Tesi sul tema "Récepteurs de la thrombine"
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Faraut, Brice. "Synaptogénèse et plasticité neuromusculaire : conséquences de l'activation du récepteur de la thrombine, PAR-1". Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05P612.
Abstract (sommario):
La thrombine est une protéase à sérine qui régule de multiples fonctions cellulaires en activant spécifiquement par clivage protéolytique une famille de récepteurs (PARs) couplés aux protéines G. Le récepteur PAR-1 de la thrombine ainsi que son inhibiteur, la protéase nexine-1, sont tous deux exprimés par la cellule musculaire au cours de la formation de la jonction neuromusculaire (JNM). Nous avons alors émis l'hypothèse que la thrombine était impliquée dans la formation et la plasticité de la jonction neuromusculaire. Nous montrons dans des myotubes in vitro que la thrombine en activant PAR-1 diminue l'expression du récepteur de l'acétylcholine (RACh) alors qu'à l'inverse son inhibiteur spécifique, l'hirudine, augmente son expression. Cet effet de la thrombine emprunte une voie de signalisation intracellulaire impliquant des signaux calciques dépendants du récepteur à l'IP3. Puis, dans des co-cultures neurone-muscle, nous montrons que la thrombine via PAR-1, diminue la taille des contacts neuromusculaires alors qu'à l'inverse, l'hirudine augmente celle-ci. Nous avons alors analysé l'expression du récepteur tyrosine-kinase spécifique du muscle, MuSK, dont l'activation induit l'agrégation du RACh dépendante de la rapsyne ainsi que d'autres protéines post-synaptiques au cours de la formation des contacts neuromusculaires. Alors que l'expression de la rapsyne n'est pas modifiée, celle de MuSK est diminuée en présence de thrombine. En conclusion, ce travail a permis de montrer l'existence d'une voie de régulation de l'expression du RACh par la thrombine et de modifications importantes de la synaptogenèse neuromusculaire lorsque les niveaux d'expression de MuSK et du RACh sont diminués par la thrombine. Récemment, des mutations dans le gène du récepteur MuSK ont été identifiées par notre équipe pour la première fois dans une pathologie neuromusculaire humaine. Pour en vérifier le caractère pathogène, nous avons effectué des expériences d'expression par la cellule musculaire de ces mutations et avons montré leurs répercussions sur la synaptogénèse neuromusculaire in vitro. Nous montrons qu'une mutation faux-sens du domaine intracellulaire de MuSK diminue la transcription du gène de la sous-unité e du RACh et induit une croissance axonale exubérante dans les co-cultures neurone-myotubes. L'ensemble de ces données contribue à une meilleure compréhension des mécanismes impliqués dans la formation et la maintenance de la jonction neuromusculaireThrombin is a serine protease that regulates numerous cellular functions by activating via specific proteolytic cleavage a family of G-protein-coupled receptors (PARs). The thrombin receptor PAR-1 and the thrombin inhibitor protease nexin-1 are both expressed by muscle cells during the formation of the neuromuscular junction (NMJ). We have then hypothesized that thrombin was involved in the formation and plasticity of the NMJ. We show in myotubes in vitro that thrombin, by activating PAR-1, decreases the expression of the acetylcholine receptor (AChR) while its specific inhibitor, hirudin, increases its expression. In addition, this effect of thrombin is mediated through intracellular calcium signals IP3 receptor-dependent. Then, in neuron-myotube cocultures, we show that thrombin via PAR-1 decreases neuromuscular contact size whereas hirudin has the opposite effect. Therefore, we have studied the expression of the muscle-specific tyrosine-kinase receptor, MuSK, which activation leads to the aggregation of AChRs mediated by rapsyn and of other post-synaptic proteins during the formation of neuromuscular contacts. We find that rapsyn expression is not changed but the one of MuSK is reduced in presence of thrombin. In conclusion, this study reveals a signaling pathway for AChR regulation by thrombin and significant modifications of neuromuscular synaptogenesis when MuSK and AChR levels are reduced by thrombin. Recently, mutations in MuSK gene have been identified by our team for the first time in neuromuscular human pathology. To study the pathogen features of these mutations, this latter have been expressed in muscle cells and the repercussion on neuromuscular synaptogenesis were analysed in vitro. We find that a nonsense mutation of the intracellular domain of MuSK decreases AChR e-subunit gene transcription and also induces an exuberant axonal growth in neuron-myotube cocultures. All together, this data contribute to a better comprehension of the mechanisms involved in the formation and the maintenance of the NMJ
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Zolotoff, Cindy. "Effets combinés de l'hypoxie intermittente et de la thrombine sur un modèle in vitro de Barrière Hémato-Encéphalique". Electronic Thesis or Diss., Lyon, 2021. http://www.theses.fr/2021LYSES020.
Abstract (sommario):
Le syndrome d’apnées obstructives du sommeil (SAOS) est caractérisé par des diminutions ou arrêts du flux aérien suivis de périodes de réoxygénation. Plusieurs études suggèrent un lien avec la survenue de maladies neurodégénératives qui pourrait passer par une altération de la barrière hémato-encéphalique (BHE), une interface permettant de protéger le cerveau de potentiels composés nocifs. Cette interface est constituée de cellules endothéliales connectées par des protéines de jonctions permettant de limiter le passage. Elles possèdent également des pompes d’efflux qui ont un rôle dans la détoxification de molécules. Les épisodes répétés d’hypoxie intermittente (HI) seraient à l’origine de l’altération de cette BHE. D’autres facteurs pourraient être impliqués puisque le SAOS augmente également l’incidence des pathologies vasculaires. La thrombine, une protéase de la coagulation agissant par ses récepteurs PAR, pourrait être augmentée. Nous avons donc développé un modèle cellulaire d’HI qui nous a permis de voir que l’HI induisait : une perturbation de la BHE marquée par une diminution de l’expression des protéines de jonctions, une augmentation de la perméabilité et une dérégulation des pompes d’efflux. Ensuite, nous avons associés l’HI et la thrombine à deux concentrations. L'HI seule ou associée à une dose élevée de thrombine augmente la perméabilité de la BHE et l'expression de PAR-1, effet qui peut être inversé par l’utilisation du dabigatran. L'HI associée à une dose plus faible de thrombine limite la perméabilité de la BHE et augmente l'expression de PAR-3. Ainsi, ces travaux ont permis une première approche des mécanismes cellulaires se mettant en place dans le SAOSObstructive sleep apnea (OSA) is characterized by decreases or cessation of airflow followed by periods of reoxygenation. Several studies suggest a link with the onset of neurodegenerative diseases that could be due to an alteration of the blood-brain barrier (BBB), an interface that protects the brain from potential harmful compounds. This interface is made up of endothelial cells connected by junctional proteins that limit passage, and they also possess efflux pumps that play a role in detoxifying molecules. Repeated episodes of intermittent hypoxia (IH) would be at the origin of the alteration of this BBB. Other factors could be involved since OSA also increases the incidence of vascular pathologies and thrombin, a coagulation protease acting through its PAR receptors, could be increased. We therefore developed a cellular model of IH which allowed us to see that IH induced: a disruption of the BBB marked by a decrease in the expression of junction proteins, an increase in permeability and a deregulation of efflux pumps. Next, we combined IH and thrombin at two concentrations. IH alone or combined with a high dose of thrombin increases BBB permeability and PAR-1 expression, an effect that can be reversed by the use of dabigatran. IH combined with a lower dose of thrombin limits BBB permeability and increases PAR-3 expression. Thus, this work has allowed a first approach of the cellular mechanisms taking place in OSA
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Saci, Abdelhafid. "Etude de la signalisation plaquettaire : implication de p120Cbl, phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-K) et Grb2". Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05P605.
Abstract (sommario):
Les plaquettes sanguines sont des cellules différenciées provenant de la fragmentation des mégacaryocytes. Annucléées et donc incapables de proliférer, les plaquettes réagissent aux signaux activateurs par des réponses du type adhésion, agrégation et une activité procoagulante. Les réponses plaquettaires diffèrent selon l'agoniste et la voie de transduction du signal activée. L'action d'un agoniste sur les plaquettes transmet un signal, dit inside-out, activateur de l'intégrine αIIb-β3. En conséquence, αIIb-β3 activée fixe le fibrinogène et permet la transmission d'un signal activateur secondaire, dit outside-in. La première partie de ces travaux a consisté en l'étude de l'implication de la protéine adaptatrice Cbl et de la lipide kinase, PI 3-K, dans les voies de signalisation médiées par (i) le récepteur du domaine Fc des IgG (FcγRIIa), (ii) l'intégrine αIIb-β3 (outside-in) et le récepteur de la thrombine. Nous avons montré que Cbl est fortement phosphorylée sur tyrosine au cours de l'activation de la voie de (FcγRIIa), alors qu'elle ne l'est que faiblement à la thrombine. .Blood platelets are anucleated and terminaly differenciated cells. A number of receptors are present on platelet membrane and mediate signalling and activation in response to various agonists. The action of an agonist triggers an inside-out signalling which activates αIIb-β3 integrin. The latter becomes able to link fibrinogen and transduces a secondary outside-in signalling. We first studied the involvement of the adoptor protein, Cbl, and of the lipid kinase, PI 3-K, in platelet signalling mediated by (i) the receptor for Fc domain of IgG (FcγRIIa), (ii) by the αIIb-β3 integrin (outside-in) and (iii) by the thrombin receptor. .
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Jumeau, Céline. "La thrombine et son récepteur PAR-1 comme cibles thérapeutiques dans la prévention et le traitement de la dilatation atriale". Thesis, Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066242.
