Tesi sul tema "Résistance aux thérapies"
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Geneste, Aline. "Tissu adipeux et résistance tumorale aux thérapies ciblées". Thesis, Lyon, 2018. http://www.theses.fr/2018LYSE1115/document.
Abstract (sommario):
Les thérapies ciblées telles que les inhibiteurs de la tyrosine kinase ont permis d'améliorer le traitement du cancer du sein en ciblant HER2. Cependant, il a été observé que le lapatinib était moins efficace chez les patients obèses ou en surpoids que chez les patients de poids normal.Nous avons d'abord reproduit l'effet de résistance des cellules de cancer du sein au lapatinib en présence de tissu adipeux tel qu’il a été observé pour d’autres thérapies. Les cellules tumorales qui surexpriment HER2 étaient partiellement résistantes au lapatinib mais également à d'autres inhibiteurs de la tyrosine kinase lorsqu'elles étaient en contact avec le milieu conditionné d’adipocytes. En implantant du tissu adipeux humain et des tumeurs humaines chez la souris, nous avons pu étudier la résistance du cancer du sein au lapatinib in vivo.Pour comprendre le mécanisme de cette résistance, nous avons exposé les adipocytes à plusieurs modulateurs du métabolisme. La cytotoxicité cellulaire induite par le lapatinib était plus faible pour les cellules tumorales exposées à un milieu conditionné d'adipocytes préalablement incubés avec les alpha-bloquants qu'à un milieu conditionné à partir d'adipocytes seuls. De la même manière, cette toxicité était inférieure pour les agonistes des récepteurs alpha adrénergiques, pour les bêtabloquants et pour les inhibiteurs de lipolyse. Au contraire, la cytotoxicité a été augmentée pour les cellules tumorales en contact avec le milieu conditionné d’adipocytes exposés aux agonistes du récepteur bêta-adrénergiques. Au niveau des cellules cancéreuses, l'arrêt du cycle cellulaire induit par le lapatinib était réduit pour les cellules tumorales exposées au milieu conditionné d’adipocytes en ce qui concerne le pourcentage de cellules dans la phase G0/G1. Ceci s’est vérifié en étudiant l'expression des gènes codant pour plusieurs protéines impliquées dans la progression du cycle cellulaireTargeted therapies as tyrosine kinase inhibitors permitted an improvement of breast cancer therapies by targeting HER2. However, resistance has been observed in obèse patients for lapatinib treatment.We reproduced the effect of resistance of breast cancer cells to laaptinib in presence of adipose tissue as observed for other therapies. Tumor cells overexpressing HER2 was partly resistant to lapatinib but also for other tyrosine kinase inhibitors when in contact with adipocyte-conditioned medium. By impnating human adipose tissue nad human tumors in mice, we were able to study rhe resistance of breast tumor cells in vivo.In order to elucidate the mechanism of such resistance, we exposed the adipocytes to several metabolism modulators. The lapatinib-induced cell cytotoxicity was lower for the tumor cells exposed to the conditioned medium from adipocytes earlier exposed to alpha blockers than to the conditioned medium from adipocytes alone. In the same manner, the toxicity was lower for the agonists of alpha-adrenergic receptors , for beta-blockers and for the lipolysis inhibitors. At the opposite, the cytotoxicity was enhanced for tumor cells in contact with the conditioned medium of adipocytes exposed to the agonists of beta adrenergic receptors.At the tumor cell level, the laaptinib-induced cell cycle arrest was reduced for the tumor cells exposed to the conditioned medium regarding the G0/G1 phase. That was verified by the study of the expression of genes involved in the cell cycle progression
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Lhuissier, Eva. "Chondrosarcome : mécanismes de résistance aux traitements conventionnels et thérapies innovantes". Thesis, Normandie, 2017. http://www.theses.fr/2017NORMC407/document.
Abstract (sommario):
Les chondrosarcomes sont des tumeurs malignes osseuses, considérés comme radio- et chimio-résistants, du fait de leur environnement hypoxique. Dans ce contexte, cette étude vise à mieux comprendre le rôle de l’hypoxie dans la résistance de ces tumeurs à la chimiothérapie (cisplatine) et à la radiothérapie (rayons X) et à identifier de nouvelles stratégies thérapeutiques permettant de sensibiliser les chondrosarcomes aux traitements, par un ciblage épigénétique de la méthylation de la lysine 27 de l’histone H3 (H3K27).Dans un premier temps, nous avons montré que, contrairement à ce qui est communément admis, l’hypoxie n’a pas d’effet sur la sensibilité au cisplatine ou aux rayons X dans certains chondrosarcomes alors qu’il augmente la résistance au cisplatine et la sensibilité aux rayons X uniquement dans une lignée de chondrosarcome. Dans un second temps, nous avons montré que le 3-deazaneplanocine A (DZNep) induit l’apoptose dans ces tumeurs, par un mécanisme indépendant de la méthylation de H3K27 et de sa méthylase EZH2 et semblerait agir par la voie Rhoβ/EGFR. Cependant, il provoque des effets secondaires sur la fertilité masculine. Par ailleurs, son association avec le cisplatine potentialise ses effets toxiques sur les chondrosarcomes. Le GSK-J4, quant à lui ralentit la croissance cellulaire des chondrosarcomes et son association avec le cisplatine augmente cet effet. Cette étude souligne que les chondrosarcomes possèdent des mécanismes de régulation cellulaires différents, d’où l’importance de mener des études sur plusieurs lignées cellulaires afin de mieux prédire la réponse aux traitements. De plus, ces travaux démontrent les propriétés anti-tumorales du DZNep et du GSK-J4 dans le traitement de ces tumeursChondrosarcomas are bone malignant tumors, considered as radio- and chemo-resistant, due to their hypoxic environment. In this context, this study aimed to better understand the role of hypoxia in the resistance of these tumors to chemotherapy (cisplatin) and radiotherapy (X-rays) and to identify new therapeutic strategies to re-sensitize chondrosarcomas by epigenetic targeting of H3K27 methylation. First, we showed that, contrary to what is commonly accepted, hypoxia has differential effect on cisplatin or X-ray sensitivity in chondrosarcomas, while it increases cisplatin resistance and X-ray sensitivity only in one cell line. Secondly, 3-deazaneplanocin A (DZNep) induces apoptosis in these tumors by a mechanism independent of H3K27 methylation and its methylase EZH2 and seems to act through the Rhoβ / EGFR pathway. However, it causes side effects on male fertility. In addition, its association with cisplatin potentiates its toxic effects on chondrosarcomas. The GSK-J4, on the other hand, decreases cell growth and its association with cisplatin increases this effect.This study highlights that chondrosarcomas use different cellular regulation mechanisms, showing the importance of conducting studies on several cell lines in order to better predict the response to treatments. In addition, these studies demonstrate the anti-tumoral properties of DZNep and GSK-J4 in the treatment of these tumors
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Kammerer-Jacquet, Solène-Florence. "Carcinome à cellules claires du rein : phénotype métastatique et résistance aux thérapies ciblées". Thesis, Rennes 1, 2016. http://www.theses.fr/2016REN1B038.
Abstract (sommario):
Le carcinome rénal à cellules claires (ccRCC) est la tumeur du rein la plus fréquente. Il se caractérise par une inactivation fréquente du gène suppresseur de tumeur VHL retrouvée dans 70% des tumeurs conduisant à une transcription des gènes cibles du facteur de transcription HIF dont le VEGF. Il s’agit d’une tumeur agressive métastatique chez 50% des patients. Le sunitinib, un inhibiteur des récepteurs tyrosine kinase anti-angiogénique, est actuellement le plus utilisé en 1ère ligne malgré 30% des patients qui progressent rapidement. L’avènement d’un nouvel anti-angiogénique ciblant MET (cabozantinib) et d’immunomodulateurs (anticorps anti-PD-1, nivolumab) rend cruciale la découverte de facteurs prédictifs de réponse au traitement. Dans une 1ére partie, nous avons étudié une série rétrospective de 98 ccRCC consécutifs pour lesquels nous souhaitions étudiés le statut VHL complet et le corréler à l’expression de PD-L1. De plus, alors que le pronostic est différent entre ccRCC métastatiques synchrones (d’emblée) et métachrones (à distance), leur phénotype n’avait jamais été comparé. Pour cela, nous avons effectué une analyse histologique des principaux facteurs pronostiques, immunohistochimique (CAIX, VEGF, PAR3, PD-1 et PD-L1) et moléculaire (statut complet VHL : délétion, mutation et méthylation du promoteur) corrélée à la survie spécifique. Nous avons démontré que le statut VHL non-inactivé (niVHL) était associé à la présence de métastases synchrones, une composante sarcomatoïde, un infiltrat lymphocytaire dense, une surexpression de VEGF, une expression de PD-L1 et à un mauvais pronostic. Nous avons aussi comparé les phénotypes des ccRCC métastatiques métachrones et synchrones. Ces derniers étaient associés à une composante sarcomatoïde, une expression cytoplasmique de PAR-3, une surexpression de VEGFA, un statut niVHL et à un mauvais pronostic depuis le diagnostic des métastases. Dans une 2ème partie, nous avons étudié une série rétrospective de 90 ccRCC métastatiques consécutifs traités par sunitinib en première ligne afin d’identifier des facteurs prédictifs de réponse ou de résistance. Nous avons utilisé les mêmes techniques que précédemment avec en plus le statut MET (mutation en NGS et expression en IHC). Les patients ont été classés en résistants primaires, intermédiaires et longs répondeurs en fonction de la durée de leur réponse évaluée par des critères radiologiques (RECIST). Nous avons aussi caractérisé le profil génétique de 73 ccRCC de cette série par CGH array pour lesquels nous disposions de congélation. Les patients résistants primaires avaient plus souvent un mauvais pronostic (score de Heng), des métastases hépatiques, une infiltration de la graisse hilaire. Sur le plan cytogénétique, leurs tumeurs présentaient des altérations génétiques plus nombreuses tant au niveau des gains que des pertes. Parmi ces altérations récurrentes, étaient décrites les gains du 5p, 7p, 8q22.1-qter et la perte de la région 6q21-q25.3. Le modèle de Cox multivarié mettait en évidence 4 facteurs indépendants : le score de Heng, des métastases hépatiques, une infiltration de la graisse hilaire et le gain du 8q qui intégrés dans un nomogramme pronostique avaient un c-index de 0.74 et 0.77 pour la survie sans progression et la survie globale. En conclusion, notre étude a permis d’identifier un sous-type de ccRCC avec un statut niVHL de mauvais pronostic qu’il conviendrait d’étudier de manière plus approfondie sur le plan génomique. De plus, nous avons montré une différence de phénotype entre les ccRCC des patients métastatiques synchrones et métachrones alors que leur prise en charge est actuellement équivalente. Enfin nous avons mis en évidence un nomogramme pronostique dans les ccRCC métastatiques traités par sunitinib en 1ère line. Ce nomogramme s’il est confirmé par une étude prospective plus large pourrait avoir un impact clinique important dans la sélection des patients les plus à même de bénéficier des anti-angiogéniquesClear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common kidney cancer. It is characterized by frequent inactivation of the tumor suppressor gene VHL found in 70% of tumors leading to the transcription of HIF transcription factor target genes such as VEGF. This is an aggressive tumor with 50% of metastatic patients. Sunitinib, an inhibitor of receptor tyrosine kinase antiangiogenic, is currently the most used in 1st line despite 30% of patients who progress quickly. The advent of a new anti-angiogenic targeting MET (cabozantinib) and immunomodulators (anti-PD-1 antibody, nivolumab) makes crucial discovery of predictors of response to treatment. In the first part, we studied a retrospective study of 98 consecutive ccRCC. We assessed complete VHL status and correlated it with the expression of PD-L1. Moreover, while the prognosis is different between ccRCC synchronous metastatic and metachronous, their phenotype have never been compared. In this purpose, we performed an analysis of the main pathological prognostic factors, immunohistochemical markers (CAIX, VEGF, PAR3, PD-1 and PD-L1) and molecular (VHL status: deletion, mutation and promoter methylation) correlated with specific survival. We demonstrated that non-inactivated VHL tumors (niVHL) were associated with the presence of synchronous metastases, sarcomatoid component, a dense lymphocytic infiltrate, an overexpression of VEGF, an expression of PD-L1 and a poor prognosis. We also compared the phenotypes of metachronous and synchronous metastatic ccRCC. The first ones were associated with sarcomatoid component, cytoplasmic expression of PAR-3 overexpression VEGFA and niVHL status and a poor prognosis even from the diagnosis of metastases. In the second part, we studied a retrospective study of 90 consecutive metastatic ccRCC treated with first line sunitinib to identify predictors of response or resistance. We used the same techniques as above plus the MET status (mutation in Next-Generation sequencing and expression by IHC). Patients were classified as primary-refractory, intermediate and long-term responders depending on the duration of their response as assessed by radiological criteria (RECIST). We also characterized the genetic profile of 73 ccRCC of this series by CGH array for which we had frozen tumor. Primary refractory patients often had poor prognosis (Heng criteria), liver metastases, infiltration of the hilar fat. Cytogenetically, their tumors had many more genetic alterations, both gains as losses. These recurrent alterations were gains of 5p, 7p, 8q22.1-qter and loss of 6q21-q25.3 region. The multivariate Cox model highlighted four independent factors: the score of Heng, liver metastases, infiltration of the hilar fat and gain of 8q which integrated into a prognostic nomogram had a c-index of 0.74 for survival progression-free survival and 0.77 for overall survival. In conclusion, our study identified a subtype of ccRCC with a poor prognosis with niVHL status that should be explored at the genomic level. Furthermore, we showed a phenotype difference between ccRCC synchronous and metachronous metastatic patients whereas their care is currently the same. Finally we have identified a prognostic nomogram in metastatic ccRCC treated with sunitinib in the first line. This nomogram if confirmed by a larger prospective study could have a significant clinical impact in the selection of patients most likely to benefit from anti-angiogenic therapy
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Delmas, Audrey. "Rôle de la petite GTPase RhoB dans la résistance des mélanomes aux thérapies ciblées". Toulouse 3, 2013. http://thesesups.ups-tlse.fr/2465/.
Abstract (sommario):
La prise en charge des mélanomes métastatiques a été récemment révolutionnée par la mise sur le marché du Vemurafenib, un inhibiteur de l'oncogène BRAFV600E. Cependant, l'efficacité de ce traitement est limitée par l'apparition rapide de résistances encore mal comprises. Ce travail doctoral a conduit à l'identification d'une nouvelle voie de résistance à cet inhibiteur ainsi qu'aux inhibiteurs de MEK, autre classe d'inhibiteurs nouvellement utilisée dans les mélanomes. En réponse à l'inhibition de la voie Ras/Raf/MEK/ERK (MAPK) par les inhibiteurs de B-Raf ou de MEK, c-Jun est surexprimé et activé, conduisant à la surexpression de la petite GTPase RhoB par activation transcriptionnelle dépendante de la boite iCCAAT de son promoteur. RhoB ainsi induite favorise la survie cellulaire en présence des inhibiteurs via l'activation de la voie AKT. L'inhibition de cette voie c-Jun/RhoB/AKT, par des ARNs interférents ou des inhibiteurs d'AKT potentialise l'efficacité des inhibiteurs de B-Raf et de MEK en induisant l'apoptose. En conclusion, nous avons mis en évidence l'implication de la voie c-Jun/RhoB/AKT dans la résistance au Vemurafenib et démontré l'activité synergique de l'association d'un inhibiteur d'AKT au Vemurafenib. Enfin, nos travaux amènent les arguments moléculaires soutenant le développement des associations d'inhibiteurs de B-RAF/MEK et d'AKT actuellement en cours d'essais cliniquesMelanoma treatment recently met a breakthrough with the approval of Vemurafenib, a BRAFV600E inhibitor. However, its efficiency is limited as patients rapidly develop resistances still misunderstood. This project reveals an original pathway involved in resistance to Vemurafenib and also to MEK inhibitors, another new therapeutic class approved in melanoma. In response to Ras/Raf/MEK/ERK pathway inhibition by B-Raf or MEK inhibitors, c-Jun is overexpressed and activated leading to RhoB overexpression by an iCCAAT box-dependent transcriptional activation. Induced RhoB favors cell survival in response to these inhibitors in an AKT-dependent manner. Inhibition of the c-Jun/RhoB/AKT pathway with siRNA or AKT inhibitors potently increases B-Raf and MEK inhibitors efficiency through apoptosis triggering. In conclusion, we identified for the first time the involvement of the c-Jun/RhoB/AKT pathway in Vemurafenib resistance and demonstrated the synergism of the Vemuranib/AKT inhibitor association. In fact, we demonstrated, at molecular level, the relevance of current clinical evaluation of B-Raf/MEK and AKT inhibitors association
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Hatat, Anne-Sophie. "Epissage Alternatif d'ATG16L1b : un rôle dans l'échappement des tumeurs pulmonaires aux thérapies anti-EGFR". Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018GREAV027/document.
Abstract (sommario):
L’identification de la notion de driver oncogene et le développement de molécules capables de cibler leur activité a entrainé d’importants changements dans le traitement des cancers CBNPC.L’EGFR est un récepteur transmembranaire à activité TK (Tyrosine Kinase) permettant latransmission de signaux extracellulaires jusqu’au sein de la cellule grâce à l’activation de voies de signalisations. Parmis ces voies de signalisation on retrouve les voies de prolifération et de survie cellulaire. Des mutations activatrices dans le domaine TK confèrent à ce dernier un rôle de driver oncogene. Dans ce domaine l’EGFR a joué un rôle avant gardiste. Ainsi de nombreuses molécules ciblant l’activité de l’EGFR muté (EGFR-TKI, gefitinib) ont été développées. L’utilisation de ces molécules en clinique a représenté une vraie révolution dans la prise en charge des patients. Cependant ces derniers développent inéluctablement des mécanismes de résistance. L’analyse transcriptomique de modèles ayant acquis une résistance aux EGFR-TKI a mis en évidence une dérégulation de l’expression des transcrits. Par ailleurs des résultats del’équipe ont montré que l’expression des protéines SR (facteurs d’épissage impliqués dans la régulation de nombreux transcrits) était dérégulée dans les CBNPC. Sur la base de ces résultats nous avons émis l’hypothèse que l’épissage alternatif des transcrits médié par les protéines SR pourrait jouer un rôle dans la résistance acquise par les tumeurs pulmonaires en réponse aux EGFR-TKI.Au sein du laboratoire des clones résistants ont été générés après exposition chroniqueau gefitinib de modèles cellulaires d’adénocarcinomes pulmonaires exprimant une mutation activatrice de l’EGFR.Nous avons tout d’abord mis en évidence une accumulation de l’expression de SRSF2 dans les clones résistants comparativement à la lignée sensible. Dans deux clones résistants au gefitinib, issus de la lignée d’adénocarcinome pulmonaire sensible PC9 exprimant un EGFR mutant Del19, nous montrons que la neutralisation de la protéine SRSF2 sensibilise les clones à l’apoptose induite par le gefitinib. Une analyse RNA-seq nous a permis d’identifier Atg16L1 comme un acteur potentiel de la resensibilisation à l’apoptose médiée par SRSF2. La neutralisation de SRSF2 entraine une modulation de l’épissage de l’exon8 de la protéine Atg16L1 en réponse à un traitement au gefitinib. Et la neutralisation de l’expression des transcrits ARN d’ATG16L1 comportant l’exon8 sensibilise les clones résistant à l’apoptose induite par le gefitinib. Ce switch d’épissage entraine une modulation de l’activité autophagique des cellules en réponse au gefitinib. Nous montrons qu’une expression majoritaire des transcrits comportant l’exon 8 favorise une inhibition de l’autophagie en réponse au gefitinib. De plus les modèlesrésistants pour lesquels on observait une resensibilisation à l’apoptose suite à une neutralisation des transcrits contenant l’exon 8, conservent leur phénotype de résistance lorsque dans ces mêmes conditions l’activité autophagique est inhibée. L’ensemble de ces travaux met en avant l’existence d’un switch d’épissage de la protéine Atg16L1 au niveau de son exon 8 contribuant à une inactivation de l’autophagie corrélée avec un phénotype de résistance à l’apoptose en réponse à un traitement par EGFR-TKI. Enfin SRSF2 participerait à la modulation de cet épissage en réponse à un traitement au gefitinibIdentifying what is a driver oncogene and developping small molecules that are able to targetits activity led to drastic changes in NSCLC treatments. EGFR is a transmembrane receptorwith Tyrosine Kinase (TK) activity allowing signal transmission from the environment towardsthe inner of the cell by signaling pathways activation. Among those signaling pathways arefound survival and proliferation pathways. Activating mutations make EGFR a driver onco-gene, which was the first protein to be identified as such. Hence numerous chemical compoundtargeting mutated EGFR (EGFR-TKI, gefitinib) have been developped. Their use in clinicsrepresent a huge improvement for patients care. However resistance mechanisms ultimatelyoccur. Transcriptomic analyses of acquired resistant models to EGFR-TKI have shown thattheir RNA transcripts expression is abnormal. Moreover results from the team have demons-trated that SR proteins (splicing factor) expression is deregulated in NSCLC. Based on thoseresults we hypothesized that SRSF2 mediated alternative splicing of mRNA could be involvedin resistance mechanims acquired by lung carcinoma in response to EGFR-TKIThe lab developped resistant clones by chronic exposure to gefitinib of EGFR mutated lungadenocarcinoma cellular models.We first observed the accumulation of the expression of SRSF2 protein in resistant clonescompared to the sensitive cell line. Secondly, sensitivity to gefitinib induced apoptosis of twoclones was resored when neutralising SRSF2. A RNA-seq analysis led us to identify Atg16L1 aspotentially being involved in the SRSF2-mediated sensitization to gefitinib-induced apoptosis.SRSF2 neutralisation modulates Atg16L1 splicing in response to gefitinib. Neutralisation ofExon 8 containing transcripts of Atg16L1 sensitizes resistant clones to gefitinib induced apop-tosis. This alternative splicing switch modulates autophagic activity of the cells in reponseto gefitinib. We have shown that exon8 containing transcripts favor autophagy inhibition inreponse to gefitinib. This work emphasize the role of Atg16L1 alternative splicing switch ofexon8 in autophagy inhibition and its correlation with a resistant phenotype in response toEGFR-TKI. SRSF2 may participate in the modulation of this alternative splicing switch inreponse to gefitinib
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Guérard, Marie. "Signalisation nucléaire de l'IGF-1R et résistance aux thérapies anti-EGFR dans les cancers du poumon". Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016GREAV085/document.
Abstract (sommario):
Responsable de 1,6 million de décès par an dans le monde, le cancer du poumon constitue aujourd’hui la première cause de mortalité par cancer. Les cancers bronchiques non-à-petites cellules représentent 85% des cancers du poumon et ont un pronostic vital très mauvais. Les EGFR-TKI (inhibiteurs de l’activité tyrosine kinase de l’EGFR, gefitinib) constituent un réel progrès thérapeutique pour le traitement des cancers du poumon. Cependant, ces traitements ne sont efficaces que dans un petit sous-groupe de patients. Un des enjeux actuels est donc d’identifier les mécanismes de résistance primaire mis en jeu par les tumeurs.Les récepteurs à activité tyrosine kinase (RTK) activent des voies de signalisation intracellulaires depuis la membrane plasmique. Ces dernières années, une translocation nucléaire des RTK a également été mise en évidence. Ces travaux récents suggèrent que la signalisation nucléaire des RTK pourrait contribuer à la résistance des tumeurs en réponse aux thérapies anti-cancéreuses.Dans l’équipe, il a été montré que l’activation de l’IGF-1R est associée à la progression tumorale des adénocarcinomes pulmonaires et que le gefitinib induit une accumulation nucléaire de l’IGF-1R dans un modèle d’adénocarcinome mucineux. Sur la base de ces résultats, nous avons émis l’hypothèse que l’IGF-1R nucléaire pourrait jouer un rôle dans la résistance aux EGFR-TKI des adénocarcinomes pulmonaires mucineux.Nos résultats indiquent que plus de 70% des adénocarcinomes pulmonaires présentent un marquage nucléaire de l’IGF-1R. A l’aide de différents modèles cellulaires résistants aux EGFR-TKI, nous montrons que le gefitinib induit l’accumulation nucléaire de l’IGF-1R dans les adénocarcinomes pulmonaires mucineux. Cette translocation nucléaire implique l’endocytose clathrines-dépendante de l’IGF-1R et la formation d’un complexe entre l’IGF-1R, l’importine β1 et la pro-amphiréguline. La neutralisation de l’amphiréguline prévient le transport nucléaire de l’IGF-1R et resensibilise les cellules à l’apoptose induite par le gefitinib in vitro et in vivo. L’ensemble de ces résultats identifient le trafic intracellulaire de l’IGF-1R comme un nouveau composant de la réponse aux EGFR-TKI et suggèrent que la signalisation nucléaire IGF-1R/Areg contribue à la progression des adénocarcinomes mucineux sous EGFR-TKIResponsible of 1.6 million deaths each year worldwide, lung cancer is today the leading cause of cancer mortality in the world. Non-small-cell lung cancers account for about 85% of lung cancer and have a very bad prognosis (5-year survival rate inferior to 10%). EGFR-TKI (EGFR tyrosine kinase inhibitors, gefitinib) are a real medical advance for lung cancers treatment. However, these treatments are efficient in a small subgroup of patients. So, one of the current issues is to identify primary resistance mechanisms involved in tumors.Tyrosine kinase receptors (RTK) activate intracellular signaling pathways from the plasma membrane. These last years, a nuclear translocation of the RTK was shown. Recent works suggest that RTK nuclear signaling could contribute to tumors resistance in response to anti-cancerous therapies.In our team, it was shown that activation of IGF-1R signaling is associated with lung adenocarcinoma progression and that gefitinib induces IGF-1R nuclear accumulation in a mucinous adenocarcinoma cell line. On the basis of these results, we hypothesize that nuclear IGF-1R could play a role in the resistance of mucinous lung adenocarcinoma to EGFR-TKI.Our results indicate that more than 70% lung adenocarcinoma tumors present a positive IGF-1R nuclear staining. Thanks to EGFR-TKI-resistant cell lines, we show that gefitinib induces the nuclear accumulation of IGF-1R in mucinous adenocarcinoma. This nuclear translocation involves clathrin-mediated endocytosis and a complex between IGF-1R, importin β1 and pro-amphiregulin. Amphiregulin silencing prevents IGF-1R nuclear translocation in response to gefitinib and restores gefitinib-induced apoptosis in vitro and in vivo. Our whole results identify that IGF-1R intracellular trafficking is a new component of response to EGFR-TKI and strongly suggest that a nuclear IGF-1R/amphiregulin signaling contributes to mucinous lung adenocarcinoma progression in response to EGFR-TKI
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Blandin, Anne-Florence. "Rôle de l'intégrine α5β1 dans la biologie du glioblastome et dans la résistance aux thérapies anti-EGFR". Thesis, Strasbourg, 2015. http://www.theses.fr/2015STRAJ066/document.
