Rozprawy doktorskie na temat „Notch pathway signalling”
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Collu, Giovanna Maria. "Crosstalk between dishevelled and the notch signalling pathway". Thesis, University of Manchester, 2008. https://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.492040.
Pełny tekst źródłaDe, Celis Ibeas Jesus Maria. "Identification of new targets of the notch signalling pathway". Thesis, University of Cambridge, 2001. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.621218.
Pełny tekst źródłaMansour, M. R. "Role of the Notch signalling pathway in acute leukaemia". Thesis, University College London (University of London), 2013. http://discovery.ucl.ac.uk/1420122/.
Pełny tekst źródłaShao, Jin. "Notch signalling pathway regulates the terminal differentiation of osteoblasts". Thesis, Queensland University of Technology, 2018. https://eprints.qut.edu.au/119172/2/Jin_Shao_Thesis.pdf.
Pełny tekst źródłaHuang, Caoxin. "Notch signalling pathway in murine embryonic stem cell derived haematopoiesis". Thesis, University of Edinburgh, 2013. http://hdl.handle.net/1842/8071.
Pełny tekst źródłaLópez-Schier, Hernán Marcelo. "The role of the notch signalling pathway in Drosophila axis formation". Thesis, University of Cambridge, 2002. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.620532.
Pełny tekst źródłaStephenson, Natalie. "Mechanotransduction of the Notch signalling pathway via the negative regulatory region". Thesis, University of Manchester, 2013. https://www.research.manchester.ac.uk/portal/en/theses/mechanotransduction-of-the-notch-signalling-pathway-via-the-negative-regulatory-region(c13c0f01-3095-4895-a536-1dfc324d9899).html.
Pełny tekst źródłaLiu, Dong. "Towards understanding the signalling requirements of thymic epithelial progenitor cells". Thesis, University of Edinburgh, 2018. http://hdl.handle.net/1842/31405.
Pełny tekst źródłaGupta, D. "Structural and functional study on Notch signalling pathway and its regulatory proteins". Thesis, University of Cambridge, 2009. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.599795.
Pełny tekst źródłaLendínez, Javier González. "Unravelling a new role of Notch signalling pathway in HSC development using a Hes1-EGFP mouse model". Thesis, University of Edinburgh, 2016. http://hdl.handle.net/1842/25897.
Pełny tekst źródłaXavier, Stephanie P. "The notch signalling pathway and mesenchymal cell fates during wool follicle initiation in the sheep". Thesis, The University of Sydney, 2009. https://hdl.handle.net/2123/28221.
Pełny tekst źródłaCapodanno, Ylenia. "Identifying therapeutic implications of cancer stem cells in human and canine insulinoma". Thesis, University of Edinburgh, 2018. http://hdl.handle.net/1842/31175.
Pełny tekst źródłaNaylor, Richard William. "An investigation into how the cell cycle and the Notch signalling pathway regulate pronephrogenesis in Xenopus laevis". Thesis, University of Warwick, 2009. http://wrap.warwick.ac.uk/1052/.
Pełny tekst źródłaHirsch, Théo Z. "Voies de signalisation dépendantes de la protéine prion : de la physiologie à la pathologie". Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCB105.
Pełny tekst źródłaThe conversion of the cellular prion protein PrPC into a pathogenic isoform, the scrapie prion protein PrPSc, lies at the root of a group of neurodegenerative disorders known as Transmissible Spongiform Encephalopathies (TSEs). Several lines of evidence indicate that PrPSc-mediated toxicity involves a subversion of PrPC normal function, however, our knowledge of PrPC physiological role is still far from complete. In this work, we sought to identify signalling pathways mobilized by PrPC that could accommodate both its role in central nervous system development and its implication in TSE pathogenesis. We show that the prion protein controls the activity of the Notch pathway, which plays an overriding role during embryonic development as well as central nervous system homeostasis and synaptic plasticity. In both ex vivo and in vivo models of TSE, we monitored a decrease in Notch activity, together with reduced expression of Eph receptors, which are key players in synaptic activity. The reduction in Eph is also found in PrPC-depleted cells. Hence, our observation of a similar signature of PrPC depletion and prion infection strengthens the view that PrPSc diverts PrPC function. We found a restoration of Notch and Eph effectors expression in response to histone deacetylase (HDAC) inhibitors, both in PrPC-depleted and prion-infected cells, suggesting that epigenetic mechanisms are involved in the PrP-dependent transcriptional control of these genes. This work provides a foundation for assessing a beneficial effect of HDAC inhibition in prion-infected mice and thereby defining whether HDAC could represent novel therapeutic targets to combat TSEs
Zannini, Alessandro. "Prolyl-isomerase Pin1 controls normal and cancer stem cells of the breast by counteracting the Fbxw7-oncosuppressive barrier on the Notch signalling pathway". Doctoral thesis, Università degli studi di Trieste, 2014. http://hdl.handle.net/10077/10120.