Abstract (sommario):
La fibrillation atriale (FA) est l’arythmie cardiaque la plus fréquente. Elle se caractérise par une contraction désorganisée des oreillettes ainsi que des modifications structurelles du myocarde. La dysfonction endothéliale entretenue par une inflammation active la coagulation et la production de thrombine, favorisant la formation de thrombus intra-auriculaire. La prévention des accidents thromboemboliques est donc un enjeu majeur dans la prise en charge de la FA et se fait par prescription d’anticoagulants oraux dont un inhibiteur direct de thrombine (IDT), le dabigatran. Notre hypothèse est que la thrombine en excès entretient les modifications structurelles myocardiques via le récepteur PAR-1 (Protease activated receptor-1) des cellules circulantes et myocardiques. L’objectif est d’identifier la voie de signalisation de la thrombine impliquée dans le remodelage atrial. Dans un modèle de dilatation atriale associée à un substrat arythmogène et une hypercoagulabilité, l’administration d’IDT ou d’antagonistes du PAR-1 réduisent la dilatation et la susceptibilité arythmique de l’oreillette gauche. Ces traitements inhibent l’induction des marqueurs de réponse hypertrophique myocytaire, β-MHC et BNP et de remodelage matriciel, PAI-1 et CTGF. Avec des cultures d’explants d’oreillettes gauches, nous montrons que ces modifications phénotypiques sont induites par la voie Rho/ROCK et le facteur de transcription STAT3. Nos résultats indiquent aussi que l’expression et l’activité des récepteurs ErbB, connus pour être transactivés via le PAR-1, sont modifiées au cours du développement de la dilatation atriale. La thrombine participe à ces variations uniquement lorsque le remodelage atrial est établi. Ces résultats montrent que la thrombine participe au remodelage atrial associé à un substrat arythmogène, et que les IDT et les antagonistes PAR-1 sont des agents thérapeutiques potentiels pour prévenir le développement de la dilatation atrialeAtrial fibrillation (AF) is the most common cardiac arrhythmia. It is characterized by a disorganized and ineffective contraction of the atria and structural changes of the myocardium. Endothelial dysfunction, maintained by inflammation, activate the coagulation cascade and thrombin generation, promoting intra-atrial thrombus formation. Prevention of thromboembolism is a major issue in the management of AF and is done by long-term prescription of oral anticoagulants among which a direct thrombin inhibitor, dabigatran. Our hypothesis is that excess thrombin maintains structural changes in the myocardium via the PAR-1 receptor (protease activated receptor-1) of circulating and myocardial cells. The objective is to identify the signaling pathway of thrombin involved in the atrial remodeling. In an atrial dilatation model associated with arrhythmogenic substrate and hypercoagulability, administration of direct thrombin inhibitors or antagonists of PAR-1 oral reduce expansion and arrhythmic susceptibility of the left atrium. These treatments inhibit the induction of myocyte hypertrophic response markers, β-MHC and BNP and remodeling of the extracellular matrix markers, CTGF and PAI-1. With explant of left atria culture, we show that these phenotypic changes are induced by the Rho pathway / ROCK and STAT3 transcription factor. Our results also indicate that the expression and activity of ErbBs receptors known to be transactivated via PAR-1, are modified during development of atrial dilatation. Thrombin participates in these changes only when the atrial remodeling is established. These results show that thrombin participates in atrial remodeling associated with an arrhythmogenic substrate, and direct thrombin inhibitors and PAR-1 antagonists are potential therapeutic agents to prevent the development of atrial dilation
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Li, Ruo Ya. "Clonage d'une tyrosine-phosphatase membranaire (HPTP-béta) et étude de l'implication de la SH-PTP1 dans l'agrégation plaquettaire induite par la thrombine". Toulouse 3, 1995. http://www.theses.fr/1995TOU30150.
Abstract (sommario):
La phosphorylation des proteines sur les residus tyrosines est un evenement majeur de l'activation cellulaire. Ce mecanisme est regule par deux types d'enzymes: les proteines tyrosines kinases (ptks) et les proteines tyrosines phosphatases (ptpases). L'essentiel de nos travaux a porte sur l'etude de ces dernieres dans l'agregation plaquettaire. Dans le but de determiner si les ptpases participent au processus de reorganisation du cytosquelette lors de la stimulation des plaquettes par la thrombine, nous avons mesure les activites enzymatiques dans les differents compartiments subcellulaires de cellules au repos et activees. L'activite phosphatasique (35%) dans les cellules au repos se repartit entre le cytosol (65%) et la fraction particulaire (35%). Cette activite est tres basse dans le cytosquelette des cellules au repos et elle augmente de 8 fois dans cette fraction 2 minutes apres l'action de la thrombine. Afin d'identifier les ptpases impliquees, nous avons recherche l'hptp beta, phosphatase de type recepteur dont nous avons clone l'adnc a partir d'une banque de poumon humain. Par des techniques d'immuno-empreinte utilisant deux anticorps polyclonaux produits au laboratoire, nous avons montre qu'une proteine de 58 kda homologue de l'hptp beta transloque au niveau du cytosquelette lors de l'activation plaquettaire. Nous avons egalement mis en evidence une autre ptpase, la sh-ptp1 localisee au niveau du cytosquelette des plaquettes activees. Cette localisation, dependante de l'agregation plaquettaire mediee par l'integrine alpha iib/beta 3, est precedee d'une activation de la phosphatase (60%) par phosphorylation sur les residus serines et tyrosines. Un pretraitement des plaquettes a la toxine pertussique inhibe de 70% la phosphorylation sur les residus tyrosines indiquant ainsi la participation de proteines g trimeriques (gi) dans la voie d'activation de la sh-ptp1. La ou les tyrosines kinases impliquees restent encore inconnues et leur identification constitue un axe prioritaire de nos projets de recherche
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Gaits-Iacovoni, Frédérique. "Intervention de protéine tyrosine phosphatases dans l'inhibition de contact des cellules endothéliales et dans l'activation de cellules mégacaryoblastiques". Toulouse 3, 1995. http://www.theses.fr/1995TOU30245.
Abstract (sommario):
La phosphorylation des proteines sur les residus tyrosines est un evenement crucial pour la regulation de nombreux processus tels que la croissance, la differenciation et l'activation cellulaires. Le taux de phosphorylation est module par l'action des proteine tyrosine kinases et des proteine tyrosine phosphatases (ptpases). Ces deux familles d'enzymes occupent donc des positions cles dans la physiologie cellulaire a differents niveaux. Nous avons montre que l'arret de croissance des cellules endotheliales humaines en inhibition de contact s'accompagnait d'une augmentation de 10 fois de l'activite tyrosine phosphatase membranaire. De plus, la diminution du taux de croissance de ces cellules en fonction de la densite s'accompagne d'une augmentation de l'expression de genes codant pour des phosphatases de type recepteur et notamment la hptp beta dont l'expression est perturbee dans des tissus ou des cellules neoplasiques qui proliferent anarchiquement. Cette premiere etude place donc les ptpases de type recepteur au centre des signaux regulant la proliferation. D'autre part, nous nous sommes egalement interesses a la transmission des signaux d'activation impliquant les ptpases cytosoliques a domaines sh2 (sh-ptp1 et sh-ptp2). Nous avons mis en evidence une nouvelle voie de signalisation cellulaire induite par les recepteurs couples aux proteines g heterotrimeriques dans la lignee megacaryoblastique dami. Dans ces cellules, sh-ptp1 est phosphorylee sur tyrosine et sur serine des les premieres secondes de stimulation, suite a l'activation de la proteine de couplage gi. Cette phosphorylation apparait consecutive a l'activation d'une tyrosine kinase encore indeterminee sous l'effet du dimere g beta-gamma. Ces deux exemples temoignent de la diversite et de la complexite des phenomenes dans lesquels les tyrosine phosphatases peuvent etre impliquees
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Guinebault, Christine. "Activation plaquettaire par l'alpha-thrombine : modes de régulation de la phosphatidylinositol 3-kinase et de la phospholipase C-gamma, en relation avec l'organisation du cytosquelette". Toulouse 3, 1994. http://www.theses.fr/1994TOU30261.
Abstract (sommario):
Dans la plaquette humaine stimulee par la thrombine, nous avons montre grace a l'utilisation d'un inhibiteur specifique de tyrosine kinases, la tyrphostine ag-213, l'implication de ces kinases dans le metabolisme des phosphoinositides. L'activite de deux enzymes-cles de ce metabolisme est significativement inhibee. Il s'agit de l'activite phospholipase c (la phospholipase c-gamma 1 etant la meilleure candidate) et de la phosphatidylinositol 3-kinase impliquee dans la synthese du phosphatidylinositol 3,4-bisphosphate. L'induction des tyrosine kinases par la thrombine est egalement impliquee dans la translocation au cytosquelette de la phospholipase c-gamma 1 et de la phosphatidylinositol 3-kinase. La relocalisation de cette derniere est parallele a l'apparition du phosphatidylinositol 3,4-bis phosphate et necessite egalement l'engagement de l'integrine gpiib-iiia (indispensable a l'agregation plaquettaire), suggerant fortement un lien entre ces deux evenements. Nous avons montre que la tyrosine-kinase p125#f#a#k s'associe, au niveau du cytosquelette, a la phosphatidylinositol 3-kinase et serait une bonne candidate pour l'activer. La localisation de ces enzymes du signal aux points de contact plaquette-plaquette, realises en grande partie par gpiib-iiia, suggere un role de ces zones de contact dans la signalisation plaquettaire
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Mokrane, Ahmed. "Modélisation de la réactivité enzymatique par le formalisme LSCF et étude des effets électrostatiques à longue distance : application à l'activation du récepteur de la thrombine". Nancy 1, 1997. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_1997_0272_MOKRANE.pdf.
Abstract (sommario):
L'objectif de ce travail est l'étude du chemin réactionnel de l'activation du récepteur d'un enzyme par ce dernier dans le cadre de la méthode hybride mécanique quantique/mécanique moléculaire LCSF (Local Self Consistent Field). Pour ce faire, nous avons apporté une amélioration méthodologique au logiciel GEOMOP (logiciel basé sur le formalisme LSCF), permettant de traiter les interactions à longue distance en gagnant un temps de calcul considérable (accélération d'un facteur moyen de 3), au prix d'une perte de précision infime. Nous avons aussi introduit une méthodologie permettant une étude de l'influence de la polarisation de l'environnement protéique sur la stabilité des intermédiaires de la réaction. En effet, le champ de réaction dû au continuum qui représente la contribution de la polarisation du milieu (environnement protéique) dans les interactions entre partie quantique et classique, stabilise les intermédiaires réactionnels de quelques kcal/mol. L'application au complexe thrombine/récepteur de la thrombine nous a permis de comprendre la base pour étudier des molécules pharmacologiques actives qui pourraient soit bloquer le récepteur, soit bloquer la thrombine.
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Dufourcq, Pascale. "La thrombomoduline, un marqueur de la lésion endothéliale : approche clinique et expérimentale dans la maladie athéromateuse". Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR2P019.
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Smadja, David. "Rôle du récepteur de la thrombine PAR-1 dans l'expansion des progéniteurs endothéliaux". Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05P625.
Abstract (sommario):
La transplantation des progéniteurs endothéliaux circulants (PEC) améliore la néovascularisation dans des modèles pré-cliniques d’ischémie. Leur faible nombre dans la circulation sanguine est un handicap pour leur utilisation en thérapie cellulaire, et la mise au point d'un procédé d’expansion des PEC à partir du sang circulant est une étape indispensable. La caractérisation des PEC en culture durant une expansion in vitro de 5 semaines nous a permis de mettre en évidence la présence à un niveau stable du récepteur à la thrombine PAR-1 en surface cellulaire, ainsi qu’une augmentation significative de l’expression du récepteur au VEGF, VEGFR2/KDR. Des anomalies vasculaires chez la souris invalidée pour le gène du PAR-1 ont été récemment décrites, suggérant un rôle de ce dernier dans le développement embryonnaire de l’arbre vasculaire. Etant donné le rôle émergent des PEC dans la néo-vasculogenèse, nous avons étudié le rôle du PAR-1 sur ces cellules via son activation par le peptide agoniste SFLLRN. L’activation des PEC ne modifie ni le nombre, ni la cinétique d’apparition des colonies de PEC issus de sang de cordon. L’activation du PAR-1 induit en revanche un effet prolifératif sur les PEC, dépendant de la synthèse d’angiopoïétine 2. Cet effet s’accompagne de la réorganisation du cytosquelette d'actine, favorisant la migration spontanée des PEC en chambre de Boyden et leur migration dirigée vers le SDF-1 grâce à l’augmentation de CXCR-4. Le traitement des PEC par le peptide SFLLRN induit également une augmentation de la formation des pseudo tubes vasculaires en Matrigel, sous la dépendance du système SDF-1/CXCR-4. Nos résultats confirment le rôle du PAR-1 dans l’angiogenèse et ouvrent des perspectives dans le cadre de la mise au point d’un procédé d’expansion in vitro des PEC. Toutefois, les effets de l’activation du PAR-1 des PEC de sang de cordon ne sont que peu ou pas retrouvés sur les PEC isolés à partir de sang périphérique, ce qui souligne l’intérêt de mobiliser une population de cellules plus immatures d’origine médullaireThe injection of endothelial progenitor cells (EPCs) in preclinical models of ischemia has been shown to enhance neovascularization. However, the scarcity of EPCs in human peripheral blood is a limitation for of its use as a cell therapy product, and the development of an expansion procedure is a crucial issue. In this work, we have characterized EPCs during in vitro expansion, using EPCs derived from cord blood CD34+ cells. An increased expression of KDR/VEGFR2 along expansion was observed, together with an increase of in vitro angiogenic properties. We also show the presence of the thrombin receptor PAR-1 on expanded EPCs. The importance of PAR-1 in blood vessel development has been demonstrated in knockout mice. As EPCs are thought to be involved in postnatal vasculogenesis, we examined the effect of PAR-1 activation on EPCs. PAR-1 activation induced EPCs proliferation, resulting of an angiopoietin 2 upregulation. PAR-1 activation also enhanced actin reorganization, promoting both spontaneous migration in a Boyden chamber assay and migration toward SDF-1. Finally, PAR-1 stimulation by SFLLRN increased the formation of capillary-like structures formed by EPCs in Matrigel, and this effect was abrogated by anti-CXCR-4 and anti-SDF-1 antibodies. All together, PAR-1 activation on cord blood derived EPCs led to a proangiogenic effect. In vivo, enhancement of angiogenic properties of EPCs by thrombin generated at the target site might promote vasculogenesis and thrombus resorption. Our data suggest that SFLLRN peptide could be used to expand cord blood derived-EPCs ex vivo. However, this effect was not found on EPCs isolated from adult blood, underlining the usefulness of a procedure designed to mobilize immature endothelial cells from bone marrow to peripheral blood
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Chieng, Yane Pauline. "Signalisation endothéliale des récepteurs thrombomoduline, PAR-1 et ErbB : rôle dans le remodelage vasculaire et auriculaire". Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05P623.
