Tesi sul tema "Mutation gain de fonction"
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Berrabah, Sofia. "Etude de nouvelles cibles thérapeutiques dans les lymphomes compliquant la maladie cœliaque". Electronic Thesis or Diss., Université Paris Cité, 2021. http://www.theses.fr/2021UNIP5201.
Abstract (sommario):
La maladie cœliaque réfractaire de type II (MCRII), autrement appelé lymphome intraépithélial, est une complication rare mais sévère de la maladie cœliaque caractérisée par une expansion clonale d'une population particulière de lymphocytes intraépithéliaux (LIE) innés, présents dans l'intestin normal chez l'Homme comme chez la souris. Notre laboratoire a montré que cette population particulière de LIE innés partage des caractéristiques communes à celles des lymphocytes T et des cellules NK. Ces « LIE iCD3+ innés » sont caractérisées par une expression de CD3 au niveau intracellulaire mais pas à la surface, de récepteurs NK et présentent des réarrangements des gènes codant le récepteur T. En outre, le laboratoire a montré que ces cellules se développent dans l'épithélium intestinal à partir de précurseurs de la moëlle osseuse en réponse à une combinaison de signaux induits à travers la voie NOTCH et l'interleukine 15. Durant la lymphomagénèse, les LIE iCD3+ innés acquièrent des mutations somatiques gain-de-fonction dans JAK1et/ou STAT3. Ces mutations pourraient favoriser l'expansion clonale des LIE iCD3+ mutés aux dépens des lymphocytes T normaux résidents en leur conférant une sensibilité accrue à l'interleukine 15 (IL-15), une cytokine surexprimée dans l'intestin des patients. Ainsi, notre hypothèse est que ces mutations ont un rôle central dans l'initiation de la lymphomagénèse dans un contexte de production chronique d'IL-15 et, de ce fait, représentent une cible thérapeutique. Le premier objectif de ma thèse a été d'étudier l'intérêt des inhibiteurs de la voie JAK/STAT dans le traitement de la MCRII. Dans un premier temps, nous avons testé in vitro différents inhibiteurs de JAK/STAT sur des lignées cellulaires IL-15-dépendantes issues soit de LIE de MCRII soit de LIE T normaux. Nous avons démontré que ces drogues inhibent la prolifération et la phosphorylation de STAT3 et augmentent l'apoptose cellulaire aussi bien dans les LIE MCRII que dans les LIE T normaux. Dans un second temps, nous avons généré un modèle de xénogreffe en injectant des cellules issues de biopsies intestinales ou du sang d'un patient MCRII dans des souris immunodéficientes surexprimant l'IL-15 humaine dans l'épithélium intestinal (Rag-/-Gc-/-IL-15TgE ou IRGC) afin de tester l'efficacité des inhibiteurs de JAK/STAT in vivo. Le traitement des souris xénogreffées par le ruxolitinib, inhibiteur de JAK1/JAK2, a permis une diminution de la fréquence et du nombre ainsi que de l'activité cytotoxique des cellules tumorales humaines et une amélioration de l'état général des souris. Ces résultats encourageants restent à confirmer. Le second objectif de ma thèse a été de vérifier si la mutation pD661V de STAT3 était suffisante pour induire le développement de la MCRII dans un contexte de surproduction d'IL-15 dans des souris IRGC. Nous avons généré avec succès les LIE iCD3+ innés murins semblables aux LIE iCD3+ innés humaines à partir de précurseurs communs aux cellules lymphoïdes (CLP) en combinant un signal NOTCH et IL-15. Nous avons ensuite transduit les CLP avec un vecteur rétroviral contenant Stat3 sauvage ou muté (D661V). Les cellules transduites ont alors été injectées chez des souris IRGC suivies pendant 8 semaines. Les résultats préliminaires ont montré que les LIE iCD3+ innés se logent préférentiellement dans l'intestin mais aucun développement d'un lymphome intraépithélial n'a été observé au bout de 8 semaines suggérant que la mutation pD661V de STAT3 seule ne suffit pas en présence d'IL-15 à induire in vivo un lymphome intraépithélial. Ces résultats préliminaires sont toutefois à reproduire et à confirmer. Le modèle mise en place pour l'étude de STAT3 va désormais être utilisé afin d'évaluer la contribution respective de mutations canoniques de JAK1 et STAT3 et des autres mutations récurrentes retrouvées dans le lymphome intraépithélialRefractory coeliac disease type II (RCDII), also called intraepithelial lymphoma, is a rare but severe complication of coeliac disease characterized by the clonal expansion of a small subset of innate intraepithelial lymphocytes (IEL), present in the normal human and murine intestine. Our lab has shown that this population displays shared features between T and natural killer (NK) cells. These so-called iCD3+ innate IEL are mainly characterized by intracellular expression of CD3, which is not detected at the cell surface, expression of NK receptors as well as DNA rearrangement of T cell receptor genes. Our lab has also shown that iCD3+ innate IEL originate from bone marrow precursors through coordinated NOTCH1 and interleukin (IL)-15 signals. During lymphomagenesis, iCD3+ innate IEL of most RCDII patients were shown to have acquired somatic gain-of-function mutations in JAK1 and/or STAT3 that confer increased sensitivity to interleukin-15, a cytokine overexpressed in the intestine of coeliac patients, thereby promoting their clonal expansion. Thus, our hypothesis is that JAK1/STAT3 mutations play a key role in initiating lymphomagenesis associated to coeliac disease in an IL-15-rich environment and that they could represent an attractive therapeutic target.The first objective of my thesis was to study the interest of JAK/STAT inhibitors for RCDII treatment. First, we have tested in vitro different JAK/STAT inhibitors on IL-15-dependent RCDII or normal IEL-T cell lines. We have shown that these inhibitors decrease the proliferation and phosphorylation of STAT3 and increase cellular apoptosis in both RCDII and normal T cell lines. Secondly, we have established a xenograft model based on the injection of cells derived from biopsy or blood from one RCDII patient into immunodeficient mice overexpressing the human IL-15 transgene in their gut epithelium (Rag-/-Gc-/- IL-15TgE; IRGC) to test the efficacy of JAK/STAT inhibitors in vivo. Treatment of xenografted mice with ruxolitinib, a potent inhibitor of JAK1/JAK2 decreased the frequency, number and cytotoxic potential of human tumoral cells and allowed clinical restoration. These preliminary results are encouraging but need to be confirmed. The second objective of my thesis was to test whether the Stat3 pD661V mutation is sufficient to induce the intraepithelial lymphoma in an IL-15-rich context in IRGC mice. We have successfully generated murine iCD3+ innate IEL in vitro, resembling their human counterparts from common lymphoid precursors by combining NOTCH and IL-15 signals. We then transduced CLP with a retroviral vector containing wild-type or mutated Stat3 pD661V. The transduced cells were injected into IRGC mice that subsequently were followed-up during a period of 8 weeks. In vitro generated iCD3+ innate IEL preferentially homed to the intestine. However, no development of intraepithelial lymphoma was observed suggesting that the Stat3 pD661V variant alone is not sufficient to induce the intraepithelial lymphoma. These preliminary results need to be reproduced and confirmed. The murine model used to test the role of STAT3 will now be used to evaluate the respective contribution of canonical mutations in JAK1 and STAT3 and of other recurrent mutations identified in RCDII
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Plaud, Clément. "Mécanismes moléculaires et cellulaires des paraplégies spastiques héréditaires liées aux mutations du gène SPG4 : haploinsuffisance VS gain de fonction pathologique". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLE037/document.
Abstract (sommario):
Les neurones sont des cellules spécialisées dans différentes fonctions, comme le contrôle des mouvements. La transmission de l’information au sein de l’axone est comparable au trafic de voitures d’une autoroute : les informations transitent dans plusieurs directions avec parfois des bouchons. Lorsque les informations n’arrivent plus à transiter, les patients peuvent souffrir de paraplégies spastiques à caractère héréditaire (PSHs), des maladies neurodégénératives. Cette thèse étudie le rôle joué par la spastine, une protéine impliquée dans certaines PSHs, et responsable de l’entretien des autoroutes. Nos résultats montrent que l’expression d’une forme mutée ou l’absence de production de la spastine,entraîne une perturbation spécifique des routes de transport et du trafic de certains composés essentiels à la survie des neurones. Dans l’ensemble, nos résultats aident à définir es effets pathophysiologies de la spastine afin de développer de nouvelles pistes de traitementsCentral motor neurons are specialized cells involved in the control of voluntary movements in human. The transmission of information along the axon of these neurons is comparable to car trafficking in a highway: information travel in both direction and sometimes traffic jam events occur. When the transit of information are slowed or impaired, patients may suffer of neurodegenerative diseases as hereditary spastic paraplegia (HSPs). In this thesis we investigated the role of spastin, a protein implicated in HSP and the maintenance of these highways. Our results showed that depletion of spastin, or expression of its mutants, lead to a disturbance of both the integrity of these « road » and the traffic of cellular components primary involved in axonal survival and growth. These results would help to elucidate the pathophysiological mechanisms implicated in the onset of this pathology and maybe in developing proficient therapeutic strategy for HSP patients
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Jiang, Dadi. "Analysis of a p53 Gain-of-function Mutation in Transgenic Mouse Salivary Tumors". VCU Scholars Compass, 2007. http://scholarscompass.vcu.edu/etd_retro/103.
Abstract (sommario):
p53 is an important tumor suppressor gene which is mutated in ~50% of all human cancers. Some of the p53 mutants appear to have acquired novel functions beyond merely losing wild-type functions. To investigate these gain-of-function effects in vivo, we interbred MMTV-v-Ha-ras transgenic mice to either p53-/- knock-out mice or p53R172H/+ knock-in mice to generate mice of three different genotypes: MMTV-ras, MMTV-ras/p53-/-, and MMTV-ras/p53R172H/R172H. Male mice of each of these genotypes were characterized with regard to age of salivary tumor onset and the tumors were characterized with regard to mean growth rates, proliferation fraction, apoptotic levels, and tumor histopathology, as well as responses to doxorubicin treatment. Microarray analysis was also performed to profile gene expression.The MMTV-ras/p53-/- and MMTV-ras/p53R172H/R172H mice display similar properties in age of tumor onset, tumor growth rates, and tumor histopathology, as well as response to doxorubicin. However, a subset of genes show differential expression between the two groups of tumor , and do not appear to be regulated by wild-type p53. At the same time, the MMTV-ras/p53R172H/R172H and MMTV-ras/p53+/+ tumors share similar expression levels of a group of genes that are differentially expressed in the MMTV-ras/p53-/- tumors. Thus, the gain-of-function effects may be caused in part by perturbed regulation of genes not normally regulated by wild-type p53, in addition to imbalances in the regulation of normal p53 target genes.
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Lartigau, Jérôme. "Le contrôle de gestion à l’heure des réformes hospitalières : une fonction en mutation ?" Thesis, Montpellier 1, 2010. http://www.theses.fr/2010MON10036/document.
Abstract (sommario):
Pris en étau entre une hausse continue de leurs dépenses et une stagnation de leurs ressources financières, les établissements publics de santé sont depuis longtemps confrontés à un problème de gestion de la rareté. Pour faire face à ce problème, beaucoup d'entre eux ont mis en œuvre un contrôle de gestion, avec les difficultés que représente une telle démarche dans une organisation traditionnellement qualifiée de « professionnelle ». Dès l'origine principalement orienté vers la maîtrise des dépenses, le contrôle de gestion hospitalier est en train de subir une profonde remise en question avec l'arrivée de la tarification à l'activité et de la mise en place de pôles d'activité médicale. Désormais, la fonction contrôle de gestion ne doit plus se cantonner à ce rôle qui lui était traditionnellement reconnu mais doit contribuer activement à l'augmentation des recettes de l'hôpital. Cette dynamique nouvelle - qui accorde une place beaucoup plus marquée aux concepts fondamentaux du contrôle de gestion - est aussi novatrice en raison de l'importance qu'elle confère aux producteurs de l'activité médicale. La mutation de la fonction contrôle de gestion dans le domaine hospitalier est un phénomène majeur pour les praticiens mais aussi un sujet particulièrement riche sur le plan théorique. Elle remet en cause les représentations traditionnellement admises du contrôle de gestion dans l'organisation professionnelle qu'est l'hôpital et donne l'occasion aux chercheurs d'utiliser de nouvelles grilles de lecture théoriqueCaught between a continuous rise in spending and a stagnation of their financial resources, public hospitals have long been faced with a problem of managing scarcity. To address this problem, many of them have implemented management control, with the difficulties of such an approach in an organization traditionally described as "professional." From the beginning mainly oriented toward expenditure control, management control in hospitals is undergoing a deep challenge with the advent of prospective payment system and the implementation of clinical directorates. Now the management control function should no longer be confined to this role which was traditionally recognized, but must actively contribute to the enhancement of the hospital's revenue. This new dynamics - which gives greater importance to fundamental concepts of management control - is innovative because of the importance it gives to producers of medical activity. The mutation of the management control function in the hospital sector is a major phenomenon for practitioners but is also particularly from a theoretical point of view. It challenges the traditionally accepted representations of management control in the hospital organization and gives an opportunity for researchers to use new theoretical frames
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Alouche, Nagham. "Impact d’un gain de fonction de CXCR4 sur la différenciation et la biologie plasmocytaire". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS450.
Abstract (sommario):
Le récepteur CXCR4 et son ligand chimiokinique CXCL12 jouent un rôle essentiel dans le développement des cellules B et contribuent à la migration des plasmocytes (PCs) vers la moelle osseuse (MO) où ces cellules persistent dans des niches particulières et produisent des anticorps au long cours. Des mutations hétérozygotes du gène codant CXCR4 ont été identifiées dans un déficit immunitaire rare appelé le syndrome WHIM (SW) et récemment dans la macroglobulinémie de Waldenström (MW), un lymphoplasmacytome B caractérisé par l’expansion d’un clone IgM+ qui s’accumule dans la MO. Ces mutations affectent l’étape de désensibilisation du récepteur en réponse à CXCL12 et mènent donc à un gain de fonction. Mes travaux de thèse ont porté sur l’étude de l’impact du gain de fonction de Cxcr4 sur la biologie plasmocytaire par le moyen d’un unique modèle murin porteur de la mutation Cxcr4+/1013 précédemment identifié chez certains patients. Afin de mieux comprendre un défaut de vaccination présent chez les patients atteints du SW, la première partie de ma thèse s’est basé sur l’étude de la réponse humorale Thymo-dépendent du modèle murin Cxcr4+/1013. Nous avons mis en évidence un défaut de maintien de la réponse vaccinale probablement lié à l’absence des PCs spécifiques de l’antigène dans la MO des souris mutantes. En revanche, une population de plasmablastes (PBs) immatures dérivée de la réponse extra-folliculaire (EF), s’accumulent de façon aberrante suggérant une occupation des niches qui pourrait être à l’origine de la réponse vaccinale défectueuse. D’une autre part, dans la MW, les mutations CXCR4 sont toujours retrouvées en association avec des mutations gain de fonction du gène MYD88, la deuxième partie de ma thèse a donc porté sur l’étude de la réponse Myd88-dependante dans le modèle Cxcr4+/1013. Nos résultats révèlent une entrée en cycle accrue des cellules B Cxcr4+/1013 qui s’accompagne d’une augmentation de la différentiation plasmocytaire après activation de Myd88. De plus, nos résultats suggèrent, que le gain de fonction de Cxcr4 affecte la maturation des PBs ainsi que leur code migratoire ce qui pourrait expliquer leur migration exacerbée vers la moelle osseuse. L’ensemble de mes travaux a permis de mettre en évidence que la désensibilisation de Cxcr4 était un mécanisme clé régulant la réponse EF ainsi que la différentiation et la maturation plasmocytaireCXCR4 plays an essential role in B cell development and controls partially plasma cell (PCs) homing to the bone marrow (BM). Heterozygous gain-of-function mutations of CXCR4 affecting its desensitization in response to the chemokine CXCL12 have been reported in a severe immune-deficiency disorder called WHIM syndrome (WS) and recently identified in Waldenström’s macroglobulinemia (WM), a B lympho-plasmacytoma characterized by the expansion of proliferative clonal malignant lymphoplasmacytic cells which secrete IgM Abs and mainly persist in the BM. Here we used a unique knock-in mice harboring the mutation Cxcr4+/1013 previously described in patients to assess how a gain-of-Cxcr4-function impacts PC biology and antibody (Ab) production. Following vaccination, WS patients mount a normal immune response but fail to maintain Ab titers over time. Therefore, the first part of my PhD was focused on studying the T-dependent humoral response in Cxcr4+/1013 mice. We showed that a strong reduction of antigen (Ag)-specific long-lived PCs in the BM of Cxcr4+/1013 mice could be the cause of the defective maintenance of Ab titers. Moreover, an aberrant accumulation of extra-follicular (EF) derived immature plasmablasts (PBs) was observed in this tissue potentially hampering the homing or maintenance of the Ag-specific PCs. Interestingly, in WM, mutations of CXCR4 are systematically associated with MYD88 mutations. Thus, the second part of my PhD focused on the study of the MyD88-dependent response in Cxcr4+/1013 mice. We showed that the Cxcr4 gain of function led to an increased cell cycle entry of splenic B cells that was associated with an enhanced PC differentiation. Finally, our findings showed that the desensitization of Cxcr4 is an essential break limiting the EF response as well as PC differentiation and maturation and suggest that an accumulation of mutated PB in the BM is not only due to the gain of function of Cxcr4 but to a more global change in the migratory code of these cells controlled by the exacerbated Cxcr4/Cxcl12 signaling
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Verleyen, Stijn. "Fonction, forme et variation : analyse métathéorique de trois modèles du changement phonique au XXe siècle, 1929-1982 /". Leuven ; Paris ; Dudley : Ma : Peeters, 2008. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb414383627.
