Letteratura scientifica selezionata sul tema "Virus de la stomatite vésiculeuse"

Lassa fever, a viral hemorrhagic fever caused by the Lassa virus (LASV), is endemic in West Africa and is associated with high morbidity and mortality. At least three of the four proposed seven lineages of LASV are found in Nigeria, where the multimammate rat, Mastomys natalensis, serves as the primary reservoir. Endemic countries report approximately 200,000 infections and 5,000 deaths annually, with Nigeria experiencing thousands of infections and hundreds of deaths including healthcare workers. The aim of this review is to provide scientific information for better understanding of the evolutionary biology, molecular epidemiology, pathogenesis, diagnosis, and prevention of Lassa fever in Nigeria and other endemic regions worldwide, which can lead to improved control efforts and reduce morbidity and mortality from recurrent epidemics. To achieve this aim, observational studies such as case series, cross-sectional and cohort studies published between December 2017 and September 2022 were searched for on various online databases including Google Scholar, Africa Journals Online (AJOL), Research Gates, PubMed, PMIC, NCDC, and WHO websites. Although the origin and evolutionary history, and the transmission dynamics of Lassa virus have been revealed through recent molecular epidemiological studies, the factors that drive the evolution of the virus remain unclear. Genetic changes in the viral genome may have enabled the virus to adapt to humans. Diagnosis of Lassa fever has also advanced from basic serological tests to more sophisticated methods such as quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) and sequencing, which are particularly useful for identifying outbreak strains. Several vaccines, including recombinant vesicular stomatitis virus (rVSV), virus- like particle (VLP), and DNA-based vaccines, have shown promise in animal models and some have progressed to phase 2 clinical trials. Preventingand controlling Lassa fever is critical to safeguard the health and well-being of affected communities. Effective measures such as rodent control, improved sanitation, and early detection and isolation of infected individuals are essential for reducing transmission. Ongoing research into the genetic and ecological factors that drive the evolution of Lassa virus is necessary to reduce the impacts of Lassa fever. French title:Une revue des avancées récentes sur la fièvre de la Lassa avec une référence particulière à l'épidémiologie moléculaire et aux progrès du développement des vaccins La fièvre de Lassa, une fièvre hémorragique virale causée par le virus de Lassa (LASV), est endémique en Afrique de l'Ouest et est associée à une morbidité et une mortalité élevées. Au moins trois des quatre lignées proposées de LASV se trouvent au Nigeria, où le rat multimammaire, Mastomys natalensis, sert de réservoir principal. Les pays endémiques signalent environ 200,000 infections et 5,000 décès par an, le Nigéria connaissant des milliers d'infections et des centaines de décès, y compris des travailleurs de la santé. L'objectif de cette revue est de fournir des informations scientifiques pour une meilleure compréhension de la biologie évolutive, de l'épidémiologie moléculaire, de la pathogenèse, du diagnostic et de la prévention de la fièvre de Lassa au Nigeria et dans d'autres régions endémiques du monde, ce qui peut conduire à des efforts de contrôle améliorés et réduire la morbidité et la mortalité des épidémies récurrentes. Pour atteindre cet objectif, des études observationnelles telles que des séries de cas, des études transversales et de cohorte publiées entre décembre 2017 et septembre 2022 ont été recherchées sur diverses bases de données en ligne, notamment Google Scholar, Africa Journals Online (AJOL), Research Gate, PubMed, PMIC, Sites Web du NCDC et de l'OMS. Bien que l'origine et l'histoire évolutive, ainsi que la dynamique de transmission du virus de Lassa aient été révélées par des études épidémiologiques moléculaires récentes, les facteurs qui déterminent l'évolution du virus restent flous. Des modifications génétiques du génome viral pourraient avoir permis au virus de s'adapter à l'homme. Le diagnostic de la fièvre de Lassa est également passé des tests sérologiques de base à des méthodes plus sophistiquées telles que la réaction quantitative en chaîne par polymérase en temps réel (qRTPCR) et le séquençage, qui sont particulièrement utiles pour identifier les souches épidémiques. Plusieurs vaccins, y compris le virus recombinant de la stomatite vésiculeuse (rVSV), les particules pseudo-virales (VLP) et les vaccins à base d'ADN, se sont révélés prometteurs dans des modèles animaux et certains ont progressé vers des essais cliniques de phase 2. La prévention et le contrôle de la fièvre de Lassa sont essentiels pour préserver la santé et le bien-être des communautés touchées. Des mesures efficaces telles que le contrôle des rongeurs, l'amélioration de l'assainissement et la détection et l'isolement précoces des personnes infectées sont essentielles pour réduire la transmission. Des recherches continues sur les facteurs génétiques et écologiques qui déterminent l'évolution du virus de Lassa sont nécessaires pour réduire les impacts de la fièvre de Lassa.

