Letteratura scientifica selezionata sul tema "Trafic de vésicules membranaires"

Les vésicules extracellulaires (VE) correspondent à un ensemble hétérogène de nanovésicules membranaires sécrétées dans le milieu extracellulaire et circulant dans les différents fluides de l’organisme. Ces VE véhiculent du matériel biologique (protéines, lipides, acides nucléiques) qu’elles peuvent transférer à des cellules/tissus cibles, modulant ainsi leur réponse et/ou leur phénotype. Les dysfonctions caractérisant les maladies métaboliques liées à l’obésité sont associées à des modifications des concentrations circulantes de VE ainsi qu’à des altérations de leur contenu. L’intérêt grandissant porté aux VE comme nouveaux vecteurs de communication intercellulaire a conduit à s’interroger sur leur rôle dans le développement des complications métaboliques. Dans cette synthèse, nous résumerons la littérature portant sur les VE circulantes comme potentiels marqueurs des maladies métaboliques. Nous détaillerons ensuite le dialogue vésiculaire inter-organes responsable du développement des complications associées à l’obésité. Enfin, nous discuterons les futures pistes de recherche qui contribueront à mieux appréhender le lien entre VE et maladies métaboliques.

Les exosomes sont de petites vésicules extracellulaires qui sont produites dans des compartiments endosomaux. Les mécanismes moléculaires sur lesquels reposent la biologie des exosomes, de leur biogenèse à leur internalisation par les cellules cibles, font notamment appel à des protéines membranaires particulières. Ces mécanismes méritent d’être clarifiés, afin de mieux comprendre la complexité de la composition des exosomes et de rationaliser leur utilisation comme biomarqueurs ou comme outils thérapeutiques. Nous discutons ici comment les syndécanes et les tétraspanines, deux familles de protéines d’échafaudage, coopèrent pour réguler les différentes étapes de la biologie des exosomes.

L’étude de l’organisation structurale et fonctionnelle des cellules eucaryotes a révélé les compartiments membranaires ainsi que la machinerie nécessaires au trafic vésiculaire des protéines. La plupart des protéines essentielles à la communication intercellulaire contiennent une séquence signal leur permettant d’être incorporées dans la voie de sécrétion conventionnelle, par laquelle les protéines sont transportées séquentiellement dans le réticulum endoplasmique (RE) puis l’appareil de Golgi. Cependant, les cellules eucaryotes sont également dotées de voies de sécrétion alternatives ou voies de sécrétion non conventionnelles, qui mettent en jeu de nombreux acteurs susceptibles de détourner certains compartiments de leurs fonctions principales au profit de fonctions sécrétoires.

AbstractIn Caenorhabditis elegans almost all the epithelial cells fuse to form permanent syncytia. Cells in the vulva and hypodermis fuse autonomously to produce ring shaped cells with defined structures and functions. Analysis of temporal and spatial sequence of events together with ultrastructural characterisation of cell fusion intermediates show that fusion pores in specific domains of the membranes dilate and subsequently vesicles are formed. The fusomorphogenetic hypothesis states that these vesicles are targeted to different domains of the plasma membrane where they fuse, thereby causing changes in cell shape. It is proposed that cell fusion and polarised membrane recycling are involved in the formation of ring cells. Fusomorphogenesis is a working model to investigate the forces that drive pattern formation and generate diversity of developmental mechanisms in nematodes. Chez Caenorhabditis elegans, presque toutes les cellules épithéliales fusionnent pour former des syncytia permanents. Les cellules de la vulve et de l’hypoderme fusionnent de façon autonome et produisent des cellules en forme d’anneau avec des structures et des fonctions définies. L’analyse de la séquence temporelle et spatiale des événements, alliée à la caractérisation ultrastructurale des intermédiaires de fusion cellulaire, montre que des pores de fusion se dilatent dans des domaines membranaires spécifiques et que des vésicules sont par la suite formées. L’hypothèse fusomorphogénétique suggère que ces vésicules sont ciblées vers des domaines différents de la membrane plasmique, ou elles fusionnent, provoquant ainsi des changements de forme cellulaire. Il est proposé que la fusion cellulaire et le recyclage polarisé de membranes soient considérés comme impliqués dans la formation des cellules en anneau. La fusomorphogénèse est un guide de travail pour étudier les forces qui entraînent la formation d’un modèle spatial et engendrent la diversité des mécanismes de développement chez les nématodes.

Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) représentent la plus grande famille de récepteurs membranaires. Classiquement, il était admis que la signalisation des RCPG, résultant de leur couplage aux protéines G, provenait exclusivement du pool de récepteurs présents à la surface cellulaire et, qu’une fois internalisés, les RCPG devenaient « silencieux ». À l’heure actuelle, il existe des preuves expérimentales montrant que des RCPG internalisés continuent à produire un signal via les protéines G. Dans notre travail, nous avons démontré, qu’une fois internalisé et présent dans la membrane des endosomes précoces, le récepteur du peptide insulinotrope dépendant du glucose (RGIP) continue de stimuler la production d’AMPc et d’activer la protéine kinase-A (PKA). En plus de preuves indirectes montrant que les cinétiques de production d’AMPc et d’activation de la PKA sont dépendantes de l’internalisation du RGIP et de son trafic intracellulaire, nous avons identifié la forme active de Gαs dans les endosomes précoces contenant le RGIP et détecté un signal au moyen d’une sonde par RET d’AMPc démontrant une production d’AMPc à la surface des endosomes contenant le GIP.

Nous avons, pour la premiere fois, isole et caracterise les vesicules mantelees a partir d'algues marines: laminaria digitata et ulva lactuca representantes des algues brunes et des algues vertes respectivement. Les fractions enrichies en vesicules mantelees ont ete preparees par gradient discontinu de saccharose. Les polypeptides de 170-175 kda correspondent aux chaines lourdes de la clathrine de buf et un des polypeptides de 70 kda est semblable au composant de la clathrine de carotte. Tous ces polypeptides montrent une reponse positive a l'anticorps anticlathrine de buf obtenu chez la chevre ou chez le lapin. Chez u. Lactuca, la proportion de la clathrine varie pendant les etapes de croissance de la plante. Les images de microscopie electronique revelent une structure reguliere du manteau vesiculaire. L'analyse lipidique montre la presence des phospholipides dans les vm de ces algues. L'analyse des glucides montre une proportion elevee de galnac et glcnac dans les vm, alors qu'ils ne sont pas detectables dans les extraits totaux de ces algues. La composition chimique des vesicules mantelees, quantitativement specifique pour chaque type d'algue etudie, suggere l'implication des vesicules mantelees dans l'edification des parois cellulaires ainsi que dans le transport des glycoproteines et glycolipides vers les differentes membranes cellulaires

Toxoplasma gondii, l'agent pathogène causant la toxoplasmose, infecte et se réplique à l'intérieur de cellules hôtes grâce à sa capacité à sécréter des facteurs stockés dans des organites sécrétoires uniques (rhoptries, micronèmes, granules denses). Ces facteurs permettent au parasite de moduler le système immunitaire de l'hôte et d'en capturer certains éléments. La formation de ces organites uniques et les processus de sécrétion et de capture dépendent d'événements de trafic vésiculaire dont les bases moléculaires restent peu connues. Notamment, il n'existe pratiquement aucune caractérisation des protéines à domaine BAR, exprimées chez T. gondii et d'autres apicomplexes, malgré leur rôle connu dans le trafic vésiculaire chez d'autres eucaryotes. Ici, en combinant des analyses structurales avec des tests in vitro et des observations cellulaires, j'ai caractérisé TgREMIND (REgulators of Membrane INteracting Domains), protéine impliquée dans la génération des rhoptries et granules denses, ainsi que TgBAR2, localisée à la périphérie du parasite. J'ai établi que TgREMIND possède un domaine F-BAR pour cibler préférentiellement des membranes neutres et potentiellement les perturber. De plus, je montre que la protéine possède un nouveau type de domaine structural appelé REMIND, qui semble capable d'inhiber l'activité de TgREMIND. En parallèle, je montre que TgBAR2 contient un domaine BAR avec l'interface de liaison à la membrane la plus basique décrite pour ce type de domaine, capable de déformer puissamment des membranes anioniques pour former notamment des tubules micellaires. Ceci suggère que ce domaine représente un nouveau type de domaine BAR. Mes données suggèrent que T. gondii code pour des protéines atypiques à domaine BAR avec des propriétés de liaison membranaire très contrastées pour cibler des régions distinctes de son système de trafic vésiculaire
Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis, infects and replicates within host cells through its ability to secrete factors stored in unique secretory organelles (rhoptries, micronemes, dense granules). These factors allow the parasite to modulate the host's immune system and capture certain elements. The formation of these unique organelles and the secretion and capture processes depend on trafficking events whose molecular bases remain poorly understood. Notably, there is virtually no characterization of BAR domain proteins, expressed in T. gondii and other apicomplexans, despite their known role in vesicular trafficking in other eukaryotes. Here, by combining structural analyses with in vitro tests and cellular observations, I characterized TgREMIND (REgulators of Membrane INter-acting Do-mains), a protein involved in the generation of rhoptries and dense granules, as well as TgBAR2, located at the periphery of the parasite. I established that TgREMIND has an F-BAR domain to preferentially target neutral membranes and potentially disrupt them. Additionally, I show that the protein has a new type of structural domain called REMIND, which appears capable of inhibiting TgREMIND activity. In parallel, I show that TgBAR2 contains a BAR domain with the most basic membrane-binding interface described for this type of domain, capable of powerfully deforming anionic membranes to form micellar tubules. This suggests that this domain represents a new type of BAR domain. My data indicate that T. gondii encodes two atypical BAR domain proteins with highly contrasting membrane binding properties to target distinct regions of its vesicular trafficking system

