Teses / dissertações sobre o tema "Chromatographie couplée à de la spectrométrie de masse"
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Mendes, Siqueira Anna Luiza. "Apport de la spectrométrie de mobilité ionique couplée à la spectrométrie de masse pour la caractérisation de produits pétroliers formulés". Thesis, Normandie, 2018. http://www.theses.fr/2018NORMR044.
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Les produits pétroliers formulés actuels tels que les carburants et les lubrifiants doiventrépondre à des cahiers des charges bien précis pour garantir les meilleures performances,fiabilité et longévité des moteurs tout en limitant l’émission de polluants. Ce travail de thèse porte sur le développement de méthodologies d’analyse pour l’identification d’additifs polymériques dans les gazoles et la caractérisation des polyalphaoléfines. L’analyse des additifs a été effectuée par couplage de la chromatographie liquide, de la spectrométrie de mobilité ionique et de la spectrométrie de masse (LC-IMSMS), l’ionisation étant obtenue par electrospray (ESI). Après ajustement des paramètres expérimentaux, les différents additifs ont été identifiés dans les gazoles sans préparation d'échantillon. Le couplage de la chromatographie liquide aux conditions critiques (LCCC) avec la spectrométrie de masse a également été évalué dans l’objectif d’améliorer la séparation des additifs de la matrice gazole. La caractérisation des polyalphaoléfines (PAO) a été réalisée par couplage IMS-MS associé à la source ASAP (sonde d’analyse de solide à pression atmosphérique) ou la source APPI (photoionisation à pression atmosphérique). En ASAP, outre les ions de pyrolyse, des espèces intactes peuvent être détectées pour les PAO de faible grade. Dans le cas des PAO de haut grade, seuls des ions fragments pyrolytiques ont été détectés, permettant toutefois d’identifier les alpha-oléfines utilisées pour produire les PAOs. En APPI, l’utilisation de solvants halogénés et de toluène, a permis d’observer des espèces intactes pour les PAOs de haut grade via la formation d’adduits halogénés. Le couplage IMS-MS a permis de différencier les polyalphaoléfines par l’étude des temps de dérive et des largeurs de signaux IMSNowadays, formulated petroleum products such as fuels and lubricants must respond toprecise technical requirements to ensure the best performance, reliability and longevity ofengines while limiting the emission of pollutants. This thesis work focused on the development of analytical methodologies for the identification of polymeric additives in diesel fuels and the characterization of polyalphaolefins. The additive analysis was performed by coupling of liquid chromatography, ion mobility spectrometry and mass spectrometry (LC-IMS-MS), the ionization was performed by electrospray (ESI). After adjusting the experimental parameters, all additives were identified in the diesel fuel without sample preparation. The coupling of liquid chromatography at the critical condition chromatography (LCCC) with mass spectrometry was also evaluated in order to improve the separation of additives from the diesel fuel matrix. The characterization of polyalphaolefins (PAO) was carried out by IMS-MS with ASAP (atmospheric solids analysis probe) or APPI (atmospheric pressure photoionization) sources. With ASAP, in addition to pyrolysis ions, intact species were detected for low PAO grades. In the case of high PAO grades, only pyrolytic fragments were detected, yet it was possible to identify the alphaolefins used to produce the PAOs. In APPI, the use of halogenated solvents and toluene, allowed to observe intact species for high PAO grades through the formation of halogenated adducts. With IMS-MS coupling polyalphaolefins were differentiated the by the study of drift times and full width at half maximum
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Roux, Aurélie. "Analyse du métabolome urinaire humain par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution". Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066575.
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L’objectif de ce travail de thèse est de développer une base de données spectrale pour faciliter l’annotation et l’interprétation biologique des jeux de données d’analyse métabolomique obtenus en utilisant la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. Deux approches ont été utilisées : l’identification par comparaison aux spectres de masse de composés de références et l’identification directement à partir des données biologiques. Pour la première approche une chiomiothèque de métabolite a été constituée et analysée. L’identification à partir de données biologiques a été réalisée sur une cohorte de volontaires de 227 individus travaillant au CEA. 244 métabolites ont ainsi été identifiés dans les urines humaines, donc 78 jamais été décrits comme faisant parti du métabolome urinaire. 139 métabolites ont également était caractérisés sur la base de leur masse précise mais sans identification formelle. Ces 383 métabolites représentent environ 1000 ions dans chacun des modes d’ionisation. Les variations physiologiques au sein de la cohorte, en fonction de l’âge, du poids et du genre, de ces différents métabolites ont été étudiées afin de construire une base de données relationnelle. Enfin, le métabolome urinaire pouvant être affecté par les conditions de prélèvement des échantillons d’urines, nous avons réalisé des études de stabilité dans les conditions de prélèvement des métabolites précédemment caractérisés. Ces études nous ont permis de proposer des recommandations en termes de conditions de prélèvement et de stockage à court terme des urines et de mesurer l’impact de la contamination bactérienne sur les concentrations de différents métabolites urinaires
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Crepier, Julien. "La chromatographie en phase supercritique couplée avec une détection UV et spectrométrie de masse haute résolution pour l’analyse d’échantillons complexes : application aux bio-huiles". Thesis, Lyon, 2018. http://www.theses.fr/2018LYSE1050/document.
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Ces travaux de thèse ont porté sur l'analyse de bio-huiles par chromatographie en phase supercritique (SFC) en couplage avec un détecteur UV et un spectromètre de de masse haute résolution (HRMS). Encore méconnue, cette technique est à ce jour peu répandue en comparaison avec la chromatographie gazeuse. En premier lieu, une optimisation basée sur la maximisation de la capacité de pics lors de l'analyse de la bio-huile a été mise en place. Pression, température, phases stationnaires et phases mobiles ont ainsi été sélectionnés pour parvenir à séparer un maximum de pics (soit plus d'une centaine de pics) sur la plus large fenêtre de rétention possible. Une fois la séparation maitrisée, un travail expérimental de couplage avec la spectrométrie de masse a été conduit tout d'abord sur un détecteur à simple quadripôle puis sur un détecteur à temps de vol avec un piège linéaire (IT-ToF/MS). Des expérimentations en fragmentation MS/MS ont ensuite été réalisées pour proposer une identification des espèces détectées. Le retraitement du grand nombre de données générées a aussi nécessité de développer un outil de retraitement adapté pour réaliser l'identification de formules brutes et proposer des structures développées à l'aide de la fragmentation et d'outils de comparaison ouverts, en libre accès sur Internet. La dernière partie de ces travaux a été consacrée à la comparaison des résultats obtenus sur une bio-huile par SFC-UV/HMRS, GCxGC-FI/MS et FT-ICR/MS. L'ensemble de ces travaux à vocation méthodologique a permis d'améliorer notre connaissance de ce type de couplage SFC-UV/HRM au travers d'exemples d'application liés à la caractérisation de matrices complexes ex-biomasseThis thesis focused on the analysis of bio-oils by supercritical fluid chromatography (SFC) in coupling with a UV detector and a high resolution mass spectrometer (HRMS). Still unknown, this technique is currently not widespread in comparison with gas chromatography. First, an optimization based on the maximization of peak capacity during the analysis of the bio-oil has been put in place. Pressure, temperature, stationary phases and mobile phases were selected to separate a maximum of peaks (more than a hundred peaks) on the widest possible retention window. Once separation optimized, an experimental work of coupling with the mass spectrometry was carried out first on a single quadrupole detector then on a time detector of flight with a linear trap (IT-ToF/MS). MS/MS fragmentation experiments were then carried out to propose an identification of the detected species. The reprocessing of the large number of data generated also necessitated the development of a reprocessing tool adapted to carry out the identification of molecular formulae and to propose developed structures using fragmentation and open-source comparison tools. The last part of this work was devoted to the comparison of the results obtained on a bio-oil by SFC-UV/HMRS, GCxGC-FI/MS and FT-ICR/MS. All of this methodological work has improved our knowledge of this type of SFC-UV / HRM coupling through application examples related to the characterization of ex-biomass complex matrices
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Simon, Romain. "La quantification ciblée de protéines et peptides par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem : développements analytiques et applications". Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00875965.
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En recherche clinique ou environnementale, les biomarqueurs protéiques présentent un intérêt croissant. Bien que les immuno-dosages restent les méthodes de référence pour leur quantification, les récentes avancées en spectrométrie de masse (MS) font de cette technique une alternative crédible à l'ELISA. Ce travail apporte quelques éléments méthodologiques pour repousser certaines limitations de la MS. D'abord, deux dosages ont été proposés. Celui réalisé chez G. fossarum représente le premier exemple de dosage de la Vitellogénine chez un invertébré par LC-MS/MS. L'un des défis de la méthode présentée est de doser spécifiquement une protéine dans un organisme dont le génome est majoritairement inconnu. Le second dosage concerne les peptides contenant une méthionine. Nous avons développé un protocole d'oxydation des méthionines afin de s'affranchir du biais lié à leur oxydation partielle. Cette méthode a ensuite été appliquée à une protéine impliquée dans la maladie d'Alzheimer (l'Apolipoprotéine E4) dans une cohorte de 673 plasmas. Ce dosage est à ce jour l'une des plus grandes études réalisées par LC-MS/MS et montre toute la robustesse de cette approche. Enfin, l'influence de la phase mobile sur la sensibilité des dosages de peptides a été étudiée : d'abord en phase inverse, où le méthanol est une bonne alternative à l'acétonitrile ; ensuite en HILIC, où les difficultés liées à l'étude d'ions multichargés en milieu majoritairement organique ont été abordées. Les problèmes liés à la capacité de charge des colonnes ont également été soulevés. La chromatographie HILIC reste prometteuse pour la quantification de peptides puisqu'un facteur dix en sensibilité peut être apporté.
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Pagés, Jean-Charles. "Analyse de la concentration des androgènes nucléaires dans la prostate humaine par chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse". Montpellier 1, 1990. http://www.theses.fr/1990MON11039.
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Debouit, Charlotte. "Dosage du (±)-VX plasmatique libre par chromatographie liquide couplée à un spectromètre de masse en tandem, application toxicologique et approche de la séparation des énantiomères". Thesis, Grenoble, 2011. http://www.theses.fr/2011GRENV045.
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De nouvelles méthodes de détection et de quantification du VX (O-éthyl S–(2(diisopropylamino)éthyl) (méthylphosphonothioate)) dans le plasma par chromatographie liquide couplée à un spectromètre de masse en tandem (LC-MS/MS) ont été développées. Après avoir été mise en œuvre en milieu HBSS (rendement > 99%), la méthode d'extraction liquide-liquide de notre composé d'intérêt nous permet d'obtenir en milieu plasmatique un rendement de soixante-cinq pour cent (65%). Cette méthode d'extraction permet d'évaluer la présence de VX dans de très faibles volumes d'échantillons de plasma (entre 20 et 1000 µL), donc dans des volumes compatibles avec des expérimentations sur de petits rongeurs. Cette extraction est suivie d'une analyse par LC-MS/MS en phase 100% organique. Des limites de détection de 0,15 et 0,5 pg/mL (pour 5 µL injecté) sont obtenues respectivement avec l'utilisation de la colonne Allure Biphényl (Restek) et Lux Cellulose-1 (Phenomenex). Afin d'étudier la toxicocinétique des énantiomères du VX dans le plasma, nos recherches se sont ensuite focalisées sur la séparation de ces derniers. Des résultats prometteurs ont été obtenus en utilisant une colonne Lux cellulose-2 (Phenomenex)Innovative analytical methods have been developed to detect and quantify the organophosphorus nerve agent, VX (O-ethyl S–(2(diisopropylamino)ethyl) (methylphosphonothioate)), in plasma using liquid chromatography coupled with mass spectrometry (LC-MS/MS) technique. Liquid-liquid extraction of VX from HBSS environment was achieved with excellent yields (> 99%). Next, extraction from plasma was performed and generated a recovery rate of approximately sixty-five percent (65%). Our distinctive extraction methodology was implemented to evaluate the presence of VX in very small quantities of plasma (between 20 to 1000 µL) as in small rodents' experiments. It was followed by an LC-MS/MS analysis in a 100% organic phase. A Lux Cellulose-1 column (Phenomenex) and an Allure biphenyl column (Restek) were tested with detection limit at 0.15 pg/mL and 0.5 pg/mL in plasma (5 µL injected), respectively. Finally, our study was focused on the separation of VX enantiomers and hopeful results were provided using a Lux cellulose-2 column (Phenomenex)
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Roy, Sylvie. "Couplage de la chromatographie liquide haute performance et de la spectrométrie de masse". Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05P035.
