Tesi: "Jonctions Cellulaire"

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Acosta-López, María Isabel. "HACE1 E3 ubiquitine ligase : caractérisation de sa régulation par phosphorylation et mise en évidence de son rôle dans la cohésion cellulaire". Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur (ComUE), 2017. http://theses.univ-cotedazur.fr/2017AZUR4065.

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Abstract (sommario):

HACE1 est une E3 ubiquitine ligase qui contrôle notamment l’activité de la petite GTPase Rac1 en catalysant son ubiquitination dégradative. Rac1 contrôle de nombreux processus cellulaires tels que l’adhérence, la migration et la prolifération. Aussi, la perte d’expression d’HACE1 dues à des altérations génétiques ou épigénétiques est associée à des pathologies humaines tels que le cancer, des syndromes neurodégénératifs et des maladies développementales. Pourtant, malgré l’importance de HACE1 en physiopathologie, rien n’est connu sur la régulation post-traductionnelle de son activité. Au cours de ce travail, nous avons montré que la serine 385 de HACE1 est phosphorylée par les kinases PAKs de groupe I en réponse à l’activation de Rac1 et de Cdc42. Nous montrons que le mutant phospho-mimetic HACE1(S385E) présente une activité réduite d’ubiquitination de Rac1. De plus, nous mettons en évidence un rôle centrale de la régulation de la Ser-385 par phosphorylation dans l’oligomérisation de HACE1, définissant ainsi les bases moléculaires de la relation entre structure et fonction de HACE1. En parallèle, nous avons déterminé que la perte d’expression d’HACE1 altère la cohésion des jonctions entre cellules épithéliales. Cet effet de dissociation s’apparente à une transition épithelio-mésenchymateuse (EMT) caractérisée par un échange d’expression de la E-cadhérine par la N-cadhérine régulé au niveau transcriptionnel. L’ensemble de ce travail a donc permis de mettre en évidence un mode inédit de régulation par phosphorylation de l’activité de HACE1 contrôlée par les kinases PAK du groupe I, ainsi qu’un rôle majeur de HACE1 dans la régulation de la cohésion cellulaire et l’EMT
The E3 ubiquitin ligase HACE1 is a key regulator of cellular homeostasis best-characterized for its ability to control the activity of the Rho GTPase Rac1. This GTPase is encoded by an essential gene whose product controls a wide array of cellular processes such as cell adhesion, migration and proliferation. Accordingly, the repression of HACE1 expression due to genetic and epigenetic alterations has been associated with numerous pathologies, including cancer, neurodegenerative and developmental diseases. However, nothing is known about the posttranslational regulation of HACE1 activity. Here, we unveiled that HACE1 gets phosphorylated at serine Ser-385 by Group-I Pak kinases in response to Rac1/Cdc42 activation. Mechanistically, we define that the phospho-mimetic mutant HACE1(S385E) displays a lower capacity to ubiquitinate Rac1 in cells. In addition, our work attributes to the phosphorylation of Ser-385 a pivotal role in the state of HACE1 oligomerization, which sets the basis for deciphering the relationship between HACE1 structure and activity. In parallel, we have found that the loss of HACE1 expression leads to the disruption of epithelial monolayer cohesion characterized by disrupted of cell-cell junctions. Accordingly, we determined that loss of HACE1 results in the acquisition of epithelial-mesenchymal transition (EMT) features, including a transcriptionally regulated switch of expression between E-cadherin and N-cadherin. Altogether, this work reveals a phospho-mediated regulation of HACE1 activity that is under the control of Group I PAKs and implicates HACE1 in the balance between epithelium integrity versus EMT

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Acosta-López, María Isabel. "HACE1 E3 ubiquitine ligase : caractérisation de sa régulation par phosphorylation et mise en évidence de son rôle dans la cohésion cellulaire". Thesis, Université Côte d'Azur (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017AZUR4065/document.

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Abstract (sommario):

HACE1 est une E3 ubiquitine ligase qui contrôle notamment l’activité de la petite GTPase Rac1 en catalysant son ubiquitination dégradative. Rac1 contrôle de nombreux processus cellulaires tels que l’adhérence, la migration et la prolifération. Aussi, la perte d’expression d’HACE1 dues à des altérations génétiques ou épigénétiques est associée à des pathologies humaines tels que le cancer, des syndromes neurodégénératifs et des maladies développementales. Pourtant, malgré l’importance de HACE1 en physiopathologie, rien n’est connu sur la régulation post-traductionnelle de son activité. Au cours de ce travail, nous avons montré que la serine 385 de HACE1 est phosphorylée par les kinases PAKs de groupe I en réponse à l’activation de Rac1 et de Cdc42. Nous montrons que le mutant phospho-mimetic HACE1(S385E) présente une activité réduite d’ubiquitination de Rac1. De plus, nous mettons en évidence un rôle centrale de la régulation de la Ser-385 par phosphorylation dans l’oligomérisation de HACE1, définissant ainsi les bases moléculaires de la relation entre structure et fonction de HACE1. En parallèle, nous avons déterminé que la perte d’expression d’HACE1 altère la cohésion des jonctions entre cellules épithéliales. Cet effet de dissociation s’apparente à une transition épithelio-mésenchymateuse (EMT) caractérisée par un échange d’expression de la E-cadhérine par la N-cadhérine régulé au niveau transcriptionnel. L’ensemble de ce travail a donc permis de mettre en évidence un mode inédit de régulation par phosphorylation de l’activité de HACE1 contrôlée par les kinases PAK du groupe I, ainsi qu’un rôle majeur de HACE1 dans la régulation de la cohésion cellulaire et l’EMT
The E3 ubiquitin ligase HACE1 is a key regulator of cellular homeostasis best-characterized for its ability to control the activity of the Rho GTPase Rac1. This GTPase is encoded by an essential gene whose product controls a wide array of cellular processes such as cell adhesion, migration and proliferation. Accordingly, the repression of HACE1 expression due to genetic and epigenetic alterations has been associated with numerous pathologies, including cancer, neurodegenerative and developmental diseases. However, nothing is known about the posttranslational regulation of HACE1 activity. Here, we unveiled that HACE1 gets phosphorylated at serine Ser-385 by Group-I Pak kinases in response to Rac1/Cdc42 activation. Mechanistically, we define that the phospho-mimetic mutant HACE1(S385E) displays a lower capacity to ubiquitinate Rac1 in cells. In addition, our work attributes to the phosphorylation of Ser-385 a pivotal role in the state of HACE1 oligomerization, which sets the basis for deciphering the relationship between HACE1 structure and activity. In parallel, we have found that the loss of HACE1 expression leads to the disruption of epithelial monolayer cohesion characterized by disrupted of cell-cell junctions. Accordingly, we determined that loss of HACE1 results in the acquisition of epithelial-mesenchymal transition (EMT) features, including a transcriptionally regulated switch of expression between E-cadherin and N-cadherin. Altogether, this work reveals a phospho-mediated regulation of HACE1 activity that is under the control of Group I PAKs and implicates HACE1 in the balance between epithelium integrity versus EMT

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Louault, Claire. "Rôle des fibroblastes dans le remodelage cellulaire cardiaque". Poitiers, 2007. http://www.theses.fr/2007POIT2271.

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Abstract (sommario):

Des données récentes montrent que les interactions entre cardiomyocytes et fibroblastes seraient tout particulièrement impliquées dans les processus à l’origine du remodelage myocardique consécutif à une surcharge de travail, notamment dans des conditions pathologiques. Le but de notre étude est de préciser la nature de ces interactions cellulaires dans les conditions in vitro et de caractériser le processus de différenciation des fibroblastes en myofibroblastes pour mieux comprendre le rôle de ces cellules dans la physiopathologie cardiaque. En utilisant un modèle de cultures primaires de cardiomyocytes et de fibroblastes isolés de cœurs de souris adultes, cultivés séparément ou ensemble, nous avons tout d’abord cherché à préciser le rôle des interactions entre ces deux types cellulaires au cours du remodelage. Nos résultats démontrent que les fibroblastes stimulent le processus hypertrophique des cardiomyocytes et que les cardiomyocytes favorisent l'adhésion et/ou la prolifération des fibroblastes. Ces données suggèrent fortement des interactions paracrines entre les deux types cellulaires dont l’interleukine-6 pourrait être un des médiateurs. Nous avons ensuite caractérisé les communications jonctionnelles des fibroblastes. Nos résultats ont permis d’identifier la présence des connexines 40 et 43 par les techniques de RT-PCR et de western blot et montrent que ces connexines sont capables de former des jonctions communicantes fonctionnelles mises en évidence avec les techniques de FRAP et de scrape loading. Ils montrent aussi que les fibroblastes sont capables d’établir des jonctions communicantes avec les cardiomyocytes. Dans la dernière partie de notre travail, nous avons cherché à caractériser le processus de différenciation des fibroblastes en myofibroblastes en étudiant leur évolution phénotypique et leur homéostasie calcique au cours de la culture. Les résultats préliminaires que nous avons obtenus montrent que les fibroblastes se différencient en myofibroblastes en fonction des conditions de densité cellulaire, indépendamment du processus de prolifération et que l’activité calcique des myofibroblastes évoluerait vers un fonctionnement de type cellule musculaire contractile. La poursuite de cette étude devrait permettre de mieux comprendre le rôle des myofibroblastes dans la physiopathologie cardiaque. En conclusion, l’ensemble de nos résultats permet de préciser les propriétés des fibroblastes cardiaques et montre l'implication forte des communications intercellulaires, paracrines et jonctionnelles entre fibroblastes et cardiomyocytes dans le développement du remodelage myocardique.

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Hassan, Ghada Shawki. "Présence des jonctions de type gap dans les cellules endothéliales et les cellules du muscle lisse vasculaire humaines et leur contribution à la modulation du calcium intracellulaire". Sherbrooke : Université de Sherbrooke, 2001.

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Wang, Zhimin. "Studying the formation of tricellular junction upon epithelial cell division in Drosophila". Electronic Thesis or Diss., Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066531.

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Abstract (sommario):

Pour maintenir l'organisation et la polarité du tissu épithélial, de nouvelles jonctions cellulaires ont besoin de se former lors de la division cellulaire. Pour comprendre les mécanismes de formation de la jonction durant la cytokinèse, nous avons exploré dans les tissus épithéliaux de la Drosophile, la formation des jonctions septées tricellulaires (TCJs), critique à la fois dans la fonction de barrière tissulaire, dans l'homéostasie des cellules souches, ainsi que dans l'orientation du fuseau mitotique. Durant les dernières étapes de la constriction de l'anneau contractile, les membranes des deux cellules filles et des cellules voisines localisées sous la jonction adhérente (JA) restent enchevêtrées dans une structure à 4 cellules apposée au corps intermédiaire. Les constituants protéiques de la jonction septée, Discs-large (Dlg) et Neuroglian (Nrg), ainsi que les composants de la TCJ, Gliotactin (Gli) et Anakonda (Aka), s'accumulent dans cette structure à 4 cellules. Par la suite, la descente basale du corps intermédiaire est corrélée au détachement des membranes des cellules voisines, au désengagement des cellules filles de leurs voisines, et à la formation de TCJs matures. Le détachement des cellules voisines du corps intermédiaire est indépendant de l'abscision. Au contraire, la perte de la fonction Gli ou Aka empêche le détachement entre les cellules filles-voisines et le mouvement du corps intermédiaire. Ainsi, nous proposons que les protéines de la TCJ contrôlent une étape additionnelle de la cytokinèse, nécessaire au désengagement des cellules filles et de leurs voisines durant la cytokinèse épithéliale
To maintain epithelial tissue organisation and polarity, new cell-cell junctions need to be formed upon cell division. To understand the mechanisms of junction formation during cytokinesis, we explored in Drosophila epithelial tissues, the de novo formation of tricellular septate junctions (TCJs), which are critical to tissue barrier function, stem cell homeostasis and mitotic spindle orientation. During the final stages of cytokinetic ring constriction, the membranes of the two daughter cells and of the neighbouring cells located below the adherens junction (AJ) remain entangled in a 4-cell structure apposed to the midbody. Protein constituents of the septate junction Discs-large (Dlg) and Neuroglian (Nrg) and the components of the TCJ Gliotactin (Gli) and Anakonda (Aka) accumulate in this 4-cell structure. Subsequently, a basal descent of the midbody correlates with the detachment of the neighbouring cell membranes, disengagement of the daughter cells from their neighbours and the formation of mature TCJs. The detachment of the neighbouring cells from the midbody is independent of abscission. On the contrary, the loss of Gli or Aka function prevents the resolution of the connection between the daughter-neighbour cells and the midbody movement. Altogether, we propose that TCJ proteins control an additional step of cytokinesis necessary for the disentanglement of the daughter cells and their neighbours during epithelial cytokinesis

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Toubas, Julie. "Jonctions gap et Insuffisance Rénale Chronique : vers un nouveau rôle des Connexines". Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066185.

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Abstract (sommario):

Notre premier objectif a été de déterminer s’il existait une modulation de l’expression des trois Cx majeures du système vasculaire (Cx37, 40 et 43) dans les stades précoces de l’IRC, et si celle-ci était corrélée avec l’inflammation rénale. Pour ce faire, nous avons utilisé trois modèles de néphropathies touchant trois compartiments différents du rein : un modèle inflammatoire vasculaire (RenTg), un modèle inflammatoire glomérulaire (modèle "anti-Glomerular Basement Membrane" : GBM) et enfin un modèle inflammatoire tubulaire (modèle "Unilateral Ureteral Obstruction" : UUO). De façon intéressante, nous avons montré que la Cx37 et la Cx43 sont modulées de manière différentielle. Il existe une balance entre la Cx37/Cx43 et le déséquilibre de cette balance favorise le développement de cette pathologie. Une augmentation de la Cx43 et une diminution de la Cx37 peuvent être des signaux précoces de l’IRC. Notre deuxième objectif a été de déterminer le rôle pathologique de l’augmentation de la Cx43 dans le processus inflammatoire et la mise en place de la fibrose. Pour cela, l’expression anormale de la Cx43 a été inhibée soit par une inhibition génétique (souris Cx43+/-), soit par une inhibition pharmacogénétique par l’administration d’oligonucléotides antisens pour la Cx43 dans un modèle de néphropathie hypertensive (RenTg) et dans le modèle UUO. Nous avons montré que l’inhibition de la Cx43 entraine une protection de la structure rénale en diminuant l’inflammation et la fibrose.

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Batias, Catherine. "Les jonctions communicantes et leurs proteines constitutives, les connexines, dans la spermatogenese normale et pathologique". Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05N088.

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Vallois, Isabelle. "Contrôle de la polarité cellulaire par les contacts cellule-cellule". Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077087.

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Abstract (sommario):

Le contrôle de la polarité cellulaire est crucial au cours de la morphogenèse et du renouvellement des tissus et il dépend de signaux procurés par l'environnement extracellulaire. Dans des cellules isolées, la géométrie des interactions avec la matrice extracellulaire régule l'asymétrie intracellulaire. En utilisant des micro-patrons pour imposer des interactions cellule-cellule reproductibles, nous avons montré que les contacts intercellulaires génèrent des signaux de polarisation qui régulent l'organisation intracellulaire et l'orientation cellulaire. Dans plusieurs types cellulaires tels que des astrocytes, des cellules épithéliales et endothéliales, les interactions cellule-cellule dépendantes du calcium médiées par les cadhérines influencent la position du noyau et du centrosome et entraînent l'orientation de l'axe noyau-centrosome en direction du bord "libre" de la cellule. Le positionnement du complexe noyau-centrosome est contrôlé par la N-cadhérine et la (3-caténine via la régulation de l'adhésion avec la matrice extracellulaire et celle des cytosquelettes d'actine et de filaments intermédiaires. De plus, la N-cadhérine et les caténines a et p contrôlent directement l'orientation de l'axe noyau-centrosome d'une façon dépendante du cytosquelette de microtubules. Nos résultats démontrent que, en plus de la fonction spécifique de la E-cadhérine dans la régulation de la polarité apico-basale, les cadhérines classiques peuvent induire la polarisation de cellules dans un cadre plus général. Les cadhérines sont probablement des déterminants critiques de l'orientation de la migration et la division' cellulaire pendant l'organogenèse ainsi que dans les tissus adultes
Control of cell polarity is crucial during tissue morphogenesis and renewal and depends on spatial cues provided by the extracellular environment. In isolated cells, the geometry of interactions with the extracellular matrix has been shown to control intracellular asymmetry. Using micropatterned substrates to impose reproducible cell-cell interactions, we show the that cell-cell contacts provide polarizing cues that regulate intracellular organization and cell orientation. In a variety bf cell types, Including astrocytes, epithelial and endothelial cells, calcium-dependent cadherin-mediated cell-cell interactions induce nucleus and centrosome off-centring towards cell-cell contacts and promote orientation of the nucleus-centrosome axis towards free cell edges. Nucleus and centrosome off-centring is controlled by N-cadherin and ß-catenin through the regulation of cell interactions with the extracellular matrix and the regulation of the actin and intermediate filaments cytoskeletons. Moreover, N-cadherin and a and ß-catenins control directly the orientation of the nucleus-centrosome axis in a microtubule-dependent manner. Our results demonstrate that in addition to the specific function of E-cadherin in regulating baso-apical epithelial polarity, classical cadherins can induce cell polarization in otherwise non-polarized cells. Cadherins are likely to be critical determinants of the orientation of cell migration and cell division during organogenesis as well as in adult tissues

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Lupo, Julien. "Caractérisation de l'ubinucléine, partenaire cellulaire du transactivateur ZEBRA du virus d'Epstein-Barr". Grenoble, 2010. http://www.theses.fr/2010GRENV073.