Pełny tekst źródłaCancer stem cells (CSCs) are proposed to be responsible for breast cancer heterogeneity, chemotherapeutic treatment failure, metastatic spread and disease recurrence. The precise identification of the molecular bases that govern the induction and maintenance of CSCs and their aggressive phenotypes is of utmost importance, since it may provide the rational to develop effective therapeutic strategies. In particular there is a considerable effort in finding common pathways, mutations or histological features that might be targeted for therapy, overcoming breast cancer heterogeneity. Here we now demonstrate that CSC self-renewal, chemoresistance, tumour growth and metastases formation capabilities’ are under direct control of Pin1’s enzymatic activity on the Notch signalling pathway. In particular Pin1 protects the nuclear activated forms of Notch1 and Notch4 (N1/4-ICD) from their E3-ubiquitin-ligase Fbxw7α, thereby boosting their protein levels and transcriptional activity. Fbxw7α acts as a potent inhibitor of CSCs maintenance by promoting protein degradation of N1- and N4-ICD, and, as a consequence, this ubiquitin-ligase strongly decreased tumour growth and metastases dissemination in vivo. Interestingly, concomitant over-expression of Pin1 almost completely recovered all these aggressive breast cancer traits. In tissues from breast cancer patients, we observed Notch signalling over-activation despite presence of the negative regulator Fbxw7α, which relied on high Pin1 protein levels. Notably, activation of the Notch-Pin1 axis correlated with poor prognosis in these patients. As a consequence of our findings, suppression of Pin1 holds promise in reverting aggressive phenotypes in breast cancer though shrinkage of CSCs number and a concomitant gain in chemosensitivity, carrying important implications for breast cancers therapy.
XXVI Ciclo
1985
Hidalgo, Sastre Ana. "Crosstalk between Notch and Wnt signalling pathways in vertebrates". Thesis, University of Manchester, 2012. https://www.research.manchester.ac.uk/portal/en/theses/crosstalk-between-notch-and-wnt-signalling-pathways-in-vertebrates(9b4411a3-cd03-4af3-b3b5-8c432c7a2c68).html.
Pełny tekst źródłaHoyle, Sarah. "The interactions between the Wnt and Notch signalling pathways". Thesis, University of Manchester, 2009. https://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.520711.
Pełny tekst źródłaJobling, Stephanie. "The Notch and EDAR signalling pathways in mammary gland development and tumourigenesis". Thesis, University of Manchester, 2011. https://www.research.manchester.ac.uk/portal/en/theses/the-notch-and-edar-signalling-pathways-in-mammary-gland-development-and-tumourigenesis(69b68d49-9f6b-4e98-8521-a21f3af3c4fb).html.
Pełny tekst źródłaSadli, Adem. "Notch3 signalling pathway in vascular smooth muscle cell growth and survival". Thesis, University of Manchester, 2013. https://www.research.manchester.ac.uk/portal/en/theses/notch3-signalling-pathway-in-vascular-smooth-muscle-cell-growth-and-survival(ee3b0663-5fa9-43bb-a7d3-f9c52fb8ade1).html.
Pełny tekst źródłaSanders, Philip Gordon Thomas. "A biochemical analysis of regulatory interactions between the Notch and Wingless signalling pathways". Thesis, University of Cambridge, 2006. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.614348.
Pełny tekst źródłaEsteves, De Lima Joana. "Link between signalling pathways, cell cycle and mechanical forces during foetal myogenesis". Thesis, Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066248/document.
Pełny tekst źródłaFoetal myogenesis relies on PAX7+ muscle progenitors that provide the source of cells for muscle growth during development and for the generation of the satellite cell pool. We aimed to decipher the signals that regulate the balance between myogenic differentiation and proliferation. We performed an exhaustive analysis of the cell cycle phases of myogenic cells during foetal myogenesis. I defined that PAX7+ cells in the S/G2/M phases were enriched at the contact points to the tendons. BMP and NOTCH signals increase the number of PAX7+ cells during foetal development, but affect differentiation in a positive and negative manner, respectively. I revealed that BMP and NOTCH increase the number of PAX7+ cells independently of each other. However, they act antagonistically during differentiation. Thus, the interplay between NOTCH and BMP signalling differs in proliferation and differentiation. Because muscle is a mechanical tissue, we tested the importance of muscle contraction for foetal myogenesis in chick embryos. I found that the block of muscle contraction during foetal myogenesis mimicked a NOTCH loss-of-function, i.e. decreased the number of foetal muscle progenitors and shifted the balance between proliferation and differentiation towards a differentiation fate. Mechanical forces provided by muscle contractions are sensed in myonuclei by the transcriptional co-activator YAP1 that regulates expression of the NOTCH ligand JAGGED2 in muscle fibres. This JAGGED2 signal keeps the muscle progenitors in an undifferentiated state and suppresses differentiation
Cheung, L. "Genetic manipulation of the Wnt and Notch signalling pathways in the pituitary gland in vivo". Thesis, University College London (University of London), 2013. http://discovery.ucl.ac.uk/1408913/.
Pełny tekst źródłaGentle, Madeleine Eva. "Interaction of Notch and Toll-like Receptor Signalling Pathways Modulates the Functional Maturation of Dendritic Cells". Thesis, Imperial College London, 2010. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.516477.
Pełny tekst źródłaAngbohang, Angshumonik. "Role of Wnt and Notch signalling pathways on the neural differentiation of human Müller stem cells and their modulation by growth factors". Thesis, University College London (University of London), 2016. http://discovery.ucl.ac.uk/1530890/.
Pełny tekst źródłaSilva, Andreia Marisa Ribeiro da. "Endocrine Resistance and Notch Signalling Pathway in Breast Cancer". Master's thesis, 2013. https://repositorio-aberto.up.pt/handle/10216/89949.
Pełny tekst źródłaHORVÁTH, Matej. "A role of Sirt1 in the Notch signalling pathway". Doctoral thesis, 2017. http://www.nusl.cz/ntk/nusl-363584.
Pełny tekst źródłaSilva, Andreia Marisa Ribeiro da. "Endocrine Resistance and Notch Signalling Pathway in Breast Cancer". Dissertação, 2013. https://repositorio-aberto.up.pt/handle/10216/89949.
Pełny tekst źródłaSLANINOVÁ, Věra. "Regulation of cellular metabolism by the Notch receptor signalling pathway". Master's thesis, 2012. http://www.nusl.cz/ntk/nusl-136603.
