Tesi sul tema "Chromatographie phase liquide spectrométrie de masse"
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Himbert, Franck. "Purification d'un mélange multicomposés en chromatographie liquide préparative : colonne, injection & couplage à la spectrométrie de masse". Orléans, 2003. http://www.theses.fr/2003ORLE2042.
Abstract (sommario):
La Chromatographie Liquide Préparative est devenue une technique de choix pour la purification de mélanges plus ou moins complexes. Elle est particulièrement utilisée, y compris à l'échelle industrielle, dans le domaine pharmaceutique. Pourtant, certains problèmes de fond sont encore peu ou mal maîtrisés. Ainsi, si la structure des colonnes chromatographiques est bien connue, leur remplissage reste encore par bien des égards un art, nécessitant expérience et savoir faire. Par ailleurs, la solubilité de l'échantillon est bien souvent un facteur limitant sur le plan économique. Enfin, le couplage CPL-SM à l'échelle préparative souffre d'un manque de souplesse et offre peu de performances. Nous nous sommes attachés à apporter des solutions à ces différents problèmes en étudiant un mode de remplissage par sédimentation assistée non décrit dans la littérature. Nous proposons de pallier au manque de solubilité des échantillons en utilisant la préconcentration en tête de colonne et avons développé un nouveau mode de couplage ± actif α CPL-SM mieux adapté aux contraintes de la chromatographie préparative. L'ensemble de ces techniques peut permettre de mettre en œuvre la purification d'un mélange complexe sur un dispositif multicolonnes économiquement plus performant qu'une colonne unique de dimensions équivalentes.
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Wolters, Cédric. "Caractérisation moléculaire d’échantillons organiques complexes par spectrométrie de masse et chromatographie en phase liquide". Thesis, Université Grenoble Alpes, 2021. http://www.theses.fr/2021GRALU009.
Abstract (sommario):
Comment analyser un échantillon organique complexe ? Cette question générale semble simple de prime abord, mais requiert de s’intéresser de plus près à la notion de complexité afin de pouvoir comprendre et justifier les moyens utilisés pour la caractériser. En planétologie, et plus largement en astrophysique, l’ensemble des observations et observables indiquent que la matière qui compose les objets extraterrestres est composée d’un mélange de diverses molécules, et ce mélange est plus ou moins divers en fonction de l’objet. Observations et modélisations sont effectuées couramment pour tenter de comprendre ces objets et de contraindre leurs processus évolutifs.Caractériser la complexité moléculaire de tels objets nécessite des instruments de pointe, qui sont difficilement adaptables aux contraintes spatiales pour être placés sur une sonde, et cela requiert que l’objet étudié puisse être échantillonné. Or, la très grande majorité des objets d’intérêt ne peuvent pas être atteints dans un temps raisonnable. Dès lors, il faut un autre moyen d’étudier ces objets : c’est l’astrophysique de laboratoire. De nombreuses expériences tentent de simuler les objets et environnements dans lequel ils évoluent, et analysent l’évolution de la matière soumise à ces contraintes. Une partie des défis de ces expériences réside dans la caractérisation chimique des échantillons, et plus particulièrement dans leur caractérisation moléculaire.Dans le cadre de cette thèse, nous proposons d’utiliser la spectrométrie de masse haute résolution (HRMS) et la chromatographie en phase liquide haute performance (HPLC) pour caractériser des échantillons organiques complexes. Pour se faire, l’ensemble de la chaine analytique a été étudiée, depuis l’acquisition des données jusqu’à leur exploitation. Ainsi, nous proposons une optimisation de l’acquisition des données en Orbitrap, ainsi que des systématiques de traitement des données issues des analyses effectuées ESI-HRMS ainsi que pour des analyses effectuées en LDI-ICR. La chromatographie couplée à la spectrométrie de masse est un outil puissant pour accéder à la structure moléculaire des échantillons, et nécessite de développer des méthodes qui soient adaptés aux échantillons analysés. Nous proposons ainsi deux méthodes HPLC pour l’analyse des échantillons, qui ont été développées et validées pour l’analyse d’échantillons complexes. Cependant, aucun logiciel commercial ne permet l’analyse non supervisée de tels échantillons : un logiciel qui permette le traitement de ces données a ainsi été développé et permet de révéler la diversité moléculaire des échantillons sans supervision. Mais l’identification des molécules ainsi détectées n’est pas un processus aisé puisqu’il nécessite alors de posséder l’ensemble des isomères possibles pour chaque molécule détectée. Pour réduire cet espace des possibles, un outil de prédiction des temps de rétention est proposé qui se base sur la connaissance des propriétés physico-chimiques de composés connus afin de prédire, pour ces mêmes composés, leur temps de rétention théorique sur les méthodes utilisées.Ce travail présente dans une dernière partie l’application de l’ensemble des développements effectués au cours de ces trois années sur un jeu d’échantillons d’analogue d’aérosols atmosphériques de synthèse modélisant des exoplanètes de type super-Terres et mini-Neptunes. Depuis l’analyse de leur matière soluble, jusqu’à la comparaison entre phase soluble, insoluble et totale, l’analyse par spectrométrie de masse indique une grande diversité et des différences importantes entre échantillons, indiquant des processus de formation et d’évolution directement liés à la composition du mélange réactif. Enfin, l’analyse par chromatographie d’un de ces échantillons indique de multiples isomères, dont certains pouvant être annotés comme étant des molécules biologiques, potentiellement impliquées dans le processus de l’origine de la vieHow to analyse a complex organic sample? This general question seems simple at first glance but requires a closer look at the notion of complexity to be able to understand and justify the means used to characterise it. In planetology, and more widely in astrophysics, all the observations and observables indicate that the matter that makes up extraterrestrial objects is composed of a mixture of various molecules, and this mixture is more or less diverse and dense depending on the object. Observations and models are routinely done to try to understand these objects and to constrain their evolutionary processes, or to try to investigate their origin.Characterising the molecular complexity of such objects requires state-of-the-art instruments, which are difficult to adapt to space industry constraints in order to be placed on a probe, and this requires that the object under study can be sampled. However, most objects of interest cannot be reached in a reasonable time. Therefore, another way to study these objects is needed: laboratory astrophysics. Many experiments attempt to simulate the objects and environments in which they evolve and analyse the evolution of matter subjected to these constraints. Part of the challenges of these experiments lies in the chemical characterisation of the samples, and more particularly in their molecular characterisation.As part of this thesis, we proposed to use high-resolution mass spectrometry (HRMS) and high-performance liquid chromatography (HPLC) to characterise complex organic samples. To do so, the entire analytical chain was studied, from the data acquisition to its use. Thus, we proposed an optimisation of the data acquisition in Orbitrap, as well as the systematic processing of the data resulting from the analysis done by ESI-HRMS as well as for the analysis done by LDI-ICR. Chromatography coupled with mass spectrometry is a powerful tool for accessing the molecular structure of samples and requires developing methods that are suited to the samples analysed. Therefore we offered two HPLC methods for sample analysis, which have been developed and validated for the analysis of complex samples. However, no currently available commercial software allowed for the unsupervised analysis of such samples. Software to allow the processing of this data has now been developed and allows the molecular diversity of samples to be revealed without supervision. The identification of the detected molecules is not an easy process since it then requires having all the possible isomers for each molecule detected as standards for reference. To reduce the number of possibilities, a tool for predicting retention times was proposed. This was based on knowledge of the physico-chemical properties of known compounds to predict their theoretical retention time on the methods used.Lastly, this work presents the application of all the developments carried out during these three years on a set of samples of synthetic atmospheric aerosol analogues modelling exoplanets of the super-Earth and mini-Neptunes type. From the analysis of their soluble matter to the comparison between soluble, insoluble, and total phase, analysis by mass spectrometry indicates a great diversity and important differences between samples. This indicates processes of formation and evolution related to the composition of the reactive mixture. Finally, chromatographic analysis of one of these samples indicates multiple isomers, some of which may be labelled as biological molecules, potentially involved in the process of the origin of life
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Dufour, Alizée. "Caractérisation des tensioactifs polydisperses industriels par spectrométrie de masse et chromatographie en phase liquide". Thesis, Université Paris sciences et lettres, 2020. http://www.theses.fr/2020UPSLS019.
Abstract (sommario):
Dans le cadre de la production pétrolière, la formulation de tensioactifs employés devient de plus en pluscomplexe, notamment pour la récupération assistée du pétrole. De ce fait des enjeux analytiquesapparaissent lors du suivi de ces tensioactifs. Suite à une caractérisation fine réalisée à l’aide de laspectrométrie de masse haute résolution (HRMS), une étude préliminaire a permis d’étudier lescomportements chromatographiques des tensioactifs sur différentes phases stationnaires. Un criblage deneuf colonnes a démontré que la séparation monodimensionnelle ne permettait pas d’obtenir uneséparation complète à cause de la gamme de polarités et à la polydispersité des composés. Ledéveloppement d’une approche multidimensionnelle a montré de réels atouts, à savoir la levée descoélutions observées en chromatographie monodimensionnelle. Suite à cette preuve de concept,l’évaluation des facteurs de réponses avec une détection par aérosol chargés a mis en avant l’absence deréponse uniforme au sein d’une même distribution ce qui a un réel impact lors de la réalisation des bilansmatières. Puis l’impact de la présence d’huile brute dans les échantillons a été démontré lors d’une étuderéalisée avec un mélange de tensioactifs dans une matrice pétrolière. La séparation était conservée, maisla présence de solvant organique et d’huile brute a un effet crucial sur signalIIn the petroleum industry, surfactant formulation is becoming more and more complex, especially in thecase of Enhanced Oil Recovery. Analytical challenges therefore appear when monitoring these surfactants.After a detailed characterisation using high resolution mass spectrometry (HRMS), a preliminary studyallowed a better understanding of the chomatographic behaviours of surfactants on different stationnaryphases. A screening of nine different columns showed that LC-1D separation did not result in a completeseparation due to the range of polarities and the polydispersity of the compounds. However, thedevelopment of a multi-dimensional approach solved the co-eluting observed in LC-1D. Following this proofof concept, the determination of the response factor, using charged aerosol detection, underlined the lackof a uniform response within a distribution. This has a strong impact on the mass balance. Finally, theinfluence of the presence of oil was demonstrated by studying a mixture of anionic and nonionic surfactantsin oil matrix. The separation was maintained but the presence of organic solvent and crude oil has a crucialimpact on the signal
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Roy, Sylvie. "Couplage de la chromatographie liquide haute performance et de la spectrométrie de masse". Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05P035.
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Jeudy, Jérémy. "Quantification de biomarqueurs protéiques dans des matrices biologiques complexes par spectrométrie de masse : développements et applications". Thesis, Lyon 1, 2014. http://www.theses.fr/2014LYO10242/document.
Abstract (sommario):
Le travail présenté ici s'est penché sur les problèmes rencontrés sur ce type d'études protéomiques, et sur les solutions qui peuvent être explorées pour améliorer le débit d'évaluation des candidats biomarqueurs. Les peptides à méthionine sont généralement évités en raison de leur sensibilité à l'oxydation. Cependant, il semblait intéressant d'étudier leur modification endogène pouvant affecter les processus biologiques. Une première évaluation de l'impact de l'oxydation des apolipoproteins dans le cas de la maladie d'Alzheimer, a permis de mettre de côté ce biomarqueur potentiel, et de faire apparaître un certain nombre de problèmes liés au prélèvement et au stockage des échantillons biologiques. L'évaluation de dispositifs DBS (Dried Blood Spot) et Vivid à partir d'un panel de 32 protéines sanguines a permis de fournir une première solution envisageable pour maîtriser ces problèmes. Par la suite, un nouveau mode de quantification des peptides appelé MRM3 a été utilisé pour dépasser la complexité de la matrice biologique, et fournir une évaluation fiable des niveaux de concentration de 2 protéines plasmatiques, la C-Reactive protein et la TIMP-1, ainsi que 2 protéines urinaires, l'aquaporin-2 et la podocin. Pour améliorer la sensibilité d'analyse et réduire les coûts de solvants nécessaires aux analyses, l'évaluation d'une plate-forme de micro-chromatographie a été réalisée par comparaison à une plate-forme narrow-bore. Cette étude a permis de mettre en évidence l'impact important de l'effet matrice sur le processus analytique, nécessitant de développer de nouvelles stratégies de travail. Enfin, afin de réduire la complexité de l'échantillon, l'évaluation de cartouches d'extraction en phase solide à base de large taille de pores a été réalisé, et un protocole développé a permis d'analyser avec succès des enzymes contenus dans un échantillon de lessive commerciale. De plus, la durée nécessaire à la préparation d'échantillons biologiques a pu être fortement réduite en combinant une digestion rapide assistée par température combinée au dessalage en ligne, afin de permettre l'analyse quantitative des protéines qu'il contient seulement quelques heures après son arrivée au laboratoireOver the past decade, interest in the use of biomarkers in clinical studies has greatly increased. Quantification of a candidate protein biomarker in complex samples (eg. plasma) requires targeted and multiplexed assays. Immunoassays are the gold standard for their quantification. However, with the need for targeted and multiplexed methods, recent developments in mass spectrometry (MS) make a viable alternative to ELISA. The present work has addressed the problems encountered in this type of proteomic studies, and solutions that can be explored to improve the workflow of candidate biomarker’s evaluation. Methionine peptides are generally avoided due to their susceptibility to oxidation. However, it seemed interesting to study how their endogenous modifications could affect biological processes. In a first time, apolipoproteins were dismissed as a potential biomarker of Alzheimer’s disease due to oxidation impact. In the same time, problems associated with biological sample collection and storage were highlighted. DBS (Dried Blood Spot) and Vivid device evaluation from a panel of 32 blood proteins has provided a first possible solution to overcome these troubles. Thereafter, a new peptide quantification method called MRM3 was used to overcome biological matrix complexity. Reliable level determinations of 2 plasma proteins (C-Reactive protein and TIMP-1) and 2 urinary proteins (aquaporin-2 and podocin) were obtained. To improve sensitivity and reduce analysis solvent costs, performances of a micro chromatography platform were compared to a narrow-bore platform. This study highlighted the significant impact of the matrix effect on the analytical process, requiring new strategie development. Finally, to reduce sample complexity, evaluation of wide pore solid-phase extraction cartridges has been achieved. A protocol was successfully developed to analyze enzymes contained in commercial laundry samples. Finally to optimize biological sample preparation time, heated-assisted digestion and online desalting step were successfully associated. Only few hours were then required for quantitative analysis
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Rougemont, Blandine. "Quantification de protéines dans des matrices complexes par spectrométrie de masse : nouveaux outils et apllications". Thesis, Lyon, 2016. http://www.theses.fr/2016LYSE1084/document.