Abstract (sommario):
L’ α-thrombine est une sérine-protéase impliquées dans le maintien de la fonction vasculaire. Elle exerce des actions ambivalentes via ses récepteurs PAR-1 et thrombomoduline. La thrombomoduline possède des effets anti-inflammatoires et anti-prolifératif, par un mécanisme de signalisation qui reste à caractériser. J’ai d’abord démontré que la liaison de la thrombine à la thrombomoduline induit la libération de fragments solubles de thrombomoduline pour activer les récepteurs à tyrosine kinase EGFR et ErbB2. Par cette signalisation, la thrombomoduline inhibe l’adhérence des monocytes à l’endothélium et freine les signaux pro-inflammatoires du PAR-1. En utilisant des modèles de remodelage auriculaire et de resténose chez le rat, nous avons montré que la transcription de la thrombomoduline est dérégulée tandis que la signalisation du PAR-1 est activée. Un inhibiteur du PAR-1 inhibe la dilatation auriculaire en stimulant la voie de signalisation anti-apoptotique du récepteur ErbB2, mais sans restaurer la transcription de thrombomoduline. Il inhibe également la resténose post-angioplastie sans prévenir la diminution d’expression des récepteurs thrombomoduline, EGFR et ErbB2. Ces observations démontrent l’existence d’une balance entre les voies de signalisation de la thrombomoduline et du PAR-1. Sa dérégulation participe aux processus inflammatoires et au remodelage tissulaire. Ainsi, les inhibiteurs du PAR-1 ont un intérêt thérapeutique potentiel et la thrombomoduline est une nouvelle cible thérapeutique pour les pathologies cardiovasculaires et proliférativesThe α-thrombin is a serine-protease involved in the maintenance of vascular function. Thrombin has ambivalent functions through its two receptors, PAR-1 and thrombomodulin. Thrombomodulin has anti-inflammatory and anti-proliferative properties but it signaling still remains to be characterized. I first demonstrated that thrombin binding to thrombomodulin induces the release of soluble thrombomodulin fragments to activate the tyrosine kinase receptors, EGFR and ErbB2 and inhibits monocyte adhesion to endothelium and PAR-1 pro-inflammatory signals. Using models of atrial remodeling and restenosis in rats, we showed that thrombomodulin transcription is down regulated while PAR-1 signaling is activated. A PAR-1 inhibitor prevents atrial dilation by stimulating the anti-apoptotic ErbB2 signaling pathway but has no effect on thrombomodulin transcription. It also inhibits angioplasty-induced restenosis without preventing early decrease in expression of thrombomodulin, EGFR and ErbB2. Thus, dysfunction of the balance between the signaling pathways of thrombomodulin and PAR-1 results in tissue remodeling and inflammatory processes. So, PAR-1 inhibitors have a therapeutic potential and thrombomodulin is a new therapeutic target for cardiovascular and proliferative diseases
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Nguyen, Quang-Dé. "Signalisation du récepteur PAR-I de la thrombine dans l'invasion cellulaire et la carcinogenèse colique". Paris 6, 2004. http://www.theses.fr/2004PA066248.
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Yin, Xing. "Mécanismes d'activation des cellules musculaires lisses par l'angiotensine II et la thrombine : influence des ions calcium et rôles du récepteur de l'EGF et des protéines SRC". Paris 6, 2004. http://www.theses.fr/2004PA066338.
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Cazes, Eric. "Aspects biologiques et cliniques sur le rôle du récepteur de la thrombine, PAR-1, dans les plaquettes". Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR28638.
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Lagrange, Jérémy. "Changements hémostatiques du syndrome métabolique, de l'hypertension artérielle, et de l'insuffisance cardiaque : approches physiologique et physiopathologique". Thesis, Université de Lorraine, 2013. http://www.theses.fr/2013LORR0160/document.
Abstract (sommario):
L'allongement de l'espérance de vie a fait de l'insuffisance cardiaque (IC) l'un des problèmes majeurs de santé publique. Le syndrome métabolique (SMet) et l'hypertension sont deux facteurs conduisant à l'IC. Les modifications qui interviennent au niveau structural et cellulaire de la paroi artérielle dans le SMet, l'hypertension et l'IC pourraient entraîner des anomalies de l'hémostase qui aggravent ces tableaux cliniques. Nous avons montré au cour de ce travail les modifications du phénotype de l'hémostase dans différents modèles animaux de pathologies impliquées dans la mise en place de l'IC. L'altération de l'hémostase précède les modifications de la paroi et pourrait favoriser le développement de l'IC chez le rat Zucker. Le modèle de rat spontanément hypertendu SHR présente une hypercoagulablité de la paroi via les cellules musculaires lisses. Ces résultats ne permettent pas d'impliquer uniquement l'hypertension artérielle dans l'hypercoagulabilité plasmatique trouvée chez le rat Zucker. L'activation du récepteur à l'aldsotérone au niveau endothélial chez la souris induit un phénotype antithrombotique provoqué par une augmentation de la réactivité du système anticoagulant de la protéine C, via son récepteur, l'EPCR. L'étude d'une cohorte de patients insuffisants cardiaques a permis de distinguer des paramètres de fonction cardiaque et de rigidité artérielle. Cette caractérisation est indispensable pour comprendre les mécanismes des événements thrombotiques associés à l'IC. La conclusion de ce travail est que les pathologies pouvant conduire à la mise en place d'une IC modifient l'hémostase vers un état d'hypercoagulabilité qui fait intervenir la paroi artérielleIncreasing life span has made heart failure (HF) a major issue for public health. The metabolic syndrome (MetS) and hypertension are two important factors which can lead to HF. Structural and cellular modification occurring in the arterial wall in the MetS, hypertension and HF may provoke hemostasis alterations that can worsen the clinical situation. We have shown in this work, hemostasis modifications in animal models of pathologies implicated in HF development. Hemostasis alterations were shown to precede functional modifications of the arterial wall and could favor HF development in Zucker rats. Spontaneously hypertensive rats showed an arterial wall hypercoagulability via smooth muscle cells. These results don't permit the implication of hypertension in the hypercoagulable state found in the Zucker rat. A mouse model with aldosterone receptor activation in the endothelium lead to a hypocoagulable state by increasing the protein C anticoagulant system via his receptor, the EPCR. Studying a human HF patient cohort permitted the measurement of cardiac function and of arterial stiffness parameters. This characterization is important to understand thrombosis events associated with HF in humans. The general conclusion of this work is that, in pathologies leading to HF, modification of hemostasis to a procoagulable state, implicates the arterial wall
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Carteaux, Jean-Philippe. "Circulation extra-corporelle, thrombose artérielle : modèles expérimentaux : rôle de l'inhibition des récepteurs plaquettaires GP IIb-IIIa". Nancy 1, 1996. http://www.theses.fr/1996NAN10340.
Abstract (sommario):
La thrombose artérielle et les troubles de l'hémostase induits par la circulation extra corporelle (C. E. C. ) sont des préoccupations majeures du chirurgien cardio-vasculaire. Les plaquettes sanguines ont un rôle déterminant dans l'intrication des facteurs impliqués dans la physiopathologie des désordres cardio-vasculaires d'origine thrombotique ainsi que dans. La survenue des troubles hémobiologiques associés à la circulation extra-corporelle. La liaison du récepteur plaquettaire, la glycoprotéine IIb-IIIa (GP IIb-IIIa) au facteur Willebrand participe aux phénomènes d'adhésion plaquettaire ; la liaison de GP IIb-IIIa au fibrinogène supporte les phénomènes d’agrégation plaquettaire. Le blocage du récepteur GP IIb-IlIa est donc une cible thérapeutique qui permet d'inhiber à la fois les phénomènes d'adhésion et d'agrégation plaquettaires. Le but de ce travail à été d’étudier dans des conditions expérimentales la thrombose artérielle et les troubles de l'hémostase induits par la C. E. C. : Thrombose artérielle. Nous décrivons un modèle expérimental original de thrombose carotidienne chez le cochon d'Inde. Ce modèle permet de générer des phénomènes reproductibles de thrombose artérielle dans des conditions de force de cisaillement similaires à celles rencontrées dans les phénomènes de thrombose d'artères sténosées humaines. Grâce à ce modèle, nous montrons : i) L'efficacité thérapeutique de l'inhibition du récepteur GPIIb-IIIa, supérieure à celle de l'inhibition de la voie de la cyclooxygènase ou à celle de l'inhibition de la génération de thrombine; ii) L'importance de la mesure du temps de coagulation activé pour comparer l'activité antithrombotique des inhibiteurs direct et indirect de la thrombine. Circulation extracorporelle. L'inhibition du récepteur GP IIb-IIIa a été utilisée dans deux modèles expérimentaux: i) Un modèle original de C. E. C. Développé chez le cochon d'Inde, a permis de montrer que l'inhibition du récepteur GP IIb-IIIa prévient de façon dose dépendante la diminution du nombre de plaquettes circulantes observée durant la C. E. C. ; ii) Ces résultats ont été confirmés par une étude chez le chien, lors de la réalisation d'une C. E. C. Dans des conditions techniques et chirurgicales comparables à celles rencontrées en clinique. Par ailleurs dans ce travail, l'inhibition du récepteur GP IIb-IIIa a généré une perturbation des tests d'agrégation plaquettaire et un allongement du temps de saignement durant la C. E. C. Sans induire une augmentation des pertes sanguines post opératoires. Conclusion: - Le temps de coagulation activé doit être utilisé pour comparer l'activité antithrombotique des inhibiteurs direct et indirect de la thrombine. - Dans deux situations d'activation plaquettaire intense, la thrombose artérielle et la circulation extracorporelle, l'inhibition du récepteur plaquettaire GP lIb-IlIa se montre efficace dans la prévention des' phénomènes thrombotiques et dans la prévention des phénomènes de consommation plaquettaire. L'inhibition du récepteur plaquettaire GP lIb-IlIa apparaît comme une stratégie thérapeutique prometteuse.
