Rozprawy doktorskie na temat „Kinase”
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Gopalbhai, Kailesh. "Régulation négative des MAP kinase kinases par phosphorylation /". [Montréal] : Université de Montréal, 2003. http://wwwlib.umi.com/cr/umontreal/fullcit?pNQ92759.
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Thèse (Ph.D.) -- Université de Montréal, 2004."Thèse présentée à la Faculté des études supérieures en vue de l'obtention du grade de Philosophiae Doctor en Pharmacologie" Version électronique également disponible sur Internet.
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Sengar, Ameet Singh. "Mkh1, a novel MAP kinase kinase kinase in Schizosaccharomyces pombe". Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1997. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk2/ftp04/mq20852.pdf.
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Gatesman, Ammer Amanda. "PKCalpha direct cSrc activation and podosome formation through the adaptor protein AFAP-110". Morgantown, W. Va. : [West Virginia University Libraries], 2004. https://etd.wvu.edu/etd/controller.jsp?moduleName=documentdata&jsp%5FetdId=3762.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
Thesis (Ph. D.)--West Virginia University, 2004Title from document title page. Document formatted into pages; contains vii, 350 p. : ill. (some col.). Vita. Includes abstract. Includes bibliographical references (p. 322-346).
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Nadeau, Philippe. "Régulation de la MAP3-kinase Ask1 par oxydoréduction". Doctoral thesis, Université Laval, 2009. http://hdl.handle.net/20.500.11794/21223.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
La MAP3-kinase Askl est un point de convergence dans la réponse cellulaire apoptotique induite par le stress oxydant chez les cellules de mammifères. Par contre, le mécanisme par lequel le stress oxydant régule l'activité d'Askl demeure incompris. Plusieurs protéines qui, comme Askl, sont impliquées dans les voies de signalisation induites par le stress oxydant, sont régulées par des mécanismes d'oxydoréduction. La présente étude révèle que le H2O2 induit l'oxydoréduction de plusieurs résidus cysteines d'Askl. Une exposition des cellules au H2O2 induit rapidement la formation d'oligomères covalents d'Askl par l'intermédiaire de ponts disulfures. Sept cysteines sensibles à l'oxydation ayant le potentiel de participer à la formation de ces liens disulfures et de ces oligomères covalents ont été identifiées. Bloquer la formation de ces derniers avec un mutant où toutes les cysteines sensibles à l'oxydation sont mutées permet de bloquer l'apoptose dépendante d'Askl en réponse au H2O2. Parmi les cysteines sensibles à l'oxydation, la cysteine 250 est essentielle pour qu'Askl régule la phosphorylation de JNK en réponse au H2O2. Les résultats montrent aussi que la régulation des résidus cysteines d'Askl implique diverses activités thiol-réductases de la Trxl. Tout d'abord, une activité thiol-réductase rapide et transitoire de la Trxl sur les oligomères covalents d'Askl permet à la Trxl de les réduire et de ramener Askl à son état initial. Dans des cellules non stimulées, une activité thiol-réductase plus lente ou plus stable de la Trxl lui permet de s'associer à la cysteine 250 d'Askl et de réguler négativement la kinase. En effet, à la suite d'une stimulation au H2O2, cette activité de la Trxl est perdue ce qui permet une exposition de la cysteine 250 d'Askl et l'activation de JNK. Les cysteines d'Askl sensibles à l'oxydation ne régulent pas la phosphorylation et l'activation d'Askl, ce qui suggère qu'elles seraient plutôt essentielles à la signalisation régulée par Askl suivant son activation. Enfin, le domaine coil dans le domaine C-terminal d'Askl est aussi essentiel à la régulation de la kinase par le H2O2. Cette thèse propose donc un nouveau mécanisme de régulation d'Askl par le stress oxydant, principalement par l'oxydoréduction de certains de ses résidus cysteines, et enrichie le modèle par lequel la Trxl régule négativement Askl.
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Jean, Steve. "Caractérisation fonctionnelle de nouveaux partenaires protéiques des kinases xPAK1 et xMLK2 chez Xenopus laevis". Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25722/25722.pdf.
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Vaglio, Philippe. "Etude de la relation structure-fonction de la protéine kinase CK2 par mutagenèse dirigée des résidus basiques conservés". Montpellier 1, 1996. http://www.theses.fr/1996MON1T029.
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Wan, Omar Wan Bayani. "Studies into interactions between MAP kinase and MAP kinase kinase proteins of Arabidopsis". Thesis, Heriot-Watt University, 2011. http://hdl.handle.net/10399/2490.
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The Arabidopsis thaliana genome contains genes encoding 10 MAP kinase kinase (MKK) and 20 Map kinase (MAPK) proteins, however the exact relationship between upstream MKK activators and downstream MAPK protein partners has not fully elucidated. In this study, the yeast two -hybrid system was used to identify protein-protein interactions between all Arabidopsis MAPKs and MKKs. In the yeast two- hybrid assay, the result from the qualitative β-galactosidase filter assay showed that 6 MAPK proteins interacted with 6 MKK proteins. Quantitative β-galactosidase liquid assay was used to confirm the interactions between MAPK and MKK in yeast. The BiFC approach was used to test whether MKK1, MKK2 and MKK6 associated with MPK4 and MPK11 in vivo in Arabidopsis. In these assays, GFP fluorescence was observed in the protoplasts suggesting that MKK1, MKK2 and MKK6 interact with MPK4 and MPK11, respectively. However, evidence of reciprocal interaction was only seen with the combination of MKK1 and MPK11, and with MKK2 and MPK11. This contrasts with the findings seen using the yeast two-hybrid system in which reciprocal activity was seen for all combinations of MKK1, MKK2 or MKK6 with MPK4 or MPK11. Furthermore, the negative controls for BiFC (spilt GFP with no fusions partners) gave strong fluorescence, indicative of non-specific interaction between the split GFP. Since MPK4 is known to be an important regulator of plant stress responses, MPK11 (similar in sequence to MPK4) might also be involved in such responses. Therefore, a knock-out allele of MPK11 was obtained and analysed on a molecular and physiological basis. Seed germination experiments showed that no differences between the germination of the wildtype and the mpk11 mutant by increasing levels of salt however seed germination experiments showed that seedling of mpk11 mutant are hypersensitive to ABA during germination. To aid further understanding on the function of MPK11 and the relationship between MPK11 and interacting activators, HA-epitope tagged cDNA for MPK11 was introduced into Arabidopsis Columbia Wildtype, mpk11, mkk1 and mkk2. Results from Western blot analysis indicated that several lines from each transformant produced detectable levels of MPK11-HA, thus generating tools for further analysis
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Mazharian, Alexandra. "Rôle complémentaire des MAP Kinases ERK2, p38 et JNK1 dans l'activation plaquettaire". Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077217.
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Les MAP Kinases (MAPK) sont des sérine/thréonine kinases regroupées en trois familles: les «Extracellular signal-RegidatedKinases» (ERKs), les p38MAPKs et les «c-jun N-terminal Kinases» (JNKs). L'étude des MAPK dans les plaquettes présente un double intérêt. Elle permet d'identifier de nouvelles cibles et de nouveaux rôles notamment dans l'hémostase et la thrombose. Dans la première étude, nous montrons un rôle complémentaire d'ERK2 et p38 dans l'adhérence des plaquettes sur une matrice de collagène, En effet, ERK2 dépend des taux de cisaillement et de l'interaction vWF/GPIb. En revanche p38, sous le contrôle des récepteurs du collagène (α2β1 et GPVI), est indépendante des taux de cisaillement. La deuxième étude montre un rôle d'ERK2 et p38 dans l'étalement des plaquettes sur une matrice de fibrinogène induit par le récepteur PAR4 de la thrombine. L'activation de la p38 dépend du récepteur P2Y12 de l'ADP alors qu'ERK2 dépend du signal outside-in de l'intégrale αllbβ3. P38 et ERK2 jouent respectivement un rôle sur la polymérisation de l'actine et la phosphorylation de la Myosin Light Chain, toutes deux nécessaires à l'étalement. Enfin, nous montrons un rôle de JNKl dans l'agrégation et la sécrétion plaquettaires induites par le collagène. JNKl contribue à la formation du thrombus in vitro dépendant de l'activation de l'intégrine αllbβ3 et de l'interaction vWF/GPIb, et joue également un rôle dans la thrombose in vivo chez la souris. En conclusions, nos travaux ont permis d'apporter de nouvelles connaissances quant aux rôles complémentaires des MAPK dans les différentes étapes de l'activation plaquettaireThe MAP Kinases belong to a serine/threonine kinase family that include the "Extracellular signal-Regulated Kinases" (ERKs), p38MAPKs and the "c-jun N-terminal Kinases" (JNKs). The study of the MAP Kinase in platelets allows identifying new targets and new rôles in particular in the haemostasis and thrombosis. In the first study, we describe complementary roles of ERK2 and p38MAPK in platelet adhésion and spreading over a collagen matrix. The role of ERK2 is dependent of blood flow and vWF/GPIb interaction. In contrast, the role of the p38MAFK in platelet adhesion is independent of blood flow and involved the α2β1 integrin. In the second study, we show the ERK2 and p38MAPK are involved in platelet spreading on a fibrinogen matrix after PAR4 stimulation. Activation of p38MAPK, required for actin polymerization, is dependent of ADP signalling through its receptor P2Y12, In contrast, ERK2, required for Myosin Light Chain phosphorylation, is dependent on integrin αllbβ3 outside-in signalling and the Rho pathway, Both MAP Kinases act on cytoskeleton rearrangement required for platelet spreading, Lastly, we show for the first time a role of JNKl in platelet aggregation and secretion induced by low concentrations of collagen. In addition, JNKl is required for thrombus growth at high shear involving activation of integrin αllbβ3 and vWF/GPIb interaction. Finally, in vivo, JNKl is involved in a mouse model of arterial thrombosis. In conclusions, our works bring us new knowledge as for the roles of MAP Kinases ERK2, p38MAPK and JNKl in the different stages of platelet activation
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Beggs, James. "The MAP-kinase interacting kinases (Mnks) as targets in cancer". Thesis, University of Southampton, 2015. https://eprints.soton.ac.uk/390651/.
