Letteratura scientifica selezionata sul tema "Maladie glomérulaire"

La Haute Autorité de santé (HAS) a publié une mise à jour des recommandations concernant la prise en charge de la maladie rénale chronique (MRC)1. La MRC est définie par la présence de signes d’atteinte rénale persistant pendant plus de trois mois : une baisse du débit de filtration glomérulaire (DFG) < 60 mL/min/1,73 m², une protéinurie, une hématurie, une leucocyturie ou une anomalie morphologique rénale à l’échographie. Le déclin physiologique du DFG pourrait être de 2 mL/min/1,73 m² par an. Il est considéré comme modéré entre 2 et 5 mL/min/1,73 m² par an et rapide au-delà de 5 mL/min/1,73 m² par an. Les auteurs recommandent un dépistage de la MRC en cas de diabète, d’hypertension artérielle, de maladie cardiovasculaire, de maladie auto-immune, d’obésité, d’affection urologique, d’antécédent familial d’insuffisance rénale chronique terminale et d’expositions à des toxiques comme le plomb ou à des traitements néphrotoxiques comme les anti-inflammatoires non stéroïdiens.

L’insuffisance rénale chronique est une définition biologique caractérisée par la diminution du débit de filtration glomérulaire. Quelle qu’en soit la cause initiale, son origine est toujours une réduction néphronique, une diminution du nombre d’unités fonctionnelles du rein, appelées néphrons. Après une agression rénale initiale, les néphrons sains restants vont assurer la filtration permettant le maintien d’une fonction rénale normale. Mais, progressivement, ces néphrons vont s’altérer et vont être remplacés par du tissu fibreux. Cette altération du parenchyme va entraîner un ensemble de symptômes biologiques et histologiques réunis sous le terme de maladie rénale chronique : augmentation de la créatininémie, protéinurie, glomérulosclérose et fibrose interstitielle.

Au cours des trente dernières années, des progrès majeurs ont été réalisés dans la prise en charge des enfants souffrant d’une maladie rénale chronique (MRC). Cependant, les données épidémiologiques existantes proviennent essentiellement des registres de traitement de suppléance de l’insuffisance rénale terminale. L’incidence et la prévalence aux stades plus précoces de MRC restent donc mal connues, mais de rares études en population suggèrent que la prévalence de la MRC, tous stades confondus, pourrait concerner jusqu’à 1 % de la population pédiatrique. Les désordres congénitaux, incluant les hypodysplasies rénales et uropathies malformatives (CAKUT) et les néphropathies héréditaires, sont responsables de la moitié aux deux tiers des cas de MRC de l’enfant dans les pays industrialisés, alors que les néphropathies acquises prédominent dans les pays en développement. La progression de la MRC est plus lente chez les enfants avec une maladie congénitale que chez ceux ayant une néphropathie glomérulaire, et d’autres facteurs de risque de progression ont également été identifiés. Alors que la survie des enfants présentant une MRC s’est continuellement améliorée au cours du temps, la mortalité reste 20 à 30 fois supérieure à celle de la population générale pédiatrique.

La glycoprotéine Lu/BCAM, a initialement été découverte comme un antigène de groupe sanguin. Etant fortement exprimée dans l’endothélium rénal, on suggère qu'elle a un rôle majeur dans l'adhérence leucocytaire ainsi que dans le contrôle de permsélectivité glomérulaire. C'est un récepteur avec deux types moléculaire. D'une part la laminine α5 qui compose en particulier les laminines 10 et 11 de la matrice sous-endothéliale, d'autre part l'intégrine α4ß1 (VLA-4) présente à la surface leucocytaire. Les souris Lu/BCAM1' présentent de légères anomalies au niveau de la morphologie glomérulaire, telles qu'un épaississement local de la membrane basale glomérulaire (MBG) et parfois un élargissement des pieds des podocytes. Nous avons donc émis deux hypothèses : Premièrement, l'expression endothéliale de Lu/BCAM pourrait favoriser l'adhérence leucocytaire à l’endothélium via l'intégrine α4ß1 (VLA-4) ; deuxièmement, Lu/BCAM pourrait limiter la permsélectivité glomérulaire en favorisant l'ancrage des cellules endothéliales à la MBG contenant la laminine. Afin de tester notre première hypothèse, un modèle de glomérulonéphrite rapidement progressive (GNRP) a été induit par injection de sérum néphrotoxique (NTS) contenant un anticorps anti-MBG. Les souris Lu/BCAM~ NTS-traitées montrent une protection dans le contexte de protéinurfe, de la fonction rénale, de l'histologie rénale, de la formation des glomérulaires à croissant, du dépôt de fibrine, du nombre de podocyte et de l'infiltration leucocytaires (CD3, F4/80, MAC-1, MAC-3, CD68). Le test d'adhérence leucocytaire humain a confirmé que les leucocytes adhèrent sur Lu-Fc via