Les structures pré- et post-fusion de G VSV ont été élucidées par radiocristallographie,permettent d'identifier certains résidus qui pourraient jouer le rôle d'interrupteurs moléculaires sensibles au pH depuis la forme post- vers la forme pré-fusion. Ces acides aminés acides ont donc été remplacés par de simples(D268L,N,V;D274N;E276Q;D393N;D395N: et doubles mutants(D274N-D395N,E276-393N). L'expression,repliement,transport à la membrane cellulaire ont été analysés par immunofluorescence et FACS. Des expériences de fusion cellule-cellule ont montré que la plupart de ces mutants sont affectés dans leur propriétés de fusion. En particulier,les mutants en position 268 ont complètement perdu leur activité de fusion. Les mutants D268V/L sont piégés dans leur conformation post-fusion alors que la mutation D268N entraîne la création d'un site de glycosylation,qui rend le mutant incapable de former le trimère post-fusion. Tous ces mutants,sauf E276Q,ont des capacités réduites à pseudotyper un virus dépourvu du gène de la G. De façon inattendue,la stabilisation du trimère post-fusion empêche l'incorporation de G dans les particules virales. Nous avons utilisé la génétique inverse pour produire des particules virales recombinantes. La plupart des mutants on immédiatement réverté vers la séquence de type sauvage révélant l'importance de celle-ci. Ces données démontrent que les résidus identifiés précédemment sont bien des régulateurs du changement de conformation de G et que D268 est k résidu majeur dans cet rôle. Elles suggèrent aussi que la conformation de G régule son incorporation dans les particule naissantes et/ou la libération de la nucléocapside virale dans le cytoplasme après fusion
The structure of the pre- and post-fusion of VSV G states have been elucidated by X-ray crystallography,allowing the identification of some amino acid residues which could play the role of pH-dependent molecular switches,triggering the conformational change from the post- toward the pre-fusion state. To confirm this,these acidic amino acids were mutated,creating single(D268L,N,V;D274N;E276Q;D393N;D395N) and double mutants (D274N-D395N,E276Q-D393N). Their expression,folding and transport to the tell membrane were analyzed by immunofluorescence and FACS. A cell-cell fusion assay showed that most of these mutants are affected in their membrane fusion properties. Particularly,mutants D268L/V/N have completely lost their fusion activity. We demonstrated that D268LN are trapped in their post-fusion state whereas the mutation D268N,which results in the creation of an efficient glycosylation, is unable to form the post fusion trimer. All these mutants, except mutant E276Q, do not or very inefficiently pseudotype a virus lacking the glycoprotein gene. Surprisingly,the stabilization of the post fusion trimer precludes G incorporation into the viral particles. We used a reverse genetic approach to produce recombinant viral particles. Most of the mutants immediately reverted toward the wild type sequence indicating the importance of the wild type sequence in this region. These data demonstrate that the residues identified are indeed regulators of G conformational change and that D268 is the major pH sensitive switch. It also suggests that the conformation of G regulates its incorporation in nascent particles and/or the release of viral nucleocapsid into the cytoplasm alter fusion

Les virus enveloppés pénètrent dans les cellules par la fusion membranaire catalysée par des glycoprotéines virales. Les structures cristallines ont fourni, des images statiques des conformation pré- et post-fusion de ces glycoprotéines mais les états intermédiaires restent inconnus. Les glycoprotéines (G) des vésiculovirus forment des assemblages trimériques dans leurs conformations pré- et post-fusion. Ici nous décrivons un unique cristal contenant simultanément un intermédiaire précoce et tardif durant le changement de conformation de la glycoprotéine (G) du virus Chandipura, un vésiculovirus responsable d'encéphalites mortelles. Les deux intermédiaires de G forment un hétérotétramètre (un dimère d'hétérodimère) plat exposant les boucles de fusion à sa surface. La microscopie électronique et la tomographie montrent deux intermédiaires différents à la surface du virus : une structure plate qui induit l'agrégation des virions et une structure allongée monomérique correspondant à l'intermédiaire tardif. Ces résultats ainsi que des données précédemment obtenues sur des mutants de G de plusieurs rhabdovirus, nous permettent de proposeer que le tétramère ou le dimer sont le complexe qui attaque la membrane cible. Dans ce modèle, la transition structurale depuis la forme pré-fusion de G démarre par une étape de monomérisation et se poursuit par une série d'événements au cours de laquelle les monomères sont en mesure de former d'une part le tétramère, au niveau de la zone de contact avec la membrane cible, et d'autre part un réseau de spicules dans leur état post-fusion en dehors de cette zone de contact. Ce dernier réseau serait impliqué dans l'élargissement des pores de fusion