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Pinet, Caroline. "Effets de la thrombine sur les courants sodiques rapide et persistant, dans les myocytes atriaux humains, et les cellules CHO transfectées avec hNav1. 5". Paris 7, 2003. http://www.theses.fr/2003PA077097.
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Baurand, Anthony. "Les récepteurs à l'ADP des plaquettes sanguines : 1.Régulation au cours de l'activation plaquettaire et désensibilisation. 2.Cibles de nouvelles molécules antithrombotiques". Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2002. http://www.theses.fr/2002STR13138.
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Valéra, Marie-Cécile. "Étude de l'effet des oestrogènes sur la fonction plaquettaire : rôle des récepteurs [alpha] et [béta] des oestrogènes". Toulouse 3, 2009. http://www.theses.fr/2009TOU30327.
Abstract (sommario):
Chez la femme, une augmentation du risque thrombotique a été rapportée lors de la prise d'un traitement hormonal substitutif de la ménopause ainsi que dans la seconde moitié de la grossesse, période caractérisée par une élévation majeure des taux d'œstrogènes. Alors que de nombreuses études ont fait la lumière sur les modifications de l'hémostase associées à la prise d'un traitement hormonal substitutif ou à la grossesse, nous disposons de peu de données concernant les effets des œstrogènes sur la fonction des plaquettes sanguines, éléments clés des processus d'hémostase et de thrombose. Au cours de notre travail de thèse, nous avons donc eu pour objectif de déterminer les effets d'une administration chronique de 17 béta-œstradiol à des doses élevées, mais physiologiques, sur la fonction plaquettaire de souris C57BL/6J. Pour ce faire, des études ex vivo nous ont permis de caractériser l'agrégation de plaquettes issues de souris traitées ou non en réponse à des agonistes forts. Nous avons ensuite utilisé un modèle de thromboembolisme afin de comparer in vivo les effets d'une administration de doses élevées d'œstradiol à des doses endogènes. Enfin, l'utilisation de chimères hématopoïétiques nous a amené à définir le rôle des récepteurs des œstrogènes alpha et béta et de la fonction transactivatrice AF-1 du récepteur des œstrogènes alpha dans les effets observés. Mieux comprendre les implications des œstrogènes dans l'augmentation du risque thrombotique pourrait aider au développement de SERMs (Selective Estrogen Receptor Modulators), modulateurs capables de se lier aux récepteurs des œstrogènes et d'induire, selon le tissu considéré, des effets agonistes ou antagonistesAlthough estrogens are recognized to favour a deleterious effect on the venous thrombosis risk and a preventive action on the development of arterial atheroma, their effect on platelet functions in vivo remains unclear. The main aim of this work was to evaluate the impact of a chronic treatment of oestradiol (E2) on platelet functions in mouse. Platelets from E2-treated mice showed a marked decrease in their responsiveness ex-vivo compared to non-treated mice. Accordingly, E2 treatment increased tail bleeding time and elicited an impressive resistance to thromboembolism following injection of an epinephrin-collagen mix. Haematopoietic transgenic chimera mice demonstrated that E2 action on bleeding time and thromboembolism resistance was mediated by the haematopoietic ER alpha but not ER béta and that ER alpha activation function-1 was dispensable. Altogether, we demonstrate that E2 can elicit an antiaggregant action in an ER alpha-dependent, activation function-1-independent manner, opening the way for new potential strategies for antithrombotic and vasculoprotective therapies
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Kammerer, Nadège. "Rôle des récepteurs purinergiques plaquettaires dans la thrombose expérimentale localisée et étude du temps de saignement chez la souris". Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2004. http://www.theses.fr/2004STR13151.
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Addi, Tawfik. "Identification des partenaires moléculaires répondant à l'activation d'Aryl hydrocarbon Receptor par les toxines urémiques". Thesis, Aix-Marseille, 2019. http://www.theses.fr/2019AIXM0127.
Abstract (sommario):
La maladie rénale chronique a pour principale complication les maladies cardiovasculaires. L’accumulation des toxines urémiques dérivées de la voie indolique du métabolisme du tryptophane, l’indole-3-acétique acide (IAA) et l’Indoxyl sulfate (IS), sont impliquées dans un phénomène clé des événements cardiovasculaires ; la thrombose. Ces toxines induisent l'expression et l'activité pro coagulante du facteur tissulaire (FT), principal initiateur cellulaire de la coagulation sanguine. Le facteur de transcription, Aryl Hydrocarbon Receptor (AHR), un récepteur cellulaire pour les toxines indoliques, est impliqué dans l'induction du FT endothélial. Les mécanismes par lesquels AhR contrôle l’expression du FT dans les cellules endothéliales sont peu connus.L’objectif principal de cette thèse était de déterminer les voies de signalisation et les facteurs de transcription impliqués dans l'expression du FT médiée par AhR et induit par l’IAA et l’IS. L’expression du FT induite par l’IAA et l’IS au niveau endothélial est contrôlée principalement par la transcription. L’IAA et l’IS activent la voie génomique classique d’AhR. Cependant, l’expression du FT n'est pas médiée par cette voie. L’activation du FT en réponse à l’IAA passe par une voie AhR-p38MAPK-NF-kB. En conclusion, l’induction par l'IAA du FT dans les cellules endothéliales humaines implique la voie non génomique d’AhR-p38MAPK/NF-KB. L’identification de cette voie de signalisation suggère que nous puissions dissocier l’effet détoxifiant d’AhR dépendant de la voie génomique, de l’effet prothrombotiqueThe main complication of chronic kidney disease is cardiovascular disease. Accumulation of uremic toxins derived from the tryptophan metabolism indole-3-acetic acid (IAA) and Indoxyl sulfate (IS) pathways, are involved in a key phenomenon of cardiovascular events; thrombosis. These toxins induce the expression and pro-coagulant activity of tissue factor (TF), the main cellular initiator of blood coagulation. The transcription factor, Aryl Hydrocarbon Receptor (AHR), a cellular receptor for indole toxins, is involved in the induction of endothelial TF. The mechanisms by which AhR controls the expression of TF in endothelial cells are poorly understood. The main objective of this thesis was to determine the signaling pathways and transcription factors involved in the expression of AhR mediated TF and induced by the IAA and the SI.The expression of IAA-mediated TF and endothelial IS is controlled primarily by transcription. The IAA and the IS are activating the classical genomic AhR pathway. However, the expression of TF is not mediated by this way. Activation of TF in response to the IAA passes through an AhR-p38MAPK-NF-kB pathway.In conclusion, induction by IAA of TF in human endothelial cells involves the non-genomic pathway of AhR-p38MAPK / NF-KB. The identification of this signaling pathway suggests that we can dissociate the detrimental effect of AhR depending on the genomic pathway, the prothrombotic effect
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Croizet, François. "Modélisation et conception d'antagonistes du récepteur plaquettaire du fibrinogène (αIIb/ß3 - GP IIb/IIIa)". Bordeaux 2, 1997. http://www.theses.fr/1997BOR2B006.
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Makhloufi, Camelia. "Rôle de l’Aryl Hydrocarbon Receptor dans la thrombose durant la maladie rénale chronique". Thesis, Aix-Marseille, 2019. http://www.theses.fr/2019AIXM0585.
Abstract (sommario):
La maladie rénale chronique (MRC) est un problème de santé publique qui a pour principale complication les maladies cardiovasculaires (MCV). La thrombose est un acteur clé dans la progression des MCV. La MRC est caractérisée par l’accumulation de toxines urémiques (TU). Notre équipe a démontré que deux TU indoliques dont l’indoxyl sulfate (IS), induisaient l'expression et l'activité du facteur tissulaire (FT), principal déclencheur de la cascade de coagulation, via l’activation du facteur de transcription Aryl Hydrocarbon Receptor (AhR). Pour comprendre les mécanismes impliqués dans la formation d’un état prothrombotique durant la MRC, nous avons comparé deux modèles murins de MRC : la néphrectomie des 5/6ème et le régime adénine (RA). Les deux modèles présentent une activation de la coagulation. le RA présente une insuffisance rénale plus sévère et une tendance hémorragique absente dans le modèle néphrectomie. L’utilisation du RA chez des souris invalidées pour AhR a été un échec. Ce modèle est résistant à l’induction d’une insuffisance rénale. En conclusion, notre travail confirme l’importance de la caractérisation approfondie d’un modèle avant son utilisation. Le modèle adénine résume bien l’ensemble des troubles de l’hémostase au cours de la MRC mais n’est pas un bon modèle pour étudier le rôle d’AhR dans ces derniersChronic kidney disease (CKD) is a public health problem whose main complication is cardiovascular disease (CVD). Thrombosis is a key factor in the progression of CVD. CKD is characterized by the accumulation of uremic toxins (UT). Our team demonstrated that indolic UTs, including indoxyl sulfate (IS), induced the expression and activity of tissue factor (TF), the main trigger for the coagulation cascade, via the activation of the transcription factor Aryl Hydrocarbon Receptor (AhR). To understand the mechanisms involved in the formation of a prothrombotic state during CKD, we compared two mouse models: 5/6th nephrectomy and adenine diet (AR). Both models have coagulation activation. RA has more severe renal failure and a hemorrhagic tendency absent in the nephrectomy model. The use of AR in mice invalidated for AhR has been a failure. This model is resistant to the induction of renal insuffisency. In conclusion, our work confirms the importance of thorough characterization of a model before its use. The adenine model summarizes all hemostasis disorders during the MRC but is not a good model for studying the role of AhR in them
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Ducros, Elodie. "Cancer et thrombose : Le rôle du récepteur de la protéine C". Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA11T061.
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Bertolino, Frédéric. "Caractérisation et modulation pharmacologiques d'effets cardiovasculaires aigus liés à l'activation du récepteur au thromboxane A2/endopéroxyde". Bordeaux 2, 1995. http://www.theses.fr/1995BOR28355.
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Marque, Pierre-Emmanuel. "Modulation de l'activité de la thrombine". Paris 5, 2002. http://www.theses.fr/2002PA05P625.