Abstract (sommario):
La spectrométrie de masse en tandem est désormais une technique de choix pour l'analyse du protéome humain ou de micro-organismes. Typiquement, les protéines sont tout d'abord digérées en peptides protéotypiques, ceux-ci étant ensuite séparés par chromatographie liquide avant d'être analysés par MS/MS. L'identification et la quantification de ces peptides rapporteurs de protéines permet la mise en évidence d'un phénotype ou d'un mécanisme cellulaire particulier, dans un organisme complexe. Des approches par spectrométrie de masse ciblée et non ciblée coexistent et sont complémentaires dans l'analyse protéomique. Les travaux présentés ici se sont focalisés sur le développement de méthodes ciblées, et plus particulièrement en mode SRM, à travers deux applications chez des micro-organismes modèles. Ainsi, une première étude s'est portée sur la quantification absolue des protéines du virus chimère dengue – fièvre jaune candidat vaccin. Par l'utilisation d'une stratégie de quantification de type AQUA, nous avons pu développer, valider et transférer le dosage des quatre sérotypes du virus chimère candidat vaccin. Les problématiques soulevées à travers ce projet nous ont amené à proposer des étapes à contrôler lors du développement d'un dosage par la stratégie AQUA.Dans une seconde partie, nous nous sommes attachés à développer une analyse quantitative sans marquage de 445 protéines afin d'étudier l'infection d'un phytopathogène, Dickeya dadantii, sur une plante modèle. Afin d'assurer un transfert simple et rapide de cette analyse multiplexée, nous proposons un nouvel outil d'acquisition indépendant des temps de rétention. Cet outil développé en partenariat avec la R&D Sciex à Toronto est appelé « Scout-MRM »Tandem mass spectrometry is now a technique of choice for human or micro-organisms proteome analysis. Typically, proteins are first digested into surrogates’ peptides, separated by liquid chromatography before being analyzed by MS/MS. The ultimate goal is the identification and the quantification of these peptides, belonging to proteins and highlighting a phenotype or a cellular mechanism in a complex organism. Both targeted and untargeted approaches are used and are complementary in proteomic analysis. The work presented here is focused on the development of targeted methods, and more particularly in the SRM mode, through two applications involving micro-organisms. So, the first study concerned to absolute quantification of viral proteins of the chimeric yellow-dengue fever, vaccine candidate against dengue. By using the AQUA quantification strategy, we were able to develop, to validate and to transfer the method for the four chimeric virus serotypes. Then, problems met during development process, lead us to suggest check points to verify when using AQUA strategy. In a second part, we attempted to develop a quantitative label free analysis of 445 proteins to study the infection of the phytopathogen Dickeya dadantii, on a model plant. To ensure a simple and fast transfer of this multiplex, we purpose a new acquisition tool, independent from retention time. This tool was developed in a partnership with the R&D Sciex, Toronto and is called “Scout-SRM”
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Cortejade, Aurélie. "Approches et outils pour l’évaluation de l’Exposome : du dosage de contaminants vers le screening non ciblé pour la caractérisation des expositions humaines environnementales". Thesis, Lyon 1, 2015. http://www.theses.fr/2015LYO10219/document.
Abstract (sommario):
Ces travaux mettent en avant le développement de méthodes analytiques afin d'évaluer l'Exposome selon différentes stratégies. Une méthode multirésidus sélective permettant l'analyse d'additifs plastiques et de leurs produits de dégradation pouvant être relargués par des emballages plastiques dans les boissons et les aliments, et ainsi être ingérés par l'Homme, a tout d'abord été mise au point. Cette méthode consiste en une extraction de type Stir Bar Sorptive Extraction sur des barreaux à base de dérivés de polydiméthylsiloxane des additifs plastiques ciblés, suivie d'une analyse par chromatographie liquide ultra-haute performance couplée à un spectromètre de masse en tandem de type triple quadripôle. Afin de détecter et quantifier une plus large gamme de contaminants entrant en contact avec l'Homme, une méthode de screening a été développée par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse haute résolution avec un instrument de type QqToF, à partir d'une matrice urinaire. La méthode de screening ciblé, validée selon les recommandations FDA, a permis de quantifier des contaminants appartenant à diverses familles dans l'urine, sans préparation préalable de l'échantillon, à des concentrations de l'ordre du ng/mL. Appliquée à des urines de volontaires, la méthode de screening non ciblé a permis d'émettre de nombreuses hypothèses d'identification de composés après fragmentation MS/MS. La mise en place de tels outils pour caractériser l'Exposome, associée à des études statistiques et bio-informatiques, contribueront grandement à la compréhension des relations de causalité entre les maladies humaines et les facteurs environnementauxThese research works highlight the development of analytical methods, based on mass spectrometry, to assess the Exposome according to different strategies. A selective multiresidue method for the analysis of plastic additives and their degradation products that may be released by plastic packaging in food and beverages and thus ingested by man was developed. This method consists of a Stir Bar Sorptive Extraction with bars covered by polydimethylsiloxane derivatives, followed by an analysis by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry with a triple quadrupole instrument. To detect and quantify a wide range of contaminants in contact with man in daily routine, a screening method was developed by liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry with a quadrupole-time-of-flight instrument from urinary matrix. The targeted screening method validated according to FDA guidelines allows the quantification of contaminants classified according to different families, in urine without sample preparation, at concentrations of the order of ng.mL-1. This method was applied to volunteers’ urine samples. The non-targeted screening method allows issuing numerous assumptions of compound identification after MS/MS fragmentation. The implementation of this tool to measure the Exposome associated with statistical studies, contribute greatly to the understanding of the causal relationships between diseases and environmental factors
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Pereira, Hélène. "Développement de l'approche métabolomique par couplage chromatographie liquide / spectrométrie de masse : application à la nutrition". Phd thesis, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00719399.
Abstract (sommario):
L'étude du métabolome est un challenge analytique important, de part la grande diversité chimique des métabolites présents à des concentrations très variables dans les matrices biologiques. Ce travail présente une stratégie analytique mettant en oeuvre le couplage chromatographie liquide / spectrométrie de masse afin d'acquérir des profils métaboliques de fluides biologiques et d'identifier des biomarqueurs potentiels de dysfonctionnements métaboliques. Une attention particulière a été donnée à l'étude des sources de variablité analytique, depuis l'étape de préparations d'échantillons jusqu'au traitement des données. Un protocole optimisé a été proposé et appliqué à une intervention nutrionnelle (ANR METAPROFILE). L'identification a été basée sur l'utilisation des bases de données, ainsi que sur l'interprétation des informations spectrales (profils isotopiques et fragmentations MSn)
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Jaffuel, Aurore. "Résolution de mélanges complexes d'oligosaccharides sulfatés par chromatographie 2D et spectrométrie de masse : application aux héparines thérapeutiques". Thesis, Lyon, 2016. http://www.theses.fr/2016LYSE1150.
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Delalande, François. "Application du couplage chromatographie liquide-spectrométrie de masse à l'étude de la biodisponibilité de peptides issus de produits laitiers et à la protéomique". Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2003. http://www.theses.fr/2003STR13068.
Abstract (sommario):
Le couplage chromatographie liquide-spectrométrie de masse est devenu une méthode de choix pour la quantification de molécules dans une matrice, la détermination des séquences primaires de peptides et de protéines ainsi que la mise en évidence de modifications post-traductionnelles. Les progrès réalisés tant au niveau de la LC qu'au niveau de la spectrométrie de masse ont aussi révolutionné la biologie en permettant une identification sur des quantités femtomolaires de protéines séparées par électrophorèse bidimensionelle dans le cadre d'études protéomiques et la détection toujours plus sensible de molécules d'intérêt par exemple dans les fluides biologiques (plasma, urine, LCR). Mon travail de thèse a porté sur le choix et la mise au point de stratégies instrumentales et analytiques en optimisant de façon poussée tous les paramètres du couplage LC-MS et LC-MS-MS. La première partie concerne la mise au point expérimentale de techniques de microLC-MS et microLC-MS-MS pour la caractérisation de composés peptidiques et la mesure de leur biodisponibilité. La seconde partie porte sur le développement, l'optimisation et l'utilisation de la nano-LC-MS pour l'étude protéomique avec une première étude protéomique visant à caractériser les interactions entre le riz et le rice yellow mottle virus. Ce travail a permis par les techniques MALDI-MS et LC-MS-MS, de mettre en évidence les protéines du riz recrutées par les protéines de capside du virus et l'identification des protéines différentiellement exprimées selon la variété de riz (résistant/sensible). La seconde étude protéomique concerne la caractérisation de marqueurs d'expressions liés à l'anomalie "Mantled" chez le palmier à huile faisant appel au séquençage de novo. Pour conclure, nous avons utilisé les multiples potentiels du couplage microLC-MS et nanoLC-MS-MS pour répondre à différents problèmes biologiques. Ces réponses n'ont pu être obtenues que grâce à la mise au point de méthodologie particulièreThe LC-MS coupling has arisen as a method of choice for the quantification of molecules in a matrix, the determination of the primary sequences of peptides and proteins and for the establishment of post-traductional modifications. The progress realized both at the LC and at the MS level have revolutionized the biology allowing the identification of femtomolar amounts of proteins separated by 2-D electrophoresis in the context of proteomic studies and the detection of molecules of interest with always more sensibility for example in biological fluids (plasma, urine, cerebro-spinal liquid)My PhD work consisted in the choice and the perfecting of instrumental and analytical strategies by a deep optimisation of alls the parameters of the LC-MS and LC-MS-MS coupling. The first part relates to the experimental perfecting of the microLC-MS(-MS) technics for the characterization of peptidic compounds and the measurement of their biodisponibility. The second part focuses on the development, the optimisation and the use of the nanoLC-MS-MS for proteomic studies with a first proteomic study aimed at characterizing the interactions between rice and the rice yellow mottle virus. This work has permitted, thanks to Maldi-MS and LC-MS-MS technics, to show up the rice proteins that are recruited by the capsid proteins of the virus and to identify the proteins differentially expressed depending an the rice cultivars (resistant/sensitive). The second proteomic study concerns the characterization of expression markers linked to the abnormality "Mantled" by the oil palm needing de novo sequencing. To conclude, we have used the multiple potentialities of the microLC-MS and the nanoLC-MS-MS coupling to reply to diverse biological problems. These responses could have been obtained only thanks to the perfecting of particular methodologies
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Favetta, Patrick. "Étude du métabolisme du propofol chez l'homme : intérêt des systèmes de couplage chromatographie-spectrométrie de masse". Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO1T057.
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Antonopoulos, Aristotelis. "Caractérisation par chromatographie en phase liquide et spectrométrie de masse d'oligosaccharides sulfatés : application à des hydrolysats de carraghénanes". Orléans, 2005. http://www.theses.fr/2005ORLE2032.
Abstract (sommario):
Un des intérêts de recherche dans le domaine des saccharides est orienté vers: (i) le mode d'interaction entre protéines et saccharides, et (ii) la caractérisation des oligosaccharides et polysaccharides. Le travail développé dans ce manuscrit concerne ce deuxième axe de recherche pour la caractérisation de polysaccharides sulfatés (carraghénanes, provenant des algues rouges). Ces molécules constituent une classe fondamentale de biopolymères parce que leur charge est responsable de leur grande affinité avec des protéines (surtout basiques). Nous avons étudié la structure de certaines espèces de kappa- iota- et lambda-carraghénanes en appliquant des enzymes spécifiques (carraghénases). Nous proposons des systèmes de couplage par chromatographie en phase liquide avec la spectrométrie de masse pour caractériser les hydrolysats de carraghénanes. Les résultats obtenus montrent que certains biopolymères sont constitués par des unités répétitives non-idéales. En étudiant ces structures non-idéales, il est possible d'identifier les unités répétitives qui constituent chaque polysaccharide et en plus de déduire des informations concernant le type de séquençage. De plus, il est possible de retirer des informations au niveau du fonctionnement des enzymes (carraghénases) appliquées.
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Jabot, Claire. "Développement de stratégies analytiques basées sur la LC-MS/MS pour la recherche de traces de pesticides et métabolites dans des matrices apicoles". Thesis, Lyon, 2017. http://www.theses.fr/2017LYSE1216/document.
