Tesi sul tema "Modèles in cellulo et in vivo"
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Teixeira, Renata Cunha. "Modèles in vitro et in vivo de leucémies aiguës humaines avec les gènes de fusion de MLL". Master's thesis, Université Laval, 2014. http://hdl.handle.net/20.500.11794/25471.
Abstract (sommario):
Les fusions de MLL peuvent générer trois types de leucémies aiguës (LLA-B, LMA et LLA-T). Les cellules souches/progénitrices de sang de cordon humain purifiées par une méthode de sélection négative ont été infectées par un rétrovirus contrôle exprimant la EGFP ou un rétrovirus exprimant un gène de fusion de MLL et la EGFP, avant d’être injectées dans le fémur de souris immunodéficientes. Après 20 semaines, les souris ont été sacrifiées et les organes hématopoïétiques ont été analysés par FACS. MLL-ENL a généré exclusivement des LLA-B, MLL-ELL des LLA-B et LMA, et MLL-AF9 des LLA-B et mixte. Il semble que certains partenaires peuvent jouer un rôle important dans le phénotype et que le microenvironnement murin peut favoriser le phénotype LLA-B. Cette étude peut aider à comprendre le rôle instructif des MLL-ENL, MLL-ELL et MLL-AF9 sur le phénotype leucémique et leur capacité à initier la transformation des cellules normales en cellules leucémiques.MLL fusion genes may generate three different types of acute leukemia (B-ALL, AML and T-ALL). Purified human cord blood cells by negative selection technique (Lin-CB) and having CD34+ > 70% were transduced by control retrovirus expressing the EGFP or other retrovirus expressing an MLL fusion gene and the EGFP, and then injected into the immune-deficient NSG mouse femur to test the leukemogenic potential. After 20 weeks, the mice were sacrificed and organs were analysed by FACS. MLL-ENL exclusively produced B-ALL, MLL-ELL B-ALL and AML, and MLL-AF9 B-ALL and mixed. It seems that some MLL partner genes may play an important role in phenotype, and the murine microenvironment of our in vivo model may promote the B-ALL phenotype. This study may help understand the instructive role of MLL-ENL, MLL-ELL and MLL-AF9 fusion genes in leukemic phenotype and their ability to induce the transformation of normal hematopoietic stem/progenitor cells into leukemic cells.
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Toutain, Hervé. "Développement et caractérisation de modèles expérimentaux pour l'étude ex-vivo et in-vitro de la cellule tubulaire proximale de rein de lapin". Rouen, 1989. http://www.theses.fr/1989ROUES036.
Abstract (sommario):
Une suspension de cellules tubulaires proximales de rein de lapin est isolée par une nouvelle méthode qui ne fait pas intervenir d'enzymes protéolytiques. Ces cellules, après une caractérisation biochimique, morphologique, et métabolique, sont séparées en deux populations hautement purifiées par une technique d'électrophorèse ou flux libre en veine liquide. Présentation d'un modèle de culture primaire de cellules tubulaires proximales de rein de lapin
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Bassaglia, Yann. "Les cellules satellites musculaires dans deux modèles de myogénèse ("in vitro" et "in vivo") : différences entre un muscle lent et un muscle rapide". Paris 12, 1991. http://www.theses.fr/1991PA120031.
Abstract (sommario):
Deux modeles myogeniques complementaires sont presentes. Ils reposent sur l'existence des cellules satellites (cellules myogeniques mononucleees du muscle adulte). La mise en culture in vitro des cellules satellites, apres extraction a la pronase, fournit des cultures primaires myogeniques a 90 pour cent. Par dosage immunoenzymatique, il est demontre que les cellules satellites en culture ne produisent du afgf que pendant leur proliferation. Les myotubes se couvrent d'une basale, observable en microscopie electronique et contenant de la laminine. Une analyse clonale permet de deceler des differences entre les proprietes de proliferation et de fusion des cellules satellites issues de l'extensor digitorum longus (edl, muscle rapide) et du soleus (sol, muscle lent). Un modele de regeneration apres ecrasement total du muscle est presente. L'utilisation de deux marqueurs, l'un myogenique et intracellulaire (desmine), l'autre extracellulaire (laminine), met en evidence les differences de comportement myolytique et de capacites regeneratives des deux muscles edl et sol. La myolyse du sol est rapide, importante, et heterogene. Les basales sont fortement remaniees. La reconstruction musculaire commence rapidement, preferentiellement dans les zones ou la basale est conservee. Le processus de regeneration stagne vers 16 jours. Le muscle regenere montre une fibrose importante. Dans l'edl, les basales sont conservees lors de la myolyse. La reconstruction, plus lente, progresse regulierement de facon centripete. Elle a lieu a l'interieur des anciennes basales. Le muscle regenere retrouve une structure quasi-normale des 16 jours; cette structure semble stable dans le temps. Ce modele souligne l'importance probable du turn-over des basales. La comparaison de ces deux modeles plaide pour l'existence de populations de cellules satellites aux proprietes differentes dans l'edl et dans le sol
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Passeri, Elodie. "Use of nanoliposomes rich in omega-3 for the prevention of neurodegenerative diseases : bioavailability in vivo and in cortical neurons". Electronic Thesis or Diss., Université de Lorraine, 2021. https://docnum.univ-lorraine.fr/ulprive/DDOC_T_2021_0337_PASSERI.pdf.
Abstract (sommario):
La maladie d’Alzheimer (MA) est la cause d’affection neurodégénérative la plus fréquente et représente un enjeu majeur de santé publique au niveau mondial. De nombreuses stratégies thérapeutiques sont explorées depuis plusieurs décennies, néanmoins, il n'existe toujours aucun traitement curatif et la priorité reste la prévention. Dans ce travail de thèse, nous nous sommes focalisés sur l’approche préventive basée sur les lipides, en particulier les acides gras polyinsaturés oméga-3 (AGPI n-3). Les AGPI n-3 jouent un rôle important dans le développement, le maintien et le fonctionnement du cerveau et ils ont fait l'objet d'un intérêt particulier dans la prévention des déficits cognitifs liés aux maladies neurodégénératives. L’objectif de ce travail est d’étudier la fonctionnalité et la biodisponibilité des nanoliposomes (NL) riches en AGPI n-3, afin d’évaluer leur potentiel neuroprotecteur pour développer de nouvelles stratégies préventives dans les maladies liées au vieillissement comme la MA. Pour ce faire, une technique d'extraction verte a été utilisée pour préparer des NL, provenant de ressources naturelles à partir de lécithine de saumon riche en AGPI n-3. Cette thèse repose sur trois parties. La première partie est consacrée à une revue bibliographique des nouvelles techniques pour faciliter l’accès des molécules au cerveau. Les NL montrent un rôle prometteur, ils sont capables d’améliorer le transport de molécules à travers la barrière hémato-encéphalique et atteindre les régions cérébrales ciblées. Dans la deuxième partie de ce travail, la biodisponibilité des NL riches en AGPI n-3 a été étudiée dans une culture primaire de cellules neuronales corticales d’embryons de rat et dans un modèle de souris. Cette étude montre pour la première fois la biodisponibilité cérébrale des NL riches en AGPI n-3 dans des modèles in vitro et in vivo. Et enfin, dans la troisième partie de cette thèse, les propriétés physico-chimiques et des mécanismes de transfert des NL ont été étudiés dans une culture primaire de neurones corticaux. Ces résultats apportent de nouvelles informations sur l'interaction entre les NL et les neurones et sont prometteurs quant à l'utilisation des NL riches en AGPI n-3, ouvrant de nouvelles possibilités dans le développement de stratégies thérapeutiques préventives et neuroprotectrices pour les maladies neurodégénératives telles que la MAAlzheimer's disease (AD) is the most common cause of neurodegenerative disease and represents a major public health issue worldwide. Many therapeutic strategies have been explored for several decades, however, there is still no curative treatment and the priority remains prevention. In this thesis work, we focused on the preventive approach based on lipids, in particular omega-3 polyunsaturated fatty acids (n-3 PUFAs). N-3 PUFAs play an important role in the development, maintenance and function of the brain, and they have been the subject of particular interest in the prevention of cognitive deficits associated with neurodegenerative diseases. The objective of this work is to study the functionality and bioavailability of nanoliposomes (NL) rich in n-3 PUFAs, in order to assess their neuroprotective potential to develop new preventive strategies in aging-related diseases such as AD. To do this, a green extraction technique was used to prepare NL, from natural resources from salmon lecithin rich in n-3 PUFA. This thesis is based on three parts. The first part is devoted to a bibliographical review of new techniques to facilitate the access of molecules to the brain. NL shows a promising role, being able to improve the transport of molecules across the blood-brain barrier and reach relevant brain regions. In the second part of this work, the bioavailability of NL rich in n-3 PUFA was studied in a primary culture of cortical neuronal cells from rat embryos and in a mouse model. This study shows for the first time the brain bioavailability of NL rich in n-3 PUFA in in vitro and in vivo models. Finally, in the third part of this thesis, the physicochemical properties and transfer mechanisms of NL were studied in a primary culture of cortical neurons. These results provide new information on the interaction between NL and neurons and are promising with regards to the use of NL rich in n-3 PUFA, opening up new possibilities in the development of preventive and neuroprotective therapeutic strategies for neurodegenerative diseases such as AD
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Diouani, Sara. "Implication de PiT1 dans l’apoptose induite par le TNF-α dans des modèles in vivo et in vitro". Thesis, Paris 5, 2013. http://www.theses.fr/2013PA05T036.
Abstract (sommario):
PiT1/SLC20A1 a été identifiée pour la première fois comme récepteur rétroviral, puis de nombreuses autres études réalisées in vitro ont permis de révéler ces différentes fonctions. PiT1 est notamment un transporteur de phosphate-sodium dépendant. Par le biais de cette activité de transporteur de phosphate inorganique (Pi), PiT1 est impliqué dans plusieurs processus cellulaires comme la minéralisation osseuse, la calcification vasculaire (dans certaines pathologies), et la réabsorption rénale et intestinale de Pi. Dans notre laboratoire, afin de mieux caractériser les fonctions physiologiques de PiT1, un Knock Out (KO) total pour cette protéine a été généré. Les souris présentent un phénotype létal embryonnaire et une atteinte hépatique. Au vu de ces résultats, d’autres études, réalisées dans le laboratoire, ont mis en évidence l’implication de PiT1 dans la prolifération et l’apoptose cellulaire. Ces fonctions nouvellement décrites sont spécifiques à PiT1 et indépendantes de sa fonction de transporteur de Pi.Les objectifs majeurs de mon travail de thèse ont consisté à mieux comprendre le rôle de PiT1 dans les mécanismes apoptotiques déclenchés par le TNF-α. Pour cela, j’ai étudié la cascade d’activation du TNF-α dans les cellules Hela exprimant de manière stable un shPiT1 ou un shScramble. En effet, mes résultats suggèrent que l’association de TRAF2 ; un élément clé de l’activation de la voie des MAPKs ; à PiT1 par le bisais de sa large boucle intracellulaire, permettrait la dissociation des kinases en amont de la voie des MAPKs, GCK (MAP4K) et MLK3 (MAP3K), induisant leur désactivation et ainsi la régulation négative de JNK. La désactivation de JNK induit à son tour à l’inhibition des caspases et donc la signalisation apoptotique. Par ailleurs, j’ai montré que la suractivation de JNK dans les cellules invalidées pour PiT1 corrèle avec la dissocition antérieur du complexe TRAF2-cellular Inhibitor of Apoptosis Proteins (cIAPs). Ainsi, le complexe pro-apoptotique formé de la caspase-8, la protéine FAS-Associated via Death Domaine (FADD) et du Receptor Interactinf Protein 1 (RIP1) était plus actif.Par ailleurs, la boucle PiT1 et la boucle PiT2 ; son homologue ; ont été échangées, permettant ainsi l’obtention des protéines chimères P2-BclP1 et P1-BclP2. Celles-ci représenteraient des outils intéressants pour mieux comprendre les mécanismes cellulaires engagés dans cette voie apoptotique. Enfin, le rôle de PiT1 dans l’apoptose induite par le TNF-α étudié dans des modèles cellulaires a été confirmé dans deux modèles murins faisant ainsi et pour la première fois un lien entre PiT1 et une pathologie inflammatoire, l’hépatite fulminante. Ces résultats montrent que l’absence de PiT1 sensibilise le foie à l’apoptose; à l’appui d’autres résultats ; PiT1 pourrait être considéré comme une cible thérapeutique dans des pathologies inflammatoires et cancéreusesPiT1/SLC20A1 was identified for the first time as retroviral receptor then phosphate inorganic-dependent sodium transporter activity. Through this more a function of phosphate inorganic (Pi) transporter, PiT1 is involved in multiple cellular processes such as bone mineralization, vascular calcification, renal and intestinal reabsorption of Pi. In our laboratory, a total mice Knock Out (KO) for this gene encoding for PiT1 was generated to characterize its physiological functions. The embryonic mice PiT1 KO have a lethal phenotype through liver damage. We have previously found that additional transport-independent functions. PiT1 is involeved in proliferation and in the regulation of tumour necrosis factor (TNF)-induced apoptosis. Modulated cells was mediated by an increased activation of c-Jun N-terminal Kinase (JNK).The aim of my study was to define the role of PiT1 in apoptotic mechanisms of TNF-α signaling. For that, I have studied the regulation cascade of TNF-α pathway in Hela cells expressing shPiT1 or shScramble. My results suggest that intra-cytoplasmic loop domain of PiT1 was interact with TRAF2 ; a key element in the MAPK pathway activation. Furthermore, we also have shown that TNF-induced association of two JNK upstream kinases (Germinal Centre Kinase (GCK or MAP4K) and Mixed Lineage Kinase 3 (MLK3 or MAP3K) to PiT1 suggesting that PiT1 inducing their deactivation and thus down-regulation of JNK. Furthermore, we have shown that JNK increased signalling in PiT1-depleted cells correlates with the earlier dissociation of TRAF2 – cellular Inhibitor of Apoptosis Proteins (cIAPs) complexes. Thus, the apoptotic complex formed by caspase-8, Fas-Associated protein via Death Domain (FADD) and Receptor Interacting Protein 1 (RIP1) was more effectively activated. Moreover, PiT1 and PiT2 loops, were exchanged, thus allowing obtaining chimeric proteins BclP1-P2 and P1-BclP2. These proteins represent valuable tools to explore the mechanisms involved in the apoptotic pathway. Finally, we confirmed the relevance of these observations in vitro and showed that PiT1 gene conditional deletion in the liver of adult mice increases their sensitivity to fulminant hepatitis TNF-induced. These results are the first report of the involvement of PiT1 in a fatal pathology
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Liu, Xuanli. "Rôle de la leucocidine de Panton-Valentine dans l'infection oculaire staphylococcique : étude des cibles cellulaires et des conséquences inflammatoires tissulaires rétiniennes sur des modèles d'endophtalmie in vivo et ex vivo chez le lapin". Thesis, Strasbourg, 2018. http://www.theses.fr/2018STRAJ076/document.
Abstract (sommario):
Staphylococcus aureus est une bactérie responsable de nombreuses infections. Divers facteurs de virulence sont décrits comme ayant un rôle aggravant dans l’infection staphylococcique. La leucocidine de Panton-Valentine (LPV) en est un. Elle interagit par l’intermédiaire du récepteur de C5a (C5aR) avec les leucocytes et les cellules neuronales dans différents tissus, mais son action au niveau rétinien est méconnue. Nous avons recherché des cibles rétiniennes cellulaires de l’intoxination à la LPV et étudié ses conséquences cellulaires et inflammatoires précoces dans les tissus rétiniens. AINSI, deux modèles de lapins ont été créés : l'injection intravitréenne in vivo et les explants rétiniens ex vivo. Dans les deux modèles, les cellules ganglionnaires étaient les principales cibles cellulaires rétiniennes de la LPV et le seul type de neurones rétiniennes qui exprimait C5aR. Les cellules de Müller comme la microglie étaient activées. L’explant rétinien était facilement manipulé, ils peuvent servir à la recherche de la LPV sur la rétine. La LPV seule pourrait induire une inflammation rétinienne après avoir ciblé spécifiquement les cellules neuronalesStaphylococcus aureus is responsible for many infections. It secretes various virulence factors aggravating the staphylococcal infections. Panton-Valentine leucocidin (PVL) is a virulent leukotoxin from S. aureus and presents active effects towards leukocytes and neuronal cells via the C5a receptor (C5aR). The effects of PVL on retina is little known. We explored PVL retinal cell target and early retinal inflammation and tried to find the processes of bacterial toxins aggravating bacterial endophthalmitis. We employed two different rabbit models to study the PVL effects on retina: intravitreal injection in vivo and retinal explant ex vivo. In the two models, retinal ganglion cells were the only retinal neurons which express C5aR and the major cell targets of PVL in retina. PVL induced retinal Müller and microglial cell activation. The retinal explants were easily manipulated and showed obvious cellular targets of PVL and glial cell activations, they can contribute to research the effects of PVL on retina in future. PVL alone without S. aureus could induce great retinal inflammation after targeting specifically retinal neurons
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Daudet, Nicolas. "Etudes in vivo et in vitro du potentiel régénératif de l'organe de Corti : recherche de facteurs moléculaires capables d'influencer ce potentiel". Montpellier 1, 2001. http://www.theses.fr/2001MON1T001.
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Maltais, Chantale. "Thérapie génique ex vivo de la dystrophie musculaire de Duchenne à l'aide de cellules souches pluripotentes induites". Thesis, Université Laval, 2014. http://www.theses.ulaval.ca/2014/30769/30769.pdf.