α4ß1. Pour répondre à notre deuxième hypothèse, les souris ont été soumises au modèle d'HTA par perfusion d'angiotensine II pendant 28 jours ou par administration d'un inhibiteur de NO synthase (L-NAME) pendant 90 jours. Les deux traitements induisent une augmentation similaire de la pression artérielle chez les deux groupes de souris. Pourtant, les souris Lu/BCAM ~ présentent une augmentation plus importante de l'albuminurie avec un traitement à l'AngII et au L-NAME comparées aux souris contrôles. Une précipitation massive de l'albumine a été fréquemment observée dans la chambre urinaire chez les souris Lu/BCAM1' traitées à l'AngII. De plus, nous avons testé la permsélectivité vasculaire au niveau des carotides. La diffusion sous endothéliale de dextran (70KDa) couplé au FITC était augmentée en absence de Lu/BCAM. Enfin, les souris Lu/BCAM ~ présentent une augmentation de perméabilité au BE au niveau des reins. Cette hyperperméabilité n'est pas différente dans le cerveau, la rate ou le foie. En conclusion, nos résultats suggèrent que : 1, Lu/BCAM entraine une accumulation des leucocytes (notamment monocytes et polynucléaires neutrophiles) dans le glomérule inflammatoire. Les effets de cette Glycoprotéine sur le recrutement leucocytaire sont possibles via la liaison Lu/BCAM/VLA-4. 2, Lu/BCAM n'a pas d'effet sur la pression artérielle systolique induite par l'AnglI mais elle joue un rôle essentiel dans la perméabilité glomérulaire au cours de l'HTA et dans la perméabilité endothéliale extra-rénale
Lu/BCAM blood group glycoprotein, due to its important expression in renal endothelium, is suggested involved in facilitating accumulation of leukocyte and maintained the glomerular permselectivity. Lu/BCAM has been recognized as a receptor for two types of molecules. On one hand, it is a receptor for laminin α5 chain which constitute in particular lamininlO and 11 in the sub-endothelial matrix; on the other hand, it is a receptor for integrin α4ß1 (VLA-4) which present on the surface of leukocyte. Lu/BCAM-/-mice exposes abnormalities characterized by an irregular thickening of the glomerular basement membrane and sometimes an abnormal enlargement of foot process of podocyte. We have made two hypotheses: firstly, Lu/BCAM could promote leukocyte adhesion on endothelium via integrin α4ß1; secondly, Lu/BCAM could limit glomerular permselectivity by maintaining EC to GBM containing laminin α5 chain. To respond our first hypothesis, a passive RPGN model has been used. In this model, Lu/BCAM-/-mice attenuated glomerular accumulation of T cells and macrophages, crescent formation, and proteinuria, correlating with reduced fibrin and platelet déposition in glomeruli. Furthermore, we found pro-adhesive interaction between human monocyte α4ß1 integrin and Lu/BCAM proteins. For proving our second hypothesis, hypertension and glomerulosclerosis were induced by high salt diet (5% NaCl) and chronic infusion of Angiotensin II (l μ g/kg/min) or PBS in an osmotic mini-pump for 28 days or by administration of a NO syntheses inhibitor L-NAME in Lu-/-mice for 90 day in Lu/BCAM-/- mice and their wild-type littermates. Despite of a similar arterial tension, Lu/BCAM-/- hypertensive mice exhibited higher albuminuria. During Dextran-FITC (70K Da) diffusion test, a vascular hyper-permeability was observed in Lu/BCAM-/- carotid compared with their WT group. Furthermore, Lu/BCAM-/- mice displayed also a renal hyper-permeability during evans bleu permeability test, but this hyperpermeability was not found in the other organs such as brain, spleen and liver. In conclusion, the results indicated that: 1, Lu/BCAM-/- mice could possess a nephroprotective function in the early stage of GNRP when the leukocyte (monocyte and macrophage in particular) attached to into inflammatory glomerulus. It's function of leukocyte recruitment was possibly accomplished via VLA-4 ; 2,Lu/BCAM has no effect on systolic blood pressure but it plays a major role in glomerular permselectivity during hypertension and it has a extra reral endotherial permeability

