Tesi sul tema "Os humains"

Dans ce travail, nous avons voulu apporter notre contribution dans le domaine de la recherche sur les poux humains, afin d’en savoir plus sur l’origine et la phylogéographie des clades, les pathogènes qui leurs sont associés et comprendre les mécanismes impliqués dans la résistance à l’ivermectine. Nous avons obtenu des résultats concrets dans chacune des thématiques abordées. En effet, nous avons (i) pour la première fois rapporté la présence de clade B au Moyen-Orient datant de plus de 2000 ans, supportant une origine asiatique pour ce clade, (ii) mis en évidence l'existence d'un nouveau clade mitochondrial (Clade F), (iii) mis en place une nouvelle technique de PCR en temps réel pour l’identification moléculaire rapide des clades de poux, (iv) mis en évidence chez des poux de tête la présence de l’ADN de plusieurs bactéries, dont plusieurs bactéries qui ne sont pas habituellement vectorisées par les poux telles que Coxiella burnetii, Rickettsia aeschlimannii et de potentielles nouvelles espèces de genre Anaplasma et Ehrlichia ont été détectées pour la première fois chez les poux. Enfin, nous rapportons des données nouvelles sur la résistance des poux à l’ivermectine : (v) en mettant en évidence la présence de trois mutations non-synonymes au niveau de GluCl des poux cliniquement résistants à l’ivermectine, (vi) et en démontrant, pour la première fois, chez une population de poux de laboratoire résistante à l’ivermectine qu’une répression significative de la complexine est à l’origine de la résistance. Cette découverte représente la première évidence liant la complexine à la résistance aux insecticides
In this thesis, we are interested in studying human lice and we aimed to learn more about the origin and phylogeography of clades, lice-borne associated pathogens and to investigate potential mechanisms underlying resistance to ivermectin in lice. We obtained concrete results that have led to scientific publications. Indeed, (i) we reported for the first time the existence of the clade B in the Middle East, dating approximately to 2,000 years old, supporting an Asian origin for this clade, (ii) we highlighted the existence of a sixth mitochondrial clade (Clade F), (iii) we developed a new qPCR for a quick molecular identification of all the known clades of lice, (iv) we identified the presence of the DNA of several bacterial pathogens in head lice, among which several bacteria are not usually associated with lice, such as Coxiella burnetii, Rickettsia aeschlimannii, Borrelia theileri and potential new species from the Anaplasma and Ehrlichia. We finally, investigated mechanisms underlying resistance to ivermectin in lice: (v) we have identified, for the first time, the occurrence of three non-synonymous mutations in GluCl gene in clinically confirmed ivermectin resistant head lice, (vi) and we have identified the involvement of neuronal protein, a complexin, in laboratory ivermectin-selected resistant lice. This finding represents the first evidence linking complexin to insecticide resistance

Chez les primates, le visage s'organise de manière assez similaire avec deux yeux, un nez et une bouche disposés dans un ovale. Dès lors on peut se demander si le système de traitement des visages chez les primates humains et non humains pourrait avoir une origine évolutive commune. Pour répondre à cette question, nous avons vérifié‚ la capacité‚ de sujets humains et de trois espèces de primates non humains à reconnaître des visages de leur propre espèce et d'une autre espèce que la leur. Chez l'être humain, nous avons montré‚ que les humains reconnaissaient mieux les visages d'humains et de primates non humains que des visages de moutons lorsqu'ils recevaient une instruction de reconnaissance (dans un test de choix forc‚). Cependant, dans un test de reconnaissance spontanée les humains discriminent l'un de l'autre des visages d'humains, ce qui n'est pas le cas pour les visages d'autres espèces de primates. De plus, nous avons étudié le rôle de l'expérience dans la reconnaissance des visages d'une autre espèce chez l'homme. En effet, la littérature rapporte que les humains traitent préférentiellement la configuration des visages, c'est-à-dire la relation entre les traits du visage plutôt que chaque trait du visage de manière isolée. Ce traitement configural serait permis grâce à l'expérience acquise pour les visages. Des experts en primatologie se sont révélés plus performants dans le traitement des visages de primates non humains comparés à des non experts. Ils traitaient mieux les visages d'humains que les visages d'une autre espèce de primate. La reconnaissance des visages est donc spécifique de l'espèce chez l'homme. Avec des tests de reconnaissance spontanée nous avons mis en évidence une espèce spécificité comparable chez des macaques de Tonkéan, des macaques de Java et chez des capucins bruns. Une analyse de la configuration des visages de plusieurs espèces de primates a révélé qu'une ou deux variables configurales (telle que la distance entre la base du nez et le menton par exemple suffisaient à caractériser un visage au niveau de l'espèce. La différence dans la configuration des visages d'une espèce de primate à l'autre peut-être l'un des éléments qui empêche le système de reconnaissance de traiter ces visages aussi efficacement que les visages de sa propre espèce. Notre travail permet de considérer que le système de reconnaissance des visages de l'ancêtre commun aux primates pourrait avoir été suffisamment élaboré pour permettre encore aujourd'hui une reconnaissance efficace et espèce spécifique pour les espèces actuelles
In primates, faces share strong similarities with two eyes, a nose and the mouth arranged similarly in face. Do primate share a common face recognition system ? Does this system allow a recognition of their own species only, or does it allow to discriminate between faces of other species ? We studied face recognition capacities in four primate species : humans, tonkean macaques, long-tailed macaques and brown capuchin monkeys. Using a forced choiced task, we have shown that humans performed better in recognition of human and non human primates compared with recognition of sheep faces. However, ability to recognise other primate faces was poor when the tests conditions became harder or in passive viewing task. In addition we tested the role of expertise in the recognition of faces of other species in humans. Literature reports that face recognition may be dependent of the experience with the stimuli, that is, experience would give the ability to treat the configuration of the face. Primatologists revealed strong abilities in recognition of non human primate faces in forced choice recognition task, but they recognised only human faces in passive viewing task. Thus, face recognition is species specific in humans. A similar species specificity was revealed in passive tasks with Tonkean macaques, longtailed macaques, and brown capuchin monkeys. We concluded that the automatic processes involved in face recognition in primates are species specific. A morphometric analyses of the configuration of the stimuli showed that faces can be discriminated at the species level with one or two morphological variables only, suggesting that the face recognition system may use these configural information to engage face recognition or not. As the four species showed the same pattern of species specificity, we conclude that the ancestral simian form may have already need the elaborated face recognition system and may therefore has been a highly social species

Une mise au point bibliographique rappelle les connaissances actuelles sur l'élastine. Une protéolyse de l'élastine pulmonaire étant constatée durant le processus qui conduit à l'emphysème, la dégradation de l'élastine pulmonaire humaine par les enzymes leucocytaires a été entreprise "in vitro" dans le but de caractériser des produits de digestion susceptibles d'être mis en évidence dans les liquides biologiques. L'élastine pulmonaire d'un sujet âgé et celle de poumons de nouveau-nés ont été préparées et soumises à des études de solubilisation par l'élastase et la cathepsine g leucocytaires. Les fragments solubles ont été caractérisés

Les cytochromes p-450 constituent une superfamille d'enzymes impliquees a la fois dans la detoxication des nombreux xenobiotiques (medicaments, polluants environnementaux, composes chimiques) et dans le metabolisme de divers composes endogenes (acides gras, steroides, vitamines liposolubles). Cependant, dans certains cas, le metabolisme des xenobiotiques par les cytochromes p-450 peut etre a l'origine de phenomenes pathologiques (toxicite cellulaire, immuno-allergie, cancerogenese). Les polymorphismes genetiques, l'induction et la repression de l'expression des cytochromes p-450 par des substances etrangeres a l'organisme, sont a l'origine d'importantes variations interindividuelles de ces enzymes et representent des facteurs de risque pour la survenue de processus toxiques. Les cytochromes p-450 peuvent intervenir dans les processus cancerigenes par deux voies distinctes. Les cytochromes p-450 peuvent activer des composes genotoxiques capables d'interagir avec les macromolecules cellulaires et d'induire la cancerogenese chimique. Afin de determiner si le polymorphisme genetique du cytochrome p-450 2d6 represente reellement un facteur de risque pour la survenue du cancer pulmonaire, une etude de genotypage des metaboliseurs lents et ultra rapides de la debrisoquine a ete realisee sur une population caucasienne, d'origine francaise, constitue de 301 cas atteints de cancer pulmonaire et de 310 individus controles. Aucune association a pu etre demontree entre ces phenotypes et la susceptibilite au cancer pulmonaire. Cependant, des resultats, a la limite de la significativite, suggerent un risque accru pour les metaboliseurs ultra rapides a developper un adenocarcinome. Les cytochromes p-450 peuvent egalement intervenir dans la cancerogenese non genotoxique en regulant la concentration intracellulaire de composes physiologiques impliques dans la regulation de la croissance et de la differenciation cellulaire. Les cytochromes p-450 1a1 et 2c8 representent d'importants regulateurs de la concentration intracellulaire de la vitamine a et de son derive actif (acide retinoique), et donc des fonctions biologiques que controlent ces composes

Depuis plusieurs années, la simulation de mouvements d'humains virtuels est devenue un enjeu important pour de nombreux domaines. Comprendre le fonctionnement du mouvement humain et le simuler intéresse des disciplines variées, telles que l'animation par ordinateur, la robotique, la biomécanique, etc. Dans le cas de l'animation d'humains virtuels, le but est d'utiliser ces connaissances pour créer des humanoïdes aussi réalistes que possible. De nombreux travaux ont été déjà été réalisés, permettant désormais de gérer de nombreuses tâches avec des mouvements fidèles à ce qu'un humain aurait réalisé. L'une des contraintes importante du réalisme du mouvement humain est le respect des lois de la dynamique. Tout humain est soumis à ces lois inviolables, faisant partie des lois de la physique. Dans cette thèse, nous nous intéressons à l'étude et la modélisation simplifiée de la dynamique du mouvement humain afin d'atteindre des performances compatibles avec des applications interactives. Le travail proposé se décompose donc en trois parties : analyser le comportement de l'être humain face à certaines contraintes dynamiques, évaluer la capacité d'un utilisateur à percevoir les subtilités gestuelles induites par ces contraintes et proposer une nouvelle méthode d'animation d'humains virtuels tirant le meilleur profit de ces connaissances. Dans le cadre de cette thèse, nous nous sommes donc tout d'abord penchés sur l'étude de la mesure d'équilibre dynamique du mouvement humain. Différents critères de mesure de l'équilibre et du déséquilibre du mouvement humain existent depuis des années en biomécanique et robotique. Dans le but d'évaluer l'efficacité de ces critères, nous avons réalisé une étude portant sur différent types de mouvements pour catégoriser le domaine d'utilisation optimal de chaque critère. Cependant, si la dynamique joue un rôle crucial dans le réalisme du mouvement, peu de travaux traitent de la perception des propriétés dynamiques. Dans le but de définir un seuil de perception, nous avons étudié la capacité des utilisateurs à détecter la masse d'un objet porté par un humain réel (vidéo) ou virtuel (animation). Il sort de l'étude réalisée qu'une faible différence de charge portée par un humain n'est pas perçue. Cependant, nous ne notons pas différence de précision si la séquence provient d'une vidéo ou d'une animation en images de synthèse. Ainsi, malgré le fait que des informations soient perdues lors du processus de capture de mouvements et de synthèse, les éléments liés à la dynamique du mouvement sont préservées et perçus par l'utilisateur. Au vu de l'imprécision avec laquelle un utilisateur perçoit les adaptations gestuelles dues à des contraintes dynamiques, nous avons proposé un modèle simplifié d'adaptation du mouvement en réponse à de nouvelles contraintes dynamiques. Lorsqu'un humain virtuel est soumis à des perturbations non présentes dans le mouvement d'origine, la méthode traite séparément l'adaptation posturale et temporelle du mouvement, entraînant une légère imprécision au profit d'une amélioration considérable du temps de calcul. Le mouvement obtenu est davantage adapté aux contraintes dynamiques que ne l'était celui d'origine, à moindre coût de calcul.

