Tesi sul tema "Genus Canis"

O surgimento e a evolução da vida na terra foram possíveis graças ao desenvolvimento de mecanismos temporais precisos capazes de ajustar os processos fisiológicos que ocorriam no interior do organismo com os ciclos ambientais, promovendo assim, ganhos na capacidade adaptativa e reprodutiva dos indivíduos. Neste contexto, luz e temperatura são as duas pistas temporais mais relevantes para resetar o relógio endógeno e, aparentemente, esses dois zeitgebers trabalham juntos para manter os ritmos circadianos. Uma ampla gama de fotorreceptores e fotopigmentos evoluiu no sentido de perceber com alta sensibilidade a informação fótica fornecida pelo ambiente e, recentemente, foi demonstrado que a detecção de temperatura também pode ser exercida pelos fotopigmentos rodopsina e melanopsina, sendo mediada por canais TRP (Shen et al., 2011). Consideramos as células B16-F10 Per1::Luc como um modelo promissor para o estudo de luz e temperatura em relógios periféricos, uma vez que essa linhagem expressa os dois fotopigmentos apontados com função de termorreceptores em Drosophila. Nossos estudos nos permitiram verificar que a luz não atua como um agente sincronizador nessas células, que se mantiveram em livre curso mesmo após um pulso de 10 min de luz azul (650 lux). Por outro lado, um pulso de temperatura de 2,5º C acima da temperatura de manutenção por 1h atuou ajustando a expressão do gene Per1, imprimindo um ritmo circadiano, diferentemente do observado no controle. Com base nessas informações, hipotetizamos que a informação de luz, percebida via melanopsina na retina de mamíferos, levaria a regulação da temperatura circadiana pelo NSQ, e a temperatura corporal, por sua vez, poderia atuar como uma pista interna para a sincronização dos tecidos periféricos, tendo os canais TRP como mediadores. Para responder esta questão, utilizamos camundongos WT e TrpV1 KO submetidos a diferentes protocolos de luz e avaliamos a expressão de genes do relógio Per1, Per2, Clock e Bmal1 e dos canais TrpV1 e TrpA1 em tecidos periféricos. Identificamos que a glândula suprarrenal, fígado e tecido adiposo marrom possuem uma maquinaria do relógio tipicamente ativa e acreditamos que a oscilação dos genes de relógio observada nesses tecidos é expressiva. Interessantemente, vimos também que o TrpV1, além de ser expresso nos tecidos analisados em animais WT, apresenta uma transcrição rítmica no fígado e tecido adiposo marrom de animais em LD, corroborando nossa hipótese de que canais TRP atuam como mediadores da informação de luz aos tecidos periféricos. Dadas as diferenças encontradas entre os animais WT e TrpV1 KO, sugerimos que a presença do canal TRPV1 pode ser essencial, embora seu grau de envolvimento varie de acordo com o tecido. No que diz respeito ao canal TRPA1, encontramos dois resultados que merecem ser destacados. Primeiramente, identificamos no fígado de camundongos TrpV1 KO mantidos em LD uma provável compensação da expressão de TrpA1 na ausência de TrpV1 e, curiosamente, que o tecido adiposo marrom não expressa o canal TrpA1. Considerando os resultados deste trabalho sobre o envolvimento dos canais TRP em resposta à luz e temperatura, acreditamos ter fortalecido nossa hipótese inicial, principalmente após demonstrarmos o papel do canal TRPV1 e que tecidos periféricos são sincronizados por alterações de temperatura.
