Jan [Verfasser]. "Investigation and Intensification of Monoclonal Antibody Purification by Aqueous Two-Phase Extraction / Jan Mündges." München : Verlag Dr. Hut, 2015. http://d-nb.info/107976805X/34.
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Moussa, Manel. "Développement de polymères à empreintes ioniques pour l'extraction sélective des lanthanides dans des échantillons environnementaux." Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066585/document.
Анотація:
L'analyse des lanthanides à l'état de trace dans les matrices environnementales requiert souvent une étape de purification et de préconcentration. L'extraction sur phase solide (SPE) est la technique la plus utilisée dans le domaine du traitement de l'échantillon. Cette thèse a consisté à développer des polymères à empreintes ioniques (IIP) pour l'extraction sélective des lanthanides (Ln3+). Tout d'abord, des IIP ont été préparés selon l'approche de piégeage en utilisant le 5,7-dichloroquinoline-8-ol, un ligand non vinylique. La perte de ce ligand, supposé piégé, durant les étapes d'élimination de l'ion empreinte et de sédimentation succédant à la polymérisation a été démontrée en HPLC-UV. Cette perte non répétable a entraîné un manque de répétabilité des profils SPE sur deux IIP préparés dans les mêmes conditions. Cela a permis de démontrer que cette approche de synthèse pour des IIP n'était pas adéquate. Ensuite, des IIP ont été synthétisés par immobilisation chimique en utilisant l'acide méthacrylique comme monomère vinylique. La répétabilité des étapes de synthèse et d'extraction a été démontrée. Une sélectivité pour l'ensemble des lanthanides a été obtenue et des applications avec des échantillons réels ont été faites avec succès. Enfin, des IIP obtenus par immobilisation chimique d'acide méthacrylique et de 4-vinylpyridine comme monomères ont été synthétisés avec comme ion empreinte soit un Ln3+ léger (Nd3+) soit un Ln3+ lourd (Er3+). Des sélectivités identiques de ces IIP pour l'ensemble des Ln3+ ont été obtenues dans les deux cas. Cependant, cette sélectivité a pu être modulée en changeant la nature et le pH de la solution de lavage utilisée dans le protocole SPEThe analysis of the lanthanide ions present at trace level in complex environmental matrices requires often a purification and preconcentration step. The solid phase extraction (SPE) is the most used sample preparation technique. To improve the selectivity of this step, Ion Imprinted Polymers (IIPs) can be used as SPE solid supports. The aim of this work was the development of IIPs for the selective extraction of lanthanide ions from environmental samples. In a first part, IIPs were prepared according to the trapping approach using 5,7-dichloroquinoline-8-ol as non-vinylated ligand. For the first time, the loss of the trapped ligand during template ion removal and sedimentation steps was demonstrated by HPLC-UV. Moreover, this loss was not repeatable, which led to a lack of repeatability of the SPE profiles. It was then demonstrated that the trapping approach is not appropriate for the IIPs synthesis.In a second part, IIPs were synthesized by chemical immobilization of methacrylic acid as vinylated monomer. The repeatability of the synthesis and the SPE protocol were confirmed. A good selectivity of the IIPs for all the lanthanide ions was obtained. IIPs were successfully used to selectively extract lanthanide ions from tap and river water. Finally, IIPs were synthesized by chemical immobilization of methacrylic acid and 4-vinylpyridine as functional monomers and either a light (Nd3+) or a heavy (Er3+) lanthanide ion as template. Both kinds of IIPs led to a similar selectivity for all lanthanide ions. Nevertheless, this selectivity can be modified by changing the nature and the pH of the washing solution used in the SPE protocol
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Gaillard, Yvan. "Analyse des xénobiotiques après extraction en phase solide en pharmaco-toxicologie : applications cliniques, médico-légales et sportives." Lyon 1, 1999. http://www.theses.fr/1999LYO1T122.
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Ross, Kristin Coby. "Separation of Recombinant β-Glucuronidase from Transgenic Tobacco by Aqueous Two-Phase Extraction". Thesis, Virginia Tech, 2008. http://hdl.handle.net/10919/43471.
Анотація:
Biopharmaceutical manufacturing is a rigorous and expensive process. Due to the medicinal nature of the product, a high purity level is required and several expensive purification steps must be utilized. Cost-effective production and purification is essential for any biopharmaceutical product to be successful and development of the fastest, most economical, and highest-yielding purification scheme is a constant engineering challenge. Commercial-scale purification schemes currently revolve around the use of multiple chromatography steps for the purification of biopharmaceutical products. Chromatography has many shortcomings including high cost, limited throughput, and complex scale up. The goal of this research was to develop an alternative, non-chromatography purification step for the separation of an acidic model protein, recombinant β-glucuronidase (rGUS), from transgenic tobacco with high yield and purity.
Aqueous two-phase extraction (ATPE) is a powerful technique for separation and purification of proteins, and has the potential to replace an expensive chromatography step for the initial purification of recombinant proteins. ATPE enables high levels of target protein recovery and concentration while removing large amounts of impurities from the initial extract. Fractional factorial designs and response surface methodology were used to determine an optimized aqueous two-phase system for the purification of rGUS from transgenic tobacco. In a 13.4 % (w/w) PEG/18% (w/w) potassium phosphate system, 74% of the rGUS was recovered in the top PEG-rich phase while 90% of the native tobacco proteins were removed in the interphase and the bottom phase. A purification factor of about 20 was achieved in this process.Master of Science
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Nait-Si, Youssef. "Extraction, purification, comportement chimique de l'hypéricine et de la pseudohypéricine du millepertuis (hypericum perforatum)." Aix-Marseille 3, 2002. http://www.theses.fr/2002AIX30073.
Анотація:
Le millepertuis est une plante médicinale à activités multiples qui contient deux caractéristiques, l'hypéricine et la pseudohypéricine, aux quelles on a attribué certaines de ces activités. Ce travail a eu pour objet la mise au point de procédés permettant d'obtenir les deux naphthodianthrones pures. Un critère de pureté des deux composés a d'abord été élaboré. Ensuite des protocoles d'extraction de la plante et de purification ont été mis au point jusqu'à l'obtention d'un extrait enrichi en hypéricine et pseudohypéricine. Les deux composés sont ensuite séparés par deux chromatographies successives sur silice et silice greffée et obtenus purs par précipitation. L'étude de leur comportement a montré que l'hypéricine est stable en milieu hydraté alors que la pseudohypéricine est transformée en isopseudohypéricine, nouvelle naphthodianthrone. Nous avons mis en évidence un équilibre entre la pseudo et isopseudohypéricine en milieu hydraté neutre et le déplacement total de l'équilibre vers l'isopseudohypéricine en milieu faiblement alcalin et vers la pseudohypéricine en milieu faiblement acideSt. -John's-wort (Hypericum perferatum) is a medical plant with multiple activities which contains two characteristic compounds, hypericin and the pseudohypericin, in wich one attributed some of these activities. This work had for object the settling of processes allowing to obtain the two naphthdianthrons at an high degree of purity. Firstly a criterion of purity of the two compound was elaborated. Subsequently, protocols for extracting the plant and purifying extracts were finalized for obtaining an extract enriched in hypericin and pseudohypericin. The compounds are then separated by two successive chromatographies using silica gel and silica gel C-18 reversed phase and obtained pure up to 95 % by precipitation. The study of their behavior showed that the hypericin is stable in hydrated medium while the pseudohypericin is transformed into isopseudohypericin, a new naphthodianthron. We shown an equilibrum between pseudo and isopseudohypericin in neutral hydrated medium and the a full deplacement of the equilibrum to isopseudohypericin in weakly alkaline medium and to pseudohypericin in weakly acid one
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Larroque, Virginie. "Développement d'une méthode de micro-extraction sur phase solide pour l'analyse de composés organiques volatils dans l'air intérieur." Pau, 2006. http://www.theses.fr/2006PAUU3038.
Анотація:
L'amélioration des connaissances sur la qualité de l'air intérieur nécessite une caractérisation fine de la pollution. En alternative aux méthodes d'échantillonnage classiques, la SPME a donc été étudiée pour la mesure des COV dans cet environnement. Malgré ses nombreux avantages, la SPME montre quelques limites pour la quantification. Une méthodologie de prélèvement à l'équilibre thermodynamique a donc été développée pour résoudre le problème des compétitions d'adsorption. Les conditions opératoires mettent en jeu une fibre PDMS/Car et une extraction en mode statique dans un volume d'échantillon fixe. Les cinétiques d'adsorption de COV modèles ont été tracées pour 3 volumes afin de déterminer le meilleur compromis temps d'extraction/performances. Le volume retenu est 250 mL avec un temps d'équilibre de 3h. Des limites de détection de l'ordre du µg. M-3 sont atteintes en GC/MS et la quantification est possible jusqu'à 9 µmol. M-3, même pour une humidité relative de 70%. Pour mieux comprendre les mécanismes mis en jeu durant l'échantillonnage, une approche théorique basée sur la modélisation de la diffusion a été abordée. La méthode de quantification développée a ensuite été comparée à des méthodes de prélèvement hors équilibre qui mettent en jeu des temps d'extraction courts. De meilleures performances sont obtenues pour la méthode à l'équilibre. La conservation des fibres a finalement été étudiée pour éviter les contaminations et les pertes avant et après prélèvement. La méthodologie a été appliquée avec succès à l'analyse des COV dans deux écoles différentes (HQE et non HQE). L'effet du produit de nettoyage des sols a aussi été évaluéIndoor air quality is a recent concern and to improve the knowledge in this field, analytical methods are required for pollution characterisation. In this aim, SPME was studied as alternative to traditional sampling methods for the analysis of VOCs in indoor air. Despite its numerous advantages, SPME shows some limits for quantitative analysis. Therefore, an equilibrium sampling method was developed to overcome competitive adsorption. Operating conditions involves PDMS/Car fibre and static extraction in a fixed sample volume. Adsorption kinetics of model compounds were determined for 3 volumes in order to find the best compromise between extraction time and performance. 250 mL and 3h extraction were retained. Limits of detection in the sub -µg. M-3 order are reached in GC/MS and quantitative analysis is possible up to 9 µmol. M-3, even with 70% RH air humidity. For a better understanding of sampling mechanisms, a theoretical approach, based on diffusion modelling, was studied. Then, the method developed was compared to non-equilibrium methods involving short extraction times. Best results were obtained for the equilibrium method: linearity domains are larger and limits of detection are at least twice lower. Fibre storage was studied to avoid both contamination and losses before and after sampling. The methodology was then successfully applied to the analysis of VOCs in classrooms of two nursery schools built according to two different rules of building (traditional and HEQ). The effect of floor cleaning on VOCs content in air was also shown
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Boussetta, Sabrina. "Greffage de résine et membrane polymères par des agents chelatants : application à l'extraction en phase solide de cations métalliques." Toulon, 2004. http://www.theses.fr/2004TOUL0009.
Анотація:
Dans le but de connaître l'impact de l'ensimage sur la nature et les propriétés de l'interphase d'un composite cyanate/fibre de verre D, quatre types d'échantillons ont été réalisés : une série de trois composites mis en œuvre par moulage au sac et qui différent par l'absence ou la présence d'ensimage (avec ou partiellement extrait), et des échantillons de résine seule. L'analyse mécanique dynamique a été choisie pour étudier ces composites. Les relaxations mécaniques, notamment la relaxation principale associée à la Tg de la résine, sont largement modifiées par l'état de l'interphase. Une étude approfondie de cette transition nous permet d'émettre des hypothèses sur la formation et la nature de l'interphase pour ce système. Ces résultats sont corroborés par des analyses complémentaires (microscopie infrarouge, microanalyse thermique. . . ). Enfin, des vieillissements ont été réalisés sur les composites et la résine afin de caractériser plus finement cette interphaseWith the view to know sizing impact on interphase nature and properties of a cyanate/D glass fibre composite, four types of samples were achieved : a series of three composites, processed by vacuum moulding and which differ by absence or presence of sizing (with or partially extracted), and resin samples. The dynamic mechanical analysis was selected to study these composites. Mechanical relaxations, particularly main relaxation associated to resin Tg, are largely modified by the state of the interphase. A elaborate study of this transition enables us to express assumptions on the formation and the nature of the interphase for this system. These results are corroborated by complementary analysis (infra-red microscopy, micro thermal analysis. . . ). Lastly, ageings were realized on the composites and the resin in order to characterize this interphase more finely
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Gignac, Fanny. "Développement de supports solides fonctionnalisés par des aptamères pour l’analyse d’ions présents à l’état de trace dans des échantillons complexes." Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2023. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2023SORUS522.pdf.