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Morin, Denis. "Le récepteur V2 humain de la vasopressine : perte de fonction et gain de fonction. Du Diabète Insipide Néphrogénique à un récepteur V2 constitutivement actif". Montpellier 1, 1999. http://www.theses.fr/1999MON1T007.
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Biajoux, Vincent. "Impact d’un gain de fonction de Cxcr4 sur le développement et la compartimentalisation périphérique des lymphocytes". Thesis, Paris 11, 2013. http://www.theses.fr/2013PA114825/document.
Abstract (sommario):
Le syndrome WHIM (SW) est un déficit immuno-hématologique rare causé principalement par des mutations autosomales dominantes du gène CXCR4 qui entrainent une troncation du domaine C-terminal (C-Ter) du récepteur. Les formes mutantes de CXCR4 associées au SW génèrent des altérations de la désensibilisation et de l’internalisation du récepteur en réponse à CXCL12, qui se traduisent par une hypersensibilité à l’action chimiotactique du ligand. CXCR4 est un récepteur de chimiokine exprimé sur les leucocytes dont le rôle dans l’hématopoïèse et le trafic leucocytaire à l’état basal suggère que la lympho-neutropénie des patients atteints du SW est due à des défauts de production et/ou de domiciliation périphérique des leucocytes causés par le gain de fonction de CXCR4. Néanmoins, la validation de cette hypothèse est difficile chez les patients. En générant une souche de souris (Cxcr4+/1013), porteuse d’une mutation rapportée chez une famille de patients par une stratégie de knock-in, nous avons mis en évidence le rôle du domaine C-Ter de Cxcr4 dans le développement, la domiciliation périphérique des lymphocytes et l’immunité adaptative à médiation humorale.Les principaux résultats issus de notre travail, obtenus en combinant des approches biochimiques, fonctionnelles, de reconstitution de l’hématopoïèse par compétition, de transferts adoptifs et d’injection d’anticorps anti-CD45 in vivo, sont : 1) La mutation Cxcr41013 tronquant le domaine C-Ter se comporte différemment en terme de signalisation, selon qu’elle soit présente à l’état hétérozygote ou homozygote, et perturbe respectivement les transitions double-négatif (DN) 2-DN3 et proB-preB de la lymphopoïèse dans le thymus et la moelle osseuse (MO). Au contraire, elle ne génère pas d’effets sur le développement des cellules NK et la myélopoïèse ; 2) La lymphopénie qui touche les lymphocytes B (LB) et T (LT) est un processus intrinsèque aux cellules porteuses de la mutation Cxcr41013 et suit un modèle allèle-dose-dépendant ; 3) Le défaut de désensibilisation de Cxcr41013 empêche le relargage des lymphocytes NK et B immatures de la MO et celui des LB et LT matures des ganglions lymphatiques dans le sang. A l’inverse, le gain de fonction exacerbe la migration des LB recirculants et LT matures et leur rétention dans le parenchyme médullaire ; et 4) malgré l’absence de follicules primaires dans les ganglions lymphatiques, les souris mutantes sont capables de mettre en place une réponse immunitaire humorale efficace et spécifique d’un antigène T-dépendant, comme en témoigne l’augmentation des LB du centre germinatif et des plasmocytes ayant effectué une commutation isotypique. En conclusion, nous démontrons que la signalisation fine médiée par Cxcr4 est nécessaire pour le développement, la compartimentalisation périphérique et la fonction des lymphocytesThe WHIM Syndrome (WS) is a rare combined immuno-hematological disorder caused by inherited heterozygous autosomal dominant mutations in CXCR4, which result in most cases in the distal truncation of the receptor’s Carboxyl-terminal tail (C-Tail). Mutants of CXCR4 associated with WS display impaired desensitization and internalization of the receptor upon CXCL12 exposure, leading to enhanced migratory response. Because CXCR4 is expressed on leukocytes, we hypothesized that circulating pan-leukopenia could arise from altered CXCR4-mediated signalling that would skew tissue distribution and differentiation of leukocytes. This assumption was obviously difficult to address in patients. By generating a knock-in mouse strain (Cxcr4+/1013) that harbors a WS-linked gain-of-Cxcr4-function mutation, we establish that the C-tail domain in Cxcr4-mediated signalling is a pivotal regulator of lymphocyte development, peripheral trafficking and humoral immunity. The essential findings of our work, obtained by combining biochemical, bone marrow (BM)-mixed chimeras, in vivo labelling, adoptive co-transfers and functional approaches, are: 1) the C-tail truncating Cxcr41013 mutation caused differential signalling capacities depending on its heterozygous versus homozygous status and inhibited double-negative (DN) 2-to-DN3 and pro-B-to-pre-B developmental transitions during lymphopoiesis. In contrast, it had no effect on NK lymphopoiesis and granulopoiesis; 2) the resulting circulating B and T lymphopenia was due to hematopoietic cell-intrinsic defects and followed a mutated allele dose-dependent pattern; 3) impaired Cxcr41013 desensitization prevented the release of immature BM NK and B cells and mature lymph node (LN) B and T lymphocytes into the blood. Conversely, it forced homing and retention of mature recirculating B and T cells in the BM parenchyma; and 4) despite the absence of primary B-cell follicles in LNs, mutant mice produced efficient humoral responses upon immunization as illustrated by increased antigen-specific germinal center B cells and isotype-switched plasma cells. Collectively, our findings demonstrate that fine-tuning of Cxcr4 signal strength is required for optimal trafficking, egress and fitness of lymphocytes
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Bouis, Delphine. "Etude des conséquences d’un gain de fonction de Sting chez la souris : modèle STING V154M/WT". Thesis, Strasbourg, 2018. http://www.theses.fr/2018STRAJ063.
Abstract (sommario):
Des mutations gains de fonction du gène STING chez l’Homme (telles que V155M) déclenchent une pathologie autoinflammatoire sévère de type interféronopathie, le SAVI (Sting associated vasculopathy with onset in infancy), une vasculopathie associée à une fibrose pulmonaire et des symptômes lupus-like. Afin de comprendre la physiopathologie du SAVI, nous avons généré un modèle murin porteur de la mutation correspondante grâce à la technologie CRISPR/Cas9. Ces souris STING V154M/WT développent un phénotype SCID (déficit immunitaire combiné sévère) avec diminution des LT, des LB et des NK en périphérie, et une expansion du compartiment myéloïde. Ce défaut de développement est observé précocement dès le stade pré-proB dans la moelle osseuse, et au stade DN2 dans le thymus, et semble intrinsèque aux cellules hématopoïétiques. De plus, ces souris présentent une hypogammaglobulinémie sévère. Les LT et LB matures présentent également des défauts intrinsèques. Enfin, les souris présentent une signature IFN, mais leur phénotype SCID est IFN de type I-indépendant. Ces résultats mettent en évidence un rôle important de STING dans le développement lymphoïdeIn humans, point mutations in STING gene, such as V155M, lead to a severe autoinflammatory disease called SAVI (Sting associated vasculopathy with onset in infancy), classified as interferonopathy and characterized by vasculopathy, pulmonary fibrosis and a lupus-like pathology. In order to better understand the pathophysiology of SAVI, we generated a mouse model with the corresponding mutation, using CRISPR/Cas9 technology. These STING V154M/WT mice develop a SCID (severe combined immunodeficiency disease) with decrease of peripheral T, B and NK cells, and expansion of myeloid compartment. This defect seems to be present since the early stages, i.e. pre-proB cells stage in bone marrow and DN2 stage in thymus, and seems intrinsic to hematopoiectic cells. In addition, these mice present a strong hypogammaglobulinemia. Mature T and B cells also present intrinsic defaults. Finally, these mice present an IFN signature but their phenotype is independent of the IFN pathway. These results highlight an important role of STING in lymphoid development
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Pronier, Elodie. "Etude de la fonction de TET2 dans l'hématopoïese normale et pathologique". Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077035.
Abstract (sommario):
Les hémopathies myéloïdes sont des maladies clonales de la cellule souche hématopoïétique. Récemment de nombreuses études ont démontré l'implication des facteurs épigénétiques dans l'apparition de ces maladies. En effet, le séquençage d'ADN de patients atteints de diverses hémopathies malignes a permis l'identification de mutations dans le gène TET2 (TET methylcytosïne dioxygenase 2). Cette enzyme convertit les 5-méthylcytosines en 5-hydroxyméthylcytosines (5hmC). L'impact biologique de cette nouvelle base de l'ADN ainsi que la fonction des protéines TET sont encore mal connus. Les objectifs de ma thèse ont donc consisté à déterminer la ou les fonction(s) de TET2 au cours de l'hématopoïèse humaine et son implication dans la transformation maligne. Mes travaux ont confirmé, dans les cellules de patients atteints de NMP, que la mutation de TET2 induit une diminution du taux global de 5hmC génomique. Puis nous avons montré qu'une haploinsuffisance en TET2 dans des cellules CD34+ induisait un biais de différenciation vers le lignage myéloïde aux dépens des lignages lymphoïdes et érythrocytaires. Elle influence aussi les étapes terminales des trois lignages myéloïdes. Nous avons également démontré que l'inhibition de TET2 induit la surexpression de MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor}, TET2 est capable de se fixer au niveau de son site d'initiation de la transcription (TSS) et d'influencer sa transcription par recrutement d'EGR-1 et de la polymerase II activée. Enfin, l'haploinsuffisance de TET2 confère un avantage sélectif aux cellules CD34+ permettant une reconstitution supérieure du système hématopoïétique de souris immunodéficientes dans un modèle de xénogreffeMyeloid malignancies are clonal disease of the hematopoietic stem cell develop following a skewed of the differentiation toward myeloid lineages associated with increased proliferation. Recently, many studies have demonstrated the involvement epigenetic factors in malignant transformation. Indeed, DNA sequencing of patients with diverse malignancies identified mutations in TET2 (TET methylcytosïne dioxygenase 2) gene. This gene encodes an enzyme that couverts 5-methylcytosines to 5-hydroxyméthylcytosines (5hmC). The biological impact of this new modification of DNA bases and the TET protein function during hematopoiesis is poorly understood. The objectives of my thesis were to determine the function(s) of TET2 in human hematopoiesis and involvement in malignant transformation. My results confirmed in the cells from MPN patients that TET2 mutation induces a decrease in the overall rate of 5hmC. Then we hâve shown that TET2 haploinsufficiency after infection of CD34+ using a specific shRNA induces differentiation skewed toward myeloid lineage. This haploinsufficiency also affects the terminal stages of myeloid three lineages. We also demonstrated that TET2 inhibition induces expression of several inflammatory cytokines such as MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor}. TET2 binds to it promoter regions and influence their transcription through the recruitment of EGR1 and active polymerase II. Finally, haploinsufficiency of TET2 induces a selective advantage of CD34+ cells for reconstitution of the hematopoietic System of highly immunodeficient mice. TET2 is involved in several steps of tumor transformation but these functions factor transcription remain poorly understood
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Bozhilov, Yavor. "Analysis of a gain-of-function mutation that produces a new transcriptional unit in the α-globin locus". Thesis, University of Oxford, 2017. http://ora.ox.ac.uk/objects/uuid:c6979237-b318-47a6-ba03-8aab85c33d63.
Abstract (sommario):
The expression of the human α-globin locus is regulated by a set of well characterized enhancer elements. Mutations in the α-globin protein coding genes or their regulatory elements can cause a form of anaemia called α-thalassemia which results from the downregulation of α-globin in red blood cells. There are rare cases where this downregulation is caused by genetic defects outside the know elements. This thesis deals with a genetic mutation found in an intergenic region in the α-globin locus outside of any know regulatory site. The individuals with the mutation show the typical features of α-thalassemia but have also acquired the expression of a new transcript in their red blood cells. This transcript originates near a single base pair substitution which has been associated with the phenotype and is located upstream of the α-globin genes. The mutation is a transition from the wild type Thymidine to a Cytosine, which generates a new binding motif for the key erythroid transcription factor GATA1. Previous studies of an affected individual's primary erythroid cells demonstrate enrichment of GATA1 in the region of the mutation, along with the recruitment of TAL1 and RNA Polymerase II and an increase in acetylation of histone H3. The thesis tests the hypothesis that the new transcriptional unit may utilise the established transcription regulatory landscape of the α-globin locus for its own expression. This would result in competition with the α-globin promoters for enhancer activity, thereby causing a downregulation of α-globin transcription. The first objective of this thesis is to recapitulate the previously observed phenotype in a cell line system. This model is then used to address the question of how the normally un-transcribed sequence has acquired the ability to be expressed and lastly, this thesis explores the molecular mechanisms that cause the downregulation of α-globin. To this end an iPSC-based erythroid differentiation system was characterized. This system appears to recapitulate key aspects of erythropoiesis and generates a highly pure culture containing a large number of erythroid-like cells. Next, patient iPSC lines containing the mutation were generated and differentiated along the erythroid pathway. These cells faithfully express the novel transcript and show a reduction in α-globin mRNA levels. Expression of the new transcript is accompanied by the emergence of a new region of open chromatin at the site of the mutation along with the recruitment of GATA1, KLF1 and RNA Polymerase II and the enrichment of the promoter mark H3K4me3. Chromatin conformation analysis was used to assess the proximity between the elements in the α-globin locus in the presence of the mutation. This demonstrates increased interaction between the enhancers and the site of the new transcriptional unit and reduced interaction of the α-globin promoters with their enhancers, suggesting competition for enhancer activity. Finally, to demonstrate that the variant is necessary for the observed phenotype a patient line was genetically engineered to correct the mutation. This rescues the phenotype by reducing the expression of the new transcript, abolishing the accessible region and upregulating α-globin transcription. In addition, the mutation was introduced in a wild type iPSC line to recreate the phenotype. This results in the emergence of the patient-specific region of accessible chromatin, expression of the novel transcript and downregulation of α-globin. These observations prove that the single base pair change is sufficient to cause the formation of the new transcriptional unit and that it is the causal mutation for this form of α-thalassemia.