Abstract (sommario):
La coagulation du sang est déclenchée par une activation enzymatique en cascade de zymogènes initialement inactifs. Cette cascade, bien que de nature explosive, est sélective et auto-contrôlée. C'est la dernière enzyme générée (la thrombine) qui la module directement et indirectement. L'activité de la thrombine est elle même régulée par trois mécanismes : 1) un auto-contrôle de sa génération, 2) une modulation par la thrombomoduline et 3) sa neutralisation par l'antithrombine. Ces deux derniers mécanismes ont été abordés au cours de cette thèse, plus particulièrement celui de la voie de la protéine C, qui est le seul système anticoagulant inductible donc auto-régulé. La neutralisation directe de la thrombine par son principal inhibiteur plasmatique a été étudiée à l'aide d'un anticorps monoclonal qui permet de distinguer la conformation de l'antithrombine complexée de tous les autres conformères de cette serpine. Cette étude a fourni des informations incontournables sur la nature de l'interaction enzyme-serpine. L'étude sur la "thrombomodulation" a commencé par une cartographie de la spécificité des sous-sites catalytiques de la thrombine à l'aide de substrats à fluorescence réprimée. .Blood coagulation results in sequential activation of plasma proenzyme to their enzyme form. This burst of activation is very selective and auto-regulated. It is the last enzyme (thrombin) who controls directely and indirectely this cascade. Thrombin activity is regulated through three mechanisms 1) an auto-control of its generation, 2) modulation by thrombomodulin and 3) neutralization by antithrombin. The last two mechanisms were discussed in this thesis, especially Protein C activation which is the only inductible anticoagulant system. Direct neutralization of thrombin by antithrombin was investigated through the characterization of a monoclonal antibody that selectively recognizes complexed antithrombin. This antibody reacts with none of the monomeric conformers of antithrombin. These observations limit drastically the possible locations of the defeated protease within the complex. .
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Rafowicz, Stéphane. "L'hirudine : un inhibiteur spécifique de la thrombine". Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05P130.
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GANDOSSI, ERIC. "Pharmacologie de la thrombine associee au caillot". Paris 7, 1999. http://www.theses.fr/1999PA077093.
Abstract (sommario):
La thrombine associee a la fibrine conserve son activite enzymatique et peut activer certains facteurs de la coagulation. Associee a un caillot de fibrine, elle peut egalement activer les plaquettes. Ces effets sont inhibes par des inhibiteurs directs de la thrombine et resistent a l'inhibition par l'heparine/atiii. La thrombine induit egalement la proliferation de nombreuses cellules dont les fibroblastes. Le but de ces travaux est d'explorer de maniere systematique la pharmacologie de la thrombine associee a un caillot et son inhibition par 3 inhibiteurs aux mecanismes d'action differents. Nous montrons que les caillots prepares a partir de ppp ou de prp de lapin induisent l'agregation plaquettaire. Cette agregation est equivalente a 5,5 nm de thrombine en solution pour les caillots ppp et a 3,7nm pour les caillots prp. Les inhibiteurs directs de la thrombine sont capables d'inhiber l'agregation induite par les caillots avec une efficacite proche de celle obtenue face a la thrombine en solution. En revanche, l'agregation induite par les caillots est resistante a l'inhibition par l'heparine. L'agregation induite par les caillots ppp humains est equivalente a 0,8 nm de thrombine en solution. Cet effet est inhibe par les inhibiteurs directs et dans une moindre mesure par l'heparine. Cependant les caillots prp presentent a leur surface un taux de thrombine proche du seuil necessaire a l'induction de l'agregation expliquant qu'ils n'induisent pas ce processus. Nous montrons que les caillots de fibrine induisent la proliferation des ccl39. Cette proliferation est equivalente a 50nm de thrombine en solution lorsque la concentration utilisee pour former les caillots est de 91nm. Cependant nous montrons que cet effet est du a la thrombine liberee dans le surnageant lors de la periode d'incubation, expliquant l'inhibition observee avec l'heparine. Les caillots ppp induisent egalement la proliferation, mais principalement par d'autres facteurs plasmatiques. Les caillots plasmatiques permettent de se rapprocher de la constitution des thrombi arteriels, et nos resultats contribuent a montrer la superiorite des inhibiteurs directs sur l'heparine dans ce contexte. Notre etude renforce egalement le concept assimilant le caillot a un reservoir de molecules actives, et liberables dans l'environnement vasculaire.
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Eliautou, Sandra. "Signalisation déclenchée par le complexe GPIb-V-IX et émission de filopodes dans la plaquette sanguine". Strasbourg, 2009. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2009/ELIAUTOU_Sandra_2009.pdf.
Abstract (sommario):
L’hémostase primaire est la première étape du processus de réparation tissulaire lors d’une lésion de la paroi vasculaire. Elle permet la constriction du vaisseau lésé et la formation d’un clou plaquettaire qui obstrue la brèche. Les plaquettes sanguines jouent un rôle majeur dans ce processus grâce à leurs fonctions d’adhésion, de sécrétion et d’agrégation. Ces étapes d’activation sont accompagnées de changements morphologiques avec au stade initial le passage d’une forme discoïde à une forme sphérique avec extension de filopodes. Les filopodes pourraient favoriser l’interaction entre ligands et récepteurs et ralentir les plaquettes soumises au flux sanguin lors de l’interaction avec la matrice sous-endothéliale. L’émission de filopodes est notamment observée suite à l’interaction du complexe GPIb-V-IX plaquettaire avec le Facteur Willebrand (FW) dans l’étape initiale du processus hémostatique. La voie de signalisation en aval du complexe GPIb-V-IX implique une src kinase, l’activation de PLCγ2, la production d’IP3 et la mobilisation des stocks internes de Ca2+. Les mécanismes et les acteurs moléculaires impliqués dans l’émission de filopodes sont mal connus dans la plaquette. L’objectif de ce travail a été d’étudier ces mécanismes en aval de GPIb-V-IX en caractérisant plus précisément cette voie de signalisation et en évaluant des acteurs impliqués dans l’émission de filopodes dans d’autres types cellulaires. Ces acteurs potentiels ont été évalués en utilisant des souris génétiquement modifiées et des inhibiteurs pharmacologiques. L’émission de filopodes dans la souris a été étudiée dans un modèle d’adhésion sur FW recombinant de souris et également en réponse au fibrinogène et à des agonistes solubles comme l’ADP et la thrombine. La src kinase Lyn et la tyrosine Btk, connues pour participer à l’activation de PLCγ2 en aval de GPVI, ont été évaluées dans des souris déficientes pour Lyn et Btk et exprimant une forme activée constitutive de Lyn (Lyn up/up). Les résultats d’adhésion sur FW indiquent que ces deux kinases ne jouent pas de rôle en aval de GPIb. La GTPase Cdc42, PKCδ et VASP, qui ont été impliquées dans l’émission de filopodes dans différentes cellules, dont la plaquette, ont été évaluées en aval du complexe GPIb-V-IX. Un rôle a été révélé uniquement pour Cdc42 qui semble spécifique de cette signalisation. Deux autres GTPases de la famille Rho, Rac1 et RhoA, ne participent pas à l’émission de filopodes en aval de GPIb. La Myosine IIA, connue pour son rôle dans la contraction du cytosquelette intra plaquettaire, a également été évaluée dans des souris déficientes pour le gène MYH9. L’absence de Myosine IIA empêche l’émission de filopodes en aval de GPIb mais également en réponse aux agonistes solubles comme l’ADP. Afin d’évaluer d’autres acteurs pour lesquels il n’existe pas de lignées murines ou d’inhibiteurs, nous avons établi une lignée cellulaire humaine HEK transfectée par le complexe GPIb-IX capable d’adhérer sur FW et d’émettre des filopodes. Le rôle de RalA, une Ras GTPase susceptible de lier le complexe GPIb via la Filamine, a été évalué dans cette lignée par extinction shRNA montrant une émission normale de filopodes et que cette GTPase n’est probablement pas impliquée en aval de GPIb. Ce travail a permis d’identifier Cdc42 et la Myosine IIA comme étant impliquées dans la signalisation GPIb-V-IX menant à l’émission de filopodes et d’éliminer plusieurs acteurs potentiels (Lyn, Btk, PKCδ, VASP, RalA, Rac1 et RhoA). Le rôle potentiellement important de l’émission de filopodes en aval de ce récepteur à un stade précoce du processus hémostatique justifie de compléter sa caractérisation dans le but d’identifier de nouvelles cibles antiplaquettaires.
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Marque, Pierre-Emmanuel. "Rôle des exosites dans la régulation allostérique de la thrombine". Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05P212.
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Bouton, Marie-Christine. "Specificite de la thrombine humaine. Relations structure-fonctions". Paris 7, 1994. http://www.theses.fr/1994PA077210.
Abstract (sommario):
L'etude des relations structure-fonctions de la thrombine est capitale pour la comprehension de la specificite d'action de cette enzyme. Nous avons tout d'abord caracterise les domaines fonctionnels de la thrombine, en montrant l'existence d'une communaute de structure entre le domaine de la thrombine reconnu par le fragment e du fibrinogene et ceux reconnus par la glycoproteine ib (gpib) et la thrombomoduline. En revanche aucune communaute de structure avec le site reconnu par la proteine c n'a ete observee. Notre etude des mutants recombinants wg148, ke154 et du peptide t147-s158 de la thrombine a montre l'absence de role direct de la boucle 144-155 dans l'interaction des differents ligands de la thrombine et a suggere l'intervention indirecte de cette boucle dans le fonctionnement du domaine catalytique de la thrombine. La seconde partie de notre travail concerne l'etude de l'interaction thrombine-plaquettes. Nous avons demontre directement la liaison du peptide 269-287 de la gpibalpha au niveau de l'exosite i de la thrombine. Nous avons produit un fragment amino-terminal recombinant du recepteur de la thrombine qui a permis de mesurer directement l'interaction thrombine-recepteur. Nous avons ainsi pu montrer que le recepteur reconnait l'exosite i de la thrombine via des structures partagees au moins en partie, avec les sites de liaison du fibrinogene et de la thrombomoduline, mais pas avec le site de liaison du fragment proteolytique de la gpib, la glycocalicine. Au total, nous avons precise le degre de specialisation des domaines de reconnaissance de la thrombine pour differents ligands, et le lien existant entre l'interaction thrombine-gpib et la proteolyse du recepteur plaquettaire de la thrombine
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CHEN, LI XIN. "Relation structure-fonction du recepteur de la thrombine". Paris 11, 1998. http://www.theses.fr/1998PA112266.
Abstract (sommario):
De nombreuses maladies renales sont associees a des depots de fibrine intrarenaux, temoignant de l'activation locale de la coagulation et de la formation de thrombine. Outre son role dans la coagulation, la thrombine a des effets cellulaires par l'intermediaire de recepteurs specifiques. Apres l'activation par la thrombine, les recepteurs induisent une la signalisation intracellulaire. Ils subissent egalement une internalisation, phenomene qui participe a l'arret de la signalisation. Nous avons montre que l'endotheline-1, un vasoconstricteur, induit une internalisation rapide et prolongee du recepteur de type 1 de la thrombine par-1 dans les cellules epitheliales glomerulaires humaines. Cette internalisation heterologue par l'endotheline-1 depend de l'activation de la proteine kinase c. Par mutagenese dirigee, nous avons etudie les roles des differents domaines de par-1 sur l'internalisation spontanee ou induite par l'agoniste dans les cellules cho transfectees de facon stable avec differents mutants de par-1. Nos resultats indiquent que la troisieme boucle intracellulaire et l'extremite c-terminale de par-1 sont necessaires a l'internalisation induite par la thrombine. En revanche, seulement l'extremite c-terminale est impliquee dans l'internalisation induite par le pma. Elle joue aussi un role dans l'internalisation spontanee de par-1. Enfin elle est le site unique de phosphorylation de par-1 induite sous l'effet de la thrombine et du pma. Nous avons etudie la proliferation cellulaire et l'activation de la map kinase par ces differents recepteurs mutes. Nous avons montre le role de la troisieme boucle intracellulaire et de l'extremite c-terminale de par-1 dans la transduction des signaux et le couplage aux differents type de proteines g. Pour etudier le role de par-1 in vivo, nous avons utilise un modele de glomerulonephrite induite par l'injection d'un antiserume anti-membrane basale glomerulaire chez les souris normales et les souris invalidees pour par-1. Nos resultats montrent que par-1 est necessaire et tres important pour l'apparition des depots de fibrine et la formation des croissants glomerulaires.