Le génome des rotavirus (RV) comporte 11 segments d’ARN double brin. Dans des conditions de haute multiplicité d’infection, un dysfonctionnement de l’ARN polymérase virale peut induire le réarrangement d’un segment d’ARN par duplication partielle de sa séquence. In vivo, la survenue de réarrangements n’a été décrite qu’au cours d’infections chroniques chez des enfants immunodéprimés. Nous avons caractérisé les segments 7 et 11 réarrangés (7R et 11R) d’une souche de RV humain. Nous avons montré que le segment 7R n’était pas stable lors de la propagation du virus en culture et subissait une délétion aboutissant à l’expression d’une protéine NSP3 modifiée. L’analyse des séquences des segments 7R et 11R nous a permis de proposer un mécanisme théorique du réarrangement, fondé sur les structures secondaires des ARNm. Nous avons ensuite montré que des réarrangements du segment 11 pouvaient survenir lors d’infections aiguës à RV chez des enfants immunocompétents. Ces réarrangements surviennent en des points précis de la séquence au niveau de courtes répétitions, qui pourraient intervenir dans le mécanisme du réarrangement. Lors de l’infection aiguë, les virus à génome réarrangé restent très minoritaires par rapport aux virus sauvages, peut-être du fait d’une vitesse de réplication virale amoindrie. Nous avons montré que les RV à segment 7R avaient une cinétique de réplication inférieure ou égale à celle de virus sauvages. Paradoxalement, lorsque ces virus sont mis en compétition avec des virus sauvages, le segment 7R est sélectionné dans la descendance virale, suggérant une encapsidation préférentielle du segment réarrangé par rapport à son homologue normal lors de la réplication.

La naissance du régionalisme asiatique des droits humains n’est pas un mythe. Il est vrai que l’Asie se distingue par l’absence d’un mécanisme régional officiel. Pourtant, malgré des contextes diversifiés et complexes, émane de la plupart des États asiatiques une reconnaissance au moins formelle des droits humains fondamentaux. Les proclamations dans les constitutions, la création –pas encore généralisée– d’institutions nationales des droits humains en témoignent, ainsi que l’acclimatation à l’examen périodique universel, même si ce dernier semble être préféré aux procédés plus intrusifs des comités onusiens… et même si des violations massives de droits humains ont encore lieu. En fait, les éléments d’un régionalisme des droits humains apparaissent en Asie. À l’intérêt croissant que portent à ces droits les associations d’États à vocation économique, notamment l’ASEAN – dont l’attractivité s’élargit –, s’ajoute la transnationalisation des mouvements de la société civile. L’expérience grandissante de la Commission intergouvernementale de l’ASEAN et l’interaction des facteurs interétatiques avec les facteurs transnationaux de changement créent une dynamique, qui fait que la mise en place d’une cour asiatique des droits humains semble n’être plus aujourd’hui qu’une question de temps
The birth of human rights regionalism in Asia is not a myth. Although Asia distinguished itself with the absence of a formal regional mechanism for the protection of human rights, its relevance shall not to be questioned. Evolving within various challenging contexts, most Asian States formally recognise fundamental human rights while tolerating domestic and international enforcement mechanisms. Thus, a preference is given to constitutions and their courts, NHRIs and UPR against most intrusive mechanisms such as the UN committees. Nevertheless, elements of a human rights regionalism are rising upon Asia’s economic associations increasing interest in human rights – such as the ASEAN – and the civil society broadening interest for transnational movements. A comparative analysis into the Asian States relationships with these mechanisms will reveal worrying signs of massive human rights violations. However, acknowledging the continuous recognition of human rights as well as the growing experience of the ASEAN Intergovernmental commission, it is believed the enactment of an Asian human rights court is now only a matter of time

Les antoanticorps antispermatozoides presents chez certains sujets infertiles peuvent empecher les fonctions spermatiques en agissant sur une ou plusieurs etapes de la physiologie du spermatozoides humain. Dans cette etude, nous avons demontre, in vitro, la repercussion des anticorps elues a partir des spermatozoides de sujets infertiles, sur certaines fonctions spermatiques: parametres du mouvement en conditions non capacitantes et capacitantes, reaction acrosomique induite par ionophore, fixation a la zone pellucide humaine, penetration d'ovocytes depellucides de hamster. L'origine polyclonale de ces anticorps qui sont diriges contre plusieurs antigenes de membrane explique la diversite de leur point d'impact sur la fonction spermatique. Certains anticorps peuvent bloquer specifiquement des molecules impliquees dans une fonction particuliere telle que la fixation a la zone pellucide ou a la fusion avec la membrane ovocytaire. D'autres anticorps, par leur fixation sur plusieurs antigenes de surface, peuvent bloquer non specifiquement la membrane spermatique en empechant les remaniements et les echanges ioniques necessaires a l'accomplissement de la capacitation et de la reaction acrosomique. Le mecanisme responsable des effets observes est l'objet de nos recherches actuelles

L’ostéosarcome (OS) est la tumeur osseuse primitivemaligne la plus fréquente. Les cellules souchesmésenchymateuses (CSM) sont suspectées d’être àl’origine de l’OS. Nous avons émis l’hypothèse que desCSM avec des caractéristiques de cellules souchescancéreuses (CSC) pouvaient être impliquées dans ledéveloppement de l’OS, la résistance à lachimiothérapie et l’évolution métastatique.Nous avons isolé et cultivé des cellules dérivées d’OS(CDOS) à partir de fragments tumoraux et nous lesavons comparées aux propres CSM de moelle osseuse(CSMMO) de 6 malades.Les CDOS avaient la même morphologie et le mêmeprofil d’expression de récepteurs membranaires que lesCSMMO. Elles présentaient des capacités dedifférenciation ostéoblastique plus importantes que lesCSMMO. Le caryotype était normal dans les 6populations de CSMMO et dans 4 populations deCDOS. Les CDOS présentaient des caractéristiques deCSC, avec la formation de sphères en milieu semisolide, la diminution du métabolisme mitochondrial ennormoxie. Deux populations de CDOS présentaient desanomalies caryotypiques minimes. Il n’y avait pas deformation de tumeur chez la souris immunodéprimée(SCID). Dans les modèles de coinjection chez la sourisNude, 4 populations de CDOS soutenaient lacroissance tumorale de la lignée d’OS (MNNG-HOS).Les CDOS isolées n’étaient vraisemblablement pastumorales. Elles se présentaient plus comme descellules du microenvironnement, suspectées de souteniret moduler la croissance tumorale. Des étudescomplémentaires sont donc nécessaires pour identifierquels sont les facteurs stromaux influençant lacroissance de l’OS
Osteosarcoma (OS) is the most frequent primitivemalignant bone tumor. We hypothesised that someMSC with cancer stem cell (CSC) characteristics maybe involved in OS development, chemotherapyresistance and metastatic progression.Adherent cells from six human OS samples wereisolated after tumor dissociation and culture. They werenamed OS derived cells (OSDC) and were compared toown patient bone marrow mesenchymal stem cells(BMMSC). We tested MSC characteristics, CSCcharacteristics, and tumor growth support capacities inan induced human OS mouse model.OSDC had the same morphologic aspect andmembrane expression profile as BMMSC. They keptdifferentiation capacities toward osteoblastic lineageand to less extend toward adipogenic and chondrogeniclineage, with variability between different OSDCpopulations. Karyotype was normal for all 6 BMMSCand for 4 OSDC. OSDC showed CSC characteristics,with sphere formations in semi solid conditions,decrease of mitochondrial metabolism in normoxiacondition. Some minimal karyotype abnormalities werefound in 2 OSDC populations. However, no tumorformation was induced in immunocompromised mice(SCID). In coinjection mouse model, 4 out of 6 OSDCincreased tumor growth compared to osteosarcomacells (MNNG-HOS) alone.OSDC that were isolated from human OS samples didnot demonstrate own tumor properties. They are highlysuspected to be part of tumor microenvironment, ratherthan the tumor origin, and to support and modulate thetumor growth. More studies are necessary to identifywhich CDOS factors influence tumor growth suggestingnew stromal targets for combined therapy