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Hattori, Tetsuhisa. "A novel gain-of-function KCNJ2 mutation associated with short QT syndrome impairs inward rectification of Kir2.1 currents". Kyoto University, 2012. http://hdl.handle.net/2433/157461.
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Billet, Sandrine. "Caractérisation in vitro et in vivo d'un mutant "Gain de Fonction" du récepteur AT1a de l'angiotensine II". Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N15S.
Abstract (sommario):
L'Angiotensine II (AngII) est le principal effecteur du Système-Rénine-Angiotensine-Aldostérone (SRAA) et participe à la régulation de la pression artérielle (PA) et de l'équilibre hydroélectrolytique. L’AngII agit sur ses tissus cibles par l'intermédiaire de récepteurs couplés aux protéines G comme le récepteur AT1. Le but de ce travail était de caractériser le phénotype in vitro et in vivo d’un mutant «gain de fonction» du récepteur AT1A de l’AngII. Le mutant choisi associait une mutation constitutivement activatrice et une délétion qui altère la désensibilisation du récepteur. L’expression de ce mutant chez la souris conduit à une hypertension artérielle modérée, une absence de désensibilisation à l’AngII, une modification du SRAA et une altération de la fonction cardiaque. Ce nouveau modèle de souris transgéniques ouvre des perspectives pour l’étude des mécanismes régulant la PA et pour le rôle direct de l’AngII à travers le récepteur AT1A sur les organes cibles du SRAAAngiotensin II (AngII) is the principal effector of the Renin-Angiotensin-Aldosterone-System (RAAS) that regulates blood pressure (BP) and hydroelectrolytic balance. AngII acts on its target organs via G protein coupled receptors like AT1 receptor. The goal of this work was to characterize the in vitro and in vivo phenotype of a «gain of function» mutant of the AngII AT1A receptor. We selected a mutant bearing a constitutively activating mutation and a deletion which deteriorates receptor desensitizing. The expression of this mutant in mouse leads to moderate hypertension, absence of desensitizing to AngII, modification of the RAAS and deterioration of cardiac function. This new transgenic mice model opens new perspectives for the studying of mechanisms controlling BP and for the direct role of AngII through AT1A receptor on the target organs of the RAAS
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Freitas, Christelle. "Impact d’un gain de fonction de CXCR4 sur la différenciation des cellules souches et des progéniteurs hématopoïétiques". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016SACLS099.
Abstract (sommario):
Le Syndrome WHIM (SW) est un déficit immuno-hématologique rare qui se caractérise notamment par une profonde leucopénie circulante. Le SW résulte principalement de mutations hétérozygotes autosomiques dans CXCR4 qui tronquent partiellement le domaine C-terminal de la protéine et entraînent un défaut de désensibilisation de CXCR4 en réponse à CXCL12. L’impact in vivo d’un gain de fonction de CXCR4 sur le développement et la différenciation lymphocytaires restant à définir, nous avons généré un modèle murin hétérozygote pour la mutation ponctuelle identifiée chez certains patients. L’objectif de ma thèse a été de déterminer si un défaut de différenciation des cellules souches et des progéniteurs hématopoïétiques (CSPH) était à l’origine de ces anomalies de lymphopoïèse. Nous avons observé que le nombre et la clonogénicité des CSH sont préservés dans la moelle osseuse des souris mutantes. Toutefois, les CSH porteuses de la mutation gain de fonction de Cxcr4 ont une quiescence accrue alors que leur multipotence et leur auto-renouvellement sont réduits. Ces dérégulations du compartiment des CSH entraînent, in vivo et in vitro, une altération de la production et de la spécification lymphoïde des progéniteurs multipotents (MPP). En périphérie, nous avons mis en évidence une diminution des CSPH dans le sang des souris mutantes, anomalie également retrouvée à partir de prélèvements sanguins de quatre patients atteints du SW et porteurs d’une mutation hétérozygote dans CXCR4. Ces résultats indiquent une anomalie de circulation des CSPH, hypothèse confortée par le développement d’une hématopoïèse extra-médullaire intra-splénique chez les souris mutantes. Ces données suggèrent que la désensibilisation de Cxcr4 régule la quiescence, la multipotence et l’auto-renouvellement des CSH et serait requise pour la spécification lymphoïde des MPP. Ainsi, l’absence de ce processus pourrait être à l’origine de la lymphopénie observée dans notre modèle murin et, par extrapolation, chez les patientsThe Warts, Hypogammaglobulinemia, Infections and Myelokathexis Syndrome (WS) is a rare immuno-hematological disorder characterized notably by a pan-leukopenia. It is mostly caused by heterozygous autosomal dominant gain-of-function mutations in CXCR4, which engender a distal truncation in the carboxyl-terminal tail domain and lead to a desensitization-resistant receptor. The in vivo impact of a gain-of-CXCR4 function on lymphocyte development and differentiation remain to be established. Then we recently produced major breakthroughs in the pathophysiology of the WS by generating a mouse strain harbouring a WS-linked heterozygous Cxcr4 mutation. The aim of my PhD was to determine if a HSPC differentiation defect would account for the lymphopenia. We showed that the total number and the clonogenicity of HSC were not altered in the BM of mutant mice. However, HSC carrying the gain-of-function mutation in Cxcr4 have an increased quiescence but a decreased multipotency and self-renewal. These HSC compartment deregulations lead to a in vivo and in vitro decline of multipotent progenitors (MPP) production and lymphoid specification. Furthermore, we reported a decrease in the total number of HSPC in the blood of mutant mice, an anomaly also found in four WS patients carrying a heterozygous CXCR4 mutation. This suggested an abnormal HSPC circulation that was strengthened by an enhanced extramedullary haematopoiesis observed in the spleen of mutant mice. These results suggest that Cxcr4 desensitization regulates HSC quiescence, multipotency and self-renewal and is required for MPP lymphoid specification. In this respect, the absence of such process could account for the lymphopenia in this model and likely in patients
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De, Zulueta Pablo. "Caractérisation fonctionnelle de la protéine homéotique teashirt (TSH) : analyse d'un mutant de gain-de-fonction inductible et fonction inductible et identification de trois nouvelles cibles de TSH". Aix-Marseille 2, 1994. http://www.theses.fr/1994AIX22068.
Abstract (sommario):
Le travail expose dans ce memoire concerne la caracterisation fonctionnelle in vivo et in vitro de la proteine teashirt (tsh), une proteine impliquee dans l'etablissement du patron morphologique et fonctionnel correct chez drosophila melanogaster. La premiere partie de ce memoire correspond a une introduction bibliographique sur le developpement comme mecanisme de structuration de la matiere vivante, sur l'ontogenese de drosophila melanogaster comme modele de developpement et sur les fonctions ontogenique et phylogenique des genes selecteurs. Cette partie sera centree sur les genes selecteurs homeotiques, le gene teashirt (tsh) pouvant etre place dans cette classe de gene. La deuxieme partie de ce memoire concerne les differents resultats obtenus et qui sont exposes sous forme d'articles. Le premier article est une etude des fonctions in vivo de la proteine tsh grace a l'etude des effets associes a la surexpression ectopique de tsh pendant le developpement. Les deux autres articles concernent l'etude de l'expression de la proteine tsh dans les embryons sauvages, la caracterisation de sa capacite de se lier in vitro a l'adn et l'etude de sa fonction grace a la caracterisation de trois genes cibles putatifs. La troisieme partie de ce memoire est une discussion sur les fonctions de tsh pendant l'ontogenese de drosophila melanogaster, sur la specificite d'action homeotique et sur certains genes cibles. La disponibilite de genes cibles va nous permettre d'etablir certains modeles sur la fonction homeotique, d'analyser la redondance fonctionnelle partielle de tsh et des genes hom-c, de dissequer le role de tsh dans la specificite d'action homeotique et d'examiner son origine et sa fonction evolutive possible
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Brasseur, Gaël. "Relations structure-fonction du complexe bc1 chez Saccharomyces cerevisiae : étude de mutants affectés au centre QN de réduction des quinones et d'un mutant d'origine nucléaire". Aix-Marseille 1, 1995. http://www.theses.fr/1995AIX11010.
Abstract (sommario):
Les complexes de type bc sont presents dans les chaines de transfert d'electrons a tous les stades de l'evolution. Le cytochrome b joue un role central dans le fonctionnement du complexe bc1. Afin de preciser les relations structure-fonction du cytochrome b membranaire, quatre mutants de deficience respiratoire et dix revertants ont ete analyses. Les mutants du gene du cytochrome b m221k et s206l sont affectes a la fois dans la reduction et l'oxydation de l'heme b562 par le centre n ; l'hypothese retenue est une instabilite de la semiquinone au centre catalytique de reduction des quinones. Les mutants frame-shift 204 et g33d ont un defaut d'assemblage du complexe bc1. Trois revertants issus du mutant s206l sont thermosensibles ; la serine 206 et l'asparagine 208 sont impliquees dans la thermostabilite de la proteine. Les mutations analysees induisent un deplacement du maximum d'absorption de l'heme b562 ce qui suppose une proximite avec l'environnement electronique de cet heme. La position 208 est impliquee dans la fixation de la funiculosine et le site de fixation de cet inhibiteur est tres proche du centre catalytique qn. L'ensemble des resultats montre que la region nh2 terminale du cytochrome b et la boucle reliant les helices transmembranaires 4 et 5 sont proches dans la structure tertiaire de la proteine, au voisinage de l'heme b562 ; ces regions sont impliquees a la fois dans la fixation des inhibiteurs du centre n et dans le centre catalytique de reduction des quinones. Le mutant nucleaire delete-disrupte du gene abc1 est affecte dans les activites de plusieurs complexes de la chaine respiratoire. Le pool de quinones endogenes est fortement diminue. Le profil electrophoretique des proteines mitochondriales est modifie chez ce mutant ; le complexe bc1 est assemble mais son fonctionnement est modifie. Abc1 est implique dans la bioenergetique et dans la biogenese mitochondriale
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Behrendt, Anna. "Proteomic and transcriptomic investigation of the mechanisms and consequences of p53 gain of function mutation in laryngeal squamous cell carcinoma". Thesis, University of Liverpool, 2011. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.569205.
Abstract (sommario):
Loss of p53 function is a critical event in tumour development. It has been well documented that p53 mutation can lead to an oncogenic gain of function (GOF) associated with poorer prognosis and therapeutic response. Such mutants exert their gain-of-function properties by modifying cells through altered transcriptional activity as well as novel protein-protein interactions, but the molecular details of the mechanisms involved are still not entirely understood. Recent reports indicate that mutant p53 increases TGFβ-dependent metastatic potential of cancer cells via inhibition of p63 function and also promotes invasion through increased integrin (aSpl) and EGFR recycling, which is also linked with suppression of transcriptionally active p63 in normal epithelial cells, lung cancer cells and invasive breast cancer cells. The aim of this study was to investigate the mechanism of mutant p53 GOF in squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN) cells. To avoid the potentially confounding impact of studying cells from biologically distinct anatomical sub-sites, the studies described here focused upon the most common sub-type of SCCHN -laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC). Two hot-spot p53 mutants representing two distinct mutational classes have been chosen for these studies: R17SH (structural mutation) and R273H (contact mutation), both of which have been previously demonstrated to have GOF properties and have been documented to occur in laryngeal cancer. The mechanism of mutant p53 GOF was investigated by identifying protein interactions of mutant p53 and by studying gene expression changes in LSCC cells expressing these p53 mutants. In addition, the functional consequences of mutant p53 expression in LSCC cells were investigated in terms of response to radiation (a primary treatment modality for LSCC) and motility/invasiveness (key determinants of metastatic potential). A number of proteins have been identified in the mutant p53 containing protein complexes in LSCC cells and one of these, HSP70, has been confirmed by immunoprecipitation to selectively interact with the p53-175H mutant. p53-273H-expressing cells and to a smaller extent p53-175H-expressing cells display increased motility. A stable knock-down of the mutant p53 has been shown to reduce the motility of cells suggesting that p53-273H contributes to increased
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Humbert, Aline. "La mutation de l'office du juge français : réflexions sur l'influence du droit d'origine externe sur la fonction juridictionnelle". Université Robert Schuman (Strasbourg) (1971-2008), 2005. http://www.theses.fr/2005STR30019.
Abstract (sommario):
La mutation de l'office du juge interne découle de l'ouverture de l'ordre juridique interne aux droits international, communautaire et européen des droits de l'homme. Cette mutation est principalement analysée à travers la juridiction administrative, mais n'exclut pas cependant tout intérêt des juridictions judiciaire ou constitutionnelle. La réflexion porte sur l'adaptation de la fonction juridictionnelle à sa nouvelle mission d'harmonisation entre logiques juridiques interne et externes. On s'interroge sur la capacité de l'office du juge, en premier lieu, à développer les instruments adaptés à cette responsabilité, et, en second lieu, à intégrer des finalités nouvelles. Le résultat ne peut qu'être nuancé, mais l'office du juge gagne en valorisation sur le plan interne et en complexification par son intégration au réseau juridictionnel européen. Le cadre institutionnel traditionnel est alors bouleversé. Il convient donc de repenser les critères de légitimité du juge dans la citéEvolution of the French internal judicial function has been particularly influenced by the increasing opening up of the internal legal order to international, European community and European human rights laws. Such evolution is mainly analysed through the administrative jurisdiction but doesn't exclude private law or constitutional law judges. The present dissertation focuses on how the legal function is adjusting to its new role of harmonization between internal and external legal systems. As such the first step is to question the judge's capacity to develop the suitable instruments to carry out such responsibility and the second step is to question his capacity to incorporate his new findings. The end result may vary but the role of the judge, from an internal viewpoint, is more valuable and also more complex given its integration to the European judicial network. The traditional institutional framework is therefore affected. It is advisable then to reflect on the judge's legitimacy criteria
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Vaglio, Philippe. "Etude de la relation structure-fonction de la protéine kinase CK2 par mutagenèse dirigée des résidus basiques conservés". Montpellier 1, 1996. http://www.theses.fr/1996MON1T029.
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Volat, Fanny. "Rôle des aldose réductases dans la physiologie du tissu adipeux blanc : modèles génétiques murins perte et gain de fonction". Phd thesis, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00686589.
Abstract (sommario):
Le développement du tissu adipeux blanc est finement régulé par des facteurs pro- et anti- adipogéniques. Au cours de l'obésité, son expansion conduit à de nombreuses complications métaboliques. A ce jour, peu de données sont disponibles sur les facteurs qui contrôlent négativement son développement. Dans ce contexte, le laboratoire a dirigé ses recherches sur le rôle de l'aldose réductase murine Akr1b7 dans ce tissu. Akr1b7 est exprimée dans la fraction stromale vasculaire du tissu adipeux blanc et possède un effet anti-adipogénique sur les préadipocytes en culture. La réalisation et l'analyse de souris invalidées pour le gène Akr1b7 nous a permis de démontrer que la perte de Akr1b7 entraîne une expansion de la masse adipeuse par une hypertrophie et une hyperplasie des adipocytes associées à une insulino-résistance. Les souris Akr1b7-/- ne sont pas hyperphagiques mais présentent un métabolisme basal réduit. Akr1b7 qui possède une activité prostaglandine synthase, régule le développement excessif du tissu adipeux par deux mécanismes dépendant de la PGF2α à savoir, l'inhibition de l'adipogenèse et de la lipogenèse. D'autre part, nous avons développé un modèle de souris transgéniques sur-exprimant l'aldose réductase humaine AKR1B1 dans le tissu adipeux. Contre toute attente et à l'inverse de Akr1b7, ce modèle montre un effet pro-adipogénique deAKR1B1. Ces données in vivo révèlent des activités inédites et opposées entre différentes isoformes d'aldose réductase et ouvrent de nouvelles pistes pour appréhender les mécanismes contrôlant l'homéostasie adipeuse et ses dérèglements.
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Eller, Carla. "Un criblage gain-de-fonction identifie CDKN2C comme facteur d'hôte impliqué dans le cycle viral du virus de l'hépatite B". Thesis, Strasbourg, 2019. http://www.theses.fr/2019STRAJ103.