Abstract (sommario):
Le glioblastome multiforme (GBM) est la tumeur cérébrale primaire la plus fréquente. Une dérégulation des voies de signalisation de l’EGFR et un fort potentiel invasif sont les caractéristiques principales du GBM. Malheureusement, les essais cliniques impliquant des thérapies anti-EGFR dans le traitement des GBM demeurent inefficaces. Nous avons précédemment montré que le récepteur de la fibronectine, l’intégrine α5β1, est associé avec un mauvais pronostic et une résistance des patients au temodal. Les intégrines peuvent coopérer avec les récepteurs aux facteurs de croissance et ainsi amplifier leur potentiel oncogénique. Ici, nous avons cherché à déterminer le rôle de l’intégrine α5 dans la résistance aux thérapies anti-EGFR. Utilisant la lignée U87 de GBM, on a dans un premier temps confirmé que l’activation de l’intégrine sous l’influence de la fibronectine, potentialisait la signalisation de l’EGFR. La perte d’expression d’α5 sensibilise les cellules U87 aux anti-EGFR (cetuximab, gefitinib) dans des essais de clonogénicité en soft agar. L’expression d’ α5 favorise la résistance aux 2 drogues lors de la migration cellulaire. Pour aller plus loin, nous avons développé un nouveau test basé sur la quantification de l’évasion cellulaire à partir d’une sphère tumorale. La perte d’ α5 augmente la sensibilité des cellules U87 à 2 TKI réversibles spécifiques de l’EGFR, gefitinib et erlotinib, mais n’a pas d’effet sur l’efficacité du lapatinib, un TKI irréversible ciblant EGFR, ErbB2, ErbB3 et ErbB4. Grâce à la microscopie confocale, nous avons montré l’effet important du gefitinib sur l’endocytose de l’intégrine et de l’EGFR. Ces résultats suggèrent que l’expression d’ α5 favorise la résistance aux TKI par l’activation des voies de signalisation des récepteurs ErbB ou en contrôlant le trafic membranaire de l’EGFR. On a aussi montré que pour favoriser l’adhésion cellulaire, l’intégrine α5 stimulait la fibrillogénèse. Dans les cellules migrant à distance de la sphère, l’intégrine α5 est strictement engagée dans des adhésions cellule-substrat contenant la protéine FAK activée. Nos résultats soulignent le rôle central du couple fibronectine/ intégrine α5 dans l’invasivité du GBM et la résistance aux thérapies anti-EGFRGlioblastoma multiforme (GBM) is the most common primary brain tumor. Alteration of the EGFR pathway and high invasive potential are hallmarks of GBM. Unfortunately, trials using anti-EGFR therapies for the treatment of GBM reveal limited efficacy. We previously showed that overexpression of the fibronectin receptor, α5β1 integrin, is associated with a poor prognosis for patients and is responsible for chemoresistance to temodal. Integrins can cross-talk with growth factor receptors and amplified their oncogenic activity. Here, we sought to determine the potential role of α5 integrin in resistance to anti-EGFR therapy. Using U87 GBM cell line, we first confirmed that fibronectin-mediated integrin activation potentiated EGFR signaling. Loss of α5 integrin expression sensitized U87 cells to anti-EGFR drugs (cetuximab, gefitinib) in soft agar clonogenic assay. α5 expression can trigger resistance to both drugs on cell migration. To go further, we developed a new assay based on the quantification of cell evasion from tumor spheroids. α5 depletion increased U87 cell sensitivity to gefitinib and erlotinib, 2 EGFR-selective reversible TKI, but had not effect on lapatinib efficacy, an irreversible TKI that target EGFR, ErbB2, ErbB3 and ErbB4. Confocal microscopy revealed a strong impact of gefitinib on EGFR and integrin endocytosis. These results suggested that α5 expression may trigger resistance to TKI either by activating ErbB pathways or by controlling EGFR membrane trafficking. We also showed that to promote cell adhesion, α5 integrin stimulated fibronectin fibrillogenesis. As cells moved away from the spheroids, α5 became strictly engaged in cell-substratum adhesion sites where it recruited activated FAK. Our work highlights the pivotal role of fibronectin/α5β1 integrin in invasivity of GBM and resistance to anti-EGFR drugs
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Diazzi, Serena. "Le cluster pro-fibrotique miR-143/145 favorise la plasticité phénotypique associée à la résistance des mélanomes aux thérapies ciblées". Thesis, Université Côte d'Azur, 2021. http://theses.univ-cotedazur.fr/2021COAZ6006.
Abstract (sommario):
Le mélanome est le cancer de la peau le plus agressif de par sa grande plasticité phénotypique, son potentiel métastatique et sa résistance aux traitements. Malgré la percée des thérapies ciblant la voie oncogénique MAP kinase, la résistance du mélanome a ces traitements demeure un obstacle majeur qui limite le bénéfice pour les patients porteurs de la mutation BRAFV600E. Les cellules de mélanome peuvent transiter vers un état de type mésenchymateux dédifférencie en fonction des pressions du microenvironnement et des traitements. Cette plasticité cellulaire phénotypique adaptative a été décrite comme un facteur essentiel de résistance aux thérapies ciblées. Mon équipe de recherche travaille sur ce type de résistance non-génétique définie comme ≪ mésenchymateuse ≫, dans lequel les cellules tumorales présentent un comportement invasif et acquièrent des caractéristiques observées typiquement dans les fibroses telles que la capacité à accumuler et à remodeler la matrice extracellulaire et activer les voies de mécanotransduction. Dans ce contexte, mon projet a consiste à caractériser un cluster compose de deux ≪ FibromiRs ≫, microARN impliques dans les mécanismes de fibrogènes et qui sont fortement exprimes dans les mélanomes résistants. Mes résultats obtenus à l’aide d’approches in vitro et in vivo démontrent le rôle du locus miR-143/-145 dans la régulation de la résistance non-génétique en raison de sa capacite à remodeler la matrice et façonner une niche de protection et de tolérance pour la tumeur face aux inhibiteurs de la voie MAP kinase. MiR-143 et miR-145 contribuent également au passage d’un phénotype cellulaire différentié prolifératif a un phénotype mésenchymal plus invasif et résistant. Au niveau moléculaire, j’ai identifié parmi les nombreuses cibles potentielles du cluster, la FSCN1 comme un gène clé cible de miR-143 et -145. Ces travaux ont permis de dévoiler le rôle du cluster miR143/-145 dans le comportement agressif des cellules de mélanome dédifférenciées résistantes et de proposer miR-143 et miR-145 comme nouvelles cibles thérapeutiques pour vaincre la résistance mésenchymateuse et mieux combattre la maladie métastatique réfractaireBecause of its intrinsic plasticity and resistance to treatment, melanoma is one of the most aggressive cancers. Due to the MAPK pathway hyperactivation, targeted therapies counteracting this signaling cascade are efficient in most patients harboring BRAFV600E metastatic melanoma. However, innate and acquired resistances constitute major therapeutic challenges. Acquired resistance to MAPK-targeted therapies arises from de novo genetic lesions and non-genetic events such as transcriptional reprogramming and epigenetic changes. Upon MAPK inhibitors exposure, melanoma cells assume functionally different phenotypic states defined by master transcription factors differential activity and fixed by epigenetic events. Among them, the emergence of a poorly differentiated cell state is strongly associated with resistance acquisition and tumor recurrence. Our team has previously shown that melanoma cells switching to a dedifferentiated phenotype in response to MAPK-targeted therapies display features of cancer-associated fibroblasts (CAFs) like extracellular matrix (ECM) remodeling and markers observed in fibrotic diseases, allowing them to generate a drug tolerant microenvironment.This fibrotic state is characterized in vitro and in vivo by increased deposition and altered ECM organization associated with a mechanophenotype regulated by the mechanotransducers YAP and MRTFA. However, post-transcriptional signaling networks that underpin this mesenchymal-like phenotype are still unknown and effective therapeutic treatments to overcome MAPK-targeted therapy resistance are missing. Given the tumorigenic role of ECM in cancer progression and resistance, therapies aimed at “normalizing” the tumorigenic ECM represent promising strategies to overcome non-genetic resistance to MAPK inhibitors. Based on the role of miRNAs in post-transcriptional regulation, I focused on the characterization of a pool of miRNAs, defined as “FibromiRs,” which have been shown to participate in the onset and progression of fibrotic diseases. Their crucial role in the fibrogenic process and the possibility to therapeutically manipulate them make them promising druggable targets to prevent the onset of resistance to MAPK-targeted therapies in melanoma. Starting from a screening designed to compare the expression of “FibromiRs” in MAPK inhibitors resistant mesenchymal melanoma cells compared to therapy-naive parental cells, we have identified the profibrotic miR-143/145 cluster as overexpressed in mesenchymal resistant cells. We then explored the profibrotic function of miR-143/145 cluster in the mesenchymal-like resistant cell state and melanoma phenotypic plasticity. First, we analysed the regulation of miR-143 and miR-145 in melanoma, identifying a negative regulation of the MAPK pathway on its expression and the involvement of signaling pathways typical of the mesenchymal resistant state, such as TGFβ and PDGF signaling, in the activation of their expression. Next, we investigated the function of the cluster in the context of adaptive and acquired resistance, showing its contribution in ECM reprogramming, activation of mechanotransduction pathways, and in driving the switch from a differentiated proliferative phenotype to a dedifferentiated invasive one with decreased sensitivity to MAPK inhibition. We characterized its mechanism of action, identifying FSCN1 as a key target gene of both mature miR-143 and miR-145 in the acquisition of the mesenchymal invasive phenotype. Finally, we tested the cluster as a potential therapeutic target in vitro and in vivo through antisense oligonucleotide-mediated inhibition of its expression or pharmacological modulation combined with MAPK inhibitors administration. Overall, this work highlights the importance of a FibromiR cluster in the acquisition of a dedifferentiated phenotype resistant to MAPK-targeted therapies and proposes new therapeutic strategies based on the inhibition of FibromiRs to overcome such resistance mechanism
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Ben, Jouira Rania. "Implication de la matrice extracellulaire tumorale dans la transition phénotypique et la résistance aux thérapies ciblées du mélanome". Thesis, Université Côte d'Azur (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017AZUR4140.
Abstract (sommario):
Le mélanome cutané est le cancer de la peau le plus agressif de par sa grande plasticité phénotypique, son fort caractère métastatique et sa résistance aux traitements. L’émergence d’inhibiteurs ciblant la forme mutée de la kinase BRAF (BRAF V600E) a produit des réponses thérapeutiques spectaculaires, malheureusement suivies par l’apparition rapide de résistances secondaires très agressives. La compréhension des mécanismes cellulaires et moléculaires impliqués dans ces résistances constitue donc un prérequis indispensable à l’amélioration de ces thérapies ciblées. A côté des altérations intrinsèques au mélanome, les interactions entre les cellules malignes et leur microenvironnement favorisent la survie tumorale et contribuent à la résistance aux thérapies. En particulier, la matrice extracellulaire (MEC), qui constitue un réseau dynamique de macromolécules de composition et de propriétés physico-chimiques variables, influence l’architecture des tissus tumoraux, l’invasion et la réponse aux traitements. De façon importante, l’acquisition par les cellules de mélanome d’un phénotype mésenchymateux invasif a été décrite comme un mécanisme d’échappement aux thérapies ciblant la mutation oncogénique de BRAF. Dans ce contexte, l’objectif de mon travail de thèse a été de préciser le rôle de cette signature phénotypique sur les propriétés bio-mécaniques des cellules de mélanome et la réponse aux thérapies ciblées. Dans la première partie de ma thèse, j’ai observé que les cellules résistantes présentant un phénotype invasif mésenchymateux produisent, assemblent et remodèlent une matrice ayant des propriétés mécaniques et biochimiques proches de myofibroblastes. Ce phénotype est associé à une activation de la voie YAP/TAZ et une mécano-sensibilité amplifiée. La caractérisation par spectrométrie de masse du matrisome des cellules résistantes a révélé la présence abondante de protéines matricielles comme la Fibronectine, le Collagène 1(I) et la THBS1 mais également de protéines de réticulation du collagène comme LOXL2 et TGM2. Nos données montrent aussi que ces modifications sont conférées de novo par un traitement aux inhibiteurs de BRAF ou de MEK dans des cellules de mélanome mutées BRAF in vitro, et que chez la souris le traitement au Vémurafénib de cellules de mélanome xénogreffées induit l’assemblage de fibres de collagène associé à une rigidification tumorale. Finalement, j’ai pu montrer que la matrice produite par les cellules mésenchymales résistantes protège les cellules de mélanome naïves des effets anti-prolifératifs liées à l’inhibition de BRAF ou MEK. Dans une deuxième partie de ma thèse, je me suis intéressée à la protéine de réticulation du collagène de la famille des lysyl oxidases (LOX), LOXL2 exprimée par les cellules mésenchymales résistantes. Nos analyses bioinformatiques et biochimiques montrent que l'expression de cette enzyme est fortement associée à la signature invasive MITFlow AXLhigh des mélanomes. En utilisant des approches d'interférence à ARN, j'ai aussi montré que la suppression de LOXL2 dans les cellules de mélanome invasif diminue la migration cellulaire et augmente la prolifération cellulaire in vitro et in vivo, suggérant un rôle de LOXL2 dans la transition phénotypique du mélanome. Dans l’ensemble, mes travaux de thèse révèlent un rôle paradoxal de l’inhibition de la voie MAPK qui induit des changements du phénotype tumoral associés à la production autonome par la cellule maligne d’une MEC pathologique capable d'altérer le comportement cellulaire et la réponse au traitement. Cet environnement matriciel 'sanctuaire', associée à une intense hétérogénéité tumorale, pourrait jouer un rôle majeur dans le développement et l'émergence des résistances thérapeutiques du mélanome. Ces résultats permettent une meilleure compréhension du rôle de la MEC du mélanome et devraient proposer de nouvelles pistes pour améliorer les traitementsCutaneous melanoma remains one of the most challenging and difficult cancers to treat because of its high plasticity, metastatic potential and resistance to treatment. New therapies targeting oncogenic BRAFV600E mutation have shown remarkable clinical efficacy. However, drug resistance invariably develops. Thus, the need for improving existing therapies remains critical. Recent studies have indicated that tumor resistance arises from the tumor microenvironment in which the extracellular matrix (ECM) is a determinant factor. Here, we found that BRAF inhibitor (BRAFi)-resistant melanoma cells, but not BRAFi-sensitive cells display an increased mechanosensitivity associated with a capacity to produce and remodel a 3D ECM displaying increased levels of matrix proteins such as fibronectin (FN) and collagen fibers. Interestingly, our results show that this 3D ECM is able to protect therapy-sensitive cells from the anti-proliferative effects of MAPKi. In addition, short exposures of naive melanoma cells to MAPKi augment matrix proteins production and assembly in vitro and in vivo. This 3D ECM also promotes drug tolerance within BRAFi sensitive cells. In conclusion, our results suggest that a subset of resistance to MAPK targeted therapies is associated with the production by melanoma cells of a pathological fibrotic matrisome that may affect cell behavior and therapeutic response
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Combès, Eve. "Mise en évidence d’intéractions létales par criblage phénotypique dans le contexte de la résistance aux thérapies du cancer colorectal". Thesis, Montpellier, 2017. http://www.theses.fr/2017MONTT134/document.
Abstract (sommario):
Aujourd’hui, les traitements du cancer colorectal métastatique ont évolué grâce à la combinaison de chimiothérapies conventionnelles à base de 5-FU, oxaliplatine et/ou Irinotécan et de thérapies ciblées dirigées contre le récepteur de l’EGF ou le VEGF. Malgré un taux de survie amélioré par la combinaison de ces drogues, la résistance innée et acquise aux traitements est une cause fréquente d'échec thérapeutique.Dans le but de découvrir de nouvelles cibles thérapeutiques nous avons effectué plusieurs criblages phénotypiques en utilisant des modèles cellulaires de résistance acquises aux chimiothérapies (oxaliplatine et irinotécan) générés au laboratoire ainsi que la lignée HCT116 qui présente une résistance innée aux thérapies anti-EGFR (cétuximab, panitumumab, Erlotinib). Le but final de ce projet étant de révéler des gènes, dont l’inhibition permet de rétablir la sensibilité à l’un de ces traitements, affichant ainsi une interaction létale avec le médicament.Une fois les kinases potentiellement impliquées dans la résistance aux thérapies du CCR identifiées, une inhibition spécifique par shRNA et/ou un inhibiteur spécifique a été effectuée afin de confirmer les potentielles cibles thérapeutiques et/ou biomarqueurs de réponse aux traitements. La cible la plus prometteuse, identifiée comme un déterminant de la résistance à l’oxaliplatine est la protéine ATR (Ataxia-telangiectasia mutated and rad3 related). Une protéine jouant un rôle clé dans la réparation de l'ADN et qui est activée en réponse à la présence d'ADN simple brin persistant (ssDNA) ou de stress réplicatif, pouvant être généré par certaines thérapies anticancéreuses.L’inhibition ATR via son inhibiteur pharmacologique VE-822 (VX-970) combinée à l’oxaliplatine a alors été étudiée par l’utilisation de tests cytotoxiques complétés par une étude d’additivité. Ainsi, nous avons démontré que l’inhibition d’ATR combinée avec l’oxaliplatine entraine une forte synergie dans la lignée HCT116-R1 à la fois en 2D et en 3D. Cet effet est également retrouvé dans d’autres lignées clonales résistantes à l’oxaliplatine (HCT116-R2, SW48-R1) ainsi que dans les lignées cellulaires à l’origine de ces dernières (HCT116, SW48). Nous avons également montré que l'effet synergique de l’oxaliplatine et du VE-822 dans la lignée HCT116-R1 s'accompagne d'une augmentation de la présence d’ADN simple brins suivie de nombreuses cassures double brins de l’ADN, d'un arrêt de la prolifération et d'une induction de l'apoptose. L'apparition de ces dommages à l'ADN est également corrélée avec l'activation de la voie ATM, de p53 et l'inhibition de l'activité CDK2. De plus, in vitro le double traitement provoque une induction des signaux moléculaires à l’origine de la mort immunogène équivalente ou bien supérieure aux traitements par l’oxaliplatine seul. Enfin, l'association d'oxaliplatine + VE-822 est également efficace in vivo, sur des souris immunodéprimées xénogreffées avec les cellules HCT116-R1 ainsi que sur des souris immunologiquement compétentes, avec un effet synergique plus élevé indiquant que la mort immunitaire (ICD) fait partie du mécanisme de cette combinaison de médicaments. En conclusion, toutes ces données confirment l’intérêt du criblage phénotypique dans la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques en démontrant pour la première fois le rôle fonctionnel de l'ATR dans la sensibilité à l’oxaliplatineToday, treatments for metastatic colorectal cancer have evolved through the combination of conventional chemotherapy 5-FU, oxaliplatin and / or Irinotecan and targeted therapies directed against the EGF receptor or VEGF. Despite an improved survival rate through the combination of these drugs, innate and acquired resistance to treatment is a common cause of therapeutic failure.In order to discover new therapeutic targets we carried out several phenotypic screenings using cellular resistance models acquired to chemotherapies (oxaliplatin and irinotecan) generated in the laboratory as well as the HCT116 line which exhibits an innate resistance to anti-EGFR therapies (cetuximab , panitumumab, Erlotinib). The ultimate goal of this project is to reveal genes, whose inhibition restores sensitivity to one of these treatments, thus displaying a lethal interaction with the drug.Once the kinases potentially involved in resistance to CCR therapies identified, specific inhibition by shRNA and / or a specific inhibitor was performed to confirm the potential therapeutic targets and / or biomarkers for response to treatments. The most promising target, identified as a determinant of resistance to oxaliplatin is the ATR protein (Ataxia-telangiectasia mutated and rad3 related). A protein that plays a key role in DNA repair and is activated in response to the presence of persistent single stranded DNA (ssDNA) or replicative stress, which can be generated by certain anti-cancer therapies.The inhibition of ATR via its pharmacological inhibitor VE-822 (VX-970) combined with oxaliplatin was then studied by the use of cytotoxic tests supplemented by an additivity study. Thus, we demonstrated that the inhibition of ATR combined with oxaliplatin leads to a strong synergy in the HCT116-R1 cell line in both 2D and 3D. This effect is also found in other oxaliplatin resistant clonal lines (HCT116-R2, SW48-R) as well as in the cell lines originating from them (HCT116, SW48).We have also shown that the synergistic effect of oxaliplatin and VE-822 in the HCT116-R1 line is accompanied by an increase in the presence of single-stranded DNA followed by numerous double-stranded DNA breaks, stopping proliferation and inducing apoptosis. The occurrence of this damage to DNA is also correlated with activation of the ATM pathway, p53 and inhibition of CDK2 activity. Moreover, in vitro the double treatment causes an induction of the molecular signals triggering the immunogenic cell death equivalent or superior to the treatments by oxaliplatin alone.Finally, the combination of oxaliplatin + VE-822 is also effective in vivo in immunodeficient mice xenografted with HCT116-R1 cells as well as in immunologically competent mice with a higher synergistic effect indicating that immune death (ICD ) is part of the mechanism of this combination of drugs.In conclusion, all these data confirm the interest of phenotypic screening in the discovery of new therapeutic targets by demonstrating for the first time the functional role of ATR in sensitivity to oxaliplatin
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Kužet, Sanya-Eduarda. "Étude du rôle de la rigidité matricielle dans la résistance des cellules de carcinomes squameux aux thérapies anti-cancéreuses". Thesis, Université Côte d'Azur (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019AZUR4010.
Abstract (sommario):
Dans notre modèle de carcinome épidermoïde humain de la tête et du cou (HNSCC), si l’on observe une surexpression du récepteur au facteur de croissance épidermique (EGFR) dans plus de 15 % des cas, les cellules cancéreuses (SCC) sont réfractaires à un traitement par des inhibiteurs de l’activité Tyrosine kinase de l’EGFR (EGFR TKI) tels que le Géfitinib et l’AG1478. A ce jour, les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans la résistance des HNSCC aux EGFR TKI sont encore inconnus. On sait aujourd’hui que les niches tumorales jouent un rôle crucial dans la résistance des cellules cancéreuses aux traitements chimiothérapeutiques conventionnels et que les fibroblastes associés au cancer (CAF) présents dans ces niches, participent très certainement à ce processus. Les CAF sont notamment responsables de la fibrose du tissu tumoral et d’un remodelage excessif de la matrice extracellulaire (MEC) aboutissant à une augmentation de sa rigidité. Dans les cellules de carcinome, l'adhésion sur un substrat rigide déclenche des voies de signalisation intracellulaires mécano-dépendantes qui favorisent la résistance des tumeurs aux chimiothérapies conventionnelles. Mes travaux démontrent que la rigidification de la MEC est responsable d'une augmentation significative de la survie des cellules de carcinome épidermoïde (SCC) en réponse aux traitements par des ITK de l'EGFR, aux chimiothérapies conventionnelles ou à une combinaison des deux. Comparé à des cellules ensemencées sur matrice molle, des cellules cultivées sur matrice rigide survivent mieux (+60%) au traitement avec le Gefitinib (EGFR TKI). Le même effet a été observé sur une matrice dérivée de CAF dont on sait qu'elle est plus rigide que celle dérivée de fibroblastes isolés d'une peau normale. Une analyse plus poussée a révélé une induction partielle de la transition épidermo-mésenchymateuse (EMT) dans des cellules SCC étalées sur des matrices rigides. L’EMT joue un rôle dans la résistance des cellules cancéreuses aux traitements, j’ai ainsi démontré que la régulation négative des facteurs de transcription connus pour être impliqués dans l’EMT conduit, dans le cas de cellules ensemencées sur une matrice rigide, à une augmentation de la sensibilité cellulaire aux EGFR TKI. Pour comprendre plus en détails ce qui induit la résistance des cellules SCC lorsqu’elles sont étalées sur une plaque rigide, nous avons effectué un séquençage d’ARN. Le séquençage de l'ARN des cellules SCC12 étalées sur une matrice souple et rigide a révélé que la protéine AXL pouvait contribuer à la résistance au Géfitinib des HNSCC. J'ai pu démontrer que l'inhibition de l’expression d'AXL dans les cellules SCC ensemencées sur des matrices rigides, réduit totalement la résistance à l'EGFR TKI induite par la niche tumorale. De plus, je montre, en culture cellulaire 3D, l’importance de combiner AXL et EGFR TKI dans le traitement des SCC. Notre objectif global était d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques présentant une opportunité de résistance réduite. Les recherches présentées dans ce manuscrit ont le potentiel d’établir un biomarqueur de prédiction de la réponse des HNSCC et d’autres types de cancers aux EGFR TKIResistance to epidermal growth factor receptor (EGFR) targeted therapy triggered by the tumor niche in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) represents a challenge in research and in clinics. Despite the fact that over 15% of HNSCC overexpress EGFR, HNSCC are refractory to EGFR Tyrosine Kinase Inhibitors (TKIs) targeted therapy and yet the molecular and cellular mechanisms of EGFR-TKIs resistance in HNSCC are unknown. The tumor niche plays an important role in conventional chemotherapeutic resistance. Cancer associated fibroblasts (CAFs), the most prominent stromal cell in tumor niche, participate in this process. Notably, CAFs are responsible for tumor tissue fibrosis an excessive extracellular matrix (ECM) remodeling that increases matrix stiffness. In carcinoma cells, adhesion to stiff substrate triggers mechano-dependent intracellular signaling pathways that favor tumor resistance to conventional chemotherapies. My work demonstrates that ECM stiffening is responsible for a significant increase of squamous cell carcinoma (SCC) survival upon the treatment with EGFR TKIs, conventional chemotherapies and combination of both. Over 60% more cells survive treatment with the gefitinib EGFR TKI compared to cells plated on soft matrix. Same effect was observed on matrix derived from CAFs that is known to be stiffer compared to the one derived from fibroblasts isolated from normal skin. Further analysis revealed an induction of partial epidermal-to-mesenchymal transition (EMT) in cells plated on rigid matrices. EMT is know to play a role in resistance of cancer cells to treatments, and I have demonstrated that downregulation of know transcriptional factors involved in EMT leads to an increase of cell susceptibility to EGFR TKI when plated on stiff matrix. To understand in more detail what drives the resistance of SCC cells when plated on stiff we conduced an RNA sequencing. RNA sequencing of SCC12 cells plated on soft and stiff matrix revealed AXL as main driver of EGFR TKI resistance in HNSCC. I was able to demonstrated that inhibiting AXL in SCC cells, lying on stiff matrices, reverts the EGFR TKI resistance triggered by the tumor niche. Moreover, I show in 3D cell culture the importance of combining AXL and EGFR TKI in treatment of SCCs. Our overall goal was to identify novel therapeutic targets with reduced resistance opportunity. Finally, research presented in this manuscript carries potential in establishing a prediction biomarker to the response of HNSCCs and other cancers to EGFR TKIs
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Guiho, Romain. "Thérapies impliquant la voie de TRAIL dans les tumeurs osseuses pédiatriques : mécanismes de résistance et approches précliniques pour une (re-)sensibilisation". Nantes, 2015. https://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show/show?id=317c45e6-23f6-4b90-9560-60f354209ad8.