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Lafarge, Patricia. "Couplage chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse : principe, réalisation, pratique et intérêt analytique". Paris 5, 1988. http://www.theses.fr/1988PA05P048.
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Werner, Erwan. "Analyse du métabolome par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse : application à la recherche de biomarqueurs indirects d’induction enzymatique". Thesis, Paris 11, 2011. http://www.theses.fr/2011PA114817/document.
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Issue d’un partenariat de recherche entre le CEA et les laboratoires Servier, cette thèse avait pour objectif d’évaluer l’approche métabolomique par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS) pour l'identification de marqueurs indirects de l'induction dans les espèces de toxicologie. Le travail de thèse a débuté par l’optimisation de la méthode d’acquisition des empreintes métaboliques tant sur le plan analytique que dans le domaine du traitement des données brutes. Un outil reposant sur les matrices d’auto corrélation a alors été développé afin de s’affranchir d’une partie de la redondance du signal obtenu par spectrométrie de masse. Dans un troisième temps, les indices de Kendrick couplés à la sélectivité méthylène ont été appliqués à l’étude de composés biologiques en spectrométrie de masse haute résolution afin de proposer une méthode alternative de visualisation des données offrant une aide à l’identification des variables. Enfin, dans une dernière partie, les efforts se sont portés sur l’identification des composés endogènes modifiés au cours du protocole d’inductionThis work is the result of a research partnership between the CEA and Les laboratories Servier. It deals with the characterization of biomarkers of metabolic enzyme induction in rat biofluids using MSbased metabolomics. The first part of this work included methodological developments regarding theacquisition and the processing of metabolic fingerprints. A tool based on autocorrelation matrices wasthen implemented to reduce the redundancy of data generated with mass spectrometry and subsequently accelerate the isolation of discriminating variables. The next step consisted in the evaluation of the combined use of Kendrick mass defects and methylene selectivity as an alternative visualization tool for large data set, which would rely on compound chemical structures. Finally, the last part of the work was dedicated to the identification of discriminating signals raised up by ametabolomic global approach from rat biofluids collected before and after an induction assay
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Himbert, Franck. "Purification d'un mélange multicomposés en chromatographie liquide préparative : colonne, injection & couplage à la spectrométrie de masse". Orléans, 2003. http://www.theses.fr/2003ORLE2042.
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La Chromatographie Liquide Préparative est devenue une technique de choix pour la purification de mélanges plus ou moins complexes. Elle est particulièrement utilisée, y compris à l'échelle industrielle, dans le domaine pharmaceutique. Pourtant, certains problèmes de fond sont encore peu ou mal maîtrisés. Ainsi, si la structure des colonnes chromatographiques est bien connue, leur remplissage reste encore par bien des égards un art, nécessitant expérience et savoir faire. Par ailleurs, la solubilité de l'échantillon est bien souvent un facteur limitant sur le plan économique. Enfin, le couplage CPL-SM à l'échelle préparative souffre d'un manque de souplesse et offre peu de performances. Nous nous sommes attachés à apporter des solutions à ces différents problèmes en étudiant un mode de remplissage par sédimentation assistée non décrit dans la littérature. Nous proposons de pallier au manque de solubilité des échantillons en utilisant la préconcentration en tête de colonne et avons développé un nouveau mode de couplage ± actif α CPL-SM mieux adapté aux contraintes de la chromatographie préparative. L'ensemble de ces techniques peut permettre de mettre en œuvre la purification d'un mélange complexe sur un dispositif multicolonnes économiquement plus performant qu'une colonne unique de dimensions équivalentes.
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Werner, Erwan. "Analyse du métabolome par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse : application à la recherche de biomarqueurs indirects d'induction enzymatique". Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00703475.
Texto completo da fonteResumo:
Issue d'un partenariat de recherche entre le CEA et les laboratoires Servier, cette thèse avait pour objectif d'évaluer l'approche métabolomique par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS) pour l'identification de marqueurs indirects de l'induction dans les espèces de toxicologie. Le travail de thèse a débuté par l'optimisation de la méthode d'acquisition des empreintes métaboliques tant sur le plan analytique que dans le domaine du traitement des données brutes. Un outil reposant sur les matrices d'auto corrélation a alors été développé afin de s'affranchir d'une partie de la redondance du signal obtenu par spectrométrie de masse. Dans un troisième temps, les indices de Kendrick couplés à la sélectivité méthylène ont été appliqués à l'étude de composés biologiques en spectrométrie de masse haute résolution afin de proposer une méthode alternative de visualisation des données offrant une aide à l'identification des variables. Enfin, dans une dernière partie, les efforts se sont portés sur l'identification des composés endogènes modifiés au cours du protocole d'induction.
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Robin, Tiphaine. "Mise au point de méthodes de recherche large de xénobiotiques par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem". Thesis, Limoges, 2020. http://www.theses.fr/2020LIMO0052.
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Dans de nombreux contextes de toxicologie clinique, le screening ou criblage toxicologique est la première analyse effectuée chez un patient, lorsque la nature ou la présence même de médicaments ou de toxiques est totalement inconnue. Le plus souvent, le screening précède la mise en œuvre de méthodes quantitatives spécifiques. Les méthodes d’extractions peuvent être diverses mais celles-ci restent en général manuelles.Les objectifs de nos travaux étaient de développer des méthodes de screening qualitatives, quantitatives et automatisées avec un spectromètre de masse en tandem (modèle 8060 ; Shimadzu) et une préparateur automatisé d’échantillons (CLAM-2000 ; Shimadzu).Des bibliothèques regroupant les paramètres spectraux et chromatographiques d’environ 1 300 molécules d’intérêt en toxicologie ont été construites. Sur la base de ces bibliothèques plusieurs méthodes de screening faisant appel à différents modes d’acquisition spectrales ont été développées et évaluées (MTS, MRM, MRM-SpM,…). Différentes méthodes d’extraction ont été également mises en place : préparation manuelle basée sur l’utilisation des sels QuEChERS et approche entièrement automatisée grâce au CLAM-2000.Ses approches ont été appliquées à des échantillons réels et ont vu leurs performances comparées à celles de méthodes déjà accréditées selon les exigences de la norme ISO-15189. Elles pourraient notamment être positionnées comme des méthodes de première ligne pour des laboratoires travaillant 24h/24 7j/7, dans un contexte d’urgenceScreening methods for compounds of interest in clinical toxicology have been historically employed as first-line analysis to either confirm or exclude the hypothesis of drug overdose, or poisoning with a toxicant. After identification using a screening method, quantification using specific methods is often necessary in a second time to assess the severity of intoxication. This obviously increases the turnaround time and has an impact on patient care. With regards to the rapidity needed to report results in clinical toxicology, sample extraction may be a limiting step. There is no universal extraction procedure for human samples prior to screening analysis Our goal were to developed screening procedures using a programmable liquid handler (CLAM-2000; Shimadzu®) directly coupled to a liquid chromatography - tandem mass spectrometry (LC-MS 8060; Shimadzu®).Libraries with spectral and chromatographic parameters were built for about 1300 compounds selected based on their relevance to, and occurrence in, clinical toxicology. Using these libraries, screening methods were developed using different acquisition modes.Two different extraction procedures were developed: one using QuEChERS salts, another using the CLAM-2000.Each approach was validated according to the ISO 15189 requirements and was applied to real patient samples. The different screening methods yielded high confidence in compound detection and should be useful in core labs facing clinical toxicology situations where rapid and reliable results are needed
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Louvet-Helen, Céline. "Développement d'une méthode analytique de dosage des dioxines et composés apparentés par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse en tandem". Rennes 1, 2004. http://www.theses.fr/2004REN10123.
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Le travail réalisé présente une méthode alternative de dosage des dioxines et PCB "dioxin-like" basée sur la spectrométrie de masse basse résolution de type trappe d'ion avec l'utilisation de la technologie MSn (MS/MS et MS3). Le dosage de ces composés dans les cendres volantes, les mâchefers et les fumées issues de l'incinération des ordures ménagères a ensuite été réalisé. La mise au point de cette étape a porté sur la purification des extraits. L'utilisation de l'HPLC a été étudiée sur deux types de colonne aux propriétés très différentes : perméation de gel et silice greffée C18. Des cartouches d'adsorbants prêtes à l'emploi ont également été testées et comparées aux résultats obtenus avec la méthode traditionnelle sur colonnes ouvertes remplies d'adsorbants. Les performances des méthodes développées ont ensuite été contrôlées par comparaison avec la méthode de référence en CPG-HRMS, puis par l'analyse d'une cendre volante certifiée et la participation à un essai interlaboratoire.
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Venne, Philippe. "Quantification des ecdystéroïdes et acides rétinoïques chez la puce d’eau (D.magna) par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem". Mémoire, Université de Sherbrooke, 2015. http://hdl.handle.net/11143/8570.
Texto completo da fonteResumo:
L’introduction de composé d’origine anthropogénique (produits pharmaceutiques, et de soin personnel, retardateur de flammes, plastifiants, etc.) par les stations de traitement des eaux usées municipales ainsi que le devenir de ses composés dans l’environnement est une problématique d’intérêt mondial. L’élimination de ses contaminants d’intérêt émergent des eaux usées s’effectue au niveau des stations de traitement des eaux usées qui, pour la plupart, ne sont pas conçues pour réaliser cette tâche. En effet, celles-ci présentent des niveaux très variables d’efficacité de dégradation/transformation de la plupart des contaminants émergents ce qui laisse dans l’effluent de ces stations des concentrations habituellement inférieures à quelques microgrammes par litres d’au moins plusieurs centaines de contaminants. Quelques études ont démontrés que l’exposition chronique à ces concentrations environnementales de différents CIE donne lieu à des effets toxiques chez le méné à tête de boule (effondrement de la population) et le gammare (diminution de l’activité). Cependant, les méthodes classiques utilisées pour l’évaluation de la toxicité ne sont pas suffisamment sensibles pour déceler des effets sublétaux aux concentrations environnementales observées dans les milieux recevant ces rejets de station d’épuration. Bien entendu, il est impossible de concevoir un procédé unique capable d’éliminer la totalité des contaminants d’intérêt émergent (présents ou futurs) des eaux usées. Il est donc nécessaire de créer des approches capables de prioriser et de cibler les composés qui doivent être éliminés. Ce projet de recherche met de l’avant l’hypothèse qu’une étude métabolomique ciblé serait capable de répondre à cette problématique. L’approche utilisée vise à ajouter un ou plusieurs points de terminaison (fluctuation des métabolites) au test de toxicité aiguë des effluents déjà effectué sur la puce d’eau (Daphnia magna) en quantifiant des molécules essentielles à la survie de cette espèce (ecdystéroïdes et acides rétinoïques). Les daphnies sont des modèles idéaux pour ce type d’étude puisqu’il s’agit d’organismes essentiels du zooplancton dans le monde entier. L’espèce D. magna est retrouvée dans l’hémisphère nord dans les lacs, rivières et étangs temporaires, elle se reproduit rapidement, est facile à cultiver et se reproduit par parthénogénèse.