Abstract (sommario):
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une myopathie héréditaire due à l'absence de dystrophine. Parmi les thérapies possibles, la greffe autologue de myoblastes dérivés de cellules souches pluripotentes induites (hiPSCs) provenant du patient dystrophique, préalablement corrigés génétiquement, est envisageable. Lors de la première partie de ma recherche, j'ai transplanté des hiPSCs de patient DMD différenciés en myoblastes chez la souris Rag/mdx. Ces cellules avaient été corrigées génétiquement à l'aide d'un vecteur lentiviral codant pour la micro-dystrophine, une dystrophine tronquée, mais toujours fonctionnelle. Mes résultats ont démontré l'expression de cette micro-dystrophine dans certaines fibres hybrides. Cependant, le protocole de différenciation des hiPSCs en myoblastes doit être amélioré. La deuxième partie de mon projet consistait donc à induire la myogenèse à l’aide de protéines recombinantes. Pour cela, des facteurs de transcription régulateurs de la myogenèse, fusionnés à un peptide de pénétration cellulaire, ont été produits et purifiés d’un système bactérien. Leur pénétration dans des cellules mésenchymateuses a été observée in vitro et leurs effets sur les cellules sont en cours d’étude. Lorsque ces approches thérapeutiques seront mises au point, elles pourraient être appliquées cliniquement pour traiter des patients dystrophiques.Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a hereditary myopathy due to the absence of dystrophin. Among the possible therapies, there is the autologous transplantation of genetically corrected myoblasts derived from human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) of a dystrophic patient. In the first part of my research project, I have transplanted myoblasts differentiated from iPSCs of a DMD patient in the Rag/mdx mouse. These cells had been previously genetically corrected with a lentiviral vector coding for micro-dystrophin, a functional truncated version of dystrophin. The results demonstrated the expression of this micro-dystrophin in some of the hybrid fibers. However, in order to increase the graft success, the protocol of differentiation of hiPSCs in myoblasts must be improved. The second part of my project was the induction of myogenesis from hiPSCs using recombinant proteins. To accomplish this, myogenic transcription factors fused with a cell penetrating peptide were produced and purified from the bacterial system. Their capacity to enter into mesenchymal-like cells in vitro was observed and their effects on the cells are currently under study. Once optimized, these therapeutic approaches could be clinically applied to treat dystrophic patients.
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Neveux, Nathalie. "Volume cellulaire et métabolisme du foie conservé : étude ex vivo sur foie de rat isolé perfusé". Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05P609.
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Amri, Fatma. "Contribution à l’étude des mécanismes de la glioprotection anti-oxydante et anti-inflammatoire sur des modèles in vitro et in vivo de neurodégénérescences et d'ischémie cérébrale : implication potentielle des globines endogènes du système nerveux central". Thesis, Aix-Marseille, 2016. http://www.theses.fr/2016AIXM4090.
Abstract (sommario):
Le stress oxydatif joue un rôle majeur dans la mort des cellules neuronales dans diverses conditions neuropathologiques. Cependant, les astrocytes réactifs, en produisant des facteurs neuroprotecteurs et antioxydants, sont capables de protéger les neurones contre le stress oxydatif. De ce fait, la protection des cellules gliales contre les facteurs nocifs, s’avère indispensable pour prévenir les dommages des cellules nerveuses. Les globines du cerveau, en particulier, la neuroglobine (Ngb) et l’hémoglobine (Hb), exprimées dans les cellules nerveuses, jouent un rôle important dans le métabolisme de l’oxygène. Récemment, il a été démontré, que ces protéines exercent des effets neuroprotecteurs dans les modèles expérimentaux de maladies neurodégénératives. Cependant, aucun effet glioprotecteur n’a été rapporté. Les objectifs de ce travail de thèse sont, de mettre en évidence les effets protecteurs de l’Hb et la Ngb dans les astrocytes en culture en présence d’un stress oxydant, et d’élucider les mécanismes intracellulaires mis en jeu. Nous avons démontré que l’Hb et la Ngb sont capables de promouvoir la survie des astrocytes en condition de stress oxydatif, et ce en réduisant significativement la surproduction des ROS, la surexpression des gènes pro-inflammatoires (IL-6, IL-33, iNOS), le dysfonctionnement mitochondrial et la stimulation de l’activité de la caspase-3/7. Nous avons montré aussi que les effets anti-apoptotiques impliquent l’activation des voies de signalisation ERK-MAPK. En outre, nous avons vérifié les effets glioprotecteurs sur un modèle animal de stress oxydatif chronique, les souris KO TP53INP1, ainsi que sur un modèle animal d’hypoxieOxidative stress plays a major role in the death of neuronal cells under various neuropathological conditions. However, reactive astrocytes, by producing neuroprotective and antioxidant factors, are able to protect neurons against oxidative stress. Therefore, protecting glial cells from harmful factors is essential to prevent nerve cell damage. Brain globins, in particular, neuroglobin (Ngb) and hemoglobin (Hb), expressed in neurons and glial cells, play an important role in the metabolism of oxygen. Recently, it has been demonstrated that these proteins exert neuroprotective effects in experimental models of neurodegenerative diseases. However, no glioprotective effect has been reported. The objectives of this thesis work are to demonstrate the protective effects of Hb and Ngb in cultured astrocytes in the presence of oxidative stress and to elucidate the intracellular mechanisms involved. We have demonstrated That Hb and Ngb are able to promote the survival of astrocytes under oxidative stress conditions by significantly reducing over-production of ROS, overexpression of pro-inflammatory genes (IL-6, IL-33, iNOS) Mitochondrial dysfunction and stimulation of caspase-3/7 activity. We have also shown that anti-apoptotic effects involve the activation of ERK-MAPK signaling pathways. In addition, we verified the glioprotective effects on an animal model of chronic oxidative stress, KO mice TP53INP1, as well as on an animal model of hypoxia
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Douin-Echinard, Victorine. "Etude de la mise en place d'une immunité antitumorale par l'utilisation de cellules génétiquement modifiées pour exprimer les molécules de costimulation CD70 et CD80". Toulouse 3, 2001. http://www.theses.fr/2001TOU30206.
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Neau, Elodie. "Sélection in vitro et in vivo de souches probiotiques ayant des propriétés préventives dans l’allergie". Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCB163.
Abstract (sommario):
L'allergie alimentaire peut avoir des effets significatifs sur la morbidité et la qualité de vie. Il existe donc un intérêt considérable à générer de nouvelles stratégies thérapeutiques capables de réduire le risque de développer une atopie. Des études cliniques et expérimentales ont montré que l’allergie était associée à une dysbiose intestinale. Une modulation du microbiote intestinal pourrait ainsi aider à prévenir et traiter les maladies allergiques, justifiant l’utilisation rationnelle de souches probiotiques. L’objectif de mon travail a été de sélectionner au sein d’un panel de 31 souches bactériennes une ou plusieurs souche(s) probiotique(s) possédant des propriétés préventives dans l'allergie, à l'aide d'une combinaison d’approches in vitro et in vivo. Les propriétés immunomodulatrices des souches bactériennes ont été étudiées sur cellules mononucléées sanguines humaines et sur splénocytes murins orientés Th2. Les six souches qui ont induit un fort rapport IL10/IL12p70 et une faible sécrétion d'IFN-γ dans ces deux modèles cellulaires ont été testées pour leur effet protecteur dans un modèle murin d’allergie alimentaire à la β-lactoglobuline (BLG). Trois de ces six souches ont montré un effet protecteur sur l'allergie avec une diminution de la dégranulation des mastocytes et sur la sensibilisation avec une diminution des IgE et des IgG1 spécifiques de la BLG. L’étude de l'impact de ces trois souches sur l'équilibre T helper a montré qu’elles possédaient différents mécanismes d’action. Au niveau systémique, la souche LA307 s’est révélée immunosuppressive, la souche LA308 a induit un profil pro-Th1 et la souche LA305 a induit une réponse à la fois pro-Th1 et régulatrice. Au niveau iléal, l’induction de tolérance pourrait être générée par anergie pour la souche LA305 et par suppression active des réponses Th2 pour les souches LA307 et LA308. L’étude de l’impact de ces trois souches sur le microbiote ne permet pas de conclure que leur effet protecteur est lié à une modulation de la composition du microbiote. Ces résultats montrent que le criblage in vitro, basé sur les propriétés immunomodulatrices des candidats probiotiques, permet une présélection efficace avec trois des six souches sélectionnées ayant un effet protecteur in vivoFood allergy can have significant effects on morbidity and quality of life. There, the generation of efficient approaches to reduce the risk of developing food allergy is of considerable interest. Clinical and experimental studies have shown the association of allergy with intestinal dysbiosis. Thus, a modulation of the gut microbiota may contribute to the prevention and management of allergic diseases. This notion supports the use of probiotics.The aim of my study was to select, among a panel of 31 bacterial strains, probiotic strains with preventive properties in allergy using a combination of in vitro and in vivo approaches. Immunomodulatory properties of strains were studied on human blood mononuclear cells and on Th2 skewed splenocytes. The six strains inducing a high IL10/IL12p70 ratio and a low secretion of IFN-γ on both cellular models were tested for their protective impact in a murine model of food allergy to β-lactoglobulin (BLG). Three out of six strains showed a protective impact on sensitization with a decrease in allergen specific IgE and on allergy with a decrease in mast cell degranulation. The study of the impact on the T-helper balance for these 3 strains showed that they had different mechanisms of action. At the systemic level, LA307 strain proved to be immunosuppressive, LA308 strain induced a pro-Th1 profile and LA305 strain induced both, a pro-Th1 and a regulatory profile. At the ileal level, tolerance induction resulted from anergy for LA305 strain and from active suppression of Th2 responses for LA307 and LA308 strains. This study does not enable to conclude about the relationship between the protective impact of these 3 strains and the modulation of the composition of microbiota. These results reveal that the in vitro screening, based on immunomodulatory properties of candidate probiotics, allow an efficient pre-selection with three out of the six selected strains showing an in vivo protective impact
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Moustafa, Tarek Mohamed Mohamed. "Microencapsulation de cellules chromaffines bovines dans le traitement des douleurs chroniques rebelles : étude de faisabilité in vitro et in vivo". Toulouse 3, 2007. http://thesesups.ups-tlse.fr/45/.
Abstract (sommario):
Le principe de thérapie cellulaire des douleurs chroniques rebelles est de transplanter dans l'espace sous-arachnoïdien des cellules chromaffines pour qu'elles se comportent comme un véritable mini pompes en libérant de manière continue des substances neuroactives telles que les catécholamines et les peptides opioïdes. Mais les transplants xénogéniques dégénèrent progressivement si un traitement immunosuppresseur n'est pas mis en route. Le concept d'immuno-isolement a été proposé pour éviter le traitement immunosuppresseur. Dans ce travail, nous rapportons la microencapsulation des cellules chromaffines bovines (CCB) dans des microcapsules de type alginate/poly-L-lysine/alginate (APA). Nous avons validé la faisabilité de l'utilisation de cette technique et d'une telle formulation pour ce type de cellules. Nous avons mené des études visant à évaluer d'une part les caractéristiques physicochimiques des microcapsules fabriquées et d'autre part la viabilité et la fonctionnalité des cellules chromaffines encapsulées in vitro et in vivo chez le rat. Ainsi la réponse immunitaire de l'hôte vis-à-vis de ces microcapsules implantées chez le rat a été évaluée. Les paramètres de fabrication que nous avons utilisé dans le cadre de l'encapsulation des cellules chromaffines permettent d'obtenir des microcapsules sphériques, stables, résistantes et présentent une membrane semi-perméable. L'étude in vitro montre que ces cellules gardent leur viabilité et leur fonctionnalité au cours de l'étude en exprimant tous les marqueurs étudiés. Une sécrétion basale et stimulée de catécholamines est également observée. L'étude in vivo effectuée chez le rat montre que les cellules chromaffines microencapsulées maintiennent leur viabilité et leur fonctionnalité trois semaines après leur implantation. De plus, cette étude montre également que l'hôte ne développe pas de réaction inflammatoire vis-à-vis des microcapsules. Cependant d'autres investigations seraient encore nécessaires avant l'utilisation de cette stratégie thérapeutique en clinique humaineAdrenal medullary chromaffin cells secrete a combination of pain reducing neuroactive substances including catecholamine and opioid peptides that alleviate both acute and chronic pain not only in several animal models but also in some clinical applications. But, the xenografts can not maintain their survival in central nervous system for a long period without the implication of immunosuppressive drug. In this context, the concept of immune-isolation by cell encapsulation seems to have a great interest in the field of cell therapy in order to protect the transplant from the host’s immune system. In the present study, we report the viability and functionality of bovine chromaffin cells (BCC) encapsulated in microcapsules of alginate/poly-L-lysine/alginate (APA) with a liquefied inner core both in vitro and in vivo in rats. The microencapsulation of BCC not only allows the cells to keep their viability and functionality but also to retain their pharmacological integrity as indicated by expression of tyrosine hydroxlase, met-enkephalin and secretion of catecholamine. The in vivo study concerning the implantation of both microencapsulated chromaffin cells and empty microcapsule in the central nervous system of rats aimed to evaluate the cellular viability and functionality of microencapsulated cells and to determine the host reaction against the implanted microcapsules. This study showed that the microencapsulated cells maintain their viability and their functionality three weeks after implantation in sub-arachnoid space of rats. In addition, this study gave us an account very interesting concerning the absence of immunological response against the implanted microcapsules. This approach may offer a useful potential for cell transplantation in the management of many clinical problems including intractable pain and degenerative diseases. However, other investigations are still necessary before application of this strategy in human clinics
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Bonnet, Celine. "Différentiation cellulaire, régulation des cellules souches et impact des mutations : une approche probabiliste". Thesis, Institut polytechnique de Paris, 2020. http://www.theses.fr/2020IPPAX016.
Abstract (sommario):
Cette thèse porte sur la compréhension des mécanismes de différenciation cellulaire des cellules souches permettant la production des globules rouges (mécanisme appelé érythropoïèse). Nous avons élaboré différents modèles mathématiques permettant une compréhension à différents niveaux. Dans un premier temps, nous avons construit et calibré un modèle à 8 équations différentielles ordinaires pour décrire la dynamique de 6 populations de cellules en érythropoïèse de repos et de stress. L’étude de données expérimentales in vivo, recueillies par nos collaborateurs Stéphane Giraudier (hématologue) et Evelyne Lauret (INSERM), a montré la nécessité d’ajouter deux équations pour modéliser les régulations érythropoïètiques. La calibration du modèle a été effectuée à l’aide des données biologiques et d’un algorithme d’optimisation stochastique appelé CMA-ES. Ce modèle nous a permis de mettre en lumière l’importance de la capacité d’auto-renouvellement des cellules érythropoïètiques dans la production des globules rouges. L’élaboration d’un modèle probabiliste de dimension 3 nous a ensuite permis de comprendre les conséquences dynamiques de cette capacité sur la production des globules rouges. L’étude de ce modèle a nécessité des changements d’échelles en taille et en temps révélant un système dit lent/rapide. À l’aide de méthodes dites de moyennisation nous avons décrit l’approximation en grande population du nombre de cellules de chaque type. Nous avons également quantifié mathématiquement les grandes fluctuations biologiquement observées au niveau du nombre de globules rouges. Nous avons finalement construit un modèle pour comprendre l’influence des longues phases d’inactivité, connues, des cellules souches mutantes dans la production des globules rouges. Les cellules souches mutantes, en faible nombre dans l’organisme comparé aux cellules saines, basculent aléatoirement d’un état actif à un état inactif. Les différences d’échelle de taille entre les populations de cellules, nous a conduit à étudier la dynamique d’un processus de Markov déterministe par morceaux de dimension 4. Nous avons montré l’existence d’une unique probabilité invariante vers laquelle le processus converge en variation totale, et identifié cette limiteThis thesis focuses on understanding the mechanisms of stem cell differentiation leading to the production of red blood cells (a mechanism called erythropoiesis). To this end, we have developed different mathematical modelling leading to an understanding at different levels. Firstly, we have built and calibrated a model with 8 ordinary differential equations to describe the dynamics of 6 populations of cells in steady-state and stress erythropoiesis. The study of in vivo experimental data, realized by our collaborators St´ephane Giraudier (hematologist) and Evelyne Lauret (INSERM), showed the need of two equations to model erythropoiesis regulations. Modeling calibration was performed using biological data and a stochastic optimization algorithm called CMA-ES. This model highlighted the importance of the self-renewal capacity of the erythropoietic cells in the production of red blood cells. The development of a 3-dimensional probabilistic model then allowed us to understand the dynamic consequences of this capacity on the production of red blood cells. The study of this model required changes of scale in size and time revealing a so-called slow/fast system. Using averaging methods, we described the large population approximation of the number of each cell type. We have also mathematically quantified the large fluctuations in the number of red blood cells, biologically observed. Finally, we constructed a model to understand the influence of long periods of inactivity of mutant stem cells in the production of red blood cells. Mutant stem cells, which are in low numbers in the organism compared to healthy cells, randomly switch between an active and an inactive state. The different size scale between the cell populations led us to study the dynamics of a 4-dimensional piecewise deterministic Markov process. We showed the existence of a unique invariant probability measure towards which the process converges in total variation, and we identified this limits
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Ngo, Charlotte. "Rôle des formes réactives de l'oxygène dans la prolifération des cellules endométriosiques in vitro et in vivo : applications thérapeutiques". Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T010.
Abstract (sommario):
Le but de notre travail était d'évaluer le rôle des formes réactives de l'oxygène dans la physiopathologie de Tendométriose. Notre travail montre que, comparées aux cellules endométriales normales de patientes témoins, les cellules endométriales et endométriosiques des patientes malades proliféraient plus, qu'elles étaient soumises à un stress oxydant accru et que leur métabolisme des FRQ était identique à celui de cellules tumorales. Ce phénotype était associé à une activation de la voie ERK. La prolifération cellulaire était significativement diminuée in vitro et in vivo dans un modèle murin d'endométriose par un antioxydant (N-acetylcysteine), par les inhibiteurs de protéine kinase (Leflunomide, A771726, PD98059 et U0126) et par le 5-fluorouracil. Ces résultats sont le préliminaire à des essais cliniques évaluant l'utilisation des inhibiteurs de la voie ERK dans le traitement de l'endométrioseOur aim in this study was to evaluate the role of reactive oxygen species in the pathogenesis of endometriosis. We showed that compared to normal endometrial cells from control patients, endometrial and endometriotic cells of patients with endometriosis have an increased proliferation rate, an increased oxidative stress, and a ROS metabolism similar to these observed in tumoral cells. Cellular proliferation was associated with the ERK pathway activation. Cellular proliferation was decreased, in vitro and in vivo in a murin model of endometriosis, by an antioxidant (N-acetylcystein), by protein kinase inhibitors (leflunomide, A771726, PD98059 and UP 126) and by 5-fluorouracil. These results allow clinical trials evaluating the use of ERK pathway inhibitors in the treatment off endometriosis
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Le, Guyader Laurent. ""Utilisation de sondes pyréniques in vivo pour caractériser l'état de phase global de la membrane plasmique de cellules eurcaryotes". Application à la détection de la liaison d'agonistes au recepteur et opioide murin". Phd thesis, Université Paul Sabatier - Toulouse III, 2007. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00195744.