Enveloped viruses enter cells through a membrane fusion reaction driven by conformational changes of viral fusion glycoproteins. Crystal structures have provided static pictures of pre- and post-fusion conformations for several of these glycoproteins but structures of intermediates are unknown. Vesiculovirus glycoproteins (G) form trimeric assemblies both in their pre- and post- fusion conformation. We report here a single crystal structure containing two different states of G which correspond to an early and a late intermediate during the conformational change of the glycoprotein G of Chandipura virus, a vesiculovirus responsible for deadly encephalopathies. In the crystal, the two intermediates are associated to form a fusion loop-exposing flat tetramer with twofold symmetry. Consistent with these data, electron microscopy and tomography show two different intermediates at the viral surface depending on experimental conditions : a flat assembly leading to viral aggregation and a monomeric elongated structure which resembles the late intermediate. All this information and previous rhabdoviruses mutants with so far unexplained phenotypes, allowed us to propose that G dimer or tetramer have a role during membrane fusion. We propose a model for G structural transition that is depicted as a series of events in which, after dissociation of the trimeric prefusion state, the resulting monomers are able to form, on the one hand, a tetrameric assembly in the contact zone with the target membrane, and on the other, outside this contact zone, a helical network of spikes in their post-fusion state. This helical network would be involved in fusion pore enlargement

Le transfert d'un cargo, contenu dans une vésicule, vers des cellules d'intérêt reste un défi pour les thérapies ciblées. Les glycoprotéines virales, se liant à un récepteur cellulaire et induisant la fusion membranaire, constituent des outils prometteurs pour ce type d'approche. La glycoprotéine G du VSV est la glycoprotéine virale la plus utilisée pour pseudotyper des lentivirus en thérapie génique. Il y a néanmoins des limites à l'utilisation de G : les récepteurs de G (membres de la famille du LDLR) sont ubiquitaires et présents à la surface de cellules non cibles. Les travaux de l'équipe sur la structure du complexe VSVG/LDLR avaient identifié des mutants de G ne liant plus le LDLR mais conservant leur activité de fusion. Ce découplage entre reconnaissance du récepteur et fusion ouvrait la possibilité de recibler spécifiquement la glycoprotéine vers des récepteurs d'intérêt. Nous avons construit une glycoprotéine chimérique en fusion avec un nanobody dirigé contre la mCherry en position aminoterminale de G. L'insertion de ce nanobody dans G est délétère. Par évolution expérimentale, nous avons identifié deux mutations dans G améliorant le repliement de la chimére. Ces mutations favorisent le repliement des G chimériques quel que soit le nanobody inséré en position amino-terminale. Les virus pseudotypés (VSV et lentivirus) avec ces G chimériques ont un titre 10 fois plus élevé lorsque les mutations d'optimisations sont présentes. Nous avons ensuite construit des glycoprotéines chimériques avec plusieurs nanobodies ciblant le récepteur HER2. Dans ces glycoprotéines, nous avons introduit les mutations abolissant la reconnaissance des récepteurs naturels de G. Les virus pseudotypés par ces glycoprotéines n'infectent plus que des cellules exprimant le récepteur HER2. Nous avons donc identifié des mutations de G permettant de conférer un nouveau tropisme à G par insertion aminoterminale de nanobodies. Ceci ouvre la voie à des thérapies ciblées personnalisées