La quantification des ecdystéroïdes et acides rétinoïques aux concentrations observées chez la puce d’eau (picogramme par individus) est typiquement atteinte par dosage radio-immunologique (radioimmunoassay). Cependant, ce type de méthode ne permet pas d’identifier spécifiquement l’analyte ciblé, mais plutôt la somme de toutes molécules produisant une réaction immunologique similaire à celui-ci appelée "équivalent immunologique" et les résultats obtenus dépendent de l’anticorps, de la préparation effectuée et du lot de l’anticorps utilisé. Ce manque de sélectivité et variabilité des données obtenues pose problème pour la comparaison inter-laboratoires de résultats et a donc forcé le développement d’une nouvelle méthode analytique.
Le présent document décrit le développement et la validation d’une méthode de quantification par chromatographie liquide couplée à un spectromètre de masse permettant d’atteindre des limites de quantification allant de 210 à 380 pg mL-1 pour trois ecdystéroïdes (20-hydroxyecdysone, ecdysone et ponasterone A) et de 5 ng mL-1 pour la somme des isomères de l’acide rétinoïque.
La quantification de ces analytes aux faibles concentrations observées chez la puce d’eau a nécessité l’optimisation des paramètres instrumentaux, de la préparation d’échantillon et l’optimisation des conditions chromatographiques. Au final, la 20-hydroxyecdysone a pu être quantifiée à 19 ± 8 pg ind-1 pour les adultes (475 ± 200 pg mL-1, n=3) et à 3.6 ± 1.0 pg ind-1 pour les juvéniles (360 ± 10 pg mL-1, n=3), mais seulement détectée chez les néonates à 0.19 pg ind-1 (19 pg mL-1, n=3). L’ecdysone a également pu être détectée à 1.8 pg ind-1 chez les spécimens de taille adulte (180 pg mL-1, n=3).
Le projet suivant vise à augmenter les connaissances sur l’effet de contaminants d’intérêt émergents sur l’environnement et sur le métabolisme de la puce d’eau D.magna ainsi que fournir une méthode potentiellement capable d’évaluer le risque d’exposition à des concentrations environnementales et permettre de prioriser les composés à être évaluer.
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Lafaye, Alexandra. "Analyse du métabolome par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse : applications en toxicologie et dans la compréhension des systèmes biologiques". Paris 6, 2005. http://www.theses.fr/2005PA066424.
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Pons, Alexandre. "Utilisation des dérivés heptafluorobutyrates pour l'analyse qualitative et quantitative des constituants des glycoconjugués par chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse". Lille 1, 2004. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/2004/50376-2004-207-208.pdf.
Texto completo da fonteResumo:
La GC-MS, utilisée pour son potentiel résolutif, sa sensibilité et sa rapidité, impose souvent de dériver leséchantillons afin de les protéger de la thermolyse et de favoriser leur volatilité. Il existe déjà de nombreuses méthodologies permettant cela, mais aucune d'entre elles ne permet d'analyser efficacement l'ensemble des constituants des glycoconjugués. C'est pourquoi, nous avons développé une technique plus universelle de dérivation par des groupements heptafluorobutyrates, qui permet en trois étapes successives, sur un seul et même échantillon sans qu'il ne quitte son contenant, d'analyser qualitativement et quantitativement la quasitotalité des constituants des glycoconjugués. Ainsi, elle permet d'obtenir la composition d'un mélange en monosaccharides (pentoses, hexoses, désoxy-hexoses, hexosamines, acides hexuroniques, etc. ), en acides sialiques, en lipides (acides gras, bases sphingoïdes, monoalkylglycérols, plasmalogènes, etc. ) et en acides aminés. .
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Maheux, Maxim. "Stratégies analytiques par chromatographie liquide avec détection en spectrométrie de masse afin d'évaluer l'activité de neuf enzymes du cytochrome P450". Thesis, Université Laval, 2012. http://www.theses.ulaval.ca/2012/28806/28806.pdf.
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Pereira, Hélène. "Développement de l'approche métabolomique par couplage chromatographie liquide / spectrométrie de masse : application à la nutrition". Phd thesis, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00719399.
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L'étude du métabolome est un challenge analytique important, de part la grande diversité chimique des métabolites présents à des concentrations très variables dans les matrices biologiques. Ce travail présente une stratégie analytique mettant en oeuvre le couplage chromatographie liquide / spectrométrie de masse afin d'acquérir des profils métaboliques de fluides biologiques et d'identifier des biomarqueurs potentiels de dysfonctionnements métaboliques. Une attention particulière a été donnée à l'étude des sources de variablité analytique, depuis l'étape de préparations d'échantillons jusqu'au traitement des données. Un protocole optimisé a été proposé et appliqué à une intervention nutrionnelle (ANR METAPROFILE). L'identification a été basée sur l'utilisation des bases de données, ainsi que sur l'interprétation des informations spectrales (profils isotopiques et fragmentations MSn)
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Delporte, Cédric. "Etude des modifications de l'apolipoprotéine B-100 induites par la myéloperoxydase à l'aide de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse". Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2012. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/209655.
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Les maladies cardiovasculaires constituent la première cause de décès dans le monde et l’athérosclérose est le premier facteur causal de ces maladies. Parmi les multiples facteurs de risque athéromateux, un facteur est souvent décrit :la modification des lipoprotéines de basse densité (LDLs). Bien que le phénomène d’athérogénèse ne soit pas encore complètement résolu, il est actuellement admis que les LDLs natives passent la paroi vasculaire et s’accumulent au niveau sous-endothélial où elles sont oxydées et endocytées par les macrophages. Une théorie plus récente indique que les LDLs peuvent être également modifiées dans la circulation.Néanmoins, le processus par lequel ces lipoprotéines sont modifiées reste hautement controversé. Depuis quelques années, le modèle de modification des LDLs par la myéloperoxydase est apparu comme un modèle physiopathologique contrairement au modèle longuement utilisé de l’oxydation des LDLs par le cuivre. La myéloperoxydase est une enzyme présente dans les granules primaires des neutrophiles mais qui lors d’inflammations chroniques, comme dans l’athérosclérose, peut se retrouver dans le milieu extracellulaire et former un oxydant puissant qui attaque les protéines, les lipides ou les acides nucléiques. Les LDLs modifiées par la myéloperoxydase ne sont plus reconnues par le récepteur membranaire spécifique pour les LDLs. De plus, très peu d’études ont décrit à ce jour les modifications apportées par la myéloperoxydase aux LDLs.
Dans ce contexte, nous avons étudié la spécificité de la myéloperoxydase à modifier les LDLs. Dans ce modèle, la partie protéique de la lipoprotéine est majoritairement touchée. C’est pourquoi nous avons développé et optimisé des méthodes d’analyse par spectrométrie de masse de l’apolipoprotéine B-100, la seule protéine de la LDL. De plus, l’activité de la myéloperoxydase à la surface des LDLs a également été investiguée.
Les résultats de ce travail montrent que la myéloperoxydase s’attaque de manière spécifique aux LDLs et que le modèle chimique utilisant de l’acide hypochloreux pour mimer l’action de la myéloperoxydase n’est pas parfait. Enfin, nous avons également observé des changements dans l’activité enzymatique lorsque la myéloperoxydase est adsorbée à la surface des LDLs.
Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques
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Larose, Jessica. "Analyse des isomères de F2-isoprostanes par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse dans la circulation maternelle en fin de grossesse". Master's thesis, Université Laval, 2013. http://hdl.handle.net/20.500.11794/25559.
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Tableau d’honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2013-2014.Un stress oxydatif survient lorsqu’il y a surproduction de dérivés actifs de l’oxygène par rapport aux défenses antioxydantes. Ce déséquilibre est associé, entre autres, à la prééclampsie, une pathologie de la grossesse. Les F2-isoprostanes regroupent soixante-quatre isomères issus de la peroxydation de l’acide arachidonique. Ceux-ci sont reconnus comme étant les biomarqueurs les plus fiables du stress oxydatif in vivo. Une méthode d’analyse par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem pour le dosage de sept isomères de F2-isoprostanes dans des échantillons de plasma, de sang et de membranes érythrocytaires a été mise au point et validée. Les F2-isoprostanes dans le plasma ont été corrélés positivement avec plusieurs acides gras trans plasmatiques au troisième trimestre de la grossesse. Contre toute attente, les F2-isoprostanes du plasma, du sang et des membranes érythrocytaires sont moins abondants en prééclampsie par rapport aux contrôles en fin de grossesse.
An oxidative stress is defined as an imbalance between the production of reactive oxygen species and antioxidant defenses of the organism. This imbalance has been associated with preeclampsia, a pathology of the mid-to-late pregnancy. Peroxidation of arachidonic acid generates sixty-four isomers of F2-isoprostanes. The latter are recognized as the most reliable biomarkers of oxidative stress in vivo. A method using liquid chromatography tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) for the determination of seven isomers of F2-isoprostanes in plasma samples, whole blood and erythrocyte membranes has been developed and validated. The F2-isoprostanes correlated positively with several trans fatty acids in plasma at end of the pregnancy. Unexpectedly, F2-isoprostanes were less abundant in preeclampsia than in control pregnancies at the third trimester.
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Wiest, Laure. "Méthodologies analytiques basées sur la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse pour la quantification multi-familles de tensioactifs dans les rivières". Electronic Thesis or Diss., Lyon, 2021. http://www.theses.fr/2021LYSE1138.