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Abstract (sommario):

Le facteur de transcription ZEBRA (EB1) du virus d'Epstein-Barr joue un rôle essentiel dans l'initiation de l'infection lytique et la production virale. L'ubinucléine a été identifiée comme un partenaire cellulaire de ZEBRA, capable de l'empêcher de se fixer à ses séquences d'ADN cibles. Le rôle de l'ubinucléine dans la cellule demeure inconnu, ainsi que les conséquences de son interaction avec ZEBRA dans les cellules infectées par l'EBV. Notre travail a permis, d'abord, de mieux caractériser l'ubinucléine dans la cellule épithéliale en l'identifiant comme une protéine des jonctions serrées. L'ubinucléine a été proposée comme un nouveau membre de la famille des protéines NACos (nuclear and adhesion complex components) possèdant une double localisation, les noyaux et les jonctions des cellules. Afin de mieux comprendre son rôle dans la cellule épithéliale, nous avons étudié par une approche protéomique couplée à la spectrométrie de masse les partenaires de l'ubinucléine et identifié les protéines LYRIC et RACK-1. Nos résultats suggèrent que l'ubinucléine est impliquée dans différents processus biologiques tels que la régulation de la prolifération et de l'adhésion cellulaires. Enfin, dans les cellules épithéliales infectées par l'EBV, les fonctions de l'ubinucléine semblent dépendre de sa localisation cellulaire. Au niveau nucléaire, l'ubinucléine régule négativement le cycle lytique et la production de particules virales en empêchant ZEBRA et d'autres facteurs cellulaires de se fixer à leurs promoteurs de type AP-1. Lorsqu'elle est séquestrée dans les jonctions serrées, l'inhibition de ZEBRA est levée permettant ainsi le bon déroulement du cycle lytique du virus
The ZEBRA (EB1) transcription factor of Epstein-Barr virus (EBV) is crucial for initiation of lytic infection and viral production. Ubinuclein (Ubn-1) has been identified as a cellular partner of ZEBRA enabling to prevent ZEBRA-DNA interaction. The role of Ubn-1 in the cell remains elusive as well as the consequences of its interaction with ZEBRA in EBV infected cells. In our work, we have characterized Ubn-1 as a new protein of epithelial cells tight junctions (TJ) and a new member of NACos (nuclear and adhesion complex components) proteins with a dual cellular localisation, the nuclei and the junctions of the cells. Using a proteomic approach coupled to mass spectrometry, we have then studied interacting partners of Ubn-1 in order to get more insights on its role in epithelial cells and identified LYRIC and RACK-1 proteins. Our results suggest that Ubn-1 is involved in different biological processes such regulation of cells proliferation and cell-cell contacts. Finally, in EBV infected epithelial cells, Ubn-1 functions seem depend on its cellular localisation. Nuclear Ubn-1 regulates negatively lytic cycle and virus production interfering with ZEBRA and others cellular factors in the activation of AP-1 promoters. When Ubn-1 is sequestered in TJ, Ubn-1 can no longer act as a repressor of ZEBRA which is free to activate the EBV productive cycle

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Lupo, Julien. "Caractérisation de l'ubinucléine, partenaire cellulaire du transactivateur ZEBRA du virus d'Epstein-Barr". Phd thesis, Université de Grenoble, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00559673.

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Abstract (sommario):

Le facteur de transcription ZEBRA (EB1) du virus d'Epstein-Barr joue un rôle essentiel dans l'initiation de l'infection lytique et la production virale. L'ubinucléine a été identifiée comme un partenaire cellulaire de ZEBRA, capable de l'empêcher de se fixer à ses séquences d'ADN cibles. Le rôle de l'ubinucléine dans la cellule demeure inconnu, ainsi que les conséquences de son interaction avec ZEBRA dans les cellules infectées par l'EBV. Notre travail a permis, d'abord, de mieux caractériser l'ubinucléine dans la cellule épithéliale en l'identifiant comme une protéine des jonctions serrées. L'ubinucléine a été proposée comme un nouveau membre de la famille des protéines NACos (nuclear and adhesion complex components) possèdant une double localisation, les noyaux et les jonctions des cellules. Afin de mieux comprendre son rôle dans la cellule épithéliale, nous avons étudié par une approche protéomique couplée à la spectrométrie de masse les partenaires de l'ubinucléine et identifié les protéines LYRIC et RACK-1. Nos résultats suggèrent que l'ubinucléine est impliquée dans différents processus biologiques tels que la régulation de la prolifération et de l'adhésion cellulaires. Enfin, dans les cellules épithéliales infectées par l'EBV, les fonctions de l'ubinucléine semblent dépendre de sa localisation cellulaire. Au niveau nucléaire, l'ubinucléine régule négativement le cycle lytique et la production de particules virales en empêchant ZEBRA et d'autres facteurs cellulaires de se fixer à leurs promoteurs de type AP-1. Lorsqu'elle est séquestrée dans les jonctions serrées, l'inhibition de ZEBRA est levée permettant ainsi le bon déroulement du cycle lytique du virus.

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Awina, Hala. "Importance des jonctions adhérentes et la polarité cellulaire dans la régulation des signaux engendrés par le récepteur Fas/CD95". Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019AZUR6025.

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Abstract (sommario):

Fas (CD195/TNFRSF6) est une protéine transmembranaire appartenant à la superfamille des tumor necrosis factor receptor (TNFR). Même si la signalisation induite par ce récepteur suite à la liaison avec son ligand FasL (CD178/TNFSF6), a surtout été étudiée dans un contexte de mort cellulaire, on sait à présent qu’elle conduit aussi, notamment dans un contexte cancéreux, à la survie de la cellule en induisant sa prolifération ou sa migration. L’équipe du Dr. AO Hueber s’efforce depuis plusieurs années de disséquer les mécanismes moléculaires sous tendant la versatilité de ce récepteur. En effet, comprendre le contrôle des signaux émis par Fas dans le contexte de l’équilibre de la décision mort/vie de la cellule, est crucial pour le développement de stratégies thérapeutiques anti cancéreuses et notamment pour le cancer colorectal, qui est la troisième cause la plus courante de cancer dans le monde et au 2ème rang des décès par cancer.S’il était connu que les cellules intestinales, en perpétuel renouvellement, mourraient suite à la perte des contact cellule-cellule ou cellule-matrice extracellulaire, le rôle possible des jonctions intercellulaires et de la polarité cellulaire dans le contrôle de la signalisation du récepteur de mort Fas avait été jusqu’à présent largement inexploré. L’objectif principal de mon sujet de doctorat a été d’étudier le rôle des jonctions adhérentes et de la polarité cellulaire dans la modulation de la mort cellulaire induite par FasL dans des cellules épithéliales de côlon. Nous avons pu démontrer que l’établissement de la polarité cellulaire et la formation de jonctions adhérentes contrôlaient la signalisation pro-apoptotique du récepteur Fas en montrant que : (i) le récepteur Fas se concentrent avec l’E-cadhérine aux jonctions intercellulaires ; (ii) l’association Fas-cadhérine protège les cellules de la mort cellulaire induite par Fas. Une approche protéomique nous a permis d’identifier plusieurs nouveaux partenaires interagissent avec un site d’interaction à domaine PDZ localisé dans la partie C-terminale du récepteur. Parmi ceux-ci se trouve la molécule de polarité/échafaudage Dlg1. Nous avons démontré que Dlg1 interagit directement avec Fas et réduit la formation du complexe de mort suite à l’engagement avec le ligand, ce qui constitue un mécanisme supplémentaire de protection contre la mort cellulaire. L’ensemble de ces résultats nous ont conduit à proposer que le complexe Fas-cadherin-Dlg1 en contrôlant l’inhibition de la mort cellulaire induite par Fas non seulement participer à l’homéostasie épithéliale en protégeant l’épithélium de l’apoptose mais également participer à l’élimination des cellules endommagée non-polarisées freinant ainsi le développement de cellules cancéreuses. Dans la deuxième partie de mon doctorat, j’ai étudié le rôle de plusieurs partenaires de Fas identifiés dans notre analyse protéomique, et notamment de l’E3 ubiquitine ligase LNX2. J’ai pu montrer que (i) LNX2 se liait directement à Fas (ii) induisait la dégradation du récepteur activé par son ligand au niveau des lysosomes, conduisant à une inhibition des signaux de mort. L’ensemble de ces résultats suggèrent que LNX2 protège les cellules épithéliales coliques de la mort cellulaire induite par FasL. La protéine LNX2 étant surexprimée dans le cancer du côlon, le mécanisme d’action de LNX2 identifie sur la signalisation Fas pourrait expliquer la résistance des cellules cancéreuses du côlon à la mort par Fas
Fas is a transmembrane cell death receptor mostly known for its function in inducing cell death through apoptosis, but it is also recognized to be implicated in a wide range of non-death functions in various cell types and contexts. The disequilibrium between cell death and survival signals due to defective apoptosis is a key factor in tumorigenesis. Fas is found ubiquitously expressed in human tissues including many epithelia such as in the intestine. Thus, the activation of Fas signaling in this tissue should be rigorously regulated in order to maintain the balance between cell death and non-death signaling. At a cellular level, the choice of life and death, is regulated by different environmental cues including cell-cell junctions and cell polarity through the involvement of various sets of specialized macromolecules. The possible role of cell–cell contacts and cell polarity in the control of Fas signaling has been largely unexplored. Therefore, the main aim of my PhD was to investigate the role of adherens junction and cell polarity in the modulation of the FasL- induced cell death signaling in colon epithelial cells. We were able to demonstrate that both cell polarity establishment and adherens junction formation control the pro-apoptotic signaling of the death receptor Fas. We found that the Fas receptors concentrate at cell-cell junctions together with E-cadherin and that Fas-cadherin association protects cells from FasL- induced cell death. Using a proteomic approach, we identified several novel partners of Fas that interact with the C-terminal PDZ-binding site of Fas including the polarity/scaffold molecule Dlg1. We demonstrated that Dlg1 interacts directly with Fas and decrease the death- inducing complex formation upon Fas activation, therefore, providing an additional mechanism to protect against cell death. Altogether, our data show that inhibition of FasL- induced cell death by Fas-cadherin-Dlg1 complex helps to maintain epithelial homeostasis by protecting normal epithelia from apoptosis and promotes elimination of compromised non- polarized cells to avoid development of pathological conditions such as cancer development. In the second part of my PhD, I investigated the role of several partners of Fas identified in our proteomic analysis, including the E3 ubiquitin ligase LNX2. I demonstrate that LNX2 binds directly Fas, and targets activated Fas to lysosomal degradation, therefore preventing FasL- induced cell death. My results suggest that LNX2 protects colon epithelial cells against FasL- induced cell death. Interestingly, LNX2 is found overexpressed in colon cancer, which may explain how colon cancer cells evades Fas-mediated apoptosis by promoting Fas degradation following its activation

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Fouquet, Stéphane. "Adhésion et apoptose dans les entérocytes : implication de deux protéines des jonctions cellule-cellule, la E-cadhérine et la protéine cellulaire du prion". Paris 6, 2004. http://www.theses.fr/2004PA066119.

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Besnier, Laura. "Rôle de la Protéine Cellulaire du Prion (PrPc) dans l'homéostasie de l'épithélium intestinal". Thesis, Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066058.

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Abstract (sommario):

La Protéine Cellulaire du Prion (PrPc), isoforme non pathogène de la Protéine Scrapie, est une protéine ubiquitaire qui a été impliquée dans de nombreux processus cellulaires tels que la prolifération, la migration, l’adhésion, la différenciation et l’apoptose, par des mécanismes qui restent en grande partie à élucider. L’épithélium intestinal est en constant renouvellement et son homéostasie repose sur une régulation fine et coordonnée de l’ensemble de ces processus. Notre équipe s’est intéressée au rôle de la PrPc dans l’épithélium intestinal et a mis en évidence son expression dans le type cellulaire majoritaire de cet épithélium, les entérocytes, et sa double localisation selon leur état de différenciation. En effet, dans les cellules différenciées, la PrPc est majoritairement présente au niveau des desmosomes, alors que dans les cellules prolifératives, elle est principalement nucléaire. Nous mettons en évidence que la PrPc desmosomale est impliquée dans le maintien et l’intégrité de l’ensemble des jonctions intercellulaires (jonctions serrées, adhérentes et desmosomes) et contribue à la fonction de barrière de l’épithélium intestinal. La PrPc nucléaire, quant à elle, interagit avec plusieurs effecteurs de la voie de signalisation Wnt : la -caténine, la -caténine et le facteur de transcription TCF7L2. Dans ce contexte, nous révélons la capacité de la PrPc nucléaire à moduler l’expression de gènes cibles de la voie Wnt canonique. L’ensemble de ces travaux permet de révéler la PrPc comme un nouvel élément clé de l’homéostasie de l’épithélium intestinal – du maintien de la fonction de barrière jusqu’à la régulation de l’expression de gènes – et de définir la PrPc comme un nouveau membre de la famille des protéines NACos
The cellular Prion Protein (PrPc), the normal conformer of the Scrapie protein, is a ubiquitous protein, which has been involved in several cellular processes such as proliferation, migration, adhesion, differentiation and apoptosis, through mechanisms that are not fully characterized. Intestinal epithelium is renewing constantly and its homeostasis requires a fine and coordinated regulation of all these processes. Our team has focused on PrPc functions in this tissue and has demonstrated that it is expressed in enterocytes, the major cell type in the intestinal epithelium, with a dual localization depending on the differentiation state of the cells. Indeed, in differentiated cells PrPc is localized in desmosomes while being mostly in the nucleus in proliferative cells. We demonstrated the involvement of desmosomal PrPc in the maintenance and integrity of all the intercellular junctions (tight, adherens junctions and desmosomes) and its requirement for the intestinal barrier function. PrPc in the nucleus interacts with key effectors of the Wnt pathway: -catenin, -catenin and the transcription factor TCF4/TCF7L2. In this context, we revealed the ability of nuclear PrPc to modulate the expression of a subset of Wnt target genes. Altogether, this work highlights the role of PrPc as a new key element of the intestinal epithelial homeostasis – from the barrier function to gene regulation – and allows considering PrPc as a new member of the NACos family proteins (proteins associated with the Nucleus and Adhesion Complexes)

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Houssin, Élise. "Implication de la protéine Girdin dans la régulation des jonctions d'adhérence et de la polarité épithéliale chez Drosophila melanogaster". Doctoral thesis, Université Laval, 2016. http://hdl.handle.net/20.500.11794/26590.

