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Le, Du Julie. "Développement d'antagonistes des récepteurs CXCR2 contre les pathologies angiogéniques oculaires et le cancer". Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2024. http://www.theses.fr/2024COAZ5067.
Testo completoAbstract (sommario):
L'angiogenèse, ou processus de formation de nouveaux vaisseaux sanguins, joue un rôle majeur dans la progression de nombreux cancers et diverses pathologies oculaires. Les récepteurs aux chimiokines CXCR2 sont impliqués dans ces processus en médiant la prolifération cellulaire, l'inflammation et la formation de nouveaux vaisseaux sanguins. Le but de cette thèse a donc été de développer des antagonistes des récepteurs CXCR2 pour inhiber ces mécanismes pathologiques, et en particulier l'angiogenèse pathologique tumorale et oculaire. Sur la base de recherches antérieures, nous avons étudié de nouveaux analogues de N,N'-diarylurée comme inhibiteurs de la voie ELR+CXCL-CXCR2, pour le traitement du cancer. Deux séries d'analogues ont été synthétisées afin d'étudier la relation structure-activité et d'optimiser un composé lead. Des évaluations sur des lignées cellulaires de cancer du rein, de la tête et du cou et de mélanomes uvéaux, ainsi que sur des cultures sphéroïdes 3D ont identifié un composé lead optimisé, montrant une inhibition significative de l'invasion, de la migration et de la néo-angiogenèse. De plus, des études de pharmacologie, de pharmacodynamie et de polymorphisme ont été réalisées. Dans le cadre des pathologies oculaires angiogéniques, le développement d'une seconde famille de composés a été poursuivi, avec notamment l'étude de nouvelles voies de synthèse en vue d'une montée en échelle pour une future production industrielle et des études de formulation afin de réaliser des préparations de principes actifs sous forme de collyre. Enfin, une nouvelle série de composés à visée anticancéreuse a été conçue et une voie de synthèse a été développée pour obtenir une première série d'analogues. L'évaluation des activités biologiques de ces composés a permis de dégager une relation de structure-activité préliminaireAngiogenesis, the process of forming new blood vessels, plays a crucial role in the progression of various cancers and ocular diseases. CXCR2 chemokine receptors are implicated in these processes by mediating cell proliferation, inflammation, and the formation of new blood vessels. This thesis aims to develop CXCR2 receptor antagonists to inhibit these pathological mechanisms, particularly pathological tumor and ocular angiogenesis. Based on previous research, we investigated new N,N'-diarylurea analogues as inhibitors of the ELR+CXCL-CXCR2 pathway for cancer treatment. Two series of analogues were synthesized to study the structure-activity relationship and to optimize a lead compound. Evaluations on renal, head and neck cancer, and uveal melanoma cell lines, as well as on 3D spheroid cultures, identified an optimized lead compound showing significant inhibition of invasion, migration, and neo-angiogenesis. Additionally, pharmacology, pharmacodynamics, and polymorphism studies were conducted.In the context of ocular angiogenic diseases, the development of a second family of compounds was pursued, including the study of new synthetic routes for scaling up for future industrial production and formulation studies to create active ingredient preparations in the form of eye drops.Finally, a new series of anticancer compounds was designed, and a synthetic route was developed to obtain a first series of analogues. The evaluation of the biological activities of these compounds allowed the establishment of a preliminary structure-activity relationship
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Mateo, Lou. "Synthèse et évaluation de nouveaux antagonistes des récepteurs CXCR1-2 pour cibler conjointement l’angiogenèse et l’inflammation dans les pathologies cancéreuses". Thesis, Université Côte d'Azur, 2021. http://www.theses.fr/2021COAZ4006.
Testo completoAbstract (sommario):
L’angiogenèse et l’inflammation sont deux acteurs primordiaux dans le développement et la progression de nombreux cancers. Une meilleure connaissance des mécanismes cellulaires a permis l’essor des thérapies ciblées anti-angiogéniques. L’intérêt de ces thérapies ciblées anti-angiogéniques, est limité du fait de l’apparition de résistances. En parallèle de la voie du VEGF, il existe un second axe pro-angiogénique et pro-inflammatoire : la voie des CXCL-ELR+/CXCR, qui est particulièrement sollicitée dans le cancer et notamment dans le cancer du rein métastatique. Le but de cette thèse a été de développer de petites molécules originales capables d’inhiber l’interaction ligands/récepteurs (CXCL/CXCR1-2) afin d’avoir une action duale : à la fois anti-inflammatoire et anti-angiogénique. Le motif 2-aminobenzothiazinone a été choisi pour la préparation de trois familles d’inhibiteurs. Des stratégies de synthèse divergentes permettent d’obtenir les composés des deux premières familles, bien que les conditions opératoires aient nécessité une adaptation en fonction de la réactivité de chaque substrat. La dernière famille de molécules, est accessible selon une stratégie de synthèse linéaire qui comporte cependant des limitations lors de la dernière étape de cyclisation. Les évaluations biologiques des molécules obtenues ont mis en évidence un composé prometteur possédant une IC50 de 0.6 μM sur la lignée 786-O et inhibant la chimiotaxie des cellules exprimant les récepteurs CXCR1-2. Des études supplémentaires vont être effectuée pour confirmer ces résultats préliminaires encourageants afin d’envisager par la suite une campagne in vivo sur des poissons-zèbres, avec ce composé afin d’étudier sa capacité à entraver l’angiogenèseCancer is one of the main causes of death in the world. Angiogenesis and inflammation represent two essential hallmarks in the development and progression of tumors and are essential for the survival of the cancer cells. Better knowledge of cellular mechanisms has enabled the development of targeted anti-angiogenic therapies. However, the emergence of resistance constitutes the main limitation of these current anti-angiogenics targeted therapies, as you may know the anti-VEGF therapies. But in parallel to the VEGF pathway, another crucial pro-angiogenic and pro-inflammatory axis in cancers is required: the CXCL-ELR+/CXCR pathway, particularly in metastatic kidney cancer. The aim of this work was to develop original small organic molecules able to inhibit the ligand/receptor interaction (CXCL-ELR+ / CXCR1-2) in order to have both anti-inflammatory and anti-angiogenic activities. The 2-aminobenzothiazinone pattern was chosen for the preparation of 3 new classes of inhibitors. Divergent synthesis strategies were used to obtain the members of families 1 & 2, although the conditions have been adapted according to the reactivity of each substrate. The last family of molecules was prepared according to a linear synthesis. However, this latter strategy displayed some limitations during the cyclisation step. Thereafter, biological evaluations revealed a promising compound exhibiting an IC50 of 0.6 μM on the 786-O cell line compared with our reference molecule (IC50 = 2 μM). Other result highlighted that this compound also exerted an inhibition of the chemotaxis of cells expressing CXCR1-2 receptors. Further studies on zebrafish are planned with this compound in order to study its ability to interfere with the angiogenesis phenomenon in vivo
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Desurmont, Thibault. "Etude de l'implication des chimiokines et de leurs récepteurs dans la survenue d'une rechute métastatique chez des patients atteints d'un cancer du côlon métastatique et traités par chirurgie hépatique avec ou sans chimiothérapie néoadjuvante". Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S042/document.
Testo completoAbstract (sommario):
Notre objectif était d’analyser l’implication potentielle des voies associées aux récepteurs de chimiokines CXCR2 et CXCR4 dans le cancer colorectal métastatique au foie. Les niveaux d’expression de CXCR2, CXCR4 et de leurs chimiokines étaient évalués dans les métastases hépatiques de cancers colorectaux dans le but d’étudier leurs corrélations avec la survie globale et la survie sans récidive de patients ayant reçu, ou non, une chimiothérapie néoadjuvante. Des analyses d’expression pour RT-PCR quantitative et immunohistochimie étaient réalisées en utilisant des prélèvements humains de métastases hépatiques de cancers colorectaux. Les niveaux d’expression de CXCR2, CXCR4 et de leurs ligands étaient statistiquement analysés en fonction des traitements par chimiothérapie néoadjuvante administrés ou non, et en fonction du suivi des patients. Des modèles murins de xénogreffes sous-cutanées et orthotopiques intracaecales ont été mis au point et utilisés pour étudier l’expression de CXCR2, CXCR4 et CXCL7 en relation avec le traitement des souris par chimiothérapie.Nous avons montré que la surexpression de CXCR2 et CXCL7 était corrélée à de plus courtes survies globales et sans récidive de nos patients. En analyse multivariée, l’expression de CXCR2 et de CXCL7 étaient des facteurs indépendants de survie globale et sans récidive. La chimiothérapie néoadjuvante augmentait significativement l’expression de CXCR2, et de CXCL7 de façon proche de la significativité. Les résultats de nos modèles murins ont montré une tendance à la surexpression de nos gènes d’intérêts dans les tissus tumoraux des souris traités. En conclusion, ces résultats suggèrent l’implication de la voie de signalisation CXCL7/CXCR2 comme facteur prédictif de mauvais pronostic dans le cancer colorectal métastatique. Les chimiothérapies à base de 5 Fluoro-uracile augmentent l’expression de ces gènes dans les métastases hépatiques, fournissant une explication sur l’agressivité des tumeurs métastatiques en échappement thérapeutique. Un blocage sélectif de l’axe CXCR2/CXL7 pourrait fournir de nouvelles opportunités thérapeutiquesOur aim was to analyze the potential role of chemokine receptors CXCR2 and CXCR4 signalling pathways in liver metastatic colorectal cancer (CRC) relapse. Expression levels of CXCR2, CXCR4, and their chemokine ligands were evaluated in liver metastases of colorectal cancer in order to study their correlation with overall and disease-free survival of patients having received, or not received, a neoadjuvant chemotherapy regimen.Quantitative RT-PCR and CXCR2 immunohistochemical staining were carried out using human CRC liver metastasis samples. Expression levels of CXCR2, CXCR4, and their ligands were statistically analyzed according to treatment with neoadjuvant chemotherapy and patients ' outcome. Murine models of subcutaneous and orthotopic intracaecal xenografts have been developed and used to study the expression of CXCR2, CXCR4 and CXCL7 in connection with the treatment of mice with chemotherapy.We showed that CXCR2 and CXCL7 overexpression are correlated to patient’s shorter overall and disease-free survival. By multivariate analysis, CXCR2 and CXCL7 expressions are independent factors of overall and disease-free survival. Neoadjuvant chemotherapy increases significantly the expression of CXCR2 and CXCL7 was overexpressed close to significance. Results of our mouse models have shown a trend over-expression of our interest genes in tumor tissues of the treated mice.In conclusion, we show the involvement of CXCL7/CXCR2 signalling pathways as a predictive factor of poor outcome in metastatic CRC. 5-Fluorouracil-based chemotherapy regimens increase the expression of these genes in liver metastasis, providing one explanation for aggressiveness of relapsed drug-resistant tumors. Selective blockage of CXCR2/CXCL7 signalling pathways could provide new potential therapeutic opportunities
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Benbrika, Radhia. "Etude des mécanismes impliqués dans le processus métastatique dans le cancer colique humain : implication de l'axe CXCL12/CXCR4/CXCR7". Thesis, Strasbourg, 2018. http://www.theses.fr/2018STRAJ125.
Testo completoAbstract (sommario):
Malgré les diagnostics précoces et les avancées thérapeutiques, le taux de mortalité chez les patients diagnostiqués d’un CCR au stade métastatique reste très élevé. L’objectif de ce travail a été d’étudier le rôle de la chimiokine CXCL12 et ses deux récepteurs CXCR4 et CXCR7 dans processus métastatique. J’ai comparé l’expression de la chimiokine CXCL12 dans des tumeurs coliques humaines avec les tissus sains associés puis je me suis intéressée aux mécanismes de régulation de cette expression et plus particulièrement la régulation épigénétique. J’ai montré que le promoteur de CXCL12 est méthylé dans 35% des CCR et qu’un défaut d’acétylation des histones du promoteur entraîne la perte d’expression de CXCL12. Des enzymes impliquées dans la régulation des mécanismes épigénétiques, potentiellement liées à ce défaut d’acétylation ont été identifiées par l’analyse des tumeurs par PCR Array et parmi ces facteurs, j’ai identifié l’histone acétyl-transférase PCAF dont l’expression est diminuée dans les tumeurs. Enfin, pour comprendre le rôle respectif de CXCR4 et de CXCR7 dans la dissémination métastatique, j’ai invalidé l’expression du gène des récepteurs dans la lignée colique humaine SW480 par Crispr-Cas9, puis j’ai comparé la capacité migratoire des cellules in vitro et leur potentiel métastatique in vivo. L’induction d’une perte d’expression du récepteur CXCR7 n’a pas eu d’impact sur le développement des métastases pulmonaire et hépatique in vivo, mais a entraîné une baisse de la migration in vitroDespite early cancer detection and therapeutic advances, the mortality rate in patients diagnosed with CRC at the metastatic stage remains very high. The aim of this work was to study the role of the chemokine CXCL12 and its two receptors CXCR4 and CXCR7 in the metastatic process. I compared the expression of the chemokine CXCL12 in human colon tumors with the associated healthy tissues, then I focused on the mechanisms regulating this expression and more particularly the epigenetic regulation. I have shown that the CXCL12 promoter is methylated in 35% of the CCR and that a lack of histone acetylation of the CXCL12 promoter causes the loss of its expression. Enzymes involved in the regulation of epigenetic mechanisms, potentially related to this acetylation defect, were identified by Array PCR on tumors and among these factors, the histone acetyl transferase PCAF, whose expression is decreased in tumors, was identified. Finally, to understand the respective role of CXCR4 and CXCR7 in metastatic spread, I invalidated the expression of both receptor genes in the human colonic line SW480 by Crispr-Cas9, and then compared the migratory capacity of the cells in vitro and their metastatic potential in vivo. Inducing a loss of expression of CXCR7 receptor did not have an impact on the development of pulmonary and hepatic metastases in vivo, but resulted in a decrease in in vitro migration
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Cutolo, Pasquale. "Etude de l'interaction structurelle et fonctionnelle entre la chimiokine CXCL12 et ses récepteurs : CXCR4 et ACKR3/CXCR7". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016SACLS550/document.
Testo completoAbstract (sommario):
L'axe formé par la chimiokine CXCL12 et son récepteur CXCR4 est conservé chez les vertébrés où il joue un rôle important dans l'embryogenèse et la vie adulte, régule de nombreux processus des réponses immunitaires grâce à ses fonctions dans la migration cellulaire, la survie et la prolifération.En outre, cet axe est impliqué dans les processus pathologiques tels que les cancers (croissance et métastase) et immunodéficiences ainsi que des dysfonctionnements (par exemple l'expression dérégulée, polymorphismes ou mutations) et est également détourné par certains agents pathogènes (par exemple le virus de l'immunodéficience humaine, virus du papillome humain).Un grand groupe de travail est consacré à cette paire comme cible thérapeutique, mais seulement un composé (à savoir Plérixafor) a atteint l'approbation pour une utilisation clinique faisant le potentiel de cet axe comme cible de médicament encore inexploré.Bien que cet axe est l'objet d'un grand intérêt, des questions demeurent quant aux déterminants structurels impliqués dans l'interaction CXCL12/CXCR4.Cependant, la structure récemment résolue par diffraction de CXCR4 a donné quelque indice au sujet de ces questions, et au delà, la possible stoichiométrie entre CXCL12 et CXCR4.Plusieurs éléments de preuve appuient le concept que les formes CXCR4 homo- et hétéro- oligomères (qui peut contribuer à la diversité des fonctions de récepteur), telles que la structure de diffraction, le gain de fonction d'un récepteur CXCR4 mutant responsable du syndrome WHIM et la modulation allostérique des fonctions de CXCR4 par CXCR7 (ACKR3), le second récepteur de CXCL12. La possibilité de former des oligomères ouvre de nombreuses questions en matière de CXCL12 et ses interactions avec CXCR4 et CXCR7/ACKR3. La stoichiométrie de cette interaction reste une question ouverte, comme le récepteur est capable de former des oligomères avec le même récepteur ou autre récepteurs, en particulier CXCR7/ACKR3. Ce récepteur, connu comme scavenger, n'a pas de structure résolue et son mécanisme d'interaction avec CXCL12 reste inconnu.Afin d'étudier les interactions CXCL12/CXCR4/CXCR7, nous avons appliqué plusieurs techniques de modélisation moléculaire tels que peptid-peptide docking et simulations de dynamique moléculaire.Objets du projet ont étés : la résolution des possibles formes stoichiométriques de l'interaction CXCR4/CXCL12 (modélisation moléculaire, docking et dynamique); la modélisation de la structure du récepteur CXCR7/ACKR3 et son interaction avec CXCL12 (homology modeling), avec caractérisation des domaines et des résidus clef de l'activation des pathways de signalisation en aval du récepteur (mutants CXCR7/ACKR3); l'étude et la caractérisation de nouveaux outils innovants pour la détection de l'oligomerisation de ces récepteurs en conditions endogènes. (Nanobodies, HTRF)Les résultats du premier objectif ont été publiés en janvier 2016 : PMID 26813575.La modélisation de CXCR7/ACKR3 nous a permit de générer plusieurs mutants du récepteur pour tester nos hypothèses sur l’activation.Les nanobodies caractérisés pour CXCR4 seront utilisé dans une deuxième étude pour l’identification des formes oligomériques du récepteur sur tissus et cellulesThe axis formed by the chemokine CXCL12 and its receptor CXCR4 is conserved in vertebrates where it plays an important role in embryogenesis and adult life, regulates many processes of immune responses through its functions in cell migration, survival and proliferation.In addition, this axis is involved in pathological processes such as cancers (growth and metastasis) and immune deficiencies and malfunctions (eg deregulated expression, mutations or polymorphisms) and is also hijacked by certain pathogens (eg HIV, human papilloma virus).A large working group is dedicated to this pair as a therapeutic target, but only a compound (ie Plerixafor) achieved approval for clinical use by the potential of this area as a drug target unexplored.Although this axis is the subject of great interest, questions remain about the structural determinants involved in CXCL12 / CXCR4 interaction.However, the recently resolved diffraction structure of CXCR4 gave some clue about these questions, and beyond possible stoichiometry between CXCL12 and CXCR4.Several lines of evidence support the concept that forms CXCR4 homo- and hetero-oligomers (which can contribute to the diversity of the receptor functions), as shown in the diffraction structure, the gain function of a mutant CXCR4 receptor responsible for the syndrome WHIM and allosteric modulation of CXCR4 functions by CXCR7 (ACKR3), the second receptor of the chemokine CXCL12. The ability to form oligomers opens many issues of CXCL12 and its interaction with CXCR4 and CXCR7 / ACKR3.The stoichiometry of this interaction still remains an open question, as the receptor is capable to form oligomers with the same receptor or other receptors, particularly CXCR7 / ACKR3. This receptor, known as scavenger, has not solved structure and the mechanism of interaction with CXCL12 is unknown.To study the interactions CXCL12 / CXCR4 / CXCR7, we applied several molecular modeling techniques such as peptide-peptide docking and molecular dynamics simulations.Objectives of this project were: the resolution of the different stoichiometric forms for the interaction of CXCR4 and CXCL12 (molecular modeling, docking and dynamic); modeling the CXCR7 / ACKR3 receptor structure and its interaction with CXCL12 (homology modeling), with the characterization of domains and residues key in the activation of downstream signaling pathways of the receptor (CXCR7 / ACKR3 mutants); the study and characterization of new innovative tools for the detection of oligomerization of these receptors in endogenous conditions. (Nanobodies, HTRF)The results of the first objective were published in January 2016: PMID 26813575.Modeling of CXCR7 / ACKR3 allowed us to generate several mutants of the receptor to test our hypothesis about the activation pathways.Nanobodies were fully characterized for CXCR4 to be used in a second study to identify oligomeric forms of the receptor in tissues and cells
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Segret, Audrey. "Implication de la chimiokine CXCL12 et de ses récepteurs CXCR4 et CXCR7 dans le coeur sain et en situations pathologiques". Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05P619.
Testo completoAbstract (sommario):
Les chimiokines sont impliquées dans la chimioattraction. Dans le domaine cardiovasculaire, des études ont suggéré que les chimiokines pourraient être des médiateurs de la fonction cardiaque. L’objectif de ma thèse a été de définir dans le tissu cardiaque, le rôle de la chimiokine CXCL12 à travers sa liaison à chacun de ses récepteurs : CXCR4 et CXCR7. Les travaux présentés dans ce mémoire ont permis de mettre en évidence pour la première fois : l’expression protéique et la localisation dans les cardiomyocytes de l’isoforme spécifique CXCL12g et des récepteurs CXCR4, CXCR7, suggérant que cette chimiokine pourrait à travers ses récepteurs agir selon un système autocrine/paracrine. CXCL12 via ses deux récepteurs CXCR4 et CXCR7 apparaît comme un acteur incontournable dans l’organogenèse comme dans la fonction normale et pathologique du cœurChemokines are involved in chemoattraction. Some studies realized on normal heart and during cardiac pathological condition suggested that these proteins could be considered as key protein of cardiac fonction. The purpose of my thesis was to define in cardiac tissue the role of the chemokine CXCL12 via its interaction with these two receptors: CXCR4 and CXCR7. Findings presented in this report show for the first time that the protein expression and localization of CXCL12g isoforme and CXCR4 CXCR7 receptors in cardiac myocytes suggested that CXCL12 could acts via these two receptors as an autocrine/paracrine system. The chemokine CXCL12 via its two receptors CXCR4 and CXCR7 represented a key protein in the cardiac organogenesis as in normal and pathological cardiac function
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Bouamar, Hakim. "Etude de la régulation de la fonction du récepteur à chimiokine CXCR4 et rôle de CXCR7/SDF-1 dans l'hématopoïèse". Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077001.