Анотація:
De nombreux ions métalliques sont reconnus comme essentiels au bon fonctionnement de notre organisme, mais certains tels que les ions cadmium ou plomb sont eux nocifs, même à l’état de traces. D’autres ions tels que les ions cuivre peuvent s’avérer nocif lorsqu’un déficit ou un excès est constaté dans l’organisme. Des normes et seuils de normalité ont donc été fixés, notamment dans les denrées alimentaires, mais aussi dans les matrices biologiques comme le sang. Il est alors nécessaire de pouvoir quantifier ces métaux à l’état de traces dans des matrices complexes. Afin de pallier les limites en termes de performances des instruments d’analyse élémentaire comme le manque de spécificité ou encore la sensibilité aux effets de matrices, une étape préalable de traitement de l’échantillon est nécessaire, telle que l’extraction sur phase solide. Cependant les supports conventionnels manquent de spécificité, entrainant la co-extraction d’autres ions. Pour combler ce manque de spécificité, de nouveaux supports hautement spécifiques sont en cours de développement, tels que les polymères à empreintes ioniques, dont le potentiel à d’ores et déjà été démontré mais dont la synthèse et la mise en œuvre peuvent s’avérer complexes. L’objectif de cette thèse est d’investiguer l’utilisation d’aptamères, de simples brins d’ADN ou d’ARN, afin de développer des supports d’extraction hautement spécifiques et sélectifs aux ions métalliques. Si leur potentiel a déjà été démontré pour l’extraction de molécules organiques, peu de travaux concernent à ce jour l’extraction d’ions métalliques tels que ceux ciblés dans cette étude à savoir les ions cadmium, plomb et cuivre. Après une étude bibliographique portant sur l’utilisation d’aptamères spécifiques de ces ions métalliques, notamment dans le cadre du développement de capteurs, des séquences d’intérêt ont été sélectionnées pour chacune des cibles. Ces séquences ont été greffées de manière covalente sur de la Sépharose activée CNBr. Après avoir évalué la capacité théorique des supports obtenus par la mesure des taux de greffage, une étude approfondie de l’effet des milieux de percolation et de lavage sur la rétention des ions ciblés a été réalisée grâce à la mesure de chacune des fractions en ICP-MS, démontrant la forte influence des ions présents dans le milieu sur la spécificité et la sélectivité. Ces deux paramètres ont été étudiés respectivement par l’étude de la rétention d’autres cations divalents sur les supports greffés par les aptamères spécifiques et des ions ciblés sur des supports greffés par des séquences dites de contrôle, à savoir n’ayant pas d’affinité connue pour les ions ciblés. Après optimisation des protocoles pour chacun des supports les plus prometteurs permettant d’extraire l’un des ions cibles, les capacités des supports ont été déterminées. Enfin, les supports ont permis avec succès l’extraction des ions ciblés d’échantillons réels tels que le sérum, illustrant le fort potentiel des aptamères pour l’extraction d’ions métalliquesMany metal ions are recognized as essential for the proper functioning of our organism, but some of them, such as cadmium or lead ions, are harmful even in trace amounts. Other ions, like copper ions, can also become harmful when a deficiency or excess is observed in the body. Standards and normal thresholds have been established, particularly in food products, as well as in biological matrices such as blood. Therefore, it is necessary to be able to quantify these trace metals in complex matrices. In order to overcome the performance limitations of elemental analysis instruments, such as lack of specificity or sensitivity to matrix effects, a preliminary sample treatment step is required, such as solid-phase extraction. However, conventional supports lack specificity, leading to the co-extraction of multiple metal ions. To overcome this lack of specificity, new highly specific supports are being developed, such as ion-imprinted polymers whose potential has already been demonstrated, but whose synthesis and implementation can be complex. The objective of this thesis is to investigate the use of aptamers, simple DNA or RNA strands, to develop highly specific and selective extraction supports for metal ions. While their potential has already been demonstrated for the extraction of organic molecules, few studies have focused on the extraction of metal ions such as cadmium, lead, and copper, which are targeted in this study. Following a literature review on the use of specific aptamers for these metal ions, especially in the context of sensor development, specific sequences of interest were selected for each target. These sequences were covalently attached to activated CNBr Sepharose. After evaluating the theoretical capacity of the supports by measuring the grafting rates, a detailed study of the effect of percolation and washing media on the retention of targeted ions was conducted thanks to ICP-MS measurement of each fraction, demonstrating the strong influence of ions present in the medium on specificity and selectivity. These two parameters were investigated respectively by studying the retention of other divalent cations on sorbent grafted with specific aptamers and by studying the retention of targeted ions on supports grafted with so-called control sequences, i.e. with no known affinity for targeted ions. After optimizing the procedures for each of the most promising supports capable of extracting one of the target ions, the capacities of the supports were determined. Then, the supports were successfully applied to the extraction of targeted ions from real samples such as serum, illustrating the strong potential of aptamers for the extraction of metal ions
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Urdaneta, Zurbarán Erika Cristina. "Purification of UV cross-linked RNA-protein complexes by phenol-toluol extraction." Doctoral thesis, Humboldt-Universität zu Berlin, 2020. http://dx.doi.org/10.18452/21318.
Анотація:
RNA-Bindungsproteine spielen Schlüsselfunktionen bei der post-transkriptionellen Regulation der Genexpression. Durch Bindung an RNA steuern sie die RNA-Aufbereitung, den Transport, die Stabilität und die Translation. In den letzten zehn Jahren wurden bedeutende Fortschritte bei der Aufklärung bakterieller post-transkriptioneller Mechanismen erzielt. Es wird immer deutlicher, dass diese Regulierungsebene auch bei der Pathogenese und Antibiotikaresistenz eine wichtige Rolle spielt. Die Analyse von RNA-Protein-Komplexen (RNPs) auf Proteomebene wurde durch die (m)RNA-interactome-capture Technologie vorangetrieben, die den Teil des Proteoms isoliert, welcher mit polyadenylierter (m)RNA vernetzt ist. Dies hat zur Identifizierung von Hunderten von neuen RBPs in einer Vielzahl von eukaryontischen Arten, vom Menschen bis zur Hefe, geführt. Allerdings fehlt die Poly-Adenylierung in der funktionellen RNA von Bakterien und anderen Klassen von -eukaryontischen- regulatorischen RNAs. Ziel dieser Arbeit war es, diese Einschränkung durch die Entwicklung einer neuartigen und unvoreingenommenen Methode zur Aufreinigung von UV-vernetzten RNPs in lebenden Zellen zu überwinden: PTex (Phenol-Toluol-Extraktion). Das Reinigungsprinzip basiert ausschließlich auf den physikalisch-chemischen Eigenschaften von vernetzten RNPs gegenüber ungebundenen Proteinen oder RNA; es ist dabei unparteiisch gegenüber spezifischen RNAs oder Proteinen und ermöglicht somit erstmals eine systemweite Analyse von nicht-poly-(A)-RNA-interagierenden Proteinen sowohl in eukaryontischen (HEK293) als auch in prokaryontischen (Salmonella Typhimurium) Zellen.RNA binding proteins play key functions in post-transcriptional regulation of gene expression. By binding to RNA, they control RNA editing, transport, stability and translation. In the last decade, significant advances have been made in the elucidation of bacterial post-transcriptional mechanisms. It is becoming increasingly clear that this layer of regulation also plays an important role in pathogenesis and antibiotic resistance. The analysis of RNA-protein complexes (RNPs) at the proteome level has been driven by the (m)RNA interactome capture technology which isolates the proteome cross-linked to poly-adenylated (m)RNA. This has resulted in the identification of hundreds of novel RBPs in a diversity of eukaryotic species ranging from humans to yeast. However, poly-adenylation is absent in functional RNA from bacteria and other classes of -eukaryotic- regulatory RNAs. This work was aimed to overcome that limitation by developing a novel and unbiased method for the purification of UV-cross-linked RNPs in living cells: PTex (Phenol Toluol extraction). The purification principle is solely based on physicochemical properties of cross-linked RNPs versus unbound proteins or RNA, and it is impartial towards specific RNA or proteins; enabling for the first time a system-wide analysis of non-poly(A) RNA interacting proteins in both eukaryotic (HEK293) and prokaryotic (Salmonella Typhimurium) cells.
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Costa, Sara Henriques da Silva e. "Development of aqueous micellar two-phase systems for the selective extraction and purification of IgG from real matrixes." Master's thesis, Universidade de Aveiro, 2016. http://hdl.handle.net/10773/21244.
Анотація:
Mestrado Biotecnologia MolecularOs anticorpos, mono e policlonais, têm sido alvo de estudo intenso pelas indústrias farmacêuticas e biotecnológicas, resultando num extraordinário crescimento do mercado de produção de anticorpos. Este crescente interesse deve-se principalmente às vantagens que estas biomoléculas compreendem, tais como a sua aplicação terapêutica e a sua incorporação numa vasta variedade de técnicas de quantificação. A imunoglobulina G (IgG) é um dos anticorpos já aprovados pela Food and Drug Administration (FDA) que oferece uma grande variedade de aplicações em diversas áreas e, portanto, reconhecida como uma proteína de valor acrescentado. Apesar da vasta oferta de técnicas de purificação de anticorpos, ainda existem grandes desvantagens associadas à sua purificação. As técnicas atualmente utilizadas centram-se em técnicas cromatográficas, as quais envolvem materiais dispendiosos e longos períodos de operação, sendo responsáveis por 50-80% dos custos totais do produto. Copulativamente, estas técnicas apresentam grandes limitações relativamente à escalabilidade do processo. Como alternativa, este trabalho foca-se na aplicação de sistemas micelares de duas fases aquosas convencionais e mistos, utilizando líquidos iónicos com carácter tensioativo, como uma técnica de purificação não cromatográfica para a extração e purificação de IgG a partir de soro de coelho. Foram otimizados alguns parâmetros associados ao processo de purificação, tais como a concentração de surfactante, a presença/ ausência de líquidos iónicos como co-surfactantes, o efeito da sua concentração e as suas características estruturais. Após o estudo de otimização, os sistemas convencionais foram confinados a uma percentagem de 10% de Triton X-114 a pH 7, alcançando purezas de IgG de 24,6%. Com a aplicação de sistemas micelares mistos de duas fases aquosas compostos por líquidos iónicos obtiveram-se ainda melhores fatores de purificação. Os sistemas que conduziram a melhores purezas foram os sistemas com adição de [C16mim]Cl a 0,7 wt%, [P4,4,4,14]Cl a 1,0 wt% e [P6,6,6,14]Br a 0,7wt%, obtendo-se purezas de IgG de 26,3%, 28,1% e 29,2%, respectivamente. Estes resultados de pureza são superiores aos reportados na literatura relativamente à purificação de IgG a partir do soro do coelho utilizando sistemas de duas fases aquosas, confirmando o potencial desta técnica na extração e purificação de anticorpos ou outros produtos de valor acrescentado de matrizes complexas.
Os anticorpos, mono e policlonais, têm sido alvo de estudo intenso pelas indústrias farmacêuticas e biotecnológicas, resultando num extraordinário crescimento do mercado de produção de anticorpos. Este crescente interesse deve-se principalmente às vantagens que estas biomoléculas compreendem, tais como a sua aplicação terapêutica e a sua incorporação numa vasta variedade de técnicas de quantificação. A imunoglobulina G (IgG) é um dos anticorpos já aprovados pela Food and Drug Administration (FDA) que oferece uma grande variedade de aplicações em diversas áreas e, portanto, reconhecida como uma proteína de valor acrescentado. Apesar da vasta oferta de técnicas de purificação de anticorpos, ainda existem grandes desvantagens associadas à sua purificação. As técnicas atualmente utilizadas centram-se em técnicas cromatográficas, as quais envolvem materiais dispendiosos e longos períodos de operação, sendo responsáveis por 50-80% dos custos totais do produto. Copulativamente, estas técnicas apresentam grandes limitações relativamente à escalabilidade do processo. Como alternativa, este trabalho foca-se na aplicação de sistemas micelares de duas fases aquosas convencionais e mistos, utilizando líquidos iónicos com carácter tensioativo, como uma técnica de purificação não cromatográfica para a extração e purificação de IgG a partir de soro de coelho. Foram otimizados alguns parâmetros associados ao processo de purificação, tais como a concentração de surfactante, a presença/ ausência de líquidos iónicos como co-surfactantes, o efeito da sua concentração e as suas características estruturais. Após o estudo de otimização, os sistemas convencionais foram confinados a uma percentagem de 10% de Triton X-114 a pH 7, alcançando purezas de IgG de 24,6%. Com a aplicação de sistemas micelares mistos de duas fases aquosas compostos por líquidos iónicos obtiveram-se ainda melhores fatores de purificação. Os sistemas que conduziram a melhores purezas foram os sistemas com adição de [C16mim]Cl a 0,7 wt%, [P4,4,4,14]Cl a 1,0 wt% e [P6,6,6,14]Br a 0,7wt%, obtendo-se purezas de IgG de 26,3%, 28,1% e 29,2%, respectivamente. Estes resultados de pureza são superiores aos reportados na literatura relativamente à purificação de IgG a partir do soro do coelho utilizando sistemas de duas fases aquosas, confirmando o potencial desta técnica na extração e purificação de anticorpos ou outros produtos de valor acrescentado de matrizes complexas.