Abstract (sommario):
L'ostéosarcome (OS) et le sarcome d'Ewing (SE) sont les deux tumeurs osseuses pédiatriques les plus fréquentes. Malgré des avancées thérapeutiques, dans le cas d'une tumeur métastatique ou résistante à la chimiothérapie, le taux de survie à cinq ans est de 20%. Les propriétés de mort sélective des cellules tumorales par la cytokine pro-apoptotique TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand (TRAIL) permettent d'envisager une nouvelle approche thérapeutique pour ces patients à haut risque. Néanmoins, l'étude de la sensibilité à TRAIL de nombreuses lignées cellulaires et de plusieurs modèles de xénogreffe chez la souris Nude, a montré l'existence de phénomènes de résistance à la voie pro apoptotique de TRAIL, mais aussi la capacité des cellules tumorales à privilégier une deuxième voie de signalisation de TRAIL, induisant survie et prolifération. L'objectif de notre étude est d'identifier les mécanismes moléculaires mis en jeu dans la résistance à TRAIL pour ces pathologies afin de proposer des stratégies de sensibilisation par des approches in vitro et in vivo. Nos stratégies de sensibilisation s'appuient sur deux hypothèses : 1) le rôle globalement négatif du microenvironnement osseux sur la sensibilité à TRAIL, avec l'utilisation de molécules ciblant le microenvironnement potentiellement sensibilisantes (agents de chimiothérapie, bisphosphonates,…). 2) L'utilisation de nouveaux outils d'activation de la voie de TRAIL, dotés d'une plus grande capacité à induire la « clusterisation » des récepteurs de surface, favorisant ainsi la voie proapoptotiqueOsteosarcoma (OS) and Ewing's sarcoma (EWS) are the two most common pediatric bone tumors. Despite therapeutic advances, in the case of a metastatic tumor or a resistant to chemotherapy, the survival rate at five years is 20%. Pro-apoptotic cytokine TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand (TRAIL) can selectively kill tumor cells and could be a new therapeutic approach for these high-risk patients. However, the study of many cell lines and several xenograft models in nude mice for TRAIL sensitivity, showed the existence of resistance phenomena to the TRAIL pro-apoptotic pathway, but also the ability of tumor cells to favor a second TRAIL signaling pathway, inducing survival and proliferation. The aim of our study is to identify molecular mechanisms involved in TRAIL resistance in these diseases, to offer sensitization strategies, with in vitro and in vivo approaches. Our sensitization strategies are based on two hypothesis: 1) the negative role of bone tumor microenvironment on TRAIL sensitivity, with the use of potentially sensitizing molecules targeting the microenvironment (chemotherapy agents, bisphosphonates. . . ). 2) The use of new activation tools of TRAIL pathway, with greater ability to induce surface receptors clusterization, thus promoting the proapoptotic pathway
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Recondo, Gonzalo. "Resistance Mechanisms to ALK Tyrosine Kinase Inhibitors (TKIs) in NSCLC". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS248/document.
Abstract (sommario):
Les analyses moléculaires et la classification des adénocarcinomes bronchiques ont conduit au développement de thérapies ciblées sélectives visant à améliorer le contrôle de la maladie et la survie des patients. ALK (anaplastic lymphoma kinase) est un récepteur tyrosine kinase de la famille des récepteurs de l'insuline. Des réarrangements chromosomiques impliquant le domaine kinase d’ALK sont présents dans environ 3 à 6% des patients atteints d'un adénocarcinome bronchique. La protéine de fusion provoque une activation du domaine kinase de manière constitutive et indépendante du ligand. Lorlatinib est un inhibiteur d’ALK de troisième génération avec une efficacité et une sélectivité optimale, ainsi qu’une pénétration élevée vers le système nerveux central. Lorlatinib peut vaincre la résistance induite par plus de 16 mutations secondaires dans le domaine kinase d’ALK acquises lors de la progression aux ALK TKI de première et deuxième générations. Le traitement par lorlatinib est donc efficace chez les patients préalablement traités par un ALK TKI de première ou deuxième génération, et est actuellement approuvé pour cette indication. Le spectre complet de mécanismes de résistance au lorlatinib chez les patients reste à élucider. Il a récemment été rapporté que l'acquisition séquentielle de deux mutations ou plus dans le domaine kinase, également appelées mutations composées, est responsable de la progression de la maladie chez environ 35% des patients traités par le lorlatinib, principalement en altérant sa liaison au domaine kinase d’ALK. Cependant, l’effet de ces mutations sur la sensibilité aux différents inhibiteurs d’ALK peut varier, et les autres mécanismes de résistance survenant chez la plupart des patients restent inconnus. Mon travail de thèse avait pour but d’explorer la résistance au lorlatinib chez des patients atteints d'un cancer du poumon ALK réarrangé par la mise en œuvre de biopsies spatiales et temporelles et le développement de modèles dérivés de patients. Dans le cadre de l’étude institutionnelle MATCH-R (NCT02517892), nous avons effectué un séquençage à haut débit de l’exome, de l’ARN et ciblé, ainsi qu’un séquençage des ctDNA afin d’identifier les mécanismes de résistance. Nous avons établi des lignées cellulaires dérivées de patients et caractérisé de nouveaux mécanismes de résistance et identifiés de nouvelles stratégies thérapeutiques in vitro et in vivo. Nous avons identifié trois mécanismes de résistance chez quatre patients avec des biopsies appariées. Nous avons étudié l'induction de la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT) par l'activation de SRC dans une lignée cellulaire, dérivée d’un patient, exposée au lorlatinib. Les cellules mésenchymateuses étaient sensibles à l’inhibition combinée de SRC et d'ALK, montrant que même en présence d'un phénotype agressif, des stratégies de combinaison peuvent surmonter la résistance aux ALK TKI. Nous avons identifié deux nouvelles mutations composées du domaine kinase d’ALK, F1174L / G1202R, C1156Y / G1269A survenues chez deux patients traités par le lorlatinib. Nous avons développé des modèles de cellules Ba / F3 exprimant les mutations simples et composées pour étudier leur effet sur la résistance au lorlatinib. Enfin, nous avons caractérisé un nouveau mécanisme de résistance provoqué par la perte de fonction de NF2 au moment de la progression du lorlatinib par l’utilisation de PDX et de lignées cellulaires dérivées de patients, et par CRISPR / CAS9 knock-out de NF2. Nous avons constaté que l'activation de mTOR par la perte de fonction de NF2 provoquait la résistance au lorlatinib et qu'elle pouvait être surmontée par le traitement avec des inhibiteurs de mTOR.Cette étude montre que les mécanismes de résistance au lorlatinib sont plus divers et complexes que prévu. Nos résultats démontrent également comment les études longitudinales de la dynamique tumorale permettent de déchiffrer la résistance aux TKI et d'identifier des stratégies thérapeutiquesThe molecular study and classification of lung adenocarcinomas has led to the development of selective targeted therapies aiming to improve disease control and survival in patients. The anaplastic lymphoma kinase (ALK) is a tyrosine kinase receptor from the insulin tyrosine kinase receptor family, with a physiologic role in neural development. Gene rearrangements involving the ALK kinase domain occur in ~3-6% of patients with lung adenocarcinoma. The fusion protein dimerizes leading to transactivation of the ALK kinase domain in a ligand-independent and constitutive manner. Lorlatinib is a third generation ALK inhibitor with high potency and selectivity for this kinase in vitro and in vivo, and elevated penetrance in the central nervous system. Lorlatinib can overcome resistance mediated by over 16 secondary kinase domain mutations occurring in 13 residues upon progression to first - and second - generation ALK TKI. In addition, treatment with lorlatinib is effective for patients who have been previously treated with a first and a second generation or a second generation ALK TKI upfront and is currently approved for this indication. The full spectrum of biological mechanisms driving lorlatinib resistance in patients remains to be elucidated. It has been recently reported that the sequential acquisition of two or more mutations in the kinase domain, also referred as compound mutations, is responsible for disease progression in about 35% of patients treated with lorlatinib, mainly by impairing its binding to the ALK kinase domain. However, the effect of these compound mutations on the sensitivity to the repertoire of ALK inhibitors can vary, and other resistance mechanisms occurring in most patients are unknown. My PhD thesis aimed at exploring resistance to lorlatinib in patients with ALK-rearranged lung cancer through spatial and temporal tumor biopsies and development of patient-derived models. Within the institutional MATCH-R study (NCT02517892), we performed high-throughput whole exome, RNA and targeted next-generation sequencing, together with plasma sequencing to identify putative genomic and bypass mechanisms of resistance. We developed patient-derived cell lines and characterized novel mechanisms of resistance and personalized treatment strategies in vitro and in vivo. We characterized three mechanisms of resistance in four patients with paired biopsies. We studied the induction of epithelial-mesenchymal transition (EMT) by SRC activation in a patient-derived cell line exposed to lorlatinib. Mesenchymal cells were sensitive to combined SRC and ALK co-inhibition, showing that even in the presence of an aggressive and challenging phenotype, combination strategies can overcome ALK resistance. We identified two novel ALK kinase domain compound mutations, F1174L/G1202R, C1156Y/G1269A, occurring in two patients treated with lorlatinib. We developed Ba/F3 cell models harboring single and compound mutations to study the differential effect of these mutations on lorlatinib resistance. Finally, we characterized a novel mechanism of resistance caused by NF2 loss of function at the time of lorlatinib progression through the development of patients derived PDX and cell lines, and in vitro validation of NF2 knock-out with CRISPR/CAS9 gene editing. Downstream activation of mTOR was found to drive lorlatinib resistance by NF2 loss of function and was overcome by providing treatment with mTOR inhibitors.This study shows that mechanisms of resistance to lorlatinib are more diverse and complex than anticipated. Our findings also emphasize how longitudinal studies of tumor dynamics allow deciphering TKI resistance and identifying reversing strategies
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Astorgues-Xerri, Lucile. "Rôle de la galectine-1 et de la transition épithélio-mésenchymateuse dans la sensibilité et la résistance aux thérapies ciblées anticancéreuses". Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077129.
Abstract (sommario):
Décrypter les mécanismes de résistance aux thérapies ciblées anticancéreuses représente un enjeu majeur de progrès médical pour l'identification de futures cibles thérapeutiques. Dans notre panel de lignées tumorales, la résistance aux inhibiteurs des PKCs est principalement associée à la transition épithélio-mésenchymateuse. Dans les cellules résistantes, nous avons observé une augmentation de l'expression de marqueurs mésenchymateux et une diminution de l'expression de marqueurs épithéliaux. De plus, Pendothéline-1 et la mutation activatrice G13D sur l'exon 2 de K-Ras apparaissent comme des marqueurs moléculaires potentiels de la résistance. PTX-008 est un agent ciblant la galectine-1, une lectine impliquée dans la prolifération tumorale et l'augmentation du potentiel métastatique. PTX-008 inhibe la prolifération des cellules tumorales à phénotype épithélial exprimant faiblement la galectine-1. Dans la lignée la plus sensible d'origine ORL, PTX-008 inhibe l'expression de la galectine-1 et les voies de survie et de prolifération PI3K/AKT et MAPKs. Dans les xénogreffes, PTX-008 diminue la croissance tumorale, l'angiogenèse et le développement de métastases. En combinaison, PTX-008 a des effets synergiques avec plusieurs thérapies utilisées en clinique. De plus, l'acquisition de la résistance à PTX-008 est associée à l'acquisition par les cellules d'un phénotype mésenchymateux et à une inhibition de l'expression de la galectine-1. Nos résultats permettent d'envisager une meilleure sélection des patients sur des critères biologiques pour l'indication de thérapies ciblées, et de valider la galectine-1 comme une nouvelle cible prometteuse dans le traitement des cancersDeciphering mechanism of resistance to anticancer targeted therapies represent a crucial challenge of medical progress for the identification of future therapeutic targets. In our panel of tumor cell lines, résistance to PKCs inhibitors is mainly associated with epithelial to mesenchymal transition. Indeed, resistant cells show an increase in mesenchymal markers concomitant with a decrease in epithelial markers. Our findings point out endothelin-1 and activating K-Ras mutation as the molecular factors responsible of PEP005 and enzastaurin resistance, respectively. PTX-008 is a compound aimed to target galectin-1, a lectin implicated in tumor proliferation and metastatic dissemination. PTX-008 inhibits the proliferation of tumor cells with épithelial phenotype and low levels of galectin-1. In thé PTX-008-sensitive head and neck cell line, PTX-008 decreases galectin-1 expression and blocks PI3K/AKT and MAPK pathways. In xenografts, PTX-008 treatment inhibits tumor growth, angiogenesis and metastatic dissemination. In combination, PTX-008 shows synergistic effects with another antiangiogenic agent as sunitinib, and potentiates the effects of several classical cytotoxic compound used in clinical practice. Moreover, a cell line PTX-008-resistant has been developed in our lab, which displays a mesenchymal phenotype and a marked galectin-1 expression decrease. Altogether, our results may contribute to optimize future selection of patients candidate to targeted therapies, and validate galectin-1 as a promising new target for innovant anticancer approaches
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Long-Mira, Élodie. "Identification de biomarqueurs tissulaires et sanguins impliqués dans la progression, la réponse et la résistance aux thérapies ciblées des mélanomes cutanés". Thesis, Université Côte d'Azur (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016AZUR4129.
Abstract (sommario):
Contexte : Le mélanome est un cancer agressif chez l’homme, développé aux dépens des mélanocytes. L’identification de la mutation BRAF conditionne la prescription d’une thérapie ciblée. L’objectif de ce travail a été de mettre au point dans les tissus tumoraux et dans le sang (cellules tumorales circulantes, ADN libre tumoral plasmatique) des approches technologiques de biologie moléculaire et d’immunohistochimie (IHC) pour identifier des biomarqueurs prédictifs d’une réponse ou de résistance thérapeutique. Nous montrons que l’IHC BRAF (clone VE1, Roche, Ventana) pourrait remplacer l’analyse en biologie moléculaire dans certaines indications, notamment sur un matériel tumoral de petite taille. Parallèlement, nous montrons que la présence de cellules mélanocytaires circulantes [détectées par cytomorphologie (Technique ISET)] chez des patients atteints de mélanome métastatique est un facteur prédictif indépendant de mauvais pronostic de la survie globale. Enfin, nous montrons que le système Biocartis Idylla™ (processus automatisé couplant l’extraction, le séquençage et l’analyse de l’ADN) est sensible et spécifique pour la détection plasmatique des mutations BRAF et NRAS et que cette technique pourrait être indiquée dans le suivi de la maladie résiduelle (apparition de résistance) après traitement des patients atteints de mélanomes métastatiques. Conclusion : L’identification des biomarqueurs tissulaires et sanguins (BRAF, NRAS et CTC) permettent : 1- Une optimisation des délais diagnostiques de la mutation BRAF/NRAS – 2) L’identification de facteurs de mauvais pronostic – 3) De détecter une récidive précoce et de suivre la maladie résiduelle après traitementBackground: Knowledge of the BRAFV600E status is mandatory in metastatic melanoma patients (MMP). Molecular biology is currently the gold standard method for status assessment. The aim of this work was to assess and compare several methods of molecular biology and immunohistochemistry (IHC) in tissue and blood (cell-free circulating tumor DNA, circulating tumor cell (CTC)) to identify predictive biomarkers of response or resistance to targeted treatment. Results: We showed that BRAFV600 IHC could be a substitute for molecular biology in the initial assessment of the BRAFV600E status in MPP. We also found that the presence of circulating tumor cell detetcted by a cytomorphological approach ISET (Isolation by Size of Epithelial Tumor Cell – Rarecells Diagnostics, Paris, France) in MMP is an independent predictor of shorter survival. Then, in a monocentric study conducted at the University of Nice Hospital, we evaluated a novel and fully automated CE-IVD PCR-based system (IdyllaTM, Biocartis, Mechelen, Belgium) for plasmatic BRAF and NRAS mutation detection. We showed that this technology is highly sensitive and specific and provide promising potential to assess tumor progression, identify targets for therapy, and evaluate clinical response to treatment. In conclusion, identification of tissue and blood biomarkers with these technologies allow a quick turnaround-time to BRAF/NRAS diagnosis and improve monitoring of treatment response and development of resistance in metastatic melanoma patients
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Lheureux-Thelliez, Stéphanie. "Evaluation préclinique de thérapies dirigées contre Bcl-xL et Mcl-1 dans les cancers de l'ovaire : focus sur les molécules BH3-mimétiques". Caen, 2013. http://www.theses.fr/2013CAEN4076.
Abstract (sommario):
Les cancers de l’ovaire sont dépendants de deux protéines anti-apoptotiques Bcl-xL et Mcl-1. Dans ce contexte, la molécule BH3-mimétique, ABT-737, ciblant Bcl-xL apparaît prometteuse, bien que son activité soit conditionnée in vitro à l’inactivation de Mcl-1. In vitro, l’ABT-737 a été inefficace en agent seul pour induire la mort cellulaire dans quatre lignes cellulaires. Les dérivés du platine sensibilisent à l’ABT-737 par diminution de l’expression de Mcl-1 ou par augmentation de l'expression des protéines pro-apoptotiques Noxa et, à une moindre mesure, Bim. Ex vivo, sur des tumeurs issues de patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire, l’ABT-737 a induit en agent seul la mort cellulaire par apoptose massive et son efficacité n'a pas été significativement améliorée par sa combinaison au carboplatine. L'expression de Bim à l’état basal apparaît comme un biomarqueur pertinent qui pourrait être facilement utilisé en pratique clinique pour sélectionner les patientes pouvant bénéficier de l’ABT-263 dans le cadre d’un essai clinique. Nous avons aussi étudié in vivo l'intérêt de cibler la voie PI3K/Akt/mTOR pour surmonter la chimiorésistance. Le BEZ235, double inhibiteur de PI3K et mTOR, a induit une diminution homogène de la fixation tumorale du FDG dans un modèle de cancer ovarien platine résistant. Elle a été corrélée à une diminution significative de la prolifération cellulaire et une extinction significative de la voie PI3K/mTOR. Quatre jours après l’arrêt du traitement, la reprise tumorale a été objectivée et corrélée à l’imagerie par FDG PET/CT. Ces données suggèrent que le FDG PET/CT peut être un marqueur dans le suivi des thérapies ciblant la voie PI3K/mTOROvarian cancers are addicted to the anti-apoptotic proteins Bcl-xL and Mcl-1. In this context, the BH3-mimetic ABT 737 molecule appears therapeutically promising as it inhibits Bcl xL, although its activity in vitro is conditioned by Mcl-1 inactivation. In vitro, ABT-737 as a single agent was ineffective at promoting cell death in the four cell lines tested. Platinum compounds sensitize to ABT-737 by dose-dependently decreasing Mcl-1 expression or by increasing the expression of pro-apoptotic BH3-only proteins Noxa and, to a lower extent, Bim. Surprisingly in the ex vivo study on human ovarian cancer, we demonstrated that ABT-737 induced massive apoptotic cell death as a single agent and that its efficacy was not significantly improved when combined with carboplatin. Bim expression at baseline appears as a relevant biomarker that could be easily used in clinical practice for the selection of ovarian cancer patients in the development of a clinical trial using ABT-263. We also studied in vivo the interest of targeting the PI3K/Akt/mTOR pathway to overcome chemoresistance in ovarian cancer. BEZ235, a dual PI3K/mTOR inhibitor, induced a marked and homogeneous decrease in FDG uptake in a cisplatin-resistant ovarian cancer model, which was correlated to a significant decrease in cell proliferation and to a significant PI3K/mTOR pathways inhibition. Four days following treatment cessation, tumor recovery was observed and correlated to FDG SA-PET/CT findings. These data suggest that FDG PET could be of use for therapy monitoring of PI3K/mTOR inhibitors
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Berestjuk, Ilona. "Rôle de la matrice extracellulaire et des récepteurs à domaine discoïdine, DDR1 et DDR2, dans la résistance des cellules de mélanome aux thérapies ciblées". Thesis, Université Côte d'Azur (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019AZUR6029.