Testo completoAbstract (sommario):
Le couple CXCR4/SDF-1 joue un rôle crucial dans la domiciliation des cellules souches hématopoïètiques (CSH). L'étude de la régulation de la fonction de CXCR4 est cruciale pour mieux décrypter les mécanismes de migration, mobilisation et rétention des CSH, Un des modes de régulation implique l'accumulation de neutrophile élastase (NE) et cathépsineG (CG) associée au clivage de l'extrémité N-terminale de CXCR4, Nous montrons que la forme murine de CXCR4 est clivé très rapidement après traitement avec la NE et la CG, Les formes mutées de CXCR4 potentiellement résistants aux deux enzymes que nous avons générées sont toujours sensibles au clivage mais l'étude fonctionnelle de cas mutants a révélé que certains acides aminés sont essentiels à la signalisation de CXCR4. La fonction de CXCR4 est également régulée par la concentration extracellulaire de SDF-1. Nous montrons que le récepteur CXCR7 est capable de lier SDF-1, qui! n'est pas exprimé dans les cellules hématopoïètiques alors que son expression est forte dans les cellules de lignées stromales et primaires et qu'en surexpression, il ne confère ni la capacité migratoire ni l'activation des voies PÎ3K et MAPK en réponse à SDF-1. Cependant CXCR7 peut inhiber de manière paracrine la réponse à SDF-1 de cellules exprimant CXCR4. Finalement, nous avons démontré que des cellules stromales MS-5 surexprimant CXCR7 pouvaient inhiber la prolifération et la capacité de soutient de l'hématopoïèse des cellules hématopoïètiques immatures humaines et murines en piégeant SDF-1 du milieu extracellulaire suggérant fortement que CXCR7 est un récepteur « decoy » qui régule de manière négative la fonction de CXCR4Couple CXCR4/SDF-1 plays a crucial role in the domiciliation of the HSC. The study of the regulation of the fonction of CXCR4 is crucial for better describing the mechanisms of migration, mobilization and retention of the hematopoietic original cells. One of the modes of regulation implies the accumulation of neutrophil elastase{NE) me cathepsinG (CG) associated with the cleavage of the N-terminal of CXCR4. We show that the murine form of CXCR4 is cleaved very quickly after treatment with NE and CG. The mutated forms of CXCR4 potentially resistant to the two enzymes which we generated are always sensitive to cleavage but the functional study of these mutants revealed that certain amino-acids are essential for CXCR4 signaling, The fonction of CXCR4 is also controlled by th0 extracellular concentration of SDF-1. We show that CXCR7 receptor is able to bind SDF- 1, is not expressed in thé hematopoietic cells whereas its expression is strong in stromal cell lines and primary stromal cells and that in overexpression, it confers neither the migratory capacity nor the activation of PI3K and MAPK pathways in response to SDF-1, However, CXCR7 can inhibit in a paracrine manner SDF-1 biological activities of cells expressing CXCR4, FinaHy, we showed that MS~5 stromal celis overexpressing CXCR7 inhibit the proliferation and hematopoiesis of human and murine hematopoietic immature cells by trapping SDF-1 of the extracellular medium strongly suggesting that CXCR7 is a "decoy receptor" which controls in a negative manner the fonction of CXCR4
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Mcheik, Saria. "Conséquences fonctionnelles de l'hétéromérisation des récepteurs aux chimiokines: étude du couple des récepteurs CXCR4/CCR7". Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2017. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/248613/3/SMTDM.pdf.
Testo completoAbstract (sommario):
Les chimiokines sont des petites protéines qui régulent la migration et le "homing" des cellules leucocytaires. Elles jouent également un rôle clef dans le développement de certains cancers en régulant les phénomènes de prolifération, d'angiogenèse ou encore de migration des cellules métastatiques. À ce jour, environs 40 chimiokines et plus de 19 récepteurs appartenant à la famille des récepteurs couplés aux protéines G (RCPGs) ont été répertoriés. De nombreuses études ont montré que les récepteurs liant les chimiokines pouvaient s'associer sous forme de complexes homo et hétéromériques. Les conséquences fonctionnelles associées à l'hétéromérisation sont diverses et fonction de la nature des récepteurs étudiés, du type de cellules sur lesquelles ces récepteurs sont exprimés et de l'expression relative des récepteurs. Cependant, le rôle physiologique exact de l’hétéromérisation des récepteurs aux chimiokines, et des RCPGs de manière générale, resteencore peu connu. Nous avons tenté de répondre à cette question dans ce travail de doctorat en étudiant plus particulièrement l’hétéromérisation de CXCR4 et CCR7 au cours du développement des lymphocytes B. Nous avons montré que le récepteur CXCR4 est exprimé à la surface des lymphocytes B à tous les stades de leur développement et qu’une diminution de l’expression de CXCR4s’opère lors de la transition du stade Pré-B vers les stades B immatures et matures. Cette transition s’accompagne d’une «uprégulation » du récepteur CCR7 qui est le plus fortement exprimé à la surface des lymphocytes B matures. Nous avons par ailleurs montré que la transition du stade Pré-B vers les stades B immatures et matures s’accompagne d’une forte inhibition de CXCR4, les cellules B matures étant totalement réfractaires à la migration dans un gradient de CXCL12. Cette perte totale de fonctionnalité ne pouvant pas s’expliquer par la diminution partielle de l’expression de CXCR4, nous avons testé si l’expression du récepteur CCR7 pouvait contribuer à la perte de fonction de CXCR4 observée. Dans un premier temps, nous avons comparé la capacité de CXCR4 à induire la chimiotaxie des lymphocytes B matures provenant de souris sauvages ou de souris CCR7KO déficientes pour l’expression de CCR7. Nous avons montré que l’absence de CCR7 permet de récupérer une migration significative des lymphocytes B matures dans un gradient de CXCL12. De manière intéressante, l’absence de CCR7 affecte spécifiquement la fonction de CXCR4 mais pas celle des récepteurs CXCR5 et CCR6 également exprimés à la surface des lymphocytes B matures. De plus, l’inhibition de CCR7 des lymphocytes B matures sauvages par des anticorps bloquant ne permet pas de reproduire l’effet de l’absence de CCR7. Ce résultat suggère que la signalisation du récepteur CCR7 ne serait pas impliquée. Nous avons également montré que l’absence de CCR7 s’accompagne d’un nombre plus important de lymphocytes B matures dans la moelle osseuse des souris CCR7KO, en parfait accord avec le rôle connu de CXCR4 dans la rétention des progéniteurs hématopoïétiques au sein de la moelle osseuse. Nous avonségalement montré que l’expression du récepteur humain CCR7 dans la lignée lymphocytaire Pré-B humaine Nalm-6 ou dans des cellules CHO-K1 exprimant le récepteur CXCR4 suffit à induire une perte de fonctionnalité de CXCR4. Tout comme pour les lymphocytes B maturesmurins, cette inhibition s’exerce en absence de toute stimulation de CCR7. Nous avons aussi montré que l’expression de récepteurs CCR7 mutants incapables de lier les chimiokines CCL19 et CCL21 (mutant CCR7NT) ou d’induire une signalisation (mutants CCR7D(R/A)Y et CCR7(N/A)PXXY) sont toujours capables d’induire l’inhibition de CXCR4, ce qui confirme qu’une signalisation CCR7 n’est pas nécessaire pour induire le phénomène de la régulation de CXCR4. Ce résultat montre aussi que les fonctions de signalisation et de régulation de CCR7peuvent être découplées.Nous avons également tenté d’identifier le mécanisme moléculaire associé à l’inhibition de CXCR4 par CCR7. Grâce à l’utilisation de biosenseurs BRET mesurant l’activation des protéines G, nous avons montré que l’expression de CCR7 inhibe fortement l’activation de la protéine Gαi2 connue pour jouer un rôle important dans la migration des lymphocytes. Ce résultat permet donc d’expliquer la perte de migration détectée dans les lymphocytes B coexprimant CXCR4 et CCR7. Cependant, nous avons aussi montré que l’expression de CCR7 n’empêche pas l’interaction physique de la protéine Gαi2 avec le récepteur CXCR4. Nous avons alors émis l’hypothèse que CCR7 exercerait son effetinhibiteur sur CXCR4 en interagissant physiquement avec lui et en altérant sa capacité à activer la protéine Gαi2. Nous avons montré par différentes techniques que le récepteur CCR7 interagit avec CXCR4 et que la conformation du complexe formé par CXCR4 et la protéineGαi2 est différente suivant que cette interaction a lieu au sein d’un homomère CXCR4/CXCR4 ou d’un hétéromère CXCR4/CCR7. L’ensemble de ces données suggère donc que l’hétéromérisation de CXCR4 avec CCR7 change la conformation du complexe CXCR4/Gαi2 et la capacité de CXCR4 à activer la protéine Gαi2. De manière intéressante, l’hétéromérisation de CXCR4 avec CCR7 inhibe également l’activation de la protéine Gαi1 mais pas celle de la protéine Gαi3. Ce résultat très intéressant suggère que l’hétéromérisation CXCR4/CCR7 ne serait pas simplement associée à une inhibition de la fonction de CXCR4 mais plutôt à une modulation de son profil d’activation. Cette hypothèse suggère donc que le récepteur CCR7 jouerait le rôle de modulateur allostérique endogène de CXCR4 capable de moduler l’activation de certaines voies de signalisation tout en en laissant d'autres fonctionnelles. Cependant, le manque de temps ne nous a pas permis de confirmer le maintiend’un signal dépendant de Gαi3 dans les cellules coexprimant CXCR4 et CCR7.L’ensemble de ces résultats suggèrent que le récepteur aux chimiokines CCR7 exercerait le rôle de modulateur allostérique de CXCR4 au cours du développement des lymphocytes B et que cette fonction nécessiterait l’interaction physique de CXCR4 et CCR7.À notre connaissance, ces résultats constituent la première indication que l’hétéromérisation de récepteurs aux chimiokines peut jouer un rôle dans un processus physiologique.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Chabanon, Aurélie. "Rôle de la chimiokine SDF-1/CXCL12 et de des récepteurs CXCR4 et CXCR7 dans la régulation de la quiescence des progéniteurs hématopoïétiques humains". Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA11T088.
Testo completo
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Klein, Valérie. "Contribution aux études structurales des récepteurs de chimoikines CCR5 et CXCR4, principaux co-récepteur du VIH-1 exprimés en système levure et en cellule d'insecte". Strasbourg 1, 2005. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2005/KLEIN_Valerie_2005.pdf.
Testo completoAbstract (sommario):
Les 39 millions de personnes infectées par le VIH/SIDA dans le monde, le coût des traitements, l’émergence de souches virales résistantes et les effets secondaires lourds soulignent la nécessité de trouver rapidement de nouveaux traitements. Une stratégie serait de bloquer l’entrée du virus dans les cellules de l’hôte. Parmi les différents partenaires impliqués dans l’entrée du virus, les récepteurs de chimiokines CCR5 et CXCR4, appartenant à la superfamille des RCPG, sont les deux principaux co-récepteurs du VIH-1. La conception de molécules à effet thérapeutique assistée par ordinateur est l’une des voies envisageables. Cette approche nécessite toutefois d’obtenir la structure 3D de la protéine, ce qui s’avère très complexe dans les cas des RCPG. En effet, ces récepteurs sont naturellement très faiblement exprimés, d’où la nécessité de développer des systèmes d’expression permettant d’obtenir les quantités de protéine pures et actives nécessaires aux études structurales envisagées. Ces récepteurs ont d’abord été exprimés dans la levure méthylotrophe H. Polymorpha, en adressant les protéines surexprimées vers les membranes des péroxisomes. Même si les taux d’expression semblaient prometteurs, les récepteurs produits dans ce système ne lient pas leurs ligands, et semblent former des agrégats indissociables après solubilisation. Nous avons donc testé un nouveau système, basé sur une expression stable et inductible dans les cellules S2 de D. Melanogaster. Les récepteurs ont été fusionnés à l’EGFP pour faciliter les étapes de détection, de quantification et de purification, mais aussi pour développer un test FRET afin de vérifier la fonctionnalité des récepteurs ainsi produits. Le FRET détecté entre EGFP. CXCR4 et SDF-1. TR prouve que les récepteurs sont produits sous forme fonctionnelle dans ce système. Par ailleurs, les récepteurs sont solubilisés par le NP-40 et les quantités de récepteurs obtenus (mg/L) sont compatibles avec les études structurales envisagéesThe 39 millions AIDS infected patients worldwide, the cost of the treatments, the emergence of resistant viral strains and the heavy side effects underline the need for finding new treatments. A new strategy could be to block the virus entry in the host cells. Among the different molecular partners involved in the virus entry, the chemokine receptors CCR5 and CXCR4 belonging to the GPCR superfamily are known to act as the principal HIV-1 co-receptors. These receptors are thus representing ideal targets for entry-blocking drugs and computer-assisted drug design could be a way of choice to discover such molecules. This approach requires however to obtain the 3D structure of the proteins, which is very complex especially in the case of GPCR. Actually, these receptors are naturally very poorly expressed, and efficient and reliable heterologous expression systems are still to be developed to obtain the large quantities of pure and active proteins needed for the structural studies considered. These receptors were first produced in the methylotrophic yeast H. Polymorpha, by targeting the overexpressed proteins towards the membranes of peroxisomes. Even if the expression levels were rather promising, ligand-binding activities of the produced receptors were not measurable and moreover, the receptors were always aggregating after solubilization attempts. Therefore we tested a new system, based on a stable and inducible expression in D. Melanogaster S2 cells. The receptors were N-terminally fused to EGFP as a tag, in order to facilitate the steps of detection, quantification and purification, but also to develop a FRET test in order to check the functionality of the receptors thus produced. The FRET detected between EGFP. CXCR4 and SDF-1. TR proved that the receptors can be functionnaly expressed in this system. Moreover, the receptors could be solulilized by NP-40, and the amounts of protein obtained in this system (mg/L) are compatible with the structural studies considered
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Mona, Christine. "Développement et caractérisation de ligands du récepteur à chimiokine CXCR4". Thèse, Université de Sherbrooke, 2016. http://hdl.handle.net/11143/9588.
Testo completoAbstract (sommario):
Le récepteur à chimiokine CXCR4 est à ce jour l’un des récepteurs couplés
aux protéines G les plus étudiés. Le CXCL12, sa chimiokine endogène induit
l’activation de plusieurs voies de signalisation cruciales à plusieurs processus
physiologiques. Par ailleurs, dans de nombreux processus pathologiques
comme le cancer, le récepteur CXCR4 et/ou son ligand endogène sont
surexprimés et facilite la dissémination et le maintien de conditions
favorables à la prolifération cancéreuse. Afin d’étudier le récepteur CXCR4
et sa signalisation, notre approche vise à développer des ligands ciblant le
CXCR4 en se basant sur CXCL12. Par des études de relation structure-activité
et du design rationnel, nous avons conçu des chimères du CXCR4.
Ces outils pharmacologiques nous permettent de mieux extraire les
déterminants structuraux impliqués dans l’activation du CXCR4 mais aussi
d’étudier les voies de signalisation associées à ces nouvelles entités
chimiques. Nos données de relation structure-activité ont permis de mettre
en évidence deux positions clés sur le N-terminal de nos chimères, la
position 3 et la position 7 cruciales pour l’affinité et l’efficacité
respectivement. Nous avons pu moduler l’efficacité ainsi que l’affinité de
nos chimères en introduisant des acides aminés non naturels capables de
potentialiser l’effet pharmacologique. Nous avons également corrélé nos
résultats de SAR avec de la dynamique moléculaire réalisée à partir des
deux structures cristallographiques du CXCR4. Nos données de dynamique
moléculaire montrent des différences structurales importantes au niveau
des domaines transmembranaires 3 et 7 en présence ou non de nos
chimères. Par ailleurs, nous avons développé un nouveau déterminant
avec des propriétés pharmacocinétiques améliorées comparativement au
déterminant d’affinité des chimères de première génération. La
caractérisation de ce déterminant a par ailleurs révélé son caractère
agoniste inverse. Tous ces résultats apportent des éléments clés pour un
meilleur design de molécules à visée thérapeutique ciblant le CXCR4.
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Sohy, Denis. "Etude de la dimérisation des récepteurs aux chimiokines CCR2, CCR5 et CXCR4". Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2008. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/210282.
Testo completoAbstract (sommario):
La dimérisation des récepteurs couplés aux protéines G est un nouveau concept apparu dans la littérature au cours des quelques années qui ont précédé le début de notre travail. Bien qu’il soit clairement établi que les récepteurs sont capables de former des homo et des hétérodimères, les conséquences fonctionnelles de telles interactions demeurent souvent peu claires. Dans une étude précédente, le laboratoire d’accueil a montré que les récepteurs aux chimiokines CCR2 et CCR5 forment des homo et des hétérodimères de manière constitutive et identifié une coopérativité négative de liaison de nature allostérique entre les deux sites de liaison de CCR2 et CCR5 dans des cellules co-exprimant les deux récepteurs. Dans ce travail, nous avons étendu cette étude au récepteur CXCR4, structurellement plus éloigné que CCR2 et CCR5 entre eux. Nous montrons par une méthode biophysique se basant sur le transfert d’énergie de bioluminescence (le BRET) que CCR2, CCR5 et CXCR4 forment des homodimères et des hétérodimères de manière constitutive. De plus nous démontrons une coopérativité négative de liaison de nature allostérique des deux sites de liaisons pour les hétérodimères CCR2/CXCR4 et CCR5/CXCR4. lorsque CXCR4 est co-exprimé avec CCR2 ou CCR5, la chimiokine spécifique de CXCR4 (SDF-1α) inhibe la liaison du traceur spécifique de CCR2 (MCP-1) ou du traceur spécifique de CCR5 (MIP-1β), et vice-versa. La nature allostérique de ces interactions est démontrée par des expériences mesurant la dissociation de traceurs en présence ou non de compétiteurs. La coopérativité négative de liaison de nature allostérique des deux sites de liaisons est montrée également dans des cellules primaires, excluant tout effet indésirable dû à la surexpression de récepteurs. Nous montrons également que l’antagoniste spécifique de CXCR4 (AMD3100) inhibe la liaison du traceur spécifique de CCR2 (MCP-1) ou du traceur spécifique de CCR5 (MIP-1β), et vice-versa (TAK-779 vs SDF-1α), uniquement quand CXCR4 est co-exprimé respectivement avec CCR2 ou CCR5. Il s’agit là de la première preuve montrant que les interactions allostériques au sein d’hétérodimères de récepteurs aux chimiokines impliquent aussi des antagonistes, et qu’un antagoniste de récepteur aux chimiokines influence la réponse fonctionnelle d’un autre récepteur aux chimiokines auquel il ne se lie pas. De tels effets fonctionnels ont été montré dans des expériences de mobilisation de Ca++, de chimiotactisme sur lymphoblastes et dans des expériences d’air pouch in vivo.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques
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Armando, Sylvain. "Structure quaternaire des récepteurs de chimiokines CXCR4 et CCR2 et interaction avec leur effecteurs". Thesis, Montpellier 2, 2010. http://www.theses.fr/2010MON20208/document.
Testo completoAbstract (sommario):
Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) sont la famille de récepteurs membranaires la plus représentée chez les vertébrés, et la plus grande cible thérapeutique chez l'Homme. L'évolution du paradigme initial qui énonçait une stœchiométrie récepteur : protéine G : effecteur de 1 :1 :1 sera présentée sur le modèle des récepteurs aux chimiokines CXCR4 et CCR2. Grâce à la technique de transfert d'énergie par bioluminescence (BRET), les travaux réalisés durant cette thèse montrent (1) que c'est par un couplage alternatif de CXCR4 à Gα13 au lieu de la voie classique Gαi que les cellules de cancer du sein migrent pour former des métastases, (2) que la désensibilisation de CXCR4 implique le recrutement d'une combinaison définie de protéines (GRK et arrestines) permettant l'arrêt sélectif des multiples voies engagées en réponse à l'agoniste, et (3) que le protomère CXCR4 a un rôle déterminant dans l'engagement de la protéine Gαi et le recrutement de la β-arrestine par l'hétéro-oligomère CXCR4/CCR2 lorsque CCR2 est activé. Dans cette dernière et principale étude, les résultats montrent également que le dimère CCR2 peut s' assembler au dimère CXCR4 pour former un tétramère, et que l'activation de CCR2 influence la conformation du dimère CXCR4. Les phénomènes de coopérativité et d'activation asymétrique déjà rapportés pour cet hétérodimère pourraient donc impliquer l'interaction de quatre protomères. En conclusion les travaux effectués durant cette thèse démontrent une régulation supplémentaire de l'activité des récepteurs chimiokines au niveau de leur structure quaternaire, de leur signalisation, et de l'arrêt de cette signalisationG protein coupled receptors (GPCR) are the most represented cell surface receptors among vertebrates, and the major therapeutic target in humans. The initial paradigm stating a 1 :1 :1 stoichiometry for receptor :G protein :effector has evolved to a more complex model, as illustrated here with the example of the chemokine receptors CXCR4 and CCR2. Bioluminescence resonance energy transfer (BRET) was used to demonstrate that (1) CXCR4 is able to couple Gα13 instead of Gαi to promote breast cancer metastasis, (2) the multiple pathways engaged by stimulation of CXCR4 are selectively desensitized by the specific recruitment of a defined combination of proteins (GRKs and arrestins) and (3) the CXCR4 protomer plays a crucial role during Gαi engagement and β-arrestin recruitment by the CXCR4/CCR2 heterodimer upon CCR2 activation. In this last and main study, the results shown also demonstrate that CCR2 dimers could assemble with CX CR4 dimers into hetero-tetramers, and that CCR2 activation leads to a conformational change in the CXCR4 dimer. Former results showing cooperativity and asymmetric activation of a simple CXCR4/CCR2 heterodimer could then be applied to a tetramer. To conclude, the work done during this thesis demonstrates a more sophisticated regulation of chemokine receptors than previously suspected at 3 different levels: quaternary structure of the protomers, G protein signalling, and signalling termination
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Escot, Sophie. "Rôle de la chimiokine SDF-1 dans la migration des cellules de crêtes neurales cardiaques". Paris 6, 2012. http://www.theses.fr/2012PA066611.
