Дисертації з теми "Clonidine – administration et posologie"

Le sujet de recherche de ce Doctorat a porté sur le développement de méthodes analytiques afin d'évaluer la stabilité ou les incompatibilités de médicaments injectables d'anesthésie-réanimation en solution ou en systèmes dispersés.La première partie de ce travail a porté sur l'étude de la stabilité d'ampoules de bésylate de cisatracurium produites par la pharmacie du CHU de Lille pour permettre la continuité de la prise en charge des patients de réanimation dans le contexte des ruptures d'approvisionnement occasionnées par la pandémie à la COVID-19. L'étude de stabilité a été menée sur un lot de 4000 ampoules conservées entre 2 et 8 °C pendant 18 mois. Ce travail a nécessité la validation d'une méthode CLHP-UV indicatrice de stabilité pour le dosage du cisatracurium et de la laudanosine, un produit de dégradation décrit comme marqueur de son instabilité. Par ailleurs le recours à une méthode CLHP couplée à la spectrométrie de masse a permis une identification des produits de dégradation et l'étude des voies de dégradation. Nos résultats ont permis de conclure à la stabilité durant 15 mois des solutions de cisatracurium à 10mg/mL dans nos conditions de préparation et de conservation. La voie de dégradation principale observée dans nos conditions d'étude (l'hydrolyse de l'ester) différait de celle précédemment décrite (voie d'Hofmann). Cela souligne l'impondérabilité de mener des études de stabilité dans les conditions représentatives de l'utilisation réelle des médicaments.La seconde partie de cette thèse nous a conduit à étudier l'incompatibilité entre différents médicaments utilisés dans les services d'anesthésie et de réanimation. Les modèles étudiés étaient l'administration simultanée de propofol et d'agonistes des récepteurs alpha-2 adrénergiques (α2A ; clonidine ou dexmédétomidine) utilisés dans le cadre de l'analgésie multimodale. Les données disponibles dans la littérature concernent des concentrations et des ratios non représentatifs de ceux rencontrés dans les services de soins, exposant potentiellement les patients à un risque médicamenteux. Nous avons évalué la compatibilité d'associations propofol - α2A dans des conditions mimant celles des services de soins critiques. Huit conditions par association ont été évaluées pendant 96 heures, en triplicat, et en faisant varier les débits massiques simulés pour chaque médicament et pour des poids de patients de 45 et 150 kg. Afin d'évaluer la compatibilité chimique de ces associations, nous avons développé et validé 3 méthodes de dosage indicatrices de stabilité par CLHP-UV pour l'étude de la stabilité en association du propofol, de la clonidine et de la dexmédétomidine pendant 96 heures. La compatibilité physique de l'émulsion en association a été évaluée à l'aide d'un granulomètre couplé à une mesure du potentiel zeta (avec contrôles positifs et négatifs). Nos résultats ont permis de démontrer la stabilité physico-chimique de mélanges propofol-α2A représentatifs de ceux utilisés en pratique courante.En conclusion, les résultats de ce travail ont ainsi permis une validation scientifique des pratiques hospitalières de la pharmacie et des services de soins. Ils ont également permis de souligner le rôle fondamental du pharmacien pour garantir la qualité de la prise en charge médicamenteuse du patient, au travers de l'utilisation de ses compétences en chimie analytique pour l'évaluation des données de compatibilité et de stabilité
The research subject of this PhD focused on the development of analytical methods to assess the stability or incompatibilities of injectable anaesthetic drugs in solution or in dispersed systems.The first part of this work involved a study of the stability of cisatracurium besylate ampoules produced by the pharmacy of Lille University Hospital to ensure continuity of care for intensive care patients in the context of supply disruptions caused by the COVID-19 pandemic. The stability study was conducted on a batch of 4,000 ampoules stored at 2-8°C for 18 months. This study required the validation of a stability-indicating HPLC-UV method for the determination of cisatracurium and laudanosine, one of its degradation products described as a marker of its instability. In addition, the use of an HPLC-mass spectrometry method enabled the identification of degradation products and the study of degradation pathways. Our results showed that cisatracurium solutions at 10mg/mL were stable for 15 months under our preparation and storage conditions. The main degradation pathway observed under our study conditions (ester hydrolysis) differed from that previously described (Hofmann pathway). This highlights the imponderability of conducting stability studies under conditions representative of the actual use of drugs. The second part of this thesis led us to study the incompatibility between different drugs used in anaesthesia and intensive care units. The models studied were the simultaneous administration of propofol and alpha-2 adrenergic receptor agonists (α2A; clonidine or dexmedetomidine) used in multimodal analgesia. The data available in the literature refers to concentrations and ratios that are not representative of those encountered in hospital wards, potentially exposing patients to drug hazards. We assessed the compatibility of propofol-α2A combinations under conditions mimicking those encountered in critical care units. Eight conditions per combination were evaluated over 96 hours, in triplicate, varying the simulated mass flow rates for each drug and for patient weights of 45 and 150 kg. To assess the chemical compatibility of these combinations, we developed and validated 3 stability-indicating HPLC-UV assay methods to study the stability of propofol, clonidine and dexmedetomidine in combination for 96 hours. The physical compatibility of the emulsion in combination was assessed using a granulometer coupled to a zeta potential measurement (with positive and negative controls). Our results demonstrated the physico-chemical stability of propofol-α2A mixtures representative of those used in current practice.In conclusion, the results of this work have provided scientific validation of hospital pharmacy and care service practices. They also highlighted the fundamental role of pharmacists in guaranteeing the quality of patient drug management, by using their skills in analytical chemistry to assess compatibility and stability data

L'hypertension artérielle représente un problème majeur de santé publique. Depuis quelques années, la recherche cardiovasculaire s'est concentrée sur le rôle que joue le calcium dans la physiopathologie de l'hypertension artérielle et sur les inhibiteurs de flux calcique, classe à laquelle appartient l'isradipine. Les capacités thérapeutiques des molécules de première génération sont limitées notamment par leur demi-vie de courte durée qui implique des administrations multiples. De plus, leur action vasodilatatrice intense se manifeste par un pic hypotenseur rapide et prononcé, pouvant être responsable chez le sujet âgé d'une ischémie cérébrale iatrogène. L'objectif de ce travail a consisté en la mise au point de formes pharmaceutiques susceptibles de ralentir la libération de l'isradipine. Nous avons choisi des formes nanoparticulaires, des nanosphères et des nanocapsules, à base de différents polymères : poly(caprolactone), acide poly(lactique) et des copolymères d'acide lactique et glycolique (PLASQGA50 et PLA85GA 15). [. . . ]

Dans le domaine de l'hypertension, de nombreux travaux indiquent une meilleure efficacité des traitements et une toxicité réduite lors de l'association, à faible dose, de deux médicaments antihypertenseurs en raison d'un effet synergique. Parmi ces associations souvent recommandées, on peut citer le couple inhibiteur de l'entrée du calcium/[bêta]-bloquant. Notre modèle d'étude s'est porté sur la nifédipine et le chlorhydrate de propranolol. Ces deux principes actifs sont caractérisés par une demi-vie de courte durée et une faible biodisponibilité due à un premier passage hépatique important, particulièrement dans le cas du chlorhydrate de propranolol. L'objectif de notre travail a consisté à préparer des formes multiparticulaires contenant les deux principes actifs, à base d'un polymère biodégradable, la poly-E-caprolactone, et de polymères non biodégradables, des copolymères acryliques (les Eudragit® RS et RL dans le rapport 4/1). Du fait de la différence de solubilité aqueuse de la nifédipine et du chlorhydrate de propranolol, la méthode d'émulsification et d'évaporation de solvant à partir d'une émulsion multiple (hydrophile-dans-lipophile-dans-hydrophile) a été adoptée. Les microparticules ainsi obtenues ont été comparées soit à des microparticules contenant les deux principes actifs et préparées par simple émulsion (lipophile-dans-hydrophile), soit à des microparticules contenant l'un ou l'autre des principes actifs, ainsi qu'aux formes commercialisées (Adalate® LP et Avlocardyl® LP). La comparaison a porté sur leurs propriétés physico-chimiques, la quantité de principe actif encapsulé, puis libéré in vitro et leur caractérisation biopharmaceutique chez le lapin après administration des différentes formes par voie orale.

L’arthrose et l’arthrite rhumatoïde sont deux pathologies articulaires caractérisées par la dégradation du cartilage articulaire, subséquente à la production de divers médiateurs inflammatoires. Le traitement de ces pathologies se limite généralement à soulager le patient des épisodes douloureux et inflammatoires et à améliorer sa qualité de vie. Dans le cas de l’arthrose, peu de traitements permettent d’enrayer significativement l’évolution de la dégradation du cartilage et donc de la maladie. Par contre, l’arthrite rhumatoïde peut être efficacement ralentie grâce à l’administration de certaines molécules. Néanmoins, ces traitements n’ont généralement montré qu’une efficacité à court-terme, requérant une administration fréquente. L’objectif de ce travail repose donc sur l’élaboration de nouvelles options thérapeutiques permettant de réduire la fréquence d’administration ainsi que les effets indésirables des traitements actuels. La délivrance de molécules en intra-articulaire associée à une libération prolongée offre l’avantage d’exposer les sites directement impliqués dans l’évolution de la maladie à une ou plusieurs molécules efficaces contre l’inflammation et la douleur, et aidant à la régénération du cartilage, durant plusieurs semaines, voire des mois.

Des microparticules de PLGA chargées en clonidine ou en bétaméthasone ont donc été optimisées afin d’obtenir des efficacités d’encapsulation appréciables (clonidine HCl :EE ≈ 20% ;dipropionate de bétaméthasone :EE ≈ 70%), une taille adaptée à l’administration intra-articulaire (12 – 38 µm) et une libération de la molécule s’échelonnant sur 5 à 8 semaines. La libération prolongée de la clonidine implique des mécanismes de diffusion de la molécule ainsi que de dégradation/érosion du polymère. Au vu de l’absence de réaction inflammatoire, les microparticules développées sont correctement tolérées par les chondrocytes, synoviocytes, PBMC et neutrophiles, principales cellules impliquées dans les mécanismes inflammatoires de l’arthrose et de l’arthrite rhumatoïde. L’évaluation de l’efficacité anti-inflammatoire des microparticules vides et chargées en clonidine ou en bétaméthasone via l’étude de l’expression et de la sécrétion de différents médiateurs de l’inflammation a permis d’aboutir à plusieurs conclusions :(i) les microparticules vides sont associées à un effet anti-inflammatoire, (ii) les microparticules chargées en clonidine n’ont pas montré d’activité anti-inflammatoire propre pouvant être attribuée à la clonidine, et (iii) les microparticules de bétaméthasone ont confirmé l’effet anti-inflammatoire de la bétaméthasone. Enfin, l’étude de la toxicité des principes actifs et microparticules vides ou chargées a montré une toxicité significative de la clonidine sur les synoviocytes. Néanmoins, l’encapsulation des principes actifs dans les microparticules de PLGA a permis d’éliminer cette toxicité, protégeant donc efficacement les cellules articulaires.