The transfer of vesicles containing cargos toward cells of interest remains a challenge for targeted therapy. Viral fusion glycoproteins having the property of receptor recognition and fusion activity constitute promising tools for this kind of approach. VSV glycoprotein (G) is the most used viral glycoprotein to pseudotype lentiviruses in gene therapy. However, we encounter limits to the use of G: G cellular receptors (from LDLR family) are ubiquitous and expressed at the surface of non-target cells. The work of the team on VSVG/LDLR structure enabled us to identify G mutants that no longer bind the LDLR without affecting its fusion activity. This uncoupling between the recognition of the receptor and the fusion capacity opened up the possibility of retargeting G towards receptors of interest. A chimeric glycoprotein fused with a nanobody directed against the mCherry protein, in N-terminal, of G has been constructed. The insertion of a nanobody in G is deleterious for its activity. Using experimental evolution, we identified two mutations on G enhancing the chimera folding. Remarkably, these mutations improve the folding of chimeric Gs, regardless of the sequence of the nanobody inserted in amino-terminal. Pseudotyped viruses (both VSV and lentiviruses) with these chimeric Gs at their surface show 10 times higher titers with these mutations of optimisation. We then constructed chimeric Gs with several nanobodies targeting the receptor HER2. We introduced the mutations abolishing LDLR recognition in these Gs. Viruses pseudotyped with these glycoproteins only infected cells expressing HER2. We therefore identified G mutations conferring a new tropism of G thanks to the N-terminal insertion of a nanobody. All this work opens the way to personalised targeted therapies

La protéine de matrice (M, 229aa, 26kDa) du virus de la stomatite vésiculaire (VSV) est impliquée dans plusieurs étapes du cycle viral. Elle joue un rôle dans l'inhibition de la réponse antivirale de l'hôte, dans l'assemblage et dans le bourgeonnement des nouvelles particules virales. Pour réaliser ces fonctions, la protéine de matrice interagit avec plusieurs machineries cellulaires, comme celle des corps multivésiculaires ou le pore nucléaire. Pour identifier d'autres partenaires de la M, un crible double hybride a été réalisé et a permis l'identification de deux partenaires potentiels. Le premier est la dynamine. Cette protéine est impliquée dans la séparation des vésicules d'endocytose de la membrane plasmique. Les domaines d'interactions ont été identifié comme étant le domaine N-terminal de la M et le domaine d'homologie à la Pleckstrine de la dynamine. Par une approche de génétique inverse, nous avons mis en évidence que cette interaction était fonctionnelle. Cette interaction joue un rôle crucial dans les étapes d'assemblage juste avant le bourgeonnement. En particulier, nous montrons que la M interagit avec la dynamine afin d'inhiber l'endocytose de la cellule hôte ce qui favorise la formation de plates-formes d'assemblages virales. Le deuxième partenaire est CRM1. Cette protéine est impliquée dans l'export nucléaire. Nous avon: identifié une mutation sur la M abolissant l'interaction avec CRM1. Cette mutation a déjà été identifiée lors d'infections persistantes. L'interaction entre la M et CRM1 ne semble pas jouer de rôk dans la localisation cellulaire de M ni inhiber la fonction d'export de CRM1. La fonction de cette interaction reste donc à déterminer
The vesicular stomatitis virus (VSV) matrix protein (M, 229aa, 26kDa) is involved in many steps during the viral cycle. M plays a key role in the assembly and budding of new viral particles. M inhibits the cell's antiviral response. M interacts and hijacks cellular functions like the nuclear pore complex to inhibit RNA's nuclear export and the multivesicular body machinery for budding. A yeast two hybrid screening was realized in the lab with the M protein as a bait to identify new cellular partners. Among all the positive clones, we found two proteins of interest during the viral cycle : dynamin and CRM1. The first one is dynamin. This protein is involved in the pinching of new endocytosis vesicles from the plasma membrane. The flexible amino-terminal part of M interacts with dynamin PH domains. A single mutation on M abolishes interaction with dynamin and reduce virus yield. Adaptation of mutant virus occurs rapidly allowing the isolation of revertants of which the M protein recovered a significant level of interaction with dynamin. We show that M-dynamin interaction inhibits clathrine dependant endocytosis and favours the accumulation of the viral glycoprotein at the plasma membrane thus allowing the formation of assembly platform. The second cellular partner is CRM1. This protein is involved in the export of protein which have : nuclear export signal. A mutation on M that abolishes interaction between CRM1 and M was discovered. This mutation is known to be involved in persistent infections. The M-CRM1 interaction seems to have no effect on M cellular localisation and on the cellular activity of CRM1. The exact role of this interaction remains unclear