Abstract (sommario):
Depuis plusieurs années, des mortalités anormalement élevées sont observées chez les abeilles, au niveau mondial. Plusieurs facteurs peuvent être à l’origine de ces phénomènes, dont l’utilisation de pesticides. Parmi ceux-ci, les insecticides de la famille des neonicotinoides et des pyrethrinoides ainsi que certains fongicides de la famille des carboxamides sont mis en cause. Les travaux présentés dans ce manuscrit sont consacrés au développement de méthodes analytiques pour l’identification, la détection et la quantification de 13 pesticides et leurs métabolites dans les abeilles et les produits de la ruche tels que le pain d’abeille et la cire d’abeille. Dans un premier temps, une méthode originale par dSPE a été développée pour l’extraction des pesticides cibles dans la cire d’abeille. Combinée à une méthode d’analyse par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse triple quadripole (UPLC-MS/MS), elle permet d’atteindre des limites de quantification jamais atteintes auparavant en multi-familles sur cette matrice complexe, comprises entre 1 et 40 ng.g-1. L’application de cette méthode sur des cires ainsi que l’analyse d’autres matrices apicoles fournis par des apiculteurs (au total 488 échantillons dont 125 abeilles, 87 cires et 276 pains d’abeille) ont montré une large présence de ces pesticides dans les ruchers français. Globalement, la cire d’abeille est la matrice présentant les plus fortes concentrations et le pain d’abeille est la matrice la plus contaminée en termes de nombre de pesticides présents. Une seconde partie des travaux est dédiée à la détection et à l’identification des métabolites de pesticides générés par des expérimentations in vitro et in vivo. Pour cela, une stratégie analytique, basée sur la complémentarité entre la spectrométrie de masse à temps de vol et triple quadripole, a été mise en place. La première permet l’identification des métabolites par la combinaison de la recherche de métabolites connus et de profils isotopiques spécifiques (Cl, Br, S). La seconde permet leur détection et leur quantification dans des échantillons d’abeille. Cette double approche a notamment permis d’identifier 9 métabolites de pesticides et 5 marqueurs d’exposition. Des métabolites et marqueurs d’exposition au boscalide (carboxamide), principalement issus de réactions d’hydroxylation, deshalogenation et substitution, ont été synthétisés. Ces derniers ont ensuite été détectés et quantifiés dans des échantillons d’abeilles issus de ruchers symptomatiques. Les développements analytiques et résultats permettent, d’une part, de faire un état des lieux de la présence de pesticides jugés préoccupants dans les ruchers français. D’autre part, ils fournissent aux écotoxicologues des données permettant de mieux comprendre les modes d’action des pesticides chez les abeillesFor several years, abnormally high mortalities have been observed in bees worldwide. Several factors may be responsible for these phenomena, including the use of pesti-cides. Among these, insecticides of the family of neonicotinoids and pyrethroids as well as some fungicides of the carboxamide family are implicated. The work presented is devoted to the development of analytical methods for the identification, detection and quantification of 13 pesticides and their metabolites in bees and hive products such as beebread and beeswax.Initially, an original dSPE method was developed for the extraction of targeted pesti-cides in beeswax. Combined with a liquid chromatographic analysis method coupled to triple quadrupole mass spectrometry (UPLC-MS/MS), it allows to reach limits of quantification never reached before in multi-families analysis on this complex matrix, between 1 and 40 ng.g-1.The application of this method to beeswaxes and the analysis of other beekeeping matrices provided by beekeepers (a total of 488 samples including 125 bees, 87 bees-waxes and 276 honeybees) showed a wide presence of these pesticides in french apiar-ies. Overall, beeswax is the matrix with the highest concentrations and beebread is the most contaminated matrix in terms of number of pesticides present.A second part of the work is devoted to the detection and identification of pesticide metabolites generated by in vitro and in vivo experiments. For this, an analytical strategy, based on the complementarity between time-of-flight and triple-quadrupole mass spectrometry, has been put in place. The first allows the identification of me-tabolites by combining the search for known metabolites and specific isotopic profiles (Cl, Br, S). The second allows their detection and quantification in bee samples.This dual approach has identified 9 pesticide metabolites and 5 markers of exposure. Metabolites and markers of exposure to boscalid (carboxamide), mainly derived from hydroxylation, dehalogenation and substitution reactions, have been synthesized. These were then detected and quantified in bee samples from symptomatic apiaries.These analytical developments and results make it possible, on the one hand, to make an inventory of the presence of pesticides of concern in french apiaries. On the other hand, they provide ecotoxicologists with data to better understand the behavior of pesticides in bees
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Roux, Aurélie. "Analyse du métabolome urinaire humain par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution". Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066575.
Abstract (sommario):
L’objectif de ce travail de thèse est de développer une base de données spectrale pour faciliter l’annotation et l’interprétation biologique des jeux de données d’analyse métabolomique obtenus en utilisant la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. Deux approches ont été utilisées : l’identification par comparaison aux spectres de masse de composés de références et l’identification directement à partir des données biologiques. Pour la première approche une chiomiothèque de métabolite a été constituée et analysée. L’identification à partir de données biologiques a été réalisée sur une cohorte de volontaires de 227 individus travaillant au CEA. 244 métabolites ont ainsi été identifiés dans les urines humaines, donc 78 jamais été décrits comme faisant parti du métabolome urinaire. 139 métabolites ont également était caractérisés sur la base de leur masse précise mais sans identification formelle. Ces 383 métabolites représentent environ 1000 ions dans chacun des modes d’ionisation. Les variations physiologiques au sein de la cohorte, en fonction de l’âge, du poids et du genre, de ces différents métabolites ont été étudiées afin de construire une base de données relationnelle. Enfin, le métabolome urinaire pouvant être affecté par les conditions de prélèvement des échantillons d’urines, nous avons réalisé des études de stabilité dans les conditions de prélèvement des métabolites précédemment caractérisés. Ces études nous ont permis de proposer des recommandations en termes de conditions de prélèvement et de stockage à court terme des urines et de mesurer l’impact de la contamination bactérienne sur les concentrations de différents métabolites urinaires
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Mendes, Siqueira Anna Luiza. "Apport de la spectrométrie de mobilité ionique couplée à la spectrométrie de masse pour la caractérisation de produits pétroliers formulés". Thesis, Normandie, 2018. http://www.theses.fr/2018NORMR044.
Abstract (sommario):
Les produits pétroliers formulés actuels tels que les carburants et les lubrifiants doiventrépondre à des cahiers des charges bien précis pour garantir les meilleures performances,fiabilité et longévité des moteurs tout en limitant l’émission de polluants. Ce travail de thèse porte sur le développement de méthodologies d’analyse pour l’identification d’additifs polymériques dans les gazoles et la caractérisation des polyalphaoléfines. L’analyse des additifs a été effectuée par couplage de la chromatographie liquide, de la spectrométrie de mobilité ionique et de la spectrométrie de masse (LC-IMSMS), l’ionisation étant obtenue par electrospray (ESI). Après ajustement des paramètres expérimentaux, les différents additifs ont été identifiés dans les gazoles sans préparation d'échantillon. Le couplage de la chromatographie liquide aux conditions critiques (LCCC) avec la spectrométrie de masse a également été évalué dans l’objectif d’améliorer la séparation des additifs de la matrice gazole. La caractérisation des polyalphaoléfines (PAO) a été réalisée par couplage IMS-MS associé à la source ASAP (sonde d’analyse de solide à pression atmosphérique) ou la source APPI (photoionisation à pression atmosphérique). En ASAP, outre les ions de pyrolyse, des espèces intactes peuvent être détectées pour les PAO de faible grade. Dans le cas des PAO de haut grade, seuls des ions fragments pyrolytiques ont été détectés, permettant toutefois d’identifier les alpha-oléfines utilisées pour produire les PAOs. En APPI, l’utilisation de solvants halogénés et de toluène, a permis d’observer des espèces intactes pour les PAOs de haut grade via la formation d’adduits halogénés. Le couplage IMS-MS a permis de différencier les polyalphaoléfines par l’étude des temps de dérive et des largeurs de signaux IMSNowadays, formulated petroleum products such as fuels and lubricants must respond toprecise technical requirements to ensure the best performance, reliability and longevity ofengines while limiting the emission of pollutants. This thesis work focused on the development of analytical methodologies for the identification of polymeric additives in diesel fuels and the characterization of polyalphaolefins. The additive analysis was performed by coupling of liquid chromatography, ion mobility spectrometry and mass spectrometry (LC-IMS-MS), the ionization was performed by electrospray (ESI). After adjusting the experimental parameters, all additives were identified in the diesel fuel without sample preparation. The coupling of liquid chromatography at the critical condition chromatography (LCCC) with mass spectrometry was also evaluated in order to improve the separation of additives from the diesel fuel matrix. The characterization of polyalphaolefins (PAO) was carried out by IMS-MS with ASAP (atmospheric solids analysis probe) or APPI (atmospheric pressure photoionization) sources. With ASAP, in addition to pyrolysis ions, intact species were detected for low PAO grades. In the case of high PAO grades, only pyrolytic fragments were detected, yet it was possible to identify the alphaolefins used to produce the PAOs. In APPI, the use of halogenated solvents and toluene, allowed to observe intact species for high PAO grades through the formation of halogenated adducts. With IMS-MS coupling polyalphaolefins were differentiated the by the study of drift times and full width at half maximum
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Richert, Sophie. "De l'identification à la caractérisation de protéines : Développement de la spectrométrie de masse dans le cadre de l'approche protéomique". Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2003. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2003/RICHERT_Sophie_2003.pdf.
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Venisse, Nicolas. "Procédure de recherche large ("screening") de xénobiotiques dans le sérum par chromatographie liquide - électrospray - spectrométrie de masse, appliquée à la toxicologie humaine". Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR2P071.
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Rochut, Nadège. "Analyse des somatotropines endogènes et recombinantes dans l'espèce bovine par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem : application au contrôle de leur utilisation illégale en élevage". Nantes, 2002. http://www.theses.fr/2002NANT2005.
Abstract (sommario):
Dans le cadre du contrôle de l'usage illégal des hormones de croissance en élevage, le laboratoire national de référence chargé du contrôle des promoteurs de croissance en élevage (LABERCA, ENV Nantes) a décidé de consacrer l'un de ses axes de recherche à l'étude des hormones protéiques : les somatotropines. La spectrométrie de masse a été utilisée pour déterminer le caractère exogène des somatotropines recombinantes. Le principe repose sur la différence de masse entre la somatotropine bovine endogène et ses produits recombinants (substitution d'une alanine par une méthionine et addition éventuelle de 0 à 8 acides aminés du côté NH2 terminal de la protéine). La mise au point d'une méthode de purification spécifique des hormones de croissance a été réalisée et s'est appuyée sur une chromatographie d'immunoaffinité (anticorps polyclonaux)Within the control of growth promoters illegally used in animal production, the french reference laboratory (LABERCA) has decided to direct one of its research topics towards the study of protein hormones : the somatropins. Mass spectrometry was used to determine exogenous character of recombinant somatotropins
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Pennanec, Rodolphe. "Synthèses dirigées, purification et analyse de cyclodextrines anioniques par différentes méthodes séparatives et leurs couplages avec la spectrométrie de masse". Orléans, 2002. http://www.theses.fr/2002ORLE2048.
Abstract (sommario):
L'intérêt suscité par les cyclodextrines anioniques réside dans leur capacité d'inclusion qui permet d'accroître la solubilité de certains composés en milieu aqueux et dans leur propriété énantiosélective. Si les synthèses mises en jeu sont simples, elles ne permettent d'accéder qu'à des mélanges comprenant de nombreuses cyclodextrines de degré de substitution et d'isomèrie de position variés. La chromatographie liquide sur carbone graphitique poreux offre une séparation fine des lots de faible degré de substitution caractérisés par spectrométrie de masse. L'electrophorèse capillaire couplée à la spectrométrie de masse permet d'obtenir une empreinte fiable des lots analysés. Des techniques de purification sont comparées afin de proposer un protocole simplifié de traitement des mélanges réactionnels. De nouvelles conditions de synthèse sont enfin présentées afin d'obtenir des lots de faibles degré de substitution, plus faciles à caractériser et plus reproductibles.
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Antignac, Jean-Philippe. "Dosage et étude du métabolisme des corticostéroi͏̈des dans l'espèce bovine par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem : application au contrôle de leur utilisation illégale en élevage". Nantes, 2001. http://www.theses.fr/2001NANT2078.
Abstract (sommario):
Plus d'un demi-siècle après la découverte des hormones corticostéroi͏̈des naturelles et de leurs propriétés anti-inflammatoires, plusieurs dizaines de dérivés synthétiques de ces molécules sont aujourd'hui disponibles. Un grand nombre est utilisé couramment en médecine humaine et vétérinaire, dans un cadre thérapeutique légal mais réglementé. Parallèlement, ces composés sont susceptibles d'être employés en tant que promoteurs de croissance en élevage, et cette utilisation est illégale en Europe. Une méthode de contrôle de l'utilisation des corticostérod͏̈es a par conséquent été développée. Dans cette optique analytique, la présente étude a permis de proposer une méthode basée sur le couplage LC-MS/MS pour l'analyse des résidus de corticostéroi͏̈des dans les échantillons d'urine, de tissus et de poilsFifty years after the discovery of natural corticosteroid hormones and their anti-inflammatory properties, many synthetic derivatives of these molecules are today available. Most of them are widely used in human and veterinary medicines, in a legal but regulated scope. These compounds are also susceptible to be used as growth promoters, this utilisation remaining illegal in Europe. Consequently, an analytical method dedicated to the control of the utilisation of corticosteroids in cattle has been developed. In this analytical way, the present study permitted to propose a method based on LC-MS/MS measurement of corticosteroid residues in urine, tissue and hair samples
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Simon, Romain. "La quantification ciblée de protéines et peptides par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem : développements analytiques et applications". Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00875965.
Abstract (sommario):
En recherche clinique ou environnementale, les biomarqueurs protéiques présentent un intérêt croissant. Bien que les immuno-dosages restent les méthodes de référence pour leur quantification, les récentes avancées en spectrométrie de masse (MS) font de cette technique une alternative crédible à l'ELISA. Ce travail apporte quelques éléments méthodologiques pour repousser certaines limitations de la MS. D'abord, deux dosages ont été proposés. Celui réalisé chez G. fossarum représente le premier exemple de dosage de la Vitellogénine chez un invertébré par LC-MS/MS. L'un des défis de la méthode présentée est de doser spécifiquement une protéine dans un organisme dont le génome est majoritairement inconnu. Le second dosage concerne les peptides contenant une méthionine. Nous avons développé un protocole d'oxydation des méthionines afin de s'affranchir du biais lié à leur oxydation partielle. Cette méthode a ensuite été appliquée à une protéine impliquée dans la maladie d'Alzheimer (l'Apolipoprotéine E4) dans une cohorte de 673 plasmas. Ce dosage est à ce jour l'une des plus grandes études réalisées par LC-MS/MS et montre toute la robustesse de cette approche. Enfin, l'influence de la phase mobile sur la sensibilité des dosages de peptides a été étudiée : d'abord en phase inverse, où le méthanol est une bonne alternative à l'acétonitrile ; ensuite en HILIC, où les difficultés liées à l'étude d'ions multichargés en milieu majoritairement organique ont été abordées. Les problèmes liés à la capacité de charge des colonnes ont également été soulevés. La chromatographie HILIC reste prometteuse pour la quantification de peptides puisqu'un facteur dix en sensibilité peut être apporté.
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Dubuis, Alexis. "Déformulation de matrices complexes : vers une méthodologie raisonnée adaptée aux matrices issues des procédés de valorisation de la biomasse". Thesis, Lyon, 2019. http://www.theses.fr/2019LYSE1228/document.