Les microparticules développées permettent alors d’envisager l’encapsulation d’autres molécules anti-inflammatoires ou une combinaison de molécules ayant des effets complémentaires (anti-inflammatoire et antidouleur). L’utilisation de la clonidine dans ces indications devra être réévaluée en étudiant de façon approfondie son efficacité dans la douleur. / Both osteoarthritis and rheumatoid arthritis are articular diseases characterized by the degeneration of the joint cartilage, resulting from the production of various inflammatory mediators. The current treatment of these diseases is restricted to alleviate the painful and inflammatory episodes of the patients and to improve its quality of life. In osteoarthritic patients, few treatments allow to significantly stop the evolution of the degradation of the cartilage and, consequently, the disease. In rheumatoid arthritis, the evolution can be slowed down following the administration of some drugs. Nevertheless, these treatments are often associated to a short-term efficacy. The objective of this work is to develop new therapeutic options that allow to reduce the frequency of administration and the side effects of the current treatments. The intraarticular delivery combined to controlled-release presents the advantage to expose the sites directly involved in the evolution of the disease to one or more molecules effective to relieve the pain, inflammation and to help the regeneration of the cartilage.

Clonidine or betamethasone-loaded PLGA microparticles were optimized to reach suitable encapsulation efficiencies (clonidine HCl: EE ≈ 20%; betamethasone dipropionate: EE ≈ 70%), an appropriate size for an intraarticular delivery (12 – 38 µm) and a controlled-release of the molecule over 5 to 8 weeks. The release of clonidine implies mechanisms of diffusion and degradation/erosion of the polymer. Given the absence of an inflammatory reaction, the developed microparticles were properly tolerated by the chondrocytes, synoviocytes, PMBC and neutrophils, which are the main cells involved in the inflammatory reaction of osteoarthritis and rheumatoid arthritis. The assessment of the anti-inflammatory efficacy of the drug-free and drug-loaded microparticles through the evaluation of the expression and the secretion of various inflammatory mediators allowed to draw several conclusions: (i) drug-free microparticles were associated to an anti-inflammatory effect, (ii) clonidine-loaded microparticles did not show any anti-inflammatory activity that could be attributed to clonidine, and (iii) betamethasone- loaded microparticles confirmed the anti-inflammatory effect of betamethasone. Finally, the evaluation of the toxicity of the drugs and microparticles showed a significant toxicity of clonidine against synoviocytes. Nevertheless, the encapsulation of the drugs in PLGA microparticles induced the suppression of this toxicity, protecting in this way the articular cells.

Entrapping other anti-inflammatory molecules or a combination of molecules with complementary effects (anti-inflammatory and anti-nociceptive drugs) in the PLGA microparticles developed has to be considered. Moreover, the use of clonidine in these indications has to be reassessed by a thorough study of its anti-nociceptive potential.

Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques
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Le premier travail a consisté à étudier les effets de Parginine administrée à doses pharmacologiques sur des biopsies duodenales obtenues chez des volontaires sains, mises en culture en présence de doses croissantes d'arginine et d'une solution contrôle d'acides aminés, en situation basale et en situation d'inflammation expérimentale. L'effet de l'arginine sur l'inflammation intestinale était évalué par le dosage dans le milieu de culture des principales cytokines pro et anti-inflammatoires par ELISA. L'arginine n'exerçait aucun effet anti-inflammatoire dans ces conditions. L'arginine augmentait la production de NO de manière dose-dépendante dans les conditions inflammatoires, et cette production était corrélée à celle de l'IL-8. Le second travail a consisté à étudier les effets de l'arginine sur la synthèse protéique et la proteolyse intestinales. Des biopsies duodenales obtenues chez des volontaires sains après une infusion entérale d'arginine ou d'une solution contrôle d'acides aminés étaient analysées par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse afin de déterminer l'enrichissement en isotopes stables dans la muqueuse duodénale et dans le sang avec l'arginine et avec la solution contrôle. D'autre part, la proteolyse était étudiée par RT-PCR des trois principales enzymes de la proteolyse (ubiquitine, D-cathepsine, m-calpaïne). L'arginine n'exerçait pas d'effet favorisant la synthèse protéique ou diminuant la proteolyse chez le volontaire sain. Le troisième travail a constitué à étudier les effets de l'arginine combinée à la glutamine sur l'inflammation intestinale chez des patients atteints de maladie de Crohn colique en poussée, chez lesquels des biopsies coliques étaient obtenues. Ces biopsies étaient mises en culture dans quatre conditions comprenant des doses physiologiques ou pharmacologiques d'arginine et/ou de glutamine. L'inflammation intestinale était évaluée par le dosage dans les différents milieux de culture des principales cytokines pro et anti-inflammatoires par ELISA, et par la mesure de l'expression de p65 NF-kappaB, IkappaB et p38 MAPK par Western-blot. Les biopsies en présence de doses pharmacologiques combinées d'arginine et de glutamine présentaient une diminution significative du TNF-alpha, d'IL-1beta, d'IL-6 et d'IL-8, et une diminution de l'expression de p65 NF-kappaB et de p38 MAPK. La glutamine seule permettait une diminution significative de la production d'IL-6 et d'IL-8, ainsi que de l'expression de p65 NF-kappaB. L'arginine seule n'exerçait aucun effet anti ou pro-inflammatoire. Ces résultats encourageants pourraient constituer une première étape justifiant l'évaluation prospective de l'administration entérale de glutamine, préférentiellement associée à l'arginine, chez des malades atteints de maladie de Crohn en poussée, comme thérapeutique adjuvante aux traitements anti-inflammatoires classiques
The first study aimed to evaluate the effects of pharmacological doses of arginine on duodenal biopsies obtained in healthy volunteers, cultured with increasing doses of arginine and a control solution, in basal and experimental inflammation conditions. The effect of arginine on gut inflammation was assessed by the measure in the culture media of the main pro and anti-inflammatory cytokines by ELISA. Arginine had no effect on gut inflammation in these conditions. Arginine increased NO production in a dose-dependent manner in inflammatory conditions, and this production was correlated to IL-8 production. The second study aimed to evaluate the effects of arginine on gut protein synthesis and proteolysis. Duodenal biopsies obtained in healthy volunteers after enteral infusion of arginine or a control solution were analysed by GC-MS in order to determine the enrichment in stables isotopes in duodenal mucosa and in plasma with arginine and control solution. Moreover, proteolysis was analysed by RT-PCR of the three main proteolysis enzymes (ubiquitin, m-calpain, cathepsin). Arginine did not have any effect on gut protein synthesis or proteolysis in healthy volunteers. The third study was designed to assess the effects or arginine combined to glutamine on gut inflammation in patients with active Crohn's disease. Colonic biopsies were obtained and cultured in four different conditions including physiological and pharmacological doses of arginine and/or glutamine. Gut inflammation was evaluated by the dosage in different culture media of the main pro and anti-inflammatory cytokines by ELISA, and by the expression of p65 NF-kappaB, IkappaB, and p38 MARK by Western-blot. Arghigh/Glnhigh significantly decreased the production of TNFalpha, 1L-1beat, IL-8 and IL-6. Argˡ°ʷ/G\nhigh decreased IL-6 and IL-8 production, whereas Arghigh/Glnˡ°ʷ did not affect cytokine and NO production. Argˡ°ʷ/Gln and Arghigh/Glnhigh decreased NF-kappaB p65 subunit expression, whereas p38 MARK was only decreased by Arghigh/Glnhigh. Combined pharmacological doses of Arg and Gin decreased TNFalpha and the main pro-inflammatory cytokines release in active colonic CD biopsies via NF-kappaB and p38 MARK pathways. These results could be the basis of prospective studies evaluating thé effects of enteral supply of combined Arg and Gln during active CD.

La diffusion récente et mondiale des entérobactéries multirésistantes et notamment celles qui produisent des béta-lactamases à spectre élargi (BLSE) a compromis l'efficacité des antibiotiques utilisés dans les infections qu'elles causent. Le microbiote intestinal joue un rôle central dans ce phénomène en étant le réservoir des entérobactéries chez l'Homme. Pourtant, la caractérisation de ce portage reste parcellaire sur de nombreux points, ce qui empêche d'en prendre en compte ses caractéristiques pour le soin des patients. C'est pourquoi nous avons tenté dans ce travail d'enrichir les connaissances autour des différentes phases du portage digestif d'entérobactéries multirésistantes (pré-colonisation, colonisation et post-colonisation). Nous nous sommes tout d'abord intéressés à la phase qui précède la colonisation en cherchant à caractériser les déterminants menant au portage d'entérobactéries productrices de BLSE. Nous avons pu observer que ces bactéries diffusaient dans des zones géographiques isolées, et que la prédiction de leur portage digestif à l'entrée à l'hôpital en France était difficile à partir des données disponibles à ce moment. En ce qui concerne la colonisation elle-même, nous avons développé un nouveau marqueur quantitatif du portage d'çntérobactéries résistantes : l'abondance relative (soit le ratio entre la densité intestinale des entérobactéries résistantes sur celle des entérobactéries totales). Nous avons étudié l'évolution de ce marqueur lors d'un traitement par lévofloxacine, un antibiotique largement utilisé dans les infections urinaires. Toujours pour mieux caractériser la colonisation elle-même, nous avons développé une méthode microbiologique de détection des entérobactéries productrices de la carbapénémase OXA-48 après sa découverte incidentelle chez une patiente ne présentant pas de facteurs de risque habituels pour le portage de telles bactéries. Enfin, nous avons étudié la phase post-colonisation (i) en établissant pour la première fois le lien entre abondance relative dans les selles des Escherichia coli producteurs de BLSE et le risque d'infection urinaire à ces bactéries, et (ii) en objectivant le transfert In vivo d'une carbapénémase KPC d'une Klebsiella pneumoniae acquise en Grèce vers une K. Pneumoniae commensale. En conclusion, nos travaux autour du portage digestif d'entérobactéries multirésistantes ont montré le rôle central du microbiote intestinal et ont ouvert des perspectives innovantes et concrètes dans le contrôle de ces bactéries
The recent widespread of multidrug-resistant enterobacteria, especially those producing extended-spectrum beta-lactamases (ESBL), has jeopardized the efficacy of currently advised treatments of the infections they cause. The intestinal microbiota might play a key role in this phenomenon as being the main reservoir for enterobacteria. Still, data about intestinal carriage of multidrug-resistant enterobacteria remain scarce for some aspects that could benefit to the patients. In the present work, we aimed to add knowledge to the different phases of the intestinal carriage of multidrug-resistant enterobacteria (pre-colonization, colonization and post-colonization). We first focused on the pre-colonization phase and studied the determinants that lead to the intestinal carriage of multidrug-resistant enterobacteria. We found that such bacteria had spread even in extremely remote places, and that at hospital admission, the prediction of their digestive carriage was poorly effective based on the clinical data available at that time. About colonization itself, we worked on the quantitative dimension of the carriage of ESBL-producing enterobacteria and introduced a new marker: the relative abundance i. E. The ratio between the intestinal densities of ESBL-producing enterobacteria and that of total enterobacteria. We observed the evolution of this marker after a short exposure to levofloxacin, a widely-prescribed fluoroquinolone. Furthermore about thé colonization phase, we developed a microbiological method to recover enterobacteria producing the OXA-48 carbapénémase, subsequently to its incidental detection in a patient with no obvious risk factors for carriage of such bacteria. Eventually, we studied the post-colonization phase (i) in establishing for the first time the link between the relative abundance of ESBL-producing enterobacteria and their occurrence in urinary-tract infections in women, and (ii) in observing the in vivo transfer of the KPC carbapenemase from a Greece-acquired strain of Klebsiella pneumoniae to a commensal K. Pneumoniae. In conclusion, our results highlighted the central role played by the intestinal microbiota and opened new, concrete perspectives of the management of multidrug-resistant enterobacteria