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The Mnks appear to play an important role in tumour development, but are not essential for normal cell growth and development. This makes them attractive targets for designing anti-cancer treatments. The Mnks are directly downstream of the RAS-RAF-MEK-ERK pathway, a pathway that is frequently overactive in cancer cells. The Mnks bind to eIF4G, which is part of the translation initiation complex, and are the only kinases known to phosphorylate the 5’ mRNA cap-binding protein eIF4E. Despite numerous studies linking this phosphorylation event to cancer, its precise role in cancer remains unclear. The lack of progress in developing our understanding of the role the Mnks is largely down to the absence of a selective and potent Mnk inhibitor. Presented here are the results of experiments carried out using a novel Mnk inhibitor, Mnk-I1. These results are also backed up with the results of experiments using cells – Mouse Embryonic Fibroblasts (MEFs) - that have had the Mnks genetically knocked out. What the results show, is that Mnk kinase activity appears to play a key role in cancer cell migration. The mechanism appears to involve an important role for Mnk kinase activity in the translation of vimentin mRNA into protein and in preventing the degradation of the vimentin protein: an established marker of cells that have undergone Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT) and become motile. The results presented in the last chapter focus on whether the Mnks might be suitable targets for overcoming acquired resistance to the MEK inhibitor AZD6244. In the context of a BRAF600E amplification, Mnk-I1 appeared to have a small antiproliferative effect in one cancer cell line tested; however, there was no effect on the proliferation of a cancer cell line with a KRAS13D amplification. Included in this set of data is an interesting effect of Mnk-I1 on increasing P-Mnk1 levels.
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Chetoui, Nizar. "Caractérisation du rôle de la protéine kinase MEK1 dans les voies de transduction des MAP kinases". Thesis, Université Laval, 2005. http://www.theses.ulaval.ca/2005/22589/22589.pdf.
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Le développement tumoral nécessite une dérégulation des contrôles normaux de la prolifération et de la différenciation cellulaires. Il est bien connu que la voie de signalisation ERK/MAP kinase est impliquée dans ces processus de régulation cellulaire. De plus, un rôle essentiel dans la transformation cellulaire est attribué à MEK1 qui est un élément central de cette voie. Une meilleure compréhension de l’implication de MEK1 dans les voies de transduction devrait donc nous permettre de mieux comprendre le developpement cellulaire et la transformation morphologique. Mes travaux de recherche tentent d’élucider les mécanismes de régulation des protéines kinases MEK1 et MEK2 dans le but de mieux comprendre leur divergence fonctionnelle et leur implication dans les différentes réponses cellulaires. Ainsi, l’étude de la voie ERK/MAPK chez les fibroblastes embryonnaires mutants pour le gène Mek1 indique que la transduction du signal amorcée par un neuropeptide, la bombésine, passe spécifiquement par MEK1 et serait indépendant de MEK2. La région C-terminale de MEK1 semble médier la spécificité de la réponse à la bombésine. Le domaine MSS, qui est une insertion d’une séquence riche en proline unique à MEK1 et MEK2 pourrait être la clef de cette réponse spécifique. En outre, nos travaux de délétion et d’interactions protéiques suggèrent qu’une variation de la conformation de la région C-terminale de MEK1 pourrait avoir lieu entre l’état inactif et l’état actif de ces MAPKKs. En absence d’activation, la région en caboxy du domaine kinase semble interagir avec la boucle d’activation se trouvant au cœur du domaine kinase. Cette interaction intramoléculaire serait dépendante de l’état de phosphorylation de MEK1. Par contre, la région en carboxy ne semble pas être un domaine d’autoinhibition ou un pseudo substrat puisque sa délétion ne met pas la protéine dans un état constitutivement actif. Ainsi, il est possible que cette région soit essentielle du point de vue structural pour permettre, en fonction de son activité, la régulation des interactions de MEK1 (ou MEK2) avec ses activateurs, substrats ou protéines d’échafaudage.
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Samuels, Ivy S. "The roles of ERK₁ and ERK₂ MAP kinase in neural development and disease". Cleveland, Ohio : Case Western Reserve University, 2008. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc%5Fnum=case1214495630.
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Waskiewicz, Andrew Jan. "Mitogen-activated protein kinase : evolutionary conservation and activation of downstream kinases /". Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 1996. http://hdl.handle.net/1773/9216.
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Simard-Bisson, Carolyne. "Rôles de la "Dual leucine zipper-bearing Kinase" dans la réorganisation des microtubules et la différenciation des kératinocytes humains". Doctoral thesis, Université Laval, 2015. http://hdl.handle.net/20.500.11794/28201.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
La fonction barrière de la peau dépend en grande partie d’une différenciation appropriée des kératinocytes épidermiques. Au cours de ce processus, de nombreux changements ont lieu dans ces cellules tels que la diminution de la prolifération, le remodelage du cytosquelette, des changements dans l’expression génique, la dégradation du noyau et des organites de même que la formation d’une structure bien particulière : l’enveloppe cornée. Il est important que de tels évènements soient régulés de façon adéquate puisqu’un débalancement au sein de ces derniers peut mener à l’apparition de conditions pathologiques. La Dual Leucine zipper-bearing Kinase (DLK) est une Mitogen-Activated Protein Kinase Kinase Kinase dont l’expression est très forte au niveau de la couche granuleuse, soit la dernière couche de cellules vivantes avant la couche cornée de l’épiderme. Des études précédentes ont révélé que la surexpression de la DLK dans des kératinocytes en culture avait pour effet d’induire la différenciation terminale. Toutefois, les mécanismes par lesquels la DLK régule ce processus restent encore méconnus faisant en sorte que l’objectif général de cette thèse consiste à mieux les définir. L’hypothèse à la base de ces travaux est que la DLK est requise pour la différenciation des kératinocytes et que celle-ci y participe en favorisant la stabilisation des microtubules de même que l’expression ou l’activité de facteurs de transcription impliqués dans ce processus. Dans un premier temps, un modèle de peau reconstruite in vitro dans lequel l’expression de la DLK a été réduite par interférence à l’ARN a été développé. Il a été noté que la diminution de la DLK avait pour effets d’affecter la distribution de protéines de l’enveloppe cornée telles que la filaggrine et la transglutaminase 1 de même que d’inhiber la formation des couches granuleuse et cornée. Des analyses en immunofluorescence et en microscopie électronique ont permis d’observer des défauts au niveau des jonctions serrées et des desmosomes dans les peaux sous-exprimant la DLK révélant un rôle de cette kinase dans le bon maintien de ces deux types de jonctions cellulaires. L’impact de la DLK sur les microtubules a été étudié dans des kératinocytes en culture transduits à l’aide de vecteurs adénoviraux menant à la surexpression de la DLK de même que dans les peaux reconstruites présentant une expression réduite de cette kinase. Ces études ont permis de conclure que la DLK était non seulement en mesure d’induire la réorganisation et la stabilisation des microtubules en périphérie cellulaire, mais que celle-ci était également requise à la réalisation de ces processus. Afin de mieux décrire les mécanismes par lesquels la DLK assure la réorganisation des microtubules en périphérie cellulaire, les effets de la surexpression ou de la sous-expression de la DLK sur les protéines LIS1 et HSP27 (pour Heat shock protein 27 kDa), des régulateurs de la distribution des microtubules, ont été étudiés. Ces analyses ont permis de définir la DLK en tant qu’élément nécessaire à la bonne distribution en périphérie cellulaire de LIS1 et HSP27. Des études plus poussées ont révélé que l’expression de la DLK dans des kératinocytes en culture était non seulement en mesure d’induire la redistribution en périphérie cellulaire d’HSP27, mais également l’insolubilisation et la phosphorylation de cette protéine de choc thermique. Il a également été démontré que l’ensemble de ces processus dépendaient de l’activité de ERK (pour Extracellular-signal Regulated Kinase). Dans le but de définir l’importance des microtubules dans le processus de différenciation des kératinocytes, des peaux reconstruites ont été traitées avec un agent induisant la dépolymérisation de cette composante cytosquelettique soit plus précisément le nocodazole. Un tel traitement produit un phénotype similaire à celui des peaux reconstruites sous-exprimant la DLK suggérant les microtubules comme d’importants effecteurs de la différenciation induite par la DLK. Dans la perspective de mieux définir les effets de la DLK sur la signalisation cellulaire et l’expression génique globale, nous avons eu recours à l’étude de la phosphorylation d’importants médiateurs de la signalisation moléculaire intracellulaire de même qu’à des analyses en micropuce à ADN d’échantillons provenant de peaux reconstruites sous-exprimant la DLK. Cette démarche a permis de révéler une hausse de la phosphorylation de ERK1/2, de JNK1/2/3, de GSK3 (pour Glycogene Synthase Kinase 1) et du récepteur à l’EGF (pour Epidermal Growth Factor). Les analyses en micropuce à ADN ont permis de révéler une réduction dans l’expression de nombreux gènes impliqués dans la formation de l’enveloppe cornée. Finalement, la réduction de c-Jun et de C/EBPα a pu être observée dans les noyaux de peaux reconstruites sous-exprimant la DLK révélant ainsi l’importance de cette kinase dans la régulation de ces facteurs de transcription dans un contexte de différenciation des kératinocytes. Globalement, nos travaux montrent que la DLK est requise pour la différenciation des kératinocytes et que celle-ci y contribue en assurant la réorganisation des microtubules en périphérie cellulaire, la consolidation des desmosomes et des jonctions serrées de même la régulation positive des facteurs c-Jun et C/EBPα.Skin barrier function greatly depends on proper keratinocyte differentiation in the epidermis. During this process, many changes occur within the cell such as decrease in cell proliferation, cytoskeleton reorganization, changes in gene expression, nucleus and organelles elimination as well as cornified envelope formation. Keratinocyte differentiation