Abstract (sommario):
Le mélanome est un cancer de la peau très agressif de part son fort potentiel métastatique et sa résistance aux traitements. La progression tumorale est accompagnée par des mutations « drivers » qui touchent principalement les gènes BRAF et NRAS et conduisent à l’activation constitutive de la voie des MAP kinases. De nouvelles options thérapeutiques comme les thérapies ciblées associant un inhibiteur de BRAF (vémurafénib) et un inhibiteur de MEK (tramétinib), et les immunothérapies sont indiquées mais ces traitements ne bénéficient qu'à certains patients et leur utilisation est limitée du fait de l'émergence de résistances primaires et secondaires. Il est donc fondamental de mieux comprendre les mécanismes de l'échappement aux thérapies ciblées dans le but d'en améliorer l'efficacité.La capacité des cellules cancéreuses à résister aux traitements repose en partie sur leur pouvoir d’adaptation au microenvironnement tumoral. Au sein d’une tumeur, la cellule cancéreuse interagit avec un écosystème complexe composé de cellules stromales dont des fibroblastes activés et de la matrice extracellulaire (MEC). La MEC, majoritairement produite par les fibroblastes est composée de molécules d’adhérence comme la fibronectine et de structure comme les collagènes. Elle constitue un réseau dynamique ayant des propriétés biochimiques et mécaniques qui influencent la progression tumorale. Ainsi, le stroma dans lequel sont ancrées les mélanomes et les interactions qu’ils entretiennent avec la MEC peuvent avoir un rôle prépondérant dans la résistance aux thérapies ciblées. Cette résistance induite par l’adhérence des cellules à une matrice est définie comme la MM-DR (Matrix Mediated-Drug Resistance).Dans un premier temps mes études ont montrés, a l’aide d’un modèle 3D de MEC, que les FRCs (Fibroblasts Reticular Cells) ou différentes populations de MAFs (Melanoma Associated Fibroblasts) isolées de biopsies de métastases lymphatiques produisent et remodèlent une MEC riche en fibres de collagènes, d’enzymes d’échafaudage et de protéines matricielles qui est plus rigide qu’une MEC produite par des fibroblastes d’origine dermique. J’ai également observé un effet « protecteur » de ces matrices sur les mélanomes face aux thérapies. L’adhérence des cellules de mélanome conduit à une résistance en réponse aux effets anti-prolifératifs des inhibiteurs de BRAF et de MEK. Dans un deuxième temps j’ai identifiée les DDRs (Discoidin Domain Receptors 1 & 2), deux récepteurs de collagène à l’activité tyrosine kinase et qui fonctionnent indépendamment des intégrines, comme étant impliqués dans la MM-DR. Par une approche d’interférence ARN et par une approche pharmacologique, j’ai montré que l’inhibition de DDR1 et de DDR2 ré-sensibilise les cellules cultivées sur matrice aux effets cytostatiques et cytotoxiques du vémurafénib. Ces résultats ont étaient également confirmés par une approche in vivo en utilisant un modèle de xénogreffe. En effet, le traitement des souris avec la combinaison Vémurafénib + Imatinib (un inhibiteur de tyrosine kinase utilisé en clinique dans le traitement de certaines leucémies) diminue drastiquement la croissance tumorale, avec une médiane de survie de 48 jours contre 36 jours pour le traitement de Vémurafénib seul. En conclusion, mes données ont mis en évidence les propriétés structurelles, biophysiques et fonctionnelles remarquables des MECs produites par les fibroblastes lymphatiques et un rôle de la MM-DR dans la résistance aux traitements ciblés. Mais également travaux ont permis d’identifier les DDRs comme étant des nouvelles cibles thérapeutiques impliquées dans la résistance des cellules de mélanome aux thérapies cibléesMelanoma is a very aggressive skin cancer because of its intratumoral heterogeneity, high metastatic potential and resistance to treatment. Driver mutations mainly affect the BRAF and NRAS genes leading to the constitutive activation of the MAP kinase pathway (MAPK). New therapeutic options such as targeted therapies that combine BRAF (Vemurafenib) and MEK (Trametinib) inhibitors as well as immunotherapies are available, but these treatments only benefit certain patients and their use is limited because of the emergence of resistance. It is therefore essential to better understand the escape mechanisms in response to targeted therapies, in order to improve their effectiveness.The ability of cancer cells to resist treatment depends in part, on their ability to adapt to the tumour microenvironment. Within the primary tumour and various metastatic niches, the cancer cell interacts with a complex ecosystem composed of stromal cells, including activated fibroblasts and extracellular matrix (ECM). ECM, mainly produced by fibroblasts, is composed of adhesion and structural molecules such as fibronectin and collagen. It constitutes a dynamic network with biochemical and mechanical properties that influence tumour progression. Thus, the stroma in which melanoma cells are anchored and their interactions with the ECM contribute to anti-cancer treatment resistance. This resistance provided by the matrix is defined as MM-DR (Matrix Mediated-Drug Resistance).Firstly, my study showed, using a 3D model of ECM produced by fibroblasts, that FRCs (Fibroblast Reticular Cells) or different populations of MAFs (Melanoma Associated Fibroblasts) isolated from biopsies of lymphatic metastases produce and remodel an ECM rich in collagen fibres, scaffolding enzymes and matrix proteins and these ECMs are more rigid than those produced by dermal fibroblasts. Furthermore, I observed a protective effect of these matrices on melanoma cells carrying the BRAFV600E mutation to targeted therapies. Adherence of melanoma cells to the ECM lead to resistance in response to the antiproliferative effects of BRAF and MEK inhibitors.Additionally, I identified the discoidin domain receptors, DDR1 and DDR2, which have tyrosine kinase activity and interact with collagen, thereby playing a key role in MM-DR. Using the RNA interference and pharmacological approaches which targeted DDR kinase activity, I showed that inhibition of DDR1 and DDR2 re-sensitised melanoma cells cultured on ECM to the cytostatic and cytotoxic effects of Vemurafenib. These results were confirmed with an in vivo approach using a preclinical tumour xenograft model. Treatment of mice with the combination of Vemurafenib / Imatinib (a DDR inhibitor clinically used in the treatment of certain leukemias) greatly reduces tumour growth, prevented the development of resistance in response to Vemurafenib and increased mice survival.In conclusion, my thesis has highlighted the remarkable structural, mechanical and functional properties of the ECM produced by metastatic lymphatic niche fibroblasts in the survival and therapeutic resistance of melanoma and demonstrated a new role of DDRs in their escape from targeted therapies. Thus, inhibition of DDRs in combination with inhibitors of the MAPK pathway may represent a new therapeutic strategy for BRAF mutant melanoma
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Zerhouni, Marwa. "Mécanismes de résistance aux thérapies ciblées dans le mélanome cutané métastatique et les syndromes myélodysplasiques : Caractérisation et validation préclinique de composés innovants". Thesis, Université Côte d'Azur, 2020. http://www.theses.fr/2020COAZ6008.
Abstract (sommario):
Le mélanome cutané métastatique et les syndromes myélodysplasiques (SMD) sont deux cancers incurables développant des résistances à leurs traitements antitumoraux de référence. Les cellules résistantes à ces thérapies sont caractérisées par une reprogrammation métabolique qui influence et facilite la progression tumorale. Par conséquent, l’inhibition des voies métaboliques semble être une stratégie thérapeutique prometteuse dans ces deux pathologies.Les deux équipes impliquées dans ce projet de thèse collaborent de longue date dans le domaine du cancer. Dans ce contexte et en partenariat avec l’Institut de Chimie de Nice, nos deux équipes ont mis au point des composés innovants ciblant les balances énergétiques intra cellulaires et la voie de l’AMPK. Parmi ces composés nous nous sommes intéressés plus précisément à l’AICAR (Acadésine). Un criblage d’efficacité et des études de structure-activité, nous ont permis d’optimiser la structure de nos composés. Sur la base de leur solubilité, de leur stabilité et sur leur capacité à induire la mort cellulaire de cellules tumorales, nous avons identifié le HA 344 comme composé « lead ». Cette étude propose de caractériser et de valider un nouvel inhibiteur covalent, le HA 344, dérivé de l’Acadésine, efficace sur des lignées de mélanomes et SMD sensibles et résistants à leur traitement de référence mais également sur cellules de patients. En combinant des techniques de click chimie, protéomique et métabolomique, nous avons identifié cette molécule comme un inhibiteur covalent de deux hubs métaboliques différents au sein des cellules tumorales. HA 344 inhibe l’étape finale et limitante de la glycolyse par sa liaison covalente à l’enzyme pyruvate kinase M2 (PKM2), et bloque simultanément l’activité de l’inosine monophosphate déshydrogénase (IMPDH), l’enzyme limitante de la synthèse de novo de guanylate. HA 344 bloque la croissance tumorale in vitro et in vivo de cellules de mélanome sensibles et résistantes aux inhibiteurs de BRAF. Ainsi, ce mécanisme d'action spécifique du HA 344 offre une nouvelle voie thérapeutique potentielle pour les patients atteints de mélanome cutané métastatique et d’autres cancersCutaneous metastatic melanoma (CMM) and myelodysplastic syndromes (MDS) are two incurable cancers developing resistance to their reference antitumor treatments. Cells resistant to these therapies are characterized by a metabolic reprogramming which profoundly influences and promotes tumor progression. Therefore, inhibition of metabolic pathways seems to be a promising therapeutic strategy to overcome resistance in these two pathologies.The two teams involved in this thesis project have a long-lasting collaboration in the field of cancer. In this context and in partnership with the Nice Institute of Chemistry, our two teams have developed innovative compounds targeting intra-cellular energy balances and the AMPK pathway. Among these compounds, we were more specifically interested in AICAR (Acadesine). Screening efficiency and structure-activity studies enabled us to optimize the structure of our compounds. Based on their solubility, their stability, and their ability to induce tumor cells death, we have identified HA 344 as a lead compound.This study describes the characterization and validation of a new covalent inhibitor, HA 344, derived from Acadesine, effective on CMM and MDS cell lines either sensitive or resistant to their reference treatment but also on CMM and MDS patient cells. By combining click chemistry, proteomics, and metabolomics approaches, we have identified this molecule as a covalent inhibitor of two different metabolic hubs within cancer cells. HA 344 inhibits the final and rate-limiting step of glycolysis through its covalent binding to the pyruvate kinase M2 (PKM2) enzyme, and concurrently blocks the activity of inosine monophosphate dehydrogenase (IMPDH), the rate-limiting enzyme of de novo guanylate synthesis. HA 344 efficiently eliminates tumor growth of BRAF inhibitor sensitive- and resistant-CMM cells both in vitro and in vivo. Thus, this specific mechanism of action of HA 344 provides potential therapeutic avenues not only for patients with CMM but also a broad range of cancers
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Mouracade, Pascal. "Etude des voies signalétiques impliquées dans la résistance aux agents thérapeuthiques dans le carcinome à cellules rénales humain". Thesis, Strasbourg, 2015. http://www.theses.fr/2015STRAJ055/document.
Abstract (sommario):
Le carcinome à cellules rénales (CCR) se caractérise par une résistance importante aux thérapies. Notre hypothèse était que des voies signalétiques prolifératives, anti-apoptotiques et/ou angiogéniques sont mises en jeu dans la résistance aux thérapies. Il s’agissait de mesurer la sensibilité de lignées cellulaires de CCR humain à différentes classes thérapeutiques in vitro et in vivo. Une étude pilote a été réalisée sur la base de xénogreffes de la lignée A498 chez la souris nude, puis exploitée pour des analyses sur biopuces à protéines afin d’identifier les voies de signalisation induites par le sunitinib. In vitro, les lignées cellulaires de CCR se sont révélées sensibles aux thérapies indépendamment du statut VHL. In vivo, la lignée A498 est apparue résistante au sunitinib. L’approche par biopuces a montré que plusieurs protéines de l’angiogenèse sont modulées sous l'effet du traitement, notamment l’angiogénine. Il n’y a pas de modification de l’expression des protéines de l’apoptose testées. Les formes phosphorylées d’Akt sont également augmentées dans les tumeurs traitées, de même que Lim1 alors que la forme phosphorylée de NFκB est diminuée. Ce travail a ainsi identifié de potentielles cibles impliquées dans les mécanismes de résistance et devraient permettre de définir de nouvelles options thérapeutiques dans le cancer du reinThe renal cell carcinoma is characterized by a high resistance to therapies. Our working hypothesis was that proliferative signaling pathways, anti-apoptotic and / or angiogenic are involved in resistance to therapies. Thus, as part of this thesis, we measured the sensitivity to chemotherapy and targeted therapies in kidney cancer cell lines in vitro as well in vivo.A pilot study was conducted on the basis of the A498 cell line xenografts in nude mice, and then used for analysis on proteome arrays to identify the signaling pathways induced by sunitinib. In vitro, the cell lines of RCC were sensitive to therapy regardless of the VHL status. In vivo, the line A498 appeared resistant to sunitinib. The approach using the proteome array has shown that several angiogenesis proteins are modulated as a result of treatment, including angiogenin. There was no change in the expression of proteins of apoptosis. Phosphorylated forms of Akt were also increased in the treated tumors, as well as Lim1 whereas the phosphorylated form of NFkB was reduced. This work has identified potential targets involved in resistance mechanisms and should define new therapeutic options in renal cancer
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Beganton, Benoît. "Caractérisation des réseaux d’interactions protéiques associés aux mutations oncogéniques principales retrouvées dans le cancer du poumon non à petites cellules". Thesis, Montpellier, 2017. http://www.theses.fr/2017MONTT157/document.
Abstract (sommario):
Le cancer du poumon est la première cause de mortalité liée au cancer en France et dans le monde. Il s’agit d’un cancer de mauvais pronostique, diagnostiqué généralement aux stades tardifs III ou IV et avec une survie à 5 ans faible, respectivement de 6 et 1%. Ce cancer comprend différents types histologiques, parmi lesquels les adénocarcinomes sont les plus fréquents et comptent pour 40% des diagnostics. L’analyse génétique par séquençage des tumeurs des patients en stade IV permet de mettre en évidence des mutations récurrentes, et généralement mutuellement exclusives, au niveau des gènes KRAS, EGFR, BRAF et ALK. L’identification de ces mutations permet dans le cadre de tests compagnons de décider de l’éligibilité du patient aux thérapies ciblées lorsqu’elles sont disponibles.Bien que ces thérapies ciblées représentent une véritable révolution dans la prise en charge des patients, une majorité de patients ne peuvent bénéficier de ces traitements car ils ne présentent pas au niveau tumoral de mutation activatrices actionnables (absence de mutation EGFR, BRAF et ALK, présence d’une mutation KRAS…). De plus, dans l’éventualité où ils peuvent être traités par une molécule orale, le bénéfice observé reste malheureusement de courte durée et tous finiront à terme par échapper au traitement, c’est le cas par exemple lors de mutations de l’EGFR.Ainsi, afin de mieux comprendre quels sont les mécanismes moléculaires associés aux phénomènes de résistances thérapeutiques observés en clinique, et dans l’objectif de proposer de nouvelles voies thérapeutiques pour les patients non éligibles aux thérapies ciblées, j’ai étudié, au niveau protéique, l’impact des mutations sur les réseaux d’interactions protéiques en utilisant la technique du BioID (proximity-dependent biotinylation identification). Plus particulièrement, je me suis intéressé aux mutations activatrices de l’EGFR, KRAS, BRAF et ALK. Les protéines de la famille RAS (HRAS, NRAS, KRAS) étant mutées dans plus de 30% des cancers, je me suis également intéressé aux réseaux d’interactions protéiques portés par ces trois isoformes afin de mettre en évidence des interactions protéiques spécifiques à l’isoforme KRAS.Au cours de ma thèse, j’ai montré que les réseaux d’interaction caractérisés par le BioID sont bien plus denses que ceux obtenus par la technique plus conventionnelle de purification par affinité, et qu’ils permettent de mettre en évidence des interacteurs spécifiquement dérégulés par l’apparition de mutations activatrices. Par ailleurs les modèles cellulaires HEK293 (cellules humaines embryonnaires de rein) et BEAS2B (cellules pulmonaires d’origine non-cancéreuses) ont montré un fort recouvrement des interacteurs identifiés, ce qui suggère que la stratégie employée est pertinente pour identifier des interacteurs spécifiques de mutations. Ce travail de thèse a permis d’identifier une série de plusieurs interacteurs spécifiques des formes mutante de KRAS, d’EGFR, de BRAF, de NRAS et de la fusion EML4-ALK. Treize interacteurs spécifiques de la forme mutée de KRAS ont été validés fonctionnellement dans des modèles cellulaires de cancers du poumon. Enfin, en utilisant les données de BioID, un modèle préliminaire de résistance de l’EGFR aux thérapies ciblées a pu être élaboré, lequel fait apparaitre les protéines CBL et IGF2R comme des protéines potentiellement impliquées dans l’acquisition des résistances aux thérapies ciblées.Ce travail de thèse propose ainsi de nouvelles perspectives quant à la détermination des mécanismes de résistance spécifiques aux thérapies ciblées et à l’identification de nouvelles cibles thérapeutiques chez les patients présentent des mutations activatricesLung cancer is the leading cause of cancer-related death in France and in the world. It is a cancer of poor prognosis, diagnosed at the late stage III or IV, with a 5-years survival of 6% and 1%, respectively. This cancer encompass several histological types, and among them adenocarcinoma account for 40% of the diagnosis. Genetic sequencing of stage IV tumors highlights redundant mutations, and generally exclusives from each other’s, of KRAS, EGFR, BRAF and ALK genes. The identification of these mutations enable, within companion test, to make eligible patients for targeted therapies when molecules are available.Even though these targeted therapies represent a true revolution in patient’s care, the majority of them cannot benefit from these treatments because their tumors do not harbor activating mutations that are targetable (e.g. absence of EGFR, BRAF and ALK mutation, presence of KRAS mutation). Additionally, when they can be treated using an oral molecule, the benefit observed is unfortunately poor in terms of period of time, and all the patients will escape from the treatment. This is for example the case with EGFR mutations.To better understand the molecular mechanisms associated with the resistance events observed in the clinic, and to propose new therapeutics for patient not-eligible for targeted therapies, I studied at the proteome level, the impact these mutations on protein networks, using the BioID technology (proximity-dependent biotinylation identification). More particularly, I have been interested in the activating mutation of EGFR, KRAS, BRAF and ALK. Considering that proteins from the RAS family (HRAS, NRAS and KRAS) are mutated in around 30% of cancers, I have been also interested in the protein network of these proteins to highlight interaction specific to the KRAS isoform.During my thesis, I showed that the protein networks characterized using BioID are much more dense compared to those identified with the more conventional technic of AP-MS (Affinity-purification and mass spectrometry), and that they enable to identify interactors specifically deregulated upon activating mutation. Additionally, the HEK293 cell model (Human Embryonic Kidney) and BEAS2B cell model (non-cancerous lung cell line) showed a high overlapping degree of the interactors identified, suggesting that the strategy used is relevant to identify interactors specific to mutations. This thesis enabled to identify several interactors specific to the mutant KRAS, EGFR, BRAF, NRAS and EML4-ALk fusion. Thirteen interactors specific to the mutated-KRAS have been functionally validated in lung-cancer cell lines models. Finally, using BioID data I have been able to propose a model of EGFR resistance to targeted therapies. This model shows that CBL and IGH2R might be the EGFR partners responsible for therapeutic escape.Altogether, this thesis propose new perspective to determine resistance mechanisms and to identify new therapeutic targets for KRAS-mutated patients
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Pohorecka, Magdalena. "Rôle de c-Jun dans la réponse aux inhibiteurs de la voie des MAPK dans les mélanomes". Thesis, Toulouse 3, 2018. http://www.theses.fr/2018TOU30373.
Abstract (sommario):
Il est clairement admis que la voie des MAPK est essentielle à la mélanomagenèse. Le développement de nouveaux médicaments ciblant cette voie, tels que les inhibiteurs de BRAF et/ou de MEK, a constitué une avancée majeure dans la prise en charge thérapeutique du mélanome. Cependant, les patients rechutent systématiquement sous traitement, ce qui suggère l'émergence de mécanismes de résistances. De nombreuses études montrent que l'expression et l'activation du facteur de transcription c-Jun sont induites après traitement de cellules de mélanome BRAF-mutées par des inhibiteurs de la voie des MAPK (MAPKi). De plus, la déplétion de c-Jun sensibilise ces cellules à ces inhibiteurs en induisant l'apoptose. Nous avons transfecté des lignées cellulaires de mélanome BRAF-mutées par des siARN dirigés contre c-Jun et traité ces cellules avec un inhibiteur de BRAF (PLX4032). Nous avons ensuite analysé l'expression du génome par une étude de transcriptomique afin de déterminer les gènes cibles de c-Jun qui pourraient être impliqués dans la réponse pharmacologique aux MAPKi. Cette étude a révélé que SLIT And NTRK Like Family Member 6 (SLITRK6) est un gène cible de c-Jun qui pourrait être associé à une réponse pharmacologique antitumorale aux MAPKi. En effet, l'ARNm et la protéine SLITRK6 sont induits dans les lignées cellulaires de mélanome BRAF-mutées après traitement par inhibiteur de BRAF seul ou en association avec un inhibiteur de MEK (AZD6244). Nous avons également montré que la combinaison des inhibiteurs de la voie des MAPK avec un anticorps conjugué à un cytotoxique ciblant SLITRK6 augmente la mort des cellules de mélanome BRAF-mutées en induisant de l'apoptose in vitro. Finalement, nos travaux montrent que SLITRK6 pourrait être une nouvelle cible pharmacologique pour le traitement du mélanome métastatique BRAF-muté et/ou être un biomarqueur potentiel de cellules résistantes aux MAPKiIt is clearly recognized that the MAPK pathway is essential for melanomagenesis. The development of new drugs targeting this pathway such as BRAF inhibitors and/or MEK inhibitors has been a major advance in the therapeutic management of melanoma. However, patients still relapse suggesting the emergence of mechanisms of resistance. Many data show that both the expression and activation of the transcription factor c-Jun are induced after treatment of BRAF-mutant cells with MAPK pathway inhibitors (MAPKi). Furthermore, depletion of c-Jun sensitizes cells to these inhibitors triggering apoptosis. We depleted BRAF-mutant melanoma cell lines for c-Jun by siRNA and treated cells with a BRAF inhibitor (PLX4032). Whole genome expression was then analysed by transcriptomic study to determine target genes of c-Jun that could be associated with pharmacological response to MAPKi. This study revealed that SLIT And NTRK Like Family Member 6 (SLITRK6) is a target gene of c-Jun that could be associated with antitumor pharmacological response to MAPKi. Indeed, SLITRK6 mRNA and protein are induced in BRAF-mutant melanoma cell lines after BRAF inhibitor treatment alone or in combination with MEK inhibitor (AZD6244). We also show that the combination of MAPKi with an antibody conjugated with a cytotoxic drug targeting SLITRK6 increases BRAF-mutant melanoma cell death triggering apoptosis in vitro. Finally, our data show that SLITRK6 could be a new pharmacological target for the treatment of BRAF-mutant metastatic melanoma and/or a potential biomarker of resistant cells to MAPKi
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Poiraudeau, Loïc. "Identification de nouvelles cibles thérapeutiques dans le cancer neuroendocrine de la prostate". Electronic Thesis or Diss., université Paris-Saclay, 2023. http://www.theses.fr/2023UPASL143.
Abstract (sommario):
Le cancer de la prostate est le cancer le plus fréquent chez l'homme et il constitue la deuxième cause de mortalité par cancer chez l'homme dans les pays industrialisés. Le traitement systémique de ces cancers repose sur une déprivation androgénique par castration chirurgicale ou pharmacologique. Le cancer de la prostate métastatique résistant à la castration (mCRPC) est traité par des inhibiteurs de la voie des androgènes (ARPI). Cependant, environ un tiers des patients ne sont pas sensibles à ces médicaments et les autres, sensibles initialement, développent malheureusement une résistance secondaire, acquise dans un délai d'environ 1 à 2 ans. Les mécanismes qui expliquent la résistance primaire et secondaire ne sont pas bien connus. Une différenciation neuroendocrine (NE) des constitue l'un de ces mécanismes. En effet, entre 15 et 20% des tumeurs évoluent vers un phénotype neuroendocrine de la prostate (NEPC). Le pronostic de ces patients est très mauvais car les mécanismes moléculaires précis impliqués dans la différenciation neuroendocrine ne sont pas clairement élucidés et il n'existe pas de solution thérapeutique adaptée à ces tumeurs. L'objectif de cette thèse était d'étudier la différenciation neuroendocrine afin d'identifier des nouvelles cibles thérapeutiques. Nous nous sommes appuyés sur l'étude MATCH-R visant à étudier les mécanismes de résistance aux thérapies ciblées (enzalutamide, abiraterone) dans le cancer de la prostate métastatique. Les biopsies de patients ont été caractérisées par des méthodes de séquençage à haut débit et d'immunohistochimie. Dans le cadre de cette étude le laboratoire a aussi développé et caractérisé des modèles précliniques de xénogreffes dérivées de patients (PDX). Nous montrons à partir du WES et RNAseq de biopsies de patients que la différenciation neuroendocrine résulte probablement d'altérations transcriptomiques et épigénétiques. Par ailleurs, nos PDX NEPC maintiennent les caractéristiques génétiques, moléculaires et pharmacologiques par rapport à leurs biopsies d'origine. L'analyse du RNAseq a permis d'identifier une protéine membranaire spécifiquement exprimée par les NEPC. L'expression de cette protéine est corrélée à l'expression de marqueurs NE tels que synaptophysine (SYP) et chromogranine A (CHGA) ainsi qu'à un plus mauvais pronostic. Le traitement de nos PDX NEPC exprimant cette protéine avec une unique injection intraveineuse d' un anticorps conjugué ciblant la protéine résulte en une diminution significative du volume tumoral dans le groupe de souris traitées par rapport au groupe de souris non traitées. Enfin, nous avons identifié un récepteur nucléaire orphelin NR0B2 surexprimé dans les NEPC qui pourrait être impliqué dans la résistance aux inhibiteurs de la voie du RA. Au final, la thèse a permis de confirmer la différenciation neuroendocrine comme mécanisme important de résistance aux thérapies ciblant la voie du récepteur aux androgènes, de développer de nouveaux modèles pertinents (PDX et organoïdes), d'identifier et valider une nouvelle cible thérapeutique et enfin de suggérer le rôle d'un facteur nucléaire orphelin comme acteur moléculaire dans la résistance des cancers neuroendocrinesProstate cancer is the most common cancer in men and the second leading cause of cancer death in men in industrialized countries. The systemic treatment of these cancers is androgen deprivation therapy (ADT), which can be achieved through surgical or pharmacological castration. Metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC) is treated with androgen receptor inhibitors (ARi). However, approximately one-third of patients are not responsive to these drugs and the others, who are initially responsive, unfortunately develop secondary resistance, which is acquired within approximately 1-2 years. The mechanisms that explain primary and secondary resistance are not well understood. Neuroendocrine differentiation (NE) of mCRPC is one of these mechanisms. In fact, between 15 and 20% of resistant tumors evolve into neuroendocrine prostate cancer (NEPC). The prognosis of these patients is very poor because the precise molecular mechanisms involved in neuroendocrine differentiation are not clearly elucidated and there is no therapeutic solution adapted to these tumors.The objective of this thesis was to study neuroendocrine differentiation in order to identify new therapeutic targets. We relied on the MATCH-R study, which aimed to study the mechanisms of resistance to targeted therapies (enzalutamide, abiraterone). Patient biopsies were characterized using high-throughput sequencing and immunohistochemistry methods. As part of this study, the laboratory also developed and characterized preclinical patient-derived xenograft (PDX) models. We show from WES and RNAseq performed on patient biopsies that neuroendocrine differentiation is likely the result of transcriptomic and epigenetic alterations. Moreover, our PDXs retain the genetic, molecular, and pharmacological characteristics of their original biopsies. RNAseq analysis identified a membrane protein, which is specifically expressed by NEPC. The expression of this protein is correlated with the expression of NE markers such as synaptophysin (SYP) and chromogranin A (CHGA), as well as a worse diagnosis. Treatment of our NEPC PDXs with a single intravenous injection of an antibody-drug conjugate targeting this protein, resulted in a significant decrease in tumor volume in the treated group compared to the untreated group. Finally, we identified an orphan nuclear receptor, NR0B2 that is overexpressed in NEPC and could be involved in resistance to ARi. NEPC are aggressive tumors with few therapeutic options. These tumors result from transcriptomic alterations and require the development of relevant models that recapitulate the complexity of the disease to identify potential targets for new targeted therapies. ADCs are promising therapies, especially in NEPC, and have shown anti-tumor efficacy in preclinical evaluation
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Pacheco, Nieva Yovana. "Réponse immune cellulaire et thérapie de l'infection par le VIH". Nantes, 2010. https://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show/show?id=59e1f838-c420-42d8-b4a6-49b9bf87c144.