Malgré de très nombreuses études expérimentales et cliniques dans le domaine de l'arrêt circulatoire, seulement 1 à 8% des patients quittent l'hôpital avec une bonne récupération neurologique. Il est donc nécessaire de proposer de nouvelles thérapeutiques pour tenter d'augmenter la survie après un arrêt circulatoire. Pour atteindre ce but, il semble indispensable d'améliorer la qualité du massage cardiaque durant la réanimation et de protéger le myocarde et le cerveau contre les phénomènes d'ischémie-reperfusion. Dans la première partie de ce travail, nous avons évalué les pratiques actuelles pour voir si celles-ci sont réellement bénéfiques aux patients. Ainsi, en nous basant sur de nouvelles techniques d'imagerie, nous avons analysé l'effet de la régulation de la pression intra-thoracique sur la microcirculation des organes. Ensuite, ce travail s'est consacré à étudier l'impact des dispositifs d'intubation supraglottique sur la perfusion cérébrale au cours de la réanimation cardiopulmonaire. Enfin, nous avons étudié les effets potentiellement délétères de l'adrénaline sur la perfusion des organes vitaux lors de son utilisation au cours de la réanimation cardiopulmonaire. La seconde partie de ce travail a porté sur l'optimisation de la perfusion des organes vitaux par une nouvelle technique de réanimation cardiopulmonaire baptisée SNPeCPR. Enfin, la dernière partie a porté sur la protection des lésions de reperfusion après un arrêt cardiaque par une adaptation du post-conditionnement ischémique à la réanimation cardiopulmonaire
Despite numerous experimental and clinical studies in the field of cardiac arrest, only 1 to 8% of the patients leave the hospital with good neurological recovery. Therefore, it is necessary to propose new therapeutics to increase survival after cardiac arrest. To achieve this goal, it seems essential to improve the quality of chest compressions during resuscitation and to protect the myocardium and the brain against ischemia reperfusion injuries. In the first part of this work, we evaluated the current practices to assess if they are beneficial to the patients. Thus, based on a new imaging technic of microcirculation, we checked with direct visualization the effects of the intrathoracic pressure regulation on the microcirculation of the organs. Then, this work studied the impact of supraglottic airway devices on cerebral perfusion during cardiopulmonary resuscitation. Finally, we studied the potentially deleterious effects of epinephrine on vital organ perfusion during cardiopulmonary resuscitation. The second part of this work was focused on optimizing vital organ perfusion by a new technique called SNPeCPR. Finally, the last part focused on the protection of reperfusion injury after cardiac arrest by an adaptation of ischemic postconditioning in cardiopulmonary resuscitation

Actuellement, il est difficile de distinguer le rôle respectif de l'obésité et des troubles métaboliques associés comme l'insulino-résistance et/ou le diabète de type 2 dans la génération des désordres respiratoires et notamment des apnées du sommeil puisque ces derniers sont généralement diagnostiqués tardivement. Les données de la littérature suggèrent que, malgré l'augmentation de la morbidité et de la mortalité par ce syndrome, les mécanismes qui permettent d'expliquer cette anomalie restent insuffisants. Ce manque de connaissance provient en partie du manque de modèles animaux permettant d'étudier la survenue naturelle d'apnées du sommeil. Le but de ce travail était d'étudier les répercussions de l'insulino-résistance et du diabète de type 2 sur le métabolisme énergétique, la ventilation, l'occurrence des apnées en absence d'obésité et la contractilité diaphragmatique en adaptant le modèle de rat nourri avec un régime riche en graisses développé par Reed et al (Metabolism, 2000). Les effets de la metformine, molécule connue pour traiter l'insulino-résistance, ont été étudiés pour déterminer si ce traitement permet de réduire, voir supprimer les éventuelles répercussions induites par cette pathologie sur la respiration. Notre étude montre que l'insulino-résistance augmente le score d'apnées durant le sommeil en absence d'obésité. Cette augmentation est réversible sous metformine renforçant ainsi l'idée que l'insulino-résistance peut, à elle seule, entraîner des troubles ventilatoires pendant le sommeil, indépendamment de l'obésité. Cette étude a également montré que la prise de metformine en parallèle avec le régime hyperlipidique présente un effet préventif sur le développement d'un syndrome d'apnées du sommeil. La diminution, in vitro, de la force du diaphragme, principal effecteur inspiratoire, pourrait être reliée avec l'augmentation des apnées du sommeil. Par ailleurs, des modifications morphologiques des fibres diaphragmatiques ont été observées chez les rats diabétiques avec une augmentation de la proportion des fibres de types IIb et une diminution des fibres de type I et IIa
To day, it is difficult to distinguish the respective role of obesity and metabolic disorders as insulin resistance and/or type 2 diabetes mellitus in the occurrence of respiratory disorders and notably sleep apneas since these disorders are typically diagnosed late in their course. Data from literature suggest that, although increase morbidity and mortality from this syndrome, the mechanisms underlying this pathology remain poorly understood. This lack of knowledge stems in part from a paucity of animal models to study naturally occurring apnea during sleep. The aim of this work was to study insulin resistance and type 2 diabetes mellitus repercussions on energetic metabolism, ventilation, apneas occurrence in absence of obesity and diaphragmatic contractility by using the rat model fed high fat diet developed by Reed et al (metabolism, 2000). Our study was also designed to assess whether the use of metformin, one of the most common drugs used in the treatment of insulin resistance, could reverse or suppress the possible ventilation impairments and apnea occurrence. This study demonstrates that insulin resistance increases apneas score during sleep in absence of obesity. This increase was reversed by metformin treatment reinforcing the idea that insulin resistance could induce ventilatory disorders during sleep independently of obesity. This study also demonstrated that metformin treatment in parallel with high fat fed diet prevent the development of sleep apnea syndrome. The decrease, in vitro, of the force of diaphragm, the principal inspiratory muscle, could be linked to an increase of apnea during sleep. Indeed, morphological modifications in diaphragmatic fibres had been shown with an increase of type IIb fibres and a decrease of type I and IIa fibres in diabetic rats

La thrombose coronaire, un phénomène de coagulation pourtant physiologique, va entraîner, de part la brutalité de son apparition dans un espace confinée -l'artère coronaire- une anoxie aiguë et des dommages myocardiques irréversibles dont les conséquences à court et à long terme peuvent être catastrophiques en terme de morbi-mortalité. Parmi les cinq « projets clinico-biologiques » présentés ici, le premier est la première observation ex-vivo chez l'homme de la dynamique de composition du thrombus responsable de l'occlusion intracoronaire lors d'un infarctus du myocarde. Le second, est un projet princeps démontrant qu'il existe un impact de la transfusion de globule rouge sur la réactivité plaquettaire et apporte des réponses quand à la physiopathologie de l'effet délétère rapporté associé à cette thérapeutique. Le troisième est une étude génétique sur les déterminants de l'architecture et la fonction du réseau de fibrine composant le thrombus et valide le concept de l'existence d'une résistance pharmacogénétique à la fibrinolyse chez certains patients. La quatrième étude est une étude pharmacologique concernant la variabilité de la réponse au traitement par le clopidogrel et démontre l'utilité de l'augmentation de la dose afin de surmonter la mauvaise réponse de certain patients et d'améliorer leur pronostic. Enfin, la cinquième étude porte sur la validation d'un test biologique rapide de mesure de l'activité anticoagulante obtenue par l’énoxaparine dans le but d'optimiser et d'individualiser la prise en charge des patients devant subir une revascularisation par angioplastie percutanée des artères coronaires occluses par une thrombose
Coronary thrombosis, a coagulation phenomenon yet physiological, lead, because of the brutality of his appearance in a confined space -the coronary artery- to an acute anoxia and irreversible myocardial damage whose consequences in the short and long term can be catastrophic in terms of morbidity and mortality. Among the five "clinico-biological projects" presented here, the first observation is the first ex-vivo study in human of the dynamics of composition of the thrombus responsible for the occlusion during intracoronary myocardial infarction. The second project is a princeps study demonstrating that there is an impact of red blood cells transfusion on platelet reactivity and provides answers on the pathophysiology of the reported harmful effects associated with this therapy. The third is a study on genetic determinants of the architecture and fonction of the network of fibrin, a major component of the thrombus and validates the concept of the existence of pharmacogenetic résistance to fibrinolysis in some patients. The fourth study is a pharmacological study on the variability of response to treatment by clopidogrel and demonstrates the usefulness of increasing the dose to overcome the poor response of some patients and improve their prognosis. Finally, the fifth study concerns the validation of a rapid biological test for measuring the anticoagulant activity obtained with enoxaparin in order to optimize and individualize the care of patients undergoing percutaneous revascularization with angioplasty of occluded coronary arteries

L'encapsulation de molécules d'intérêt thérapeutique est une technique développée dans le domaine biopharmaceutique afin de remédier aux problèmes d'instabilité des molécules en milieu biologique. Notre travail a consisté à mettre au point différentes particules polymères dans le but de développer deux types d'applications différentes: l'administration par voie orale d'un principe actif non administrable jusqu'alors par cette voie et la conception d'un immunoadsorbant original. La technique d'encapsulation par double émulsion (hydrophile dans lipophile dans hydrophile) et extraction/évaporation de solvant a été utilisée dans l'ensemble de notre travail. Cette technique a permis d'une part d'encapsuler un principe actif hydrophile, l'héparine de bas poids moléculaire (HBPM), et d'autre part d'incorporer des fragments membranaires d'érythrocytes humains porteurs d'antigènes sériques dans une matrice polymère, dont les caractéristiques physico-chimiques varient suivant l'application en question. La section 1 est dédiée aux travaux concernant l'incorporation de l'HBPM, anticoagulant actuellemen administré uniquement par voie parentérale, dans des micro- et nanoparticules polymères. Des polymères biodégradables et non biodégradables ont été utilisés. Les particules solides ainsi obtenues ont fait l'objet d'une caractérisation in vitro (taille, charge superficielle, taux d'encapsulation, cinétique de libération, conservation de l'activité biologique, répartition de l'HBPM marquée à la fluorescéine au sein de la matrice polymère des microparticules). Une étude in vivo préliminaire a ensuite été réalisée chez l'animal. De l'HBPM encapsulée dans des nanoparticules a été administrée par voie orale à des lapins et l'activité biologique plasmatique obtenue au cours du temps a été comparée à celle obtenue après administration intraveineuse d 'HBPM libre en solution aqueuse. L'activité biologique plasmatique a été déterminée par une méthode classique (dosage chromogénique de l'activité anti-Xa) et par une méthode en cours de développement permettant de suivre la génération et l'inhibition de la thrombine: la thrombinographie. Les pics d'activité plasmatique obtenus témoignent de l'efficacité de notre système. La section 2 est consacrée à la mise au point d'une colonne d'immunoépuration dont les éléments de basesont des microparticules encapsulant des ghosts érythrocytaires. Les microparticules obtenues, non biodégradables et non chargées, ont été placées en tube et en colonne afin d'étudier la capacité d'adsorption d'anticorps anti-A, anti-B et anti-Kell en solution aqueuse ou plasmatique avec les antigènes membranaires encapsulés. Les antigènes de groupe sanguin A ou B et du système Kel incorporés dans nos particules conservent leur pouvoir antigénique et restent capables de dépléter les solutions éluées. Au vu des potentialités de ce système, cette invention fait l' objet d'une demande de brevet français. En conclusion, nous avons démontré qu'une même technique d'encapsulation pouvait être utilisée à la foispour développer une forme pharmaceutique et un biodispositif médical. Ces travaux ont en effet mis en évidence les potentialités d'une part des nanoparticules quant à l'administration orale de l'HBPM et d'autre part des microparticules en tant qu'immunoadsorbant.