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Sanchez, Caroline. "Influences génétique et environnementale de la génération de thrombine". Thesis, Aix-Marseille 2, 2011. http://www.theses.fr/2011AIX20658.
Abstract (sommario):
Dans ce travail nous nous sommes intéressés à caractériser les modulateurs génétiques et environnementaux de la génération de thrombine (ETP).Nous avons montré que le taux d’antithrombine (AT) peut être considéré comme un facteur continu de risque de thrombose. L’ETP, le plus élevé, est observé chez les porteurs d’un déficit quantitatif en AT. Les porteurs de la mutation AT Cambridge II présentent également une augmentation de l’ETP. Parallèlement à l’AT, nous avons confirmé l’effet positif de l’allèle PT 20210A sur la génération de thrombine d’autant plus qu’il existe des antécédents personnels de thrombose veineuse (TV). A côté de ces contributions, nous avons confirmé le rôle des taux plasmatiques de fibrinogène et de facteur II, du groupe sanguin et de la prise de contraceptifs oraux sur l’ETP.Nos résultats montrent également que chez le rat, un régime riche en graisses a un effet sur la génération de thrombine. Le régime gras maintient des taux élevés d’ETP après le sevrage, alors qu’une alimentation standard le diminue. Cet effet est partiellement expliqué par l’élévation des taux de facteur VII coagulant et ne suit pas l’évolution des modifications classiques du métabolisme glucidolipidique. Les niveaux élevés d’ETP observés pendant une alimentation riche en graisses se normalisent quatre semaines après le retour à une alimentation standard.En conclusion nos données suggèrent que l’ETP peut être considéré comme un indicateur de l’état prothrombotique des patients, mais son utilisation à l’échelle individuelle dans la prédiction du risque de thrombose veineuse reste à approfondir. La mesure de la génération de thrombine peut être un outil utile pour évaluer les conséquences des modifications du régime alimentaire ou des médicaments pour traiter l’obésité sur le potentiel procoagulant circulantIn this work, we studied genetic and environmental modulators of thrombin generation by endogenous thrombin potential (ETP).We showed that plasma levels of antithrombin (AT) can be considered as risk factors for thrombosis. ETP levels are higher in patients presenting a quantitative defect of AT. In addition, mutation AT Cambridge II is also associated with an increase of ETP. Besides the AT, we confirmed a positive effect of the prothrombin 20210A allele on thrombin generation, especially in presence of venous thrombosis antecedents. These contributions, we have confirmed the role of plasma fibrinogen and factor II, blood group and oral contraceptives on thrombin generation.In addition, our results also showed an effect of high fat diet on thrombin generation in rats. Conversely to the standard fat diet, high fat diet maintened high levels of ETP after weaning. High fat diet-induced effects persisted four weeks after switching to standard fat diet. This effect could be partially explained by higher rates of coagulation factors VII and did not follow classical changes in glucidolipidic metabolism.In conclusion our data suggest that ETP can be considered as an indicator of the prothrombotic state in patients, but require more explanation to predict a risk of venous thrombosis. The measurement of thrombin generation may be a useful tool for assessing the impact of changes in diet or medication to treat obesity on circulating procoagulant potential
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Khamlichi, Samir. "Interactions des sérine-protéases avec des supports chromatographiques fonctionnalisés par les amidines". Paris 13, 1990. http://www.theses.fr/1990PA132026.
Abstract (sommario):
Les amidines sont connues comme de puissants inhibiteurs de serine-protéases. Cette inhibition est due à une interaction des fonctions amidines avec le site primaire de fixation de ces enzymes. Dans ce contexte, deux types de supports à base de silice et de polystyrène modifie ont été fonctionnalises soit par des amidines non substituées, soit par des amidines n,n-substituées. La silice a été préalablement enrobée par une couche de polysaccharide modifie afin de minimiser les interactions secondaires et non spécifiques dues a la présence de groupements silanes a la surface de la silice native. L'affinité de ces supports fonctionnalises par les amidines, vis-à-vis de trois serine-protéases (thrombine, plasmine et trypsine) a été étudiée. Cette étude a permis de montrer l'influence de plusieurs caractéristiques structurales de ces enzymes sur leur affinité. Ainsi, de manière analogue à la plasmine, la thrombine possède en dehors de son site primaire de fixation un ou plusieurs sites capables d'interagir avec les amidines non substituées fixées sur le support. La trypsine pour sa part, interagit avec les amidines uniquement par l'intermédiaire de son site primaire de fixation. La chromatographie d'affinité sur ces supports permet d'obtenir à partir d'un échantillon commercial une thrombine de haute pureté avec un rendement de purification d'environ 75%. Dans les mêmes conditions, les performances de séparation obtenues sur un support commercial a base de silice non enrobée, à montre le rôle très important joue par l'enrobage de la silice native par une couche de polysaccharide
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Trapaidze, Ana. "Integration of thrombin-binding aptamers in point-of-care devices for continuous monitoring of thrombin in plasma". Thesis, Toulouse 3, 2015. http://www.theses.fr/2015TOU30050/document.
Abstract (sommario):
La thrombine est l'enzyme principale dans le processus d'hémostase. Les dérèglements de la concentration de thrombine clinique prédisposent les patients à des complications hémorragiques ou thromboemboliques. Le suivi en temps réel de la thrombine dans le sang est donc nécessaire pour améliorer le traitement de patients en état critique. Les aptamères, qui sont de courts nucléotides monobrins semblent constituer des candidats prometteurs pour la reconnaissance moléculaire dans les biocapteurs. L'objectif de ces travaux est l'étude de différentes solutions d'intégration des aptamères dans des dispositifs de diagnostic de type "point of care" pour le suivi en continu de la thrombine dans le plasma. La cinétique d'interaction des aptamères avec la thrombine et leur spécificité vis-à-vis de la prothrombine et des inhibiteurs de la thrombine ont été étudiés par résonance par plasmons de surface. Ces travaux ont démontré la faible spécificité de l'aptamère HD1 vis-à-vis de la thrombine, et la présence d'interactions non-spécifiques avec la prothrombine, les inhibiteurs naturels de la thrombine et l'albumine. Inversement, nous avons observé une bonne affinité de l'aptamère HD22 avec la même liste de cible. Parallèlement, nous avons évalué des stratégies d'intégration d'aptamères dans des dispositifs d'analyse. Le principe de reconnaissance a ensuite été validé et la possibilité de détecter la thrombine dans des gammes de concentration de 5 à 500nM a été démontrée. Enfin, afin d'augmenter la spécificité de la détection de la thrombine, nous avons proposé une nouvelle approche basée sur l'ingénierie de structures dimères interconnectant HD1 et HD22Thrombin is the central enzyme in the process of hemostasis. Normally, in vivo concentration of thrombin is rigorously regulated; however, clinically impaired or unregulated thrombin generation predisposes patients either to hemorrhagic or thromboembolic complications. Monitoring thrombin in real-time is therefore needed to enable rapid and accurate determination of drug administration strategy for patients under vital threat. Aptamers, short single-stranded oligonucleotide ligands represent promising candidates as biorecognition elements for new-generation biosensors. The aim of this PhD work therefore is to investigate different solutions for the integration of thrombin-binding aptamers in point-of-care devices for continuous monitoring of thrombin in plasma. The kinetics of aptamer interaction with thrombin and specificity towards prothrombin and thrombin - inhibitor complexes was rigorously investigated using Surface Plasmon Resonance. These experiments unveiled the complex character of interaction of the HD1 with thrombin, confirming nonspecific interactions with prothrombin, natural inhibitors of thrombin, serum albumin whereas another 29-bp aptamer HD22 proved to be highly affine and specific towards thrombin. On the other hand we explored aptamer integration options. We validated the principle and at the same managed to detect different concentrations of thrombin (5-500 nM). We finally proposed a novel approach to increase sensitivity and specificity for thrombin detection based on the engineering of aptadimer structures bearing aptamers HD1and HD22 interconnected with a nucleic acid spacer
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Plantier, Jean-Luc. "La thrombine dans la physiopathologie vasculaire : une étude structure-fonction". Université Joseph Fourier (Grenoble), 1994. http://www.theses.fr/1994GRE10179.
Abstract (sommario):
La thrombine est une glycoproteine de la famille des proteases a serine. Comparee a celles des autres membres de sa famille, sa structure tertiaire possede une serie de boucles d'insertion particulierement exposees, organisees autour du site actif. Parce que la specificite restreinte de la thrombine pour ses substrats semble faire appel a des interactions a la surface de la molecule, il nous est apparu interessant de determiner quels etaient les roles de ces boucles dans certaines des activites de l'enzyme. Des mutations ponctuelles ont ete realisees dans deux de ces boucles (la boucle b et la boucle ) ainsi que sur la serine du site actif. L'analyse des resultats nous a permis de conclure qu'une thrombine dont le site actif est mutee est denuee de toute activite catalytique. La boucle b est confirmee dans son role de determinant majeur lors de la reconnaissance de tous les substrats testes. En revanche, les mutants que nous avons realises dans la boucle ne modifient que subtilement la poche de specificite primaire et peu les interactions avec les substrats macromoleculaires. En plus de cette etude structurale, nous avons etudier le mecanisme d'augmentation de la permeabilite de l'endothelium induite par la thrombine. La variation de permeabilite depend exclusivement du clivage du recepteur et necessite donc une enzyme catalytiquement active. La reponse des cellules endotheliales depend aussi de l'activation de la proteine kinase c et de phosphorylation sur les tyrosines. Le retour d'une sensibilite a l'enzyme requiere la synthese de nouveaux recepteurs. L'utilisation de nos outils moleculaires nous a permis de montrer que l'activite catalytique de l'enzyme est necessaire pour activer les megacaryocytes et inhiber specifiquement la pousse de leurs progeniteurs, ces deux mecanismes etant medies par le recepteur de la thrombine
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Sébert, Morgane. "Les effets de la thrombine sur l'épithélium colique humain, grâce aux organoïdes (modèle ex vivo, 3D)". Thesis, Toulouse 3, 2018. http://www.theses.fr/2018TOU30006/document.