The life emergence and evolution on Earth were made possible by the development of precise temporal mechanisms able to adjust the physiological processes within an organism with environmental cycles, thus promoting gains in the adaptive and reproductive capacity of the individuals. In this context, light and temperature are the two most relevant time cues to reset the endogenous clock; apparently these two zeitgebers work together to keep the circadian rhythms. A wide variety of photoreceptors and photopigments evolved in order to precisely perceive the photic information provided by the environment, and recently it has been shown that the temperature detection can also be exerted by the photopigments rhodopsin and melanopsin, being mediated by TRP channels (Shen et al., 2011). We have identified B16-F10 Per1::Luc cells as a promising model for the study of light and temperature effects on peripheral clocks, since this cell line expresses both photopigments pointed as thermoreceptors in Drosophila. Our studies allowed us to demonstrate that light does not act as a synchronizing agent on those cells, which remained in free running after a 10 min pulse of blue light (650 lux). On the other hand, a temperature pulse of 2.5º C above the maintenance temperature, for 1h, adjusted Per1 gene expression, imprinting a circadian rhythm, which was not observed in the control. Based on this information, we hypothesized that the light perceived via melanopsin by the mammalian retina would lead to the regulation of the circadian temperature by the SCN, and the body temperature, in turn, could act as an inner cue for the synchronization of the peripheral tissues, having the TRP channels as mediators. To answer this question, we have used WT and TrpV1 KO mice under different light protocols and evaluated the expression of clock genes Per1, Per2, Clock and Bmal1 and TrpV1 and TrpA1 channels in peripheral tissues. We found that the adrenal gland, liver and brown adipose tissue have a typically active clock machinery, and the oscillation of clock genes observed in these tissues is significant. Interestingly, we observed that TrpV1 is expressed in those tissues, and presents a rhythmic transcription in the liver and brown adipose tissue of LD maintained animals, confirming our hypothesis that TRP channels act as mediators of light information to peripheral tissues. In face of the differences between WT and trpV1 KO animals, we suggest that the presence of the TRPV1 channel may be essential, although its degree of involvement may vary according to the tissue. In terms of TRPA1 channel, we found two results that deserve to be highlighted. Firstly, we identified in the liver of TrpV1 KO mice maintained in LD a presumable compensation of TrpA1 expression in the absence of TrpV1 and, interestingly, the brown adipose tissue does not express TrpA1 channel. Considering the findings of this study on the participation of TRP channels in responses to light and temperature, we believe we have strengthened our initial hypothesis, especially after we have demonstrated the role of TRPV1 channel, and that peripheral tissues may be synchronized by temperature changes.

INTRODUÇÃO: O bócio é um termo genérico usado para descrever o aumento no volume da glândula tireoide que pode estar associado à formação de múltiplos nódulos, o chamado bócio multinodular. Camundongos transgênicos tireoide específicos com depleção do Pten ou aumento de expressão do Dream, dois importantes genes que têm sido implicados nas vias de sinalização das células foliculares, apresentam desenvolvimento de bócio. Em humanos, uma larga porcentagem de pacientes com doença de Cowden apresentam bócio ou outras anormalidades tireoidianas associadas a mutações germinativas no PTEN. OBJETIVO: O objetivo desse estudo foi investigar a expressão dos genes PTEN e DREAM em tecido hiperplásico tireoidiano, bem como mutações germinativas e somáticas no PTEN e mutações somáticas no DREAM, em pacientes portadores de bócio multinodular, com a finalidade de avaliar o papel destes genes na etiologia do bócio. MÉTODOS: Foram investigados 60 pacientes com bócio multinodular (54 mulheres). A extração do DNA genômico foi realizada a partir de tecido hiperplásico da tireoide e do sangue periférico dos pacientes enquanto o RNA foi obtido apenas do tecido glandular. A quantificação relativa do RNA mensageiro do PTEN e do DREAM foi avaliada pelo método de 2-??Ct utilizando o GAPDH como normalizador em dados produzidos pela PCR em tempo real. A alta e a baixa expressão de PTEN e DREAM foram definidas, respectivamente, por valores de quantificação superiores a 2.0 e inferiores a 0.5 em comparação a um pool comercial de RNA de tireoide normal de