must be finely orchestrated since misregulation of this process may lead to pathological conditions. The Dual Leucine zipper-bearing Kinase (DLK) is a Mitogen-Activated Protein Kinase Kinase Kinase showing a strong expression in the granular layer, the last layer composed of living cells before reaching the cornified layer. Previous studies revealed DLK capacity to induce keratinocyte terminal differentiation process. However, how DLK promotes such an event remains unknown. The main objective of this thesis is to identify mechanisms and potential effectors of the DLK-induced keratinocyte differentiation. Our hypothesis is that DLK is required for keratinocyte differentiation by promoting microtubule stabilization as well as the expression or the activity of transcription factors involved in this process. In order to test our hypothesis, a tissue-engineered skin (TES) model with a reduced DLK expression was produced using a RNA interference approach. Impaired distribution of cornified envelope proteins such as filaggrin and transglutaminase 1 as well as reduced granular and cornified layers were observed in TES with reduced DLK expression. In those samples, immunofluorescence and electron microscopy analyses pointed out desmosomal and tight junctional defects suggesting a role for DLK in the maintenance of these types of cell junctions. The impact of DLK expression on microtubules was also studied in TES with reduced DLK expression and in keratinocytes in culture overexpressing DLK following gene transduction using adenoviral vectors. These studies led to the conclusion that DLK not only promotes but is also required for microtubules reorganization and stabilization to cell periphery. To explain DLK capacity to induce such a process, effects of DLK depletion or overexpression on microtubule regulators such as LIS1 and HSP27 were investigated by immunofluorescence staining. These analyses revealed that DLK induces and is required for LIS1 and HSP27 relocalization to cell periphery. In additional studies, our results show that DLK expression in normal human keratinocytes in culture not only promotes HSP27 distribution to cell periphery but also induces HSP27 insolubilization and phosphorylation in an ERK-dependent manner. In order to more precisely define the role of microtubules in keratinocyte differentiation process, TES were treated with nocodazole, a microtubule depolymerizing agent. The effect of such a treatment was to reproduce the phenotype of DLK-depleted TES suggesting that microtubules are important effectors of DLK-induced keratinocyte differentiation. In an attempt to describe the impact of DLK on global gene expression, RNA samples of DLK-depleted TES were studied using microarray analyses. This approach revealed a reduction in the expression of many genes coding for cornified envelope proteins. Reductions of c-Jun and C/EBPα immunofluorescence staining were also noted in TES with a reduced DLK expression suggesting this kinase as a c-Jun and C/EBPα regulator in the context of keratinocyte differentiation. Globally, our works show that DLK is required for keratinocyte differentiation since it promotes microtubule reorganization to cell periphery, desmosomes and tight junction consolidation as well as c-Jun and C/EBPα localization to the nucleus.
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Klaus, Anna. "Interactomique de kinases clefs du métabolisme énergétique : caractérisation d'interactions de la protéine kinase activée par l'AMP et de la créatine kinase". Grenoble, 2010. http://www.theses.fr/2010GRENV063.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
A key property of complex biological systems is the presence of interaction networks crucial for all levels of cellular function, including the regulation of cellular energy. Two enzymes take center stage in the regulation of cellular and whole-body energy metabolism. Creatine kinase (CK) functions as an intracellular energy storage and transport system playing a crucial role in the acute response to increasing energy demands. AMP-activated protein kinase (AMPK) regulates cellular and whole-body energy delivery and consumption. We first applied an original cytosolic Y2H screen to identify new protein-protein interactions of cytosolic brain type CK (BCK) and AMPK in human brain. Various interaction candidates were identified, among them vesicle associated membrane proteins (VAMPs) interacting with both kinases. AMPK-VAMP interaction was confirmed by co-immunoprecipitation from synaptic vesicles, but did not lead to VAMP phosphorylation, suggesting that VAMP rather recruits AMPK for a regulation of exo- and endocytotic processes. A second strategy combining a biophysical interaction screen (Surface Plasmon Resonance, SPR) with an in vitro phosphorylation assay revealed rather AMPK isoform-specific targets. One is fumarate hydratase, which is preferentially phosphorylated by AMPK221, leading to an increase in enzyme activity in vitro. Finally, one class of interaction candidates, the glutathione S-transferases GSTM1 and -P1, were characterized in detail by a panel of interactomics methods (Y2H, SPR, co-immunoprecipitation) as reliable, high affinity interactors and identified as new AMPK substrates. In case of GSTP1, this leads to an increase in its enzymatic activity, suggesting a direct role of AMPK signaling in oxidative stress defenseUne propriété clé des systèmes biologiques est la présence d'un réseau d'interactions protéiques, crucial pour toute fonction cellulaire comme par exemple la régulation du métabolisme énergétique. Deux enzymes clé impliquées dans cette régulation sont la créatine kinase (CK), dont la fonction consiste dans la gestion du stock et du transfert d'énergie, et la protéine kinase activée par l'AMP (AMPK), qui régule l'homéostasie énergétique au sein de la cellule et de l'organisme entier. Dans un premier temps un crible de double hybride en levure original fut appliqué afin d'identifier de nouveaux partenaires d'interaction de la CK cytosolique du cerveau (BCK) et de l'AMPK dans le cerveau humain. Différents candidats d'interaction furent identifiés, dont des protéines membranaires associées aux vésicules (VAMP) interagissant avec les deux kinases. L'interaction AMPK-VAMP fut confirmée par co-immunoprecipitation à partir de vésicules synaptiques, mais ne menait pas à la phosphorylation de VAMP, suggérant que VAMP recrute AMPK pour la régulation de processus d'endo- et d'exocytose. Une seconde stratégie combinant un essai d'interactions biophysique, basé sur la résonance plasmonique de surface (SPR), avec des essais de phosphorylation in vitro permit la sélection de cibles AMPK isoforme spécifique. Une de ces cibles fut la fumarate hydratase, dont la phosphorylation préférentielle par l'AMPK221 provoque une augmentation de l'efficacité enzymatique in vitro. Finalement, une classe de candidats d'interaction, les glutathion S-transférases GSTM1 et -P1, fut caractérisée en détail par un panel de méthodes d'interactomique (SPR, double hybride, co-immunoprécipitation). Cette étude les identifie comme interacteurs fiables à haute affinité ainsi que nouveaux substrats de l'AMPK. Dans le cas de GSTP1 la phosphorylation par AMPK provoque une augmentation de son activité enzymatique suggérant un rôle direct de la signalisation par AMPK dans la défense contre le stress oxydatif
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Wall, Jason A. "Mechanisms of mitogen activated kinase kinase 6 mediated cardioprotection /". Diss., Connect to a 24 p. preview or request complete full text in PDF format. Access restricted to UC campuses, 2005. http://wwwlib.umi.com/cr/ucsd/fullcit?p3185930.
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Gandhi, Payal. "Characterization of the Parkinson's disease associated protein, leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2), as a Ras-related GTPase". Cleveland, Ohio : Case Western Reserve University, 2007. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc%5Fnum=case1195574448.
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Cheng, Kwan-wai. "Regulation of equilibrative nucleoside transporter-1 by protein kinase C and mitogen-activating protein kinase /". View the Table of Contents & Abstract, 2005. http://sunzi.lib.hku.hk/hkuto/record/B31494912.
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Dennis, Patrick B. (Patrick Brian). "Autophosphorylation and Autoactivation of an S6/H4 Kinase Isolated From Human Placenta". Thesis, University of North Texas, 1994. https://digital.library.unt.edu/ark:/67531/metadc279364/.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
A number of protein kinases have been shown to undergo autophosphorylation, but few have demonstrated a coordinate increase or decrease in enzymatic activity as a result. Described here is a novel S6 kinase isolated from human placenta which autoactivates through autophosphorylation in vitro. This S6/H4 kinase, purified in an inactive state, was shown to be a protein of Mr of 60,000 as estimated by SDS-PAGE and could catalyze the phosphorylation of the synthetic peptide S6-21, the histone H4, and myelin basic protein. Mild digestion of the inactive S6/H4 kinase with trypsin was necessary, but not sufficient, to activate the kinase fully
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Nurimba, Margaret. "Roles of SR protein kinase Dsk1 and LAMMER kinase Kic1 in mRNA processing in fission yeast, Schizosaccharomyces pombe". Scholarship @ Claremont, 2014. http://scholarship.claremont.edu/scripps_theses/305.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
Protein kinases comprise a fundamental class of cell function regulators that modify proteins by transferring phosphate groups from a nucleoside triphosphate such as ATP to specific amino acid residues on target proteins, altering protein conformation, function, and activity. As such, protein kinases are major regulators of many biological processes, including gene expression, which consists of the transfer of hereditary information in two major processing steps, transcription of DNA into a complementary precursor RNA transcript (pre-mRNA) and its subsequent translated into protein by the ribosome, where it can then go on to perform various processes in the cell. One particular family of protein kinases, otherwise known as serine/arginine protein-specific protein kinases (SRPKs), is conserved throughout eukaryotes and has been shown to be important in regulating gene expression, yet their roles in the gene expression pathway have yet to be elucidated. SRPK are known to phosphorylate serine/arginine (SR) splicing factor proteins, which are involved in mRNA splice site recognition and recruitment of splicing machinery. Members of the LAMMER kinase subfamily of SRPKs have also been shown to be required for efficient pre-mRNA splicing and important for mediating cellular progression through the cell cycle.