Pełny tekst źródłaMsibi, Thandiwe. "The effects of inhibiting the notch signalling pathway in triple negative breast cancer cell lines". Thesis, 2016. http://hdl.handle.net/10539/19748.
Pełny tekst źródłaThe molecular pathology of triple negative breast cancer (TNBC) is poorly understood, consequently, no successful forms of therapy have been developed. Thus an improvement of knowledge and subsequently the discovery of novel treatments for the disease are imperative. It has been found that deregulation of the Notch signalling pathway promotes tumourigenesis in breast tissue. Therefore, it was of interest here to investigate whether the Notch signalling pathway is deregulated in TNBC and whether its abrogation affects the proliferation and migration of TNBC cell lines. The normal growth characteristics of MCF-7 cells (hormone sensitive) were compared to those of MDA-MB-231 and MDA-MB-436 (both hormone insensitive) cell lines and were determined by real-time cell impedance assays, using the ―xCELLigence‖ instrument. Thereafter, cells were treated with gamma secretase inhibitors (GSI) of the Notch signalling pathway. The MCF-7 cell line proliferated faster than the MDA-MB-231 and MDA-MB-436 cell lines. The proliferation of the MDA-MB-231 and MDA-MB-436 cell lines decreased significantly following treatment with inhibitors. Confocal microscopy was used to assess levels of the Notch intracellular component (a gamma secretase cleavage product) and E-cadherin (a breast tumour suppressor marker), pre- and post- treatment. Prior to drug treatments, confocal microscopy showed that the Notch intracellular component was highly expressed in the MDA-MB-231 cell line, and it was low in the MDA-MB-436 cell line, compared to the MCF-7 cell line. Following drug treatments, confocal microscopy showed a decreased expression of the Notch intracellular component in all three cell lines. Prior to drug treatment only the MCF-7 cell line expressed E-cadherin which was reduced post treatment. Subsequently the cell migration assays revealed that migration is reduced post- drug treatment in all three cell lines, despite no statistical significance. Overall the MDA-MB-231 and MDA-MB-436 cell lines were more significantly sensitive to the gamma secretase inhibitors compared to the MCF-7 cell lines. Therefore these observations suggest that the Notch signalling pathway is a plausible novel therapeutic target in the treatment of TNBC.
Lahiry, Mohini. "Regulation of Notch signalling by hypoxia and AMPK in breast cancer". Thesis, 2018. http://etd.iisc.ac.in/handle/2005/4239.
Pełny tekst źródłaCaiado, Francisco Landeck Moreira Franco. "Role of the notch-delta signalling pathway on bone marrow-derived cells function during wound healing and tumor progression". Doctoral thesis, 2011. http://hdl.handle.net/10451/3740.
Pełny tekst źródłaBone marrow (BM)-derived cell populations participate in numerous physiological and pathological conditions in adult individuals, directly interacting with tissue specific cellular and extracellular matrix (ECM) components. In particular BM-derived endothelial progenitors (EPCs) contribute to physiological and pathological new vessel formation, a process termed posnatal-vasculogenesis. However the molecular mechanisms regulating their contribution are still lacking. In the present PhD thesis we adressed the role of two major pathways that regulate embryonic vasculogenesis: the Notch-Delta signalling pathway and Integrin-ECM pathway on EPC function during wound healing and tumor progression. To address the contribution of Integrin-ECM interactions to EPC function we tested the effect of the pro-angiogenic fibrin fragment E (FnE) on EPC vasculogenic properties. Our data shows that FnE potentiates the in vitro vasculogenic properties of EPCs, increasing their adhesion (via integrin α5β1), endothelial differentiation and paracrine factor production thus leading to increased in vivo wound vascularization and healing. Concerning the contribution of the Notch-Delta signalling pathway we defined that this pathway mediates bidirectional interactions between BM-derived cells and tissue resident cells during wound healing and tumor progression. In detail we observed that activation of the Notch pathway on EPCs increases integrin α3β1 expression, improving EPC adhesion and endothelial differentiation as well as their pro-angiogenic and wound healing potential in vitro and in vivo. In a tumor setting we observed that EPC-mediated activation of the Notch signaling on ECs regulates vessel stability by increasing the expression of basement membrane components as well as endothelial cell-cell junction proteins, thus being essential for neo-vessel normalization during tumor growth. Further characterization of BMderived cells recruited to tumor tissues lead us to the identification of BM-derived tumor associated macrophages (TAMs) that can activate Notch signaling on colon carcinoma cells inducing tumor epithelial to mesenchymal transition (EMT) thus contributing to tumor progression and metastisation. Taken together our results suggests that both Integrin-ECM and Notch-Delta pathways modulate the properties of BM-derived populations, being essential for the vasculogenic properties of EPCs and for the tumor promoting functions of TAMs, thus making these pathways valid targets in both wound healing and tumor progression.