L'objectif de ce travail est d'identifier les paramètres inertiels segmentaires humains, c’est-à-dire la masse, la position du centre de masse et la matrice d’inertie de ces segments. Ces paramètres, au nombre de dix par segment, constituent une donnée d'entrée indispensable aux calculs de dynamique inverse utilisés dans les études de biomécanique. Bien qu'il existe des méthodes pour avoir accès à ces paramètres par le biais de tables anthropométriques ou le calcul des volumes segmentaires, l'identification apparaît nécessaire dès lors que les sujets étudiés sont atypiques (handicapés physiques, femmes enceintes, sportifs présentant des hypertrophies musculaires). L'originalité de ce travail est de proposer une approche mixte dans l'écriture du problème d'identification combinant une formulation vectorielle et matricielle des équations du mouvement d’un système poly-articulé supposé rigide, qui ont déjà été établies au sein de l'équipe dans les travaux de thèse de Tony Monnet. La première permet d’identifier les masses et les centres de masse segmentaires. La deuxième permet d’identifier, elle, les matrices d’inertie segmentaires. Les paramètres d’entrée de cette méthode d’identification sont les matrices rotations segmentaires, leurs dérivées secondes, les accélérations segmentaires, ainsi que le torseur externe. Si ce dernier est directement mesuré par une plateforme de force, les autres grandeurs sont obtenues après des opérations sur la mesure de la cinématique segmentaire du sujet obtenue par un système opto-électronique. Ce système mesurant la cinématique du sujet grâce à des marqueurs cutanés, cette cinématique diffère de la cinématique théorique obtenue si les segments sont rigides, du fait des mouvements des masses molles. Ce travail a donc porté sur le calcul d’une matrice rotation optimale, basée sur une transformation matérielle décrivant le mouvement segmentaire.De plus les mouvements des masses molles ainsi que les instruments de mesure induisent un bruit dans les signaux cinématiques. Du fait de la double dérivation de ces signaux pour le calcul des accélérations segmentaires et des dérivées secondes des matrices rotations, ce bruit devient prépondérant sur le signal porteur. Ce travail a donc également porté sur le filtrage à effectuer pour atténuer ces bruits. Cinq filtres utilisés dans la littérature (filtre de Butterworth, lissage de Savitsky-Golay, moyenne glissante, lissage par spline et analyse spectrale) ont été implémentés et leurs effets sur les paramètres inertiels identifiés ont été comparés. Les résultats montrent que les paramètres identifiés avec la méthode vectorielle ne nécessitent pas de traitement. L’identification des matrices d’inertie nécessite, elle, un traitement et le lissage optimal est obtenu avec le moyenne glissante.Enfin, une modélisation du membre supérieur par une chaîne cinématique a également été implémentée afin de rigidifier la cinématique acquise. Les premiers résultats ne sont pas satisfaisants mais le modèle retenu peut être affiné avant de conclure sur l’intérêt de cette modélisation pour l’identification des paramètres inertiels. Finalement, l’approche mixte développée permet l'identification des dix paramètres inertiels des segments du corps humain. La méthode a été validée en identifiant les paramètres inertiels des segments constituant le membre supérieur de dix huit sujets. Les paramètres obtenus ont ensuite été comparés à ceux issus d’une table anthropométrique. Les résultats montrent que les paramètres identifiés sont très proches de ceux estimés. Cela montre donc que l’identification des paramètres inertiels est fiable et permet d’avoir accès aux paramètres inertiels de sujets atypiques, pour qui les tables anthropométriques ne sont pas disponibles
The aim of this thesis is the identification of body segment inertial parameters (BSIP), i.e. the segment mass, center of mass location and inertia tensor. Those ten parameters per segment are a mandatory input for inverse kinetics methods which are widely used in biomechanics studies. Despite the fact that methods exist to estimate them from anthropometric tables or segment volumes measurements, identification is useful when subjects are atypical (such as disabled people, pregnant women or athletes with muscular hypertrophies). The originality of this work is to use a mixed approach to write the identification problem, combining a vectorial and a matrix formulations of rigid multi-body motion equations, based on previous work did in the RoBioSS axis by Tony Monnet during his PhD. The first one permit to identify segmental masses and center of mass locations. The second one identifies segmental inertia tensors.Inputs of identification algorithm are rotation matrices, their second derivatives, segmental accelerations, and external torsor. Even though this external torsor is directly measured with a force plate, the others inputs are derived from kinematics measurements performed by an optoelectronical device. This device measures kinematics with skin mounted markers tracked by cameras, and the obtained kinematics deviate from the theoretical kinematics of rigid bodies, because of the soft tissues artefacts. In order to deal with these artefacts an optimal rotation matrix computation, based on material transformation, has been performed.Also, noise appears during measurement because of the soft tissues artefacts and the measure device. When double numerical derivatives are applied, this noise becomes greater than the carrier signal. In order to deal with it, five filters, i.e. Butterworth filter, Savitsky-Golay smoothing, sliding average window, spline smoothing and singular spectrum analysis, taken from literature have been implemented and compared. Results show that BSIP identify from vectorial formulation didn’t need any filtering. On the other hand, inertia tensors identification needed smoothed inputs and the best way to smooth them was the sliding average window.Finally, a kinematic chain model of the upper limb has been implemented to rigidify the kinematics. Preliminary results aren’t satisfying but the chain model can be improved before assuming kinematic chain aren’t well suited to enhance BSIP identification. Ultimately, the developed mixed approach has been validated by upper limb inertial parameters identification of eighteen subjects. Identified inertial parameters have also been compared with ones estimated with an anthropometric table. The conclusion is that the identified parameters were very close to the estimated ones, which shows that identification will be reliable to estimate inertial parameters of atypical subjects for whom anthropometric tables aren’t available

Les coronavirus représentent un grand groupe de virus infectant tes oiseaux et tes mammifères. A l’heure actuelle, 5 coronavirus humains (HCoV) sont connus. Les HCoV-229E et 0043 découverts par Tyrrel et Mc lntosh dans les années 60, le SARS-CoV identifié en 2003 lors des épidémies de syndrome respiratoire aigue sévère, les HCoV-NL63 et HKUI identifiés en 2004 et 2005. La détection des infections à HCoV fut longtemps difficile, les nouvelles techniques de biologie moléculaire (RT-PCR) permettent une nouvelle approche de la pathologie liée à ces virus, Les infections aux HCoV classiques (229E, 0043, NL63) sont ubiquitaires et circuleraient sous forme épidémique. Ces virus sont responsables d’un tiers des rhumes de l’adulte et seraient également incriminés dans les crises d’asthme et les bronchiolites du nourrisson. Les virus à tropisme respiratoire sont classiquement transmis selon trois mécanismes parfois associés (1) aérosols de petites (<5μ) particules aériennes (diffusion à distance), (2) aérosols de grandes particules aériennes (contact étroit nécessaire), (3) transmission directe par les mains ou par l’intermédiaire de surfaces. La transmission des HCoV se fait principalement de façon directe par les gouttelettes de secrétions oropharyngées mais la survie possible des HCoV en aérosol et en suspension plaide également en faveur de la possibilité de transmission par particules aériennes et/ou par voie manuportée. A travers ces travaux sont analysés les différents modes de transmission des HCoV. Tout d’abord au niveau des infections nosocomiales à travers un suivi prospectif de 3 années des infections respiratoires virales nosocomiales qui confirme leur rôle pre��pondérant. Le mode de transmission principal de ces infections nosocomiales semble être via le personnel infecté ou par voie manuportée d’un enfant à l’autre via le personnel. Ces infections surviennent préférentiellement chez les nouveau-nés et les prématurés. Au décours de ce suivi, 37 cas d’infections néonatales ont été mis en évidence. Nous avons donc étudié la possibilité de transmission périnatale des HCoV dans une étude prospective de 500 couples mères-enfants sur 3 années. Les HCoV ont été retrouvés chez 14 couples mères-enfants. Les 4 souches de HCoV ont été retrouvées dans les prélèvements respiratoires des mères, mais seul le HCoV-229E fut mis en évidence dans les sécrétions vaginales maternelles (4 cas) et chez les nouveau-nés (3 cas). Les résultats de ces études suggèrent : (1) une possible transmission materno-foetale qui ne peut pour le moment être confirmée compte tenu du faible nombre de cas, (2) également la contamination des nouveau-nés à la naissance par les mères ou le personnel. L’ensemble de ces données apporte donc de nouvelles connaissances quant au pouvoir pathogène des coronavirus chez les nouveau-nés et leur mode de transmission, Il serait souhaitable de poursuivre ces investigations en réalisant des études multicentriques avec l’analyse génomique des souches isolées afin de confirmer le mode de transmission nosocomial par le personnel et de valider la transmission materno-foetale de ces infections
Coronaviruses represent a large group of viruses infecting both birds and mammals. Currently, five caronaviruses are known to infect humans: HCoV 229E and 0C43 discovered by Tyrrel and Mc Intosh in the 1960’s; SARS-CoV, identified in 2003 as being responsible for an epidemic of severe acute respiratory syndrome; and HCoV-NL63 and HKU1, newly identified in 2004 and 2005. Their pathogenic role in children has been unclear essentially due to difficulties in virological diagnosis. Molecular biological methods (RT-PCR) offer a new approach to monitoring these infections. Classic RCoV, including HCoV-229E, 0C43 and NL63, are worldwide and circulate during seasonal outbreaks. These viruses are responsible for one-third of common colds in adults and are suspected of being involved in the exacerbation of asthma and bronchiolitis in children. Respiratory viruses are spread by 3 principal mechanisms: (1) through close person-to-person contact via droplets; (2) by air due to inhalation of small particles (

La présente étude porte sur l'encadrement juridique et pas sur la mise en oeuvre, car nous souhaitons nous interroger sur l'existence d'une volonté des Etats de combattre à travers du droit positif le phénomène. Dans l'ensemble on constate qu'il existe un lien indissociable entre la prévention et la répression de la traite et la protection des droits fondamentaux des victimes. L'histoire du droit international relatif à la traite remonte à 1904, la date d'adoption du premier instrument juridique international sur la question. En 1926 a été élaboré la première Convention relative à l'esclavage. Suite à l'ampleur du phénomène, la Convention relative à la répression de la traite des êtres humains et à l'exploitation de la prostitution d'autrui de 1949 et la Convention supplémentaire relative à l'abolition de l'esclavage, de la traite des esclaves et des institutions et pratiques analogues à l'esclavage de 1956 ont été adoptées. Ces conventions, ne prenaient pas en compte tous les aspects du problème, étaient antérieures à la plupart des pratiques modernes relatives au trafic de personnes, et ne disposaient pas d'organe de contrôle au niveau international. Le Protocole additionnel de la Convention des Nations Unies contre la criminalité transnationale organisée visant à prévenir, réprimer et punir la traite des personnes, et en particulier des femmes et des enfants donne pour la première fois une définition conventionnelle la plus élaborée du phénomène. De son côté le Statut de Rome de la Cour pénale internationale institue un nouvel organe international pour la traite en citant la réduction en esclavage au nombre des crimes considérés comme étant des crimes contre l'humanité. A coté des conventions universelles plusieurs organisations internationales et régionales se penchent sur le phénomène. La Convention du Conseil de l'Europe sur la lutte contre la traite des êtres humains est l'instrument du Conseil la plus susceptible de contribuer de manière efficace à la lutte contre la traite des êtres humains. L'Union européenne a adoptés plusieurs résolutions spécifiques concernant la traite, au niveau du continent Américain, l'Organisation des États Américains a adopté plusieurs instruments concernant la traite, à l'échelle du continent africain, il y a des initiatives importantes qui se préoccupent directement du problème. Au niveau étatique les États membres disposent dans l'ensemble de dispositions pénales spécifiques permettant d'incriminer la traite en introduisant des sanctions effectives et dissuasives. En établissant des dispositions dans les différents codes, la Turquie prévoit une efficace répression en répriment toutes les formes de la traite. De son coté l'Ukraine pays d'origine de la traite doit non seulement sanctionner sévèrement les trafiquants, mais en même temps doit se conformer aux normes et exigences internationales. Avec le développement du phénomène une protection aux victimes est assurée, non seulement à travers les conventions à vocation universelle, mais aussi à travers diverses institutions régionales. Avec le Protocole de Palerme la communauté internationale a mis en place un cadre juridique international visant assurer une meilleure protection. De son côté dans le Statut de Rome de la Cour pénale internationale la protection et l'assistance proposées aux victimes sont applicables à toutes victimes de crime. Tandis que les deux conventions de Conseil de l'Europe, la Convention des droits de l'homme et la Convention sur la traite des êtres humains protègent efficacement les victimes, et les instruments adoptés au niveau de l'Union européenne contribuent à l'harmonisation des politiques de protection, les engagements pris par l'OSCE ne prévoient pas de dispositions contraignantes, de la manque de mécanisme de contrôle.