Le Virus de la Stomatite Vésiculaire est un virus enveloppé affectant principalement les mammifères. Non pathogène pour l'homme et facile à cultiver, il constitue un modèle idéal pour étudier les différents mécanismes du cycle infectieux. Lors de la dernière étape de ce cycle, VSV acquiert sa membrane en bourgeonnant au travers de la membrane cytoplasmique de sa cellule hôte. La protéine de matrice (M), une des cinq protéines virales, joue un rôle clef lors de ce phénomène. Elle est aussi responsable de l'assemblage et de la condensation de la nucléocapside virale, ainsi que d'effets cytopathogènes du virus. Deux propriétés biochimiques de la M liées à l'assemblage et au bourgeonnement ont été identifiées: elle est capable de s'auto-assembler et de s'associer aux membranes. Cette thèse présente d'abord l'étude de la protéine M par protéolyse ménagée menant à la purification de fragments solubles de la protéine ayant permis d'obtenir des cristaux de la protéine. Elle présente ensuite la détermination de la structure de cette protéine par radiocristallographie. Enfin, des études sur l'interaction de la protéine et de certains de ses mutants avec les membranes permettent de proposer un mode d'interaction de la protéine avec les membranes
Vesicular Stomatitis Virus, an enveloped virus, infects mainly mammals. As it is nonpathogenic for humans and easy to grow, VSV is used as a model to study the different mechanisms of the infectious cycle. During the last stage of this cycle, VSV acquires its membrane by budding through the membrane of its host cell. The matrix protein, one of the five proteins of VSV, plays a major role in this process. This protein is also involved in viral assembly and nucleocapsid condensation and is responsible for the cytopathogenic effects of the virus. Two biochemical properties have been linked to the assembly and budding functions of the M protein : the protein self-associates and binds to membranes. The present work describes the study of M protein by limited proteolysis that lead to the purification of soluble fragments that were crystallized. We also present the determination of the structure of the M protein by radiocrystallography. Together with studies of membrane association of native and mutants of the protein, the structure helped us to propose a mode of membrane interaction of the protein

Le virus de la stomatite vésiculaire (VSV) est un virus enveloppé appartenant au genre Vésiculovirus et à la famille des Rhabdoviridae. Son unique glycoprotéine G reconnait un récepteur à la surface de la cellule hôte puis, après endocytose du virion, déclenche la fusion membranaire grâce à une transition structurale induite à faible pH depuis la forme pré-fusion de G vers sa forme post-fusion. Par ailleurs, G est la cible des anticorps neutralisant le virus. Les structures cristallographiques des formes pré- et post-fusion de l'ectodomaine soluble de G (i.e. sans sa partie transmembranaire) ont été déterminées par radiocristallographie. Ces structures ont installé G comme étant le prototype des glycoprotéines de fusion de classe III. L'organisation de l'extrémité carboxyterminale de l'ectodomaine et du domaine transmembranaire de G, qui jouent un rôle important durant le processus de fusion, n'est cependant pas connue. Nous avons donc réalisé une étude par cryo-microscopie électronique sur la glycoprotéine complète, purifiée à partir de particules virales, seule ou en complexe avec un anticorps monoclonal. Cette étude nous a permis de compléter les structures de l'ectodomaine dans ses conformations pré et post-fusion. Elle suggère que les domaines transmembranaires sont mobiles au sein de la membrane. Par ailleurs, nous avons résolu deux structures de G en complexe avec un FAb dérivé d'un anticorps neutralisant, reconnaissant à la fois les formes pré- et post-fusion de plusieurs souches de Vésiculovirus. Cette première structure d'un complexe entre G et un anticorps nous a permis de caractériser finement l'épitope, d'identifier les résidus de G clefs