Abstract (sommario):
L’hépatite B est causée par le virus de l’hépatite B (VHB) qui est une cause majeure du carcinome hépatocellulaire, deuxième cancer le plus meurtrier au monde. Le VHB infecte des hépatocytes humains, et, dû à la petite taille de son génome, dépend de nombreux facteurs de l’hôte, qui contribuent au tropisme d’espèce et à sa spécificité tissulaire. Cependant, au niveau moléculaire les interactions virus-hôtes nécessaires au cycle viral restent mal connues, à cause de l’absence de modèles cellulaires robustes pour l’étude de l’infection par le VHB. Un criblage innovant de génomique fonctionnel a révélé le rôle de CDKN2C comme facteur d’hôte proviral promouvant la réplication du VHB lors d’une étape du cycle viral postérieure à la formation de l’ADN super-enroulé, ceci, par sa fonction de régulateur du cycle cellulaire. Les travaux réalisés offrent une meilleure compréhension des interactions virus-hôte et des limites des systèmes de culture cellulaire actuellement disponibles, et contribuera au développement de systèmes modèles infectieux plus performantes et à l’élaboration de stratégies thérapeutiques novatrices pour lutter contre l’hépatite B chroniqueHepatitis B is caused by the hepatitis B virus (HBV) and is a major cause of progressive liver disease including cirrhosis and hepatocellular carcinoma (HCC), the second leading cause of cancer death worldwide. HBV infects human hepatocytes, and, because of the tiny size of its genome, depends on multiple host functions, contributing to species and tissue tropism. However, fundamental virus-host interactions remain obscure, owing to the lack of robust infectious models for HBV research. An innovative functional genomics screen revealed the role of CDKN2C as proviral host factor promoting HBV replication in a step of the life cycle after the formation of covalently closed circular (ccc) DNA via its function as cell cycle regulator. This provides a better understanding of virus-host interactions and limitations of currently available cell culture systems, and will contribute to the development of physiological infectious model systems and novel therapeutic strategies for viral cure
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Tast, Benjamin [Verfasser], Rolf [Akademischer Betreuer] Marschalek, Rolf [Gutachter] Marschalek e Halvard [Gutachter] Bönig. "Einfluss einer CXCR4 gain-of-function Mutation auf die (un)reife Hämatopoese / Benjamin Tast ; Gutachter: Rolf Marschalek, Halvard Bönig ; Betreuer: Rolf Marschalek". Frankfurt am Main : Universitätsbibliothek Johann Christian Senckenberg, 2019. http://d-nb.info/119237214X/34.
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Goßmann, Jennifer [Verfasser], e Andreas [Akademischer Betreuer] Neubauer. "Einfluss einer gain-of-function-Mutation im Plcg2-Gen auf eine Helicobacter felis-induzierte gastrale MALT-Lymphom Entwicklung / Jennifer Goßmann. Betreuer: Andreas Neubauer". Marburg : Philipps-Universität Marburg, 2016. http://d-nb.info/1082347108/34.
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Deblonde, Jean-Philippe. "Exploitation de la dynamique du geste en IHM : application aux fonctions de transfert pour le pointage et l'extraction d'événements discrets". Thesis, Lille 1, 2012. http://www.theses.fr/2012LIL10189.
Abstract (sommario):
La dynamique du geste reste peu exploitée dans le domaine de l’interaction hommemachinealors qu’elle permet de définir des critères simples d’analyse de l’intention desutilisateurs. Sa principale utilisation porte sur les fonctions de transfert des périphériquesisotoniques. Ces fonctions permettent d’établir une relation entre le geste de l’utilisateureffectué dans l’espace moteur avec le périphérique de pointage (i.e. souris) et le mouvementdu pointeur dans l’espace visuel. Les fonctions de transfert utilisées par les systèmesd’exploitation modernes restent cependant fortement méconnues même si des études ontmontré qu’elles ont un impact sur les performances des utilisateurs. Pour caractériser cesfonctions, nous avons développé un périphérique électronique qui simule une souris réelleet qui permet d’obtenir les fonctions de transfert de tout système. Nous avons ainsi puobtenir les fonctions des systèmes Windows, Linux et Mac et nous avons observé des différencesnotables entre ces fonctions. Nous avons ensuite cherché à optimiser ces fonctionsen réduisant au maximum le nombre de leurs degrés de liberté. En faisant varier de manièreexhaustive ces paramètres, nous avons ainsi pu observé des différences significativesqui montrent qu’il existe une famille de fonctions pour lesquelles les performances sontoptimales. Enfin, nous nous sommes intéressés à l’utilisation de la dynamique du gestedans un autre contexte, celui de la génération d’événements discrets, pertinent dans lecadre des interfaces sans contact de type Kinect. Nous avons ainsi montré qu’il est possiblede distinguer la sélection du déplacement dans une tâche d’interaction 3D. La techniquedéveloppée est ensuite améliorée dans le cas des cibles de petites tailles et son applicationdans un contexte d’interaction 2D est évaluéeThe dynamic of the gesture is not used a lot in the domain of human-computer interaction,while it can help to define some simple heuristics to analyze the intents of users.Its first use is related to transfer functions for isotonic devices. Those functions establisha relationship between the gesture of the user, executed in motor space with the pointingdevice (i.e. a mouse), and the movement of the pointer in the visual space. The transferfunctions used by modern operating systems are still not well known, even if somestudies have shown they have an impact on user’s performance. To characterize thosefunctions, we have developed an electronic device which simulates a real mouse, and thatcan retrieve the transfer functions of any system. We have then exposed the functions ofthe Windows, Linux and Mac systems, and we observed some visible differences betweenthose functions. We have then tried to optimize those functions by reducing their numberof degrees of freedom. By varying those parameters in an exhaustive way, we have thenobserved some significant differences that show there is a family of functions for whichperformances are optimal. Finally, we were interested in the use of the dynamic of thegesture in another context : the generation of discrete events, useful when dealing withcontact-less interfaces, like the Kinect. We have shown that it is possible to distinguishbetween picking and drag’n’drop in a 3D interaction task. The technique is then improvedin the case of small size targets, and its application in a 2D interaction context isevaluated
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Plantier, Jean-Luc. "La thrombine dans la physiopathologie vasculaire : une étude structure-fonction". Université Joseph Fourier (Grenoble), 1994. http://www.theses.fr/1994GRE10179.
Abstract (sommario):
La thrombine est une glycoproteine de la famille des proteases a serine. Comparee a celles des autres membres de sa famille, sa structure tertiaire possede une serie de boucles d'insertion particulierement exposees, organisees autour du site actif. Parce que la specificite restreinte de la thrombine pour ses substrats semble faire appel a des interactions a la surface de la molecule, il nous est apparu interessant de determiner quels etaient les roles de ces boucles dans certaines des activites de l'enzyme. Des mutations ponctuelles ont ete realisees dans deux de ces boucles (la boucle b et la boucle ) ainsi que sur la serine du site actif. L'analyse des resultats nous a permis de conclure qu'une thrombine dont le site actif est mutee est denuee de toute activite catalytique. La boucle b est confirmee dans son role de determinant majeur lors de la reconnaissance de tous les substrats testes. En revanche, les mutants que nous avons realises dans la boucle ne modifient que subtilement la poche de specificite primaire et peu les interactions avec les substrats macromoleculaires. En plus de cette etude structurale, nous avons etudier le mecanisme d'augmentation de la permeabilite de l'endothelium induite par la thrombine. La variation de permeabilite depend exclusivement du clivage du recepteur et necessite donc une enzyme catalytiquement active. La reponse des cellules endotheliales depend aussi de l'activation de la proteine kinase c et de phosphorylation sur les tyrosines. Le retour d'une sensibilite a l'enzyme requiere la synthese de nouveaux recepteurs. L'utilisation de nos outils moleculaires nous a permis de montrer que l'activite catalytique de l'enzyme est necessaire pour activer les megacaryocytes et inhiber specifiquement la pousse de leurs progeniteurs, ces deux mecanismes etant medies par le recepteur de la thrombine
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Tadmouri, Abir. "Les déterminants moléculaires et cellulaires de la mutation humaine R482X de la sous-unité Cavb4 impliqués dans l’épilepsie". Université Joseph Fourier (Grenoble), 2007. http://www.theses.fr/2007GRE10081.
Abstract (sommario):
Les canaux calciques neuronaux activés par la dépolarisation membranaire contrôlent diverses fonctions cellulaires telles que l’excitabilité neuronale et la transmission synaptique. Les canaux calciques sont formés d’une sous-unité principale Cav associée à 3 sous-unités régulatrices (b, a2d et g). La sous-unité auxiliaire Cavb joue un rôle crucial dans la régulation des propriétés biophysiques du canal et dans l’adressage membranaire de la sous-unité Cav. Chez l’homme, un isoforme de cette sous-unité Cavb4 est l’objet de mutations qui conduisent à des phénotypes épileptiques. L’une de ces mutations est une délétion d’une partie du domaine carboxy-terminal de Cavb4 (R482X). Les efforts effectués pour comprendre les mécanismes cellulaires du phénotype épileptique des patients concernés n’ont pas encore aboutit à des explications probantes. Ainsi, le phénotype neurologique ne semble pas lié à une altération de l’activité du canal, mais plus vraisemblablement à des fonctions cellulaires inconnues de Cavb4. Ma thèse porte sur la caractérisation des déterminants moléculaires et cellulaires du mutant humain R482X impliqué dans le phénotype neurologique des patients qui portent la mutation. Etant donné que l’épilepsie implique essentiellement les neurones du lobe temporal, je me suis particulièrement intéressée à l’étude des fonctions et de la localisation de Cavb4 dans les neurones d’hippocampe. Dans ces cellules, une translocation de la sous-unité Cavb4 du cytoplasme vers le noyau est notée au cours de la différenciation neuronale. Cette translocation est dépendante de l’intégrité structurale de la sous-unité Cavb4, elle est perdue dans le cas de la mutation R482X. La perte du fragment carboxy-terminal conduit à une altération de la structure de Cavb4 suite à la rupture de l’interaction intramoléculaire entre les deux domaines conservés, au sein de la protéine native. Dans les neurones d’hippocampe, cette déstructuration empêche la localisation nucléaire de la protéine mutante. Etant donné que la sous-unité Cavb4 ne possède aucun signal d’adressage nucléaire, la technique du double hybride a été réalisée afin de déterminer les partenaires protéiques capables d’adresser la sous-unité Cavb4 vers le noyau. Parmi les trois protéines criblées qui interagissent spécifiquement avec Cavb4 et pas avec le mutant, une est capable d’adresser Cavb4 dans le noyau alors que l’autre la retient dans le cytoplasme. Afin d’étudier l’effet de la localisation nucléaire de la sousunité Cavb4 sur la régulation génique, une étude transcriptomique a été réalisée. La sousunité Cavb4 montre un effet répressif sur l’expression génique. Cette répression est inversée dans le cas du mutant incapable de s’adresser vers le noyau des neurones. Parmi ces gènes, plusieurs sont des candidats potentiels pour expliquer l’altération d’activités neuronaux impliquée dans le phénotype épileptique. Enfin, l’absence de l’adressage nucléaire de la sous-unité Cavb4 mutante (R482X) due à la déformation de sa structure native, altèrerait la régulation transcriptionnelle des gènes, qui serait à la base du phénotype épileptique des patients qui portent cette mutationHigh voltage-activated (HVA) calcium channels are hetero-multimeric complexes that translate electrical signals into Ca2+ influx, a secondary messenger that mediates essential neuronal processes such as neurotransmitter release and neuronal excitability. HVA calcium channels are composed of four subunits: Cavα1 subunit, the pore forming of the channel and the auxiliary subunits Cavβ, Cavα2δ and Cavγ. The Cavß subunit has focused much of the interest owing to its regulatory functions within the complex. By masking an endoplasmic retention signal on the Cavα1 subunit, Cavß subunit targets the mature calcium channel to the plasma membrane and contributes to the increase in number of functional calcium currents. In humans, pathologic mutations have been identified in CACNAB4 that produce epileptic phenotype. One of these mutations is a premature termination mutation (R482X). Mutations produced minor biophysical effects on calcium channels in spite of their preponderant pathological phenotypes, which tend to indicate that cellular functions other than channel regulation may be responsible for the predominant neurological effects of the R482X mutation. My thesis focuses on the molecular and cellular determinants of the Cavb4 mutant (R482X) inducing the human neurological phenotype. Studies were realized in hippocampal neurons which are particularly implicated in epilepsy. A translocation of endogenous Cavß4, from the cytoplasm to the nucleus is observed during neuronal differentiation and synaptogenesis. This translocation is conditioned by the native structural conformation of Cavß4 subunit; carboxy-terminal deletion inhibits the nuclear localization of the mutant. The 38 amino acids deletion disturbs the structure of Cavß4 by altering the intramolecular interaction between the two conserved domains in Cavß4 subunit. In hippocampal neurons, this structural distortion prevents the nuclear localization of the mutant Cavß4. In order to identify the impact of the nuclear localization of the Cavß4 subunit on transcriptional regulation, a study on gene expression generated by microarray is realized. Profiles of gene expression revealed a differential gene regulation between wild-type and mutant Cavß4. Cavß4 subunit seems to have a repressive action on gene regulation; on the other hand, the lack of nuclear localization of the mutant reverses this repressive impact. Among the specific transcripts differentially expressed, some genes are primordial keys in neuronal activities, thus alterations in the regulation of these genes could be involved in neuronal diseases. Since no NLS consensus sequence has been identified on Cavß4, two-hybrid assay was realized in order to identify partners responsible of the Cavß4 nuclear targeting. A specific protein holding a NLS sequence interacts specifically with Cavß4 subunit, but not with the mutant, and is able to target Cavß4 to the nucleus. The other protein which specifically interacts with the WT Cavß4 sequesters Cavß4 in the cytoplasm. Finally, the lack in nuclear targeting of the R482X mutant due to the structural distortion appears to alter the transcriptional gene regulation which is maybe implicated in the epileptic phenotype of patients holding the mutation
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Nguidjoe, Evrard. "Etude de la fonction de la cellule bêta pancréatique dans un modèle de souris présentant une mutation nulle partielle de l'échangeur sodium/calcium". Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2011. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/209833.
Abstract (sommario):
Précédemment, nous avons montré que la surexpression de l'échangeur Na/Ca NCX1), une protéine responsable de la sortie de calcium (Ca2+) des cellules, augmentait la mort cellulaire programmée ou « apoptose » et réduisait la prolifération des cellules β. Afin d’étudier plus en profondeur le rôle de l’échangeur dans les cellules β in vivo, nous avons développé et caractérisé des souris présentant une inactivation de NCX1.Des méthodes biologiques et morphologiques (imagerie du Ca2+, capture de Ca2+, métabolisme du glucose, sécrétion d'insuline et morphométrie par comptage de points) ont été utilisées pour évaluer la fonction de la cellule β in vitro. Les taux de glucose et d'insuline dans le sang ont été mesurés afin de déterminer le métabolisme du glucose et la sensibilité à l’insuline in vivo. Des îlots ont été transplantés sous la capsule rénale pour évaluer leur capacité à corriger le diabète chez les souris rendues diabétiques par l’alloxane.
L'inactivation hétérozygote de Ncx1 chez les souris provoque une augmentation de la sécrétion d’insuline induite par le glucose avec un renforcement important à la fois de la première et de la deuxième phase. Ces résultats s’accompagnent d’une augmentation de la masse et de la prolifération des cellules β. La mutation augmente également le contenu en insuline, l’immunomarquage de la proinsuline, la capture de Ca2+ induite par le glucose et la résistance à l'hypoxie des cellules β. En outre, les îlots de souris Ncx1+/- montrent une capacité à compenser le diabète 2 à 4 fois plus élevé que les îlots de souris Ncx1+/+ lorsque transplantés chez des souris diabétiques.