Les polynucleaires neutrophiles sont les cellules effectrices des reactions inflammatoires precoces. Ils sont en effet susceptibles d'etre attires au sein d'un foyer inflammatoire par nombre de facteurs chimiotactiques tant endogenes que bacteriens. Ce deplacement cellulaire a partir du courant circulatoire constitue le chimiotactisme qui s'accompagne de changements morphologiques particuliers appeles polarisation des neutrophiles. La polymerisation de l'actine, observee lors de la stimulation des neutrophiles par les facteurs chimiotactiques, joue un role central dans la polarisation morphologique des neutrophiles. Trois facteurs chimiotactiques ont ete utilises au cours de ce travail: le fmlp, l'interleukine 8 et la fraction c5a du complement. Nous avons montre qu'une reorganisation locale du cytosquelette stimulee par un facteur chimiotactique precede et sous-tend la polarisation morphologique des neutrophiles. Nous avons etudie ensuite le role du calcium qui est un second messager dans de tres nombreuses voies transductionnelles. Nous avons montre que le calcium, implique dans le declenchement des activites lytiques des neutrophiles, ne joue aucun role dans la reorganisation locale du cytosquelette des neutrophiles. Enfin, les inhibiteurs des tyrosine kinases n'entravent pas non plus la polarisation morphologique des neutrophiles stimulee par les facteurs chimiotactiques. Par ailleurs, nous avons egalement montre que des proteines tyrosine kinases sont impliquees dans la synthese du tnf- par les monocytes humains pres stimulation de ces cellules par des agonistes tels que le zymosan ou la fraction nld de nocardia opaca

Au cours de leur differenciation, les megacaryocytes (mks) commutent leur systeme de proliferation par mitose vers un systeme de division atypique consistant en une duplication de l'adn sans division nucleaire et cytoplasmique. Ce processus, appele endomitose, aboutit a des cellules polyploides mononucleees. Mon travail de these visait a une meilleure comprehension de ce phenomene de polyploidisation. Nous avons demontre par un abord descriptif que les endomitoses dans les mks humains sont des divisions cellulaires incompletes avec absence des temps tardifs, y compris la cytocinese. Les fuseaux mitotiques observes dans les mks polyploides en metaphase sont multipolaires et presentent une organisation complexe (chaque aster pouvant participer a plusieurs sous-fuseaux) probablement a l'origine de la migration asymetrique des chromosomes a l'anaphase. Leur structure compacte suggere par ailleurs une anomalie dans l'elongation des microtubules conduisant a un eloignement insuffisant des poles (anaphase b). Les deux lots chromosomiques, trop rapproches en l'absence d'etirement de la cellule, se retrouveraient confines au sein d'un seul noyau lors de la reformation de l'enveloppe nucleaire en fin d'endomitose. Les mecanismes cellulaires et moleculaires responsables du processus de polyploidisation sont encore mal connus. Nous avons explore en priorite l'hypothese d'une deregulation dans l'expression de certains regulateurs du cycle cellulaire. Nous avons ainsi mis en evidence par un abord biochimique dans les mks polyploides : 1) la presence d'un complexe cdk1/cycline b1 fonctionnel, dont l'activite necessaire a l'accomplissement d'une vraie mitose corrobore le modele que nous proposons pour decrire les endomitoses. 2) une expression anormalement elevee de cycline d3 et de p21 dans les mks polyploides. D'apres des travaux preliminaires, la surexpression de p21 assurerait l'arret des endomitoses. 3) l'existence d'un point de controle metaphase/anaphase normal.

Les humains virtuels contribuent à l'évolution des techniques d'ingénierie concourante. Ils doivent permettre de tester les réactions de l'humain face à une maquette virtuelle du produit en cours de développement. Nous développons une architecture d'animation qui permet l'interaction des humains virtuels avec la maquette numérique. Après un état de l'art des techniques d'animation des humains virtuels, nous soulevons des problèmes de perte de passivité qui peuvent se poser lors de l'interaction si l'on n'y prend pas garde, et proposons des éléments de réponse. Dans un second temps nous nous attachons à résoudre les contraintes liées à l'évolution de l'humain virtuel dans son environnement. Nous retenons la non pénétration de l'environnement, les limites articulaires, et surtout l'équilibre. Nous commençons par développer un contrôleur d'équilibre simple, qui ne prend en compte que les cas où les contacts avec l'environnement sont coplanaires (c'est le cas des mouvements de marche par exemple), puis nous étendons ce premier contrôleur à un cas plus général autorisant tout type de contacts. Nous avons mis en œuvre plusieurs types de modes de commande (libre, contraint, automatique…). Dans une dernière partie nous traitons de la problématique de leur ordonnancement, et de la continuité entre modes de commande. Nous exposons alors les résultats obtenus grâce à notre plateforme
Virtual humans contribute to the evolution of techniques related to concurrent engineering. They allow to test the behaviour of humans towards a digital mock-up of the product being designed. We develop an animation architecture that enables the interaction of virtual humans with the digital mock-up. After describing a state of the art of techniques linked to virtual humans' animation, we deal with passivity loss problems that can arise during interaction. We propose solutions to the problem. In a second step we tackle with constraints linked to the evolution of the virtual human in its environment: non penetration of the environment, joint limits, and above all balance. We develop a simple balance controller that only regard coplanar contacts (this is the case of walk movements), then we extend this controller to a more generic case allowing non coplanar contacts. We developed several types of control modes (free, constrained, automatic…). In the last section we try to schedule them, being careful to continuity between each mode. We then describe the results obtained thanks to our animation platform

Le signal electroencephalographique (eeg) a ete caractrise a l'aide des methodes qui permettent de distinguer une dynamique stochastique, dependant d'un nombre eleve de degres de liberte, d'une dynamique chaotique caracterisant un systeme deterministe gouverne par un attracteur etrange. Nous avons utilise l'algorithme de grassberger et procaccia, consistant a calculer une integrale de correlation c(r) egale au nombre des paires de points de l'espace dont la distance est inferieure a r. Si l'on observe un comportement en loi de puissance c(r)r#, et si l'exposant est constant dans un domaine de valeurs de et de n, est identifie a la dimension de l'attracteur. L'etude a porte sur l'homme au cours de la veille calme et de la veille attentive, en utilisant les derivations bipolaires centrale-occipitale, frontale-centrale et temporale-occipitale. La non-stationnarite du signal eeg limite les possibilites d'analyse. Nous avons trouve un processus de selection des parametres (dimension: n; retard: ; frequence: f; duree: t) tel que soit constant dans une fenetre d'observation. Si celle-ci est assez etendue, la moyenne de sera confondue avec la dimension-fractale d'un attracteur. La valeur de depend du segment antero-posterieur explore; elle est sensible aux processus d'attention

L’herpèsvirus humain de type 6B (HHV-6B) infecte près de 100% des humains et établit une latence pour le reste de la vie de l’hôte. L’épidémiologie d’HHV-6A est moins connue. Ces deux virus sont capables d’intégrer leur génome dans les télomères des chromosomes humains. Lorsque cette intégration a lieu dans une cellule germinale et qu’il y a fécondation, ceci mène à un individu portant une copie du génome viral dans chacune des cellules de son corps. Cette condition, appelée inherited chromosomally-integrated HHV-6 (iciHHV-6), résulte en une transmission du génome viral intégré à 50% des descendants et est retrouvée chez environ 1% des humains. Malgré cette importante fréquence dans la population, l’intégration de HHV-6, de même que son infection et son effet sur ses cellules hôtes, demeurent peu caractérisés. Dans ce travail, nous avons étudié l’effet de l’infection d’HHV-6A et HHV-6B sur la réponse de dommages à l’ADN (DDR). Nous avons observé une forte réponse DDR localisée dans les compartiments de la réplication virale (RC), colocalisant avec une grande quantité d’ADN télomérique d’origine virale. De plus, les niveaux des ARNm des gènes TRF1, TRF2 et TPP1, membres du complexe shelterin protégeant les télomères, étaient surexprimés dans les cellules infectées. Cette augmentation se traduit par une surexpression de la protéine TRF2, recrutée aux séquences télomériques virales dans les RC. Finalement, nous avons étudié l’effet de BRACO-19, un inhibiteur de la télomérase, sur l’intégration d’HHV-6A et sa persistance. En utilisant un essai d’intégration récemment mis au point dans notre laboratoire, nous avons démontré que l’inhibition de la télomérase menait à une diminution significative de la fréquence de cellules porteuses d’intégration. Ce travail apporte de nouvelles connaissances sur l’infection de HHV-6 et sur son mécanisme d’intégration potentiel, de même que la première observation d’une possible participation des protéines du complexe shelterin dans l’infection de HHV-6.
Human herpesviruse 6B (HHV-6B) is a very prevalent virus that infect nearly 100% of humans and establish a life-long latency. Much less is known regarding HHV-6A epidemiology. Both viruses can integrate their genome into the telomeres of human chromosomes. When this integration occurs in a germinal cell, it can lead to an individual carrying one copy of the viral genome in every cell of its body. This condition, called inherited chromosomally-integrated HHV-6 (iciHHV-6), will then be transmitted to 50% of offspring and is found in approximately 1% of individuals across the world. Despite being so frequent, much remains to be studied on HHV-6 infection and integration processes. In this work, we studied the effects of viral infection on DNA damage response (DDR) signaling. We observed a DDR located in viral replication compartments (RC), together with a large amount of telomeric sequences that we confirmed to be of viral origin. In addition, mRNAs coding for TRF1, TRF2 and TPP1, members of the shelterin complex protecting telomeres, were upregulated during infection. Consequently, TRF2 protein was overexpressed and relocated to viral telomeric sequences in RC. Lastly, we’ve examined the effects of BRACO-19, a compound that affects telomerase activity, on HHV-6 integration and persistence. Using an integration assay recently developed in our laboratory, we could demonstrate that in the presence of the telomerase inhibitor, the frequency of cells containing integrated HHV-6 was significantly reduced. This work brings new knowledge regarding HHV-6 infection and its potential integration mechanism, as well as the first observation of a possible participation of the shelterin complex proteins during HHV-6 infection.

Chez l’homme, l’architecture nucléaire et l’organisation de la chromatine pendant l’interphase jouent un rôle crucial dans la régulation de l’expression génique. Au sein du noyau, la chromatine est organisée de façon non aléatoire en territoires chromosomiques distincts, permettant d’optimiser l’efficacité des processus transcriptionnels. L’hétérochromatine constitutive qui représente plus de 90% de notre génome et dont le rôle est largement méconnu pourrait être un des régulateurs principaux de l’organisation du génome à l’intérieur du noyau. L’objectif de notre projet a été d’étudier les conséquences sur la topographie du génome de modifications de l’hétérochromatine liées à des anomalies des cohésines (syndrome de Roberts) ou de la méthylation (syndrome ICF) en microscopie confocale et FISH 3D. Nous avons pu montrer que le défaut fonctionnel des cohésines secondaire aux mutations d’ESCO2 dans le syndrome de Roberts provoquait une modification de l‘architecture de l’hétérochromatine péricentromérique associée à un repositionnement au sein du noyau. Dans le syndrome ICF, l’hypométhylation de l’ADN associée aux nombreuses anomalies chromosomiques concernant particulièrement l’hétérochromatine constitutive semble également modifier l’architecture nucléaire. Ces résultats permettent d’avancer dans la compréhension du rôle de l’organisation en 3D du génome sur la régulation de l’expression, et de son impact dans la physiopathologie de ces deux syndromes
In humans, nuclear architecture and chromatin organization during interphase play a crucial role in gene expression regulation. Within the nucleus, chromatin is organized nonrandomly in distinct chromosome territories optimizing the efficiency of transcriptional processes. Constitutive heterochromatin, which represents over 90% of our genome and whose role is largely unknown could be one of the main regulators of genome organization within the nucleus. Our goal was to study the effects of topographic changes of heterochromatin secondary to cohesin abnormalities (in Roberts syndrome) or methylation defect (in ICF syndrome) by 3D FISH and confocal microscopy. We have shown that the functional defect of cohesin secondary to ESCO2 mutations in Roberts syndrome causes a change in the architecture of pericentric heterochromatin associated with a repositioning in the nucleus. In ICF syndrome, DNA hypomethylation of constitutive heterochromatin seems also to modify nuclear architecture. These results shed new light on the regulation of 3D organization of the genome and further refine the hypothesis on gene expression control pathways in the pathophysiology of both disorders