Cette thèse avait pour but d'illustrer l'intérêt de méthodes statistiques avancées lorsqu'on s'in­ téresse aux associations entre différents facteurs et la progression de la maladie rénale chronique (MRC). Dans un premier temps, une revue de la littérature a été effectuée alin d'identifier les méthodes classiquement utilisées pour étudier les facteurs de progression de la MRC ; leurs limites et des méthodes permettant de mieux prendre en compte ces limites ont été discutées. Notre second travail s'est concentré sur les analyses de données de survie et la prise en compte de la censure par intervalle, qui survient lorsque l'évènement d'intérêt est la progression vers un stade spécifique de la MRC, et le risque compétitif avec le décès. Une comparaison entre des modèles de survie standards et le modêle illness-death pour données censurées par intervalle nous a permis d'illustrer l'impact de la modélisation choisie sur les estimations à la fois des effets des facteurs de risque et des probabilités d'évènements, à partir des données de la cohorte NephroTest. Les autres travaux ont porté sur les analyses de données longitudinales de la fonction rénale. Nous avons illustré l'intérêt du modèle linéaire mixte dans ce contexte et présenté son extension pour la prise en compte de sous-populations de trajectoires de la fonction rénale différentes. Nous avons ainsi identifier cinq classes, dont une avec un déclin très rapide et une autre avec une amélioration de la fonction rénale au cours du temps. Des perspectives de travaux liés à la prédiction permettent enfin de lier les deux types d'analyses présentées dans la thèse
The objective of this thesis was to illustrate the benefit of using advanced statistical methods to study associations between risk factors and chrouic kidney disease (CKD) progression. In a first time, we conducted a literature review of statistical methods used to investigate risk factors of CKD progression, identified important methodological issues, and discussed solutions. In our sec­ ond work, we focused on survival analyses and issues with interval-censoring, which occurs when the event of interest is the progression to a specifie CKD stage, and competing risk with death. A comparison between standard survival models and the illness-death mode! for interval-censored data allowed us to illustrate the impact of modeling on the estimates of both the effects of risk factors and the probabilities of events, using data from the NephroTest cohort. Other works fo­ cused on analysis of longitudinal data on renal function. We illustrated the interest of linear mixed mode! in this context and presented its extension to account for sub-populations with different trajectories of renal function. We identified five classes, including one with a strong decline and one with an improvement of renal function over time. Severa! perspectives on predictions bind the two types of analyses presented in this thesis

Hypertension artérielle résistante et maladie rénale chronique : Déterminants et risques associésL’hypertension résistante, définie par une pression artérielle au-dessus de la cible en dépit de la prise de trois antihypertenseurs à dose optimale dont un diurétique, est fréquemment associée à la maladie rénale chronique (MRC). Sa prévalence, ses déterminants et l’impact potentiel de la MRC sur son pronostic à long terme sont mal connus, notamment chez le sujet âgé. Dans l’étude des 3 cités, incluant 4262 personnes de plus de 65 ans traitées pour hypertension, la prévalence de l’hypertension apparemment résistante (HTAR) - la notion de traitement à dose optimale étant inconnue - était de 11,8% vs 5,2% chez ceux avec vs sans MRC (définie par une fonction rénale < 60 mL/min/1.73 m2). Nous avons montré que l’apparition d’une HTAR était plus fortement liée à la rapidité du déclin annuel de la fonction rénale qu’à son niveau, indépendamment des autres facteurs de risque : obésité, diabète, sexe masculin, antécédent cardiovasculaire. Comparé au groupe de référence (avec hypertension contrôlée et sans MRC), les personnes avec une HTAR et une MRC n’avaient pas de risque significativement plus élevé de mortalité toute cause, mais avaient deux fois plus de risque d’accident vasculaire cérébral (AVC), létal ou non, et de récurrence d’un AVC ou d’un événement coronaire, et trois fois plus de décès coronaire. Cependant, l’’hypothèse d’un effet aggravant de la MRC sur le pronostic de l’HTAR n’a pas été confirmé (interaction non significative).Dans la cohorte CKD-REIN, incluant plus de 3000 patients avec une MRC modérée ou avancée suivis en néphrologie (âge moyen, 70 ans, 60% d’hommes), nos résultats préliminaires montrent une prévalence élevée d’HTAR, 36,7%, et plusieurs facteurs de risque potentiellement modifiables : adhérence médiocre au traitement, absence de diurétique, consommation de sel en excès, obésité.Dans l’ensemble, ces travaux montrent l’importance de la MRC dans le développement de l’HTAR et des risques cardiovasculaires associés, et suggère des moyens de prévention au-delà des traitements médicamenteux