Testo completoAbstract (sommario):
Comprendre comment le cœur se forme au cours du développement est une étape essentielle pour mieux élucider les causes des maladies cardiaques congénitales. Les cellules de crêtes neurales cardiaques (CCN cardiaques) migrent à partir du tube neural et contribuent à la morphogenèse du cœur. Elles colonisent le cœur pour former la paroi des grandes artères, le septum aorticopulmonaire, qui sépare l’aorte du tronc pulmonaire, une partie du septum interventriculaire et l’innervation parasympathique du cœur. Un défaut de migration ou de différenciation des CCN cardiaques entraîne des phénotypes cardiovasculaires comme un tronc artériel commun, un défaut de formation du septum interventriculaire, un ventricule droit à double issue et des transpositions des vaisseaux cardiaques, anomalies communément observées dans les pathologies congénitales cardiaques chez l’homme. Les mécanismes par lesquels les CCN cardiaques contribuent à la morphogenèse du cœur ne sont pas réellement élucidés à l’heure actuelle. Des résultats récents suggèrent que les CCN cardiaques pourraient être guidées vers le cœur par un mécanisme de chimiotactisme. Les souris déficientes pour la chimiokine Sdf1 et pour les deux récepteurs de cette chimiokine, Cxcr4 et Cxcr7 présentent des défauts dans la formation du septum interventriculaire, suggérant que ces anomalies cardiaques pourraient être reliées à un défaut de migration des CCN cardiaques. Nos résultats montrent une expression spécifique et dynamique de la signalisation SDF1/CXCR4/CXCR7 au cours de la migration des CCN cardiaques chez le poulet. La perte de fonction de CXCR4 dans les CCN induit un retard de migration et une augmentation de l’apoptose des CCN cardiaques, ce qui entraîne des malformations cardiaques dont des ventricules droits à double issue et des défauts de septum interventriculaire. L’expression ectopique de SDF-1 induit une chimiotaxie des CCN cardiaques. Nos résultats démontrent donc que SDF-1 régule la migration des CCN cardiaques vers le cœur et qu’un défaut de cette signalisation entraîne des anomalies cardiaques importantes. De la région d’où émergent les CCN cardiaques proviennent également les CCN entériques qui colonisent le tube digestif. Ces deux populations de CCN empruntent des voies de migration distinctes et notre travail a permis de montrer que la chimiokine SDF-1 joue un rôle dans la ségrégation de ces deux populations de CCN. De plus, nos résultats montrent un rôle de SDF-1 et CXCR4 dans la migration des CCN crâniennes à l’origine de la formation de la mâchoire inférieure. L’ensemble de nos résultats, qui démontre une nouvelle fonction de la signalisation SDF-1 au cours du développement embryonnaire ouvre des perspectives nouvelles pour la compréhension et la détection de certaines formes de cardiopathies congénitales isolées ou syndromique chez l’hommeUnderstanding how the heart develops is an essential step for a better understanding of congenital heart diseases. Cardiac neural crest cells (CNC) originate from the neural tube and contribute to heart morphogenesis. They migrate through the heart by giving rise to mesenchymal cells of the outflow tract, to the ventricular septa and the semilunar valves, as well as to neuronal cells of the cardiac ganglia and smooth muscle cells of the great arteries. Failure in CNC migration or differentiation results in septation defects of the outflow and ventricular tracts, double outlet right ventricle and interrupted aortic arch, which are commonly observed in congenital heart diseases. The migration pathways of CNC have been well studied however, molecular mechanisms regulating these processes need to be more defined. Some recent results suggest that CNC could find their way to the heart by chemotaxis. Cardiac development is aberrant in the Sdf-1 chemokine knockout mice, as well as in knockout mice of its two receptors, Cxcr4 and Cxcr7. Mutant animals present ventricular septal defects, suggesting that cardiac abnormalities could be related to CNC. Our results show a specific expression of the SDF-1 signalling pathway in CNC in chick embryos. We have demonstrated, by gain and loss of function approaches in chick embryo, that SDF-1 play a role in CNC migration and a defect in SDF-1 pathway leads to major anomalies in heart development, which phenocopy those observed in mice deficient for these genes. From the region where arise the CNC, arise also the progenitors for enteric ganglia (Enteric Neural Crest ENC). CNC and ENC follow different migration pathway and our work demonstrate a role of SDF-1 signalling in the segregation of this two population of NC. Furthermore, we show that SDF-1 and CXCR4 are important for the migration of cephalic NC that give rise to the lower jaw. Our project demonstrates a novel function for SDF-1 signalling in embryonic development. We think that it will open new issues to investigate the role of Sdf-1, Cxcr4 and Cxcr7 genes in cardiac congenital pathologies
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By, Youlet. "Modulation des récepteurs de l'adénosine par anticorps monoclonaux et ligands synthétiques. : application en physiopathologie humaine". Thesis, Aix-Marseille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010AIX20688/document.
Testo completoAbstract (sommario):
L’adénosine est un nucléoside ubiquitaire qui exerce un contrôle puissant sur les systèmes nerveux,immunitaire et cardiovasculaire par l’intermédiaire de quatre récepteurs membranaires : A1R, A2AR, A2BR etA3R. L’étude des récepteurs de l’adénosine est nécessaire à la compréhension de physio‐pathologieshumaines non encore élucidées. Pour étudier l’expression des A2AR, nous avons, dans une première étude,produit un anticorps monoclonal, appelé Adonis, d’isotype IgM, . Adonis reconnait un épitope linéaire desept acides aminés sur la partie C‐terminale de la seconde boucle extra‐cellulaire de l’A2AR humain. Adonisrévèle, par Western blotting sur lysats cellulaires, une bande de 45 KDa, correspondant à l’A2AR. Adonis secomporte comme un « agonist‐like » en augmentant la production d’AMPc et en inhibant la proliférationcellulaire via la stimulation des A2AR. Dans une deuxième étude, nous avons utilisé Adonis pour montrerque l’expression des A2AR de cellules mononucléées, qui mime celle des tissus cardiaques, permet dedifférencier certains patients souffrant de syncope neurocardiogénique. Nous avons monté dans unetroisième étude, qu’Adonis induit une « down‐régulation » de l’expression des co‐récepteurs CXCR4 etCCR5 des cellules T via la stimulation des A2AR, et qu’à ce titre il pouvait être un outil thérapeutique dans lesinfections par HIV. Dans une quatrième étude, nous avons évalué les effets anti‐nociceptifs d’Adonis qui,administré par voie intra‐cérébro‐ventriculaire, augmente de manière dose‐dépendante les latencesobtenues avec le test du Hot‐plate et du Tail‐flick chez la souris. Ces effets sont renversés par deuxantagonistes des A2AR mais aussi par un antagoniste des récepteurs aux opioïdes. Ceci suggère que leseffets anti‐nociceptifs d’Adonis sont médiés par la libération d’opioïdes endogènes. En marge de sesétudes, nous avons également testé les propriétés biologiques de nouveaux ligands des A1R dans le cadred’une collaboration entre chimistes et biologistes. Ainsi, nous montrons, dans une cinquième étude, queparmi la trentaine de molécules synthétisées, quatre sont des antagonistes et deux autres des agonistesavec un EC50 de l’ordre du micromolaire pour la production d’AMPc. De tels agonistes des A1R pourraientêtre utiles dans le traitement des douleurs neuropathiques, tandis que les antagonistes le seraient dansl’insuffisance cardiaque ou utilisés comme diurétique. Enfin dans une sixième étude, nous avons testé unemolécule originale, puisque bivalente, possédant un pôle d’activité pour les récepteurs aux opioïdes μ et unautre pour les A1R. Cette molécule est un antagoniste pour les deux récepteurs. Elle pourrait avoir desapplications cliniques dans certaines pathologies comme le choc hypovolémique ou le sevrage aux opiacésAdenosine interacts on its cell surface receptors, namely A1R, A2AR, A2BR and A3R, to exertphysiological effects on target tissues. Modulation of these adenosine receptors appears to be a currenttopic of research which may bring more comprehensions on human pathophysiology yet to be elucidated.In order to study A2AR expression, we produced, in study 1, a monoclonal antibody anti‐human A2AR, calledAdonis being of IgM, isotype. Adonis recognized a linear epitope of seven amino acids on the C‐terminalpart of the A2AR second extra‐cellular loop. By Western blotting, Adonis reveals a 45 KDa band of A2AR incell lysates. Adonis behaves as an agonist‐like which increases the cAMP production and inhibits cellproliferation through A2AR stimulation. In study 2, we showed that using Adonis, to measure the A2ARexpression of peripheral blood mononuclear cells which mimic those of the cardiac tissue, was able todifferentiate some patients with suspected neurally mediated syncope. We showed, in study 3, that A2ARstimulation by Adonis leads to a down‐regulation of CXCR4 and CCR5 expression on T‐cells, suggesting thatAdonis would be a potential drug to treat HIV infections. In study 4, we showed that intracereboventricularinjection of Adonis increased the Hot‐plate and Tail‐flick test latencies in mice in a dose‐dependent manner.Such increases were prevented by two A2AR antagonists and by an opiate receptor antagonist, suggestingthat the anti‐nociceptive effects of Adonis were mediated, at least in part, by endogenous opioid liberation.The last section focused on biological evaluation of new A1R ligands in collaborative studies betweenchemists and biologists. Indeed we showed, in study 5, that among thirty synthesized molecules, four act asA1R antagonists and two turn out to be A1R agonists with a micromolar EC50 on cAMP production. ThoseA1R agonists would be used in neuropathic pains, whereas other antagonists could be used in cardiacfailure or as diuretic. Finally, in study 6, we tested an original hybrid molecule which was revealed to be abivalent antagonist to μ opiate receptors and A1R. This hybrid compound may have applications in somepathologies such as hypovolemic shock and opiate addiction
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Rodrigues, Laura. "Nanoparticules polymères ciblant le récepteur CXCR3 : élaboration et évaluation sur modèles de tumeur". Thesis, Bordeaux, 2018. http://www.theses.fr/2018BORD0104/document.
Testo completoAbstract (sommario):
La thèse présentée porte sur l’élaboration de nanoparticules polymères fonctionnalisées par le ligand SCH546738 afin de cibler le récepteur CXCR3 surexprimé sur les cellules cancéreuses. La synthèse des copolymères à blocs Poly(triméthylène carbonate)-b-Poly(éthylène glycol) (PTMCb- PEG) et PTMC-b-PEG-SCH546738, puis leurs auto-assemblages dans l’eau avec des pourcentages différents de l’un par rapport à l’autre et enfin l’activité biologique de ces nanoparticules in vitro ont été réalisés. Une série de PTMC-b-PEG de fraction hydrophile massique f différentes (entre 34 et 6%) ont été obtenus par polymérisation par ouverture de cycle (ROP) du monomère triméthylène carbonate (TMC) amorcée par un PEG (MW= 2000 g/mol). Les études d’auto-assemblage ont montré que la fraction hydrophile était liée à la morphologie des objets obtenus (micelles et vésicules) et que la taille et la morphologie pouvaient être modulées en fonction du protocole utilisé. Des PTMC-b-PEG-SCH546738 ont été obtenus par couplage convergent entre le PEG-SCH546738 et le bloc PTMC. Le co auto-assemblage entre les copolymères fonctionnalisés et non fonctionnalisés a été réalisé par nanoprécipitation contrôlée par un système de microfluidique qui permet d’obtenir des polymersomes monodisperses de tailles contrôlées. Le pourcentage molaire de SCH546738 en surface des polymersomes a été fixé à 5, 10 et 20 % et à l’aide d’une nanoparticule contrôle ces échantillons ont pu être testés in vitro sur cellules HEK 293 et U87 surexprimant le CXCR3-A. L’influence du ligand et son pourcentage sur l’internalisation des nanoparticules à différents temps et sur le blocage des voies de signalisation des cellules cancéreuses ont été observésThis thesis deals with the elaboration of polymeric nanoparticles functionalized by the ligand SCH546738 to target the CXCR3 receptor overexpressed in human healthy or tumoral cells. Poly(trimethylene carbonate-b-Poly(ethylene glycol) (PTMC-b-PEG) blocks copolymers and PTMC-b-PEG-SCH546738 synthesis, then their self-assembly with different ratios in water, and finally biological activity in vitro of these different nanoparticles were studied. A serie of PTMC-b-PEG with different hydrophilic mass fractions f (between 34 and 6%) were obtained by ring opening polymerization (ROP) of trimethylene carbonate (TMC) initiated by a block PEG (MW: 2000 g/mol). Self-assembly studies showed that the hydrophilic mass fraction was related to the morphology of the nano objects (micelles and vesicles) and that size and morphology of nano objects can be changed by the self-assembly protocol. PTMC-b-PEG-SCH546738 were obtained by the convergent coupling between PEG-SCH546738 and PTMC block. The co self-assembly of functionalized and not functionalized copolymers was done by nanoprecipitation controlled by a microfluidic system that allows monodisperse polymersomes with controlled size to be produced. The molar percentage of SCH546738 at the surface of polymersomes was fixed at 5, 10 and 20 %, and with the control nanoparticle, these samples were tested in vitro on HEK 293 and U87 cells overexpressing the CXCR3-A. The influence of the ligand and its percentage on nanoparticles internalization and signaling pathways blocking on cells were analyzed
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Catusse, Julie. "Étude de l'interaction de chimiokines et de ligands non-peptidiques avec le récepteur CXCR2 de l'interleukine 8". Lyon 1, 2003. http://www.theses.fr/2003LYO1T060.
Testo completoAbstract (sommario):
La 4e de couverture indique : "L'interleukine-8 (IL8), une CXC-chimiokine, a deux récepteurs (CXCR1 et CXCR2), exprimés à la surface des neutrophiles humains. Ils sont, tous trois, impliqués dans différents processus pathologiques : inflammations chroniques, croissance tumorale, infections virales pour lesquels l'inhibition de l'interaction à l'aide d'antagonistes non peptidiques représente une perspective de traitement originale. Dans l'objectif de rechercher un modèle animal approprié au développement pharmacologique de tels antagonistes, le clonage d'un récepteur de l'IL-8 chez le cobaye a été réalisé. Le récepteur a été testé pour sa capacité à lier et à être activé par des chimiokines de différentes espèces. Parallèlement, une recherche du site d'action d'un antagoniste non peptidique de CXCR2 de référence (SB225002) a été entreprise par la synthèse de différents récepteurs CXCR2 mutés. En effet, CXCR1 et CXCR2 sont fortement homologues (73%), or le SB225002 est spécifique de CXCR2. Les acides aminés de CXCR2, absents de CXCR1, ont donc été mutés en leur homologues CXCR1, afin d'observer une perte éventuelle de l'affinité des inhibiteurs pour ces nouvelles protéines, et d'identifier les acides aminés responsables de cette liaison. Ce modèle d'étude de ligands spécifiques de CXCR2 a également été utilisé pour caractériser la liaison d'une molécule des Laboratoire Fournier ainsi que celle de différentes chimiokines liant CXCR2 : l'IL-8 et le Gro-a, pour lesquels la littérature rapportent des résultats contradictoires, le GCP-2 et l'ENA-78 dont les sites de liaison n'avaient pas encore été explorés. "
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Habasque, Cécile. "Contribution à la mise en évidence des chimiokines et de leurs récepteurs dans le testicule". Rennes 1, 2002. http://www.theses.fr/2002REN10010.
Testo completoAbstract (sommario):
Lors de réactions inflammatoires du testicule, une infiltration leucocytaire est observée. Le but de notre étude a été de déterminer si les cellules testiculaires pouvaient produire des chimiokines, molécules responsables de l'attraction des leucocytes. Nos résultats montrent que les cellules somatiques du testicule sont capables de produire les chimiokines MCP-1, GRO, IP-10 et fractalkine en réponse à des cytokines pro-inflammatoires ou à du LPS. De plus, la fractalkine est également présente en conditions basales et possède, au sein du testicule, un deuxième transcrit que nous avons caractérisé. D'autre part, de nombreuses observations font du testicule une cible potentielle du VIH. Nous avons donc a donc recherché les principaux récepteurs du VIH : CD4, CCR5, CXCR4 et CCR3 dans le testicule. Nous démontrons la présence de CD4, CCR5 et CXCR4 uniquement au niveau des macrophages résidents testiculaires. Ainsi, ces cellules deviennent des cibles du virus et une voie d'infection et de réplication au sein du testicule.
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Foudi, Adlen. "Etude de la fonction et de la régulation du récepteur CXCR4 dans l'hématopoïèse". Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077100.
Testo completoAbstract (sommario):
La chemokine SDF-1 et son récepteur CXCR4 jouent un rôle crucial dans la prolifération, la survie et la domiciliation des cellules hématopoïétiques. La diminution de l'expression ou de la fonction de CXCR4 induit la mobilisation des cellules souches hématopoïétiques (CSH). En pathologie humaine, CXCR4 est impliqué dans la migration des cellules malignes, dans les syndromes WHIM et de Wiscott-Aldrich (WAS). Dans un modèle de reconstitution hématopoïétique de souris chimériques préalablement irradiées, nous montrons que les cellules de foie fœtal CXCR4-/- présentent un déficit de radioprotection associé à des anomalies de homing des cellules matures essentiellement. Le homing des progéniteurs CXCR4-/- et CXCR4+/+ est similaire, mais un nombre élevé de progéniteurs CXCR4-/- circule dans le sang, démontrant que CXCR4 joue un rôle clé dans la rétention médullaire des progéniteurs. Par ailleurs, nous montrons l'existence d'un pool intracellulaire important de CXCR4 dans les cellules primitives humaines CD34+, en particulier dans les cellules CD34+ circulantes. Ce pool est associé à des marqueurs du compartiment endosomal, démontrant l'existence d'une endocytose constitutive importante de CXCR4. Ces résultats suggèrent que la distribution cellulaire de CXCR4 joue un rôle important dans sa fonction et qu'une internalisation de CXCR4 pourrait contribuer à la circulation des CSH. Des anomalies de migration en réponse à SDF-1 ont été décrites dans le WAS. Nous montrons dans le modèle de souris invalidées pour le gène wasp (WASP-KO), une thrombopénie associée à un nombre anormalement élevé de proplaquettes dans la moelle de ces souris. De plus, les mégacaryocytes WASP-KO en cours de maturation ont une importante diminution de leur capacité de migration sous SDF-1 in vitro. Ces résultats suggèrent que WASP est impliquée dans la voie de signalisation de SDF-1. Cette signalisation permettrait la migration des mégacaryocytes et la libération des plaquettes sanguinesCXCR4 receptor and ils ligand SDF-1 are involved in numerous biological processes ranging from cell migration, proliferation and survival. The downregulation of CXCR4 expression or its decreased function results in hematopoietic stem cells mobilization. CXCR4 receptor is also involved in malignacy, tumor metastases, HIV entry and in WHIM and WAS (Wiskott-Aldrich syndrome) syndromes. Using an in vivo hematopoietic reconstitution assay of lethally irradiated mice, we demonstrated that CXCR4-null fêtai liver cells exhibited a dramatic radioprotection deficiency related to a reduced homing of maturing myeloid cells. The homing of CXCR4-/- and CXCR4+/+ progenitor cells are similar but CXCR4-/- chimeric mice displayed a high circulating number of progenitors during several month after transplantation. These results indicate that CXCR4 receptor is a key regulator of progenitor cells maintaining to the bone marrow microenvironment. Moreover, we show that circulating human primitive CD34+ cells exhibited a high level of intracellular pool of CXCR4 receptor. This pool is associated with the expression of several endosomal markers suggesting an important constitutive endocytosis of CXCR4 in thèse cells. These data indicate that the distribution of CXCR4 between cell surface and cytosol may be important in the mecanisms involved in HSC mobilization. A reduced migration of cells from WAS patients have been characterized. Here we show that WASP-null mice exhibited a slight thrombopenia associated with an elevated number of proplatelets in their bone marrow. Maturing megakaryocytes from WASP-null mice displayed a reduced in vitro migration toward SDF-1 chemokine. These results suggest that WASP protein is involved in megakaryocytic SDF-1 signaling. This mechanism may be responsible for megakaryocytes homing to specific vascular niches in the bone marrow microenvironment, priorto platelets shedding
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Raffin, Caroline. "Les lymphocytes T régulateurs CD4+CD25+FOXP3+ : relation avec les lymphocytes TH17 et implication dans les cancers humains". Nantes, 2013. https://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show/show?id=bb76da2c-10b7-48ee-bc59-ba543bcdafa4.
Testo completoAbstract (sommario):
Les lymphocytes T CD4+ régulateurs (Treg) sont essentiels pour maintenir la tolérance au soi ainsi que pour limiter les réponses immunitaires exagérées. Les Treg ont initialement été définis comme une population homogène de cellules CD25+ et FOXP3+. Il a ensuite été montré que la population était hétérogène, incluant notamment des populations générées dans le thymus, dites naturelles (nTreg), ainsi que d'autres dérivées dans la périphérie, dites induites (iTreg). Ces deux populations étaient, au début de ma thèse, décrites comme étant phénotypiquement indistinguables, ce qui limitait leur analyse. L'objectif de ma thèse a ainsi été d'étudier l'hétérogénéité des Treg humains. Nous avons dans un premier temps approfondi l'étude de la relation entre les Treg et une population de cellules T CD4+ auxiliaires appelées TH17 et montré que l'expression du récepteur de l'IL-1 (IL-1RI), ex vivo, identifiait, parmi les Treg, un intermédiaire précoce dans une voie de différenciation allant des Treg naïfs aux TH17. Puis, nous avons montré que l'expression de l'IL1RI, en combinaison avec celle de CCR7, caractérisait une sous-population n'exprimant pas Helios, associé aux nTreg, mais qui exprimait Aiolos, associé aux iTreg et aux TH17. L'utilisation de ces marqueurs permet désormais de distinguer, parmi les lymphocytes T circulants humains, les iTreg des nTreg, et également de les isoler et ainsi d'approfondir leur étude. Enfin, en caractérisant les Treg infiltrant la tumeur dans le cancer épithélial de l'ovaire, nous avons montré que la population principale de Treg dans ces sites était de type Helios+, donc probablement nTreg, et exprimait CXCR3 et T-bet, qui sont associés aux TH1Regulatory CD4+ T cells (Treg) are essential to maintain self-tolerance and to limit exuberant immune responses. Treg were initially defined as a homogenous population composed of cells expressing CD25 and FOXP3. However, it was later shown that this population is, in fact, heterogeneous notably including subsets generated in the thymus, called natural Treg (nTreg), or derived in the periphery, called induced Treg (iTreg). These two populations were, at the beginning of my thesis, described as phenotypically undistinguishable. Therefore, the aim of my thesis was to study the heterogeneity of the human Treg compartment, namely by characterizing and comparing nTreg and iTreg. To this end, I first explored the relationship between Treg and a population of pro-inflammatory CD4+ helper T cells called TH17. I demonstrated that the ex vivo expression of IL-1 receptor type I (IL-1RI) identifies, among Treg, an early intermediate along a differentiation pathway leading from naïve Treg to TH17. I then showed that the expression IL-1RI, in combination with that of CCR7, characterizes, ex vivo, a subset of Treg that do not express the transcription factor Helios, associated with nTreg, but express Aiolos, associated with iTreg and TH17. Thus, the use of these markers now allows to distinguish, among human circulating T cells, iTreg from nTreg, as well as to isolate and further assess them. Finally, by characterizing tumor-infiltrating Treg in epithelial ovarian cancer, I could show that the main Treg population at these tumor sites is Helios+, suggesting a natural origin, and expresses CXCR3 and T-bet, both associated with TH1 cells
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Jouni, Dima. "Rôle de l'oxyde nitrique dans la régulation des cellules souches hématopoétiques". Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077052.