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Duran, Renan Ravetti. "Procédés d’extraction et de purification de molécules à haute valeur ajoutée issues de la biomasse bois." Thesis, Université de Lorraine, 2015. http://www.theses.fr/2015LORR0325.
Анотація:
Les sous-produits qui proviennent de l’industrie du bois, particulièrement les nœuds, contiennent différents types de molécules qui peuvent être valorisées comme source de composants bioactifs pouvant répondre à des besoins thérapeutiques. C’est sur cette idée que le projet "Le Bois Santé" a été conçu. Grâce à la collaboration de plusieurs partenaires, le présent travail vise dans un premier temps à développer des procédés d’extraction "verts" (solide-liquide et supercritique) pour obtenir un extrait riche en lignanes à partir d’un mélange de nœuds d’épicéa commun et de sapin pectiné. Les effets des conditions opératoires sur le rendement d’extraction de chaque composé cible et sur l’activité anti-oxydante des extraits ont été déterminés. Afin d’étudier le procédé complet, le projet vise à étudier l’impact des procédés de concentration et de séchage de l’extrait à partir de l’évaporation sous vide et de la lyophilisation. De plus, la séparation et la purification des composés ont été développées et optimisées par simulation grâce à la technique de chromatographie frontaleBy-products from wood industry, particularly knots, contain different types of molecules that can be valued as a source of bioactive components meeting therapeutic needs. It is on this idea that the project "Le Bois Santé" was designed. Through the collaboration of several partnerships, the present work aims initially to develop a "green" extraction processes (solid-liquid and supercritical) to obtain an extract rich in lignans from a mixture of norway spruce and silver fir knots. The effects of operating conditions on the extraction yield of each target compound and the antioxidant activity of the extracts were determined. To understand the entire process, the project aims to investigate the impact of concentration and drying processes using vacuum evaporation and lyophilisation. Moreover, the separation and purification of the compounds have been developed and optimized using frontal chromatography technique
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Belghith, Hafedh. "Production et extraction-purification d'une alcool oxydase : réalisation et développement d'un capteur à alcools." Compiègne, 1985. http://www.theses.fr/1985COMPI211.
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Bakaï, Marie-France. "Développement d’un procédé de réduction des sulfites dans les vins." Thesis, Bordeaux, 2015. http://www.theses.fr/2015BORD0374/document.
Анотація:
Le SO2 est un additif utilisé en oenologie pour ses propriétés antiseptiques,antioxydantes et antioxydasiques. Il est introduit dans les vins en grandes quantités en raisonde son fort pouvoir de combinaison avec les dérivés carbonylés, ce qui limite son activité. Leproblème est que les teneurs maximales de SO2 autorisées ne permettent pas toujours uneprotection suffisante du vin contre les phénomènes de refermentation. L'objectif principal dece projet était de réduire la concentration en dioxyde de soufre dans les vins en éliminant unepartie des dérivés carbonylés responsables de la combinaison bisulfitique. La méthoderetenue a été l’extraction sur phase solide (SPE). Elle fait intervenir des interactions entre unephase liquide et un support solide poreux modifié avec une fonction extractive. Les travauxantérieurs ont permis de sélectionner l’hydrazine et la sulfonylhydrazine comme agentsd’extraction. Ces fonctions ont été fixées sur des supports polymères organiques selon deuxvoies : la fonctionnalisation de résines sulfoniques commerciales et la copolymérisation ensuspension de méthacrylate de glycidyle suivie d’une fonctionnalisation. Les supports solidesobtenus ont été caractérisés afin de valider la fonctionnalisation. Ils ont ensuite été testés surdes solutions modèles du vin et le procédé a prouvé son efficacité. La présence decontaminants dans les solutions a été recherchée avant d’appliquer la méthode sur du vinSO2 is an additive used in enology for its antiseptic, antioxidant and antioxydasic properties. It is introduced in wines in large quantities due to its high binding power with carbonyl compounds, which limits its activity. The maximum SO2 content authorized is notalways enough to avoid fermentative phenomena during wine storage. The main objective of this project was to develop a method to reduce the sulfur dioxide concentration in wines byeliminating some of carbonyl compounds responsible for the SO2 binding. The method used was solid-phase extraction (SPE). It involves interactions between a liquid and a porous solid support modified with an extractive function. Previous work allowed to select hydrazine andsulfonylhydrazine as extractive reagents. These functions were fixed on organic polymersupports according to two routes : functionnalization of commercial sulfonic resins and suspension copolymerization of glycidyl methacrylate (followed by the functionnalization). The solid supports obtained were characterized in order to validate the functionnalization.Then selective extractions were executed on model solutions. The diminution of carbonylcompounds concentration and SO2 content was showed by those experiments. The presence of contaminants in the solutions was investigated before applying the method to wine
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Lardon, François. "Synthèse et caractérisation de mésophases silice/tensioactif/ligand pour l'extraction solide-liquide des cations métalliques en phase aqueuse : Application à l'Américium (III) et à l'Europium (III)." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2006. http://www.theses.fr/2006STR13183.
Анотація:
Ce travail porte sur l’extraction solide-liquide des actinides contenus dans la solution de dissolution des combustibles nucléaires usés dans l’acide nitrique. Nous étudions plus particulièrement l’utilisation de matériaux hybrides silice/tensioactif, organisés en mésophase, comme support de cette extraction. L’idée soutenue est de mettre à profit les propriétés lipophiles des molécules de tensioactif organisées en micelles, pour introduire dans une matrice de silice des molécules-ligands ayant une affinité pour la complexation des actinides. Les travaux réalisés concernent la conception et la synthèse de ces nouveaux supports d’extraction et la réalisation de tests d’extraction sur des solutions d’américium(III) et d’europium(III), deux constituants des combustibles nucléaires usés. Des études de caractérisation par diffraction des rayons X, microscopie électronique à transmission et résonance magnétique nucléaire ont été réalisées. A partir des informations obtenues, nous proposons un modèle d’organisation moléculaire en relation avec les propriétés extractivesThis work deals with the reprocessing of spent nuclear fuels by solid-liquid extraction. We study in particular the use of micelle-templated mesostructured materials as a silica-based adsorbent. The key idea is to take advantage of the lipophilic properties of the immobilized surfactant to introduce inside a silica framework ligand-molecules which have affinity for actinides. The design and synthesis of such new functionalized materials and extraction experiments on aqueous solutions of americium(III) and europium(III), two elements of the spent nuclear fuel, have been done. X-ray diffraction, transmission electronic microscopy and nuclear magnetic resonance experiments have been realized. From the information obtained, a model of molecular organization, in connection with the extraction properties, is proposed
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Brothier, Fabien. "Développement d'outils bioanalytiques miniaturisés : greffage de biomolécules sur monolithes en capillaire couplés à la nanochromatographie pour l'analyse d'échantillons complexes." Thesis, Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066299/document.
Анотація:
L’analyse de traces dans des matrices complexes (environnementales, alimentaires ou biologiques) requiert très souvent une étape de purification et de préconcentration avant une analyse via des méthodes chromatographiques. Dans cette optique, des supports d’extraction basés sur des mécanismes de reconnaissance moléculaire ont été développés et appliqués à l’extraction de composés cibles rendant ainsi l’analyse plus sensible et plus fiable. Ces supports sélectifs peuvent entre autres résulter de l’immobilisation de biomolécules tels que les anticorps ou les aptamères (i.e. des oligonucléotides présentant une séquence capable de se lier spécifiquement à une molécule). Cette étape de traitement de l’échantillon est particulièrement nécessaire lorsqu’il s’agit de développer des systèmes séparatifs miniaturisés, tels que les microsystèmes séparatifs sur puce, du fait de la diminution de la résolution qui résulte de l’utilisation d’un canal de séparation de faible longueur. Dans ce contexte, ce projet de recherche a consisté à développer des systèmes bioanalytiques miniaturisés pour l’analyse de petites molécules ou protéines dans des échantillons complexes. Pour développer ces systèmes, la synthèse d’un monolithe hybride organique-inorganique in situ dans des capillaires de 100 µm d.i. a, dans un premier temps, été optimisée via une approche sol-gel puis caractérisée en termes de répétabilité. Dans une deuxième partie, deux toxines modèles de faible poids moléculaire ont été choisies : la microcystine-LR (MC-LR) et l’ochratoxine A (OTA). Des anticorps monoclonaux et des aptamères, spécifiques de l’une et l’autre des toxines ont ensuite été greffés sur des monolithes en capillaire. Les immuno- et oligoadsorbants miniaturisés obtenus (respectivement mIS et mOS) ont été couplés en ligne avec la nanoLC. La rétention spécifique des toxines cibles sur les mIS et mOS a été démontrée dans l’eau pure. La répétabilité de la synthèse et du greffage a été évaluée et la capacité de chacun des supports miniaturisés a été déterminée. Enfin, mIS et mOS ont été appliqués avec succès à l’extraction sélective de la MC-LR et de l’OTA à partir d’extraits de cultures de cyanobactéries, d’eaux environnementales ainsi que d’échantillons de bière dopés. Dans un troisième temps, de façon à transposer les outils sélectifs développés à l’analyse de protéines, des microréacteurs enzymatiques (IMER) ont été préparés par greffage de deux enzymes protéolytiques (pepsine et trypsine) sur des monolithes. Ces outils ont ensuite été couplés avec la nanoLC-MS² pour l’analyse d’une protéine modèle, le cytochrome C. Les rendements de digestion sur IMER se sont avérés présenter une bonne répétabilité. Toutefois, l’efficacité de la digestion sur les IMER à base de pepsine reste à ce jour insuffisante et nécessite de réadapter la procédure de greffage et/ou de digestionThe analysis of ultra-traces from complex matrices (environmental, foodstuff or biological) often requires a step of purification and preconcentration before their analysis by chromatographic separation methods. Therefore, extraction sorbents based on a molecular recognition mechanism can be developed and used for the selective extraction of target molecules thus rendering their quantitative analysis in complex samples more reliable and sensitive. These extraction sorbents may result, among others, from the immobilization of biomolecules such as antibodies and aptamers (i.e. oligonucleotides whose sequence is specific for a target molecule). This selective sample pretreatment step is particularly necessary when developing miniaturized devices such as separative microsystems on chip because of the decrease of the resolution that results from the use of a shorter length separation channel. In this context, the aim of our study was to develop miniaturized bioanalytical devices for the analysis of small molecules or proteins in complex samples. For the development of these devices, in-situ synthesis of a porous hybrid organic-inorganic monolith in capillaries (100 µm i.d.) by sol-gel approach was firstly optimized and characterized in terms of repeatability. Secondly, two model toxins of low molecular weight were chosen: microcystin-LR (MC-LR) and ochratoxin A (OTA). Monoclonal antibodies and aptamers specific to one and the other target molecules were then grafted on the monolithic capillaries. The resulting miniaturized immunosorbent (mIS) and oligosorbent (mOS) were then coupled on-line to nanoLC. Specific retention of MC-LR and OTA on the mIS and the mOS, respectively, was demonstrated in pure water. Synthesis repeatability and capacity of the miniaturized sorbents were evaluated. Finally, these miniaturized tools were applied to the selective extraction of MC-LR or OTA from complex samples, i.e. blue-green algae extracts, environmental waters or beer. In a third part, immobilized enzyme reactors (IMERs) were prepared by grafting two proteolytic enzymes (pepsin and trypsin) on monoliths in order to transpose the developed selective tools to the analysis of proteins. These IMERs were then coupled on-line to nanoLC-MS² for the analysis of a model protein, cytochrome C. Digestion yields on IMERs presented a good repeatability. However, digestion efficiency on the pepsin-based IMERs remains so far insufficient and grafting or digestion procedure needs to be readjusted
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Belhadj-Kaabi, Faten. "Développement et caractérisation de polymères à empreintes moléculaires pour l'extraction de composés pharmaceutiques à l'état de traces dans les fluides biologiques : miniaturisation du format de synthèse et couplage en-ligne à la nano-chromatographie." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066542.