Les tubes membranaires sont des structures rencontrées dans le monde vivant et notamment dans l'environnement cellulaire. L'extrusion artificielle de tubes représente un outil idéal pour sonder les propriétés de la membrane et ses interactions avec la matrice sous-jacente. Notre technique d'extrusion hydrodynamique a permis d'extraire des tubes membranaires à partir de vésicules géantes ou de cellules ancrées ponctuellement à une micro-pointe et soumises à un écoulement. On s'est intéressé tout d'abord à caractériser la dynamique d'extrusion de tubes extraits de vésicules rendues poreuses par l'action de la streptolysine O. La comparaison avec les dynamiques d'extrusions sur des vésicules classiques a permis de mieux définir le comportement singulier des vésicules poreuses. La multitude de pores présents au sein de la membrane des vésicules entraîne une perte de ses propriétés élastiques. D'autres expériences ont été menées sur des vésicules encapsulant un gel de Poly(Nipam), permettant ainsi de se rapprocher d'un système plus réaliste de la cellule. L'extrusion de tubes sur des vésicules décorées par un polyélectrolyte, le chitosane, a également été étudié. On a poursuivi notre étude sur une lignée de cellules endocrines, les cellules BON. Les relations entre la force et la vitesse d'extrusion obtenue expérimentalement ont été confrontées à notre modèle théorique. Plusieurs paramètres membranaires tels que la viscosité membranaire, l'énergie d'adhésion membrane-cytosquelette ont pu être estimés. Enfin, on s'est intéressé à étudier l'effet d'un apport massif de membrane, provoqué par le déclenchement volontaire de l'exocytose, sur la dynamique d'extrusion de tubes.

A travers leur capacité à réguler la dynamique des microtubules, les phosphoprotéines apparentées à la stathmine (les stathmines membranaires) tiennent des rôles spécifiques dans la formation et la maturation du système nerveux, en particulier la stathmine 2 (SCG10) dans la croissance axonale et la stathmine 3 (SCLIP) dans le branchement neuritique. L’ensemble de ces protéines est localisé au Golgi et à des vésicules qui sont accumulées au cône de croissance. La palmitoylation de deux cystéines conservées présentes dans leur domaine d’adressage N-terminal est responsable de cette localisation membranaire. Avec l’objectif de mieux comprendre l’interconnexion entre la localisation et les fonctions des stathmines membranaires, nous avons disséqué les mécanismes impliqués dans leur palmitoylation et leur trafic. Ainsi, nous avons montré, par des approches biochimiques et de biologie cellulaire sur des neurones en culture, que la palmitoylation des stathmines membranaires a lieu au Golgi et tient une place centrale dans leur localisation et leur trafic au sein des voies d’exocytose. Nous avons également identifié les enzymes (DHHC2, 3, 7, 15, et 21) potentiellement responsables de cette palmitoylation et montré qu’elles étaient capables de stabiliser l’ancrage membranaire préalablement établi probablement par liaisons électrostatiques. Ainsi, à travers son caractère réversible et régulable, la palmitoylation permet aux stathmines de cycler entre le cytosol et leurs membranes spécifiques en réponse à des signaux extracellulaires. Cette régulation permet le transport de leurs partenaires vers des lieux qui nécessitent une régulation de la dynamique des microtubules, notamment lors de la différenciation neuronale