O sistema cardiovascular constitui o primeiro sistema de órgãos que se forma durante o desenvolvimento embrionário dos vertebrados, tendo como principais funções oxigenação e nutrição de todos os tecidos assim como a remoção de produtos secundários do metabolismo e regulação térmica via vasoconstrição e dilatação. Os principais componentes do sistema cardiovascular são o coração, o sangue e os vasos sanguíneos. Por sua vez os vasos sanguíneos têm como unidade funcional e estrutural a célula endotelial (CE) ao nível da qual são feitas as trocas celulares, metabólicas e gasosas entre as células de todos os tecidos e o sangue. A formação de vasos sanguíneos ocorre durante o desenvolvimento embrionário sendo um processo extremamente complexo que envolve essencialmente dois mecanismos celulares distintos mas interligados: vasculogénese e angiogénese. A vasculogénese é o processo através do qual células precursoras endoteliais, denominadas angioblastos, migram, agregam-se e coalescem formando uma rede primitiva de tubos endoteliais. O subsequente crescimento, expansão e estabilização dessa rede vascular primitiva ocorre através da proliferação, migração e consequente ramificação de CE activadas, num processo denominado angiogénese. Num organismo adulto as CE, assim como os vasos sanguíneos que elas constituem encontramse num estado não proliferativo, denominado quiescência. No entanto, na presença de estímulos específicos nomeadamente em situações fisiológicas (cicatrização de feridas, revascularização de tecidos isquemicos, ovulação, menstruação ou gravidez) ou patológicas (cancro, psoriase, artrite, retinopatias, aterosclerose ou em feridas com cicatrização atrasada) as CE podem tornar-se activas e por angiogénese geram novos vasos sanguíneos. No entanto dados recolhidos na ultima década sugerem que à semelhança do que acontece durante o desenvolvimento embrionário, também no adulto novos vasos sanguíneos se podem formar por vasculogénese. Efectivamente foram identificados em indivíduos adultos células denominadas progenitores endoteliais (PE), que partilham semelhanças com angioblastos embrionários, e que em situações fisiológicas e patológicas são recrutados e diferenciam-se em CE, que por sua vez incorporam os novos vasos formados, num processo denominado vasculogénese pós-natal. PE são definidos como células com origem na medula óssea e que são caracterizados pela expressão de marcadores moleculares específicos de células estaminais como o CD133, CD34 ou o Sca-1 (em ratinho) assim como marcadores endoteliais como o VEGFR-2 (receptor 2 do factor de crescimento vascular). Em resposta a estímulos específicos provenientes de tecidos em remodelação vascular os PE são mobilizados da medula óssea para a circulação, onde são transportados até atingirem os locais de remodelação vascular onde abandonam a circulação por extravasão, invadem os tecidos adjacentes e eventualmente diferenciam-se em CE incorporando os novos vasos formados. O processo de diferenciação endotelial dos PE pode ser dividido em 3 fases essenciais: adesão, mediada por integrinas, dos PE aos componentes da matriz extracelular, sobrevivência e proliferação dos PE aderentes em resposta a factores de crescimento e a sinais da matriz extracelular e finalmente aquisição de marcadores e propriedades endoteliais. Apesar de já ser conhecida e descrita a contribuição dos PE em diversas condições fisiológicas e patológicas os mecanismos que regulam a sua diferenciação em CE ainda são desconhecidos. Assim sendo os objectivos desta tese de doutoramento são a compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos na diferenciação endotelial, em contexto de cicatrização de feridas e de progressão tumoral, com especial foco em vias que são essenciais para a vasculogénese embrionária: via de interacção entre integrinas e proteínas da matriz extracelular e via de sinalização Notch-Delta. Além da compreensão dos mecanismos moleculares que regulam a diferenciação endotelial em PE também foi feita investigação relativa ao papel da via de sinalização Notch-Delta na comunicação entre outras populações celulares derivadas da medula óssea (além dos PE) e células tumorais, durante a progressão tumoral. No capítulo 3 desta tese de doutoramento abordámos o papel da matriz extracelular provisória composta essencialmente por fibrina e pelos seus fragmentos de degradação, que se forma durante a cicatrização de feridas, na função dos PE. Em particular caracterizámos in vitro o papel do fragmento de degradação da fibrina E (FnE), que tem potentes propriedades pró-angiogénicas, na diferenciação e nas propriedades vasculogénicas dos PE. De acordo com os nossos resultados FnE potencia a adesão dos PE, via integrina α5β1, assim como a sua diferenciação endotelial comparativamente a outros componentes da matriz extracelular. Surpreendentemente observámos que PE cultivados em FnE produzem níveis mais elevados de factores paracrinos, nomeadamente de factores pró-angiogénicos e de inúmeras citoquinas. Utilização de meios condicionados de PE cultivados em diferentes componentes da matriz revelou que os meios condicionados dos PE na presença de FnE têm propriedades pró angiogénicas assim como propriedades quimiatractoras de monócitos sanguíneos extremamente elevados comparativamente às restantes condições. Para validarmos o papel pró-vasculogénico do FnE em PE in vivo, utilizámos uma matriz sintética enriquecida com FnE (denominada Smart Matrix – SM) em modelos murinos de cicatrização de feridas. De acordo com os nossos resultados a adição de SM conjuntamente com PE potenciou significativamente o fecho das feridas, estando associado a uma maior vascularização da ferida comparativamente com as restantes condições. Em conclusão os resultados apresentados no capítulo 3 sugerem que FnE tem grandes propriedades vasculogénicas, pelo que a sua administração sob a forma de uma matriz sintética conjuntamente com PE representa uma possível abordagem terapêutica para potenciar a cicatrização de feridas quer resultantes de trauma, queimadura ou ulceração crónica resultante de diabetes, pressão ou estase venosa. No capítulo 4 investigámos o papel da via de sinalização Notch-Delta na diferenciação endotelial e nas propriedades vasculogénicas dos PE, num contexto de cicatrização de feridas. De acordo com os nossos resultados os PE expressam ligandos e receptores da via Notch-Delta e durante a diferenciação endotelial destas células observámos um aumento na activação da via Notch-Delta. Curiosamente a inibição farmacológica da via Notch-Delta levou a uma redução drástica na adesão dos PE a diversos componentes das matriz extracelular assim como a uma redução significativa do número de CE obtidas no final do ensaio de diferenciação endotelial in vitro. Mecanisticamente observámos que inibição da via Notch-Delta nos PE conduzia a uma redução da expressão da integrina α3β1, razão pela qual observámos redução na adesão e consequentemente na diferenciação