Abstract (sommario):
La conversion de la biomasse lignocellulosique en biocarburants et molécules biosourcées produit des matrices liquides complexes thermosensibles qui couvrent une large gamme de polarités et de masses moléculaires. Les outils analytiques développés dans la littérature donnent une description partielle de ces matrices oxygénées. Pour en comprendre la réactivité et mieux guider le développement des procédés de conversion, une meilleure caractérisation est nécessaire. L’objectif de cette thèse est de démontrer l’apport d’une dimension de fractionnement pertinente en amont de techniques séparatives pour accéder à la caractérisation à l’échelle moléculaire d’échantillons ex-biomasse. Une déformulation complète et structurée par familles chimiques est visée, sans perte ni modification des composés. Deux voies de fractionnement ont été investiguées : (1) fractionnement par solubilité à l’aide de l’extraction liquide-liquide (LLE) et de la chromatographie de partage centrifuge (CPC) et (2) fractionnement par taille avec la chromatographie d’exclusion stérique (SEC). Ces techniques se veulent complémentaires à une analyse par chromatographie liquide à polarité de phase inversée avec détection par spectroscopie ultraviolet-visible et spectrométrie de masse haute résolution (RPLC-UV/HRMS). Des méthodes de fractionnement LLE, CPC et SEC ont été développées sur molécules modèles afin d’identifier les mécanismes et la sélectivité chimique mis en jeu. Des cartographies 2D inédites ont ainsi été obtenues, assurant un gain important en pouvoir résolutif et une structuration nouvelle des chromatogrammes en comparaison à l’approche RPLC-UV/HRMS. Dans un second temps, le potentiel des couplages SECxRPLC-UV/HRMS et CPCxRPLC-UV/HRMS pour la description de matrices complexes a été illustré via l’étude de deux échantillons issus d’expérimentations en unités pilotes et de compositions chimiques très différentes, représentant deux voies possibles de transformation (biochimique et thermochimique) de biomasse lignocellulosique. La complémentarité entre les approches de séparation mises au point a ainsi permis de doubler le nombre de pics détectés tout en bénéficiant de l’organisation chimique des composés. Cette aide précieuse à l’identification a été renforcée par les informations structurales délivrées via les différents modes de détection, en particulier l’HRMS. La compréhension de la structuration des cartographies 2D a été présentée et discutée afin de proposer la stratégie la plus adaptée pour déformuler complètement un échantillon en s’appuyant sur la mesure de descripteurs pertinents. Enfin, l’une des approches développée dans cette thèse a été mise en œuvre pour l’isolement sélectif et l’élucidation structurale de molécules clefs au sein d’une matrice complexe à l’aide d’expériences en fragmentation MS et spectroscopie de résonance magnétique nucléaire (RMN)The conversion of lignocellulosic biomass into biofuels and biosourced molecules produces complex thermosensitive liquid matrices which cover a wide range of polarity and molecular weight. Analytical tools developed in the literature only give a partial description of these oxygenated matrices. To understand the reactivity of these samples and optimize the development of conversion processes, a better characterization is required. The objective of this thesis is to demonstrate the interest of a relevant fractionation step prior to separation techniques to help the molecular characterization of biomass samples. The reverse engineering proposed for the sample is desired complete and chemically controlled (without loss or sample modification). Two fractionation pathways were investigated: (1) solubility fractionation with liquid-liquid extraction (LLE) and centrifugal partition chromatography (CPC) and (2) size fractionation with size exclusion chromatography (SEC). These techniques intend to be complementary to reversed-phase liquid chromatography hyphenated to ultraviolet-visible spectroscopy detection and high resolution mass spectrometry (RPLC-UV/HRMS). LLE, CPC and SEC methods were developed on model molecules to understand mechanisms involved and control the chemical selectivity. 2D contour plots were obtained, improving the resolving power and structuring chromatograms in comparison with RPLC-UV/HRMS. Then, SECxRPLC-UV/MS and CPCxRPLC-UV/MS hyphenations were applied to describe two complex samples from different substrates produced on experimental pilot units from two possible conversion pathways of lignocellulosic biomass (biochemical and thermochemical). The complementarity of separation modes allows to double the number of peaks detected, benefiting from the chemical organization of compounds. This constitute a support to identification also enhanced by multi-detection which provide additional structural information on compound detected, especially HRMS. Chemical organization in 2D contour plots were presented and discussed to propose the most adapted strategy to fully fractionate a sample based on the measurement of relevant descriptors. Finally, one of the fractionation approach developed in this thesis was used to isolate and structurally elucidate key molecules of a complex sample through MS fragmentation experiments and nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR)
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Cecchini, Tiphaine. "Caractérisation de bactéries par analyses protéomiques en spectrométrie de masse". Thesis, Lyon, 2016. http://www.theses.fr/2016LYSE1064.
Abstract (sommario):
Grâce à la spectrométrie de masse de type MALDI-TOF, l'identification des bactéries est maintenant possible en quelques minutes. Mais le taux de mortalité des patients augmente lorsqu'une antibiothérapie inappropriée est utilisée et les instruments MALDI-TOF ne sont pas capables d'analyser rapidement et exhaustivement la résistance bactérienne. Actuellement, 6 à 24 heures sont nécessaires pour déterminer le phénotype de résistance. En couplant une chromatographie liquide et un spectromètre de masse à ionisation électrospray (LC-MS/MS), nous avons identifié les marqueurs de résistance en 1 à 2 heures. En 30 min, nous avons pu détecter les mécanismes de résistance aux β-lactamines, aux glycopeptides, à la méthicilline et aux fluoroquinolones, à l'aide de méthodes de type "Suivi de Réactions Sélectionnées", ou "Selected Reaction Monitoring" (SRM). Au cours de la même analyse multiplexée, des dizaines de protéines peuvent être détectées de façon hautement spécifique et sensible. Comme l'illustre l'étude de la résistance multifactorielle chez Acinetobacter baumannii, cette approche permet en outre une analyse quantitative d'un grand intérêt pour certains mécanismes de résistance. Cependant, malgré ces perspectives attrayantes, la LC-MS/MS reste, aujourd'hui, loin d'une possible implantation en routine dans les laboratoires de microbiologie. Les instruments sont trop coûteux et la technologie trop complexe pour un usage pour du diagnostic in vitro. La spectrométrie de masse pourrait déjà avantageusement compléter les technologies actuelles de biologie moléculaire. Aujourd'hui, le séquençage de nouvelle génération est la méthode de référence pour la caractérisation moléculaire des bactéries. Mais, comme démontré dans ce travail, l'annotation des gènes est perfectible. Pour quelques dizaines d'euros et quelques heures d'analyse, les peptides identifies par spectrométrie de masse facilitent l'assemblage des séquences (« scaffolds ») et la détection des gènes. De surcroît, la spectrométrie de masse permet une quantification précise des protéines. Elle apporte ainsi une nouvelle dimension analytique et une vision moléculaire plus proche du phénotype. En conclusion, la spectrométrie de masse LC-MS/MS peut être une technologie complémentaire attractive, voir une future alternative, à la biologie moléculaire pour la caractérisation des bactériesThanks to MALDI-TOF mass spectrometry, identification of isolated bacteria is now possible within a few minutes. But doctors also need to rapidly know the phenotype of resistance of the bacteria. Indeed, the patient mortality rate increases when the antibiotherapy is not appropriate. However, MALDI-TOF instruments are not able to analyze antibacterial resistance rapidly and comprehensively.Today, 6 to 24 hours are nedded for antibiotic susceptibility testing. When combining a liquid chromatography and a mass spectrometer with electrospray ionization (LC-MSMS), the detection of resistance biomarkers was possible within 1 to 2 hours. Using a Selected Reaction Monitoring (SRM) method, resistance mechanisms to beta-lactams, methicillin, glycopeptides and fluoroquinolones were detected in strains within 30 minutes. Tens of resistance determinants can be analyzed in a single multiplexed assay, with high specificity and sensitivity. Illustrated by the study of multifactorial resistance in Acinetobacter baumannii, the technology allows furthermore a quantitative analysis, which is of great value for some resistance mechanisms. Similarly, we identified virulent strains of enterohemorrhagic Escherichia coli by targeting toxins and serotype biomakers in the same assay. Mass spectrometry offered deeper bacterial characterization than conventional serotyping using polyclonal antibodies. However, despite all these favorable prospects, LC-MS/MS remains today far from reaching a routine use in microbiological hospital laboratories. Instruments are too expensive and the technology is too cumbersome for a daily in vitro diagnostic use. Waiting for a more suitable use, mass spectrometry could yet advantageously complement current molecular technologies. Today, the gold standard to study bacteria at molecular level is next generation sequencing. However, as demonstrated during this work, gene annotation remains imperfect. For tens of euros and few hours of analysis, peptides identified by mass spectrometry analysis of a bacteria might improve scaffold assembly and gene detection. Moreover, mass spectrometry gives an accurate protein quantitation and brings a new analytical dimension, potentially closer to the phenotype than molecular techniques. In conclusion, LC-MS/MS mass spectrometry could be an attractive complementary, or alternative technology in a near future, to conventional molecular biology techniques for deep characterization of bacteria
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Bossant, Marie-Jeanne. "Étude structurale et dosage du paf-acéther et de ses dérivés par chromatographie en phase liquide ou en phase vapeur couplées à la spectrométrie de masse et au détecteur à capture d'électrons". Paris 11, 1988. http://www.theses.fr/1988PA114808.
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Person, Marine de. "Analyse par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse d'acides aminés et de petits peptides non dérivés dans des matrices agroalimentaires : développement et validation de méthodes". Orléans, 2005. http://www.theses.fr/2005ORLE2035.
Abstract (sommario):
L'analyse qualitative et quantitative des acides aminés et des petits peptides dans les matrices complexes représente un enjeu indéniable dans de nombreux domaines d'application (agroalimentaire, pharmaceutique, exobiologie,. . . ). Les méthodes d'analyse que nous proposons dans ce mémoire font appel à la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse sans étape de dérivation. La première partie du mémoire est consacrée à l'identification et au dosage de petits peptides dans des vins de Champagne. La méthodologie d'analyse est basée sur le couplage de la chromatographie de paire d'ions en milieu acide à la spectrométrie de masse à source electrospray en mode d'ionisation positif. Elle a été optimisée puis validée selon les critères classiques de validation. La seconde partie du mémoire a trait au développement de deux nouvelles méthodes séparatives complémentaires, compatibles avec un mode d'ionisation négatif. La première fait appel à la chromatographie de paire d'ions en milieu alcalin avec des agents d'appariement d'ions volatils (n-alkylammonium) sur silice greffée octadécyle et sur carbone graphitique poreux. La seconde utilise la chromatographie d'interactions hydrophiles sur une phase stationnaire polymérique de type amino. Une validation de ces méthodes a été développée. Enfin, une étude comparative des performances de deux sources d'ionisation de type electrospray associées à des interfaces différentes a été réalisée dans le cadre de l'analyse des acides aminés non dérivés.
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Jacquet, Romain. "Cyclodextrines hydrophiles : caractérisation et étude de leurs propriétés énantiosélective et complexante : utilisation de la chromatographie en phase liquide et de la spectrométrie de masse". Phd thesis, Université d'Orléans, 2006. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00185542.
Abstract (sommario):
De par leurs propriétés complexante et énantiosélective, les cyclodextrines (CDs) sont largement utilisées dans les industries pharmaceutique, cosmétique, agroalimentaire, etc. ainsi qu'en chimie analytique. Les travaux présentés dans ce manuscrit concernent différents domaines d'étude des CDs : leur caractérisation, leur utilisation en tant que sélecteurs chiraux et l'analyse de leurs complexes.Dans la première partie, une nouvelle CD méthylée faiblement substituée a été caractérisée par différentes techniques analytiques, permettant ainsi l'obtention d'informations complémentaires menant à une meilleure connaissance de la composition du mélange commercial. D'autre part, la séparation par chromatographie en phase liquide (CPL) des trois isomères de la sulfobutyléther-beta-CD monosubstituée a été optimisée sur carbone graphite poreux (PGC) en augmentant la température de la colonne.
La deuxième partie a porté sur l'évaluation du système chromatographique PGC / CDs méthylées pour la séparation chirale en CPL. Outre sa grande résistance physique et chimique, le PGC s'est révélé plus sélectif que les colonnes de silice greffée habituellement employées pour ce type de séparation et a nécessité une quantité moindre de CDs dans la phase mobile.
Enfin, dans la troisième partie, les complexes de différentes CDs méthylées avec des solutés test ont été étudiés par des expériences de partage liquide-liquide et par spectrométrie de masse à ionisation électrospray. La comparaison des résultats obtenus par ces deux méthodes a révélé que les signaux enregistrés en ESI-SM ne reflètent pas les équilibres existant en solution.
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Maheux, Maxim. "Stratégies analytiques par chromatographie liquide avec détection en spectrométrie de masse afin d'évaluer l'activité de neuf enzymes du cytochrome P450". Thesis, Université Laval, 2012. http://www.theses.ulaval.ca/2012/28806/28806.pdf.
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Al, Turihi Nour. "Caractérisation et quantification de la toxine et de l'anatoxine tétanique dans les vaccins par spectrométrie de masse". Thesis, Lyon, 2019. http://www.theses.fr/2019LYSE1103.
Abstract (sommario):
Le médicament prophylactique qui a drastiquement réduit l’impact et la sévérité du tétanos sur les populations humaines est le vaccin antitétanique. Son principe actif appelé anatoxine tétanique résulte de l’inactivation au formaldéhyde de la toxine tétanique. Cette détoxification chimique est une étape critique qui détermine la sécurité, l’antigénicité et l’immunogénicité du vaccin. Pour une meilleure compréhension de ce processus chimique, à l’échelle moléculaire, nous avons dans un premier temps caractérisé l’anatoxine tétanique par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem haute résolution (LC-MS/MS) afin d’identifier et de localiser exhaustivement l’ensemble des modifications induites par le formaldéhyde sur la structure tridimensionnelle de la protéine vaccinale. Dans un second lieu, pour un meilleur suivi qualité du procédé industriel de fabrication de l’anatoxine tétanique, nous avons développé des méthodes uniques d’expertise in vitro par LC-MS/MS pour réaliser la quantification relative et/ou absolue de la toxine tétanique, de l’anatoxine tétanique, ainsi que pour effectuer la quantification relative des fragments de toxine chimiquement modifiés par le formaldéhyde. Ces outils de caractérisation sont complémentaires aux méthodes de contrôles qualités existantes et contribuent actuellement à un meilleur suivi de la reproductibilité des lots de vaccins antitétaniquesThe prophylactic drug, which has drastically reduced the impact and severity of tetanus on human populations, is the tetanus vaccine. Its active ingredient called tetanus toxoid results from the inactivation of tetanus toxin with formaldehyde. This chemical detoxification is a critical step, which determines the safety, antigenicity and immunogenicity of the vaccine. For a better understanding of this chemical process, at the molecular level, we first characterized tetanus toxoid by liquid chromatography coupled with high-resolution tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) in order to fully identify and map all the modifications induced by formaldehyde on the three-dimensional structure of the vaccine protein. In a second step, for a better quality control of the industrial process of manufacturing tetanus toxoid, we developed in vitro expertise methods by LC-MS/MS to perform the relative and/or absolute quantification of tetanus toxin, tetanus toxoid, and to carry out the relative quantification of the toxin fragments chemically modified with formaldehyde. These characterization tools are complementary to existing quality control methods and currently contribute to better monitoring the reproducibility of tetanus vaccine batches
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Mathe, Carole. "Etude de résines naturelles : caractérisation par CLHP et CPG couplées à divers modes de détection : UV/Visible, fluorimétrique et spectrométrie de masse". Avignon, 2003. http://www.theses.fr/2003AVIG0216.