Resistant hypertension and chronic kidney disease: Determinants and outcomesResistant hypertension defined as blood pressure above goal despite simultaneous use of 3 antihypertensive classes at optimal doses including a diuretic, is commonly associated with chronic kidney disease (CKD). Resistant hypertension prevalence and determinants, and the impact of CKD on its long term outcomes are poorly known, particularly in the elderly population.In the 3 Cities cohort, including 4262 community-dwelling elderly individuals, aged 65 years or older treated for hypertension, the prevalence of apparent treatment resistant hypertension (aTRH) – because of lack of information on optimal treatment dose – was 11.8% vs 5.2% in those with vs without CKD (defined as estimated glomerular filtration rate < 60 mL/min/1.73 m2). We showed that new-onset aTRH was more strongly related to the speed of kidney function decline than kidney function level itself, independent of other risk factors: male sex, obesity, diabetes, and history of cardiovascular disease. Compared to the reference group (with controlled hypertension and no CKD), participants with aTRH and CKD had no significantly higher risk of all-cause mortality, but had a risk of fatal or non-fatal stroke and of recurrent stroke or coronary events more than twice as high, and of coronary death more than three times higher. However, the hypothesis that CKD may worsen the prognosis of aTRH was not confirmed (no significant interaction).In the CKDREIN cohort, which included more than 3000 nephrology outpatients with moderate or severe CKD (mean age, 70 years, 60% of men), our preliminary results showed a high prevalence of aTRH, 36,7% and several potentially modifiable risk factors : poor treatment adherence, lack of diuretic use, excess salt intake and obesity.Overall, this work shows the importance of CKD in the development of aTRH and associated cardiovascular outcomes, and suggests means for prevention beyond drug therapy

La présence pathognomonique d'IgA dans le mésangium glomérulaire des patients atteints de néphropathie à IgA suggère un contrôle anormal du métabolisme des IgA dimériques dans cette maladie. Dans ce travail nous avons approfondi l'hypothèse d'une origine muqueuse des IgA mésangiales. Pour cela, nous avons déterminé les cellules B du sang périphérique, activées, produisant des IgA, en transit entre les différents sites muqueux ainsi que les cellules B amygdaliennes à différents stades de maturation chez des patients atteints de néphropathie à IgA et des sujets contrôles. L'expression d'une part quantitative de molécules d'adhésion leucocytaires sur les lymphocytes T et B et d'autre part qualitative de molécules d'adhésion dans les différentes régions amygdaliennes a été analysée dans ces différents groupes de patients. L'influence de l'amygdalectomie sur les taux sériques d'IgA dimériques, chez les patients atteints de néphropathie à IgA a également été étudiée. Le rôle de la structure polymérique des IgA dans la formation des dépôts a de plus été déterminé dans un modèle animal de néphropathie à IgA basé sur la production in vivo d'IgA dimériques à partir de cellules d'hybridome issues de cellules provenant de plaques de Peyer. [. . . ]

L'hormone de croissance (GH) et la somatostatine interviennent de façon opposée dans l'inflammation aiguë et la fibrose, en particulier dans le rein. La GH participe au développement de la fibrose glomérulaire. Nous nous sommes posés deux questions : (1) ces effets profibrosants de la GH dépendent-ils de sa liaison au récepteur de la GH déjà identifié ?, (2) la GH agit-elle indépendamment de l 'IGF-1? Afin de rechercher si les effets profibrosants de la GH sur le glomérule sont médiés par la liaison de la GH au récepteur de la GH décrit, nous avons analysé les reins de souris invalidées pour le gène du récepteur de la GH/GHBP après induction d 'un diabète expérimental. Les souris invalidées pour le gène du récepteur de la GH/GHBP sont apparues protégées du développement de la fibrose glomérulaire associée au diabète. Par ailleurs, puisque les IGFBP modulent l'action des IGF, et par conséquent de la GH, nous aYons analysé la susceptibilité des souris transgéniques pour l'IGFBP-1 humaine à développer une fibrose glomérulaire. Les résultats attendus étaient que la surexpression de l'IGFBP-1 en limitant la biodisponibilité de l'IGF-1 pourrait lever le rétrocontrôle négatif exercé normalement par l'IGF-1 sur la sécrétion de GH, et ainsi favoriser le développement d'une fibrose glomérulaire. Nous avons effectivement observé l'accumulation d'un matériel fibreux dans le mésangium chez les souris transgéniques IGFBP-1 homozygotes âgées de 3 mois. Celle-ci était caractérisée par un excès de laminine et de collagène de type IV et l'apparition de collagène de type 1. Cette fibrose glomérulaire survenait en l'absence d'hypertrophie glomérulaire et d 'hypercellularité. Parce qu'une réduction du nombre de néphrons à la naissance peut être impliquée dans le développement d'une fibrose glomérulaire, nous avons ensuite vérifié l'impact de la