Дисертації з теми "Biochimique"
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Lemaire, Géraldine. "Interactions "récepteurs-pesticides" : rôle dans la régulation des gènes de défense cellulaire." Nice, 2004. http://www.theses.fr/2004NICE4018.
Анотація:
L’utilisation courante de pesticides suscite de lus en plus d’interrogations en terme de santé publique. Par leur affinité pour certains récepteurs nucléaires, certains d’entre eux – fortement utilisés dans les années 1970 mais maintenant bannis pour la plupart – se comporteraient comme des xéno-hormones régulant ainsi des gènes vitaux. Dans ce cadre, nous avons d’abord examiné la capacité de différentes familles à activer u à inhiber les récepteurs AR er Ers : seuls les organochlorés présentent des propriétés agonistes et/ou antagonistes vis-à-vis de ces deux récepteurs. L’activation des récepteurs RARa, b, g a également été testée : cinq composés organochlorés transactivent les RARb, ge et induisent le cytochrome P450 RAI1. Nous nous sommes également intéressé au récepteur PXR et nous avons développé un modèle cellulaire stable exprimant le récepteur PXR et induisant les cytochromes P450 3A4 et 2B6 (CYPs) sur des cultures d’hépatocytes humains. Dans une seconde partie du travail, nous avons étudié le rôle du récepteur AhR dans l’induction du CYP1A1 par le thiabendazole. Ce pesticide induit l’expression transcriptionnelle du CYP1A1, sans déplacement du [3H]TCDD de son site de liaison sur le récepteur AhR, montrant qu’un récepteur peut être activé de manière indirecte par des pesticides. L’ensemble de ces résultats démontre que certains pesticides retrouvés dans l’environnement interagissent avec des récepteurs nucléaires d’importance majeure en physiologie, interactions susceptibles d’expliquer leurs incidences toxicologiques en santé humaineThe widespread use of pesticides has raised public health concerns. BY their affinity for certain nuclear receptors some pesticides widely used until the 1970’s but now banned may be regarded as xeno-hormones that may control vital genes. Within this framework, we initially examined the ability of various families of pesticides t activate or to inhibit androgen receptor (AR) and estrogen receptors (ERs) : only organochlorines have AR antagonist and ER agonist properties. The activation of retinoic acid receptor (RARa, b, g) was also tested : five organochlorine pesticides transactivate ARb and RARg and also induce cytochrome P450RAI1 expression. In addition, we were also interested in the pregnane X receptor (PXR) and a stable cellular model containing the receptor and its responsive element coupled to a luciferase gene reporter was developed. Some of the pesticides tested are PXR agonists and induce the expression of cytochrome P450 3A4 and 2B6 in cultured human hepatocytes. In the second part, the role of AhR in the thiabendazole-mediated induction of cytochrome P450 A1 (CYP1A1) was investigated. The pesticide induces transcriptional expression of CYP1A1, without displacement of [3H]TCDD from its binding sites to AhR, showing that a receptor could be indirectly activated by pesticides. All these results demonstrate that some pesticides founds in the environment interact with nuclear receptors, these interactions may explain their toxicological incidence in human health
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Camponovo, Jérémy. "Synthèse de nanoarchitectures à vocation biochimique." Thesis, Bordeaux 1, 2010. http://www.theses.fr/2010BOR14042/document.
Анотація:
Un nouveau dendron phénol trialcyne a été développé par analogie avec le dendron phénol triallyle déjà connu. En nous appuyant sur les cœurs dendritiques polyiodés du laboratoire, nous avons obtenu une famille de dendrimères polyalcynes comportant 27, 81 et 243 branches. Des ferrocènes ont ensuite été greffés par chimie « click » à la périphérie de ces dendrimères. La série obtenue permet la reconnaissance électrochimique d’oxo-anions d’intérêt biologique, comme l’ATP, et de cations métalliques. Grâce aux propriétés d’adsorption des grand dendrimères, nous avons obtenu des électrodes de platine modifiées, robustes et recyclables, permettant de réaliser cette reconnaissance. Une série de glycodendrimères comportant 27, 81 et 243 xylopyranosides terminaux a également été synthétisée. Les méthodes de caractérisation de nanoobjets ont été investiguées, et en particulier, les techniques permettant d’obtenir la taille des molécules en solution comme la RMN DOSY et la diffusion dynamique de la lumière (DLS). Enfin, une série de dendrimères robustes comportant 4 à 6 branches alcynes très longues a été développée. Le greffage périphérique par chimie « click » de beta-cyclodextrines méthylées aléatoirement est également rapportéA new easily accessible trialkyne phenol dendron has been developed mimicking the already known triallyl phenol dendron. A family of polyalkynyl containing dendrimers with 27, 81 and 243 terminal branches was obtained starting from the classical polyiodo dendritic cores of the laboratory. Ferrocenes were then grafted using “click” chemistry. The dendrimers obtained allowed electrochemical sensing of both biologically interesting oxo-anions like ATP and metallic cations. Robust and recyclable modified platinum electrodes were obtained thank to the adsorption properties of large dendrimers. These electrodes are able to recognize the same ions as the dendrimer in solution. A novel series of glycodendrimers with 27, 81 and 243 modified xylopyranosides termini was synthesized too. The characterization methods for such nanoobjects were investigated, and particularly technics that allow to obtain the size of the molecules like dynamic light scattering (DLS) and DOSY NMR. Finally, a family of robust polyalkynyl containing dendrimers with 4 to 6 enlarged branches was developed. The functionalization with randomly methylated beta-cyclodextrins using “click” chemistry is also reported
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Sansot, Jean-Luc. "Alanine aminopeptidase approches biochimique et toxicologique /." Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376010389.
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DOE, CURT SYLVIE. "Evolution botanique et biochimique des renonculacees." Strasbourg 1, 1987. http://www.theses.fr/1987STR10718.
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Seffouh, Amal. "Caractérisation biochimique et fonctionnelle de l'enzyme HSULF." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016GREAV014.
Анотація:
Les grandes propriétés interactives des HS dépendent de leur profil de sulfatation, finement régulé au cours de la biosynthèse du polysaccharide ainsi qu'à la surface cellulaire par l'action d'endosulfatases nommées Sulfs. Ces enzymes ôtent spécifiquement les groupements 6-O-sulfates d'un certain nombre de disaccharides trisulfatés, éléments clés de nombreuses interactions protéines/HS. Ainsi, ces enzymes sont impliquées dans de nombreux processus, autant physiologiques que pathologiques. En utilisant différentes approches (biochimique et biophysique), nous avons révélé récemment que les isoformes humain HSulf-1 et -2 agissent de façon processif et orientées pour désulfater les chaines d’HS ce qui régule différemment les facteurs de croissances FGF-1 et -2 (Seffouh et al., FASEB J. 2013). Nous avons également identifié deux motifs impliqués dans l’interaction HSulf-2/HS et qui se sont avérés importants pour l’activité 6-O-endosulfatase [Manuscrit en préparation]. Par ailleurs, HSulf-2, et contrairement à HSulf-1, s’est révélé porteuse d’une O-glycosylation capable de moduler considérablement son activité à la surface cellulaire [Manuscrit en préparation]. Enfin, et en collaboration avec l’'institut Karolinska (Stockholm, Sweden), une éventuelle implication de Sulf-1 dans le mésothéliome malin a été suggéré (Heidari-Hamedani et al., Cellular Signalling J. 2015)Heparan sulfate (HS) is a polysaccharide able to bind and modulate a wide variety of proteins. HS large interactive properties are essentially governed by precise sulfation patterns of the polysaccharide. Sulf-1 and Sulf-2 are two endosulfatases able to cleave specific 6-O sulfate groups within HS chains. Their action can modulate critical intracellular signaling processes, many of which with key relevance for cancer development. However, little is known on their structure, substrate specificities, and on the way their catalytic activity directs the subtle modifications of HS 6-O-sulfation profile.In this work, we have identified an original enzymatic mechanism by which Sulfs catalyze the processive and orientated desulfation of HS and finely regulate the polysaccharide biological properties. We also identified two basic motifs within the N-terminal domain of HSulf-2. Recombinant enzymes mutated for these sites were then produced and characterized. We found that these epitopes are necessary for its endosulfatase activity. Altogether, these results provide further insights into the enzyme/substrate recognition process and contribute to the understanding of the fundamental role played by these enzymes in the regulation of HS activity. The biochemical study of the purified HSulf-2 allowed to highlight a O-glycosylation able to significantly modulate its activity at the cell surface. Otherwise, and in collaboration with the Karolinska Institute (Stockholm, Sweden), the study of malignant mesothelioma (MM) provided new evidence that enhanced Syndecan-1 expression also finely modulates HS structure by interfering with HS-modifying enzymes HSulf-1. These results suggest important roles for Syndecan-1 and HSulf-1 in MM
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Muir, Kyle. "Caractérisation biochimique et biophysique du complexe cohésine." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016GREAV005/document.