En conclusion, l’inactivation de l'échangeur Na/Ca conduit à une augmentation de la fonction de la cellule β, de sa prolifération, de sa masse et de sa résistance au stress physiologique, à savoir à divers changements de fonction des cellules β opposés aux principales anomalies rencontrées dans le diabète de type 2 (Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM). Ceci nous procure un modèle unique pour la prévention et le traitement du dysfonctionnement des cellules β dans le T2DM et pour la transplantation d'îlots.
Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Brilland, Laurent. "Étude et réalisation de réseaux de Bragg inscrits dans une fibre optique monomode pour une fonction d'égalisation du gain des amplificateurs à fibre dopée". Lille 1, 2000. https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/Th_Num/2000/50376-2000-504.pdf.
Abstract (sommario):
Le sujet du mémoire s'inscrit dans le domaine des télécommunications par fibres optiques. Il porte sur l'étude et la réalisation de réseaux de Bragg en tant que filtres égalisateurs de la bande de gain des amplificateurs à fibre dopée à l'erbium. Dans la technique de multiplexage en longueur d'onde (wdm), l'uniformisation du gain des amplificateurs garantit un rapport signal à bruit optimal de l'ensemble des signaux portés par différentes porteuses. Le taux d'erreurs binaires s'en trouve alors amelioré, ce qui permet d'augmenter la distance de propagation des signaux. La solution que nous avons adoptée pour aplanir le gain des amplificateurs consiste à réaliser des filtres égalisateurs de gain à base de réseaux de Bragg. Nous présentons d'abord les modèles théoriques aboutissant à la présentation de leurs réponses spectrales. En raison de leurs caractéristiques spectrales, deux types de réseaux de Bragg se distinguent : les réseaux à pas longs et les réseaux à traits inclinésUn effort de modélisation nous a conduit à réaliser des fibres à structures d'indice particulières dans lesquelles nous avons inscrit des réseaux à pas longs mieux adaptés à la fonction d'égalisation. Les deux techniques d'inscription (photoinscription et déformation locale) sont analysées. Nous présentons un travail théorique et expérimental sur les caractéristiques spectrales des réseaux à traits inclinés photoinscrits dans une fibre à gaine photosensible. La stabilisation thermique de ces composants par un dispositif passif a été également effectuée. Une courbe de gain d'amplificateur à fibre dopée à l'erbium rendu uniforme par des réseaux à traits inclinés est présentée
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Jacquet, Eric. "Relations structure-fonction du domaine d'ef-tu liant les nucleotides guanyliques : mutation de la val20, residu homologue a la position 12 de la p21". Paris 6, 1988. http://www.theses.fr/1988PA066307.
Abstract (sommario):
La valine 20 du facteur d'elongation eftu est substituee par une glycine par mutagenese dirigee. Cette mutation a des consequences sur l'activite gtp asique et sur la vitesse d'association-dissociation du complexe eftu (gly 20)-gdp. Les etudes d'homologie des sequences primaires indiquent que le residu val 20 de eftu correspond a la position 12 de la proteine p21 codee par les genes ras humains
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Jacquet, Eric. "Relations structure-fonction du domaine d'EF-Tu liant les nucléotides guanyliques mutation de la Val20, résidu homologue à la position 12 de la p21 /". Grenoble 2 : ANRT, 1988. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376144130.
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Aguissa, Toure Almass-Houd. "Bases moléculaires de l'anémie de Diamond-Blackfan : étude structure-fonction de la protéine ribosomique RPS19 chez Saccharomyces cerevisiae". Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/427/.
Abstract (sommario):
L'anémie de Diamond-Blackfan (ADB) est une érythroblastopénie congénitale rare associée à des mutations mono-alléliques dans plusieurs gènes de protéine ribosomique. Cette liaison suggère une relation causale entre l'altération de la biogenèse ou de la fonction des ribosomes et cette pathologie. Le gène RPS19 est le plus fréquement muté (25% des patients). Pour comprendre l'impact des mutations, en particulier les mutations ponctuelles faux-sens, nous avons engagé une étude structure-fonction de l'homologue de la protéine RPS19 chez la levure Saccharomyces cerevisiae. Parallèlement, nous avons mené un travail collaboratif pour déterminer la structure cristalline de l'homologue de RPS19 de l'archeae Pyrococcus abyssi. Nos résultats distinguent deux types de mutations : certaines, enfouies dans la structure, affectent le repliement et la stabilité de la protéine, tandis que d'autres, en surface de la protéine, inhibent l'incorporation de RPS19 dans les particules pré-ribosomiques 40S. Par ailleurs, nous avons déterminé la séquence de localisation nucléaire et les déterminants moléculaires de l'adressage nucléaire de RPS19. Les différentes mutations de RPS19 n'interfèrent pas avec ce mécanisme de transport. Ainsi, les mutations faux-sens de la protéine RPS19 affectent en premier lieu la capacité de la protéine à être incorporée dans les pré-ribosomes, ce qui altère la biogenèse des ribosomes. Ceci pourrait d'une part activer une réponse de stress et d'autre part conduire à un déficit en ribosomes, deux facteurs qui pourraient être fatals dans certains processus physiologiques comme l'érythropoïèse. Ce mécanisme peut être étendu à toute protéine ribosomique mutée dans l'ADBDiamond-Blackfan Anaemia (DBA) is a rare congenital erythroblastopenia associated with mono-allelic mutations in several ribosomal protein genes. This linkage suggests a causal relationship between alteration of ribosome biogenesis or functions and this pathology. ?The RPS19 gene is the most frequently mutated (25% of patients). To understand the impact of the mutations, especially missense mutations, we undertook a structure-function study of RPS19 homolog in yeast Saccharomyces cerevisiae and we conducted a collaborative work to determine the crystal structure of archeae Pyrococcus abyssi RPS19. Our results distinguish two types of mutations: some affect residues buried in the structure and alter the protein folding and stability, while others change amino acids at the protein surface and prevent incorporation of RPS19 into 40S pre-ribosomal particles. In addition, we determined the nuclear localization sequence and the molecular determinants of RPS19 transport to the nucleus. Mutations linked to DBA do not interfere with the nuclear localization of the protein. Thus, missense mutations in RPS19 primarily affect the ability of the protein to be incorporated into pre-ribosomes, which alters ribosome biogenesis. This could on the one hand activate a stress response and on the other hand lead to ribosome shortage, two events that could be fatal to some physiological processes like erythropoiesis. A similar mechanism can be proposed for any ribosomal protein mutated to the DBA
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Mazza, Catherine. "17-hydroxystéroïde déshydrogénase humaine de type I : analyse des relations structure-fonction par mutagenèse dirigée et cristallographie des rayons X". Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015), 1997. http://www.theses.fr/1997GRE10214.
Abstract (sommario):
La 17-hydroxysteroide deshydrogenase de type 1 (17-hsd1) est responsable de la synthese de l'stradiol, strogene biologiquement actif implique dans le declenchement et la proliferation des cancers du sein hormono-dependants. Cette enzyme appartient a la famille des deshydrogenases reductases a chaine courte dans laquelle les residus ser142 tyr155 et lys159, tres conserves, sont supposes intervenir dans le transfert de proton. La 17-hsd1 presente une specificite exclusive, mais inexpliquee vis-a-vis des steroides possedant un cycle a aromatique. De plus, elle utilise, in vitro, aussi bien le nad#+ que le nadp#+ comme cofacteur. Au cours de ce travail, nous avons tente d'identifier les interactions qui regissent ces specificites et de proposer un mecanisme reactionnel. Pour ce faire, des mutants s142a, y155f, s142a/y155f, k159m, h221l, h221q et -17-hsd1 (deletion des 38 residus c-terminaux) ont ete construits et exprimes dans le systeme baculovirus-cellules d'insecte. Les parametres de cinetique enzymatique de ces mutants ont ete compares a ceux de l'enzyme sauvage et une etude structurale a ete menee sur certains de ces mutants. Ainsi, des complexes h221l/nadp#+/stradiol, -17-hsd1/nadp#+/estradiol, h221l/nad#+ et h221q/stradiol ont ete resolus respectivement a 2. 7 a, 1. 9 a, 3. 0 a et 2. 7 a de resolution. Ces structures nous montrent une image detaillee des interactions enzymes-nadp#+ dans lesquelles intervient une boucle mobile (191-199), desordonnee dans toutes les structures precedemment decrites. Stabilisee uniquement en presence de cofacteur, cette boucle se rabat sur le site actif et le protege du solvant. De plus, le residu phe192 stabilise le groupement nicotinamide par un contact hydrophobe fort. Conjointement, ces deux elements favorisent le transfert d'hydrure. Par ailleurs, le groupement 2-phosphate du nadp#+ est stabilise par deux interactions ioniques avec les residus arg37 et lys195 et par une liaison hydrogene avec la ser11. Cette stabilisation demontre la preference de l'enzyme pour le coenzyme nadp(h) et souligne l'originalite de la 17-hsd1 dans laquelle un des deux residus basiques est situe en dehors du motif rossmann fold. De plus, l'analyse des proprietes catalytiques et du mode de liaison de l'stradiol pour les deux mutants h221l et h221q suggere que la liaison hydrogene normalement observee entre le residu his221 et l'oxygene o#3 du steroide joue un role primordial dans le determinisme de la specificite de l'enzymze vis-a-vis des substrats possedant un cycle a aromatique. Enfin, l'analyse structurale du site catalytique des complexes ternaires associee a la perte d'activite enzymatique des mutants s142a, y155f, s142a/y155f et k159m nous a permis de proposer un mecanisme catalytique dans lequel le residu tyrosine jouerait le role d'acide en donnant son proton a l'oxygene o#1#7, le residu serine stabiliserait l'intermediaire reactionnel et contriburait a reduire le pka de la tyrosine alors que le role principal de la lysine serait de stabiliser le groupement nicotinamide.
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Pyun, Hae-Ok. "Les carrières nomades [motiles] constituent-elles une réponse face à un environnement en mutation? : Etude de cas sur les administrateurs territoriaux". Paris 2, 2010. http://www.theses.fr/2010PA020095.
Abstract (sommario):
Depuis les années 1970, l’environnement socio-économique et politique est en constante évolution et entraîne de profonds changements dans le mode organisationnel et plus particulièrement, dans la relation entre le salarié et l’employeur. La crise économique et financière de 2008 n’a fait qu’accélérer la cadence de ces changements. On assiste alors à « la rupture du contrat psychologique » entre les salariés et les employeurs. Les signes forts du changement sont : une nette diminution des mouvements verticaux et une augmentation de la part des emplois occupés par les non salariés, les travailleurs atypiques ou les salariés à temps partiels. Dans ce contexte, la théorie des carrières nomades [motiles] propose une explication fortement plausible des changements en cours dans le domaine de carrières. En s’appuyant sur différentes théories, notamment les théories de la contingence structurelle externe, de l’action de s’organiser, des trous structurels, cette théorie pose le principe suivant : la forme de carrière dépend principalement de l’état de l’environnement et du mode organisationnel. Autrement dit, la carrière organisationnelle est la forme contingente dans un environnement certain et stable, tandis que les carrières nomades [motiles] le sont dans un environnement équivoque et incertain. Or, les études de cas sur les administrateurs territoriaux suivant la démarche déductive de Popper remettent en cause trois propositions théoriques des carrières nomades [motiles] et mettent en évidence la nécessité d’apporter plus de précisions quant à l’application empirique dans le domaine de carrières.
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Brillet, Thomas. "Relations structure-fonction de l'alpha-hémoglobine et de sa protéine chaperon l'AHSP : octamères d'hémoglobine recombinante : application à la mise au point d'un transporteur d'oxygène artificiel". Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077097.
Abstract (sommario):
Ces travaux concernent l'étude de deux molécules d'hémoglobine (Hb) candidates à l'élaboration d'un transporteur artificiel d'oxygène et l'étude des relations structure-fonction de l'α-Hb et de sa protéine chaperon AHSP dans la cadre d'un mutant de l'AHSP décrit chez un patient présentant un syndrome thalassémique. La première partie du travail concerne le mutant α-HbH⁵⁸L, résidu clé de la poche de Thème, en vue de réduire l'auto-oxydation dans l'Hb. Celui-ci présente les mêmes caractéristiques spectrales quel que soit le ligand externe ajouté, contrairement à la protéine native. Dans ce mutant Thème semble être hexacoordonné avec un ligand endogène avec une forte affinité. La deuxième partie concerne les études d'octamères recombinants d'Hb réalisés par pontage intermoléculaire soit au niveau des sous-unités ß (ß octamère) ou a (α octamère). Ces octamères ont des propriétés fonctionnelles proches de THbA, mais avec une interaction avec l'haptoglobine (Hp) très diminuée. L'Hp et l'α octamère forment en quelques heures de grands complexes alors que le p octamère réagit nettement moins vite avec l'Hp, reflétant une plus grande stabilité de ce dernier La troisième partie concerne la caractérisation du complexe AHSP/α-Hb. Les constantes d'association, de dissociation de Tα-Hb vis à vis de son chaperon ont été déterminées. Pour le mutant AHSPV⁵⁶G, la constante de dissociation du complexe AHSP/α-Hb est diminuée 4 fois. L'AHSPV⁶⁵G seule est partiellement repliée à 37°C avec une stabilité thermique fortement diminuée alors que le complexe AHSPV⁵⁶G/α-Hb a une stabilité thermique proche de la normale. Au sein du complexe AHSPV⁵⁶G/α- Hb, l'α-Hb a également une fonction normaleThis work concerns the study of two candidate molecules of hemoglobin (Hb) in the development of an artificial oxygen carriers and the study of structure-function relationships of α-Hb and its chaperone AHSP in the context of a mutant AHSP described in a patient with thalassemia syndromes. The first part of the work concerns the mutant α-HbH⁵⁸L, a key residue of the heme pocket in order to reduce auto-oxidation in Hb. This mutant has the same spectral characteristics regardless of the external ligand added, unlike the native protein. This mutant appears to have a hexacoordinated heme with a high affinity endogenous ligand. The second part concerns the study of recombinant Hb octamers Hb, obtained by intermolecular disulfide bond of ß-Hb (ß octamer) or α-Hb (α octamer). These octamers have functional properties similar to HbA, but with a decreased interaction with haptoglobin (Hp). Hp and a octamer form within a few hours a large complex while the ß octamer reacts much more slowly with Hp, reflecting its greater stability. The third part concerns the characterization of the complex AHSP/α-Hb. Both association and dissociation rates of the α-Hb with its chaperone were determined. For the mutant AHSPV⁵⁶G, the dissociation rate of the complex AHSP/α-Hb is 4 times reduced. The AHSPV⁵⁶G appears to be partially folded at 37 ° C with a progressive thermal unfolding curve. However the complex AHSPV⁵⁶G/α-Hb has a thermal stability close to normal. Within the complex AHSPV⁵⁶G/α-Hb, the α-Hb displays a normal function
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KEMTCHOU, JASMINE. "Contribution a l'etude de la qualite et de la fiabilite des amplificateurs optiques a fibre dopee erbum : modelisation du gain et du bruit en fonction des contraintes climatiques". Paris 11, 1997. http://www.theses.fr/1997PA112106.