humanos. Análise de mutação foi realizada por amplificação da região codificante dos genes PTEN e DREAM pela PCR convencional seguida por sequenciamento automático (RQ = quantificação relativa; x? = média e DP = desvio padrão). RESULTADOS: Foi observada alta expressão do PTEN em 58,3% dos pacientes portadores de bócio (x RQ = 3,81; DP = 2,26) enquanto apenas dois casos apresentaram baixa expressão (x? RQ = 0,34; DP= 0,09). Nos 38,3% casos restantes foi observada expressão normal de PTEN (x? RQ = 1,35; DP = 0,35). Em relação ao gene DREAM, alta e baixa expressão foram observadas em 33,3% (x RQ = 6,07; DP = 5,02) e 15,0% (x RQ = 0,30; DP = 0,10) dos pacientes com bócio respectivamente, enquanto pouco mais da metade dos casos (51,6%) teve expressão normal RQ = 1,12 ; DP = 0,40). A Análise de mutações do PTEN e do DREAM revelaram apenas polimorfismos intrônicos, previamente descritos no banco de dados do NCBI, tanto nos DNA de sangue e/ou de tecido hiperplásico. CONCLUSÕES: Nossos resultados demonstraram uma expressão aumentada de PTEN em bócio multinodular, sugerindo que este pode estar hiperexpresso, ou pelo menos tem sua expressão mantida, nesta hiperplasia benigna da tireoide. Alterações na sequência gênica codificante do PTEN não foram observadas. Na análise mutacional e de expressão do DREAM não foram encontradas alterações que pudessem ser relacionadas à patogênese de bócio em humanos
BACKGROUND: Multinodular goiter is a clinicopathological entity characterized by an increased volume of the thyroid gland with formation of nodules. A high proliferative status of thyroid follicular cells and goiter were observed in mutants mice with specifically deleted Pten or Dream overexpression in thyrocytes. In humans, a large percentage of patients with Cowden disease have goiters or other thyroid abnormalities associated with germ-line PTEN mutations. OBJECTIVE: The aim of this study was to investigate the tissue expression of PTEN and DREAM, as well as germ-line and somatic PTEN mutations and somatic DREAM mutations, in patients with multinodular goiter to evaluated the role of these genes in goitrogenesis. METHODS: We investigated 60 multinodular goiter patients (54 females). Genomic DNA was extracted from both patients\' hyperplastic thyroid tissue and peripheral blood whereas RNA was obtained only from glandular tissue. Relative quantification of PTEN and DREAM messenger RNA was evaluated using 2-Ct method normalized to GAPDH expression on data produced by real-time PCR. PTEN and DREAM over and lower expression were respectively defined by value > 2.0-fold and < 0.5-fold relative to a commercial pool of normal human thyroid RNA. Mutations analyses were performed by amplification of PTEN and DREAM coding region by PCR followed by automatic sequencing. RQ = relative quantification; x = average; SD = standard deviation. RESULTS: We observed a high expression of PTEN in 58.3% of multinodular goiter patients (RQ x = 3.81; SD = 2.26) and only two cases with lower expression (RQ x = 0.34; SD = 0.09). In the remaining 38.3% of patients expression of PTEN was normal (RQ x = 1.35; SD = 0.35). For the DREAM, over and lower expression were observed in 33.3% (RQ x = 6.07; SD = 5.02) and 15.0% (RQ x = 0.30; SD = 0.10) of patients respectively, whereas 51.6% had normal expression (RQ x = 1.12; SD = 0.40). Regarding PTEN and DREAM mutations analysis, only previously described intronic polymorphisms were observed in DNA from blood and/or thyroid hyperplastic tissue. CONCLUSIONS: Our results demonstrated that PTEN expression is higher in multinodular goiter suggesting that this gene is overregulated (or at least has its expression maintained) in this benign hyperplastic thyroid lesions. No evidence for the involvement of DREAM in goitrogenesis was observed in our cohort of multinodular goiter patients

Both the prenatal and postnatal environment have a profound impact on the risk for adult diseases. A model of catch-up growth following fetal growth restriction was set in Wistar rats to study changes in the gene expression of energetic metabolism–related genes. Excessive adipose tissue accumulation and hypertrophy, decreased circulating adiponectin and triglycerides levels, higher HOMA-IR values and reduced expression of STK11, DLK1 and SIRT1 genes in retroperitoneal adipose, hepatic and muscular tissues were observed in pups with catch-up growth at postnatal day 42, that is related to visceral fat accumulation and insulin resistance. In conclusion, catch-up growth following prenatal growth restriction leads to changes in STK11, DLK1 and SIRT1 gene expression. These genes could be new therapeutic targets for early prevention on fetal programming of metabolic disorders in adulthood.