To determine what other roles SRPKs play in mRNA processing, it is of use to study the homologous SRPK and LAMMER kinases in fission yeast, S. pombe, Dsk1 and Kic1, respectively. S. pombe provides a genetically valuable model for studying kinase function in RNA processing as both RNA processing machinery and SRPKs are conserved through higher eukaryotes. Using a novel green fluorescent protein tagging system based on properties of the MS2 bacteriophage genome, we are able to label specific mRNA transcripts of interest and visualize their locations in the cell using fluorescence microscopy. By visualizing the mRNA trafficking patterns of intron-containing and intronless mRNA transcripts, we show for the first time that deletions of the Dsk1 and Kic1 genes result in the nuclear retention of mRNA, such that Dsk1 and Kic1 are distinctly involved in mRNA export out of the nucleus.
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NADAL, WOLLBOLD FLORENCE. "Activation et regulation des map kinases extracellular signal-regulated kinase 2 et c-jun nh2-terminal kinase 1 dans les plaquettes humaines". Paris 7, 2000. http://www.theses.fr/2000PA077163.
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Les map kinases sont des serine/threonine kinases regroupees en trois familles : les extracellular signal-regulated kinases (erks), les c-jun nh2-terminal kinases (jnks) et les p38 m a p k s. Principalement activees par les recepteurs a activite tyrosine kinase, les recepteurs couples aux proteines g heterotrimeriques et les integrines, elles jouent un role important dans la proliferation, la differenciation, la migration et l'apoptose. Si l'activation, la regulation, et le role des map kinases sont tres etudiees dans les cellules proliferatrices, tres peu de travaux sont realises dans les cellules anuclees comme les plaquettes sanguines ou leur fonction est encore inconnue. Outre la presence des proteines erk1/2 et p38 m a p k dans les plaquettes humaines, nous avons mis en evidence la presence de la proteine jnk1 dans ces cellules. Nous avons par ailleurs, etudie l'activation des kinases erk2 et jnk1 dans les plaquettes humaines stimulees par la thrombine. Nos resultats montrent que l'activation de la proteine jnk1 est plus precoce que celle de erk2, et suggerent que erk2 et jnk1 ne sont pas impliquees dans les evenements precoces de l'activation plaquettaire. De plus, l'activite de erk2, retrouvee dans la fraction soluble et dans le cytosquelette, est dependante de l'activation des pkcs conventionnelles et independante de l'activation des kinases de la famille rafs. Enfin et pour la premiere fois, nos resultats mettent en evidence que dans un modele d'adhesion cellule/cellule telle que l'agregation plaquettaire, une integrine et particulierement l'integrine iib3 peut reguler negativement les map kinases erk2 et jnk1. D'autre part, nous avons montre que ces deux map kinases sont regulees positivement par le phenomene d'agitation.
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Lee, Gui-in. "Structure and dynamics of the receptor kinase interacting FHA domain of kinase associated protein kinase from arabidopsis". Free to MU campus, others may purchase, 2003. http://wwwlib.umi.com/cr/mo/fullcit?p3100058.
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Fragoso, Cristina Margarida Gomes Grangeio. "Fosforilação da HsPI3-Kinase-C2? = Phosphorylation of HsPI3-Kinase-C2?" Master's thesis, Universidade de Aveiro, 2002. http://hdl.handle.net/10773/23128.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
Mestrado em Métodos Biomoleculares AvançadosVárias isoformas da enzima fosfoinositide-3-cinase (PI3-Cinase), uma vasta família de cinases lipidicas têm nos últimos anos vindo a ser clonada e caracterizada. P13-Cinases constituem uma família de cinases conservadas durante a evolução que catalisam a adição de uma molécula de fosfato ao fosfatidilinositol e seus derivados, esta adição tem lugar no anel inositol na posição D3. P13-Cinases estão agrupadas em três classes de acordo com as moléculas que preferencialmente utilizam como substrato in vitro e de acordo com as suas características estruturais. Fosfoinositide-3-Cinase-C2a (PI3-Cinase-C2a), pertence à classe I1 de P13- Cinases, esta classe é caracterizada pela utilização de fosfatidilinositol e fosfatidilinositol-4-P como substrato in vitro. Todos os membros da classes I1 possuem no seu C-terminal um domínio C2, característico da classe. Este trabalho permitiu a identificação do local de fosforilação da HsPI3-Cinase- C2a bem como a identificação de duas cinases envolvidas na sua fosforilação. A fosforilação de HsP13-Kinase-C2a ocorre na Ser259 e este resíduo é um alvo comum de fosforilação mitótica e de fosforilação induzida por radiação UV. Durante o ciclo celular HsP13-Cinase-C2a é predominantemente fosforilada na M fase e a cinase envolvida 6 a Cdk1,após radiação UV a fosforilação é mediada pela JNK.
In recent years, a large family of Phosphoinositide-3-Kinases (PI3-Kinase) isozymes has been characterized and cloned. PI3-Kinases constitute a family of evolutionary conserved lipid kinases that catalyse the addition of a phosphate molecule to the D3 position of the inositol ring of phosphatidylinositol and its derivatives. P13-Kinases are grouped into three classes according to the molecules that they preferentially utilize as substrates and their structural characteristics. Phosphoinositide-3-Kinase-C2a (P13-Kinase-C2a) belongs to class II P13- Kinases, which are defined by their in vitro use of phosphatidylinositol and phosphatidylinositol-4-phosphate as substrates. All type II P13-Kinases contain a C2 domain at their C-terminus. This work resulted in the identification of a phosphorylation site on HsP13- Kinase-C2a as well the identification of two kinases involved in mitotic and UVinduced phosphorylation of HsP13-Kinase-C2a. The phosphorylation of HsP13- Kinase-C2a occurs in Ser259 and this serine is a common target in mitotic and UV-induced phosphorylation. We found that during the cell cycle HsP13- Kinase-C2a is predominantly phosphorylated in mitotic phase and the kinase involved is Cdkl and after UV irradiation the phosphorylation of HsPI3-Kinase- C2a is mediated by JNK.
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Dutil, Erica M. "Phosphorylation of protein kinase C by the phosphoinositide-dependent kinase /". Diss., Connect to a 24 p. preview or request complete full text in PDF format. Access restricted to UC campuses, 2000. http://wwwlib.umi.com/cr/ucsd/fullcit?p9961757.
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Fesquet, Didier. "Mécanisme d'activation de la kinase cdc2 : purification de la thréonine 161 kinase activatrice des complexes CDK-cyclines". Montpellier 1, 1993. http://www.theses.fr/1993MON1T026.
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Young, Stephen W. "The insulin receptor tyrosine kinase and the activation of the map kinase cascade : interactions with the protein kinase C and protein kinase A signalling pathways". Thesis, University of Bristol, 1994. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.238958.
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Dittmann, Linda [Verfasser]. "Expressionsanalyse von Aurora-Kinase A, Aurora-Kinase B, Repp 86, Cyclin-Dependent-Kinase 1 und Cyclin-Dependent-Kinase 2 bei Mamma- und Ovarialkarzinomen / Linda Dittmann". Kiel : Universitätsbibliothek Kiel, 2014. http://d-nb.info/1062536061/34.
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Rojnuckarin, Ponlapat. "Mitogen-activated protein kinase pathways in megakaryocyte development /". Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2001. http://hdl.handle.net/1773/9200.
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Kannanayakal, Theresa Joseph. "Casein kinase 1 isoforms in degenerative disorders". Connect to this title online, 2004. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc%5Fnum=osu1094264800.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2004.Document formatted into pages; contains 150 p. Includes bibliographical references. Abstract available online via OhioLINK's ETD Center; full text release delayed at author's request until 2005 Sept. 7.
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Sallam, Hatem. "Pharmacological and analytical studies of the cyclin dependent kinase inhibitors". Stockholm, 2009. http://diss.kib.ki.se/2009/978-91-7409-706-1/.
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Graham, Heidi C. "Nuclear magnetic resonance studies of a kinase : 3-phosphoglycerate kinase (PGK)". Thesis, University of Oxford, 1991. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.334917.
Pełny tekst źródła
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Hynes, Andrews Mark. "Rx-kinase and protein kinase C in superoxide production from neutrophils". Thesis, University College London (University of London), 1997. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.267858.
Pełny tekst źródła
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Foukas, Lazaros. "Defining the physiological role of phosphatidylinositol 3-kinase protein kinase activity". Thesis, University College London (University of London), 2003. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.397223.
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Dunn, L. M. "Characterisation of leucine-rich repeat kinase-2 regulation and kinase function". Thesis, University College London (University of London), 2011. http://discovery.ucl.ac.uk/1322688/.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
Mutations in Leucine-Rich Repeat Kinase 2 (LRRK2) are one of the most common causes of genetic Parkinson’s disease (PD), with mutations thought to account for around 5% of all familial cases. LRRK2 is a large protein with a kinase and GTPase domain and multiple protein-‐protein interaction domains. Regulation of this protein is complex, with GTPase activity known to regulate kinase activity. Similarly, LRRK2 can autophosphorylate and is thought to form a dimer when active. Mutations in LRRK2 are numerous, with the most prevalent mutations occurring in the enzymatic core of this protein. This thesis describes work done to characterise the regulation and functioning of LRRK2, in order to further contribute towards understanding how mutations in this protein can lead to the pathogenesis of PD. Using BlueNative PAGE and glycerol gradient centrifugation, the quaternary structure of LRRK2 was assessed. In vitro kinase assays were used to characterise kinase activity of recombinant LRRK2 and a number of putative kinase substrates were also investigated. Identification of new kinase substrates was attempted and immunoprecipitation of LRRK2 to identify novel binding partners was also performed. Results of these experiments showed that familial mutations do not affect the ability of LRRK2 to form complexes. Instead, some mutations are affecting the enzymatic activity of LRRK2. Dephosphorylating LRRK2 showed that dimer formation is dependent on phosphorylation. Dephosphorylated forms of LRRK2 were more likely to be monomeric and displayed lower kinase activity than higher molecular weight forms. In vitro kinase assays to evaluate LRRK2 kinase substrates showed that α-synuclein is phosphorylated at low levels by G2019S but not wild-type LRRK2. Attempts to identify novel kinase substrates and binding partners of LRRK2 were unsuccessful, however evaluation of putative kinase substrates in vitro showed that DVL3 and TUBB5 may be good candidates for further investigation, as they were robustly phosphorylated by LRRK2. These results contribute towards our understanding of how LRRK2 functions and future studies based on these results may prove useful in aiding our understanding of how LRRK2 can cause PD pathogenesis.