La sécrétion de vésicules membranaires (VMs) constitue un processus physiologique important qui a particulièrement été étudié chez les Bactéries et les Eucaryotes. La récente découverte de la production de VMs chez les Archées souligne cependant que ce phénomène est universel et suggère que le dernier ancêtre commun aux trois domaines, LUCA (Last Universal Common Ancestor), produisait certainement des VMs. Les VMs des Archées n'ayant pour le moment été étudiées que chez certaines Crénarchées (ex : G/ Sulfolobus), nous avons entrepris de caractériser les VMs produites par un groupe d'Euryarchées hyperthermophiles anaérobies, les Thermococcales. Dans la première partie de cette étude, nous avons examiné le mécanisme de production ainsi que la composition en lipides et en protéines des VMs de trois espèces de Thermococcales: Thermococcus kodakaraensis, Thermococcus gammatolerans et Thermocococus sp. 5-4. Nous avons observé que les VMs sont sécrétées par un processus de bourgeonnement à partir de l'enveloppe cellulaire similaire à la formation des ectosomes par les cellules eucaryotes. De plus, les VMs sont fréquemment libérées en groupes, formant de grosses protubérances ou des filaments ressemblant aux nanopodes récemment décrits chez les Bactéries. Des différences de structure et de composition protéique sont observées entre les VMs des trois souches étudiées. Cependant, les VMs et les membranes cellulaires d'une même souche ont des compositions protéique et lipidique très proches, confirmant que les VMs sont produites à partir des membranes des cellules. Les VMs et les membranes cellulaires des trois souches comportent notamment un récepteur de peptides de la famille OppA (Oligopeptide-binding protein A) et des homologues de cette protéine ont été identifiés dans les VMs de certaines souches de Sulfolobus.Les VMs sécrétées par les Thermococcales sont associées à de l'ADN et cette association les protègent contre la thermodégradation. Nous montrons dans notre étude que les cellules de T. kodakaraensis transformées avec le plasmide navette plC70 relâchent des VMs comportant ce plasmide. De façon intéressante, ces VMs peuvent être utilisées pour transférer pLC70 à des cellules dénuées de plasmides, suggérant que les VMs pourraient être impliquées dans le transfert d'ADN entre cellules à haute température.Dans la seconde partie de cette étude, nous nous sommes particulièrement intéressés à la souche Thermococcus nautilus, une Thermococcale produisant des VMs associées de manière sélective à deux plasmides contenus dans la cellule. L'un d'eux correspond notamment à un génome viral défectueux de la lignée d'adenovirus PRD1. Ceci indique que les VMs peuvent être un moyen de transport pour des génomes viraux et suggère que la production de VMs par des cellules ancestrales pourraient avoir joué un rôle dans l'apparition des virus.En plus d'être impliquées dans le transport de plasmides/virus, les VMs produites par T. nautilus exercent un effet toxique sur certaines souches de Thermococcales, probablement dû au convoyage de toxines. Même si ces " thermococcines " nécessitent d'être caractérisées, il s'agit de la première mise en évidence d'une activité toxique liée aux VMs chez les Thermococcales.