dans l'interaction et de proposer un mécanisme de neutralisation. Ce travail augmente de façon significative nos connaissances sur la structure de G qui est la glycoprotéine la plus utilisée en biotechnologie pour délivrer un cargo et en thérapie génique pour le pseudotypage de vecteurs lentiviraux. Nous avons également débuté une étude visant à caractériser les glycoprotéines des Lyssavirus, genre appartenant également à la famille des Rhabdoviridae, et dont le virus de la rage est le prototype. Nous avons produit et purifié les ectodomaines de plusieurs Lyssavirus, et nous avons pu obtenir une structure cristallographique de l'ectodomaine du virus Ikoma (IKOV G) qui correspondrait à un intermédiaire monomérique tardif. Afin de poursuivre le travail de caractérisation de cette structure, plusieurs approches sont en cours. Nous avons notamment réalisé une sélection par phage display de ligands alphaReps dirigés contre IKOV G. Les alphareps sont des protéines artificielles constituées par des répétitions hélicoïdales. 6 des 11 alphareps sélectionnées sont capables de lier IKOV G. La caractérisation des complexes IKOV G est en cours. Nous envisageons i) d'utiliser ces alphareps pour piéger des conformations différentes de G que celle obtenues pour en obtenir la structure par cristallographie ou cryo-EM ii) tester l'activité antivirale des apharep sélectionnées
Vesicular stomatitis virus (VSV), an enveloped virus, is the prototype species of the genus Vesiculovirus within the family Rhabdoviridae. Its G glycoprotein is responsible for receptor recognition, on the host cell surface, that triggers clathrin-mediated endocytosis of VSV. Then, within the acidic environment of the endosome, VSV G undergoes a fusogenic conformational change from the pre-fusion form of G to its post-fusion form, leading the fusion of both membranes. G is also the target of virus-neutralizing antibodies. Both structures of the pre- and post-fusion forms of the soluble ectodomain of G (i.e. without its transmembrane part) were determined by radiocrystallography. These structures established G as the prototype of class III fusion glycoproteins. However, the organization of the carboxyterminal part of the ectodomain and the transmembrane domain of G, which play an important role during the fusion process, remains unknown. Therefore, we carried out a cryo-electron microscopy study on the complete glycoprotein, directly purified from viral particles, alone or in complex with a monoclonal antibody. This study led to complete the structures of the ectodomain in its pre- and post-fusion conformations. It also revealed that the transmembrane domains are mobile within the membrane. We have also solved two structures of G in complex with a FAb derived from a neutralizing antibody, recognizing both pre- and post-fusion forms of G from several strains of Vesiculovirus. Based on these first structures of a complex between G and an antibody, we could characterize the epitope, identify the key G residues in the interaction and propose a neutralization mechanism. This work significantly increases our knowledge of the structure of G, which is the most widely used glycoprotein in biotechnology for cargo delivery and in gene therapy (by lentivirus pseudotyping).We also initiated a study aimed at characterizing the glycoproteins of Lyssaviruses, a genus also part of the Rhabdoviridae family, and for which rabies virus is the prototype. We produced and purified the ectodomains of several Lyssaviruses, and we were able to obtain a crystallographic structure of the ectodomain of Ikoma virus (IKOV G), which corresponds to a late monomeric intermediate. Several approaches are underway to further characterize this structure. We also carried out a phage display selection of alphaReps directed against IKOV G. Alphareps are artificial proteins binders consisting of helical repeats. 6 out of 11 alphareps are able to bind IKOVG. Complexes of IKOV G with alphareps are currently being characterized. We plan to i) use these tools as crystallization helpers to trap different conformations of G in crystallography or cryo-EM ii) evaluate the potential antiviral activity of these alphareps