Abstract (sommario):
L'objet de cette etude est de modeliser le fonctionnement des amplificateurs optiques a fibre dopee erbium (afde) en fonction des contraintes liees a l'environnement climatique. Les notions de base de la spectroscopie des ions de terres-rares inseres dans une matrice vitreuse, necessaires pour la modelisation, sont rappelees dans la premiere partie de ce travail, qui decrit egalement le principe de fonctionnement et les applications des afde. La deuxieme partie presente les principaux modeles mathematiques decrivant le fonctionnement des amplificateurs optiques apparus depuis le debut des annees 90. L'objectif est de developper parmi ces modeles celui le plus adapte a notre etude, en y introduisant les effets lies aux contraintes climatiques. Les grandeurs fondamentales qui refletent la structure electronique de l'ion erbium insere dans sa matrice hote sont les sections efficaces d'absorption et d'emission. La troisieme partie decrit des methodes permettant de les mesurer en fonction des contraintes de temperature et d'humidite relative. Les valeurs obtenues permettent de determiner la loi de variation de ces sections efficaces avec la temperature et l'humidite relative, d'introduire cette loi dans le developpement mathematique du modele choisi, afin de modeliser dans la quatrieme partie le fonctionnement des afde en fonction des contraintes climatiques. Une validation experimentale du modele est effectuee. En outre, le comportement des afde est etudie et compare pour deux longueurs d'onde de pompage differentes, ainsi que pour plusieurs types de fibres dopees erbium. Enfin, la dependance en temperature des caracteristiques des amplificateurs a fibre dopee erbium pour une utilisation dans les systemes multicanaux est theoriquement analysee.
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Virot, Sophie. "Les petites protéines de stress et leur rôle dans la mort cellulaire : étude de leur fonction chaperon à travers l'exemple de la mutation R120G del'[alpha]B-cristalline". Lyon 1, 2004. http://www.theses.fr/2004LYO10095.
Abstract (sommario):
Les petites protéines de choc thermique Hsp27 et [alpha]B-cristalline, sont synthétisées en réponse à de nombreux stress environnementaux. Plusieurs mécanismes biochimiques nécessitant des modifications de l'état d'oligomérisation ou de phosphorylation d'Hsp27 ont été proposés pour expliquer son rôle protecteur lors de stress thermique ou oxydant. Nous avons étudié les modifications biochimiques d'Hsp27 lors de l'activation de la caspase-3 et du relachage du cytochrome mitochondrial au cours de l'apoptose induite par différents stimuli. Une corrélation entre le statut biochimique et l'inhibition de la caspase-3 a été établie. L'[alpha]B-cristalline exerce également un rôle protecteur lors d'un stress ozydant, thermique ou apoptotique. La mutation R120G de cette protéine est responsable d'une myophatie liée à la semine et provoquerait in vitro la perte de la fonction de type chaperon. J'ai réalisé et caractérisé des lignées cellulaires HeLa exprimant constitutivement l'[alpha]B-cristalline sauvage ou mutée et comparé leur rôle protecteur au cours de stress thermique, oxydatif et apoptotique. La mutation ne semble pas modifier le réseau de filaments intermédiaires mais affecte le cytosquelette d'actine et la mobilité cellulaire ainsi que la résistance au stress thermique et oxydatif
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Scekic-Zahirovic, Jelena. "Troncation conditionnelle de la protéine FUS chez la souris : un nouveau modèle animal du continuum sclérose latérale amyotrophique/démence fronto-temporale". Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAJ002/document.
Abstract (sommario):
La sclérose latérale amyotrophique (SLA) et la démence fronto-temporale (DFT) sont deux maladies qui constituent un continuum clinico-pathologique. La mutation de FUS, une protéine nucléaire à fonctions multiples, provoque des cas familaux de SLA, et ces mutations provoquent une redistribution sub-cellulaire de FUS, du noyau vers le cytoplasme. Certains cas de DFT présentent une telles distribution anormale en l’absence de mutations de FUS. Il n’est pas connu si la maladie est provoquée par une perte de la fonction nucléaire de FUS et/ou un gain de fonction cytoplasmique.Nous avons généré et caractérisé une lignée de souris exprimant une forme cytoplasmique de FUS (Fus-ΔNLS). La localisation exclusive de FUS dans le cytoplasme provoque la mort des motoneurones via un gain de fonction dans les motoneurones eux-mêmes. Une localisation cytoplasmique partielle de FUS est suffisante pour développer un phénotype de la SLA et de DFT. Les mécanismes élucidés permettront de comprendre les bases des SLA/DFTAmyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Frontotemporal dementia (FTLD) are now considered as a unique clinicopathological spectrum referred to as ALS/FTLD. Cytoplasmic aggregation of the physiologically nuclear FUS protein is a hallmark feature of a subset of ALS/FTLD. It remains unknonwn whether the critical pathogenic event relies on a loss of FUS normal nuclear functions, a toxic gain of function of FUS in the cytoplasm, or a combination of both.To answer this question we have generated a conditional mouse model expressing truncated FUS without nuclear localization signal - FusΔNLS. Our data showed that complete cytoplasmic mislocalization of truncated FUS protein within spinal motor neurons is a major determinant of motor neuron degeneration via toxic gain of function. A partial mislocalization of truncated FUS protein was sufficient to trigger key features of ALS and of FTLD.These studies allowed the elucidation of mechanisms underlying FUS role in ALS/FTLD, and will hopefully lead to development of therapies for these devastating diseases
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Mouz, Nicolas. "Mécanismes de résistance aux [bêta]-lactamines : études des relations structure-fonction de la Penicillin-Binding Protein 2x de Streptococcus pneumoniae". Université Joseph Fourier (Grenoble), 1999. http://www.theses.fr/1999GRE10102.
Abstract (sommario):
Streptococcus pneumoniae est une bacterie pathogene dont la resistance aux antibiotiques de la famille des -lactamines est liee a une diminution de la sensibilite des penicillin-binding proteins (pbps) a ces molecules. Ces pbps sont des d,d-transpeptidases, enzymes essentielles a la viabilite des bacteries et impliquees dans la synthese de la paroi bacterienne. Pbp2x est une des premieres cibles modifiees chez les pneumocoques resistants aux -lactamines. L'objectif de ce travail de these a ete de comprendre, a un niveau moleculaire, quels etaient les mecanismes a la base de la perte de sensibilite aux -lactamines de pbp2x de s. Pneumoniae. Chez les pneumocoques resistants aux -lactamines le domaine transpeptidase de pbp2x presente un nombre important de substitutions d'acides amines, compare a celui provenant de souches sensibles. Un nombre limite de ces changements doivent etre responsables de la baisse d'affinite pour les $$-lactamines. Nous avons identifie quelques positions, proches de la serine 337 du site actif, mutees uniquement au sein de pbp2x isolees de souches resistantes. Ces residus definissent deux groupes dont nous avons analyse le role par mutagenese dirigee. Les mutations ont ete introduites dans la region soluble extracellulaire de pbp2x de s. Pneumoniae sensible aux -lactamines (s-pbp2x*), exprimee dans escherichia coli. Le premier groupe de residus appartient au brin 3. La structure cristallographique a haute resolution d'un complexe s-pbp2x*/cefuroxime montre que le brin 3 est en contact direct avec l'antibiotique. La position 552 est souvent mutee dans pbp2x de s. Pneumoniae isolee en milieu hospitalier, tandis que la position 550 est preferentiellement substituee dans les mutants de laboratoire selectionnes par une seule cephalosporine. Nous avons trouve que la mutation 552 dans s-pbp2x* reduisait l'efficacite d'acylation de la proteine pour la penicilline g et le cefotaxime tandis que la mutation en position 550 diminuait l'efficacite d'acylation seulement pour le cefotaxime. Ainsi, la position et la nature des substitutions des residus se trouvant sur le brin 3 de pbp2x affectent la specificite d'interaction des mutants avec la penicilline g et/ou le cefotaxime. Le second groupe inclut des residus qui ne sont pas en contact direct avec l'antibiotique et qui definissent une cavite enfouie contenant une molecule d'eau structurale. Les chaines laterales des residus 338 et 571 sont liees a cette molecule d'eau dans les formes sensibles de pbp2x. La mutagenese dirigee des positions 338 et 571 produit des mutants similaires, en terme d'affinite aux -lactamines et d'hydrolyse de substrats, aux pbp2x produits par des souches resistantes isolees en milieu clinique. Une mutation inverse dans un variant pbp2x issu d'une souche resistante clinique provoque des effets opposes, c'est a dire une augmentation de l'efficacite d'acylation des -lactamines et de l'hydrolyse des analogues de substrat. Ces resultats suggerent que la perte partielle ou totale de la molecule d'eau decrite ci-dessus pourrait moduler la reactivite de la serine active. La baisse de cette reactivite resterait compatible avec la synthese du peptidoglycane mais reduirait la sensibilite des bacteries aux concentrations therapeutiques d'antibiotiques. La combinaison des substitutions des deux groupes de mutations provoque une reduction de sensibilite aux -lactamines a un niveau comparable a celui mesure pour les pbp2xs issues de souches resistantes isolees en milieu clinique. Nos resultats montrent qu'un faible nombre de mutations suffit pour convertir un pbp2x sensible aux -lactamines en une molecule resistante. Cette etude illustre aussi la diversite des mecanismes moleculaires mis en jeu pour aboutir a la resistance, qui impliquent des residus en contact ou non avec l'antibiotique.
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Renault, Anne-Laure. "Identification de facteurs génétiques modifiant le risque de cancer chez les porteuses d'une mutation constitutionnelle d'ATM & profil tumoral des tumeurs du sein associées à une perte de fonction d'ATM". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLS389/document.
Abstract (sommario):
L’ataxie-télangiectasie (A-T) est une maladie génétique récessive rare de l’enfant, caractérisée par un syndrome neurodégénératif, un déficit immunitaire et des télangiectasies cutanées. La maladie est causée par des mutations bialléliques inactivatrices dans le gène ATM (Ataxia-Telangiectasia Mutated). La maladie implique aussi un risque élevé de développer des cancers, en particulier des leucémies et des lymphomes. Les sujets atteints d’A-T ont également une radiosensibilité accrue. Les femmes de plus de 50 ans apparentées à un enfant atteint d'A-T, porteuses d’une seule copie mutée d’ATM (HetAT), ont un risque plus élevé de cancer du sein que les femmes de la population générale (RR 4,94, 95%CI 1,90 - 12,09). Des études épidémiologiques confirment l’implication d’ATM dans la prédisposition au cancer du sein et montrent que 0,5% à 1% de la population porte une mutation délétère dans ce gène mais le risque de cancer pour les individus HetAT sont encore mal estimés. Dans le premier volet de ma thèse, j’ai recherché des facteurs génétiques constitutionnels pouvant modifier le risque de cancer chez les femmes de la cohorte CoF-AT (cohorte de femmes apparentées à un enfant atteint d’A-T). J’ai ensuite décrit les caractéristiques histologiques et génomiques des tumeurs du sein de sujets HetAT afin d’identifier des biomarqueurs permettant de discriminer les tumeurs ATM des autres tumeurs.Les résultats obtenus dans la première partie de mes travaux menés sur un échantillon de 284 individus HetAT et 174 individus non-HetAT issus de 103 familles A-T montrent que les individus HetAT ont des télomères plus longs que leurs apparentés non-HetAT (p=0.0008). En revanche, la longueur des télomères n’est pas associée au risque de cancer dans cette population. De plus, le SNP rs9257445 (ZNF311) qui est associé à la longueur des télomères chez les individus HetAT n’est pas lui non plus associé au risque de cancer. En revanche les SNPs rs6060627 (BCL2L1) et rs2380205 (ANKRD16) modifient le risque de cancer chez les femmes HetAT et non-HetAT.Les résultats obtenus dans la deuxième partie de la thèse à partir de la description morphologique de 41 tumeurs mammaires montrent que les tumeurs des porteurs d’une mutation dans ATM sont majoritairement de sous-type luminal B. D’un point de vue moléculaire, les 23 tumeurs ATM étudiées ne présentent pas la signature BRCAness associée à de grandes pertes chromosomiques. En revanche, nous avons montré que la majorité des tumeurs ATM sont tétraploïdes et présentent une perte d’hétérozygotie au locus 11q22-23 entrainant une inactivation de l’allèle normal d’ATM dans les tumeurs. De plus, l’analyse du nombre de copies réalisée sur ces tumeurs montre une signature ATM impliquant des pertes des loci 13q14.11-q14.3, 21p11.2-p11.1 et 22q11.23.L’ensemble de ces travaux aura permis de mieux caractériser les caractéristiques génétiques des femmes de la cohorte CoF-AT et de mettre en évidence des bio-marqueurs des tumeurs ATMInherited biallelic mutations in the ATM gene cause Ataxia Telangiectasia (A-T), a multisystemic disorder characterized by neurological, cutaneous and immunological abnormalities. The disease is associated with an elevated risk of malignancies, particularly of lymphoma or leukemia, and a high radiosensitivity. Epidemiological studies have shown that female heterozygote carriers (HetAT) younger than 50 years are at increased risk of breast cancer, as compared to women from the general population (RR 4,94, 95%CI 1,90 - 12,09). Despite the rarity of A-T disease, 0.5 to 1% of the population is estimated to be HetAT. Epidemiological studies have confirmed that some specific truncating or missense variants in ATM are associated with increased breast cancer risk but this risk is not yet well estimated. The first part of my thesis project has consisted in characterizing inherited genetic factors modifying cancer risk in women participating in the prospective cohort CoF-AT (“cohorte de femmes apparentées à un enfant atteint d’A-T). In the second part of my work, I described the morphological and molecular features of ATM breast tumours with the aim to identify biomarkers allowing to distinguished ATM-associated tumours from sporadic tumours.Assessment of the contribution of inherited factors such as SNPs of telomere length on the risk of cancer was performed on 284 HetAT individuals and 174 non-HetAT individuals belonging to 103 A-T families. We showed that HetAT individuals have longer telomeres than their non-HetAT counterparts (p=0.0008). However, we found that telomere length was not associated with cancer risk in our study population. The SNP rs9257445 (ZNF311), which is associated with telomere length in HetAT participants, was not associated with cancer risk. Conversely, SNPs rs6060627 (BCL2L1) and rs2380205 (ANKRD16) modified cancer risk in HetAT and non-HetAT women.Pathology review of 41 ATM-associated breast tumours revealed that these tumours mostly belonged to luminal B molecular subtype. The molecular characterization of 23 ATM-associated tumours did not revealed the BRCAness profile associated with Large-Scale State Transitions. However, we found that ATM tumours were mostly tetraploïd and observed loss of heterozygosity at 11q22-23 in the majority of the tumours and loss of ATM wild type allele. Moreover, copy number losses at loci 13q14.11-q14.3, 21p11.2-p11.1 and 22q11.23 appeared to be specific of ATM tumours.Altogether, this project allowed to better characterize the genetic background of the CoF-AT participants and to highlight biomarkers of ATM breast tumours
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Albiges-Sauvin, Laurence. "Caractérisation des Carcinomes Papillaires du Rein". Thesis, Paris 11, 2013. http://www.theses.fr/2013PA11T070.