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Le nombre de nouveaux produits chimiques sur le marché augmente chaque année. De surcroit, ils sont de plus en plus complexes et les formulations contiennent des mélanges qui sont finalement disséminés dans divers compartiments de l’environnement. Parmi ces micropolluants, les tensioactifs présentent quelques particularités. Tout d’abord, les tensioactifs sont des mélanges complexes d’homologues et isomères dont la composition dépend des matières premières et des procédés de synthèse utilisés. Deuxièmement, certains, comme les alkylbenzène sulfonate linéaires (LAS) et les triethanolamine esterquats (TEAQ), sont utilisés en très grandes quantités, ce qui peut faire craindre une « pseudo-persistance » dans les milieux récepteurs. Enfin, les domaines d’application des tensioactifs sont extrêmement variés, allant du domestique à l’industriel, en passant par l’agricole et l’hospitalier, ce qui suggère un grand nombre de sources de transfert vers l’environnement. Les données concernant leur occurrence sont très hétérogènes selon les familles, et certains types de tensioactifs n’ont jamais été recherchés dans les rivières jusqu’à présent. L’objectif de cette thèse est donc de développer des méthodologies analytiques sensibles et fiables qui permettent de combler ce manque de connaissance concernant l’occurrence des tensioactifs dans l’environnement. Afin d’obtenir une sensibilité suffisante, une méthode de chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS) a tout d’abord été optimisée. Une contamination des blancs instrumentaux, en particulier par les tensioactifs anioniques, à des concentrations comprises entre 0,1 µg/L et 3 µg/L a été observée. Les limites de quantification (LQ) étant encore trop élevées par rapport aux PNEC, une étape de préconcentration par extraction sur phase solide a été mise au point pour l’analyse dans les eaux de rivière. Concernant l’analyse des sédiments, une extraction assistée par ultrasons a été optimisée puis validée. Avec des LQ entre 0,015 et 0,485 µg/L pour les eaux et entre 6,4 et 158 µg/kg pour les sédiments, les performances analytiques obtenues sont compatibles avec l’analyse de traces. L’application de ces méthodologies à des eaux et sédiments de rivière prélevés en France a montré une forte présence des tensioactifs dans ces milieux. En particulier, les LAS présentent à la fois des fréquences de quantification et des rapports concentrations moyennes sur PNEC élevés, et représentent donc un risque important pour les écosystèmesThe number of chemicals on the market is increasing every year. Moreover, they are more and more complex and the formulations contain mixtures that are finally disseminated in various compartments of the environment. Among these micropollutants, surfactants present some particularities. First, surfactants are complex mixtures of homologues and isomers whose composition depends on the raw materials and the synthesis processes used. Secondly, some, such as linear alkylbenzene sulfonates (LAS) and triethanolamine esterquats (TEAQ), are used in very large quantities, which may induce "pseudo-persistence" in the receiving environments. Finally, the fields of application of surfactants are extremely varied, ranging from domestic to industrial, agricultural and hospital, which suggests a large number of sources of transfer to the environment. The data concerning their occurrence are very heterogeneous according to the families, and some types of surfactants have never been looked for in rivers until now. The objective of this thesis was therefore to develop sensitive and reliable analytical methodologies to fill this knowledge gap concerning the occurrence of surfactants in the environment. In order to obtain sufficient sensitivity, a liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was first optimized. Contamination of instrumental blanks, in particular by anionic surfactants, at concentrations between 0.1 µg/L and 3 µg/L was observed. As the limits of quantification (LOQ) were still too high compared to the PNEC, a pre-concentration step by solid phase extraction was developed for the analysis in river water. For sediment analysis, an ultrasound-assisted extraction was optimized and validated. With LOQs between 0.015 and 0.485 µg/L for water and between 6.4 and 158 µg/kg for sediment, the analytical performances obtained are compatible with trace analysis. The application of these methodologies to river waters and sediments sampled in France showed a high occurrence of surfactants in these media. In particular, LAS have both high quantification frequencies and high mean concentration to PNEC ratios, and therefore represent a significant risk to ecosystems
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Rochut, Nadège. "Analyse des somatotropines endogènes et recombinantes dans l'espèce bovine par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem : application au contrôle de leur utilisation illégale en élevage". Nantes, 2002. http://www.theses.fr/2002NANT2005.
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Dans le cadre du contrôle de l'usage illégal des hormones de croissance en élevage, le laboratoire national de référence chargé du contrôle des promoteurs de croissance en élevage (LABERCA, ENV Nantes) a décidé de consacrer l'un de ses axes de recherche à l'étude des hormones protéiques : les somatotropines. La spectrométrie de masse a été utilisée pour déterminer le caractère exogène des somatotropines recombinantes. Le principe repose sur la différence de masse entre la somatotropine bovine endogène et ses produits recombinants (substitution d'une alanine par une méthionine et addition éventuelle de 0 à 8 acides aminés du côté NH2 terminal de la protéine). La mise au point d'une méthode de purification spécifique des hormones de croissance a été réalisée et s'est appuyée sur une chromatographie d'immunoaffinité (anticorps polyclonaux)Within the control of growth promoters illegally used in animal production, the french reference laboratory (LABERCA) has decided to direct one of its research topics towards the study of protein hormones : the somatropins. Mass spectrometry was used to determine exogenous character of recombinant somatotropins
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Dubois, Mathieu. "Développement de techniques analytiques pour l'évaluation des protéines thérapeutiques et des biomarqueurs par spectrométrie de masse". Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00341749.
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Si la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse est un outil de bioanalyse largement utilisé pour la quantification des molécules de faible poids moléculaire dans les fluides biologiques, il n'en est pas de même pour les macromolécules. Au cours de ce travail, nous avons exploré les possibilités et les difficultés d'une méthode d'extraction par immunoaffinité couplée de la spectrométrie de masse pour la quantification des protéines recombinantes et des biomarqueurs. Cette stratégie a tout d'abord été appliquée à une petite protéine thérapeutique, Epi-hNE4, un inhibiteur de l'élastase humaine et pour lequel nous avons obtenu une sensibilité de 80 pM. Cette méthode a également été appliquée à un anticorps thérapeutique utilisé pour le traitement du cancer colorectal, Cetuximab, pour lequel une sensibilité de130 pM a été obtenue grâce à une extraction par l'EGFR, sa cible biologique. Ce dernier développement offre des perspectives pour évaluer l'immunogénecité des protéines thérapeutiques. La méthode de référence est la technique ELISA, que nous avons appliquée à la détection d'anticorps anti-Epi-hNE4, mais les difficultés rencontrées suggèrent que la spectrométrie de masse serait une alternative interessante. Enfin, une dernière application de la spectrométrie de masse pour la quantification multiplexée des biomarqueurs a été menée sur les apelines, une famille de peptides de 12 à 36 acides aminés jouant un rôle crucial dans le système cardiovasculaire. Une limite de détection de l'ordre de 25 pM a été atteinte, et de façon interessante, cette méthode nous a permis de conclure à l'absence des formes supposées circulantes.
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Delpuech, Aude. "Etude de la détection de molécules organiques duales par microextraction en phase solide et chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse". Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066068.
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Face aux risques terroristes, il convient de développer une méthode de détection d’indices d’activités proliférantes (chimique et nucléaire) exploitable sur site. Cette thèse avait pour objectif d’optimiser l’échantillonnage par la technique de MicroExtraction en Phase Solide (fibre SPME) de seize molécules duales présentes à l’état de trace dans l’air. Cet échantillonnage repose sur l’établissement d’un équilibre thermodynamique biphasique (air/polymère) des composés cibles. La compréhension des mécanismes diffusionnels a nécessité des études mathématique et par simulation numérique qui ont infirmé les équations proposées par Pawliszyn. Nous proposons dans cette thèse, une nouvelle équation d’estimation du temps d’équilibre d’un composé pour une configuration de fibre donnée. Des cinétiques d’extraction ont été étudiées expérimentalement, ainsi que des estimations de constantes thermodynamiques, grâce à un générateur d’air étalon. De plus, une optimisation de l’analyse par chromatographie en phase gazeuse et spectrométrie de masse permet de détecter leur présence à de faibles teneurs dans l’air.
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Favetta, Patrick. "Étude du métabolisme du propofol chez l'homme : intérêt des systèmes de couplage chromatographie-spectrométrie de masse". Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO1T057.
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Ducruix, Céline. "Analyse du métabolome par chromatographie couplée à la spectrométrie de masse : application à la recherche de biomarqueurs et à la compréhension des systèmes biologiques". Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066255.
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Ce travail a pour objectif de développer des approches métabolomiques basées sur l’utilisation de la spectrométrie de masse afin de les appliquer à des thématiques biologiques. Pour cela, des méthodes d’analyse, de traitement des données, ainsi que d’analyses statistiques multivariées ont ainsi été mises au point. Cette approche a été appliquée à l’étude des effets du cadmium chez la plante Arabidopsis thaliana. Des peptides chélatant ce métal qui n’avaient jamais été décrits dans cette espèce ont ainsi été caractérisés. La régulation de la voie métabolique impliquée dans la synthèse de ces peptides a également été étudiée en détails. L’analyse métabolomique a été appliquée à la recherche de biomarqueurs de fibrose pulmonaire sur des échantillons urinaires provenant de modèles murins. Enfin, des études ont également été menée afin d’affiner nos stratégies d’identification des métabolites d’intérêt biologiques mis en évidence par les analyses statistiques multivariées.
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Antignac, Jean-Philippe. "Dosage et étude du métabolisme des corticostéroi͏̈des dans l'espèce bovine par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem : application au contrôle de leur utilisation illégale en élevage". Nantes, 2001. http://www.theses.fr/2001NANT2078.
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Plus d'un demi-siècle après la découverte des hormones corticostéroi͏̈des naturelles et de leurs propriétés anti-inflammatoires, plusieurs dizaines de dérivés synthétiques de ces molécules sont aujourd'hui disponibles. Un grand nombre est utilisé couramment en médecine humaine et vétérinaire, dans un cadre thérapeutique légal mais réglementé. Parallèlement, ces composés sont susceptibles d'être employés en tant que promoteurs de croissance en élevage, et cette utilisation est illégale en Europe. Une méthode de contrôle de l'utilisation des corticostérod͏̈es a par conséquent été développée. Dans cette optique analytique, la présente étude a permis de proposer une méthode basée sur le couplage LC-MS/MS pour l'analyse des résidus de corticostéroi͏̈des dans les échantillons d'urine, de tissus et de poilsFifty years after the discovery of natural corticosteroid hormones and their anti-inflammatory properties, many synthetic derivatives of these molecules are today available. Most of them are widely used in human and veterinary medicines, in a legal but regulated scope. These compounds are also susceptible to be used as growth promoters, this utilisation remaining illegal in Europe. Consequently, an analytical method dedicated to the control of the utilisation of corticosteroids in cattle has been developed. In this analytical way, the present study permitted to propose a method based on LC-MS/MS measurement of corticosteroid residues in urine, tissue and hair samples
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Hoja, Harald. "Application du couplage chromatographie liquide-spectrométrie de masse à la toxicologie analytique : intérêt des interfaces à pression atmosphérique". Limoges, 1997. http://www.theses.fr/1997LIMO302B.
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Person, Marine de. "Analyse par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse d'acides aminés et de petits peptides non dérivés dans des matrices agroalimentaires : développement et validation de méthodes". Orléans, 2005. http://www.theses.fr/2005ORLE2035.
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L'analyse qualitative et quantitative des acides aminés et des petits peptides dans les matrices complexes représente un enjeu indéniable dans de nombreux domaines d'application (agroalimentaire, pharmaceutique, exobiologie,. . . ). Les méthodes d'analyse que nous proposons dans ce mémoire font appel à la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse sans étape de dérivation. La première partie du mémoire est consacrée à l'identification et au dosage de petits peptides dans des vins de Champagne. La méthodologie d'analyse est basée sur le couplage de la chromatographie de paire d'ions en milieu acide à la spectrométrie de masse à source electrospray en mode d'ionisation positif. Elle a été optimisée puis validée selon les critères classiques de validation. La seconde partie du mémoire a trait au développement de deux nouvelles méthodes séparatives complémentaires, compatibles avec un mode d'ionisation négatif. La première fait appel à la chromatographie de paire d'ions en milieu alcalin avec des agents d'appariement d'ions volatils (n-alkylammonium) sur silice greffée octadécyle et sur carbone graphitique poreux. La seconde utilise la chromatographie d'interactions hydrophiles sur une phase stationnaire polymérique de type amino. Une validation de ces méthodes a été développée. Enfin, une étude comparative des performances de deux sources d'ionisation de type electrospray associées à des interfaces différentes a été réalisée dans le cadre de l'analyse des acides aminés non dérivés.
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Méjean, Marie. "Développement d’un couplage de chromatographie en phase supercritique et spectrométrie de masse pour l’analyse de substances naturelles". Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA114829/document.