Анотація:
L'appariement des chromatides sœurs est un prérequis fondamental pour la ségrégation fidèle du génome. Cet assemblage est précisément régulé par plusieurs facteurs modulant la solidarité entre le complexe formant la cohésine et les chromosomes. Un de ces facteurs, Pds5, engage la cohésine par le biais de SCC1 et participe à la fois au renforcement de la cohésion, et inversement à la libération de la cohésine de la chromatine. Dans cette thèse, la structure cristalline du complexe entre les protéines de levure Pds5 et SCC1 est présentée. Celle-ci permet la compréhension de la fonction moléculaire de Pds5. Pds5 forme un « heat-repeat » allongé qui se lie à SCC1 via une interface dont sa séquence reste conservée. Suite à la caractérisation biologique et biochimique de cette structure, cette thèse démontre que l'intégrité de l'interface entre Pds5 et SCC1 est indispensable pour le recrutement de Pds5 à la cohésine et que son abrogation conduit à la perte de la cohésion entre les chromatides sœurs ainsi que la perte de la viabilité cellulaire. Les résultats présentés dans cette thèse suggèrent donc que Pds5 est constitutivement lie au cœur de la sous-unité de la cohésineSister chromatid cohesion is a fundamental prerequisite to faithful genome segregation. Cohesion is precisely regulated by accessory factors that modulate the stability with which the cohesin complex embraces chromosomes. One of these factors, Pds5, engages cohesin through Scc1 and participates both in the enhancement of cohesion, and conversely in mediating the release of cohesin from chromatin. In this thesis the crystal structure of a complex between budding yeast Pds5 and Scc1 is presented, thus elucidating the molecular basis of Pds5 function. Pds5 forms an elongated HEAT repeat that binds to Scc1 via a conserved surface patch. Through complementary cell biological and biochemical characterisation of this structure, the thesis demonstrates that the integrity of the Pds5–Scc1 interface is indispensable for the recruitment of Pds5 to cohesin, and that its abrogation results in loss of sister chromatid cohesion and cell viability. The results presented in this thesis therefore suggest that Pds5 is a constitutively bound, core subunit of cohesin
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Rosenberger, Corinne. "Etude biochimique de l'autisme : analyse linéaire discriminante." Paris 5, 1988. http://www.theses.fr/1988PA05P243.
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Pivot, Véronique. "Etude biochimique et activité de phospholipides fongiques." Lyon 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LYO10039.
Анотація:
Un extrait mycelien provenant de phytophthora capsici induit une protection des cotyledons de piment vis-a-vis de ce pathogene. Les molecules fongiques actives ont ete isolees et caracterisees: ce sont des sphingophospholipides contenant de l'inositol, de la c#1#6-sphingosine saturee ou insaturee et un acide gras. Leur masse moleculaire, determinee par fab, varie de 751 a 851 da. Les composes majoritaires sont essentiellement les phospholipides de masse 833, 835 et 849 da. Leur pourcentage varie en fonction de la souche et du milieu de culture. L'addition d'un fongicide au milieu de culture a un effet modulateur sur la synthese de ces phospholipides. Nous avons montre que ces phospholipides etaient specifiques du genre phytophthora en tant que marqueurs biochimiques; ils presentent egalement dans le domaine agronomique une activite anti-phytophthora potentielle. Ils sont le plus inhibiteurs de l'activite d'une cutinase isolee de fusarium solani. Une autre famille de phospholipides de type phosphatidyl choline a egalement ete isolee du mycelium de phytophthora capsici. Ces composes presentent la propriete d'induire une resistance chez le piment et chez le ble vis-a-vis du pathogene. L'etude structurale de tous ces phospholipides fongiques a ete realisee par les methodes chimiques et physiques: methanolyse, hydrolyses acides et alcalines, chromatographies sur couche mince et en phase gazeuse, rmn#1h, chromatographie gazeuse couplee a la spectrometrie de masse, fast atom bombardment
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Lazrak, Tarik. "Renforcateurs membranaires : etude structurale et evolution biochimique." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1987. http://www.theses.fr/1987STR13167.
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Lazrak, Tarik. "Renforçateurs membranaires étude structurale et évolution biochimique /." Grenoble 2 : ANRT, 1987. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37607103c.
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JEBLAOUI, KARIMA. "Contribution biochimique au diagnostic de la mucoviscidose." Strasbourg 1, 1987. http://www.theses.fr/1987STR10732.
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FERRERO, LUCIA. "L'adn topo-isomerase iv de staphylococcus aureus : identification, caracterisation biochimique et, etudes biochimiques et genetiques sur la resistance aux fluoroquinolones." Paris 7, 1995. http://www.theses.fr/1995PA077289.
Анотація:
La resistance aux fluoroquinolones est devenue un probleme majeur chez les staphylococcus aureus, que ces souches soient ou non d'origine nosocomiale, ou qu'elles soient resistantes ou non a la methicilline. Nous nous sommes atteles dans ce travail a comprendre le mecanisme par lequel s. Aureus devient resistant aux fluoroquinolones. Deux genes isoles de s. Aureus. Grla et grlb ont ete clones et, apres caracterisation biochimique et genetique, identifies comme les genes de structure de l'adn topo-isomerase iv (une homologue de la gyrase) de s. Aureus. La qrdr de gyra et de la region correspondante de grla chez les souches resistantes de s. Aureus, provenant de milieux hospitaliers, ou selectionnees in vitro sur de faibles concentrations en ciprofloxacine ont ete analysees : une mutation ponctuelle existe dans grla chez toutes les souches examinees. Cette mutation conduit a une substitution de la ser80 (correspondant a la ser83 de gyra d'e. Coli) en tyr ou phe. Une mutation dans gyra et/ou une diminution de l'accumulation intracellulaire de norfloxacine est trouvee chez les souches ayant une cmi 16 mg/l de la ciprofloxacine. L'analyse de grla/grlb sauvage dans le test d'inhibition par certaines fluoroquinolones de l'activite de desenchevetrement de l'adn de kinetoplastes, a montre que l'enzyme est une cible de ces produits. De plus, l'inhibition d'une enzyme pure grlaser80tyr/grlb montre que cette enzyme est de 10 a 80 fois plus resistante aux fluoroquinolones testees que l'enzyme sauvage. L'ensemble de ces resultats obtenus in vivo et in vitro demontrent que l'adn topo-isomerase iv de s. Aureus est la cible primaire des fluoroquinolones.
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Cotton, Frédéric. "Contribution au diagnostic biochimique des anémies hémolytiques héréditaires." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2003. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/211269.
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Leclerc, Marie-Claude. "Purification et caractérisation biochimique d'une nucléotidase d'origine hépatique." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1999. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk1/tape7/PQDD_0015/MQ56927.pdf.
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Leclerc, Marie-Claude. "Purification et caractérisation biochimique d'une nucléotidase d'origine hépatique." Mémoire, Université de Sherbrooke, 1998. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4437.
Анотація:
Ce n'est qu'au cours des deux dernières décennies que les chercheurs se sont davantage intéressés à l'importance des nucléotides extracellulaires, en particulier aux purines extracellulaires, et aux rôles qu'ils pouvaient bien jouer au niveau des divers systèmes physiologiques des animaux. Au niveau du foie, ils seraient impliqués dans la sécrétion biliaire dépendante de l'ATP, dans la glycogénolyse et la contraction/relaxation des vaisseaux sanguins irriguant le foie. Notre intérêt pour le sujet nous a amené à la purification et à la caractérisation d'une ectonucléotidase, l'ATP-diphosphohydrolase hépatique, afin de mieux comprendre le rôle de cette enzyme au niveau du foie. Le but de notre travail était de purifier l'enzyme afin d'en définir ses caractéristiques biochimiques et cinétiques. Cette étude pare la voie au clonage de son gène. Les résultats ont montré que l'ATP-diphosphohydrolase hépatique possédait des caractéristiques différentes des ATPDases déjà purifiées et caractérisées. De cette étude, nous avons pu conclure que les ions Ca [exposant] 2+ et Mg [exposant] 2+ sont nécessaires pour l'activité de l'enzyme hépatique. Ce travail contient une deuxième partie portant aussi sur une nucléotidase. Dans le cadre de la purification de nucléotidases, des résultats intéressants ont mené vers la purification d'une protéine soluble démontrant des activités phosphohydrolases. L'un des objectifs de ma maîtrise fut de caractériser une protéine soluble démontrant des activités nucléotidases et purifiée originalement par Salma Daoud. Ce peptide, appelé peptide S, est un peptide dérivé d'une protéine connue: la calponine. Ces résultats sont présentés dans l'annexe I. Ils démontrent qu'un polyphosphate est étroitement lié à la protéine. De plus, lorsque la protéine est dépourvue de cette molécule de polyphosphate, celle-ci ne possède pas d'activité nucléotidase."--Résumé abrégé par UMI.
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Hündling, Dörte. "Caractérisation biochimique et structurale de lectines d'Aspergillus fumigatus." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015GREAV055/document.