Cette investigation anthropologique touche aux types de relations qu'entretiennent les scientifiques, et plus particulièrement les biologistes, avec ceux que l'on a coutume de nommer leurs "objets de recherche". Partant du constat que l'usage de catégories comme la rationalité ou l'objectivité, ou encore les dichotomies sujet/objet et nature/culture ne peuvent que nuire à un rendu de l'expérience scientifique qui tienne compte de ce qui importe réellement aux chercheurs, cette thèse se déploie autour d'un laboratoire et de l'observation minutieuse des interactions entre les deux espèces dominantes qui le définissent : l'Homme et la levure Saccharomyces cerevisiae, et interroge ainsi sous un autre angle des notions comme le réductionnisme, l'objectivité ou encore l'universalité des connaissances produites par les sciences occidentales
This anthropological investigation concerns the types of relationships between scientists, and more specifically biologists, with those actually called their “research object”. From the assessment that the use of categories such as rationality or objectivity, or the dichotomies subject/object and nature/culture can only be prejudicial to a rendition of the scientific experiment which considers what really matters to the researchers, this PhD takes place around a laboratory and around meticulous observation of the interactions between the two prevailing species which define it : the Man and the Saccharomyces cerevisiae yeast, and question therefore with a different perspective notions such as reductionism, objectivity or universality of knowledge made from western sciences

Ce travail s’attache à décrire la coprésence de l’urbain et du rural à Chefchaouen au Maroc. La dimension rurale est une réalité ancrée au sein de cette petite cité de montagne du rif occidental. Elle s’observe à travers des pratiques et des représentations de la ville et de ses quartiers, des manières d’aller au souk, un certain rapport au monde rural et aux produits, à ses origines traduites par des histoires familiales, des valeurs et des manières d’être en société. Elle se comprend encore dans les rapports quotidiens, routiniers ou plus occasionnels, à une diversité d’êtres non-humains, invisibles ou visibles: Dieu, les djinns, le shaytan ou les animaux, dont les chats, l’animal sacrificiel de l’Aïd el Kabîr et les chèvres et les boucs élevés en ville. Cette thèse restitue comment l’urbain et le rural sont présents et objets d’attentions variées sur ces divers pans de la vie sociale, selon les échelles et les individus considérés. Ce sont ici plusieurs champs disciplinaires qui sont concernés dont l’ethnologie urbaine, l’anthropologie religieuse et la question du croire, les rapports homme-animal et la question de l’ontologie en anthropologie. Grâce un perspectivisme anthropographique, cette recherche montre comme l’individu, saisi dans son quotidien et dans la continuité de son existence, offre une perspective située sur les catégories, et permet de penser autrement la diversité des rapports aux êtres. En plus de mettre en avant la pluralité des vécus, cette recherche souligne, d’une part, l’importance de la singularité des relations que tout un chacun est à même d’avoir envers d’autres êtres, tout particulièrement l’animal, et d’autre part, celle du croire qui permet de garder l’attention sur l’engagement que les individus ont de situation en situation face à aux non-humains, en particulier Dieu et les djinns. Voici là trois apports que la thèse entend apporter au « débat ontologie ». Ce travail y parvient en remettant les individus au cœur du projet anthropologique, tant dans leur singularité que leurs manières d’être socialement
This work attempts to describe the copresence of urbanity and rurality in Chefchaouen, Morocco. In this small city of the western Rif Mountains, the expression of rurality is pregnant. Rurality manifests itself through practices and representations of the city and its neighborhoods, in ways of going to the souk. It finds expressions in relation to rural surroundings as well as rural products. Rurality is also given consistency with reference to origins and family histories, values and ways of being in society. Rurality can be understood out of daily routinized or on the contrary, unusual encounters with a variety of non-human beings, visible or invisible: God, jinn-s, Shaytan or animals, including cats, the sacrificial animal of Aid el Kabir or goats raised in the city and its vicinity. This Ph.D. thesis aims at rendering how urban and rural are present and are objects of varying attentions, according to the scales and individuals considered. Several disciplines are engaged with in this work: urban ethnology, anthropology of religion and the question of belief, human-animal relations and the question of ontology in anthropology. Grounded in an anthropographical perspectivism, this research demonstrates how the individual apprehended in his daily life and the continuity of its existence, offers a situated perspective on categories which enables to think from anew the diversity of relations between humans and other beings. It also sheds light on the plurality of experiences. This perspective allows two demonstrations: firstly, it sets the importance of the singular and unique relationship everyone is able to have with other beings, especially animals,; and secondly, it focuses on the question of “believing” keeping the attention on the commitment individuals develop from situation to situation while facing non-humans - especially God and jinn-s. These are the contributions the Ph.D. thesis intends to make to the "ontology debate." This can only be accomplished by putting individuals at the heart of the anthropological project, both in their singularity and in their ways of being as social beings

Etude d'oncogenes cellulaires mis en evidence a partir de tumeurs humaines. Le gene mcf. 2 a ete isole a partir d'une lignee cellulaire du cancer du sein (mcf7) par l'essai de tumorigenicite chez la souris athymique. Une banque des cosmides d'une tumeur secondaire mcf7. 2. 2 a ete construite. Le gene transformant (ou active) mcf. 2 est le produit d'un double rearrangement ayant reuni trois segments chromosomique differents

Les adénovirus humains (HAdV) provoquent un large spectre de maladies cliniques chez les patients immunodéprimés et immunocompétents et sont également des outils polyvalents pour le transfert de gènes et la vaccination. L’immunité humorale acquise peut être en partie responsable des réactions indésirables envers les vecteurs AdV révélées dans plusieurs essais cliniques de vaccination. De plus, plusieurs protéines de l'hôte comme le facteur X de coagulation de la souris (FX) ou les immunoglobulines de type G se lient aux HAdV et exacerbent la réponse pro-inflammatoire. L’évaluation des risques précliniques se fait souvent chez la souris, même s’il existe plusieurs différences entre les humains et les souris dans l'interaction avec les HAdV. La liaison de FX aux HAdV active une réponse pro-inflammatoire chez la souris par l'intermédiaire des récepteurs Toll-like 4. Dans un autre scénario clinique pertinent, le complexe immun HAdV (IC-HAdV-C5) induit une activation plus forte de l’inflammasome dans les phagocytes humains que l’HAdV-C5 non complexé, mais par un mécanisme inconnu. Dans ce contexte, j’ai participé à deux études. Premièrement, nous avons étudié le rôle potentiel de FX et de TLR4 dans la réponse innée à l ‘HAdV-C5 en utilisant uniquement des cellules et des protéines d’origine humaine. Nous avons constaté qu'il n'y a pas d’activation de la voie de signalisation via TLR4 chez l’homme en présence de FX-HAdV. De plus, le FX n'a pas affecté la forte réponse immunitaire innée induite par IC-HAdV-C5 dans les phagocytes humains. Deuxièmement, nous avons abordé le mécanisme sous-jacent de l'inflammation induite par IC-HAdV-C5. Nous avons démontré que l‘IC-HAdV-C5 induit la formation de l’inflammasome dans les cellules dendritiques dérivées de monocytes et cela dépend de l’échappement endosomal dépendant de la protéine VI et de l'activation des récepteurs cytosoliques de l’inflammasome. Nos résultats nous aident à mieux comprendre les différences entre les tests précliniques réalisés chez la souris et les essais cliniques réalisés chez l'homme. De plus, cela nous permet de mieux comprendre comment l’immunité préexistante façonne la réponse immunitaire innée face aux HAdV, afin d’améliorer le traitement des maladies liées aux HAdV ainsi que l’efficacité des vecteurs HAdV
Human adenoviruses (HAdV) cause a broad spectrum of clinical diseases in immunocompromised and –competent patients and are also versatile tools for gene transfer and vaccination. Pre-existing humoral immunity may be in part responsible for the adverse responses towards AdV vectors seen in several clinical vaccine trials. Furthermore, a variety of host proteins like mouse coagulation factor X (FX) or immunoglobulin G bind HAdV exacerbate the pro-inflammatory response. Pre-clinical risk assessment is often done in mice, albeit there are multiple differences between human and mice in the interaction with HAdV. The binding of FX to HAdV activates a pro-inflammatory response in mouse via Toll-like receptor 4. In another clinical relevant scenario, immune complexed-HAdV (IC-HAdV-C5) induces more inflammasome activation in human phagocytes than HAdV-C5 alone but by unknown mechanism. In this regard, I participated in two studies. First, we investigated a potential role of FX and TLR4 in the innate response to HAdV-C5 by using only human components. We found that there is no detectable FX-HAdV-TLR4 axis in human and FX did not affect the innate immune response elevated by IC-HAdV-C5 in human phagocytes.Second, we addressed the underlying mechanism of IC-HAdV-C5-induced inflammation. We found that IC-HAdV-C5 induces inflammasome formation in monocyte-derived dendritic cells and this is dependent on pVI-mediated endosomal escape and activation of cytosolic inflammasome sensors. Our findings help us to better understand the differences in preclinical testing in mice and clinical use in humans and how pre-existing immunity shapes the innate immune response to HAdV to improve treatment for HAdV diseases and HAdV vector effectiveness

Les anticorps monoclonaux représentent aujourd'hui un outil de choix en thérapeutique et en diagnostic. Les anticorps thérapeutiques sont des biomédicaments en plein essor depuis les années 1970 et représentent 10% du marché des produits pharmaceutiques. Les anticorps monoclonaux sont utilisés dans divers domaines : en cancérologie, pour lutter contre les maladies auto-immunes ou en infectiologie. Le nombre des anticorps monoclonaux en développement ne cesse d'augmenter. Les premiers anticorps monoclonaux utilisés en thérapie étaient d'origine murine et leur administration à l'Homme est susceptible de déclencher des effets secondaires. De nouveaux anticorps visant à limiter voir faire disparaitre ces effets indésirables tels que d'abord les anticorps chimériques, puis les anticorps humanisés et enfin les anticorps totalement humains ont été développés. 9 anticorps totalement humains sont actuellement sur le marché et d'autres sont en cours de développement. Le phage display, les souris transgéniques et l'utilisation de lymphocytes B humains sont les trois stratégies mises en œuvre pour produire des anticorps totalement humains. L'utilisation des lymphocytes B humains, peu étudiée à cause d'un faible rendement et de problèmes de stabilité, a connu ces dernières années un regain d'intérêt grâce à l'immortalisation virale par le virus Epstein-Barr et à la découverte de myélomes humains. Dans ce contexte, l'objectif de mon projet de thèse a été la production d'anticorps monoclonaux humains à partir de lymphocytes B humains. Pour ce faire, deux approches basées sur l'immortalisation virale par le virus Epstein-Barr couplée ou non à une immortalisation cellulaire par des myélomes ont été mises en œuvre. La première approche utilise des lymphocytes B mémoires isolés de sang périphérique de donneurs infectés ou vaccinés. L'entérotoxine B de Staphylococcus aureus (SEB) a été utilisée comme modèle.La deuxième approche implique une immunisation in vitro de lymphocytes B naïfs extraits de sang périphérique. Cette stratégie pourrait permettre la production d'anticorps humains contre des antigènes pour lesquels il n'existe pas de donneurs infectés ou vaccinés. Deux modèles, le peptide N-terminal de la neurotoxine A de Clostridium Botulinium A (BoNT/A) et la protéine de fusion ZZTat101, comportant le domaine ZZ de Staphylococcus aureus lié covalemment à la protéine transactivatrice Tat du virus de l'immunodéficience humaine VIH-1, ont été employés. Nous avons réussi à obtenir des IgMs dirigés contre la neurotoxine Clostridium Botulinium A, ainsi que des IgMs (et peut-être des IgGs) dirigés contre la protéine Tat. L'immortalisation par Epstein-Barr, nous a permis d'isoler 7 lignées de lymphocytes immortalisés sécrétant des anticorps IgMs anti-TBA-Nter humains. L'immunisation in vitro produisant essentiellement des IgMs, la possible production d'IgGs après stimulation par la protéine ZZTat101 se révèle un résultat très intéressant. Nous avons montré que la production d'anticorps par ZZTat101 impliquait les 7 cystéines, la région 22-57 et la liaison aux héparanes sulfates de Tat.