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Abstract (sommario):

La protéine Girdin humaine est surexprimée dans divers types de cancers où elle contribue à la progression tumorale. Elle favorise notamment la migration et l’invasion cellulaires. Récemment, il a été montré que Girdin interagit directement avec Par-3. Cette interaction est essentielle à la polarisation des cellules en migration. Par-3 et son orthologue chez la drosophile Bazooka sont également impliquées dans l’établissement et le maintien de la polarité épithéliale et des jonctions d’adhérence (JA). La polarité épithéliale, caractérisée par la distribution asymétrique des composantes cellulaires, est nécessaire au maintien de l’intégrité des épithéliums. En effet, la perte de plusieurs régulateurs de la polarité épithéliale mène à la transition épithélio-mésenchymateuse. Nous avons donc émis l’hypothèse que Girdin est impliquée dans la polarité épithéliale et/ou l’adhésion cellule-cellule tout comme son partenaire d’interaction Par-3. Afin de vérifier notre hypothèse in vivo, nous avons généré des allèles mutants nuls de Girdin (orthologue de Girdin chez la drosophile) et établit un anticorps anti-Girdin spécifique. Tout d’abord, nous avons démontré que Girdin est essentiellement exprimée durant l’embryogenèse. Dans les épithéliums embryonnaires elle est enrichie aux JA. Ensuite, les embryons Girdin mutants présentent divers défauts morphogénétiques dont la formation de kystes ectopiques de cellules épithéliales et parfois l’ouverture de la ligne médiane ventrale, ce qui pourrait être attribuable à des défauts de cohésion cellulaire. De plus, l’association entre les composantes des JA, incluant Armadillo (β-Caténine) et DE-Cadhérine (DE-Cad), et le cytosquelette diminue dans les embryons Girdin mutants. Ces résultats suggèrent donc que Girdin est impliquée dans le maintien de la stabilité des JA. Nous nous sommes ensuite intéressés à l’implication de Girdin dans la polarité épithéliale. Bien que les mutants Girdin ne présentent aucun défaut de polarité épithéliale, nous avons pu mettre en évidence des interactions génétiques fortes entre Girdin et trois gènes codant pour des régulateurs de la polarité épithéliale : crb, yrt et lgl. Dans l’ensemble, nos résultats identifient Girdin comme un nouveau régulateur de la polarité épithéliale et de l’adhésion cellule-cellule. À l’avenir il sera essentiel de prendre en considération ces fonctions de Girdin pour évaluer s’il s’agit d’une cible thérapeutique appropriée contre le cancer.
The human Girdin protein is overexpressed in various cancers, and promotes cell migration and invasion. This suggests that Girdin contributes to tumor progression. Recently, it was shown that Girdin directly interacts with Par-3. This interaction is essential for cell polarization associated with directed cell migration. Par-3 and its Drosophila ortholog Bazooka are also known for their role in the establishment and maintenance of epithelial cell polarity and adherens junction (AJ) formation. Epithelial polarity, which is characterized by the asymmetric distribution of many cellular constituents, is necessary for epithelial tissue function and homeostasis. Indeed, loss of several epithelial polarity regulators leads to epithelial to mesenchymal transition. We thus hypothesized that Girdin plays a role in epithelial polarity and/or cell-cell adhesion, as reported for its binding partner Par-3. In order to test this premise in vivo, we generated null alleles of Girdin, which encodes the Drosophila ortholog of Girdin, and established specific anti-Girdin antibodies. First, we demonstrated that Girdin is mainly expressed during embryogenesis. In embryonic epithelial cells, it is predominantly associated with the plasma membrane and enriched at AJ. Girdin mutant embryos present several morphogenetic defects including the formation of ectopic epithelial cell cysts and opening of the ventral midline, suggesting that loss of Girdin weakens cell-cell adhesion. Consistent with this phenotype, the association between AJ components, including Armadillo (β-catenin) and DE-Cadherin (DE-Cad), and the cytoskeleton decreases in Girdin mutant animals. These results suggest that Girdin participates in AJ stability. We then investigated the implication of Girdin in epithelial polarity. Although we could not observe any epithlelial polarity defects in Girdin mutants, we found strong genetic interactions between Girdin and three genes encoding polarity regulators : crb, yrt and lgl. Together, our data identifies Girdin as a novel regulator of epithelial cell polarity and cell-cell adhesion. These results thus reveal unsuspected roles for Girdin related proteins. Comprehensive analysis of Girdin function is essential to evaluate whether it is an appropriate target to treat cancer.

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Peignon, Grégory. "Adhésion cellulaire et différenciation entérocytaire : rôle de la E-cadhérine ?" Paris 6, 2005. http://www.theses.fr/2005PA066344.

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Gava, Fabien. "Etude des mécanismes d'agrégation cellulaire tumorale". Thesis, Toulouse 3, 2018. http://www.theses.fr/2018TOU30372.

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Abstract (sommario):

Les métastases sont responsables de 90% des décès attribués au cancer justifiant qu'une large part des recherches actuelles en cancérologie soit consacrée à l'étude des mécanismes responsables de leur formation. Il a récemment été démontré que des clusters ou agrégats de cellules tumorales circulantes (CTCs) détectés dans la circulation sanguine des patients présentent un potentiel métastatique largement plus important que des cellules tumorales circulantes isolées. Il a également été montré que leur présence est corrélée avec un pronostic péjoratif pour les patients atteints de plusieurs types de cancers d'origine épithéliale. Ces observations ouvrent des perspectives diagnostiques et thérapeutiques prometteuses mais qui nécessitent de mieux comprendre comment se forment et se maintiennent ces clusters. Dans ce contexte notre laboratoire a développé un essai semi-automatisé in vitro basé sur la vidéo-microscopie permettant d'étudier les mécanismes impliqués dans l'agrégation de cellules tumorales dans des conditions ancrage indépendantes. Cet essai a permis de démontrer l'implication de la protéine de jonction adhérente E-cadhérine et des protéines de jonctions desmosomales DSG2 et DSC2 dans l'agrégation de cellules tumorales. L'objectif de mes travaux de thèse a été de poursuivre l'exploration de l'implication des protéines de jonctions intercellulaires de type épithélial dans l'agrégation des cellules tumorales en conditions ancrage-indépendantes et de chercher à identifier de nouveaux régulateurs. Dans un premier temps j'ai pu démontrer et explorer le rôle des jonctions communicantes (ou jonctions gap), ainsi que de la P-cadhérine dans l'agrégation des cellules tumorales mammaires et colorectales. Au cours de la seconde partie de mes travaux, j'ai développé une stratégie basée sur la classification de lignées tumorales selon leur comportement au cours du processus d'agrégation. Afin d'établir les paramètres de cette classification, nous avons exploré les capacités agrégatives de 28 lignées cellulaires tumorales d'origine épithéliale. Cette étude nous a permis de mettre en évidence une forte diversité de comportement au cours de ce processus et de définir des classes de lignées intégrant les aspects dynamiques du processus d'agrégation ainsi que la structure des agrégats obtenus. La combinaison de cette classification avec les données d'expression aujourd'hui disponibles pourrait permettre l'identification de nouveaux régulateurs originaux de l'agrégation. Nos résultats ont mis en évidence de nouveaux régulateurs de l'agrégation cellulaire tumorale ancrage-indépendante ainsi qu'une large diversité de comportement de différentes lignées cellulaires tumorales. Nos travaux ouvrent ainsi des perspectives vers une meilleure compréhension des mécanismes impliqués, vers l'application à l'étude des cellules tumorales circulantes provenant de patients et également au ciblage thérapeutique de ces clusters
Metastases are responsible for 90% of cancer-related deaths justifying the current cancer research's substantial part dedicated to study their formation's mechanisms. It has been recently demonstrated that clusters (or aggregates) of circulating tumor cells (CTCs) identified in patient's blood samples have a far higher metastatic potential than isolated circulating tumor cells. It also has been shown that their detection is correlated with a poor prognosis for patients suffering from epithelial cancers. These observations open up promising diagnostic and therapeutic perspectives but that still requires further investigation on the mechanisms of clusters formation. In this context our laboratory developed an in vitro semi-automated assay based on video microscopy enabling the study of mechanisms involved in tumor cell anchorage-independent clustering. This assay allowed to demonstrate the involvement of adherent junction protein E-cadherin and desmosomal junction proteins DSG2 and DSC2 during tumor cell clustering. The aim of my work was to investigate epithelial intercellular junction's proteins involvement in tumor cell aggregation in anchorage-independent conditions and to search for new regulators. In the first instance I explored and demonstrated the role of communicating junctions (or gap junctions) and P-cadherin in tumor cell aggregation of breast and colorectal cancer cell lines. In the second part, I developed a strategy based on tumor cell lines classification depending on their characteristics of the aggregation process. With the aim of determining the parameters of this classification, I examined aggregation abilities of 28 tumor cell lines derived from epithelial cancers. This study provides evidence for a high variability during this process and allows defining cell lines categories integrating both aggregation process dynamic aspects and aggregates structure. The combination of this classification with current available expression data could lead to the identification of original new aggregation regulators. Together, these results have underscored new anchorage-independent tumor cell aggregation regulators and a wide range of behaviors of different tumor cell lines observed. Our work provides opportunities into a better understanding of involved mechanisms, towards an application to study circulating tumor cells from patients and also a therapeutic targeting of these clusters

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Geneau, Graziello. "Modulation des processus de prolifération et de différenciation ostéoblastiques chez des souris déficientes en connexine 43". Poitiers, 2007. http://www.theses.fr/2007POIT2305.

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Abstract (sommario):

La découverte de pathologies humaines liées à un dysfonctionnement ou à des mutations des gènes de connexines (Cx), protéines constitutives des jonctions communicantes, renforce l’importance de la communication jonctionnelle intercellulaire (GJIC). Dans le tissu osseux, plusieurs études ont démontré l’importance des niveaux d’expression et de fonction de la Cx43 dans le contrôle des processus de différenciation ostéoblastique, de minéralisation et dans les réponses cellulaires aux hormones et facteurs de croissance. Les interactions de la Cx43 avec l’endothéline-1 (ET1), peptide impliqué dans le développement de pathologies osseuses, ont été recherchées dans des cultures primaires d’ostéoblastes (OB) de calvaria de souris Cx43+/+ et Cx43+/-. L’analyse de la densité minérale osseuse par microtomographie des animaux testés a démontré un retard d’ossification de la calvaria des souris Cx43+/-. La caractérisation in vitro des OB a révélé une altération de l’expression de la Cx43, de la différenciation ostéoblastique et de la minéralisation. Une analyse pharmacologique approfondie de l’effet d’une périfusion d’ET1 a démontré une réduction significative de l’influx calcique liée spécifiquement aux canaux calciques voltage dépendants de type L dans les OB Cx43+/-. Un effet inhibiteur de l’ET1 sur la différenciation ostéoblastique et la minéralisation corrélé à une réduction du niveau de couplage jonctionnel a été retrouvé pour les deux génotypes tandis qu’un effet mitogénique a été observé seulement pour les OB Cx43+/+. En conclusion, cette étude suggère que le niveau d’expression de la Cx43 module l’effet de l’ET1 sur la différenciation ostéoblastique
Dysfunction of gap junctional intercellular communication (GJIC) or mutations of gap junction protein (connexin, Cx) genes have been implicated in various human pathologies. In bone, in vitro and in vivo studies have demonstrated the implication of Cx43 expression and GJIC in mineralization and osteoblastic differentiation. Cumulated data support the fact that Cx43 expression is very important for bone formation and regulation of cellular responses to hormones/growth factors stimulation. In this context, since endothelin-1 (ET1) has been also implicated in bone pathologies, the possible cross talk between Cx43 and ET1 was investigated in calvarial osteoblastic cells (OB) isolated from Cx43+/- and Cx43+/+ mice. Interestingly, microcomputed tomographic analysis revealed a hypomineralization in Cx43+/- newborn mice. In vitro characterization demonstrated that Cx43 expression, osteoblastic differentiation and mineralization processes were significantly reduced in Cx43+/- OB. Pharmacological study of ET1 action revealed that the Cx43+/- genotype was related to a reduced calcium influx through L-type voltage sensitive calcium channels. ET1 induced an inhibitory effect on OB differentiation in both genotypes whereas this peptide has a mitogenic effect only on Cx43+/+ OB. Moreover, the ET1 inhibitory effect on cell differentiation was correlated to a reduced Cx43 expression and GJIC only in Cx43+/+ OB, suggesting an alternative regulatory pathway in Cx43+/- OB. In conclusion, these data strongly suggest that the level of Cx43 expression influences the osteoblastic response to ET1

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Lablack, Abdesselam. "Etude des jonctions communicantes in vivo dans le testicule de souris normale et pathologique et in vitro dans une lignée cellulaire de type sertolien 42GPA9". Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05S016.

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Abstract (sommario):

Le testicule qui assure la spermatogenèse et la production d'hormones, est régulé par de nombreux effecteurs paracrines et juxtacrines et des communications intercellulaires. La spermatogenèse joue un rôle clé dans la stérilité masculine. Les cellules de sertoli participent à la synchronisation de la maturation gamétique par l'intermédiaire des jonctions communicantes qu'elles forment entre elles. Les modèles étudiés sont des souris adultes et pré pubères, et le mutant ébouriffé. L’analyse biologique de ces mutants, nous a permis de montrer une désorganisation des mitochondries de la pièce intermédiaire, que l'on peut mettre en rapport avec une diminution de l'expression des connexines. Au cours du développement du testicule de souris normale, la présence et la localisation de la CX43 dans le tube séminifère a été analyse par immunofluorescence et RT-PCR. Nos résultats démontrent l'évolution des connexines qui suivent la mise en place de la barrière hémato-testiculaire. Cependant, l'étude des jonctions communicantes impliquées dans la prolifération et la différenciation des cellules germinales et des cellules de sertoli est limitée par l'impossibilité de maintenir les différents types cellulaires testiculaires en culture pendant un temps suffisamment long, sans perte des fonctions différenciées. Nous avons pu établir en collaboration avec le groupe de CJF INSERM une lignée 42GPA9 de cellules testiculaires immortalisées à partir de souris transgéniques exprimant la protéine grand T du virus du polyome. La caractérisation de ces cellules montre qu'elles expriment des caractères propres aux cellules de sertoli. L'analyse des communications intercellulaires qui était difficile à envisager en culture primaire de cellules testiculaires, devient maintenant possible grâce à ces lignées immortalisées, et devrait permettre de mieux comprendre le rôle et la régulation des jonctions communicantes impliquées dans la fonction testiculaire et dans la prolifération tumorale.

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Song, Yuxiang. "Role of MKS1 in epithelial homeostasis". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS435.