Анотація:
L’analyse et la quantification d’un ou plusieurs analytes à partir d’un échantillon complexe (fluides biologiques, effluents industriels, …) reste une problématique récurrente en chimie analytique. La présence de nombreux interférents dans ces matrices complexes ainsi que la recherche des composés en concentration inférieure aux seuils de sensibilité des détecteurs nécessitent le recours à un traitement de l’échantillon afin d’éliminer un maximum de composés interférents et de ne concentrer que les composés d’intérêt. L’extraction sur phase solide (Solid phase extraction, SPE) constitue aujourd’hui un outil puissant pour le développement de méthodes d’analyse de composés à l’état de traces. De nombreux supports ont été développés ces dernières années rendant ainsi possible l’extraction et la concentration de la plupart des analytes recherchés. Cependant, la majorité de ces supports mettent en jeu des interactions hydrophobes qui conduisent à la co-extraction de composés de polarité similaire à celle des analytes ciblés. Ce problème d’interférences concerne aussi bien le traitement des échantillons environnementaux que les échantillons biologiques ou alimentaires. Pour pallier ce manque de sélectivité, des supports sélectifs basés sur un mécanisme de reconnaissance moléculaire ont été développés : les immunoadsorbants et les polymères à empreintes moléculaires (Molecularly imprinted polymers, MIP). La synthèse des MIP consiste en la création d’images complémentaires en termes de structure et de fonctionnalités chimiques d’une molécule cible au sein d’un polymère synthétique. Leur omniprésence en tant que support SPE durant ces deux dernières décennies implique une activité de recherche intense et c’est dans ce contexte que s’inscrit cette thèse. Elle porte sur la synthèse et la caractérisation des polymères à empreintes moléculaires en vue de l’extraction sélective de composés pharmaceutiques du plasma. Les molécules étudiées, le palirodène, les endocannabinoïdes et l’alfuzosine. Compte de tenu de la demande importante de l’identification de composés pharmaceutiques à partir du plasma, cette matrice a été choisie pour la présente étude. Actuellement, on assiste à une miniaturisation de l’ensemble du système analytique intégrant les trois étapes de l’analyse : traitement de l’échantillon, séparation et détection. Cette évolution se justifie par les très faibles volumes d’échantillons disponibles, le coût de certains réactifs et par la nécessité croissante de réduire les temps d’analyse pour répondre rapidement à une urgence médicale ou pour augmenter le débit d’analyse. Le développement de microsystèmes analytiques intégrés (Micro total analytical system, µTAS) est en pleine émergence. Ainsi, l’intégration des MIP aux dispositifs miniaturisés s’avère intéressante. Les différentes approches permettant leur intégration sont étudiées de manière approfondie. En s’appuyant sur les travaux relatés dans la littérature, la synthèse des MIP a été miniaturisée au format capillaire, de dimensions similaires à celles des micro-canaux des µ-TAS. Ensuite, le support obtenu a été couplé avec la nano-LC pour l’extraction sélective d’un composé pharmaceutique du plasma
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Nouri, Bahia. "Dosage des pesticides dans l'eau : mise au point et application des méthodes de dosage par extraction liquide-solide et analyse par chromatographie en phase liquide et en phase gazeuse." Montpellier 1, 1997. http://www.theses.fr/1997MON13501.
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Arrambide, Cruz Carlos. "Méthodologies de synthèse de résines formo-phénoliques chélatantes : vers une extraction solide-liquide optimisée des métaux stratégiques." Thesis, Montpellier, 2017. http://www.theses.fr/2017MONTT169.
Анотація:
L’extraction d’éléments d’intérêt (terres rares, métaux lourds, métaux de transition, radionucléides) de de minerais conventionnels ou non conventionnels (mines urbaines) et d’effluents industriel ou nucléaire est un enjeu majeure dans les procédés d’extraction, de recyclage et/ou de décontamination.Un grand nombre de solides organiques et inorganiques, chélatants ou échangeurs d’ions, ont été développés pour un tri ionique sélectif par procédé solide/liquide.L’introduction covalente de ligands spécifiques dans le squelette de la résine permet d’augmenter la sélectivité vis-à-vis d’une cible métallique par la nature des agents de complexation, leurs sites de chélation et leur rigidité.L’objectif de cette thèse recouvre d’une part la synthèse de systèmes chélatant réactifs, leur polymérisation pour la préparation des résines « super »chélatantes et d’autre part, l’évaluation des polymères pour l’extraction/séparation d’ions, les terres rares étant plus particulièrement ciblées.A partir de résines formo-phénolique incorporant du catéchol et la 8-hydroxyquinoléine qui sont des précurseurs phénoliques, nous avons pu montrer que la récupération sélective du germanium été possible vis-à-vis du silicium ou du zinc en fonction de leur proportion dans la matrice polymérique.La synthèse des précurseurs phénoliques intégrant des ligands comme l’acide diglycolamique et les diglycolamides a permis la mise en œuvre de résine pour la récupération des terres rares. Une étude sur la compréhension de la synthèse des résines ainsi que leurs performances d’extraction a ainsi été réalisée et a pu mettre en évidence le potentiel de ces résines pour la récupération et valorisation des terres rares.Une ouverture vers d’autres possibilités de synthèses de ce type de résines (matériaux poreux, sous forme de mousse…) est également proposée pour permettre d’augmenter les surfaces de contacts lors des extractions solide-liquide et ainsi augmenter les performances de ces matériauxExtraction of specific targeted species (rare earth, heavy metals, transition metals, radionuclides) from industrial (mining deposit and urban mining) and nuclear effluents is an important issue in the recycling and / or decontamination processes. A large number of organic and inorganic solids, chelating or ion-exchanging materials, have been developed for selective ionic separation by solid / liquid process. Metal-specific ligands incorporate in the structure of the resin itself is an interesting way to perform ion separation taking the advantage of the selectivity of chelating agents. The aims of this project are firstly the synthesis of chelating original systems and then prepare specific ion exchange resins.From formo-phenolic resins incorporating catechol and 8-hydroxyquinoline, we have been able to show that the selective recovery of germanium from silicon or zinc was possible, , depending on their proportion of each phenolic precursors in the polymeric matrix.The synthesis of the phenolic precursors integrating ligands such as diglycolamic acid and diglycolamides allowed the use of resin for the recovery of rare earths elemnets. A study on the understanding of the synthesis of resins as well as their performance of extraction was thus realized and was able to highlight the potential of these resins for the recovery and valorization of the rare earths elements.An opening towards other possibilities of synthesis of this type of resins (porous materials, in the form of foam, etc.) is also proposed in order to increase the contact surfaces during solid-liquid extractions and thus increase the performance of these materials
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Delaunay-Bertoncini, Nathalie. "Developpement d'immunoadsorbants à base d'anticorps monoclonaux pour l'extraction selective de familles de micropolluants organiques contenus dans des matrices complexes : comparaison avec des polymères à empreinte moléculaire." Paris 6, 2001. http://www.theses.fr/2001PA066507.
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Madru, Benjamin. "Développement d'un support d'extraction sélective à base d'aptamères : synthèse, caractérisation et application à des matrices complexes." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2010. http://pastel.archives-ouvertes.fr/pastel-00538840.
Анотація:
L'analyse de composés à l'état de traces dans des échantillons complexes tels que les fluides biologiques, les matrices environnementales ou les denrées alimentaires nécessite une étape de purification avant analyse afin de limiter la présence d'effets de matrice. Les supports conventionnels d'extraction sur phase solide, bien qu'étant très efficaces pour préconcentrer l'échantillon, conduisent souvent à la co-extraction de composés interférents. Afin de pallier ce manque de sélectivité, des supports sélectifs fondés sur des mécanismes de reconnaissance moléculaire ont été développés. Les immunoadsorbants, reposants sur l'utilisation d'anticorps dirigés contre l'analyte et immobilisés sur un support solide, et les polymères à empreintes moléculaires qui possèdent des cavités spécifiques complémentaires d'une molécule empreinte, ont déjà démontré un fort potentiel pour l'extraction sélective de composés de matrices complexes. Un troisième type de support d'extraction sélective également fondé sur un mécanisme de reconnaissance moléculaire exploitant les propriétés des aptamères a été développé lors de cette étude. Les aptamères sont des oligonucléotides capables de fixer de manière spécifique une molécule avec une affinité comparable à celle des anticorps. Un aptamère sélectionné pour reconnaître la cocaïne a été choisi comme aptamère modèle pour cette étude de faisabilité. Différents supports d'immobilisation ont été évalués et les oligoadsorbants obtenus ont été caractérisés en termes de rétention spécifique et non spécifique, de taux de greffage, et de capacité. La sélectivité du support le plus performant en milieu pur a ensuite été évaluée en réalisant l'extraction de la cocaïne de plasma et de sang. L'analyse chromatographique des extraits obtenus a conduit à des chromatogrammes dépourvus de co-élutions, contrairement à ceux issus des traitements généralement employés, démontrant ainsi l'apport en purification de l'oligoextraction. Ce développement a ensuite été transposé avec succès à un autre aptamère, l'aptamère anti-ochratoxine A. L'oligoadsorbant obtenu s'est montré très rétentif, du fait de sa forte affinité, et a permis l'extraction sélective de l'ochratoxine A du vin. Les résultats obtenus sont très similaires à ceux obtenus avec un immunoadsorbant. De plus, les procédures d'extraction s'avèrent beaucoup plus simples à développer que pour les polymères à empreintes moléculaires.
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Tachon, Romain. "Apport de la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse pour l'analyse de traces d'explosifs : optimisation des conditions d'extraction et de purification pour le traitement d'échantillons récupérés sur une scène d'attentat." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066669.
Анотація:
Les investigations menées après attentat par les services de police technique et scientifique ont pour but d’identifier la nature de la charge explosive employée mais la tâche peut se révéler particulièrement difficile d’un point de vue analytique. En effet, les résidus de charge explosive sont le plus souvent présents à l’état de traces dans des matrices variées et difficiles à traiter d’où la nécessité de disposer de protocoles analytiques performants. Ces travaux ont tout d’abord consisté à développer une méthode d’analyse basée sur le couplage entre chromatographie en phase liquide et spectrométrie de masse. L’utilisation d’un support de séparation en carbone graphite poreux et l’optimisation du couplage a rendu possible l’analyse simultanée des explosifs organiques les plus couramment rencontrés. Les effets de matrice sur les performances de la méthode ont ensuite été évalués puis éliminés en partie avec la mise en place d’une procédure de purification de l’échantillon par extraction sur phase solide. Enfin, un protocole général de traitement de l’échantillon incluant les étapes d’extraction, de purification et de concentration a été proposé puis validé avec l’analyse d’échantillons réels obtenus lors de simulations d’attentats avec engins explosifs improvisés
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Comte, Julien. "Mise au point d’une méthodologie d’échantillonnage utilisant la micro-extraction sur phase solide pour la quantification de goudrons sur des procédés de thermolyse de la biomasse." Grenoble 1, 2008. http://www.theses.fr/2008GRE10152.
Анотація:
La gazéification de la biomasse par voie thermochimique apparaît aujourd'hui comme une voie prometteuse pour la production de H2 et CO utilisés dans la synthèse de biocarburants. Le traitement thermique subi par la biomasse entraîne toutefois la production de composés indésirables appelés goudrons (hydrocarbures lourds) dont la teneur dans les gaz de synthèse doit être inférieure à 0,1 mg. Nm-3. Le suivi de la quantité de goudrons produits est, par conséquent, indispensable. Dans ce contexte, une méthodologie d'échantillonnage utilisant la SPME (micro-extraction sur phase solide) a été mise au point pour la quantification de "composés types" représentatifs de la quantité globale de goudrons émis principalement par deux pilotes de gazéification et de pyrolyse. L'introduction de la notion de composés types est destinée d'une part, à simplifier la méthodologie d'échantillonnage et d'autre part, à s'affianchir des éventuelles limitations liées au système de prélèvement des effluents gazeux développé dans le cadre de ce travail pour autoriser l'extraction par SPME. Pour les deux pilotes, 15 composés types ont été retenus. Leur quantification a d'abord nécessité l'étalonnage préalable des fibres SPME (revêtue de polydimethylsiloxane) qui a permis, à plusieurs températures, d'établir les profils d'absorption et de déterminer les coefficients de partage. L'influence des conditions d'extraction sur l'absorption ainsi que les performances du couplage SPME-chromatographie gazeuse ont également été évaluées. De manière à éviter les étalonnages répétitifs, un modèle basé sur la théorie des équilibres thermodynamiques a été développé pour déterminer la valeur des coefficients de partageThe gasification of biomass by thermochemical processes is presently a promising method of producting H2 and CO which are used for synthesis of biogasoil. However, the thermal treatment of biomass leads to the production of unwanted compounds referred to as "tar" (heavy hydrocarbons) of which the content in syngas must to be inferior to 0. 1 mg. Nm-3. Knowledge oftar content is consequently needed. To this end, a sampling methodology using SPME (Solid Phase MicroExtraction) was developed for the quantification of "model compounds" which represents the total tar content mainly emitted by two gasification or pyrolysis processes. Introduction of the notion of model compounds is intended to simplify the sampling methodology on one hand to overcome the possible limitations related to the sampling system developed in this work to allow SPME extraction on the other. For the two thermochemical processes,15 model compounds were selected. The quantification of these compounds required calibration of SPME fibres (polydimethylsiloxane coating) which allow us, over a range oftemperatures, to establish the absorption profiles and to determine distribution coefficients. Influence of the sampling conditions on the absorption and performance of the coupled SPME-gas Chromatography were also evaluated. Ln order to avoid repetitive calibrations, a model based on thermodynamic considerations was developed to speed-up determination of the distribution coefficient
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Guyomard, Philippe. "Étude de faisabilité d'un extrudeur bivis en pressage-extrusion de graines oléoprotéagineuses." Compiègne, 1994. http://www.theses.fr/1994COMPD753.