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L’objectif de ce projet doctoral a été de coupler la chromatographie en phase supercritique (SFC) avec un spectromètre de masse haute résolution pour l’analyse de substances naturelles apolaires. La SFC est une technique dite « verte » contrairement à la chromatographie liquide en phase normale (NPLC), très consommatrice de solvants organiques toxiques pour l’environnement, puisque la phase mobile est principalement constituée de CO2. Le CO2 ayant une faible viscosité, cela implique une diffusivité, des débits élevés et des temps d’analyse courts. Notre attention a été focalisée sur des molécules apolaires : les lipides. Le but était de mettre au point des dosages dans des matrices alimentaires et biologiques et de débuter une approche lipidomique d’étude de la maladie de Parkinson. La première partie a été dédiée au développement du système SFC avec une détection UV, prêté par le constructeur Agilent Technologies. La première étude s’est portée sur 6 composés de la famille des vitamines A. Une phase d’optimisation a été réalisée afin d’obtenir une séparation satisfaisante des composés, en testant différents paramètres chromatographiques comme le type de phase stationnaire ou encore la composition de la phase mobile, afin d’obtenir une résolution optimale. Ensuite, des études de linéarité et de répétabilité ont été réalisées et des limites de détection et de quantification ont été déterminées afin d’obtenir une méthode fiable et robuste. Une deuxième partie a concerné la mise en place du couplage entre la SFC et un spectromètre de masse de type quadripôle-temps de vol (Q-TOF), afin d’améliorer la spécificité et la sensibilité des analyses. Différentes sources d’ionisation ont été utilisées : ESI, APCI et APPI. Chacune des sources présente des modes d’ionisation différents, qui permettent de pouvoir balayer une large gamme de polarité des analytes. Nous avons choisi 8 dérivés de la vitamine E, composés apolaires pour lesquels la SFC paraît être la technique d’analyse idéale. La séparation de ces composés a été optimisée de façon à obtenir une bonne résolution chromatographique et un temps d’analyse minimal. L’ionisation des composés est réalisée avec les 3 sources disponibles en faisant varier les paramètres de sources ou encore le solvant « make-up », de façon à obtenir une sensibilité optimale. La source APPI a été finalement choisie après une étude sur les performances de la méthode. Cette source présente une bonne répétabilité, linéarité et des limites de détection de l’ordre de celles retrouvées dans la littérature par HPLC-MS. Nous avons ensuite réalisé la quantification des ces composés dans 2 types de matrices alimentaire et biologique : l’huile de soja et le plasma de rat. Une troisième partie a été débutée sur le profilage de lipides à polarités variées par SFC-MS. Cette technique se révèle idéale de par la faible polarité de ces composés et leur absence d’absorbance dans le domaine UV. En effet, l’intégrité des lipides peut être altérée suite aux dommages causés par les radicaux libres, qui sont potentiellement impliqués dans de nombreuses maladies neurodégénératives. Il parait primordial de développer des outils analytiques présentant une haute sensibilité et résolution et la possibilité d’accéder aux informations structurales. La source d’ionisation ESI nous a permis de détecter 12 lipides sur les 20 sous-classes analysées en mode positif et 8 lipides en mode négatif. Une application a été réalisée sur un échantillon de plasma humain. Il serait intéressant à l’avenir d’effectuer cette étude en utilisant la source APPI, source propice à l’analyse structurale de lipides et présentant une bonne sensibilité et répétabilité. Ce couplage SFC-MS, présentant une bonne sensibilité et répétabilité, sera par la suite étendu à l’analyse de lipides dans diverses matrices biologiques et pourra à l’avenir être appliqué à l’étude de nouveaux biomarqueurs et au screening rapide d’un grand nombre d’échantillonsThe aim of this PhD project was to couple supercritical fluid chromatography (SFC) with a high resolution mass spectrometer for apolar natural compounds analysis. Because mobile phase is principally constituted of CO2, SFC is called “green technic” contrary to normal phase liquid chromatography (NPLC), which uses lot of organic solvents toxic for environment. The CO2 presents a low viscosity, in this way high diffusivity and flow rate, and lower analysis times are obtained. Our work was focused on apolar molecules: the lipids. The aim was to quantify molecules in alimentary and biological matrices and to a lipidomic approach to study Parkinson disease. The first part was to develop the system SFC with a UV detection on a system on loan by Agilent Technologies. This first study was carried out on 6 vitamin A compounds. An optimization of chromatographic parameters has been realized in order to obtain a good separation of the compounds. Then, linearity, repeatability, detection and quantification limits have been determined in order to have a reliable and robust method. A second part concerned the coupling of SFC and a quadrupole time-of-flight mass spectrometer (Q-TOF), in order to improve specificity and sensitivity of analysis. Different ionization sources have been tested: ESI, APCI and APPI. Each ion source presents different ionization mode, which permits to analyze a wide range of polarities of compounds. We have chosen 8 vitamin E derivatives, which are apolar compounds for which SFC seems to be well suited. Separation compounds have been optimized in order to have a good chromatographic resolution and a short analysis time. This compounds ionization is realized with the 3 sources, varying ionization parameters and make-up solvent, to have an optimal sensitivity. The APPI source has been chosen after a performance evaluation method. This source presents a good repeatability, linearity and detection limit in the same order of magnitude than those found in the literature by HPLC-MS. Then we have quantified these compounds in alimentary and biological matrices: a soya oil and plasma rat. A third study has been started on lipid profiling with various polarities by SFC-MS. This technic is well suited because of the low polarity of this molecules and their lack of absorbance in the UV range. The integrity of lipids can be altered with damages caused by free radicals, and are potentially involved in neurodegenerative diseases. It is essential to develop analytical systems with a high sensitivity and resolution and the possibility to access to structural information. The ESI source permits to detect 12 lipids on the 20 sub-classes analyzed in positive ion mode and 8 lipids in negative mode. An application has been realized on human plasma. In the future, it will be interesting to analyze these lipids with the APPI source, which is good choice for structural analysis of lipids, with good sensitivity and repeatability. Studies with this SFC-MS system, presenting good sensitivity and repeatability, will be extended to lipid analysis in biological matrices and could be applied to new biomarkers study and for fast screening of a large number of samples
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Lamrini, El-Uahhabi Rachid. "Étude d'un modèle cellulaire et de deux modèles acellulaires de production d'espèces oxygénées réactives : intérêt de la mesure du rapport isotopique 13C-12C par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse isotopique". Lyon 1, 1996. http://www.theses.fr/1996LYO1T186.
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Machon, Christelle. "Quantification des pools de nucléotides à l'aide de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem : applications à l'étude de la progression tumorale". Thesis, Lyon 1, 2015. http://www.theses.fr/2015LYO10217/document.
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Les nucléotides, terme regroupant les nucléosides monophosphate, diphosphate et triphosphate, sont impliqués dans de nombreux processus cellulaires. Ils représentent les éléments constitutifs des acides nucléiques, fournissent de l'énergie à des réactions métaboliques, jouent le rôle de transporteurs et seconds messagers. L'exploration des pools nucléotidiques apparaît indispensable afin de connaître leur rôle précis dans des situations physiologiques ou pathologiques. Nous avons développé une méthode de dosage des nucléotides endogènes (formes mono-, di- et triphosphate) par extraction en ligne sur colonne WAX couplée à la LC-MS/MS. La séparation analytique est réalisée sur colonne Hypercarb, sans agent de paire d'ions dans la phase mobile. Grâce à l'utilisation d'un triple quadripôle et une ionisation en mode positif, les nucléotides endogènes sont identifiés sans équivoque, y compris ceux possédant la même masse molaire. L'extraction et la séparation des nucléotides sont réalisées en 20 min. L'ensemble de la méthode, en comptant la ré- équilibration des colonnes, dure 37 min. La méthode de dosage a été validée pour les formes mono- et triphosphate et est applicable à des séries d'une vingtaine d'échantillons biologiques. D'autre part, dans une étude pré-analytique basée sur les plans d'expériences, nous avons comparé les conditions de préparation d'échantillons en vue du dosage de nucléotides intracellulaires dans 4 lignées cellulaires : 2 adhérentes (Messa et NCI-H292) et 2 en suspension (RL et L1210). Nous avons montré que les conditions pré-analytiques optimales dépendent de la lignée cellulaire soulignant ainsi l'importance de cette phase dans l'analyse des nucléotides. Enfin, l'expérience et les connaissances acquises lors du développement de la méthode de dosage des nucléotides ainsi que la large palette de molécules analysables avec cette méthode (nucléosides, nucléotides sucrés, autres métabolites), nous ont permis de développer des collaborations dans le domaine de la cancérologie avec différentes équipes de recherche. Par exemple, nous avons étudié l'implication des pools nucléotidiques dans le stress réplicatif induit par le stress oxydant et dans la reprogrammation cellulaire observée dans les cellules cancéreuses. Ainsi, les informations apportées par notre approche analytique, complémentaires des autres approches utilisées, ont montré l'implication des pools nucléotidiques dans la tumorigénèse. En conclusion, ce travail a permis de développer une technique analytique et de mettre en place une méthode de travail pour le dosage des nucléotides endogènes dans différents milieux biologiquesNucleotides, term including nucleoside mono-, di- and triphosphates, are endogenous compounds playing various roles in biology. They are components of nucleic acids, provide energy to metabolic reactions and act as carriers or second messenger. The study of endogenous nucleotides has become of great interest in physiological and pathological conditions. We developed a method for the quantification of endogenous nucleotides, using an on-line extraction on a WAX column coupled with LC-MS/MS. Analytical separation is performed on a Hypercarb column, without ion pairing agent in the mobile phase. The use of a triple quadrupole mass spectrometer following positive mode ionization allows the unambiguous identification of nucleotides presenting the same mass. Extraction and separation of nucleotides are achieved within 20 min and the method including re-equilibration of the two columns within 37 min. The method was validated for the quantification of nucleoside mono- and triphosphates, and could be applied to series of more than twenty biological samples. Secondly, in a study based on design of experiments, pre-analytical parameters influencing results of intracellular nucleotides were compared in four cell lines. We demonstrated that optimal pre-analytical parameters depend on cell lines. This clearly highlights the importance of pre- analytical conditions for the quantification of intracellular nucleotides to be as representative as possible of the real levels in cells. Then, thanks to experience acquired during the development and the validation of the analytical method, scientific collaborations have been established with several cancer research teams. For example, implication of nucleotide metabolism in replicative stress induced by oxidative stress or in the metabolic reprogramming in cancer cells was studied. Results obtained by our analytical approach were complementary to those obtained by other techniques. To conclude, our work consisted on the study of the entire workflow for the analysis of endogenous nucleotides in various biological samples
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Roux, Aurélie. "ANALYSE DU METABOLOME URINAIRE HUMAIN PAR CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE COUPLEE A LA SPECTROMETRIE DE MASSE A HAUTE RESOLUTION". Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00641529.