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Abstract (sommario):

Les mutations MKS1 sont impliquées dans un groupe de ciliopathies récessives létales, telles que le syndrome de Meckel-Gruber (MKS) et le syndrome de Joubert (JBT), caractérisées par une dysplasie rénale kystique, des anomalies du système nerveux central (encéphalocèle occipitale), une polydactylie, une dysgénésie biliaire et une fibrose hépatique. MKS1 a été localisée dans la zone de transition du cil dans de nombreux types cellulaires où elle joue un rôle essentiel pour la structure et la fonction des cils, en particulier la régulation de plusieurs voies de signalisation telles que Wnt et Shh.Dans le présent travail, nous avons identifié la fonction pré-ciliaire de MKS1 dans des cellules épithéliales. Nous avons montré que la localisation subcellulaire de MKS1 varie au cours de la maturation de l’épithelium, passant du cytosol où MKS1 co-localise avec le réseau de kératine, aux jonctions cellulaires, où elle co-colocalise avec les caténines. De plus, la translocation de MKS1 des jonctions au cytosol s'est avérée être mécano-sensible, suggérant que MKS1 participe à l'homéostasie épithéliale en stabilisant les jonctions cellulaires, via la transduction des signaux mécaniques liés à la compaction de l’épithelium.L’analyse fonctionnelle a démontré que le « knockdown » de MKS1 désorganise le réseau de kératine, et déstabilise les jonctions adhérentes des cellules épithéliales en culture, avec une diminution de la β-caténine jonctionnelle et une libération de l’E-cadhérine, l’α-caténine et la vinculine dans le cytosol. De plus, la déplétion de MKS1 entraîne une diminution notable du réseau apical d’actine, ainsi que la désorganisation de la structure épithéliale et une transition partielle vers un état mésenchymateux. Ces résultats illustrent une fonction indépendante du cil de MKS1 dans l’homéostasie épithéliale, et apporte de nouvelles hypothèses quant à son rôle et celui des filaments intermédiaires dans les processus d’organogenèse des épitheliums, en particulier la tubulogenèse, qui repose à la fois sur l’équilibre de la transition épithelium/mesenchyme et la mécanotransduction des sollicitations mécaniques durant l’embryogenèseDans le but de caractériser les partenaires de MKS1, des expériences de Co-IP et d’analyses protéomiques ont permis d’identifier l’epiplakine comme un partenaire possible de MKS1. L'Epiplakine est un cytolinker capable de lier la kératine à la membrane et à l'actine ; l’interaction de MKS1 avec l’epiplakine pourrait ainsi rendre compte de la stabilisation à la fois du réseau de kératine et des jonctions cellulaires. Des analyses complémentaires de protéomique et des études fonctionnelles devront compléter ces résultats préliminaires.Finalement, ces travaux ont également permis de révéler le rôle de MKS1 dans la stabilisation des jonctions communicantes ; la déplétion de MKS1 conduisant à une diminution de la CX43 jonctionnelle et à une altération de la fonction de communication intercellulaire dans les cellules épithéliales en culture. Ces travaux, qui constituent la première mention d’une altération possible des jonctions communicantes dans ce type de maladies, devront être approfondis pour caractériser leur impact dans les processus de tubulogenèse.En conclusion, ce travail qui a permis de révéler un rôle pré-ciliaire de MKS1 dans l'homéostasie épithéliale, apporte de nouvelles hypothèses pour l’étiologie de ces maladies, jusqu’alors considérées comme essentiellement consécutives à des défauts de transduction de la signalisation ciliaire. Il propose également de nouveaux mécanismes pour rendre compte des anomalies du développement hépatique, telles que la dysgénésie des voies biliaires, et plus largement des processus de tubulogenèse impliqués dans le développement de nombreux organes
MKS1 mutations are involved in a group of lethal recessive ciliopathies, such as Meckel-Gruber syndrome (MKS) and Joubert's syndrome (JBT), characterized by cystic renal dysplasia, central nervous system abnormalities (occipital encephalocele) , polydactyly, biliary dysgenesis and hepatic fibrosis. MKS1 has been located in the transition zone of the cilia in many cell types where it plays an essential role in the cilia structure and function, in particular in the regulation of signaling pathways such as Wnt and Shh.In the present work, we have identified the preciliary function of MKS1 in epithelial cells. We have shown that the subcellular localization of MKS1 varies during the maturation of the epithelium, from the cytosol where MKS1 co-localizes with the keratin network, to the cell junctions, where it co-localizes with the catenins. In addition, the MKS1 translocation to cytosol junctions proved to be mechano-sensitive, suggesting that MKS1 participates in epithelial homeostasis by stabilizing cell junctions, via the transduction of mechanical signals related to epithelial compaction.Functional analysis has shown that the knockdown of MKS1 disrupts the keratin network, and destabilizes the adherent junctions of epithelial cells in culture, with a decrease in the junctional β-catenin and a release of E-cadherin, the α-catenin and vinculin in the cytosol. In addition, the depletion of MKS1 results in a significant decrease in the apical actin network, as well as disorganization of the epithelial structure and a partial transition to a mesenchymal state. These results illustrate a ciliary-independent function of MKS1 in epithelial homeostasis, and provides new hypotheses regarding its role and that of intermediate filaments in epithelial organogenesis processes, in particular tubulogenesis, which is based both on the equilibrium of the epithelium / mesenchyme transition and the mechanotransduction of mechanical stresses during embryogenesisIn order to characterize MKS1 partners, Co-IP experiments and proteomic analyzes have identified epiplakin as a possible MKS1 partner. Epiplakin is a cytolinker capable of binding keratin to membrane and actin; the interaction of MKS1 with epiplakin could thus account for the stabilization of both the keratin network and cell junctions. Additional proteomic analyzes and functional studies will complement these preliminary results.Finally, this work has also revealed the role of MKS1 in the stabilization of gap junctions; the depletion of MKS1 leading to a decrease in the junctional CX43 and an alteration of the intercellular communication function in the epithelial cells in culture. This work, which constitutes the first mention of a possible alteration of gap junctions in this type of disease, will have to be further developed to characterize their impact on tubulogenesis processes.In conclusion, this work which revealed a pre-ciliary role of MKS1 in epithelial homeostasis, provides new hypotheses for the etiology of ciliopathies, previously considered as essentially consecutive to signal transduction defects. It also proposes new mechanisms to account for abnormalities of hepatic development, such as bile ducts dysgenesis, and more broadly tubulogenesis processes involved in the development of many organs

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Tiroille, Victor. "Ingénierie génétique d'organoïdes à l'aide de nanoblades et étude du rôle d'UBTD1 comme modulateur de la force d'adhésion cellulaire dans les organoïdes de prostate". Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2021. http://theses.univ-cotedazur.fr/2021COAZ6039.

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Abstract (sommario):

Au cours de ma thèse, j'ai travaillé sur le modèle d'organoïde 3D en suivant deux objectifs principaux : i) développer des outils génétiques pour modifier le génome des organoïdes et ii) déchiffrer le rôle de la ubiquitin domain-containing protein 1 (UBTD1) dans le développement des organoïdes de la prostate.L'ingénierie du génome est devenue ces dernières années plus accessible grâce aux endonucléases programmables par ARN telles que le système CRISPR-Cas9. Cependant, l'utilisation de cette technologie d'édition dans des organes synthétiques appelés "organoïdes" reste très inefficace. Ceci est principalement dû aux méthodes de livraison utilisées pour la machinerie CRISPR-Cas9, qui sont principalement réalisées par électroporation de RNP contenant le complexe CAS9-gRNA, une procédure toxique pour les organoïdes. Nous décrivons ici l'utilisation de la technologie "Nanoblade" pour réaliser l'édition du génome dans les organoïdes. Les nanoblades ont dépassé de loin les niveaux de knock-out (KO) obtenus avec d'autres techniques utilisées jusqu'à présent pour la livraison de la machinerie d'édition de gènes. Nous avons atteint jusqu'à 80 % de knockout génétique dans les organoïdes après traitement avec les nanoblades. Nous avons atteint un niveau élevé de KO médié par les nanoblades pour le gène codant le récepteur des androgènes (AR) et le gène du cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) avec des nanoblades contenant un seul ARNg ou un double ARNg. Plus important encore, contrairement à d'autres méthodes d'édition de gènes, ce résultat a été obtenu sans toxicité pour les organoïdes. En outre, il ne faut que quatre semaines pour obtenir des lignées stables KO pour un gène dans les organoïdes et aucun INDELS indésirable évident dans un site hors cible du génome n'a été détecté. En conclusion, les nanoblades simplifient et permettent une édition rapide du génome dans les organoïdes avec peu ou pas d'effets secondaires.La morphogenèse et le remodelage des tissus sont des processus finement régulés, régis par les adhésions entre cellules. Cependant, le contrôle spatial et temporel des molécules d'adhésion reste partiellement inexploré. Nous avons étudié ici le rôle d'UBTD1 comme modulateur de la force des adhérences dans l'épithélium de la prostate. Nous avons montré que la régulation négative d'UBTD1 perturbe l'auto-organisation des cellules en trois dimensions. Inversement, nous avons démontré que la surexpression d'UBTD1 induit des monocouches épithéliales plus régulières et augmente la tension de la surface cellulaire. Les analyses transcriptomiques ont révélé un profil d'expression génique des protéines impliquées dans les jonctions cellulaires affectées par la modulation d'UBTD1. En utilisant le modèle d'organoïde de prostate, nous avons montré que l'expression d'UBTD1 dans les cellules luminales perturbait la formation de lumen dans les organoïdes de prostate de souris. Enfin, en utilisant une approche de co- immunoprécipitation couplée à la spectrométrie de masse, nous avons montré que UBTD1 interagit avec des partenaires impliqués dans les jonctions cellule-cellule et que ces interactants voient leur expression modulée par la dérégulation de UBTD1. Nos résultats montrent qu'une protéine impliquée dans les processus de dégradation des protéines régule la force des jonctions d'adhérence
During my thesis, I worked on the 3D organoid model following two main objectives: i) developing genetic tools to modify the genome of organoids and ii) deciphering the role of ubiquitin domain-containing protein 1 (UBTD1) in the development of prostate organoids . Genome engineering has become in the last few years more accessible thanks to the RNA programmable endonucleases such as the CRISPR-Cas9 system. However, using this editing technology in synthetic organs called ‘organoids’ is still very inefficient. This is mainly due to the delivery methods used for the CRISPR-Cas9 machinery, which are predominantly performed by electroporation of RNPs containing the CAS9-gRNA complex, a procedure toxic for the organoids. Here we describe the use of the ‘Nanoblade’ technology to accomplish genome editing in organoids. Nanoblades outperformed by far knockout (KO) levels achieved with other techniques used to date for delivery of the gene editing machinery. We reached up to 80% of gene knockout in organoids after treatment with nanoblades. We achieved high-level nanoblade-mediated KO for the androgen receptor (AR) encoding gene and the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene with single gRNA or dual gRNA containing nanoblades. Most importantly, in contrast to other gene editing methods, this was obtained without toxicity for the organoids. Moreover, it requires only four weeks to obtain stable lines KO for a gene in organoids and no obvious unwanted INDELS in off-target site in the genome were detected. In conclusion, nanoblades simplify and allow rapid genome editing in organoids with little to no side-effects.Morphogenesis and tissue remodeling are finely regulated processes governed by cell-cell adhesions. However, the spatial and temporal control of adhesion molecules remains partially unexplored. Here we studied the role of UBTD1 as a modulator of the strength of adherens in the prostate epithelium. We showed that down-regulation of UBTD1 disrupted the self- organization of cells in three dimensions. Conversely, we demonstrated that overexpression of UBTD1 induced more regular epithelial monolayers and increased cell surface tension. Transcriptomic analyses revealed a gene expression profile of proteins involved in cell junctions affected by UBTD1 modulation. Using the prostate organoid model, we showed that UBTD1 expression in luminal cells disrupted cyst formation in mouse prostate organoids. Finally using a co-immunoprecipitation approach coupled to mass spectrometry, we showed that UBTD1 interacts with partners involved in cell-cell junctions and that these interactants have their expression modulated by UBTD1 deregulation. Our results show that a protein involved in protein degradation processes regulates the strength of adherens junctions

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Chartier, Nicolas. "Mise en place des jonctions adhérentes lors de la différenciation entérocytaire et rôles de p120ctn dans l'homéostasie intestinale". Phd thesis, Université de Grenoble, 2007. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00992066.

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Abstract (sommario):

Au cours de la différenciation des cellules épithéliales de l'intestin, les cellules reçoivent et intègrent des signaux de la part de leur environnement, aboutissant à des modifications de leur morphologie et de l'expression des gènes. Les cellules intestinales modulent notamment leur capacités d'adhérence à la matrice extracellulaire et aux cellules voisines par le biais de complexes protéiques associées respectivement aux intégrines et aux cadhérines. En utilisant la lignée cellulaire d'adénocarcinome colique humain HT-29, nous étudions la mise en place des jonctions adhérentes accompagnant la différenciation entérocytaire et nous soulignons l'importance de différents facteurs dans les étapes successives de maturation de ces jonctions. Ainsi, nous montrons que la laminine 5 est capable d'induire une augmentation d'expression de la E-cadhérine et permet d'initier la mise en place des jonctions adhérentes par un mécanisme dépendant de l'adhérence cellule-matrice extracellulaire: en activant les intégrines α3β1 et α6β4, la laminine 5 induit une augmentation transitoire de l'activité de la PI3 Kinase qui active à son tour la GTPase monomérique Rac1 et son variant Rac1b. Nous montrons que la maturation des jonctions adhérentes est ensuite favorisée par l'émergence de radeaux lipidiques au sein desquels la E-cadhérine et la p120ctn interagissent de façon préférentielle. Le recrutement des protéines des jonctions adhérentes dans ces microdomaines est dépendant de l'activité de Rac1 et conduit à l'apparition de marqueurs de différenciation entérocytaire. Dans une seconde partie, nous étudions le rôle spécifique de la p120ctn dans la régulation de l'homéostasie des cellules intestinale. Nous montrons que l'augmentation du pool cytoplasmique de p120ctn induit une baisse de prolifération des cellules HT-29 suite à l'interaction de p120ctn avec le complexe cycline E /cdk2. Cette association se traduit par une augmentation de la stabilité de la cycline E et conduit à des défauts de duplication des centrosomes. Des effets similaires sont observés dans les cellules cancéreuses et pourraient être à l'origine du développement tumoral.

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Santiquet, Nicolas. "Régulation des jonctions communicantes chez les complexes ovocyte-cumulus de porc au cours de la maturation in vitro". Thesis, Université Laval, 2013. http://www.theses.ulaval.ca/2013/30338/30338.pdf.

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Abstract (sommario):

Les jonctions communicantes (JCs) sont particulièrement importantes au sein du follicule ovarien puisque qu’elles vont participer à la régulation de la maturation ovocytaire. Les JCs vont contrôler le flux de molécules tels que l’AMPc et le GMPc qui passent entre les cellules du cumulus et l’ovocyte et qui inhibent la reprise de la méiose. La fermeture de ces canaux, tant in vivo qu’in vitro, va entrainer la reprise de la méiose en empêchant le passage de ces molécules. Dans les études que nous avons réalisées, nous avons tout d’abord développé une méthode d’analyse fonctionnelle des jonctions communicantes (le FRAP : Fluorescence Recovery After Photobleaching) dans la structure tridimensionnelle du complexe ovocyte-cumulus. Cette technique nous a permis de déterminer que les gonadotrophines et le liquide folliculaire présent dans le milieu de maturation pouvaient moduler la dynamique de transfert entre les cellules du cumulus pendant les premières heures de maturation in vitro (MIV). Par la suite, nous avons étudié la régulation des connexines (Cx), qui sont les protéines composant la JC. Nous avons identifié les principales connexines présentes dans le COC porcin, la Cx43, la Cx45 et la Cx60. Nous avons déterminé que les gonadotrophines régulaient l’expression, la dégradation ainsi que la localisation de la connexine 43 (la principale connexine présente dans les cellules du cumulus porcin). Enfin, nous nous sommes intéressés à la régulation de la reprise de la méiose par le peptide natriurétique de type C (CNP). En effet, le CNP a été proposé pour inhiber la reprise de la méiose en se liant à son récepteur NPR-B sur les cellules du cumulus, ce qui stimule la production de GMPc. Il est ensuite transféré dans l’ovocyte, via les JCs, où il va inhiber la reprise de la méiose. Nous avons montré que le CNP et un analogue du GMPc avaient un impact différent sur la dynamique de transfert entre les cellules du cumulus. De plus, le CNP agirait sur un autre récepteur (le récepteur NPR-C) pour promouvoir l’arrêt méiotique. En conclusion, ces résultats ajoutent un niveau de compréhension supplémentaire des mécanismes régulant les JCs et la reprise de la méiose durant la MIV chez le porc.
Intercellular gap-junctional communication (GJC) plays an important role in ovarian cell physiology. Closure of GJC has been proposed to be involved in oocyte maturation, particularly in the resumption of meiosis, both in vivo and in vitro, by controlling the flow of meiosis inhibitors, such as cAMP and cGMP. In the present study, we have first developed an assay based on recovery of calcein fluorescence in photobleached cumulus cells (FRAP: Fluorescent Recovery After Photobleaching) in the three-dimensional cumulus-oocyte complex (COC), during the first hours of porcine in vitro maturation (IVM). Results obtained using FRAP technology provide evidence that the composition of the IVM medium in terms of hormones and follicular fluid clearly affects cumulus-cumulus cell GJC. We then turned our attention to the effect of gonadotropins on connexins regulation. Indeed, GJC are composed of connexins proteins. We indentified Cx43, Cx45 and Cx60 as the main connexins expressed in swine COC. We show that gonadotropins regulate Cx43 protein level, degradation and localisation in the COC during the first hours of IVM. We finally turned our attention on the effect of natriuretic peptide C (CNP) on GJC regulation and meiotic resumption during porcine IVM. Indeed, CNP has been proposed to bind to receptor natriuretic peptide receptor B (NPR-B) where it triggers the production of cyclic guanosine monophosphate (cGMP). The cGMP produced is then transferred to the oocyte through gap junctions where it promotes meiotic arrest. Here we show that CNP and a cGMP analogue have different effects on GJC and Cx43 regulation suggesting that cGMP signaling may not be the only signaling pathway involving CNP. Moreover, we found that CNP is likely to bind to receptor natriuretic peptide receptor C (NPR-C) to play a role in maintaining meiotic arrest during porcine IVM, when activated in addition to NPR-B. In conclusion, we describe new mechanisms involved in the complex regulation of dynamic changes in GJCs and meiotic resumption. A better understanding of GJC regulation during IVM may in turn provide a powerful tool to improve assisted reproduction technologies and their efficacy in mammals.