Анотація:
Cette thèse est consacrée à l'étude d'un nouveau procédé de trituration de graines oléagineuses par une technique de pression-extrusion. Trois objectifs ont été fixés : le premier a été d'obtenir un équipement compact, intégrant l'ensemble des opérations de prétraitements thermomécaniques et de pressage, le deuxième de posséder un équipement multi-graines (colza, tournesol, ricin) et le troisième que cet équipement soit multifonctions (pressage, texturation). L'ensemble des opérations de trituration des graines oléagineuses est tout d'abord décrit, notamment les opérations de prétraitements de cuisson et de pressage. Puis sont présentées les innovations technologiques des dix dernières années, l'expandeur, la presse à froid Krupp et l'extrudeur-presse. Cette revue des procédés est accompagnée d'une étude paramétrique du pressage mécanique. Les effets des principaux paramètres de pressage du pressage hydraulique et du pressage en continu (presse monovis et bivis) sont examinés. Cette étude est complétée par un aperçu des aspects micro et macroscopiques de la distribution des gouttelettes dans les graines et des mécanismes mis en jeu lors du pressage. A partir des observations établies concernant les études des procédés et du pressage mécanique permettant d'optimiser l'extraction de l'huile des graines, deux technologies issues de l'extrudeur-presse bivis ont été élaborées puis étudiées, et ceci en fonction de l'influence de nombreux paramètres opératoires, notamment celui de l'arrangement de configuration des vis. La première concerne l'utilisation de la technologie bivis en zone de pressage, engendrant un pressage axial. Les résultats obtenus ont été insatisfaisants au niveau des performances d'extraction. En revanche la technologie associant des éléments de vis copénétrants et indépendants en zone de pressage, engendrant un pressage axial et radial, a permis d'atteindre les trois objectifs précédemment cités. Les perspectives et opportunités technico-économiques de ce procédé ont été traitées sur les plans national et international, par rapport aux marches des oléagineux et des équipements de trituration. Elles laissent entrevoir de nombreuses possibilités d'utilisation soit en pré-pression soit en pression unique.
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Casas, Mora Alba. "A catch-and-release purification method to simplify the synthesis of cysteine-rich peptides." Thesis, Orléans, 2017. http://www.theses.fr/2017ORLE2050/document.
Анотація:
Bien que la synthèse peptidique en phase solide (SPPS) soit maintenant une technique mature et très largement popularisée pour des peptides simples, certaines séquences restent encore compliquées à produire, comme les peptides riches en ponts disulfure (DRPs). Ces produits naturels, ligands sélectifs d’un grand nombre de cibles thérapeutiques, sont des outils pharmacologiques de premier ordre et sont considérés comme de bons candidats médicaments. La proportion importante de cystéines dans leur séquence (plus de 10%) leur confère des propriétés remarquables, mais limite aussi leur synthèse,conduisant à des purifications HPLC délicates, associées à des rendements faibles et une pureté médiocre.Dans l’optique de simplifier la production de DRPs par voie chimique, notre but est de proposer une méthode de purification non-chromatographique. Pour cela, nous avons développé un bras N-terminal conçu pour être complètement compatible avec les peptides riches en cystéines: Boc-Cys(Trt)-1-{6-[1,3-diméthyl-2,4,6(1H,3H,5H)trioxopyrimidine-5-ylidène]hexyle}. A la fin de l’élongation sur support solide, ce bras est introduit sélectivement à l'extrémité N-terminale du peptide cible, sans réagir avec les peptides tronqués acétylés qui constituent les principales impuretés de la SPPS. Après coupure de la résine SPPS, le peptide cible est immobilisé sur un second support solide par le biais d’une réaction de ligation chimique native(NCL). Les peptides tronqués sont alors éliminés par simple filtration, puis le peptide cible est relargué en solution par coupure du bras N-terminal. Ayant comme objectif d’élargir par la suite notre stratégie à la synthèse de très longs DRPs via l’assemblage de multiples segments peptidiques par NCLs successives enphase solide, nous avons étudié en détail la stabilité et les conditions de coupure du bras.La méthode a été appliquée à la purification de deux séquences naturelles riches en cystéines et biologiquement pertinentes : AvBD2 (36 AA), un peptide antimicrobien appartenant à la famille des β défensines aviaires et Bv8 (77 AA) un peptide d’amphibien de la famille des prokinéticinesAlthough solid phase peptide synthesis (SPPS) is a mature and widely popularized technique for simple peptides, some sequences are still complicated to produce, such as disulfide-rich peptides (DRPs). These natural products are able to selectively bind a wide number of therapeutically relevant targets, hence they are considered as promising drug candidates and pharmacological tools. The large proportion of cysteines in their sequence (more than 10%) confers them remarkable properties, but also limits their synthesis, lead ingto delicate HPLC purifications associated with low yields and poor purity.With the aim to simplify the chemical production of DRPs, we have developed an N-terminal linker: Boc-Cys(Trt)-1-{6-[1,3-dimethyl-2,4,6(1H,3H,5H)trioxopyrimidine-5-ylidene]hexyl}, which can be used for non chromatographiccatch-and-release purifications. It has been designed to be completely compatible with unprotected cysteine-containing peptides. Following solid phase elongation, this linker is selective lyintroduced at the N-terminus of the target peptide, leaving unreacted truncated acetylated peptides which are the main co-products of SPPS. After cleavage from the SPPS resin, the target peptide is immobilized on a second solid support through native chemical ligation (NCL). The truncated peptides are then removed by simple filtration. Cleavage of the linker finally releases the purified peptide into solution.Having in mind the future extension our strategy to the synthesis of very long DRPs through successive solid-supported NCLs of multiple peptide segments, we have studied in detail the stability and cleavage conditions of the N-terminal linker.To explore the scope and limitations of the method, it has been applied to the purification of two biologically-relevant cysteine-rich peptide sequences: chicken AvBD2 (36 AA), a β defensin antimicrobial peptide, and Bv8 (77 AA), a prokineticin-like peptide from yellow-bellied toad
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Gervais, Gaël. "Rôle des paramètres opératoires sur la fiabilité d’une analyse multi-résidus de micropolluants dans l’eau : extraction sur phase solide, séparation par chromatographie liquide à très haute pression et détection par spectrométrie de masse en tandem." Rennes 1, 2010. http://www.theses.fr/2010REN1S057.
Анотація:
La présence de micropolluants est un aspect majeur pour évaluer la qualité des eaux. Depuis quelques années les méthodes analytiques combinant l’extraction sur phase solide et la séparation par chromatographie liquide couplée à la détection par spectrométrie de masse en tandem se sont imposées pour mesurer une large gamme de micropolluants. A partir d’un exemple d’analyse multi-résidus de pesticides et de composés perturbateurs endocriniens dans les eaux, il a été recherché l’influence des différents paramètres de l’extraction, de la séparation, de la détection et du retraitement des données sur la qualité de l’analyse (répétabilité, fiabilité, stabilité, reproductibilité…). Chacune des étapes de la méthode d’analyse ont été optimisées et tous les paramètres qui influencent le signal des substances détectées avec ce type d’appareillage ont été discutés. Une réflexion globale sur l’origine des variations des signaux observées et sur la pertinence des solutions qui peuvent être apportées a été menée. Des exemples d’applications en milieu réel et en analyse inter-laboratoire des protocoles développés pour la mesure des pesticides valideront les solutions adoptées. Les clés et les outils permettant de maîtriser les résultats d’analyse des micropolluants dans l’eau par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse sont ainsi présentés dans ce travailThe occurrence of micropollutants is a major aspect in water quality assessment. For the last few years, analytical methods combining solid-phase extraction, liquid chromatography and tandem mass spectrometry has become the main technique for the analysis of a broad range of micropollutants. On the basis of some pesticides and endocrine disruptor compounds in water analysis, impacts of the parameters: extraction, separation, detection and data processing, on the analysis reliability (repeatability, accuracy, stability, reproducibility…) have been studied. Each step of the analytical method has been optimized and the parameters, affecting substance signals have been discussed. A global reflection upon the cause of signal variations and the possible answers to apply has been conducted. Proposed answers were validated by real matrix analysis and inter-laboratory studies. This work presents the tools and the key-points to ensure the results obtained by liquid chromatography/tandem mass spectrometry analysis
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Mokh, Samia. "Optimisation de techniques analytiques pour caractériser les antibiotiques dans les systèmes aquatiques." Electronic Thesis or Diss., Bordeaux 1, 2013. http://www.theses.fr/2013BOR14950.
Анотація:
Les antibiotiques sont des polluants présents dans les écosystèmes aquatiques, réceptacles ultimes des substances anthropiques. L’étude de ces composés porte sur leur rémanence dans le milieu ou leurs effets sur des organismes naturels. De nombreux efforts ont été faits à l’échelle mondiale pour l’évaluation de la qualité environnementale des différentes ressources en eau pour la survie des espèces aquatiques mais aussi pour la consommation humaine et le risque sanitaire lié. Dans ce but, l’optimisation des techniques analytiques pour ces composés dans les systèmes aquatiques demeure une nécessité. Notre objectif est de développer des méthodes d’extraction et de détection pour 12 molécules appartenant à la famille des aminoglycosides et de la colistine dans les eaux des stations d’épuration et les eaux hospitalières. L’absence des méthodes d’analyse pour ces composés ainsi que le manque des études permettant leur détection dans l’eau sont les raisons de leur étude. L’Extraction sur Phase Solide (SPE) en mode classique (hors ligne) ou en ligne, suivie d’une analyse par la Chromatographie Liquide couplée à la Spectrométrie de Masse (LC/MS/MS) est la méthode la plus couramment employée pour ce type d’analyse. Les paramètres sont optimisés et validés afin d’assurer les meilleures conditions utilisées dans les analyses environnementales. Cette technique a été appliquée sur des échantillons réels des eaux des stations d’épuration à Bordeaux et au LibanAntibiotics are pollutants present in aquatic ecosystems ultimate receptacles of anthropogenic substances. These compounds are studied as their persistence in the environment or their effects on natural organisms. Numerous efforts have been made worldwide to assess the environmental quality of different water resources for the survival of aquatic species, but also for human consumption and health risk related. Towards goal, the optimization of analytical techniques for these compounds in aquatic systems remains a necessity. Our objective is to develop extraction and detection methods for 12 molecules of aminoglycosides and colistin in sewage treatment plants and hospitals waters. The lack of analytical methods for analysis of these compounds and the deficiency of studies for their detection in water is the reason for their study. Solid Phase Extraction (SPE) in classic mode (offline) or online followed by Liquid Chromatography analysis coupled with Mass Spectrometry (LC/MS/ MS) is the most method commonly used for this type of analysis. The parameters are optimized and validated to ensure the best conditions for the environmental analysis. This technique was applied to real samples of wastewater treatment plants in Bordeaux and Lebanon
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Betton, Clélia. "Nouvelle stratégie d'extraction et de purification de l'hydrazine N2H4 de grade spatial via le procédé Raschig : synthèse, modélisations cinétiques, équilibres entre phases et schémas de procédé." Thesis, Lyon 1, 2014. http://www.theses.fr/2014LYO10366/document.
Анотація:
Ce travail, effectué dans le cadre d’un financement CIBLE-Région Rhône-Alpes, en partenariat avec le groupe HERAKLES-SAFRAN, a pour objectif la mise au point d’un nouveau procédé d’extraction et de purification de l’hydrazine N2H4, pour des applications spatiales. Ce monergol se doit d'être de très haute pureté, avec une composition massique supérieure à 99,5 % en hydrazine et un taux en carbone inférieur à 30 ppm. La première partie de cette étude nous a permis d’identifier les réactions de formation et de dégradation en vue d’établir un modèle cinétique global et de déterminer les paramètres directeurs de la synthèse. La connaissance des compositions des liqueurs réactionnelles fonction des conditions opératoires de la synthèse, nous a permis de positionner, au sortir des réacteurs, le point de mélange global dans les diagrammes de phases ternaires et quaternaires en vue de définir les conditions optimales d’extraction. La seconde partie concerne l'étude thermodynamique détaillée de la nouvelle voie d'extraction, qui consiste, non pas à extraire l’ammoniac en excès du milieu réactionnel mais à le maintenir, in situ, pour extraire l’hydrazine lors de la démixtion liquide-liquide par effet de solvant. L’objectif, in fine, est d’obtenir une phase ammoniacale quasi-anhydre, de manière à éliminer les multiples distillations et opérations complexes d’extraction et de purification rencontrées dans le procédé traditionnel. Cette nouvelle stratégie repose sur l’existence d’une lacune de miscibilité à l’état liquide, dans les systèmes ternaire H2O-NH3-NaOH et quaternaire H2O-N2H4-NH3-NaOH sous une pression comprise entre 15 et 20 bar. La dernière partie aborde le volet génie des procédés. L’exploitation pertinente du modèle cinétique et des diagrammes de phases impliqués nous a permis de déterminer les conditions optimales de synthèse et d’isolement, de calculer la composition des flux de matière au sortir de chaque opération unitaire et de les comparer aux procédés industriels antérieurs. Les schémas de procédé correspondant à chaque option ont ainsi été établis et analysés au niveau coût, sécurité et spécifications du produit utile obtenuThis work, funded by the CIBLE-Rhône-Alpes Region, in partnership with the HERAKLES-SAFRAN group, aims to develop a new method for extracting and purifying hydrazine N2H4, for space applications. This monopropellant must be of very high purity, with an upper mass composition of 99.5% hydrazine and a carbon content of less than 30 ppm.The first part of this study allowed us to identify the reactions of formation and degradation to establish a global kinetic model and determine the guiding parameters of synthesis. Knowledge of the compositions of reaction liquors function of operating conditions of the synthesis, has allowed us to position, on leaving the reactor, the overall mixing point in the diagrams of ternary and quaternary phases in order to define the optimum extraction conditions.The second part concerns the detailed thermodynamic study of the new method of extraction, which is, not to extract excess ammonia from the reaction mixture but maintain the in situ to extract the hydrazine in the liquid phase separation -liquid by solvent effect. The aim ultimately is to get a virtually anhydrous ammonia phase so as to eliminate multiple distillations and complex extraction and purification encountered in the traditional process. This new strategy is based on the existence of a miscibility gap in the liquid state, in the H2O-NH3-H2O-NaOH ternary system and N2H4-NH3-NaOH quaternary system at a pressure of between 15 and 20 bar.The last part deals with the process engineering component. The operation of kinetic model and phase diagrams involved allowed us to determine the optimum conditions of synthesis and isolation, to calculate the composition of the material flow at the end of each unit operation and compare them with previous industrial processes . The process diagrams for each option have been prepared and analyzed at cost, safety and specifications obtained useful product
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Mokh, Samia. "Optimisation de techniques analytiques pour caractériser les antibiotiques dans les systèmes aquatiques." Thesis, Bordeaux 1, 2013. http://www.theses.fr/2013BOR14950/document.