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L'objectif de ce travail de thèse est de développer une base de données spectrale pour faciliter l'annotation et l'interprétation biologique des jeux de données d'analyse métabolomique obtenus en utilisant la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. Deux approches ont été utilisées : (i) l'identification par comparaison aux spectres de masse de composés de références et (ii) l'identification directement à partir des données biologiques. Pour la première approche une chiomiothèque de métabolite a été constituée et analysée. L'identification à partir de données biologiques a été réalisée sur une cohorte de volontaires de 227 individus travaillant au CEA. 244 métabolites ont ainsi été identifiés dans les urines humaines, donc 78 qui n'avaient jamais été décrits comme faisant parti du métabolome urinaire.139 métabolites ont également était caractérisés sur la base de leur masse précise mais sans identification formelle. Ces 383 métabolites représentent environ 1000 ions dans chacun des modes d'ionisation. Les variations physiologiques au sein de la cohorte, en fonction de l'âge, du poids et du genre, de ces différents métabolites ont été étudiées afin de construire une base de données relationnelle. Enfin, le métabolome urinaire pouvant être affecté par les conditions de prélèvement des échantillons d'urines, nous avons réalisé des études de stabilité dans les conditions de prélèvement des métabolites précédemment caractérisés. Ces études nous ont permis de proposer des recommandations en termes de conditions de prélèvement et de stockage à court terme des urines et de mesurer l'impact de la contamination bactérienne sur les concentrations de différents métabolites urinaires.
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Gnansounou, Senankpon Martial. "Etude des activités anti-inflammatoire, antioxydante et screening par chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse d’extraits éthanoliques de trois fabacées du Bénin : isolement de molécules bioactives". Thesis, Aix-Marseille, 2019. http://www.theses.fr/2019AIXM0603.
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Face à la résurgence de pathologies infectieuses, notre étude a porté sur le potentiel thérapeutique de Dialium guineense, Parkia biglobosa et Tamarindus indica afin de rechercher des molécules bioactives pouvant contrer l’antibiorésistance ou ses corolaires. L’état de l’art des molécules bioactives des trois plantes a montré que de nombreuses familles de composés sont identifiées dans différents organes aériens. Toutefois le lien avec les activités biologiques reste non élucidé. Ensuite, nous avons évalué quelques activités biologiques des extraits éthanoliques ou hydro-éthanoliques des feuilles, fruits et écorces. Avec de bons taux de viabilité cellulaires, les extraits de D. guineense (écore) ainsi que ceux de P. biglobosa (feuilles) et T. indica (écorce) ont des ratios d’activités antiinflammatoires de 458,2 ; 161 et 174,6 respectivement. Ces valeurs sont supérieures à celle de la dexaméthasone utilisée comme témoin. Le test KRL a montré une activité antiradicalaire dose dépendante dans la gamme de 0 à 20mg/L. In vitro, 1g de chacun des extraits susmentionnés présente une capacité antioxydante respectivement équivalente à 1585 ; 2092 ; 5071 et 2246 mg de Trolox. Les extraits ont par la suite été analysés par GC-MS révélant pour la première fois la présence de lupéol et de sitostérol dans l’écorce de D. guineense. Enfin, l’étude nutritionnelle des trois fruits révèle, à travers les fortes teneurs en nutriments (80% de sucre pour D. guineense), leur possible contribution à la lutte contre la malnutrition au Bénin et la nécessité d’œuvrer à leur conservation.Mots-clés : Pathologies infectieuses, antibiorésistance, anti-inflammatoire, antioxydant, molécules bioactivesIn a context of infectious diseases resurgence, our study focused on therapeutic potential of Dialium guineense, Parkia biglobosa and Tamarindus indica in order to search for bioactive molecules that can counter antibiotic resistance or its corollaries. The state of the art of on bioactive molecules from the three plants has shown that many families of compounds are identified in different aerial organs. However, the link with biological activities remains unclear. Next, we evaluated some biological activities of ethanolic or hydroethanolic extracts of leaves, fruits and bark. With good cell viability levels, extracts of D. guineense (bark) as well as those of P. biglobosa (leaves) and T. indica (bark) have anti-inflammatory activity ratios of 458.2; 161 and 174.6 respectively. These values are higher than that of dexamethasone used as positive control. The KRL test showed dose-dependent antiradical activity in the range of 0 to 20mg / L. In vitro, 1 g of each of the abovementioned extracts has an antioxidant capacity respectively equivalent to 1585 ; 2092 ; 5071 and 2246 mg of Trolox. The extracts were then analyzed by GC-MS revealing for the first time the presence of lupeol and sitosterol in the bark of D. guineense. Finally, the nutritional study of the three fruits reveals, through the high levels of nutrients (80% sugar for D. guineense), their possible contribution to fight malnutrition in Benin and the need of their conservation. Keywords : Infectious diseases, antimicrobial resistance, anti-inflammatory, antioxidant, bioactive molecules
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Delmotte, Nathanaël. "Développement de méthodes chromatographiques liquides multidimensionnelles couplées à la spectrométrie de masse, préparation et analyse d'échantillons biologiques complexes". Phd thesis, Université Louis Pasteur - Strasbourg I, 2007. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00193714.
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Des immunoadsorbeurs ont été développés à partir de disques CIM monolithiques pour l'analyse de biomarqueurs impliqués dans des maladies cardio-vasculaires. Les colonnes développées ont permis d'isoler sélectivement la myoglobine et le NT-proBNP du sérum humain. Les colonnes anti-NT-proBNP ont permis l'isolation quantitative du NT-proBNP (R2=0,998) à des concentrations jusqu'à 750 amol/μL de sérum.Six matériaux à accès restreints ont été évalués en fonction de leur aptitude à exclure l'hémoglobine d'hémolysats sanguins. Des injections à différents pH ont montré que la rétention de l'hémoglobine est drastiquement restreinte à pH 10,7. En raison d'une bonne stabilité à pH basique, la colonne polymérique Biotrap 500 MS RAM a été retenue pour l'extraction d'antibiotiques d'hémolysats sanguins. Des extractions quantitatives d'analytes à faibles concentrations (200 pg/μL) ont été réalisées sans effet mémoire d'hémoglobine sur la colonne.
Un nouveau système 2D-HPLC-ESI-MS/MS pour l'analyse protéomique a été développé. Le système est composé d'une séparation par RP-HPLC à pH 10,0, suivie d'une séparation par IP-RP-HPLC à pH 2,1. Ce nouveau système a été comparé à un système conventionnel SCX x IP-RP-HPLC. L'orthogonalité des méthodes de séparation est plus élevée dans l'approche SCX x IP-RP-HPLC que dans le schéma RP x IP-RP-HPLC. Cependant, en raison d'une meilleure distribution des peptides et d'une meilleure efficacité de séparation, le système RP x IP-RP-HPLC permet d'identifier significativement plus de peptides. Les deux approches sont complémentaires et une combinaison des deux systèmes permet d'identifier plus de peptides que des analyses répétées par un système unique.
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Delalande, François. "Application du couplage chromatographie liquide-spectrométrie de masse à l'étude de la biodisponibilité de peptides issus de produits laitiers et à la protéomique". Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2003. http://www.theses.fr/2003STR13068.
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Le couplage chromatographie liquide-spectrométrie de masse est devenu une méthode de choix pour la quantification de molécules dans une matrice, la détermination des séquences primaires de peptides et de protéines ainsi que la mise en évidence de modifications post-traductionnelles. Les progrès réalisés tant au niveau de la LC qu'au niveau de la spectrométrie de masse ont aussi révolutionné la biologie en permettant une identification sur des quantités femtomolaires de protéines séparées par électrophorèse bidimensionelle dans le cadre d'études protéomiques et la détection toujours plus sensible de molécules d'intérêt par exemple dans les fluides biologiques (plasma, urine, LCR). Mon travail de thèse a porté sur le choix et la mise au point de stratégies instrumentales et analytiques en optimisant de façon poussée tous les paramètres du couplage LC-MS et LC-MS-MS. La première partie concerne la mise au point expérimentale de techniques de microLC-MS et microLC-MS-MS pour la caractérisation de composés peptidiques et la mesure de leur biodisponibilité. La seconde partie porte sur le développement, l'optimisation et l'utilisation de la nano-LC-MS pour l'étude protéomique avec une première étude protéomique visant à caractériser les interactions entre le riz et le rice yellow mottle virus. Ce travail a permis par les techniques MALDI-MS et LC-MS-MS, de mettre en évidence les protéines du riz recrutées par les protéines de capside du virus et l'identification des protéines différentiellement exprimées selon la variété de riz (résistant/sensible). La seconde étude protéomique concerne la caractérisation de marqueurs d'expressions liés à l'anomalie "Mantled" chez le palmier à huile faisant appel au séquençage de novo. Pour conclure, nous avons utilisé les multiples potentiels du couplage microLC-MS et nanoLC-MS-MS pour répondre à différents problèmes biologiques. Ces réponses n'ont pu être obtenues que grâce à la mise au point de méthodologie particulièreThe LC-MS coupling has arisen as a method of choice for the quantification of molecules in a matrix, the determination of the primary sequences of peptides and proteins and for the establishment of post-traductional modifications. The progress realized both at the LC and at the MS level have revolutionized the biology allowing the identification of femtomolar amounts of proteins separated by 2-D electrophoresis in the context of proteomic studies and the detection of molecules of interest with always more sensibility for example in biological fluids (plasma, urine, cerebro-spinal liquid)My PhD work consisted in the choice and the perfecting of instrumental and analytical strategies by a deep optimisation of alls the parameters of the LC-MS and LC-MS-MS coupling. The first part relates to the experimental perfecting of the microLC-MS(-MS) technics for the characterization of peptidic compounds and the measurement of their biodisponibility. The second part focuses on the development, the optimisation and the use of the nanoLC-MS-MS for proteomic studies with a first proteomic study aimed at characterizing the interactions between rice and the rice yellow mottle virus. This work has permitted, thanks to Maldi-MS and LC-MS-MS technics, to show up the rice proteins that are recruited by the capsid proteins of the virus and to identify the proteins differentially expressed depending an the rice cultivars (resistant/sensitive). The second proteomic study concerns the characterization of expression markers linked to the abnormality "Mantled" by the oil palm needing de novo sequencing. To conclude, we have used the multiple potentialities of the microLC-MS and the nanoLC-MS-MS coupling to reply to diverse biological problems. These responses could have been obtained only thanks to the perfecting of particular methodologies
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Berahia, Tahar. "Comportement par couplage chromatographie gazeuse-spectrométrie de masse et activité antioxydante de polyméthoxyflavones : application aux huiles essentielles de Citrus sinensis". Aix-Marseille 3, 1993. http://www.theses.fr/1993AIX30034.
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Notre etude vise a une meilleure connaissance de la composition flavonique de l'huile essentielle de peaux de citrus sinensis (orange valencia) et de l'incidence de la flavone, des polymethoxyflavones (pmfs) et d'un extrait flavonique d'huile d'orange sur les phenomenes d'oxydation. Il est possible de separer individuellement les flavonoides presents dans la meme plante par chromatographie, de determiner leur structures en n'utilisant que tres peu de materiel vegetal. Les outils les plus puissants sont la chromatographie gazeuse (cg) et la spectrometrie de masse (sm). La mise au point de la technique cg fait intervenir 39 pmfs (comprenant de 0 a 7 groupements methoxyles) etalons et a ete menee sur une colonne capillaire de phase apolaire. L'influence de la methoxylation est montree et discutee. Le comportement en spectrometrie de masse est etudie par couplage cg/sm. Ce travail fournit de nombreuses donnees sm et de nouveaux fragments sont proposes. Un protocole experimental realise a partir d'une huile de citrus sinensis a ete mis au point. Il permet d'obtenir un extrait brut tres enrichi en composes flavoniques. Six flavones completement methoxylees ont ete isolees et quatre flavones monohydroxylees ainsi qu'une flavanone ont ete caracterisees par couplage cg/sm. L'evaluation de l'activite antioxydante (aao) faisant appel a la variation de l'absorbance du beta-carotene resultant de son oxydation par les produits de degradation de l'acide linoleique a ete appliquee aux flavones polymethoxylees. Dans les conditions operatoires, la flavone possede une aao marquee pour une concentration egale ou proche de 45 mg/l. Bien que les pmfs n'aient pas montre une aao prononcee, l'extrait flavonique brut de l'huile de peaux d'orange presente un caractere antioxydant relativement eleve
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Boulenguer, Patrick. "Applications de la spectrométrie de masse, du couplage LC-MS et de la chromatographie en phase supercritique à l'étude des dérivés glucidiques". Lille 1, 1987. http://www.theses.fr/1987LIL10142.