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Villars, Franck. "Etude in vitro du rôle des cellules endothéliales humaines dans la différenciation ostéoblastique : modèle de coopération cellulaire". Bordeaux 2, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR28765.

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Villeneuve, Clémentine. "L'oncogène aPKCi, nouvel acteur de la dissémination tumorale précoce". Electronic Thesis or Diss., Paris Sciences et Lettres (ComUE), 2019. https://theses.hal.science/tel-02631809.

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Abstract (sommario):

La formation de métastases issues de carcinomes est la principale cause de mortalité des cancers. Certaines cellules cancéreuses ont la capacité de s’échapper de la glande mammaire et former des métastases à un stade très précoce, bien avant la détection d’une tumeur primaire. Les mécanismes impliqués restent à être identifiés. L’extrusion basale pourrait être un des mécanismes impliqués dans la dissémination précoce de cellules cancéreuses. La perte de la polarité cellulaire est une des signatures des cellules cancéreuses. La protéine kinase C atypique iota (aPKCi) est un oncogène surexprimé dans de nombreux cancers, en particulier dans les cancers du sein, où cette surexpression est un facteur de mauvais pronostic pour la survie des patientes. aPKCi est un bon candidat pour étudier la dissémination tumorale précoce. Mon étude révèle que la surexpression d’aPKCi dans quelques cellules épithéliales de la glande mammaire promeut l’extrusion basale in vivo et ex vivo en dégradant la membrane basale de façon dépendante des métalloprotéases. Les cellules surexprimant aPKCi sont exclues de l’épithélium par des mécanismes de ségrégation cellulaire en modifiant la localisation de la vinculine. La surexpression d’aPKCi entraîne une diminution de la vinculine aux jonctions adhérentes, au profit des adhésions focales, conférant aux cellules aPKCi+ des propriétés pro-migratrices. En parallèle, la contractilité, dépendante de l’activité de la myosine II, augmente spécifiquement à l’interface des cellules aPKCi+/saines. Cette balance entre la diminution de la vinculine aux jonctions adhérentes couplée à l’augmentation de la tension jonctionnelle à l’interface aPKCi+/WT entraîne l’extrusion basale des cellules aPKCi+. Par la suite, les cellules en contact avec la membrane basale, la dégradent grâce aux métalloprotéases et sont capables de migrer dans la MEC, via la renforcement de la vinculine aux points focaux d'adhésion permettant une migration efficace. Cette étude met en évidence un nouveau mécanisme, l’extrusion basale oncogénique, dans la dissémination tumorale précoce et révèle l’importance des modifications des propriétés mécaniques des cellules oncogéniques dans ce processus
Metastasis is the main cause of cancer-related deaths. Recent data suggest that metastatic dissemination often occurs at an early stage during tumour formation. Tumorigenesis is a multi-step process initiated from oncogenic single cells within a normal tissue. How these cancer cell alterations evolve within tightly regulated normal tissue environments remains elusive. Cell extrusion is a potential mechanism that allows for mutant cells to escape from untransformed epithelia, and the cues promoting tumor cell extrusion need to be identified. Polarity proteins may play essential roles in triggering cell extrusion and early tumor cell dissemination as loss of epithelial cell polarity is a hallmark of cancer cells that is correlated with tumor aggressiveness. The polarity protein kinase aPKCi (atypical Protein Kinase C iota) is an oncogene, which overexpression (aPKCi+) is of poor prognosis. Here, we identify aPKCi+ oncogenic basal extrusion from the normal mammary epithelium as a mechanism for early breast tumor cell dissemination in vivo. By combining in vitro biophysical approaches, we show an increase in cell tension at the interface between aPKCi+ and WT cells. This increase in cell tension depends on myosin II activity and is associated with the relocation of vinculin from cell-cell junctions to focal adhesions in aPKCi+ cells. The shift in vinculin localization affects aPKCi+/WT cell junction stability, leading to the acquisition of pro-migratory features in aPKCi+ cells. We propose that a balance between cell contractility and cell-cell adhesion at the interface of normal and oncogenic aPKCi+ cells is crucial for promoting basal cell extrusion. We anticipate that this mechanism may be conserved in other carcinomas, promoting early cancer cell dissemination

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Marcelo, Paulo. "Régulation de l'expression du gène de l'IFN-γ dans le trophectoderme porcin : mise au point et étude d'un sytème cellulaire inductible in vitro". Paris 11, 2002. http://www.theses.fr/2002PA112030.

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Abstract (sommario):

Une expression atypique, transitoire d'interferon-gamma (IFN-γ) a été décrite au cours du développement du trophectoderme porcin et pose de nombreuses questions sur les mécanismes d'induction de l'IFN-γ dans ce tissu. Afin d'étudier ces mécanismes, nous avons isolé un clone cellulaire: B4-3. Quand elles sont cultivées sur membrane microporeuse, ces cellules acquièrent un phénotype polarisé comme le montre l'augmentation de la résistance transépithéliale (RTE). Elles sécrètent spontanément et transitoirement une faible quantité d'IFN-γ dans le compartiment apical entre le 4ème et le 6ème jour de culture. Lorsque nous avons traité les cellules B4-3 avec le PMA, nous avons observé une chute brutale de la RTE et une augmentation de la perméabilité paracellulaire indiquant un relâchement des JS. Trois jours après le retrait du PMA, la RTE augmente pour retrouver peu à peu sa valeur initiale. Nous avons montré que cette augmentation était corrélée avec une expression de l'IFN-γ (5 à 10 fois supérieure que la sécrétion spontanée). C'est le premier exemple d'induction d'IFN-γ par des cellules épithéliales polarisées. Après traitement par le PMA, nous avons montré que l'utilisation des inhibiteurs de MEK induisait induit une remontée plus rapide de la RTE corrélée avec une expression et une sécrétion de l'IFN-γ plus précoce suggérant le rôle important de cette voie de transduction dans la régulation de l'expression de cette cytokine. Nous avons montré que le promoteur de l'IFN-γ dans les cellules B4-3 était déméthylé suggérant que la déméthylation est nécessaire mais pas suffisante pour l'expression du gène. Enfin, nous avons détecté pour la première fois le facteur T-bet, un nouveau facteur de transcription récemment découvert dans les lymphocytes Th1, in vivo dans le blastocyste porcin et in vitro dans les cellules B4-3. Ces résultats suggèrent donc un mécanisme de régulation du gène de l'IFN-γ différent dans les cellules trophoblastiques porcines
An atypical, transient and developmentally regulated expression of interferon-gamma (IFN-γ) by pig embryo's trophectoderm raises interesting questions about the mechanisms of IFN-γ gene induction in this tissue. In order to study these mechanisms, we isolated a cloned cell line named B4-3. When these cells are grown on microporous membrane they differentiate into highly polarized cell monolayer as monitored by transepithelial resistance (TER) increase, is accompanied by a transient expression of IFN-γ in the apical compartment of the cell culture system within 4-6 days. When we treated B4-3 cells with PMA, we observed a dramatic decrease of the TER and a large increase of transcellular permeability indicating TJs slackening. Three days after PMA removal, TER reach initial values. We observed a close correlation between TER increase and a transient IFN-γ expression (5-10 fold higher than the spontaneous one). This is the first example of inducible expression of IFN-γ by a polarized epithelial cell. In B4-3 cells plated on filters, we observed that MEK/ERK pathway inhibition activated more rapidly TER rising correlated with IFN-γ mRNA and protein expression after PMA treatment suggesting a potent role of this transduction pathway in regulation of IFN-γ expression. We reported in B4-3 cells the IFN-γ gene promoter was hypomethylated, thus suggesting that hypomethylation may be necessary but not sufficient for gene expression. Then, we detected for the first time T-bet, a novel Th1-specific transcription factor recently described in T cells which controls IFN-γ gene transcription, in vivo in pig blastocyst and in vitro in B4-3 cells. These results suggest an additional mechanism of IFN-γ gene regulation in porcine trophoblastic cells

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Neyton, Jacques. "Propriétés des canaux des jonctions Gap et leur modulation par les neurotransmetteurs : analyse électrophysiologique". Paris 6, 1986. http://www.theses.fr/1986PA066298.

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Pinheiro, Diana. "Understanding the mechanisms underlying force transmission during epithelial cell division". Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066591/document.

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Abstract (sommario):

Au sein d'un tissu épithélial la division cellulaire doit être couplée à la formation de nouvelles jonctions intercellulaires entre les futures cellules-filles, afin de préserver l'intégrité du tissu et maintenir son adhésion et polarité. Chez les vertébrés et les invertébrés, lors de la constriction de l'anneau contractile les jonctions assemblées entre la cellule en division et ses voisines est remodelé. Concomitamment, la myosine non-musculaire II (MyoII) s'accumule dans les cellules voisines y produit la force nécessaire pour juxtaposer les membranes de la cellule en division, définissant ainsi la longueur de la future jonction formée entre les cellules-filles. Dans le cadre de mes travaux de doctorat, j'ai cherché à comprendre les mécanismes moléculaires sous-jacents au dialogue entre les cellules épithéliales pendant la division. J'ai montré que chaque division cellulaire est associée à un processus de mécano-transduction qui contrôle la dynamique de la MyoII dans les cellules voisines. Les forces produites par l'anneau contractile allongent localement la membrane des voisines diluant ainsi la concentration d'E-Cadhérine (E-Cad). En retour, cette réduction locale d'E-Cad, couplée à la contractilité intrinsèque des cellules voisines, génère des flux auto-organisés d'actine et myosine, qui conduisent à l'accumulation de MyoII dans les cellules voisines. En montrant que la cytocinèse épithéliale est une source endogène de contraintes mécaniques, mon travail définit un nouveau mécanisme de mécano-transduction qui coordonne les dynamiques d'actine et myosine dans les cellules en division et leurs voisines, et qui est permet de plus le remodelage des jonctions adhérentes
During epithelial cytokinesis, the remodelling of adhesive cell-cell contacts between the dividing cell and its neighbours has profound roles in the integrity, the arrangement and morphogenesis of proliferative tissues. In both vertebrates and invertebrates, this remodelling requires the activity of non-muscle Myosin II (MyoII) in the interphasic cells neighbouring the dividing cells. However, the mechanisms coordinating cytokinesis and MyoII activity in the neighbours are unknown. Here, we found that, in the Drosophila notum epithelium, each cell division is associated with a mechano-sensing and transmission event controlling MyoII dynamics in the neighbours. We established that the ring pulling forces promote local junction elongation, resulting in a decrease of E-Cadherin (E-Cad) concentration at the ingressing adherens junction (AJ). In turn, the local reduction of E-Cad concentration and the contractility of the neighbouring cells promote self-organized actomyosin flows, ultimately leading to MyoII accumulation at the base of the ingressing AJ. While mechano-sensing has been extensively studied in the context of AJ reinforcement to stabilize the adhesive cell-cell contacts, we propose an alternative mechano-sensing mechanism able to coordinate actomyosin dynamics between epithelial cells and to sustain AJ remodelling in response to mechanical forces

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Bellamy, Charlotte. "Functional characterization of a novel mutation in PRKCA, the major driver of Chordoid glioma". Electronic Thesis or Diss., université Paris-Saclay, 2024. http://www.theses.fr/2024UPASL052.

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Abstract (sommario):

Le gliome chordoïde (ChG) est une tumeur cérébrale rare de bas grade, caractérisée par une nouvelle mutation ponctuelle récurrente PRKCA p.D463H, une substitution dans le domaine kinase de la protéine kinase C alpha (PKCα). Cette étude démontre le rôle de cette kinase mutée dans le développement des ChG. Ici, nous montrons l'inactivation et l'effet négatif dominant de PKCαD463H via des tests d'activité in vitro et in cellulo. Nos résultats montrent que la mutation affecte la structure tertiaire, ce qui entraîne une protéine ouverte et instable. Les données de spectrométrie de masse phosphoprotéomique et de co-immunoprécipitation des cellules HEK surexprimant PKC⍺D463H montrent une diminution de phosphorylation et interaction avec les protéines impliquées dans l'adhésion cellulaire. Nous confirmons génétiquement par le RNAseq à noyau unique que les ChG dérivent de tanycytes spécialisés. En comprenant le contexte cellulaire de la tumorigenèse ainsi que les changements fonctionnels de cette mutation sur l'activité et l'interactome de PKCα, nous avons élaboré un modèle de développement des ChGs parallèlement à l'identification d'une approche thérapeutique
Chordoid glioma (ChG) is a rare low-grade brain tumor, characterised by a novel recurrent point mutation PRKCA p.D463H, a substitution in the kinase domain of Protein kinase C alpha (PKCα). This study demonstrates the role of this mutated kinase in the development of ChGs. Here we show the inactivation and dominant negative effect of PKCαD463H via in vitro and In cellulo activity assays. Our results show the mutation affects the tertiary structure, resulting in an open, unstable protein. Phosphoproteomic and Co-Immunoprecipitation mass spectrometry data from HEK cells overexpressing PKC⍺D463H show decreased phosphorylation and interaction with proteins involved in cell adhesion. We confirm genetically through single nuclei RNAseq that ChGs derive from specialised tanycytes. By understanding the cell context of tumorigenesis alongside the functional changes of this mutation on the activity and interactome of PKCα, we elaborated a model of the development of ChGs alongside the identification of a therapeutic approach

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Bernard-Perrone, Françoise. "Etude de la protéine reg et du trypsinogène au cours des mécanismes de prolifération et de différenciation de l'épithelium intestinal, normal et cancéreux". Aix-Marseille 3, 1998. http://www.theses.fr/1998AIX30019.

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Abstract (sommario):

La reg-proteine est localisee dans les cellules cryptiques de l'intestin grele humain et jamais dans les villosites. Elle pourrait donc etre impliquee dans les phenomenes de croissance et/ou de differenciation de cet organe. Le trypsinogene est retrouve dans les cellules de paneth qui s'hypertrophient et s'hyperplasient au cours de l'atrophie intestinale. Nous avons recherche la presence et le devenir de la reg-proteine et du trypsinogene 1 dans plusieurs lignees cellulaires cancereuses coliques humaines qui se differencient en cellules de type enterocytaire (caco-2 et ht-29 glc-/+) au cours de la culture et dans des cellules qui restent indifferenciees (ht-29 glc+). Apres avoir suivi la differenciation des lignees caco-2 et ht-29 glc-/+ (dosages enzymatiques d'hydrolases de la bordure en brosse et immunofluorescence), nous avons clairement demontre que la reg-proteine et le trypsinogene 1 etaient presents dans ces cellules (cytoimmunologie, immunoempreintes, filtration sur gel, hybridations avec les adnc des proteines). La reg-proteine et son arnm sont exprimes pendant la periode de croissance jusqu'aux premiers jours de la phase stationnaire. Par contre, le trypsinogene 1 et son arnm sont toujours presents. Le trypsinogene libere dans le milieu de culture reste sous la forme de zymogene. Pour les cellules qui se differencient, il existe un pic d'expression du trypsinogene 1 au cours des premieres etapes de differenciation. La reg-proteine et le trypsinogene semblent donc associes respectivement aux phenomenes de croissance et/ou de differenciation de ces cellules. Cette implication pourrait etre en rapport avec le role de ces proteines dans la mise en place des jonctions cellulaires.

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Loiselet, Alicia. "Trafficking cellulaire lors de l’interaction de Candida albicans avec les cellules entérocytaires Caco-2". Thesis, Bourgogne Franche-Comté, 2019. http://www.theses.fr/2019UBFCI003.