Анотація:
Les antibiotiques sont des polluants présents dans les écosystèmes aquatiques, réceptacles ultimes des substances anthropiques. L’étude de ces composés porte sur leur rémanence dans le milieu ou leurs effets sur des organismes naturels. De nombreux efforts ont été faits à l’échelle mondiale pour l’évaluation de la qualité environnementale des différentes ressources en eau pour la survie des espèces aquatiques mais aussi pour la consommation humaine et le risque sanitaire lié. Dans ce but, l’optimisation des techniques analytiques pour ces composés dans les systèmes aquatiques demeure une nécessité. Notre objectif est de développer des méthodes d’extraction et de détection pour 12 molécules appartenant à la famille des aminoglycosides et de la colistine dans les eaux des stations d’épuration et les eaux hospitalières. L’absence des méthodes d’analyse pour ces composés ainsi que le manque des études permettant leur détection dans l’eau sont les raisons de leur étude. L’Extraction sur Phase Solide (SPE) en mode classique (hors ligne) ou en ligne, suivie d’une analyse par la Chromatographie Liquide couplée à la Spectrométrie de Masse (LC/MS/MS) est la méthode la plus couramment employée pour ce type d’analyse. Les paramètres sont optimisés et validés afin d’assurer les meilleures conditions utilisées dans les analyses environnementales. Cette technique a été appliquée sur des échantillons réels des eaux des stations d’épuration à Bordeaux et au LibanAntibiotics are pollutants present in aquatic ecosystems ultimate receptacles of anthropogenic substances. These compounds are studied as their persistence in the environment or their effects on natural organisms. Numerous efforts have been made worldwide to assess the environmental quality of different water resources for the survival of aquatic species, but also for human consumption and health risk related. Towards goal, the optimization of analytical techniques for these compounds in aquatic systems remains a necessity. Our objective is to develop extraction and detection methods for 12 molecules of aminoglycosides and colistin in sewage treatment plants and hospitals waters. The lack of analytical methods for analysis of these compounds and the deficiency of studies for their detection in water is the reason for their study. Solid Phase Extraction (SPE) in classic mode (offline) or online followed by Liquid Chromatography analysis coupled with Mass Spectrometry (LC/MS/ MS) is the most method commonly used for this type of analysis. The parameters are optimized and validated to ensure the best conditions for the environmental analysis. This technique was applied to real samples of wastewater treatment plants in Bordeaux and Lebanon
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Hajouj, Zahira. "Mélanges mécaniques de phases greffées sur gel de silice. Application en chromatographie planaire et en extraction en phase solide vis-à vis d'hydrocarbures aromatiques polycondensés et d'azaarènes, polluants de l'environnement." Aix-Marseille 3, 1997. http://www.theses.fr/1997AIX30076.
Анотація:
Des phases mixtes c8-diol et cn-c18 melangees mecaniquement a partir de phases greffees sur gel de silice ont ete utilisees pour la c. C. M. Bidimensionnelle. Les mecanismes developpes par ces phases ont ete determines en utilisant des hydrocarbures aromatiques polycondenses. Les comparaisons entre les phases c8-diol et cn-c18 ont revele des comportements aussi bien identiques que differents. En outre, des cartouches pour l'extraction en phase solide remplies de phases mixtes : c18 et acide propylsulfonique greffees sur gel de silice melangees mecaniquement ont ete employees pour l'extraction d'un echantillon aqueux contenant des polluants de l'environnement. L'influence de differents parametres ainsi que la methode de preparation des phases mixtes et la nature d'eau utilisee ont ete examines.
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Desgranges, Nathalie. "Développement d'échantillonneurs passifs de type POCIS pour l'évaluation de la contamination en pesticides des eaux de bassins versants languedociens." Thesis, Bordeaux, 2015. http://www.theses.fr/2015BORD0041/document.
Анотація:
Malgré une sensible baisse des ventes depuis quelques années, la France reste le premier utilisateur européen de phytosanitaires. Ceci n’est pas sans conséquences sur l’environnement et les organismes non visés par ces produits. De nombreuses études ont permis d’une part de mieux comprendre les phénomènes de transfert des pesticides dans les compartiments eau-air sols et d’autre part de mettre en évidence leur contamination. Les données concernant l’eau sont plus nombreuses du fait de son statut de réceptacle ultime des pollutions.et des normes établies par les textes réglementaires. La Directive Cadre européenne sur l’Eau (DCE) adoptée en 2000 vise à atteindre le bon état chimique et écologique des eaux d’ici 2015 avec une obligation de résultats. Le bon état chimique dépend du respect des normes de qualité environnementales (NQE) établies notamment pour 24 pesticides. En 2012, 5% des points de mesure en cours d’eau et 19% des points de mesure en eaux souterraines ne respectent pas ces NQE.Le Languedoc Roussillon est depuis de nombreuses années la première région viticole de France et souffre d’une pression phytosanitaire importante. En 2014, un rapport de l’Agence Régionale de Santé (ARS) fait même état de l’utilisation encore récente de pesticides interdits (simazine, terbuthylazine…) depuis le début des années 2000. L’ARS a de plus affirmé que la plupart des cas de non-conformité avérés pouvaient être rattachés à la présence d’activité agricole dans le bassin versant du captage.Remédier à ces contaminations passe par le suivi de la qualité des eaux et la caractérisation de la pollution. Les outils actuels s’avèrent ne pas être toujours représentatifs de cette pollution ;de nouveaux outils sont donc mis au point. L’étude présentée ici porte sur l’utilisation de l’échantillonnage passif de type POCIS (Polar Organic Chemical Integrative Sampler) pour le suivi de la contamination en pesticides de trois bassins versants languedociens : Paulhan,Puissalicon, Roujan.Dans un premier temps, l’étude des limites possibles du dispositif POCIS a été faite pour évaluer son applicabilité dans les conditions d’exposition imposées par le terrain. Le comportement des molécules au sein de l’outil a été étudié pour une meilleure compréhension des phénomènes de diffusion qui s’y produisent. Ces études ont mené à la mise en place de calibrations en laboratoire en conditions contrôlées. [...] La mise en place des dispositifs POCIS sur les trois sites d’études a mis en évidence la prédominance de pesticides utilisés en viticulture et a montré tout l’intérêt de l’outil d’un point de vue qualitatif. La comparaison de l’outil avec l’échantillonnage automatisé montre des disparités entre concentration réelle et concentration estimée via le POCIS. Ce dernier reste à améliorer d’un point de vue quantitatif pour obtenir un échantillonneur fiable et robuste pour ce type de milieu d’expositionDespite a noticeable sales decrease since few years, France remains the first european user of phytosanitary products. This is not without consequences on the environment and the untargeted organisms. Several studies allowed on one hand to better understand phenomena of pesticides transfer in water-air and soils compartments and on the other hand to highlight their contamination. Data concerning the water are more numerous cause of its status of ultimate receptacle of pollution and standards established by regulatory texts. The european Water Framework Directive (WFD) adopted in 2000 aims to achieve good chemical and ecological status of water bodies by 2015 with an obligation of results. The good chemical status depends on respect for the Environmental Quality Standards (EQS) established, for instance, for 24 pesticides. In 2012, 5% of river measurement points and 19%of groundwater measurement points do not respect these EQS. For many years, Languedoc Roussillon is the first wine-producing region of France and suffers from a significant pesticide pressure. In 2014, a report from the Regional Health Agency (RHA) has mentioned a relatively recent use of banned pesticides since the early 2000’s like simazin and terbutylazin. Moreover, RHA stated that most of recognized cases of non-compliance could be linked to the presence of agricultural activity in the catchment basin.[...] The establishment of POCIS devices on the three study sites showed the predominance ofpesticides used in viticulture and showed all the interest of the tool on a qualitative point ofview. The comparison of the tool with the automated sampling shows disparities between real concentration and concentration estimated with the POCIS. However, it remains to improvethe tool on a quantitative way to obtain a reliable and robust sampler for this type of exposure medium
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Lassagne, Laurent. "Conception et réalisation d'un pilote de combustion en lit fluidisé circulant : caractérisation et dosage des HAP gazeux à l'émission : développement d'une méthodologie analytique par micro extraction en phase solide." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1999. http://www.theses.fr/1999GRE10192.
Анотація:
La protection de l'environnement est l'un des enjeux majeurs du developpement economique des prochaines annees. Les recents protocoles d'accord internationaux attestent de l'interet croissant porte aux grands problemes environnementaux en general et a la pollution atmospherique en particulier. C'est dans ce contexte que s'inscrit cette etude basee sur une technologie propre : le lit fluidise circulant, et les emissions liees aux combustions de charbon notamment les hap. La premiere partie de ce travail concerne la conception et la realisation d'un pilote d'etude des combustions en lit fluidise circulant de taille semi-industrielle. La demarche employee pour la conception s'appuie sur l'analyse fonctionnelle du besoin. La realisation apporte des solutions originales (performances, mesures, securite), une analyse de risques basee sur la methode mosar a d'ailleurs ete realisee. La seconde partie est consacree a la mesure des hydrocarbures aromatiques polycycliques. Elle presente une nouvelle methodologie de dosage des hap gazeux basee sur la micro extraction en phase solide (spme). Un systeme de generation de standards gazeux pour les composes semi volatils a ete developpe. Des mesures d'hap par spme/gc/fid, spme/gc/ms et spme/hplc/fluorimetrie ont ete realisees sur des combustions de charbon a differentes temperatures. Des precurseurs de formation des hap comme la phenyl propyne ont aussi ete mis en evidence.
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Dakas, Pierre-Yves. "Divergent synthesis of resorcyclic acid lactones : a privileged natural pharmacophore." Strasbourg, 2009. http://www.theses.fr/2009STRA6265.
Анотація:
Les protéines kinases jouent un rôle essentiel dans différents processus cellulaires ainsi que dans la plupart des transductions de signaux. De nombreuses pathologies ont pour origine une kinase défectueuse. Leur inhibition spécifique est devenue une priorité à la fois en thérapie mais également dans l’espoir de distinguer individuellement toutes les fonctionnalités de l’ensemble des kinases que contient le kinome. Au delà de l’intérêt en recherche fondamentale, l’inhibition de kinase attire énormément l’attention des compagnies pharmaceutiques. Les inhibiteurs principalement développés et employés dans la thérapeutique du cancer sont des molécules de type hétérocycliques. Ces dernières années, le laboratoire du Professeur Nicolas Winssinger s’est intéressé à une famille de substances naturelles connue sous le nom de macrolides du résorcinol suite à l’observation qu’elle contenait plusieurs inhibiteurs de kinases (Figure 1). [1] Mon projet avait pour but à la fois de synthétiser ces macrolides que la nature nous a offerts mais également de développer des stratégies de synthèse suffisamment flexibles afin d’en étendre la diversitéProtein kinases play a fundamental role in many cellular processes and signal transduction pathways. Numerous pathologies can be attributed to a dysfunctional kinase. Their specific inhibition became a priority in therapy and is expected to allow the determination of the functionality of each individual kinases in the kinome. Most inhibitors targeting kinases are heterocycles with some reminiscence of the adenosine scaffold. As I began my thesis, the group of Professor Nicolas Winssinger had become interested in a family of natural products which has a high incidence in kinases inhibition. This family is known as resorcylic acid lactones (RALs) and contains several kinase inhibitors (Figure 1). [1] The aim of my project was to develop flexible synthetic strategies towards RALs amenable to the preparation of libraries extending beyond the diversity of the analogues accessible from natural sources
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Charlot, Alexandre. "Synthèse et Evaluation de silices hybrides mésoporeuses pour l'extraction de l'uranium en milieu sulfurique." Thesis, Montpellier, Ecole nationale supérieure de chimie, 2016. http://www.theses.fr/2016ENCM0006/document.