Testo completoAbstract (sommario):
L'oxyde nitrique (NO) est un messager intra et inter cellulaire. Il est impliqué dans la survie, la prolifération et la migration des cellules. Dans le système hématopoïétique, NO est décrit comme régulateur des cellules souches hématopoïétiques HSC. Cependant les mécanismes impliqués dans sa régulation des CSH restent méconnus. Dans ce travail, nous avons montré que la production de NO par les cellules stromales est importante pour le maintient des progéniteurs humains in vitro. L'inhibition de la production de NO par les cellules stromales diminue l'expression d'AMLl et de CXCR4 (le récepteur de SDF-1) dans les cellules CD34+. Elle diminue également l'adhésion des cellules CD34+ au stroma et le nombre de progéniteurs. L'effet de NO sur le nombre de progéniteurs et sur l'expression d'AMLl serait contact-dépendant. En effet, la séparation des cellules hématopoïétiques du stroma, en utilisant des filtres, estompe l'effet de l'inhibition de la production de NO. Ces résultats suggèrent qu'AMLl est régulé indirectement par NO via la régulation de CXCR4 et de l'adhésion. In vivo, l'inhibition de la production de NO induit la mise en cycle des CSH, normalement quiescentes, via les mêmes mécanismes impliqués in vitro c'est-à-dire la diminution de l'expression de CXCR4 et d'AMLl. La prolifération des CSH est associée à une diminution de l'expression des cyclin dépendante- kinase p57, p21 et p!9. En accord avec la diminution de l'expression de CXCR4, l'inhibition de la production de NO induit la mobilisation des progéniteurs vers le sang et la rate. L'ensemble de ces résultats montre un rôle important de NO dans la régulation des CSH et des progéniteurs humains et murinsNitric oxide (NO) is a small gaseous molecule produced by most cells. Since the 1980s, NO has emerged as an important messenger within and between cells. NO is involved in the survival, proliferation and cell migration. In the hematopoietic System, NO is described as a regulator of hematopoietic stem cells HSC. However, the mechanisms involved in its regulation of HSC remain unknown. In this work, we showed that NO production by stromal cells is important for the maintenance of human progenitors in vitro. Inhibition of NO production by stromal cells decreases the expression of AML1 and CXCR4 (the receptor of SDF-1) in CD34 + cells. It also decreases the adhesion of CD34 + cells to the stroma and the number of progenitor cells in cultures in a semi-solid medium. The effect of NO on the number of progenitors and the expression of AML1 is contact-dependent. Indeed, the separation between hematopoietic and stromal cells blurs the effect of inhibition of NO production. These results suggest that NO through the regulation of CXCR4 and adhesion indirectly regulates AML1. In vivo, inhibition of NO production enhances HSC proliferation by the same mechanisms involved in vitro; reduction of CXCR4 and AML1 expression. The proliferation of HSC is associated with decreased expression of cyclin dependent kinases p57, p21 and pi 9. Consistent with the decreased expression of CXCR4, inhibition of NO production induced mobilization of progenitors into the blood and spleen. All these results show an important role of NO in the regulation of HSCs and progenitors
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Abdelouahab, Hadjer. "Etude des mécanismes impliqués dans l'hématopoièse extra-médullaire dans les myélofibroses primaires et secondaires". Paris 7, 2014. http://www.theses.fr/2014PA077212.
Testo completoAbstract (sommario):
Les myélofibroses (MF) primaires et secondaires sont des néoplasmes myéloprolifératifs (NMP) rares et complexes. Elles se caractérisent par une fibrose médullaire et une mobilisation constitutive des cellules souches et des progéniteurs hématopoïétiques (CSPH) associée à une hématopoïèse extra-médullaire (HEM) dans le foie et la rate. Les MF se caractérisent également par un statut mutationnel complexe. JAK2V617F et MPLW515 sont les principales mutations sur les molécules de signalisation. Elles entraînent une activation constitutive des voies de signalisation. Au cours de ce travail, nous avons étudié le rôle du couple CXCL12/CXCR4 dans la mobilisation constitutive des CSPH et dans la progression de l'HEM dans les MF. Nos résultats montrent que les cellules CD34+ de patients MF se caractérisent par une forte réponse chimiotactique à CXCL12. Cette forte migration ne corrèle pas avec une forte expression de CXCR4, mais semble corréler avec une activation des voies de signalisation. Nos résultats montrent également que les voies de signalisation de l'axe CXCL12/CXCR4 et des cytokines sont synergiques dans le chimiotactisme cellulaire. Nous avons également démontré que le traitement des patients MF avec des inhibiteurs de JAK2 mobilisait les cellules CD34+ dans le sang périphérique. Enfin, l'inhibition de CXCR4 réduit la migration des cellules CD34+ MF en réponse à CXCL12 et induit une diminution de l'HEM dans deux modèles murins de MF. L'ensemble de ces résultats suggère que la mobilisation constitutive des CSPH et l'HEM dans les MF sont dépendantes de la signalisation de CXCL12/CXCR4Primary and secondary myelofibrosis (MF) are rare and complex myeloproliferative neoplasms (MPN). They are characterized by medullary fibrosis and constitutive mobilization of stem cells and hematopoietic progenitors (HSPC), associated with extramedullary hematopoiesis in the liver and spleen. MF are also characterized by a complex mutational profile with JAK2V617F and MPLW515 being the main mutations in signaling molecules, leading to constitutive activation of signaling pathways. During this work, we have studied the role of CXCL12/CXCR4 in the constitutive HSPC mobilization and in the progression of the EMH in MF. Our results have shown that CD34+ MF patient cells are characterized by a strong chemotactic response to CXCL12 in vitro. This strong migration did not correlate with a high CXCR4 membrane expression, but seems correlated with activation of signaling pathways. Our results further demonstrated that the signaling pathways of CXCL12/CXCR4 and cytokines/cytokine receptors were synergistic in the chemotactic responses of cells to CXCL12. Furthermore, treatment MF patients with JAK2 inhibitors mobilizes CD34+ cells in peripheral blood. Finally, CXCR4 inhibition reduced the migration of MF CD34 cells in response to CXCL12 and induced a decrease in EMH in two mouse models of MF. Altogether, these resulb suggest that the constitutive HSPC mobilization and EMH in MF depend on CXCL12/CXCR4 signaling
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Désogère, Pauline. "Synthèse et étude de nouveaux agents chélatants optimisés ciblant le récepteur de chimiokine CXCR4". Phd thesis, Université de Bourgogne, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00842206.
Testo completoAbstract (sommario):
L'objectif de ce travail de thèse était de développer des outils pour détecter et traiter le cancer àun stade précoce. Nous avons donc entrepris la synthèse de nouveaux radiopharmaceutiques ciblantspécifiquement le récepteur CXCR4, en utilisant le savoir-faire et l'expertise de notre groupe dans lasynthèse et la fonctionnalisation des polyazacycloalcanes. Nous avons travaillé simultanément surdeux aspects : l'agent chélatant et la molécule vectrice.Dans un premier temps, les travaux ont concerné la conception, la synthèse et la caractérisationde nouveaux macrocycles à fort potentiel pour la chélation du cuivre et du gallium. Nous avons toutd'abord développé une nouvelle voie de synthèse permettant d'accéder à des dérivés homocyclènesC-functionnalisés. Nous nous sommes ensuite intéressés aux dérivés du 1,4,7-triazacyclononane(TACN). En optimisant une voie de synthèse déjà développée au laboratoire, nous avons facilitél'accès à des dérivés TACN N- et C-fonctionnalisés. Nous avons ainsi préparé une série denouveaux agents chélatants bifonctionnels adaptés pour la complexation du cuivre ou du gallium, envariant la nature de la fonction de greffage et des bras coordinants. Nous avons également réalisé lasynthèse de nouveaux cryptands en série cyclène et nous avons étudié leur propriété decomplexation vis à vis du cuivre.Dans un second temps, nous avons développé une nouvelle famille d'agents imageants duCXCR4 en modifiant la structure des AMD3100 et AMD3465. Ce travail a tout d'abord nécessité lamise au point de nouvelles méthodes de fonctionnalisation de ces structures. Nous avons ainsi pupréparer de nouveaux synthons porteur d'une fonction de greffage dans les deux séries. Nous avonsensuite introduit différentes sondes imageantes, telles que des chélates adaptés pour la complexationdu cuivre, gallium et indium ainsi que des sondes fluorescentes de type bodipy.
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Penco-Campillo, Manon. "Le VEGFC et les récepteurs CXCR1/2 : des cibles pertinentes pour le traitement des médulloblastomes pédiatriques". Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2022. http://www.theses.fr/2022COAZ6025.
Testo completoAbstract (sommario):
Le médulloblastome (MB) est la tumeur pédiatrique cérébrale la plus fréquente et la plus agressive. Malgré un traitement multimodal agressif, entraînant des effets secondaires importants, 30% des patients développent une résistance et rechutent suite à l'apparition de métastases dans les 5 ans. Les récidives ne peuvent être contrôlées par des traitements conventionnels (radio et chimiothérapie) ou ciblés (anti-angiogénique, anti-inflammatoire, anti-point de contrôle immunitaire). L'objectif de ma thèse est donc de découvrir de nouvelles cibles et stratégies thérapeutiques pertinentes pour ces patients au diagnostic ou après une rechute.Les MB sont des tumeurs très vascularisées. Le phénomène de résistance est, en partie, lié au développement de vaisseaux sanguins (angiogenèse) et lymphatiques (lymphangiogenèse) dans la tumeur, qui constituent les principales voies de dissémination métastatique. Le facteur de croissance des vaisseaux lymphatiques, le VEGFC, et ses récepteurs/co-récepteurs sont les acteurs majeurs de la lymphangiogenèse. Dans la première partie de ma thèse, j'ai montré que le VEGFC est inversement corrélé à la croissance et l'agressivité cellulaire du MB. En effet, le VEGFC diminue de manière autocrine la prolifération et la migration des cellules MB, ainsi que leur capacité à former des pseudo-vaisseaux in vitro. Les cellules résistantes à la radiothérapie présentent des niveaux élevés de VEGFC et perdent leur capacité à migrer et à former des pseudo-vaisseaux. L'irradiation réduit l'agressivité des cellules de MB par un processus dépendant du VEGFC. Les cellules surexprimant le VEGFC et les cellules résistantes à l'irradiation forment des tumeurs expérimentales plus petites chez la souris Nude. Le VEGC semble être un régulateur négatif de la croissance des MB. Ces résultats ouvrent la voie au développement de thérapies pro-VEGFC dans ces cancers.Dans la seconde partie de ma thèse, j'ai corrélé l'expression de la voie de signalisation pro-angiogénique et pro-inflammatoire ELR+CXCL/CXCR1-2 à une survie plus courte chez des patients atteints de MB. J'ai montré qu'un nouvel inhibiteur pharmacologique (C29) des récepteurs CXCR1-2 inhibe la prolifération, la migration dépendante de CXCL8/CXCR1/2, l'invasion et la formation de pseudo-vaisseaux par des cellules de MB sensibles ou résistantes à la radiothérapie. C29 réduit la croissance de MB expérimentaux dans un modèle de souris organotypique ex vivo et traverse la barrière hémato-encéphalique. Ainsi, le ciblage de CXCR1-2 représente une stratégie prometteuse pour le traitement des MB pédiatriques, en première ligne ou à la suite de rechutes.Mots-clés : médulloblastome pédiatrique, VEGFC/VEGFR, CXCR1-2, cytokines ELR+CXCL, thérapie ciblée, lymphangiogenèse, angiogenèseMedulloblastoma (MB) is the most common and aggressive pediatric brain tumor. Despite aggressive multimodal treatment, resulting in significant side effects, 30% of patients develop resistance and relapse following the appearance of metastases within 5 years. Recurrences cannot be controlled by conventional (radio- and chemotherapy) or targeted (anti-angiogenic, anti-inflammatory, anti-immune checkpoint) treatments. The objective of my thesis is therefore to discover new targets and relevant therapeutic strategies for these patients at diagnosis or after a relapse.MBs are highly vascularized tumors. The phenomenon of resistance is, in part, linked to the development of blood (angiogenesis) and lymphatic (lymphangiogenesis) vessels in the tumor, which constitute the main routes of metastatic dissemination. The lymphatic growth factor, VEGFC, and its receptors/co-receptors are the major players in lymphangiogenesis. In the first part of my thesis, I showed that VEGFC is inversely correlated to MB cell growth and aggressiveness. Indeed, VEGFC decreases the proliferation and migration of MB cells, as well as their ability to form pseudo-vessels in vitro, by an autocrine signalization. Cells resistant to radiotherapy show elevated levels of VEGFC and lose their ability to migrate and form pseudo-vessels. Irradiation reduces the aggressiveness of MB cells by a VEGFC-dependent process. VEGFC-overexpressing cells and radiation-resistant cells form smaller experimental tumors in nude mice. Thus, VEGC appears to be a negative regulator of MB growth. These results pave the way for the development of pro-VEGFC therapies in these cancers.In the second part of my thesis, I correlated the expression of the ELR+CXCL/CXCR1-2 pro-angiogenic and pro-inflammatory signaling pathway to shorter survival in patients with MB. I showed that a novel pharmacological inhibitor (C29) of CXCR1-2 receptors inhibits proliferation, CXCL8/CXCR1-2-dependent migration, invasion and pseudo-vessel formation by susceptible or resistant MB cells to radiotherapy. C29 reduces the growth of experimental MBs in an ex vivo organotypic mouse model and crosses the blood-brain barrier. Thus, targeting CXCR1-2 represents a promising strategy for the treatment of pediatric MB, at first line or at relapse.Key words: pediatric medulloblastoma, VEGFC/VEGFR, CXCR1-2, ELR+CXCL cytokines, targeted therapy, lymphangiogenesis, angiogenesis
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Jourdan, Patrick. "Etude de la régulation de l'expression de CXCR4 à la surface des lymphocytes T humains". Montpellier 2, 2000. http://www.theses.fr/2000MON20037.
Testo completoAbstract (sommario):
Cxcr4 est un recepteur a chimiokines ayant comme unique ligand connu, sdf-1. Au cours de ce travail de recherche, nous avons etudie la regulation de l'expression de ce recepteur a la surface des cellules t naives (cd45ro ccr7 +), memoires centrales (cd45ro +ccr7 +) et memoires effectrices (cd45ro +ccr7 ) generees in vitro. Nous montrons que l'activation de toutes ces cellules realisee avec la combinaison d'anticorps anti-cd3/anti-cd28 inhibe l'expression de cxcr4 a leur surface. En outre, l'activation in vitro des pbmc de patients allergiques au der p avec cet allergene conduit aux memes resultats sur les cellules t specifiquement activees par l'allergene. En revanche, les cytokines, dont les recepteurs partagent la chaine de transduction du signal il-2rgc (il-2, 4, 7 et 15), induisent des niveaux variables de cxcr4 a la surface des cellules t au repos. Nous avons egalement mis en evidence dans des experiences de coculture que des cellules dendritiques activees, mais ne presentant pas d'antigene, sont capables d'induire l'expression de cxcr4 a la surface des cellules t autologues memoires centrales. Enfin, nous montrons que cette induction depend de l'interaction de cd134 et cd154, exprimees sur les cellules t, avec cd134l et cd40 presents a la surface des cellules dendritiques activees. Ainsi, l'ensemble de ces resultats indique que cxcr4 ne semble pas etre implique dans des reponses immunitaires sur le site de l'inflammation et que l'expression de ce recepteur est dynamique et dependante de nombreux stimuli.
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Ahr, Barbara. "Rôles des motifs cytoplasmiques de CXCR4 dans la signalisation induite par SDF-1". Montpellier 1, 2005. http://www.theses.fr/2005MON1T009.
Testo completoAbstract (sommario):
LE RECEPTEUR AUX CHIMIOKINES CXCR4 APPARTIENT A LA FAMILLE DES RECEPTEURS COUPLES AUX PROTEINES G HETEROTRIMERIQUES (RCPGs). LE SEUL LIGAND NATUREL QUI LUI SOIT ACTUELLEMENT CONNU EST LA CHIMIOKINE SDF-1. CXCR4 EST PAR AILLEURS UN CORECEPTEUR MAJEUR DU VIH-1 AYANT UN TROPISME POUR LES LIGNEES CELLULAIRES T. LES VIRUS X4, A TROPISME POUR LES LIGNEES T, APPARAISSENT AU COURS DE L'EVOLUTION DE LA PATHOLOGIE, ET CETTE EMERGENCE EST ASSOCIEE A UNE FORTE DEPLETION DES LYMPHOCYTES T CD4+, QUI SERAIT DUE, EN PARTIE AU MOINS, A DES PHENOMENES D'APOPOSE DES LYMPHOCYTES T NON INFECTES. AVANT MON ARRIVEE AU LABORATOIRE, UNE PARTIE DE LA CASCADE APOPTOTIQUE ACTIVEE LORS DE L'INTERACTION DES GLYCOPROTEINES D'ENVELOPPE PRESENTEES A LA SURFACE DES CELLULES, AVEC CXCR4, AVAIT ETE MISE EN EVIDENCE. IL AVAIT NOTAMMENT ETE MONTRE QUE CETTE APOPTOSE INDUIT LA DEPOLARISATION DE LA MEMBRANE MITOCHONDRIALE, LE RELARGAGE DE CYTOCHROME C DE LA MITOCHONDRIE VERS LE CYTOSOL, ET L'ACTIVATION DES CASPASES 9 ET 3. IL NOUS PARAISSAIT ALORS INTERESSANT DE CARACTERISER CETTE CASCADE DE SIGNALISATION PLUS EN AMONT, ET DE DETERMINER LE ROLE JOUE PAR LES DOMAINES CYTOPLASMIQUES DE CXCR4 DANS LES VOIES DE SIGNALISATION INDUITES PAR CE RECEPTEUR EN SITUATION PHYSIOLOGIQUE. AFIN DE REPONDRE A CETTE PROBLEMATIQUE, NOUS AVONS CONSTRUIT DES MUTANTS DE CHACUN DES DOMAINES CYTOPLASMIQUES DE CXCR4. NOUS AVONS AINSI MIS EN EVIDENCE QUE, APRES LIAISON DE SDF-1, SEULE LA TROISIEME BOUCLE INTRACELLULAIRE DE CXCR4 EST REQUISE POUR L'OBSERVATION DES SIGNAUX DEPENDANTS DES PROTEINES Gi, MAIS QUE CETTE BOUCLE N'A AUCUN ROLE DANS L'INTERNALISATION DU RECEPTEUR, SIGNAL STRICTMENT DEPENDANT DE LA PARTIE C-TERMINALE DE CXCR4. NOUS AVONS EGALEMENT DETERMINE QUE LE CHIMIOTACTISME EST UN EVENEMENT PLUS COMPLEXE QUI IMPLIQUE LES DEUXIEME ET TROISIEME BOUCLES CYTOPLASMIQUES DE CXCR4 AINSI QUE SON DOMAINE C-TERMINAL. GRACE AUX MUTANTS DES DOMAINES CYTOPLASMIQUES DE CXCR4, ET AVEC DES MUTANTS PONCTUELS DES TYROSINES CYTOPLASMIQUES, NOUS AVONS ENSUITE DETERMINE QUE, APRES ACTIVATION PAR SDF-1, LA PARTIE N-TERMINALE DE LA TROISIEME BOUCLE CYTOPLASMIQUE DE CXCR4 EST IMPLIQUEE DANS LA PHOSPHORYLATION DE JAK2, ET QUE LA TYROSINE 157 EST RESPONSABLE DE L'ACTIVATION DE STAT3. A PLUS LONG TERME, CE TRAVAIL POURRAIT PERMETTRE DE DISSOCIER AU NIVEAU FONDAMENTAL LES SIGNAUX INDUITS PAR CXCR4 APRES LIAISON DE SDF-1 DE CEUX INDUITS APRES INTERACTION DES GLYCOPROTEINES D'ENVELOPPE DU VIH-1, ET AINSI POUVOIR APPORTER DE NOUVELLES PERSPECTIVES DE TRAITEMENT EN INHIBANT L'APOPTOSE DEPENDANTE DU VIRUS SANS INTERFERER AVEC LE ROLE PHYSIOLOGIQUE DE CXCR4.
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Bignon, Alexandre. "Dérégulation des récepteurs de chimiokine CCR1 et CXCR4 dans le Lupus Erythémateux Disséminé et la Lymphopénie T CD4+ Idiopathique". Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA114818.
Testo completoAbstract (sommario):
L’objectif de ma thèse a été d’étudier l’expression et l’activité de deux récepteurs de chimiokine dans deux désordres immunitaires, CCR1 dans le modèle murin NZB/W de néphrite lupique et CXCR4 dans la Lymphopénie T CD4+ Idiopathique (LCI), un déficit immunitaire rare chez l’Homme. Le Lupus Erythémateux Disséminé est une maladie autoimmune, chronique et inflammatoire dont le développement est caractérisé par une perte progressive de la fonction rénale associé notamment à une infiltration leucocytaire. Je me suis intéressé à la contribution de CCR1 et de ses ligands CCL3/CCL5 au recrutement leucocytaire intra-rénal chez la souris NZB/W néphritique. Nos résultats révèlent une augmentation de l’expression et de la fonction de CCR1 à la surface des cellules T (LT), des phagocytes et des neutrophiles issues de souris néphritiques. Un traitement aigu par un antagoniste non-peptidique de CCR1 administré par voie orale a réduit l’infiltration rénale des LT et des macrophages. L’inhibition de CCR1 à long terme a permis de diminuer l’accumulation rénale des LT CD4+ effecteurs/mémoires, des monocytes inflammatoires Ly6C+ et des macrophages polarisés M1 ou M2, a amélioré les atteintes tubulo-interstitielles et glomérulaires, a retardé l’apparition d’une protéinurie fatale et in fine a prolongé la survie des souris NZB/W. Ainsi, la combinaison d’approches pharmacologiques et fonctionnelles nous a permis de dévoiler un rôle pathogénique de CCR1, dans la progression de la néphrite lupique chez la souris NZB/W. La LCI est un déficit immuno-hématologique hétérogène et d’étiologie inconnue associant un nombre faible et persistant de LT CD4+ circulants et des infections opportunistes sévères en particulier d’origine fongique. Nos analyses multi-paramétriques par cytométrie en flux ont permis de révéler une perte d’expression et de fonction de CXCR4 à la membrane des LT de 17 des 20 patients étudiés. Ces données suggèrent que l’anomalie de CXCR4 constitue un trait biologique commun de la LCI. Notre approche transcriptomique a également permis d’identifier des signatures spécifiques de l’expression de gènes associés au seuil d’activation du TCR et à l’immuno-sénescence dans la LCI. Nos analyses phénotypiques et fonctionnelles ont confirmé ces observations et rapportent pour la première fois que les LT circulants résiduels de patients présentent un profil sénescent (exemple : perte d’expression des molécules de co-stimulation CD27 et CD28), des anomalies de réponse du TCR in vitro et une érosion des télomères. Sur un plan mécanistique, nous avons montré que les anomalies de signalisation intrinsèque aux LT des patients sont causées par l’expression accrue de la DUal-Specific Phosphatase 4 (DUSP4). Par conséquent, nos travaux révèlent une sénescence précoce des LT de patients souffrant de LCI, qui pourrait résulter d’une hyperstimulation chronique. Ce phénomène semble dépendre de la surexpression de DUSP4, dont la modulation pourrait constituer une piste thérapeutique dans la LCI afin d’améliorer les stratégies vaccinalesMy PhD works focused on the expression and function of chemokine receptors in two immune disorders, namely CCR1 in the lupus-prone NZB/W mouse model and CXCR4 in the Idiopathic CD4+ T-cell lymphopenia, a rare human immune defect.Systemic lupus erythematosus is a chronic inflammatory autoimmune disease, the development of which is characterized by a progressive loss of renal function. Such dysfunction is associated with renal leukocyte infiltration. During my PhD, I investigated the role of the CCR1 chemokine receptor in this process during the progression of nephritis in NZB/W mice. We found that peripheral T-cells, mononuclear phagocytes and neutrophils from nephritic NZB/W mice were more responsive to CCR1 ligands than the leukocytes from younger prenephritic mice. Short-term treatment of nephritic NZB/W mice with a orally available CCR1 antagonist decreased renal infiltration by T-cells and macrophages. Longer Ccr1 blockade decreased kidney accumulation of effector/memory CD4+ T-cells, Ly6C+ inflammatory monocytes, and both M1 and M2 macrophages; reduced tubulointerstitial and glomerular injuries; delayed fatal proteinuria; and prolonged animal lifespan. Altogether, these findings highlight a pivotal role for CCR1 in the recruitment of T and mononuclear phagocyte cells to inflamed kidneys of NZB/W mice, which in turn contribute to the progression of renal injury.ICL is heterogeneous immunological syndrome of unclear molecular mechanisms, characterized by a profound and persistent CD4+ T-cell defect and by opportunistic infections in particular of fungal origin. We detected using multiparametric flow-cytometry analyses, reduced levels of CXCR4 expression and chemotactic function on T-cells from 17 of 20 ICL patients. These results suggest that the impaired membrane expression and function of CXCR4 is a common biologic trait of ICL. Using a transcriptomic approach, we also identified an ICL-specific T-cell gene expression signature characteristic of low TCR sensitivity and accelerated T-cell aging. Phenotypic and functional analyses of circulating T cells confirmed these observations and extended them to include an expansion of terminally-differentiated T cells with hallmarks of aging including loss of the co-stimulatory molecules CD27 and CD28, defective in vitro TCR responses, and telomere erosion. Mechanistically, we further showed that intrinsic T-cell signaling defects were caused by higher expression of DUal-Specific Phosphatase 4 (DUSP4). These findings suggest that premature T-cell senescence occurs in ICL as a result of chronic T-cell activation. This is in part due to abnormally high DUSP4 expression in CD4+ T cells, the modulation of which may constitute a novel therapeutic avenue in ICL to improve vaccination strategies
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Chow, Yan Ching Ken. "Role and Molecular Basis of the CXCL12-signalling Axis in the Pathogenesis of WHIM syndrome and the carcinogenesis associated with human papillomavirus (HPV) infection". Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077129.