surexpression de l'IGFBP-1 sur le développement rénal, en particulier sur le nombre de néphrons. Lorsque seul l'allèle paternel était exprimé chez les souris transgéniques, nous avons observé une réduction du nombre de néphrons d'environ 20%. Lorsque l'IGFBP-1 était exprimé chez la mère, et quel que soit le phénotype du fœtus (homozygote, hétérozygote ou non-transgénique), un retard de croissance intra-utérin survenait entraînant également une réduction néphronique d'environ 20%. Puisque certains groupes de souris dont le nombre de néphrons était réduit de 20% ne développaient pas de fibrose glomérulaire à l'âge adulte, ce déficit néphronique n'intervient pas dans le développement de la fibrose glomérulaire chez les souris transgéniques pour l'IGFBP-1. La somatostatine exerce un rôle anti-inflammatoire en partie en augmentant la réponse aux glucocorticoïdes. Afin de déterminer si cet effet est associé à une augmentation de l 'expression du récepteur des lucocorticoïdes (GR), nous avons étudié le rôle de la somatostatine sur la liaison des glucocorticoïdes aux cellules appartenant à la lignée macrophagique murine RAW 264. 7. Nous avons montré que la somatostatine augmentait la liaison des glucocorticoïdes de manière dépendante de la dose - la dose la plus efficace était de 10 nM - et du temps - une augmentation d'un facteur 2 était atteinte après 18 heures. La somatostatine augmentait le nombre de sites disponibles sans modifier l'affinité de GR pour les lucocorticoïdes. Cette augmentation n'était pas liée à une augmentation de l'expression de GR mais représentait une stabilisation de la protéine de choc thermique (Hsp) 90 associée à GR, qui le maintient dans une configuration lui conférant une forte affinité pour le ligand. La somatostatine stabilisait Hsp 90 en limitant l'activité calpaine. La somatostatine exerce ses effets en se liant à une famille de cinq récepteurs couplés aux protéines G (sst1 à sst5). Nous avons donc cherché à identifier les sous-types de récepteurs impliqués dans l'activité anti-inflammatoire de la somatostatine dans les macrophages. Par reverse transcriptase-polymerase chain reaction, les AlC - messagers des sous-types sst1, sst2 et sst3 étaient détectés dans les cellules RAW 264. 7. Des études de liaison sur des macrophages murins de souris invalidées pour le gène sst2 et de souris contrôles ont mis en évidence une liaison spécifique de la somatostatine qui n'impliquait pas le sous-type de récepteur de la somatostatine sst2
GH plays a role in the development of glomerulosclerosis. We addressed two questions: (1) does GH-associated kidney damage depend on GH binding to the known GH receptor?, (2) does GH act independently of IGF-1? To investigate whether GH-associated kidney damage depends on GH binding to the known GH receptor, diabetes was induced in mice in which the gene for the GH receptor/binding protein had been disrupted (GHRIBP-KO mice). GHRIBP-KO mice ppeared to be protected from diabetes-induced glomerulosclerosis. In other respects, because IGF binding proteins (IGFBP) modulate IGF actions and, bence, GH secretion, we assessed whether mice transgenic for human IGFBP-1 have altered susceptibility to glomerulosclerosis. By reducing IGF-1 bioavailability, IGFBP-1 overexpression limits potentially the negative feedback exerted by circulating IGF-1 on GH secretion and, bence, may worsen GR-dependent glomerulosclerosis. We observed an expansion of extracellular matrix area in homozygous IGFBP-1 transgenic mice at 3 months of age. This was related to a marked increase in !aminin and type IV collagen and to the appearance of type 1 collagen. These changes were not associated with glomerular hypertrophy and hypercellularity. Because nephron reduction at birth can be involved in the development of glomerulosclerosis, we then investigated the impact of IGFBP-1 overexpression on renal development, in particular on the nephron number. When only patemal allele was expressed in the transgenic mice, we observed a 20% reduction in the nephron number. When IGFBP-1 was expressed in the mother, and whatever genotypesof the fetuses were (homozygous, heterozygous or non-transgenic), an intrauterine growth retardation was present in offspring, inducing a reduction in the nephron number to the same extent. As 20% nephron reduction occured in sorne groups of mice which did not develop glomerulosclerosis in adulthood, nephron reduction does not account for the development of glomerulosclerosis in mice transgenic for IGFBP-1. Somatostatin has anti-inflammatory actions, partly by increasing glucocorticoid responsiveness in target cells. To evaluate whether this effect is mediated by up-regulating GR expression, we studied the role of somatostatin on glucocorticoid binding and signaling in macrophage cellline RAW 264. 