dos PE. Adicionalmente verificámos que inibição farmacológica da via Notch-Delta nos PE reduzia a capacidade destas células induzirem angiogénese e migração endotelial em ensaios in vitro, sugerindo que a via Notch-Delta é essencial não so para a adesão e diferenciação endotelial dos PE mas também para as suas propriedades pró-angiogenicas. Após constatarmos o papel essencial da via Notch-Delta nos PE, testámos o efeito da inibição desta via em PE em modelos murinos de cicatrização de feridas. Em confirmação dos resultados in vitro observámos que ratinhos injectados com PE normais têm um aumento da taxa de cicatrização associado a um aumento do numero de vasos sanguíneos presentes na ferida. Por outro lado o efeito dos PE na cicatrização e vascularização perde-se quando a via Notch-Delta é inibida, curiosamente PE com a via Notch-Delta inibida estão presentes na ferida em frequências menores que os PE normais. Estes dados demonstram que a activação da via Notch-Delta em PE potencia as suas propriedades vasculogénicas e próangogénicas, sendo essencial para a sua capacidade de acelerar a cicatrização de feridas em modelos murinos. No capitulo 5 abordámos o papel de um dos ligandos da via Notch-Delta expresso em PE, o Dll4 (Delta-like ligand 4) na angiogénese tumoral. De acordo com os nossos resultados a expressão de Dll4 em PE é regulada directamente por 2 factores mobilizadores de PE: VEGF (factor de crescimento vascular) e SDF-1 (factor derivado do estroma de medula óssea). Para testar o efeito de Dll4 na activação da via Notch-Delta em CE, co-cultivámo PE com diferentes níveis de expressão de Dll4 conjuntamente com CE e posteriormente analisámos os genes expressos diferencialmente nas CE consoante os níveis de Dll4 dos PE. De acordo com a nossa análise a activação da via Notch-Delta nas CE via Dll4 expresso pelos PE conduziu ao aumento da expressão de componentes da matriz extracelular (nomeadamente fibronectina) e de componentes das adesões endoteliais (ICAM2 e VE-Caderina). In vivo observámos que em ratinhos transplantados com PE heterozigóticos para Dll4 (Dll4+/-) o crescimento tumoral era reduzido relativamente a ratinhos transplantados com PE normais, no entanto analise do tecido tumoral revelou que os tumores dos ratinhos transplantados com PE Dll4+/- tinham maior densidade vascular, mas menor proliferação, maior frequência de células apoptóticas e áreas de hipoxia mais extensas relativamente aos tumores crescidos em ratinhos transplantados com PE normais. Esta observação sugeriu que os vasos tumorais desenvolvidos em ratinhos transplantados com PE Dll4+/- eram mais instáveis embora existissem em maior numero. De facto análise histológica revelou que estes vasos apresentam menor expressão de fibronectina e menor cobertura com pericitos (células vasculares musculares), confirmando que a activação da via Notch-Delta em CE via Dll4 expresso por PE é essencial para a estabilização da vasculatura tumoral nascente e consequentemente para o crescimento tumoral. Finalmente para validar o efeito de Dll4 expresso nos PE na estabilização da vasculatura tumoral transplantámos ratinhos com PE com sobre-expressão de Dll4 e analisámos a vasculatura tumoral. De facto observámos que embora o crescimento tumoral não tenha sido alterado, assim como o numero total de vasos formados, a quantidade de fibronectina assim como o calibre dos vasos tumorais era superior nos ratinhos transplantados com PE com sobre-expressão de Dll4 do que nos ratinhos transplantados com PE normais, confirmando que a activação da via Notch-Delta em CE via Dll4 expresso em PE conduz à estabilização vascular. Concluindo, os dados apresentados no capitulo 5 descrevem o papel essencial de Dll4 expresso por PE na activação da via Notch-Delta em CE, conduzindo ao aumento de proteínas da matriz extracelular assim como de componentes das junções celulares entre células endoteliais essenciais para a estabilização e funcionalidade da vasculatura tumoral. Finalmente no capítulo 6 investigámos a contribuição de outras populações celulares derivadas da medula óssea para a progressão tumoral. Para este efeito utilizámos ratinhos nos quais transplantámos medula óssea proveniente de ratinhos actina-GFP, pelo que obtivemos ratinhos nos quais todas as células na medula expressavam GFP. Posteriormente inoculámos estes ratinhos com tumores derivados de linhas celulares isoladas de carcinoma de cólon (HCT15) e procedemos à analise histológica dos tumores, após estes crescerem durante 1 ou 4 semanas (tumores precoces e tardios). Análise histológica revelou que em tumores tardios há uma contribuição significativa de células derivadas da medula óssea (GFP+) e que estas células expressam essencialmente marcadores mielóides (CD11b). Inesperadamente constatámos que nas regiões tumorais onde as células derivadas da medula óssea se acumulavam, as células tumorais perdiam a expressão de marcadores epiteliais (nomeadamente a E-Caderina), adquirindo a expressão de marcadores mesenquimatosos (nomeadamente Vimentina) sugerindo que estas células tumorais estavam em transição epitelial-mesenquimal (TEM). Para confirmar a suspeita que células derivadas da medula óssea poderiam estar a induzir TEM em células tumorais de carcinoma do cólon, procedemos a co-culturas in vitro com células derivadas da medula associadas ao tumor com células do carcinoma do cólon. Surpreendentemente verificámos que células derivadas da medula óssea associadas ao tumor tinham a capacidade de induzir TEM em células tumorais e ainda que essa capacidade dependia da activação da via Notch-Delta nas células tumorais. Após uma caracterização detalhada da população de células derivadas da medula associadas ao tumor capazes de induzir TEM nas células tumorais, definimos esta população como sendo constituída por macrófagos associados a tumor ou MAT (CD11b+ F4/80+) que expressava o ligando da via Notch Jagged-2. Experiências de co-cultura in vitro desta população com células tumorais confirmaram que esta população consegue via Jagged-2 induzir a activação da via Notch-Delta promovendo TEM nas células tumorais sendo essencial para a progressão tumoral. Em conjunto os dados apresentados no capitulo 6 sugerem que durante a progressão tumoral, populações de células derivadas da medula podem de facto modular propriedades das células tumorais induzindo TEM e consequentemente induzindo um fenotipo mais invasivo e potencialmente mais metastático nos tumores primários. Em conclusão, o trabalho realizado neste projecto de doutoramento permitiu atribuir à via Notch- Delta e também as interacções entre integrinas e proteínas da matrix extracelular um papel essencial na comunicação entre populações celulares derivadas da medula óssea, em particular PE e MAT, e componentes celulares e da matrix extracelular presentes durante a cicatrização de feridas ou durante a progressão tumoral, sugerindo assim o uso destas vias e destas populações como potenciais alvos terapêuticos.
Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, SFRH / BD / 31381 / 2006)
Tomaz, Diogo Miguel Rosa. "Insights on the function of MyT1L in Ascl1 mediated neuronal reprogramming". Master's thesis, 2015. http://hdl.handle.net/10451/25009.
Pełny tekst źródłaPrevious studies have accomplished direct lineage reprogramming of many cell types to different ones by using defined combinations of transcription factors. Vierbuchen et al. showed that the combined ectopic expression of Ascl1, Brn2 and MyT1L can efficiently reprogram mouse embryonic fibroblasts (MEFs) into induced neuronal (iN) cells. In another study, Ascl1 was characterized as the main driver of this process by its activity as a pioneer factor. Previous experiments with Ascl1 single-reprogramming showed that Ascl1 is capable of converting MEFs into iN cells, although the reprogrammed neurons show low levels of maturity. On the other hand, several reprogramming experiments associated MyT1L with a late function by promoting the maturation of iN cells, but not with the capacity to reprogram MEFs into iN cells like Ascl1. However, a mechanistic characterization of MyT1L still needed to be clarified. MyT1L is a member of the MYT1 family, also including MyT1 and MyT3, all zinc-finger transcription factors. Recent work from our laboratory showed that MyT1, a paralog of MyT1L, acts as a repressor of Notch targets, in neural stem/progenitor cells. One of those identified Notch targets was Hes1. In neurogenesis, the Notch pathway induces the activation of the Notch downstream effector Hes1. Hes1 functions as a repressor of proneural genes, such as Ascl1, as well as their target genes. Similar to the neurogenesis context, it is tempting to speculate that in Ascl1-dependent reprogramming Hes1 may be functioning as a repressor of Ascl1 targets in MEFs. The goal of this work is to investigate the role of MyT1L and the Notch signalling pathway in Ascl1-dependent reprogramming of MEFs into iN cells. To evaluate Notch activity in MEFs, I compared the expression levels of two Notch targets, Hes1 and Hes5, between MEFs and neural stem cells. I show that Hes1 expression in MEFs is similar to Hes1 expression in neural stem cells. Hes5 expression is substantially lower in MEFs than in neural stem cells. This suggests low Notch activity in MEFs as previous studies identify the Hes5 promoter as readout of Notch activation. Chemical inhibition of Notch signalling did not alter the Hes1 expression in MEFs. I show that the proximal promoter region of Hes1, that mediates regulation by Notch and MyT1 in neural stem/progenitor cells, is accessible to transcription factor binding in MEFs. Additionally, I show that the Notch effector transcription factor RBPJ binds to the Hes1 proximal promoter region. These results in conjunction with the high levels of Hes1 expression in MEFs suggest that the Notch pathway is not the main regulator of Hes1 expression in these cells. Work from our laboratory showed that, in transcriptional assays, MyT1 represses the Hes1 proximal promoter activity, after Notch activation. Here I show that Myt1L can counteract the Notch activation of the Hes1 promoter in a transcriptional assay. The Hes1 proximal promoter contains three consensus binding sites of the MYT1 family suggesting that MyT1L regulates the Hes1 promoter by direct DNA-binding to this region. Using chromatin immunoprecipitation assay against a tagged version of Myt1L, I show that MyT1L directly binds to the Hes1 promoter region two days after being ectopically expressed in MEFs. Finally I started the optimization of the Ascl1-depedent reprogramming protocol in MEFs. I did observe reprogrammed iN cells after single or combined expression of Ascl1 or Ascl1/MyT1L, respectively. However, the percentage of iN cells to total number of cells in culture revealed low reprogramming efficiency. Additionally, iN cells observed show low levels of maturity in single or combined expression of Ascl1 or Ascl1/MyT1L. Nonetheless, this protocol still needs further improvement. Overall, my findings indicate that MyT1L binds to DNA in MEFs at early stages of the Ascl1-dependent reprogramming protocol. The results suggest that MyT1L represses the expression of Hes1 in Ascl1-dependent reprogramming and this may lead to the activation of the Ascl1 targets that promote iN cell maturation.