La sécrétion de vésicules membranaires (VMs) constitue un processus physiologique important qui a particulièrement été étudié chez les Bactéries et les Eucaryotes. La récente découverte de la production de VMs chez les Archées souligne cependant que ce phénomène est universel et suggère que le dernier ancêtre commun aux trois domaines, LUCA (Last Universal Common Ancestor), produisait certainement des VMs. Les VMs des Archées n’ayant pour le moment été étudiées que chez certaines Crénarchées (ex : G/ Sulfolobus), nous avons entrepris de caractériser les VMs produites par un groupe d’Euryarchées hyperthermophiles anaérobies, les Thermococcales. Dans la première partie de cette étude, nous avons examiné le mécanisme de production ainsi que la composition en lipides et en protéines des VMs de trois espèces de Thermococcales: Thermococcus kodakaraensis, Thermococcus gammatolerans et Thermocococus sp. 5-4. Nous avons observé que les VMs sont sécrétées par un processus de bourgeonnement à partir de l’enveloppe cellulaire similaire à la formation des ectosomes par les cellules eucaryotes. De plus, les VMs sont fréquemment libérées en groupes, formant de grosses protubérances ou des filaments ressemblant aux nanopodes récemment décrits chez les Bactéries. Des différences de structure et de composition protéique sont observées entre les VMs des trois souches étudiées. Cependant, les VMs et les membranes cellulaires d’une même souche ont des compositions protéique et lipidique très proches, confirmant que les VMs sont produites à partir des membranes des cellules. Les VMs et les membranes cellulaires des trois souches comportent notamment un récepteur de peptides de la famille OppA (Oligopeptide-binding protein A) et des homologues de cette protéine ont été identifiés dans les VMs de certaines souches de Sulfolobus.Les VMs sécrétées par les Thermococcales sont associées à de l’ADN et cette association les protègent contre la thermodégradation. Nous montrons dans notre étude que les cellules de T. kodakaraensis transformées avec le plasmide navette plC70 relâchent des VMs comportant ce plasmide. De façon intéressante, ces VMs peuvent être utilisées pour transférer pLC70 à des cellules dénuées de plasmides, suggérant que les VMs pourraient être impliquées dans le transfert d’ADN entre cellules à haute température.Dans la seconde partie de cette étude, nous nous sommes particulièrement intéressés à la souche Thermococcus nautilus, une Thermococcale produisant des VMs associées de manière sélective à deux plasmides contenus dans la cellule. L’un d’eux correspond notamment à un génome viral défectueux de la lignée d’adenovirus PRD1. Ceci indique que les VMs peuvent être un moyen de transport pour des génomes viraux et suggère que la production de VMs par des cellules ancestrales pourraient avoir joué un rôle dans l’apparition des virus.En plus d’être impliquées dans le transport de plasmides/virus, les VMs produites par T. nautilus exercent un effet toxique sur certaines souches de Thermococcales, probablement dû au convoyage de toxines. Même si ces « thermococcines » nécessitent d’être caractérisées, il s’agit de la première mise en évidence d’une activité toxique liée aux VMs chez les Thermococcales
Secretion of membrane vesicles (MVs) is an important physiological process that has been extensively studied in Bacteria and Eukarya. The recent discovery that Archaea produce MVs shows that this process is universal and suggests that the Last Universal Common Ancestor, LUCA, certainly produced MVs. As these archaeal MVs have been only studied in some Crenarchaeota (ex: G/ Sulfolobus), we started characterizing MVs produced by Thermococcales, a group of hyperthermophilic anaerobic Euryarchaeota.In the first part of this study we examined the mechanism of production as well as the protein and lipid composition of MVs produced by three strains of Thermococcales: Thermococcus kodakaraensis, Thermococcus gammatolerans and Thermocococus sp. 5-4. We observed that MVs are released by a budding process from the cell envelope that is similar to ectosome formation in eukaryotic cells. Moreover, clusters of MVs often form filamentous structures and protuberances on cell surfaces, resembling recently described bacterial nanopods. Differences in structure are observable between MVs of the three species, as well as in their protein composition. However, MVs and cell membranes from the same species have a quite similar protein and lipid composition, confirming that MVs are produced from cell membranes. A major protein present in cell membranes and MVs from the three strains is the oligopeptide-binding proteins (OppA), which has homologues in MVs from Sulfolobus species. Thermococcales MVs harbor DNA and protect this DNA against thermodegradation. Here, we show that T. kodakaraensis cells transformed with the shuttle plasmid pLC70 release MVs harboring this plasmid. Interestingly, these MVs can be used to transfer pLC70 into plasmid-free cells, suggesting that MVs could be involved in DNA transfer between cells at high temperature. In the second part of this study, we were specially interested in the strain Thermococcus nautilus, a Thermococcale that produces MVs selectively enriched in two plasmids from the cell. Notably, one of them corresponds to the genome of a defective virus from PRD1-adenovirus lineage. This indicates that MVs can be used as vehicles for the transport of viral genomes and suggests that production of MVs by ancestral cells could have played a role in the origin of viruses.In addition to be involved in transport of plasmids/viruses, MVs from T. nautilus display a toxic effect on some strains of Thermococcales, maybe due to the delivery of toxins. Even if these “thermococcins” remain to be characterized, this is the first time that a toxic activity associated with MVs has been shown in Thermococcales