7. Somatostatin promoted a time- and dose-dependent increase in [3H] dexamethasone binding. Cell exposure to 10 nM somatostatin for 18 h promoted a 2-fold increase in the number of GR sites per cell without significant modification of the affinity. Analysis of GR heterocomplex components demonstrated that somatostatin increased the level of GR-associated heat shock protein (Hsp) 90, by limiting its calpain-dependent cleavage. Somatostatin exerts its function through binding to a family of five G protein-coupled receptors (sst1 to sst5). We then tried to identify somatostatin receptors involved in the anti-inflammatory activity of somatostatin in macrophages. By reverse transcriptase­ polymerase chain reaction, the mRNA for the receptor subtypes sst1, sst2 and sst3 could be detected in RAW 264. 7 macrophages. Binding assays on macrophages of mice in which the gene for the sst2 had been disrupted and of control mice showed a specifie somatostatin binding which did not involved sst2

L’étude des formes familiales de syndrome néphrotique (SN) ou de protéinurie glomérulaire avec lésions histologiques de hyalinose segmentaire et focale (HSF) a permis d’incriminer plus d’une vingtaine de gènes, majoritairement exprimés par le podocyte, cellule principale de la barrière de filtration glomérulaire (BFG). Parmi ces gènes, près d’une dizaine code des régulateurs du cytosquelette d’actine démontrant ainsi le rôle central de la plasticité et de l’architecture du podocyte dans le fonctionnement du filtre glomérulaire. L’ensemble de ces travaux a permis de définir une nouvelle catégorie de maladies nommées podocytopathies héréditaires. Mon projet de thèse a porté sur la caractérisation de plusieurs gènes (TTC21B, WDR73, TRIM3), dont nous avons identifié des mutations dans des cas de podocytopathies héréditaires isolées ou syndromiques. Les résultats du premier volet de ma thèse ont montré que la mutation faux sens p.P209L dans le gène TTC21B induit à l’état homozygote une nouvelle entité clinique associant à la fois une atteinte glomérulaire et une atteinte tubulaire. TTC21B code l’IFT139 (intraflagellar transport protein 139), une protéine impliquée dans le transport protéique antérograde dans le cil primaire, un organite présent à la surface de la plupart des cellules épithéliales. Ces résultats étaient inattendus car l’identification de mutations dans un gène codant une protéine ciliaire n’avait jamais été démontrée auparavant dans des cas de podocytopathies héréditaires, et surtout, il ne semblait pas exister de cil primaire à la surface des podocytes matures. Effectivement, nous avons montré que le cil primaire est présent dans les podocytes humains indifférenciés, mais disparait au cours de la différenciation. Nos résultats ont permis de comprendre l’apparente contradiction entre la survenue d’une pathologie glomérulaire relativement tardive (protéinurie et SN à l’adolescence) et l’absence de cil dans le podocyte mature. En effet, nous avons montré que la mutation p.P209L est une mutation hypomorphe qui induit des défauts mineurs dans la fonction ciliaire, alors qu’elle provoque, dans le podocyte différencié, une déstructuration importante du réseau d’actine et de microtubules du podocyte. Cette étude montre que la protéine ciliaire IFT139, par sa fonction extra-ciliaire, permet de réguler la dynamique des microtubules. Dans le deuxième volet de mon projet, en collaboration avec l’équipe de D Bonneau (Angers), nous avons identifié des mutations tronquantes dans le gène WDR73, dans deux familles non apparentées présentant un syndrome de Galloway-Mowat (SGM), pathologie de transmission autosomique récessive, très hétérogène cliniquement, associant SN et microcéphalie. Ces travaux ont permis d’identifier le premier gène impliqué dans le SGM, dans un sous-groupe de patients présentant un phénotype neurologique très homogène (microcéphalie post-natale, atrophie corticale avec atrophie cérébelleuse majeure, déficience intellectuelle très sévère), alors que l’atteinte glomérulaire est très variable. Ce gène code WDR73, une protéine à motifs WD40. Nos travaux ont montré que la protéine est exprimée dans les neurones du système nerveux central, en particulier dans les cellules de Purkinje du cervelet et dans les podocytes. Des études fonctionnelles nous ont permis de montrer que WDR73 est impliquée dans la survie cellulaire, puisqu’en son absence, une apoptose accrue est observée dans les fibroblastes de patients. De plus, elle est également nécessaire au maintien de la dynamique des microtubules dans les fibroblastes et dans les podocytes différenciés, alors qu’elle ne semble pas avoir de rôle dans la régulation de l’actine. (...)