Abstract (sommario):
Pendant le traitement antirétroviral de l'infection par le VIH, différents cas d'échecs thérapeutiques peuvent survenir, dans ce travail nous nous sommes intéressés à deux aspects de cet échec: D'une part la grande variabilité du VIH permet au virus d'échapper aux médicaments antirétroviraux et peut être à l'origine d'un échec virologique. Il a été observé que plusieurs mutations de résistances sont localisées au sein des épitopes reconnus par les CTL, suggérant que la réponse immune peut avoir un effet sur les virus résistants. Afin d’étudier cette question, nous avons évalué, la réponse cytotoxique dirigée contre l’épitope RT181-189 chez 34 patients HLA-A2+ séropositif pour le VIH. Cet épitope comprend la mutation M184V, responsable de la résistance virale à la Lamivudine. Chez la majorité des patients en échec virologique sous Lamivudine la réponse contre cet épitope n'est pas présente alors qu'elle est fréquente chez les patients naïfs de traitement. Une étude détaillée sur les facteurs influençant le développement de la réponse à cet épitope a été effectuée. Par ailleurs, chez certains patients la reconstitution du compartiment CD4 n’est pas complète, il s'agit d'un échec immunologique. Dans ce cadre nous avons comparé les effets de trois cytokines (IL-2, IL-7, IL-15) et d'un agoniste de l'IL-15 RLI, sur les CD4+ et CD8+ des patients pour évaluer leur possible rôle thérapeutique dans la reconstitution de l'immunocompétence. Nos résultats montrent que la réponse proliférative des patients à l'IL-7 est préservée chez les patients VIH+ même chez ceux dont le taux de CD4 est faible. L'IL-15 et le RLI induisent une prolifération efficace de la population CD4 effecteur mémoireDuring HIV infection antiretroviral tritherapy efficiently inhibits viral replication and restores CD4 counts in infected patients. Nevertheless treatment failure may occur. In this work, we investigated two different aspects of this problem : Firstly, HIV sequence variability may provoke the emergence of resistant viruses leading to virological failure. The fact that many drug resistance mutations in HIV fall within CTL epitopes suggests that the immune response play a role in inhibiting resistant virus. In order to address this question we analyzed the response against the RT181-189 epitope covering the Lamivudine resistance mutation, M184V in 34 HLA-A2+ HIV+ infected patients. We found that RT181-189 is frequently recognized by ART Naive patients and poorly recognized by patients with virological failure under Lamivudine treatment. Both viral load and viral sequence polymorphism were associated with the presence of a CTL response against RT181-189. Secondly, some patients may undergo immunological failure; the recovery of CD4+ T-cell counts is incomplete despite complete suppression of viral replication. The aim of our study was to compare the effects of IL-2, IL-7, IL-15 and an agonist of IL-15, RLI, on CD4+ and CD8+ lymphocytes from HIV-infected patients, in order to evaluate the therapeutic potential of these molecules on immune reconstitution. Overall our results indicate that the proliferative response of CD4+ T-cells to IL-7 is preserved, even in patients with low CD4+ T-cell counts, and that both IL-15 and RLI can induce homeostatic proliferation of CD4+ effector-memory T-cells. In, RLI did not show greatly increased potency compared to native IL-15
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Marthinet, Eric. "Modulation du phénotype typique de multichimiorésistance (MDR) des cellules cancéreuses humaines par des leurres transcriptionnels et étude de la régulation transcriptionnelle du gène MDR1 au niveau de la région MED-1". Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO10021.
Abstract (sommario):
Le phenotype de multichimioresistance mdr est une cause majeure de l'echec de la chimiotherapie anticancereuse. Le phenotype dit typique s'explique entre autres par la surexpression de proteines membranaires parmi lesquelles la plus importante est la glycoproteine-p (p-gp) codee par le gene mdr1 chez l'homme. La modulation du phenotype mdr est une priorite majeure du traitement clinique anticancereux. Dans cette optique, nous developpons au laboratoire des strategies innovantes et efficaces pour moduler le phenotype mdr en agissant non pas sur la proteine elle-meme mais sur son gene. Ces approches sont basees sur l'utilisation de leurres transcriptionnels (destines a devier la fixation de proteines regulatrices sur ces leurres plutot que sur leur region regulatrice) et de ribozymes (petits arn capables de cliver l'arn messager du gene mdr1) pour reduire l'expression de la p-gp. Les resultats positifs de modulation obtenus avec les leurres transcriptionnels sur les modeles cellulaires construits au laboratoire ont ete transposes avec succes a des cellules tumorales mdr in vitro et seront testees prochainement sur des cellules in situ. L'issue de ces tests permettra d'envisager serieusement l'usage de ces approches pour le traitement clinique des cancers. De plus, afin de mieux comprendre la regulation de la transcription du gene mdr1, nous avons isole et identifie une proteine qui interagit specifiquement avec une region regulatrice specifique du gene mdr1, appelee med-1. Le role de cette region consisterait a initier correctement la transcription du gene. Nous avons identifie cette proteine par spectrometrie de masse maldi-tof comme etant la proteine lrp130. Nous avons egalement entrepris l'etude du role de cette region
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Billaud, Amandine. "Analyse moléculaire, enjeux et limites des thérapies ciblées en oncologie : extension des sensibilités aux anti-PARP dans les cancers ovariens par caractérisation de variants non annotés et nouveaux mécanismes de résistance dans les cancers bronchiques. Caractérisation moléculaire de l’EGFR dans les cancers bronchiques non à petites cellules : étude prospective comparative des technologies NGS et automate Idylla Somatic mRNA analysis of BRCA1 splice variants provides a direct theranostic impact on PARP inhibitors". Thesis, Angers, 2020. http://www.theses.fr/2020ANGE0003.
Abstract (sommario):
Malgré les bénéficies cliniques considérables de la prise en considération du contexte moléculaire tumoral, les thérapies ciblées présentent certaines limitations majeures. La première partie de ces travaux se concentre sur l’étude des inhibiteurs de tyrosine kinase ciblant l’EGFR dans les cancers bronchiques non à petites cellules. L’amélioration des méthodes de détection des biomarqueurs a été complétée par la caractérisation in vitro d’un mécanisme de résistance acquise non précédemment identifié. L’exposition de cellules pulmonaires à un agent mutagène puis une pression de sélection a ainsi mis en évidence la signature TBK1 et l’effet synergique de la co-inhibition s’est révélé intéressant. Le deuxième aspect concernent les inhibiteurs de PARP, incontournables dans la prise en charge des cancers de la sphère gynécologique. Ces thérapies reposant sur le principe de létalité synthétique, la présence de mutations pathogènes de BRCA1/2 est un pré-requis, illustrant la problématique des variants de signification inconnue. Face à la nécessité de leur caractérisation fonctionnelle, une étude transcriptionnelle des variants d’épissage par extraction de l’ARNm depuis les prélèvements FFPE a d’abord été réalisée. Puis, afin d’évaluer tous les variants, l’édition génomique a été développée comparant les efficacités d’édition d’un variant d’intérêt et d’un variant silencieux dans un contexte haploïde où ces gènes sont essentiels. La signification biologique de variants de BRCA1/2, et la généralisation de notre approche à l’ensemble des gènes suppresseurs de tumeur essentiels de nos cellules, peut ainsi être évaluée en 3 semaines, délai compatible avec les impératifs cliniquesDespite significant clinical benefit from the consideration of molecular context, targeted therapies are still challenging. First part of this work focused on tyrosine kinase inhibitors targeting EGFR in non small cell lung cancers. Thus, improvement of biomarkers detection methods was completed by in vitro characterization of an unreported mechanism of acquired resistance. Briefly, pulmonary cells were exposed to a mutagen agent and a selection pressure was applied with EGFR inhibitors allowing the detection of TBK1 signature. Finally, synergic effect of that co-inhibition was highlighted. Now essentials in gynaecological cancers management, PARP inhibitors represent the second part of that work. Those targeted therapies are based on synthetic lethality. Consequently, BRCA1/2 pathogenic mutations are required for their administration, illustrating the issue of variants of uncertain significance. Toward their functional characterization necessity, a transcriptional analysis of splicing variant was first conducted on mRNA extracted from FFPE samples. Then, to evaluate functional signification of all types of variants, genomic edition was developed. Editing efficiencies of the unknown variant and a silent control one were compared in a haploid model where those genes are essentials. Functional signification of BRCA1/2 variants, and thereby mutations from all essential tumor suppressor genes in our model, can be evaluated in three weeks which is compatible with clinical management
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Sala, Margaux. "Implication des récepteurs à domaine discoïdine dans la résistance à la thérapie ciblée au cours du mélanome". Thesis, Bordeaux, 2019. http://www.theses.fr/2019BORD0400.
Abstract (sommario):
La combinaison de deux traitements, un anti-BRAF et un anti-MEK est actuellement utilisée en première ligne de traitement dans la prise en charge des patients ayant un mélanome métastatique porteur de la mutation somatique BRAF V600E. Cependant, le problème majeur dans le mélanome est l'acquisition d'une résistance cellulaire chez 80% des patients, qui est associée à une augmentation de la formation de métastases, notamment due à l'hyper-activation de la voie des MAP kinases. Or, les récepteurs à domaine discoïdine DDR1 et DDR2 sont capables d’activer cette voie de signalisation. Les DDRs sont surexprimés dans de nombreux cancers où ils sont associés à des phénomènes de résistance et de récidives. Notre projet a donc pour but d’analyser l’implication des DDRs dans la résistance des cellules tumorales de mélanome à la thérapie ciblée. En premier lieu, nous avons déterminé que les DDRs sont surexprimés dans les cellules résistantes au Vemurafenib par rapport aux cellules sensibles. L’hypothèse posée est que les lignées cellulaires résistantes, malgré la bithérapie, sont capables de suractiver la voie des MAP kinases par l'induction des DDRs. De plus, nous avons démontré que la diminution de l’expression des DDRs par des inhibiteurs des DDRs, comme le Dasatinib ou le CR-13542, induit une diminution de la prolifération tumorale due à une baisse du niveau d’activité de la voie MAP kinase. Enfin, nous avons confirmé ces résultats in vivo, dans un modèle murin de xénogreffe. Par conséquent, nous avons identifié les DDRs comme étant de nouvelles cibles thérapeutiques chez les patients résistants atteints de mélanome métastatique. De ce fait, nous proposons que le Dasatinib (possédant déjà une autorisation de mise sur le marché) puisse être utilisé en deuxième intention, après un traitement à la bithérapie ciblée, chez les patients résistants surexprimant les DDRsThe combination of two treatments, an anti-BRAF plus an anti-MEK is currently used in first line in patient management presenting metastatic melanomas and harboring the BRAF V600E somatic mutation. However, the main issue during targeted therapy is the acquisition of cellular resistance in 80% of the patients, which is associated with an increase of metastasis formation, notably due to the hyperactivation of MAP kinase pathway. Different receptors are known to activate this signaling pathway and previous reports have indicated that Discoidin Domain Receptors (DDRs) 1 and 2 can activate MAP kinase pathway. Then, in order to study the role of DDRs in melanoma cells resistance to the targeted therapy, we firstly determined, that DDRs are overexpressed in Vemurafenib resistant cells compared to sensitive ones. We hypothesized that resistant cell lines, despite the bi-therapy, are able to over-activate MAP kinase pathway through DDRs activation. We also reported that DDRs depletion or inactivation by DDRs inhibitors such as Dasatinib or CR-13542 reduced tumor cell proliferation, due to a decrease of MAP kinase pathway activity in resistant cells. We finally confirmed those results in vivo, in a xenograft mouse model. As a result, we characterized DDRs as new therapeutic targets in resistant patient with metastatic melanoma. Therefore, we propose that Dasatinib, an FDA approved drug, could be a second treatment after the targeted bi-therapy in resistant patients overexpressing DDRs
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Bertorello, Juliette. "Reprogrammation traductionnelle par eIF3 liée à la résistance aux traitements des glioblastomes". Thesis, Toulouse 3, 2020. http://www.theses.fr/2020TOU30096.
Abstract (sommario):
La résistance intrinsèque aux thérapies actuelles, conduisant à une rechute quasi systématique des patients, est une caractéristique des glioblastomes multiformes (GBM), la tumeur cérébrale la plus courante et la plus agressive. Comprendre les mécanismes sous-jacents d'une telle tumeur maligne est donc un besoin médical urgent. Il a été démontré par de nombreux travaux que la dérégulation de la machinerie de traduction des ARNm, notamment pendant l'étape d'initiation, contribue à la transformation maligne et à la progression des cancers en partie via une traduction sélective des transcrits spécifiques impliqués dans le développement et la survie des cellules cancéreuses. Mes travaux de thèse se sont concentrés sur le facteur eIF3, un complexe multimérique participant à l'initiation de la traduction et fréquemment dérégulé dans les GBM. Nos travaux montrent que l'expression dérégulée d'eIF3e, la sous-unité (e) du complexe eIF3, dans des régions de GBM spécifiques, impacte la synthèse de protéines nécessaires à la survie des cellules cancéreuses. En particulier, eIF3e restreint l'expression des protéines impliquées dans la réponse au stress cellulaire et augmente l'expression des marqueurs de cellules souches. Nos résultats montrent également que les effets d'activation et de répression d'eIF3e sur la traduction pourraient s'expliquer en partie par un modèle de liaison distinct d'eIF3e, d'eIF3d et de DDX3X (une ARN hélicase) sur les ARNm cibles. Finalement, l'ensemble des données obtenues permettent de mieux appréhender comment l'hétérogénéité intratumorale de l'expression de eIF3 aboutit à l'activation de voies de signalisation propres à chaque région tumorale dans les GBM, notion essentielle à prendre en compte dans l'élaboration de futurs traitements plus ciblés et plus personnalisés pour les patientsThe intrinsic resistance to current therapies, leading to an almost systematic relapse of patients, is a characteristic of glioblastomas (GBM), the most common and aggressive brain tumor. Understanding the underlying mechanisms of such a malignant tumor is therefore an urgent medical need. Several studies support the notion of a deregulation of the translation machinery, in particular during the initiation stage, contributes to the malignant transformation and progression of cancers, in part via a selective translation of the specific transcripts involved in the development and maintenance of cancer cells. Our work focuses on the eIF3 factor, a multimeric complex participating in the initiation of translation and frequently deregulated in GBM. Our results show that the deregulated expression of eIF3e, the subunit (e) of the eIF3 complex, in specific GBM regions, could influence the synthesis of specific proteins impacting the development of the disease. In particular, eIF3e restricts the expression of proteins involved in the response to cellular stress and increases the expression of stem cell markers. Our results also show that the activation and repression effects of eIF3e on translation could be partially explained by a distinct binding model of eIF3e, eIF3d and DDX3X (a RNA helicase) on target mRNAs. Finally, the data obtained allow us to better understand how the intratumor heterogeneity of eIF3 expression results in the activation of signaling pathways specific to each tumor region in GBM, an essential concept to take into account in the development of future more targeted and personalized treatments for patient
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St-Onge, Julie. "Utilisation des antibiotiques et tests diagnostiques en thérapie parodontale : une étude transversale sur les pratiques courantes des parodontistes au Canada". Master's thesis, Université Laval, 2019. http://hdl.handle.net/20.500.11794/34017.
Abstract (sommario):
En considérant la problématique grandissante des résistances bactériennes, cette étude avait pour but d’évaluer l’utilisation des antibiotiques et des tests diagnostiques microbiens en thérapie parodontale afin de vérifier si les pratiques cliniques actuelles des parodontistes canadiens concordent avec la littérature disponible. La collecte de données a été effectuée par l’entremise d'un questionnaire électronique acheminé par courriel et rempli de façon anonyme. Parmi les 322 parodontistes contactés, 64 ont participé à cette étude. Un taux de participation de 19,88 % a alors été atteint. Les résultats obtenus ont révélé que 59,38 % des parodontistes canadiens utilisent les antibiotiques locaux. Toutefois, les participants rapportent y avoir recours rarement et principalement pour la prise en charge de la parodontite réfractaire (39,47 %) et la parodontite chronique sévère localisée (21,05 %). D’ailleurs, la minocycline est l’antibiotique local le plus fréquemment utilisé. Pour ce qui est de l’antibiothérapie systémique, la majorité des parodontistes canadiens ont démontré des pratiques cliniques similaires pour les différentes conditions parodontales évaluées, et ce, autant pour les fréquences d’utilisation que les choix d’antibiotiques. La combinaison d’amoxicilline et de métronidazole est l’antibiothérapie systémique sélectionnée le plus fréquemment pour différentes conditions parodontales. Finalement, 82,81 % des participants n’utilisent jamais les tests diagnostiques microbiens dans leur pratique et cette non-utilisation a été justifiée par l’absence d’avantages associés à leur utilisation. En conclusion, une certaine similarité entre les habitudes de pratique a été dénotée pour l’antibiothérapie et les tests diagnostiques. Ainsi, en ce qui a trait à l’utilisation globale de l’antibiothérapie, les parodontistes canadiens respectent les évidences scientifiques actuelles. Pour ce qui est des tests diagnostiques, l’absence de littérature démontrant clairement les bénéfices cliniques d’avoir recours à ce type de test en thérapie parodontale a été reflétée par la faible utilisation de ceux-ci rapportée dans ce projet.Considering the emerging problem of bacterial resistance, this study was designed to evaluate the use of antibiotics and microbial diagnostic tests in periodontal therapy to determine whether the current clinical practices of Canadian periodontists are consistent with available literature. The data were collected through an electronic questionnaire sent by email and completed anonymously. There are 64 of the 322 periodontists contacted who participated in this study. A participation rate of 19.88 % was then obtained. The results show that 59.38 % of periodontists practicing in Canada use local antibiotics. However, participants mentioned using it rarely and mainly for the management of refractory periodontitis (39.47 %) and localized severe chronic periodontitis (21.05 %). Moreover, minocycline is the most frequently used local antibiotic. For systemic antibiotic therapy, the majority of Canadian periodontists demonstrated similar clinical practices. In fact, similarities were observed for frequency of use and antibiotic choice in various periodontal conditions evaluated. The combination of amoxicillin and metronidazole is the most frequently selected systemic antibiotic therapy for different periodontal conditions. Finally, 82.81 % of participants never use microbial diagnostic tests in their practice and this non-use was justified by the lack of benefits associated with these tests. In conclusion, a certain similarity between the practice habits was denoted for antibiotic therapy and diagnostic tests. Thus, the overall use of antibiotic therapy by Canadian periodontists respects current scientific evidence. The low use of diagnostic tests reported in this project reflects the lack of literature clearly supporting the clinical benefits of using these tests in periodontal therapy.
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Labialle, Stéphane. "Élément invMED1 et complexe LRP130 d'activation du gène MDR1 humain : découverte et application à la génothérapie du phénotype de multi-chimiorésistance des cancers". Lyon 1, 2004. http://www.theses.fr/2004LYO10032.
Abstract (sommario):
Le phénotype de résistance des cancers à la chimiothérapie (MRD) est principalement dû à la surproduction de protéines membranaires telles que la Pgp codée par le gène MDR1 chez l'humain. Nous rapportons ici la découverte d'un élément cis-activateur de la transcription des gènes MDR1 et MVP impliqués dans le phénotype MDR, que nous avons nommé invMED1. Nous avons étudié un facteur nucléaire de 150 kDa dont l'intensité d'interaction avec l'élément invMED1 croît lorsque le niveau de chimiorésistance intrinsèque de cellules cancéreuses en culture augmente. La caractérisation de ce facteur a permis d'indentifier sa copmposante protéique, la protéine LRP130, et suggère la présence d'un partenaire ARN. Ces détails permettent de développer nos stratégies de génothérapie du phénotype MDR. Grâce à l'établissement de lignées cancéreuses issues de mélanomes uvéaux humains et caractérisées par un groupe phénotype MDR complexe, nous avons pu tester le bénéfice apporté par l'administration de leurres transcriptionnels reproduisant l'élément invMED1 sur des cellules qui coexpriment les gènes MDR1 et MVP. Ces travaux permettent d'espérer une thèrapie génique du phénotype MDR qui aboutisse au traitement des cancers résistants par la chimiothérapie conventionnelle.
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Losson, Hélène. "Combinaisons de nouveaux inhibiteurs de désacétylase d’histones 6 avec des inhibiteurs de tyrosine kinase pour le traitement de la leucémie myéloïde chronique". Thesis, Université de Lorraine, 2020. http://www.theses.fr/2020LORR0003.
Abstract (sommario):
Les patients atteints de leucémie myéloïde chronique (LMC) breakpoint cluster region-Abelson (BCR-ABL)+ sont traités avec des inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK), comme l’imatinib, cependant certains développent des résistances et des effets secondaires sévères. Des traitements combinés à base d’inhibiteurs d’histone désacétylase (HDAC)6 (HDAC6i), pouvant potentiellement réduire l’expression de BCR-ABL, apparaît être une approche intéressante pour prévenir l’apparition de résistances aux ITK. De plus, l’implication d’HDAC6 dans les voies de dégradation des protéines rend son inhibition couplée à celle du protéasome susceptible de sensibiliser les cellules aux ITK. Notre hypothèse est que la combinaison ITK-HDAC6i pourrait être efficace pour le traitement de la LMC. Dans un premier temps, les effets anti-cancéreux d’un HDAC6i identifié dans notre laboratoire, le composé 7b, à celui de référence, la tubacine, en combinaison avec l’imatinib ont été comparés. La combinaison imatinib-7b a généré des effets anti- cancéreux plus importants que la combinaison imatinib-tubacine et a provoqué une mort synergique apoptotique dépendante des caspases dans les cellules K-562 et réduit la proportion de cellules souches leucémiques alors qu’elle n’a eu qu’un effet modéré sur des cellules saines. Enfin, la combinaison a diminué plus fortement la capacité de formation de colonies et la masse tumorale des cellules de LMC respectivement en milieu semi-solide et dans des poissons zèbres xénogreffés, par rapport aux composés seuls. D’un point de vue mécanistique, la combinaison induit l’ubiquitination et la dégradation de BCR-ABL, et la dérégulation de protéines de ses voies de signalisation impliquées dans la prolifération et la survie cellulaire. La protéine HDAC6 possédant deux sites catalytiques, nos résultats tendent à montrer que le composé 7b cible le deuxième. Dans un second temps, une étude a été initiée sur un nouvel HDAC6i de type hydroxamate, le MAKV-15, qui diminue l’expression de BCR-ABL, et qui en pré-traitement avec le bortezomib, sensibilise les cellules à l’imatinib, entrainant une augmentation de la mort apoptotique dépendante des caspases dans les cellules sensibles et résistantes à l’imatinib. Enfin, nos résultats suggèrent que l’inhibition d’HDAC6 potentialise l’effet de l’imatinib, pourrait prévenir l’apparition de résistances et que de telles combinaisons pourraient représenter une approche thérapeutique prometteuse pour les patients atteints de LMCBreakpoint cluster region-Abelson (BCR-ABL)+ chronic myeloid leukemia (CML) patients receive tyrosine kinase inhibitors (TKIs) such as imatinib as the first-line treatment; however, some patients develop resistances and severe adverse effects. Combination treatments, especially with histone deacetylase (HDAC)6 inhibitors (HDAC6i), appear as an attractive option to prevent TKI resistances considering the capacity of HDAC6i to downregulate BCR-ABL. Moreover, HDAC6 is implicated in protein degradation pathways, so that its inhibition combined with that of the proteasome could sensitize cells to TKIs. Thus, we hypothesized that HDAC6i combined to TKIs could be effective for CML treatment. In the first part, we compared the anti-CML effects of a HDAC6i identified in our laboratory, compound 7b, to the reference HDAC6i tubacin, in combination with imatinib. Results showed that the imatinib-7b combination generated stronger anti- CML effects than imatinib-tubacin. Especially, the imatinib-7b combination elicited a potent synergistic caspase- dependent apoptotic cell death and drastically reduced the proportion of cancer stem cells in K562 CML cells, whereas it only moderately impacted various healthy cell models. Ultimately, the imatinib-7b combination decreased more potently the colony forming capacities and tumor mass formation of CML cells in a semisolid methylcellulose medium and in xenografted zebrafishes, respectively, compared to each compound alone. Mechanistically, the combination induced BCR-ABL ubiquitination and downregulation leading to a dysregulation of multiple key proteins of its downstream pathways involved in CML proliferation and survival. Results tend to demonstrate that 7b could target the second site. In the second part, we initiated a study of a novel hydroxamate-based HDAC6i, MAKV-15, and preliminary results demonstrated it triggered BCR-ABL downregulation. Accordingly, in pre-treatment with bortezomib it sensitizes CML cells to imatinib leading to enhanced caspase-dependent apoptotic death in imatinib-sensitive and imatinib-resistant CML cells. Considering that HDAC6 is reported to possess two functional catalytic sites, we finally attempted to determine which catalytic site is targeted by these HDAC6i. Taken together, our results suggest that HDAC6i potentiate the effect of imatinib and could overcome TKI resistance in CML cells and therefore such combination may represent a promising therapeutic approach for CML patients
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Resnier, Pauline. "Nano-Vectorisation de siRNA via des nanocapsules lipidiques : contournement de la résistance du mélanome aux chimiothérapies conventionnelles". Thesis, Angers, 2014. http://www.theses.fr/2014ANGE0006/document.