L'objet de cette thèse est d’explorer les mécanismes évolutionnaires à l'origine de la punition coûteuse chez les humains. Dans le chapitre 1, nous montrons que les comportements punitifs observés en laboratoire sont plus en adéquation avec des processus de sélection individuelle plutôt que de sélection de groupe. Dans le chapitre 2, nous fournissons des preuves empiriques que la décision de punir relève principalement de raisonnements intuitifs causés par une forte exposition à des environnements à réciprocité directe. Enfin, dans le chapitre 3, nous émettons quelques doutes quant à l'hypothèse (plutôt récente) que des stratégies de changement de partenaires pourraient se substituer à la punition coûteuse dans la nature. En somme, nos résultats soulignent le caractère maladaptatif du sentiment punitif tel qu'il se manifeste dans les jeux expérimentaux à un coup
The aim of this thesis is to investigate the evolutionary roots of costly punishment in humans. In chapter 1, we show that available experimental data are more compatible with behavioral patterns sculpted by individual selective pressures than higher-population processes. In chapter 2, we provide experimental evidence that punishing decisions mostly rely on intuitive reasonings originally adapted to direct reciprocity environments. Finally, in chapter 3, we cast doubt on the (recent) claim that cheap partner switching opportunities make costly punishment anecdotal in the wild. In sum, our results emphasize the maladaptive nature of punitive behaviors observed in anonymous, one-shot laboratory settings

La persistance d'une infection par un même papillomavirus humain à haut risque oncogène (HPV-HR) est le principal facteur de risque d'apparition et de progression des lésions précancéreuses et cancéreuses du col de l'utérus. La recherche des lésions précancéreuses et l'introduction des tests basés sur la détection des HPV-HR dans le dépistage ont permis de réduire l'incidence du cancer du col de l'utérus dans les pays développés. Un des enjeux actuels réside dans l'identification de nouveaux marqueurs qui permettraient d'améliorer le dépistage. Dans ce contexte, les objectifs de cette thèse étaient d'explorer l'histoire naturelle de l'infection par HPV-HR au travers de facteurs tels que la charge virale, l'intégration, l'expression des oncogènes viraux ou encore la méthylation du promoteur viral à partir de prélèvements biologiques et d'évaluer l'intérêt de ces facteurs en pratique clinique. Après optimisation et validation d'outils de biologie moléculaire, l'analyse de frottis cervico-utérins représentatifs de la progression des lésions du col de l'utérus a permis de mieux comprendre l'histoire naturelle de l'infection transformante par HPV16. Nos données confirment la valeur diagnostique de la charge virale, indiquent une méthylation tardive du promoteur viral et suggèrent que les niveaux d'expression des gènes viraux ne sont pas suffisamment robustes pour présenter un intérêt clinique. D'autre part, nos travaux ont mis en évidence de potentielles analogies de comportement virologique entre génotypes apparentés. Enfin, la caractérisation de tumeurs du canal anal à l'aide de nos marqueurs viraux a permis d'identifier une signature moléculaire des cancers associés à HPV16
The main risk factor of precancerous and cancerous cervical lesions is a persistent infection with the same high-risk HPV (HR-HPV). Screening based on precancerous lesions and HR-HPV detection considerably reduced cervical cancer incidence in developed countries. A current challenge remains the identification of new biomarkers in order to improve cervical cancer screening. This work was conducted with the purpose of (i) exploring HR-HPV infection natural history through viral factors such as viral load, integration, viral oncogene expression and viral promoter methylation and (ii) evaluating the clinical value of these potential markers. After optimization and validation of several molecular biology methods, the analysis of cervical smears representative of the full spectrum of cervical diseases allowed a better knowledge of transforming HPVI6-infection natural history. Our data confirm the potential diagnostic value of viral load. show that HPVI6 promoter methylation seems to be a late event in cervical carcinogenesis, and suggest that viral oncogene expression levels are not robust enough to be transferred to clinical practice. Moreover, our data highlight similar molecular behavior between closely related HR-HPV genotypes. Finally, the characterization of anal tumors with markers identified a molecular signature pattern of HPVI6-associated tumors

Le locus des chaînes légères lambda chez l'humain contient 7 segments de gènes constants. De ces 7 segments de gènes, 4 sont fonctionnels et peuvent être exprimés avec les 39 segments de gènes variables fonctionnels. Lors de cette étude, une méthode sera mise au point pour permettre le dosage des différents isotypes C lambda chez des individus sains. De plus, la caractérisation d'un nouveau polymorphisme situé dans la région codante d'IgLC2 a été effectuée. La connaissance de ce nouveau polymorphisme est essentielle pour l'interprétation des résultats sur le dosage des isotypes IgLC2 et IgLC3 puisque ces 2 isotypes sont identiques à l'intérieur de la région codante à l'exception de la position polymorphique. L'étude des différents génotypes associés à une amplification d'IgLC2 et/ou IgIC3 a aussi été réalisée chez certains donneurs pour déterminer si l'amplification de ces régions constantes pouvait affecter le niveau d'expression de ces isotypes. Cette étude a aussi analysé le marqueur Oz retrouvé sur IgLC3 pour déterminer si celui-ci se comportait de façon allélique, s'il était lié ou non au nouveau polymorphisme caractérisé et au [i.e. aux] différents génotypes liés aux amplifications d'IgLC2 et/ou IgIC3.

Depuis l'antiquite jusqu'a nos jours, certains droits ont ete reconnus meme implicitement a l'embryon et au foetus humains in utero, des la conception. Ii s'agit dans notre droit positif de certains elements constitutifs d'une protection civile et sociale mais la protection penale actuelle de l'embryon in utero est fragilisee par les nouvelles dispositions du code penal et sa protection medicalereste insuffisante. Neanmoins l'embryon et le foetus in utero peuvent etre rattaches a la categorie juridique des personnes et consideres comme des sujets de droit, meme si certains des droits specifiques a la personne dont ils beneficient, sont limites dans leurs effets. La realite de l'etre humain des sa conception, qui implique a la fois une dependance vis a vis de la femme qui la porte et uneexistence fragile mais neanmoins humaine, justifie l'adoption d'une qualification de "personne sous condition resolutoire" des lors que les droits dont il beneficie sont retroactivement effaces lorsque l'enfant ne nait ni vivant ni viable. Quant a l'embryon in vitro, une qualification identique peut etre adoptee puisque l'intervention de l'homme, par le biais des techniques de procreation assistee conditionne tres fortement son evolution et ses droits mais ne fait disparaitre ni sa vocation a se developper pour naitre vivant et viable ni son appartenance au genre humain.

Les pathologies de l'hémostase nous enseignent la nécessité de l'intégrité fonctionnelle des récepteurs plaquettaires. L'absence ou l'altération des complexes GPIIb-IIIa chez les patients atteints de thrombasthénie de Glanzmann antraîne un défaut d'agrégation. Cette constatation clinique a permis d'envisager le traitement des épisodes thrombotiques par les anticorps monoclonaux humains dirigés contre le complexe GPIIb-IIIa et inhibiteurs de la fonction d'agrégation en bloquant l'interaction du complexe GPIIb-IIIa avec les protéines adhésives. Notre objectif a été la production "in vitro" d'AcM humains spécifiques du complexe IIb-IIIa, à partir de lymphocytes B de patients immunisés contre ce complexe. Dans ce but, un "screening" des sérums des patients atteints de purpura thrombopénique ou de thrombasthénie de Glanzmann a été réalisé par la technique du MAIPA "Monoclonal antibody-immobilization of platelet antigens". Nous nous sommes ensuite attachés à immortaliser les lymphocytes B sécréteurs des patients immunisés ; les techniques utilisées ont été l'infection par ABV (virus d'Epstein Barr) et la stimulation "in vitro" des lymphocytes B, suivie d'une fusion avec un myélome. Cette dernière a permis l'obtention de certains clones sécréteurs. Nous avons également réalisé une étude approfondie sur le cas d'une patiente (C. V. ) atteinte de purpura thrombopénique idiopathique. La présence dans son sérum d'anticorps anti-idiotypiques de type public a été mis en évidence. Enfin, au cours d'un de nos protocoles d'immortalisation des lymphocytes par EBV, nous avons obtenu un clone stable sécrétant un anticorps monoclonal humain anti-myosine plaquettaire. Cet anticorps se fixe également sur la myosine cardiaque. La caractérisation de l'affinité des fragments Fab sur la myosine de coeur humain nous permet de proposer l'utilisation de cet anticorps en immunoscintigraphie pour la détection de la nécrose des myocytes dans le diagnostic des infarctus du myocarde et le suivi des transplantés cardiaques
Disorders of primary haemostasis highlight the need to detail the function of platelet receptors. Qualitative or quantitative abnormalities of GP IIb-IIIa in patients with Glanzmann's Thrombasthenia (QT) manifest in platelet aggregationabnormalities. The thrombasthenic state has shed light on possible therapeutic manoeuvres in the treatment of thrombotic states. Human monoclonal antibodies directed against the GP IIb-IIIa complex are capable of inhibiting aggregation by blocking interaction of this complex with adhesive proteins. Our aim was to produce "in vitro" human monoclonal specific for GP IIb-IIIa and capable of inhibiting aggregation, from the B lymphocytes of patients producing antibodies against this complex. Sera of patients with thrombocytopenic purpura or GT were screened using the MAIPA technique (Monoclonal Antibody-Immobilization of Platelet Antigens). We then attempted to immortalize the B lymphocytes of these immunised patients ; we achieved this with the use of EBV infecion and stimulation of B lymphocytes, followed by fusion with a myeloma cell line. In the course of our experiments, we performed detailed study of one patient (C. V. ) with ITP. The presence in her serum of an anti-idiotypic antibody against a public epitope was proven. In another patient immortalization of B lymphocytes produced a stable clone which produced an antibody recognising platelet myosin. This antibody fixed strongly to cardiac myosin also. Characterization of the affinity of Fab fragments for human heart myosin and the evaluation by immunoscintigraphy for detection of cardiac myocyte death may permit the use of this antibody in the clinical scenarios of diagnosing of myocardial infarction and surveillance following cardiac transplantation