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Abstract (sommario):

Candida albicans (C. albicans) est une levure commensale des muqueuses de l’Homme, responsable d’infections opportunistes graves chez les patients fragilisés. Les candidémies et candidoses disséminées ont une origine essentiellement endogène, à partir de la flore colonisante digestive. Les objectifs de cette thèse étaient (i) de préciser les mécanismes cellulaires et moléculaires associés à l’invasion de C. albicans dans les cellules épithéliales intestinales et (ii) d’étudier le rôle des jonctions serrées (JS) inter-entérocytaires dans ces mécanismes. Dans un modèle in vitro de cellules Caco-2, nous montrons que les JS ont un rôle protecteur en limitant l’invasion de la muqueuse digestive par C. albicans puisque l’invasion entérocytaire est facilitée lorsque les JS sont immatures ou altérées pharmacologiquement. Par ailleurs, nous montrons que C. albicans lui-même est capable de moduler la structure des JS pour faciliter secondairement son invasion dans les cellules épithéliales intestinales. Ainsi, une augmentation de la perméabilité de monocouches de cellules Caco-2 associée à une destruction des protéines des JS a été observée à la fois au cours de l’infection des cellules par C. albicans et lors du traitement des cellules par du surnageant de culture fongique. L’ensemble de ces données suggère qu’un facteur de virulence de C. albicans sécrété par la forme filamenteuse de C. albicans serait impliqué dans le trafficking des JS
Candida albicans (C. albicans) is a commensal yeast of the human mucosa, responsible for severe opportunistic infections in debilitated patients. Candidemia and disseminated candidiasis are mainly of endogenous origin, where C. albicans cells colonizing the digestive tract can translocate through the gut barrier. The objectives of this thesis were (i) to clarify the cellular and molecular mechanisms associated with the invasion of C. albicans through intestinal epithelial layers and (ii) to study the role of intestinal tight junctions (TJ) in these mechanisms. Using an in vitro model of Caco-2 cells, we show that TJ provide a protective role to the gut barrier by limiting invasion of C. albicans into intestinal epithelial cells. Enterocyte invasion is indeed facilitated when TJ display immature or pharmacologically impaired structure. Moreover, we show that C. albicans by itself is able to modulate the structure of JS to secondarily facilitate its invasion into intestinal epithelial cells. Thus, an increase in the permeability of Caco-2 cell monolayers associated with a destruction of TJ proteins was observed both during C. albicans infection of cells and during treatment of cells with fungal culture’s supernatant. All of these data suggest that a virulence factor of C. albicans is secreted by the filamentous form of the fungus that would be involved in the trafficking of TJ

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Zvalova, Darina. "Étude de la modulation de la communication entre astrocytes par les jonctions de type gap au cours du stress cellulaire : mise en évidence du rôle des kinases ERK/MAPK et p38/SAPK2". Paris 6, 2002. http://www.theses.fr/2002PA066379.

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Aubert, Marine. "Modélisation de la migration de cellules tumorales : évolution in vitro de sphéroïdes de cellules issues de glioblastomes". Phd thesis, Université Paris-Diderot - Paris VII, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00341905.

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Abstract (sommario):

Le glioblastome est une tumeur cérébrale maligne particulièrement agressive et le pronostic vital des patients atteints par cette tumeur est très mauvais. La médiane de survie est de l'ordre de 12 mois même lorsqu'une stratégie thérapeutique a pu être mise en place. Un des facteurs qui pourrait expliquer la dificulté à traiter ces tumeurs par voie chirurgicale est l'invasion des cellules tumorales dans le tissu sain environnant. De plus, les mécanismes à l'origine de ce phénomène sont, en partie, méconnus. L'objectif que nous nous étions fixé pour mon travail de thèse était de s'intéresser à ces mécanismes d'invasion en étudiant la migration in vitro de cellules tumorales issues de glioblastomes. Pour cela, nous avons créé un modèle de migration microscopique, basé sur un automate cellulaire, reproduisant la migration de cellules tumorales sur deux substrats différents : substrat de collagène et monocouche d'astrocytes. Les cellules migrent selon des règles prédéfinies et dépendant des interactions (de contact ou à plus longue portée) introduites. La confrontation des simulations avec les expériences a permis de valider le modèle et de mettre en évidence deux phénomènes : une communication par contact entre cellules tumorales et entre cellules tumorales et astrocytes (cette dernière favoriserait l'invasion des cellules tumorales) et la sécrétion à partir de la masse tumorale d'une substance chimio-répulsive favorisant sur la migration des cellules. Afin de décrire l'évolution d'une masse tumorale plus réaliste, nous avons construit et validé un modèle macroscopique (équation de diffusion non linéaire) à partir de l'automate, en tenant compte des interactions entre cellules tumorales.

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Patoine, Dany. "Implication des connexions dans les effets de l'ischémie cardiaque". Master's thesis, Université Laval, 2007. http://hdl.handle.net/20.500.11794/19574.

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Pinheiro, Diana. "Understanding the mechanisms underlying force transmission during epithelial cell division". Electronic Thesis or Diss., Paris 6, 2016. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2016PA066591.pdf.

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Abstract (sommario):

Au sein d'un tissu épithélial la division cellulaire doit être couplée à la formation de nouvelles jonctions intercellulaires entre les futures cellules-filles, afin de préserver l'intégrité du tissu et maintenir son adhésion et polarité. Chez les vertébrés et les invertébrés, lors de la constriction de l'anneau contractile les jonctions assemblées entre la cellule en division et ses voisines est remodelé. Concomitamment, la myosine non-musculaire II (MyoII) s'accumule dans les cellules voisines y produit la force nécessaire pour juxtaposer les membranes de la cellule en division, définissant ainsi la longueur de la future jonction formée entre les cellules-filles. Dans le cadre de mes travaux de doctorat, j'ai cherché à comprendre les mécanismes moléculaires sous-jacents au dialogue entre les cellules épithéliales pendant la division. J'ai montré que chaque division cellulaire est associée à un processus de mécano-transduction qui contrôle la dynamique de la MyoII dans les cellules voisines. Les forces produites par l'anneau contractile allongent localement la membrane des voisines diluant ainsi la concentration d'E-Cadhérine (E-Cad). En retour, cette réduction locale d'E-Cad, couplée à la contractilité intrinsèque des cellules voisines, génère des flux auto-organisés d'actine et myosine, qui conduisent à l'accumulation de MyoII dans les cellules voisines. En montrant que la cytocinèse épithéliale est une source endogène de contraintes mécaniques, mon travail définit un nouveau mécanisme de mécano-transduction qui coordonne les dynamiques d'actine et myosine dans les cellules en division et leurs voisines, et qui est permet de plus le remodelage des jonctions adhérentes
During epithelial cytokinesis, the remodelling of adhesive cell-cell contacts between the dividing cell and its neighbours has profound roles in the integrity, the arrangement and morphogenesis of proliferative tissues. In both vertebrates and invertebrates, this remodelling requires the activity of non-muscle Myosin II (MyoII) in the interphasic cells neighbouring the dividing cells. However, the mechanisms coordinating cytokinesis and MyoII activity in the neighbours are unknown. Here, we found that, in the Drosophila notum epithelium, each cell division is associated with a mechano-sensing and transmission event controlling MyoII dynamics in the neighbours. We established that the ring pulling forces promote local junction elongation, resulting in a decrease of E-Cadherin (E-Cad) concentration at the ingressing adherens junction (AJ). In turn, the local reduction of E-Cad concentration and the contractility of the neighbouring cells promote self-organized actomyosin flows, ultimately leading to MyoII accumulation at the base of the ingressing AJ. While mechano-sensing has been extensively studied in the context of AJ reinforcement to stabilize the adhesive cell-cell contacts, we propose an alternative mechano-sensing mechanism able to coordinate actomyosin dynamics between epithelial cells and to sustain AJ remodelling in response to mechanical forces

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Voegelin, Manon. "Rôle des facteurs de transcription E2F2 et ID3 dans la progression tumorale et intérêt du ciblage de l'aminopeptidase N/CD13 dans le traitement du cancer colique humain". Phd thesis, Université de Strasbourg, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00871983.

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Abstract (sommario):

Une analyse génomique (Comparative Genomic Hybridization) a été réalisée sur une cohorte d'adénomes et de tumeurs coliques et a mis en évidence, parmi d'autres altérations, la délétion de la région 1p36.12 dans 23% des adénomes et 47% des carcinomes. Parmi les 15 gènes ayant une fonction connue retrouvés dans cette zone, le gène codant pour le facteur de transcription E2F2 a été retenu en raison de son implication dans des processus cellulaires clés. Une analyse de Kaplan- Meier a montré que la délétion de E2F2 est un facteur de bon pronostic de survie sans progression. Afin de mieux cerner l'implication des gènes ciblés par la micro-délétion en 1p36.12, une étude fonctionnelle in vitro et in vivo de la perte de fonction de E2F2 a été réalisée, et étendue à celle de ID3 dont le gène est le voisin direct de E2F2. Nos observations indiquent qu'in vivo, la perte d'E2F2 favorise la croissance tumorale et bloque le développement de métastases. Dans le cadre d'une collaboration avec l'équipe de biochimiste du Pr Céline TARNUS (U.H.A.), une étude pilote a été réalisée pour prouver l'efficacité anti-tumorale de nouveaux inhibiteurs hautement sélectifs pour l'aminopeptidase N.

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Jneid, Rouba. "Effet des bioinsecticides à base de Bacillus thuringiensis sur la physiologie intestinale de la Drosophile". Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2021. http://theses.univ-cotedazur.fr/2021COAZ6003.

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Abstract (sommario):

Bacillus thuringiensis (Bt) est une bactérie sporulante Gram-positive. Elle a synthétise des toxines (Cry) entomopathogènes qui sont enfermées dans un cristal au sein de la spore. Les produits Bt sont les bioinsecticides les plus efficaces contre les lépidoptères ravageurs de cultures et prédominent en agriculture biologique, occupant 70 % des parts de marché des bioinsecticides. La surface mondiale en agriculture biologique a doublé en 10 ans induisant de facto une augmentation de 4% par an de l'utilisation des bioinsecticides. Cette tendance va s'accentuer dans les années à venir suite aux incitations nationales et internationales visant à réduire l’utilisation des produits chimiques. Avec cette forte croissance, les populations sont de plus en plus exposées aux bioinsecticides via l’alimentation, ce qui soulève la question de leurs effets potentiels à long terme sur la santé. Le premier organe en contact avec de la nourriture contaminée par les bioinsecticides Bt est donc le tube digestif.Mon projet de thèse s'intéresse aux conséquences physiopathologiques intestinales liées à l'ingestion chronique de Bt aux doses retrouvées sur les légumes "bio" après traitement en utilisant la drosophile comme modèle. La drosophile permet d'identifier les mécanismes physiologiques, cellulaires et génétiques impliqués dans les effets observés. La conservation de ces mécanismes entre la drosophile et les vertébrés permet ensuite de rapidement aborder les problèmes chez les mammifères. J'ai ainsi montré que l'ingestion de bioinsecticides Btk kurstaki (Btk) aux doses environnementales par des drosophiles adultes induisait sous 24h une apoptose modérée des entérocytes. J'ai montré que cette apoptose est causée par les toxines Cry de Btk. Qui dit apoptose d'entérocytes, dit mise en route du processus de remplacement cellulaire via la différentiation des progéniteurs en entéroblastes puis en entérocytes. Etonnamment, j'ai observé une forte augmentation du nombre de cellules entéroendocrines à partir du premier jour suivant l'ingestion. Par lignage cellulaire, j'ai démontré que peu de nouveaux entérocytes apparaissaient, en tous cas pas suffisamment pour remplacer tous ceux mourant. De fait, le nombre total d'entérocytes dans l'intestin diminue alors que le nombre de cellules entéroendocrine augmente. Ensuite j'ai démontré que les cristaux de toxines de Btk détournaient les progéniteurs de leur destin initial d'entérocytes vers un destin de cellules entéroendocrines, à cause d'un affaiblissement de l'interaction cellule-cellule entre les cellules souches intestinales mères et les cellules filles progénitrices. J'ai pu sauver l'excès de cellules entéroendocrines dépendant du bioinsecticides Btk en augmentant la force des jonctions adhérentes entre les cellules souches et les progéniteurs. La souche Btk composant les produits commerciaux produit 5 toxines Cry différentes (Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac, Cry2Aa, et Cry2Ab) ciblant les larves de lépidoptères. J'ai montré que les toxines de type Cry1A sont capables, seules, d'induire l'augmentation du nombre de cellules entéroendocrines.En conclusion, une partie de mes travaux participent aux connaissances sur les mécanismes physiologiques, génétiques et cellulaires fondamentaux nécessaires au maintien de l'intégrité de l'épithélium intestinale après une agression modérée. D'autre part, mes travaux montrent que l’ingestion de bioinsecticides Btk aux doses utilisées en agriculture induit une perturbation de l’équilibre physiologique de l'intestin d'un organisme non-cible. La poursuite de ce type de travaux est essentielle pour arriver à évaluer minutieusement les risques consécutifs à une exposition aux biopesticides Btk par les organismes non-cibles. Il est important d’obtenir des données précises pour mettre en place des mesures préventives et/ou curatives pour la santé humaine et l'environnement
Microbes, toxins and chemicals such as pesticides are harmful agents that could attack the gastrointestinal tract throughout organismal life. This triggers a rapid renewing of damaged intestinal cells to sustain a functional barrier to limit the risk of developing pathologies. The repair process involves a transient proliferation of intestinal stem cells (ISCs) and the differentiation of their progeny into enterocytes to replace the damaged ones. Among pesticides, the broadly used bioinsecticides composed of spores and crystalline (Cry) toxins of Bacillus thuringiensis subsp kurstaki (Btk) are expected to supplant synthetic chemical pesticides to specifically fight lepidopteran pests. We have investigated here the effects of spores and toxins of Btk ingested along with the food on intestinal cellular homeostasis of the non-target dipteran Drosophila melanogaster. We showed that Btk Cry toxins induce enterocyte death and ISC proliferation. Surprisingly, a high proportion of ISC's daughter cells differentiate into enteroendocrine cells instead of their initial enterocyte destiny. This imbalanced intestinal cell composition is due to Cry toxins which weakened cell adhesion between the ISC mother cell and its immediate daughter progenitor leading the latter to adopt an enteroendocrine cell fate. Our results further showed that Cry1A family of toxins is implicated in this intestinal cell fate diversion, suggesting that Btk bioinsecticides induce non-negligible deleterious effects on gut physiology

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Pinto, Giulia. "Tunneling Nanotubes and their role in Glioblastoma Treatment-Resistance". Thesis, Sorbonne université, 2020. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=http://theses-intra.upmc.fr/modules/resources/download/theses/2020SORUS061.pdf.