Abstract (sommario):
Le développement d'outils performants de criblage de nouvelles molécules capables d'induire une réponse cellulaire identique à celle d'un ligand (agoniste/ antagoniste, etc...), est un enjeu important pour la recherche pharmaceutique. Les principales cibles utilisées aujourd'hui sont les récepteurs trans-membranaires couplés aux protéines G (RCPG), dont l'activation déclenche une cascade de réactions intracellulaires (signalisation) régulant des fonctions essentielles de la cellule. L'objectif de ce travail de thèse est la détection de l'initiation de la signalisation cellulaire par spectrométrie de fluorescence pour le récepteur d opioïde murin (mDOR) qui induit un changement conformationnel responsable d'un épaississement de sa partie transmembranaire lors de la signalisation, au niveau de la membrane plasmique de cellules eucaryotes in vivo. Ce changement est supposé générer des modifications de phase lipidique de la membrane plasmique lors de cette interaction RCPG/agoniste, avec des redistributions locales de certains lipides comme le cholestérol, conduisant à la génération d'une phase liquide-ordonnée (lo). Pour cela deux nouvelles sondes fluorescentes membranaires de la famille des Pyrènecholestérol ont été synthétisées, le 3b-hydroxy-pregn-5-ène-21-(1-méthylpyrényl)-20-one 1 et le 3b- hydroxy-pregn-5-ène-21-(1-méthylpyrényl)-20-méthylidène 2. Dans un premier temps la comparaison du comportement de ces sondes vis-à-vis du cholestérol a été analysée dans différentes membranes modèles phospholipidiques. Les données de microcalorimétrie et de RMN-2H indiquent que ces composés induisent des perturbations des lipides comparables à celle du cholestérol. Les données d'absorption, combinées à la propriété hypochromique du chromophore pyrène, ont permis de mettre en évidence un comportement autoassociatif de ces sondes. Nous extrapolons ce résultat à celui du cholestérol car des simulations en dynamique moléculaire déduisaient cette même associativité. Nous retrouvons qu'elle augmente avec le degré d'insaturation des chaînes acyles et qu'elle diminue quand la quantité de cholestérol croît (plus grande miscibilité des sondes dans les membranes enrichies en cholestérol). Dans un deuxième temps la sensibilité du spectre d'émission de fluorescence à la polarité de l'environnement a été vérifiée et mise à profit dans des membranes modèles pour discriminer les membranes en phase ld de celles en phase lo (où la polarité du coeur de la membrane est plus faible). Enfin, l'incorporation de la sonde 2 dans la membrane plasmique de cellules vivantes CHO qui sur-expriment mDOR, a permit le suivi dans le temps, par spectrofluorimétrie et microspectrofluorimétrie, de la perturbation de phase induite par un agoniste de ce récepteur. Les bases d'un criblage sélectif sont donc posées.
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Le, Guyader Laurent. "Utilisation de sondes pyréniques in vivo pour caractériser l'état de phase global de la membrane plasmique de cellules eucaryotes : application à la détection de la liaison d'agonistes au récepteur "delta" opioïde murin". Toulouse 3, 2007. http://thesesups.ups-tlse.fr/53/.
Abstract (sommario):
Le développement d'outils de criblage de nouvelles molécules capables d'induire une réponse cellulaire identique à celle d'un ligand (agoniste, antagoniste. . . ) est un enjeu important pour la recherche pharmaceutique. Les principales cibles utilisées aujourd'hui sont les récepteurs trans-membranaires couplés aux protéines G (RCPG) dont l'activation déclenche une cascade de réactions intracellulaires (signalisation). L'objectif de ce travail de thèse est la détection de l'initiation de la signalisation cellulaire par spectrométrie de fluorescence pour le récepteur ??opioïde murin (mDOR) qui induit un changement conformationnel responsable d'un épaississement de sa partie transmembranaire lors de la signalisation, au niveau de la membrane plasmique de cellules eucaryotes in vivo. Ce changement est supposé générer des modifications de phase lipidique de la membrane plasmique lors de cette interaction RCPG/agoniste, avec des redistributions locales de certains lipides comme le cholestérol, conduisant à la génération d'une phase liquide-ordonnée (lo). Pour cela deux nouvelles sondes fluorescentes membranaires de la famille des Pyrènecholestérol ont été synthétisées, le 3?-hydroxy-pregn-5-ène-21-(1-méthylpyrényl)-20-one 1 et le 3?-hydroxy-pregn-5-ène-21-(1-méthylpyrényl)-20-méthylidène 2. Dans un premier temps la comparaison du comportement de ces sondes vis-à-vis du cholestérol a été analysée dans différentes membranes modèles phospholipidiques. Les données de microcalorimétrie et de RMN-2H indiquent que ces composés induisent des perturbations des lipides comparables à celle du cholestérol. Les données d'absorption, combinées à la propriété hypochromique du chromophore pyrène ont permis de mettre en évidence un comportement auto-associatif du cholestérol dépendant du degré de saturation des chaînes acyles. De plus ces sondes sont plus idéalement miscibles dans les phases lo. Dans un deuxième temps la sensibilité du spectre d'émission de fluorescence à la polarité de l'environnement a été vérifiée et mise à profit dans des membranes modèles pour discriminer les membranes en phase ld de celles en phase lo (où la polarité du coeur de la membrane est plus faible). Enfin, l'incorporation de la sonde 2 dans la membrane plasmique de cellules vivantes CHO qui sur-expriment mDOR, a permit le suivi dans le temps, par spectrofluorimétrie de la perturbation de phase induite par un agonisteThe development of tools for the screening of new receptors’ agonists is a major issue for pharmaceutical research. Currently, the main targets used are the G-protein coupled receptor of the plasma membrane which the activation trigger the signaling pathways involved in many cell functions. The goal of this thesis is the detection, using a spectrofluorometry approach in vivo, of the signaling pathway ignition by the mouse delta opioid receptor (mDOR). DOR is assumed to generate a relocalisation of some lipids (cholesterol) while agonist binding leading to the formation of a liquid-ordered phase (lo). Thus two fluorescent probes have been synthesized, which the 3beta-hydroxy-pregn-5-ene-21-(1-methylpyrenyl)-20-methylidene. Data from calorimetry and RMN-2H studies show that this probe induces the same lipid membranes disturbance than cholesterol. Absorption data of the probe allowed the assessment of a self-association process of cholesterol in model membranes, which is as a function of the acyl-chains saturation degree of phospholipids. Then the polarity sensitive property of the probe has been used to distinguish between ld and lo phases in model membranes. Finally, we incorporated the probes in CHO cells over-expressing mDOR to monitor, by fluorescence spectroscopy, the mean phase state change of the plasma membrane triggered by a mDOR agonist. This is the first step of a new screening approach
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Moser, Muriel. "Les cellules dentriques :étude de leurs propriétés et de leurs fonction in vivo dans un modèle murin". Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2002. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/211439.
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Alaa, El Din Ferdos. "Le syndrome de Rendu-Osler-Weber : aspects génétiques, moléculaires et épidémiologiques". Thesis, Poitiers, 2015. http://www.theses.fr/2015POIT2260/document.
Abstract (sommario):
La télangiectasie hémorragique héréditaire (HHT) est une maladie rare (1/10.000). Son incidence est plus élevée (pouvant atteindre 1/1000) dans certaines zones géographiques dont la région Poitou-Charentes. Cette maladie autosomique dominante est causée par des mutations d'un des trois gènes identifiés ENG, ACVRL1 et SMAD4 codant pour des protéines de la voie BMP spécifiquement exprimés dans les cellules endothéliales. Le nombre croissant de mutations détectées chez les patients et l'expressivité variable de certaines mutations nous a ammené à déterminer les conséquences de mutations afin d'établir une corrélation génotype/phénotype. Cette corrélation est importante pour le conseil génétique et évidemment le diagnostic prénatal. Dans ce contexte, nous avons étudié aux niveaux cellulaire et moléculaire les effets de plusieurs mutations. L'effet délétère de ces mutations sur la protéine et/ou l'épissage de l'ARN a été évalué. Nous avons montré que sur les 23 mutations d'ACVRL1 : 1) 18 mutations faux-sens affectent la fonctionnalité de la protéine en réponse à BMP9 et 3 mutations sont de simples polymorphismes, 2) la mutation exonique c.733A>G (p.Ile245Val) affecte l'épissage de l'exon 6, 3) La mutation c.1048+5G>A de l'intron 7 en dehors du site consensus induit un épissage aberrant de l'exon 7. En ce qui concerne l'ENG, nous avons analysé 4 mutations et nous avons montré que la mutation c.1088G>A (p.Cys363Tyr) a un impact sur l'activité du récepteur et que les mutations c.1134G>A (p.Ala378Ala) et c.1060C>T (p.Leu364Leu) altèrent l'épissage de l'exon 8. Ce travail montre l'importance de l'étude approfondie de toute nouvelle mutation par des études in silico, in vitro et in cellulo à différents niveaux cellulaires. Des études in vivo ultérieures peuvent compléter et appuyer la stratégie expérimentale que nous avons suivieHereditary hemorrhagic telangiectasia (HHT) is a rare disease (1/10.000). Its incidence is higher in certain geographic areas including the Poitou-Charentes region (1/1000). This autosomal dominant disease is caused by mutations in one of three identified genes ENG, ACVRL1 and SMAD4 encoding BMP pathway proteins specially expressed in endothelial cells. The increasing number of mutations detected in patients and the variable expressivity of certain mutations has taken us to determine the consequences of mutations to establish a genotype/phenotype correlation. This correlation is important for genetic counseling and obviously for prenatal diagnosis. In this context, we investigated the effects of several mutations at the cellular and molecular levels. The deleterious impact of these mutations on the protein and/or RNA splicing was evaluated. We have shown that for the 23 mutations of ACVRL1: 1) 18 missense mutations affect the functionality of the protein in response to BMP9 and 3 are polymorphisms, 2) exonic mutation c.733A>G (p. Ile245Val) affects the splicing of the exon 6, 3) mutation c.1048+5G>A in intron 7 off the consensus site induces an aberrant splicing of exon 7. Concerning the ENG, we analyzed 4 mutations and we showed that the mutation c.1088G> A (p.Cys363Tyr) has an impact on the activity of the receptor and that the mutations c.1134G> A (p.Ala378Ala) and c.1060C> T (p.Leu364Leu) inhibit the splicing of exon 8. This work shows the importance of the comprehensive study of any new mutation by in silico, in vitro and in cellulo studies at different cellular levels. The in vivo studies can further complement and support the experimental strategy that we followed
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Ahdjoudj, Souhila. "Différenciation des cellules stromales osseuses pluripotentes : régulation in vitro et dans un modèle d'ostéopénie in vivo". Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077161.
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Montcuquet, Nicolas. "Diminution de l'alloréactivité de cellules T cultivées ex vivo : étude in vitro des mécanismes et effet sur la reconstitution immunitaire in vivo dans un modèle de greffe allogénique de cellules souches hématopoïétiques". Besançon, 2008. http://www.theses.fr/2008BESA3004.
Abstract (sommario):
Une modulation de l'alloréactivité des cellules T présentes dans un greffon de cellules souches hématopoïétiques (CSH) peut être obtenue par transfert par voie rétrovirale d'un gène "suicide" dans les lymphocytes T (LT) du donneur. Le transfert de gène nécessite notamment une période de 12 jours de culture ex vivo de cellules mononucléées (CMN) activées par des anticorps (Acs) CD3 solubles en présence d'Interleukine (IL)-2 qui est en partie responsable d'une diminution de l'alloréactivité des cellules cultivées (appelées Co). Les hypothèses d'induction d'anergie, de délétion des cellules alloréactives au cours de l'expansion ex vivo ou de mort induite par activation au cours de la reconnaissance de l'allo-antigène, testées pour expliquer cette diminution d'alloréactivité, ont été invalidées (résultats non publiés). L'augmentation d'expression de marqueurs des cellules T régulatrices au cours de l'expansion ex vivo nous a incités à tester l'hypothèse selon laquelle une expansion préférentielle des cellules T régulatrices pourrait être à l'origine de la diminution d'alloréactivité des Co. Les résultats obtenus n'ont pas permis de mettre en évidence une activité suppressive liés à la présence de cellules T régulatrices (Montcuquet N et al. Immunology 2008) et suggèrent que la diminution d'alloréactivité résulte d'un épuisement fonctionnel des LT. - Dans un second temps nous avons cherché à améliorer les conditions de culture afin de maintenir cette alloréactivité. L'activation des CMN a été réalisée par des Acs soluble CD3 ou par des Acs CD3 et CD28 co-immobilisés sur billes, puis les cellules ont été cultivées en présence d'IL-2, d'IL-7 ou d'IL-15. Nous avons observé que le fait de remplacer la stimulation CD3 par une co-stimulation CD3/CD28 conduit à une alloréactivité similaire in vitro mais augmente la prolifération cellulaire et l'alloréactivité testée in vivo dans un modèle xénogénique de réaction du greffon contre l'hôte (GvH). Par ailleurs, le fait de remplacer l'IL-2 par l'IL-7 mais pas par l'IL-15, ou de diminuer les concentrations d'IL-2 et d'IL-7 utilisées lors de la culture, améliore l'alloréactivité des Co, au détriment cependant d'une expansion cellulaire plus faible (Mercier-Letondal P et al. Cytotherapy 2008). Ces résultats posent les bases de futurs protocoles de production de cellules T génétiquement modifiées conservant leur alloréactivité en vue d'obtenir un effet anti-leucémique maximal en situation d'allogreffe hématopoïétique. - La culture ex vivo de CMN entraîne non seulement une diminution d'alloréactivité, mais aussi des modifications phénotypiques se traduisant par l'acquisition par les Co d'un phénotype de LT mémoires. Or, les LT mémoires ont une alloréactivité plus faible que des LT naïfs en termes d'induction de GvH mais sont capables d'accélérer la reconstitution immunitaire. Nous avons pu montrer que, de façon similaire, des LT cultivés issus de splénocytes murins étaient capables d'améliorer la reconstitution immunitaire au même titre que des LT mémoires frais dans un modèle murin d'allogreffe de CSH par un effet indépendant de l'alloréactivité. - Ces résultats posent les bases d'un possible développement des LT cultivés comme nouvel outil de thérapie cellulaire permettant d'accélérer la reconstitution immunitaire dans des contextes de greffe où celle-ci est lente (greffe de sang de cordon, greffe haplo-identique. . . )We have demonstrated previously that retroviral-mediated transfer of a suicide gene into bone marrow (BM) donor T cells allows an efficient control of graft-versus-host disease (GvHD) after allogeneic BM transplantation. However, 12 days of ex vivo culture is required for the production of sufficient gene-modified cells (GMC). This process requires both CD3 monoclonal antibody (MAb) activation and interleukin-2 (IL-2) expansion resulting in a diminution of expanded cells alloreactivity (termed Co). This phenomena is independent of anergy, clonaI deletion during expansion or apoptosis inducing cell death during mixed lymphocyte reaction. - Here, we demonstrate that this phenomena is the result of T-cell functional exhaustion and not due to anypreferential expansion of regulatory T cells in the culture (Montcuquet N et al. Immunology 2008). - Our approach was then to try to improve the ex vivo culture conditions in order to maintain alloreactivity. Peripheral blood mononuclear cells were activated with soluble CD3 MAb or CD3 and CD28 MAb co-immobilized on beads and expanded for 12 days in the presence of IL-2, IL- 7 or IL-15 before analysis of alloreactivity and phenotype. Replacing the CD3 MAb by CD3/CD28 beads led to similar in vitro alloreactivity but improved also expansion and in vivo alloreactivity of GMC. Replacing the IL-2 with IL- 7, but not IL-15, or decreasing IL-2 or IL- 7 concentrations, improved the in vitro alloreactivity of expanded cells but with lower expansion. Indeed, the alloreactivity of expanded cells was negatively correlated with cell expansion and positively correlated with CD4/CD8 ratio and CD8 expression levels (Mercier-Letondal P, Montcuquet N et al. Cytotherapy 2008). - ln a mouse model of Graft-versus-host Disease (GvHD) induction, memory T-cells are less allogeneic than naïve T cells. Memory T-cells also improve immune reconstitution. We examined the potential of expanded T-cells to improve immune reconstitution in the absence of GvHD. Indeed, expanded splenocytes can have the same effects as fresh memory T-cells. - Taken together these results should be useful in designing GMC therapy protocols where alloreactivity is maintained and co-administrated expanded T-cells offer a new cell therapy product
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Legaz, Sophie. "Les nanoparticules de poly(acide lactique) comme plateforme d'imagerie et de vectorisation de molécules actives chez Drosophila Melanogaster : analyses in cellulo et in vivo du couple GAL4/UAS". Thesis, Lyon 1, 2015. http://www.theses.fr/2015LYO10293.