Vários estudos têm vindo a demonstrar que a reprogramação directa de uma linha celular somática para outros tipos celulares pode ser alcançada através da expressão ectópica de factores de transcrição. De facto, trabalho desenvolvido por Yamanaka e Takahashi (Takahashi and Yamanaka, 2006) demonstrou que a adição de quatro factores de transcrição é suficiente para reprogramar fibroblastos em células estaminais pluripotentes. Este estudo estabeleceu uma mudança de paradigma na forma como olhamos para o programa de transcrição e a plasticidade do genoma da célula. A reprogramação de um tipo celular a partir de células estaminais ou somáticas oferece um enorme potencial de aplicações na medicina regenerativa e na terapia de doenças. A reprogramação de fibroblastos em células neuronais foi alcançada através da adição de três factores de transcrição, Brn2, Ascl1 e MyT1L (BAM) (Vierbuchen et al., 2010), em que o Ascl1 é o factor de transcrição principal, uma vez que, sozinho, é capaz de converter os fibroblastos em neurónios, apesar de apresentarem baixa complexidade morfológica e capacidade funcional (Chanda et al., 2014). Curiosamente, Ascl1 funciona como um factor pioneiro, sendo capaz de se associar às regiões genómicas, independentemente de se encontrarem em locais de cromatina acessível (Raposo et al., 2015; Wapinski et al., 2013). O Ascl1 é um factor de transcrição proneural que actua como um regulador da diferenciação neuronal no cérebro de mamíferos (Bertrand et al., 2002; Wilkinson et al., 2013). No processo de neurogénese, Ascl1 actua principalmente como um activador de transcrição sobre uma grande variedade de genes que controlam vários passos da neurogénese, como a proliferação das células estaminais neurais/progenitoras, migração celular e crescimento das neurites (Borromeo et al., 2014; Castro et al., 2011, 2006). Recentemente, Ascl1 foi identificado como um factor de transcrição capaz de modificar a cromatina dos seus genes alvos, durante a neurogénese, promovendo a acessibilidade da cromatina para Ascl1 (Raposo et al., 2015). Durante a neurogénese, o Ascl1 é regulado pela via de sinalização Notch. No desenvolvimento do sistema nervoso, a via de sinalização Notch é responsável pela manutenção da população de células estaminais neuronais/progenitoras, através da inibição da diferenciação neuronal. A proteína Notch activa a expressão de genes repressores da neurogénese, dos quais se incluem os genes Hes1 e Hes5. Os genes Hes1/5 actuam como repressores da transcrição, sendo um dos seus alvos Asc1. Adicionalmente, resultados anteriores do nosso laboratório demonstraram que Hes1 inibe a expressão dos genes alvos de Ascl1. Recentemente, estudos realizados no nosso laboratório revelaram que um alvo de Ascl1 durante a neurogénese, o factor MyT1, tem um papel importante em bloquear a expressão de genes alvo de Notch, em particular o Hes1. MyT1 é um factor de transcrição da família MYT1, que é composta por outros 2 factores de transcrição: MyT1L e MyT3. Os membros desta família são altamente homólogos, particularmente nos domínios proteicos zinc-fingers, responsáveis pela ligação ao ADN (Bellefroid et al., 1996; Kim et al., 1997). Todos os membros da família MYT1 são expressos no desenvolvimento do sistema nervoso central. Em particular, MyT1L é expresso exclusivamente em neurónios e é detectado tanto na neurogénese como na fase adulta do organismo (Matsushita et al., 2014). Na reprogramação neuronal, o MyT1L tem sido utilizado em vários protocolos para promover um aumento da complexidade morfológica e das propriedades electrofisiológicas das células neuronais (Ambasudhan et al., 2011; Pang et al., 2011; Vierbuchen et al., 2010; Yoo et al., 2011). Considerando os resultados do nosso laboratório em que se demonstrou que MyT1 é um repressor da expressão de Hes1, colocámos a hipótese de que MyT1L pudesse também actuar na reprogramação de células neuronais como um repressor da expressão de Hes1. O trabalho desta dissertação teve como objectivo investigar o papel do MyT1L e da via de sinalização Notch na reprogramação de fibroblastos em células neuronais promovida por Ascl1. Em primeiro lugar analisei a actividade da via de sinalização Notch nos fibroblastos através da análise de expressão de dois genes alvos de Notch, Hes1 e Hes5. A expressão destes genes foi comparada entre fibroblastos e células NS-5, uma linha de células estaminais neurais com elevada actividade da via Notch. Os resultados demonstraram que o nível de expressão de Hes1 em fibroblastos e em células NS-5 são semelhantes. No entanto, após inibição química da actividade de Notch não observei nenhuma alteração na expressão de Hes1, o que sugere que a via sinalização Notch não é a principal reguladora de Hes1 nos fibroblastos. Contrariamente a Hes1, a expressão de Hes5 é consideravelmente inferior nos fibroblastos em relação às células NS-5. Por outro lado, a inibição química da actividade de Notch levou a uma diminuição da actividade da expressão de Hes5, indicando que Hes5 é regulado por Notch em fibroblastos. Em segundo lugar, investiguei qual o possível papel de MyT1L na regulação da expressão de Hes1 em fibroblastos. Analisei que a região promotora de Hes1, onde anteriormente o nosso laboratório demonstrou haver associação de MyT1 em células neurais/progenitoras estaminais, se encontra com cromatina acessível à associação de factores de trancrição, em fibroblastos. Também analisei a actividade de MyT1L nessa região promotora de Hes1 através de um ensaio de transcrição com a co-expressão de MyT1L e receptor Notch1 activado. Esta análise revelou que o MyT1L é um repressor do promotor de Hes1, dependente da activação pela via Notch. Esta região promotora de Hes1 contém três sítios de ligação ao ADN comum à família MYT1. De facto, os resultados da imunoprecipitação da cromatina extraída de