Abstract (sommario):
Les Carcinomes Papillaires du Rein (pRCC) représentent la seconde forme histologique de cancers du rein . Ils correspondent à une entité hétérogène de tumeurs subdivisées en type I et type II sur leurs caractéristiques anatomopathologiques. Leur pronostic au stade métastatique est inferieur à celui des carcinomes à cellules claires. Les caractéristiques biologiques des pRCC sont mal connues et n’ont pas permis de développer jusqu'à ce jour de thérapeutiques spécifiques.Ce travail propose, en première partie, une synthèse des données disponibles biologiques, anatomo-pathologiques, thérapeutiques et pronostiques des pRCC. Cette synthèse a fait l’objet d’une publication. ( Albiges et al. The Oncologist 2012)Le second volet est dédié à l’analyse de la place du proto-oncogène MET au sein des pRCC de type I et II et plus particulièrement les différentes modalités d’activation de ce gène. Cette analyse (i) caractérise les anomalies quantitatives de l’ADN du gène MET (CGH array pour les pRCC de type II et CGMA pour les pRCC de type I) et leur corrélation au niveau d’expression génique; (ii) recherche l’existence de mutations activatrices du domaine tyrosine kinase par séquençage du gène MET chez les pRCC de type I; et (iii) analyse également les niveaux d’expression du ligand et des co-activateurs de ce récepteur MET. Ces résultats sont en cours de publication (Albiges et al. Clinical Cancer Research)Le troisième et dernier volet de ce travail vise à identifier des pistes biologiques propres aux pRCC par l’analyses de sous groupes distinguable en termes de profils d’expression génique et surtout par l’analyses des anomalies de l’ADN identifiées par CGH array des pRCC de type II, couplées aux données de transcriptomePapillary renal cell carcinomas (pRCC) are the second most common form of Renal Carcinomas and belongs to the non clear cell carcinomas family. This tumour type is an heterogeneous group of tumours usually subdivided in type I and type II according to pathological features. The prognosis of pRCC in the metastatic setting is worse to clear cell carcinoma’s prognosis. Biological characteristics of pRCC are poorly known and did not allow the development of specific targeted therapies.This work first presents a synthesis of published data regarding biology, pathology, therapeutics and prognosis of pRCC. This review has been published. (Albiges et al. The Oncologist 2012)Second part is dedicated to the analysis of MET proto-oncogene across pRCC. The main focus is to assess MET activation drivers. This analysis (i) characterises MET gene DNA copy number alterations (CGH array for type II pRCC and CGMA approach for Type I pRCC) and their correlation with gene expression profiling; (ii) assess activating mutations within the tyrosine kinase of MET gene in the type I pRCC; and (iii) investigate expression level of ligand and co-activators of MET receptor. This analysis is under publication. (Albiges et al. Clinical Cancer Research)Third and last part of this work aims at identifing new biological pathway specific to pRCC using clustering of gene expression profiling and DNA abnormalities assessed by CGHarray inthe type II pRCC subtypes with matching gene expression data
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Aghion, Joël. "Le virus polyome et les cellules de carcinome embryonnaire murin : expression et réplication virales en fonction de l'état de différenciation". Paris 6, 1986. http://www.theses.fr/1986PA066003.
Abstract (sommario):
L’étude montre que l'expression des gènes viraux précoce est bloquée dans ces cellules mais que la réplication et l'expression des gènes tardifs sont possibles. La nature du blocage de l'expression précoce, ainsi que celle du mécanisme de la réplication sont analysées grâce a des mutants du virus et a des hybrides somatiques: cellules de carcinome embryonnaire-cellules thymiques.
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Huet, Tiphaine. "Exploitation de la relation structure-fonction du récepteur nucléaire de la vitamine D pour l’élucidation des mécanismes de la signalisation de la vitamine D". Strasbourg, 2010. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2010/HUET_Tiphaine_2010.pdf.
Abstract (sommario):
L’expression de l’information génétique est régulée par des facteurs de transcription. Parmi ces facteurs, le récepteur de la vitamine D (VDR) appartient à la famille des récepteurs nucléaires, activables par la fixation d’un ligand. La forme active de la vitamine D, le Calcitriol, est le ligand naturel du VDR et est impliqué dans de nombreuses fonctions biologiques telles que l’homéostasie du calcium et du phosphate, l’inflammation, la différenciation et la prolifération cellulaires et l’apoptose. Cependant, ses actions intrinsèques génomiques s’accompagnent d’effets hypercalcémiques non-génomiques qui limitent ses applications thérapeutiques. Dans l’objectif de dissocier les actions anti-tumorales du Calcitriol de ses effets hypercalcémiques pour des applications thérapeutiques, le challenge consiste à différencier précisément les acteurs de la voie non-génomique de ceux de la voie génomique. Précédemment, le résidu Leu337 du VDR de poisson-zèbre a été identifié comme jouant un rôle majeur dans l’adaptabilité du domaine de fixation du ligand. Une étude classique de mutagenèse a mis en évidence un résultat surprenant : le mutant VDR Leu337His abolit l’activité génomique du VDR en présence du Calcitriol mais présente une activité transcriptionnelle identique au récepteur sauvage en présence du ligand synthétique à double chaîne latérale Gemini. Mon travail de thèse a consisté à comprendre les bases structurales de cette sélectivité. Les résultats présentés montrent que tout comme les VDR sauvages humain et du poisson-zèbre, les VDR mutés de ces deux espèces se comportent de manière similaire en présence des ligands Calcitriol et Gemini en termes d’affinités de liaison et de transactivation. L’étude structurale a mis en évidence une interaction cruciale pour la stabilisation du ligand naturel. En revanche, la mutation Leu337His a un effet silencieux en présence du Gemini et de deux analogues du Gemini que nous avons étudiés. De plus, les résultats structuraux révèlent que les ligands à deux chaînes latérales sont moins sensibles aux modifications affectant le réseau de contacts entre les résidus de la poche et le ligand. Mes travaux de thèse ont permis d’établir les bases structurales et moléculaires pour la création d’un modèle animal original (souris génétiquement modifiée exprimant le VDR muté) qui permettra d’éteindre ou d’allumer le VDR nucléaire selon la présence de Calcitriol ou de Gemini, et ainsi de dissocier la voie génomique de la voie nongénomique induite par le Calcitriol. Ce travail de thèse s’inscrit dans une approche pluridisciplinaire, allant de l’atome à l’organisme et l’intégration de l’ensemble des données in vivo permettra une meilleure compréhension de la signalisation induite par l’hormone Calcitriol et le développement de nouveaux traitements hautement spécifiquesGenetic expression is regulated by transcriptional factors. Among them, the Vitamin D receptor (VDR) belongs to the superfamily of nuclear receptors which adopt their active conformation upon ligand binding. The active form of Vitamin D, Calcitriol is the natural ligand of VDR and plays important roles in several biological functions such as calcium and phosphate homeostasis, inflammation, cell differentiation and proliferation and apoptosis. However, its intrinsic genomic actions are accompanied by hypercalemic nongenomic effects which limit the use of Calcitriol in therapeutic treatments. To further dissociate the antitumor actions of Calcitriol from its hypercalcemic effects, the challenge is to decipher the mechanisms involved in the non-genomic pathway from those involved in the genomic one. Previously, we identified the Leu337 of zebrafish VDR as a key residue in the adaptability of the ligand binding domain. Then, a classical mutagenesis study stressed a surprising finding : the VDR Leu337His abolishes the genomic activity of VDR in presence of Calcitriol but not in presence of the synthetic double-chained Gemini ligand. The results of my thesis confirm that as for the wild-type human and zebrafish VDRs, both zebrafish VDR Leu337His and human VDR Leu309His behave similarly in presence of Calcitriol and Gemini in terms of ligand binding and transactivation. The structural study conducted in parallel emphasizes a crucial interaction for the stabilization of Calcitriol. In sharp contrast, the mutation Leu337His has a neutral incidence on the stabilization of Gemini and the two Gemini derivatives studied. Moreover, the structural findings reveal that double-chained ligands are less sensitive to structural modifications targeting the network of ligand/residues interactions. This study relates the structural and molecular basis for the design of an original animal model (knock-in-mice expressing the corresponding mutation Leu337His) which will allows us to switch on/off the nuclear VDR following the presence of Calcitriol or Gemini, and to gain insight into the non-genomic pathway induced by Calcitriol. My work enrolls a multi-disciplinary approach, from atomic structure to the organism and the integration of the in vivo data will provide us with a better understanding of the Calcitriol signalization and with the development of highly specific new treatments
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Israel, Nicole [Verfasser], Katharina [Akademischer Betreuer] Riedel, Ulrike [Akademischer Betreuer] Seifert, Katharina [Gutachter] Riedel, Ulrike [Gutachter] Seifert e Luca [Gutachter] Simeoni. "The role of the immunoproteasome during Toxoplasma gondii infection and the characterization of SHP2D61Y gain-of-function mutation in T cells / Nicole Israel ; Gutachter: Katharina Riedel, Ulrike Seifert, Luca Simeoni ; Katharina Riedel, Ulrike Seifert". Greifswald : Universität Greifswald, 2020. http://d-nb.info/1206688408/34.
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Guénard, Sophie. "Fonction et dysfonction des systèmes d'efflux actif chez les souches cliniques de pseudomonas aeruginosa". Thesis, Besançon, 2013. http://www.theses.fr/2013BESA3003/document.
Abstract (sommario):
Chez P. aeruginosa, la surproduction constitutive du système MexXY/OprM s'accompagne d'une augmentation de larésistance aux aminosides, fluoroquinolones et à certaines (3-lactamines. La caractérisation des mécanismes génétiquesconduisant à la surproduction de cette pompe parmi une collection de 57 isolats cliniques non redondants a permisd'identifier 3 types de mutations affectant, soit le gène mexZ dont le produit réprime l'opéron mexXY (mutants agrZ,77,2%), soit les gènes parRS codant pour un système à deux composants (mutants agrWl, 8,8%) ou d'autres cibles dontl'inactivation perturbe la synthèse protéique et entraîne la surexpression du gène PA5471 dont le produit, ArmZ, est unanti-répresseur de MexZ (mutants agrWl,\4%). Si certaines populations de P. aeruginosa tendent à devenir plusrésistantes aux aminosides en surproduisant le système MexXY/OprM, d'autres évoluent paradoxalement vers unehypersensibilité aux p-lactamines sous l'effet de mutations inactivant MexAB-OprM (MexAB-). L'analyse d'unecollection de 275 souches isolées de 36 patients CF nous a permis d'identifier des souches MexAB- hypersensibles à laticarcilline (37%) et des souches MexAB- non hypersensibles en raison d'une surproduction de la B-lactamase AmpC(16%). Au total, 53% des isolats sont apparus déficients dans le système MexAB-OprM. L'étude de l'activité ou de laproduction de divers facteurs de virulence a indiqué que la perte de fonction de MexAB-OprM n'était pas associée àcelle de caractères de virulence. Au final, notre travail apporte un éclairage nouveau sur la capacité de P. aeruginosa àmoduler l'activité de ses pompes d'efflux pour s'adapter à diverses situations cliniquesPseudomonas aeruginosa is a nosocomial pathogen naturally resistant to many antibiotics thanks to numerous resistantmechanisms. Among them, overproduction of the MexXY/OprM efflux System leads to decrease significantly thesusceptibility of P. aeruginosa to aminoglycosides, fluoroquinolones and some p-lactams. Characterization of geneticmechanisms leading to overproduction of this pump from a collection of 57 non-redundant clinical isolates enable toidentified three types of mutations affecting either the gene mexZ whose product represses mexXY operon (agrZmutants, «=77. 2%), or genes parRS encoding a two component System (agrW2 mutants, w=8.8%) or other targetswhose inactivation disturbs protein synthesis and results in overexpression of the gene PA547I, whose product ArmZ isan anti-repressor of MexZ protein (agrWl mutants, n= 14%). If some populations of A aeruginosa are becoming moreresistant to aminoglycosides by overproducing MexXY/OprM system, others develop an hypersensitivity to P-lactamsas a resuit of mutations inactivating MexAB-OprM efflux system (MexAB-). The analysis of 275 strains isolated from36 CF patients allowed us to identify MexAB- strains hypersensitive to ticarcillin (37%) and non-MexABhypersensitive strains due to an overproduction of the p-lactamase AmpC (16%). In fine, 53% of the isolates appeareddeficient in MexAB-OprM. The study of various virulence factors indicated that the loss of function of MexAB-OprMin P. aeruginosa was not associated with virulence of the strains. To conclude, our work highlight on the ability ofP. aeruginosa to modulate the activity of its efflux pumps in order to adapt to various clinical environments
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Reilly, Madeline Louise. "Identification and characterisation of loss of function mutations in KIF14 leading to syndromic renal hypodysplasia". Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCC266.
Abstract (sommario):
Des mutations dans le gène KIF14 ont été précédemment identifiées dans des individus présentant soit une microcéphalie isolée soit une forme syndromique développementale et létale associant une microcéphalie sévère à une hypodysplasie rénale (RHD). Ce dernier phénotype a été considéré comme une ciliopathie, un semble de maladies génétiques liées à des défauts du cil primaire, un organite avec un rôle important dans des voies de signalisation et présent à la surface de nombreuses cellules quiescentes. Le gène KIF14 code une kinésine mitotique qui joue un rôle clé pendant la cytokinèse mais qui n’a pas été décrite comme protéine ciliaire auparavant. Nous avons analysé les effets des mutations de KIF14 retrouvées chez des fœtus de quatre familles présentant la forme syndromique. Nos analyses fonctionnelles montrent que les variations identifiées ont un impact sévère sur l'activité de la protéine et correspondent probablement à des mutations de perte de fonction (LOF). Notre analyse des tissus rénaux de fœtus humains a montré une accumulation des ‘midbodies’ positifs pour KIF14 dans la lumière des bourgeons urétéraux, mettant en évidence des similarités entre les événements mitotiques au début du développement cérébral et rénal. En analysant une lignée de poisson zèbre présentant une mutation non-sens précoce dans le gène kif14 on a pu montrer un rôle conservé pour cette kinésine mitotique dans le développement rénal et cérébral. De manière intéressante, on a également observé des phénotypes associés à une ciliopathie chez les embryons mutants, suggérant encore une fois que kif14 pourrait jouer un rôle au cil. Cependant, nos analyses in vitro et in vivo ont finalement démontré que KIF14 n’a pas de rôle direct dans la ciliogenèse et que la perte de kif14 chez le poisson zèbre phénocopie une ciliopathie par l’accumulation de cellules mitotiques et non ciliées dans les tissus ciliés. Nos résultats montrent que les mutations dans le gène KIF14 entraînent un syndrome sévère associant une microcéphalie et RHD grâce à une fonction conservée dans l’abscission lors du développement du rein et du cerveauMutations in KIF14 were previously shown to lead to either isolated microcephaly or to a developmental and lethal syndromic form associating severe microcephaly with renal hypodysplasia (RHD). The latter phenotype was considered reminiscent of a ciliopathy, relating to defects of the primary cilium, a signalling organelle present on the surface of many quiescent cells. KIF14 encodes a mitotic kinesin which plays a key role at the midbody during cytokinesis, and was not previously shown to be involved in cilia-related functions. Here, we have analysed four families with foetuses presenting with the syndromic form and harbouring variations in KIF14. Our functional analyses show that the identified variations severely impact the activity of KIF14 and likely correspond to loss-of-function (LOF) mutations. 0ur analysis on human foetal kidney tissues revealed the accumulation of KIF14-positive midbody remnants in the lumen of ureteric bud tips, highlighting similarities between mitotic events during early brain and kidney development. Subsequently, analysis of a kif14 mutant zebrafish line showed a conserved role for this mitotic kinesin. Interestingly, additional ciliopathy-associated phenotypes were also present in these mutant embryos, supporting a potential novel role for kif14 at cilia. However, our in vitro and in vivo analyses ultimately indicated that KIF14 does not have a direct role in ciliogenesis and that kif14 LOF in zebrafish phenocopies ciliopathies through an accumulation of mitotic, non-ciliated cells in ciliated tissues. Altogether, our results demonstrate that KIF14 mutations result in a severe syndrome associating microcephaly and RHD through a conserved function in abscission during kidney and brain development
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Chevallet, Mireille. "Étude du rôle structural et fonctionnel de la sous-unité NUO I de la NADH:ubiquinone oxydoréductase Rhodobacter capsulatus". Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015), 1997. http://www.theses.fr/1997GRE10181.
Abstract (sommario):
La nadh ubiquinone oxydoreductase ou complexe i est le premier element de la chaine respiratoire mitochondriale. Cette enzyme, dont le deficit est associe a plusieurs pathologies humaines, est un element essentiel du metabolisme energetique. Sa taille, sa localisation, sa complexite, le fait qu'elle soit codee a la fois par le genome mitochondrial et le genome nucleaire rendent son etude difficile. Pour ces raisons un modele bacterien a ete etudie : la nadh oxydoreductase de rhodobacter capsulatus qui ne contient que 14 sous-unites. La sous-unite nuo i du complexe i bacterien est remarquablement conservee en regard de son homologue mitochondrial de 23 kda (tyky), en particulier au niveau de motifs de cysteines susceptibles d'organiser 2 centres 4fe4s. Cette sous-unite est donc potentiellement impliquee dans le transfert des electrons. Le role de cette sous-unite a ete etudie par mutagenese dirigee. Le mutant de deletion du gene nuoi, (nuoi) est incapable de respirer en utilisant le nadh comme substrat ainsi que de se developper a la lumiere en anaerobiose stricte. Aucun des centres fe-s attribues au complexe i n'est visible en resonance paramagnetique electronique (rpe) et une etude immunologique montre que seule la partie membranaire du complexe i est presente dans les membranes de ce mutant. Differents mutants ponctuels ont ete construits. Le mutant c74s presente un phenotype proche de celui du mutant nuoi, mais on retrouve 20% du contenu normal en sous-unite nuo i dans ses membranes. Les mutants c67s et c106s presentent des phenotypes peu alteres, l'activite de leur complexe i est peu diminue mais les signaux rpe du centre n2 sont modifies. La sous-unite nuo i apparait indispensable pour l'assemblage du complexe i, elle semble jouer un role de charniere entre le domaine membranaire et le domaine peripherique du complexe i. L'etude rpe des mutants c106s et c67s permet d'envisager la presence du centre n2 sur la sous-unite nuo i.