Abstract (sommario):
Les nanoparticules (NP) de poly(acide lactique) (PLA) sont des vecteurs biodégradables prometteurs pour la vaccination et la délivrance thérapeutique. Cependant leur évaluation in vivo n'est pas toujours couronnée de succès. Un des écueils réside dans la difficulté à suivre la prise en charge cellulaire de ces nanomatériaux à l'échelle d'un organisme, ces NP étant indécelables dans les tissus profonds. L'objectif de cette thèse est de valider l'utilisation des NP de PLA comme plateforme d'imagerie et de vectorisation d'actifs chez Drosophila Melanogaster et d'analyser ainsi le devenir de NP dans un corps entier. Le modèle drosophile a été choisi pour son faible encombrement, sa facilité d'élevage, la diversité des lignées transgéniques et la puissance des outils génétiques à disposition. Il permet également de mener des études mécanistiques in vivo dans un laps de temps restreint. Nous avons évalué in cellulo et in vivo la toxicité de ces NP afin d'établir des conditions optimales expérimentales. Ensuite le potentiel des NP de PLA a été évalué in cellulo sur des cellules de drosophile transfectées transitoirement par un plasmide porteur du gène GFP sous le contrôle du promoteur UAS. Les NP vectorisant le gène gal4 ou la protéine GAL4 permettent de confirmer par simple observation en microscopie à fluorescence l'efficacité de délivrance de molécules actives dans la cellule via la fixation de la protéine GAL4 sur le promoteur UAS. Enfin, ces formulations ont été administrées par voie orale à des drosophiles transgéniques UAS-RFP pour confirmer les résultats précédents in vivo. GAL4 est un outil prometteur pour le suivi indirect de NP dans des organismes transgéniquesThe biodegradable NanoParticles (NPs) of PolyLactic Acid) (PLA) are promising vectors for vaccination and therapeutic delivery. However, their in vivo evaluation is not always successful. NPs being undetectable in deep tissues, one of the challenges is the difficulty to follow the cellular uptake of these nanomaterials at the organism level. The aim of this thesis is to validate the use of PLA NPs as an imaging and drug vectorization platform in Drosophila melanogaster, and to analyze their fate in the whole fly body. The Drosophila model was chosen for its small footprint, the ease of breeding, the variety of transgenic lines, and the power of genetic tools available. Tt also allows to carry out in vivo mechanistic studies in a limited time window. We evaluated in cellulo and in vivo toxicity of these NP to determine optimal experimental conditions. Then the potential of PLA NPs was evaluated in cellulo on transiently transfected Drosophila cells by a plasmid carrying the GFP gene under the control of the UAS promoter. A simple observation by fluorescence microscopy of NPs vectorizing the gal4 gene or the GAL4 protein can confirm the effective delivery of active molecules into the cell through the binding of GAL4 protein to the UAS promoter. Finally, these formulations were orally administered to transgenic Drosophila UAS-RFP to confirm the previous in vivo results. GAL4 is a promising tool for indirect monitoring of NPs in transgenic organisms
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Fournier, Nancy. "Modèles d'angiogénèse dans des matériaux biologiques, études in vitro et in vivo". Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1997. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk3/ftp04/nq25405.pdf.
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Forrat, Rémi. "L'ischemie myocardique chez l'animal diabétique : modèles expérimentaux in vivo et in vitro". Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO1T012.
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Joly, Candie. "Dynamique des réponses lymphocytaires T locales et systémiques à l'injection d'un vaccin dans la peau". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS317.
Abstract (sommario):
La vaccination est considérée comme l’un des plus grandes découvertes de l’histoire des maladies infectieuses, ayant permis le déclin et l’éradication de plusieurs pathogènes. Cependant, nous ignorons encore tous les mécanismes impliqués dans la protection contre les pathogènes. Cette méconnaissance est la cause de notre incapacité à formuler des nouveaux vaccins contre le VIH, la tuberculose, le paludisme et les pathogènes émergents. Récemment, on note des efforts pour induire une réponse cellulaire efficace après une vaccination, qui joue un rôle crucial dans la clairance des pathogènes.Cette thèse s’appuie sur un modèle de vaccin vivant atténue issu du virus de la vaccine : le MVA (Modified Vaccinia Ankara) et sur le modèle de primate non-humain. Nous avons caractérisé la réponse cellulaire après une immunisation intradermique suivant un schéma en prime-boost homologue, avec un boost à 2, suivi d’un boost à 9 mois. Le MVA a induit une infiltration massive de Lymphocytes T CD8 au niveau du site d’injection, 7 jours après l’immunisation. La réponse cellulaire systémique était modérée et ne reflétait pas l’amplitude de la réponse locale. Les injections du prime et du boost ont orienté la réponse cellulaire de façon différente, ce qui a mené à une importante induction de cellules T CD4 et CD8, persistantes, spécifiques de l’antigène et polyfonctionnelles après l’injection du boost à 9 mois.Cette étude souligne la différence entre les réponses systémiques et locales, démontrant l’importance de se focaliser sur la réponse tissulaire. Elle a également mis en lumière l’impact du schéma d’immunisation sur la qualité de la réponse cellulaireVaccination has been considered as one of the greatest discoveries in the history of infectious diseases by allowing pathogens decline or eradication. However, we still ignore all the mechanism that lead to protection and therefore, fail to elaborate new vaccines against HIV, tuberculosis, malaria and emergent pathogens. Recently, efforts have been made to elicit effective cellular response after vaccination, which is crucial for pathogen clearance.This thesis relied on live-attenuated vaccine model derived from the vaccinia virus: the MVA (Modified Vaccinia Ankara) and a non-human primate model. We characterized the cellular immune response triggered by a homologous prime-boost intradermal injection of MVA, with a 2 months and 9 months boost. The MVA induced a massive infiltration of CD8 T cells at the injection site 7 days post immunization. In comparison, the systemic cellular response was mild and did not reflect the magnitude of the local response. The prime and boost injections elicited distinct orientation of the systemic and local T cells, which led to an important induction of a persistent, antigen-specific and polyfunctional CD8 and CD4 T cell responses after the 9 months boost.This work emphasizes the difference between local and systemic response, demonstrating the importance of the focus on tissue immunity. It also highlights the impact of the immunization schedule on the quality of the cellular response
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Chargui, Jamel. "La lymphopoïèse expérimentale in vivo : étude de la différenciation et de la réponse anticorps dans le modèle de la souris génétiquement immuno-déficiente greffée avec des cellules souches hématopoïétiques foetales humaines". Lyon 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LYO1T156.
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Bun, Sok-Siya. "Etudes in vitro et in vivo du métabolisme et des interactions médicamenteuses du paclitaxel". Aix-Marseille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003AIX22954.
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Lantz, Nicolas. "Rôle des récepteurs P2Y1,P2Y4 et P2Y12 dans un modèle d'angiogenèse in vivo chez la souris et rôle du récepteur P2Y1 dans la fonction de la cellule endothéliale". Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2007. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2007/LANTZ_Nicolas_2007.pdf.
Abstract (sommario):
En plus de leur rôle dans l’hémostase et la thrombose, les nucléotides extracellulaires interviennent dans différents processus physiologiques et physio-pathologiques tels que la prolifération cellulaire et la modulation de l’apoptose, le contrôle du tonus vasculaire et la réponse inflammatoire, en agissant sur les cellules endothéliales, les cellules musculaires lisses et les leucocytes. L’inflammation, la prolifération cellulaire et les plaquettes sanguines tiennent une place importante dans l’angiogenèse ce qui suggère que ces nucléotides pourraient jouer un rôle dans ce processus. Les récepteurs P2Y aux nucléotides sont exprimés sur la plupart des cellules qui participent aux étapes de la formation des vaisseaux sanguins, à savoir les plaquettes sanguines, les cellules endothéliales, les cellules musculaires lisses et les leucocytes, et leur rôle dans l’angiogenèse a été ainsi envisagé. L’objectif de ce travail a été d’étudier le rôle des récepteurs P2 des nucléotides dans l’angiogenèse. Pour cela, nous avons d’abord mis au point un modèle d’étude in vivo chez la souris. Nous avons aussi été amenés, au cours de ce travail, à établir des lignées immortalisées de cellules endothéliales de souris. Les principaux résultats de ces travaux sont que, parmi les récepteurs étudiés, le récepteur P2Y4 semble avoir un rôle important dans l’angiogenèse. Concernant le récepteur P2Y1, son rôle n’a pas pu être mis en évidence dans le modèle in vivo. En revanche, dans les cellules endothéliales immortalisées en culture, il semble participer à la régulation de la prolifération. Enfin, pour étudier le rôle du récepteur P2Y12, nous avons utilisé le clopidogrel, l’inhibiteur sélectif de ce récepteur, ainsi que son énantiomère inactif. Les deux molécules ayant le même impact dans notre modèle in vivo, à savoir la formation de zones hémorragiques et une diminution du nombre de vaisseaux formés, nous ne pouvons pas attribuer cet effet à l’inhibition du récepteur P2Y12. En conclusion, notre travail a permis de mettre à disposition du laboratoire, deux modèles d’étude : un modèle d’angiogenèse in vivo et un modèle de culture de cellules endothéliales immortalisées. Concernant les récepteurs P2, seul le récepteur P2Y4 semble jouer un rôle dans l’angiogenèse. Des expériences complémentaires permettront d’indiquer l’importance du rôle d’autres récepteurs P2Y, comme les récepteurs P2Y2 et P2Y6, ainsi que les récepteurs P2X, dans la formation des vaisseaux sanguins. Leur identification à la surface des cellules endothéliales et des autres cellules participant à l’angiogenèse, permettra non seulement d’étudier leurs fonctions dans la régulation de ces cellules, mais aussi d’envisager leur rôle dans des pathologies dépendantes de l’angiogenèseIn addition to their role in haemostasis and thrombosis, extracellular nucleotides regulate various physiological and physiopathological processes such as the cellular proliferation and the modulation of apoptosis, the control of vascular tone and inflammation, by acting on endothelial cells, smooth muscle cells and leucocytes. Inflammation, cellular proliferation and blood platelets hold an important place in angiogenesis suggesting that nucleotides could play a role in this process. Extracellular nucleotides receptors, the P2Y receptors, are expressed on the majority of the cells involved in the blood vessels formation, for example the blood platelets, endothelial cells, smooth muscle cells and leucocytes, and their role in angiogenesis was thus considered. The aim of this work was to study the role of the extracellular nucleotides P2 receptors in angiogenesis. First, we developed an in vivo mouse model of angiogenesis then we established immortalized mouse endothelial cell lines. The major results of this work are that, among the receptors studied, the P2Y4 receptor seems to have an important role in angiogenesis. Concerning the P2Y1 receptor, its role could not be highlighted in the in vivo model. On the other hand, in the immortalized endothelial cells in culture, this receptor seems to play a role in the control of the proliferation. Lastly, to study the role of the P2Y12 receptor, we used the clopidogrel, the selective inhibitor of this receptor and also its inactive enantiomer. These two molecules having the same impact in our in vivo model, the formation of hemorrhagic zones and a reduction in the number of new vessels formed, we cannot allot this effect to the P2Y12 receptor inhibition. In conclusion, thanks to this work, the laboratory has now two models of study: an in vivo model of angiogenesis and a model of culture of immortalized endothelial cells. Concerning the P2 receptors, only the P2Y4 receptor seems to be important in angiogenesis. Additional experiments are required to highlight the importance of the role of other P2Y receptors, like the P2Y2 and P2Y6 receptors, as well as the P2X receptors, in the formation of blood vessels. Their identification on the surface of endothelial cells and other cells involved in angiogenesis will not only make it possible to study their functions in the regulation of these cells, but also to consider their role in pathologies dependent on angiogenesis
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Plessier, Alexandre. "Développement et caractérisation de modèles vitro et vivo de cancers pédiatriques infiltrant du tronc cérébral (DIPG)". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS270.
Abstract (sommario):
Les gliomes infiltrants du tronc cérébral (DIPG) sont les gliomes pédiatriques les plus agressifs. Leur localisation dans le pont de Varole et leur caractère infiltrant les rendent inopérables. Le manque de matériel biologique et l’absence de modèles pertinents ont longtemps freiné le développement de nouvelles thérapies. Le séquençage du génome entier de ces tumeurs a identifié la substitution K27M des gènes d’histone HIST1H3B/C et H3F3A comme mutation somatique initiatrice des DIPG. Bien que partageant la mutation sur le même résidu, notre laboratoire a montré que les tumeurs mutées dans le gène codant H3.1 ou H3.3 définissent des sous-groupes de DIPG avec des programmes oncogéniques, propriétés d’invasion et survies différents.Dans ce contexte, le premier objectif de ma thèse a consisté à développer des modèles in vitro et in vivo pertinents de la maladie. Pour ce faire, nous avons dissocié des biopsies fraiches de DIPG naïves de tout traitement et avons, de manière systématique, mis en culture une moitié de la suspension dans du milieu sans sérum pour permettre l’expansion de cellules souches de gliomes (GSC). En parallèle, l’autre moitié a été directement injectée par stéréotaxie dans le cerveau de souris immunodéprimées, pour obtenir des modèles de xénogreffes dérivés de patients (PDX). De plus, nous avons obtenu un second type de modèle in vivo de DIPG à partir des cellules tumorales en culture greffées dans le tronc par stéréotaxie (CDX). Au préalable, les GSC ont été modifiées pour exprimer de manière stable la protéine fluorescente mKate2 et l’enzyme Luciférase, permettant le suivi longitudinal de la croissance tumorale. Nous avons pu générer des GSCs issues de 26 patients différents mutées dans le gène codant H3.1 ou H3.3 et qui maintiennent leurs propriétés de cellules souches in vitro. De plus, nous avons généré 8 modèles PDX et 6 modèles CDX développant des tumeurs infiltrantes et présentant les mêmes symptômes neurologiques que les patients. Conformément aux données cliniques, nos modèles in vivo mutés H3.3 ont développé des tumeurs infiltrant le parenchyme plus rapidement que les modèles H3.1. En somme, ces résultats indiquent que nous avons réussi à générer des modèles de DIPG à partir d’échantillons naïfs de tout traitement, et qui récapitulent les aspects cliniques et moléculaires de ce cancer.Nous avons ensuite profité des modèles GSCs pour étudier les mécanismes moléculaires qui conduisent au phénotype invasif. Dans un premier temps, nous avons montré que l’expression de CXCR4, un récepteur de chimiokines, est corrélée à la capacité migratoire des GSC in vitro. Cependant, l’inhibition de CXCR4 par un antagoniste n’a montré d’efficacité que dans une partie des GSC testées, suggérant l’implication d’autres voies de signalisations dans leur motilité. Aussi, dans le but d’identifier de manière non biaisée de nouveaux mécanismes moléculaires impliqués dans la migration des GSC, nous avons analysé le profil transcriptomique de 13 GSC présentant une mutation K27M dans les gènes codant H3.1 ou H3.3 par séquençage de l’ARN. Nous avons ensuite sélectionné les gènes dont le niveau d’expression était corrélé à la vitesse de migration des différentes GSCs. Ainsi, nous avons découvert plusieurs candidats, parmi lesquels CXCL10, le ligand du récepteur aux chimiokines CXCR3, et SPSB4, une ubiquitine-ligase, qui sont surexprimés dans les tumeurs migrant rapidement. L’implication de ces 2 gènes dans la migration sera étudiée in vitro et in vivo dans des expériences de perte de fonction en utilisant des constructions exprimant des shARN inductibles.Au total, ce travail a permis le développement de modèles pertinents de DIPG qui récapitulent les caractéristiques de la tumeur dont ils dérivent et qui reflètent l’hétérogénéité interindividuelle observée chez les patients. De plus, cette étude a permis la découverte de nouveaux mécanismes moléculaires qui favorisent la migration de ces cellules tumorales très particulièresDiffuse Instrincic Pontine Gliomas (DIPG) are the most aggressive form of pediatric gliomas. They are infiltrative tumors originating from the brainstem. The lack of biological material and the absence of relevant models have for long hampered the development of new therapeutics. Whole genome sequencing of tumor DNA identified a K27M substitution in the histone genes HIST1H3B/C and H3F3A as a recurrent somatic driver mutation in DIPG. Despite sharing the mutation on the same residue, our lab demonstrated that H3.1- and H3.3-mutated tumors define distinct subgroups of DIPG with different oncogenic programs, overall survival or invasion properties.Thus, the first goal of my PhD project consisted in developing relevant in vitro and in vivo models from treatment-naive primary specimen of DIPG that would mimic the disease. To do so, our strategy has been to dissociate fresh biopsies upon reception from the operating room and systematically place one-half of the cell suspension in serum-free culture to allow the expansion of Glioma Stem-like cells (GSCs) while the other half is directly stereotactically injected into the brain of Nude mice to develop Patient-derived xenograft models (PDX). We also obtained a second type of in vivo DIPG models, Cell-derived Xenograft models (CDX), after stereotactic xenografting of GSCs. Cells were modified beforehand to stably express a fluorescent protein as well as the Firefly luciferase enzyme, thus allowing the longitudinal record of tumor growth. We succeeded in generating GSCs from 26 different patients harboring a K27M mutation either in H3.1 or H3.3, that maintained stemness properties in culture. In addition, we generated 8 PDX and 6 CDX models that developed infiltrative tumors with maintenance of DIPG hallmarks. All tumor-bearing mice displayed neurological disorders like impaired walking and/or hemi-paralysis, as observed in patients. In accordance with the clinical data, our H3.3-K27M in vivo models developed tumors faster than H3.1-K27M, as well as they infiltrate the parenchyma faster and deeper than H3.1-K27M models. Taken together, these results showed that we succeeded in generating models of DIPG from treatment-naïve samples that mimic the clinical and molecular aspects of the disease.We then took advantage of such GSCs models to decipher the molecular mechanisms driving the invasive phenotype of patients with DIPG. First, we showed that CXCR4 expression, a chemokine receptor, is correlated with the in vitro migration capacity of our cellular models of DIPG. However, inhibition using CXCR4-antagonist CXCR4 was only efficient in a subset of our models, suggesting that other signaling pathways could be involved in their motility. To further identify the molecular mechanisms involved in migration of GSCs in vitro in an unbiased manner, we profiled the transcriptome of 13 GSCs harboring both H3.1- and H3.3-K27M genotype by RNA-sequencing. We then selected genes which expression levels correlated with the migration speed of the different GSCs. We uncovered several candidates among which CXCL10, the ligand of the chemokine receptor CXCR3, and SPSB4, an ubiquitin-ligase, up-regulated in highly migrating tumor cells. The involvement of these 2 genes in migration will be investigated in vitro and in vivo in loss of function experiments using doxycycline-inducible shRNA expressing constructs.Altogether, this work allowed for the development of pertinent DIPG models that resemble the primary tumors they derive from and also reflect the inter-individual heterogeneity observed in patients. Additionally, we gained new insights on the molecular mechanisms promoting cell migration in these particular cells
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Benkahla, Mehdi Ayech. "Infection à entérovirus in vitro et in vivo". Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S053/document.