fibroblastos revelaram uma associação do MyT1L ectopicamente expresso na região promotora de Hes1. Hes1 é um factor repressor da expressão de Ascl1 e dos seus genes alvos. De facto, é possível que, no contexto da reprogramação promovida por Ascl1, os níveis de Hes1 endógeno possam estar a reprimir a expressão dos genes alvos de Ascl1. Esta repressão de Hes1 pode explicar o baixo nível de diferenciação das células neuronais observado na reprogramação com apenas sobre-expressão de Ascl1. De facto, MyT1L foi descrito como tendo um papel importante no desenvolvimento de características de neurónios morfologicamente complexos. Assim é possível que, o MyT1L promova indirectamente a expressão dos genes alvos de Ascl1, através da inibição da expressão de Hes1. Deste modo, o protocolo de reprogramação de fibroblastos em células neuronais mediado por Ascl1 foi optimizado, com o objectivo de investigar a interacção de MyT1L e Hes1, no contexto desta reprogramação. Infelizmente, o protocolo não foi estabelecido com sucesso, devido, a uma elevada taxa de morte célular. Apesar da elevada morte celular, consegui obter células neuronais, a partir de fibroblastos, com apenas a sobre-expressão de Ascl1 em co-expressão com MyT1L. As células neuronais obtidas com estas duas condições apresentavam baixos níveis de complexidade morfológica. Em conclusão, demonstrei que MyT1L encontra-se associado à região promotora de Hes1 quando expresso de modo ectópico em fibroblastos e que Myt1L actua como um repressor da actividade da região promotora de Hes1 promovida pela activação da via de sinalização Notch. A junção destes dois resultados sugere que a inibição da expressão de Hes1 se reflicta nos fibroblastos após sobre-expressão de Myt1L. A função de MyT1L pode incluir a repressão da expressão de Hes1, promovendo a activação de genes alvos de Ascl1 responsáveis pela maturação neuronal. Experiências futuras que demonstrem uma diminuição da expressão de Hes1 após a sobre-expressão de MyT1L em fibroblastos devem ser consideradas. Adicionalmente, futuras experiências devem também focar-se na descoberta de outros genes alvo de MyT1L em fibroblastos que possam ter um papel importante na reprogramação promovida por Ascl1 de fibroblastos em neurónios.
The studies presented in this thesis were carried out at the Instituto Gulbenkian Ciência (IGC) at the Molecular Neurobiology Laboratory, Oeiras. The present study was supported by Fundação Calouste Gulbenkian.
Mathieu, Mélissa. "Étude de la différenciation des lymphocytes T CD8+ effecteurs et mémoires : rôle de la cellule présentatrice d’antigène et de la voie de signalisation Notch". Thèse, 2014. http://hdl.handle.net/1866/11791.
Pełny tekst źródłaFollowing an infection with a pathogen, antigen-specific naive CD8+ T lymphocytes (Tn) will proliferate and differentiate into effector (Te) cells. Those Te cells will produce different cytokines and acquire a cytotoxic activity, leading to pathogen clearance. Only 5 to 10 % of Te cells will survive and differentiate into memory CD8+ T lymphocytes (Tm) able to respond rapidly following a second encounter with the same pathogen, contributing to the success of vaccination. However, the mechanisms regulating Te and Tm cells development remain incompletely understood. To better understand the signals required for CD8+ T lymphocytes during an immune response, we proposed two hypotheses. First, we propose that different antigen presenting cells (APCs) can deliver different signals to CD8+ T lymphocytes at the time of priming leading to different outcome. Given their potential for use in immunotherapy, we compared the ability of CD40 activated B lymphocytes (CD40-B) and dendritic cells (DCs) to activate CD8+ T lymphocytes. We have shown that CD40-B cell immunisation leads to an effector response but very few Tm cells are generated compared to DC immunisation. The Te cells generated following CD40-B cell immunisation are functional because they secrete cytokine, are cytotoxic and control a Listeria monocytogenes (Lm) infection. We propose that CD40-B cells secrete less cytokines and interact during shorter period of time with the CD8+ T lymphocytes, without engulfment, contributing to the decreased Tm generation observed following immunisation with CD40-B cells. Second, among the signals provided by APC at the time of CD8+ T lymphocyte priming, we have hypothesised that the Notch signalling pathway influences Te and Tm cell differentiation by inducing a particular genetic program. Using an in vitro system, we first studied the role of the Notch signalling pathway in the hours following CD8+ T lymphocyte priming. We demonstrated that Notch signalling directly regulates PD-1 expression. Then, studying mice where Notch1 and Notch2 receptor genes are deleted only in mature CD8+ T lymphocytes, we characterised the role of the Notch signalling pathway on Te and Tm differentiation during an immune response. Our results show that following Lm infection or a DC immunisation, the Notch signalling pathway promotes the differentiation of short lived effector cells Te cells (KLRG1highCD127low) meant to die by apoptosis. However, the Notch signalling pathway did not influence the generation of CD8+ Tm cells. Most interestingly, IFN- regulation by the Notch signalling pathway depends on the activation context. Indeed, following Lm infection, lack of Notch receptors does not impact IFN- secretion by Te cells while it is significantly decreased following a DC immunisation suggesting a context dependant role for the Notch signalling pathway. Our findings provide a better understanding of the key signals provided by APC as well as the Notch signalling pathway, and thus the molecular mechanisms leading to CD8+ lymphocyte effector and memory generation which is crucial as this knowledge may ultimately lead to improved vaccination.