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Abstract (sommario):

Le glioblastome (GBM) est un cancer du cerveau très agressif dont la rechute après les thérapies est provoquée par des cellules souches appelées GSC. La communication intercellulaire joue un rôle dans la résistance aux thérapies, car les GSC peuvent s'interconnecter par des extensions épaisses, les Tumor Microtubes (TM), qui favorisent la transmission de courant à travers des GAP-junctions. Les Tunneling Nanotubes (TNT) sont de minces canaux de communication ouverts entre cellules permettant le transfert bilatéral de matériel cellulaire. Ils ont également été décrits dans plusieurs cancers associés à un phénotype plus malin. L'objectif de mon projet était de déterminer si des TNT existaient dans divers modèles de GBM et s’ils contribuaient à la communication cellulaire et à la résistance aux thérapies. J'ai utilisé trois lignées cellulaires et deux GSC provenant d’un même patient. Toutes ces cellules étaient capables de former des TNT transférant vésicules ou mitochondries en culture adhérente. Les deux GSC ont montré différentes capacités de communication par TNT, tant dans des conditions de contrôle que d'irradiation, en accord avec l'hétérogénéité de la tumeur d'origine. En cultivant les GSC dans des organoïdes tumoraux, un modèle tridimensionnel représentatif de plusieurs caractéristiques tumorales, j'ai démontré la présence de TNT fonctionnels, ainsi que de connexions ressemblant aux TM. En conclusion, je propose que les TNT existent dans le GBM, où ils permettent le transfert de matériel cellulaire et qu'avec les TM, ils sont impliqués dans la résistance aux thérapies et la rechute du GBM
Glioblastoma (GBM) is a very aggressive brain cancer that relapses after therapy and is caused by stem cells called GSCs. Intercellular communication plays a role in resistance to therapy, as the GSCs can interconnect through thick extensions, named Tumor Microtubes (TM), which promote the transmission of current through GAP-junctions. Tunneling Nanotubes (TNTs) are thin open communication channels between cells allowing the bilateral transfer of cellular material. They have also been described in several cancers and associated with a more malignant phenotype. The aim of my project was to determine whether TNTs exist in various GBM models and whether they contribute to cellular communication and resistance to therapy. I used three cell lines and two GSCs from the same patient. All of these cells were capable of forming TNTs transferring vesicles or mitochondria in adherent culture. The two GSCs showed different TNT communication capabilities under both control and irradiation conditions, in accordance with the heterogeneity of the original tumour. By cultivating the GSCs in tumour organoids, a three-dimensional model representative of several tumour characteristics, I demonstrated the presence of functional TNT, as well as TM-like connections. In conclusion, I propose that TNTs exist in the GBM, where they allow the transfer of cellular material and that together with TMs, they are involved in resistance to therapies and relapse of the GBM

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Ferro, Magali. "Development of conducting polymer devices for the monitoring of in vitro barrier tissue models". Thesis, Lyon, 2018. http://www.theses.fr/2018LYSEM017.

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Abstract (sommario):

La règlementation européenne des 3Rs (Remplacer, Réduire, Raffiner) impose de diminuer le nombre d’animaux utilisé à des fins de recherches scientifiques. Elle répond à des exigences éthiques en soutenant le développement de méthodes alternatives. Dans cet objectif, les modèles cellulaires in vitro connaissent un essor important notamment grâce à la possibilité d’utiliser des cellules humaines pour reproduire des tissus ou des organes en laboratoire. Les récents progrès en micro-fabrication et techniques d’ingénierie tissulaire ont permis de se rapprocher des conditions physiologiques des tissus reproduits en évoluant notamment vers des configurations en 3-Dimension. L’intégration de techniques de caractérisation pour rendre observable les phénomènes biologiques à l’échelle cellulaire ou tissulaire est inhérente au développement des modèles in vitro notamment pour leur utilisation en toxicologie. Au cours de cette thèse, j’exploite les possibilités qu’offre le polymère conducteur PEDOT:PSS intégré dans des dispositifs électriques pour la caractérisation de barrières tissulaires. Ainsi, les transistors organiques électrochimiques (OECTs) ont été adaptés pour le développement de plateformes de caractérisation de sphéroïdes, de modèles tissulaires à l’interface air-liquide ou encore de réseaux vasculaires. Le lyophilisation du PEDOT :PSS a également permis la création d’un échafaudage 3D offrant de nouvelles perspectives pour le mélange de polymères électriquement actifs avec la matrice extracellulaire des tissus
In vitro cell models are widely accepted platforms for toxicological studies. However starting from the 2D models, improvements are needed to reproduce the physiological environment of the tissue. Advances in tissue engineering have given rise to 3D barrier tissue models that recreate cell-cell and cell-matrix interactions. However, electrical platforms to quantify barrier tissue permeability hasn’t followed the rapid pace of models complexification. In this work I explore the possibilities to design conductive polymer-based devices adapted for the characterization of barrier tissue models. Conventional electrical tools used to evaluate integrity of barrier tissues are made of metal electrodes placed on each side of the tissue. This technology presents limitations when it comes to analyzing customized 3D tissue models due to issues in electrode size and stiffness. As an alternative option to metal electrodes, organic electronic materials have shown great promise to interface with biological tissues. In particular the Organic ElectroChemical Transistor (OECT) using PEDOT:PSS has already shown great efficiency to quantify electrical properties of barrier tissues in 2D. Thanks to microfabrication techniques they can be miniaturized and tuned to form mechanically compliant interface with a range of biological tissues. In this thesis, OECT compatibility with models such as tracheal cell culture at the air-liquid interface, spheroid models and microvessel-on-a-chip system has been tested. The achievements described in this work present significant progress in the field of in vitro platforms of barrier tissue modeling for toxicology and drug discovery testing

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Chepied, Amandine. "Étude de l'implication de la Connexine 43 dans le processus d'invasion des glioblastomes humains". Thesis, Poitiers, 2015. http://www.theses.fr/2015POIT2274/document.

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Abstract (sommario):

Depuis plusieurs décennies, la communication intercellulaire par jonctions gap (CIJG) est connue pour être impliquée dans la cancérogenèse. Cette implication semble complexe par le fait que les connexines pourraient augmenter la capacité d’invasion des cellules cancéreuses tout en diminuant leur prolifération. Ceci était particulièrement observé pour la connexine 43 (Cx43) dans le cas de cellules de gliomes. Or, les propriétés d’invasion des gliomes de haut grade, les glioblastomes multiformes (GBM), les rendent difficiles à supprimer par résection chirurgicale et favorisent leur récidive. Afin de préciser le rôle de la Cx43 dans le contrôle des capacités invasives de cellules de GBM, nous avons utilisé une lignée de cellules de glioblastome humaine U251 exprimant par shRNA des niveaux, en ARNm et protéiques, de Cx43 réduits. Ces clones shRNA des cellules U251 montrent une corrélation entre le niveau d’expression de la Cx43 et le processus d’invasion. Au cours de ce travail, nous avons montré, pour la première fois, que la Cx43 est localisée dans les structures protéolytiques permettant l’invasion, les invadopodes. Nous avons démontré aussi que, par sa localisation, la Cx43 favorise la formation des invadopodes en agissant comme une protéine d’échafaudage qui permet l’interaction de Src de la Cortactine. De plus, l’activité hémicanal de la Cx43, probablement inhibée par le Bisphénol A, possède des effets négatifs sur la cinétique de développement des invadopodes. Une étude du protéome et du sécrétome des cellules U251 et des clones shRNA a permis l’identification des protéines impliquées dans l’invasion et la formation et fonction des invadopodes. En conclusion, la Cx43 participe au processus invasif des cellules de GBM en favorisant la formation et la fonction des invadopodes. Cette nouvelle fonction de la Cx43 semble être la conséquence de ses propriétés de protéines d’échafaudage et hémicanal, et non de son rôle principalement décrit dans la CIJG
Since several decades, the gap junction intercellular communication (GJIC) is known to be involved in carcinogenesis. This involvement seems complicated by the fact that connexins could increase cancer cells invasion ability while decreasing their proliferation. This was especially observed for connexin 43 (Cx43) in the case of glioma cells. But high-grade gliomas, glioblastoma multiform (GBM) has invasion properties that make it difficult to remove surgically and promote their recurrence. To clarify the Cx43 role in the control of GBM cells invasive capacities, we used the GBM U251 cell line expressing Cx43 levels, mRNA and protein, reduced by shRNA strategy. Through this approach, we confirmed that Cx43 expression level is associated with the invasive capacity of GBM cells. Furthermore we have shown, for the first time, that Cx43 is localized in invasive proteolytic structures, the invadopodia. We also show that, by its location, Cx43 promotes invadopodia formation by acting as a scaffolding protein that allows Src and Cortactin interaction. Moreover, Cx43 hemichannel activity, probably inhibited by Bisphenol A, has negative effects on invadopodia kinetics development. A proteome and secretome study of U251 cells and shRNA clones allowed the identification of proteins involved in invasion and invadopodia formation and function.In conclusion, Cx43 participates in the invasive process of GBM cells by promoting invadopodia formation and function. This new function of Cx43 seems to be the result of its scaffold proteins and hemichannel properties, but not its role described mainly in CIJG

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Wang, Zhimin. "Studying the formation of tricellular junction upon epithelial cell division in Drosophila". Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066531.

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Abstract (sommario):

Pour maintenir l'organisation et la polarité du tissu épithélial, de nouvelles jonctions cellulaires ont besoin de se former lors de la division cellulaire. Pour comprendre les mécanismes de formation de la jonction durant la cytokinèse, nous avons exploré dans les tissus épithéliaux de la Drosophile, la formation des jonctions septées tricellulaires (TCJs), critique à la fois dans la fonction de barrière tissulaire, dans l'homéostasie des cellules souches, ainsi que dans l'orientation du fuseau mitotique. Durant les dernières étapes de la constriction de l'anneau contractile, les membranes des deux cellules filles et des cellules voisines localisées sous la jonction adhérente (JA) restent enchevêtrées dans une structure à 4 cellules apposée au corps intermédiaire. Les constituants protéiques de la jonction septée, Discs-large (Dlg) et Neuroglian (Nrg), ainsi que les composants de la TCJ, Gliotactin (Gli) et Anakonda (Aka), s'accumulent dans cette structure à 4 cellules. Par la suite, la descente basale du corps intermédiaire est corrélée au détachement des membranes des cellules voisines, au désengagement des cellules filles de leurs voisines, et à la formation de TCJs matures. Le détachement des cellules voisines du corps intermédiaire est indépendant de l'abscision. Au contraire, la perte de la fonction Gli ou Aka empêche le détachement entre les cellules filles-voisines et le mouvement du corps intermédiaire. Ainsi, nous proposons que les protéines de la TCJ contrôlent une étape additionnelle de la cytokinèse, nécessaire au désengagement des cellules filles et de leurs voisines durant la cytokinèse épithéliale
To maintain epithelial tissue organisation and polarity, new cell-cell junctions need to be formed upon cell division. To understand the mechanisms of junction formation during cytokinesis, we explored in Drosophila epithelial tissues, the de novo formation of tricellular septate junctions (TCJs), which are critical to tissue barrier function, stem cell homeostasis and mitotic spindle orientation. During the final stages of cytokinetic ring constriction, the membranes of the two daughter cells and of the neighbouring cells located below the adherens junction (AJ) remain entangled in a 4-cell structure apposed to the midbody. Protein constituents of the septate junction Discs-large (Dlg) and Neuroglian (Nrg) and the components of the TCJ Gliotactin (Gli) and Anakonda (Aka) accumulate in this 4-cell structure. Subsequently, a basal descent of the midbody correlates with the detachment of the neighbouring cell membranes, disengagement of the daughter cells from their neighbours and the formation of mature TCJs. The detachment of the neighbouring cells from the midbody is independent of abscission. On the contrary, the loss of Gli or Aka function prevents the resolution of the connection between the daughter-neighbour cells and the midbody movement. Altogether, we propose that TCJ proteins control an additional step of cytokinesis necessary for the disentanglement of the daughter cells and their neighbours during epithelial cytokinesis

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Gayrard, Charlène. "Mécanotransduction au complexe E-cadhérine/β-caténine lors de la transition épithelio-mésenchymateuse". Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCC269/document.

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Abstract (sommario):

Dans les organismes multicellulaires, les cellules génèrent et subissent des forces mécaniques qui se propagent aux cellules voisines. Ces forces peuvent déterminer la forme des tissus et organes, et aussi être converties en signaux biochimiques. Dans un épithélium, les cellules forment un tissu en adhérant directement les unes aux autres grâce à des complexes d’adhérence, tels que les Jonctions Adhérentes. Ces Jonctions Adhérentes sont composées de protéines transmembranaires les E-cadhérines, dont la partie cytoplasmique est sous tension générée par le cytosquelette d’actomyosine par un lien assurée par la β-caténine. La β-caténine est aussi un cofacteur de transcription majeur qui régule l’activité de gènes impliqués dans la transition épithélio-mésenchymateuse une fois dans le noyau. L’accumulation nucléaire et l’activité transcriptionnelle de la β-caténine peuvent avoir lieu à la suite de stimulations mécaniques dans des situations physiologiques et pathologiques, et ont été proposées comme la conséquence d’une libération de la β-caténine des Jonctions Adhérentes suite à sa phosphorylation. Néanmoins, les preuves directes de ce phénomène et ses mécanismes manquent, et le rôle qu’y tient la tension des E-cadhérines n’est pas connu.Dans cette thèse, nous avons établi la relation entre la tension des E-cadhérines et la localisation nucléaire et l’activité de la β-caténine, prouvé l’existence d’une translocation de la membrane au noyau de la β-caténine, et caractérisé les mécanismes moléculaires sous-jacents dans des cellules en migration induite par un facteur de croissance ou par blessure sur un épithélium, deux conditions qui récapitulent au moins partiellement une transition épithélio-mésenchymateuse.Nous avons montré que l’accumulation nucléaire de la β-caténine est due à un départ substantiel de celle-ci de la membrane, spécifiquement dans les cellules en migration. Cette translocation a lieu en aval d’une voie de signalisation impliquant les kinases Src et FAK, et qui conduit à une relaxation de tension des E-cadhérines. Le mécanisme sous-jacent implique une réorganisation du cytosquelette d’actine, caractérisé par un enrichissement des fibres des stress ventrales, soutenant les protrusions, en phospho-myosine, au détriment du cortex d’actine des Jonctions Adhérentes. En revanche, les phosphorylations dans le complexe cadhérine/caténine ne sont pas requises. Ces résultats démontrent que les E-cadhérines ont un rôle de senseur de la mécanique intracellulaire, et que les adhésions focales sont impliquées dans l’activation de la voie de signalisation β-caténine
In multicellular organisms, cells generate and experience mechanical forces that propagate between and within cells. These forces may shape cells, tissues and organs, and also convert into biochemical signals. In a simple epithelium, cells form tissue sheets by directly adhering to one another through adhesion complexes, such as the Adherens Junctions. Adherens Junctions comprise transmembrane proteins E-cadherins, which are under actomyosin-generated tension via a link that contains β-catenin. β-catenin is also a major transcription cofactor that regulates gene activity associated with Epithelial-to-Mesenchyme Transition when translocated in the nucleus. β-catenin nuclear localization and transcriptional activity are mechanically inducible in a variety of healthy and disease models and were proposed to follow phosphorylation-induced -catenin release from E-cadherin. However, direct evidence for this translocation and these mechanisms are lacking, and whether E-cadherin tension is involved is unknown.In this thesis, we assess the relationship between E-cadherin tension and β-catenin nuclear localization and activity, determine the relevance of β-catenin shuttling between membrane and nucleus, and characterize the underlying molecular mechanisms in cells migrating in an at least partial EMT-like fashion upon hepatocyte growth factor (HGF) or wound stimulation. We showed that β-catenin nuclear activity follows a substantial release from the membrane that is specific to migrating cells. This translocation occurs downstream of the Src-FAK pathway, which targets E-cadherin tension relaxation. The underlying mechanisms sufficiently involve actomyosin remodeling, characterized by an enrichment of ventral stress fibers that capture phosphomyosin at the expense of the cortex at Adherens Junctions. In contrast, phosphorylations of the cadherin/catenin complex are not substantially required. These data demonstrate that E-cadherin acts as a sensor of intracellular mechanics in a crosstalk with cell-substrate adhesions that targets β-catenin signaling

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El, khatib Mariam. "Implication des porines dans la genèse et le développement des biofilms de Providencia stuartii". Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017GREAV012/document.