Анотація:
Les usines de l’amont du cycle du combustible nucléaire, génèrent des effluents industriels faiblement chargés en uranium. La récupération de l’uranium de ces effluents vise à les décatégoriser (diminution de la radioactivité) et à valoriser l’uranium recyclé. L’acide sulfurique est majoritairement utilisé dans l’amont du cycle du combustible. Dans ces conditions, l’uranium est sous forme de complexes de sulfates d’uranyles qu’il convient d’extraire sélectivement vis-à-vis d’ions compétiteurs comme le Mo ou le Fe. Plusieurs procédés peuvent être envisagés : précipitation, extraction liquide-liquide et extraction sur supports solides. Cette dernière technique est particulièrement attractive pour des solutions faiblement chargées en uranium : elle est éco-responsable (évite la manipulation de solvants organiques), les procédés sont compacts et nécessitent peu de manipulations (i.e. extraction sur lit fixe). Parmi les supports solides à forts potentiels, les silices mésoporeuses occupent une place de choix de par leur grande surface spécifique, leur facilité de synthèse et leur facilité de caractérisation.Cette thèse se propose d’évaluer l’extraction d’uranium en milieu sulfurique par l’utilisation de silices hybrides mésoporeuses au sein desquelles sont greffées des molécules extractantes sélectives. Dans un premier temps, différentes molécules extractantes ont été sélectionnées, synthétisées puis greffées sur une silice commerciale afin d’évaluer les propriétés extractives de ces différentes familles d’extractant. Les N,N-carbamoylalkylphosphonates ont été identifiées comme étant des molécules intéressantes en terme de propriétés extractives. De plus, cette étude souligne la nécessité d’avoir un monoacide sur le groupement phosphonate et montre l’importance des chaines alkyles aussi bien sur le phosphonate que sur le groupement amide. A la suite de ce travail, l’impact du diamètre de pore des supports de silice sur la configuration de la partie organique greffée et sur les propriétés d’extraction de l’uranium a été mis en évidence. Une gamme de porosité (entre 3 et 20 nm) pour laquelle les matériaux hybrides sont homogènes et présentent une bonne efficacité d’extraction a été identifiée. Pour parfaire la compréhension des mécanismes d’extraction via les supports hybrides, une étude paramétrique (pH, force ionique, présence d’éléments compétiteurs) a été menée en parallèle d’analyses spectrométriques (EXAFS, FT-IR, Raman, DRX). Ces techniques ont permis de proposer un mécanisme d’extraction au sein du solide impliquant deux diamido-phosphonates par uranyle. Les résultats obtenus à l’échelle moléculaire sont en accord et confortent les propriétés macroscopiques observées lors de l’analyse paramétriqueNuclear industries are perpetually looking for technical, economic and environmental progresses. Important volumes of acidic waste are generated by nuclear plants of the front end. The extraction of uranium from these solutions is required to decontaminate effluents (decrease of the radioactivity) and value uranium (reincorporation in the cycle). Uranium leaching is mostly achieved using sulfuric acid leading to the production of aqueous effluents that contain a large grade of sulfate complexes. In such conditions, uranyl sulfate complexes constitute the predominant uranium species in solution and its extraction represents a real scientific and technological challenge. Commonly, precipitation, solvent extraction or solid phase extraction are used. The last one is particularly adapted for low grade solutions due to it weak environmental footprint (no solvent are handling) and the facility of the process involved (i.e. fixed bed column). Among the available solid-phase extraction candidates, hybrid mesoporous silicas get a crucial part. They develop a very high specific surface areas and a driven porosity which give them a high potential of extraction capacities.In this manuscript the tailoring and the evaluation of hybrid mesoporous silicas have been investigated. Firstly, the work focus on the organic part grafted by post-synthetic pathway, the N,N-dialkylcarbamoylphosphonate based molecules have been identified to get interesting extraction properties. This study emphasizes that acid groups are required and that alkyl substituents get a real importance in the extraction efficiency. On the second hand, the role of pore size has been investigated. The results obtained disclosed that pores size diameters directly impact the grafting ratio as well as the homogeneity of the material: (1) materials with a pore size below 3 nm are heterogeneously functionalized due to steric issues, (2) a homogeneous organic monolayer grafted onto the silica skeleton occurs when the pore size ranges from 3 nm to 20 nm and (3) functionalization of material having pore size above 30 nm results in an organic multilayer covalently linked to the surface. The organic self-organization drives the extraction efficiency, only monolayers lead to promising results. At the saturation state, two molecules are required to extract one uranyl ion. To describe the molecular scale of the uranyl complex onto the solid, the local structure has been investigated by a parametric study and spectroscopic techniques (IR, EXAFS and DRX). Results reveal that two diamido-phosphonates are involved in the uranyl extraction. By this work, it is shown how the molecular scale helps to understand the macroscopic phenomena.Finally, continuous extraction in a fixed bed column confirms the extractive properties obtained in batch mode experiments and points out the potential of such material to be reused several times without any damages
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Lopez, Claire. "Synthèse de polymères à empreintes moléculaires d'alcaloïdes Vinca pour leur extraction sur phase solide dans des extraits de plantes ou des fluides biologiques : développement du détecteur conductimétrique sans contact à couplage capacitif et de la technique de la double injection en électrophorèse capillaire." Thesis, Orléans, 2010. http://www.theses.fr/2010ORLE2078.
Анотація:
Ce mémoire reporte dans une première partie les études menées sur des polymères à empreintes moléculaires (MIP) en extraction solide-liquide (SPE). La nature des interactions polymère-analyte, l’influence de la composition de la matrice de l’échantillon et la sélectivité des MIPs sont étudiés.La première application concerne l’extraction de molécules ciblées dans un extrait de plante. Deux MIPs respectivement préparés à partir de l’acide méthacrylique (MAA) et l’acide itaconique (IA) et avec respectivement la catharanthine et la vindoline comme molécule empreinte ont montré leur sélectivité sur des solutions standards puis sur un extrait de plante. Des expériences de réactivité croisée réalisées sur des molécules analogues à la molécule empreinte (alcaloïdes dimères) montrent la spécificité de reconnaissance des analytes par les MIPs. Le MIP-catharanthine est caractérisé par les isothermes de Scatchard et sa capacité est évaluée en SPE à partir de l’extrait de Catharanthus roseus. Un MIP préparé à partir de MAA avec la vinorelbine comme molécule empreinte a été appliqué à des matrices aqueuses salines pour l’extraction de la vinflunine et de son métabolite dans du plasma bovin et de l’urine. Des rendements d’extraction élevés ont été atteints grâce à une étude de l’impact des sels et au choix de solvants de lavage adaptés à la matrice. Une deuxième partie montre la simplicité d’utilisation et la sensibilité de la détection conductimétrique sans contact à couplage capacitif (C4D) lors de l’analyse du contre-ion et du principe actif dans des composés pharmaceutiques en électrophorèse capillaire (EC). La technique de la double injection a permis l’analyse simultanée des cations et des anions. La méthode EC-C4D développée est appliquée aux alcaloïdes Vinca et à différents médicaments avec des contre-ions anioniques ou cationiquesThis thesis reports in a first part results obtained with molecularly imprinted polymers (MIP) during solid liquid extraction. Polymer-analyte interactions, composition of the sample matrix and selectivity of MIPs have been studied.The first application concerned the extraction of molecules in a plant extract. Two MIPs respectively prepared from the methacrylic acid (MAA) and itaconic acid ( IA) and with respectively catharanthine and vindoline as template showed their selectivity on standard solutions then on a plant extract. Experiments of cross reactivity performed with analogue of the template (dimers alkaloids) have proved the specificity of analytes recognition by the MIPs. The MIP-catharanthine is characterized by Scatchard isotherms and its capacity was estimated from the extract of Catharanthus roseus. A MIP prepared from MAA with the vinorelbine as template was applied in salt aqueous matrices for the extraction of vinflunine and its metabolite in bovine plasma and urine. High extraction recoveries were reached with a study of the impact of salts and the choice of washing solvents adapted to the matrix. The second part showed the simplicity of use and the sensibility of capacitively coupled contactless conductivity detection (C4D) for the analysis of counter-ion and active principle in pharmaceutical compounds in capillary electrophoresis (CE). The technique of double injection allowed the simultaneous analysis of cations and anions. The developed method EC-C4D was applied to Vinca alkaloids and various medicines with anionic or cationic counter-ions
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Eddhif, Balkis. "Développement d'une approche analytique non ciblée pour l'étude des protéines dans les milieux complexes, environnementaux et biologiques." Thesis, Poitiers, 2017. http://www.theses.fr/2017POIT2291/document.
Анотація:
Grâce aux récents progrès en terme d'instrumentation analytique, la protéomique, en tant que science qui étudie le protéome d'un organisme ou d'un milieu, a connu un véritable tournant et a permis d'étendre le champ des connaissances sur le fonctionnement du vivant dans son ensemble (structure, fonction, métabolisme, dynamisme). Néanmoins, l'étude des protéomes représente un challenge pour de nombreux biologistes, chimistes et biochimistes, en raison notamment de la complexité des échantillons étudiés. De nombreux protocoles analytiques ont d'ores et déjà été développés. Cependant, dans leur ensemble, ces stratégies sont relativement longues et multi-étapes et le plus souvent ciblées sur une protéine donnée.Dans ce contexte, ce travail de thèse a pour objectif de simplifier les protocoles expérimentaux existants afin de limiter les pertes en protéines et ainsi amplifier leurs signaux au cours d'une analyse « Bottom-up » par LC-HRMS (analyse « hors gel »). Chaque étape du processus a été décortiquée et optimisée. Dans un premier temps, les paramètres UPLC-HRMS/MS ont été optimisés afin d'améliorer la détection et la quantification des protéines présentes à des concentrations très variables dans les milieux étudiés. Ensuite, une approche de purification simplifiée qui repose sur une seule et unique étape de lavage et solubilisation des protéines a été mise au point. La démonstration de son efficacité « chimique » et « biologique » a ensuite été réalisée via une étude mécanistique au cours de laquelle les changements de conformation des protéines ont été étudiés à chacune des étapes de purification proposées. Enfin, certains paramètres influençant l'extraction des protéines à partir de ces mêmes matrices ont été étudiés afin de proposer à terme un protocole d'extraction à la carte compatible avec une analyse directe par LC-HRMS/MSRecent advances in proteomics have been spurred by the rapid development of hybrid and/or high-resolution mass analysers (HRMS/MS). These powerful instrumentations have led to significant improvements in « Bottom-up » approach and have enabled to deepen our knowledge on the functionality of biological systems (structure, function, metabolism, dynamic, etc).Despite their high sensibilities, the potential of such instruments could be significantly lessened by an imperfect sample pre-treatment. In this context, current sample pretreatments follow multi-steps experimental workflows, which alternatively lead to low recoveries of proteins. In this line, this study aims at developing a simple and versatile strategy in order to reduce protein losses and enhance their detection in gel-free LC-MS analysis. First, an analytical method based on liquid chromatography and tandem mass spectrometry was developed to detect and quantify complex peptides mixture. Secondly, a universal, simple and fast purification approach was designed with the aim to purify protein extracts in only one-step. For this purpose, the molecular reactivity, dynamics and conformational changes of proteins at each development step were comprehensively investigated with a set of spectroscopic techniques, in order to select the best strategy. Finally, different factors influencing extraction of proteins were investigated with the goal in the long term to propose an on-demand extraction protocol for direct analysis of proteins by LC-HRMS/MS
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Kouzayha, Abir. "Développement des méthodes analytiques pour la détection et la quantification de traces des HAP et de pesticides dans l'eau : application à l'étude de la qualité des eaux libanaises." Thesis, Bordeaux 1, 2011. http://www.theses.fr/2011BOR14414/document.