Abstract (sommario):
Le mélanome métastatique reste à l’heure actuelle une pathologie dramatique avec une survie moyenne de 13 mois après diagnostic, démontrant l’échec des chimiothérapies. Ces travaux de thèse ont pour but de développer une stratégie alternative utilisant les siRNA (petits ARN interférents) encapsulés au sein de nanocapsules lipidiques (LNC) pour une injection intraveineuse. Les premiers travaux ont porté sur le développement et l’amélioration du procédé de formulation des LNC chargées en siRNA. Les résultats ont permis une encapsulation à hauteur de 35%, une stabilité prolongée supérieure à 3 mois et une efficacité d’extinction du gène cible dans les cellules de mélanome. La deuxième partie de la thèse s’est orientée sur les stratégies de ciblage du mélanome après administration systémique. Différentes modifications de surface des LNC à l’aide de polyéthylène glycol (PEG) et d’Affitins (peptide d’affinité) ont été mises au point. La biodistribution sur des animaux « sains » ou des animaux greffés en sous-cutanés (mélanome humain) a révélé des comportements distincts en fonction des recouvrements utilisés. Les formes pegylées ont montré une accumulation préférentielle au site tumoral en comparaison avec les formes non modifiées ou modifiées avec les Affitins. Dans une troisième partie, des études d’efficacité anti-tumorale ont été réalisées avec un siRNA ciblant la protéine Bcl-2 ou la sous unité alpha 1 de la pompe Na/K ATPase. Une réduction du volume tumoral de 25% est observée avec les LNC siRNA Bcl-2. Par ailleurs, l’association de nouvelles chimiothérapies, les ferrocifènes, et des siRNA Bcl-2, montrent grâce à leur co-encapsulation au sein des LNC, des effets prometteurs. Ces travaux démontrent ainsi la capacité des LNC à délivrer des siRNA par voie intraveineuse dans de nouvelles stratégies de ciblage du mélanomeMetastatic melanoma represents the most aggressive form of skin cancer with a median survival around 13 months. The low efficacy of actual chemotherapy is explained by important resistance phenomenon. The objective of this work consists in developing a new alternative strategy based on siRNA (small interfering RNA) encapsulated into lipid nanocapsules (LNCs) for intravenous injection. Firstly, the experiments were focused on development and optimization of formulation process for the encapsulation of siRNA into LNCs. The result demonstrated an encapsulation efficiency evaluated at 35% by spectrophotometer analysis, an important stability at 4°C (for at less 3 month) and an efficient gene inhibition in melanoma cells. The second part of this work studied the melanoma targeting potential of surface modified LNCs after systemic injection. In this way, pegylation with different polymers and Affitin grafting (affinity peptide) was performed on siRNA LNCs. The biodistribution on healthy animals and subcutaneous melanoma tumor bearing mice revealed the distinct behavior of various modified LNCs. All pegylated LNCs showed a preferential accumulation in tumor site in comparison with non-modified or Affitins LNCs. In a third part, the anti-cancer efficacy was tested with siRNA targeting Bcl-2, an anti-apoptotic member, or Alpha 1 subunit of Na/K ATPase. A reduction of tumoral volume evaluated at 25% was observed for Bcl-2 siRNA LNC. Moreover, the association with new promising anticancerous drug, ferrocifens, and Bcl-2 siRNA co-encapsulated into LNCs evidenced promising effects. This work demonstrated the capacity of LNC to deliver siRNA into melanoma cells and tumor after systemic administration thank to new targeting strategies in melanoma
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Joha, Sami. "Mécanismes de résistance aux inhibiteurs de tyrosine kinase sur le modèle de leucémie myéloïde chronique". Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00451045.
Abstract (sommario):
La leucémie myéloïde chronique (LMC) est une transformation maligne d'une cellule souche hématopoïétique, caractérisée par une anomalie génétique acquise : le chromosome Philadelphie (Ph), résultant de la translocation réciproque t(9 ;22)(q34 ;q11), et son équivalent moléculaire, l'oncogène BCR-ABL. La protéine BCR-ABL présente une activité tyrosine kinase constitutive qui agit sur les voies de survie et de prolifération. La progression de la maladie vers la phase accélérée puis blastique s'accompagne d'anomalies génétiques additionnelles marqueurs d'une instabilité génomique croissante. La responsabilité de BCR-ABL dans la genèse de cette instabilité génomique est fortement suspectée. Dérivé de 2-phénylamino-pyrimidines, l'Imatinib inhibe l'activité tyrosine kinase de BCR-ABL ainsi que la prolifération de lignées cellulaires BCR-ABL positives et induit leur apoptose. Les échecs du traitement par l'Imatinib sont dus à des mécanismes de résistance qui ne sont pas tous entièrement caractérisés. Des nouveaux inhibiteurs de tyrosine kinases (ITKs) ou des associations avec l'Imatinib ont été développés afin de la surmonter. Cependant, une résistance croisée et multiple demeure difficile à traiter et nécessite une meilleure compréhension des mécanismes de résistance afin d'éradiquer la maladie dans un avenir proche. Les travaux réalisés au cours de cette thèse ont montré que la présence de microremaniements génétiques (traduisant une instabilité) au sein de progéniteurs leucémiques CD34+ de patients traités par l'Imatinib corrélait avec la perte de réponse à l'Imatinib chez les patients diagnostiqués en phase chronique, suggérant que la résistance à l'Imatinib pourrait être corrélée aux altérations génétiques survenant précocement dans la physiopathologie de la maladie. 113 gènes affectés ont été détectés dont certains sont localisés dans des régions connues pour être hypervariables (CNV) suggérant un rôle de ces régions dans le développement de la LMC ou la résistance à l'Imatinib. Nous avons mis en évidence la présence d'une anomalie acquise récurrente dans telle région localisée en 8p23.1 qui groupe les gènes de la famille de la Défensine B. Ce microremaniement n'est pas lié à la résistance à l'Imatinib car il est retrouvé dans les populations cellulaires CD34+ Ph+ et Ph-, il peut donc être considéré comme un marqueur de l'instabilité d'une sous-population cellulaire clonale de CD34+ présentant une grande prédisposition à acquérir des altérations génétiques additionnelles, comme la fusion BCR-ABL. Nos études montrent que des altérations secondaires pourraient être le support d'une résistance à l'Imatinib. La résistance à l'Imatinib peut alors être liée à la dérégulation des voies de signalisation en amont ou en aval de BCR-ABL, affectant ainsi la prolifération, la survie, la différenciation et l'intégrité du génome. Il semble donc que le traitement par l'Imatinib seul ne soit pas suffisant pour éradiquer la maladie. Pour cette raison, de nouvelles molécules à associer avec l'Imatinib sont actuellement en cours d'évaluation. Parmi ces associations, les inhibiteurs de la voie Ras ont montré une certaine efficacité dans la restauration de l'activité proapoptotique de l'Imatinib. Il était donc intéressant de chercher une cible thérapeutique régulant négativement cette voie afin de surmonter cette résistance. GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper) inhibe la voie Ras/Raf par une interaction directe. Il inhibe également la voie NFκB dont certains antagonistes sont capables de surmonter la résistance à l'Imatinib. Nos résultats montrent, pour la première fois, que l'expression de GILZ est diminuée dans des lignées humaines ou murines exprimant BCR-ABL sensibles ou résistantes aux ITKs ainsi que dans les cellules dormantes résiduelles isolées d'un modèle cellulaire murin développé au laboratoire. L'expression forcée de GILZ dans ces lignées résistantes restaure la sensibilité à l'Imatinib. Nos résultats montrent que le mécanisme passe par une inhibition de la voie mTORC2/Akt Ser473. Elle est due à une interaction directe de GILZ avec mTORC2 permettant l'activation de FoxO3a et l'induction de l'expression de la protéine proapoptotique Bim. Dans ce système, GILZ augmente l'expression de Bim tandis qu'Imatinib, par ses effets "Off-target", diminue celle de Mcl-1 inversant ainsi le rapport des membres antiapoptotiques/proapoptotiques de la famille Bcl-2 et entrainant l'apoptose. Le traitement séquentiel par les glucocorticoïdes puis l'Imatinib induit l'apoptose de cellules souches de patients résistants par le même mécanisme, suggérant que la modulation de l'expression de GILZ pourrait représenter une nouvelle stratégie thérapeutique pour cibler les cellules leucémiques résistantes ou résiduelles. La régulation de la voie mTORC2/Akt Ser473 semble être d'une importance cruciale dans la survie des cellules BCR-ABL+, ainsi que dans la résistance aux ITKs. Parmi les gènes méthylés dans notre étude, on retrouve un gène impliqué dans la régulation de cette voie et qui code pour la phosphatase PHLPP (PH domain and Leucine rich repeat Protein Phosphatase) dont l'activité est de déphosphoryler la sérine 473 d'Akt favorisant son inactivation. Nos résultats montrent que la réexpression du variant 1 de cette phosphatase (PHLPP1) dans notre modèle murin de résistance restaure la sensibilité à l'Imatinib et que la répression de celui-ci n'est pas exclusivement due à l'activité tyrosine kinase de BCR-ABL, mais aussi à des modifications épigénétiques. Nos études ont permis d'identifier des gènes impliqués dans la résistance des LMC aux ITKs et de proposer de nouveaux traitements pour surmonter cette résistance en inhibant la voie Akt Ser473
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Ly, Nary. "Caractérisation moléculaire du VIH-1 et premières données de la résistance aux antirétroviraux au Cambodge". Bordeaux 2, 2006. http://www.theses.fr/2006BOR21336.
Abstract (sommario):
La variabilité génétique du VIH-1 a de nombreuses implications en particulier au niveau de la résistance aux anti-retroviraux (ARVs). En effet les mutants résistants aux ARVs sont bien caractérisés pour le sous-type B mais des données nouvelles sont nécessaires pour les sous-types non-B. Dans ce travail mené au Cambodge, nous nous sommes intéressés au CRF01_AE. Dans une première étude nous avons caractérisé les isolats viraux de patients adultes naîfs d'ARVs ; nous avons montré la large prédominance (95,5 %) du CRF01_AR , en outre nous avons mis en évidence la faible prévalence de mutations de résistance (MDR), inférieure au seuil fixé par l'OMS (5 %). La seconde étude a concerné des femmes enceintes recevant une prophylaxie par une simple dose de nevirapine dans le cadre d'une prévention de la transmission du VIH-1 de la mère à l'enfant. Nous avons observé un taux d'incidence des MDR aux inhibiteurs non nucléosidique de la transcriptase inverse variant de 18,8 % à 31,3 %, selon la période de l'échantillonnage. Globalement les mutations du CRF01_AE cambodgien étaient similaires à celles des sous-types A, D et CRF02_AG. Une dernière étude a porté sur des patients adultes recevant une HAART et présentant un échec thérapeutique. Les MDR observées étaient celles attendues pour le sous-type B. Cependant, d'autres substitutions ont été détectées chez ces patients en échec qui devront être confirmées sur de plus larges séries. Ces données pourraient à terme plaider pour une réactualisation artielle des algorithmesGenetic variability of HIV-1 has multiple implications, especially in regard to antiretroviral (ARV) drug resistance. Mutant resistances to ARVs are well characterized for B subtype but new data are needed for non-B subtypes. This research project investigated CRF01_AE in Cambodia. A first study has characterized viral isolates from adult patients naive to ARVs. It showed a large predominance of CRF01_AE (95,5 %), and a low prevalence of drug resistance mutations (DRM), lower than World Health Organization's 5 % threshold. A second study involved pregnant women who received nevirapine single dose prophylaxis for prevention of mother-to-child HIV-1 transmission. We observed incidence rates of DRM to nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors of 18,8 % to 31,3 % according to the sampling time. Cambodian CRF01_AE mutations are generally similar to those observed in A, D and CRF02_AG subtypes. A last study involved adult patients in therapy failure under HAART. The DRM observed were those expected for the B subtype. Other substitutions were also detected in these patients but should be confirmed on larger samples. These data could lead to the partial update of algorithms
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Michaud, Mickaël. "Modulation du phénotype de multichimiorésistance des cancers : identification de cibles potentielles et développement de nouveaux outils génothérapeutiques". Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10017.
Abstract (sommario):
La chimiorésistance des cancers est une cause majeure d’échec des chimiothérapies et résulte du phénotype de multichimiorésistance (MDR). Il est dû notamment à la surexpression du gène MDR1 produisant la glycoprotéine-P (P-gp) qui expulse les médicaments hors de la cellule. Nous avons montré l’existence d’une forme dimérique de la P-gp, abondante dans les régions membranaires riches en cholestérol, dont la formation dépend de la glycosylation de la P-gp. Nous avons pu moduler in vitro le phénotype MDR en diminuant la production de transporteurs ABC (P-gp, MRP1, BCRP) et des protéines MVP et LRP130 par interférence par ARN. Cet outil a été adapté aux lignées MDR difficilement transfectables grâce à des vecteurs lentiviraux, et a suggéré un rôle nouveau de la LRP130 dans l’apoptose des cellules MDR, complémentaire de son activité trans-activatrice de MDR1. Ces travaux ouvrent de nouvelles perspectives d’étude et proposent des solutions originales dans la chimiothérapie des cancers MDRThe chemoresistance of cancers is a major cause of failure of chemotherapy. It results from the multidrug resistance phenotype (MDR), due in particular to the overexpression of the MDR1 gene. MDR1 produces P-glycoprotein (P-gp) that ejects drugs out of the cell. We showed the existence of P-gp dimers, particularly in cholesterol-enriched membranes, the formation of which depends on P-gp glycosylation. We could modulate the MDR phenotype in vitro by decreasing the production of ABC transporters (P-gp, MRP1, BCRP) and other proteins (MVP and LRP130) by using RNA interference. Lentiviral vectors carrying modulator siRNAs allowed us to transfect MDR cell lines that were hardly transfectable by other means. With this tool we could evidence a new role of LRP130 in the apoptosis of MDR cells that is complementary of its MDR1 trans-activating activity. This work opens new prospects and proposes original solutions in the chemotherapy of MDR cancers
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Jebahi, Abdelghani. "Recherche d'outils d'inhibition de la protéine anti-apoptotique Mcl-1 pour la sensibilisation des cancers de l'ovaire à la molécule BH3-mimétique ABT-737". Caen, 2015. http://www.theses.fr/2015CAEN4014.
Abstract (sommario):
La survie des cancers de l’ovaire dépend des protéines anti-apoptotiques Bcl-xL et Mcl-1. L’inhibition de ces cibles a un potentiel clinique considérable. L’ABT-737 (puissant inhibiteur de Bcl-xL) et son analogue le Navitoclax sont des candidats prometteurs, mais l’état d’expression de Mcl-1 est un déterminant essentiel de leur efficacité. L’inhibition pharmacologique de Mcl-1 représente donc un défi majeur pour le succès clinique du Navitoclax. Nous avons abordé cette problématique de deux façons : par l’inhibition des voies de signalisation contrôlant Mcl-1, et par la recherche d’inhibiteurs directs issus du criblage de la Chimiothèque Nationale Essentielle. Nos travaux sur le BEZ235, double inhibiteur de PI3K et de mTOR, montrent que cette approche inhibe partiellement l’expression de Mcl-1 et induit celle de Puma dans les deux lignées tumorales testées, mais induit BIM dans une seule des deux. Ils montrent également que le BEZ235 sensibilise ces cellules à l’ABT-737 à condition que l’expression de BIM soit induite. Dans les lignées exprimant faiblement BIM après exposition au BEZ235, l’inhibition de ERK1/2 permet de restaurer son expression et de les sensibiliser à l’ABT-737. Nous avons également cherché à identifier des inhibiteurs pharmacologiques directs de Mcl-1, soit au sein d’une famille d’analogues de la molécule MIM1 (4 molécules plus actives) soit parmi les 640 composés de la Chimiothèque Nationale Essentielle. À cet effet, nous avons développé un test spécifique et sélectionné 12 nouveaux inhibiteurs potentiels de Mcl-1. Ces travaux ouvrent d’intéressantes perspectives à l’inhibition de Mcl-1 pour l’amélioration de la prise en charge des cancers de l’ovaireOvarian cancers are addicted to Bcl-xL and Mcl-1 anti-apoptotic proteins. Efficient inhibition of these targets is an attractive strategy for the therapeutic management of such disease. Navitoclax, an orally bioavailable analogue of the potent Bcl-xL inhibitor ABT-737, is a promising drug candidate. However, Mcl-1 has been widely described as a key resistance factor to ABT-737. Mcl-1 inhibition thus constitutes a major challenge for the clinical success of Navitoclax. We have addressed this issue with two strategies: inhibiting signaling pathways controlling Mcl-1 expression, and looking for new specific inhibitors by screening a representative sample of the French National Chemical Library (CNE, 640 compounds), selected according to diversity criteria. BEZ235, a dual inhibitor of PI3K/Akt/mTOR pathway, strongly repressed Mcl-1 expression and induced Puma expression in both ovarian carcinoma cell lines tested while differentially modulating BIM. Interestingly, BEZ235 efficiently sensitized ovarian carcinoma cells to ABT-737, provided that BIM expression was induced. Moreover, inhibiting the ERK1/2 pathway restored BIM expression and sensitized low BIM-expressing cancer cells to the BEZ235/ABT-737 treatment. Otherwise, we identified new potential specific Mcl-1 inhibitors. Four small molecules were produced by structural optimization of MIM1, a recently discovered specific Mcl-1 inhibitor. We have also developed a specific functional screening assay and selected 12 hits from « Essential Compound National Library ». These results open interesting perspectives for Mcl-1 targeting for future improvement of the clinical management of ovarian cancers
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Mazaheri, Mahta. "Molecular basis of anti-hormonal treatment and resistance in breast cancer". Toulouse 3, 2009. http://thesesups.ups-tlse.fr/610/.
Abstract (sommario):
Le cancer du sein est le plus fréquent cancer chez les femmes dans le monde. Environ 70% des tumeurs mammaires expriment le récepteur des oestrogènes alpha (REa) et sont considérées comme hormono-sensibles. La thérapie hormonale a longtemps été le traitement de choix. Toutefois, les effets agonistes sur le REa et le développement de la résistance des thérapies actuels, tels que le tamoxifène nécessitent le développement de nouveaux traitements qui agissent par des mécanismes distincts. L'objectif de notre étude était de concevoir des outils qui peuvent aider à comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans la modulation ligand-dépendante ou dans la dégradation du REa. Nous avons choisi quelques anti-oestrogènes avec différentes structures et nous avons comparé leurs effets sur: 1. La dégradation du REa. 2. La localisation intra-cellulaire du REa. 3. La régulation de la transcription des gènes cibles du REa 4. La régulation de la transcription dans les mutants de REa. Grace à notre appproche mécanistique, nous avons pu classer ces anti-estrogènes en trois groupes sur la base de leur fonction : SERM, SERD et un nouveau groupe EM. Les SERM (selective estrogen receptor modulator) stabilisent le REa, induisent une re-localisation du REa dans le noyau, augmentent l'activité transcriptionnelle de mutants qui affectent le recrutement de cofacteurs et qui altèrent la liaison avec la chaîne latérale de l'anti-œstrogène et, enfin, manquent de pouvoir d'inhibition de l'expression basale de gènes endogènes. Les SERD (selective estrogen receptor disruptor) induisent une dégradation protéasome dépendante du REa dans le noyau en formation des foyers nucléaires qui colocalisent avec le proteasome, et inhibent l'expression basale du gène endogène du récepteur de la progestérone (PGR). Enfin, EM652 est un composé qui affecte le devenir du RE comme les SERM mais qui a un effet inhibiteur sur l'expression basale du gene endogene PGR. Cette approche peut être utilisée pour cribler de nouveaux anti-oestrogènesBreast cancer is the most common type of malignancy among women in the world. Approximately 70% of breast tumours express the estrogen receptor alpha (ERa) and are considered hormone-responsive. Endocrine therapies have long been the treatment of choice. However, the estrogen- like agonist effect and development of resistance of the available selective estrogen receptor modulator such as tamoxifen require developing new treatments that act through different mechanisms. The objective of our study is to design tools that can help to understand the molecular mechanisms involved in ligand-dependent modulation or degradation of ERa. We selected a set of anti-estrogens with different structures and compared their effect on: 1. ERa degradation. 2. Intra-cellular localisation of ERa. 3. Regulation of transcription of ERa- endogenous target genes. 4. Regulation of transcription in the mutants of ERa. Using this mechanistic study we could classify the tested anti-estrogens into three groups based on their function: SERM, SERD and a new group for EM652. SERM (selective estrogen receptor modulator) include compounds such as OH-tamoxifen and RU39411, that stabilise ERa, that re-localize ERa into the nucleus upon binding, that increase transcriptional activity in mutants affecting the recruitment of cofactors or the binding of their side chain and that lack inhibitory capacities of the basal expression of endogenous genes. SERD (selective estrogen receptor modulator) include compounds such as ICI182580 or RU58668, that induce nuclear proteasome-dependent degradation ERalpha which occur in large nuclear foci that colocalize with the proteasome and that inhibit basal gene expression of the endogenous progesterone receptor gene (PGR). Finally, EM652 was found to affect ER degradation and localisation similarly to SERM but inhibited basal gene expression of the endogenous PGR
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Joha, Mohamad Sami. "Mécanismes de résistance aux inhibiteurs de tyrosine kinase sur le modèle de leucémie myéloïde chronique". Lille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009LIL2S042.
Abstract (sommario):
La leucémie myéloïde chronique (LMC) est une transformation maligne d’une cellule souche hématopoïétique, caractérisée par une anomalie génétique acquise : le chromosome Philadelphie (Ph), résultant de la translocation réciproque t(9 ;22)(q34 ;q11), et son équivalent moléculaire, l’oncogène BCR-ABL. La protéine BCR-ABL présente une activité tyrosine kinase constitutive qui agit sur les voies de survie et de prolifération. La progression de la maladie vers la phase accélérée puis blastique s’accompagne d’anomalies génétiques additionnelles marqueurs d’une instabilité génomique croissante. La responsabilité de BCR-ABL dans la genèse de cette instabilité génomique est fortement suspectée. Dérivé de 2-phénylaminopyrimidines, l’Imatinib inhibe l’activité tyrosine kinase de BCR-ABL ainsi que la prolifération de lignées cellulaires BCR-ABL positives et induit leur apoptose. Les échecs du traitement par l’Imatinib sont dus à des mécanismes de résistance qui ne sont pas tous entièrement caractérisés. Des nouveaux inhibiteurs de tyrosine kinases (ITKs) ou des associations avec l’Imatinib ont été développés afin de la surmonter. Cependant, une résistance croisée et multiple demeure difficile à traiter et nécessite une meilleure compréhension des mécanismes de résistance afin d’éradiquer la maladie dans un avenir proche. Les travaux réalisés au cours de cette thèse ont montré que la présence de microremaniements génétiques (traduisant une instabilité) au sein de progéniteurs leucémiques CD34+ de patients traités par l’Imatinib corrélait avec la perte de réponse à l’Imatinib chez les patients diagnostiqués en phase chronique, suggérant que la résistance à l’Imatinib pourrait être corrélée aux altérations génétiques survenant précocement dans la physiopathologie de la maladie. 113 gènes affectés ont été détectés dont certains sont localisés dans des régions connues pour être hypervariables (CNV) suggérant un rôle de ces régions dans le développement de la LMC ou la résistance à l’Imatinib. Nous avons mis en évidence la présence d’une anomalie acquise récurrente dans telle région localisée en 8p23. 1 qui groupe les gènes de la famille de la Défensine B. Ce microremaniement n’est pas lié à la résistance à ii l’Imatinib car il est retrouvé dans les populations cellulaires CD34+ Ph+ et Ph-, il peut donc être considéré comme un marqueur de l'instabilité d’une sous-population cellulaire clonale de CD34+ présentant une grande prédisposition à acquérir des altérations génétiques additionnelles, comme la fusion BCR-ABL. Nos études montrent que des altérations secondaires pourraient être le support d’une résistance à l’Imatinib. La résistance à l’Imatinib peut alors être liée à la dérégulation des voies de signalisation en amont ou en aval de BCR-ABL, affectant ainsi la prolifération, la survie, la différenciation et l’intégrité du génome. Il semble donc que le traitement par l’Imatinib seul ne soit pas suffisant pour éradiquer la maladie. Pour cette raison, de nouvelles molécules à associer avec l’Imatinib sont actuellement en cours d’évaluation. Parmi ces associations, les inhibiteurs de la voie Ras ont montré une certaine efficacité dans la restauration de l’activité proapoptotique de l’Imatinib. Il était donc intéressant de chercher une cible thérapeutique régulant négativement cette voie afin de surmonter cette résistance. GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper) inhibe la voie Ras/Raf par une interaction directe. Il inhibe également la voie NFκB dont certains antagonistes sont capables de surmonter la résistance à l’Imatinib. Nos résultats montrent, pour la première fois, que l’expression de GILZ est diminuée dans des lignées humaines ou murines exprimant BCR-ABL sensibles ou résistantes aux ITKs ainsi que dans les cellules dormantes résiduelles isolées d’un modèle cellulaire murin développé au laboratoire. L’expression forcée de GILZ dans ces lignées résistantes restaure la sensibilité à l’Imatinib. Nos résultats montrent que le mécanisme passe par une inhibition de la voie mTORC2/AktSer473. Elle est due à une interaction directe de GILZ avec mTORC2 permettant l’activation de FoxO3a et l’induction de l’expression de la protéine proapoptotique Bim. Dans ce système, GILZ augmente l’expression de Bim tandis qu’Imatinib, par ses effets "Off-target", diminue celle de Mcl-1 inversant ainsi le rapport des membres antiapoptotiques/proapoptotiques de la famille Bcl-2 et entrainant l’apoptose. Le traitement séquentiel par les glucocorticoïdes puis l’Imatinib induit l’apoptose de cellules souches de patients résistants par le même mécanisme, suggérant que la modulation de l’expression de GILZ pourrait iii représenter une nouvelle stratégie thérapeutique pour cibler les cellules leucémiques résistantes ou résiduelles. La régulation de la voie mTORC2/AktSer473 semble être d’une importance cruciale dans la survie des cellules BCR-ABL+, ainsi que dans la résistance aux ITKs. Parmi les gènes méthylés dans notre étude, on retrouve un gène impliqué dans la régulation de cette voie et qui code pour la phosphatase PHLPP (PH domain and Leucine rich repeat Protein Phosphatase) dont l’activité est de déphosphoryler la sérine 473 d’Akt favorisant son inactivation. Nos résultats montrent que la réexpression du variant 1 de cette phosphatase (PHLPP1) dans notre modèle murin de résistance restaure la sensibilité à l’Imatinib et que la répression de celui-ci n'est pas exclusivement due à l'activité tyrosine kinase de BCR-ABL, mais aussi à des modifications épigénétiques. Nos études ont permis d’identifier des gènes impliqués dans la résistance des LMC aux ITKs et de proposer de nouveaux traitements pour surmonter cette résistance en inhibant la voie AktSer473.