Les gliomes malins sont les tumeurs primitives du système nerveux central humain adulte les plus fréquentes. Malgré les récentes avancées thérapeutiques, ces cancers restent incurables. Pour commencer, nous avons établi le profil protéomique des oligodendrogliomes (ODG) de l’adulte présentant la mutation de l’isocitrate déshydrogénase 1 (IDH1). Nous avons établi une signature des cellules tumorales, parmi une série de 68 protéines dérégulées dans le tissu tumoral. Nous avons ensuite établi un profil moléculaire de 42 protéines spécifiquement dérégulées dans les ODG mutés, en comparaison aux non mutés. Ensuite, nous avons établi les protéomes des cellules souches cancéreuses issues de glioblastomes de l’adulte (CSC), et les avons comparées à celui de cellules souches neurales normales (CSN), et au tissu tumoral d’origine. Parmi les protéines dérégulées dans les CSC, nous avons identifié le facteur Hepatoma-derived growth factor (HDGF) et montré qu’il est spécifiquement sécrété par les CSC, entrainant la prolifération et la migration des cellules endothéliales in vitro, et la formation d’une angiogénèse in vivo. Nous avons également testé le Résveratrol, une molécule naturelle aux propriétés anti-cancéreuses. Nous avons démontré que cette drogue est capable de cibler spécifiquement les CSC en épargnant les CSN, suggérant une application clinique potentielle. Enfin, nous avons pu identifier des cellules souches cancéreuses parmi les gliomes de l’enfant quel que soient le type et le grade de gliome. Nous les avons caractérisées et avons montré une corrélation entre le devenir des patients et le potentiel d’auto-renouvellement, proposé donc comme facteur de mauvais pronostic.

Mise en évidence, par l'analyse de l'ADN des adénovirus humains, de plusieurs types génomiques nouveaux appartenant aux sous-groupes A, B, C et D, au cours d'études d'épidémiologie moléculaire. Méthode de détection rapide et d'identification dans les fèces des sérotypes 40 et 41, responsables de la majorité des cas de gastroentérites dues à des adénovirus, à l'aide d'une sonde d'ADN recombinant spécifique de ces sérotypes

Les détecteurs gustatifs aux saveurs sucré, umami et amer sont des récepteurs membranaires qui appartiennent à la famille des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG). Ils sont caractérisés par l’existence d’un domaine transmembranaire (DTM) hydrophobe et un mécanisme d’activation qui implique une protéine G hétérotrimérique.L’homme possède 25 récepteurs à l’amer TAS2R. Ces récepteurs appartiennent à la classe A des RCPG. Leur l’architecture est constituée d’un DTM structuré en 7 hélices  qui forment le site orthostérique de liaison des molécules amères. Le récepteur au goût umami est un hétérodimère composé des sous-unités TAS1R1 et TAS1R3, alors que les sous-unités TAS1R2 et TAS1R3 s’assemblent pour composer le récepteur au goût sucré. Chacune de ces sous-unités appartient à la classe C des RCPG et partage une architecture commune, constituée d’un domaine N-terminal (DNT) extracellulaire de grande taille qui est relié au DTM par une région riche en cystéines (RRC). La contribution de chaque sous-unité au fonctionnement des récepteurs hétérodimériques demeure cependant largement inconnue.A cause de leur nature amphipathique, les RCPG constituent une famille de protéines extrêmement difficiles à étudier d’un point de vue biochimique. Caractériser leurs interactions et déterminer leurs structures sont des enjeux importants et un véritable challenge pour les années à venir. Dans ce travail, nous avons développé différents systèmes d’expression afin de mieux comprendre les mécanismes moléculaires qui gouvernent les interactions récepteur-ligand.Pour l’étude du goût umami, les DNT de TAS1R1 et TAS1R3 ont été produits en bactérie E. coli sous forme de corps d’inclusions puis repliés in vitro. En combinant des approches biochimiques et des tests cellulaires d’activité fonctionnelle, nous avons montré que l’inosine-5’-monophosphate (IMP), un exhausteur du goût umami, se lie à TAS1R3-DNT et agit en synergie avec le sucralose et le néotame.Concernant le récepteur au goût sucré, la sous-unité (taille complète) de TAS1R2 a été surexprimée dans une lignée cellulaire HEK293S inductible par la tétracycline. Un protocole de solubilisation et de purification a permis d’obtenir le récepteur TAS1R2 fonctionnel. Une analyse par dichroïsme circulaire dans l’UV lointain a révélé que TAS1R2 est bien replié. La diffusion de lumière couplée à la gel filtration a montré que TAS1R2 était présent majoritairement sous forme dimérique. Les interactions avec les ligands sucrés mesurées par fluorescence intrinsèques ont révélé des affinités de l’ordre du micromolaire en accord avec les tests d’activité cellulaires et les pouvoirs sucrants des molécules.Parallèlement, afin d’étudier les récepteurs au goût amer, nous avons conçu différents vecteurs d’expression du récepteur TAS2R14 afin d’améliorer son expression et son adressage à la membrane plasmique. Nous avons montré que l’utilisation de la séquence QBI SP163 en amont du codon initiateur de traduction, associée au peptide signal de la somatostatine 3 de rat en position N-terminale et à l’étiquette FLAG en position C-terminale, permettait d’augmenter la réponse fonctionnelle du récepteur aux ligands amers aussi bien en termes d’amplitude que de sensibilité. Cette construction plasmidique représente un outil prometteur pour aider à identifiés certains agonistes des TAS2R orphelins
Sweet, umami and bitter taste detectors are membrane receptors that belong to the family of G-protein coupled receptors (GPCRs). They are characterized by the existence of a hydrophobic transmembrane domain (TMD) and an activation mechanism that involves a heterotrimeric G protein.Human has 25 bitter taste receptors TAS2R. These receptors belong to class A GPCRs. Their architecture consists of a TMD structured in 7 -helix which form the orthosteric binding site of bitter molecules. The umami taste receptor is a heterodimer composed of the TAS1R1 and TAS1R3 subunits, while the TAS1R2 and TAS1R3 subunits form the sweet taste receptor. Each subunits belongs to the class C GPCRs and shares a common architecture, consisting of a large extracellular N-terminal domain (NTD) connected to the TMD by a cysteine-rich region (CRR). However, the relative contribution of each subunit to the heterodimeric receptors function remains largely unknown.Because of their amphipathic nature, GPCRs are extremely difficult to study from a biochemical point of view. Characterizing their interactions and determining their structures are important issues and a real challenge for the next years. In this work, we have developed different expression systems to understand molecular mechanisms that govern receptor-ligand interactions.For the study of umami taste, the TAS1R1 and TAS1R3 NTDs were produced in E. coli bacteria as inclusion bodies and then folded in vitro. By combining biochemical approaches and functional cell assays, we have shown that inosine-5'-monophosphate (IMP), an umami flavor enhancer, binds to TAS1R3-NTD and acts synergistically with sucralose and neotame.Regarding the sweet taste receptor, the subunit (full size) of TAS1R2 was overexpressed in a tetracycline inducible cell line HEK293S. Solubilization and purification protocol allows to obtain functional TAS1R2 receptor. Far-UV circular dichroism spectroscopy analysis revealed that TAS1R2 is well folded. Multiangle light scattering coupled with gel filtration showed that TAS1R2 was predominantly present in dimeric form. Interactions with sugar ligands measured by intrinsic fluorescence revealed micromolar range affinities in agreement with cellular assays and the sweetening powers of molecules.In parallel, to study bitter receptors, we designed different TAS2R14 receptor expression vectors in order to improve receptor expression and target to the plasma membrane. We showed that use of the QBI SP163 sequence upstream of the translational initiation codon, associated with the signal peptide of the rat somatostatin 3 in the N-terminal position and the FLAG tag in the C-terminal position, increase the functional response of the receptor to bitter ligands both in terms of amplitude and sensitivity. This plasmid construct represents a promising tool to help identify some orphaned TAS2R agonists