Abstract (sommario):
Ces travaux portent sur l'étude de deux résines végétales naturelles : l'oliban et le sang-dragon. L'oliban, est une oléo-gommo-résine exsudée uniquement par certaines espèces de Boswellia (famille des Burséracées). Le sang-dragon correspond, quant à lui, à une résine particulière dans le sens où elle est colorée en rouge. Actuellement, il est admis que le véritable sang-dragon appartient aux deux espèces Daemonorops et Dracaena. Aussi, deux échantillons ont été analysés correspondant à Daemonorops draco (Indonésie) et Dracaena cinnabari (espèce endémique à l'île de Socotra au Yémen). Seule la partie résine (terpénique) de ces substances a été analysée, c'est-à-dire les mono- et sesquiterpènes (huiles essentielles), les diterpènes et surtout les triterpènes (squelettes ursane, oléanane, lupane, tirucallane). Diverses techniques chromatographiques tant en phase liquide (CLHP-UV/ fluorimétrie et CLHP/SM) qu'en phase gazeuse (CPG/SM), ont été employées pour caractériser ces substances. Un des objectifs de ce travail est la recherche de marqueurs chimiques spécifiques de ces matériaux. A ce titre, dix-sept molécules ont été isolées ou hémisynthétisées à partir d'oliban commercial de type " Erythrée ", dont les acides a- et b-boswelliques et leur dérivé acétylé correspondant, ainsi qu'un composé original l'acide lupéolique. Des tests de dégradation thermique ont été également réalisés ; l'étude des fumées dégagées ainsi que le résidu résineux obtenu traduisent la présence de composés de dégradation : 24-noroléana-3,12-diène, 24-norursa-3,12-diène et 24-norlupa-3(20)29-diène. La résistance thermique de nos composés standards a été également mise en évidence. L'étude de divers échantillons d'origines géographiques diverses a été également traitée dans l'objectif de corréler la composition chimique et l'origine géographique. Les espèces Boswellia carteri, Boswellia sacra et Boswellia frereana ont pu être différenciées. De plus, nos méthodes chromatographiques ont également permis la mise en évidence d'adultération. L'extrapolation des résultats obtenus sur des résines contemporaines, a permis notamment la caractérisation d'encens au sein d'échantillons provenant d'une pharmacie du XVIIIème siècle ou bien d'échantillons datant de l'Egypte Ancienne. En ce qui concerne le sang-dragon, les deux espèces considérées ont pu être différenciésThis work concerns the study of two natural vegetable resins : olibanum and dragon's blood. Olibanum, is a oleo-gommo-resin only exuded by certain species of Boswellia (family of Burseraceae). The dragon's blood corresponds to a particular resin coloured in red. It is currently admitted, it is allowed that the true dragon's blood belongs to both species Daemonorops and Dracaena. Consequently, two samples were analyzed corresponding to Daemonorops draco (Indonesia) and Dracaena cinnabari (endemic species of Socotra's island, Yemen). Only the resin part (terpenic) of these substances was analyzed : the mono ones and sesquiterpenes (essential oils), the diterpenes and especially the triterpenes (ursane, oleanane, lupane and tirucallane skeletons). Various chromatographic techniques (LC/PDA/Fluorimetry, LC/SM and GC/MS) were employed to characterize these substances. The main goal of this work is to determine the specific chemical markers of these materials. Thus, seventeen molecules were isolated or hemisynthetized from commercial olibanum "Erytrean" type , as for example boswellic acids and their corresponding acetylated derivative, and a novel compound named lupeolic acid. Thermal degradation assays were also carried out ; studies of the released fume and the resinous residue obtained indicate the presence of products resulting from degradations : 24-noroléana-3,12-diene, 24-norursa-3,12-diene and 24-norlupa-3(20)29-diene. The thermal resistance of our standard compounds was also highlighted. Various geographical samples was also investigated to correlate the chemical composition and geographical origin. The species Boswellia carteri, Boswellia sacra and Boswellia frereana were differentiated. Moreover, our chromatographic methods also allowed the determination of fraud. Note that, the extrapolation of the results obtained on contemporary resins, allowed the characterization of olibanum in samples coming from the 18th century pharmacy or samples dating from ancient Egypt. Concerning the dragon's blood, both species considered were differentiated
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Podevin, Christelle. "Détermination des alcools aliphatiques polyéthoxylés dans les eaux usées par couplage entre la chromatographie en phase liquide et la spectrométrie de masse". Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO10173.
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Bezy, Vincent. "Développement de méthodologies séparatives couplées à la spectrométrie de masse pour le dosage des nucléotides et nucléosides antiviraux du VIH". Orléans, 2005. http://www.theses.fr/2005ORLE2083.
Abstract (sommario):
Cette étude de développement de procédures de dosage des métabolites plasmatiques et intracellulaires des Inhibiteurs Nucléosidiques de la Transcriptase Inverse (INTIs), s’inscrit dans le cadre du suivi thérapeutique. L’efficacité de ces drogues étant patient « dépendante », l’ajustement thérapeutique des traitements administrés se doit d’être optimisé. Nous avons mis en place deux procédures de dosage, par électrophorèse capillaire et chromatographie liquide, couplées avec la spectrométrie de masse. Les méthodologies de dosage simultané des métabolites intracellulaires dans des extraits cellulaires PBM ont été validées en suivant les critères SFSTP – pharmacopée européenne - et de la FDA (Federal Drug Administration). Les limites de quantification sont de l’ordre de quelque dizaine de ng/mL par EC-ESI-SM/SM et quelques centaines de pg/mL par CPL-ESI-SM/SM. Pour terminer, dans le cadre de l’adhérance, une procédure d’analyse des métabolites plasmatiques de sept INTIs a été mise en place et pré-validée par CPL – UV. Les Limites de Quantification (LOQs) obtenues sont de l’ordre de quelques dizaines de ng/mL.
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Wiest, Laure. "Méthodologies analytiques basées sur la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse pour la quantification multi-familles de tensioactifs dans les rivières". Electronic Thesis or Diss., Lyon, 2021. http://www.theses.fr/2021LYSE1138.
Abstract (sommario):
Le nombre de nouveaux produits chimiques sur le marché augmente chaque année. De surcroit, ils sont de plus en plus complexes et les formulations contiennent des mélanges qui sont finalement disséminés dans divers compartiments de l’environnement. Parmi ces micropolluants, les tensioactifs présentent quelques particularités. Tout d’abord, les tensioactifs sont des mélanges complexes d’homologues et isomères dont la composition dépend des matières premières et des procédés de synthèse utilisés. Deuxièmement, certains, comme les alkylbenzène sulfonate linéaires (LAS) et les triethanolamine esterquats (TEAQ), sont utilisés en très grandes quantités, ce qui peut faire craindre une « pseudo-persistance » dans les milieux récepteurs. Enfin, les domaines d’application des tensioactifs sont extrêmement variés, allant du domestique à l’industriel, en passant par l’agricole et l’hospitalier, ce qui suggère un grand nombre de sources de transfert vers l’environnement. Les données concernant leur occurrence sont très hétérogènes selon les familles, et certains types de tensioactifs n’ont jamais été recherchés dans les rivières jusqu’à présent. L’objectif de cette thèse est donc de développer des méthodologies analytiques sensibles et fiables qui permettent de combler ce manque de connaissance concernant l’occurrence des tensioactifs dans l’environnement. Afin d’obtenir une sensibilité suffisante, une méthode de chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS) a tout d’abord été optimisée. Une contamination des blancs instrumentaux, en particulier par les tensioactifs anioniques, à des concentrations comprises entre 0,1 µg/L et 3 µg/L a été observée. Les limites de quantification (LQ) étant encore trop élevées par rapport aux PNEC, une étape de préconcentration par extraction sur phase solide a été mise au point pour l’analyse dans les eaux de rivière. Concernant l’analyse des sédiments, une extraction assistée par ultrasons a été optimisée puis validée. Avec des LQ entre 0,015 et 0,485 µg/L pour les eaux et entre 6,4 et 158 µg/kg pour les sédiments, les performances analytiques obtenues sont compatibles avec l’analyse de traces. L’application de ces méthodologies à des eaux et sédiments de rivière prélevés en France a montré une forte présence des tensioactifs dans ces milieux. En particulier, les LAS présentent à la fois des fréquences de quantification et des rapports concentrations moyennes sur PNEC élevés, et représentent donc un risque important pour les écosystèmesThe number of chemicals on the market is increasing every year. Moreover, they are more and more complex and the formulations contain mixtures that are finally disseminated in various compartments of the environment. Among these micropollutants, surfactants present some particularities. First, surfactants are complex mixtures of homologues and isomers whose composition depends on the raw materials and the synthesis processes used. Secondly, some, such as linear alkylbenzene sulfonates (LAS) and triethanolamine esterquats (TEAQ), are used in very large quantities, which may induce "pseudo-persistence" in the receiving environments. Finally, the fields of application of surfactants are extremely varied, ranging from domestic to industrial, agricultural and hospital, which suggests a large number of sources of transfer to the environment. The data concerning their occurrence are very heterogeneous according to the families, and some types of surfactants have never been looked for in rivers until now. The objective of this thesis was therefore to develop sensitive and reliable analytical methodologies to fill this knowledge gap concerning the occurrence of surfactants in the environment. In order to obtain sufficient sensitivity, a liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was first optimized. Contamination of instrumental blanks, in particular by anionic surfactants, at concentrations between 0.1 µg/L and 3 µg/L was observed. As the limits of quantification (LOQ) were still too high compared to the PNEC, a pre-concentration step by solid phase extraction was developed for the analysis in river water. For sediment analysis, an ultrasound-assisted extraction was optimized and validated. With LOQs between 0.015 and 0.485 µg/L for water and between 6.4 and 158 µg/kg for sediment, the analytical performances obtained are compatible with trace analysis. The application of these methodologies to river waters and sediments sampled in France showed a high occurrence of surfactants in these media. In particular, LAS have both high quantification frequencies and high mean concentration to PNEC ratios, and therefore represent a significant risk to ecosystems
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Ghezal, Salma. "Etude métabolomique par LC-MS/MS chez Plasmodium Falciparum, parasite responsable du Paludisme". Thesis, Montpellier 2, 2014. http://www.theses.fr/2014MON20179.
Abstract (sommario):
La forme la plus sévère de paludisme est causée par le parasite unicellulaire P. falciparum. Lors de la phase intra-érythrocytaire de son développement, P. falciparum met en place des fonctions métaboliques nécessaires à son développement dans l'érythrocyte, à sa multiplication et enfin à sa dissémination vers d'autres érythrocytes. Comprendre et élucider les structures et les dynamiques du réseau métabolique chez le parasite, permettent de découvrir de nouvelles voies métaboliques et des étapes clefs qui peuvent jouer un rôle important dans le développement du parasite. Elles permettent également de déterminer le mécanisme d'action des agents antipaludiques et de mieux comprendre les résistances associées aux traitements existants. Dans cet objectif, une approche métabolomique ciblée, utilisant la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS) a été utilisée. Cette approche consiste en une quantification absolue de métabolites impliqués dans les voies de biosynthèse des phospholipides membranaires du parasite mais également d'autres métabolites qui reflètent son statut métabolique. Nous avons dans un premier temps, déterminé les distributions et les quantités absolues des métabolites présents dans un érythrocyte infecté par P. falciparum en comparaison avec un érythrocyte sain. Nous avons également mis en évidence les perturbations causées par cette infection sur le métabolisme de l'érythrocyte humain ainsi que les différents échanges qu'entretien le parasite avec sa cellule hôte mais également avec le milieu extracellulaire. Le métabolisme phospholipidique de Plasmodium est complexe car il possède plusieurs voies de synthèses opérant à partir de précurseurs initiaux distincts et conduisant à la synthèse d'un même produit final. Dans l'objectif d'étudier la contribution relative des différentes voies métaboliques dans la biosynthèse des phospholipides majoritaires chez P. falciparum (PC et PE), nous avons développé une approche qui consiste à incuber les érythrocytes infectés en présence de précurseurs marquésThe most severe form of malaria is caused by the single-celled parasite P. falciparum. During the intra-erythrocytic stage of its development, P. falciparum implements several metabolic functions necessary for its development in the erythrocyte, its multiplication and finally to its spread to other erythrocytes. Understand and elucidate the structures and the dynamics of the parasite's metabolic network is useful to discover new metabolic pathways and key steps that may play an important role in the development of the parasite. They also help determine the mechanism of action of antimalarial agents and better understand the resistances associated with available treatments. For this purpose, a targeted metabolomics approach, using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) was used. This approach consists of an absolute quantitation of metabolites involved in the biosynthesis of membrane phospholipids of the parasite but also other metabolites that reflect its metabolic status. We initially determined the distributions and the absolute amounts of metabolites in infected erythrocytes in comparison with healthy erythrocytes. We also highlighted the disruption caused by this infection on the metabolism of the human erythrocyte and the various interactions between the parasite and its host cell as well as the extracellular medium. The phospholipids metabolism of Plasmodium is complex because it has several synthetic pathways operating from separate initial precursor and leading to the synthesis of a single end product. With the aim to study the relative contribution of these different metabolics pathways in the biosynthesis of the most important phospholipids in P. falciparum (PC and PE), we have developed an approach that involves incubation of infected erythrocytes in the presence of labeled precursors
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Dauchy, Xavier. "Spéciation des butylétains dans les sédiments marins par couplage chromatographie en phase liquide - plasma à couplage inductif/spectrométrie de masse (HPLC-ICP-MS)". Pau, 1993. http://www.theses.fr/1993PAUU3003.