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Gil, Marie-Ève. "Analyse d'équations intégro-différentielles et d'EDP non locales issues de la modélisation de dynamiques adaptatives". Thesis, Aix-Marseille, 2018. http://www.theses.fr/2018AIXM0346.
Abstract (sommario):
Ce manuscrit de thèse porte sur l’analyse mathématique de modèles intégro-différentiels issus de la génétique des populations. Les deux modèles étudiés sont des équations de réaction-dispersion de type ∂tp(t,m) = UD[p](t,m) + f[p](t,m). Ils décrivent la dynamique de la distribution de la fitness (ou valeur sélective) dans une population asexuée sous l’effet des mutations et de la sélection représentées respectivement par les termes non locaux UD[p](t,m) et par f[p](t,m). La différence entre les deux modèles se situe au niveau du terme de mutation. En effet, dans le premier modèle, les effets des mutations sur la fitness ne dépendent pas de la fitness du parent, cela se traduit donc par un terme de convolution classique : D[p](t,m) =RR J(m−y)p(t,y)dy−p(t,m). Lorsqu’une mutation a lieu, la fonction J(m−y) représente la densité de probabilité pour un individu de fitness y d’avoir un descendant de fitness m. Le taux de mutation est donné par la constante U. Dans le second modèle, les effets des mutations sur la fitness dépendent aussi de la fitness du parent. Dans ce cas, un individu de fitness y a un descendant de fitness m avec la densité de probabilité Jy(m−y). Ce type de dépendance apparaît naturellement lorsque l’on suppose qu’il existe une fitness optimale (ou encore un optimum phénotypique). Pour chacun des deux modèles, nous établissons dans un premier temps des résultats d’existence et d’unicité ainsi que des propriétés de décroissance de la solution. Cette décroissance permet de définir la fonction génératrice des cumulants (CGF) associée à la distribution de fitness. La CGF est la solution d’une équation de transport non locale. Pour le premier modèle, l’étude de cette équation permet d’obtenir une solution analytique et donc d’obtenir une description complète de la distribution p(t,m) via ses moments. Nous étudions ensuite les états stationnaires pour chacun des deux modèles, et établissons des conditions suffisantes pour l’existence et la non-existence de phénomènes de concentration, correspondant à une accumulation d’individus de phénotypes optimaux. Nos résultats sont comparés à des sorties de modèles stochastiques individu-centrés représentant le même type de dynamiques évolutivesThis manuscript is devoted to the mathematical analysis of integro-differential models from population genetics. Both models are reaction-dispersion equations of the form ∂tp(t,m) = UD[p](t,m)+ f[p](t,m). They describe the dynamics of fitness distribution in an asexual population under the effect of mutation and selection. These two processes are represented by the nonlocal terms UD[p](t,m) and by f[p](t,m) respectively. The difference between the models rests on the mutation term. Indeed, in the first model, the mutation effects on fitness do not depend on the fitness of the parent. Thus, the mutation term is a standard convolution product: D[p](t,m) =RR J(m−y)p(t,y)dy −p(t,m). When a mutation occurs, the function J(m − y) represents the density of probability for an individual with fitness y to have an offspring with fitness m. The mutation rate is given by the constant U. In the second model, the mutation effects on fitness depend on the fitness of the parent. In this case, an individual with fitness y has an offspring with fitness m with a probability density Jy(m−y). This type of dependence naturally arises when the existence of an optimal fitness (or a phenotypic optimum) is assumed. For both models, we first establish existence and uniqueness results as well as decay properties of the solution. The decay property allows us to define the cumulant generating function (CGF). The CGF obeys a nonlocal transport equation. In the first model, we compute the analytical solution of this transport equation and thus, we obtain a complete description of the distribution p(t,m) through its moments. Then, we study the stationary states for both models, and establish sufficient conditions for the existence and non-existence of a concentration phenomenon corresponding to an accumulation of individuals with best possible phenotype. The results are compared to the results of stochastic individual based models which represent the same kind of evolutionary dynamics
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Zuniga, Dania. "Structural and functional studies of a human potassium channel, Kir2.1. Mechanism and consequences of mutations". Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2022. http://www.theses.fr/2022SORUS336.
Abstract (sommario):
La capacité d'une cellule à faciliter le mouvement sélectif et rapide des ions et des petites molécules à travers la membrane plasmique est un processus biologique indispensable. Les canaux potassiques à rectification entrante (Kir) sont des protéines membranaires intégrales qui fournissent des voies sélectives aux ions K+ à travers la membrane cellulaire autrement imperméable, le long des gradients électrochimiques. Les canaux Kir permettent le passage des ions K+ dans les deux sens et régulent diverses fonctions chez les humains, notamment la fréquence cardiaque, le tonus vasculaire, la sécrétion d'insuline et l'équilibre salin et hydrique. L'importance physiologique des canaux Kir est mise en évidence par le fait que des défauts génétiquement héréditaires de ces gènes entraînent des maladies humaines (canalopathies). Nous nous intéressons particulièrement au syndrome d'Andersen, où des mutations du gène KCNJ2 codant pour la protéine Kir2.1 sont directement impliquées. Le syndrome d'Andersen (AS) est une maladie rare caractérisée par des arythmies cardiaques, des dysmorphies multiples et des paralysies périodiques. Le traitement disponible pour les patients atteints d’AS est empirique plutôt que rationnel en raison de la manque de connaissance de ce canal Kir2.1. Cette thèse visait à identifier les différences entre le canal Kir2.1 de type sauvage et deux canaux mutants causant l’AS afin de trouver des liens entre la structure et la fonction du Kir2.1 humain en utilisant une combinaison d'approches biochimiques, structurelles et fonctionnelles. Dans cette étude, nous avons exprimé le canal Kir2.1 humain dans la levure et l'avons purifié dans un détergent. Nous avons caractérisé l'interaction entre Kir2.1 et l'activateur essentiel PIP2, résolu par cryo-EM la première structure d'un canal Kir humain et exploré la reconstitution dans des systèmes modèles sans détergent comme les amphipols et les nanodisques. Les résultats de cette étude fourniront une base structurale et fonctionnelle pour mieux comprendre les mécanismes impliqués dans les canaux Kir et les effets de leurs mutations. Ce manuscrit est divisé en trois parties. La première partie présente les canaux Kir et l'état de l'art. La deuxième partie porte sur la caractérisation du canal potassique humain Kir2.1, la détermination de sa structure par cryo-EM et l'impact des mutations sur sa structure et sa fonction. La troisième partie présente deux mutations dans l'homologue bactérien KirBac3.1, qui partage des caractéristiques structurelles avec Kir2.1, pour donner un aperçu du mécanisme d’ouverture et fermeture des canaux KirThe ability of a cell to facilitate the selective and rapid movement of ions and small molecules across the plasma membrane is one of the most fundamental biological processes. Inward rectifier potassium (Kir) channels are integral membrane proteins that provide K+-selective pathways across the otherwise impermeable cell membrane along the electrochemical gradients. Kir channels support the flow of K+ ions into and out of the cell and regulate various functions in the human body, including heart rate, vascular tone, insulin secretion, and salt and fluid balance. The physiological significance of Kir channels is highlighted by the fact that genetically-inherited defects in these genes result in human diseases (channelopathies). We are particularly interested in Andersen’s syndrome, where mutations in the KCNJ2 gene coding for Kir2.1 protein are directly involved. Andersen’s syndrome (AS) is a rare disease characterized by cardiac arrhythmias, dysmorphic features, and periodic paralysis. The available treatment for AS patients is empirical rather than rational due to the lack of knowledge of this Kir2.1 channel. This thesis aimed to identify the differences between the wild-type Kir2.1 channel and two mutant AS-causing channels to find links between the structure and the function of human Kir2.1 using a combination of biochemical, structural, and functional approaches. In this study, we recombinantly expressed the human Kir2.1 channel in yeast and purified it in detergent. We characterized the interaction between Kir2.1 and the essential activator PIP2, solved the first human Kir channel structure by cryo-EM, and explored reconstitution in detergent-free systems like amphipols and nanodiscs. The findings of this study will provide a structural and functional base to understand better the mechanisms involved in Kir channels and the effects of their mutations. This manuscript is divided into three parts. The first part introduces Kir channels and state-of-the-art. The second part focuses on the characterization of the human potassium channel Kir2.1, the determination of its structure by cryo-EM, and the impact of mutations on its structure and function. The third part presents two mutations in the bacterial homolog KirBac3.1, which shares structural features with Kir2.1, to provide insight into the gating mechanism of Kir channels
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Vitellius, Géraldine. "Implication du récepteur des glucocorticoïdes en physiopathologie humaine". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS256.
Abstract (sommario):
Les glucocorticoïdes (GC), généralement sécrétés par le cortex surrénalien, exercent de très nombreuses fonctions dans l’organisme, via leur liaison au récepteur des glucocorticoïdes (GR). Les rares mutations inactivatrices du GR déjà décrites, sont responsables d’un syndrome de résistance aux GC et peuvent conduire à une hypertension artérielle (HTA), une hyperplasie surrénalienne (HBS), un hirsutisme et une obésité. Dans ce travail, nous avons caractérisé fonctionnellement 13 variants hétérozygotes du GR (expression, transactivation, localisation subcellulaire,...). Six variants du GR, découverts par séquençage à haut débit (NGS) ne sont pas pathogènes alors que 7 mutations hétérozygotes originales délétères ont été identifiées dans le cadre du protocole hospitalier de recherche clinique (Muta-GR). Ce PHRC a permis de préciser une prévalence à 5% de mutations inactivatrices du GR dans une cohorte de 100 patients avec HBS associée à une HTA et/ou un hypercortisolisme biologique sans signe clinique de Cushing.Une haploinsuffisance du GR, démontrée par la diminution d’induction par la déxamethasone du gène cible FKBP5, a été mise en évidence dans les fibroblastes cutanés de certains patients porteurs de mutations inactivatrices du GR. Ces patients présentent souvent un hypercorticisme avec hypokaliémie, aldostérone et rénine basse, signant un pseudohyperaldostéronisme. Nous avons démontré que le gène HSD11B2 codant pour l’enzyme 11β-HSD2, assurant l’inactivation des GC, est une cible directe du GR comme démontré par transfection transitoire de gène-rapporteur, RT-qPCR, LC/MSMS et ChIP. L’établissement des modèles de knock-in de mutations GR par stratégie Crispr/cas9 dans des lignées cellulaires préadipocytaires ou corticosurrénaliennes humaines s’est soldé par un échec. Ce travail devrait faciliter la sélection des patients chez qui la recherche de mutation inactivatrice du GR doit être faite et invite à un suivi régulier de ces patientsGlucocorticoids (GC) regulate many essential biological functions by activating the glucocorticoid receptor (GR). GR loss-of function mutations are responsible for GC resistance syndrome, often associated with high blood pressure, hirsutism, bilateral adrenal hyperplasia (BAH) and obesity. Herein, functional characterization of 13 GR variants is presented (expression and binding studies, transactivation assays, subcellular localization) 6 variants were discovered with next-generating sequencing and had no functional impact on GR signaling while 7 GR loss-of-function mutations were mainly discovered during the National Clinical Hospital Research Program, Muta-GR. This PHRC discloses a 5% prevalence of GR loss-of-function mutations in a cohort of 100 patients with BAH, biological hypercortisolism and/or hypertension without Cushing signs. A GR haploinsuffisiency was demonstrated by a reduced dexamethasone-induced FKBP5 expression in skin fibroblasts of some patients harbouring GR loss-of-function mutations. These patients often presented with hypercorticism, hypokalemia, low renin and aldosterone levels, consistent with a pseudohypermineralocorticism. We showed that HSD11B2 encoding the 11β-HSD2 enzyme inactivating GC, is a direct GR target gene by transient transfection of reporter gene, RT-qPCR, LC/MSMS and ChIP. We failed to introduce GR loss-of-function mutations in human preadipocytes and adrenocortical cells by Crispr/Cas 9 technology. This work should facilitate selection of patients in whom GR mutation may be search, enabling an appropriate follow-up
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Chollat-Namy, Marie. "Effet de l’inactivation du gène suppresseur de tumeur p53 et de sa réactivation pharmacologique sur la réponse cytotoxique anti-tumorale The Pharmalogical Reactivation of p53 Function Improves Breast Tumor Cell Lysis by Granzyme B and NK Cells Through Induction of Autophagy Mutant P53 Gain of Function Stimulates PD-L1 Expression". Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASL032.
Abstract (sommario):
Le système immunitaire joue un rôle important dans le contrôle et l'éradication du cancer. Des acteurs majeurs de la réponse immune antitumorale sont les cellules tueuses naturelles (ou cellules NK) et les lymphocytes T cytotoxiques (ou CTL), capable de reconnaitre et détruire des cellules tumorales par l’exocytose de perforine et de granzymes contenus dans leur granule cytotoxique. Il a été montré au sein du laboratoire l’implication de la protéine suppresseur de tumeur p53 dans cette voie apoptotique. Or, plus de 50% des tumeurs humaines présentent des mutations inactivatrices de p53 ce qui favorise le développement tumoral. De ce fait, l’inactivation fréquente de p53 dans les tumeurs humaines pourrait leur permettre d’échapper à la destruction par les CTL et les cellules NK.Dans ce contexte, mes travaux de thèse ont montré que la réactivation pharmacologique de la fonction de p53 sauvage dans des cellules tumorales exprimant une p53 mutée augmente leur susceptibilité à la lyse induite par les cellules NK grâce à l’induction d’un processus d’autophagie. De plus, j’ai cherché à déterminer le lien entre les mutations de p53 et l’expression à la surface des cellules tumorales de PD-L1 qui empêche l’activation optimale des cellules cytotoxiques et conduit à leur épuisement. Mes travaux actuels suggèrent que l’expression de p53 mutantes induits une surexpression de PD-L1 à la surface des cellules cancéreuses. Les mécanismes expliquant ce phénomène sont en cours d’étudesImmune system plays an important role in the control and destruction of cancer cells. The major effectors of antitumor immune response are Natural Killer (NK) cells and the cytotoxic T lymphocytes, which recognize et destroy tumor cells by exocytosis of perforin and granzymes contained in cytotoxic granules. It has been previously shown in the laboratory that the tumor suppressor p53 plays an important role in this apoptotic pathway. However more than 50% of human tumors have p53 inactivating mutations which favor tumor development. Consequently, frequent p53 inactivation in human tumor could enable them to escape from destruction by cytotoxic immune cells. In this context, my thesis work has shown that the pharmacological reactivation of wild type p53 function in cancer cells expressing a mutated p53 increased their susceptibility to NK cell-mediated apoptosis cells through the induction of an autophagic process. Moreover, I tried to determine the link between p53 mutations and the expression of the immune checkpoint ligand PD-L1 which prevent efficient activation of cytotoxic cells and promote immune cells exhaustion. My work suggests that the expression of p53 mutants promotes an the expression of PD-L1 at the cancer cell surface. The study of the underlying mechanisms is still in progress