Abstract (sommario):
La thrombine, une protéase à sérine connue pour être l'acteur clé de la cascade de coagulation, a été décrite pour réguler les processus apoptotiques au niveau du côlon via l'activation de récepteurs activés par des protéases ou PARs (Protease-Activated Receptors). Cependant, les effets de la thrombine sur la cellule épithéliale colique n'ont été étudiés qu'en utilisant des lignées cellulaires. Les conséquences d'une exposition à différentes doses de thrombine sur un épithélium complexe, composés de différents types cellulaires plus ou moins différenciés sont inconnues à ce jour. Un nouveau modèle cellulaire, nommé organoïde, permet de reconstituer un épithélium colique fonctionnel en 3-dimensions (3D) à partir de résections ou de biopsies humaines, et ce, grâce aux capacités d'auto-renouvellement et de différenciation des cellules souches issues des cryptes coliques. Le 1er objectif de ma thèse a été d'évaluer les effets de la thrombine sur la survie, la prolifération, l'apoptose et la différenciation de l'épithélium colique humain, en utilisant le modèle organoïde. Puis, de déterminer l'implication des récepteurs PAR1 et PAR4 activés par la thrombine dans ces effets. Ainsi, l'ajout de thrombine (à faible dose : 10mU/mL et à forte dose : 50mU/mL) sur une culture d'organoïdes établis à partir de tissus colorectaux normaux entraîne une diminution de moitié de l'activité métabolique et de la prolifération cellulaire. Ces effets sont bloqués en présence d'un antagoniste de PAR1. Le processus apoptotique est, cependant, augmenté d'un facteur 8 en réponse à la thrombine (aux deux doses). Ce processus est inhibé en présence d'antagoniste de PAR1 ou de PAR4. Concernant la différenciation épithéliale, la thrombine diminue le nombre de colonosphères (structures immatures), au profit d'une augmentation du nombre de structures apoptotiques et de colonoïdes (structures plus matures présentant des néo-cryptes). Cet effet est dû à l'activation à la fois de de PAR1 et de PAR4 dans les cellules épithéliales coliques. Mes résultats démontrent que la thrombine exogène agit sur les processus d'apoptose, de prolifération et de différenciation sur un épithélium complexe, issu de la culture de tissus humains. L'utilisation de ce modèle ex vivo permet de comparer les organoïdes pathologiques et normaux, voire de tester les effets d'approches pharmacologiques et de nouveaux médicaments sur ces cultures. Ainsi, la 2nde partie de ce travail de thèse a été d'aborder la mise en place des conditions de culture et d'imagerie nécessaires pour réaliser un screening à haut débit robuste et reproductible, HCS (High-Content Screening), appliquée aux organoïdes. Les conditions de culture d'organoïdes en plaques 96-puits ont été mises au point de même que les conditions permettant d'acquérir des images répondant aux critères nécessaires pour une analyse via un système HCS. Le système Operetta HCS couplé au logiciel d'analyse Harmony (PerkinElmer) a été utilisé pour mettre en place une procédure d'analyse permettant de reconnaître les organoïdes, de les dénombrer, de les classer selon leur état de différenciation et de suivre leur croissance tout au long de la culture. Pour conclure, ces travaux de thèse ont permis de mettre en évidence les effets de la thrombine sur l'état métabolique, l'apoptose et la différenciation de l'épithélium colique humain, grâce au modèle 3D ex vivo d'organoïdes colorectaux. L'utilisation de ce modèle complète les approches jusque-là effectuées dans des modèles de lignées de cellules épithéliales, proposant une vision intégrée du comportement d'un épithélium complexe humain. L'approche HCS initiée lors de ces travaux de thèse pourrait permettre d'analyser de façon robuste et automatisée dans ce modèle, les effets d'autres composés et avoir ainsi un impact majeur sur notre compréhension des pathologies épithéliales et sur les tests de nouvelles approches thérapeutiquesThrombin, a serine protease known for its role in the coagulation cascade, was described for its effects on the induction of apoptosis in colonic epithelial cell lines, through the activation of Protease Activated Receptors (PARs). However, the effects of thrombin on complex epithelial structures such as the human intestinal epithelium composed of different cell types and cells at different stages of differentiation, has never been investigated. A new cellular model, named organoid, enables to reconstitute a functional epithelium in 3-dimensions (3D), from human resections or biopsies, thanks to the self-renewal and differentiation properties of stem cells isolated from colonic crypts. The first objective of this thesis was to evaluate thrombin's effects on survival, proliferation, apoptosis and differentiation in human colonic epithelium, using the organoid model. Then, we aimed to determining the implication of PAR1 and PAR4 in the thrombin's effects. Thus, thrombin added (at low dose: 10mU/mL and higher dose: 50mU/mL) to organoid cultures from control patients, led to a decrease by half of metabolic activity and cell proliferation. These effects were blocked by the addition of a PAR1 antagonist. Apoptotic process was 8-fold higher in organoid cultures exposed to thrombin (both doses) and this effect was inhibited by the addition of a PAR1 or a PAR4 antagonist. As per epithelial differentiation, thrombin decreased the number of colonospheres (immature structures) favoring the increase of apoptotic structures and colonoids (budding structures considered as more mature). This effect was due to PAR1 and PAR4 activation as again, it was blocked both by PAR1 and PAR4 antagonist. Taken together, these results reveal that exogenous thrombin acts on apoptosis, proliferation and differentiation processes in complex human colonic epithelium. The use of this ex vivo model will allow to compare pathological versus normal organoid cultures, but also to test the effects of pharmacological approaches and new treatment options directly in cultured human tissues. Thus, the 2nd part of this thesis was to setup the best culture conditions and the best imaging conditions to perform a robust and reproducible screening approach, HCS (High-Content Screening), using organoid cultures. Culture conditions in 96-well plates were set up and allowed to acquire images with the HCS system. Operetta HCS coupled to an analysis software (Harmony, PerkinElmer) was used to develop a specific program enabling the recognition of organoids, their counting, their classification according to their differentiation status and enabling to follow organoid growth in cultures. To sum up, the work performed allowed to highlight the effects of thrombin on metabolic status, apoptosis and differentiation of human colon epithelium, using an ex vivo 3D organoid model. The use this model nicely completed epithelial cell line approaches, offering an integrated view of the complex behavior of human epithelium. The HCS approach initiated within this thesis should allow the automated analysis of a number of drugs and treatments. It should help our understanding of epithelial pathologies and the testing of new therapeutic approaches
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Daniel, Camille. "Biopuce à aptamères anti-thrombine : exploration d'une technique alternative de détection". Phd thesis, Université de Grenoble, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00954086.
Abstract (sommario):
Du fait de leur haute stabilité et bas coût de production, les aptamères suscitent un intérêt croissant, depuis près de 20 ans, dans le design de biocapteurs en tant qu'élément de reconnaissance idéal. Le but de ce travail de thèse est de démontrer l'intérêt et la pertinence d'un outil tel qu'une biopuce à aptamères, associant les avantages des sondes aptamères à ceux d'une détection par SPRi (Surface Plasmon Resonance imaging), permettant une détection sans marquage et en temps réel d'interactions moléculaires. Dans ce but, deux aptamères anti-thrombine (APT1 = 5′- GGT-TGG-TGT-GGT-TGG -3′ et APT2 = 5′-AGT-CCG-TGG-TAG-GGG-AGG-TTG-GGG-TGA-CT-3′) ont été choisis comme objets d'étude modèles. Ce choix a permis d'orienter différents axes de recherche : utilisés indépendamment comme sondes lors de l'élaboration de notre biopuce, ils ont tout d'abord permis de réaliser une détection cinétique optimisée de la thrombine, avec des performances remarquables pour une détection de ce type, ainsi que le calcul de constantes de dissociation en solution et à la surface des biopuces. Mais au-delà d'un simple biocapteur, la biopuce a également pu être utilisée comme véritable plateforme d'étude de la thrombine et de ses interactions, au sein de structures plus complexes telles que la structure " sandwich " entre les deux aptamères, ou d'autres interactions impliquant la thrombine en tant qu'acteur de la cascade de coagulation (inhibition de la thrombine par l'antithrombine III et le cofacteur II de l'héparine, transformation de la prothrombine au sein du complexe prothrombinase).
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Yu, Xiao-Jie. "Chromatographie liquide d'affinité de la thrombine sur résines de polystyrène modifié". Grenoble 2 : ANRT, 1987. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37610827t.
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Quintard, Virginie. "Préparation d'un facteur X* clivable par la thrombine : anti-hémophilique potentiel". Paris 5, 2002. http://www.theses.fr/2002PA05P630.
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Tagzirt, Madjid. "Modulation de la production de thrombine et fibrino-formation dans l'hémostase". Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05P630.
Abstract (sommario):
Le facteur X de la coagulation (FX) permet la génération de thrombine responsable de la formation d’un réseau de fibrine et de l’activation des plaquettes qui libèrent de grande quantité de facteur 4 plaquettaire (PF4). La première partie de ce mémoire concerne la caractérisation d’un mutant naturel du FX dont nous avons décrypté le défaut fonctionnel expliquant le phénotype du patient. Nous avons par ailleurs préparé et caractérisé cinq dérivés du FX activables par la thrombine. Ces dérivés rétablissent une amplification de la génération de thrombine dans un plasma d’hémophile et pourraient constituer un traitement innovant. La seconde partie de ce mémoire porte sur deux fonctions insoupçonnées du PF4. Nous avons dévoilé qu’il limite la génération de thrombine en inhibant l’activation du facteur V plasmatique et qu’il altère profondément la structure du réseau de fibrine. Ces observations apportent un éclairage nouveau sur la formation et la structure du clou plaquettaire initialCoagulation factor X (FX) participates in the generation of thrombin, which forms the fibrin network, and activates platelets which release platelet factor 4 (PF4) in large quantities. The first part of this report concerns the characterization of a novel mutant of FX, whose functional defect was deciphered by looking at the phenotype of the patient. We also prepared and characterized five recombinant proteins of thrombin-activable FX. These recombinants restored the amplification of thrombin production in blood plasma of haemophiliacs and could constitute an innovative treatment. For the second part, we investigated the characteristics of PF4 and revealed two unsuspected functions. We found that it prevents the generation of thrombin by inhibiting the activation of the plasma-derived factor V and we demonstrated that PF4 profoundly alters the structure of the fibrin network. These observations provide a new insight on the formation and the structure of the initial platelet clot
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Yu, Xiao-Jie. "Chromatographie liquide d'affinité de la thrombine sur résines de polystyrène modifié". Paris 13, 1987. http://www.theses.fr/1987PA132003.
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Trumel, Catherine. "Etude des mécanismes biochimiques impliqués au cours de la phase irréversible de l'agrégation plaquettaire". Toulouse 3, 1999. http://www.theses.fr/1999TOU30260.
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Buzluca-Dargaud, Gamze Yesim. "Phénotypage du système de coagulation sanguine par la mesure de génération de thrombine : étude pré-clinique et applications cliniques innovantes". Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10122.
Abstract (sommario):
L'exploration de l'hémostase est basée sur la mesure des temps de coagulation ou des activités des différentes protéines de la coagulation. Cette approche a une faible valeur prédictive du risque individuel hémorragique ou thrombotique encouru par les patients. Nous avons étudié le test de génération de thrombine pour le phénotypage de la coagulation. Les conditions préanalytiques et analytiques permettant de s'approcher le plus possible des conditions physiologiques ont été déterminées avec une bonne répétabilité, reproductibilité du test permettant son utilisation dans des laboratoires hospitaliers. Nous avons montré que le test pouvait détecter l'hypo- et hypercoagulabilités liées à l'hémophilie et aux thromboses veineuses. Nous avons établi une relation entre l'ETP et le risque d'événement clinique hémorragique ou thrombotique chez les hémophiles et les patients thrombotiques. Le test peut aussi être utilisé pour la surveillance des traitements antihémophiliques
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Aubert, Hélène. "Mise en évidence du déterminisme génétique du taux plasmatique de TAFI : Etude de la contribution du TAFI au risque thrombotique artériel". Aix-Marseille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003AIX22063.
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Capot, Rullier Anne. "Thrombine et protéine C activée dans la fibrogénèse et la carcinogénèse hépatiques". Bordeaux 2, 2005. http://www.theses.fr/2005BOR21260.