Els ambients pre i postnatal poden augmentar el risc de desenvolupar malalties en l’edat adulta. S’ha dissenyat un model animal de creixement recuperador postnatal secundari a restricció de pes prenatal en rates Wistar per estudiar canvis en l’expressió de gens de regulació metabòlica. Les cries amb creixement recuperador postnatal presenten acumulació excessiva i hipertròfia del teixit adipós visceral, disminució dels nivells l’adiponectina i triglicèrids circulants, augment del valor de HOMA-IR i baixa expressió dels gens STK11, DLK1 i SIRT1 en els teixits adipós, hepàtic i muscular en el dia postnatal 42 que es relaciona amb acumulació de greix visceral i resistència a la insulina. En conclusió, el creixement recuperador postnatal secundari a restricció de pes prenatal provoca canvis en l’expressió dels gens STK11, DLK1 i SIRT1, els quals podrien ser noves dianes terapèutiques per a la prevenció precoç de la programació fetal dels desordres metabòlics en l’edat adulta.

Dogs (Canis lupus familiaris) and wolves (Canis lupus lupus) share genotypes, which are nearly identical, but their behavioral phenotypes are very different. It has been repeatedly hypothesized that these adult behavioral differences are the result of heterochronic changes, or differences during the course of development. This dissertation investigates three major behavioral differences between these two morphs: (1) Interspecies socialization: both dogs and wolves are capable of forming interspecies attachments, most commonly with humans, but wolves require more intense exposure to reach a less intense attachment. (2) Expression of species-typical motor patterns: while dogs and wolves have the same species-typical motor patterns, they express them at different rates and in different frequencies. (3) Frequency of barking: while both dogs and wolves bark, dogs bark at a much higher frequency than wolves. The primary objective of this dissertation is to determine if behavioral differences between polymorphs of the genus Canis are the result of heterochrony. Fifty-two Canis pups including, both mother- and hand-reared dogs (Canis lupus familiaris) represented by two breeds (Border collies and German shepherds) and hand-reared wolves were observed. Frequency of motor pattern display was recorded from two to eight weeks of age in all groups. Responses of pups to olfactory, auditory, and visual stimuli were also tested weekly from two to seven weeks of age. Groups were then compared on the timing of the onset and frequency of expression of foraging motor patterns (orient, eye, stalk, chase, and grab-bite) and the onset of their ability to orient towards olfactory, auditory, and visual stimuli. My results demonstrate that small changes in the timing of the critical period of socialization in relationship to the development of the sensory systems do account for differences in the ability to form interspecies social attachments between dogs and wolves. The data also demonstrate that there are heterochronic differences in the development of species typical foraging motor patterns between dogs and wolves. However, these changes alone do not explain the fragmenting of breed-typical sequences in relation to functional wolf sequences. Investigation of barking frequency was accomplished by searching previous literature to define acoustic measurements, which distinguish the bark from other vocalizations. This definition was then used to determine in what situations the bark occurred in dogs, wild Canis species, other mammals, and birds. Barking occurs in a large variety of mammals and birds, and is motivated by conflicting internal states associated with mobbing. This is supported by the acoustic structure of the bark itself and the contexts in which mammals, including dogs and other members of the genus Canis, and birds use the bark vocalization.