Abstract (sommario):
Le genre Enterovirus comporte de nombreux virus à ARN non enveloppés regroupés en espèces EV-A-J et Rhinovirus A-C. Les coxsackievirus B (CV-B) appartiennent à l’espèce EV-B. Le rôle des CV-B et notamment de CV-B4 dans la pathogenèse du diabète de type 1 (DT1) est fortement suspecté. Coxsackievirus-B4 E2 (CV-B4 E2) isolé à partir du pancréas d’un patient souffrant de DT1 est capable d’induire une hyperglycémie chez des souris. Les mécanismes de la pathogenèse entérovirale du diabète ne sont pas encore bien connus. Il a été montré que les monocytes humains sont infectés par CV-B4 in vitro grâce à des anticorps anti-VP4 formant des complexes avec le virus, et que les macrophages humains également sont infectés par CV-B4 in vitro. Les études réalisées in vitro sont riches d’informations mais des modèles d’infection in vivo sont nécessaires pour explorer d’avantage les mécanismes des infections à entérovirus. Malgré l’impact des entérovirus en pathologie les moyens de lutte contre ces virus sont limités.Nos principaux objectifs étaient i) d’étudier l’infection à CV-B4 E2 chez la souris et de déterminer si les monocytes/macrophages sont des cibles du virus in vivo ii) de mettre en œuvre un modèle de diabète induit par CV-B4 E2 chez la souris iii) d’étudier l’activité anti-CV-B4 de diverses molécules in vitro iiii) de mettre en évidence la survenue d’infections entérovirales naturelles chez des animaux.L'ARN viral est présent in vivo dans les monocytes (CD14+) et macrophages (F4/80+) de la rate et dans les cellules de la moelle osseuse de souris ICR-CD1 inoculées avec CV-B4 E2. In vitro, CV-B4 E2 infecte les cellules CD14+ et les cellules F4/80+ de la rate. Les macrophages dérivés de la moelle osseuse cultivés en présence de M-CSF sont infectés par CV-B4 in vitro. Le sérum de souris infectée par CV-B4 E2 facilite l’infection in vitro des cellules spléniques par CV-B4 E2, mais pas celle des macrophages dérivés de la moelle osseuse. Chez des souris ICR-CD1 préalablement traitées par des doses sub-diabétogènes de streptozotocine β (STZ), l’inoculation de CV-B4 E2 provoque une hyperglycémie associée à une hypo-insulinémie. La charge virale du pancréas évaluée par RT-PCR quantitative n’est pas différente chez les animaux diabétiques (STZ/CV-B4 E2) par rapport aux animaux inoculés avec le virus mais non diabétiques. L'analyse histologique du pancréas d’animaux diabétiques (STZ/CV-B4 E2) met en évidence des foyers d’inflammation au niveau des ilots de Langerhans. Des dérivés de pirodavir, molécules qui se fixent à la capside des entérovirus inhibent l’infection à echovirus 7 et 11 mais pas à CV-B4 E2 in vitro. Par contre la fluoxétine a fait preuve d’un effet anti-CV-B4 E2 dans un modèle de culture de fragments de pancréas et de cellules béta pancréatiques murins. La détection d’anticorps sériques anti-VP4 par ELISA, à l’aide d’un peptide de 50 acides-aminés de la protéine VP4 d’EV-G1 (un entérovirus porcin), a été appliquée à la mise en évidence de l’infection de jeunes porcs par des entérovirus. Une homologie de 88% de la séquence du peptide VP4 d’EV-G1 avec celle des protéines VP4 d’ autres EV-G suggère que des anticorps dirigés contre ces virus distincts d’EV-G1 puissent être détectés.En conclusion, CV-B4 E2 peut infecter les monocytes et les macrophages in vitro et in vivo dans un système murin, et le virus peut provoquer un diabète chez des souris préalablement exposées à de faibles doses de STZ. La fluoxétine inhibe l’infection à CV-B4 E2 de cellules pancréatiques in vitro. La détection d’anticorps anti-VP4 d’EV-G1 a permis de mettre en évidence des infections naturelles à entérovirus chez des jeunes porcs. Ce modèle porcin pourrait être mis à profit pour étudier la physiopathologie des infections à entérovirus et tester des moyens de lutte contre ces virusEnterovirus genus encompasses a number of non-enveloped RNA viruses grouped into 12 species, EV-A-J and Rhinovirus A-C. Group B coxsackieviruses (CV-B) belong to the EV-B species. CV-B and particularly CV-B4 is thought to be involved in the development of chronic diseases like type 1 diabetes (T1D). A strain of CV-B4 (CV-B4 E2) was isolated from the pancreas of a patient with T1D, and was able to induce a hyperglycemia in mouse. The mechanisms of the enteroviral pathogenesis of T1D are not well known yet. It has been observed that the infection of human monocytes with CV-B4 E2 in vitro can be enhanced by anti-VP4 antibodies bound to the virus, and human macrophages are also infected by CV-B4 in vitro. The in vitro studies are rich with information but in vivo infection models are needed to better understand the mechanisms of enterovirus infections. Despite the effect of enterovirus on health, the means in the fight against these viruses are limited.Our main objectives were i) to investigate CV-B4 E2-infection in mice and to determine whether monocytes / macrophages are targets of the virus in vivo ii) to implement a CV-B4 E2-induced diabetes model in mice iii) to study the anti-CV-B4 activity of various molecules in vitro iiii) To highlight the natural occurrence of enterovirus infections in animals.Viral RNA was found in vivo in monocytes (CD14+) and macrophages (F4/80+) of the spleen and in bone marrow cells of ICR-CD1 mice inoculated with CV-B4 E2. In vitro, CV-B4 E2 infected the CD14+ and the F4/80+ cells of the spleen. Bone marrow-derived macrophages (BMDM) were infected by CV-B4 in vitro. The serum of CV-B4 E2- infected mice enhanced in vitro the infection of spleen cells by CV-B4 E2 but not the infection of BMDM. ICR-CD1 mice, treated with a sub-diabetogenic dose of Streptozotocin β (STZ), and afterwards inoculated with CV-B4 E2 developped hyperglycaemia and hypoinsulinemia. The viral load of pancreas assessed by quantitative RT-PCR was not different in diabetic animals (STZ/CV-B4 E2) compared to non-diabetic animals inoculated with CV-B4 E2. Histological analysis of diabetic animals highlighted an inflammation of pancreas isletsPirodavir-derived molecules, which bind to the enteroviruses capsid, inhibited the infection with echovirus 7 and 11 but not the infection with CV-B4 E2 in vitro. On the other hand, it was displayed that an anti-CV-B4 E2 effect of fluoxetine in cultures of mouse pancreas fragments and mouse beta cells. The detection of anti-VP4 antibodies in serum by ELISA using a 50 amino acids peptide of VP4 from EV-G1 (a porcine enterovirus) was applied to piglets to highlight enterovirus infections. A strong sequence homology (88%) between the VP4 of EV-G1 and of other EV-G suggests that antibodies directed against viruses other than EV-G1 can be detected.In conclusion, CV-B4 E2 can infect monocytes and macrophages in vitro and in vivo in a murine system, and the virus can cause diabetes in mice previously exposed to low doses of STZ. Fluoxetine inhibits the infection of pancreatic cells with CV-B4 E2 in vitro. The detection of anti-EV-G1-VP4 antibodies highlighted natural enterovirus infections in young pigs. This porcine model could be used to study the pathophysiology of enterovirus infections and to evaluate approaches aimed to fight these viruses
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Marchal, Pierre-Olivier. "Rôle de NOV/CCN3 dans différents modèles in vivo de néphropathies et pathologies cardiovasculaires". Thesis, Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066321.
Abstract (sommario):
La maladie rénale chronique (MRC) est un véritable problème de santé publique. Bien qu'elle puisse avoir plusieurs origines, celle-ci est caractérisée par le développement d'une inflammation chronique ainsi qu'une fibrose conduisant à une diminution progressive de la fonction rénale. Il est nécessaire de trouver de nouvelles cibles thérapeutiques pour arrêter la progression de cette pathologie. La protéine NOV/CCN3 a été identifiée comme étant une cible potentiellement intéressante. Dans cette étude, nous avons montré que dans un modèle in vivo de néphropathie obstructive, NOV avait un rôle proinflammatoire et profibrotique. Dans un autre modèle in vivo de néphropathie hypertensive, nous avons montré que NOV était régulée par l'Angiotensine II (AngII) et pouvait inhiber l'expression du récepteur AT1R de l'AngII et ainsi limiter les effets délétères de cette hormone. Bien que contradictoires, ces résultats montrent un rôle important de NOV au cours du développement des néphropathies indiquant que cette protéine peut avoir des effets opposés en fonction du contexte pathologique. Enfin, du fait de l'étroite relation entre NOV et l'AngII, nous avons montré que NOV était aussi régulée par cette hormone au niveau aortique et avait un effet proinflammatoire au niveau vasculaire dans des conditions d'hypertension. L'ensemble de nos résultats montrent un rôle important de NOV dans ces différents types de pathologies et que cette protéine pourrait être une cible intéressante pour traiter les néphropathies ou encore les pathologies cardiovasculairesChronic kidney disease (CKD) is a major public health problem. Regardless of the primary cause, CKD is characterized by the development of chronic inflammation and fibrosis leading to progressive decline of renal function and eventually end-stage renal disease (ESRD). Actually, regular hemodialysis and renal transplantation are the only available therapies for ESRD patients. Therefore, there is an urgent need for new therapeutically targets against this incurable disease. Recently, the NOV/CNN3 protein was shown to be an interesting candidate. In this study we have shown that, in obstructive nephropathy in mice, NOV has profinflammatory and profibrotic effects. In addition, we have shown in a mouse model of hypertensive nephropathy, that NOV was regulated by Angiotensin II (AngII) and could inhibit AT1R receptor expression to limit the deleterious effects of this hormone. These results show an important role of NOV during the development of two different types of nephropathies and may indicate that this protein can have model specific effects. Finally, we have shown that NOV itself was also regulated by AngII in the aorta and has proinflammatory effects in hypertensive conditions. Taken together our results show an important role of NOV in these different types of pathologies and that this protein could be a key player in the development of CKD as well as vascular diseases. Nevertheless, further investigations are still required to better characterize the precise role of NOV in these pathological contexts
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Vautheny, Audrey. "Rôle de la neuroinflammation et du récepteur microglial TREM2 dans la progression de deux modèles de tauopathie". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS170.
Abstract (sommario):
Les processus de neuro-inflammation jouent un rôle majeur dans la maladie d'Alzheimer (MA). Des études génétiques récentes démontrent cette association entre neuro-inflammation et MA et impliquent notamment un gène, TREM2, qui code pour un récepteur exprimé à la surface de la microglie. La tauopathie est une lésion caractéristique de la MA. Elle se traduit par l’hyperphosphorylation et l’agrégation intraneuronale de la protéine Tau. Les travaux sur le rôle de TREM2 dans le développement de la pathologie Tau sont peu nombreux et donnent des résultats contradictoiresAinsi, l’objectif de ma thèse est d’étudier le rôle de la neuroinflammation et de TREM2 dans la progression de la tauopathie, dans deux modèles différents. Le premier est obtenu par injection stéréotaxique de vecteurs AAV dans la couche CA1 de l’hippocampe de souris déficientes ou non en TREM2. Ces vecteurs entrainent la surexpression de différentes formes de la protéine Tau humaine et permettent de récapituler les différents stades de la tauopathie.Nous avons en parallèle utilisé un modèle transgénique plus progressif de tauopathie, la souris THY-Tau22, afin d’étudier l’influence du stade de la pathologie dans l’effet provoqué par une déficience en TREM2 sur l’évolution de la pathologie. Notre étude a mis en évidence la toxicité des formes solubles de Tau dans le modèle AAV par rapport à ses formes agrégées. Le modèle transgénique THY-Tau22 nous a permis de mettre en évidence une augmentation des lésions tauopathiques dans les souris déficientes en TREM2 par rapport aux souris qui ne le sont pas, uniquement à un stade avancé. Cela suggère que, à l’instar des modèles amyloïdes, l’effet de la déficience en TREM2 sur le décours de la tauopathie est différent en fonction du stade considéréNeuroinflammation processes appear to play a major role in Alzheimer's disease (AD). Recent genetic studies support this correlation between neuroinflammation and AD and include a gene, TREM2, expressed on microglial surface. Tauopathy is a characteristic lesion of AD. It results in hyperphosphorylation and intraneuronal aggregation of Tau protein. In the literature, only few articles describe the role of TREM2 in the development of Tau pathology, and they report contradictory results. We therefore do not know for sure whether a deficiency in TREM2 has a deleterious effect or not on tauopathy. Thus, the goal of my thesis is to study the role of neuroinflammation and TREM2 in the progression of tauopathy, in two different models. The first is obtained by stereotaxic injection of AAV vectors into the CA1 layer of the hippocampus of TREM2-deficient or non-deficient mice. These vectors lead to the overexpression of different forms of the human tau protein, thus making it possible to recapitulate the different tauopathy stages.In parallel, we used a more progressive trangenic model of tauopathy, the THY-Tau22 mouse, to study the influence of TREM2 deficiency at different stage of the pathology. Our study demonstrated the toxicity of Tau soluble forms in the AAV model compared to its aggregated forms. The THY-Tau22 transgenic model allowed us to demonstrate an increase in tauopathic lesions in TREM2 deficient mice compared to wild type mice, at late stage only. This suggests that, similar to amyloid models, the effect of TREM2 deficiency on the course of tauopathy is influenced by the stage of the disease
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Kukavica-Ibrulj, Iréna, e Iréna Kukavica-Ibrulj. "Génomique fonctionnelle du régulateur transcriptionnel PYCR de Pseudomonas aeruginosa essentiel in vivo et comparaison des cinétiques d'infection pulmonaire chronique". Doctoral thesis, Université Laval, 2007. http://hdl.handle.net/20.500.11794/19688.
Abstract (sommario):
Pseudomonas aeruginosa est une bactérie pathogène opportuniste, hautement résistant à une multitude d’antibiotiques qui infecte principalement les patients immunosupprimés. Il représente la cause principale de morbidité et de mortalité chez les patients atteints de fibrose kystique (mucoviscidose). Le but principal de ce projet consistait à identifier et à caractériser des gènes essentiels à l’infection et au maintien de P. aeruginosa dans un modèle animal d’infection pulmonaire chronique. À partir d’une banque de mutants transpositionnels, nous avons identifié 148 mutants de P. aeruginosa déficients à causer l’infection pulmonaire chronique chez le rat. Suite à des analyses bioinformatiques, le mutant inactivant le gène PA5437 a été sélectionné. L’opéron adjacent code pour les sous unités du pyruvate carboxylase (pycA et pycB) et est régulé par le gène PA5437, d’où l’appellation pycR pour pyruvate carboxylase regulator. Le pycR a été identifié comme étant un régulateur transcriptionnel de type LysR ayant une région typique de liaison à l’ADN. Le codon d’initiation de la transcription des gènes pycR et pycA a été identifié par élongation d’amorce. La capacité de liaison de la protéine PycR à l’ADN a été confirmée à l’aide du gel à retardement. L’implication de PycR dans la virulence bactérienne in vivo a été confirmée par indice de compétition et après 7 jours d’infection le mutant déficient ΔpycR est complètement éliminé du poumon du rat. L’importance de PycR a aussi été confirmée in vitro à l’aide des tests phénotypiques et enzymatiques démontrant la déficience dans la production de la lipase, de l’estérase et du biofilm. Finalement, l’analyse des résultats métaboliques et transcriptomiques a confirmé l’importance de PycR dans la régulation du métabolisme de lipides, de l’activité lipolytique, de la respiration anaérobique, de la formation du biofilm et des gènes régulés par le quorum sensing. Dans un second volet, une étude comparative entre souches prototypes (PAO1 et PA14) de P. aeruginosa et un isolat clinique (LESB58) de la fibrose kystique a été réalisée dans un modèle de l’infection pulmonaire chronique chez le rat. Cette étude a permis d’identifier des différences significatives au niveau de la localisation bactérienne dans les tissus pulmonaires de l’isolat clinique LESB58. D’importantes différences ont également été notées au niveau des facteurs de virulence comme la mobilité et la formation du biofilm. À long terme, les nouvelles connaissances acquises en génomique fonctionnelle devraient permettre d’identifier et de développer de nouvelles approches thérapeutiques permettant de combattre et mieux comprendre les infections causées par cette bactérie.Pseudomonas aeruginosa est une bactérie pathogène opportuniste, hautement résistant à une multitude d’antibiotiques qui infecte principalement les patients immunosupprimés. Il représente la cause principale de morbidité et de mortalité chez les patients atteints de fibrose kystique (mucoviscidose). Le but principal de ce projet consistait à identifier et à caractériser des gènes essentiels à l’infection et au maintien de P. aeruginosa dans un modèle animal d’infection pulmonaire chronique. À partir d’une banque de mutants transpositionnels, nous avons identifié 148 mutants de P. aeruginosa déficients à causer l’infection pulmonaire chronique chez le rat. Suite à des analyses bioinformatiques, le mutant inactivant le gène PA5437 a été sélectionné. L’opéron adjacent code pour les sous unités du pyruvate carboxylase (pycA et pycB) et est régulé par le gène PA5437, d’où l’appellation pycR pour pyruvate carboxylase regulator. Le pycR a été identifié comme étant un régulateur transcriptionnel de type LysR ayant une région typique de liaison à l’ADN. Le codon d’initiation de la transcription des gènes pycR et pycA a été identifié par élongation d’amorce. La capacité de liaison de la protéine PycR à l’ADN a été confirmée à l’aide du gel à retardement. L’implication de PycR dans la virulence bactérienne in vivo a été confirmée par indice de compétition et après 7 jours d’infection le mutant déficient ΔpycR est complètement éliminé du poumon du rat. L’importance de PycR a aussi été confirmée in vitro à l’aide des tests phénotypiques et enzymatiques démontrant la déficience dans la production de la lipase, de l’estérase et du biofilm. Finalement, l’analyse des résultats métaboliques et transcriptomiques a confirmé l’importance de PycR dans la régulation du métabolisme de lipides, de l’activité lipolytique, de la respiration anaérobique, de la formation du biofilm et des gènes régulés par le quorum sensing. Dans un second volet, une étude comparative entre souches prototypes (PAO1 et PA14) de P. aeruginosa et un isolat clinique (LESB58) de la fibrose kystique a été réalisée dans un modèle de l’infection pulmonaire chronique chez le rat. Cette étude a permis d’identifier des différences significatives au niveau de la localisation bactérienne dans les tissus pulmonaires de l’isolat clinique LESB58. D’importantes différences ont également été notées au niveau des facteurs de virulence comme la mobilité et la formation du biofilm. À long terme, les nouvelles connaissances acquises en génomique fonctionnelle devraient permettre d’identifier et de développer de nouvelles approches thérapeutiques permettant de combattre et mieux comprendre les infections causées par cette bactérie.