Tableau d’honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2014-2015
Tableau d’honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2014-2015
La réaction de glucuronidation prise en charge par les enzymes UDP-glucuronosyltransférases est une voie majeure du système de détoxification cellulaire qui influence la biodisponibilité de molécules endogènes et exogènes. Notre laboratoire a récemment découvert l’existence de nouvelles protéines UGT nommées i2 dérivées de l’épissage alternatif du gène UGT1A. Ces protéines sont dépourvues d’activité transférase. Nous avons démontré par immunohistochimie que les enzymes i1 et les protéines alternatives i2 sont coexprimées dans plusieurs tissus du tractus gastro-intestinal, ainsi que dans les mêmes types cellulaires de ces tissus. Les i2 sont localisées dans la membrane du réticulum endoplasmique (RE) avec les i1, mais sont également présentes dans le cytosol. Étant donné la proximité physique des i1 et i2 au RE, nous avons généré des modèles cellulaires surexprimant différentes combinaisons d’enzymes i1 et de protéines i2. Nos données démontrent que la coexpression de ces deux types de protéines diminue l’activité de glucuronidation de 20 à 80 % dépendamment du substrat et de l’enzyme testés. Par co-immunoprécipitation, nous avons démontré que cette répression survient via l’interaction physique des i1 avec les i2. À l’inverse, l’augmentation de l’activité de glucuronidation suite à la répression des formes i2 endogènes a permis de confirmer ce rôle de modulateur négatif des i2. Il semble aussi que les i2 soient en mesure de moduler significativement l’activité UGT même lorsque leur niveau d’expression est inférieur à celui des i1, tel que retrouvé dans plusieurs tissus humains. Nos données supportent également l’influence de ces protéines alternatives sur la réponse pharmacologique. En effet, la répression de l’expression des i2 endogènes dans une lignée de cancer de côlon entraîne un avantage de survie sous traitement chimiothérapeutique. Enfin, l’identification de l’interactome tissulaire des isoformes des UGT1A démontre qu’elles ont le potentiel d’interagir avec des enzymes impliquées dans le métabolisme énergétique et la migration cellulaire. Nos données supportent que les i2 ont même la capacité de modifier le potentiel migratoire de cellules cancéreuses. Nous avons également démontré que les i2 ont la capacité de moduler le stress oxydatif cellulaire, entre autres via l’interaction avec des protéines antioxydantes, telle la catalase. En conclusion, nos résultats démontrent que les protéines alternatives i2 auraient le potentiel de moduler le système de défense cellulaire à plusieurs niveaux, en plus d’influencer la réponse aux médicaments.
La réaction de glucuronidation prise en charge par les enzymes UDP-glucuronosyltransférases est une voie majeure du système de détoxification cellulaire qui influence la biodisponibilité de molécules endogènes et exogènes. Notre laboratoire a récemment découvert l’existence de nouvelles protéines UGT nommées i2 dérivées de l’épissage alternatif du gène UGT1A. Ces protéines sont dépourvues d’activité transférase. Nous avons démontré par immunohistochimie que les enzymes i1 et les protéines alternatives i2 sont coexprimées dans plusieurs tissus du tractus gastro-intestinal, ainsi que dans les mêmes types cellulaires de ces tissus. Les i2 sont localisées dans la membrane du réticulum endoplasmique (RE) avec les i1, mais sont également présentes dans le cytosol. Étant donné la proximité physique des i1 et i2 au RE, nous avons généré des modèles cellulaires surexprimant différentes combinaisons d’enzymes i1 et de protéines i2. Nos données démontrent que la coexpression de ces deux types de protéines diminue l’activité de glucuronidation de 20 à 80 % dépendamment du substrat et de l’enzyme testés. Par co-immunoprécipitation, nous avons démontré que cette répression survient via l’interaction physique des i1 avec les i2. À l’inverse, l’augmentation de l’activité de glucuronidation suite à la répression des formes i2 endogènes a permis de confirmer ce rôle de modulateur négatif des i2. Il semble aussi que les i2 soient en mesure de moduler significativement l’activité UGT même lorsque leur niveau d’expression est inférieur à celui des i1, tel que retrouvé dans plusieurs tissus humains. Nos données supportent également l’influence de ces protéines alternatives sur la réponse pharmacologique. En effet, la répression de l’expression des i2 endogènes dans une lignée de cancer de côlon entraîne un avantage de survie sous traitement chimiothérapeutique. Enfin, l’identification de l’interactome tissulaire des isoformes des UGT1A démontre qu’elles ont le potentiel d’interagir avec des enzymes impliquées dans le métabolisme énergétique et la migration cellulaire. Nos données supportent que les i2 ont même la capacité de modifier le potentiel migratoire de cellules cancéreuses. Nous avons également démontré que les i2 ont la capacité de moduler le stress oxydatif cellulaire, entre autres via l’interaction avec des protéines antioxydantes, telle la catalase. En conclusion, nos résultats démontrent que les protéines alternatives i2 auraient le potentiel de moduler le système de défense cellulaire à plusieurs niveaux, en plus d’influencer la réponse aux médicaments.
The glucuronidation reaction mediated by the UDP-glucuronosyltransferases (UGT) enzymes is a major pathway of cellular detoxification system and has a clear effect on xenobiotic and endobiotic bioavailability. We have recently discovered nine new UGT proteins, named i2, which are derived from UGT1A alternative splicing. Those proteins are devoid of transferase activity. Using immunohistochemistry, we have demonstrated that i1 enzymes and i2 alternative proteins are coexpressed in multiple tissues of the gastrointestinal tract and also in the same cell types. Alternative i2 are localized in the endoplasmic reticulum (ER) membrane along with i1, but are also detected in the cytosol. Given the physical proximity of i1 and i2 at the ER, we have generated cellular models overexpressing different combinations of enzymes and i2 alternative proteins. Our data revealed that coexpression of those two types of proteins leads to a decrease of 20 – 80 % of the glucuronidation activity depending on the substrate and enzyme tested. By co-immunoprecipitation experiments, we have demonstrated that this modulation occurs via the physical interaction of i1 and i2. We have confirmed the negative modulator function of i2 alternative proteins by RNA interference. Our results demonstrates that repression of endogenous i2 leads to a significant increase of cellular glucuronidation activity. Data also support the importance of expression ratio of i2 :i1. Indeed, even an expression of i2 below the level of i1, as found in several tissues, consistently resulted in a significant modulation of UGT activity. Our data also support the role of i2 alternative proteins on pharmacological response. Repression of endogenous i2 in a colon cancer cell line leads to an increased cell viability under chemotherapeutic treatment. Furthermore, identification of UGT1A endogenous interactome reveals their capacity to physically interact with protein implicated in energy metabolism and cell migration. Our data support that i2 alternative proteins have the capacity to modulate migration potential of cancer cells. We have also demonstrated that i2 alternative proteins are able to modulate cellular oxidative stress, in part via protein-protein interaction with anti-oxidant proteins, such as catalase. In conclusion, our results demontrate that i2 alternative proteins have the potential to modulate the cellular defense system at multiple levels in addition to influence pharmacological response.
The glucuronidation reaction mediated by the UDP-glucuronosyltransferases (UGT) enzymes is a major pathway of cellular detoxification system and has a clear effect on xenobiotic and endobiotic bioavailability. We have recently discovered nine new UGT proteins, named i2, which are derived from UGT1A alternative splicing. Those proteins are devoid of transferase activity. Using immunohistochemistry, we have demonstrated that i1 enzymes and i2 alternative proteins are coexpressed in multiple tissues of the gastrointestinal tract and also in the same cell types. Alternative i2 are localized in the endoplasmic reticulum (ER) membrane along with i1, but are also detected in the cytosol. Given the physical proximity of i1 and i2 at the ER, we have generated cellular models overexpressing different combinations of enzymes and i2 alternative proteins. Our data revealed that coexpression of those two types of proteins leads to a decrease of 20 – 80 % of the glucuronidation activity depending on the substrate and enzyme tested. By co-immunoprecipitation experiments, we have demonstrated that this modulation occurs via the physical interaction of i1 and i2. We have confirmed the negative modulator function of i2 alternative proteins by RNA interference. Our results demonstrates that repression of endogenous i2 leads to a significant increase of cellular glucuronidation activity. Data also support the importance of expression ratio of i2 :i1. Indeed, even an expression of i2 below the level of i1, as found in several tissues, consistently resulted in a significant modulation of UGT activity. Our data also support the role of i2 alternative proteins on pharmacological response. Repression of endogenous i2 in a colon cancer cell line leads to an increased cell viability under chemotherapeutic treatment. Furthermore, identification of UGT1A endogenous interactome reveals their capacity to physically interact with protein implicated in energy metabolism and cell migration. Our data support that i2 alternative proteins have the capacity to modulate migration potential of cancer cells. We have also demonstrated that i2 alternative proteins are able to modulate cellular oxidative stress, in part via protein-protein interaction with anti-oxidant proteins, such as catalase. In conclusion, our results demontrate that i2 alternative proteins have the potential to modulate the cellular defense system at multiple levels in addition to influence pharmacological response.

Le gene codant pour le recepteur beta 2-adrenergique humain a ete clone, sequence et exprime dans des cellules eucaryotes. Un troisieme gene beta-adrenergique humain inconnu jusqu'a present a egalement ete isole, sequence et exprime in vitro. Chez le rongeur, l'arnm de l'equivalent du recepteur beta 3 humain est present dans le tissu adipeux, le muscle strie et le foie. La comparaison des sequences des trois recepteurs beta-adrenergiques humains montre que les regions les plus divergentes se situent soit au niveau de la partie 5 non traduite, comprenant le promoteur proximal, soit au niveau des regions qui codent pour le domaine d'interaction avec les proteines g et le domaine de regulation. Les recepteurs beta-adrenergiques ont ete exprimes dans escherichia coli. Les proprietes de liaison des ligands des recepteurs beta dans les bacteries sont tres proches de celles mesurables dans les tissus de reference. Ce systeme d'expression est un outil de choix pour l'etude du site de liaison et pour la selection de nouveaux ligands. Pour etudier les bases structurales de la selectivite des recepteurs beta-adrenergiques, huit genes chimeriques beta 1/beta 2 ont ete exprimes dans e. Coli. L'analyse des proprietes de liaison d'une serie de ligands sur ces recepteurs chimeriques a montre que la selectivite des ligands vis-a-vis des recepteurs depend d'une combinaison particuliere d'interactions ligand-recepteur; ces sous-sites de liaison sont vraisemblablement determines par les proprietes structurales propres de chaque ligand. La presence d'auto-anticorps specifiques du recepteur beta 1-adrenergique a ete recherchee dans le serum de malades atteints de myocardiopathie chronique dilatee idiopathique. Environ 30% de ces patients ont effectivement dans leur serum de tels auto-anticorps dont les proprietes biochimiques sont compatibles avec un effet pathogene in vivo

La mort par apoptose est impliquee au cours de l'homeostasie et du developpement des tissus. L'apoptose est responsable de la deletion des lymphocytes immatures autoreactifs. Cette elimination resulte de l'activation de ces cellules immatures a travers leur recepteur antigenique. Nous avons montre que des molecules associees a ce recepteur telles que le cd19 et le cd22 sont capables d'induire l'apoptose apres aggregation importante de ces molecules. Des cellules b matures peuvent egalement mourir par apoptose. Ces resultats suggerent que l'apoptose induite par l'antigene peut egalement etre une voie importante de regulation de l'activation des lymphocytes b matures. Des mediateurs solubles ou interleukines peuvent egalement moduler la mort des cellules b. Ainsi nous avons montre que le tgf beta pouvait a la fois bloquer la proliferation et induire l'apoptose de certaines cellules b. Neanmoins, le blocage du cycle cellulaire par le tgf beta n'est pas toujours associe a une induction d'apoptose sans que des differences d'expression c-myc et bc12 puissent rendre compte de ces differentes proprietes du tgf beta. A l'inverse, d'autres interleukines telles que l'il-4, l'il-13 ou l'interferon alpha peuvent prevenir invitro l'apoptose de cellules b normales ou tumorales leucemie lymphoide chronique b). Nos travaux montrent que l'apoptose des cellules b est regulee par differents signaux incluants l'antigene et des facteurs solubles ou interleukines

L'épiderme est un tissu en constant renouvellement dont la régénération est due à la présence de cellules souches à sa base. En raison du manque de marqueurs spécifiques des cellules souches épidermiques qui permettraient de les purifier, la biologie de ces cellules est mal connue. Or, le phénotype d'exclusion du Hœchst 33342, appelé SP, apparaît comme une caractéristique commune aux cellules souches de nombreux tissus adultes. Cette technique a donc été adaptée pour isoler une population SP à partir de kératinocytes humains en culture dont les identités cellulaire et moléculaire ont ensuite été étudiées. Ainsi, un kératinocyte SP possède un potentiel de prolifération suffisamment élevé pour régénérer la totalité de l'épiderme, propriété attribuée aux cellules souches de ce tissu. Parallèlement, une expérience d'hybridation sur puces à ADN a permis de mettre en évidence 41 gènes différentiellement exprimés, 37 gènes étant surexprimés dans les kératinocytes SP contre 4 gènes réprimés
The aim of the present study was to characterize human progenitor cells isolated from primary keratinocyte cultures. For that purpose, the Hoechst exclusion assay described for haematopoietic cells was adapted to keratinocytes to isolate SP cells that exclude the dye. We show that SP cells represented an average of 0. 16 % of the total population. These keratinocytes exhibited a larger expansion potential in long-term cultures ; indeed, one SP cell can generate enough keratinocytes to cover the whole body. To further characterize SP cells, cDNA microarrays spotted with 9120 probes were used to identify their molecular signature. Transcriptome analysis showed that 41 genes were differentially expressed, with 37 up-regulated genes and only 4 down-regulated genes in SP cells. In conclusion, SP keratinocytes can be isolated from primary cultures of adult human epidermis. These cells exhibit a high proliferative potential and a specific gene expression profile