Dissertação de Mestrado em Genética Molecular Comparativa e Tecnológica
A Doença Periodontal (PD) inclui as doenças inflamatórias induzidas pela placa bacteriana no periodonto. Inicialmente manifesta-se na forma de gengivite, podendo evoluir para uma forma inflamatória crónica designada periodontite. A origem e modulação da PD está associada principalmente a factores microbianos e ambientais, apresentando, contudo, uma etiologia multifactorial onde factores comportamentais, sistémicos e genéticos são descritos. A importância da PD na medicina humana é inequívoca estimando-se que 30% da população adulta seja afectada. Na medicina veterinária, a PD é igualmente muito relevante, sendo a doença mais prevalente e frequente da cavidade oral nos carnívoros domésticos. Adicionalmente, a PD tem sido associada a outras doenças de ordem sistémica, factor que tem contribuído para o crescente interesse na investigação dos factores associados ao seu desenvolvimento. Muitos agentes e/ou mediadores envolvidos na PD ainda são pouco claros, sendo necessário desenvolver novos estudos que interrelacionem esses factores/indicadores de risco. A sua identificação precoce poderá auxiliar a traçar perfis de susceptibilidade, permitindo caracterizar os indivíduos com maior predisposição para a doença e desenvolver terapias personalizadas e estratégias preventivas mais eficientes. A investigação molecular e genética tem contribuído para o melhor conhecimento da PD tendo sido evidenciado que muitos genes desempenham um papel fundamental na predisposição e progressão da doença, principalmente através da regulação dos mediadores inflamatórios. O cão é um modelo muito utilizado nas várias áreas da investigação periodontológica, pois a PD neste animal apresenta muitas semelhanças com a doença no homem a nível da etiologia e da fisiopatologia, no entanto a sua valência para o estudo dos factores genéticos nunca foi analisada. Com este estudo pretende-se contribuir para a caracterização da base genética da PD no cão e adicionalmente para a sua implementação como modelo no estudo da doença humana. Com esse objectivo foram seleccionados dois genes (IL6 e LTF) potencialmente associados à susceptibilidade para a PD no homem. Variações no gene IL6 parecem influenciar a resposta inflamatória desta citocina contra agentes infecciosos e influenciar a reabsorção óssea associada à PD. Alterações no gene LTF são associadas a alterações das funções anti-microbianas desta molécula, influenciado a susceptibilidade para a doença. Neste trabalho efectuou-se uma análise molecular dos genes LTF e IL6 do cão, com o objectivo principal de identificar variações genéticas e analisar a sua associação à PD através de um estudo caso-controlo. Com essa finalidade e tendo em vista a continuidade desta investigação, começou-se por criar uma base de dados onde foi incluída toda informação clínica e material biológico (sangue e tecido gengival) dos animais analisados neste estudo. Neste trabalho foram analisadas três regiões do gene LTF e duas do gene IL6, seleccionando-se primers específicos para a sua amplificação por PCR utilizando o DNA extraído com sucesso a partir dos elementos figurados do sangue. Todos os fragmentos amplificados foram sequenciados, permitindo a identificadas de oito variações genéticas no gene LTF e três no gene IL6. As frequências de todas estas variações foram analisadas num estudo do tipo caso-controlo englobando uma população de 70 animais, divididos num grupo controlo (45) e num grupo de casos com PD (25), de forma a avaliar a sua influência na susceptibilidade para a doença. Foi ainda realizada a optimização de uma metodologia para a extracção de RNA a partir de tecido gengival. Estas amostras foram utilizadas posteriormente na optimização das condições de amplificação por RT-PCR do cDNA do gene IL6, tendo em vista a realização de futuros estudos de expressão envolvendo este gene. Os resultados mostraram que para todas as variações genéticas identificadas não existiram diferenças estatisticamente significativas entre o grupo controlo e o grupo de casos com PD, não permitindo relacionar qualquer variação com a susceptibilidade para a PD no cão. No entanto, todas estas variações foram descritas pela primeira vez, tendo sido observadas diferenças interessantes quando as sequências foram comparadas com os dados disponíveis nas bases de dados genómicas do NCBI e Ensembl. É importante desenvolver novos estudos para esclarecer o papel das variações genéticas identificadas neste trabalho, envolvendo populações de maior dimensão. Este é o primeiro estudo direccionado para a caracterização genética da PD do cão, sendo importante prosseguir a investigação no sentido de analisar outros genes candidatos, variações genéticas e a forma como podem influenciar a susceptibilidade para a doença, de forma a contrapor resultados e avaliar a aplicabilidade deste modelo para o estudo da PD humana.