Les formes orales de traitements anticancéreux se sont considérablement développées récemment. La question de l’adhésion au traitement devient donc un nouvel enjeu en oncologie. Cette thèse aborde de façon générale le problème de l’adhésion aux traitements oraux en oncologie, et plus spécifiquement celui de la mesure en bases de données médico-administrativesde l’observance et de la persistance à l’hormonothérapie, traitement oral majeur dans le cancer du sein. Le point de vue retenu est celui de la pharmacoépidémiologie, à savoir l’étude des consommations pharmaceutiques en contexte clinique. La première partie de cette thèse fait le point sur les connaissances actuelles concernant l’adhésion à l’hormonothérapie - tamoxifène et inhibiteurs de l’aromatase (IA) - dans le cancer du sein. La seconde partie, reposant sur l’analyse de cohortes de patientes atteintes de cancer du sein sélectionnées à partir de (1) la UK General Practice Research Database et (2) des données de l’Assurance Maladie, a montré que : - Plus de la moitié des femmes de moins de 40 ans au diagnostic ne reçoivent plus de tamoxifène à 5 ans. Il s’agit du groupe de femmes le plus à risque d’arrêt prématuré de traitement. - Chez les femmes âgées de plus de 50 ans au diagnostic, les arrêts de traitement sont moins fréquents pour les IA que pour le tamoxifène. - Les déterminants associés à la non-persistance sont un faible soutien social et la déclaration précoce de non-prise de traitement par la patiente chez les femmes jeunes. Chez les femmes âgées, l’utilisation de médecines complémentaires et alternatives, la présence de comorbidités sont associées à une augmentation du risque d’arrêt de traitement. A contrario, la présence d’une poly-médication est associée à une diminution du risque d’arrêt.- Dans les études précédentes, une proportion importante de femmes reprend son traitement au moins une fois après l’avoir arrêté de façon prolongée. Les arrêts transitoires de traitements ont été pris en compte à l’aide de modèles multi-états. La probabilité d’arrêt de traitement estimée à partir de ces modèles est plus faible que celle mesurée par la méthode de Kaplan-Meier, après la première année de traitement. La non-adhésion à l’hormonothérapie est fréquente. Certains de ses déterminants sont modifiables ou peuvent servir à identifier précocement les patientes à risque de non-observance. La prise en compte des arrêts transitoires de traitement est importante dans la mesure de la persistance. L’adhésion est l’élément clé faisant le lien entre l’efficacité d’un traitement mesuréedans un essai clinique et son impact dans la vraie vie. Il est urgent de prendre conscience de l’importance de la non-adhésion des formes orales en oncologie
The use of oral anticancer therapies has significantly increased in recent years. Adherence to these therapies has therefore become a major issue in the field of oncology. This thesis focuses on the question of treatment adherence in oncology, and more specifically on the use of medical records and administrative databases to estimate adherence and persistence to hormonal therapy—now a major form of oral breast cancer therapy. Our perspective is based on pharmacoepidemiology, i.e. the study of drugs in a clinical setting. The first part of this thesis synthesizes current knowledge on adherence and persistence to hormonal therapy for BC – i.e. tamoxifen and aromatase inhibitor therapies.The second part, which is based on the study of two cohorts constituted (1) from the UK General Practice Research Database and (2) from the French National Health Insurance System, demonstrates that - More than half of women younger than 40 at diagnosis do not receive any tamoxifen at 5years of follow-up. This group of women presents the highest rates of treatmentinterruption. - Among women over 50 at diagnosis, those receiving some form of AI therapy discontinue less frequently than those on tamoxifen treatment. - Determinants of non-persistence identified in the studies under review include low social support and self-reporting of non-compliance among younger women. Among older women, those using complementary or alternative medicine or suffering from comorbidities are more likely to discontinue their treatment, whereas women usingpolypharmacy are less likely to discontinue. - In previous studies, a large proportion of women who discontinued their treatment resumed after a prolonged gap. To account for these temporary treatment discontinuations, we used multi-state models. The probability of being off treatment estimated from these models is lower than that estimated from Kaplan-Meier estimates, after the 1st year of treatment. Adherence to hormonal therapy is largely suboptimal. Some of its determinants are modifiablefactors, while others can be used to identify sub-groups of patients at high risk of non-adherence. Accounting for temporary treatment discontinuation is important when measuring nonpersistence. Adherence is a key element for the translation of efficacy measured in clinical trials into effectiveness in real life. There is an urgent need to acknowledge the problem of nonadherence to oral therapy in oncology

La faible pénétration des antibiotiques ou d'autres drogues dans lés cellules rend certaines infections ou d'autres maladies telles que les cancers difficiles à traiter. La stratégie d'un cheval de Troie pour acheminer les médicaments directement vers sa cible dans les cellules est parmi les voies possibles pouvant améliorer l'efficacité thérapeutique. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à Chlamydia Trachomatis pour l'antibiothérapie et aux cellules cancéreuses en utilisant des nanoparticules magnétiques à visée thérapeutique. Dans les deux cas, la transferrine, la protéine majeure impliquée dans l'acquisition de fer, a été utilisée comme cheval de Troie pour cibler les cellules avec des antibiotiques et/ou des nanoparticules magnétiques. Dans le premier cas, l'amoxicilline a été greffée sur la transferrine et le système Amox¬transferrine a été testé in vitro et sur des cellules HeLa infectées par Chlamydia. Il est 10 fois plus efficace que l'amoxicilline seule, ce qui peut éventuellement impliquer la transferrine dans le système d'acquisition du fer de Chlamydia. Dans le second cas une série de trois nanomatériaux hybrides constitués de nanoparticules superparamagnétiques de maghémite portant des transferrines ont été synthétisés et caractérisés. Les 3 nanomatériaux sont internalisés dans les cellules HeLa et Lymphocyte par endocytose du récepteur de la transferrine. Ces résultats peuvent ouvrir de nombreuses possibilités dans le domaine de l'antibiothérapie pour les systèmes type transferrine-antibiotique ainsi que dans l'imagerie IRM, l'hyperthermie magnétique et la chimiothérapie pour les nanohybrides
The poor intracellular penetration of the most commonly used antibiotics or other drugs renders intracellular infections and/or other diseases, such as cancers difficult to treat. The strategy of a Trojan horse delivering the drug into the required spot is among the interesting routes exploited to overturn this therapeutic deficiency. Among these two are of interest, the first concerns Chlamydia trachomatis response to antibiotherapy and the second concerns the delivery of therapeutic nanoparticles to specific cells such as cancerous. In this work, transferrin, the major protein implied in the acquisition of iron, was used as a Trojan horse to deliver antibiotics and/or nanohybrid constructs. In the first case amoxicillin was grafted onto transferrin and the system tested in vitro and in HeLa cells infected with Chlamydia. It showed to be at least ten times more efficient that amoxicillin which may implicate transferrin in iron acquisition by Chlamydia. In the second case, a series of three nanoconstructs of superparamagnetic maghemite nanoparticles canying transferrin were synthesized and characterized. The three nanoconstructs are internalized in HeLa cells by the transferrin-receptor mediated endocytosis. These promising results are of interest in antibiotherapy for the antibiotic-transferrin constructs as well as in imagery, magnetic hyperthermia and chemotherapy for the nanoconstructs

L'objectif principal de la thèse est de montrer que dans une situation de contrôle de processus où (1) la prise de décision est distribuée, dans la mesure où celui qui élabore les plans est différent de celui qui les exécute, et (2) de plus, la coopération entre les deux opérateurs est verticale et intégrative, on a nécessairement une dépendance cognitive mutuelle entre les partenaires. Ils doivent partager leurs connaissances et leurs représentations complémentaires de la situation avec chacun une vision globale sur le processus à gérer, chacun à son niveau de contrôle propre. Ceci va supposer une phase d'évaluation mutuelle critique de la situation et, selon nous, une élaboration partagée des plans. Dans ce cadre, la planification distribuée induit, selon nous, une activité coopérative pour l'élaboration des plans : on parlera de planification coopérative. Le cadre de l'étude concerne les activités de prescription thérapeutique par le médecin et d'administration des médicaments par l'infirmier qui sont des fonctions clés à l'hôpital. Depuis la mise en exergue des nombreuses erreurs médicamenteuses, de nombreuses études ont montré l'impact positif des systèmes informatisés sur la sécurité des patients. L'automatisation est alors considérée comme « LA » solution pour diminuer de façon significative les taux d'erreurs. Pourtant, malgré tous les efforts et les moyens apportés, l'implémentation d'une application de ce type demeure extrêmement difficile et depuis peu, certaines études montrent même la création d'erreurs nouvelles engendrées par l'introduction des systèmes. Ces outils de soutien reposent, en effet, sur une allocation des tâches bien déterminée. Et selon nous, sur le terrain, cette individualisation des tâches n'est pas concevable, ou alors elle génère de nouvelles erreurs dans les activités. La première partie de l'étude consiste en une analyse de l'activité médicale et soignante à partir d'observations in situ et d'entretiens avec les opérateurs. Une comparaison de situations de travail utilisant des dispositifs informatisés ou non (dispositifs papier) montre que plus qu'un problème d'outil informatique, les problèmes sont plutôt imputables, en grande partie, à un défaut de communications entre les partenaires, ce qui fragilise l'ajustement des représentations compatibles. De ce fait, la deuxième partie s'est focalisée sur le recueil et l'analyse approfondie des communications écrites et orales entre les deux partenaires. L'analyse montre que, globalement, les médecins ont besoin d'informations sur le patient et sur les résultats des actions précédentes, informations dont seuls les infirmiers ont une connaissance « directe » de par leur présence continue auprès des patients. Les infirmiers ont, quant à eux, surtout besoin d'accéder aux intentions du médecin lorsqu'il prend une décision thérapeutique. Dans une situation non familière, les communications orales se révèlent indispensables pour faciliter l'élaboration et le maintien d'une représentation partagée efficace. En, effet, pour élaborer et mettre à jour un référentiel commun adapté, les opérateurs doivent s'appuyer sur une intelligibilité commune, qui est d'autant plus difficile à atteindre que les deux partenaires ont des spécialités et des formations différentes. Sans communications orales, les artefacts externes ne suffisent pas à générer une représentation « correcte » de la situation. De plus, les résultats montrent que ces communications orales permettent également une réelle co-construction des plans de prise en charge entre les médecins et les infirmiers, ce qui permet une fiabilisation du contrôle et de la surveillance du processus. Enfin la troisième partie s'intéresse au caractère public de l'action qui peut faciliter l'apprentissage par les opérateurs. Une série d'entretiens est réalisée auprès d'infirmiers qui, selon l'organisation du service, participent ou non au déroulement de l'action médicale (prise de décision thérapeutique au lit du malade). L'analyse montre que (1) les communications médecins-médecins et médecins-patients et (2) le déroulement de l'examen clinique permet un certain apprentissage par les infirmiers des règles médicales utilisées, ce qui renforce l'intelligibilité attendue entre les acteurs. En conclusion, nous présentons une synthèse des résultats des trois études et discutons de la gestion collective des risques, pour laquelle, dans les situations nouvelles, une construction collective de l'expertise est nécessaire. C'est dans la confrontation des interprétations différentes de la situation et dans leur cohabitation au niveau collectif que réside une part non négligeable de la fiabilité collective. Nous insistons sur l'importance (1) de la conception de situations de travail facilitatrices de processus de partage et (2) de l'étude des activités coopératives pour éclairer certains choix de conception des systèmes