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Brotin, Emilie. "Chimiosensibilisation des cancers de l’ovaire par inhibition de l’expression de Bcl-xL : développement d’une stratégie ARN interférence". Caen, 2007. http://www.theses.fr/2007CAEN4069.
Abstract (sommario):
Dans les cancers de l’ovaire, l’expression de Bcl-xL apparaît strictement associée aux situations qui conduisent à l’échappement au traitement par le cisplatine, principale causes des échecs thérapeutiques, alors que sa répression est associée à la mort massive par apoptose. Nous avons évalué la capacité d’un protocole visant à entraver l’expression de Bcl-xL par utilisation d’un siARN spécifique à sensibiliser les cellules SKOV3 au cisplatine. Notre siARN (siXL1) provoque une disparition de l’ARNm et de la protéine Bcl-xL associée à une induction modérée de l’apoptose. Lorsque le siXL1 est combiné au cisplatine, une induction massive de la mort cellulaire survient (le cisplatine seul étant seulement cytostatique). Une stratégie multicible est également en cours de développement. Ce travail montre l’intérêt d’inhiber l’expression de Bcl-xL pour la chimiosensibilisation des cancers de l’ovaire. Nous avons donc étudié l’effet du siXL1 sur la survie de souris porteuses d’une carcinose péritonéale d’origine ovarienne humaine et montré que ce siARN permettait de sauver 50% des animaux, contrairement au cisplatine. L’administration de ce siXL1 diminue fortement l’expression de Bcl-xL dans les nodules tumoraux, de façon associée à une diminution de la prolifération. Nous avons accordé une attention particulière aux conditions d’administration et recherchons également un effet sur les cellules du stroma tumoral. Ces résultats brevetés en 2006, confirment l’intérêt de cibler les membres anti-apoptotiques de la famille Bcl-2 pour le traitement des cancers ovariens et sont en cours de validation précliniqueIn ovarian cancers, cisplatin exposure of sensitive cells has been associated with a down-regulation of Bcl-xL expression in conditions inducing massive apoptotic cell death, whereas recurrence (which is the major causes for therapeutic failure) was systematically observed when Bcl-xL expression was maintained. In order to impede Bcl-xL expression we developed a specific siRNA, and evaluated its ability to induce apoptotic cell death in response to cisplatin in the highly resistant cells SKOV3. Our siRNA (siXL1) led to the disappearance of both Bcl-xL mRNA and protein, associated with a low rate of apoptosis induction. When transfection was combined to cisplatin exposure, we observed a massive induction of cell death, whereas cisplatin alone was only transiently cytostatic. A multi-target strategy is also currently developed. This work emphasizes the interest of the inhibition of Bcl-xL expression as a chemosensitizing tool for the treatment of ovarian carcinoma. We thus investigated siXL1 effect on survival of SKOV3 tumour bearing mice. We showed that the administration of siXL1, allows a strong increase of survival rate, half of the mice being cured, in contrast to the inefficiency of cisplatin. The administration of siXL1 significantly decreased both Bcl-xL expression and proliferation in tumour nodes. We particularly investigated the importance of administration conditions, and currently research the effect of siXL1 on tumour stroma cells. These results, patented in 2006, confirm the interest to target the anti-apoptotic Bcl-2 family members for the treatment of ovarian carcinomas, and are currently under preclinical validation
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Jeannot, Victor. "Identification et vectorisation de combinaisons de traitements pour la thérapie des tumeurs pulmonaires résistantes aux inhibiteurs de tyrosine kinase de l'EGFR". Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015GREAV061/document.
Abstract (sommario):
Responsable d'environ 30000 décès/an en France, le cancer du poumon est un problème de santé publique majeur. Un des enjeux actuels est d'adapter le traitement du cancer du poumon pour proposer des thérapeutiques ciblées plus efficaces et moins agressives. Les inhibiteurs de l'activité tyrosine kinase du récepteur de l'EGF (EGFR-TKI, gefitinib et erlotinib) constituent un réel progrès pour le traitement des cancers du poumon. Cependant, des mécanismes de résistance ont été décrits et des traitements combinés de thérapies ciblées avec des EGFR-TKI pourraient permettre de surmonter les résistances dans les cancers du poumon.Dans ce contexte, nous avons étudié les mécanismes impliqués dans la résistance à ces traitements. Nous montrons que l'activation de la voie de signalisation PI3K/AKT joue un rôle majeur dans la résistance aux EGFR-TKI, en inhibant l'apoptose par des mécanismes dépendant de l'acétylation. Les histones déacétylases (HDACs) et les sirtuines interviennent dans ces mécanismes de résistance, en modulant l'activation de la voie PI3K/AKT et l'apoptose. Ainsi l'utilisation d'inhibiteurs des HDACs (HDACi) et des sirtuines permettent de restaurer la sensibilité aux EGFR-TKI. Ces résultats confirment l'intérêt thérapeutique de l'association EGFR-TKI/HDACi et montrent le potentiel thérapeutique d'associer des inhibiteurs de l'EGFR et de la voie PI3K/AKT pour contourner la résistance aux EGFR-TKI.Les molécules thérapeutiques doivent atteindre spécifiquement le site tumoral, nécessitant parfois de les protéger contre leur dégradation, de réduire leurs effets indésirables, et de contrôler leur libération dans le temps et l'espace, à l'aide de transporteurs. Ainsi dans la deuxième partie de cette thèse, nous avons évalué les capacités de ciblage des tumeurs pulmonaires de nanoparticules à base de copolymère amphiphile, contenant une partie polysaccharidique hydrophile (le hyaluronane) et une partie polypeptidique hydrophobe (le poly(γ‐benzyl L‐glutamate, PBLG). Nos travaux mettent en évidence la capacité de ciblage tumoral de ces nanoparticules injectées par voie intraveineuse, ouvrant ainsi de nouvelles perspectives thérapeutiques. Notre objectif est de charger les combinaisons de traitements EGFR-TKI/HDACi que nous avons identifiées dans ces vecteurs, afin de traiter les tumeurs pulmonaires résistantes aux EGFR-TKIResponsible of 30000 deaths each year in France, lung cancer is a major public health problem. One of the current challenges is to adapt the treatment of lung cancer to offer more effective and less aggressive targeted therapies. EGFR tyrosine kinase inhibitors (EGFR-TKI, gefitinib and erlotinib) represent a real progress in lung cancer therapy. However resistance mechanisms have been described and combination of targeted therapy with EGFR-TKI could overcome resistance in lung cancer.In this context, we studied mechanisms involved in resistance to EGFR-TKI. We show that PI3K/AKT activation is a major pathway leading to EGFR-TKI resistance leading to apoptosis inhibition through acetylation-dependent mechanisms. Histone deacetylase (HADCs) and sirtuin are involved in these mechanisms and modulate PI3K/AKT activation and apoptosis. The use of HDACs inhibitors (HDACi) and sirtuins inhibitors thus restores the sensitivity to EGFR-TKI. Altogether these results confirm the therapeutic effect of the EGFR-TKI/HDACi combination and show the therapeutic potential of the association of EGFR and PI3K/AKT inhibitors to overcome EGFR-TKI resistance.Therapeutic molecules must specifically reach the tumor site, sometimes requiring to protect them against degradation, to reduce their side effects, and to control their release in time and space, using transporters. In the second part of this thesis, we have thus evaluated the lung tumors targeting capabilities of amphiphilic copolymer-based nanoparticles, containing an hydrophilic polysaccharidic block (hyaluronan) and an hydrophobic polypeptidic block (the poly(γ‐benzyl L‐glutamate PBLG). Our work highlights the tumor targeting capability of these nanoparticles injected intravenously, offering new lung cancer therapy perspectives. Our aim is to load the drugs combination (EGFR-TKI/HDACi) in these vectors, to treat the lung tumors resistant to EGFR-TKI
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Attaoua, Chaker. "Etude des mécanismes moléculaires de résistance différentielle du mélanome malin aux vincalcaloïdes". Thesis, Montpellier 1, 2013. http://www.theses.fr/2013MON13505.
Abstract (sommario):
Le mélanome malin (MM) est un cancer très réfractaire aux thérapies anticancéreuses, dont les vincalcaloïdes (VAs). Afin d'étudier le rôle de la GSTM1 (glutathion S-transférase 1) et la MRP1 (multidrug resistance protein 1) dans la résistance acquise du MM aux VAs, nous avons établi 4 modèles cellulaires de résistance à la vincristine (CAL1R-VCR), à la vindésine (CAL1R-VDS), à la vinorelbine (CAL1R-VRB) et à la vinflunine (CAL1R-VFL), par exposition continue de cellules du MM (CAL1-wt), pendant un an, à ces anticancéreux. L'expression d'ne GSTM1 fonctionnelle est spécifiquement observée (RT-PCR, western blot, activité GST totale) dans les cellules résistantes. Le curcumin (inhibiteur de GSTM1), la BSO (inhibiteur de synthèse de glutathion) et le MK571 (inhibiteur de MRP1), réduisent considérablement le résistance acquise à la VCR et à la VDS mais pas à la VRB ou à la VFL. Toutefois, tous ces VAs réduisent spécifiquement l'activité GSTM1. Ces données montrent l'implication différentielle de GSTM1 et MRP1 dans la résistance aux VAs. Pour déterminer les mécanismes moléculaires de cette chimiorésistance, nous avons réalisé une étude pangénomique (biopuces Affymetrix HG-U133 Plus 2.00) sur les lignées CAL1 (wt et R). Le regroupement hiérarchique (par Cluster et TreeView) des données des puces a révélé une similarité entre les profils d'expression génique de CAL1R-VRB et CAL1-wt mais aussi entre ceux de CAL1R-VCR et CAL1R-VDS. L'analyse bioinformatique (par IPA) des transcrits les plus différemment exprimés entre les lignées cellulaires, a mis en évidence 6 réseaux géniques connus pour leur rôle dans la chimiorésistance tumorale. Le programme FatiGO a révélé 3 termes biologiques sur-représentés (> 60%) dans CAL1R (ribosome, filaments intermédiaires du cytosquelette, récepteurs olfactifs) tandis que l'étude fonctionnelle (invalidation génique par siRNA, test de viabilité) de GPR143, KIT et SLC45A2 (gènes interagissant avec NF-κB et CCND1 (facteurs de la chimiorésistance tumorale), très exprimés dans CAL1-wt et muets dans CAL1R) a montré la faible tendance des deux premiers à être impliqués dans la résistance aux VAsMalignant melanoma (MM) is a very refractory tumor to anticancer therapies, including vinca alkaloïds (VAs). To investigate the role of GSTM1 (glutathione S-transferase μ1) and MRP1 (multidrug resistance protein 1) in MM acquired resistance to VAs, we established 4 cellular models of resistance to vincristine (CAL1R-VCR), to vindesine (CAL1R-VDS), to vinorelbine (CAL1R-VRB) and to vinflunine (CAL1R-VFL), by continuous exposure of MM cells (CAL1-wt), for one year, to these anticancer agents. The expression of a functional GSTM1 is specifically observed (RT-PCR, western blot, total GST activity) in resistant cells. Curcumin (GSTM1 inhibitor), BSO (glutathione synthesis inhibitor) and MK571 (MRP1 inhibitor), considerably reduce the acquired resistance to VCR and VDS but not that to VRB or VFL. However, all these VAs specifically reduce GSTM1 activity. These data show the differential involvement of GSTM1 and MRP1 in resistance to VAs. To determine the molecular mechanisms of this chemoresistance, we performed a pangenomic study (Affymetrix HG-U133 Plus 2.00 microarrays) on the CAL1 lines (wt and R). The hierarchical clustering (by Cluster and TreeView) of array data revealed a similarity between the gene expression profiles of CAL1R-VRB and CAL1-wt, but also between those of CAL1R-VCR and CAL1R-VDS. The bioinformatic analysis (by IPA) of the most differentially expressed transcripts between cell lines, highlighted 6 gene networks known for their role in tumor chemoresistance. FatiGO program revealed 3 biological terms overrepresented (>60%) in CAL1R (ribosome, intermediate filaments of cytoskeleton, olfactory receptors), while functional study (gene invalidation by siRNA, viability test) of GPR143, KIT and SLC45A2 (genes interacting with NF-kB and CCND1 (tumor chemoresistance factors), highly expressed in CAL1-wt and mute in CAL1R) showed the weak trend of the two formers to be involved in resistance to VAs
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Pastor, Marie. "Étude du potentiel des pFAR4, miniplasmides dépourvus de gène de résistance à un antibiotique, comme vecteurs pour la thérapie génique". Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCB043.
Abstract (sommario):
L’un des principaux défis de la thérapie génique est d’identifier un vecteur sûr capable d’assurer un transfert efficace et une expression soutenue d’un gène d’intérêt thérapeutique dans les cellules cibles. L’émergence de vecteurs plasmidiques de nouvelles générations a permis d’atteindre ces objectifs et de considérer la thérapie génique non virale comme une alternative prometteuse aux vecteurs viraux pour le traitement de maladies génétiques ou acquises. Appartenant à ces nouvelles générations, les dérivés du vecteur pFAR4 sont des miniplasmides dépourvus de gène de résistance à un antibiotique. Leur propagation dans les cellules d’Escherichia coli est basée sur la suppression d’une mutation non-sens de type ambre introduite dans un gène essentiel de la souche productrice, permettant ainsi d’éliminer les risques associés à l’utilisation de gène de résistance à un antibiotique tout en diminuant la taille du vecteur. Le but de cette thèse est d’étudier le potentiel de ces vecteurs dans deux contextes de thérapie génique non virale : Dans une première approche, le potentiel du vecteur pFAR4 a été évalué pour l’expression d’un gène thérapeutique dans le foie de souris. Pour ce faire, un dérivé de ce vecteur exprimant le gène Sgsh à partir d’un promoteur spécifique des hépatocytes et codant la protéine sulfamidase, protéine défectueuse chez les patients souffrant de la maladie de Sanfilippo de type A, a été administré par injection hydrodynamique à des souris. Nous avons montré que le vecteur pFAR4 promeut dans le foie une expression élevée et soutenue de la sulfamidase, qui décline rapidement lorsque le gène Sgsh est administré par un vecteur contenant un gène de résistance à la kanamycine. Dans le cadre de cette étude, il a été établi que le profil d’expression obtenu avec le vecteur pFAR4 n’est pas lié à son insertion dans le génome des hépatocytes mais résulte, de par sa taille réduite, d’une protection contre les phénomènes d’extinction de transgène couramment observés in vivo avec les vecteurs conventionnels. Dans une seconde approche, le vecteur pFAR4 a été combiné à la technologie Sleeping Beauty (SB), dont l’un des constituants majeurs est la transposase hyperactive SB100X qui promeut la transposition d’un transgène, en l’excisant du plasmide qui le porte et en l’insérant dans le génome des cellules hôtes. Cette combinaison a été étudiée in vitro dans des cellules HeLa, en utilisant un transposon contenant soit le gène de résistance à la néomycine soit le gène codant la protéine fluorescente Vénus. Nous avons ainsi montré que le plasmide pFAR4 constituait un vecteur efficace pour les composants du système SB et que la combinaison pFAR4/SB conduisait à un taux de transgénèse augmenté par rapport à une association avec des plasmides conventionnels. Cette efficacité élevée résulte d’un niveau de transfection et d’un taux d’excision augmentés, tous deux favorisés par la taille réduite du plasmide. La combinaison pFAR4/SB devrait prochainement être utilisée pour transférer le gène codant le facteur anti-angiogénique PEDF (Pigment Epithelium-Derived Factor) à des cellules primaires de l’épithélium pigmentaire de la rétine ou de l’iris dans deux essais cliniques (Phase I/II) de thérapie génique ex vivo pour le traitement de la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA)One of the main challenges in gene therapy is to identify safe vectors that promote an efficient gene delivery and a sustained therapeutic transgene expression level in targeted cells. The development of novel plasmid vectors allowed to reach these objectives and to consider non-viral gene therapy approaches as attractive alternatives to treat genetic and acquired disorders. The pFAR4 vector is a novel antibiotic-free mini-plasmid. In Escherichia coli, its propagation is based on the suppression of an amber nonsense mutation introduced into an essential gene, thus eliminating safety concerns classically attributed to antibiotic resistance markers present on conventional plasmid DNA vectors and allowing a reduction in plasmid size. The aim of this work was to investigate the potential of pFAR4 as a gene vector in two different non-viral gene therapy approaches. In a first approach, the potential of the pFAR4 vector was assessed for the expression of a therapeutic gene in mouse liver. To this end, a pFAR4 derivative expressing the Sgsh gene from a liver-specific promoter and coding the sulfamidase, an enzyme deficient in patients suffering from the Sanfilippo A disease, was tail vein hydrodynamically injected into mouse liver. We showed that the pFAR4 derivative promoted a high and prolonged sulfamidase expression which rapidly declined when the same expression cassette was delivered by a conventional plasmid containing a kanamycin resistance marker. It was established that the superior expression profile obtained with the pFAR4 derivative did not result from its integration in host genome but seemed to benefit from protection against transcriptional silencing. In a second approach, the pFAR4 vector was combined to the Sleeping Beauty transposon system that mediates transgene integration into host genomes, after its excision from a plasmid donor by the hyperactive SB100X transposase, in order to obtain a long-term expression in dividing cells. This combination was studied in vitro, delivering either the neomycin resistance gene or the fluorescent Venus protein-encoding gene into HeLa cells. We showed that the combination pFAR4/SB led to an increased transgenesis rate in comparison to the association of SB with conventional plasmids. The pFAR4/SB combination seemed to benefit from an elevated transfection efficiency and a higher excision rate, resulting from the reduced size of the pFAR4 vector. The two technologies should be soon used for the delivery of the anti-angiogenic pigment epithelium-derived factor (PEDF) gene into autologous primary pigment epithelial cells, in the context of two PhaseI/II clinical trials based on an ex vivo gene therapeutic approach for the treatment of neovascular age-related macular degeneration (nAMD)
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Rebucci, Magali. "Mécanismes de résistance au cetuximab et influence des associations de traitement dans des lignées cellulaires de cancers de voies aérodigestives supérieures". Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00576444.
Abstract (sommario):
Dans le traitement des cancers des voies aérodigestives supérieures (VADS), une approche biologique par des anti-EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) comme le cetuximab (Erbitux®) a récemment été proposée. Le cetuximab est un anticorps monoclonal chimérique qui se lie spécifiquement au domaine extracellulaire de l'EGFR, régulateur central de la prolifération et de la différenciation dans les cancers. Par cette liaison, le cetuximab entre en compétition avec les ligands du récepteur et empêche son activation, induit son internalisation et bloque la transduction du signal vers les voies de signalisation en aval. Même si cette approche thérapeutique est rationnelle puisque l'EGFR est surexprimé dans la plupart des cancers et notamment dans les cancers des VADS, certains types de cancers présentent une résistance à cet anticorps. Parmi les molécules qui ciblent EGFR il existe également des inhibiteurs de l'activité tyrosine kinase intracellulaire de l'EGFR comme le gefitinib (Iressa®), mais ce dernier n'est actuellement pas prescrit dans le traitement des cancers des VADS.Le but de notre travail a été d'étudier les mécanismes de résistance au cetuximab dans des lignées cellulaires de cancers des VADS puis de proposer des associations thérapeutiques pouvant pallier à cette résistance.Nous avons choisi deux lignées cellulaires de cancers des VADS, CAL33 et SQ20B en comparaison à la lignée épidermoïde A431 sur exprimant EGFR et sensible au cetuximab. Nous avons pu mettre en évidence que CAL33 et SQ20B étaient résistantes au cetuximab mais de manière surprenante sensibles au gefitinib. Nous avons montré que l'absence d'inhibition de phosphorylation d'AKT et qu'une altération de l'internalisation de l'EGFR par le cetuximab étaient responsables en partie de la résistance au cetuximab dans ces modèles cellulaires.Afin de pallier à cette résistance nous avons alors étudié les conséquences biologiques de l'association du cetuximab avec (i) des inhibiteurs de la voie PI3K/AKT par différentes approches et avec (ii) les radiations ionisantes. Dans un premier temps, nous avons étudié l'influence de l'inhibition de la voie AKT par un inhibiteur de PI3K ou un siRNA ciblant AKT. Nous avons démontré que l'inhibition de la phosphorylation d'AKT par l'inhibiteur LY294002 sensibilisait au cetuximab la lignée CAL33 porteuse d'une mutation activatrice du gène PIK3CA codant pour la sous-unité catalytique p110 de la protéine PI3K. Nous avons montré que la persistance de l'activation d'AKT dans la lignée CAL33 prévenait l'effet anti tumoral du cetuximab, tandis que la résistance au cetuximab dans la lignée SQ20B ne semblait pas dépendante de la voie AKT.Une association de traitement du cetuximab avec les radiations ionisantes est déjà proposée en clinique dans le traitement des cancers des VADS. Nous avons donc dans un second temps déterminé les effets de cette association de traitement dans les lignées SQ20B et CAL33 respectivement sauvage et mutée dans la voie de signalisation AKT et dans la lignée contrôle A431. Nous avons montré que l'association du cetuximab aux radiations ionisantes potentialisait l'effet du cetuximab sur l'inhibition de prolifération de la lignée A431 alors que nous n'avons observé aucune potentialisation de l'effet du cetuximab sur la prolifération dans les lignées résistantes CAL33 et SQ20B. Dans ce travail, nous montrons que la voie AKT apparaît donc comme un élément central dans la réponse au cetuximab dans la lignée CAL33 et que l'association du cetuximab avec un inhibiteur de la voie PI3K/AKT pourrait être une bonne option thérapeutique dans le traitement des cancers des VADS mutés pour PIK3CA.
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Cicero, Julien. "TrkA dans les métastases cérébrales des cancers du sein triple négatifs". Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2022-....), 2023. http://www.theses.fr/2023ULILS031.
Abstract (sommario):
Près de 90 % des décès chez les patients atteints d'un cancer du sein sont imputables à la formation de métastases. Le cancer du sein triple négatif (TN) se distingue par sa nature agressive et sa forte propension à métastaser. Parmi les différents sites touchés, le développement de métastases cérébrales présente le pronostic le plus sombre et altère considérablement la qualité de vie des patients. Les mécanismes qui sous-tendent la progression des métastases cérébrales dans le cancer du sein triple négatifne sont à ce jour décrits que de façon parcellaire. Pour tenter de mieux les comprendre, ce travail vise à étudier le comportement des cellules du cancer du sein au cours du processus de dissémination vers le cerveau. Pour cela il s’est agit de développer différents modèles expérimentaux complémentaires : Un modèle in vitro de barrière hémato-encéphalique humaine (BHE), de matrice extracellulaire organotypique3D in vitro, des co-cultures ex vivo de tranches de cerveau de souris et des expériences de xénogreffes in vivo. Dans ces travaux, nous démontrons l'implication de TrkA et de ses co-récepteurs (e.g. EphA2) dans le développement des métastases cérébrales.Nous avons tout d’abord identifié le complexe de récepteur TrkA/EphA2 comme médiateur de la transmigration de la BHE induite par le proNGF. Par ailleurs, nos résultats ont également démontré que l'inhibition combinée de TrkA et d'EphA2 réduirait de manière significative les métastases cérébrales dans un modèle pré-clinique de cancer du sein.Ces résultats remettent en question la compréhension actuelle des mécanismes de métastases cérébrales et mettent en lumière le rôle du proNGF en tant que facteur clé du tropisme cérébrale du cancer du sein TNNearly 90% of deaths in breast cancer patients are due to metastasis. Triple-negative(TN) breast cancer is characterized by its aggressive nature and high propensity to metastasize. Among the various sites of metastasis, the development of brain metastasis is associated with the worst prognosis, with a greater impact on patients'quality of life. The mechanisms underlying the progression of brain metastases in triplenegativebreast cancer are incompletely understood. To address this gap, we have used several experimental models to study the behavior of breast cancer cells during the process of dissemination to the brain. These models include an in vitro human blood-brain barrier (BBB) model, in vitro 3D organotypic extracellular matrix, ex vivo co-cultures of mouse brain slices, and in vivo xenograft experiments. By recapitulating the final key steps of brain metastasis in these models, we sought to better understand the underlying molecular mechanisms. In this work, we demonstrate the involvement of TrkA and its co-receptors (e.g. EphA2) in the development of brain metastases. First, we identified the TrkA/EphA2 receptor complex as a mediator of proNGF-induced BBB transmigration. Furthermore, our results showed that combined inhibition of TrkA and EphA2 significantly reduced brain metastasis in a preclinical breast cancer model. These results challenge the current understanding of the mechanisms of brain metastasis and highlight the role of proNGF as a key factor in the brain tropism of metastatic TN breast cancer
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Allagui, Ferdaous. "Utilisation du vaccin de la rougeole dans le traitement des cancers résistants aux traitements usuels : modèle du mélanome". Thesis, Nantes, 2017. http://www.theses.fr/2017NANT1029/document.