Periodontal Disease (PD) includes inflammatory diseases induced by bacterial plaque in the periodontium. Initially it is manifested in the form of gingivitis and can progress to a chronic inflammatory form called periodontitis. The origin and modulation of PD is mainly associated to microbial and environmental factors; however it presents a multifactorial etiology, in which behavioral factors, systemic and genetic factors are described. The importance of PD in human medicine is clear and it is estimated that 30% of the adult population is affected. In veterinary medicine, DP is also very important, being the most common disease of the oral cavity in domestic carnivores. Furthermore, the PD has been associated with other systemic diseases, a factor that has contributed to the increasing interest in the investigation of factors related to its development. Many agents and/or mediators involved in PD remain unclear, being necessary to develop new strategies to analyse them. Its early identification may help to establish profiles of susceptibility, allowing the characterization of individuals with a higher predisposition to the disease and develop personalized therapies and more efficient preventive strategies. The molecular and genetic research has contributed to a better understanding of PD and has shown that many genes play a role in the predisposition and progression of disease, primarily through the regulation of inflammatory mediators. The dog is a model classically used in many areas of periodontology, because in this model the PD has many similarities to the disease in man in terms of pathophysiology and etiology, however its valence for the study of genetic factors has never been analyzed. This study aims to contribute to the characterization of the genetic basis of PD in the dog and its implementation as a model in the study of human disease. With this objective we selected two genes (IL6 and LTF) potentially associated with susceptibility to PD in humans. Changes in IL6 gene appear to influence this inflammatory cytokine responses against infectious agents and influence bone resorption related to PD. Variations in the LTF gene are associated with changes in anti-microbial functions of this molecule, influencing the susceptibility to the disease. This work carried out a molecular analysis of LTF and IL6 genes in dog, to identify genetic variations and verify its association with PD in a case-control study. To this end and in order to continue this investigation, we first organized a database that included clinical information and biological materials (blood and gingival tissue) of the animals analyzed in this study. We analysed three regions of the LTF gene and two regions of the IL6 gene and selected specific primers for their amplification by PCR using DNA extracted successfully from figurative elements of the blood. All amplified fragments were sequenced, allowing the identification of eight genetic variations in the LTF gene and three in IL6 gene. The frequencies of all variations were analyzed in a case-control study comprising a population of 70 animals, divided into a control group (45) and a group of cases with PD (25), to assess their influence on susceptibility to disease. In addition we optimized a method for extracting RNA from gingival tissue. These samples were used in the optimization of the amplification by RT-PCR of cDNA of IL6 gene in order to carry out future studies involving gene expression. For all the genetic variations identified, the results showed that there were no statistically significant differences between the control group and the group of cases with PD, unable to correlate any variation with susceptibility to PD in dogs. However, all these changes were first described in this work and interesting differences were observed, when our sequences were compared with the sequence data available in genomic databases of NCBI and Ensembl. It is important to develop future studies to clarify the role of the genetic variations identified in this work, involving larger populations. This is the first study focussed to the genetic characterization of the DP in dog. It is essential to continue this research to determine others candidate genes, genetic variations and how they can influence susceptibility to disease, in order to compare the results and analyse the applicability of this model in the human PD research.

This thesis is focused on polymorphism of MDR1 gene and related drug resistance. Resistance is caused by deletion of four nucleotids, that resulting in a frame shift and synthesis of nonfunctional transport of P-glycoprotein. The text describes a polymorphism of MDR1 (ABCB1) gene, which results in reduced resistance to drugs belonging to the group of macrocyclic lactones. It also describes inheritance of this phenomenon and it deals with the detection of mutation using PCR (polymerase chain reaction) and by fragmentation analyses. A review of literature study is a form of research solely from scientific publications. 128 dogs were included into the own analysis. The results confirmed that Collies had the highest presence of deletions (29,73 %) with a high number of carriers in the study population of dogs (54,05 %). The percentage of affected individuals in the breed of Australian Shepherd and Sheltie was significantly lower (7,32 % and 6 %), but the percentage of carriers were also high in both Australian Shepherds (34,14 %) and the breed Sheltie (48 %).