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Ces dernières années, l'ionisation des molécules organiques par bombardemnt d'atomes neutres accélérés (Fast Atom Bombarment : FAB) a été largement développée dans le champ des glycoconjugués. Cette technique d'ionisation, qui utilise une sonde d'introduction directe sur laquelle est déposé l'échantillon dissous dans une matrice (glycérol ou thioglycérol), ne permet pas le couplage entre un appareil de chromatographie et le spectromètre de masse. Nous décrivons dans ce travail une nouvelle sonde d'introduction qui permet à la fois d'utiliser le mode d'ionisation FAB et l'arrivée en continue des échantillons [. . . ]
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Roy, Sandrine. "Analyse des bio-marqueurs de la maladie de Fabry par techniques séparatives couplées et spectrométrie de masse". Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114841.
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La maladie de Fabry est une maladie orpheline de transmission récessive qui se caratérise par l'accumulation des certains glycosphingolipides (GSls) (le digalactosylcéramide, Ga2, et le globotriaosylcéramide, Gb3) suite à la mutation du gène codant pour l'α-galactosidase A. Différentes techniques ont été développées pour analyser les classes lipides et les espèces moléculaires de chaque classe. Tout d'abord, les principaux GSLs ont été séparés. Une technique de CLHP couplée à un detecteur évaporatif à diffusion de la lumière a permis de détecter le Gb3 contenu dans des sédiments urinaires de patients. Puis, nous avons analysés les différentes espèces moléculaires du Gb3 et du Ga2 dans des sédiments urinaires par spectrométrie de masse en tandem (MALDI Q-TOF et CHLP APPI MS-MS). Environ vingt espèces moléculaires ont été identifiées pour leGb3 et le Ga2. Enfin, ces lipides ont été analysés directement sur la surface de coupes de tissus. Des approches d'imagerie par spectrométrie de masse, comme le MALDI-TOF et TOF-SIMS ont été utilisées pour localiser ces GSLs sur des coupes de peau et de rein de patients atteints de la maladie de FabryFabry disease in an X-linked inborn error of neutral glycosphingolipids (GSLs) metabolism, caused by a deficiency of the lysomal α-galactosidase A, wich results in high levels of globotriaosylceramide (Gb3) and galabiosylceramide (Ga2). Different techniques are developed to analyse lipid classes and molecular species in each lipid class. First, we optimised the separation of four major neutral GSLs. An HPLC separation combined with evaporative light-scattering detection allowed the detection of urinary globotriaosylceramide in urinary sediments of patients. Second, we analysed the different molecular species of Gb3 and Ga2 in urinary sediments with tandem mass spectrometry (MALDI Q-TOF and HPLC APPI MS-MS). About twenty molecular species are identified for Gaé and Gb3. Third, these lipids were analysed directly on the surface of tissue sections. MALDI-TOF ond cluster-TOF-SIMS imaging approaches were used to obtain the localization of GSLs on skin and kidney sections of patients affected by the Fabry disease
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Barges, Causeret Nathalie. "Contribution à l'étude du passage ophtalmosystémique des sels de morphine : prélèvement du film lacrymal et dosage de la morphine par chromatographie phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse". Paris 5, 1991. http://www.theses.fr/1991PA05P140.
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McSheehy, Shona. "Identification des espèces organiques d'arsenic et de sélénium dans les matrices biologiques par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse. : ICP MS et électrospray MS/MS". Pau, 2001. http://www.theses.fr/2001PAUU3032.
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Ledauphin, Jérôme. "Caractérisation chimique et sensorielle de Calvados "sortie alambic" : Identification des composés volatils et des marqueurs olfactifs par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse et olfactométrie". Caen, 2003. http://www.theses.fr/2003CAEN2027.
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22 échantillons de Calvados " sortie alambic " ont été analysés selon leur qualité aromatique. Ils ont été classés en trois catégories : " à défauts ", " neutres " ou " de qualité ". L'analyse de leur composition volatile a été effectuée par CPG/SM, et la séparation des constituants a été réalisée sur trois types de phases stationnaires. Le couplage de méthodes préparatives telles que le fractionnement sur gel de silice et la Chromatographie Préparative en Phase Gazeuse a conduit à l'identification d'un total de 336 composés volatils dans les Calvados. L'étude a été complétée au moyen d'analyses en olfactométrie qui nous ont permis de déterminer les odeurs constituant le " squelette aromatique " du produit. La présence de méthional, de 3-méthylbut-2-én-1-ol, de 1,1,3-triéthoxypropane, ou d'alcool benzylique semble déprécier l'arôme des Calvados. A contrario, le 4-éthylphénol, l'acétate d'isoamyle et le 4-éthylguaiacol semblent favoriser la qualité aromatique du produit. Les composés carbonylés ont été largement étudiés de façon qualitative au moyen du réactif T de Girard supporté sur gel de silice et de façon quantitative par dérivation au moyen du 2-hydrazono-3-méthylbenzothiazole (HMBT).
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Aros, Sandrine. "Analyse métabolomique de S. aureus par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution : Développements analytiques et applications à l’étude de la résistance à la méticilline". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015SACLS013.
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Le taux de mortalité associé aux infections par le S. aureus résistant à la méticilline (SARM) est le plus élevé parmi les infections staphylococciques. Le SARM est aussi la plus fréquente des bactéries multirésistantes, plaçant souvent le médecin en situation d'impasse thérapeutique. Une meilleure compréhension des phénomènes de résistance aux antibiotiques permettrait de mieux détecter ces bactéries et concevoir de nouveaux antibiotiques. Dans ce contexte, ces travaux de thèse visaient à étudier le phénotype de résistance à la méticilline de S. aureus par une approche métabolomique.La première partie de ce travail a été dédiée au développement des outils nécessaires aux analyses métabolomiques globales de S. aureus. Ces développements ont impliqué la mise place d'un protocole de préparation d'échantillon spécifique et multi-étapes, de méthodes de chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution (LC/HRMS) et l'implémentation d'une base de données spectrales dédiée.Dans ces conditions, nous avons pu extraire et identifier jusqu'à 210 métabolites intracellulaires, ce qui représente la plus large couverture métabolique de S. aureus obtenue à ce jour. Dans un second temps, nous avons appliqué l'approche développée à l'étude de souches SARM et de souches sensibles à la méticilline (SASM). Après optimisation rigoureuse des conditions de culture, l'étude approfondie de 24 souches cliniques nous a permis de dégager une signature métabolique du phénotype de la résistance à la méticilline, signant notamment l'implication des voies de biosynthèse de la paroi et de la capsule bactérienne.Le séquençage complet du génome de ces 24 souches combiné à l'étude complémentaire de 16 souches de SARM de fonds génétiques différents nous a ensuite permis de souligner la pertinence de cette signature métabolique vis-à-vis du phénotype étudié. Enfin, l'étude de souches isogéniques en présence d'antibiotique a également confirmé l'implication de la synthèse de la paroi dans la distinction SARM/SASMThe mortality rate associated with Methicillin resistant S. aureus (MRSA) is the highest among the staphylococcal infections. A better understanding of antibiotic resistance phenomena would lead to better detect these bacteria and design new antibiotics. In this context, this PhD work aimed to study the MRSA phenotype by using a metabolomics approach. The first part of this work has been dedicated to developing a global metabolomic analysis of S. aureus: i.e., the setting up of a reliable sample preparation protocol, the development of liquid chromatography-high resolution mass spectrometry methods, and the implementation of a dedicated spectral database. Under these conditions, 210 metabolites have been extracted and identified in bacterial cell extracts, which is the widest metabolic coverage of S. aureus obtained to date.Secondly, we have performed a metabolomic study of MRSA and methicillin susceptible S. Aureus (MSSA) strains. The analysis of 24 clinical strains has allowed us to highlight a metabolic signature of MRSA phenotype of which metabolites involved in bacterial wall and capsule biosynthesis pathways were part. The complete genome sequencing of these 24 strains combined with the complementary study of 16 MRSA strains of different genetic backgrounds have reinforced the relevance of this metabolic signature. Finally, the study of isogenic strains in the presence of an antibiotic has confirmed the involvement of metabolites of the wall and capsule biosynthesis pathways in the distinction of MRSA/MSSA phenotypes
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Pailleux, Floriane. "Étude des tachykinines et de leurs dérivés peptidiques associés à la douleur neuropathique grâce à l'utilisation de modèles animaux et de la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse". Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01070204.
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La gestion de la douleur neuropathique reste un challenge en médecine, malgré le nombre de traitements actuellement disponible. L'expérimentation animale a généré beaucoup d'informations concernant la douleur, mais ces connaissances demeurent insuffisantes pour développer de nouveaux analgésiques plus efficaces tout en restant sécuritaires. La douleur est un symptôme clinique complexe avec de multiples origines, et les mécanismes de douleur centraux et périphériques dépendent de l'évolution de la pathologie. Il est donc essentiel d'investiguer plus profondément les mécanismes moléculaires responsables de l'initiation et du maintien de la douleur, afin de cibler de nouvelles voies de transmission de la nociception plus prometteuses pour soulager la neuropathie et développer de meilleures stratégies thérapeutiques. Ce projet s'est donc intéressé plus particulièrement à la famille des tachykinines issues du gène TAC1 (substance P, ses précurseurs et métabolites, et neurokinine A sont les peptides ciblés pour ce projet de recherche), une famille de neuropeptides qui joue un rôle critique dans la transmission nociceptive. Pour réaliser cette étude, nous avons d'abord développé une stratégie de quantification afin de quantifier les expressions des différents neuropeptides bioactifs cibles, par HPLCMS/ MS. Puisqu'il existe différentes stratégies de quantification des peptides par HPLCMS/ MS, une méthode analytique fiable et robuste était nécessaire pour répondre aux objectifs de recherche. Nous avons développé une méthode utilisant la quantification relative avec un étalon interne stable marqué isotopiquement. En effet, pour quantifier les neuropeptides d'intérêt de l'étude, c'est la stratégie qui s'est avérée la plus reproductible et précise. Suite à la mise au point de la stratégie de quantification, nous avons utilisé des modèles animaux, souvent nécessaires pour faire progresser la recherche scientifique sur la compréhension de la douleur
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Yu, Haiyan. "Étude de la biodisponibilité orale du S-nitrosoglutathion au moyen de modèles de la barrière intestinale par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse après marquage par l’isotope 15 de l’azote". Thesis, Université de Lorraine, 2018. http://www.theses.fr/2018LORR0100/document.