Abstract (sommario):
Le but de ce travail était d'étudier le rôle de la thrombine et de la protéine C activée (PCA) dans la fibrose hépatique et le carcinome hépatocellulaire (CHC). Nous montrons que des souris KO ou hétérozygotes pour le récepteur à la thrombine PAR-1 ont une susceptibilité réduite à la fibrose hépatique. Dans le CHC humain, PAR-1 est exprimé par les myofibroblastes hépatiques et par de rares cellules tumorales. L'expression du facteur tissulaire (FT), initiateur de la coagulation, est réduite dans les CHC par rapport au foie non tumoral et n'a pas de valeur pronostique. Enfin, la PCA, inhibiteur de la génération de thrombine, a des effets profibrogéniques sur les myofibroblastes hépatiques humains via PAR-1. Son rôle reste à préciser car la préincubation avec la thrombine abolit ses effets. PAR-1 semble être une cible thérapeutique d'avenir dans la prévention de la fibrose hépatique mais son rôle dans le CHC semble mineur comme celui du FT. Le rôle de la PCA reste à définir in vivoThe aim of this work was to study the role of thrombin and Activated Protein (APC) in liver fibrosis and hepatocellular carcinoma (HCC). We found that KO and heterozygous mice for the main receptor of thrombin, PAR-1, had a reduced susceptibility to CC14-induced fibrosis. In human HCC, liver myofibroblasts and few tumor cells expressed PAR-1. The expression of tissue factor, the main iniitiator of coagulation, was lower in HCC than in non tumoral liver and its expression had no pronostic significance. Finally, PCA, an inhibitor of thrombin generation, had profibrogenic effects in human liver myofibroblasts via PAR-1. Its role is still ill-defined because preincubation with thrombin abolished its effects. PAR-1 could be a promising target for antifibrotic liver treatment. The role of PCA must be addressed in vivo. PAR-1 and tissue factor do not appear as major actors of liver carcinogenesis
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Brunette-tournier, Agnès. "Recherche d'une hypercoagulabilité au cours de l'hypertension artérielle pulmonaire". Thesis, Nancy 1, 2010. http://www.theses.fr/2010NAN10133/document.
Abstract (sommario):
L'hypertension pulmonaire (HTP) est une affection marquée par une dysfonction endothéliale et des thromboses in situ. L'état hypercoagulable a souvent été postulé mais il n'a jamais été clairement été démontré. Notre objectif principal était de déterminer si les patients atteints d'hypertension artérielle pulmonaire idiopathique (HTAPi), d'hypertension artérielle associée (HTAP associée) ou d'hypertension pulmonaire secondaire à une maladie respiratoire présentaient une hypercoagulabilité in vitro grâce la thrombinographie. Le second objectif de ce travail était d'étudier la dysfonction endothéliale chez les patients atteints d'HTAPi. Nous avons montré que certains patients atteints d'HTAPi présentent une hypercoagulabilité in vitro. Par contre nous n'avons pas pu montrer d'hypercoagulabilité dans les autres groupes de patients. La maladie sous-jacente pourrait expliquer en partie la différence mais cela reste encore à établir. Nous avons également montré que les patients atteints d'HTAPi ont une dysfonction endothéliale marquée par une augmentation du facteur von Willebrand, du Tissue Factor Pathway Inhibitor et une diminution de la thrombomodulinePulmonary hypertension (PH) is an affection with an endothelial dysfunction and in situ thromboses. Hypercoagulable state was postulated but was never clearly demonstrated. Our main objective was to determine if patients with idiopathic pulmonary arterial hypertension (iPAH), associated PAH or PH of respiratory diseases had in vitro hypercoagulability with calibrated automated thrombography (CAT). The second objective was to study the endothelial dysfunction in patients with iPAH. We have shown that some patients with iPAH had a hypercoagulable state in vitro. But patients of the other groups had no hypercoagulability. The underlying disease could explain at least in part the difference but it still remain to establish. We have shown that patients with iPAH had an endothelial dysfunction with increase of von willebrand factor, Tissue Factor Pathway Inhibitor and decrease of thrombomodulin
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De, Rache Aurore. "Caractérisation électrochimique et spectroscopique de sondes aptamères quadruplexes impliquées dans la détection de la thrombine". Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2012. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/209595.
Abstract (sommario):
Les biosenseurs basés sur des aptamères quadruplexes comme celui de la thrombine (TBA) recourent souvent à l’élongation de l’aptamère. La flexibilité accrue de l’aptamère-sonde facilite la reconnaissance de la cible et améliore donc sa détection. Or le reploiement des structures quadruplexes est influencé notamment par l’ajout de nucléotides à leur extrémité. Du fait de l’importance de la structure de la sonde pour la reconnaissance, nous avons dans un premier temps comparé le type de reploiement adopté par 2 séquences allongées, GTA GGT TBA et TTT TTT TBA, à celui de TBA et ce en présence de différents cations (Ba2+, Ca2+, K+, Mg2+, Na+, NH4+, Rb+ et Sr2+). La stabilité thermique de ces structures a aussi été étudiée. Nous avons montré qu’alors que TBA se reploie toujours en un quadruplexe anti-parallèle, les séquences allongées peuvent également adopter une conformation parallèle. Les différences entre les résultats obtenus avec les deux séquences allongées indiquent que, contrairement à ce qui se fait dans la littérature, le choix de ces nucléotides devrait être effectué en fonction de la structure adoptée par la sonde allongée dans les conditions d’interaction envisagées.La deuxième partie du travail a porté sur l’interaction entre les aptamères et le [Ru(NH3)6]3+, fréquemment utilisé pour quantifier des sondes ADN immobilisées. Nos mesures mettent en évidence un comportement électrochimique inédit pour le [Ru(NH3)6]3+ en interaction avec les aptamères. La notion de [Ru(NH3)6]3+ « confiné » a été introduite pour distinguer cette interaction du cas purement électrostatique bien connu. La stœchiométrie d’interaction entre le [Ru(NH3)6]3+ confiné et la partie quadruplexe des séquences d’aptamère a été évaluée à 2 complexes métalliques par quadruplexe et confirmée, en solution, par dichroïsme circulaire (CD). Ces mesures montrent aussi que ce marqueur redox déstabilise la structure quadruplexe anti-parallèle de TBA et que pour les séquences GTA GGT TBA et TTT TTT TBA, il stabilise des structures quadruplexes parallèles. Dans le cas des séquences allongées, l’interconversion entre les structures parallèles et anti-parallèles a été suivie par CD lors d’une compétition ionique entre les cations [Ru(NH3)6]3+ et K+.
Sur base des différentes interactions mises en évidence entre le [Ru(NH3)6]3+ et les aptamères, diverses pistes de détection de la thrombine ont été explorées. Les conditions d’immobilisation des sondes ont été optimisées sur base des dimensions de la thrombine. La détection de cette protéine cible a été réalisée avec succès d’une part en exploitant l’interaction purement électrostatique du [Ru(NH3)6]3+ et d’autre part grâce à la formation de [Ru(NH3)6]3+ confiné.
Doctorat en Sciences
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Besbes, Samaher. "Rôle de la Protéine C, un anticoagulant naturel, dans l’association thrombose et cancer". Thesis, Paris 11, 2015. http://www.theses.fr/2015PA11T048/document.
Abstract (sommario):
Il est désormais admis que le caractère invasif d'une tumeur est lié, non seulement, au génotype des cellules cancéreuses, mais aussi à leurs interactions avec le microenvironnement tumoral (MT). Au sein du MT, une déstabilisation de la matrice stromale favorise la progression tumorale et la dissémination métastatique. Le remaniement de la matrice extracellulaire est souvent piloté par des enzymes protéolytiques. En revanche, les effets de l'inhibition de la formation de cette matrice sont peu étudiés. C’est dans cette optique que nous nous sommes intéressés à la protéine C (PC) et son récepteur endothélial (EPCR) et à leur rôle dans la tumorigenèse des leucémies et des cancers solides.L’EPCR est exprimé par un grand nombre de lignées cellulaires cancéreuses. Il est aussi détecté dans le compartiment tumoral chez des patients atteints de pathologie tumorale. Son gène est hautement conservé. Il possède cependant plusieurs polymorphismes. Un de ces SNPs (single nucleotide polymorphism) - 6936A/G - se traduit par la libération d'une forme soluble circulante de l'EPCR (EPCRs) résultant de la protéolyse de la forme membranaire. Chez des patients leucémiques, une fréquence élevée du SNP 6936A/G est observée et associée à la survenue de thrombose. D'autre part, l’EPCR est détecté in situ dans la majorité des biopsies tumorales testées et sécrété en grande quantité dans les ascites. La fixation de la PC sur l’EPCR et son activation augmentent la survie et le potentiel migratoire des cellules cancéreuses. Aussi, la PCA est capable de moduler, par communication paracrine, la sécrétion de plusieurs interleukines et cytokines. Ainsi, la stimulation de cellules du cancer de l'ovaire par la PCA induit la synthèse d'une thrombopoéïtine ovarienne fonctionnelle. Cette cytokine étant régulatrice de la production de plaquettes, la PCA semble être de nouveau à l'interface entre troubles de l'hémostase et pathologie cancéreuse. L’élucidation du rôle complexe de la PCA et de son récepteur endothélial dans la carcinogenèse permettrait non seulement de dégager de nouvelles approches thérapeutiques, mais aussi de prévenir le risque de thrombose associée au cancer et d’en réduire la morbiditéIt is now recognized that the invasiveness of tumor cells is not only related to the genotype of these cells but also to their interaction with tumor microenvironment (TM). Within the TM, stromal matrix destabilization promotes tumor progression and metastatic dissemination. The extracellular matrix remodeling is often driven by proteolytic enzymes. However, few studies have investigated the effects of an impairment of the matrix formation. Given these facts and circumstances, we were interested in protein C (PC) and its endothelial receptor (EPCR), as well as in their role in tumorigenesis in leukemia and solid cancers. EPCR is expressed by a wide range of cancer cell lines. It is also detected within the tumor compartment in patients with malignant diseases. EPCR gene is highly conserved but nevertheless contains polymorphisms. One of these SNPs (single nucleotide polymorphism) - 6936A/G – reflects – in the release of a soluble circulating form (EPCRs) resulting from the proteolysis of membrane-associated form. In leukemic patients a high incidence of 6936A/G SNP is observed and associated with thrombosis events. Moreover, EPCR is detected in the majority of tumor biopsies and is abundantly secreted in ascitic fluid. The PC attachment to EPCR and its activation promotes cell survival and migratory potential of tumor cells. Also, APC is able to modulate, by a paracrine manner, interleukins and cytokines secretion. Thus, ovarian cancer cells stimulation by APC induces the synthesis of a functional ovarian thrombopoietin. As this cytokine has a regulatory effect on platelet production, APC may be once again at the interface between hemostasis disorders and coagulation. The elucidation of the intricate role of APC and its endothelial receptor could permit not only to identify new therapeutic approaches but also to prevent cancer-associated thrombosis risk and to decrease morbidity in cancer patients
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Forest, Marie-Anne. "Utilisation de la thrombine et de la fibrine pour l'amélioration du succès de greffe de myoblastes chez le patient atteint de dystrophie musculaire de Duchenne". Thesis, Université Laval, 2009. http://www.theses.ulaval.ca/2009/26316/26316.pdf.