Анотація:
L'objectif de cette thèse a été de contribuer à la compréhension des stratégies d'infection du pathogène opportuniste Aspergillus fumigatus. Ce pathogène est une cause émergente de morbidité et de mortalité chez les patients dont l'immunité est compromise et dans les milieux hospitaliers. Une infection avec Aspergillus est en général appelée une Aspergillose et ellepeut se développer dans un certain nombre d'organes, le plus fréquemment dansl'appareil respiratoire (poumons et sinus). Outre les infections (Aspergillosis invasive), la colonisation par ce champignon peut causer des réactions allergiques (Aspergilloses broncho pulmonaire allergique) et de l'asthme. Le nombre de patients immunodéprimés augmente régulièrement à cause des avancées des traitements du SIDA, du cancer, de la mucoviscidose ainsi que par le nombre grandissant de transplantation d'organes. De nouveaux médicaments antifongiques et des médicaments préventifs sont nécessaires pour venir en soutienaux soins médicaux des patients. Bien que plusieurs fongicides existent déjà sur le marché, l'Aspergillosisinvasive reste souvent fatale. Ceci est lié d'une part à la difficulté d'établir le diagnostic, et d'autre part au fait que des résistances émergent rapidement. La motivation de cette thèse est de comprendre les mécanismes impliqués dans le premier contact entre les conidies et le tissu de l'hôte. Ces mécanismes d'adhésion initiaux sont souvent réalisés par des liaisons entre les lectines et les carbohydrates. Le tissu épithélial et la surface muqueuse du système respiratoire sont couverts de structures possédants des carbohydratestels que les glycoprotéines, les glycolipides et les glycosaminoglycanes. L'identification des lectines d'A. fumigatus et leurs caractérisations devraient dorénavant contribuer à la compréhension de la glycostratégie de ce pathogène opportuniste ainsi que des mécanismes impliqués dans l'adhésion et l'infection. L'analyse détaillée de la structure des lectines permettra d'établir le rôle de cesprotéinesdans la virulence et de guider la conception de glycomimétiques, afin d'inhiber le phénomène d'adhésion. Cettenouvelle approche consistant à bloquer l'adhésion de l'agent pathogène plutôt que sa prolifération, vise à diminuer les résistances par une réduction de la pression évolutive. Deuxstratégies différentes ont été utilisées pouridentifier de nouvelleslectines. Tout d'abord une purification des lectinesà partir d'extraits fongiques brutsa été tentée et d'autre part un criblage pour trouver des séquences similaires avec les protéines codées par A. fumigatusa été réalisé parmi une banque de lectines fongiques connuesThe aim of this thesis was to contribute to the understanding of infection strategies of the opportunistic pathogen Aspergillusfumigatus. This pathogenic mould is an emerging cause of morbidity and mortality in immuno-compromised patients and hospital environments. An infection with Aspergillus is generally referred to as Aspergillosis; it can develop in a variety of organs but the most common sites are the respiratory apparatus i.e. lungs and sinuses. Besides infections (invasive aspergillosis), colonization with the fungus can cause allergic reactions (allergic broncho pulmonary aspergillosis) and asthma. The number of immuno-suppressed patients is steadily increasing due to advancement in the HIV, cancer and cystic fibrosis medical care, as well as an increasing number of organ transplantations. Needless to say that new antifungal drugs and preventive medication is desperately needed to support medical care for those patients. Even though several fungicides already exist on the market, invasive aspergillosis remains to be often fatal. On one hand, this is due to difficulties in diagnosis and on the other hand, resistances are emerging rapidly. The motivation behind this thesis is to understand the underlying mechanisms that are involved in the first contact between conidial spores and host tissues. Initial adhesion steps often involve carbohydrate binding proteins, called lectins. They recognize glycoconjugates such as glycoproteins, glycolipids and glycosaminoglycans which cover the epithelial tissue and mucosal surface of the respiratory tract.. Identification and characterization of the lectins from A. fumigatus will therefore contribute to the understanding of the glycostrategy of this opportunistic pathogen and of the mechanisms involved in adhesion and infection. Detailed structural analysis of the carbohydrate-protein interactions will allow ascertaining the lectins role in virulence and guide the design of glycomimetics, as adhesion inhibitors. With this novel approach of targeting the pathogen adhesion rather than its proliferation, resistances are believed to be less frequent due to the lack of evolutionary pressure. In this work, two different strategies were employed to obtain novel lectins. Firstly, lectins were purified from crude fungal extracts and secondly the A. fumigatus genome was screened for encoded proteins showing sequence similarity with known fungal lectins. While lectin purification from the crude extracts was inconclusive due to low lectin activity in the starting material, genome screening showed that several putative lectins were present. One of these lectins, named AFL6, belonged to the cyanovirin-N homolog (CVNH) family and it was recombinantly expressed and purified. Glycan array and micro calorimetry techniques were carried out to investigate its carbohydrate binding specificityand the three dimensional structure was determined using X-ray crystallography. The structure showed an overall similarity with other CVNHs with slight differences in the presumed carbohydrate binding sites. Unlike other family members, it shows a low affinity for mannosides and an apparent affinity for lactosamine containing glycan structures
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Villar, Marc. "Incompatibilité interspécifique chez Populus : approches physiologique et biochimique." Lyon 1, 1987. http://www.theses.fr/1987LYO10008.
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Moummi, Chafiq. "Caractérisation pharmacologique et biochimique des myocytes gastriques isolés." Montpellier 1, 1987. http://www.theses.fr/1987MON13507.
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LAGAUDRIERE, GESBERT CECILE. "Caracterisation biochimique et fonctionnelle de la tetraspanine cd82." Paris 11, 1997. http://www.theses.fr/1997PA112138.
Анотація:
La proteine membranaire cd82 a ete identifiee a l'aide d'un anticorps monoclonal dirige contre les molecules de surface exprimees a la surface des cellules sensibles a la lyse par les effecteurs natural killer. L'adnc correspondant code pour une proteine de 267 acides amines appartenant a la famille des tetraspanines. Cette famille comprend des marqueurs leucocytaires, des antigenes tumoraux, et des proteines de schistosomes et drosophile. Le but de ce travail etait de caracteriser la proteine cd82 sur le plan biochimique et fonctionnel. Cette molecule est constituee d'une chaine proteique de 28 kda et de residus n-glycosyles de taille heterogene. Faible sur les cellules immunitaires au repos, son expression augmente apres activation ou differenciation. Sur le plan fonctionnel, l'engagement de la proteine cd82 par des anticorps specifiques renforce et amplifie les signaux transmis par diverses molecules d'activation : recepteur fc sur les cellules monocytaires (augmentation du calcium cytosolique), recepteur t sur les lymphocytes t (production de cytokines). Dans les lymphocytes t, un evenement precoce induit par l'engagement de la proteine cd82 est son association au cytosquelette qui s'accompagne de changements morphologiques. De plus, les anticorps anti-cd82 ont la capacite d'induire une agregation homotypique et une inhibition de la migration cellulaire. Ces fonctions sont communes a d'autres tetraspanines (cd9, cd81, cd53). Sur le plan biochimique, une caracteristique majeure des tetraspanines est leur capacite a former des complexes. Ainsi, la proteine cd82 est associee aux tetraspanines leucocytaires (cd9, cd63, cd81), aux molecules du complexe majeur d'histocompatibilite de classe i et ii et aux integrines vla. L'ensemble de ces resultats suggere que la proteine cd82 est une molecule adaptatrice membranaire permettant le recrutement et la stabilisation de complexes de signalisation impliques dans les contacts et l'activation cellulaires.
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GENDY, CYRILLE. "Controle de la morphogenese : etude physiologique et biochimique." Paris 11, 1991. http://www.theses.fr/1991PA112280.
Анотація:
Pour elucider les mecanismes du controle de la morphogenese chez les plantes, il est necessaire de disposer d'un systeme experimental sur lequel un controle rigoureux est possible. Le meilleur systeme aurait ete les mutants de morphogenese. Devant une penurie de tels mutants, a l'heure actuelle, nous proposons l'etude des couches cellulaires minces de tabac chez lequel on peut programmer depuis la division cellulaire, l'enlargissement cellulaire jusqu'a divers types de morphogenese: fleurs, bourgeons vegetatifs, racines. Ce systeme est reconnu et adopte pour l'etude de la differenciation par de nombreux groupes de recherche. Notre contribution porte sur la mise en evidence des facteurs ou (signaux) specifiques de controle (polyamines, cytokinines et oligosaccharides). Parallelement, des variations correlatives de voies metaboliques (biosynthese de polyamine, de catabolisme des cytolinines, induction d'enzyme parietales) ont ete etudiees
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DEZEURE, FRANCOISE. "Etude biochimique des analogues fluores de la putrescine." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1989. http://www.theses.fr/1989STR13006.
Анотація:
Les polyamines existent dans tous les organismes vegetaux, microbiens et animaux. La putrescine, la spermidine et la spermine sont les plus repandues. La croissance et la proliferation normale ou tumorale des cellules d'eucaryotes, s'accompagnent d'une augmentation de la biosynthese des polyamines. Les polyamines fluorees se comportent de la meme maniere que leurs homologues naturels, ce sont d'excellents substrats pour la spermidine synthase. Ils activent la delta -adenosyl methionine decarboxylase. La substitution de polyamines naturelles par des polyamines fluorees peut permettre une localisation des tissus a croissance rapide dans un organisme entier grace a l'utilisation de la rmn du fluor 19
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Quintyn, Jean-Claude. "Approche chimique et biochimique du décollement de rétine." Toulouse 3, 2007. http://thesesups.ups-tlse.fr/161/.
Анотація:
Le décollement de rétine est une pathologie qui sans un traitement chirurgical peut conduire à la cécité. Par une approche chimique et biochimique, nous avons essayé d'améliorer les résultats anatomiques et fonctionnels de cette maladie. Nous rapportons une étude clinique sur cette pathologie montrant l'efficacité de l'Oxane HD(r), une huile de silicone de densité supérieure à un, obtenue par le mélange d'une huile de silicone 1300 et d'une oléfine mixte C8F17CH2CH=CHCH2CH(CH3)2 nommée RMN3. Nous avons aussi montré que la concentration de la " Neuron Specific Enolase " dans le liquide sous-rétinien est corrélée à la mort des photorécepteurs. Enfin, nous rapportons que l'utilisation de la sphingosine-1-phosphate peut permettre une inhibition de l'apoptose des photorécepteurs lors du décollement de rétine. Nous proposons une formulation de ce principe actif pour une application topique dans un modèle d'apoptose cornéenneChemical and biochemical approach to the retinal detachment The retinal detachment may blind if it is not treated by surgical operation. With a chemical and biochemical approach, we have tried to improve the anatomical and functional results of this pathology. We report a clinical study about the results of Oxane HD(r) use in the treatment of the retinal detachment. Oxane HD(r) is a mixed of silicone oil 1300 and a mixed olefin C8F17CH2CH=CHCH2CH(CH3)2 called RMN3. Its density is upper than one. We have showed that the concentration of the Neuron Specific Enolase in the subretinal fluid is correlated with the death of the photoreceptors. Finally, we report that the sphingosine-1-phosphate inhibits the photoreceptors apoptosis during a retinal detachment. We propose a formulation of this molecule for a topic use in an apoptosis corneal model
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Leclerc, Marie-Claude. "Purification et caractérisation biochimique d'une nucléotidase d'origine hépatique." Sherbrooke : Université de Sherbrooke, 1999.