The opportunistic pathogen Pseudomonas aeruginosa is highly resistant to most classes of antibiotics and causes a wide variety of infections in compromised hosts. In addition, it represents the major cause of morbidity and mortality in cystic fibrosis (CF) patients. The principal goal of the present research project was to identify and to characterise P. aeruginosa genes essential for causing a chronic lung infection. Using a PCR-based signature-tagged mutagenesis, we identified a P. aeruginosa STM5437 mutant having an insertion into the PA5437 gene; its inactivation causes attenuation of virulence in vivo. The PA5437 gene, now called pycR, regulates the adjacent operon encoding the pyruvate carboxylase subunits (pyruvate carboxylase regulator). PycR has the signature of a putative transcriptional regulator with a predicted helix-turn-helix motif binding to a typical LysR DNA-binding motif identified in the PA5436 (pycA)-PA5437 (pycA) intercistronic region. Transcriptional start sites of pycA and pycR were identified by primer extension and the DNA binding capacity of PycR was confirmed by a DNA mobility gel shift assay. Genome-wide transcriptional profiling indicated that the genes whose control were differentially expressed by PycR implicated genes responsible for lipid metabolism, lipolytic activity, anaerobic respiration, biofilm formation and a number of quorum sensing regulated genes. This study defines PycR as a major regulator in virulence and where mutations in pycR have pleiotropic effects on the expression of multiple virulence factors such as lipase, esterase and biofilm formation. The expressions of several of these genes are associated with chronic lung persistence. In the second part of the study, P. aeruginosa prototype strains PAO1 and PA14 were compared with the CF isolate LESB58 in the rat model of chronic lung infection. This comparative study identified major differences for LESB58; in vivo in bacterial localisation in the rat lung and in vitro for motility and biofilm production. Functional genomics of P. aeruginosa will provide new insights for the development of novel therapeutic targets. Genomic biodiversity may explain the variation in severity of the P. aeruginosa infections in CF disease.
The opportunistic pathogen Pseudomonas aeruginosa is highly resistant to most classes of antibiotics and causes a wide variety of infections in compromised hosts. In addition, it represents the major cause of morbidity and mortality in cystic fibrosis (CF) patients. The principal goal of the present research project was to identify and to characterise P. aeruginosa genes essential for causing a chronic lung infection. Using a PCR-based signature-tagged mutagenesis, we identified a P. aeruginosa STM5437 mutant having an insertion into the PA5437 gene; its inactivation causes attenuation of virulence in vivo. The PA5437 gene, now called pycR, regulates the adjacent operon encoding the pyruvate carboxylase subunits (pyruvate carboxylase regulator). PycR has the signature of a putative transcriptional regulator with a predicted helix-turn-helix motif binding to a typical LysR DNA-binding motif identified in the PA5436 (pycA)-PA5437 (pycA) intercistronic region. Transcriptional start sites of pycA and pycR were identified by primer extension and the DNA binding capacity of PycR was confirmed by a DNA mobility gel shift assay. Genome-wide transcriptional profiling indicated that the genes whose control were differentially expressed by PycR implicated genes responsible for lipid metabolism, lipolytic activity, anaerobic respiration, biofilm formation and a number of quorum sensing regulated genes. This study defines PycR as a major regulator in virulence and where mutations in pycR have pleiotropic effects on the expression of multiple virulence factors such as lipase, esterase and biofilm formation. The expressions of several of these genes are associated with chronic lung persistence. In the second part of the study, P. aeruginosa prototype strains PAO1 and PA14 were compared with the CF isolate LESB58 in the rat model of chronic lung infection. This comparative study identified major differences for LESB58; in vivo in bacterial localisation in the rat lung and in vitro for motility and biofilm production. Functional genomics of P. aeruginosa will provide new insights for the development of novel therapeutic targets. Genomic biodiversity may explain the variation in severity of the P. aeruginosa infections in CF disease.
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Sayegh, Souraya. "Les cellules souches mésenchymateuses dérivées du tissu adipeux dans le traitement de la polyarthrite rhumatoïde : approches in vitro et in vivo". Thesis, Toulouse 3, 2019. http://www.theses.fr/2019TOU30236.
Abstract (sommario):
La polyarthrite rhumatoïde (PR) est une maladie auto-immune inflammatoire caractérisée par une synovite chronique aboutissant à la dégradation du cartilage et une érosion osseuse. Malgré la présence de stratégies thérapeutiques capables de contrôler la maladie, il n'existe aujourd'hui aucun traitement curatif. De nombreuses études ont déjà démontré les capacités immunomodulatrices des cellules souches mésenchymateuses dérivées du tissu adipeux (ADSC) in vitro et dans des modèles murins de PR. Cependant, cet effet n'a toujours pas été traduit efficacement dans un contexte clinique. L'objectif de cette étude est de définir comment l'inflammation pourrait dicter l'efficacité thérapeutique des ADSC par (i) une approche translationnelle en utilisant des liquides synoviaux (SF) de patients atteints de PR ou (ii) en étudiant l'effet des injections d'ADSC dans deux modèles différents d'arthrite expérimentale. Nous montrons que les SF pro-inflammatoires conservent la capacité des ADSC à proliférer ainsi que leur phénotype et induisent l'expression des gènes COX-2, IDO, IL-6, TSG6, ICAM-1, VCAM-1 and PD-L1 qui sont tous impliqués dans le potentiel immunomodulateur des ADSC. Nous démontrons que l'effet des SF est directement médié par la voie de signalisation TNF/NF-?B et partiellement par l'IL-6. De plus, le pré-traitement des ADSC avec les SF inflammatoires renforce leur capacité à moduler les marqueurs pro-inflammatoires des macrophages (CD40 et CD80) et à induire des lymphocytes T régulateurs (Tregs). In vivo, les ADSC injectées par voie intra-péritonéale ont aggravé la progression d'arthrite dans le modèle de transfert de sérum K/BxN en traitement préventif mais n'ont eu aucun effet sur les scores arthritiques en traitement thérapeutique. En outre, un effet protectif sur la progression de l'arthrite n'a été observé que lorsque les ADSC ont été injectées par voie intra-articulaire. L'ensemble de nos résultats mettent en avant l'influence de l'environnement inflammatoire local sur les effets thérapeutiques des ADSC et suggèrent leur adressage direct aux sites inflammatoires qui stimulent leur potentiel immunomodulateur et maximisent leur intérêt cliniqueRheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune inflammatory disease characterized by chronic synovitis that leads to bone erosion and cartilage degeneration. Despite the presence of therapeutic strategies capable of managing disease progression, there is currently no cure available. Adipose-derived mesenchymal stem cells (ADSC) have been successfully shown to have immunomodulatory abilities both in vitro and in animal models of RA. However, this effect has yet to be efficiently translated in clinical settings. In the present study, we aimed to define how inflammation could play part in dictating the therapeutic efficiency of ADSC through either (i) a translational approach by using synovial fluids from RA patients (RASF) or (ii) by studying the effect of ADSC injections in two different RA experimental models. Here, we show that pro-inflammatory RASF preserve ADSCs' proliferative capacity and phenotype and up-regulates the gene expression of COX-2, IDO, IL-6, TSG6, ICAM-1, VCAM-1 and PD-L1 which are all involved in the immunomodulatory potential of ADSC. We demonstrate that RASF effect is directly mediated by TNF/ NF-?B signaling pathway and partially by IL-6. Moreover, pre-treating ADSC with inflammatory RASF functionally enhances their ability to alter pro-inflammatory markers in macrophages (CD40 and CD80) and induce regulatory T cells (Tregs). In vivo, ADSC worsened disease progression in the K/BxN serum transfer arthritis model when injected intraperitoneally as a preventive protocol but did not have any effect on arthritic scores when injected as a therapeutic protocol. Only when ADSC were injected intra-articularly did we observe protective effects on the progression of arthritis. Altogether, this work puts forward the influence of the local inflammatory environment on ADSC therapeutic effects and suggests a direct delivery to sufficiently inflamed sites in order to properly prime their immunomodulatory potential and maximize their clinical benefits
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Hamidouche, Katia. "Intérêt de stratégie multi-cibles (cholinergique et sérotoninergique) pour le traitement de la maladie d'Alzheimer : étude in vivo et ex vivo dans différents modèles murins". Thesis, Normandie, 2018. http://www.theses.fr/2018NORMC406.
Abstract (sommario):
Environs 70 millions de personnes seront atteintes par la maladie d’Alzheimer (MA) en 2030 et les coûts engendrés par la prise en charge des patients affectés par cette pathologie excédera quatre fois les coûts des maladies cancéreuses. Dans le but lutter contre cette pathologie multifactorielle, des stratégies thérapeutiques combinatoires ainsi que le développement de MTDL « Multi Target Directed Ligands » suscitent un grand intérêt. Dans ce contexte, l’association d’inhibiteurs de l’acétylcholinestérase (AChE) avec les agonistes des récepteurs sérotoninergiques de type 4 (5-HT4) a montré des effets bénéfiques sur la mémoire et la protection du cerveau chez les rongeurs. Après avoir démontré l’avantage de l’association de la galantamine, un inhibiteur de l’AChE avec le RS 67333, un agoniste des récepteurs 5-HT4 dans un modèle de déficit mnésique induit par la scopolamine sur les performances de mémoires de travail et de référence, nous avons étudié le donecopride, un MTDL récemment développé, à la fois inhibiteur de l’AChE et agoniste partiel des récepteurs 5-HT4. Chez les souris sauvages, une administration unique de donecopride augmente la sécrétion du neuropeptide protecteur sAPPα et a démontré des effets anti-amnésiants et pro-cognitifs. Dans un modèle amyloïdogénique de la MA (5xFAD), six mois de traitement chronique par le donecopride ont amélioré les performances de mémoire de travail à l’âge de 9 mois, sans modifier la densité des plaques amyloïdes au niveau cérébral. Par ailleurs, nous avons également étudié les effets d’un autre composé MTDL « 7m » qui est à la fois agoniste des récepteurs 5-HT4 et antagoniste des récepteurs 5-HT6, qui a montré des effets anti-amnésiants chez les souris sauvages lorsque le déficit mnésique est induit par administration de scopolamine. Ainsi, la modulation chronique et simultanée de différentes cibles centrales d’intérêt représente un potentiel thérapeutique important dans le cadre du traitement de la MAIn 2030, the number of people affected by Alzheimer’s disease (AD) is expected to reach almost 70 million, and the cost of the disease would be over four folds cost of cancer diseases care. To face the multifactorial disease combining drugs arouse a big interest and the concept of MTDL “Multi Target Directed Ligands” has emerged. Thus, combining acetylcholinesterase (AChE) inhibitors with serotonergic receptor type 4 (5-HT4) showed beneficial effects on memory and brain protection in rodents. First, we showed beneficial effects of galatamine, an AChE inhibitor while combined to RS 67333, a 5-HT4 receptors partial agonist, on working and reference memory performances in a pharmacological model with scopolamine-induced amnesia. Then, we assessed effects of donecopride, the AChE inhibitor and partial agonist of 5-HT4 receptors. Donecopride, which increases sAPPα release in cell culture and C57BL/6 mice, showed anti-amnesiant and pro-cognitive effects in NMRI mice. In 5xFAD mice, an amyloidogenic mice model of AD, six months of chronic treatment of donecopride improves working memory performances in 9 months old 5xFAD mice, but does not affect spatial learning performances neither flexibility. Moreover, donecopride inhibits AChE and does not affect 5-HT4 receptor expression level neither amyloid plaque density in the brain. In the other hand, we also showed that the MTDL, which modulate 5-HT4 and 5-HT6 receptors, recovers working memory performances in NMRI mice where scopolamine induced memory deficit. Thus, hitting multiple targets, particularly while administered early and chronically, accounts for a hopeful strategy to better face AD
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Velly, Lionel. "Effets neuroprotecteurs des agents anesthésiques sur des modèles in vitro et in vivo d'ischémie cérébrale". Thesis, Aix-Marseille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010AIX22957/document.
Abstract (sommario):
L’effet neuroprotecteur des agents anesthésiques est maintenant établi depuis plus de 30ans. Cependant, les mécanismes impliqués restent imparfaitement élucidés. A cours de cetravail nous avons étudié deux volets de leur protection :La première partie porte sur l’implication de la transmission glutaminergique dans leurseffets neuroprotecteurs directs, c'est-à-dire lorsqu’ils sont utilisés au cours d’une l’ischémiecérébrale. Nous avons étudié deux agents anesthésiques de classe distincte: le propofol et lesévoflurane sur des co-cultures de neurones et d’astrocytes corticaux de rat soumis à uneprivation en oxygène et en glucose transitoire (POG). Nous avons ainsi observé que laprésence de propofol ou de sévoflurane pendant la POG prévenait la mort neuronale,l’accumulation de glutamate extracellulaire et la diminution de la capture du glutamateinduites par l’ischémie. Nous avons également montré que cette restauration partielle del’activité de capture du glutamate impliquait des transporteurs distincts entre le propofol et lesévoflurane.La deuxième partie a porté sur la neuroprotection obtenue par un préconditionnement (PC)pharmacologique liée à l’utilisation avant l’ischémie d’agents anesthésique volatils. Nousavons tout d’abord confirmé in vitro l’existence d’une telle protection avec le sévoflurane etmis en évidence le rôle primordial, au cours de cette protection, des canaux potassiques ATPdépendantset des radicaux libres. Puis sur un modèle in vivo d’occlusion transitoire del’artère cérébrale moyenne, le PC par sévoflurane a induit une neuroprotection supérieure àcelle obtenue avec l’utilisation de sévoflurane uniquement pendant l’ischémie. Cependantcette protection est transitoire et ne perdure pas dans le temps. Le sévoflurane ne fait queretarder, sans l’empêcher, la mort neuronale liée à l’apoptose. Il offre cependant une fenêtrethérapeutique intéressanteThe neuroprotective effect of anesthetic agents is now established for over 30 years.However, the mechanisms involved remains to be fully explored. This work focuses on twoneuroprotective strategies:The first part is on the involvement of glutamatergic transmission in their directneuroprotective effects. We studied the effect of two separate classes of anesthetic agents:propofol and sevoflurane on co-cultures of cortical neurons and astrocytes from rats subjectedto a transient oxygen and glucose deprivation (OGD) mimicking cerebral ischemia. Weobserved that the presence of propofol or sevoflurane during OGD prevented neuronal death,accumulation of extracellular glutamate and decreased uptake of glutamate induced byischemia. We also demonstrated that this partial restoration of glutamate uptake mediated bypropofol and sevoflurane involved differential transporters.The second part deals with the neuroprotection achieved by pharmacologicalpreconditioning with regard to the use of volatile anesthetic agents before ischemia. We firstconfirmed in vitro the existence of such protection with sevoflurane. We also highlighted therole of ATP-dependent potassium channels and reactive oxygen species in sevofluranepreconditioning-induced neuroprotection. Then, using an in vivo model of focal transientischemia, we showed that sevoflurane preconditioning significantly improved functionaloutcome and reduced infarct volume. However, this protection was transient. Sevofluraneonly delayed the neuronal death associated with apoptosis but offers an interesting therapeuticwindow
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Mauduit, David. "Thérapie cellulaire dans un modèle préclinique de Dystrophie Musculaire de Duchenne : Développement par édition génomique de cellules thérapeutiques et traçables in vivo par imagerie médicale". Thesis, Paris Est, 2016. http://www.theses.fr/2016PESC0085.