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Holland, Pamela M. "Identification, interactions, and specificity of a novel MAP kinase kinase, MKK7 /". Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 1999. http://hdl.handle.net/1773/9262.
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Brown, Jacob D. "Liver Kinase B1/AMP-Activated Protein Kinase Signaling in the Diaphragm". BYU ScholarsArchive, 2010. https://scholarsarchive.byu.edu/etd/2543.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
The Liver Kinase B1 (LKB1)/AMP-Activated Protein Kinase (AMPK) signaling pathway is a major regulator of skeletal muscle metabolic processes. During exercise, LKB1-mediated phosphorylation of AMPK leads to its activation, promoting mitochondrial biogenesis and glucose transport, among other effects. The roles of LKB1 and AMPK have not been fully characterized in the diaphragm. Two methods of AMPK activation were used to characterize LKB1/AMPK signaling in diaphragms from muscle-specific LKB1 knockout (KO) and littermate control (C) mice: (1) acute injection of 5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside (AICAR) and (2) 5-min direct electrical stimulation (ES) of the diaphragm. Diaphragms were excised 60 minutes post-AICAR injection and immediately after ES. AMPK phosphorylation increased with AICAR and ES in C but not KO mice. Acetyl CoA carboxylase (ACC) phosphorylation increased with AICAR in C but not KO mice, but increased in both genotypes with ES. While the majority of mitochondrial enzyme levels were lower in KO diaphragms, uncoupling protein 3 (UCP-3) levels were not different between genotypes. A IIx to IIb fiber type switch was observed in KO diaphragms. While in vitro peak force generation was similar between genotypes, KO diaphragms fatigued more quickly and had an impaired ability to recover. In conclusion, LKB1 regulates AMPK phosphorylation, mitochondrial enzyme expression, fiber type distribution, as well as recovery of the diaphragm from fatigue.
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Yoon, Moon-Young. "Studies of the Mechanism of the Catalytic Subunit of cAMP Dependent Protein Kinase". Thesis, University of North Texas, 1989. https://digital.library.unt.edu/ark:/67531/metadc332161/.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
The kinetic mechanism of the cAMP-dependent protein kinase has been determined to be random in the direction of MgADP phosphorylation by using initial velocity studies in the absence and presence of the product, phospho-Serpeptide (Leu-Arg-Arg-Ala-Ser[P]-Leu-Gly) , and dead-end inhibitors. In contrast to the kinetic parameters obtained in the direction of Serpeptide phosphorylation, the only kinetic parameters affected by Mg^2+ are the dissociation constants for E:phospho-Serpeptide and E:MgADP, which are decreased by about 4-fold. The dead-end analog MgAMPCP binds with an affinity equal to that of MgADP in contrast to MgAMPPCP, which binds weaker than MgATP. The ratio of the maximum velocities in the forward and reverse reactions is about 200, and the Haldane relationship gives a K-eq of (7.2 ± 2) x 10^2. The latter can be compared to the K-eq obtained by direct measurement of reactant concentrations (2.2 ± 0.4) x 10^3 and 31-P NMR (1 ± 0.5) x 10^3.
Data for the pH dependence of kinetic parameters and inhibitor dissociation constants for the cAMP dependent protein kinase are consistent with a mechanism in which reactants selectively bind to an enzyme with the catalytic base unprotonated and an enzyme group required protonated for Ser-peptide binding. Preferentially MgATP binds fully ionized and requires an enzyme residue (probably lysine) to be protonated. The maximum velocity and V/K-MgATP are pH independent. The V/K for Serpeptide is bell-shaped with estimated pK values of 6.2 and 8.5. The dependence of 1/K-i for Leu-Arg-Arg-Ala-Ala-Leu-Gly is also bell-shaped, giving pK values identical with those obtained for V/K-Serpeptide, while the K-i for MgAMPPCP increases from a constant value of 650 μM above pH 8 to a constant value of 4 mM below pH 5.5. The K-i for uncomplexed Mg^2+ obtained from the Mg^2+ dependence of V and V/K-MgATP is apparently pH independent.
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Penfold, Lucy. "Investigating the roles of AMP-activated protein kinase and calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase β in prostate cancer". Thesis, Imperial College London, 2016. http://hdl.handle.net/10044/1/54390.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
Prostate cancer cells are characterised by rapid growth, proliferation and migration, which requires rewiring of cellular metabolism including increased lipid and protein synthesis. AMP-activated protein kinase (AMPK) is a conserved master regulator of energy homeostasis and acts to downregulate anabolism and cell growth, whilst upregulating catabolism to maintain cellular ATP levels. Whether these actions inhibit or aid cancer progression is controversial. Intriguingly, an upstream activating kinase of AMPK, calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase β (CaMKKβ) has recently been implicated in prostate cancer progression. A small-molecule direct activator of AMPK, 991, was used to test the effects of AMPK activation in a panel of prostate cancer cell lines. AMPK activation led to downregulation of cellular proliferation, 2D migration, invasion and lipogenesis, and upregulation of adhesion in all cell lines. However, in PC3 and 22RV1 cells AMPK activation led to an increase in migration down a chemoattractant gradient. This increase in migration was dependent on CaMKKβ and PAK1 activity. To investigate the role of AMPK and CaMKKβ in vivo the PTEN prostate cancer mouse model was used. AMPKβ1 and CaMKKβ were deleted in this model creating two novel mouse lines. Upon β1-deletion prostate cancer development was increased based on the timing of a switch in protein expression characterised in the PTEN-/- prostate upon disease progression and pathological analysis of tissue sections. In contrast, disease progression was significantly reduced upon CaMKKβ-deletion in the PTEN-/- prostate based on prostate weight, Ki-67 staining and pathological analysis. Disease progression was also inhibited in the PTEN mouse model upon treatment with a pharmacological inhibitor of CaMKKβ, STO609. These data suggest that AMPK and CaMKKβ have different roles in prostate cancer development and progression likely lie on separate pathways in this disease.
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Walker, Valerie Glynis. "Pl3-kinase mediates cSrc activation and podosome formation through the adaptor protein, AFAP-110, in response to PKC[alpha] activation". Morgantown, W. Va. : [West Virginia University Libraries], 2007. https://eidr.wvu.edu/etd/documentdata.eTD?documentid=5191.
Pełny tekst źródłaStreszczenie:
Thesis (Ph. D.)--West Virginia University, 2007.Title from document title page. Document formatted into pages; contains viii, 306 p. : ill. (some col.). Vita. Includes abstract. Includes bibliographical references.
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Murail, Pauline. "Pyridin-2(1H)one derivatives - a new class of therapeutics for trigeminal pain". Electronic Thesis or Diss., Université Clermont Auvergne (2021-...), 2024. http://theses.bu.uca.fr/nondiff/2024UCFA0026_MURAIL.