Dissertação de mestrado em Applied Biochemistry Branch of Biomedicine
In the last decades, fungi have emerged as one of the major causes of human infection diseases. Candida species are one of the most common fungal pathogens that can cause both superficial and invasive infections. Under normal conditions, Candida species are commensal microorganisms of the human microflora, however, they can also be successful opportunistic pathogens, especially in individuals with a compromised immune system. Candida species can adapt very easily to several host niches, including colonizing and proliferating in very different environmental conditions. Glucose is generally the preferred carbon source of most microorganisms, however, some of the most common colonization sites by Candida are not rich in this monosaccharide, for example, the vaginal tract. In these cases, the use of alternative carbon sources becomes essential for the survival of these pathogens. The ATO (Acetate Transporter Ortholog) plasma membrane carboxylate transporters are present in different yeast species. These proteins seem to be very important for Candida adaptation to different host environments, especially in those where carboxylic acids are the main carbon source available. The species Candida glabrata, often considered the second or third most common cause of candidiasis in humans, is recognized by its ability to adapt to environmental or host-imposed stresses, like nutrient limitation. This pathogen encodes two homologues of ScATO1 (CgATO1, CgATO2) and one of ScATO3 (CgATO3), that are upregulated in the presence of acetic acid, suggesting that Ato proteins are important for the uptake of this substrate. In addition, C. glabrata encodes two homologues of S. cerevisiae FPS1, CgFPS1 and CgFPS2, that are also expressed in the presence of acetic acid. The main goal of this thesis was to characterize these transporters and channels in terms of the substrates that they transport, their subcellular localization and their importance in the survival of C. glabrata cells after phagocytosis. This study validated the function of these proteins in C. glabrata as acetate transporters and unveiled their role in the adaptation and persistence of this fungus to the intracellular environment of macrophages.
Nas últimas décadas, os fungos têm surgido como uma das principais causas de doenças infeciosas humanas. As espécies de Candida são um dos agentes patogénicos fúngicos mais comuns, podendo causar tanto infeções superficiais como invasivas. Em condições normais, estas espécies são microrganismos comensais da microflora humana. No entanto, em indivíduos com um sistema imunitário comprometido, podem tornar-se patógenos oportunistas. Estes microrganismos adaptam-se facilmente aos vários nichos do hospedeiro e conseguem proliferar em condições ambientais muito diferentes. A glucose, fonte de carbono preferida da maioria dos microrganismos, nem sempre se encontra disponível nos diferentes locais colonizados pelas espécies de Candida, como por exemplo, o trato vaginal. Assim, o uso de fontes alternativas de carbono torna-se essencial para a sobrevivência destes patógenos. Os transportadores de carboxilatos ATO (Acetate Transporter Ortholog) estão presentes na membrana plasmática das células e podem ser encontrados em diferentes espécies de leveduras. Estas proteínas parecem desempenhar um papel importante na adaptação das espécies de Candida aos diferentes nichos do hospedeiro, principalmente naqueles onde os ácidos carboxílicos são a principal fonte de carbono disponível. A espécie Candida glabrata é frequentemente considerada a segunda ou terceira causa mais comum de candidíase em humanos, e esta espécie é reconhecida pela sua capacidade de se adaptar a stresses impostos pelo hospedeiro ou pelo próprio ambiente, como por exemplo a limitação de nutrientes. Em C. glabrata existem dois homólogos do gene ATO1 de Saccharomyces cerevisiae (CgATO1, CgATO2) e um homólogo do gene ScATO3 (CgATO3), cuja expressão é aumentada na presença de ácido acético, sugerindo que as proteínas Ato são importantes para a captação deste substrato. Além disso, C. glabrata codifica dois homólogos do canal FPS1 de S. cerevisiae, CgFPS1 e CgFPS2, que também são expressos na presença de ácido acético. O principal objetivo desta tese foi caracterizar estas proteínas relativamente aos substratos que transportam, à sua localização subcelular e à sua importância na sobrevivência das células de C. glabrata após a fagocitose. Este estudo permitiu validar a função destas proteínas em C. glabrata como transportadores de ácido acético, assim como desvendar o seu papel na adaptação e persistência deste fungo ao ambiente intracelular dos macrófagos.