Abstract (sommario):
Cette thèse porte sur la mise au point d'une technique analytique pour la détermination des butyletains dans des échantillons issus de l'environnement. Elle est organisée en neuf chapitres. Le premier résume les applications industrielles des organoétains. Le chapitre suivant rassemble les informations actuellement disponibles sur la répartition de ces composés dans l'environnement. Les transformations des organoétains dans le milieu naturel sont abordées dans le troisième chapitre. Le quatrième chapitre regroupe les connaissances actuelles sur la toxicité de ces produits. Les cinquième et sixièmes chapitres constituent un résumé des méthodes chromatographiques et non chromatographiques utilisées pour la détermination des organoétains, ainsi qu'un résumé des procédures d'extraction employées pour les échantillons issus de l'environnement. Les résultats expérimentaux sont présentés à partir du chapitre sept, qui décrit la mise au point d'une méthode HPCL-ICP/MS pour la spéciation des butylétains. Le chapitre suivant expose les expériences qui ont été tentées afin d'améliorer la limite de détection. Le dernier chapitre rapport les résultats de l'application de la méthode HPLC-ICP/MS à la détermination des butyletains dans un sédiment marin de référence (pacs-1) et dans un sédiment côtier en cours de certification pour le BCR (CRM 462).
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Goulitquer, Sophie. "Identification et dosage de dérivés oxydés d'acides gras polyinsaturés dans les milieux biologiques par une approche métabolomique ciblée". Brest, 2008. http://www.theses.fr/2008BRES3075.
Abstract (sommario):
Les oxylipides/oxylipines, dérivés oxydés d'acides gras polyinsaturés, jouent un rôle important dans la signalisation lipidique, en réponse à un stress biotique ou abiotique, chez les animaux comme chez les végétaux. Nous avons mis au point des méthodes spécifiques de dosage des oxylipides dans des échantillons biologiques d'origine humaine et phycologique (algues). Ces méthodes font appel à la spectrométrie de masse couplée à la chromatographie en phase gazeuse ou liquide (GC/MS/NCI et LC/MS). Ainsi, nous avons : -établi une méthode de dosage des EETs dans le sang humain par GC/MS/NCI. Ces métabolites époxydés de l'acide arachidonique (AA) par les cytochromes P450 ont des propriétés de vasorelaxation. -mis en évidence la production de 20-HETE, métabolite de l'AA, par le CYFP dans une lignée hépatomateuse humaine, HepaRG. -étudié la formation des énantiomères du 19,20-époxyde de l'acide docosahaénoïque (DHA) après incubation de cytochromes P450 recombinants humains avec du [14C]-DHA, ainsi que leur séparation sur colonne chirale. -identifié une signature oxylipidique de la réponse de l'algue brune Laminaria digitata au stress induit par le cuivre, révélant des voies de synthèse enzymatique et chimique ainsi qu'un nouveau composé : l'acide 18-hydroxy, 17-oxo-eicosatétranoïque. -mis en évidence l'émission d'aldéhydes polyinsaturés par les algues en réponse à un stress. Ces composés sont impliqués dans la communication interplante menant à une potentialisation des défenses face au stress biotique mimé par les oligoguluronates. Ces résultats devraient contribuer à une meilleure compréhension du rôle des oxylipides chez l'homme comme chez l'algueOxylipids/oxylipins, oxidized derivatives of polyunsaturated fatty acids, play a major role in lipid signalization, during biotic or abiotic stress, in both mammals ans in higher plants. We established specific methods for quantifying oxylipids in biological samples of human or phycologic (algae) origin. These methods are based on mass spectrometry coupled with gas or liquid chromatography (GC/MS/NCI and LC/MS). Thus, we have : -established a quantification method of EETs from human blood by GC/MS/NCI. These arachidonic acid (AA) metabolites by the action of cytochromes P450, have vasorelaxation properties. -highlighted the specific production of 20-HETE, an AA metabolite, by the CYP4F3B in a human hepatoma cell line, HepaRG. -studied the formation of docosahexaenoic acid (DHA) 19,20-epoxide enantiomers after incubation of recombinant human cytochromes P450 with [14C]-DHA and their separation on a chiral column. -identified an oxylipin signature of the response of the brown marine alga Laminaria digitata during abiotic stress, induced by copper, revealing enzymatic and chemical synthesis pathways. The presence of a new compound, the 18-hydroxy, 17-oxo-eicosatetraenoic acid has been described. -highlighted the polyinsaturated aldehyde emission in response to stress in this alga. These compounds are involved in distance signaling and inter-plant communication leading to a priming of defenses during a biotic stress mimicked by oligoguluronates. These results could allow a better comprehension of the oxylipid role in man as algae
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Poyer, Salomé. "Développement de méthodes d'analyse par spectrométrie de masse à mobilité ionique pour l'identification des analogues de saxitoxine". Rouen, 2015. http://www.theses.fr/2015ROUES053.
Abstract (sommario):
Ces travaux de thèse portent sur la séparation et l’identification de la saxitoxine et de ses analogues, composés neurotoxiques naturels. Des méthodes séparatives modernes telles que la chromatographie liquide à interactions hydrophiles (HILIC) et la spectrométrie de mobilité ionique (IMS) ont été couplées à la spectrométrie de masse (MS) pour réaliser l’analyse de ces toxines. Les couplages HILIC-MS et IMS-MS ont été développés, montrant une complémentarité dans la séparation des différents analogues. Le couplage des trois méthodes, HILIC-IMS-MS, a ensuite été mis au point et a permis la séparation rapide et non-ambiguë de chacun des analogues de saxitoxine. Le couplage HILIC-IMS-MS s’est également révélé être très répétable pour l’analyse de matrices biologiques complexes, bien que moins sensible que le couplage de la chromatographie HILIC avec un triple quadripôle utilisé en mode ciblé (MRM). L’approche IMS-MS a par ailleurs permis de déterminer les valeurs de sections efficaces de collision pour chaque analogue. Ces valeurs expérimentales ont été confrontées à des valeurs calculées correspondant à des structures théoriques obtenues par modélisation moléculaire. De bonnes corrélations ont été obtenues et ont permis d’accéder à des informations concernant la structure tridimensionnelle de ces toxines. La caractérisation structurale des analogues de saxitoxine a également été réalisée par spectrométrie de masse en tandem à partir notamment des espèces [M+H]+, [M+Li]+, [M+Na]+, [M+K]+ et [M−H]−. Une systématique de fragmentation, caractéristique de ce type de composés, a été mise en évidence. De plus, la nature des différents ions produits a permis de déterminer la stabilité des groupements fonctionnels en fonction du mode d’ionisation étudiéThis thesis work focused on the separation and identification of saxitoxin analogues, natural neurotoxic compounds. Modern separation techniques such as hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) and ion mobility spectrometry (IMS) coupled to mass spectrometry (MS) were developed for the analysis of saxitoxins. HILIC-MS and IMS-MS coupling were developed, showing a complementary for separation of the various saxitoxin analogues. HILIC-IMS-MS coupling was then optimized and allowed the fast separation of the toxin analogues. The HILIC-IMS-MS coupling was also repeatable when complex mixtures were injected, although it was less sensitive than with the coupling of HILIC with a triple quadrupole instrument operated in targeted mode. IMS application to saxitoxins also permitted to determinate the collision cross section values of each analogue. The calculation of theoretical structures permitted the determination of theoretical collision cross sections that were correlated to experimental values and allowed the access of gaseous phase conformation. Saxitoxin analogues characterization was carried out by tandem mass spectrometry of [M+H]+, [M+Li]+, [M+Na]+, [M+K]+ and [M−H]− species. The different product ions gave information about stability of chemical functions depending on the different species studied
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Werner, Erwan. "Analyse du métabolome par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse : application à la recherche de biomarqueurs indirects d’induction enzymatique". Thesis, Paris 11, 2011. http://www.theses.fr/2011PA114817/document.
Abstract (sommario):
Issue d’un partenariat de recherche entre le CEA et les laboratoires Servier, cette thèse avait pour objectif d’évaluer l’approche métabolomique par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS) pour l'identification de marqueurs indirects de l'induction dans les espèces de toxicologie. Le travail de thèse a débuté par l’optimisation de la méthode d’acquisition des empreintes métaboliques tant sur le plan analytique que dans le domaine du traitement des données brutes. Un outil reposant sur les matrices d’auto corrélation a alors été développé afin de s’affranchir d’une partie de la redondance du signal obtenu par spectrométrie de masse. Dans un troisième temps, les indices de Kendrick couplés à la sélectivité méthylène ont été appliqués à l’étude de composés biologiques en spectrométrie de masse haute résolution afin de proposer une méthode alternative de visualisation des données offrant une aide à l’identification des variables. Enfin, dans une dernière partie, les efforts se sont portés sur l’identification des composés endogènes modifiés au cours du protocole d’inductionThis work is the result of a research partnership between the CEA and Les laboratories Servier. It deals with the characterization of biomarkers of metabolic enzyme induction in rat biofluids using MSbased metabolomics. The first part of this work included methodological developments regarding theacquisition and the processing of metabolic fingerprints. A tool based on autocorrelation matrices wasthen implemented to reduce the redundancy of data generated with mass spectrometry and subsequently accelerate the isolation of discriminating variables. The next step consisted in the evaluation of the combined use of Kendrick mass defects and methylene selectivity as an alternative visualization tool for large data set, which would rely on compound chemical structures. Finally, the last part of the work was dedicated to the identification of discriminating signals raised up by ametabolomic global approach from rat biofluids collected before and after an induction assay
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Herviou, Pauline. "Personnalisation des posologies en oncologie selon le profil pharmacocinétique et pharmacogénétique, avec comme modèle l'irinotécan et le bevacizumab". Thesis, Clermont-Ferrand 1, 2016. http://www.theses.fr/2016CLF1MM04.
Abstract (sommario):
Dans la pratique courante, la posologie des anticancéreux est le plus souvent normalisée parrapport à la surface corporelle du patient (parfois son poids). Cependant, cette adaptation de dose neprend pas en compte la variabilité interindividuelle pharmacologique du médicament. Les facteursmodulant cette dernière sont nombreux, dont notamment les capacités individuelles de métabolisme etd’élimination. A dose égale, l’exposition systémique du patient peut donc varier, et entraîner un risquede surdosage pour certains patients, avec la survenue de toxicités, ou de sous-dosage pour d’autres,associée à une limitation de l’efficacité thérapeutique. Des alternatives à l’utilisation de la surfacecorporelle ont donc été proposées afin de prendre en compte de façon plus importante la variabilitéinterindividuelle des patients, tel que le suivi thérapeutique pharmacologique ou lapharmacogénétique. Les polymorphismes des gènes codants pour des enzymes impliquées dans lemétabolisme ou le transport des cytotoxiques peuvent modifier leur activité et donc influer sur lapharmacocinétique d’un médicament donné. Le développement des connaissances dans ces domainespourrait permettre la mise en place, de façon progressive, de nouvelles méthodes d’ajustement de laposologie.Ce projet de thèse porte sur l’individualisation de la posologie des anticancéreux ens’intéressant aussi bien aux chimiothérapies cytotoxiques, avec pour modèle l’irinotecan, qu’auxthérapies ciblées, en distinguant dans cette même classe les inhibiteurs de tyrosine kinase et lesanticorps monoclonaux (modèle du bévacizumab). Afin d’optimiser l’index thérapeutique de cestraitements, l’adaptation de la posologie a été abordée selon le profil pharmacogénétique maiségalement selon le profil pharmacocinétique.Une étude clinique a été mise en place afin d’évaluer, en terme de toxicité et d’efficacité,l’intérêt d’une adaptation de posologie de l’irinotécan dans le cadre d’une polychimiothérapie dans letraitement du cancer colorectal (FOLFIRI +/- bévacizumab ou cétuximab), en se basant sur unpolymorphisme génétique de l’UGT1A1, enzyme impliquée dans son métabolisme. Les résultats del’étude intermédiaire de cet essai de phase II, mené chez 16 patients, sont en faveur de la poursuite del’étude avec 12,5% de toxicités hématologiques de grade 4 et un taux de réponse objective de 58,3 %.L’objectif secondaire a été l’étude de la pharmacocinétique de l’irinotécan et de ses métabolites lorsd’une des cures de chimiothérapie. Ces dosages ont été réalisés par chromatographie liquide couplée àla spectrométrie de masse. Cette technique, largement utilisée pour la quantification plasmatique desmédicaments, a été développée et validée selon les normes en vigueur. Le dosage du bévacizumab, unanticorps monoclonal associé au FOLFIRI dans le traitement du cancer colorectal, a lui aussi étédéveloppé par cette technique et a fait l’objet d’un travail de mise au point avec l’identification despeptides spécifiques, ainsi que l’optimisation des étapes de prétraitement de l’échantillon et de latechnique analytique.En parallèle, la mise en place du dosage des inhibiteurs de tyrosine kinase par spectrométrie demasse, ainsi que sa validation, ont fait partie de ce travail de thèse, et autorisent son utilisation enroutine hospitalière dans le cadre du suivi thérapeutique pharmacologique.Mots-clés : suivi thérapeutique pharmacologique, pharmacogénétique, irinotécan, chromatographieUsually, the dosage of anticancer is normalized with used to the patient's body surface area(sometimes its weight). However, this adaptation does not take into account the interindividualpharmacological variability in the pharmacokinetics of the drug. Factors modulating thispharmacokinetics are numerous, including interindividual capacities of metabolism and elimination.At the same dosage, the systemic exposure of the patient can thus be changed, and cause a risk ofoverdosing for some patients, with the development of toxicities, or under dosing for others, withlimiting the therapeutic efficacy. Alternatives to the use of the body surface area have been proposedin order to more take account of inter-individual variability of patients, such as therapeutic drugmonitoring or pharmacogenetics. Genetic polymorphisms of enzymes involved in the metabolism ortransport of a cytotoxic, can change and modify their activity, and impact on drug’s metabolism. Thedevelopment of knowledge in these areas could allow the establishment of new methods to dosage’sadjustment.This PhD project focuses on individualizing dosage of anticancer focusing in both cytotoxicchemotherapies with the model of irinotecan, as targeted therapies, distinguishing in this same classtyrosine kinase inhibitors and monoclonal antibodies (bevacizumab model). To optimize thetherapeutic index of these therapies, the dose adjustment was according to pharmacogenetics profile,but also according to the pharmacokinetics profile.A clinical study was developed to studying, in terms of toxicity and efficacy, the interest ofadapting dosage of irinotecan in combination of chemotherapy to traitement of metastatic colorectalcancer (FOLFIRI +/- bevacizumab or cetuximab), based on a genetic polymorphism of UGT1A1, anenzyme involved in its metabolism. Results of the interim study of this phase II trial, conducted in 16patients, are in favor of study continuation with 12.5% grade 4 hematological toxicities, and objectiveresponse rate of 58.3%. The secondary objective was to study the pharmacokinetics of irinotecan andits metabolites during one cycle. These assays were performed by liquid chromatography-massspectrometry. This technique, widely used for quantification of drug in plasma was developed andvalidated according to standards. The dosage of bevacizumab, a monoclonal antibody used tocolorectal cancer treatment (associated to FOLFIRI) was also developed by this technique, withspecific peptide identification, and optimization of sample preparation and analytical technique.In parallel, the implementation of the determination of tyrosine kinase inhibitors by massspectrometry and its validation were part of this PhD project, and allow its use in hospital routine intherapeutic drug monitoring
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Larose, Jessica. "Analyse des isomères de F2-isoprostanes par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse dans la circulation maternelle en fin de grossesse". Master's thesis, Université Laval, 2013. http://hdl.handle.net/20.500.11794/25559.