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La douleur chronique affecte environ 10% de la population mondiale. Seulement, la prise en charge de la douleur chronique, reste un défi nécessitant de nouvelles thérapies. Les protéines kinases (PK) présentent dans la corne dorsale médullaire (CDM)-extracellular signal-regulated protein kinase, γ isoform of protein kinase C, p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK)- contribuent à l'hypersensibilité à la douleur chez l'animal. Les PK pourraient représenter de nouvelles cibles pour le traitement de la douleur chronique. L'objectif est de synthétiser des inhibiteurs de PK aux propriétés analgésiques.Une 1ère série de dérivés de pyridin-2(1H)-one a été conçue, synthétisée et évaluée sur un modèle présentant une hypersensibilité mécanique (HM) inflammatoire. Plusieurs composés ont fortement inhibé l'HM. Le composé le plus actif, la 3-(2-bromophényl)-5-(phénylamino)pyridin-2(1H)-one (C69), a également réduit l'HM neuropathique. Évalué sur un panel de 50 PK, le C69 est un inhibiteur de p38α MAPK. Une 2ème série de dérivés de pyridin-2(1H)-one a été synthétisée. Le composé le plus actif, le C60, présente de fortes propriétés analgésiques.Nous avons deux objectifs : i) évaluer l'efficacité analgésique et caractériser le mécanisme d'action du C69 et C60 dans des modèles de douleur trigéminale, et ii) concevoir, synthétiser et évaluer une 3ème série de composés pour améliorer l'effet analgésique.À l'aide du comportement, de l'électrophysiologie in vivo et d'immunohistochimie pour c-Fos chez des rats mâles et femelles, nous avons examiné l'effet des composés appliqués par voie orale ou intracisternale (i.c.) sur le comportement douloureux spontané et évoqué, ainsi que sur la sensibilisation neuronale de la CDM dans des modèles de douleur trigéminale : inflammatoire (capsaïcine, formol, Complete Freund Adjuvant (CFA)), neuropathique (constriction du nerf infra-orbitaire (ION-CCI)) et migraine (isosorbide dinitrate (ISDN)). Nous avons également évalué leur cytotoxicité, cardiotoxicité, effet sur les performances motrices, et, pour le C69 par voie orale, sa pharmacocinétique.Le C69 administré par voie i.c. prévient le comportement spontané induit par la capsaïcine et le formol ainsi que l'HM, et prévient l'HM induite par le CFA. Il réduit également l'HM induite par l'ION-CCI. Par voie orale, le C69 inhibe l'HM induite par le CFA et l'ISDN. Ces effets sont durables dans les deux sexes. Dans la CDM, le C69 administré par voie i.c. prévient l'expression de c-Fos induite par le CFA et inhibe les réponses des neurones wide dynamic range (WDR) aux stimuli non nociceptifs et nociceptifs, ainsi que le wind-up. De plus, le C69 ne présente aucune cytotoxicité ni cardiotoxicité, n'altère pas la motricité, et appliqué de manière répétée n'entraine pas de modification de la sensibilité mécanique. Enfin, sa pharmacocinétique est similaire à celle des analgésiques établis.La 2ème série présente des composés plus puissants. Le C60 inhibe l'HM induite par le CFA, la capsaïcine et le formol. Mais il n'a aucun effet sur le comportement spontané induit par la capsaïcine ou le formol. Par voie orale, le C60 réduit l'HM induite par le CFA. Dans la CDM, le C60 administré par voie i.c. prévient l'expression de c-Fos induite par le CFA et inhibe les réponses des neurones WDR seulement aux stimuli non nociceptifs. Il atténue cependant la post-décharge provoquée par les fibres C. Enfin, le C60 présente le même profil favorable que le C69.Nous avons synthétisé une 3ème série de composés, comparant leur efficacité à celle du C60 sur le modèle de capsaïcine de la patte postérieure. Sur 21 composés, seuls 8 inhibent efficacement l'HM, et le C10, le plus actif, est plus puissant que le C60.Les dérivés de pyridin-2(1H)-one pourraient représenter une nouvelle classe de traitement pour la douleur chronique trigéminale. Le C69 semble avoir le plus grand potentiel thérapeutique, avec des effets analgésiques sur divers symptômes et étiologiesChronic pain affects about 10% of the population worldwide. Despite extensive research, the management of chronic pain, particularly trigeminal chronic pain, is still a clinical challenge, requiring new therapeutics. Protein kinases (PK) in the spinal dorsal horn or trigeminal nucleus caudalis (TNC)-extracellular signal-regulated protein kinase, γ isoform of protein kinase C, p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK)-contribute to pain hypersensitivity in animals. PKs may represent new molecular targets for chronic pain treatment. We aim to synthesize PK inhibitors with analgesic properties.A 1st series of pyridin-2(1H)-one derivatives was designed, synthesized, and evaluated on a rat inflammatory mechanical hypersensitivity (MH) model. Several compounds strongly inhibited inflammatory MH. The most active, 3-(2-Bromophenyl)-5-(phenylamino)pyridin-2(1H)-one (C69), also reversed neuropathic MH. Evaluated against a panel of 50 PKs, C69 appeared to be a p38α MAPK inhibitor. We synthesized a 2nd series of pyridin-2(1H)-one derivatives, substituting the 2 pyridinones, at the 3-position, with various aryl/heteroaryl moieties, and at the 5-position, with a phenylamino group. The most active, C60 exhibited strong analgesic properties.We have 2 objectives: i) to assess the analgesic efficacy and characterize the mechanism of action of compounds C69 and C60 in various models of trigeminal pain, and ii) to design, synthesize, and evaluate a 3rd series of compounds to improve analgesic potency.Using behavior, in vivo electrophysiology, and c-Fos immunoreactivity in male and female rats, we examined the effect of per os or intracisternally (i.c.) applied compounds on spontaneous and evoked pain-like behavior and TNC neuronal sensitization in several trigeminal pain models: inflammatory [capsaicin, formalin, Complete Freund Adjuvant (CFA)], neuropathic [infraorbital nerve chronic constriction (ION-CCI)] and migraine [isosorbide dinitrate (ISDN)]. We also assessed their cytotoxicity, cardiotoxicity, and effect on motor performance, and for per os C69, its pharmacokinetic.I.c. C69 prevents capsaicin- and formalin-induced rubbing behavior and facial MH and CFA-induced facial MH. It also reverses ION-CCI-induced MH. Per os, C69 inhibits CFA and ISDN-induced facial MH. All these effects are long-lasting in both sexes. In TNC, i.c. C69 prevents CFA-induced c-Fos expression and inhibits the responses of wide dynamic range (WDR) neurons to both innocuous and noxious stimuli, as well as wind-up. Moreover, C69 appears safe: showcasing no evident cytotoxicity and cardiotoxicity, exerting analgesia with no motor impairment, and, persistently applied, does not affect mechanical sensitivity. Finally, its pharmacokinetic is similar to that of established analgesics.The 2nd series produced more potent anti-MH compounds. C60 completely inhibits CFA-, capsaicin- and formalin-induced facial MH. But it has no effect on capsaicin- or formalin-induced rubbing behavior. Per os, C60 reduces CFA-induced facial MH. In TNC, i.c. C60 prevents CFA-induced c-Fos expression and inhibits the responses of WDR neurons to innocuous mechanical stimuli but neither to noxious mechanical ones nor to C-fiber stimulation nor to wind-up. It nevertheless attenuates C-fibers-evoked post-discharges. Finally, C60 displays the same favorable safety profile as C69.We recently synthesized a 3rd series of compounds, comparing their efficacy with that of C60 on the hindpaw capsaicin model. Of 21 compounds synthesized, only 8 compounds efficiently inhibit capsaicin-induced MH, and C10, the most active, is more potent than C60.Pyridin-2(1H)-one derivatives may represent a new class of therapeutics for chronic pain. The p38α MAPK inhibitor C69 seems to have the greatest therapeutic potential with demonstrated analgesic effects on various pain symptoms and etiologies through, at least in part, segmental, pre- and postsynaptic, effects
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Weir, Marion. "Novel Mechanisms Governing Autoregulation of the Src Family Kinase Fyn and its Crosstalk with Protein Kinase A". ScholarWorks @ UVM, 2016. http://scholarworks.uvm.edu/graddis/592.
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ABSTRACT
Phosphorylation is a post-translational modification important for regulating protein activity and protein binding capacity. It is used in many different signaling pathways within the cell. Src Family Kinases and Protein Kinase A (PKA) are two prototyptical non-receptor tyrosine and serine/ threonine kinases, respectively, which are found in canonical signaling pathways. These two kinases are critical for signaling in essentially every cell of a multicellular organism, and are particularly important in development, cell migration and proliferation. Although both proteins have been intensely studied for many decades, an understanding of the molecular mechanisms which govern their regulation and the regulation that they effect on other proteins are still being elucidated.
Fyn, like its related Src Family Kinase members, has previously been shown to be regulated by two tyrosine phosphorylation events at residues Y420 and Y531. Y420 is located in the kinase (Src Homology 1(SH1)) domain and it is a highly-characterized intermolecular autophosphorylation site that increases the activity of the kinase. Y531 is located near the C-terminus and is phosphorylated by C-terminal Src kinase (Csk). Phosphorylation of Y531 allows it to bind to R176 in the SH2 domain in an intramolecular fashion. In this conformation Fyn has only basal activity. Since these sites are essential for regulating the activity of the kinase, we hypothesized that four novel sites of tyrosine phosphorylation in Fyn could also importantly regulate the protein. Three of the novel sites lie in the SH2 domain, and one is located in the kinase domain. Mass spectrometry, in vitro kinase assays, as well as western blot analysis aided in uncovering that these novel Fyn phosphorylation sites fine tune the activity and substrate binding of the protein.
PKA has been implicated in a multitude of signaling pathways and is particularly important in cell growth, proliferation, and migration. Fyn and PKA have classically been considered to be in separate signaling pathways. However, research over the past several decades has provided evidence that there is crosstalk that exists between the two pathways. The SFK Fyn and PKA can phosphorylate each other, thereby regulating each other's activity. Based on these data, we hypothesized the existence of downstream effectors of this relatively uncharacterized pathway. It was hypothesized that the presence of Fyn could lead to PKA activation and to differences in PKA binding partners. Through the use of co-immunoprecipitations, Stable Isotope Labeling of Amino Acids in Cell Culture (SILAC) and quantitative mass spectrometry, many proteins were found to increase their binding to PKA in the presence of Fyn. Several proteins were selected and further biochemically validated. These data suggest that the presence of Fyn could allow for PKA to more importantly interact with discrete pools of proteins within the cell to effectuate its signal transduction. Together these studies provide understanding on critical and fundamental processes by which all cells function.
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Lala, Hitesh Nagin. "Subcloning of calcium-dependent protein kinase related kinase homologues in arabidopsis thaliana". Thesis, Georgia Institute of Technology, 1997. http://hdl.handle.net/1853/25343.
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Fox, Gavin Connor. "Structural studies on MAP kinase phosphatases and the receptor tyrosine kinase TrkA". Thesis, Birkbeck (University of London), 2002. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.268768.
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Lachance, Gabriel. "Implication de la MAPK kinase kinase DLK dans la différenciation des kératinocytes". Mémoire, Université de Sherbrooke, 2009. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4823.