Abstract (sommario):
La dystrophie musculaire de Duchenne de Boulogne (DMD) est une myopathie héréditaire liée au chromosome X et causée par une mutation du gène de la dystrophine. Affectant un garçon sur 5000, cette maladie entraine une dégénérescence progressive des muscles striés squelettiques et cardiaques. A ce jour, la DMD demeure une maladie invalidante, incurable et les personnes atteintes ont une espérance de vie de 30 ans. Parmi les thérapies innovantes en cours de développement, la thérapie cellulaire est une stratégie prometteuse. Cependant elle présente plusieurs limitations notamment liées à l’efficacité des types cellulaires utilisés et le devenir des cellules après injection in vivo. Le premier objectif de cette thèse est le développement d’une méthode d’imagerie pour étudier à l’échelle de l’organisme et de façon non invasive la biodistribution et la survie des cellules suite à leur injection systémique dans un modèle préclinique pertinent, le chien GRMD (Golden Retriever Muscular Dystrophy), un modèle animal reproduisant fidèlement le phénotype DMD. Notre attention s’est portée sur l’utilisation du symporteur sodium iode (NIS) pour le suivi non invasif des cellules. Nous avons obtenu des cellules myogéniques exprimant le NIS, autorisant leur visualisation par scintigraphie grâce à la propriété d’absorption du technétium 99m conférée par ce symporteur. Nous avons montré in vitro que le NIS est fonctionnel pour la capture de radioactivité même après une différentiation avancée des cellules. En parallèle, nous nous sommes intéressés au type cellulaire. Les cellules primaires ayant une capacité de renouvellement limitée, cela restreint leur utilisation en thérapie et leur modification génomique. Afin de contourner cette limitation, plusieurs protocoles visant à obtenir des cellules souches pluripotentes induites (iPSCs) dérivées de cellules canines ont été utilisés. De plus, pour ne plus être dépendant de l’immunosuppression imposée par les greffes allogéniques, nous avons utilisé le système d’édition génomique CRISPR/Cas9 pour mettre au point une correction des cellules GRMD afin de permettre la réalisation de greffes autologues. Nous avons également utilisé le système CRISPR/Cas9 pour réaliser l’insertion ciblée du gène NIS dans un site précis du génome des cellules. Les résultats obtenus autorisent le développement de programmes comparant le potentiel thérapeutique de cellules dans un modèle préclinique de la DMDDuchenne muscular dystrophy (DMD), an X-linked recessive myopathy, is caused by mutations in the dystrophin gene. One boy out of 5000 is affected by this disease, which induces a progressive loss of skeletal striated and cardiac muscles. To date, DMD remains an invalidating disease and there is no cure for it. People suffering from DMD usually die in their 30’s. Among the innovative therapies currently under development, cell therapy is a promising strategy. However, it has some limitations related notably to a low efficiency of tested therapeutic cells and their tracking in vivo after injection. The first aim of this thesis is to develop an imaging method allowing non-invasive monitoring of biodistribution and survival of cells at the scale of a large organism, following systemic injection in the GRMD dog (Golden retriever muscular Dystrophy, a relevant animal model of DMD, as it replicates finely the DMD phenotype). We took interest in the sodium iodide symporter (NIS) as an imaging reporter. We induced the expression of the NIS in myogenic cells to allow visualization of the cells by scintigraphy thanks to its ability to uptake technetium 99m. We showed that NIS is functional in the cells and they maintain their ability to differentiate. Primary cells have a limited self-renewal capability restraining their use in human cell therapy and gene editing. To overcome this limitation, we used several protocols to derive induced pluripotent stem cells (iPSCs) from adult canine cells. Furthermore, to avoid immune suppression protocols, we used the CRISPR/Cas9 gene editing tools to design a correction strategy of the GRMD mutation for future autologous injections. We also used CRISPR/Cas9 to perform a targeted integration of the NIS gene in a safe harbor locus. Results allow us to develop protocols to compare the therapeutic potential of candidate cells in a preclinical model of DMD
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Mehanna, Chadi Jean. "Traitement du glaucome : modèles expérimentaux toxicologiques et application à l'étude des combinaisons fixes in vitro et in vivo". Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05P615.
Abstract (sommario):
Le glaucome est une neuropathie optique progressive aboutissant à la cécité et dont le principal facteur de risque est l’hypertonie intraoculaire. Son traitement médical consiste à diminuer la production de l’humeur aqueuse ou à augmenter son drainage. Les collyres administrés par voie topique induisent des effets secondaires au niveau de la surface oculaire, en particulier au niveau du film lacrymal, principalement à cause du chlorure de benzalkonium. Une culture primaire de mucocytes conjonctivaux, principal élément produisant la couche mucinique du film lacrymal, permettrait d'étudier les effets des collyres sur ces cellules et les mécanismes induisant les effets toxiques. Dans le présent travail, nous avons réussi à obtenir des nodules de mucocytes à partir d’explants de conjonctives de rats. Des travaux supplémentaires sont nécessaires afin de pouvoir isoler les mucocytes des autres populations présentes dans le milieu et afin de maintenir la prolifération cellulaire après ablation des explants. Un autre modèle expérimental a permis de confirmer in vitro l’importante toxicité des associations non fixes par rapport aux combinaisons fixes. Un effet cytoprotecteur a été retrouvé pour le timolol et la brimonidine associée à l’alcool polyvinylique. Nous avons également amélioré le modèle d’analyse de la cytotoxicité in vitro en appliquant le double marquage à la technique de spectrophotométrie fluorescente en microplaques, le but étant d’avoir des résultats plus rigoureux et de faire une analyse multiparamétrique. Enfin, nous avons étudié la toxicité des collyres sur la surface oculaire de l’animal en utilisant la microscopie confocale in vivo, de même que nous avons essayé de retrouver les effets cytoprotecteurs de certains produits. Des travaux supplémentaires sont toutefois nécessaires. Tous ces modèles sont importants pour l’étude collyres antiglaucomateux et pour diminuer leur toxicité afin d’augmenter la compliance des patientsGlaucoma is a progressive optic neuropathy leading to blindness and caused by ocular hypertension. Its medical treatment is based on the reduction of aqueous humor production or on the acceleration of its drainage. Eye drops are instilled topically and induce undesired effects on the ocular surface, particularly on the tear film, mainly because of benzalkonium chloride. Conjunctival goblet cells are the major cells responsible of the production of the tear film mucin layer, and a primary culture of these cells would be useful for the study of eye drop toxic effects on these cells and the underlying mechanisms. In the present work, goblet cell nodules were obtained from cultured rat conjunctival explants. Further work is needed to isolate goblet cells from the other cell populations present in the culture and to maintain cell proliferation after explant withdrawal. In another in vitro experimental model, we confirmed the important citoxicity of non fixed associations compared to the fixed combinations. A cytoprotective effect was found with timolol and brimonidine with polyvinyl alcohol. We also improved the model we use in cytotoxicity study in vitro by using a double staining with microplate fluorescent spectrophotometry. Our goal was to get more accurate results and to perform a multiparametric analysis. Finally, we used in vivo confocal microscopy to study eye drop cytotoxic effects on animal ocular surface and to confirm the cytoprotective effects of some products. Further work is however needed. All these models are important for the évaluation of antiglaucomatous eye drops and for the reduction of their toxicity in order to increase patient compliance
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Humbert, Jean-Marc. "Différenciation et modification génétique des cellules dendritiques en vue de l'élaboration d'un modèle d'étude "ex-vivo" du rôle de DC-SIGN et de la langérine dans les étapes précoces de l'infection des cellules dendritiques par le CMV". Nantes, 2012. http://www.theses.fr/2012NANT2033.
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Sirois, Martin G. "Étude de la perméabilité endothéliale à l'albumine à l'aide de modèles in vivo et in vitro". Thèse, Université de Sherbrooke, 1993. http://hdl.handle.net/11143/12088.
Abstract (sommario):
L'augmentation de la perméabilité vasculaire (PV) et de l'oedème sont des caractéristiques majeures de la réaction inflammatoire. Nous avons étudié les effets de divers médiateurs inflammatoires ainsi que la contribution de cellules sanguines sur le contrôle de la perméabilité des cellules endothéliales. Dans la première section de notre étude, nous avons utilisé un marqueur spécifique à l'albumine soit le bleu d'Evans (BE) afin de déterminer l'effet du facteur d'activation plaquettaire (PAF), de l'endothéline-1 (ET-1) et la contribution des plaquettes et des leucocytes polymorphonucléaires (PMNLs) sur la PV dans un modèle in vivo chez le rat éveillé. Nos travaux ont montré que le PAF et l'ET-1 induisent l'extravasation protéique dans les voies respiratoires, le tractus gastrointestinal ainsi que dans le coeur pour l'ET-1. La déplétion des plaquettes qui constituent la principale source du TxA2 ou l'inhibition du TxA2 à l'aide d'antagonistes a permis de réduire jusqu'à 90% l'effet inflammatoire du PAF au niveau des voies respiratoires et l'effet de l'ET-1 au niveau du tractus gastrointestinal jusqu'à 100%. Les plaquettes de rats sont dépourvues de récepteurs au PAF et à l'ET-1 et requièrent vraisemblablement la contribution d'un autre type cellulaire pour leur activation. La déplétion des PMNLs nous a permis de montrer que l'activation des plaquettes à faible dose de PAF (1.0 µg/kg) est indépendante des PMNLs. Tandis qu'à forte dose de PAF (5.0 µg/kg), les PMNLs pourraient contribuer à l'activation des plaquettes. L'effet de l'ET-1 (1.0 nmol/kg) est également dépendant de l'activation des PMNLs au niveau du tractus gastrointestinal. Dans la deuxième section de notre étude, nous avons étudié l'effet de divers médiateurs sur la perméabilité des cellules endothéliales d'aorte bovine (CEAB) en culture, par le taux de clairance de l'125I-albumine à travers la monocouche de CEAB. L'ET-1 et le LTD4 (10-7 et 10-6 M) ont augmenté la clairance de 125I-albumine de 55%. Le PAF seul n'a pas modulé le taux de clairance basal. Toutefois, l'injection de PAF après un traitement avec l'ET-1 ou le LTD4 a permis d'augmenter jusqu'à 98% la clairance basale induite par ces deux médiateurs. Ces résultats pourraient suggérer que l'activation des récepteurs de l'ET-1 et du LTD4 induirait l'expression du récepteur du PAF et la contraction des BAEC suite à la liaison du PAF à son récepteur. Nos travaux ont permis de montrer que la perméabilité des cellules endothéliales pouvait être affectée directement par divers médiateurs et que les éléments sanguins peuvent également contribuer à la régulation de la perméabilité vasculaire.
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Lauruol, Florian. "Étude des propriétés prioniques de la huntingtine mutée dans des modèles in vitro et in vivo". Master's thesis, Université Laval, 2019. http://hdl.handle.net/20.500.11794/35845.
Abstract (sommario):
La maladie de Huntington (MH) est une maladie neurodégénérative causée par la mutation du gène codant la protéine huntingtine (HTT). Cette protéine, exprimée par toutes les cellules de l'organisme, peut adopter une forme mutée qui lui confère un aspect toxique. Dans les cellules, la mHTT va s'agréger et former di érentes structures dont des agrégats, marqueurs distinctifs de la maladie, ou des brilles. Dans le cerveau, la présence de la mHTT va causer une mort neuronale dramatique entraînant, à l'échelle de l'individu, une panoplie de troubles moteurs, cognitifs et psychiatriques. Depuis plusieurs années des études tendent à démontrent que la mHTT peut se propager de cellules à cellules et corrompre la HTT non mutée tel un prion. Pour mon projet de recherche, j'ai ainsi investigué les propriétés prioniques de la mHTT sous sa forme fibrillaire particulièrement toxique. Des fibrilles synthétiques contenant la mutation pathologique ont été utilisées pour infecter des cellules en culture et des souris. De cette manière, nous avons démontré la capacité des fibrilles à se propager et à provoquer des dommages divers dans 3 types de cellules humaines. La présence des fibrilles a également induit l'agrégation de la forme non mutée de la HTT endogène, normalement présente dans les cellules. Chez la souris, ces résultats ont été confirmés suite à l'injection des fibrilles dans le cerveau des animaux. La présence des fibrilles dans le système nerveux central des souris sauvages a provoqué la manifestation de signes caractéristiques de la MH (troubles cognitifs et moteurs). De plus, une apparition de déficits moteurs et cognitifs qui s'apparentent à la maladie a été observée chez des souris R6/2, modèle transgénique de la MH, suite à l'injection des fibrilles. Les résultats de mon projet de recherche renforcent ainsi l'hypothèse prionique de la mHTT et appuient l'hypothèse que ces propriétés pourraient être impliquées dans la physiopathologie de la MH.
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Jouan-Lanhouet, Sandrine. "Modèles de nécroptose induite par TRAIL (TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand) in vitro et in vivo". Rennes 1, 2011. http://www.theses.fr/2011REN1B151.
Abstract (sommario):
TRAIL, un nouvel anticancéreux, induit préférentiellement l’apoptose des cellules tumorales. Cependant, d’autres types de mort cellulaire ont pu être mis en évidence, comme la nécroptose. Le microenvironnement tumoral pourrait influencer le type de mort cellulaire induit par les agents anti-cancéreux. Ainsi, le pH extracellulaire (pHe), qui est plus acide dans les tissus tumoraux que dans les tissus sains, sensibilise les cellules humaines cancéreuses coliques HT-29 et hépatiques HepG2 à TRAIL via une mort cellulaire de type nécroptose. Cette mort dépend des récepteurs TRAIL-R1/2, et des kinases RIPK1 et RIPK3 qui sont impliquées dans l’activation de la protéine PARP-1, conduisant à la déplétion des cellules en ATP. D’autre part, nous avons montré qu’un modèle d’hépatite aigue induite par la concanavaline A chez la souris C57Bl/6 est un modèle relevant de nécroptose induite par TRAIL in vivo. Ainsi, l’étude de plusieurs modèles in vitro et in vivo de nécroptose induite par TRAIL nous a donc permis d’identifier de nouveaux acteurs clés impliqués dans l’induction de ce type de mort cellulaireTRAIL, a new anticancer drug, induces preferably apoptosis in tumor cells. However, recent discoveries have highlighted several other types of cell death, in particular regulated necrosis (or necroptosis). Tumor microenvironment could modify the type of cell death induced by anticancer drugs. Thus, the extracellular pH (pHe), which is more acidic in tumor than in normal tissues, sensitizes human HT-29 colon cancer cells and HepG2 liver cancer cells to a necroptosis-like cell death. This TRAIL-induced necroptosis involves TRAIL-R1/R2, and RIPK1 and RIPK3 kinases which are involved in PARP-1 activation, leading to high intracellular ATP depletion. Moreover, we showed that Concanavalin A-induced acute hepatitis in C57Bl/6 mice is a relevant model of TRAIL-induced necroptosis in vivo. In conclusion, our present study dedicated to several models of TRAIL-induced necroptosis in vitro and in vivo allowed us to identify new key proteins, as well as to better understand molecular mechanisms underlying this cell death signaling pathway
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Pâquet, Sophie. "UGT2B15, une cible pharmacologique dans le traitement du cancer de la prostate : étude Ex vivo et mise en place de modèles In vivo". Thesis, Université Laval, 2011. http://www.theses.ulaval.ca/2011/28347/28347.pdf.
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Gagnon, Mélanie. "Rôle des probiotiques lors d'infections entériques d'origine bactérienne et virale : analyses in vitro et études in vivo chez des modèles murins". Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24866/24866.pdf.
Abstract (sommario):
Afin de stabiliser le microbiote intestinal et prévenir ou traiter les infections entériques, il est suggéré depuis des décennies d’utiliser certaines bactéries lactiques dites ‘probiotiques’. La consommation de ces bactéries, qui sont des composants normaux du microbiote intestinal, aurait des effets bénéfiques sur la santé. Cependant, leur éventuel rôle prophylactique ou thérapeutique n’a été que très peu étudié. Dans une première partie, cinq bifidobactéries probiotiques isolées de fèces de nouveaux-nés ont été sélectionnées et caractérisées. Parmi celles-ci, une souche de Bifidobacterium thermacidophilum (RBL71) démontrant une forte résistance aux conditions retrouvées dans le tractus intestinal, une forte adhésion aux cellules intestinales Caco-2 et une inhibition de l’adhésion d’Escherichia coli O157:H7 (50%) aux cellules Caco-2 a été administrée par voie orale à des souris BALB/c. Ce gavage probiotique avant infection à E. coli O157:H7 a diminué les comptes fécaux de ce pathogène ainsi que les dommages histologiques intestinaux comparativement au groupe témoin. Une plus forte production d’anticorps spécifiques anti-E. coli O157:H7 a également été détectée chez les souris recevant la souche probiotique. Dans une seconde partie, l’efficacité de trois autres souches de bifidobactéries a été vérifiée contre des entéropathogènes viraux. Une souche de B. thermophilum (RBL67) démontrant la plus forte inhibition de l’attachement du rotavirus (98%) aux cellules intestinales Caco-2 et HT-29 a été administrée par voie orale à des souris néonatales CD-1 infectées par un rotavirus. La concentration de virus dans le contenu intestinal était significativement moins élevée à 48 heures post-infection chez le groupe recevant des probiotiques avant infection par rapport au groupe témoin. De plus, la durée de la diarrhée a été plus courte et une production d’anticorps spécifiques anti-rotavirus a été détectée chez les souris recevant des probiotiques avant l’infection. Ces résultats suggèrent que la souche RBL67 pourrait avoir un impact positif sur l’évolution des infections causées par des pathogènes viraux invasifs tel que rotavirus et que la souche RBL71 pourrait ainsi jouer un rôle dans la prévention ou le traitement d’infections entériques aux pathogènes bactériens non invasifs tel que E. coli O157:H7. Dans ces deux cas, l’inhibition de l’adhésion du pathogène serait le mécanisme d’action le plus probable. Cette démonstration de l’activité de ces nouvelles souches de bifidobactéries d’origine humaine contre E. coli O157:H7 et rotavirus, en interférant sur le mécanisme d’infection de ces entéropathogènes, soutient leur utilisation potentielle chez l’humain pour prévenir les infections entériques transmises par voie orale.For decades, the use of certain lactic acid bacteria as so-called probiotics has been suggested in order to stabilize the intestinal microbiota and thus prevent or treat enteric infections. Consumption of these bacteria, which are normal components of human intestinal microbiota, is reputed to be beneficial to health. However, their possible role as therapeutic or prophylactic agents has been studied very little. Five probiotic bifidobacteria isolated from the feces of newborn infants were first selected and characterized. Among these, a strain of Bifidobacterium thermacidophilum (called RBL71) demonstrating strong resistance to the conditions prevailing in the digestive tract, strong adhesion to Caco-2 intestinal cells and inhibition of the adhesion of Escherichia coli O157:H7 (50%) to Caco-2 cells was administered via the oral route to BALB/c mice. Mice thus treated before challenge had reduced fecal counts of E. coli O157:H7 and less intestinal histological damage than the control group. Greater production of O157:H7-specific antibody was detected in mice receiving the probiotic. In a second study, the effectiveness of three other strains of bifidobacteria against viral enteropathogens was examined. A strain of B. thermophilum (called RBL67) demonstrating the strongest inhibition (98%) of rotavirus attachment to Caco-2 and HT-29 intestinal cells was administered via the oral route to neonatal CD-1 mice infected with rotavirus. The viral concentration of the intestinal contents 48 hours after infection was significantly lower in the probiotic-treated group than in the control group. In addition, the diarrhea was of shorter duration and rotavirus-specific antibody production was detected in the mice receiving the probiotic before infection. These results suggest that strain RBL67 has a positive impact on the evolution of infections by invasive viral pathogens such as rotavirus and that strain RBL71 could thus have a role to play in the prevention or treatment of enteric infections by non-invasive bacterial pathogens such as E. coli O157:H7. In both cases, inhibition of adhesion of the pathogen seems to be a plausible mechanism of action. This demonstration of the activities of these new bifidobacterial strains of human origin against E. coli O157:H7 and rotavirus suggests their potential for interfering with the mechanism of infection of enteropathogens and supports their use in humans as possible agents for preventing enteric infections transmitted by the oral route.