Abstract (sommario):
Tableau d’honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2013-2014.Un stress oxydatif survient lorsqu’il y a surproduction de dérivés actifs de l’oxygène par rapport aux défenses antioxydantes. Ce déséquilibre est associé, entre autres, à la prééclampsie, une pathologie de la grossesse. Les F2-isoprostanes regroupent soixante-quatre isomères issus de la peroxydation de l’acide arachidonique. Ceux-ci sont reconnus comme étant les biomarqueurs les plus fiables du stress oxydatif in vivo. Une méthode d’analyse par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem pour le dosage de sept isomères de F2-isoprostanes dans des échantillons de plasma, de sang et de membranes érythrocytaires a été mise au point et validée. Les F2-isoprostanes dans le plasma ont été corrélés positivement avec plusieurs acides gras trans plasmatiques au troisième trimestre de la grossesse. Contre toute attente, les F2-isoprostanes du plasma, du sang et des membranes érythrocytaires sont moins abondants en prééclampsie par rapport aux contrôles en fin de grossesse.
An oxidative stress is defined as an imbalance between the production of reactive oxygen species and antioxidant defenses of the organism. This imbalance has been associated with preeclampsia, a pathology of the mid-to-late pregnancy. Peroxidation of arachidonic acid generates sixty-four isomers of F2-isoprostanes. The latter are recognized as the most reliable biomarkers of oxidative stress in vivo. A method using liquid chromatography tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) for the determination of seven isomers of F2-isoprostanes in plasma samples, whole blood and erythrocyte membranes has been developed and validated. The F2-isoprostanes correlated positively with several trans fatty acids in plasma at end of the pregnancy. Unexpectedly, F2-isoprostanes were less abundant in preeclampsia than in control pregnancies at the third trimester.
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Roy, Sandrine. "Analyse des bio-marqueurs de la maladie de Fabry par techniques séparatives couplées et spectrométrie de masse". Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114841.
Abstract (sommario):
La maladie de Fabry est une maladie orpheline de transmission récessive qui se caratérise par l'accumulation des certains glycosphingolipides (GSls) (le digalactosylcéramide, Ga2, et le globotriaosylcéramide, Gb3) suite à la mutation du gène codant pour l'α-galactosidase A. Différentes techniques ont été développées pour analyser les classes lipides et les espèces moléculaires de chaque classe. Tout d'abord, les principaux GSLs ont été séparés. Une technique de CLHP couplée à un detecteur évaporatif à diffusion de la lumière a permis de détecter le Gb3 contenu dans des sédiments urinaires de patients. Puis, nous avons analysés les différentes espèces moléculaires du Gb3 et du Ga2 dans des sédiments urinaires par spectrométrie de masse en tandem (MALDI Q-TOF et CHLP APPI MS-MS). Environ vingt espèces moléculaires ont été identifiées pour leGb3 et le Ga2. Enfin, ces lipides ont été analysés directement sur la surface de coupes de tissus. Des approches d'imagerie par spectrométrie de masse, comme le MALDI-TOF et TOF-SIMS ont été utilisées pour localiser ces GSLs sur des coupes de peau et de rein de patients atteints de la maladie de FabryFabry disease in an X-linked inborn error of neutral glycosphingolipids (GSLs) metabolism, caused by a deficiency of the lysomal α-galactosidase A, wich results in high levels of globotriaosylceramide (Gb3) and galabiosylceramide (Ga2). Different techniques are developed to analyse lipid classes and molecular species in each lipid class. First, we optimised the separation of four major neutral GSLs. An HPLC separation combined with evaporative light-scattering detection allowed the detection of urinary globotriaosylceramide in urinary sediments of patients. Second, we analysed the different molecular species of Gb3 and Ga2 in urinary sediments with tandem mass spectrometry (MALDI Q-TOF and HPLC APPI MS-MS). About twenty molecular species are identified for Gaé and Gb3. Third, these lipids were analysed directly on the surface of tissue sections. MALDI-TOF ond cluster-TOF-SIMS imaging approaches were used to obtain the localization of GSLs on skin and kidney sections of patients affected by the Fabry disease
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Gervais, Gaël. "Rôle des paramètres opératoires sur la fiabilité d’une analyse multi-résidus de micropolluants dans l’eau : extraction sur phase solide, séparation par chromatographie liquide à très haute pression et détection par spectrométrie de masse en tandem". Rennes 1, 2010. http://www.theses.fr/2010REN1S057.
Abstract (sommario):
La présence de micropolluants est un aspect majeur pour évaluer la qualité des eaux. Depuis quelques années les méthodes analytiques combinant l’extraction sur phase solide et la séparation par chromatographie liquide couplée à la détection par spectrométrie de masse en tandem se sont imposées pour mesurer une large gamme de micropolluants. A partir d’un exemple d’analyse multi-résidus de pesticides et de composés perturbateurs endocriniens dans les eaux, il a été recherché l’influence des différents paramètres de l’extraction, de la séparation, de la détection et du retraitement des données sur la qualité de l’analyse (répétabilité, fiabilité, stabilité, reproductibilité…). Chacune des étapes de la méthode d’analyse ont été optimisées et tous les paramètres qui influencent le signal des substances détectées avec ce type d’appareillage ont été discutés. Une réflexion globale sur l’origine des variations des signaux observées et sur la pertinence des solutions qui peuvent être apportées a été menée. Des exemples d’applications en milieu réel et en analyse inter-laboratoire des protocoles développés pour la mesure des pesticides valideront les solutions adoptées. Les clés et les outils permettant de maîtriser les résultats d’analyse des micropolluants dans l’eau par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse sont ainsi présentés dans ce travailThe occurrence of micropollutants is a major aspect in water quality assessment. For the last few years, analytical methods combining solid-phase extraction, liquid chromatography and tandem mass spectrometry has become the main technique for the analysis of a broad range of micropollutants. On the basis of some pesticides and endocrine disruptor compounds in water analysis, impacts of the parameters: extraction, separation, detection and data processing, on the analysis reliability (repeatability, accuracy, stability, reproducibility…) have been studied. Each step of the analytical method has been optimized and the parameters, affecting substance signals have been discussed. A global reflection upon the cause of signal variations and the possible answers to apply has been conducted. Proposed answers were validated by real matrix analysis and inter-laboratory studies. This work presents the tools and the key-points to ensure the results obtained by liquid chromatography/tandem mass spectrometry analysis
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Oursel, Delphine. "Influence de l’expression de l’ATP synthétase sur la composition lipidique des membranes bactériennes chez Escherichia coli : Identification et quantification relative des phospholipides et acides gras constitutifs par spectrométrie de masse". Rouen, 2008. http://www.theses.fr/2008ROUES062.
Abstract (sommario):
Depuis quelques années, la recherche de préférences lipidiques de protéines et/ou d’enzymes membranaires suscite un intérêt grandissant, ces phénomènes d’affinité étant susceptibles d’induire la formation de domaines lipidiques dans les membranes biologiques. C’est pourquoi, nous avons cherché à savoir si l’ATP-synthétase, protéine membranaire, était capable d’induire des domaines lipidiques dans un modèle cellulaire, la bactérie d’E. Coli. Ainsi, l’influence de l’expression de cette protéine a été évaluée au moyen de 4 souches bactériennes; la souche sauvage ainsi que 3 souches génétiquement modifiées présentant des taux variables d’enzyme. La méthodologie analytique développée fait appel à diverses techniques de MS. Les couplages LC-MS et GC-MS sont mis à profit pour l’analyse des phospholipides et des acides gras constitutifs. Cette approche a permis d’identifier l’ensemble des phospholipides, de déterminer la structure fine des acides gras les constituants ainsi que de localiser chaque acideFor years, investigations of growing interest deal with the potential lipids preference of membrane proteins and/or enzymes, these affinity phenomenons are supposed to induce the formation of lipids domains also called lipids rafts inside biological membranes. This thesis focused on the ability of ATP-synthetase, a membrane protein, to induce lipids domains in a cellular model, the E. Coli bacteria. Hence, 4 bacterial strains were studied to evaluate the influence of protein expression, a wild type and three genetically modified strains with variable enzyme rates. Analytical methodologies were developed for this purpose and involved various MS techniques. Then, LC-MS and GC-MS techniques were used for the analysis of phospholipids and constitutive fatty acids, respectively. This approach provided the identification of all the phospholipids. Moreover, the structure of the constitutive fatty acids and their location on the glycerol backbone were determined
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Dadi, Hala. "Analyse par spectrométrie de masse des tubulines et de l'hormone de croissance". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS582.
Abstract (sommario):
Les tubulines sont des protéines impliquées dans des processus biologiques essentiels à la vie cellulaire. Elles sont polymodifiées en leurs extrémités C-terminales. Différentes techniques ont été utilisées pour caractériser les polymodifications des tubulines. Mais certaines difficultés persistent concernant l’indentification fine de plusieurs structures. Le couplage de spectrométrie de masse à la mobilité ionique représente une avancée technique plus pertinente pour la séparation d’isomères de structures. En effet, la mobilité ionique peut séparer des ions de même rapport m/z en fonction de leur conformation. Dans la première partie de cette thèse, une analyse par mobilité ionique et spectrométrie de masse en tandem a permis la séparation de deux peptides de synthèse mimant des peptides C-terminaux de tubuline α diglycylés. L’hormone de croissance (GH) est une hormone anabolique et un agent dopant pour les sportifs. La disponibilité de la hGH recombinante (rhGH) dans le marché noir a augmenté la fréquence du dopage à la GH. Les tests antidopage approuvés par l’agence mondiale d’antidopage sont confrontés à certaines limites. Dans la deuxième partie de ma thèse, des analyses comparatives de la hGH naturelle et la rhGH ont été réalisées par spectrométrie de masse couplée à la chromatographie liquide en phase inverse pour trouver une différence chimique entre la hGH naturelle et la rhGH. La hGH naturelle extraite des glandes pituitaires de cadavres est glycosylée alors que la rhGH n’est pas modifiée. De manière intéressante, cette glycosylation se trouve sur un peptide protéospécifique de la hGH. Ce travail ouvre une piste pour le développement d’une nouvelle méthodologie pour les tests anti-dopage à la GHThe tubulins are proteins involved in cellular processes that are essential for cell life. The tubulins are polymodified at their C-terminal extremities. Different techniques have been used to characterize the polymodifications of tubulins. However, some challenges remain in the fine identification of some structures. In fact, mass spectrometry ion mobility can separate ions of the same m/z ratio depending on their conformations. In the first part of this thesis, an ion mobility mass spectrometry analysis allowed the separation of two synthetic peptides that mimic the structure of C-terminal peptides of biglycylated α-tubulins. In order to extrapolate this type of experiment to the C-terminal peptides purified from biological tubulins, we employed an analytical process to analyze these peptides from purified brain tubulins. Growth hormone (GH) is an anabolic hormone and a doping agent used by athletes. The availability of rhGH in the black-market has continuously increased because of doping in sports. The natural and the biosynthetic hGH have identical peptidic sequences. So far, the valid hGH anti-doping tests by the world antidoping agency are based on immunological recognition. However, Immunoassays have their own limitations. Therefore, the next generation analysis of GH has to be more specific and accurate. In the second part of this thesis, mass spectrometry coupled to reversed phase chromatography was used to find chemical differences between the pituitary hGH and the rhGH. The pituitary extracted hGH is glycosylated whereas the biotech product is sugar free. The present work represents an opening towards a novel methodology for a novel hGH anti-doping test
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Valette, Gilles. "Biotransformation et détermination du caractère lipophile de pronucléotides à visée antivirale : étude par chromatographie liquide hautes performances (C.L.H.P.) et couplage C.L.H.P./spectrométrie de masse". Montpellier 2, 1998. http://www.theses.fr/1998MON20027.
Abstract (sommario):
Le manuscrit comporte six chapitres, une partie experimentale et des annexes qui comprennent les tires a part de 3 articles. L'introduction et le chapitre 1 situent le contexte de l'etude dans un essai de rationalisation de la conception d'antiviraux. Le chapitre 2 relate une compilation de donnees de la litterature relatives aux enzymes susceptibles de catalyser la biotransformation de pronucleotides. Le chapitre 3 decrit les outils d'analyse concus pour etudier ces biotransformations (couplage hplc/masse) ainsi que les outils mathematiques permettant de determiner les parametres cinetiques. Les trois chapitres suivants rapportent les resultats des etudes effectuees : comparaison de deux types de groupements protecteurs, influence de l'enantiomerie du nucleoside, identification de metabolites inconnus, parametres utiles au choix d'un animal pour experimentation in vivo ; comparaison de l'activite de phosphodiesterases selon leur provenance ; determination du coefficient de partage octanol-eau et de la solubilite aqueuse. Une discussion ouvre des perspectives pour ameliorer la conception de nouveaux medicaments antiviraux.