Les antibiotiques sont fréquemment prescrits aux urgences pédiatriques, le plus souvent pour des infections respiratoires aiguës. Face à la problématique croissante de la résistance aux antibiotiques, l'évaluation et l'amélioration des prescriptions d'antibiotiques est une nécessité. Des indicateurs existent de longue date pour mesurer la consommation en ville et chez les patients hospitalisés. En revanche, malgré le poids des prescriptions d'antibiotiques aux urgences pédiatriques, peu de travaux y ont été effectués. Le travail doctoral avait pour but d'évaluer et d'améliorer l'usage des antibiotiques aux urgences pédiatriques. Le premier objectif était de mettre au point des indicateurs et outils pertinents pour évaluer qualitativement et quantitativement les prescriptions d'antibiotiques aux urgences pédiatriques. Nous avons montré que des indicateurs simples, tel que le pourcentage de patients souffrant infections respiratoires aiguës traités par antibiotiques, étaient utiles pour monitorer l'évolution des prescriptions d'antibiotiques lors d'interventions destinées à les améliorer. La méthodologie employée repose sur l'extraction automatisée de données du dossier médical permettant de recueillir des centaines de milliers de cas dans plusieurs sites. La deuxième question était celle de l'éducation des familles au bon usage des antibiotiques, au sein des urgences pédiatriques. Nous avons réalisé un essai randomisé, contrôlé, dans lequel 300 enfants ont été inclus. Nous avons mis en évidence une amélioration de la satisfaction et des connaissances sur le bon usag( des antibiotiques après une séance d'éducation thérapeutique sur ce thème versus une intervention contrôle
Antibiotics are frequently prescribed in pediatric emergencies department, most often for acute respiratory infections. Faced with the growing problem of resistance to antibiotics, the evaluation and improvement of the antibiotic prescriptions is crucial. Indicators of antibiotic consumption in hospital and in in ambulatory settings existed for a long time. However, despite the weight of antibiotics' prescriptions in pediatric emergencies department, few studies were conducted in these settings. This Doctoral work was designed to evaluate and improve the use of antibiotics in pediatric emergency department. Our first objective was to develop indicators and tools relevant to assess qualitatively and quantitatively antibiotics' prescriptions in pediatric emergencies department. We have shown that simple indicators, such as the percentage of patients with acute respiratory infection treated by antibiotics, were useful to monitor the evolution of the antibiotic prescriptions during interventions to improve them. The methodology is based on the automated extraction of data from the medical record to collect hundreds of thousands cases in several sites. The second issue was the education of patients and familles to the proper use of antibiotics in pediatric emergencies department. We performed a randomized, controlled blind trial in which 300 children have been included. We have showri an improvement in satisfaction and knowledge about the proper use of antibiotics after a therapeutic education on this topic versus a control intervention

Cette étude permet d'étudier la toxicité de la méthadone (les ingestions accidentelles pédiatriques, les mésusages,les conduites suicidaires et les symptômes reportés chez des patients traités) à l'aide des bases de données des Centres antipoisons et également de l'étude Méthaville. Elle permet de souligner la gravité des intoxications pédiatriques à la méthadone, et de confirmer que la forme gélule ne paraît pas entraîner plus de risque que la forme sirop, qui est commercialisée depuis 1995. Nous avons pu également retrouver de nombreuses différences significatives entre les 2 types d’exposition à la méthadone permettant de définir des profils de patients bien distincts. L'étude des symptômes rapportés par les patients traités par méthadone nous permet d'identifier des facteurs de risques à prendre en compte pour une meilleure prise en charge globale
This study investigates the toxicity of methadone (accidental pediatric ingestions, misuses, suicidal behaviours and reported symptoms in treated patients) using Poison Center databases and also the Methaville study. It highlights the severityof pediatric methadone poisoning, and confirms that the capsule form does not appear more dangerous than the syrup form, which exists since 1995 in France. We also found many significant differences between the 2 types of methadone exposure to define distinct patient profiles. The study of symptoms reported by patients treated with methadone allows us to identify risk factors to consider for a better medical management

Les atteintes cérébrales périnatales sont à l'origine de handicaps neurologiques chez les enfants nés à terme ou prématurés. Les lésions cérébrales associées sont le plus fréquemment retrouvées au niveau de la substance blanche chez le prématuré et du cortex chez l'enfant né à terme. L'origine de ces lésions est multifactorielle et implique l’excitotoxicité du glutamate. A l'aide d'un modèle murin d'agression cérébrale néonatale, basé sur l'injection d'un agoniste du glutamate, nous avons évalué l'efficacité de deux stratégies complémentaires, l'une visant à moduler des facteurs endogènes et l'autre à mesurer l'influence d'agents exogènes afin d'identifier de nouvelles cibles dans le traitement des encéphalopathies néonatales. Nous avons montré que le thiorphan, un inhibiteur de rendopeptidase neutre, injecté jusqu'à 12h après l'agression, réduit la taille des lésions corticales. Cette protection est médiée par la substance P et, à un moindre degré, la neurokirtine A, deux membres de la famille des tachykinines. Nous avons étudié l'effet neuroprotecteur de la nicotine en période néonatale et évalué la contribution respective des récepteurs α4ß2 et α7. Seule l'isoforme α4p2 semble être responsable de cette protection. Enfin, le préconditionnement hypoxique protège la substance blanche et le cortex contre une agression excitotoxique ultérieure. Le VEGF joue un rôle important dans cet effet en agissant par l'intermédiaire du récepteur Flk1/VEGFR2. Ainsi, la modulation des systèmes de neurotransmission cholinergique nicotinique et tachykinergique ainsi que l'augmentation des concentrations cérébrales du VEGF ont un rôle neuroprotecteur sur les lésions cérébrales néonatales
Perinatal brain injuries are the cause of neurological disability in the premature or term infant. The major brain lesions associated with cerebral palsy are often found in the white matter in preterm infants while they are mostly localized in the cortico-subcortical regions in term neonates. The origin of these lesions is multifactorial and involves glutamate excitotoxicity. Using a mouse model of neonatal brain injury, based on the injection of ibotenate, a glutamate analog, we investigated the efficiency of two complementary strategies, one aimed at modulating endogenous factors and the other at evaluating the influence of exogenous agents to identify new targets in the treatment of neonatal encephalopathy. We showed that thiorphan, a neutral endopeptidase inhibitor, injected up to 12 hours after the insult, decreased the size of the cortical lesions. This protection is mediated by substance P and, to a lesser extent, neurokinin A, two members of the tachykinin family. We investigated the neuroprotective properties of nicotine in neonates and evaluated the respective contributions of two dominant isoforms of acetylcholine receptor, namely, α4ß2 and al. Our results suggest that only the α4ß2 isoform seems to be responsible for nicotinic protection. Finally, hypoxic preconditioning protects the white matter and cortex from further excitotoxic injury. VEGF plays a key role in this process by acting through Flk1/VEGFR2 receptor. In summary, we have shown that the modulation of nicotinic, cholinergic, and tachykinergic Systems, as well as increased levels of VEGF in the brain, have neuroprotective effects against neonatal brain injuries

Les agents d'embolisation liquides utilisés dans le traitement endovasculaire ont de nombreuses limitations. Des polymères, tels que l’Onyx et les cyanoacrylates sont disponibles. L’alcool est un agent puissant, mais non radio-opaque. Les cyanoacrylates entrainent une réaction inflammatoire significative. Leur polymérisation rapide est responsable d’un comportement mal prévisible.Il existe une possibilité de traitement incomplet.L’Onyx est efficace pour le traitement des MAV.Une pénétration plus distale est obtenue avec l’alcool, mais associée à un risque de migration systémique. Nous avons évalué les propriétés d'un nouvel agent embolique (Alconyx) composé d'un mélange d'alcool et d'Onyx. Cet agent devrait cumuler les avantages respectifs de l'alcool et de l'onyx avec une visualisation adéquate sous fluoroscopie, une meilleure pénétration distale que l'Onyx seul et moins de toxicité systémique liée à la réduction de quantité d’alcool injecté. Divers mélanges ont été testés avec différentes concentrations d'Onyx 18 et d’alcool absolu. Alconyx 25 (75% Onyx 18; 25% d'éthanol) est la formulation la plus prometteuse. Nous avons démontré sa facilité d'injection in vivo, sa nature cohésive sans fragmentation ainsi que sa bonne visualisation sous fluoroscopie. En raison de sa moindre viscosité démontrée in vitro, Alconyx a été capable de pénétrer profondément dans le lit artériel.. L'occlusion proximale par Alconyx 25 devrait permettre d'améliorer le contact entre l'éthanol et la paroi vasculaire et donc augmenter son pouvoir sclérosant et limiter son passage systémique. Les propriétés occlusives d’Alconyx 25 sont similaires à celle de l’Onyx 18 sous haute pression in vitro
Commercially available liquid embolization agents used in endovascular treatment have many limitations. Polymeric agents as Onyx and cyanoacrylate are available. Ethanol also is a potent sclero-embolic agent. Cyanoacrylates are effective liquid embolic agents, however, their rapid polymerization makes their behaviour unpredictable with possibility of incomplete treatment. These properties render their use challenging.Onyx is easy to use. However, in very small arterial niduses, Onyx, is unable to penetrate deeply. Deep penetration is obtained with ethanol, associated with risk of systemic migration.Poor visualization of ethanol under fluoroscopy is major drawback. Mixing Onyx with ethanol had never been described in the literature till now. In this work, various mixtures have been tested with different concentrations of Onyx 18 and absolute ethanol. Alconyx 25 (75% Onyx 18; 25% ethanol) seems to be a promising product. We proved its ease of injection in vivo and in vitro, its cohesive nature showing no fragmentation or interruption of the injected column as well as its good visualization under fluoroscopy. It was able to penetrate deeply in the arterial bed. The occlusive properties of Alconyx 25 were rated as good as Onyx 18 under high pressure in vitro. Further investigation is needed to better understand the behavior of ethanol in the suspension and its effect on tissues compared to Onyx diluted simply with an equivalent amount of DMSO. Studies on other commercially available concentrations of Onyx would certainly be interesting