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Villar, Marc. "Incompatibilité interspécifique chez Populus approches physiologique et biochimique /." Grenoble 2 : ANRT, 1987. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376106080.
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Nayak, Ananta Kumar. "Modélisation de la circulation sanguine et signalisation biochimique." Electronic Thesis or Diss., Université Grenoble Alpes, 2023. http://www.theses.fr/2023GRALY094.
Анотація:
Au sein de notre corps, les globules rouges (GR) sont principalement impliqués dans le transport de l'oxygène et des nutriments vers les tissus, et inversement, ils deviennent le transporteur des excréments métaboliques tels que le dioxyde de carbone des tissus. En plus de ces processus passifs, les GR participent activement à la communication avec la paroi vasculaire. Cette communication est assurée par une molécule de signalisation, l'adénosine triphosphate (ATP), qui est libérée sous l'effet de la contrainte de cisaillement subie par la membrane des GR. L'ATP est connue comme un transporteur d'énergie, et l'énergie qu'il libère par hydrolyse de la liaison phosphate est utilisée pour assurer les fonctions cellulaires. Cependant, l'ATP libéré dans le plasma par les GR déclenche une cascade de réactions biochimiques dans les cellules endothéliales (CE), entraînant la libération du Ca2+ séquestré dans le réticulum endoplasmique (ER). Le Ca2+ est un ion ubiquitaire responsable de nombreuses fonctions cellulaires telles que la vasodilatation, la prolifération cellulaire et la transcription des gènes. En particulier, le Ca2+ régule la synthèse de l'oxyde nitrique (NO), un important vasodilatateur, dans la paroi vasculaire. Les molécules de NO agissent sur les cellules musculaires lisses (CML), une couche située sous la couche d'endothélium, pour détendre le diamètre de la paroi du vaisseau. Par conséquent, l'augmentation du diamètre des vaisseaux améliore l'apport sanguin dans la zone où les besoins métaboliques sont élevés. Néanmoins, la concentration de NO disponible pour la relaxation des CML est également affectée par les GR, qui agissent comme des piégeurs en le convertissant en d'autres métabolites tels que les nitrites et les nitrates. En raison de l'importance susmentionnée de la dynamique des GR et de son impact sur la signalisation biochimique dans la paroi vasculaire, il est nécessaire de comprendre les principes fondamentaux du contrôle de la perfusion sanguine locale et de la progression des maladies vasculaires. Cette thèse est principalement consacrée au couplage de la dynamique des GR et de la signalisation biochimique dans la paroi vasculaire en utilisant la méthode de Boltzmann sur réseau à frontière immergée (IBLBM). Plus précisément, nous avons étudié l'effet de la dynamique des GR dans un canal droit bidimensionnel (2-D) avec des changements de paramètres tels que la force du flux, la largeur du canal et la concentration des GR sur la dynamique du Ca2+ et du NO. Plus en détail, nous avons tout d'abord développé un modèle homéostatique minimal de dynamique du Ca2+ qui assure le retour des concentrations intracellulaires de Ca2+ vers la concentration physiologique (retour à l’homéostasie) en présence d'un agoniste (ATP). Deuxièmement, nous avons explicitement intégré l'ATP libéré par les GR et les CE qui déclenche la signalisation du Ca2+ dans l'endothélium. Cette étude met en lumière le contrôle en amont de la perfusion sanguine dans un réseau vasculaire grâce à la propagation des signaux Ca2+ d'une région à forte concentration d'ATP vers une région à faible concentration d'ATP. Enfin, nous avons modélisé la synthèse de NO dépendante de l'ATP et de la contrainte de cisaillement dans les CE. Ce modèle est généralisé pour incorporer explicitement le piégeage du NO par les GR afin de comprendre la disponibilité du NO dans les vaisseaux sanguins dans un cadre numérique bidimensionnel. Cette étude met en évidence le fait que la concentration de NO dans la paroi vasculaire dépend fortement de la concentration de globules rougesIn our body, red blood cells (RBCs) are primarily involved in transporting oxygen and nutrients to the tissues, and conversely, they become the transporter of metabolic excreta such as carbon dioxide from the tissues. In addition to these passive processes, RBCs are actively participated in communication with the vascular wall. This communication is mediated by a signalling molecule, adenosine triphosphate (ATP), which is released as a result of the shear stress experienced by the RBC membrane. ATP is known as an energy carrier, and the energy it releases by hydrolysis of the phosphate bond is used to carry out cellular functions. However, the ATP released to the plasma by RBCs triggers a cascade of biochemical reactions in endothelial cells (ECs), resulting in the release of sequestered Ca2+ from the endoplasmic reticulum (ER). Ca2+ is a ubiquitous ion responsible for numerous cellular functions such as vasodilation, cell proliferation and gene transcription. In particular, Ca2+ regulates the synthesis of nitric oxide (NO), an important vasodilator, in the vascular wall. NO molecules act on smooth muscle cells (SMCs), a layer located beneath the endothelium layer, to relax the vessel wall diameter. As a result, increased vessel diameter results in improved blood supply to the area where metabolic needs are high. Nevertheless, the concentration of NO available for SMC relaxation is also affected by RBCs, as they act as scavengers by converting it into other metabolites such as nitrites and nitrates. Because of the aforementioned importance of RBC dynamics and its impact on biochemical signalling in the vascular wall, it is necessary to understand the fundamentals of local blood perfusion control and progression of vascular diseases. This thesis is mainly devoted to the coupling of RBC dynamics and biochemical signalling occurring in the vascular wall using immersed boundary lattice Boltzmann method (IBLBM). More specifically, we investigated the effect of RBC dynamics in a two-dimensional straight channel (2-D) with changes in parameters such as flow strength, channel width, and RBC concentration on the Ca2+ and NO dynamics. More elaborately, firstly, we developed a minimal homeostatic Ca2+ dynamics model which ensures the return of intracellular Ca2+ concentrations from its non-physiological concentration to the physiological concentration in the presence of agonist (ATP). Secondly, we explicitly integrated ATP released from RBCs and ECs that triggers Ca2+ signalling in the endothelium. This study sheds light on the upstream control of blood perfusion in a vascular network due to the propagation of Ca2+ signals from a region of higher ATP concentration to region of lower ATP concentration. Lastly, we further modelled both ATP and shear stress-dependent NO synthesis in ECs. This model is extended to explicitly incorporate the scavenging of NO by RBCs in order to understand NO availability in blood vessels with a 2-D numerical setting. This study highlights the fact that the concentration of NO in the vascular wall strongly depends on the concentration of RBCs
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Passareiro, Heloisa M. "Contribution à la caractérisation biochimique de protéines du cytosquelette." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1990. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/213128.
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Bouchard, Dominique. "Caractérisation biochimique de l'intégrase de l'intégron de Treponema denticola." Thesis, Université Laval, 2006. http://www.theses.ulaval.ca/2006/23650/23650.pdf.
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Aizel, Kaheima. "Étude Structurale et Biochimique d'un Facteur d'Échange Atypique d'Arf." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01037875.
Анотація:
Les petites GTPases de la famille Arf, régulateurs majeurs du trafic membranaire, sont activé par plusieurs familles de facteurs d'échange nucléotidiques (ArfGEFs). Les ArfGEFs jouent un rôle essentiel dans l'intégration des signaux de régulation qui conduisent à l'activation d'Arf au niveau de compartiments cellulaires spécifiques, cependant les mécanismes par lesquels ils ciblent les Arfs activés aux membranes spécifiques et leur coordination avec l'échange de nucléotide reste peu comprise. Nous utilisons ici la cristallographie et la reconstitution des activités ArfGEF sur des membranes artificielles pour analyser ces mécanismes pour un ArfGEF humain atypique, impliqués dans l'endocytose de récepteurs et associé à l'invasion tumorale dans de nombreuses cellules cancéreuses. Les membres de cette famille ont été décrits comme des GEFs spécifique d'Arf6, et comporte un domaine de type PH après leur domaine Sec7. Dans la deuxième partie de ma thèse, nous voulions savoir comment les isoformes Arf1 et Arf6 achevaient leurs fonctions dans la cellule. Arf1 et Arf6 sont très similaires: elles possèdent plus de 60% d'identité de séquence, et des études structurales ont montré que la surface qu'ils utilisent pour interagir avec leurs régulateurs et effecteurs est essentiellement identique en séquence et en structure. Cependant, elles ont des fonctions différentes dans la cellule et des propriétés différentes in vitro, pour lesquelles aucune donnée structurale n'a donné d'explications. Nous utilisons ici la cristallographie, le SAXS et la RMN pour comprendre la différence entre ces deux isoformes.
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Franc, Jean-Marie. "La mésoglée des cténaires : approches ultrastructurale, biochimique et métabolique." Lyon 1, 1985. http://www.theses.fr/1985LYO10034.
Анотація:
L'ultrastructure et la cytochimie de la matrice extracellulaire de la mesoglee montrent que celle ci renferme : d'une part des faisceaux plus ou moins coherents de fibrilles et d'autre part un composant granulaire qui perle en abondance l'ensemble des faisceaux de fibrilles. L'existence d'une faible concentration de collagene a ete apportee
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Oaxaca, Castillo David Alonso. "L'Acyl-CoA oxydase 1 humaine : caractérisation biochimique de l’enzyme." Dijon, 2007. http://www.theses.fr/2007DIJOS010.