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Ce projet de maîtrise s'inscrit dans un effort de recherche visant à caractériser le rôle de la protéine dual leucine zipper-bearing kinase (DLK) dans la peau. Plusieurs données ont été générées par les travaux combinés de notre laboratoire avec le laboratoire d'organogénèse expérimentale (LOEX). Lorsque surexprimée dans des cellules en culture, DLK induit la différenciation spontanée des cellules de l'épiderme, les kératinocytes. Dans ces conditions, DLK active une protéine centrale dans la différenciation des kératinocytes; la transglutaminase de type 1 (TGM1). Récemment, l'étude de l'épiderme des souris knockouts pour le gène DLK a montré l'importance de cette kinase dans la formation de la couche cornée de la peau murine. Nous avons utilisé l'approche de l'ARN à interférence afin d'étudier spécifiquement la fonction de DLK dans la différenciation des kératinocytes normaux en culture. L'approche développée sur ce modèle a été transposée sur un modèle de peaux reconstruites in vitro . La mise au point de la technique des ARN interférents ciblant l'ARNm de DLK dans les kératinocytes a été faite à partir d'une lignée de carcinome spinocellulaire cutané. La diminution de l'expression de DLK par des ARN interférents dans ce modèle induit la fragmentation de l'ADN et l'arrêt du cycle cellulaire. L'apoptose est observée par le clivage du substrat des caspases, la protéine poly-ADP-ribose polymerase (PARP), spécifiquement lorsque DLK est déplétée dans les cellules cancéreuses. La mort cellulaire est corrélée avec la diminution des protéines Hsp70 et RelA, deux facteurs reconnus pour leur rôle positif sur la survie dans les kératinocytes. La surexpression de deux mutants sans activité kinase de DLK a corroboré les résultats obtenus avec le knockdown de DLK et suggère que l'activité de DLK protège les cellules de l'apoptose. Dans ces kératinocytes transformés, DLK a un rôle pro-survie qui n'est pas observé dans des kératinocytes normaux ou dans des fibroblastes normaux provenant du derme. La diminution de l'expression de DLK par l'ARN à interférence dans les kératinocytes normaux humains (NHK) a confirmé son rôle important dans la différenciation. Les NHK déplétés de DLK on une morphologie ressemblant aux kératinocytes non-différenciés. Les NHK qui expriment un shRNA ciblant la forme humaine de DLK, contrairement aux NHK infectées par le vecteur vide ou un shRNA contre la forme murine de DLK, ont très peu de jonctions adhérentes de type desmosome. Cela se traduit par un détachement plus rapide du feuillet de kératinocytes déplétées de DLK lorsque traitées à la trypsine comparativement aux cellules contrôles. La surexpression de DLK induit d'environ 50 % l'activité transglutaminase et à l'inverse, par l'approche de l'ARN à interférence, la déplétion de DLK fait diminuer de 30 % l'activité transglutaminase dans les NHK différenciées. Aussi, la diminution de l'expression de DLK induit la fragmentation de l'ADN des NHK comme le faisait la surexpression de DLK. Au niveau moléculaire, les shRNA ciblant la forme humaine de DLK n'induisent pas le clivage de la PARP, n'affectent pas la protéine pro-survie Akt1 et n'ont pas non plus d'effet significatif sur la phosphorylation des MAPK. Cependant, la sous-unité RelA du facteur de transcription est moins exprimée dans les NHK très différenciés lorsque DLK est déplétée. Globalement, ces résultats suggèrent que DLK est importante pour la différenciation des kératinocytes en favorisant la formation des jonctions adhérentes de type desmosome et en activant la TGM1 qui polymérise certaines protéines desomosomales. Certains résultats indiquent que DLK pourrait aussi réguler une partie de la cascade de NF-?B, une voie de signalisation importante pour la transition entre l'arrêt de croissance et la différenciation dans les kératinocytes. Finalement, l'infection des épidermes reconstruits in vitro avec des shRNA dirigés contre DLK a confirmé l'importance de la protéine dans l'adhérence des cellules de l'épiderme et dans la formation de la couche cornée. En effet dans ce modèle, le knockdown de DLK amène un détachement du feuillet de cellules différenciées de la couche non différenciée. Lorsque les cellules de l'épiderme sont infectées par deux shRNA différents ciblant la forme humaine de DLK, il n'y pas de couche cornée formée, tandis que les cellules infectées par un vecteur vide ou un shRNA ciblant la forme murine de DLK produisent une couche cornée normale. Tous ces résultats supportent le rôle prépondérant de DLK dans l'épiderme.
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Mazot, Pierre. "Anaplastic lymphoma kinase un récepteur tyrosine kinase orphelin impliqué dans les neuroblastomes". Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066161.
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Les récepteurs à activité tyrosine kinase (RTK) régulent de nombreux processus cellulaire essentiel. La perte du contrôle de leur activité peut être à l’origine de cancers. Le sujet de ma thèse s’est porté sur la compréhension des mécanismes d’activations physiologiques et pathologiques du RTK anaplastic lymphoma kinase (ALK) et leurs impacts sur sa localisation subcellulaire. ALK est un récepteur neuronal dont les rôles physiologiques ne sont pas élucidés. ALK est également impliqué dans la formation de neuroblastomes, suite à des mutations activatrices. La question du ligand de ALK est très controversée dans la littérature. Dans ce contexte, notre équipe a développé des anticorps monoclonaux agonistes et antagonistes de ALK. A l’aide de ces mAb, nous n’avons pas confirmer une activation de ALK par la pléiotrophine. En revanche, nous avons caractérisé un mécanisme d’activation de ALK par le zinc. Nous avons démontré dans les neuroblastomes une localisation intracellulaire préférentielle des récepteurs mutés induite par leur activité constitutive. Nous avons ensuite caractérisé les processus d’internalisation et de « down-regulation » de ALK en réponse à nos mAb. Un mAb agoniste, active ALK et induit son internalisation puis adressage au lysosome. Un mAb antagoniste, dimérisant seulement ALK, est suffisant pour induire son internalisation, puis son recyclage à la membrane plasmique. Au delà d’une meilleure compréhension des mécanismes d’activation physiologique et pathologiques de ALK, ces résultats désignent nos mAb agonistes et antagonistes comme une alternative potentielle à l’utilisation d’inhibiteurs du domaine kinase de ALK pour le traitement des neuroblastomes
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Hmitou, Isabelle. "Rôle et régulation des isoformes de la MAPKinase Kinase Kinase B-Raf". Paris 11, 2006. http://www.theses.fr/2006PA112178.
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La sérine/thréonine kinase B-Raf est impliquée dans de nombreux processus cellulaires chez les Métazoaires. Le gène B-raf code plusieurs isoformes résultant d'épissage alternatif. La présence des séquences codées par les exons alternatifs 8b et 9b, situées entre le domaine régulateur et le domaine kinase de B-Raf, module les propriétés biochimiques et oncogéniques de B-Raf : l'exon 9b augmente l'activité kinase et l'interaction avec MEK, l'exon 8b les diminue. Mon travail de thèse a eu pour objectif à la fois de comprendre les bases moléculaires du mécanisme de régulation différentielle des isoformes de B-Raf et également d'analyser leur importance fonctionnelle. J'ai ainsi montré que la présence des séquences codées par les exons 8b et 9b interférent avec l'autoinhibition du domaine régulateur sur le domaine kinase. Ces séquences interfèrent également avec la phosphorylation des résidus S365 et S429 situés dans la même région charnière, indépendamment des interactions intramoléculaires. Ainsi, alors que le niveau de phosphorylation de la S365 est modulé par la présence des exons, la phosphorylation de la S429 n'est pas modulée par les séquences alternatives mais aurait des conséquences différentes en fonction de l'isoforme. D'autre part, afin de comprendre le rôle physiologique des isoformes de B-Raf contenant les séquences codées par les exons 8b et 9b, nous avons généré des lignées de souris pour lesquelles la délétion conditionnelle de ces exons est rendue possible grâce à l'approche Cre/Lox. L'obtention de souris invalidées pour les exons 8b et 9b permettra de mieux comprendre le rôle spécifique des isoformes de B-Raf, en particulier au cours du développementThe B-Raf serine/threonine kinase is involved in many cellular processes in Metazoans. The B-raf gene encodes several isoforms resulting from alternative splicing. The presence of the sequences encoded by exons 8b and 9b, located between the regulation domain and the kinase domain of B-Raf, modulates the biochemical and oncogenic properties of B-Raf: the exon 9b increases the kinase activity and the interaction with MEK, the exon 8b decreases them. My work aimed at the same time to understand the molecular basis of the mechanism of differential regulation of B-Raf isoforms and also to analyze their functional roles. I thus showed that the presence of the sequences encoded by exons 8b and 9b interferes with the autoinhibition of the regulation domain on the kinase domain. These sequences also interfere with phosphorylation of the residues S365 and S429 located in the same hinge region, independently of the intramolecular interactions. Thus, whereas the phosphorylation level of S365 is modulated by the presence of exons, the phosphorylation of S429 is not modulated by the alternative sequences but would have different consequences according to the isoform. In addition, in order to understand the physiological role of the B-Raf isoforms containing the sequences encoded by exons 8b and 9b, we generated mice strain lines in which the conditional deletion of these exons is possible by a Cre/Lox strategy. Obtaining mice invalidated for exons 8b and 9b will render possible to better understand the specific role of B-Raf isoforms, especially during development
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Kerkelä, R. (Risto). "Signaling pathways in myocyte hypertrophy:role of GATA4, mitogen-activated protein kinases and protein kinase C". Doctoral thesis, University of Oulu, 2003. http://urn.fi/urn:isbn:9514269950.
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Abstract
Cardiac myocytes react to increased workload and hypertrophic neurohumoral stimuli by increasing protein synthesis, reinitiating expression of fetal forms of structural genes, α-skeletal actin (α-SkA) and β-myosin heavy chain (β-MHC), and by increasing expression and secretion of atrial natriuretic peptide (ANP) and B-type natriuretic peptide (BNP). Initially, the response is beneficial, but when prolonged, it leads to pathological cardiomyocyte hypertrophy. In this study, cardiomyocyte hypertrophy was initiated by hypertrophic agonists, endothelin-1 (ET-1) and phenylephrine (PE), and by increased stretching of atrial wall.
Transcription factor GATA4 was studied to identify the mechanism leading to increased gene expression of BNP. In BNP promoter, GATA4 binds to cis elements mediating hypertrophic response. Eliminating GATA4 binding by using the decoy approach, basal BNP gene expression was reduced. To identify mechanisms regulating GATA4, the roles of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) were studied. Activation of p38 MAPK increased GATA4 binding to BNP gene and led to increased GATA4 dependent BNP gene expression. p38 MAPK was required for ET-1 induced GATA4 binding, whereas extracellular signal-regulated kinase (ERK) was required for maintaining basal GATA4 binding activity. PE and ET-1 activated protein kinase C (PKC) signaling in cardiac myocytes. Antisense oligonucleotide inhibition of PKCα markedly reduced PE induced ANP secretion and ET-1 induced BNP secretion, whereas gene expression of natriuretic peptides was not affected. Antisense PKCα treatment inhibited PE induced expression of α-SkA, while increased protein synthesis or β-MHC gene expression were not affected. Sretching of the perfused rat atria increased BNP, c-fos and BNP gene expression via mechanism involving p38 MAP kinase activation of transcription factor Elk-1. In cultured neonatal rat atrial myocytes stretch induced BNP gene expression was dependent upon transcription factor Elk-1 binding sites within the BNP gene promoter.