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Abstract (sommario):

Les biofilms, communautés multicellulaires bactériennes, sont omniprésents. Malgré leur importance pour l’écosystème, ils présentent une menace pour l'industrie autant que pour la santé humaine. La virulence des biofilms procède surtout de leur résistance élevée aux antibiotiques, qui rend leur éradication quasiment impossible. Ainsi, les biofilms sont impliqués dans la plupart des infections bactériennes chroniques, causant chaque année plus de 4000 décès en France. P. stuartii est une bactérie connue pour sa capacité à former des biofilms dans le tractus urinaire humain. Elle est responsable de 10% des INU chroniques et est décrite comme étant la plus résistante de son genre. Malgré ces faits, les études menées sur cette bactérie sont rares, freinant la compréhension du mécanisme de développement et de résistance de ses biofilms et compliquant ainsi l’avancement de nouvelles thérapies pour lutter, prévenir ou éradiquer ces infections. P. stuartii exprime au niveau de sa membrane externe deux porines, Omp-Pst1 et Omp-Pst2, qui constituent 70% du contenu protéique membranaire. Ces porines sont le conduit principal permettant à la bactérie de communiquer et d’échanger avec son milieu environnant. Ainsi, les porines sont vitales pour la bactérie.A ce jour, trois publications sont disponibles qui traitent de ces deux porines, mais aucune n’a exploré leur influence sur la formation des biofilms bactériens. Les travaux effectués au cours de ma thèse ont ainsi visé à réduire le manque de connaissance sur les biofilms de P. stuartii et à dévoiler le rôle des porines dans l’établissement et la résistance de ces biofilms. Pour cela, nous avons segmenté notre travail en quatre parties ayant pour objectifs (1) de comprendre la formation des biofilms de P. stuartii et leur réponse aux stress du milieu environnant ; (2) de décrire l’effet de la suppression ou la surexpression des porines ; (3) d’étudier à l’échelle moléculaire et atomique le comportement des porines isolées ; et (4) de développer des outils pour étudier les porines à l’échelle moléculaire au sein d’un biofilm de P. stuartii
Biofilms, bacterial multicellular communities, are ubiquitous. Despite their importance to the ecosystem, they pose a threat to both industry and human health. The virulence of biofilms is mainly due to their high resistance to antibiotics, which makes their eradication virtually impossible. Thus, biofilms are involved in most chronic bacterial infections, causing each year more than 4,000 deaths in France. P. stuartii is a bacterium known for its ability to form biofilms in the human urinary tract. It is responsible for 10% of chronic nosocomial urinary infections and is described as the most resistant of its kind. Despite these facts, studies on this bacterium are rare, hampering the understanding of the mechanism of development and resistance of its biofilms and thus complicating the advancement of new therapies to fight, prevent or eradicate these infections. P. stuartii expresses at its outer membrane two porins, Omp-Pst1 and Omp-Pst2, which constitute 70% of the membrane protein content. These porins are the main conduit allowing the bacterium to communicate and exchange with its surrounding environment. Thus, porins are vital for the bacteria.To date, three publications are available that deal with these two porins, but none have explored their influence on the formation of bacterial biofilms. The work carried out during my thesis thus aimed to reduce the lack of knowledge about P. stuartii's biofilm and to unveil the role of porins in the establishment and resistance of these biofilms. For this, we have divided our work into four parts aiming at (1) understanding of P. stuartii's biofilms formation and their response to the stresses of the surrounding environment; (2) describing the effect of suppression or overexpression of porins; (3) studying the behavior of isolated porins on a molecular and atomic scale; and (4) developing tools for studying porins on a molecular scale within a biofilm of P. stuartii

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Le, Morvan Valérie. "Etude du gène candidat suppresseur de tumeur codant pour la protéine de jonction serrée ZO-2". Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR28649.

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BEX, VALERIE. "Actions de divers agents modulateurs de la cancerogenese sur les jonctions communicantes de systemes cellulaires hepatiques". Paris 6, 1995. http://www.theses.fr/1995PA066792.

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Abstract (sommario):

Le developpement de cancers resulte de l'intervention de multiples facteurs endogenes ou environnementaux agissant par voie genetique ou epigenetique. La prevention du cancer passe en partie par l'identification de ces facteurs et la connaissance de leurs mecanismes d'action. Pour l'instant, aucun test ne permet de detecter les modulateurs de la cancerogenese qui interviennent par voie epigenetique. Pourtant, ces dernieres annees, il est apparu que les modulateurs (promoteurs de tumeurs) auraient une cible d'action commune: les jonctions communicantes (jc). Les jc sont des canaux membranaires etablis entre deux cellules, assurant une communication intercellulaire (ci) directe, materialisee par l'echange de diverses molecules cytoplasmiques de petite taille (signaux intracellulaires des voies de signalisation notamment). Elles jouent donc un role important dans le controle de l'homeostasie tissulaire. Elles sont constituees par l'association de deux connexons, eux-memes composes de six proteines, les connexines (cx). Les cx sont une famille de proteines exprimees (voire coexprimees) dans certains tissus, et elles sont l'objet de regulations transcriptionnelles et post-traductionnelles (phosphorylations). Le but de ce travail a ete d'etudier l'effet et les mecanismes d'action de divers modulateurs presents dans l'alimentation (derives des vitamines a et e, flavonoides: apigenine et tangeretine ; antioxygenes de synthese: bha et bht ; contaminant alimentaire: ddt ; et de modulateurs de reference: phenobarbital et tpa) sur les jc de modeles cellulaires hepatiques. Ce travail s'integre dans un programme de recherche europeen dans lequel est engage notre equipe, et qui a pour but la mise au point et la validation d'un test base sur l'alteration des jc pour la detection de modulateurs de la cancerogenese. La premiere partie de ce travail a consiste a caracteriser les jc (etat fonctionnel ; cx exprimee) de divers systemes cellulaires hepatiques: lignees epitheliales hepat iques de rat normales (iar 20, iar 203, rel), ou transfectees par les adnc codant pour les oncoproteines nucleaires cfos (clone 43c) et cjun (clone cj-a) ; hybrides somatiques wif (wif12-1 et wif-b) tres differencies ; lignees embryonnaires (fo), adulte (f292) et ft (tumorale) provenant de souris transgeniques. Dans la deuxieme partie, les effets des molecules selectionnees ont ete etudies (de maniere non exhaustive) sur les jc des lignees iar20, iar203, rel, 43c, cj-a qui sont peu differenciees et expriment la cx 43, et de la lignee wif12-1 qui est differenciee et qui exprime la cx 32. Le bha, le bht, le ddt, et le tpa inhibent rapidement les ci des differentes lignees exprimant la cx43 ou la cx32, le phenobarbital par contre n'a un effet inhibiteur que sur les cellules wif12-1. La perte des capacites de ci induite dans la lignee rel n'est pas due a une diminution de la quantite de cx 43, elle est associee a l'hyperphosphorylation de la cx 43 et dans certains cas (bht, tpa) a l'endocytose des jc. Par ailleurs, le succinate de tocopherol inhibe les ci des cellules iar 203 sans modifier la synthese ni l'etat de phosphorylation de la cx 43 (l'-tocopherol, lui, est neutre). Les cellules transfectees par cfos ou cjun repondent globalement de la meme maniere aux modulateurs que les cellules parentales sauf dans le cas des cellules surexprimant cfos qui repondent plus durablement au tpa. L'acide retinoique (modulateur negatif) provoque une stimulation de la ci en augmentant la quantite de cx 43 par un mecanisme post-transcriptionnel dans les cellules iar 203 (bex et al. , 1995). L'apigenine et la tangeretine sont egalement capables d'augmenter la quantite de cx 43 des cellules rel, et de reserver en partie l'effet inhibiteur du tpa (chaumontet et al. , 1994) en empechant l'endocytose des jc. En conclusion, cette etude a permis de detecter differentes activites modulatrices des ci (inhibition, stimulation, antagonisme). Certains mecanismes d'action ont pu etre analyses et apportent de nombreuses informations sur le fonctionnement des jc

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Guyomar, Tristan. "Roles of acto-myosin cortex dynamics in organoid self-organisation". Electronic Thesis or Diss., Strasbourg, 2023. http://www.theses.fr/2023STRAJ100.

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Abstract (sommario):

Dans cette thèse, nous étudions les organoïdes, mini-organes auto-assemblés issus de quelques cellules souches, qui offrent une perspective unique pour étudier l'organogenèse. Notre recherche relie les formes et les mouvements collectifs des organoïdes à la dynamique hors équilibre du cortex d’acto-myosine. À l'interface entre la physique et la biologie, nous concevons des expériences pour quantifier les propriétés cellulaires et tissulaires et nous intégrons ces mesures dans des modèles physiques révélant les règles d’auto-organisation des organoïdes. En utilisant des cystes MDCK, un modèle organotypique, nous explorons (i) le rôle des asymétries corticales sur la forme des cellules et du cyste, (ii) comment les protéines de jonction serrée influent sur la morphologie et la mécanique du cyste, et (iii) l'émergence de la rotation collective spontanée en 3D de doublets cellulaires due à la rupture de symétrie de la dynamique d’acto-myosine. Notre travail établit un lien entre l'auto-organisation des organoïdes et la dynamique d’acto-myosine, révélant comment les propriétés hors équilibre dirigent la morphogenèse
In this PhD study, we investigate organoids—self-assembled mini-organs derived from a few stem cells, offering a unique perspective on organogenesis. Our research links organoid shapes and collective motions to the out-of-equilibrium dynamics of the acto-myosin cortex. At the interface between Physics and Biology, we design experiments to quantify cellular and tissue properties and use theoretical physics to integrate measurements into models revealing the self-organization of organoids. Using MDCK cysts, an organotypic model, we explore (i) the role of cortical asymmetries on cell shape and cyst structure, (ii) how tight junction proteins influence cyst morphology and mechanics, and (iii) the emergence of spontaneous 3D collective rotation of cell doublets due to symmetry breaking of acto-myosin dynamics. Our work highlights the intricate link between organoid self-organisation and acto-myosin dynamics further revealing how out-of-equilibrium properties drive morphogenesis

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Heyraud, Stéphanie. "Nouvelle architecture de la jonction adhérente endothéliale". Phd thesis, Université Joseph Fourier (Grenoble), 2007. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00179647.

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Abstract (sommario):

Les cellules tumorales, comme les leucocytes, franchissent l'endothélium vasculaire au niveau des jonctions intercellulaires à l'endroit même où s'exprime la VE-cadhérine, la protéine majeure des jonctions adhérentes. Cette transmigration déstabilise transitoirement les jonctions, ce qui affecte l'intégrité de ce tissu.
Afin de comprendre les mécanismes sous-jacents à l'ouverture des jonctions, nous avons établi la composition protéique du complexe à base de VE-cadhérine des jonctions adhérentes matures de cellules endothéliales primaires confluentes de type HUVEC. Pour cela, nous avons couplé immunoprécipitation et analyse protéomique par spectrométrie de masse (LC-nanoESI-MS/MS). Nous avons ainsi identifié de nouveaux partenaires du complexe à base de VE-cadhérine jamais identifiés auparavant au niveau de la jonction adhérente endothéliale. Parmi ceux-ci se trouvent des protéines liant l'actine telles l'annexine 2 et la moésine.
Nos résultats indiquent que l'annexine 2, qui s'accumule à la membrane plasmique au niveau des radeaux de cholestérol, entre en interaction directe avec le complexe à base de VE-cadhérine. Ainsi, l'annexine 2 connecte le complexe jonctionnel à base de VE-cadhérine au cytosquelette d'actine dans les HUVEC confluentes. L'utilisation de siRNA nous a permis d'établir que l'expression de l'annexine 2 est absolument nécessaire au maintien de la VE-cadhérine à la membrane plasmique. Nos résultats suggèrent que l'annexine 2, connectée à l'actine, arrime le complexe à base de VE-cadhérine au niveau des radeaux de cholestérol. En limitant la diffusion membranaire du complexe jonctionnel, ces interactions aboutissent à une consolidation des jonctions adhérentes ce qui contribue à maintenir l'intégrité de l'endothélium vasculaire. Lorsque les HUVEC sont soumises à des molecules destabilisant les jonctions adhérentes, une délocalisation de l'annexine 2 de la membrane vers le cytosol et une perturbation de la localisation de la VE-cadhérine sont observés. Ceci suggère que le prérequis à l'ouverture des jonctions adhérentes nécessite une rupture de l'interaction existant entre le complexe à base de VE-cadhérine et l'annexine 2.
La moésine, quant à elle, semble interagir avec le complexe à base de VE-cadhérine dans les jonctions immatures formées entre cellules sub-confluentes. La moésine serait donc impliquée dans l'établissement des contacts intercellulaires précoces plutôt que dans la maturation des jonctions endothéliales.

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Sousa, Sandra. "Mécanismes d'entrée de Listeria monocytogenes dans les cellules non-phagocytaires : étude des facteurs cellulaires en aval de l'interaction InIA/E-cadhérine". Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077172.

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Derangeon, Mickaël. "Implication de la GTPase RhoA et des récepteurs à la sérotonine couplés aux protéines G dans la régulation fonctionnelle des canaux intercellulaires présents dans les myocytes auriculaires et ventriculaires de rat nouveau-né". Poitiers, 2007. http://www.theses.fr/2007POIT2309.

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Tria, Scherrine. "Novel in vitro models for pathogen detection based on organic transistors integrated with living cells". Phd thesis, Ecole Nationale Supérieure des Mines de Saint-Etienne, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00972057.

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Abstract (sommario):

In biological systems, different tissues have evolved to form a barrier. An example is the intestinal epithelium, consisting of a single layer of cells lining the wall of the stomach and colon. It restricts the passage of harmful chemicals or pathogens from the light into the tissue, while selectively absorbing the most nutrients, electrolytes and water are necessary for the host. Tight junctions are structures which limit the passage of the material through the space between the cells. The ability to measure the paracellular and transcellular transport is of vital importance because it provides a wealth of information on the state of the barrier, indicative of certain disease states , since the disruption or malfunction of the structures involved in the transport through the tissue barrier is often caused or is indicative of toxicity or disease. In addition, the degree of integrity of the barrier is a key indicator of the relevance of a particular model in vitro for use in toxicology and drug screening. The advent of organic electronics has created a unique opportunity to connect the worlds of electronics and biology, using devices such as organic electrochemical transistor (OECT), which provides a very sensitive way to detect ionic currents. These devices have unprecedented sensitivity in a format that can be mass produced at low cost.The purpose of this study was to integrate a monolayer of cells representative of the gastro intestinal barrier with OECTs , to create devices that detect disruptions of the barrier in a timely and sensitive manner. This technique was demonstrated to be at least as sensitive, but a higher speed than current techniques on the market

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Ben, Chedly Hedi. "Dynamique et activité des cellules épitheliales mammaires lors de la monotraite chez la chèvre : implication de l’ouverture des jonctions cellulaires". Rennes, Agrocampus Ouest, 2009. http://www.theses.fr/2009NSARI053.

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Abstract (sommario):

La durabilité des élevages laitiers nécessite une maîtrise des coûts de production ainsi qu’une amélioration des conditions de travail. Une évolution des pratiques d’élevage en ce sens pourrait se faire par la monotraite. Cependant, cette pratique induit une baisse de la production laitière. Certaines hypothèses suggèrent l’implication d’une perturbation de l’intégrité de l’épithélium mammaire dans ce phénomène. L’identification des mécanismes de régulation impliqués dans la baisse de la production laitière lors du passage à la monotraite permettrait d’une part l’optimisation de l’application de cette pratique pour minimiser ses effets négatives mais d’autre part, d’évaluer l’impact de la perturbation de l’intégrité de l’épithélium mammaires. Le second objectif de la thèse a été de déterminer les mécanismes responsables de la baisse de la production laitière lors de la monotraite et l’implication de l’ouverture des jonctions cellulaires dans ces phénomènes. Dans un premier volet du travail expérimental, une induction de l’ouverture des jonctions cellulaires dans la glande mammaire de chèvre a été réalisée par l’infusion intra mammaire des solutions d’EGTA et de lactose ainsi que par l’accumulation du lait pendant 36 h. L’effet des solutions d’EGTA et de lactose sur l’état des jonctions cellulaires a été confirmé in vitro à l’aide d’un modèle cellulaire. La perturbation de l’intégrité épithéliale dans la glande mammaire suite à ces traitements a été associée à une induction de la mort et une inhibition de l’activité des cellules épithéliales mammaires
The control of the cost of production and the improvement of working conditions are needed for the sustainability of dairy farming. This can be reached by the development of new management practices such as once daily milking. However, this practice is associated to a decrease in milk yield. Some hypotheses suggest that the disruption mammary epithelium can be involved in this phenomenon. The identification of regulatory mechanisms involved in practice in order to minimize its negative effects but also will enable evaluation the effects of determine the effects of the induction of cell junction disruption on the dynamics and activity of mammary epithelial cells. The second goal of this work was to identify the mechanisms responsible for a milk yield decrease during once daily milking and the involvement of mammary cell junction disruption in that phenomenon. In a first part, an induction of cell junction disruption in the goat mammary gland was carried out by intra mammary infusions of EGTA and lactose and also by 36 h of milk accumulation

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