Анотація:
La pollution des eaux est particulièrement problématique pour les pays industrialisés et les pays en développement. Des suivis environnementaux se sont alors avérés nécessaires afin de progresser dans la compréhension des origines et des conséquences de la présence de ces polluants. Parmi les polluants organiques les plus dangereux, les Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques (HAP) et les pesticides qui peuvent se retrouver à l’état de traces dans les milieux aquatiques. Leur analyse nécessite des méthodes analytiques à la fois spécifiques et sensibles. L’Extraction sur Phase Solide (SPE) suivi d’une analyse par la Chromatographie Gazeuse couplée à la Spectrométrie de Masse (GC-MS) est la méthode la plus couramment employée. Les travaux de thèse s’inscrivent ainsi dans l’optique généralevisant à développer des nouvelles méthodes analytiques pour l’extraction et l’analyse de cesdeux familles de polluants organiques présents dans l’eau. Afin de pallier les contraintes classiques de la SPE, une nouvelle approche a été développée qui consiste à introduire latechnique de centrifugation dans certaines étapes de la procédure SPE. La nouvelle méthodeélaborée a permis de réduire considérablement le temps de préparation et d’économiserl’utilisation et le rejet des solvants organiques, en réduisant presque 10 fois les volumes nécessaires à l’obtention des rendements de récupération satisfaisants. Une méthoded’analyse par injection à température programmable (PTV) a été optimisée afin d’améliorerles seuils de détection des HAP. Cette étude a permis également d’avoir les informations surla qualité des eaux de pluie, eaux souterraines et eaux de surface au Liban quant au niveau deleur contamination pour les HAP et les pesticidesWater pollution presents a very critical problem facing industrial and developping countries. The environmental monitoring of the contaminants seems necessary to understand their sources and impacts. Among a wide variety of organic pollutants present in water,polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) and pesticides are of particular importance as widespread, persistent, and toxic contaminants. They are usually present at trace levels in theacquatic surfaces; therefore their detection and control require selective and sensitiveanalytical procedures. The Solid-Phase Extraction (SPE) followed by the Gas-Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS) are the most commonly usedtechniques for their analysis in water. Thesis objectives are focused on the development of new analytical methods for the extraction and analysis of these two families of pollutants present in water. To overcone the contraints of the traditional SPE, a new approach was developed consisting on the introduction of the centrifugation in several steps of the procedure. The new method showed practical environmental and economical advantages interms of sample preparation time, simplicity, reduction in solvent use, and cost and isparticularly suitable for routine applications requiring a high sample throughput. Aprogrammed temeperature vaporizing (PTV) injection method was also optimized and validated in order to improve the detection limits for the GC-MS analysis of PAHs. The evaluation of the quality of different water systems in Lebanon including rainwater,groundwater, drinking water and surface water was accomplished in this study
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Chirita, Raluca-Ioana. "Développement de nouvelles méthodes séparatives compatibles avec une détection par spectrométrie de masse et par électrochimie pour l'analyse de traces de catécholamines et molécules apparentées." Thesis, Orléans, 2009. http://www.theses.fr/2009ORLE2043/document.
Анотація:
Les catécholamines et les indolamines font partie de la famille des neurotransmetteurs. Un déséquilibre dans leur concentration peut être associé à différentes maladies telles les maladies de Parkinson et Alzheimer, la dépression ou la schizophrénie. C’est pourquoi le développement de méthodes de dosage spécifiques et très sensibles du fait de leurs très faibles teneurs dans les fluides biologiques est nécessaire. Dans un premier temps nous avons développé une méthode chromatographique en appariement d’ions (IP-LC) utilisant des colonnes C18 de nouvelle génération (monolithique et « fused core ») et l’acide nonafluoropentanoïque, comme agent d’appariement d’ions volatil. Cette méthode est compatible avec une détection SM en mode d’ionisation positive. Dans un deuxième temps, différents systèmes en mode HILIC ont été évalués. Le choix raisonné de la phase stationnaire offrant la meilleure séparation du mélange de catécholamines a pu être réalisé après avoir testé l’influence sur la séparation des différents groupements fonctionnels disponibles : groupement soit neutre (greffage diol, amide, ou cyano), soit positivement chargé (greffage amino ou triazole) soit négativement chargé (silice vierge avec particules totalement poreuses ou partiellement poreuses « fused core ») ou zwitterionique (greffage sulfobetaïne). La méthode HILIC présente l’avantage d’être compatible aussi bien avec une détection SM en mode d’ionisation positive que négative. Les deux méthodes (IP-LC et HILIC) ont été comparées en termes de résolution, efficacité et limites de détection (LOD), linéarité et répétabilité. Les LODs obtenues sont comprises entre 1 et 100 ng.mL-1. Pour pouvoir doser des teneurs plus faibles, une méthode de pré-concentration de l’échantillon a été développée en associant 2 supports différents (Oasis HLB et PGC). La méthode optimisée SPE-CPL-MS/MS a été enfin appliquée à un extrait de cerveau de moutonAs neurotransmitters, catecholamines play an important role in the control and regulation of numerous brain functions. They are also believed to be implicated in different neurodegenerative disorders. First an ion pairing chromatography method using nonafluoropentanoic acid as volatile ion paring agent was developed on the new generation of C18 columns (monolith and fused core). This method is compatible with MS detection in positive ionization mode. Secondly an HILIC method was optimized using different commercially available HILIC supports, they can be classified as follows: neutral (diol, amide, and cyano bounded), positively charged (amino, triazole bounded), negatively charged (bare silica as wholly porous particles or fused core particles columns) and zwitterionic (sulfobetaine bounded). Our studies lead us to a better understanding of the HILIC retention mechanism and also to the selection of the most appropriated column for catecholamine analysis. Only the HILIC system was compatible with both positive and negative ionization modes. The two chromatographic systems were then compared in terms of resolution, efficiency, detection and quantification limits (LOD/LOQ), calibration linearity and repeatability. The LODs obtained were in the range of 1-100 ng.mL-1. A simple pre-concentration method using Oasis HLB and PGC solid phase extraction cartridges has been optimized in order to enhance the LODs. Finally the optimized SPE-LC-MS/MS method has been applied to the identification of these compounds present in brain extracts
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Aftim, Nadin. "Polymères à empreinte moléculaire pour l'extraction d'un insecticide organophosphoré utilisé en oléiculture : le phosmet." Thesis, Perpignan, 2017. http://www.theses.fr/2017PERP0030.
Анотація:
L’objectif de cette thèse a consisté en la synthèse d’un polymère à empreinte moléculaire (MIP) permettant l’extraction du phosmet, un pesticide organophosphoré largement utilisé en oléiculture. La recherche du monomère fonctionnel (MF) disposant de la meilleure capacité à interagir de manière non-covalente avec le phosmet en présence du solvant porogène le plus approprié a été réalisée pour la toute première fois au moyen d’un capteur à acétylcholinestérase. Cette stratégie innovante a permis une meilleure compréhension des mécanismes cinétiques à l’œuvre lors de l’interaction MF-molécule cible. De par l’importance de son rôle dans la détermination de la structure d’un MIP, le choix d’un agent réticulant aux caractéristiques physico-chimiques adéquates a permis de sélectionner le meilleur MIP en s’appuyant sur l’étude des isothermes d’adsorption selon les modèles de Freundlich et Langmuir. La procédure d’extraction du phosmet selon la procédure MISPE (Molecularly Imprinted Solid Phase Extraction) a été effectuée par le biais d’une cartouche SPE dont la capacité a été évaluée à partir d’une solution standard. La validation du choix des réactifs de MIP sélectionnés a été confortée par la réalisation d’une expérience de réactivité croisée appliquée à une molécule analogue au phosmet. L’extraction du phosmet de l’huile d’olive a pu être effectuée avec succès selon un protocole d’extraction en flux inverse optimisé. Cette étude ouvre ainsi la voie à la recherche de nouvelles interactions MFs-molécules cibles au moyen de biocapteurs enzymatiques inhibant des composés toxiques tels que les herbicides, fongicides et autres pesticidesThe objective of this thesis has been the synthesis of a molecularly imprinted polymer (MIP) for the extraction of phosmet, an organophosphorus pesticide widely used in olive growing. The search for the functional monomer (FM) having the best ability to interact non-covalently with phosmet in the presence of the most suitable pore-forming solvent was carried out for the first time by means of an acetylcholinesterase sensor. This innovative strategy allowed us to better understand the kinetic mechanisms of FM-template interaction. Because of the importance of its role in determining the structure of a MIP, the selection of a crosslinking agent with adequate physicochemical characteristics made it possible to select the best MIP, whose adsorption isotherms were studied according to Freundlich and Langmuir models. Extraction of phosmet using a Molecularly Imprinted Solid Phase Extraction (MISPE) procedure was carried out via an SPE cartridge, whose capacity was evaluated from a standard solution. The choice of reagents and experimental conditions were validated by carrying out selectivity assays using another organophosphorus insecticide. Extraction of phosmet from olive oil was successfully carried out according to an optimized reverse flow extraction protocol. This work opens new opportunities for studying new FM-template interactions by means of enzymatic biosensors capable of detecting other inhibitors such as herbicides, fungicides and other pesticides
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Sbruzzi, Dalva. "Análise da viabilidade econômica da purificação da bromelina das folhas de curauá em sistema bifásico aquoso PEG/Fosfato." [s.n.], 2010. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/266969.
Анотація:
Orientador: Elias Basile TambourgiDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química
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Resumo: O curauá (Ananas Erectifolius L.B. Smith), espécie vegetal de porte herbáceo, é uma monocotiledônea pertencente à família Bromeliaceae, nativa da região norte do Brasil, especialmente da Amazônia, de onde pode ser extraída a bromelina. Essa faz parte de um grupo de enzimas proteolíticas, usadas na indústria alimentícia e como medicamento, pois oferece amplo espectro de eficácias terapêuticas: antiedemas, anti-inflamatórias, antitrombóticas e atividades fibrinolíticas. O desenvolvimento de novos processos de extração e purificação de proteínas é muito importante, uma vez que essa é uma etapa limitante na produção de bioprodutos. Sistemas de duas fases aquosas são amplamente utilizados para a separação e purificação de biomoléculas. As vantagens da extração em duas fases aquosas, em comparação com outros métodos de purificação, são o elevado rendimento, a faixa de trabalho próxima do equilíbrio, a fácil ampliação de escala e o uso em processos contínuos. Esta pesquisa propõe a caracterização da bromelina do curauá e a sua purificação por extração líquido-líquido em duas fases aquosas, formadas por um polímero (polietilenoglicol) e um sal (fosfato de potássio). Apresenta também um estudo sobre os custos do processo e o preço de venda estimado, e demonstra a sua viabilidade econômica, quer seja para uso como pré-processo nos tradicionais sistemas cromatográficos, quer para a comercialização direta, como alternativa para a bromelina do abacaxi. Os resultados da caracterização mostraram que as condições ideais de trabalho são pH 8,5 e temperatura 35º C para a variedade branca, e pH 8,5 e 30º C de temperatura para a variedade roxa. A massa molar é de 24 kDa, e o melhor sistema de partição da bromelina foi o SBA PEG 4000 em pH 9. A solução enzimática dos melhores sistemas contém 7 U de bromelina e, aproximadamente, 17 mg/L de proteína total medida por Bradford (curauá branco); e 6 U de bromelina e, aproximadamente, 23 mg/L de proteína total medida por Bradford (curauá roxo). O preço de venda calculado para um litro dessa solução enzimática, quando não se obtém lucro (margem de lucro desejada é 0%), foi estimado em R$75,06. Assim, pode-se concluir que o processo de purificação da bromelina das folhas de curauá, ao ser utilizado sistema bifásico aquoso, PEG/sal, é promissor no que diz respeito a sua possibilidade de produção em escala industrial
Abstract: Curaua (Ananas erectifolius L.B. Smith) is a mocotyledonous herbaceous specie belonging to the Bromeliaceae family and it is native to the north region of Brazil, especially the Amazonian Complex, that we can extract bromelain which belongs to a group of proteolytic enzymes derived from herbaceous species of Bromeliaceae family, which are used in food industries and as drugs as such as they offer a wide spectrum of therapeutic efficacies: antiedemateous, antiinflammatory, antithrombotic and fibrinolytic activities. The development of new extraction and purification processes of proteins is very important, as this is a limiting step in the production of bioproducts. Aqueous two-phase systems are widely used for separation and purification of biomolecules. The advantages of aqueous two-phase extraction compared to other purification methods lie in high productivity, working range close to equilibrium, easy scale up and use in continuous processes. This research proposes the curaua's bromelain characterization, and its purification by a liquid-liquid extraction in aqueous two-phase system, formed by a polymer (polyethylene glycol) and a salt (potassium phosphate). It also presents a study about the costs of this process and the estimated sale price, showing its economic viability, whether it is for use as a pre-process in traditional chromatographic systems or direct commercialization, as an alternative for the bromelain of pineapple. The curaua's bromelain characterization results showed that the ideal working conditions are pH 8.5 and 35 ºC of temperature to white variety and pH 8.5 and 30°C of temperature to purple variety. The curaua's molecular weight is 24 kDa and the best bromelain partitioning system was the SBA PEG 4000 at pH 9. The enzyme solution of the best purification system contains 7 U of bromelain and about 17 mg/L of total protein measured by Bradford (white curaua) and 6 U of bromelain and about 23 mg/L of total protein measured by Bradford (purple curaua). The estimated sale price for a liter of this enzyme solution, when profit is not achieved (0% of desired markup), was estimated at R$ 75, 06. So, the curaua's bromelain purification process using an aqueous two-phase system, PEG/salt, is promising with regard to the possibility of industrial scale production
Mestrado
Sistemas de Processos Quimicos e Informatica
Mestre em Engenharia Química