Анотація:
L’acyl-coenzyme A oxydase 1 (ACOX1) est l’enzyme cinétiquement limitante de la voie de B-oxydation peroxysomale et la déficience de cette enzyme est associée avec une maladie autosomale récessive létale, appelée pseudo-adrénoleucodystrophie néonatale (pseudo-NALD). Deux ARN messagers différents, transcrits à partir d’un gène unique, codent deux isoformes protéiques, respectivement ACOX1a et ACOX1b. Récemment, une mutation localisée au niveau d’un des sites d’épissage, et n’affectant qu’une seule des deux isoformes, a été rapportée chez un patient présentant un défaut de béta-oxydation du C26:0. Dans ce travail nous montrons que les ARN messagers des deux variants sont exprimés dans le foie humain. Nous avons cloné les ADNc codant chacune des isoformes. Après expression hétérologue chez la bactérie Escherichia coli des enzymes ACOX1a et ACOX1b catalytiquement actives, nous avons réalisé la caractérisation biochimique des deux isoformes de l’ACOX1 humaine. L’ACOX1a apparaît moins stable et présente seulement 50% de l’activité spécifique de l’ACOX1b envers le palmitoyl-CoAHuman acyl-CoA oxidase 1 (ACOX1) is a rate-limiting enzyme in peroxisomal fatty acids B-oxidation and its deficiency is associated with a lethal, autosomal recessive disease, called pseudoneonatal-adrenoleukodystrophy. Two mRNA variants, transcribed from a single gene encode ACOX1a or ACOX1b isoforms respectively. Recently, a mutation in a splice site has been reported, which results in the defective peroxisomal beta-oxidation of C26:0. Here we show that both mRNA splice variants are expressed in human liver and we investigated the biochemical role of the two human ACOX1 isoforms by heterologous expression of the catalytically active ACOX1a and ACOX1b enzymes in E. Coli. ACOX1a seems to be more labile and exhibits only 50% specific activity toward palmitoyl-CoA as compared to ACOX1b
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VAUDEQUIN-DRANSART, VALERIE. "Etude biochimique et moleculaire de nouvelles souches d'agrobacterium tumefaciens." Paris 6, 1996. http://www.theses.fr/1996PA066424.
Анотація:
Des souches pathogenes d'agrobacterium, isolees de tumeurs sur ficus benjamina (souches fig) et sur chrysantheme (souches chry), induisent des galles qui contiennent, en plus de la nopaline ou de la leucinopine et de la succinamopine, trois nouveaux composes de type opinique. Ces molecules sont la deoxyfructosyl oxoproline (dfop), la deoxyfructosyl glutamine (dfg) et sa lactone, la chrysopine. Elles ressemblent respectivement aux mannityl opines, acide agropinique, mannopine et agropine. Deux nouvelles classes de plasmides ti sont ainsi definies: a chrysopine-succinamopine et a chrysopine-nopaline. Les souches chry catabolisent toutes les opines dont elles induisent la synthese. La region catabolique de la chrysopine et de la dfop a ete localisee sur le plasmide ti de la souche ant4. Son organisation ressemble a celle de la region catabolique des mannityl opines sur le pti15955. La degradation de la chrysopine met en jeu une dfg-cyclase, comme celle de l'agropine implique une mannopine-cyclase. Les genes determinant ces activites semblent peu homologues. La dfg ne presente pas l'etroite specificite induction/degradation rencontree chez toutes les souches d'agrobacterium tumefaciens. Elle est degradee par un grand nombre de souches d'agrobacterium, meme non pathogenes, qui toutes contiennent un megaplasmide cryptique. C'est la premiere fois qu'une fonction peut etre attribuee au plasmide cryptique des agrobacterium. La dfg pourrait, par ses caracteristiques biochimiques, etre l'opine ancestrale dont l'existence a ete postulee dans de precedents travaux. Dans le cas de la souche ant4, le megaplasmide conferant l'utilisation de dfg et le pti sont capables de se cointegrer lors de transferts conjugatifs, sans qu'il existe de site preferentiel pour cette cointegration. La resolution des cointegrats peut affecter certaines fonctions plasmidiques. Les souches fig presentent de nombreuses particularites. Elles ne degradent ni la dfg, ni la dfop. Leurs pti montrent tres peu d'homologies avec les pti de souches d'agrobacterium tumefaciens de reference. Ces isolats pourraient constituer une nouvelle espece d'agrobacterium
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MARTIN, ANNE-CELINE. "Production et caracterisation biochimique de la tubuline gamma recombinante." Toulouse 3, 1997. http://www.theses.fr/1997TOU30211.
Анотація:
Le cytosquelette microtubulaire, essentiel pour de nombreuses fonctions cellulaires est constitue de microtubules formes par l'assemblage polarise d'heterodimeres de tubuline / et nuclees in vivo au niveau des centres organisateurs des microtubules. La tubuline est une des rares proteines connues necessaire a la nucleation des microtubules. Les donnees concernant sa localisation cellulaire et son role physiologique dans la nucleation des microtubules sont nombreuses. Mais sa caracterisation biochimique a ete limitee par la difficulte d'obtenir de la tubuline monomerique soluble a partir de tissus, car elle ne represente que 0,01 % des proteines totales. Nous avons donc mis en oeuvre la surexpression de la tubuline dans differents organismes eucaryotes (cellules d'insecte, saccharomyces cerevisiae) et procaryotes (e. Coli). Elle a abouti a l'obtention de tubuline insoluble, malgre l'optimisation des conditions d'expression (temperature d'induction, presence de proteines chaperons ou d'additifs dans le milieu de culture, utilisation de differents partenaires de fusion). Nous avons alors developpe une methode de purification, par chromatographie d'affinite en conditions denaturantes, de la tubuline obtenue sous forme de corps d'inclusion dans e. Coli. Apres optimisation des parametres de renaturation, nous disposons de plusieurs mg de tubuline soluble purifiee. Cette tubuline recombinante n'hydrolyse pas le gtp, mais sa renaturation sur billes de gtp-agarose suggere qu'elle fixe le gtp. Le gtp semble se fixer de facon non echangeable sur la tubuline et la stabiliser. Il doit avoir un role au niveau de l'interaction de la tubuline avec la tubuline /, car seule la tubuline contenant du gtp interagit avec la tubuline /. Cette interaction avec la tubuline / suggere qu'il existe plusieurs formes de tubuline dans la cellule qui pourraient avoir differentes fonctions. De plus, la tubuline renaturee en presence de gtp forme des complexes de haut poids moleculaire dont la caracterisation permettra une meilleure comprehension du mecanisme de nucleation des microtubules et de la regulation de la dynamique du cytosquelette microtubulaire.
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Gachon, Anne-Marie Françoise. "Liquide lacrymal : etude biochimique des proteines, interaction proteines-biomateriaux." Clermont-Ferrand 2, 1987. http://www.theses.fr/1987CLF2E387.
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Chappuit, Lucrezia. "Design, synthèse et évaluation biochimique d’inhibiteurs des ADN Méthyltransférases." Thesis, Sorbonne université, 2018. http://www.theses.fr/2018SORUS372.
Анотація:
Ce manuscrit présente le développement de nouveaux inhibiteurs de la DNMT1 (DNA Methyl- transferase), enzyme impliquée dans les modifications épigénétiques de l’ADN et dont la dérégulation participe à l’évolution des cancers épigénétiques. La première partie de ces travaux a porté sur le design par modélisation moléculaire de nouveaux composés prolino-homo-tryptophanes capables d’interagir avec les deux sites de liaisons de la DNMT1. Dans une seconde partie, la modélisation moléculaire nous a permis de dessiner plusieurs composés pyrazoles comme nouveaux inhibiteurs potentiels de la DNMT1. A la suite de ces études, l’ensemble des composés dessinés ont été synthétisés puis évalués sur une DNMT1 humaine recombinante grâce à un test d’inhibition biochimique. L’évaluation biochimique a permis de mettre en évidence deux composés lead capables d’inhiber totalement la DNMT1 à forte concentration (500 μM)This manuscript presents the development of novel DNMT1 (DNA Methyltransferase) inhibi- tors. This enzyme is involved in epigenetic modification of DNA and its deregulation may lead to epigenetic cancers. The first part of this work focused on the design by molecular modeling of new prolino-homo-tryptophan compounds which can interact with both pockets of DNMT1. In a second time, molecular modeling allows us to design several pyrazole compounds as po- tential new DNMT1 inhibitors. Following these studies, all designed compounds were synthe- tized and tested on a recombinant human DNMT1enzyme thanks to a biochemical inhibition test. Biological evaluation bright to light two lead compounds which totally inhibit DNMT1 at high concentration (500 μM)
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Simon, Nathalie. "Les picoeucaryotes photosynthetiques oceaniques : caracterisation morphologique, biochimique et genetique." Paris 6, 1995. http://www.theses.fr/1995PA066209.