Abstract (sommario):
Le mélanome métastatique reste à l’heure actuelle une pathologie agressive avec une survie moyenne de 13 mois après le diagnostic quelque soit le traitement. C’est pourquoi, la virothérapie anti-tumorale apparait comme une stratégie thérapeutique alternative. Le virus atténué de la rougeole (MV) est un candidat intéressant dans le cadre de cette stratégie. Mes travaux de thèse explorent l'utilisation du virus MV comme nouvelle stratégie de traitement du mélanome. Dans un premier temps, j’ai analysé l'effet oncolytique du MV in vitro contre un panel de lignées cellulaires de mélanome établies dans notre laboratoire. Ces lignées cellulaires présentent des niveaux variables de sensibilité à l'infection par le MV. Nous avons montré in vitro que cette sensibilité à l’infection ne peut pas être corrélée à l’expression du récepteur d’entrée spécifique du MV dans les cellules. In vivo, dans des modèles de xénogreffes de tumeurs humaines chez des souris immunodéficientes, le traitement par le MV induit des régressions tumorales importantes uniquement pour les lignées cellulaires sensibles à l’infection. Dans un second temps, nous nous sommes intéressés à l’étude de la réponse anti-virale IFN de type I en réponse au MV, afin d’expliquer ces différences de sensibilité. Nous avons ainsi démontré que le traitement de cellules sensibles au MV par des IFN de type I permet de bloquer leur infection. A l’inverse, l’utilisation du Ruxolitinib, un inhibiteur de la signalisation de la voie IFN de type I, sur les lignées résistantes, permet de rendre celles-ci sensibles à l’infection. Ces résultats confirment le potentiel oncolytique du MV contre les cellules tumorales de mélanome et suggèrent aussi que la sensibilité des cellules de mélanome au virus MV est dépendante à la fois du niveau d’expression de CD46 et des défauts de la voie IFN de type IMetastatic melanoma represents the most aggressive form of skin cancer with a median survival around 13 months. Thus, antitumor virotherapy appears as a potential therapeutic alternative. Live-attenuated measles virus (MV) is a good candidate for this strategy. In this work, we explored the use of MV as a new melanoma treatment strategy. In a first part, we analyzed the oncolytic effect of MV against a panel of human melanoma cell lines established in our laboratory. These cell lines exhibited varying levels of sensitivity to MV infection that cannot be fully explained by their level of expression of CD46 receptor at their surface. In melanoma xenograft mouse models, MV treatment induced important tumor regressions for sensitive cell lines but other were completely insensitive resulting in rapid tumor growth. In a second study, we analyzed the type I IFN response in our panel of melanoma cells to explain these differences in sensitivity. We have therefore, demonstrated that treatment of sensitive cells to MV by type I IFN can block their infection, while the use of ruxolitinib, an inhibitor of type I IFN signaling, on the resistant cell lines, rendered them sensitive to MV. These results confirm oncolytic MV as a viable therapeutic option for malignant melanoma and also suggest that the sensitivity of these cells to MV is dependent on both the level of expression of CD46 and defects of the type I IFN pathway
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Figarol, Sarah. "Compréhension des étapes précoces de la résistance adaptative aux inhibiteurs de tyrosine kinase de l'EGFR dans les cancers bronchiques". Thesis, Toulouse 3, 2020. http://www.theses.fr/2020TOU30095.
Abstract (sommario):
Le cancer bronchique porteur d'une mutation activatrice de l'EGFR bénéficie du développement des inhibiteurs de tyrosine kinase de l'EGFR (EGFR-TKI). Cependant l'efficacité de ces thérapeutiques bien qu'élévée n'est que transitoire, ces thérapies se heurtent inévitablement à des phénomènes de résistance. Des études antérieures suggèrent que cette résistance pourrait provenir d'une population de cellules tolérantes (ou Drug-Tolerant Cells, DTC) qui, après un état de pseudo-dormance, développent de nouveaux mécanismes de résistance dont des mutations secondaires de l'EGFR, des amplifications de MET, etc.... Cet état de tolérance a été mis en évidence in vitro essentiellement sur une seule lignée cellulaire et reste assez peu caractérisé. L'objectif de ce travail de thèse a été d'élargir et d'approfondir l'étude des mécanismes de résistance à différentes lignées cellulaires tumorales bronchiques porteuses de mutations activatrices de l'EGFR traitées par des EGFR-TKIs de première (erlotinib) ou de dernière génération (osimertinib). Nos travaux montrent que la durée de la phase de tolérance et l'émergence de clones prolifératifs résistants aux EGFR-TKIs sont très hétérogènes entre les lignées étudiées mais aussi au sein d'une même lignée. En revanche la majorité des DTC ont une morphologie élargie associée à un remodelage du cytosquelette d'actine ainsi qu'à un état de pseudo-sénescence, qui semble prédisposer à la transition épithélio-mésenchymateuse (TEM) se developpant progressivement du stade DTC jusqu'au stade prolifératif, après la perte des caractéristiques de sénescence. Des analyses en RNAseq montrent que des signatures géniques liées à la contractilité cellulaire sont retrouvées au stade DTC dans les trois modèles cellulaires étudiés. Les travaux antérieurs du laboratoire ayant montré le rôle de la petite GTPase RhoB dans la régulation du cytosquelette d'actine et dans la résistance à l'erlotinib, nous avons investigué son rôle dans la tolérance aux EGFR TKIs. RhoB, contrairement à ses homologues RhoA et RhoC, est surexprimée et suractivée dans les DTC. De plus son inhibition par la C3 exoenzyme, toxine inhibant spécifiquement RhoA, RhoB et RhoC, permet l'éradication des DTC et prévient l'émergence de clones résistants. RhoB étant régulée par sa prénylation et notamment sa farnésylation, l'association d'un inhibiteur de farnésyltransférase (FTI) et d'un EGFR-TKI a été analysée et montre qu'elle prévient très efficacement l'émergence de clones prolifératifs. Ces résultats nous conduisent à proposer cette association comme nouvelle stratégie thérapeutique dans les cancers bronchiques porteurs de mutations activatrices de l'EGFRLung cancer with EGFR activating mutation benefits from the development of EGFR tyrosine kinase inhibitors (EGFR-TKI). However, the effectiveness of these therapies, although high, is only transitory, and patients inevitably develop resistance phenomena. Previous studies suggest that this resistance could arise from a population of tolerant cells (or Drug-Tolerant Cells, DTC) which, after a pseudo-dormant state, develop new resistance mechanisms including secondary EGFR mutations, MET amplifications, etc. This state of tolerance has been demonstrated in vitro mainly on only one cell line and remains poorly characterized. The objective of this PhD work was to broaden and deepen the study of the mechanisms of resistance to different lung tumor cell lines harboring EGFR activating mutations treated with first (erlotinib) or latest-generation (osimertinib) EGFR-TKIs. Our work shows that duration of the tolerance phase and then the development of EGFR-TKIs resistant proliferative clones are very heterogeneous between the cell lines studied but also within the same cell line. However, most DTC have an enlarged morphology associated with remodelling of the actin cytoskeleton as well as a pseudo-senescent state, which seems to predispose towards the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) developing progressively from the DTC state to the proliferative state, after loss of senescence characteristics. RNA-seq analyses show that gene signatures related to cell contractility are found at the DTC state in the three cell models studied. As previous work in the laboratory has shown the role of the small GTPase RhoB in the regulation of the actin cytoskeleton and in resistance to erlotinib, we investigated its role in tolerance to EGFR TKIs. RhoB, unlike its counterparts RhoA and RhoC, is over-expressed and over-activated in DTC. Moreover, its inhibition by the C3 exoenzyme, a toxin that specifically inhibits RhoA, RhoB and RhoC, allows the eradication of DTC and thus prevents the emergence of resistant clones. Since RhoB is regulated by prenylation and in particular by farnesylation, the combination of a farnesyltransferase inhibitor (FTI) and an EGFR-TKI was analyzed and shows that it effectively prevents the emergence of proliferative clones. These results lead us to propose this combination as a new therapeutic strategy in lung cancers carrying EGFR activating mutations
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Lewis, Matthieu. "Identification de voies de résistance aux inhibiteurs de tyrosine kinase dans la leucémie myéloïde chronique par criblage CRISPR-Cas9". Thesis, Bordeaux, 2019. http://www.theses.fr/2019BORD0054/document.
Abstract (sommario):
La caractérisation des tumeurs malignes et la compréhension des mécanismes de résistance aux traitements anticancéreux sont essentielles pour la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques. Les criblages génétiques, devenus encore plus puissants avec la technologie d’édition du génome CRISPR-Cas9, le séquençage nouvelle génération et la bioinformatique, sont des outils formidables pour décrypter de nouveaux mécanismes cellulaires, dont la résistance au traitement. La leucémie myéloïde chronique (LMC) est un syndrome myéloprolifératif qui est caractérisé par l’anomalie génétique t(9;22). Cette aberration chromosomique est à l’origine du gène de fusion BCR-ABL1 qui code l’oncogène du même nom responsable de la prolifération anarchique des cellules. L’imatinib mesylate, un inhibiteur de tyrosine kinase, élimine de manière spécifique les cellules leucémiques en ciblant et en bloquant l’activité kinase de cette protéine. Malheureusement, comme pour tout type de thérapie ciblée, une résistance au traitement survient chez certains patients. Afin de repérer des nouvelles voies de résistance à cet inhibiteur de tyrosine kinase, nous avons effectué un criblage génétique avec la librairie « genome-scale CRISPR knock-out » (GeCKO v2) in vitro dans la lignée cellulaire K562. Nous avons découvert plusieurs gènes qui semblent être essentiels pour la réponse au traitement par imatinib, tels que les facteurs pro-apoptotiques BIM et BAX, ou le répresseur de la voie des MAPK, SPRED2. Le rétablissement spécifique de l’apoptose dans les cellules BIM knock-out (KO) par des BH3-mimétiques, ou l’inhibition ciblée de la voie MAPK dans la lignée SPRED2 KO sensibilise de nouveau les lignées résistantes. Dans ce travail, nous avons découvert des mécanismes de résistance déjà connus (l’apoptose, la voie MAPK…) mais nous avons également démontré l’implication de voies peu connues telles que le complexe Mediator, la maturation de ARNm et l’ubiquitinylation de protéines. Spécifiquement cibler ces lésions génétiques avec des thérapies ciblées combinées peut permettre de surmonter les phénotypes de résistance et ouvre la porte à l’utilisation de l’oncologie de précisionThe characterization of malignant tumour growth and the understanding of resistance mechanisms to treatment in cancer is of utmost importance for the discovery of novel “druggable” targets. Efficient genetic screening, now even more possible with the convergence of CRISPR-Cas9 gene editing technology, next-generation sequencing and bioinformatics, is an important tool for deciphering novel cellular processes, such as resistance to treatment in cancer. Chronic myeloid leukemia (CML) is a myeloproliferative disorder characterised by the t(9;22) genetic abnormality, which encodes the driver of CML, the BCR-ABL1 fusion protein. Imatinib mesylate, a tyrosine kinase inhibitor, specifically eliminates CML cells by targeting and blocking the kinase activity of this protein, yet, as for all targeted therapies in cancer, resistance to treatment exists. In order to discover alternative BCR-ABL1 independent mechanisms of imatinib resistance, we utilized the genome-scale CRISPR knock-out library GeCKO v2 to screen for imatinib sensitising genes in vitro on K562 cells. We revealed genes that seem essential for imatinib induced cell death, such as pro-apoptotic genes (BIM, BAX) or MAPK inhibitor SPRED2. Specifically re-establishing apoptotic capabilities in BIM knock-out (KO) cells with BH3-mimetics, or inhibiting MAP-kinase signalling in SPRED2 KO cells with MEK inhibitors restores sensitivity to imatinib, overcoming resistance phenotypes. In this work, we discovered previously identified pathways (apoptosis, MAP-kinase signalling) and novel pathways that modulate response to imatinib in CML cell lines, such as the implication of the Mediator complex, mRNA processing and protein ubiquitinylation. Targeting these specific genetic lesions with combinational therapy can overcome resistance phenotypes and paves the road for the use of precision oncology
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Garandeau, David. "Rôle du métabolisme de la sphingosine 1-phosphate dans la résistance thérapeutique des cellules de mélanome aux inhibiteurs de BRAF". Thesis, Toulouse 3, 2016. http://www.theses.fr/2016TOU30134.
Abstract (sommario):
Le traitement du mélanome métastatique a été révolutionné par le développement de thérapies ciblées, qui ont montré un bénéfice significatif sur la survie globale. En particulier, l'inhibition de la sérine-thréonine kinase BRAF, mutée dans 60% des mélanomes, par le Vémurafénib (PLX4032), a montré un gain de survie de 6 à 8 mois comparée à la chimiothérapie de référence, la Dacarbazine. Cependant, une très faible proportion de patients répond sur le long terme. En effet, la majorité des patients développent un échappement thérapeutique dans un délai médian de 6 mois. Des mécanismes cellulaires ont été mis en évidence dans l'apparition de cette résistance acquise, notamment l'implication de MITF, un facteur de transcription majeur des mélanocytes, ainsi que des modifications de l'expression de plusieurs membres de la famille de Bcl-2. Cependant, une meilleure compréhension des mécanismes de résistance aux thérapies anti-BRAF semble essentielle, tout comme l'utilisation de nouvelles approches thérapeutiques combinées afin d'optimiser l'efficacité des traitements et la durée du bénéfice clinique. Notre groupe a récemment identifié des altérations du métabolisme du céramide et de l'un de ses dérivés, la Sphingosine 1-phosphate (S1P), dans les cellules de mélanome humain comparé à des mélanocytes sains. En effet, nous avons montré que la S1P lyase (SPL), qui dégrade irréversiblement la S1P est sous exprimée. Au contraire, l'expression de la sphingosine kinase 1 (SK1), qui produit la S1P, est augmentée dans les cellules de mélanome, conséquence directe de la mutation BRAF. Ces perturbations ont pour effet d'augmenter les niveaux de S1P. Ce lysophospholipide favorise la survie cellulaire ainsi que la résistance vis-à-vis d'agents thérapeutiques dans diverses cellules tumorales. L'objectif de cette thèse a été d'évaluer si le métabolisme de la S1P peut moduler la résistance acquise des cellules de mélanome humain aux inhibiteurs de BRAF. Nous avons montré que la surexpression de la SPL ou l'inhibition pharmacologique de la SK1 (SKI-I) sensibilise les mélanomes métastatiques à l'apoptose induite par la thérapie ciblée. Ce phénomène est associé à une diminution de MITF et de l'une de ses cibles directes, la protéine anti-apoptotique Bcl-2. La diminution d'expression protéique de MITF peut être réversée par un traitement de S1P exogène. De plus, nous avons montré pour la première fois une augmentation de l'expression des récepteurs 1 et 3 à la S1P (S1PR1 et S1PR3), dans les cellules de mélanome présentant une résistance acquise au PLX4032. Ces modifications sont associées à l'expression accrue de MITF. La surexpression de la SPL, le traitement par le SKI-I ou par des inhibiteurs ciblant les S1PR1 et S1PR3, surmonte la résistance acquise de ces cellules au PLX4032 via la diminution d'expression des S1PRs, de MITF, et de Bcl-2. Par conséquent, en contrôlant l'expression de protéines clés de la survie et de la résistance, le métabolisme de la S1P représente une nouvelle approche thérapeutique pour améliorer l'efficacité des thérapies cibléesThe treatment of metastatic melanoma has changed considerably in recent years with the development of targeted therapies, which have shown a significant benefit in overall survival. In particular, the inhibition of the frequently mutated serine-threonine kinase BRAF, by Vemurafenib (PLX4032) showed that survival rates increase by 6 to 8 months compared to standard chemotherapy, Dacarbazine. However, a very small proportion of patients will respond to the long term, and the majority of patients relapses in a median of 6 months. Cellular mechanisms have been identified in the appearance of this acquired resistance, including the involvement of MITF, a major transcription factor of melanocytes, as well as changes in the expression of several members of Bcl-2 family. However, a better understanding of these mechanisms seems essential, as is the use of new therapeutic strategies to optimize treatment efficacy and duration of clinical benefit. Our group recently showed some alterations of ceramide metabolism and its derivative sphingosine 1-phosphate (S1P) in human melanoma cells compared to healthy melanocytes. For instance, S1P lyase (SPL), which degrades S1P, is under-expressed. Conversely, sphingosine kinase 1 (SK1), which produces S1P, is over-expressed in tumor cells, as a direct result of BRAF mutation. These alterations increases the levels of S1P. This lysophospholipid promotes cell survival and the resistance to therapeutic agents in a variety of tumor cells. This PhD project aimed at defining whether S1P metabolism could modulate the resistance of human melanoma cells to PLX4032. Here, we show that SPL overexpression or pharmacological inhibition of SK1 by SKI-I sensitizes metastatic melanoma cells to PLX4032-induced apoptosis. This phenomenon is associated with a decreased expression of the master regulator of melanocyte differentiation MITF as well as its direct cellular target Bcl-2. The decrease in MITF protein can be reversed by treating cells with exogenous S1P. Interestingly, we also report for the first time an increased expression of SK1 as well as the S1P receptors, S1PR1 and S1PR3, in melanoma cells with acquired resistance to PLX4032 as compared to sensitive counterparts. These modifications are associated with high expression of MITF. Overexpression of SPL, treatment with SKI-I or antagonists of S1PR1 ans S1PR3, strongly overcomes acquired resistance to PLX4032 through a decrease in the expression of S1PR, MITF as well as Bcl-2. Thus, by controlling the expression of key proteins in melanoma cell survival and resistance, S1P metabolism could represent a new therapeutic approach to enhance the effectiveness of targeted therapies
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Kovalenko, Lesia. "Sélection et caractérisation de molécules ciblant la protéine de la nucléocapside de VIH-1". Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAJ086.
Abstract (sommario):
La tri-thérapie utilisée pour le traitement du VIH-1 est efficace mais limitée par l'apparition de résistances. Par conséquent, des cibles virales alternatives sont nécessaires. Une des cibles les plus prometteuses est la protéine nucléocapside (NC), qui est hautement conservée et qui joue un rôle essentiel dans le cycle viral. Dans ce contexte, le projet européen THINPAD a eu pour but de développer des inhibiteurs de la NC en combinant plusieurs approches : criblage virtuel, criblage secondaire in vitro, tests antiviraux et de toxicité. Pour le criblage in vitro, nous avons utilisé le test de déstabilisation de cTAR, hautement spécifique de l’activité chaperonne de NC. Cinq séries de molécules ont été sélectionnées par les premiers criblages et tests antiviraux. Après des études de relation structure-activité, une seule des cinq séries a été poursuivie jusqu’aux tests d'efficacité chez les souris. Les composés de cette série présentent une activité antivirale à des concentrations nanomolaires, mais ne sont pas actifs dans le modèle murin. Les études de mécanisme d'action ont révélés que leur activité antivirale était bien consécutive au ciblage de la NCHighly Active Anti-Retroviral Therapy (HAART) is successfully used for HIV-1 treatment, but is hampered by the appearance of drug resistance. Thereby, alternative drug targets are required. One of the most promising target is the nucleocapsid protein (NC), which is highly conserved and plays essential role in HIV life cycle. In this context, the European project THINPAD was organized with the aim to develop NC inhibitors. To fulfil this objective, several approaches were used, including virtual screening, in vitro secondary screening, in cellulo antivirals tests, and toxicity evaluation. For in vitro screening, the specific NC-promoted cTAR destabilization assay was used. Five series of molecules were selected by the first screenings and antiviral tests. After structure-activity relationship studies, only one series was continued until efficacy testing in mice. The compounds of this series exhibit antiviral activity at nanomolar concentrations but are not active in the murine model. The mechanisms of action studies revealed that their antiviral activity was indeed consecutive to the targeting of the NC
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Chocry, Mathieu. "Etude des mécanismes de résistance à l'oxaliplatine dans le cancer colorectal : rôle des voies NOX1/Calpaïnes". Thesis, Aix-Marseille, 2017. http://www.theses.fr/2017AIXM0667.
Abstract (sommario):
Le cancer colorectal est un cancer majeur en termes de fréquence et de mortalité. Il s’agit de la deuxième cause de décès par cancer, avec 17 500 décès en France en 2011. Le traitement des stades avancés repose sur différentes molécules anti-cancéreuses telles que l’oxaliplatine. Cependant le développement de résistances entraine des échecs thérapeutiques expliquant le faible taux de survie observé. Il est donc crucial d’identifier les mécanismes de résistance et ses acteurs et de découvrir de nouvelles pistes de traitements.Dans un premier temps, nous nous sommes donc intéressés aux rôles joués par les calpaïnes et NOX1 dans le développement de la résistance à l’oxaliplatine en étudiant des cellules tumorales colorectales résistantes à cette drogue. Ce qui nous a permis d'identifier une voie de signalisation impliquée dans la résistance à cette chimiothérapie.Dans un second temps nous nous sommes intéressés à étudier la réversion de cette résistance à l’oxaliplatine. En criblant différentes chimiothérapies ce qui a permis de mettre en évidence une inversion du statut résistant/sensible dans nos cellules sélectionnées.La première partie de nos données met en évidence de nouvelles régulations de Nox1 qui diffèrent en fonction de la sensibilité des cellules à l’oxaliplatine. Nos résultats montrent aussi que p38 MAPK pourrait être une cible thérapeutique de choix. Dans la deuxième partie nous avons identifié un nouveau traitement permettant l'induction de l'apoptose dans nos cellules résistantes. Ainsi la gemcitabine pourrait être une solution pour traiter les patients ne répondant pas ou plus aux protocoles basés sur l’oxaliplatineColorectal cancer is a major cancer in terms of frequency and mortality. This is the second leading cause of cancer death, with 17,500 deaths in France in 2011. The treatment of advanced stages is based on different chemotherapeuties including oxaliplatin. However, the development of resistance leads to therapeutic failures explaining the low survival rate. It is therefore crucial to identify the mechanisms of resistance and the actors involved and to discover new therapeutic approaches. We first investigated the role played by calpains and NOX1 in the development of resistance to oxaliplatin, studying oxaliplatin-resistant colorectal tumor cells. This allowed us to identify a signaling pathway involved in resistance to this chemotherapy.Secondly, we have studied the reversion of this resistance to oxaliplatin. A screening of different chemotherapies revealed a reversal of the resistant / sensitive status in our selected cells In the first part, our data highlight novel Nox1 regulations which differ according to the sensitivity of the cells to oxaliplatin. Our results also show that p38 MAPK could be a therapeutic target for treating colorectal cancers resistant to oxaliplatin. In the second part, we have identified a new treatment to induce apoptosis in our resistant cells. Indeed, gemcitabine may be a solution to treat patients who do not respond to oxaliplatin-based protocols
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Ahmad, Fahmida. "Modelling heterogeneity of triple-negative breast cancer in mice to uncover and target signaling essentiality". Thesis, Aix-Marseille, 2020. http://www.theses.fr/2020AIXM0225.
Abstract (sommario):
Le cancer du sein triple négatif (TNBC) est un sous-type de cancer du sein très agressif et hétérogénène qui ne bénéficie actuellement d'aucun traitement efficace. Le but de mon projet de Thèse était d'explorer les mécanismes qui conduisent au TNBC pour concevoir de nouvelles approches thérapeutiques.Dans notre équipe, nous avons généré un modèle de souris unique (souris MMTV-R26Met) dans lesquelles le récepteur tyrosine kinase MET est faiblement augmenté. Elles développent spontanément et exclusivement des TNBC. Ce modèle récapitule la formation de métastases pulmonaires, la résistance aux agents chimiothérapeutiques classiques et à un ensemble de thérapies moléculaires ciblées combinées.Une analyse protéomique des tumeurs MMTV-R26Met combinée à une approche de type "machine learning" ont montré que le modèle MMTV-R26Met récapitule largement l'hétérogénéité du TNBC observée chez les patients TNBC.Nous avons identifié deux nouvelles combinaisons d'agents très délétères pour les lignées cellulaires dérivées de tumeurs MMTV-R26Met et un panel de cellules TNBC humaines. La première cible le facteur anti-apoptotique BCL-XL et CDK1/2 (régulateurs du cycle cellulaire). La deuxième, validée in vivo, agit sur BCL-XL et WEE1 (régulateur du cycle cellulaire et épigénétique). Mécanistiquement, nous montrons que le ciblage combiné de WEE1 et de BCL-XL induit des dommages à l'ADN, une entrée prématurée en mitose, une catastrophe mitotique et l'apoptose.Nos travaux peuvent être très pertinents pour leur transposition potentielle à la clinique, compte tenu également des études prometteuses de monothérapie avec les inhibiteurs de BCL-XL et WEE1 dans les essais cliniques de phase IITriple-negative breast cancer (TNBC) is a highly aggressive, heterogeneous breast cancer subtype, and has currently no effective treatment. The aim of my PhD project was to understand the mechanisms triggering TNBC and to develop new therapeutic approaches.In our lab, we have generated a unique mouse model (MMTV-R26Met mice) in which a subtle increase in the expression levels of the wild-type MET receptor tyrosine kinase leads to spontaneous, exclusive TNBC formation. This model recapitulates formation of lung metastasis, resistance to conventional chemotherapeutic agents and to a set of combined targeted molecular therapies.Proteomic profiling of MMTV-R26Met tumors and machine learning approach showed that the MMTV-R26Met model largely recapitulates TNBC heterogeneity observed in TNBC patients. We identified two new drug combinations highly deleterious for the MMTV-R26Met tumor-derived cell lines, and a panel of human TNBC cells. The first drug combination targets the anti-apoptotic factor BCL-XL and CDK1/2 (cell cycle regulators). The second drug combination, validated by in vivo studies, is based on a combinatorial targeting of BCL-XL and of WEE1 (cell cycle and epigenetic regulator). Mechanistically, we show that combined inhibition of WEE1 and BCL-XL leads to DNA damage, premature entry into mitosis, resulting in mitotic catastrophe and apoptosis.Our findings may be highly relevant for their potential translation to the clinic, also in view of promising studies of monotherapy with BCL-XL and WEE1 inhibitors in phase II clinical trials