La protéine de matrice (M) du virus de la stomatite vésiculaire (VSV) est une petite protéine multifonctionnelle de 26,6 kDa. La protéine M joue un rôle majeur dans les processus d'assemblage et de bourgeonnement du VSV. Elle est aussi responsable de l'extinction des synthèses cellulaires, elle déstabilise le réseau de microtubule et induit l'apoptose par voie mitochondriale. Pour remplir l'ensemble de ses fonctions, la protéine M recrute des partenaires cellulaires. Certains de ces partenaires étaient déjà connus. Parmi ceux-ci, nous nous sommes intéressés aux protéines Nedd4, une ubiquitine ligase, et TSG101, un composant du complexe ESCRT I. Lors d'un crible double hybride effectué au laboratoire, nous avons identifié trois nouveaux partenaires de la protéine M : la dynamine, une GTPase impliquée dans le processus d'endocytose, LMP2, une sous-unité catalytique de l'immunoprotéasome et l'a-caténine, une protéine appartenant aux complexes formant les jonctions intercellulaires. Dans un premier temps, nous avons étudié les rôles des protéines Nedd4, TSG101 et dynamine dans les étapes tardives du cycle viral : l'assemblage et le bourgeonnement. Nous avons caractérisé des virus recombinants mutants dont la protéine de matrice n'interagit plus avec un ou deux de ces partenaires. Pour ce faire, nous avons mis au point une nouvelle technique, plus précise, de titration du virus par fluorescence. Cette technique a été utilisée pour établir les cinétiques de production des différents virus recombinants dans divers types cellulaires. L'ensemble de nos résultats suggère que TSG101 a un rôle dans le bourgeonnement que l'on ne met en évidence que dans un contexte de double mutation. Nos observations de microscopie électronique nous ont indiqué que la dynamine intervient en amont de la protéine Nedd4. Enfin, les virions dont la protéine de matrice n'interagit plus avec Nedd4 ont une morphologie aberrante et leur protéine de matrice n'est plus ubiquitinylée. Nous nous sommes ensuite intéressés aux nouveaux partenaires de la protéine de matrice : les protéines LMP2 et l'a-caténine. Nous avions exprimé ces protéines en fusion avec la GST et nous avons montré que ces constructions étaient bien capables d'interagir avec la protéine de matrice, confirmant ainsi les interactions mise en évidence par double hybride. Enfin, nous avons précisé les résidus et les domaines impliqués dans les associations M-LMP2 et M-a-caténine. Des expériences préliminaires nous ont aussi permis de voir que la protéine de matrice et l'a-caténine colocalisent au niveau de la membrane des cellules. L'ensemble de ces résultats contribue à une meilleure compréhension de l'interactome complexe de la protéine de matrice et au rôle des diverses protéines le constituant
The matrix protein (M) of vesicular stomatitis virus (VSV) is a multifunctional 26,6 kDa small protein. M protein plays a key role in assembly and budding processes and is responsible for cellular synthesis shut down, microtubules destabilization and apoptosis. For these reasons, M protein recruits several cellular partners. Among cellular proteins identified so far, we are interested in Nedd4, E3 unbiquitin ligase and TSG101, a component of ESCRT I complex. 2-Yeast Hybrid technique allowed us to identify three news partners for M protein: Dynamin, protein involved in endocytic pathway, LMP2, catalytic subunit of immunoproteasome and Catenin a, that belongs to intercellular junctions. First, we studied the implication of Nedd4, TSG101 and dynamin during late stages of the viral cycle: assembly and budding. We characterized recombinants mutant virus containing matrix protein that does not interact anymore with one or two partners. For that, we developed a new technique to titrate with higher accuracy viral supernatants. We applied this technique for growth curves in different cell type. Our results" suggest that TSG101 plays a role during budding that highlighted with double mutant virus. EM observations indicate that dynamin acts upstream Nedd4. We also showed that some viral particles produced from an infection using virus containing M protein that does not interact with Nedd4 display an aberrant morphology and their M protein is no longer ubiquitinated. After, we started the study of new partners of M protein: LMP2 and Catenin a, previously identified. We expressed these proteins in fusion with GST and we have shown that these buildings were well able to interact with the M, confirming both interactions. Finally we could define residues and domains involved in M-LMP2 and M-Catenin a interactions. Preliminary experiments show that M protein and Catenin a colocalize at level of epithelial cells membrane. An results contribute to a better understanding of the interactome complex matrix protein