Анотація:
Les picoeucaryotes phososynthetiques marins constituent avec les procaryotes photosynthetiques, prochlorococcus et synechococcus, le picoplancton autotrophe (organismes photosynthetiques dont la taille n'excede pas 2 m de diametre). Cette classe de taille est la composante photosynthetique la plus importante, du point de vue biomasse et productivite, dans les milieux oceaniques oligotrophes et en particulier dans la zone intertropicale. Alors que la taxonomie, la physiologie et l'ecologie de la composante procaryote ont ete relativement bien etudiees, il existe tres peu de donnees concernant les picoeucaryotes. Les questions les plus importantes sont actuellement les suivantes: ? quelles sont les caracteristiques physiologiques et ecologiques des picoeucaryotes photosynthetiques oceaniques ? ? quelles sont les groupes dominants et quelle est la repartition geographique des principales especes ? ? enfin, quelle est la diversite des communautes naturelles ? compte tenu des techniques disponibles a present pour etudier ces communautes naturelles, il est tres difficile de repondre a ces questions, ainsi que le montre le chapitre d'introduction. Notre but a donc ete de caracteriser, a l'aide de techniques classiques, un certain nombre d'especes considerees dans la litterature comme representatives des communautes naturelles, ainsi qu'un certain nombre d'isolats non identifies de taille picoplanctonique. Les contenus pigmentaires mesures par chromatographie liquide haute pression (hplc), les volumes cellulaires et les contenus en adn nucleaire mesures par cytometrie en flux, ont servi a comparer les souches entre elles. A l'aide de l'ensemble de ces donnees, nous avons essaye de repondre a la question: ces couches sont-elles reellement representatives des communautes naturelles de picoeucaryotes ? pelagomonas calceolata est une espece qui semble ubiquiste et qui apparait etre la plus representative des communautes naturelles dans la collection de cultures etudiees. Une etude plus detaillee de la morphologie, du contenu pigmentaire et de la variabilite genetique de quatre isolats d'origines geographiques tres eloignees de cette espece a ete realisee. La caracterisation precise (au niveau de l'espece) des peuplements naturels de picoeucaryotes reste difficile. Etant donnes les biais introduits par les methodes classiques qui souvent impliquent la mise en culture des organismes, de nouvelles methodes doivent etre developpees dans ce but. Une technicite prometteuse est celle des sondes nucleiques specifiques de groupes phylogenetiques. La derniere partie de ce travail a consiste en la mise au point du protocole d'utilisation de ce type de sondes pour l'identification des picoeucaryotes
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PEBORDE, JEAN PASCAL. "Etude biochimique et immunologique du lipopolysaccharide d'escherichia coli k12." Toulouse 3, 1989. http://www.theses.fr/1989TOU30074.
Анотація:
Detection du lipopolyoside (lps) au cours de la purification de proteines issues d'escherichia coli. Mise au point d'une technique elisa par inhibition, application au controle de la purification de l'hormone de croissance humaine (hgh) produite par e. Coli. Comportement chromatographique du lps sur differents supports et au cours de la purification de l'hgh. Etude des interactions lps/proteines dans le cas de la serumalbumine et de l'hgh
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DOLINSEK, AVRELIJA. "Etude biochimique et biologique de l'interferon - gamma trophoblastique porcin." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA112297.
Анотація:
Le porc est la seule espece de mammifere connue ou le trophectoderme de l'embryon, en cours d'implantation, secrete de fortes quantites d'interferon-gamma (ifn-), en meme temps qu'un autre ifn, l'ifn-delta. Nous avons tout d'abord etudie la structure et les proprietes biochimiques de cet ifn embryonnaire, en les comparant a celles de l'ifn- leucocytaire adulte. Du fait de son origine epitheliale, l'ifn- trophoblastique differe de l'ifn- leucocytaire par une structure polypeptidique tronquee, par le nombre de glycoformes (deux au lieu de quatre), et par le niveau de glycosylation des monomeres. Ces differences structurales entrainent des proprietes biochimiques specifiques concernant le point isoionique (pl), la stabilite a differents ph, et la capacite a se replier apres denaturation. Dans une seconde partie nous nous sommes interesses aux effets biologiques des deux ifn embryonnaires sur l'uterus gestant. Par coloration immunohistochimique de coupes d'uterus, nous avons pu montrer que l'ifn-gamma traverse l'epithelium endometrial, et penetre dans le stroma uterin, ou il induit fortement les antigenes d'histocompatibilite de classe ii, en particulier sur les endotheliums vasculaires. Dans un modele experimental utilisant deux lignees cellulaires epitheliales (luminale et glandulaire), cultivees sur membranes microporeuses, nous avons montre que l'ifn-delta est l'agent principal sinon exclusif d'une depolarisation de l'epithelium luminal. Nous concluons que l'ifn- a pour cible la muqueuse uterine (stroma, edotheliums, glandes), contribuant probablement a creer un environnement non-infectieux pour le conceptus. Le role principal de l'ifn- serait alors de preparer l'uterus a l'implantation et/ou de permettre a l'ifn- de traverser la barriere epitheliale.
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Duhamel, Rémi. "Etude d'un capteur biochimique à ondes acoustiques de lamb." Besançon, 2005. http://www.theses.fr/2005BESA2020.
Анотація:
Le système étudié est une microbalance utilisant les propriétés des ondes acoustiques pour détecter des variations de masse. Lorsque l'on excite des ondes de Lamb dans une membrane, la fréquence à laquelle vibre la membrane est liée à la masse de celle-ci. Une augmentation locale de la masse provoquera une variation de la fréquence de vibration que l'on pourra détecter. Le choix des ondes de Lamb est pertinent : pour un mode particulier et sous certaines conditions très peu d'énergie se retrouve dissipée en milieu liquide et la sensibilité peut être supérieure à celle des systèmes classiques à base de quartz. Nous avons orienté notre étude selon deux axes de recherche : la diminution de la sensibilité à la température et l'amélioration de la sensibilité à la masse. Pour la diminution de la sensibilité à la température, deux types de dispositifs ont été étudiés. Une première famille de dispositifs à excitation électrostatique a été réalisée. La deuxième série, plus originale, utilise l'excitation des ondes de manière piézoélectrique sur deux lignes à retard croisées sur la même membrane. Nous avons pu effectuer simultanément les mesures de variations de température et de masse. Pour l'amélioration de la sensibilité à la masse, l'étude est orientée sur la diminution de l'épaisseur de la membrane dans laquelle se propagent les ondes. Deux familles de dispositifs ont été réalisées, l'une utilise le PZT comme matériau piézoélectrique et l'autre l'AlN. Les dispositifs AlN ont entièrement été caractérisés en tant que capteur de masse fonctionnant en milieu liquide. La microbalance réalisée présente une sensibilité à la masse de 200 cm2/g environ pour un système oscillant à 13 MHzThe studied system is a microbalance which uses acoustic waves properties to detect mass variations. When Lamb waves are excited in a membrane, the vibrating frequency of the membrane is linked to its own mass. If a small mass quantity is added to the membrane the vibrating frequency will change and we will be able to detect this frequency shift. Lamb waves are really interesting as a basis for such a device because for a particular mode and under given conditions there is nearly no energy loss in liquid media and mass sensitivity is better than the one reached by quartz crystal microbalances. We have decided to study two particular aspects of such a system : how to reduce temperature sensitivity and how to increase mass sensitivity. Regarding temperature sensitivity, two different kinds of systems have been studied. A first system using electrostatic excitation has been built. Another system using piezoelectric excitation has also been realised. This system is made of two crossed delay lines on the same membrane. With such a system it is possible to retrieve both temperature and mass variations at the same time. As far as mass sensitivity is concerned, we wanted to reduce the membrane thickness where waves are propagating. Two kinds of devices have been studied, one using PZT as piezoelectric material, the other one using AlN. AlN devices do work as expected, and in liquid media the microbalance shows a 200 cm2/g mass sensitivity for a 13 MHz oscillating system
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Biegala, Isabelle. "Productivite zooplanctonique dans les ecosystemes marins : approche biochimique (atcase)." Aix-Marseille 2, 1998. http://www.theses.fr/1998AIX22080.
Анотація:
Il n'existe pas a l'heure actuelle de methode satisfaisante pour mesurer la productivite mesozooplanctonique, c'est a dire la capacite du mesozooplancton a produire de la matiere organique. Les methodes qui ont ete utilisees jusqu'a present sont tres fastidieuses car elles ne sont appliquees qu'au niveau de l'espece, et necessitent le plus souvent l'incubation d'organismes. L'atcase catalyse l'une des etapes de la biosynthese de novo des nucleotides pyrimidiques, unites fondamentales des acides nucleiques. La mesure d'activite de cette enzyme a ete proposee comme un indice de productivite mesozooplanctonique, cependant cette approche n'a jamais ete comparee, en condition controlee au laboratoire ou in situ avec d'autres methodes de reference. Au cours de cette etude, les conditions optimales de conservation et d'incubation ont tout d'abord ete definies sur des echantillons mesozooplanctoniques preleves a differentes periodes de l'annee et sur le copepode calanus helgolandicus. Dans un deuxieme temps, l'activite de l'atcase a ete comparee, au laboratoire, a la production d'oeufs et aux taux de croissance proteique de c. Helgolandicus comme mesure de reference de la productivite germinale et somatique des copepodes, composants majeurs du mesozooplancton. De plus, les acides nucleiques ont ete mesures, en comparaison avec l'activite de l'atcase, au cours de la maturation des gonades de cette espece. L'ensemble de ces experiences realisees au laboratoire donnent des resultats encourageants pour l'utilisation de l'atcase comme indice de productivite des copepodes. Cependant, la mesure de l'activite de cette enzyme sur le mesozooplancton et les femelles c. Helgolandicus, au cours de suivis dans trois sites d'etude des mers du nord de l'europe, laisse penser que l'atcase est impliquee dans une partie seulement de la synthese de matiere organique des copepodes, ce qui limite son utilisation comme indice de productivite du mesozooplancton.
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Liénard-Lambour, Barbara. "Caractérisation biochimique de macroH2A1.1 dans les cellules cancéreuses mammaires." Thesis, Toulouse 3, 2016. http://www.theses.fr/2016TOU30273.