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Le développement de nouveaux donneurs d’oxyde nitrique (NO) dans le traitement chronique des maladies cardiovasculaires nécessite l’étude de leur biodisponibilité après administration par voie orale. Les S-nitrosothiols (RSNOs) apparaissent d’intéressants candidats médicaments pour ce faire, et l’étude de leur perméabilité intestinale est une première étape indispensable. Il est nécessaire de disposer d’une méthodologie analytique suffisamment sensible et sélective, en particulier permettant de différencier entre la production endogène de NO, l’apport alimentaire en ions nitrites et nitrate et le médicament lui-même. Nos travaux de thèse ont consisté à utiliser le S-nitrosoglutathion (GSNO) comme modèle après son marquage par l’isotope stable 15 de l’azote (15N). La dérivation du 15NO libéré par deux méthodes conventionnelles (méthode de Griess conduisant à la formation d’un adduit azoïque ; réaction avec le 2,3-diaminonaphtalène (DAN) formant l’adduit 2,3-naphtotriazole (NAT)) et l’étude de la fragmentation en spectrométrie de masse tandem (MS/MS) des deux adduits correspondants ont mené à sélectionner la dérivation par le DAN comme étant la plus sensible. Une transition originale résultant de la fragmentation du NAT en mode Higher-energy Collisional Dissociation (HCD) au lieu du mode conventionnel Collisionally Induced Dissociation (CID) a été mise en évidence ; elle permet d’atteindre une limite de quantification de 5 nM (soit 20 fois plus basse que celle offerte par la fluorescence). La méthode LC-MS/MS a été validée et appliquée à l’étude de la perméabilité intestinale du GS15NO par deux modèles : l’un in vitro (monocouche de cellules épithéliales type Caco-2), l’autre ex vivo (intestin de rat isolé (ileum) dans une chambre de Ussing). Les valeurs de perméabilité apparente calculées à partir des concentrations des métabolites du GS15NO (ions nitrites, nitrates et RSNOs) le classent comme un médicament de perméabilité intermédiaire. En outre, des études sur les mécanismes de dénitrosation du GSNO ont été menées sur intestin isolé, démontrant en particulier le rôle d’enzymes telles que la γ-glutamyltransférase et la protein disulfide isomeraseThe development of innovative nitric oxide (NO) donors for the chronic treatment of cardiovascular diseases implies their bioavailability studies after oral administration. S-nitrosothiols (RSNOs) look interesting drug candidates for this purpose and evaluating their intestinal permeability appears the first step to be realized. Thus, an analytical method offering high sensitivity is needed; moreover this method should be selective by differentiating between the endogenous production of NO, the intake of nitrite and nitrate ions via the diet, and the drug itself. Our work consisted in using S-nitrosoglutathione (GSNO) labeled with the stable nitrogen isotope 15 (15N) as a model. Released 15NO species were derivatized by two conventional methods: Griess method leading to the formation of an azo adduct; reaction with 2,3-diaminonaphthalene (DAN) producing 2,3-naphtotriazole (NAT); fragmentation studies of the two adducts by tandem mass spectrometry (MS/MS) allow the selection of DAN method because it provides the highest sensitivity. An original transition resulting from the NAT fragmentation in Higher-energy Collisional Dissociation (HCD) mode instead of the conventional Collisionally Induced Dissociation (CID) mode was pointed out and permitted to reach a limit of quantification of 5 nM (20 fold less than when using fluorescence). The LC-MS/MS method was validated and applied to the GS15NO intestinal permeability studies with two models: in vitro (a monolayer of Caco-2 epithelial cells), and ex vivo (isolated intestine of rat (ileum) in an Ussing chamber). The apparent permeability values calculated with concentrations of GS15NO metabolites (nitrite, nitrate ions and RSNOs) classify it as a middle permeable drug. Studies on GSNO denitrosating processes using isolated rat intestine demonstrate that the enzymes γ-glutamyltransferase and protein disulfide isomerase play a pivotal role
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Bezy, Vincent. "Développement de méthodologies séparatives couplées à la spectrométrie de masse pour le dosage des nucléotides et nucléosides antiviraux du VIH". Orléans, 2005. http://www.theses.fr/2005ORLE2083.
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Cette étude de développement de procédures de dosage des métabolites plasmatiques et intracellulaires des Inhibiteurs Nucléosidiques de la Transcriptase Inverse (INTIs), s’inscrit dans le cadre du suivi thérapeutique. L’efficacité de ces drogues étant patient « dépendante », l’ajustement thérapeutique des traitements administrés se doit d’être optimisé. Nous avons mis en place deux procédures de dosage, par électrophorèse capillaire et chromatographie liquide, couplées avec la spectrométrie de masse. Les méthodologies de dosage simultané des métabolites intracellulaires dans des extraits cellulaires PBM ont été validées en suivant les critères SFSTP – pharmacopée européenne - et de la FDA (Federal Drug Administration). Les limites de quantification sont de l’ordre de quelque dizaine de ng/mL par EC-ESI-SM/SM et quelques centaines de pg/mL par CPL-ESI-SM/SM. Pour terminer, dans le cadre de l’adhérance, une procédure d’analyse des métabolites plasmatiques de sept INTIs a été mise en place et pré-validée par CPL – UV. Les Limites de Quantification (LOQs) obtenues sont de l’ordre de quelques dizaines de ng/mL.
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JBILOU, MOHAMED. "Etude chronopharmacocinétique, chez l'homme, de la trimipramine (7162 RP) et de ses métabolites déméthylés, évalués par couplage chromatographie en phase gazeuse - spectrométrie de masse". Clermont-Ferrand 1, 1989. http://www.theses.fr/1989CLF15006.
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Lauro-Marty, Claude. "Etudes pharmacocinétique et biopharmaceutique, chez l'homme sain, du 5-mononitrate d'isosorbide évalué par couplage chromatographie en phase gazeuse - spectrométrie de masse". Clermont-Ferrand 1, 1995. http://www.theses.fr/1995CLF1PP03.
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Dauchy, Xavier. "Spéciation des butylétains dans les sédiments marins par couplage chromatographie en phase liquide - plasma à couplage inductif/spectrométrie de masse (HPLC-ICP-MS)". Pau, 1993. http://www.theses.fr/1993PAUU3003.
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Cette thèse porte sur la mise au point d'une technique analytique pour la détermination des butyletains dans des échantillons issus de l'environnement. Elle est organisée en neuf chapitres. Le premier résume les applications industrielles des organoétains. Le chapitre suivant rassemble les informations actuellement disponibles sur la répartition de ces composés dans l'environnement. Les transformations des organoétains dans le milieu naturel sont abordées dans le troisième chapitre. Le quatrième chapitre regroupe les connaissances actuelles sur la toxicité de ces produits. Les cinquième et sixièmes chapitres constituent un résumé des méthodes chromatographiques et non chromatographiques utilisées pour la détermination des organoétains, ainsi qu'un résumé des procédures d'extraction employées pour les échantillons issus de l'environnement. Les résultats expérimentaux sont présentés à partir du chapitre sept, qui décrit la mise au point d'une méthode HPCL-ICP/MS pour la spéciation des butylétains. Le chapitre suivant expose les expériences qui ont été tentées afin d'améliorer la limite de détection. Le dernier chapitre rapport les résultats de l'application de la méthode HPLC-ICP/MS à la détermination des butyletains dans un sédiment marin de référence (pacs-1) et dans un sédiment côtier en cours de certification pour le BCR (CRM 462).
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Mathe, Carole. "Etude de résines naturelles : caractérisation par CLHP et CPG couplées à divers modes de détection : UV/Visible, fluorimétrique et spectrométrie de masse". Avignon, 2003. http://www.theses.fr/2003AVIG0216.
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Ces travaux portent sur l'étude de deux résines végétales naturelles : l'oliban et le sang-dragon. L'oliban, est une oléo-gommo-résine exsudée uniquement par certaines espèces de Boswellia (famille des Burséracées). Le sang-dragon correspond, quant à lui, à une résine particulière dans le sens où elle est colorée en rouge. Actuellement, il est admis que le véritable sang-dragon appartient aux deux espèces Daemonorops et Dracaena. Aussi, deux échantillons ont été analysés correspondant à Daemonorops draco (Indonésie) et Dracaena cinnabari (espèce endémique à l'île de Socotra au Yémen). Seule la partie résine (terpénique) de ces substances a été analysée, c'est-à-dire les mono- et sesquiterpènes (huiles essentielles), les diterpènes et surtout les triterpènes (squelettes ursane, oléanane, lupane, tirucallane). Diverses techniques chromatographiques tant en phase liquide (CLHP-UV/ fluorimétrie et CLHP/SM) qu'en phase gazeuse (CPG/SM), ont été employées pour caractériser ces substances. Un des objectifs de ce travail est la recherche de marqueurs chimiques spécifiques de ces matériaux. A ce titre, dix-sept molécules ont été isolées ou hémisynthétisées à partir d'oliban commercial de type " Erythrée ", dont les acides a- et b-boswelliques et leur dérivé acétylé correspondant, ainsi qu'un composé original l'acide lupéolique. Des tests de dégradation thermique ont été également réalisés ; l'étude des fumées dégagées ainsi que le résidu résineux obtenu traduisent la présence de composés de dégradation : 24-noroléana-3,12-diène, 24-norursa-3,12-diène et 24-norlupa-3(20)29-diène. La résistance thermique de nos composés standards a été également mise en évidence. L'étude de divers échantillons d'origines géographiques diverses a été également traitée dans l'objectif de corréler la composition chimique et l'origine géographique. Les espèces Boswellia carteri, Boswellia sacra et Boswellia frereana ont pu être différenciées. De plus, nos méthodes chromatographiques ont également permis la mise en évidence d'adultération. L'extrapolation des résultats obtenus sur des résines contemporaines, a permis notamment la caractérisation d'encens au sein d'échantillons provenant d'une pharmacie du XVIIIème siècle ou bien d'échantillons datant de l'Egypte Ancienne. En ce qui concerne le sang-dragon, les deux espèces considérées ont pu être différenciésThis work concerns the study of two natural vegetable resins : olibanum and dragon's blood. Olibanum, is a oleo-gommo-resin only exuded by certain species of Boswellia (family of Burseraceae). The dragon's blood corresponds to a particular resin coloured in red. It is currently admitted, it is allowed that the true dragon's blood belongs to both species Daemonorops and Dracaena. Consequently, two samples were analyzed corresponding to Daemonorops draco (Indonesia) and Dracaena cinnabari (endemic species of Socotra's island, Yemen). Only the resin part (terpenic) of these substances was analyzed : the mono ones and sesquiterpenes (essential oils), the diterpenes and especially the triterpenes (ursane, oleanane, lupane and tirucallane skeletons). Various chromatographic techniques (LC/PDA/Fluorimetry, LC/SM and GC/MS) were employed to characterize these substances. The main goal of this work is to determine the specific chemical markers of these materials. Thus, seventeen molecules were isolated or hemisynthetized from commercial olibanum "Erytrean" type , as for example boswellic acids and their corresponding acetylated derivative, and a novel compound named lupeolic acid. Thermal degradation assays were also carried out ; studies of the released fume and the resinous residue obtained indicate the presence of products resulting from degradations : 24-noroléana-3,12-diene, 24-norursa-3,12-diene and 24-norlupa-3(20)29-diene. The thermal resistance of our standard compounds was also highlighted. Various geographical samples was also investigated to correlate the chemical composition and geographical origin. The species Boswellia carteri, Boswellia sacra and Boswellia frereana were differentiated. Moreover, our chromatographic methods also allowed the determination of fraud. Note that, the extrapolation of the results obtained on contemporary resins, allowed the characterization of olibanum in samples coming from the 18th century pharmacy or samples dating from ancient Egypt. Concerning the dragon's blood, both species considered were differentiated