In conclusion, hypertrophic signaling in cardiac myocytes involves multiple signaling cascades. Activation of p38 MAPK is required for the development of ET-1 induced hypertrophic phenotype and GATA4 mediated BNP gene expression in cultured ventricular myocytes, and for stretch induced Elk-1 dependent BNP gene expression in atrial myocytes. PKCα is involved in PE induced hypertrophic response and PE induced switch in gene programming inducing expression of α-SkA, the fetal form of cardiac α-actin.
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Ma, Sheng. "Caractérisation du rôle des protéines phosphatases impliquées dans la déphosphorylation de la protéine kinase Greatwall lors de la sortie de mitose". Thesis, Montpellier, 2015. http://www.theses.fr/2015MONTS007/document.
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Chez la drolosophile, des mutants de Greatwall présentent des défauts de condensation des chromosomes lors de la mitose. Plus tard, la même équipe a montré que chez le Xénope, Greatwall est nécessaire pour entrer en mitose. L'idée consistant à penser que puisque Greatwall ne permet plus l'entrée en mitose, il joue un rôle dans la boucle qui conduit à l'auto-amplification de MPF. En 2009, notre équipe a montré que Greatwall est réellement impliquée dans l'entrée en mitose, mais de façon indirecte par rapport à la boucle d'amplification de MPF, et cela en contrôlant l'activité de la phosphatase PP2A. Notre équipe a montré que lorsque l'on enlève PP2A, on peut sauver le phénotype de l'absence de Greatwall. Plus tard, il a été montré que la phosphorylation de Greatwall est nécessaire pour l'entrée en mitose. La phosphorylation de Greatwall sur la partie C-terminale est nécessaire pour activer Greatwall. Par conséquent, Greatwall doit être phosphorylé pour être actif. Une fois activé, Greatwall est capable de phosphoryler Arpp19 qui lie la phosphatase PP2AB55, et qui l'inhibe permettant ainsi de maintenir les phosphorylations des substrats mitotiques. Si cette voie de signalisation n'est pas fonctionnelle, la phosphatase PP2A va déphosphoryler tous les substrats mitotiques et la cellule n'entrera jamais en mitose. Greatwall doit être phosphorylé pour s'activer et pour entrer en mitose, mais on observe aussi qu'au moment de la sortie de mitose, il est déphosphorylé, et il doit être déphosphorylé pour s'inactiver. (On ne sait pas s'il est requisse pour sortir). Mon projet consiste à chercher la/les phosphatase(s) qui pourrait contrôler l'activité ou l'inactivation de Greatwall. Les questions que l'on se pose : Comment et par quelle(s) phosphatase(s) Greatwall est déphosphorylé, comment ces phosphoatases sont activées, quel est l'ordre d'activation de ces phosphatases ? Pour étudier comment Greatwall est déphosphorylé, il y a 2 sites majors : T194 et S875. Ces 2 sites sont nécessaires pour l'activité de Greatwall. Nous avons réalisé les 2 mutants T194A et S875A, et les traduit dans l'extrait interphasique d'œufs de Xénope, pour mesurer l'activité de kinase Greatwall. Pour déphosphoryler ces 2 sites, il y a 4 phosphatases principales comme candidats : Calcineurine, Fcp1, PP1, PP2AThe establishment of mitosis requires phosphorylaton of several substrates induced by kinases. Cdk1-cyclin B and Greatwall kinases are both necessary for the entry into mitosis. Cdk1-cyclin B complex phosphorylates many substrates and at the same time Greatwall phosphorylates Arpp19 which binds PP2AB55 phosphatase and inhibits it. PP2AB55 has an important role in the dephosphorylation of Cdk1-cyclin B mitotic substrates.In my laboratory, we found that after Greatwall depletion, either in Xenopus egg extracts or in human cells, PP2A is no longer inhibited and cells exit mitosis. Since activation of Greatwall requires its phosphorylation in the c-terminal part and in the T-loop site, we suppose that mitosis exit require dephosphorylation of Greatwall. So these dephosphorylations could be involved for Greatwall inactivation. Several phosphatases are candidates for this process: Fcp1, PP1, PP2A and Calcineurin. My project proposes to determine the involvement of these four phosphatases in Xenopus egg extracts after depletion and overexpression of these four proteins
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Walker, Dianne. "Bacillus stearothermophilus pyruvate kinase". Thesis, University of Bristol, 1991. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.335572.
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Nadeau, Valérie. "Implication de MEK1 et MEK2 dans la morphogenèse du placenta de souris". Doctoral thesis, Université Laval, 2015. http://hdl.handle.net/20.500.11794/25734.
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Le génome des mammifères contient deux gènes ERK/MAP kinase kinase, soient Mek1 (Map2k1) et Mek2 (Map2k2), qui codent pour des enzymes responsables de l’activation de ERK1/2. Chez la souris, la perte de fonction de Mek1 engendre une mortalité embryonnaire, tandis que les mutants Mek2 survivent sans aucun phénotype apparent. Afin d’élucider les fonctions potentielles associées à MEK2 durant l’embryogenèse, la perte de Mek2 a été étudiée en présence d’une haplo-insuffisance de Mek1. La majorité des embryons Mek1+/-Mek2+/- meurent durant la gestation due à des défauts placentaires affectant les tissus extraembryonnaires. Ainsi, bien que Mek1 joue un rôle prédominant, ces résultats mettre en lumière l’implication de Mek2 durant le développement du placenta. La caractérisation histologique des placentas Mek1+/-Mek2+/- a révélé une diminution de la vascularisation et la formation aberrante de cellules trophoblastiques géantes multinucléées (MTG). Des expériences génétiques de traçage cellulaire in vivo ont démontré que les cellules MTG dérivent d’une différenciation aberrante des SynT-II et que leur formation découle en partie d’un effet cellule autonome. Un second objectif de cette thèse était de mieux caractériser le ou les types cellulaires nécessitant une activation de la voie ERK/MAPK essentielle au développement placentaire. Des analyses génétiques et histologiques ont démontré que la formation des cellules MTG résulte d’une fusion ectopique entre les deux couches de SynT qui participent normalement de façon indépendante à la barrière hématoplacentaire. La barrière hématoplacentaire est constituée d’une double couche de SynT et de cellules dérivées de l’allantoïs, soient les cellules endothéliales et leurs péricytes. La délétion d’un allèle supplémentaire de Mek1 dans l’allantoïs des mutants Mek1+/-Mek2+/- augmente la pénétrance et l’expressivité du phénotype placentaire. De plus, les expériences d’ablation cellulaire in vivo ont permis de démontrer que le développement des SynT-I en une fine couche de cellules multinucléées dépend de la présence de la deuxième couche de SynT. Finalement, par approche de gènes candidats et par analyse de biopuces dans les placentas mutants Mek1Mek2, nous avons montré une expression dérégulée de cibles potentielles de ERK1/2 impliquées dans la déterination, la polarité et la fusion cellulaire, ce qui contribue à la compréhension du phénotype observé.The mammalian genome contains two ERK/MAP kinase kinase genes, Mek1 and Mek2, which encode dual-specificity kinases responsible for ERK/MAP kinase activation. In the mouse, the loss of Mek1 function causes embryonic lethality, whereas Mek2 mutants survive with a normal lifespan, suggesting that Mek1 rescues the lack of Mek2 function. The first objective of my thesis was to clarify potential functions of Mek2 during mouse embryogenesis. To do, I have analyzed the loss of Mek2 function in the presence of Mek1 haploinsufficiency. Most Mek1+/-Mek2+/- embryos die during gestation from placenta defects affecting extra-embryonic tissues. Thus, even though Mek1 plays a predominant role, these results enlightened the function of Mek2 in placenta development. The histological characterization of Mek1+/-Mek2+/- placentas revealed a diminution of the vascularization and an aberrant formation of multinucleated trophoblast giant (MTG) cells. Genetic experiments on the SynT-II cellular lineage in vivo demonstrated that MTG cells derive from the aberrant SynT-II differentiation and that their formation results from a cell-autonomous effect. The second objective of my thesis was to determine in which cell types the ERK/MAPK activation is essential for placenta development. Genetic analyses combined with histological studies revealed that MTG formation resulted from the ectopic fusion between both layers of SynT, which normally participate in an independent way in the blood-placental barrier. The blood-placental barrier is constituted of a double layer of SynT and by the cells derived from the allantois, the endothelial cells and their perycites. The deletion of both Mek1 alleles in allantois-derived tissues in a Mek1+/-Mek2+/- placenta environment increases the penetrance and the expressivity of the MTG phenotype. These results demonstrate the role of the ERK/MAPK pathway in defined embryonic and extraembryonic cell populations for correct placenta formation. Using mouse genetics, we also demonstrated that the normal development of syncytiotrophoblasts type I into a thin layer of multinucleated cells depends on the presence of the syncytiotrophoblasts type II. Finally, the combined mutations of Mek1 and Mek2 genes alter the expression of several genes involved in cell fate specification, cell fusion and cell polarity that likely explain the underdeveloped placenta and the MTG phenotype seen in Mek1Mek2 mutants.
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Chen, Xi. "The role of PI3K and ERK/MAPK signal transduction cascades in long-term memory formation /". Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2004. http://hdl.handle.net/1773/6248.
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