Les acides gras saturés (AGS) altèrent la fonctionnalité des organites dans de nombreux types cellulaires. Il a été proposé que ce processus, également nommé lipointoxication, puisse être responsable de plusieurs pathologies humaines telles que le diabète de Type 2.Au niveau cellulaire, l'accumulation d'AGS est associée à une augmentation du taux de saturation des phospholipides (PL) membranaires, les composants majoritaires des membranes des organites, mais également du taux de céramides, impliqués dans l'induction de l'apoptose.Dans une première partie de ce travail, nous avons étudié, chez le modèle cellulaire simple Saccharomyces cerevisiae, la contribution relative des PL saturés et des céramides à la cytotoxicité des AGS. Nous avons pu démontrer que les céramides agissaient à des étapes précoces de la voie de sécrétion, alors que les PL saturés impactaient des étapes plus tardives en altérant en particulier la formation de vésicules de sécrétion.Parallèlement, nous avons également constaté que le taux d'AGS était significativement augmenté dans les PL membranaires des patients atteints d'une maladie génétique, la mucoviscidose. La mutation la plus fréquente responsable de cette maladie, résulte en la rétention de la protéine correspondante dans le réticulum endoplasmique. Des molécules pharmacologiques, capables de corriger le trafic de la protéine à sa destination finale ont été isolées in vitro, mais des limitations importantes ont pu être observées lors des tests cliniques. Nous proposons dans le présent manuscrit que la lipointoxication liée aux AGS pourrait être un écueil important à l'utilisation des correcteurs actuels pour le traitement de la mucoviscidose
Saturated fatty acids (SFA) have been reported to alter organelle integrity in many cell types. This process, also known as lipotoxicity, has been proposed to be responsible for several human pathologies such as type 2 diabetes.At the cellular level, SFA accumulation is associated with an increase of the saturation rate of membrane phospholipids (PL), the major components of organelle membranes, and an increase of ceramides levels, implicated in apoptosis induction.In the first part of this work, we took advantage of a simple yeast-based model to study the relative contributions of saturated PL and ceramides to SFA cytotoxicity. We demonstrated that ceramides act early in the secretory pathway, while saturated PL impact the later steps, and particularly the formation of secretory vesicles.In parallel, we observed that SFA amounts were significantly increased in the membrane PL of cystic fibrosis (CF) patient cells. The most common mutation responsible for this genetic disease results in the retention of the corresponding protein in the endoplasmic reticulum. Pharmacological agents, which correct the mistrafficking of the protein, have been isolated in vitro, but they did not show significant improvements in clinical trials. We propose in the present manuscript, that SFA-related lipointoxication could be an important bottleneck for the use of these pharmacological agents in clinical trials

Nous avons construit diverses formes chimeriques de la neprilysine (e. C. 3. 4. 24. 11, endopeptidase neutre, nep) pour etudier les determinants moleculaires du ciblage entre le reseau trans-golgi et la surface cellulaire, dans les cellules de la lignee madin-darby canine kidney (mdck). Nous avons etudie l'effet de l'addition d'un glycosyl-phosphatidylinositol (gpi) sur l'incorporation des proteines dans les glycolipid rafts. Dans ce but, nous avons utilise la nep de type sauvage (wt-nep), une proteine membranaire de type ii, ainsi que la gpi-nep, constituee du domaine extracellulaire de la nep ancre a la membrane plasmique par un gpi en c-terminal, et la da-nep, qui contient une ancre gpi c-terminale en plus de l'ancre peptidique originale de la wt-nep. Nous avons pu montrer que seules la da-nep et la gpi-nep s'associent aux glycolipid rafts au niveau du golgi. Le signal porte par l'ancre gpi semble donc dominant sur celui present dans la wt-nep pour le choix d'une vesicule de transport entre le golgi et la membrane apicale des cellules mdck. La deuxieme partie de nos travaux concerne l'etude du mecanisme de retention intracellulaire de l'isoforme 1b de l'enzyme de conversion de l'endotheline (ece-1). Cette proteine membranaire existe sous trois isoformes (ece-1a, 1b, et 1c) qui different uniquement par la nature de leur domaine intracellulaire n-terminal. Seule l'ece-1b est intracellulaire. En observant la localisation intracellulaire d'une chimere comprenant les 17 acides amines n-terminaux de ece-1b fusionnes a la wt-nep, nous avons pu conclure que cette portion de l'ece-1b contient un signal de ciblage intracellulaire. La diminution du taux de retention intracellulaire subsequente a la mutation des residus leu 1 2 et leu 1 3 en ala dans la chimere ece/nep nous a permis d'identifier ces deux residus comme faisant partie de ce signal. Ces resultats suggerent qu'un signal de type di-leu serait responsable de la retention intracellulaire de l'ece-1b.