La protéine EBNA1, codée par le virus Epstein-Barr (EBV), est la seule protéine virale exprimée dans toutes les tumeurs malignes associées à EBV, et représente donc une cible importante pour la thérapie antitumorale. Bien qu'EBNA1 soit un antigène du « non-soi », le système immunitaire ne parvient pas à détruire les cellules tumorales l'exprimant. EBNA1 échappe au système immunitaire grâce à une séquence répétée de glycines et d'alanines (GAr) proche de la région N-terminale d'EBNA1. Cette répétition a la double capacité de contrôler la synthèse et la dégradation protéique en agissant en cis. Notre recherche est centrée sur la mise en évidence des mécanismes moléculaires à la base de ce double effet de GAr afin de mieux comprendre comment EBNA1 évite la présentation antigénique via la voie du CMH de classe I. Nous avons étudié les effets de GAr sur la voie ubiquitine-protéasome et avons conclu que GAr est un régulateur position- et substrat-dépendant du protéasome 26S. Dans les cas où le GAr protège le substrat de la dégradation 26S-dépendant, il provoque la dégradation partielle d'une petite fraction du substrat. Nous montrons que cette dégradation partielle est probablement due à une activité endoprotéolytique du protéasome causée par le GAr qui interfère avec l'activité de dépliage du 19S. Nous avons aussi étudié l'effet de GAr sur la synthèse des protéines. Nous démontrons que GAr affecte l'étape d'initiation de la traduction de PARNm, afin de réduire la production de peptides antigéniques précurseurs à partir de l'ensemble de PARNm. Ce mécanisme, utilisé par la protéine EBNA1 d'EBV, est probablement aussi appliqué par d'autres virus grâce à des structures des ARNm dans les régions 5' UTR
The Epstein-Barr virus (EBV) encoded EBNA1 is the only viral protein expressed in all EBV-associated malignancies, therefore represents an important target for anti-cancer therapy. Despite the fact that EBNA1 is a non-self antigen, the immune System fails to destroy EBNA1 expressing tumour cells. EBNA1 evades the immune System by a unique mechanism involving a Gly-Ala repeat (GAr) sequence near the N-terminus of EBNA1, which has the dual capacity to control protein synthesis and degradation in cis. Our research is focused on elucidating the molecular mechanisms underlying this double effect of the GAr in order to better understand how EBNA1 avoids antigen presentation via the MHC class I pathway. We investigated the effects of GAr on the ubiquitin-proteasome pathway and concluded that GAr is a position- and substrate-specific regulator of the 26S proteasome. In those cases when the GAr protects a substrate from 26S-dependent degradation it causes a small substrate fraction to be partially degraded. We show that this partial degradation is probably due to an endoproteolytic activity of the protéasome caused by the GAr interfering with the unfolding activity of the 19S regulatory particle. The second part of this study deals with the effect of GAr on protein synthesis. We demonstrate that GAr affects the initiation step of mRNA translation in order to reduce the production of antigenic peptide precursors throughout the entire mRNA. This mechanism, used by the EBNA1 protein of EBV, is probably also applied by other viruses via RNA structures in the 5' UTR of viral mRNAs

Etude à l'aide des outils de transcriptomique de 17 cultures primaires, maintenues à l'état vivant par xénogreffes et cultures cellulaires, et issues de patients ayant présenté un adénocarcinome pancréatique. Par clustering hiérarchique basée sur l'ensemble des gènes du transcriptome tumoral, 5 patients avec dénomination anonyme se sont fortement distingués des autres patients et présentaient de façon similaire des tumeurs peu différenciées sur le plan histologique et une survie péjorative de moins de 8 mois. Dans cette population de « courts survivants », un total de 942 gènes exprimés de façon significativement différentielle a été retrouvé. Parmi ces gènes, 439 gènes sont apparus significativement sous exprimés et 505 gènes significativement surexprimés (fold change ≥2). L'analyse par GO a montré que parmi ces 942 gènes différentiellement exprimés, nous avons retrouvé un enrichissement important chez les courts survivants, des gènes impliqués dans le cycle cellulaire et l'activité mitotique, la réponse cellulaire au stress, le métabolisme cellulaire ainsi que le métabolisme de l'ADN et l'organisation chromosomique. Par ailleurs, nous avons choisi parmi les 17 cultures primaires, les 3 lignées cellulaires les plus sensibles et les 3 les plus résistantes aux drogues selon les résultats des tests de « Chimiogramme ». Plusieurs gènes ont été identifiés comme spécifiquement surexprimés ou sous-exprimés en relation avec une sensibilité ou une résistance particulières des cellules aux drogues utilisées. Nous avons identifié 671 gènes associés à la gemcitabine, 1107 à l'oxaliplatine, 308 au 5-FU et seulement 34 et 46 au docétaxel et au SN38 respectivement
We developed an efficient strategy in which PDAC samples from 17 consecutive patients were collected by Endoscopic Ultrasound-Guided Fine-Needle Aspiration (EUS-FNA) or surgery and preserved, by an original approach, as breathing tumors by xenografting and as a primary culture of epithelial cells. Transcriptomic analysis was performed from breathing tumors by an Affymetrix approach. We observed a significant heterogeneity in the RNA expression profile of tumors. However, the bioinformatic analysis of this data was able to discriminate between patients with long- and short-term survival corresponding to patients carrying poorly-differentiated PDAC tumors respectively. We identified 942 genes with statically different expression. Among these genes, 439 were under-expressed and 505 genes over-expressed (fold change ≥2) in short survivors. Primary culture of cells allowed us to analyze their relative sensitivity to anticancer drugs in vitro by a "Chemogram", by similarity with the antibiogram for microorganisms, establishing an individual profile of drug sensitivity. As expected, the response was patient-dependent. Interestingly, we also found that the transcriptome analysis predict the sensitivity of cells to the five anticancer drugs the most frequently used to treating patients with PDAC. In conclusion, using this approach, we found that the transcriptomic analysis could predict the sensitivity to anticancer drugs and the clinical outcome of patients with PDAC

Ces 20 dernières années, la mortalité attribuable à l’anesthésie a été divisée par 10. Cette baisse de mortalité offre la possibilité de porter une attention plus importante à certains critères d’évaluation, reportés par les patients, tels que le vécu ou la satisfaction. Appliqué au contexte periopératoire, le vécu du patient peut constituer un indicateur de résultats de l’anesthésie, à classer aux côtés de la morbidité et de la mortalité. Une prémédication anxiolytique est largement pratiquée avant une intervention chirurgicale à travers le monde. Une autre stratégie répandue pour améliorer le vécu du patient consiste à réaliser une sédation prolongée au décours des interventions réalisées sous anesthésie locorégionale. Ces pratiques ne reposent que sur un faible niveau de preuve et leur efficacité n’est pas évaluée.Ce travail de thèse à permis de développer deux outils d’analyse de la période periopératoire, soit un questionnaire d’évaluation de l’anxiété préopératoire et une échelle d’évaluation du vécu periopératoire en anesthésie locorégionale. Ces outils ont été déployés au sein d’une démarche de recherche clinique afin d’évaluer formellement l’efficacité de la prémédication sédative et celle de la sédation peropératoire dans deux études prospectives randomisées distinctes. Les résultats mettent en évidence que si l’anxiété préopératoire est liée à un moins bon vécu global de la période periopératoire, la réalisation systématique d’une prémédication ou d’une sédation ne résulte pas en une meilleure expérience pour le patient et est à l’origine d’effets adverses significatifs
The last 20 years, mortality due to anesthesia was divided by 10. This decline in mortality allows to bring more attention to certain evaluation criteria, reported by patients, such as experience or satisfaction. Applied to the perioperative context, the patient experience can be a major outcome of anesthesia, alongside morbidity and mortality. Different empirical approaches, are implemented for several years to improve the patient experience. Sedative premedication is widely practiced before surgery worldwide. Another common strategy to improve the patient experience is to perform continuous sedation in interventions performed under regional anesthesia. These practices rely on a low level of evidence and their effectiveness is not evaluated. Such an assessment would require the use of validated tools together with a clinical experimental approach placing the patient experience as the primary endpoint.This thesis allowed to develop two tools for analyzing the perioperative period, i.e. an evaluation of preoperative anxiety and the assessment of perioperative patient experience in regional anesthesia. These tools have been deployed in a clinical research process to formally evaluate the effectiveness of sedative premedication and intraoperative sedation in two separate randomized studies. The results show that if preoperative anxiety is related to poorer overall experience of the perioperative period, the systematic implementation of premedication or sedation does not result in a better experience for the patient and could lead to significant adverse effects

Ces dernières décennies, de nouvelles techniques d’anesthésie-analgésie locorégionales ont permis d’améliorer la prise en charge post-opératoire. Cependant, les anesthésiques locaux (AL) exposent les patients à un risque de toxicité systémique potentiellement fatale. La première étude est une étude rétrospective ayant inclus des cas potentiels de toxicité systémique aux AL. Cette étude a montré que, face à l’importante variabilité pharmacocinétique des AL observée, l’interprétation des concentrations est difficile. Sa contribution au diagnostic clinique est limitée aux prélèvements précoces après les signes de toxicité.La deuxième étude porte sur la pharmacocinétique de la lidocaine administrée en anesthésie locale tumescente. Il s’agit de la première description de sa pharmacocinétique dans cette indication. Les concentrations restent faibles pendant la durée de suivi. La modélisation par approche de population a permis de décrire le processus d’absorption systémique de la lidocaine après l’injection d’une solution tumescente. La troisième étude porte sur 10 patientes ayant reçu une infusion cicatricielle de ropivacaine de 40 heures. Il s’agit de la première description pharmacocinétique de l’infusion cicatricielle de ropivacaine dans cette indication. La modélisation a montré que l’absorption systémique de la ropivacaine est retardée et la concentration maximale est atteinte 2 heures après la fin de la perfusion. Les études rapportées dans cette thèse ont exploré les propriétés pharmacocinétiques des AL. L’objectif de ces travaux est de contribuer à une meilleure connaissance des thérapeutiques et de contribuer à une meilleure prise en charge des patients
New locoregional anaesthetic techniques have permitted an improvement of care. However, local anaesthetics (LA) expose patients to systemic toxicity risks. It is essential to set guidelines for the use of these techniques. A retrospective study includes cases of suspected LA systemic toxicity. Systemic toxicity of LA occur when a large amount of LA reaches the systemic circulation. This thesis shows that the interpretation of plasmatic concentrations remains difficult because of the significant pharmacokinetics variability in the different nervous blocks. The second study deals with the population PK of lidocaine administrated in tumescent local anaesthetic. It is the first description of lidocaine PK is performed in this indication. The lidocaine concentrations remain low during the whole time of the operation. The modelling approach has allowed to highlight the slow systemic absorption process of lidocaine after injection of a tumescent solution. The third study focuses on the PK of ropivacaine administrated via continuous wound infusion in 10 women. It is the first time that the PK of ropivacaine administered using wound infusion is described. The modelling approach shows that systemic absorption of ropivacaine delayed and the maximal serum concentration is reached 2 hours after the end of ropivacaine infusion. These studies explored the PK properties of LA used as an anaesthetic or analgesic drug. The objective of this work is to contribute to a better knowledge of therapeutics and a better handling of patients