The genetic study of familial forms of nephrotic syndrome or proteinuria with focal segmental glomerulosclerosis has permitted the identification of 30 causal genes, mainly expressed in the podocyte, which is the principal actor of the glomerular filtration barrier (GFB). Among those genes, approximately ten encode actin cytoskeleton regulators and components, thus highlighting the dramatic role of the podocyte architecture and plasticity in the function of the GFB. During the last decade, all the accumulating results, has made a new category of disease called hereditary podocytopathies. The aim of my thesis project was to characterize the effect of mutations in three candidate genes (TTC21B, WDR73, WDR73), identified by whole exome sequencing in isolated or syndromic podocytopathies. In the first part of my project, we found a homozygous missense mutation (p.P209L) in TTC21B, which encodes a ciliary gene named Intraflagellar transport protein IFT139. This protein ensures the trafficking of components from the tip to the base of the primary cilium, which is an organelle present on most mammalian epithelial cells. These results were unexpected because until now, the existence of the primary cilium was unknown. Our work demonstrates the presence of the primary cilium in the human immature podocyte that disappears once podocytes have differentiated. We also showed that IFT139 localized at the basal body and then relocalized along the complex microtubule network of differenciated cells. We showed that the hypomorphic mutation p.P209L causes minor ciliary defects in undifferentiated cells that are not responsible for the glomerular phenotype. Indeed, the glomerular lesions are rather due to drastic damage in actin and, microtubular dysregulation, found in differentiated podocytes. The second part of my thesis aimed to characterize the effects of truncating mutations identified in the WDR73 gene, found in two families. WDR73 is the first gene identified in Galloway Mowat syndrome by whole exome sequencing combined with homozygous mapping. This rare disease is defined by the association of microcephaly with nephrotic syndrome. In this study, the phenotypes of patients with WDR73 mutations are homogenous concerning neurological features, and are heterogeneous with regards to the renal defects. Thus, WDR73 mutations are responsible for a subset of particular patients affected with Galloway-Mowat syndrome. The WDR73 gene encodes WDR73, a WD-40 containing protein of unknown function. Our studies demonstrated that this protein is expressed in both neurons and podocytes in human tissues. We demonstrated that in undifferentiated cells, WDR73 is weakly expressed in the cytosol, while strong expression and relocalization to the spindle pole, microtubule asters and in the cleavage furrow occur during mitosis. Patient fibroblasts and WDR73-depleted podocytes displayed defects in nuclear morphology, which was associated with a decrease in cell survival in patient fibroblasts. Furthermore, we showed that patient fibroblasts and differentiated WDR73-depleted podocytes harbored an atypical morphology associated with a disorganized microtubule network, suggesting microtubule polymerization defects. Our functional studies demonstrated that WDR73 is crucial in both cell survival and microtubule polymerization in neurons and podocytes. The final part of my PhD work focused on the characterization of a missense mutation in the TRIM3 gene R28W identified by whole exome sequencing in a non consanguineous family with autosomal dominant focal segmental glomerulosclerosis. TRIM3 encodes TRIM3, an E3 ubiquitin-ligase that plays a role in transferrin endosomal recycling, and in microtubule trafficking via KIF21B, one of its known partners. Interestingly, the polymorphism V801M in ACTN4 co-segrates with the disease. Furthermore, mutations in this gene were already incriminated in autosomal dominant cases of HSF. (...)

Contexte : Le développement de la fonction rénale immature des nouveau-nés prématurés est soumis à des facteurs environnementaux dont l'empreinte s'étend au-delà de la période néonatale. Objectifs : 1) déterminer les valeurs de référence du débit de filtration glomérulaire (DFG) chez des grands prématurés durant le premier mois de vie, 2) déterminer l'impact des facteurs périnatals sur leur fonction rénale, 3) déterminer l'effet de l'empreinte périnatale et de la croissance staturo-pondérale sur leur fonction rénale dans l'enfance. Echantillon : Cohorte multicentrique de nouveau-nés prématurés de 27-31 semaines d'aménorrhée, avec mesure de leur fonction rénale durant la période néonatale, et à 4 ans. Résultats : 1) 275 nouveau-nés inclus. La valeur de référence médiane de DFG (mL/min/1,73m²) s'étendait de : 7,9 à J7 à 37,9 à J28. 2) Le DFG était significativement diminué à J7 chez les enfants traités par ibuprofène : 12,8±6,2 vs. 18,1±12,1 ml/min/1,73 m² ; p < 0,001. Cette baisse persistait pendant le premier mois de vie, avec une atteinte de la fonction tubulaire. Parmi les médicaments administrés aux mères ou avant J7 chez les nouveau-nés, l'ibuprofène était le seul significativement associé à un DFG inférieur à la médiane pour l'âge gestationnel à J7. 3) Une taille >= -1 DS à quatre ans était un facteur de risque d'albuminurie élevée chez 119 enfants étudiés à quatre ans. Conclusion : i) Ces valeurs de référence de DFG sont disponibles pour recherche clinique, ii) L'environnement thérapeutique néonatal est un facteur de risque d'altération de la fonction rénale et de retard à la maturation rénale, iii) La taille à quatre ans est associée au taux d'albuminurie