Testo completoAbstract (sommario):
Le syndrome WHIM (SW) est un déficit rare caractérisé par une leuco-neutropénie (e. X. Myélokathexis) et la profusion des verrues cutanées et de carcinomes ano-génitaux due au Papillomavirus Humain (HPV). Il est associé à des dysfonctions du chimiorécepteur CXCR4 en réponse à son ligand SDF-1/CXCL12, qui sont souvent liées à des mutations hétérozygotes de CXCR4 conduisant à la troncation de l'extrémité C-terminale du récepteur impliquée dans le recrutement de l'arrestine (βarr) pour le processus de désensibilisation. Le récepteur muté (e. X. CXCR4¹º¹³) qui n'est donc plus désensibilisé et présente un gain de fonction confère aux leucocytes des patients des réponses exacerbées à CXCL12 dont nous proposons qu'elles contribuent à la pathogenèse du SW. Dans cette thèse, nous montrons que ces dysfonctions impliquent une association inattendue entre CXCR4¹º¹³ et βarr2. Cette interaction se traduit par une activation accrue et prolongée des voies de signalisation dépendantes de βarr2 en aval du récepteur et également de l' intégrité de la troisième boucle intracellulaire de CXCR4¹º¹³. Nous identifions que CXCR4¹º¹³ forme des dimères avec son homologue sauvage au sein desquels une association possible renforcée entre barr2 et CXCR4¹º¹³ pourrait contribuer aux réponses exacerbées à CXCL12. L'expression anormale de CXCL12 que nous avions identifiée dans les lésions dues à HPV provenant d'individus souffrants ou non du SW et le rôle critique de cette chimiokine dans le développement de nombreux cancers suggèrent l'implication de cet axe de signalisation dans la pathogénie virale. Dans les kératinocytes immortalisés par HPV à haut-risque, nous observons une expression anormale de CXCL12 et de ses deux récepteurs que nous caractérisons comme étant dépendante des protéines virales HPV-E6/7 et nécessaire à la prolifération et la migration des kératinocytes. Dans le contexte du SW, ce processus en coopération avec l'activation incontrôlée de CXCR4¹º¹³ pourrait contribuer à la maîignisation des lésions ano-génitales alors même que nous y avons identifié la seule présence d'HPV à faible potentiel cancérogène (bas-risque)The WHIM syndrome (WS) is a rare immunodeficiency characterised by severe leukoneutropenia (e. G. Myelokathexis) and profuse human papillomavirus (HPV)-associated skin lesions and malignant ano-genital cohdyloma. The disease links to dysfunctions of the CXCR4 chemokine receptor in response to its ligand SDF-1/CXCL12, and associates in many cases to heterozygous mutations causing truncation in the cytoplasmic tail of the receptor that is important for the β-arrestin (βarr)-mediated receptor desensitisation process. Such truncated receptor (e. G. CXCR4¹º¹³) displays no desensitisation and thus manifests a gain of function in response to CXCL12 in leukocytes derived from WS patients, which likely contribute to the pathogenesis of the disorder. In this study, we demonstrated that such dysfunctions are in fact dependent on an unexpected interaction between βarr2 and CXCR4¹º¹³. Upon CXCL12 stimulation, the CXCR4¹º¹³receptor displays an augmented and prolonged |3arr2-dépendent signalling that relies on the integrity of the third intracellular loop of the receptor. We have also observed the existence of CXCR4wt/CXCR4¹º¹³ heterodimer from which the possible enhanced parr2/CXCR4¹º¹³ interaction may contribute to the augmented response of the receptor to CXCL12. With the abnormal expression of CXCL12 we observed in HPV-induced lesions derived from both WS and non-WS patients, and the critical role of the chemokine in tumor growth and metastasis, we speculate on the existence of an HPV/CXCL12 interplay that could be crucial for the viral-mediated pathogenesis. Using keratinocytes immortalised by the subgenomic fragment of high-risk HPV, we showed an HPV-E6/7-dependent expression of CXCL12 and its receptors and the critical role of this signalling axis in the prolifération and motility of these cells. In WS, such HPV/CXCL12-interplay may synergise with the hyperfunctioning of CXCR4, and contribute to the malignant development of ano-genital condyloma that is unusually associated with low-risk HPV - the only viral subtype we identified in these lesions
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Fabre, Marie. "Conception, synthèse et optimisation de nouveaux antagonistes des récepteurs CXCR1/2 pour le traitement de la DMLA exsudative". Thesis, Université Côte d'Azur, 2021. http://www.theses.fr/2021COAZ4044.
Testo completoAbstract (sommario):
Dans les pays occidentaux, la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA) exsudative est l’une des principales causes de cécité chez les personnes âgées. Cette maladie est caractérisée par une vascularisation anormale de la choroïde et une forte inflammation intraoculaire. Actuellement, seuls les traitements symptomatiques anti-VEGF existent, à base d’anticorps monoclonaux humanisés et des glycoprotéines de fusion recombinantes ciblant les facteurs pro-angiogéniques. À l’heure actuelle, uniquement 30 % des patients présentent une réponse durable aux traitements.Le blocage de la voie de signalisation des cytokines ERL+ CXCL a été proposé comme une alternative prometteuse pour cibler simultanément la vascularisation de la choroïde et l’inflammation. En effet, cette sous-famille de cytokines est impliquée à la fois dans le processus inflammatoire et dans le stade précoce du signal pro-angiogénique.Deux composés de la famille des diarylurées, MCK133 et MCK140, ont permis d’établir une preuve de concept d’efficacité in vitro et in vivo. À partir de ces composés, nous allons concevoir et développer de nouvelles familles de composés inspirées du même pharmacophore, portant un noyau triazole, pour améliorer les activités, les propriétés physico-chimiques et pharmacologiques.Quatre séries de composés dérivées du pharmacophore ont été envisagées : deux avec un noyau imidazole et deux portants un noyau triazole. Les voies d’accès synthétiques à chacune de ces familles ont été étudiées. Une famille de triazole a été particulièrement explorée, et 63 analogues ont été synthétisés pour déterminer les relations structure-activité, en faisant varier des positions clés de la molécule. Tous les composés synthétisés ont été évalués sur plusieurs modèles in vitro d’angiogenèse, d’inflammation, de migration et de prolifération cellulaire pour apprécier leur potentiel à lutter contre la DMLA exsudative. Un composé Lead prometteur a été identifié. Les perspectives de cette thèse sont l’évaluation de ce composé sur plusieurs modèles in vivo de DMLA exsudative.Finalement, la dernière partie de ce manuscrit présente deux projets annexes : (i) une étude du transfert des biamidines vers les biguanides et (ii) l’étude de la stabilité du NRPa-308In western countries, exudative age-related macular degeneration (AMD) is one of the leading causes of blindness in the elderly. This disease is characterized by an abnormal vascularization of the choroid and a strong intraocular inflammation. Currently, only anti-VEGF symptomatic treatments exist, which rely on humanized monoclonal antibodies (mAbs) and recombinant fusion glycoprotein targeting pro-angiogenic factors. Moreover, only 30% of the patients present a durable response to this treatment.The blockage of the ERL+ CXCL cytokines signaling pathway has been proposed as a promising alternative to target simultaneously choroid vascularization and inflammation. Indeed, this sub-family of cytokines is specifically involved both in inflammation and in the early stage of the pro-angiogenic signal.Two compounds of diarylurea family, MCK133 and MCK140, have established a proof of concept in vitro and in vivo. Therefore, a new series of compounds has been designed that features the same pharmacophore bearing a triazole core, to enhance the activity, the physicochemical and pharmacological properties.Four series based on the pharmacophore were considered: two with an imidazole core and two with a triazole core. Synthetic pathways to each of these families have been studied. A triazole family has been particularly explored, and 63 analogs have been synthesized to determine the structure-activity relationships, by varying key positions of the molecule. All synthesized compounds were evaluated on several in vitro models of angiogenesis, inflammation, migration, and cell proliferation to assess their potential against exudative AMD. A promising lead compound has been identified. The perspectives of this thesis are the evaluation of this compound on several in vivo models of exudative AMD.Finally, the last part of this manuscript presents two annexe projects: (i) the study of the biamidines transfer to biguanides and (ii) the stability study of NRPa-308
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Robert, Olivier. "Implication des axes récepteur des glucocorticoïdes-GILZ et CXCR4-CXCL12 dans l’inflammation hépatique liée à l’obésité". Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA114850.
Testo completoAbstract (sommario):
La NAFLD (non alcoholic fatty liver disease) ou stéatopathie dysmétabolique est la manifestation hépatique du syndrome métabolique. Elle regroupe l’ensemble des lésions hépatiques liées à l’obésité en dehors de toute consommation d’alcool : la stéatose, la NASH (non alcoholic steatohepatitis), la fibrose, la cirrhose et le carcinome hépatocellulaire. Les systèmes immunitaires inné et adaptatif participent activement à la pathologie. J’ai étudié deux axes : l’axe du récepteur des glucocorticoïdes-GILZ dans les cellules de Kupffer et CXCR4-CXCL12 dans les lymphocytes T CD4+.Les cellules de Kupffer (CK) jouent un rôle clé dans la pathologie de la NASH. GILZ (glucocorticoid induced leucine zipper) est exprimé par les monocytes/macrophages et est sous le contrôle du récepteur aux glucocorticoïdes (GR). De plus, GILZ intervient dans l’inhibition des processus inflammatoires. J’ai montré que l’obésité entraîne une diminution de l’expression du GR et de GILZ dans les CK. En utilisant du RU486, un antagoniste spécifique du GR, j’ai prouvé que la diminution de l’expression du GR entraîne la diminution de l’expression de GILZ et sensibilise les CK au LPS. Ce mécanisme joue un rôle déterminant dans le développement de l’inflammation hépatique au cours de l’obésité, en modulant la réponse inflammatoire des CK. Le recrutement de cellules inflammatoires dans le foie est un élément clé de la progression de la NASH. Les lymphocytes T CD4+ issus de souris obèses ont des propriétés chimiotactiques accrues dépendantes de CXCR4. J’ai montré que la NASH augmente les propriétés migratoires dépendantes de CXCR4 des lymphocytes T CD4+ chez l’homme et la souris dans trois modèles murins de NASH. Le traitement de souris obèses par de l’AMD3100, un antagoniste de CXCR4, permet de diminuer le recrutement hépatique de lymphocytes. L’augmentation du chimiotactisme des lymphocytes T CD4+ n’était pas dû, ni à une augmentation de l’expression de CXCR4 et CXCR7, ni même de CXCL12 au niveau du foie. J’ai montré que ce mécanisme dépendait de l’augmentation de l’affinité de CXCR4 pour CXCL12.Ainsi, j’ai mis en évidence deux axes participant à l’inflammation hépatique au cours de l’obésité. Ces axes représentent de nouvelles cibles thérapeutiques potentiellesNAFLD (non alcoholic fatty liver disease) is the hepatic manifestation of metabolic syndrome. It encompasses the entire spectrum of obesity-related liver lesions : steatosis, NASH (non alcoholic steatohepatitis), fibrosis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Innate and adaptative immune systems participate actively to the pathophysiology.I studied two axis : the glucocorticoid receptor-GILZ axis in Kupffer cells and CXCR4-CXCL12 in CD4+ T lymphocytes.Kupffer cells (KC) play a key role in pathophysiology of NASH. GILZ (glucocorticoid induced leucine zipper) is expressed by monocytes/macrophages and is under the control of glucocorticoid receptor (GR). Moreover, GILZ takes part in inhibition of inflammatory processes. I showed that obesity induces a decreased expression of GR and GILZ in KC. Using RU486, a GR antagonist, I proved that decreased expression of GR induces the decreased expression of GILZ and sensitize KC to LPS. This mechanism plays a decisive role in initiation of liver inflammation in obesity, modulating inflammatory response of KC. In obese mice, recruitment of inflammatory cells into the liver is a key element in the progression of NASH. CD4+ T lymphocytes from obese mice have enhanced CXCR4-dependent chemotactic properties. I showed that NASH enhances CXCR4-dependent chemotactic properties of CD4+ T lymphocytes in patients and in three mouse models of NASH. Obese mice treatment with AMD3100, a CXCR4 antagonist, decreases lymphocytes recruitement into the liver. Enhanced chemotactic properties of CD4+ T lymphocytes were not due to increased expressions of nor CXCR4 and CXCR7, neither CXCL12 in the liver. I showed that this mechanism was dependent of an increased affinity of CXCR4 to CXCL12.Therefore, I highlighted two axis participating to obesity-related liver inflammation. These axis represent new potential therapeutic targets
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Heuninck, Joyce. "Analysis of CXCR4 and ACKR3 oligomerisation". Thesis, Montpellier, 2019. http://www.theses.fr/2019MONTT018.
Testo completoAbstract (sommario):
Mon travail de thèse s’est focalisé sur l’étude des récepteurs CXCR4 et ACKR3, deux récepteurs aux chimiokines. Ceux-ci jouent des rôles majeurs dans différentes fonctions physiologiques notamment le chimiotactisme des cellules immunitaires. Le dérèglement de leur activité est souvent associé à différents pathologies, notamment des cancers. Outre le fait que ces récepteurs lient tous les deux la même chimiokine, CXCL12, il a été montré qu’ils étaient capables d’exercer l’un sur l’autre des régulations croisées. Les mécanismes sous-tendant celles-ci sont très mal connus. Ils pourraient être liés à une compétition entre les récepteurs pour lier le même ligand CXCL12 ou à des régulations au niveau des voies de signalisation activées lors de la liaison d’une chimiokine. Ces régulations croisées pourraient également résulter de la formation de complexes de récepteurs appelés oligomères, complexes qui disposeraient de propriétés pharmacologiques particulières. De tels complexes ont été décrits dès les années 1990 dans des systèmes d’expression hétérologues mais leur existence et leurs rôles dans des systèmes natifs reste très largement débattus. Une des raisons est la difficulté à élaborer des outils moléculaires permettant l’étude de ces oligomères dans les tissus natifs.Le premier objectif de ma thèse a été l’élaboration d’outils permettant d’étudier l’existence de ces oligomères dans les systèmes natifs. En collaboration avec des laboratoires d’Amsterdam, j’ai développé des nanobodies fluorescents, petits anticorps produits par le lama, afin de marquer spécifiquement les récepteurs endogènes exprimés à la surface des cellules. Pour rendre fluorescent ces nanobodies, nous avons utilisé une technique originale permettant de greffer un fluorophore sur l’extrémité C-terminale de la molécule. Ces nanobodies conservent des propriétés pharmacologiques remarquables puisqu’ils conservent de hautes affinité et spécificité pour leur cible. J’ai ainsi pu utiliser ces molécules et démontrer l’existence des oligomères CXCR4 dans des lignées cellulaires exprimant de façon endogène le récepteur CXCR4. Des analyses similaires sont en cours sur le récepteur ACKR3.Le second objectif de ma thèse a été de définir les rôles potentiels de ces oligomères. J’ai pu montrer que les hétéro-oligomères CXCR4 /ACKR3, complexes associant les deux types de récepteurs, possèdent des propriétés de liaison particulière. Ceux-ci semblent ne lier la chimiokine CXCL12 que sur le récepteur ACKR3 au sein du complexe. Cette asymétrie de liaison est très étonnante car le récepteur CXCR4 est capable de lier CXCL12 avec une cinétique bien supérieure à celle de ACKR3 pour ce même ligand. J’ai étudié les conséquences d’une telle asymétrie de liaison sur les propriétés de signalisation de ces récepteurs. Une analyse des différentes voies de couplage activées lors de la liaison de CXCL12 a été réalisée sur les récepteurs exprimés de façon isolée ou co-exprimés au sein d’une même cellule. Les résultats ne montrent pas de modifications majeures de leur propriété de couplage.Nous avons par ailleurs analysé la capacité de ces récepteurs à internaliser en absence ou en présence de ligand CXCL12. J’ai pu observer que les hétéro-oligomères CXCR4 / ACKR3 restaient vraisemblablement bloquer à la surface des cellules.Ces travaux ouvrent des perspectives intéressantes dans la mesure où elles constituent la première démonstration de l’existence d’oligomères CXCR4 dans des systèmes natifs.Par ailleurs l’observation d’une régulation différente de l’internalisation des hétéro-oligomères constitue une première piste conférant à ces complexes un rôle particulier dans les régulations croisées de l’activité que ces récepteurs exercent l’un sur l’autreDuring my PhD, I focused on two chemokine receptors, CXCR4 and ACKR3. They have several important physiological functions, such as chemotaxis of immune cells. However, on the other hand, when their function is disturbed, they are involved in different immunological pathologies and cancer. Both receptors recognise the same chemokine, CXCL12 and many studies have reported a crosstalk between CXCR4 and ACKR3. However, the mechanisms behind this crosstalk are still poorly understood. This crosstalk can occur because both receptors are competing for CXCL12, at the level of signalling pathways or due to the formation of complexes between CXCR4 and ACKR3 receptors, called oligomers. The oligomers might have specific pharmacological properties different from the receptor monomers. Oligomeric complexes have been described since the nineties. Most of the studies on these oligomers were performed on heterologous expression systems, but still a lot of debate exists about their existence and their role in native tissues. One of the reasons behind this controversy is that studying oligomers in a native context is complicated, especially because we often lack the molecular tools for these studies.The first objective of my PhD was to generate efficient tools to study the existence of CXCR4 and ACKR3 oligomers in native systems. In collaboration with laboratories from Amsterdam and Ghent, we have developed fluorescent nanobodies, small antibodies produced by llamas. These specific tools allow the detection of receptors endogenously expressed at the cell surface. In order to fluorescently label these nanobodies, we have used an original strategy that can specifically attach the fluorophore to the C-terminus of the nanobody. Interestingly, the fluorescent nanobodies retain high affinity and specificity for their target. With these nanobodies, I have demonstrated the existence of CXCR4 oligomers in cell lines that endogenously express CXCR4. We are currently investigating the existence of ACKR3 oligomers.The second objective of my PhD consists of defining the functional roles of these oligomers. I have shown that CXCR4/ACKR3 hetero-oligomers have specific binding characteristics. It seems that CXCL12 is binding only to ACKR3 within this hetero-oligomer and that ACKR3 impairs the CXCL12 binding to CXCR4 within the hetero-oligomer. This is interesting, since we also have demonstrated that CXCL12 is binding much faster on CXCR4 than on ACKR3.In addition, I have studied the consequences of this negative cooperativity within the CXCR4/ACKR3 hetero-oligomer on different signalling pathways. We have compared conditions where the receptor was expressed alone or when receptors were co-expressed. No major modifications have been found on their signalling properties. However, when investigating the internalisation of CXCR4 and ACKR3, it seems that CXCR4/ACKR3 hetero-oligomers remain blocked on the cellular surface.This opens interesting perspectives, since it is the first time CXCR4 oligomers have been detected at an endogenous level. Moreover, the observation of a different internalisation pattern of the hetero-oligomer is a first step to further investigate the specific roles of these oligomers in the crosstalk between the receptors
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Gallego, Carmen. "Interactions hôte-virus : la chimiokine CXCL12 et ses récepteurs CXCR4 et ACKR3 dans le cycle de vie du papillomavirus humain et la carcinogènese associée". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS337.