Анотація:
Les propriétés biochimiques de la chromatine peuvent être modulées par l'incorporation de variants d'histones dans la chromatine. Le variant macroH2A contient un domaine amino-terminal typique de l'histone H2A, fusionné à un domaine appelé "domaine macro". A ce jour, trois protéines macroH2A ont été identifiées: macroH2A1.1 et macroH2A1.2 résultant d'un épissage alternatif et macroH2A2. Elles ont été majoritairement associées à la formation de l'hétérochromatine et à la répression transcriptionnelle. L'état de l'art montre ainsi une implication de macroH2A1 dans de nombreux mécanismes cellulaires tels que l'inactivation du chromosome X, la sénescence, le développement cellulaire, la régulation transcriptionnelle et les cassures double brin de l'ADN. Nombres de ces processus sont impliqués dans la formation de cancers, faisant de macroH2A1 un élément important à considérer. Son expression a d'ailleurs été corrélée au développement de nombreux cancers tel que ceux du poumon, du colon, de la peau ou du sein. De par les différences structurales, de liaisons à des ligands et les nombreuses controverses observées dans la littérature entre macroH2A1.1 et macroH2A1.2, il paraît essentiel d'étudier séparément chacun de ces deux variants sans pour autant négliger l'importance de leur interconnexion. Récemment, nous avons déterminé que le niveau d'expression de macroH2A1.1 corrélait spécifiquement avec les cancers du sein triple négatif (TNBC). Au niveau moléculaire, cette association se traduit par une corrélation positive entre le niveau d'expression de macroH2A1.1 et les caractéristiques moléculaires de la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT). Dans ce contexte, le but de ma thèse a été d'identifier les propriétés biochimiques de macroH2A1.1 dans plusieurs modèles cellulaires du cancer du sein à l'aide d'un anticorps spécifiquement dirigé contre macroH2A1.1 produit au sein du laboratoire. L'ensemble de ce travail a permis l'identification d'une forme mono-ubiquitinylée de macroH2A1.1 sur sa lysine 123. Les outils techniques mis en œuvre ont également permis d'identifier cette forme modifiée en association avec les duplexes ARN : ADN. Les résultats présentés dans cette thèse permettront de mieux comprendre l'importance des modifications post-traductionnelles des variants d'histone et d'ouvrir un nouveau champ d'exploitation dans la définition des rôles de ce variantBiochemical properties of chromatin can be modulated by incorporation of histone variants in chromatin. MacroH2A has a amino-terminal domain typical of a full-length H2A, fused to a "macro domain". To date, three macroH2A have been identified: macroH2A1.1 and macroH2A1.2 which are alternative spliced variants and macroH2A2. They have been principally associated to heterochromatin formation and transcriptional repression. State of art shows that macroH2A1 is associated to various cellular mechanisms such as chromosome X inactivation, senescence, cellular development, transcriptional regulation and DNA double strand breaks. Many of these processes are implicated in cancer formation, making macroH2A1 an important element to consider. Its expression has also been correlated to numerous cancer developments such as lung, colon, skin or breast. Due to the structural differences, links to ligands and controversy observed in the literature between macroH2A1.1 and macroH2A1.2, it seems essential to study separately these two variants without omit their interconnection significance. Recently, we have determined that macroH2A1.1 expression level correlated specifically with Triple Negative Breast Cancer (TNBC). At the molecular level, this combination results in a positive correlation between macroH2A1.1 expression level and molecular characteristics of Epithelio-Mesenchymal Transition (EMT). In this context, the aim of my thesis was to identify biochemical properties of macroH2A1.1 in many breast cancer cellular models using a specific antibody for macroH2A1.1 generated in the lab. All this work has allowed the identification of a mono-ubiquitinated form of macroH2A1.1 on its lysine 123. Technical tools implemented have also allowed to identify the modified form in association with RNA:DNA duplexes. The results presented in this thesis will allow to better understand the importance of post-translational modification of histone variant and to open a new operating field in the role definition for this variant
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Berta, Philippe. "Myocytes aortiques en culture primaire caractérisation biochimique et pharmacologique." Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37595993k.
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Hamdaoui, Ahmed. "Contribution biochimique à l'étude du rôle pathologique des élastases." Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37598179j.
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Aizel, Kaheima. "Étude structurale et biochimique d’un facteur d’échange atypique d’Arf." Thesis, Paris 11, 2012. http://www.theses.fr/2012PA114827/document.
Анотація:
Les petites GTPases de la famille Arf, régulateurs majeurs du trafic membranaire, sont activé par plusieurs familles de facteurs d’échange nucléotidiques (ArfGEFs). Les ArfGEFs jouent un rôle essentiel dans l’intégration des signaux de régulation qui conduisent à l’activation d’Arf au niveau de compartiments cellulaires spécifiques, cependant les mécanismes par lesquels ils ciblent les Arfs activés aux membranes spécifiques et leur coordination avec l’échange de nucléotide reste peu comprise. Nous utilisons ici la cristallographie et la reconstitution des activités ArfGEF sur des membranes artificielles pour analyser ces mécanismes pour un ArfGEF humain atypique, impliqués dans l’endocytose de récepteurs et associé à l’invasion tumorale dans de nombreuses cellules cancéreuses. Les membres de cette famille ont été décrits comme des GEFs spécifique d’Arf6, et comporte un domaine de type PH après leur domaine Sec7. Dans la deuxième partie de ma thèse, nous voulions savoir comment les isoformes Arf1 et Arf6 achevaient leurs fonctions dans la cellule. Arf1 et Arf6 sont très similaires: elles possèdent plus de 60% d’identité de séquence, et des études structurales ont montré que la surface qu’ils utilisent pour interagir avec leurs régulateurs et effecteurs est essentiellement identique en séquence et en structure. Cependant, elles ont des fonctions différentes dans la cellule et des propriétés différentes in vitro, pour lesquelles aucune donnée structurale n’a donné d’explications. Nous utilisons ici la cristallographie, le SAXS et la RMN pour comprendre la différence entre ces deux isoformesSmall GTPases of the Arf family, which are pivotal regulators of membrane traffic in eukaryotes, are activated by several families of guanine nucleotide exchange factors (ArfGEFs). ArfGEfs play a key role in processing upstream regulatory signals that lead to Arf activation onto specific subcellular compartments, yet the mechanisms by which they target activated Arfs to specific membranes and their coordination with nucleotide exchange remain poorly understood. Here we used X-ray crystallography and reconstitution of ArfGEF activities on artificial membranes to analyze these mechanisms for an atypical human ArfGEF, involved in receptor endocytosis and associated with tumour invasion in various cancer cells. Members of this family have been described as Arf6-specific GEFs, and carry a PH-like domain downstream their Sec7 domain. In a second part of the work we wanted to know how the isoforms Arf1 and Arf6 achieve exquisitely specific functions in cells. Arf1 and Arf6 are highly similar: they have over 60% sequence identity, and structural studies have shown that the surfaces they use to interact with regulators and effectors are essentially identical in sequence and structure. Yet, they have non-overlapping functions in cells. Arf1 is a major regulator of most aspects of vesicular traffic, while Arf6 is restricted to the plasma membrane where it acts at the crossroads of trafficking and cytoskeleton functions (D'Souza-Schorey and Chavrier 2006). Consistent with their cellular specificities, Arf1 and Arf6 also have distinctive biochemical properties in vitro, for which no straightforward structural explanation has been put forward. Here we used X-ray crystallography, synchrotron SAXS experiments and NMR to assess the difference between these two isoforms
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Cholet, Orianne. "Etude de l'écosystème fromager par une approche biochimique et moléculaire." Phd thesis, INAPG (AgroParisTech), 2006. http://pastel.archives-ouvertes.fr/pastel-00003111.
Анотація:
Identifier le rôle et la contribution de chaque flore au sein de l'écosystème fromager a déjà fait l'objet de nombreux travaux, mais les modes d'investigation sont restés trop souvent descriptifs par manque d'outils moléculaires. L'objectif principal de cette étude était d'élucider les voies métaboliques impliquées dans la désacidification et la production de composés soufrés chez trois levures (Debaryomyces hansenii, Kluyveromyces marxianus et Yarrowia lipolytica) et une bactérie de surface (Brevibacterium linens) par une approche transcriptomique. La conception et l'utilisation d'une puce à ADN dédiée à ces quatre micro-organismes ont permis de mettre en évidence une divergence des voies cataboliques de la L-méthionine entre les levures et la bactérie d'affinage. L'ensemble des résultats obtenus a montré que la transamination est l'étape essentielle du catabolisme de la L-méthionine chez les levures. Elle s'accompagne d'une accumulation transitoire de l'acide α-céto-γ- méthylthiobutyrique chez Y. lipolytica, et essentiellement de sa forme réduite, l'acide α- hydroxy-γ-méthylthiobutyrique, chez K. marxianus et D. hansenii. La dégradation de ces composés se traduit par une augmentation de la production de méthanethiol et des composés soufrés volatils qui en résultent. Une étude plus approfondie réalisée sur Y. lipolytica a montré que les gènes ARO8 et BAT2 jouent un rôle prépondérant dans l'étape de transamination de la L-méthionine chez cette levure. En revanche, chez la bactérie B. linens, l'enzyme clef du catabolisme de la L-méthionine est la L-méthionine γ-lyase. L'apport de L-méthionine dans le milieu de culture induit fortement l'expression du gène mgl et génère une large gamme de composés soufrés volatils. L'étude des voies de dégradation du lactose et du lactate chez les levures a également permis d'obtenir des informations sur la part fonctionnelle de chaque espèce au cours de l'affinage. Ainsi, il semblerait qu'en culture mixte, K. marxianus soit plus impliqué dans la consommation du lactose via l'induction des gènes LAC12 et LAC4, D. hansenii dans le métabolisme du pyruvate puis le catabolisme du lactate en fin de culture, et Y. lipolytica dans la dégradation de la L-méthionine via l'induction des gènes ARO8 et BAT2. De façon plus globale, l'ensemble de nos résultats permet de mettre en évidence la possibilité de complémentarités métaboliques entre les levures d'affinage.
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Ducassou, Lionel. "Etude biochimique d’un cytochrome P450 de cerveau humain : le CYP2U1." Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05P642/document.