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Rovere, Maria. "Reconstruction cornéenne : traitement des déficiences en cellules souches limbiques totales et bilatérales associées ou non à une atteinte du stroma". Thesis, Lyon, 2018. http://www.theses.fr/2018LYSE1263.
Abstract (sommario):
Certaines brûlures oculaires graves ou d'autres pathologies oculaires rares peuvent être associées à une perte totale de cellules souches épithéliales de la cornée (DCSL), ce qui conduit à une opacification de la cornée par invasion de la conjonctive. Lorsque la DCSL est totale et bilatérale, le limbe controlatéral n'est pas disponible pour la greffe de limbe autologue ou la culture de cellules souches autologues limbiques et la transplantation allogénique de la cornée est impossible car toujours rejetée en raison de la néovascularisation. Une thérapie innovante testée avec succès au sein de notre laboratoire, en collaboration avec le service d'ophtalmologie des HCL, consiste en une greffe autologue de Feuillet Epithélial (FE) dérivé de Muqueuse Orale (MO). Cette approche permet de restaurer la transparence et autorise, si nécessaire, une greffe cornéenne complémentaire. Cette technique a montré son efficacité lors d'un essai clinique conduit dans notre hôpital mais le dispositif breveté permettant le détachement non enzymatique des feuillets cultivés n'est plus disponible en Europe. Nous avons donc mis au point un nouveau procédé de production de FE dérivant de la MO dont la preuve de concept a été obtenue à partir d'études in-vitro et ex-vivo. En effet, un détachement avec 0,5 mg / mL de collagénase n'endommage pas le FE de MO et les protéines de la membrane basale, et, dans un modèle de stroma porcin exvivo, ces feuillets adhérents au stroma, continuent à se renouveler sous la forme d'épithélium différencié. De plus, dans le cas d'une opacité stromale associée à une DCSL, une greffe secondaire de cornée est nécessaire pour améliorer l'Acuité Visuelle (AV), c'est pourquoi nous avons cherché à développer pour ces patients à haut risque de rejet, un stroma décellularisé. Ce stroma pourrait également répondre à la pénurie de cornées dans les pays en voie de développement grâce à sa conservation longue et facile. La lyophilisation a été combinée à la décellularisation des cornées au SDS à 0,1 %, validée sur les cornées humaines sur le maintien de leur transparence et de l'ultrastructure du stroma associé à l'absence des antigènes HLA-ABC et HLA-DR. Enfin, dans un modèle de Kératoplastie Lamellaire Antérieure Profonde (KLAP) ex-vivo, nous avons montré que les cellules épithéliales et stromales de la cornée humaine receveuse colonise le stroma décellularisé. Ainsi, nos travaux permettent de proposer un traitement des DSCL totales et bilatérales associées ou non à une atteinte du stromaSome severe ocular burns or other rare ocular pathologies may be associated with a complete loss of corneal epithelial stem cells (LSCD), leading to an opacification of the cornea by invasion of the conjunctiva. When DCSL is total and bilateral, contralateral limbus is not available for autologous limb transplant or limbal autologous stem cell culture, and allogeneic transplantation of the cornea is not an option since neovascularization is constantly responsible for graft rejection. An innovative therapy tested with success in our laboratory, in collaboration with the ophthalmology department of the HCL, consists in an autologous Epithelial Cell Sheet (ECS) graft derived from Oral Mucosa (MO). This approach restores transparency and allows in a second step a complementary corneal graft when necessary. This technique has been shown to be effective in a clinical trial conducted in our hospital, but the patented device for the non-enzymatic detachment of cultivated ECS is no longer available in Europe. We have therefore developed a new method for the production of ECS from OM, the proof of concept of which has been obtained from in-vitro and ex-vivo studies. Indeed, detachment with 0.5 mg / mL of collagenase does not damage ECS from OM and basement membrane proteins, and in an ex-vivo porcine stroma model, these cell sheets adhered on corneal stroma, continued to self-renew and generated a differentiated epithelium. Since stromal opacity associated with DCSL requires a secondary corneal graft to improve Visual Acuity (VA), we also sought to develop for these patients with high rejection risk, a new approach for the generation of decellularized stroma. Such a procedure for the production of decellularized stroma was also aimed at allowing a money-saving and reliable long-term storage for stromal grafts and thus circumventing the shortage of corneas in developing countries. Our process, combining lyophilization with decellularization of the corneas at 0.1 % SDS, was validated on human corneas regarding the maintenance of stroma transparency, the stromal ultrastructure associated with the absence of HLA-ABC and HLA-DR antigens. Finally, in an ex-vivo model of Deep Anterior Lamellar Keratoplasty (DALK), we have shown that the epithelial and stromal cells of the recipient human cornea colonized efficiently the decellularised stroma. Overall, our work makes it possible to propose a treatment for total and bilateral LSCD associated or not with lesions of the stroma
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Benkhelifa, Samir. "Evaluation des mécanismes d'absorption intestinale des céphalosporines a-aminées : utilisation de modèles "in vitro" et "ex vivo"". Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05P620.
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Beaufrere, Bernard. "Modèles d'étude du métabolisme protéique in vivo à l'aide de leucine marquée aux isotopes stables et radioactifs". Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO1T074.
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Burnouf, Sylvie. "Etude in vivo des relations entre la pathologie Tau et le système neurotrophique BDNF/TRKB". Lille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010LIL2S026.
Abstract (sommario):
La mémoire est une fonction cognitive permettant l’encodage, le stockage et la restitution des informations que nous percevons. Elle est essentielle à la construction d’une histoire personnelle et à une interaction adéquate de l’individu avec son environnement. Ces phénomènes nécessitent une plasticité cellulaire importante au niveau des structures cérébrales que sont la région hippocampique et le cortex. Au niveau moléculaire, les neurotrophines ont été montrées comme étant des médiateurs importants de la plasticité structurale et fonctionnelle. La neurotrophine BDNF (Brain-Derived Neurotrophic Factor) et son récepteur de haute affinité TrkB (Tropomyosine-related kinase B) sont fortement exprimés dans ces régions cérébrales à haut degré de plasticité, où, au delà du simple rôle de support trophique nécessaire à la survie des neurones, ils régulent la transmission synaptique et la synaptogenèse. Leur implication dans les phénomènes de mémoire a été montrée dans de nombreuses études. Dans des situations pathologiques où la mémoire est altérée, comme c’est le cas dans la maladie d’Alzheimer (MA), les patients perdent la capacité de se rappeler leur passé et par conséquent d’échanger avec eux-mêmes et avec les autres. Par là même, cette maladie neurodégénérative dont le principal facteur de risque est l’âge, est l’un des plus grands fléaux de notre société de par le vieillissement de la population. Au niveau histopathologique, le cerveau des patients présente deux lésions caractéristiques : les dépôts amyloïdes, composés de peptides β-amyloïdes (Aβ) accumulés sous forme de plaques extracellulaires, et la dégénérescence neurofibrillaire (DNF), correspondant à l’inclusion intraneuronale de protéines Tau hyper- et anormalement phosphorylées. De nombreuses études ont également montré une dérégulation du système neurotrophique BDNF/TrkB dans l’hippocampe et le cortex des patients atteints de MA, suggérant un rôle dans la physiopathologie de cette maladie. L’étude de modèles animaux modélisant le versant amyloïde de la MA a permis de mettre en évidence un effet de l’accumulation du peptide Aβ sur la diminution des niveaux de BDNF dans le cortex. Cependant, l’impact de la pathologie Tau sur le système BDNF/TrkB est actuellement inconnu. Or, l’atteinte progressive des structures cérébrales par la pathologie Tau chez les patients atteints de MA s’opère de manière stéréotypée et est corrélée au développement des altérations mnésiques. La région hippocampique est la première touchée, avant même l’apparition des premiers signes cliniques, puis la pathologie Tau va s’étendre à l’ensemble du cortex dans des stades plus avancés de MA. Pour ces raisons, nous portons au sein du laboratoire un intérêt particulier pour la pathologie Tau, les mécanismes conduisant à son accumulation et ses conséquences sur la physiologie cellulaire. Afin de répondre à ces questions, nous disposons d’un modèle murin transgénique de pathologie Tau, la souris THYTau22, surexprimant une isoforme de Tau humaine mutée sur deux sites et sous contrôle d’un promoteur neuronal. Ce modèle présente dès l’âge de trois mois des altérations progressives de l’apprentissage et de la mémoire en parallèle d’une accumulation de protéine Tau principalement au niveau hippocampique, sans perte neuronale majeure, ce qui lui confère les caractéristiques d’un stade précoce de MA. Il s’agit par conséquent d’un modèle tout à fait pertinent pour étudier l’impact de la pathologie Tau sur le système BDNF/TrkB dans l’hippocampe. Par un ensemble de techniques biochimiques, nous avons mis en évidence le fait que les niveaux de transcrits et de protéines BDNF et TrkB n’étaient pas diminués dans l’hippocampe des souris THY-Tau22 avant l’âge de douze mois, suggérant l’absence d’impact majeur de la pathologie Tau sur leur expression. En revanche, des expériences électrophysiologiques menées sur des tranches d’hippocampe ont permis de mettre en évidence le fait que l’effet facilitateur du BDNF sur la transmission synaptique, appelé facilitation synaptique, est retrouvé aboli dans la région CA1 de l’hippocampe des souris THYTau22, et ce dès l’âge de 3 mois. Cette forme de plasticité synaptique requiert le couplage TrkB/récepteur glutamatergique NMDA. En accord avec les données biochimiques montrant une diminution de l’expression des différentes sous-unités du récepteur NMDA dans l’hippocampe, nos données électrophysiologiques mettent en évidence un défaut de la réponse des récepteurs NMDA lors de l’application de leur agoniste spécifique, le NMDA, sur des tranches hippocampiques de souris THY-Tau22. L’ensemble de ces données suggère qu’une forme de plasticité synaptique médiée par le BDNF est altérée de manière précoce par la pathologie Tau, et ce via une altération fonctionnelle des récepteurs NMDA, contribuant potentiellement aux altérations mnésiques observées dans la MA. Après avoir mis en évidence une altération de la fonctionnalité du système neurotrophique BDNF par la pathologie Tau, nous avons voulu investiguer si, en retour, une modulation du système BDNF pouvait avoir un impact sur la pathologie Tau. De nombreuses études suggèrent que la pratique d'une activité physique préviendrait le risque de survenue de la MA. Or, l’un des effets majeurs de l’exercice physique au niveau central est d’induire une augmentation chronique du BDNF hippocampique. Afin d'étudier les effets à long terme de l’exercice physique volontaire sur la pathologie Tau, des roues ont été mises à disposition de souris THY-Tau22 de trois mois et de leurs contrôles, et ce durant neuf mois. Nos résultats mettent en évidence une diminution de la pathologie Tau chez les souris THY-Tau22 ayant pratiqué une activité physique, en parallèle d’une amélioration de la mémoire spatiale et d’une augmentation des niveaux de BDNF hippocampique, suggérant les effets bénéfiques d’une modulation endogène et à long terme du système BDNF/TrkB sur la pathologie Tau et ses conséquences physiopathologiques. L’ensemble des résultats de cette thèse suggère par conséquent la présence d’un « dialogue » entre la pathologie Tau et le système neurotrophique du BDNF, mettant en exergue l’importance d’une modulation des neurotrophines dans le traitement de la maladie d’AlzheimerMemory is the ability of our brain to encode, store and recall our experiences. It holds our personal history and is required for an appropriate interaction with the environment. Such events require a high level of plasticity in the hippocampus and the cortex. At the molecular level, neurotrophins are important modulators of structural and functional plasticity. Among them, Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF) and its high-affinity receptor TrkB (Tropomyosine-related kinase B) are highly expressed in these cerebral regions, where beyond their role in trophic supply they can modulate synaptic transmission and synaptogenesis. Their role in memory processes has been shown in various studies. When memory is lost, as in Alzheimer’s disease (AD), people lose the ability to comprehend the world and as a result, they lose connections with themselves and with others. The main risk factor of AD being age, this neurodegenerative disease is becoming a major public health problem due to population ageing. AD patients brain exhibit two pathological hallmarks : extracellular amyloid deposits made of β-amyloid peptides (Aβ) and intraneuronal neurofibrillary tangles (NFT) made of aggregated hyper- and abnormally phosphorylated Tau proteins. In addition, BDNF/TrkB neurotrophic system has been shown to be impaired in AD patients’ cortex and hippocampus, suggesting a role in the disease physiopathology. In vivo studies using amyloid models of AD have pointed out a correlation between Aβ accumulation and BDNF decreased expression. However, whether Tau pathology impacts on BDNF/TrkB system signaling is unknown. Yet, in AD, Tau pathology follows a stereotyped and sequential pathway correlated with ognitive deficits. The lesions first appear in the hippocampal region, even before the first symptoms, and then reach the whole cortex at later stages. Therefore, in the laboratory we are most interested in Tau pathology, the mechanisms leading to its aggregation and the consequences on cellular physiology. We have developed the THY-Tau22 transgenic mouse model overexpressing a double-mutated human Tau transgene, which is under the control of a neuronal promoter. This model exhibits progressive learning and memory deficits, starting from the age of 3 months, in parallel to hippocampal Tau pathology, without major neuronal loss thereby mimicking early stages of AD. These characteristics make it a relevant model to study Tau pathology effects on hippocampal BDNF/TrkB system. Using biochemical techniques we have shown that BDNF/TrkB mRNA and protein levels were not decreased in THY-Tau22 mice hippocampus until the age of 12 months, suggesting no major influence of Tau pathology on BDNF/TrkB expression. However, electrophysiological experiments performed on hippocampal slices pointed out the fact that BDNF facilitating effects on synaptic transmission, known as synaptic facilitation, were abolished in hippocampal CA1 region of THYTau22 mice, as early as 3 months of age. This form of synaptic plasticity requires coupling of TrkB with NMDA glutamate receptor (NMDAR). In agreement with biochemical experiments showing a decreased expression of hippocampal NMDAR subunits, electrophysiological assessments on hippocampal slices uncovered impairment of NMDAR-mediated response. Overall, these data suggest that a form of BDNF-mediated synaptic plasticity is impaired in an early manner by Tau pathology, through functional alterations of NMDAR, thereby potentially contributing to memory alterations observed in AD. To further evaluate relationships between BDNF/TrkB signaling and Tau pathology, we investigated whether BDNF modulation had an impact on Tau pathology. Several studies suggest that physical activity prevents cognitive decline in AD. Yet, one major central effect of exercise is to induce a chronic increase of hippocampal BDNF. To study long-term effects of voluntary exercise on Tau pathology, 3 month-old THY-Tau22 mice and controls were given free access to a running wheel during 9 months. Our results show a decrease of Tau pathology in running THY-Tau22 mice hippocampus, together with prevention of spatial memory deficits and increase of hippocampal BDNF levels, suggesting beneficial effects of long-lasting modulation of BDNF/TrkB system on Tau pathology and its physiopathological consequences. Overall, results gathered during this thesis suggest a bilateral relationship between Tau pathology and BDNF/TrkB neurotrophic system, thereby highlighting the importance of neurotrophin modulation for AD treatment
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Sénéchal, Stéphanie. "Effets du diesel dans les maladies allergiques : modulation de la synthèse de chimiokines et développement d'un modèle allergique in vivo". Lille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003LIL2MT12.
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Tournier, Jean-Nicolas. "Influence du stress sur l'établissement de la réponse vaccinale : étude in vivo chez la souris dans un modèle de stress de contention et modélisation in vitro sur des cultures dentritiques". Université Joseph Fourier (Grenoble), 2001. http://www.theses.fr/2001GRE18010.
Abstract (sommario):
Le stress chronique induit des perturbations immunologiques. L'objectif de ce travail a été de caractériser les modulations de la réponse vaccinale induites par le stress. Dans une première partie, nous avons étudié la réponse immunitaire au vaccin anti-tétanique sur des souris soumises à un stress chronique de contention. Nos résultats montrent que le stress induit une altération majeure de la réponse cellulaire T anti-tétanique, associée à une diminution et un retard de la réponse humorale spécifique. Dans un deuxième temps nous avons mis au point un modèle in vitro. Nous avons développé un modèle de culture de cellules dendritiques murines dérivées de la moelle osseuse, sur lequel nous avons appliqué un stress physique, l'hyperthermie, composante du stress de contention. Nous montrons que l'hyperthermie régule la sécrétion des cytokines et les fonctions des cellules dendritiques. A 39 ʿC,la production d'interleukine-12 est augmentée, alors que celle de tumor necrosis factor-a et d'interleukine-10 est diminuée, ce qui est corrélé avec une capacité plus importante des cellules dendritiques à activer des lymphocytes T allogéniques. A 40 ʿC, la sécrétion de l'ensemble des trois cytokines est diminuée ce qui est corrélé avec une diminution de leur capacité à activer des lymphocytes T allogéniques. Ces résultats permettent de proposer que l'hyperthermie puisse jouer un rôle dans la régulation de la réponse immunitaire adaptativeChronic stress is known to induce immunological disorders. The aim of this work is to characterise the stress-induced modulation of the vaccine response. We first investigated the consequences of chronic restraint stress on the immune response to tetanus toxin in mice. Our results have shown that stress induces a severe disruption of T-cell specific response associated with decreased and delayed humoral specific response. Next, we investigated the effects of environmental stress or of mediators of stress on antigen-presenting cells in vitro. We developed a model of murine bone marrow-derived dendritic cells. Dendritic cells were exposed to hyperthermia which is a component of the contention stress. We have shown that hyperthermia regulate cytokines secretion and functions of dendritic cells. At 39ʿC interleukin-12 secretion increased, but tumour necrosis factor-a and interleukin-10 secretions decreased. Moreover, 39ʿC-exposed dendritic cells activated more efficiently allogeneic T-cells. Dendritic cells exposed at 40ʿC decreased their overall secretion, which is correlated with a decrease of their ability to activate T-cell reponses