Un des points cruciaux en pharmacoépidémiologie concerne le suivi longitudinal de l’exposition médicamenteuse dans les bases de données médico-administratives. Le parcours médicamenteux dans la « vraie » vie étant rarement linéaire, les trajectoires d’exposition médicamenteuses sont particulièrement complexes (notamment pour les médicaments psychoactifs) et difficilement mesurable par les méthodologies habituelles. Dans un premier temps nous avons ainsi étudié les trajectoires d’exposition à la méthadone notamment entre ses 2 formes galéniques à partir du SNIIRAM en région PACA-Corse. Cependant, la complexité des trajectoires d’exposition à la méthadone rendait leur description difficile. Pour modéliser précisément ces processus complexes un modèle multi-états a été construit. Dans ces travaux, nous avons pu identifier dans les bases de données des périodes ou l’exposition médicamenteuse ne peut être observée et pouvant engendrer un biais de classification des patients entre exposés et non exposés. Dans un second temps, nous avons donc étudié l’impact de ces périodes induites par les séjours hospitaliers a été évalué sur l’estimation du niveau d’exposition aux antipsychotiques de patients atteints de démence. En faisant l’hypothèse des « extrêmes » nous avons mis en évidence la variabilité importante induite par ces périodes. Enfin nous les avons modélisées et étudié leur impact sur la relation entre exposition aux benzodiazépines et mortalité toutes causes à 1 an à partir de l’EGB. L’ensemble de ce travail de thèse a permis de développer des méthodologies permettant une analyse plus précise de la dynamique d’exposition médicamenteuse
In pharmacoepidemiology, one of the main concerns is analysis of drug exposure time in claim databases. In real-life settings, trajectories of patients ‘exposure are complex especially with psychoactive drugs and difficult to measure with traditional methodologies. In a first stage, we have highlighted the methadone exposure paths including between its two dosages formulations. This work underlined the multiplicity of exposure trajectories to methadone and the difficulty of making an accurate description. Consequently, we developed a multi-state model on a large claims database (SNIIR-AM) in order to investigate variations of methadone exposure with time. In this work, we identified the presence of periods or drug exposure cannot be observed in these databases. These periods lead to an unobservable or immeasurable exposure time bias in which patients are misclassified as unexposed. In a second stage, we assessed their impact on the prevalence of long-term antipsychotic use in community-dwelling patients with dementia considering hospitalization periods during which drugs administered are not available within almost all health insurance databases. Under extreme bias hypothesis the prevalence of long-term antipsychotic users almost doubled. Finally, we sought to model unobservable periods due to hospitalization and to apply several methods for addressing this bias and assess their impact on risk estimates. This approach was applied to the study of the association between benzodiazepines and mortality and was performed on the EGB database. In this thesis work we have developed methodologies for a more accurate analysis of the dynamics of drug exposure

La barrière hémato-encéphalique (BHE) protège le système nerveux central (SNC) des fluctuations plasmatiques des molécules endogènes, mais aussi exogènes, et notamment des molécules à potentiel thérapeutique. L’imperméabilité de la BHE est compensée par la présence de mécanismes qui assurent le transport transendothélial des nutriments nécessaires au tissu nerveux, parmi lesquels la transcytose relayée par différents récepteurs. Dans le but d’améliorer le transfert d’agents thérapeutiques à travers la BHE, nous développons des « vecteurs » qui se lient à certains de ces récepteurs. Au cours de notre thèse, nous avons développé et optimisé des modèles in vitro de BHE et barrière sang-moelle épinière (BSME) syngéniques de rats et souris, basés sur la co-culture de cellules endothéliales microvasculaires (CEMs) cérébrales (CEMCs) ou spinales (CEMSs) et d'astrocytes. Parmi les récepteurs étudiés, nous montrons que le LDLR est exprimé à la membrane plasmique apicale des CEMCs et qu’il est impliqué dans la transcytose du LDL tout en évitant le compartiment lysosomal, confirmant l’intérêt de son ciblage dans nos approches. Nous montrons que nos vecteurs, conjugués à une molécule organique ou à un cargo protéique, sont endocytés par les CEMCs de façon LDLR-dépendante, évitent le compartiment lysosomal et franchissent la monocouche de CEMCs. Nous avons également mis en place des modèles in vitro de BHE et BSME enflammés, sachant que l’inflammation des CEMs est associée à de nombreuses pathologies du SNC. Ces modèles seront utiles pour évaluer des stratégies de vectorisation ciblant préférentiellement les structures du SNC en situation pathologique
The blood-brain barrier (BBB) protects the central nervous system (CNS) from plasma fluctuations of endogenous, but also exogenous molecules, including therapeutic molecules. The BBB’s restrictive properties are compensated by the presence of different mechanisms that provide transport of nutrients across the BBB, including transcytosis of endogenous ligands mediated by receptors. Our objective is to improve drug delivery across the BBB and we developed “vectors” that target different recpetors. During our thesis we developed and optimized cellular tools and approaches, in particular syngeneic in vitro models of the BBB and blood-spinal cord barrier (BSCB) from both rat and mouse, based on the co-culture of brain (BMECs) or spinal cord (SCMECs) microvascular endothelial cells (MECs) and astrocytes. Among the receptors we studied, we show that the LDL receptor (LDLR) is expressed at the apical plasma membrane of BMECs and confirmed that it is involved in transcytosis of LDL through the vesicular compartment, while avoiding the lysosomal compartment, further establishing its interest as a target receptor. We show that our vectors conjugated to an organic molecule or to a protein cargo are endocytosed by BMECs in a LDLR-dependent manner, avoid the lysosomal compartment and cross the BMEC monolayers. Finally, we developed BBB and BSCB in vitro models in inflammatory conditions, considering that MECs inflammation is associated with many CNS lesions and pathologies. These models will be useful to better understand the inflammatory processes of CNS endothelial cells and to evaluate vectorization strategies preferentially targeting CNS structures in pathological condition

Il a été montré que la lésion du noyau subthalamique (NST) était impliqué dans la motivation en augmentant cette dernière pour la nourriture et la réduisant pour la cocaïne. On sait aussi que le NST est impliqué dans des processus émotionnels. La notion de motivation est difficilement dissociable de celle de plaisir. Le premier objectif de ce travail de thèse a donc été de séparer la motivation du plaisir pour mieux comprendre le role du NST sur les processus hédoniques grâce à des expériences de choix entre une récompense hédonique (saccharine) et une récompense calorique (glucose) puis des expériences de choix entre nourriture et cocaïne. Dans un second temps nous avons étudié le rôle du NST dans l’influence du contexte social sur la prise de cocaïne. Il parait assez évident de penser que l’addiction aux drogues se développe la plupart du temps dans un contexte social. Cependant, bien que le contexte social global ait beaucoup été étudié, c’est seulement récemment que les modèles animaux d’addiction en neurosciences ont intégré le rôle des facteurs sociaux proximaux (FSP, ceux présents au moment de l’exposition aux drogues), sans pour autant en étudier les bases neurobiologiques. On sait que la présence d’un congénère mais aussi son comportement influence le comportement d’auto-administration de drogue d’un individu. Cependant, les études menées dans ce cadre ne se sont pas intéressées au substrat neurobiologique de ces modulations comportementales. Ainsi, la suite de ce travail de thèse s’est attaché à étudier le rôle du noyau subthalamique sur l’influence des FSP dans la prise de cocaïne
It has been shown that subthalamic nucleus (STN) is involved in motivation, increasing it for food, while decreasing it for cocaine. It has also been shown that STN is involved in emotional processes. The idea of motivation is hardly dissociable from the notion of pleasure. We currently know the role of STN in motivation, but not so much has been done regarding its implication in hedonic processes. The first aim of my work was to separate motivation from pleasure to better understand the role of STN in hedonic processes, using choice procedures between hedonic (saccharine) and caloric reward (glucose), and between food or cocaine. We wanted thus to understand better the role of STN in the modulation exerted by the context, especially the social context, on cocaine intake. We know that drug addiction often develops in a social context. However, even if global social context has been studied a lot, it is only since recently that animal studies have taken into account the role of proximal social factors (PSF, those that are immediately present at the time of drug exposure). However, these studies do not provide any information regarding neurobiological basis. Here, we examine how PSF interact with the STN, in the context of cocaine intake. Altogether, these results contribute to a better understanding of the STN involvement in the control of pleasure. Moreover, they provide evidence of the influence of proximal social factors on drug consumption and its neurobiological basis among which the STN seems to play a critical role

Introduction : De nombreuses thérapeutiques ciblant la protéine HER2 ou des protéines clés de la voie HER2 ont transformé le pronostic des cancers du sein HER2 positif. Les anomalies moléculaires tumorales, la richesse des thérapeutiques actuelles et leur coût nécessitent de rationnaliser la décision thérapeutique par l’utilisation de biomarqueurs. La protéomique ciblée, capable de détecter et mesurer un panel de protéines au sein d’échantillons complexes, est l’une des approches les plus performantes pour quantifier un jeu de biomarqueurs spécifiques simultanément dans un tissu tumoral. Objectif : développer une approche de protéomique quantitative ciblée de type PRM (Parallel Reaction Monitoring) pour évaluer les protéines clés de la voie HER2 dans différents échantillons tumoraux. Résultats : 1/ Sélection des peptides protéotypiques de nos protéines d’intérêt (EGFR, HER2 et phospho-HER2, HER3, PTEN) et développement des méthodes d’analyse. 2/ Détection et quantification de ces peptides a/ dans 17 lignées cellulaires mammaires, en conditions standard et après exposition au trastuzumab ou lapatinib. b/ dans des xénogreffes dérivées de cancer du sein humain. 4/ Corrélation des résultats a/ aux « gold » standards actuels : western blot et immuno-cyto/histo-chimie, b/ aux données issues d’analyses transcriptomiques validées. Conclusion : cette approche pourrait permettre dans le futur une vision globale de l’expression et l’activation des protéines de la voie HER2 et progresser vers une médecine « personnalisée ». Elle pourrait être améliorée par l’utilisation de spectromètres de masse plus performants et le recours à la microdissection laser sur tissu conservé en FFPE
Therapeutics targeting HER2 protein or its pathway considerably improved the prognosis of HER2-positive BC. The actual approaches to evaluate HER2 expression, immunohistochemistry (IHC) and FISH (fluorescent in situ hybridization), are labor-intensive and low-throughput, and present discrepancies between them. Therefore, there is a real need to develop other strategies to rationalize the use of targeted therapeutics. Parallel Reaction Monitoring (PRM) is a mass spectrometry-based approach for targeted proteomics able to detect and quantify numerous proteins with high-throughput allowing to follow mutated or activated status of targeted proteins. PRM could be a way to rationalize the use of targeted therapeutics to go through a more « personalized » medicine. The objective was to detect and quantify proteins implicated in HER2 pathway (EGFR, HER2, HER3, PTEN), phosphorylated peptides of HER2 and their response under treatment. We first selected proteotypic peptides of each protein and protein assays were generated. We detected and quantified proteotypic peptides of proteins of interest 1/on 17 breast cell lines on control condition and under treatment (trastuzumab or lapatinib). 2/ on more complex samples including patients-derived xenografts and human breast cancers. We correlated our data to gold standards western blot and IHC and to transcriptomic signatures previously validated. In the future, this approach could envision a picture of the expression and activation of proteins implicated in HER2-pathway. However, our strategy could be improved by more efficient mass spectrometers and the use of formalin-fixed paraffin-embedded samples to be used in clinical practice