Testo completoAbstract (sommario):
Membres épithéliotropes de notre virome, les papillomavirus humains (HPV) causent majoritairement des infections asymptomatiques ou bénignes, contrôlées par les mécanismes de défense de l'hôte à l’échelle épithélial et immunitaire. Néanmoins, l’infection persistante par certains HPV à haut risque (hrHPV) cancérogène peut conduire au développement de cancers. Ainsi, les hrHPV à tropisme muqueux causent 98% des cancers cervicaux, et sont impliqués dans un nombre croissant de cancers ano-génitaux et oropharyngés. Les vaccins prophylactiques sont efficaces pour prévenir les lésions associées aux hrHPV à tropisme muqueux, mais à l'heure actuelle, il n'existe aucun traitement antiviral pour une infection établie. Dans cette thèse de doctorat, nous avons cherché à étudier les facteurs de l’hôte impliqués dans le cycle de vie d’HPV et sa carcinogenèse à deux niveaux : ceux du kératinocyte infecté et du système immunitaire. Des études chez certains patients immunodéficients (syndrome de WHIM, WS) présentant une susceptibilité sélective à la pathogénèse HPV ont identifié la chimiokine CXCL12 et CXCR4, son récepteur couplé aux protéines G (dont les mutations causent le WS) comme facteurs de contrôle du cycle de vie de ces virus. CXCL12/CXCR4 ainsi que ACKR3, le récepteur-leurre de CXCL12, peuvent moduler à la fois les réponses antivirales épithéliales et immunitaires. Nous avons d'abord étudié la contribution d'ACKR3 au cycle de vie d’HPV dans des cultures 3D de cellules épithéliales humaines (3D-EpC), seul modèle permettant la réplication d’HPV. Nos résultats indiquent que l'activité accrue d'ACKR3 présente un potentiel pro-oncogène puisqu'elle déplace le cycle de vie productif d’HPV vers l'oncogenèse et que le blocage d'ACKR3 pourrait être une approche thérapeutique attrayante pour favoriser la réplication d’HPV. Par la suite, nous avons étudié les conséquences fonctionnelles du cycle de vie productif d’HPV dans la communication intercellulaire, en mettant en place la technique FLIP dans les 3D-EpC. Enfin, nous avons étudié l'impact d’une mutation de CXCR4 associée au WS au niveau des cellules immunitaires cutanées dans le contexte de la carcinogenèse induite par HPV. Nous avons ainsi mis en évidence le rôle de CXCR4 dans la distribution, l’activation et la migration des cellules dendritiques dermales et des cellules de Langerhans ; leur possible dérégulation dans le contexte du WS pouvant contribuer à la sensibilité sélective des patients à la pathogenèse HPV. En conclusion, ce travail fournit des clés mécanistiques sur les interactions HPV-hôte aux niveaux épithélial et immunitaire. Il révèle le rôle central d'ACKR3 dans la réponse intrinsèque des kératinocytes envers HPV et approfondit nos connaissances sur le rôle de l’axe CXCL12/CXCR4 dans l'immunité cutanée à l’homéostasie et dans la carcinogenèse HPVHuman papillomavirus (HPV) are part of our virome and infect cutaneous and mucosal sites. Most infections are asymptomatic or only cause benign lesions that are controlled by the host defence mechanisms, which take place both at the epithelial and the immune system levels. However, persistent infections with certain mucosal HPV types at high-risk for cancer development, cause virtually all cases of cervical cancers, a majority of anogenital cancers and an increasing proportion of oropharyngeal cancers. Prophylactic vaccines are efficient in preventing mucosal HPV types-associated lesions but currently, there is no antiviral treatment for an established HPV infection. In this doctoral thesis, we aimed at investigating host factors involved in HPV life cycle and carcinogenesis at two levels: the infected keratinocyte and the immune system. Studies in the context of certain immunodeficient patients (WHIM syndrome, WS) with selective susceptibility to HPV pathogenesis have identified the CXCL12 chemokine and its classical G protein-coupled receptor CXCR4 (whose mutations are causing the WS) as host susceptibility factors that act as gatekeepers of HPV life cycle. CXCL12/CXCR4 together with ACKR3, the second receptor of CXCL12 with an atypical decoy activity, can modulate both epithelial and immune cell anti-viral responses. Therefore, we first investigated the intrinsic contribution of ACKR3 to HPV life cycle in 3D human epithelial cell cultures (3D-EpC), the sole model allowing for HPV replication. Our results indicate that enhanced ACKR3 activity displays pro-oncogenic potential as it shifts HPV productive life cycle toward oncogenesis and that blocking ACKR3 could be an attractive therapeutic approach to favour HPV replication. In addition, we have studied the functional consequences of the productive HPV life cycle in cell-cell communication, being pioneers in setting up FLIP technique in 3D-EpC. Lastly, we investigated the impact of CXCR4 WS-mutation at the cutaneous immune cell level in the context of HPV-induced carcinogenesis. We have thus gained insights into the role of CXCR4 in dendritic cell and Langerhans cell distribution, phenotype and migration and how their deregulation in the context of the WS could account for the selective susceptibility of WS patients to HPV pathogenesis. In conclusion, this work provides new insights into HPV-host interactions at the epithelial and immune cell levels. We have unravelled the central role of ACKR3 in keratinocyte intrinsic response against HPV and deepen our knowledge on the role of CXCL12/CXCR4 in skin immunity in health and in HPV carcinogenesis
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Buet, Dorothée. "Régulation transcriptionnelle de l'hématopoïèse par l'activité tyrosine kinase de BCR-ABL : exemples des gènes Cxr4 et Fli-1". Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077038.
Testo completoAbstract (sommario):
L'oncoprotéine de fusion p210BCR-ABL possède une activité tyrosine kinase constitutive activant de nombreuse: voies de signalisation cellulaires conduisant à un phénotype malin. L'objectif de cette thèse a été d'analyser les mécanismes moléculaires par lesquels p210B R"ABL induit, d'une part, des anomalies d'adhésion des cellules humaines leucémiques avec leur microenvironnement et d'autre part, des anomalies de l'érythropoïèse. Nos travaux ont d'abord porté sur l'effet de p210 CR~ABL sur la fonction du récepteur CXCR4, impliqué dans l'adhésion des cellules hématopoïétiques. Nous avons mis en évidence une diminution fonctionnelle de CXCR4 par deux mécanismes distincts, liés au niveau d'expression de p210BCR-ABL, l'un régulant la signalisation à partir de CXCR4, l'autre diminuant la transcription du gène Cxcr4. Le second aspec a porté sur l'étude des effets de p210BCR-ABL sur la balance entre la différenciation erythrocytaire et mégacaryocytaire (MK) qui partagent un progéniteur commun (E/MK). Nos travaux ont montré que p210-ABL favorise la différenciation erythrocytaire au détriment de la différenciation MK et que cette différenciation erythrocytaire s'accompagne d'une régulation négative de la transcription de FLI-1, un facteur de transcription MK. Cette observation nous a conduit à réaliser des expériences d'inhibition de FLI-1 par ARN interférence dans des cellules primaires CD34+. Les résultats indiquent que FLI-1 joue un rôle majeur dans l'engagement de la différenciation du progéniteur bipotent E/MK vers la lignée MK. En conclusion, ce travail a montré qu'en plus des effets au niveau post-transcriptionnel, l'activité kinase d'un oncogène comme p210BCR-ABL pouvait moduler le phénotype d'une cellule en régulant la transcription de certains gènes clésThe expression of p210BCR-ABL, a fusion protein responsible for the development of chronic myelogenous leukemia, leads to a malignant phenotype with reduced growth factor requirement, résistance to apoptosis and altered adhesion properties, caused by its high constitutive tyrosine kinase activity activating multiple biochemical pathways. The aim of this thesis was to study the effect of p210BCR-ABL on transcription during hematopoiesis, particularly during two special aspects of the pathology: loss of adhesion to bone marrow stroma and and the anormal erythroid differentiation. First, we have studied the interactions between p210BCR-ABL and the CXCR4 receptor function, to better understand the loss of adhesion of hematopoietic progenitors to bone marrow stroma. We showed that two mechanisms could regulate CXCR4 function, depending on p210BCR-ABL expression level, one associated with diminution of Cxcr4 transcription. P210BCR-ABL can also modify the erythroid differentiation. Knowing that a close developmental relationship exists between the erythroid and the megakaryocytic (MK) differentiation, the second part of my work consisted in the study of p210BCR-ABL effects on these two lineages programming. We showed a major expansion of the erythroid lineage occurring at the expense of the MK differentiation in presence of p210BCR-ABL, associated with a diminution of the MK transcription factor FLI-1 transcription. Then we wanted to better understand the role of the regulation of FLI-1 expression during the commitment of the bipotent E/MK progenitor, in normal conditions. We showed, by RNA interference, that the FLI-1 expression level regulates the commitment in primary human CD34+cells
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Duquenne, Charline. "Modulation de l’activité des corécepteurs CCR5 et CXCR4 du VIH 1 comme stratégie thérapeutique : étude des deux isoformes de CXCR4 et interaction de CCR5 avec le récepteur S1P1". Thesis, Montpellier 2, 2013. http://www.theses.fr/2013MON20188/document.
Testo completoAbstract (sommario):
CCR5 et CXCR4 sont les corécepteurs d'entrée du VIH utilisés par le virus in vivo en plus du récepteur principal CD4 pour infecter les cellules. Au début et tout le long de l'infection, on retrouve chez les patients infectés par le VIH, des virions R5 utilisant le corécepteur CCR5 pour infecter les cellules. Dans les stades tardifs de l'infection et chez environ la moitié des personnes infectées par le VIH, on observe en plus de ces souches R5, l'apparition de souches X4, utilisant le corécepteur CXCR4 pour infecter les cellules. Cette apparition de souches X4 est un facteur d'aggravation de la maladie. Les causes de cette commutation de R5 vers X4 sont mal définies. Le but de mon travail de thèse a été de trouver de nouvelles stratégies thérapeutiques visant l'un ou l'autre de ces corécepteurs. La première partie de mon travail compare les deux isoformes de CXCR4 en tant que corécepteurs du VIH. Ces deux isoformes, CXCR4-A et CXCR4-B, diffèrent de 9 acides aminés en NH2 terminal suite à un épissage alternatif. Nous avons montré que l'isoforme CXCR4-B est la plus performante en tant que corécepteur du VIH mais que ces deux variants sont équivalents pour la migration vers leur ligand commun SDF-1. Ainsi, nous proposons qu'en ciblant exclusivement l'isoforme B qui est la plus favorable à l'infection, via par exemple des siRNA, il serait possible de limiter les infections par des souches X4 tout en gardant une partie des fonctions essentielles de ce récepteur dans l'organisme, assurées par l'isoforme A. Nos résultats suggèrent également que l'infection par des souches R5 augmente le ratio en ARNm CXCR4-B / CXCR4-A dans des PBMC, et que ce ratio est en partie responsable de la commutation de R5 vers X4 associée à une aggravation de la maladie. Cibler cette isoforme CXCR4-B pourrait donc se révéler bénéfique. La deuxième partie de cette thèse étudie la modulation de la fonction de corécepteur du VIH de CCR5 par S1P1, un autre membre de la famille des récepteurs couplés aux protéines G qui permet la remise en circulation des lymphocytes après leur séjour dans les organes lymphoïdes secondaires par chimiotactisme vers son ligand S1P, abondant dans le sang. Nous montrons que S1P1 interagit physiquement avec CCR5 et gêne l'entrée des virus R5 dans la cellule-hôte. A l'inverse, S1P1 active les étapes post-entrée du cycle viral, notamment l'expression génique virale. La résultante de ces effets opposés est une augmentation de la production virale par des cellules infectées in vitro. Ce projet a également montré que l'utilisation de FTY720, un antagoniste fonctionnel de S1P1, diminue l'infection de cellules dendritiques par des virus HIV-R5 in vitro, ainsi que la virémie dans un modèle de souris SCID infectées après reconstitution immunologique. La mise en évidence des interactions entre CCR5 et S1P1 ouvre donc des perspectives thérapeutiquesCCR5 and CXCR4 are the two HIV entry coreceptors used by the virus in addition to the main receptor CD4 in vivo to infect cells. R5 virions, that use CCR5 as a coreceptor to infect cells, are detected in most HIV patients. At late stages of infection and in about half of HIV infected persons, there is an emergence of X4 virions that use CXCR4 as a coreceptor, in addition to R5 virions. This emergence is associated with an increase in disease progression. The reasons for this R5 to X4 switch are poorly understood. The goal of my PhD work was to find new therapeutic strategies that target these coreceptors.The first part of this work compares the two CXCR4 isoforms as HIV coreceptors. Those two isoforms, CXCR4-A and CXCR4-B, differ by 9 amino acids at their NH2 terminal extremity as a consequence of an alternative splicing. We have shown that CXCR4-B isoform is more efficient as an HIV coreceptor but that those two variants are equivalent in terms of chemotaxis toward their common ligand SDF-1. Thus, we propose that by targeting specifically the B isoform that supports infection, via siRNA by example, it is possible to limit X4 development while keeping essential functions of this receptor. Our results also suggest that R5 infection increases CXCR4-B / CXCR4-A mRNA ratio in PBMC and that this ratio is in part responsible for R5 to X4 switch. Thus, targeting CXCR4-B isoform could be beneficial.The second part of this PhD thesis studies the effect on CCR5 coreceptor function of S1P1, another G protein-coupled receptor that enables lymphocytes egress from lymph nodes by chemotaxis toward its ligand S1P that is abundant in blood. We have shown that S1P1 physically interacts with CCR5 and blocks R5 virus entry. On the other hand, S1P1 activates post-entry steps of the viral cycle, in particular gene expression. The resulting effect is an increase in viral production by infected cells in vitro. We also showed that the use of FTY720, a S1P1 functional antagonist, decreases dendritic cell infection by R5 viruses in vitro, and in vivo infection in a SCID mouse model. The emphasis of CCR5 and S1P1 interactions opens new therapeutic strategies
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Vétillard, Mathias. "Régulation de la migration des cellules dendritiques : étude des mécanismes dépendant du récepteur de chimiokine CXCR4 et de la protéine Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper. Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper: Fine-Tuning of Dendritic Cells Function CXCR4 signaling controls dendritic cell location and activation at steady-state and in inflammation GILZ orchestrates migratory and calcic responses in dendritic cells". Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASQ002.
Testo completoAbstract (sommario):
Comprendre par quels mécanismes les cellules dendritiques (DC) régulent l’immunité est essentiel. Les DC résident dans les tissus périphériques et notamment la peau. Au sein de leur tissu de résidence, les DC immatures alternent des phases de migration non orientée avec des phases de capture des antigènes (AG). Dans ce contexte, la migration est en compétition pour les stocks d’actine avec les processus de capture des AG, comme la macropinocytose. Une fois activées en réponse à des signaux de danger, la macropinocytose est inhibée et les DC deviennent capables de migrer rapidement et de manière orientée, dépendante de chimiokines (e.g. CXCL12/CCL21), vers les organes lymphoïdes (OL). Au cours de ma thèse, j’ai caractérisé la contribution la protéine Glucocorticoid Induced Leucine Zipper (GILZ) et du récepteur de chimiokine CXCR4 au contrôle de la migration des DC, les mécanismes associés et les conséquences physiopathologiques d’une dérégulation de l’expression ou de la fonction de ces facteurs. J’ai utilisé deux modèles murins : 1- Un modèle de délétion de la protéine Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper (GILZ) dans les DC (GILZko). Les travaux de mon équipe avaient précédemment démontré que le niveau d’expression de GILZ dans les DC contrôle leur macropinocytose. 2- Un modèle murin de gain de fonction du chimiorécepteur à CXCL12 : CXCR4. Ainsi, j’ai cherché à savoir si les DC GILZko et les DC CXCR4 gain de fonction (CXCR4+/1013) présentaient une altération de leur capacité de migration in vivo. Dans des expériences de FITC painting j’ai démontré que les DC GILZko et CXCR4+/1013 migrent moins efficacement que les DC contrôles (CTRL) aux OL. Cette observation est associée à un défaut constitutif du nombre de DC migrantes dans les OL des souris CXCR4+/1013 mais pas ceux des souris GILZko. Pour mieux caractériser l’impact de la délétion de GILZ, j’ai étudié d’une part la vitesse de migration et d’autre part la capacité à répondre aux gradients de chimiokines des DC GILZko. J’ai démontré que les DC GILZko immatures migrent moins vite que leurs contrôles, en corrélation directe avec une macropinocytose accrue. De plus, les DC GILZko répondent moins bien aux chimiokines CXCL12 (DC immatures) et CCL21 (DC activées) que les DC CTRL. L’entrée calcique cytosolique dans les DC étant un processus central pour la chimiotaxie et la motricité des cellules, j’ai ensuite étudié le rôle de GILZ dans le contrôle de l’influx calcique cytosolique de ces cellules. J’ai montré, pour la première fois dans les DC, que la délétion de GILZ réduit les concentration et influx calciques cytosoliques, selon un mécanisme pharmacologiquement reproductible dans les DC CTRL par l’inhibition d’une kinase induite par les glucocorticoïdes. Finalement, l’analyse des conséquences de la réduction de la migration des DC vers les OL dans nos modèles a révélé une aggravation de l’inflammation cutanée dans des modèles d’hypersensibilité retardée ou d’inflammation chronique. En conclusion, mes travaux apportent de nouvelles connaissances sur un processus clé dans la mise en place de la tolérance et des réponses immunitaires. Ils démontrent d’une part l’importance de la désensibilisation de CXCR4 dans les DC cutanée pour leur permettre de quitter la peau et d’autre part l’implication de GILZ dans la régulation de la vitesse et de l’orientation de la migration des DC, selon un mécanisme qui pourrait dépendre du contrôle des flux calciques. Ainsi, la diminution de l’expression de GILZ dans les DC, notamment aux cours d’inflammation, pourrait inhiber leur fonction dépendante du calcium. L’expression accrue de GILZ dans les DC est connue pour favoriser l’accumulation de lymphocytes T régulateurs au détriment des effecteurs. Mes travaux tendent à montrer que faire diminuer l’expression de GILZ dans les DC pourrait ne pas suffire à les rendre efficaces pour activer les lymphocytes T in vivoUnderstanding the mechanisms by which dendritic cells (DC) regulate immunity is essential. DC reside in peripheral tissues, including the skin. Within their tissue of residence, immature DC alternate non-oriented migration phases with antigen capture (AG) phases. In this context, migration is in competition for actin stocks with AG capture processes, such as macropinocytosis. Once activated in response to danger signals, macropinocytosis is inhibited and DC become able to migrate rapidly and in a chemokine-dependent way (e.g. toward CXCL12/CCL21) to lymphoid organs (LO). During my thesis, I characterized the contribution of the Glucocorticoid Induced Leucine Zipper (GILZ) protein and the chemokine receptor CXCR4 to the control of DC migration, the mechanisms associated with this control and the pathophysiological consequences of a deregulation of the expression or function of these factors. I have used two mouse models: 1- A model of Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper Protein (GILZ) deletion in DC (GILZko). The previous work of my team has shown that the level of GILZ expression in DC controls their macropinocytosis. 2- A murine model of gain of function for the chemokine receptor of CXCL12: CXCR4. Therefore, I wondered if the GILZko DC and the CXCR4 gain of function DC (CXCR4+/1013) showed an alteration in their in vivo migration capacity. In FITC painting experiments, I demonstrated that GILZko DC and CXCR4+/1013 DC migrate less efficiently than Control DC (CTRL) to the LO. This observation is associated with a constitutive defect in the number of migrating DC in LO in CXCR4+/1013 mice, but not in GILZko mice. To better characterize the impact of GILZ deletion, I studied the migration speed and the ability of GILZko DC to respond to chemokine gradients in vitro. I demonstrated that immature GILZko DC migrate slower than their controls, in direct correlation with increased macropinocytosis. In addition, GILZko DC respond less well to CXCL12 (immature DC) and CCL21 (activated DC) chemokines than CTRL DC. As cytosolic calcium entry into DC is a central process in the regulation of chemotaxis and cell motricity, I the investigated the role of GILZ in controlling the cytosolic calcium entry into these cells. I have shown, for the first time in DC, that GILZ deletion reduces cytosolic calcium concentration and influx. This phenotype is reproducible in CTRL DC by pharmacological inhibition of a glucocorticoid-induced kinase. Finally, the analysis of the consequences of reduced migration from skin DC to LO in our models revealed a worsening of skin inflammation in models of delayed hypersensitivity or chronic inflammation. In conclusion, my work provides new insights on a key process in the establishment of tolerance and immune responses. It demonstrates on the one hand the importance of desensitization of CXCR4 in cutaneous DC to allow them to leave the skin, and on the other hand the involvement of GILZ in regulating the speed and direction of DC migration, according to a mechanism that might depend on the control of calcium responses. Thus, the decrease in GILZ expression in DC, particularly during inflammation, might inhibit their calcium-dependent function. The increased expression of GILZ in DC is known to promote the accumulation of regulatory T cells at the expense of effector T cells. My work suggests that decreasing GILZ expression in DC may not be sufficient to make them efficient in activating T cells in vivo
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Fumex, Maud. "Etude de la sulfatation des protéines dans les processus d’interactions biologiques : cas du récepteur aux chimiokines CXCR4". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLE033.
Testo completoAbstract (sommario):
La sulfatation protéique est une modification post-traductionnelle qui intervient principalement sur les récepteurs cellulaires. Parmi eux, le récepteur CXCR4 est particulièrement étudié en raison de son implication dans de nombreux processus physiopathologiques (réponse immunitaire, infection au VIH). Le domaine extracellulaire de 38 acides aminés de CXCR4 (le peptide P38), contenant trois tyrosines connues pour être sulfatées, est important pour l’interaction avec son ligand spécifique, la chimiokine SDF-1α/CXCL12 (Stromal Cell-Derived Factor-1α). Le rôle de la sulfatation de CXCR4 dans cette interaction est encore méconnu.Le peptide P38 a été synthétisé et sulfaté de façon régiosélective sur toutes les tyrosines (peptides mono-, di- ou tri-sulfatés, soit 7 combinaisons). L’impact du nombre et de la position des groupements sulfate le long du peptide P38 sur son interaction avec SDF-1α a été étudié par électrophorèse capillaire d’affinité (ACE) couplée ou non à la spectrométrie de masse électrospray (ESI-MS). Une interaction entre P38 et SDF-1α a été mise en évidence par ACE. Une augmentation de l’affinité peut être associée à l’augmentation du degré de sulfatation de P38. La stœchiométrie des complexes a ensuite été déterminée en utilisant l’ACE-MS, qui a mis en évidence une majorité de complexes 1:1, quel que soit le peptide étudiéCes travaux ouvrent la voie à l'étude d'une interaction à trois partenaires avec des glycosaminoglycanesSulfation is one of the most important post-translational modifications of proteins. The known sulfated proteins are mostly cell receptors and among them, CXCR4 attracts growing attention because of its involvement in numerous physio-pathological processes (immune response, HIV infection). The 38 amino-acid extracellular domain of CXCR4 (P38 peptide), containing three tyrosine residues known to be sulfated, is important for the interaction with its specific ligand, the SDF-1α/CXCL12 chemokine (Stromal cell-derived factor-1α). The role of sulfation in this interaction remains to be established.The P38 peptide was chemically synthesized and regioselectively sulfated on all the tyrosines (mono-, di- or tri-sulfated peptides, 7 combinations). The impact of both distribution and position of sulfate groups on the interaction between P38 and SDF-1α was studied by affinity capillary electrophoresis (ACE) hyphenated to electrospray mass spectrometry (ESI-MS).An interaction between P38 and SDF-1α was highlighted by ACE. It was strongly enhanced by the increase of P38 sulfation degree. The complex stoichiometry was then determined by ACE-MS, and 1:1 complexes were predominantly obtained, with all the peptides. This work opens the orad to the three-partner interaction studies involving glycosaminoglycans
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Conforti, Rosa. "Traitement anti tumoral par ciblage de TLR3 et découplage des effets opposés des chimiokines pour améliorer l’efficacité des agonistes de TLR3". Thesis, Paris 11, 2011. http://www.theses.fr/2011PA11T067.