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Chirita, Raluca-Ioana. "Développement de nouvelles méthodes séparatives compatibles avec une détection par spectrométrie de masse et par électrochimie pour l'analyse de traces de catécholamines et molécules apparentées". Thesis, Orléans, 2009. http://www.theses.fr/2009ORLE2043/document.
Abstract (sommario):
Les catécholamines et les indolamines font partie de la famille des neurotransmetteurs. Un déséquilibre dans leur concentration peut être associé à différentes maladies telles les maladies de Parkinson et Alzheimer, la dépression ou la schizophrénie. C’est pourquoi le développement de méthodes de dosage spécifiques et très sensibles du fait de leurs très faibles teneurs dans les fluides biologiques est nécessaire. Dans un premier temps nous avons développé une méthode chromatographique en appariement d’ions (IP-LC) utilisant des colonnes C18 de nouvelle génération (monolithique et « fused core ») et l’acide nonafluoropentanoïque, comme agent d’appariement d’ions volatil. Cette méthode est compatible avec une détection SM en mode d’ionisation positive. Dans un deuxième temps, différents systèmes en mode HILIC ont été évalués. Le choix raisonné de la phase stationnaire offrant la meilleure séparation du mélange de catécholamines a pu être réalisé après avoir testé l’influence sur la séparation des différents groupements fonctionnels disponibles : groupement soit neutre (greffage diol, amide, ou cyano), soit positivement chargé (greffage amino ou triazole) soit négativement chargé (silice vierge avec particules totalement poreuses ou partiellement poreuses « fused core ») ou zwitterionique (greffage sulfobetaïne). La méthode HILIC présente l’avantage d’être compatible aussi bien avec une détection SM en mode d’ionisation positive que négative. Les deux méthodes (IP-LC et HILIC) ont été comparées en termes de résolution, efficacité et limites de détection (LOD), linéarité et répétabilité. Les LODs obtenues sont comprises entre 1 et 100 ng.mL-1. Pour pouvoir doser des teneurs plus faibles, une méthode de pré-concentration de l’échantillon a été développée en associant 2 supports différents (Oasis HLB et PGC). La méthode optimisée SPE-CPL-MS/MS a été enfin appliquée à un extrait de cerveau de moutonAs neurotransmitters, catecholamines play an important role in the control and regulation of numerous brain functions. They are also believed to be implicated in different neurodegenerative disorders. First an ion pairing chromatography method using nonafluoropentanoic acid as volatile ion paring agent was developed on the new generation of C18 columns (monolith and fused core). This method is compatible with MS detection in positive ionization mode. Secondly an HILIC method was optimized using different commercially available HILIC supports, they can be classified as follows: neutral (diol, amide, and cyano bounded), positively charged (amino, triazole bounded), negatively charged (bare silica as wholly porous particles or fused core particles columns) and zwitterionic (sulfobetaine bounded). Our studies lead us to a better understanding of the HILIC retention mechanism and also to the selection of the most appropriated column for catecholamine analysis. Only the HILIC system was compatible with both positive and negative ionization modes. The two chromatographic systems were then compared in terms of resolution, efficiency, detection and quantification limits (LOD/LOQ), calibration linearity and repeatability. The LODs obtained were in the range of 1-100 ng.mL-1. A simple pre-concentration method using Oasis HLB and PGC solid phase extraction cartridges has been optimized in order to enhance the LODs. Finally the optimized SPE-LC-MS/MS method has been applied to the identification of these compounds present in brain extracts
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Hazotte, Aurélie. "La micro chromatographie liquide à haute température pour l'analyse rapide et hautement discriminante des lipides d'intérêt biologique". Paris 11, 2007. http://www.theses.fr/2007PA114818.
Abstract (sommario):
La complexité structurale des lipides et leur absence de chromophores rendent difficiles leur séparation et leur détection en chromatographie liquide. L’objectif de cette thèse est le développement d’une technique d’analyse qui soit à la fois discriminante, sensible, rapide et efficace. La micro chromatographie liquide à haute température (µHTLC) couplée à un détecteur évaporatif à diffusion de la lumière (DEDL) adapté aux micros débits, a été mise en place sur carbone graphite poreux (PGC). Une étude cinétique a mis en évidence le réel gain d’efficacité obtenu en µHTLC à des températures d’analyses et des débits élevés. Cette technique permet de diminuer fortement les temps d’analyses et d’améliorer la forme des pics d’élution. Une échelle de force éluante a été établie en se basant sur l’étude de la sélectivité méthylène sur PGC : l’augmentation de la température modifie la force éluante des solvants organiques, permettant ainsi l’utilisation de solvants alcools, moins toxiques que ceux classiquement utilisés dans l’analyse des lipides. Une application a été réalisée sur des mélanges lipidiques complexes pour illustrer le potentiel de la µHTLC et du PGC dans la séparation de ces espèces moléculaires. D’autre part, la µHTLC a été couplée au DEDL, à la spectrométrie de masse et au détecteur à aérosol chargé (CAD), afin de positionner ce dernier en terme de performances par rapport aux deux autres et d’étudier les effets de la µHTLC sur la réponse des détecteurs. Enfin, concernant la modulation de la sélectivité par la température, une étude a été réalisée sur l’analyse des triglycérides en mode isotherme et gradient de températureThe structural complexity of lipids and their lack of chromophores make their separation and their detection difficult in liquid chromatography. The aim of this thesis is the development of an analysis technique which is at the same time discriminating, sensitive, fast and efficient. The micro high-temperature liquid chromatography (µHTLC) coupled with an evaporative light scattering detector (ELSD) adapted to micro flow rates, was implemented on porous graphitized carbon (PGC). A kinetic study has highlighted the real enhancement of efficiency obtained in µHTLC at elevated temperatures and flow rates. This technique allows to strongly decrease analysis times and to improve peaks shape. A scale of eluotropic strength was established on the basis of methylene selectivity on PGC: increasing emperatures modify the eluotropic strength of organic solvents which allows the use of alcohols solvents, less toxic that those classically used in lipids analysis. An application was realized on complex mixtures of lipids to illustrate the potential of the µHTLC and PGC in separation of these molecular species. In addition, µHTLC was coupled with DEDL, mass spectrometer and aerosol charged detector (CAD), in order to position this latter in term of performance compared to the two others detectors and to study effects of µHTLC on detectors response. Finally, concerning the modulation of the selectivity by temperature, a study was realized based on analysis of triacylglycerols in isotherm and temperature gradient mode
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Sommerer, Nicolas. "Isolement et identification de petits peptides présents dans l'extrait hydrosoluble sapide de fromage de chèvre et de jambon cuit par chromatographie en phase liquide et spectrométrie de masse". Dijon, 1997. http://www.theses.fr/1997DIJOS070.
Abstract (sommario):
Les fractions hydrosolubles de fromage de chèvre et de jambon cuit, contenant les peptides de moins de 1000 g/mol, les acides aminés libres et les sels, ont une flaveur importante, proche de celle des aliments initiaux. L'objectif de cette étude était de développer une stratégie de purification et d'identification structurale de petits peptides supposes importants, au vu des données bibliographiques, pour la flaveur globale des aliments. La séparation effectuée sur le fromage de chèvre a nécessité plusieurs étapes. La fraction aqueuse est extraite par broyage et centrifugation puis est ultrafiltrée afin d'éliminer les composés de masse supérieure a 1000 g/mol. Cette fraction est alors soumise à une étape de purification par chromatographie d'exclusion stérique puis d'échange d'anions avant d'être finalement séparée par chromatographie sur phase inversée (C18). Ces étapes ont été mises au point à l'échelle analytique puis adaptées a l'échelle préparative. Plusieurs méthodes combinées de spectrométrie de masse (électrospray, lsims, spectrométrie de masse en tandem après collisions à hautes énergies, avant et après méthylation des fonctions acides libres) ont permis de déterminer la séquence de 28 peptides naturellement présents dans le fromage de chèvre. Ces peptides, a une exception près, n'ont pas été décrits dans la littérature et ne proviennent pas de l'hydrolyse des caséines par une seule enzyme, mais sont d'une origine plus complexe. Du fait de leur petite taille (3 a 8 acides aminés) et de leur faible hydrophobicité, 17 peptides sont prédits non-amers. La méthode a ensuite été étendue, pour validation, au jambon cuit. Les résultats ont montré une moins grande diversité de peptides qui sont aussi plus polaires et de plus petite taille. La dernière partie de ce travail a concerné la nanofiltration, une technique de filtration sur membrane qui présente l'avantage de fractionner les petites molécules dans l'eau, avantage indéniable pour une analyse sensorielle ultérieure. Cette méthode a permis de séparer les peptides des acides aminés et des sels. Une analyse sensorielle, après incorporation de ces 3 différents composés dans une base fromagère, n'a pas permis de mettre en évidence un rôle particulier de la fraction peptidique dans la flaveur du produit.
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Tachon, Romain. "Apport de la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse pour l'analyse de traces d'explosifs : optimisation des conditions d'extraction et de purification pour le traitement d'échantillons récupérés sur une scène d'attentat". Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066669.
Abstract (sommario):
Les investigations menées après attentat par les services de police technique et scientifique ont pour but d’identifier la nature de la charge explosive employée mais la tâche peut se révéler particulièrement difficile d’un point de vue analytique. En effet, les résidus de charge explosive sont le plus souvent présents à l’état de traces dans des matrices variées et difficiles à traiter d’où la nécessité de disposer de protocoles analytiques performants. Ces travaux ont tout d’abord consisté à développer une méthode d’analyse basée sur le couplage entre chromatographie en phase liquide et spectrométrie de masse. L’utilisation d’un support de séparation en carbone graphite poreux et l’optimisation du couplage a rendu possible l’analyse simultanée des explosifs organiques les plus couramment rencontrés. Les effets de matrice sur les performances de la méthode ont ensuite été évalués puis éliminés en partie avec la mise en place d’une procédure de purification de l’échantillon par extraction sur phase solide. Enfin, un protocole général de traitement de l’échantillon incluant les étapes d’extraction, de purification et de concentration a été proposé puis validé avec l’analyse d’échantillons réels obtenus lors de simulations d’attentats avec engins explosifs improvisés
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Chaimbault, Patrick. "Analyse d'Acides Aminés non dérivés par Chromatographie en Phase Liquide avec le Détecteur Evaporatif à Diffusion de la Lumière et Couplage avec la Spectrométrie de Masse". Phd thesis, Université d'Orléans, 2000. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00152167.
Abstract (sommario):
Les acides aminés forment une des plus importantes classes de molécules naturelles. Ils sont impliqués dans de nombreux processus biologiques dont le plus important est sans doute l'élaboration des peptides et protéines. Ils sont pour la plupart dépourvus de groupements chromophores, aussi, la majorité des méthodes chromatographiques proposées pour leur détermination en mélanges implique une dérivation pré- ou post colonne permettant alors une détection spectrophotométrique.Pour éviter l'étape de dérivation, la Chromatographie en Phase Liquide (CPL) est ici associée au Détecteur Evaporatif à Diffusion de la Lumière (DEDL) ou couplée à la Spectrométrie de Masse (SM). Ces deux modes de détection sont quasi universels mais requièrent la mise au point de phases mobiles volatiles.
Parmi les systèmes CPL testés pour l'analyse directe des acides aminés, le carbone graphitique poreux a été retenu et évalué comme phase stationnaire. Une phase mobile aqueuse saline, volatile, composée d'acétate d'ammonium, ajustée à pH=9,3, permet notamment la séparation d'acides aminés soufrés analogues de la taurine et la séparation partielle d'acides aminés protéiques. En revanche, la séparation totale des 20 acides aminés protéiques est obtenue avec une phase mobile contenant un acide carboxylique perfluoré (acide nonafluoropentanoique) comme agent d'appariement d'ions volatil, en gradient d'élution, à 10°C, en une quarantaine de minutes.
Les systèmes CPL mis au point avec le DEDL sont directement compatibles avec la SM. En utilisant la spécificité de détection de la SM et la SM tandem, l'analyse des acides aminés protéiques est possible en 20 minutes. Si le DEDL ne permet pas de descendre à des concentrations détectées inférieures au mg/l, la SM tandem autorise des limites de détection avoisinant quelques dizaines de µg/l seulement. La CPL-SM tandem a permis le dosage direct d'acides aminés soufrés dans des invertébrés marins.
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Caumette, Guilhem. "Analyse de spéciation des métaux dans les produits lourds du pétrole par couplage LC-ICP MS (Chromatographie liquide – Spectromètre de masse à plasma induit)". Pau, 2009. http://www.theses.fr/2009PAUU3029.
Abstract (sommario):
L’exploitation des pétroles lourds, devenue populaire en raison des pénuries en réserves d’énergie, est rendue difficile par la présence de métaux lourds comme le nickel ou le vanadium, qui affectent les procédés de raffinage. L’objectif de cette thèse était de développer de nouvelles méthodes analytiques afin d’étudier la distribution de ces métaux dans le pétrole et ses fractions. Les principaux développements sont : (i) une méthode sensible permettant l’analyse directe de matrices organiques en ICP MS (ii) un couplage ente la chromatographie liquide à perméation de gel avec l’ICP MS, et (iii) un couplage ente la chromatographie de phase normale et l’ICP MS qui permet l’analyse 2D perméation de gel – phase normale de la distribution des métaux dans des fractions pétrolières par ICP MS. Les méthodes développées ont été appliquées pour l’analyse de plusieurs pétroles et de leurs fractionsThe use of heavy petroleum, increasingly popular because of the shortage of energy supplies, is hampered by the presence of heavy metals, such as nickel and vanadium, which negatively affect refining processes. The objective of the thesis was to develop novel analytical methods able to study the metal distribution in petroleum, its fractions and related products. The principal developments include: (i) a high-throughput sensitive method for the analysis of organic matrices based on flow-injection total consumption micronebulisation ICP MS; (ii) a coupling of gel-permeation LC with ICP MS; and (iii) a coupling of normal phase LC – ICP MS allowing the 2D gel-permeation – normal phase characterization of the metal distribution by ICP MS. The methods developed were applied to the analysis of a number of crude oils and their fractions