L'avènement des méthodes de séquençage moléculaire à large échelle a permis l'identification d'altérations du microbiote digestif spécifiquement associés à l'obésité notamment un ratio Bacteroidetes/Firmicutes diminué chez les obèses. Depuis, de nombreux travaux ont décrit de nouvelles altérations associées à l'obésité, notamment une augmentation des représentants du genre Lactobacillus mais l'ensemble de ces résultats sont souvent l'objet de controverses. Afin de clarifier si le genre Lactobacillus était associé à l'obésité, nous avons réalisé deux études cas témoins (la deuxième étant le prolongement de la première avec un effectif de 263 individus) qui nous ont permis d'identifier que les altérations du microbiote digestif sont plus reproductibles au niveau de l'espèce. A ce titre nous avons retrouvé une plus grande concentration de Lactobacillus reuteri dans le microbiote digestif de sujets obèses alors que les concentrations de Bifidobacterium animalis, Methanobrevibacter smithii et Escherichia coli étaient diminuées. Nous avons pu établir une relation dose-dépendante entre la concentration de Lactobacillus reuteri et l'indice de masse corporelle. Par ailleurs, nous avons réalisé une méta-analyse sur les résultats des études publiées et avons retrouvé une association entre les genres Bifidobacterium (6 études, 348 individus) et Methanobrevibacter (3 études, 195 individus) avec l'absence d'obésité (…)
The revolution of large scale molecular sequencing methods allowed the identification of specific alterations in the gut microbiota associated with obesity such as a decreased Bacteroidetes / Firmicutes ratio in obese individuals. Since then, many studies have described different alterations associated with obesity, including an increase in members of the Lactobacillus genus, but results are often controversial. To clarify whether the genus Lactobacillus was associated with obesity, we conducted two case-control studies (the second being the follow-up of the first study with a total of 263 individuals) allowing us to understand that gut microbiota alterations are more reproducible at the species level. We found a greater concentration of Lactobacillus reuteri in the gut microbiota of obese while concentrations of Bifidobacterium animalis, Methanobrevibacter smithii and Escherichia coli were reduced. We were able to establish a dose-dependent relationship between the concentration of Lactobacillus reuteri and body mass index. In addition, we performed a meta-analysis on the results of published studies and we found an association between the Bifidobacterium (6 studies, 348 individuals) and Methanobrevibacter (3 studies, 195 individuals) with absence of obesity. (…)

Le mésothéliome pleural malin (MPM) est un cancer rare et de mauvais pronostic. Le diagnostic de MPM restant difficile à ce jour, nous avons tout d'abord évalué l'intérêt de l'analyse du transcriptome, à partir des cellules présentes dans le liquide pleural, à des fins diagnostiques. Si cette approche parait faisable, ses contraintes techniques la rendent incompatibles avec une utilisation en routine. Notre deuxième axe de travail s'est inscrit dans le domaine du traitement local du MPM, avec l'évaluation de l'administration intrapleurale (IP) de deux molécules de chimiothérapie : le pemetrexed et le lipoplatine. Les résultats sur modèle animal montrent que les profils pharmacocinétiques de ces deux molécules sont significativement différents entre une administration intraveineuse et une administration IP. Dans l'optique d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques, nous avons évalué la voie de l'adrénomédulline (AM) dans le MPM. L'AM et ses récepteurs sont conjointement exprimés dans les biopsies pleurales de MPM. In vitro, l'AM augmente les capacités de prolifération, de migration et d'invasion des cellules de MPM, par l'intermédiaire de la voie des MAPK. L'inhibition de l'AM ou de ses récepteurs apparait comme une stratégie thérapeutique prometteuse dans le MPM, de part ses effets directs sur les cellules néoplasiques, mais aussi ses effets indirects, via une inhibition de l'angiogénèse et de la lymphangiogénèse tumorale (in vivo). Enfin, nous avons évalué de nouveaux critères de jugement pour les essais cliniques de phase II. Nous avons montré que le taux de survie sans progression à 9 semaines est le critère le plus performant pour prédire la survie globale
Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare cancer with poor prognosis. As MPM diagnosis remains difficult today, we first assessed the potential value of transcriptome analysis, from cells in pleural fluid, with diagnostic purpose. If this approach looks feasible, its technical constraints make it incompatible with routine practice. The second axis of our work concerned MPM local treatment, with the assessment of intrapleural (IP) administration of two chemotherapy drugs: pemetrexed and lipoplatin. Results obtained in an animal model show that the pharmacokinetic profiles of these two drugs are significantly different between intravenous and IP administration. With the goal of identifying new therapeutic targets, we explored the adrenomedullin (AM) pathway in MPM. AM and its receptors are jointly expressed in pleural biopsies from MPM. Moreover we demonstrated in vitro that AM increases the proliferation, migration and invasion abilities of MPM cells, through the MAPK signaling pathway. Inhibition of AM or its receptors appears as a promising therapeutic strategy, because of its direct effects on malignant cells, but also its indirect effects, via tumor angiogenesis and lymphangiogenesis inhibition (in vivo). Finally, we assessed new endpoints for phase II clinical studies. We showed that the progression-free survival rate at 9 weeks is the most performant criterion to predict overall survival

L'émergence de la résistance des poux aux insecticides neurotoxiques ont favorisé le développement de nouveaux pédiculicides à action « mécanique » à base d’huile. Mais le mécanisme précis d’action de ces produits était mal connu. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés aux modes d’action de 5 huiles essentielles pédiculicides et d’une huile minérale, la diméticone également pédiculicide. Dans une première étape, j’ai évalué l’efficacité pédiculicide des huiles essentielles. Seule Eugenia caryophyllata s’est révélée très efficace, Litsea cubeba, a montré une efficacité relative. Dans une deuxième étape, j’ai évalué la résistance des poux à la noyade et à l’anoxie, mécanismes d’action revendiqués pour les produits huileux. Alors que les poux résistent jusque 24 h dans l’eau sans se noyer, ils se noient rapidement et meurent dans la diméticone, en moins de 30 min. Les poux meurent également par noyade lorsqu’ils sont immergés dans les composants biochimiques des huiles étudiées. Les poux résistent à l’anoxie jusque 14 h. Dans une troisième étape, l’activité neurotoxique des principaux composants des huiles a été évaluée sur la blatte, Periplaneta americana, seul modèle disponible pour ce travail. Selon la technique du patch-clamp, aucune activité électrophysiologique n’est décelée aux concentrations habituellement utilisées. Enfin, nous avons étudié le génotypage des poux utilisés. Les poux de Bobigny appartiennent à 3 clades : A, B et E. Le clade E est noté pour la première fois en région parisienne. Les agents pathogènes hébergés par ces poux ont été recherchés et nous notons pour la première fois la présence de Bartonella quintana dans les poux de corps de Bobigny
The emergence of resistance in Pediculus h. capitis, to chemical-based insecticides has result the development of "mechanical" oil-based pediculicides. Despite this interest, little is known on the precise mechanism of action of these products. In the current thesis, we have concentrated on the modes of action of 5 essential oils commonly used as pediculicides as well as one mineral oil, dimeticone. At the first step, the pediculicidal efficacy of essential oils was evaluated by in-vitro bioassay. Among oils examined, only E. caryophyllata has proved to be very effective followed by Litsea cubeba. In the second step, the resistance of head lice to drowning and anoxia was assessed. The lice were resistant up to 24 h in the water without drowning whereas they were quickly drown and died in the dimeticone, in less than 30 min. In addition, the lice were died by drowning during immersion in the pure biochemical components of essential oils. In the same way, the lice were resistant to anoxia up to 14 h in an enclosed box without oxygen. In the third step, the neurotoxic activity of the main components derived from mentioned essential oils were analyzed on the cockroach, Periplaneta americana as the sole model available. According to the patch-clamp technique, no electrophysiological activity was detected using habitual concentrations. Finally, the bacterial flora of mentioned specimens was studied using molecular analysis. Based on our results, Bartonella quintana was detected for the first time in the body lice collected in Bobigny. According to the genotyping results, the lice of Bobigny belong to three clades of A, B and E. The latter is newly reported in the current thesis

Le virus de l‘hépatite E (VHE) est endémique mondialement. Dans les pays en voie de développement, le VHE est une cause majeure d'hépatite aiguë et l'hépatite E est une maladie du péril fécal, transmise par la consommation d'eau contaminée. Le taux de mortalité de l'hépatite E aiguë en situation d'épidémie est estimé entre 0,2 et 4%. Dans les pays développés, l'hépatite E d'origine autochtone a émergé au début du XXIème siècle et un réservoir porcin à l'origine de transmissions zoonotiques du VHE a été établi. En 2008, pour la première fois, des formes chroniques de l'hépatite E ont été décrites révélant que le VHE était également une cause d'hépatite chronique et de cirrhose. Ces nouvelles formes d'hépatite E ont été rapportées chez des patients immunodéprimés pour transplantation d'organes solides, par le virus de l'immunodéficience humaine ou par des hémopathies malignes ou les traitements de ces hémopathies. Les travaux de cette Thèse ont eu pour objectifs de décrire les aspects cliniques puis épidémiologiques de l'hépatite E, d'étudier certains aspects immunologiques de l'hôte et certains aspects virologiques des VHE dans le but de comprendre les mécanismes conduisant au développement d'une hépatite E chronique dans la population des patients transplantés d'un rein suivis au CHU de Marseille. Nous avons décrit dans une étude rétrospective les caractéristiques et l'histoire naturelle de 16 infections autochtones diagnostiquées devant une hépatite inexpliquée. Nous avons décrit une évolution majoritairement chronique de l'hépatite E et son potentiel cirrhogène
Hepatitis E virus (HEV) is endemic worldwide. In developing countries, HEV is a major cause of acute hepatitis and hepatitis E is a disease transmitted by the faecal-oral route through contaminated water. The estimated mortality rate of acute hepatitis E in the setting of outbreaks ranges from 0.2 to 4%. In developed countries, hepatitis E of autochthonous origin emerged at the beginning of twenty-first century and a porcine reservoir for HEV has been established that is a source for zoonotic transmission. In 2008, for the first time, chronic forms of hepatitis E have been reported showing that HEV was also a cause of chronic hepatitis and cirrhosis. These new forms of hepatitis E have been reported in immunocompromised patients due to solid organ transplantation, infection by human immunodeficiency virus, hematological malignancies or treatment of these malignancies. The objectives of this Thesis have been to describe the clinical and epidemiological features of hepatitis E, to examine some immunological aspects of the host and some virological aspects of HEV in order to understand the mechanisms leading to the development of chronic hepatitis E in the population of kidney transplant recipients followed at the University Hospital of Marseille. In a retrospective study, we described the characteristics and natural history of 16 HEV infections diagnosed in patients presenting with unexplained hepatitis. We described that hepatitis E progressed the most frequently towards chronicity and possibly towards liver cirrhosis. We showed that after dose reduction of immunosuppressants, more than half of the chronic infections resolved