Testo completoAbstract (sommario):
Le rationnel pour l’utilisation des agonistes des Toll-Like Récepteurs (TLR) dans le traitement du cancer repose sur leurs effets bénéfiques au niveau des cellules du système immunitaire permettant une stimulation de la réponse immunitaire innée et adaptative. Cependant, certains types de cellules tumorales expriment les TLRs qui, une fois activés, peuvent déclencher des effets “délétères” comme la tumorigénèse.Pour mieux disséquer les effets biologiques directs et indirects d’un agoniste de TLR3, l’acide polyadenylique-polyurydilique (poly(A:U)), nous avons utilisé deux modèles tumoraux murins exprimant TLR3 et ne répondant pas à la chimiothérapie, mais capables de produire des grandes quantités de CCL5 et CXCL10 en réponse au poly(A:U) et à l’IFN de type I. In vivo, la combinaison chimiothérapie – poly(A:U) n’a permis d’obtenir qu’une faible activité anti tumorale sauf lorsqu’une vaccination contre les antigènes tumoraux est inclue dans le protocole de traitement et le récepteur CCR5 est bloqué (souris Ccr5-/- ou souris sauvages traitées avec MetRANTES). L’efficacité anti tumorale du traitement combiné est associée à l’induction de cellules T CD8+CXCR3+IFNγ+ et est perdue chez les souris nu/nu, Trif-/- et Cxcr3-/-. La source du ligand de CCR5 est constituée par les cellules tumorales dont la voie TLR3 est activée. L’efficacité du traitement combiné sur ces cellules a été améliorée en inhibant la production de CCL5 à l’aide d’un shARN spécifique pour CCL5. Ces résultats soutiennent la notion que le poly(A:U) peut directement agir sur l’épithélium tumoral pour promouvoir la libération de CXCL10 qui a un effet bénéfique (recrutement des LTCs), mais aussi la sécrétion de CCL5 qui a un rôle délétère (action sur des immunosuppresseurs au niveau de l’hôte). Le découplage des effets opposés des chimiokines et la vaccination anti tumorale préalable peuvent permettre aux LTCs dépendant des ligands de CXCR3 d’infirmer l’action d’immunosuppression CCR5 dépendante et devraient être intégrés dans les essais cliniques à venir utilisant les agonistes de TLR3The rationale for the use of Toll –Like Receptor (TLR) agonists in cancer therapy relies upon their “beneficial” effects on immune cells leading to enhanced innate and adaptive immune responses. However, a variety of cancer epithelia express TLRs which, upon triggering, may mediate “deleterious” effects such as tumorigenesis. To further dissect the direct versus indirect biological effects of the TLR3 agonist polyadenylic-polyuridylic acid (poly(A:U)), we took advantage of two murine tumor models expressing TLR3 that failed to respond to chemotherapy but did produce large amounts of CCL5 and CXCL10 in response to the poly(A:U) and type I IFN. In vivo, the combination of chemotherapy and poly(A:U) mediated low tumoricidal activity unless a vaccination against tumor antigens was included in the regimen and the CCR5 receptor was blocked (CCR5 loss-of-function mice or WT animals treated with MetRANTES). The antitumor efficacy of the combination therapy was associated with the elicitation of CD8+CXCR3+IFN+ T cells and abrogated in nu/nu, Trif-/- and Cxcr3-/- mice. The source of CCR5L is the TLR3-activated tumor cells in that stable inhibition of the chemokine production by specific shRNA CCL5 ameliorated the efficacy of the combination therapy. These results support the notion that poly(A:U) can directly act on tumor epithelia to promote the release of beneficial CXCL10 for the recruitment of intratumoral CTLs but also the release of deleterious CCL5 acting on host immunosuppressors. Uncoupling chemokine release and prior vaccination may enable the CXCR3L-dependent CTLs to overrule the CCR5-dependent suppression and may be integrated in future trials using TLR3 agonists
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Armani-Tourret, Marie. "Transmission et physiopathologie de l'infection VIH : leçons tirées de l'étude des virus utilisant CXCR4 comme corécepteur". Thesis, Toulouse 3, 2021. http://www.theses.fr/2021TOU30033.
Testo completoAbstract (sommario):
L'entrée du VIH-1 dans ses cellules cibles nécessite l'interaction de sa glycoprotéine d'enveloppe (Env) à la surface du virus avec le récepteur, CD4, puis avec un corécepteur, CCR5 ou CXCR4, selon le tropisme viral. Les virus qui utilisent CCR5 (virus R5) sont majoritairement représentés chez les patients. Ceux qui utilisent CXCR4, seuls (virus X4) ou en sus de CCR5 (virus R5X4) ne sont que rarement transmis mais leur fréquence s'accroit au cours de l'infection. Un lien entre tropisme viral et pathogénicité de l'infection a été proposé. Les virus utilisant CXCR4 sont plus fréquemment que les virus R5 associés à une accélération du déclin des LTCD4. Des contre-exemples à ce paradigme général de la pathogénicité accrue des virus X4 sont cependant nombreux, suggérant qu'il existe une hétérogénéité dans la pathogénicité des virus X4 dont les bases moléculaires ne sont pas connues. Lors de ma thèse, j'ai étudié le rôle du ligand naturel de CXCR4, i.e. la chimiokine CXCL12, comme force motrice de l'évolution de ces virus au cours de l'infection. La liaison de la chimiokine bloque en effet l'entrée virale in vitro, suggérant qu'elle représente une contrainte aux virus X4 in vivo. Nous avons émis l'hypothèse que ceux-ci évolueraient dans le sens d'un échappement à cette contrainte, conduisant à façonner leurs propriétés phénotypiques, en particulier leur pathogénicité. Pour étudier cette hypothèse, nous avons mesuré la sensibilité à l'inhibition par CXCL12 d'une trentaine de virus isolés de patients à différents stades de l'infection. Ces expériences ont permis d'identifier que des virus résistants (RES) à l'inhibition par CXCL12 sont fréquents chez les patients présentant des taux bas de LTCD4, fréquemment dans les phases tardives de l'infection, plus rarement au cours de la primo-infection. Ces résultats ont orienté mes travaux vers deux axes, l'un ayant trait aux mécanismes de la résistance des virus à CXCL12 et son incidence sur la pathogenèse de l'infection, l'autre aux mécanismes de la contre-sélection des virus X4 au cours de la transmission. J'ai montré que la résistance à CXCL12 est associée à des modifications des propriétés antigéniques d'Env et résulte de l'exploitation par les virus de molécules de CXCR4 faiblement affines pour CXCL12. Mes résultats suggèrent aussi que la résistance à CXCL12 accroit la capacité des virus à dépléter les LTCD4, notamment les LTCD4 effecteurs mémoires activés du sang périphérique. Mes résultats suggèrent que dans des sites anatomiques où la chimiokine CXCL12 est exprimée (e.g. tissus lymphoïdes), les virus RES infecteront plus efficacement les LTCD4, en particulier les cellules naïves. Ils seront donc plus enclins à altérer l'homéostasie des LTCD4, expliquant leur association avec des taux de LTCD4 bas chez les patients. Le fait que ces virus RES soient rares lors de la phase de primo-infection m'a aussi amenée dans le cadre d'un second axe à m'interroger sur les mécanismes qui conduisent les virus X4 à être contre-sélectionnés lors de la transmission. Ces résultats suggéraient que contrairement à l'idée prévalente, CXCL12 n'est pas le facteur majeur de la contre-sélection des virus X4 et que d'autres déterminants sont impliqués. Mes travaux suggèrent que des différences de tropisme cellulaire, d'antigénicité des Envs ou encore de sensibilité aux interférons de type I n'expliquent pas entièrement pourquoi les virus X4 sont moins efficacement transmis que les virus R5. D'autres hypothèses seront donc proposées à cet égard à la lumière de données récentes de la littérature. Dans son ensemble ce travail améliore notre compréhension de la physiopathologie et de la transmission du VIH-1. Aussi, l'identification que les virus RES utilisent des formes de CXCR4 différentes de celles utilisées par CXCL12 permet d'envisager de contrecarrer ces virus pour prévenir la déplétion des LTCD4 chez les patients VIH+ sous cART tout en préservant les fonctions homéostatiques essentielles de la chimiokineThe entry of HIV-1 into its target cells requires the interaction of its envelope glycoprotein (Env) on the surface of the virus with the receptor, CD4, and then with a co-receptor, CCR5 or CXCR4, depending on the viral tropism. Viruses that use CCR5 (R5 viruses) are predominantly represented in patients. Those using CXCR4, alone (X4 viruses) or in addition to CCR5 (R5X4 viruses) are rarely transmitted but their frequency increases during the course of the infection. A link between viral tropism and pathogenicity of the infection has been proposed. CXCR4-using viruses are more frequently associated with accelerated CD4TL decline than R5 viruses. Counterexamples to this general paradigm of increased pathogenicity of X4 viruses are, however, numerous, suggesting that there is heterogeneity in the pathogenicity of X4 viruses for which the molecular basis is not known. In my thesis, I studied the role of the natural ligand of CXCR4, i.e. the chemokine CXCL12, as a driving force of the evolution of these viruses during infection. Chemokine binding indeed blocks viral entry in vitro, suggesting that it represents a constraint to X4 viruses in vivo. We hypothesized that the viruses would evolve in the direction of escape from this constraint, leading to the shaping of their phenotypic properties, in particular their pathogenicity. To study this hypothesis, we measured the sensitivity to CXCL12 inhibition of about 30 viruses isolated from patients at different stages of infection. These experiments allowed us to identify that viruses resistant (RES) to CXCL12 inhibition are frequent in patients with low levels of CD4TL, frequently in the late stages of infection, more rarely during the primary infection. These results directed my work towards two axes, one dealing with the mechanisms of virus resistance to CXCL12 and its impact on the pathogenesis of the infection, the other with the mechanisms of X4 virus counter-selection during transmission. I showed that CXCL12 resistance is associated with changes in Env antigenic properties and results from viruses exploiting CXCR4 molecules that are weakly affine for CXCL12. My results also suggest that resistance to CXCL12 increases the ability of viruses to deplete CD4TL, including activated memory effector CD4TL from the peripheral blood. My results suggest that in anatomical sites where CXCL12 chemokine is expressed (e.g. lymphoid tissues), RES viruses will more efficiently infect CD4TL, especially naive cells. They will therefore be more likely to alter LTCD4 homeostasis, explaining their association with low LTCD4 levels in patients. The fact that these RES viruses are rare during the primary infection phase also led me in a second axis to question the mechanisms that lead X4 viruses to be counter-selected during transmission. These results suggested that contrary to the prevalent idea, CXCL12 is not the major factor in the counter-selection of X4 viruses and that other determinants are involved. My work suggests that differences in cell tropism, Envs antigenicity or type I interferon sensitivity do not fully explain why X4 viruses are less efficiently transmitted than R5 viruses. Other hypotheses will therefore be proposed in this respect in the light of recent data from the literature. Overall, this work improves our understanding of the pathophysiology and transmission of HIV-1. Also, the identification that RES viruses use different forms of CXCR4 than those used by CXCL12 allows us to consider counteracting these viruses to prevent CD4TL depletion in HIV+ patients on cART while preserving the essential homeostatic functions of the chemokine
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Lelièvre, Jean-Daniel. "Mort lymphocytaire et infection par le VIH : elations avec, l'état d'activation cellulaire, la réplication virale, les chimiokines et leurs récepteurs, la molécule Fas". Paris 7, 2002. http://www.theses.fr/2002PA077233.
Testo completo
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Rivière, Christel. "Fonction et régulation de l'activité de la chimiokine SDF-1 et de son récepteur CXCR4 dans la mégacaryopoïèse". Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T054.
Testo completoAbstract (sommario):
La libération des mégacaryocytes matures hors de la moelle osseuse est indispensable pour la production des plaquettes. Les mécanismes de cette libération ne sont pas clairement élucidés. Les chimiokines et leurs récepteurs ont été impliqués dans la régulation de la migration des cellules hématopoïétiques vers un site spécifique, mais également dans leur rétention dans ce site. Nous avons étudié le rôle de la chimiokine SDF-I et de son récepteur CXCR4 dans la mégacaryopoïèse, et montré que CXCR4 est exprimé dans les mégacaryocytes et les plaquettes, avec une expression croissante au cours de la maturation. Contrairement à son expression, la fonctionnalité du récepteur en réponse à SDF-I est diminuée au cours de cette différenciation. CXCR4 est couplé aux protéines Gay pour la transduction du signal. Dans une approche de RT-PCR en utilisant des oligonucléotides dégénérés, nous avons montré que plusieurs membres de la famille des protéines ROS, protéines impliquées dans la régulation négative des récepteurs couplés aux protéines Gαβγ, sont exprimés dans les mégacaryocytes matures et les plaquettes. L'expression des ARNm de RGS2 et ROSI6 augmente au cours de la maturation mégacaryocytaire, contrairement aux ROS, -1, -3 et -5. Seule l'expression de ces deux ROS sont régulées positivement par SDF-1 montrant leur rôle spécifique dans la régulation de la fonction de CXCR4. La surexpression de ROSI, RGS2, RGS3, et RGSI6, à la fois dans unelignée cellulaire mégacaryocytaire MO7e et dans des mégacaryocytes produits in vitro, conduisent à une inhibition de la réponse à SDF-1, aussi bien en migration que dans l’activation des MAP Kinases. L'ensemble de ce travail montre que le couple CXCR4/SDFI est impliqué dans la régulation de la migration des temps précoces de la mégacaryopoïèse. Ils suggèrent que la régulation positive de RGS2 et ROS16 au cours de la mégacaryopoïèse joue un rôle dans la perte de la fonction de CXCR4 et leur sortie de la moelle vers la circulationMature megakaryocytes migration out of the bone marrow represents the ultimate step for platelet production and their release into the blood circulation. Regulation of this mechanism remains to be determined. Chemokines and their receptors play a major role in regulating cell migration towards specifie site, but also in cell retention. We studied the role of the SDF-I chemokine and its receptor CXCR4 during megakaryopoiesis. CXCR4 is expressed in megakaryocytes and platelets with an increasing expression during this differentiation process. Nevertheless, in opposite to CXCR4 expression, response to SDF-1 is down regulated during megakaryocyte maturation. CXCR4 signal transduction is mediated through heterotrimeric G protein αβγ. Using RT- PCR with degenerate oligonucleotides, we showed expression of severa! ROS proteins family members, negative regulators of G protein coupled receptor signaling, in megakaryocytes and platelets. RGS2 and RGS16 transcript levels, but not ROSI, RGS3 and ROSS, increase during megakaryocyte differentiation. Only these two ROS are transcriptionnaly upregulated in response to high concentrations ofSDF-1, revealing a specifie role in downregulating CXCR4 function. ROSI, RGS2, RGS3, and RGS16 overexpression in a megakaryocytic cellline MO7e and in megakaroyctes obtained in vitro lead to an inhibition ofSDF-1 response as weil as in migration and MAP kinases activation assays. This whole work implies CXCR4/SDF-I proteins in regulation of early stages of megakaryocyte migration. Our results suggest that upregulation of RGS2 and ROS16 expression during MK maturation plays a crucial role in CXCR4 loss of function and megakaryocyte release into the blood circulation
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Fiser, Anne-Laure. "Rôle de la densité en CXCR4 à la surface des cellules lymphocytes TCD4+ dans l'émergence et la réplication des souches X4 du Virus de l'Immunodéficience Humaine de type 1". Montpellier 1, 2008. http://www.theses.fr/2008MON1T027.
Testo completoAbstract (sommario):
Il existe deux types de souches de VIH, celles utiliant le corécepteur CCR5, appelées R5 et celles utilisant le corécepteur CXCR4, appelées X4. Les souches R5 sont retrouvées tout au long de l'infection, alors que les souches X4 n'émergent que chez 30 à 50% des patients infectés et ce 7 à 10 ans après le début de l'infection. Plusieurs hypothèses ont tenté d'expliquer cette prédominance des souches R5, mais toutes se sont révélées incorrectes. Nous avons montré que la voie de signalisation induite par les souches X4 lors de leur fixation sur leur corécepteur CXCR4, passant par les protéines Gαi et les kinases ERK1/2, de même que celle déclenchée par les souches R5 via CCR5, favorisait la rétrotranscription du virus. Nous avons également mis en évidence que la densité en CXCR4 à la surface des cellules cibles influençait l'efficacité de réplication des souches X4. Ensuite nous avons comparé, in vitro, l'efficacité de réplication des souches R5 et X4 dans des lymphocytes TCD4+ (LTCD4+) du sang périphérique. La mise en culture de ces cellules induit une sur-expression membranaire de CXCR4, due à l'absence de son ligand CXCL12 provoquant son internalisation. Nous avons alors cocultivé les LTCD4+ avec des cellules produisant CXCL12, ce qui a maintenu la densité membranaire de CXCR4 à un niveau physiologique. Dans ces conditions, les souches R5 se sont révélées plus réplicatives que les souches X4, ce qui pourrait être une des causes de la prédominance des souches R5 in vivo. Nous avons enfin étudié in vitro, si les densités respectives en corécepteur influençaient l'apparition des souches X4 à partir des souches R5. Nous montrons que le délai d'émergence des souches X4 est dépendante d'une forte quantité de corécepteur CXCR4 à la membrane des cellules et indépendant de la densité en CCR5. Ce résultat suggère qu'in vivo, une sur-expression de CXCR4 à la surface des cellules LTCD4+ pourrait favoriser l'émergence des souches X4.
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Carnec, Xavier. "Relations structure fonction et inhibitions des co-recepteurs CCR5 et CXCR4 dans l'entrée du VIH-1". Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077083.
Testo completoAbstract (sommario):
L’entrée du VIH-1 dans les cellules cibles est gouvernée par l'interaction de la glycoprotéine d'enveloppegpl20 du virus avec CD4 et un co-récepteur, membre de la famille des récepteurs aux chimiokines : CCR5 ou CXCR4. A l'aide d'anticorps monoclonaux nous montrons que CXCR4 est présenté sous différentes conformations en surface des cellules, dont FECL-2 représente au moins l'un des déterminants. La gp120 reconnaîtrait efficacement ces isoformes de CXCR4, et interagirait principalement avec l'ECL-2. L'inhibition hétérogène observée entre isolats viraux est attribuée à une utilisation différente des résidus qui composent l'ECL-2 car tous les isolats sont également sensibles à l'inhibiteur AMD310Q. L'inhibition de-l'entrée CCR5 dépendante a été étudiée à travers l'utilisation de deux types d'inhibiteurs. Les inhibiteurs de faible poids moléculaire, tel SCH-C. Bloqueraient la liaison de la boucle V3 de gp120 à FECL-2 de CCR5. De manière isoiat dépendante. Alors que ces molécules inhibent une étape précoce de l'interaction gpl2Q/CCR5. L'anticorps monocional PA14 en inhibe une étape tardive, telle la transition entre ancrage et multitmérisation du complexe gpl2Q/Cp4/CCR5 et la fusion induite par gp41. Quelque soit le co-récepteur, l'ECL-2 tient un rôle majeur dans l'interaction avec gp120, contrairement au N-terminal. L'inhibition de l'interaction entre l'ECL-2 des co-récepteurs et la boucle V3 des gp120 empêche l'entrée du VIH-1 et représente un nouveau mode de contrôle de l'infection. Le développement d'antiviraux basés sur le mécanisme d'action de PA14, pour les deux co-récepteurs présenterait l'avantage d'une inhibition indépendante des régions variables de gpl20Entry of the Human Immunodeficiency Virus (HIV-1) into target cells is mediated by consecutive interactions of envelope glycoprotein gp120 vith CD4 and a coreceptor. In vivo, only CCR5 and CXCR4 are biologically relevant. CCR5 using strains is associated with transmission and during the early stage of disease whereas emergence of CXCR4 using strains matches with late-stage of. The. Disease. In order to further elucidate the determinants of CXCR4/gpl20 interactions, we used a panel of independent anti-CXCR4 monoclonal antibodies. Our results indicate that gp120 interacts mostly with CXCR4 ECL2, and less or not at all with the amino terminal domain, gp120 may recognize a broad range of CXCR4 sub-populations. Isolate specific interactions of different HIV-1 strains with CXCR4 may depend on recognition of different residues within CXCR4 ECL2. Inhibition of CCR5 dependant entry was investigated through the use of two classes of CCR5 antagonists. Small molecules inhibitors (namly SCH-C and TAK779) seem to inhibit binding of gp120's V3 loop to CCR5 ECL-2 in a isolat dependant manner, in contrast to anti-CCRS Mab PA14. Which inhibit a later stage of the entry mechanism. Synergistic inhibition was observed when the two classes of inhibitors were assayed together for_entry inhibition, revealing different mechanisms of action, Our results highlight the role of CXCR4 and CCR5 ECL-2 along the course of HIV-1 entry into target cells. Targetting this immuno-dominant epitope of both biologically relevant HIV-1 entry coreceptor will provide a new insight for efficiently controlling HIV-1 infection
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Gamba, Laurent. "Etude de la régulation du gène codant le récepteur de chimiokine CXCR4 dans le système de la ligne latérale postérieure du poisson-zèbre (danio rerio)". Thesis, Montpellier 2, 2010. http://www.theses.fr/2010MON20085/document.