Background: Physiological development of renal may be altered in preterm infants by environmental factors. Their imprinting could persist beyond the neonatal period. Objectives: 1) to determine reference values of glomerular filtration rate (GFR) during the first month of life in preterm newborns, 2) to determine the impact of perinatal factors and of the drugs often prescribed on their renal function, 3) to determine the effect of the perinatal imprinting, and of the growth and height catch-up, on their renal function in early childhood. Sample: Multicentre cohort of children born very preterm at 27-31 weeks of gestation, with a measure of their renal function during the neonatal period, and at 4 years of age. Results: 1) 275 infants included. Median reference GFR value (mL/min/1.73m²) was: 7.9 on day7 to 37.9 on day 28. 2) GFR was significantly reduced on day 7 in ibuprofen-infused infants in comparison to Controls: 12.8±6.2 vs. 18.1±12.1 ml/min/1.73 m², p < 0.001. This decrease persisted throughout the first month of life, and tubular function was also altered. Among all antenatal drugs and drugs administered during the first week of life, alone ibuprofen was significantly associated with a GFR < median reference value on day 7. 3) Height >= -1 SD in early childhood was associated with a high albuminuria in 119 four year-old preterm-born children. Conclusion: i) These GFR reference values are to be used in clinical research, ii) Neonatal therapeutic environment impairs renal function and delays its maturation, iii) The height at age four is an independent risk factor of high albuminuria in preterm-born children

Faible masse musculaire a été peu étudiée chez les patients avant le stade terminal de la maladie rénale chronique (MRC). Nous avons évalué la masse musculaire à partir de la créatininurie des 24h pour étudier ses déterminants, son évolution avec le déclin de la fonction rénale ainsi que ses liens avec les risques de progression vers l’insuffisance rénale terminale traitée (IRTT) et de décès avant IRTT. Dans la cohorte NephroTest incluant 1429 patients avec une MRC stades 1 à 4, le débit de filtration glomérulaire a été mesuré par la clairance du 51Cr-EDTA (DFGm) et estimé par l’équation CKD EPI (DFGe). La créatininurie moyenne à l’inclusion diminuait de 15.3±3.1 à 12.1±3.3 mmol/24 chez les hommes et de 9.6±1.9 à 7.6±2.5 chez les femmes, pour une baisse du DFGm de ≥ 60 à < 15 mL/min/1.73 m2. Être plus âgé, avoir un diabète, un faible IMC ou un niveau faible de protéinurie et d’apports protidiques était associé à un niveau faible de créatininurie. Un déclin annuel du DFGm de 5 mL/min/1.73 m2 était lié à une baisse de créatininurie, indépendamment de ces déterminants. Au cours d’un suivi médian de 3.6 ans, 229 patients ont développé une IRTT, et 113 sont décédés avant IRTT. Après ajustement sur les facteurs de confusion, le hasard ratio (HR) était de 1.6 (0.88-2.9) pour le risque de décès et de 0.60 (0.39-0.91) pour le risque d’IRTT, dans le 1er vs 4ème quartile de créatininurie. La baisse de la créatininurie apparait précocement dans la MRC et est liée au décès avant dialyse. La diminution du risque d’IRTT pourrait s’expliquer par un démarrage plus tardif de la dialyse en raison d’une surestimation du DFGm par le DFGe chez les patients avec une faible créatininurie
Mainly described in patients on dialysis, muscle wasting has received little attention in early stage chronic kidney disease (CKD). We used 24-hour creatininuria to assess determinants of low muscle mass and its putative associations with CKD outcomes, using data from the NephroTest cohort, including 1429 non-dialysis patients with CKD stages 1 to 5. Kidney function was assessed with both measured (mGFR, by 51Cr-EDTA renal clearance) and estimated glomerular filtration rate (eGFR, by CKD-EPI equation). End-stage renal disease (ESRD) and pre-ESRD death were the main studied outcomes. The mean baseline creatininuria decreased from 15.3±3.1 to 12.1±3.3 mmol/24 h in men and from 9.6±1.9 to 7.6±2.5 in women, when mGFR fell from ≥ 60 to < 15 mL/min/1.73 m2. Other determinants of low creatininuria were an older age, diabetes, a lower body mass index, a lower level of proteinuria or protein intake. A fast annual decline in mGFR of 5 mL/min/1.73 m2 was linked with a 2-fold decrease in creatininuria, independent of changes in protein intake and other determinants of muscle mass. Over a median follow-up of 3.6 years, 229 patients developed ESRD and 113 patients died before ESRD. After adjustment for confounders, patients with low muscle mass showed a significantly higher risk for pre-ESRD death (HR 1.6, 95% CI 0.88-2.9), but a lower risk for ESRD (HR 0.60, 95% CI 0.39-0.91). The latter was reversed (HR 1.5, 95% CI 1.01-2.4) when mGFR was replaced by eGFR. Decrease in 24-hour creatininuria may appear early in CKD patients, is related to pre-ESRD death. The lower risk for ESRD may reflect later dialysis start due to overestimation of true GFR by eGFR in patients with low muscle mass