Анотація:
Parmi les 57 cytochromes P450 identifiés lors du séquençage complet du génome humain, on en dénombre environ 15 dont on ne connaît pratiquement rien de leurs rôles physiologiques, de leurs substrats, et de leurs structures, d’où le nom de «P450 orphelins». Le CYP2U1 est l’un des cytochromes P450 les plus fortement exprimé au niveau du cerveau et du cervelet mais c’est aussi l’un des plus conservé parmi les différentes espèces du règne animal. Ce travail de thèse a tout d’abord consisté à optimiser les conditions d’expression du CYP2U1 sous une forme active. Un premier système d’expression dans la levure Saccharomyces Cerevisiae a permis une production d’un complexe CYP2U1-P450 réductase catalytiquement actif permettant des études de recherche de substrat. Un second système d’expression dans Escherichia Coli devrait permettre d’obtenir de plus grandes quantités d’enzyme soluble destinée à des études structurales. Dans un second temps, une recherche de substrats a été effectuée à l’aide d’analyse d’incubats par chromatographie liquide couplée à une détection par spectrométrie de masse. A ce jour, un screening dirigé de plus de soixante-dix molécules, substrats de P450s de la famille 2, a permis d’identifier les premiers substrats exogènes du CYP2U1, les analogues de terfénadone et la débrisoquine. D’autre part, une étude par modélisation moléculaire de la structure du CYP2U1 a été effectuée. Cette étude montre que le CYP2U1 diffère de tous les autres P450s par la présence d’un insert très spécifique dans son domaine N-terminal. Des modèles par homologie basés sur les structures cristallographiques des P450s de la famille 2 ont été construits. Ces modèles ont été validés par dynamique moléculaire et ont permis de proposer un mode d’interaction avec la membrane, d’identifier la position des canaux d’accès ainsi que de déterminer la topologie du site actif. Enfin, un docking des premiers substrats exogènes au sein du site actif du CYP2U1 a permis de confirmer la régioselectivité des hydroxylations catalysées par le CYP2U1Among the 57 human cytochrome P450 genes that have been identified; substrates, structure and physiologic role of 15 of them is practically unknown. They are called orphan. One of them, CYP2U1 is one of the most expressed cytochrome P450 in the brain and in the cerebellum but also one of the most conserved isoform in the all animal kingdom. This manuscript first describes the optimization of the heterologous expression of an active form of CYP2U1. Expression in a eukaryotic host, yeast Saccharomyces Cerevisiae first allows the production of a catalytic active CYP2U1-P450 reductase complex needed for substrate screening. Another expression system in a prokaryote host Escherichia Coli will allow higher production rate of a truncated and soluble form of the protein which will permit structural studies. Then a directed substrate screening was performed with the liquid chromatography – mass spectrometry analysis of CYP2U1 incubations. To date, 70 molecules, CYP2 family substrates, were tested that allow the identification of the two first exogenous CYP2U1 substrates: débrisoquine and terfenadone analogs. A structural study was achieved using a homology tridimensional model of the enzyme. We have found that CYP2U1 is longer than the other human CYPs, with an N-terminal 20 amino acids insertion, located after the helical membrane spanning domain. Structural models were built using six crystallized human CYP2s as templates. Molecular dynamics experiments in membrane suggested a specific interaction with the membrane. The active site topology and the access channels were also determined and a docking of the two first exogenous CYP2U1 substrates was performed in order to confirm the regioselective hydroxylation activities observed in vitro
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Ducassou, Lionel. "Etude biochimique d'un cytochrome P450 de cerveau humain : le CYP2U1." Phd thesis, Université René Descartes - Paris V, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00799083.
Анотація:
Parmi les 57 cytochromes P450 identifiés lors du séquençage complet du génome humain, on en dénombre environ 15 dont on ne connaît pratiquement rien de leurs rôles physiologiques, de leurs substrats, et de leurs structures, d'où le nom de "P450 orphelins". Le CYP2U1 est l'un des cytochromes P450 les plus fortement exprimé au niveau du cerveau et du cervelet mais c'est aussi l'un des plus conservé parmi les différentes espèces du règne animal. Ce travail de thèse a tout d'abord consisté à optimiser les conditions d'expression du CYP2U1 sous une forme active. Un premier système d'expression dans la levure Saccharomyces Cerevisiae a permis une production d'un complexe CYP2U1-P450 réductase catalytiquement actif permettant des études de recherche de substrat. Un second système d'expression dans Escherichia Coli devrait permettre d'obtenir de plus grandes quantités d'enzyme soluble destinée à des études structurales. Dans un second temps, une recherche de substrats a été effectuée à l'aide d'analyse d'incubats par chromatographie liquide couplée à une détection par spectrométrie de masse. A ce jour, un screening dirigé de plus de soixante-dix molécules, substrats de P450s de la famille 2, a permis d'identifier les premiers substrats exogènes du CYP2U1, les analogues de terfénadone et la débrisoquine. D'autre part, une étude par modélisation moléculaire de la structure du CYP2U1 a été effectuée. Cette étude montre que le CYP2U1 diffère de tous les autres P450s par la présence d'un insert très spécifique dans son domaine N-terminal. Des modèles par homologie basés sur les structures cristallographiques des P450s de la famille 2 ont été construits. Ces modèles ont été validés par dynamique moléculaire et ont permis de proposer un mode d'interaction avec la membrane, d'identifier la position des canaux d'accès ainsi que de déterminer la topologie du site actif. Enfin, un docking des premiers substrats exogènes au sein du site actif du CYP2U1 a permis de confirmer la régioselectivité des hydroxylations catalysées par le CYP2U1.
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Tardif, Maxime. "Analyses biochimique et protéomique de la poly (ADP-ribosyl)ation." Thesis, Université Laval, 2011. http://www.theses.ulaval.ca/2011/27718/27718.pdf.
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Corbeille-Magnol, Chantal. "Etude biochimique de l'état de dénutrition chez le jeune enfant." Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05P194.
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Susplugas, Claudine. "Etude pharmacodynamique, biochimique, chimique et botanique de reseda phyteuma l." Montpellier 1, 1985. http://www.theses.fr/1985MON13506.
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Dhouib, Rabeb. "Etude biochimique, structurale et physiologique d’enzymes lipolytiques chez les Mycobactéries." Aix-Marseille 2, 2009. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2009AIX22093.pdf.
Анотація:
Les enzymes lipolytiques chez Mycobacterium tuberculosis, l'agent étiologique de la tuberculose, restent peu étudiées malgré leur probable implication dans des fonctions physiologiques essentielles chez ce bacille. La mise à disposition de la séquence du génome de M. Tuberculosis a permis d'identifier les gènes codant ces enzymes chez ce microorganisme. Mon travail de thèse a consisté, dans un premier temps, en la caractérisation biochimique, structurale et fonctionnelle d'une enzyme lipolytique potentielle, la Rv0183, chez M. Tuberculosis. Nous avons démontré que la Rv0183 est une monoacylglycérol lipase localisée non seulement dans l'enveloppe mycobactérienne mais aussi dans le milieu de culture. Le rôle physiologique de la Rv0183 a été extrapolé grâce à l'étude de son homologue chez M. Smegmatis, la MSMEG_0220. Cette protéine, en plus de son implication dans l'hydrolyse de lipides exogènes, semble jouer un rôle structural au niveau de l'enveloppe mycobactérienne. Dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés à la caractérisation de deux autres protéines secrétées par M. Tuberculosis apparentées à la famille des cutinases : la Rv1984c et la Rv3452. Bien qu'elles présentent une identité de séquence de 50%, l'étude des propriétés cinétiques de ces protéines a montré une divergence dans leur spécificité de substrat. Si la Rv1984c pourrait être définie comme une lipase, la Rv3452 est une phospholipase de type A2. Etant secrétées par M. Tuberculosis, une évaluation de la cytotoxicité de ces protéines a montré que contrairement à la Rv1984c, la Rv3452 était capable d'induire la lyse de macrophages suggérant une implication de cette protéine dans la virulence de M. Tuberculosis. Un dernier aspect de mon travail a été d'étudier la lipolyse in situ chez M. Smegmatis. En utilisant la microscopie de florescence en temps réel, nous avons suivi, l'hydrolyse des réserves intracytoplasmiques chez ce bacille placé en milieu appauvri. Ce phénomène a été bloqué par la la tétrahydrolipstatine confirmant l'implication d'enzymes lipolytiquesLipolytic enzymes in Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agents of tuberculosis, remain poorly studied despite their probable involvement in bacteria cell life. Genomic DNA from M. Tuberculosis analysis has permitted the identification of genes encoding lipolytic enzymes. My thesis work was consisted, on the one hand, of biochemical, structural and physiological characterization of Rv0183, a putative lipolytic enzyme from M. Tuberculosis. We have demonstrated that Rv0183 is a monoacylglycerol lipase which is located not only in the cell envelope but also in the culture medium filtrate. The physiological function of Rv0183 was assessed by studying its ortholog in M. Smegmatis, the MSMEG_0220. It has been shown that this protein was involved not only in the exogenous lipid degradation but also in the cell envelop architecture. On the other hand, we have investigated on the biochemical characterization of two secreted proteins of M. Tuberculosis belonging to the cutinase family, Rv1984c and Rv3452. Despite 50% identity in their amino acid sequence, these enzymes show distinct substrate specificities. Rv1984c hydrolyses carboxyl esters and monoacylglycerols whereas Rv3452 behaves as a phospholipase A2 able to induce macrophage lysis suggesting an implication of this enzyme in M. Tuberculosis virulence. Finally, we have studied the in situ lipolysis in M. Smegmatis. Thanks to time-lapse fluorescence microscopy, we have monitored the intracytoplasmic lipids hydrolysis in this bacterium incubated under nutrient starvation. Lipid degradation was inhibited by tetrahydrolipstatin confirming the involvement of lipolytic enzymes in this process