Testo completoAbstract (sommario):
La ligne latérale postérieure embryonnaire du poisson-zèbre est composée d'un ensemble d'organes sensoriels, appelés neuromastes, qui permet au poisson de détecter les mouvements de l'eau. Le primordium qui génère la ligne latérale postérieure embryonnaire migre de la tête vers l'extrémité de la queue le long d'une piste de cellules sécrétrices de SDF-1, et dépose des groupes de cellules précurseurs des neuromastes. Cette migration dépend de la présence de CXCR4, le récepteur de SDF-1, dans la région en tête du primordium et de la présence du second récepteur de SDF-1, CXCR7, dans la région en queue du primordium. L'objectif de ma thèse est d'identifier des régulateurs de l'expression de cxcr4b au sein du primordium. Nous avons montré que l'inactivation du récepteur des strogènes ESR1 induit l'expression ectopique de cxcr4b dans les cellules de queue du primordium alors que sa surexpression induit une réduction du domaine d'expression de cxcr4b, suggérant que ESR1 agit comme un répresseur de cxcr4b. Cette découverte expliquerait pourquoi les strogènes diminuent la capacité métastatique des cellules du cancer du sein strogéno-dépendants. L'inactivation de ESR1 conduit aussi à l'extinction de l'expression de cxcr7b dans les cellules de queue du primordium, cet effet étant toutefois indirect et induit par la signalisation ectopique SDF-1/CXCR4 dans ces cellules. L'inactivation et la surexpression de ESR1 provoquent toutes deux une migration défectueuse du primordium, confirmant l'importance de ce récepteur dans le contrôle de la migration dépendante de SDF-1. Nous avons aussi montré qu'un effecteur majeur de la signalisation Wnt canonique, LEF-1, contribue au contrôle de l'expression de cxcr4b et de cxcr7b dans les cellules en tête du primordium. Nous montrons que la prolifération cellulaire, qui assure une taille constante du primordium en dépit des dépositions successives de cellules, est réduite en absence de LEF-1, et que cela conduit à une ligne latérale postérieure incomplèteThe zebrafish embryonic posterior lateral line is componed by a set sense organs, called neuromasts, allowing the fish to detect the water movements. The primordium that generates the embryonic posterior lateral line of zebrafish migrates from the head to the tip of the tail along a trail of SDF-1-producing cells, and deposits cell groups that will become the neuromasts. This migration critically depends on the presence of the SDF-1 receptor CXCR4 in the leading region of the primordium and on the presence of a second SDF1 receptor, CXCR7, in the trailing region of the primordium. The aim of my thesis is to identify regulators of the cxcr4b expression within the primordium. Here we show that inactivation of the estrogen receptor ESR1 results in ectopic expression of cxcr4b throughout the primordium, whereas ESR1 overexpression results in a reciprocal reduction in the domain of cxcr4b expression, suggesting that ESR1 acts as a repressor of cxcr4b. This finding could explain why estrogens significantly decrease the metastatic ability of ESR-positive breast cancer cells. ESR1 inactivation alsoleads to extinction of cxcr7b expression in the trailing cells of the migrating primordium; this effect is indirect, however, and due to the down-regulation of cxcr7b by ectopic SDF-1/CXCR4 signaling in the trailing region. Both ESR1 inactivation and overexpression result in aborted migration, confirming the importance of this receptor in the control of SDF-1-dependent migration. We also showed that a major effector of the canonical Wnt signaling, LEF-1, contributes to the control of both cxcr4b and cxcr7b expression in the leading cells of the primordium. We show that cell proliferation, which ensures constant primordium size in spite of sucessive rounds of cell deposition, is reduced upon lef1 inactivation, leading in a truncated posterior lateral line
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Deiva, Kumaran. "Pénétration astrocytaire et neuroprotection au cours de l'infection par le VIH1 : rôle des récepterus de chimiokines CX3CR1, CCR5, CXCR4". Paris 11, 2006. http://www.theses.fr/2006PA11T041.
Testo completo
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Poulain, Stéphanie. "Caractérisation génomique des mutations du gène CXCR4 dans la maladie de Waldenstrom". Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S032/document.
Testo completoAbstract (sommario):
Contexte: La maladie de Waldenstrom (MW) est un syndrome lymphoprolifératif B caractérisé par une infiltration de la moelle osseuse par des lymphoplasmocytes et un pic monoclonal de type IgM. La mutation MYD88L265P est considérée comme un événement fondateur dans cette hémopathie. Les études par séquençage complet du génome ont identifié des mutations du gène CXCR4 (CXCR4 Muté) dans la MW. CXCR4 est un récepteur couplé aux protéines G qui participe aux processus de migration cellulaire et d’activation de différentes cascades de signalisation parmi lesquelles figurent RAS, Akt et NFKB. Les mutations de CXCR4 joueraient un rôle important dans la physiopathologie de la MW et dans les mécanismes de chimiorésistance de certaines thérapeutiques ciblées. Notre objectif a été d’étudier le profil génomique des MW avec mutations CXCR4 par séquençage à haut débit ciblé et par puces à SNP (single nucleotide polymorphism) et d’évaluer leur impact clinique. Matériel et Méthodes. Les échantillons de moelle osseuse de 98 MW ont été analysés. L’ADN tumoral a été extrait après sélection des cellules B. Des échantillons appariés (tumeur/ lymphocytes T) ont été utilisés comme référence intra-individuelle. Les mutations de CXCR4 ont été étudiées en séquençage ciblé à haut débit (NGS) ce qui a permis d’évaluer l’architecture clonale dans les cellules tumorales de MW et /ou par séquençage Sanger (exon 2). Le spectre mutationnel de 8 gènes candidats impliqués dans les voies des Toll Like Receptor, RAS et du BCR a été étudié : MYD88L265P, CD79A (domaine ITAM), CD79B (domaine ITAM), CARD11 (exon 5-9), N RAS (exon 2-3), K RAS (exons 2-3), BRAF6 (exon 15), PTEN (exon 5-7). L’analyse des profils génomiques a été réalisée en puces à SNP (Genome-Wide Human SNP Array 6.0 (Affymetrix chips) dans une cohorte de 53 patients. L’expression de CXCR4 et du CD49d (VLA4) ont été étudiées en cytométrie de flux (n=53). Résultats. Nous avons identifié une mutation de CXCR4 dans 24.5% des MW. Toutes mutations sont hétérozygotes, acquises et localisées dans le domaine C terminal de la protéine. Parmi les 17 variants observés, nous identifions 12 nouvelles mutations dans la MW. Les mutations les plus fréquentes sont le variant C1013G (S338X) (5/98) et la mutation C1013A (S338X) (3/98). Les mutations de CXCR4 muté sont associées à une plus forte expression de la protéine CXCR4 en cytométrie de flux, indépendamment du type de mutations de CXCR4 (n=53) (p=0.003). Aucun impact en terme de niveau d’expression de l’intégrine VLA4 (CD49d), qui interagit directement avec CXCR4, n’est observé. Des mutations sous clonales de CXCR4 sont identifiées en NGS dans 4/14 cas. Les mutations de CXCR4 sont présentes dans le même clone que MYD88 L265P, mais sont mutuellement exclusives des mutations de la voie du BCR (CD79A / CD79B). Nous avons ensuite identifié une signature génomique plus complexe dans le groupe des MW CXCR4 muté. Les mutations de CXCR4 sont associées aux gains du chromosome 4 (p=0.002), aux gains en Xq (p=0.002), aux délétions 6q (p=0.038) et présentent un nombre d’anomalies plus élevées (5.8 versus 2.8 per patient, p=0.046). Nous avons ensuite cherché à caractériser le profil clinico biologique des patients MW avec mutation CXCR4 muté. Les mutations de CXCR4 sont associées à un pic monoclonal IgM plus élevé (p=0.006) et à une thrombopénie (p=0.018). Aucun impact en terme de survie globale n’a été observé dans notre cohorte selon le statut mutationnel de CXCR4. Conclusion. Notre étude a permis de décrire de nouvelles mutations de CXCR4 dans la MW et d’identifier une signature génomique plus complexe associée dans les MW CXCR4 muté parmi les MW MYD88L265P. Cette analyse des mutations de CXCR4 a d’autre part montré l’existence d’une hétérogénéité intra-clonal (dans le clone muté MYD88 et CXCR4) et interclonal (mutations du BCR et de CXCR4 dans le groupe des WM mutés MYD88L265P). Nos résultats suggèrent donc l’existence de différents sous groupes génomiques dans la MWPurpose. Waldenstrom macroglobulinemia (WM) is a B-cell malignancy characterized by bone marrow infiltration of clonal lymphoplasmacytic cells, which produce a monoclonal immunoglobulin M (IgM). MYD88L265P mutation may be considered as a founder event because of it high frequency in WM. Whole-genome sequencing has revealed CXCR4 mutations (CXCR4Mut) in WM. CXCR4 is a G-protein-coupled receptor that promotes migration and activation of several pathways including RAS, Akt and NFKB. CXCR4 mutation has proved to be of critical importance in WM, in part due to its role as a mechanism of resistance to several agents of targeted therapy. We have therefore sought to unravel the different aspects of CXCR4 mutations in WM using next generation sequencing, and SNP (single nucleotide polymorphism) arrays and to study the clinical impact.Experimental Design. Bone marrow samples of 98 patients with WM (mean age: 67 years) were analyzed. Tumoral DNA was extracted following CD19 B cell selection. Paired samples (tumor/T lymphocytes) were used as an intra-individual reference. CXCR4 mutation was analyzed by ultra deep targeted NGS (next generation sequencing) (all exons) allowing study of the clonal architecture in WM cells and/or sanger sequencing (SaS) (exon 2). Mutational spectrum of 8 candidate genes involved in Toll Like Receptor, RAS and B Cell Receptor (BCR) pathway along with MYD88L265P, CD79A (ITAM domain), CD79B( ITAM domain), CARD11 (exon 5-9), N RAS (exon 2-3), K RAS (exons 2-3), BRAF6 (exon 15), PTEN( exon 5-7), was also analysed in an integrative study. Genome-Wide Human SNP Array 6.0 (Affymetrix chips) was performed in 53 patients to decipher genomic signature of CXCR4Mut. Flow cytometry was performed to assess CXCR4 and CD49d (VLA4) expression (n=53).Results. We found all mutations to be heterozygous, somatic and located in the C-terminal domain of CXCR4 in 24.5% of the WM. CXCR4 mutations led to a truncated receptor protein. Among the 17 variants, 12 new variants were identified in WM. The most frequent mutation was the CXCR4 C1013G (S338X) mutation (5/98) followed by CXCR4C1013A (S338X) (3/98). Interestingly, CXCR4Mut was associated to higher expression of CXCR4 protein by flow cytometry, independently of the type of CXCR4 mutation (n=53) (p=0.003). No impact on the expression profile of the integrin VLA4 (CD49d) which directly interacts with CXCR4 was observed. Sub clonal CXCR4 mutations identified using NGS were identified in 4/14 cases. CXCR4 mutations pertain to the same clone as to MYD88 L265P mutations, but were mutually exclusive to CD79A/ CD79B mutations (BCR pathway). We identified a genomic signature in CXCR4Mut WM traducing a more complex genome. CXCR4 mutations were also associated with gain of chromosome 4 (p=0.002), gain of Xq (p=0.002) and deletion 6q (p=0.038) and a higher number of genomic abnormalities (5.8 versus 2.8 per patient, p=0.046). We thought to identify clinical-biologic characteristics of WM with CXCR4Mut features. CXCR4 mutations were associated with higher IgM monoclonal component (p=0.006) and thrombocytopenia (p=0.018). However, no impact in overall survival was observed according to CXCR4 mutational status. Conclusions. Our study panned out new CXCR4 mutations in WM, and identified a specific signature associated to CXCR4Mut, characterized with complex genomic aberrations among MYD88L265P WM. The study of CXCR4 mutations showed existence of intraclonal (variation in co-expression of MYD88 and CXCR4 mutations) and interclonal (BCR and CXCR4 mutations in MYD88L265P WM) heterogeneity. Our results suggest the existence of various genomic subgroups in WM
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Barbeito, Ana Gabriela. "Rôle de la chimiokine CXCL12 et de son récepteur CXCR4 dans l'interaction motoneurone-glie dans la Sclérose Latérale Amyotrophique". Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066597.
Testo completoAbstract (sommario):
La sclérose latérale amyotrophique (SLA) est une maladie fatale du motoneurone qui entraîne une paralysie progressive. Les cellules microgliales (macrophages du système nerveux central) jouent un rôle primordial dans la progression de la maladie, mais les facteurs provenant des motoneurones qui activent et attirent les cellules microgliales ne sont pas connus. Nos résultats montrent que la chimiokine CXCL12 est exprimé in vivo par les motoneurones dans un modèle de rat pour la SLA (exprimant la Cu/Zn superoxide dismutase mutée (SOD1G93A)) et que son principal récepteur,CXCR4 est exprimé in vitro et in vivo par la microglie. Notamment, l'expression motoneuronale de CXCL12 augmente au cours de la phase symptomatique de la maladie ainsi que celle de CXCR4 dans la moelle épinière lombaire des rats SOD1G93A. Au niveau fonctionnel CXCL12 induit, via CXCR4, une réponse morphologique microgliale (migration, activation) ainsi qu'une réponse chimiotactique. Cette dernière a été statistiquement plus importantes sur les cellules microgliales SOD1G93A par rapport au cellules contrôles à la concentration de 10ng/ml et fût inhibé par le bloquant de CXCR4, AMD3100. Finalement, nos études de blocage pharmacologique de CXCR4 (AMD3100) par voie intrathécale chez des souris exprimant la SOD1G93A, n'ont pas révélé une différence dans la survie. L'ensemble de ces travaux montrent une augmentation dans l'expression de CXCL12/CXCR4 au cours de la dégénérescence du motoneurone ainsi qu'un effet chimiotactique plus important de CXCL12 sur les microglies SOD1G93A, ce qui met en évidence un possible rôle de CXCL12/CXCR4 au cours de la dégénérescence des motoneurones dans des modèles de SLAAmyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal motor neuron disease that causes progressive paralysis. Microglial cells (macrophages of the central nervous system) play a crucial role in the progression of the disease. However the factors released by suffering motor neurons to activate and attract microglia are still largely unknown. Our results show that the chemokine CXCL12 is expressed by motor neurons in vivo and that its main receptor, CXCR4 is expressed in vitro and in vivo by microglial cells in a rat model for ALS ( expressing Cu / Zn superoxide dismutase mutant (SOD1G93A)). Notably , CXCL12 moto neuron expression and CXCR4 lumbar spinal cord expression, increases during the symptomatic phase of the disease in the SOD1G93A rats. At the functional level CXCL12 induced via CXCR4, a statistically sgnificant chemotactic response of SOD1G93A microglial cells compared with controls at a concentration of 10ng/ml cells. Finally , our study of pharmacological blockade of CXCR4 ( AMD3100 ) in mice expressing SOD1G93A , showed no difference in survival. Overall our studies show an increase in the expression of CXCL12/CXCR4 during motor neuron degeneration and a greater chemotactic effect of CXCL12 on SOD1G93A microglia, which highlights a possible role of CXCL12 / CXCR4 in motor neuron degeneration in ALS models
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Baudouin, Stéphane. "Le développement neuronal : rôle de la protéine adaptatrice CD3zeta et mécanismes régulant la fonction du récepteur de chimiokine CXCR4". Nantes, 2009. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=e1c7ec15-2047-495f-a325-8bf974e8128c.
Testo completoAbstract (sommario):
Le développement neuronal est assuré par un ensemble de mécanismes complexes permettant à terme la formation d'un réseau fonctionnel. Des données récentes montrent que des molécules bien décrites dans le système immunitaire ont également un rôle non immun dans des étapes fondamentales du développement cérébral. C'est dans ce contexte que nous avons étudié la molécule adaptatrice CD3zeta et le récepteur de chimiokine CXCR4. A des stades précoces de développement de neurones en culture, nous avons montré que CD3zeta est sélectivement associé aux cônes de croissance et aux filopodes. Des approches combinées de perte et de gain de fonction ont montré un rôle inhibiteur de CD3zeta dans la régulation du développement dendritique. Nos résultats suggèrent une nouvelle fonction de CD3zeta dans le contrôle de la morphogénèse dendritique. La chimiokine SDF-1 et son récepteur CXCR4 ont un rôle crucial dans plusieurs aspects du développement neuronal. Au cours de la formation des prolongements neuronaux, il a été montré que SDF-1 régule spécifiquement la formation de l’axone sans affecter les autres neurites. Nous avons montré que la stimulation du récepteur CXCR4 par son ligand SDF-1 induit l’internalisation du récepteur dans les dendrites mais pas dans l’axone. Ce résultat suggère que l’absence d’internalisation de CXCR4 dans le domaine axonal pourrait être un mécanisme permettant une action sélective de SDF-1 sur la pousse axonale. Nos résultats révèlent un rôle inédit de CD3zeta dans le développement neuronal et un mécanisme de régulation original de CXCR4 pouvant favoriser l’action sélective de SDF-1 sur les axonesNeuronal development is achieved by a complex set of mechanisms leading ultimately to the formation of a functional network. Recent data show that well-known molecules of the immune system also have non immune functions in critical stages of cerebral development. In this context, we studied the adaptor molecule CD3zeta and the chemokine receptor CXCR4. At early stages of neuronal development in culture, we have shown that CD3zeta is selectively associated with growth cones and filopodia. A combination of loss- and gain-of-function experiments in cultured neurons showed an inhibitory function of CD3zeta in dendrite development. These findings reveal a novel role of CD3zeta in the control of dendrite morphogenesis. The chemokine SDF-1 and its receptor CXCR4 have a critical role in many aspects of neuronal development. During the formation of neuronal processes, it has been shown that SDF-1 selectively regulates axonal patterning and does not affect the other neurites. We found that the stimulation of CXCR4 by SDF-1 induces receptor internalization in the somatodendritic domain but not in axons. This result suggests that the lack of CXCR4 internalization in axons might be a mechanism used to allow a selective action of SDF-1 in axonal growth. Our results reveal a novel role of CD3zeta in neuronal development and an original regulatory mechanism for CXCR4 that could promote a selective action of SDF-1 on axons
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Boyé, Kevin. "Implication de CXCR3 dans la progression tumorale : une nouvelle cible thérapeutique". Thesis, Bordeaux, 2016. http://www.theses.fr/2016BORD0315/document.
Testo completoAbstract (sommario):
CXCR3 appartient à la famille des récepteurs couplés aux protéines G. Avec ses ligands, les chimiokines CXC, CXCR3 régule diverses fonctions biologiques et participe à de nombreux processus comme l’angiogenèse, l’inflammation et le cancer. La complexité de CXCR3 provient de son épissage alternatif qui conduit à des isoformes distinctes. CXCR3-A est reconnu pour promouvoir la prolifération, la survie et la migration cellulaire tandis que CXCR3-B induit des signaux inhibiteurs de la croissance cellulaire.Le modèle cellulaire U87, dérivé d’un glioblastome humain, a été utilisé afin d’étudier les mécanismes moléculaires régulant l'activité et le trafic des isoformes de CXCR3 dans les cellules tumorales. CXCR3 est le récepteur fonctionnel de l’activité angiostatique de CXCL4 et son variant CXCL4L1. En fonction de leur état d'oligomérisation, ces deux chimiokines ont des interactions préférentielles avec les isoformes de CXCR3. L’activation de CXCR3-A conduit à un important changement conformationnel et induit des voies de signalisation pro-migratoires. L’étude du trafic souligne l’importance de la clathrine et du réseau Trans-Golgi dans l’internalisation et le recyclage de CXCR3-A. Pour la première fois, LRP-1 a été identifié comme nouveau partenaire de CXCR3-A. LRP1 n’est pas seulement reconnu comme un récepteur de l’endocytose mais également comme une protéine de la signalisation. LRP1 interagit avec CXCR3-A au niveau extracellulaire et régule sa conformation, son trafic et son activité pro-tumorale.L'utilisation de modèles cellulaires d'adénocarcinome pancréatique a permis de caractériser CXCL4L1 comme facteur pro-tumoral, via l’activation de CXCR3-A dans les cellules tumorales. CXCL4L1 apparait pour la première fois comme un biomarqueur important dans la progression du cancer pancréatique.Dans les différents modèles, les signalisations chimiokines CXC/CXCR3-A induisent une augmentation des propriétés invasives tumorales. Au niveau moléculaire, l’association de CXCR3 à diverses protéines (ligands et partenaires) est essentielle pour réguler les fonctions biologiques de la cellule tumorale.Les nanoparticules sont désormais connues comme une nouvelle génération d'anticorps thérapeutiques présentant de nombreux avantages par rapport aux anticorps conventionnels. Ainsi, le développement de nanoparticules associées à des inhibiteurs de CXCR3 apparaît comme une nouvelle stratégie thérapeutique anti-tumorale prometteuseCXCR3 belongs to the G-protein-coupled receptors family. With its ligands, the CXC chemokines, CXCR3 regulates several biological functions and plays important roles in angiogenesis, inflammation and cancer. The interaction with CXCR3 is rather complex due to the presence of distinct spliced isoforms. CXCR3-A is known to promote cell proliferation, survival, and migration while CXCR3-B leads to cell growth inhibition.The human glioblastoma cell model, U87, was used to study the molecular mechanisms regulating the activity and trafficking of CXCR3 isoforms in tumor cells. CXCR3 has been reported as the functional receptor for the angiostatic activity of CXCL4 and its variant CXCL4L1. Depending on their oligomerization status, these two chemokines present preferential interaction with CXCR3 isoforms. Activation of CXCR3-A leads to an important conformational change and induces pro-migratory signaling pathways. Studies on the vesicular trafficking highlight the importance of the clathrin and the Trans-Golgi network for both internalization and recycling of CXCR3-A. For the first time, LRP-1 is identified as a new partner of CXCR3-A. LRP1 is not only recognized as an endocytic receptor but also as a signaling protein. LRP1 interacts with CXCR3-A via its extracellular α subunit and regulates CXCR3-A conformation, trafficking and pro-tumoral activity.Pancreatic ductal adenocarcinoma cell models were used to characterize CXCL4L1 as a pro-tumoral factor that activates CXCR3-A in tumor cells. For the first time, CXCL4L1 appears as an important biomarker for pancreatic cancer progression.In the different cell models, signaling pathways of CXC chemokine/CXCR3-A lead to an increase in tumor invasive properties. At the molecular level, the association of CXCR3 with various proteins (ligands and partners) is essential to regulate tumor cell biological functions.The nanoparticles are now known as a new generation of therapeutic antibodies with many advantages over conventional antibodies. Thus, the development of nanoparticles associated to CXCR3 inhibitors appears as a new promising pharmacological targeted strategy to treat cancer
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Roland, Joachim. "Étude des signaux transduits par la molécule CXCR4 suite à l'activation par SDF-1 ou la gp120 du VIH". Montpellier 1, 2001. http://www.theses.fr/2001MON1T008.
Testo completoAbstract (sommario):
La molecule cxcr4, le recepteur aux chimiokines appartenant a la famille des recepteurs a 7 domaines transmembranaires couples aux proteines g, est le co-recepteur principal utilise par les souches du virus de l'immunodeficience humaine (vih) ayant un tropisme pour les lignees cellulaires t. La molecule cxcr4 est capable de transduire des signaux apres sa liaison avec son ligand naturel, la chimiokine sdf-1, et avec la glycoproteine d'enveloppe du vih-1 (gp120). Le contact de la gp120 sur cxcr4 induit une signalisation cellulaire differente de celle engendree par sdf-1 qui n'interfere pas sur l'entree virale. Durant mes trois annees de these, nous nous sommes interesses a l'etude de la molecule cxcr4 et des signaux qu'elle transduit suite a son contact avec ces deux molecules. [. . . ] parallelement, nous avons cherche a determiner si la molecule cxcr4 etait capable de transduire egalement des signaux suite a un contact extracellulaire avec la glycoproteine d'enveloppe gp120 du vih. Nous avons demontre que la glycoproteine d'enveloppe du virus pouvait induire des signaux via cxcr4 conduisant a la mort programmee de la cellule (ou apoptose). [. . . ] nous avons demontre l'implication de la voie mitochondriale et de la cascade des caspases. Ces resultats affirment le role majeur de la molecule cxcr4 dans la physiopathologie du sida, ainsi que les fonctions specifiques et distinctes qu'elle assure suite a l'activation par sdf-1 ou la gp120, permettant d'envisager des strategies therapeutiques ciblant les voies de signalisation induites specifiquement par la gp120 au travers de cxcr4.
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Tchou, Isabelle. "Étude de l'infection des cellules de Langerhans par le virus d'immunodéficience humaine et perspective de neutralisation par des anticorps au niveau des muqueuses". Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO1T010.
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