Thèses sur le sujet « Tumori colon retto »

The main aim of this work is to explore the relationship between survival to tumors and individual socio-economic characteristics and the Census tract where the considered persons reside. Cancer is, in fact, a chronic disease whose clinical history has a strong relationship with the socio-economic factors, in particular as regards access to medical care and the chance of a timely diagnosis, i.e. the factors that mainly influence the therapeutic results. The considered data are referred to the patients resident in the Umbria region. Women with breast cancer diagnosed in the period 1/1/2001-31/12/2010 (8,317 cases) and individuals of both genders with colorectal cancer diagnosed in the same period (12,087 cases) were considered. The follow-up of cases stopped to 31/12/2012, the most recent available data. We have chosen to study these tumors, because they are the most widespread in the Italian population and the literature has shown how the socio-economic characteristics of the patients affected by these cancers are associated with significant differences in their survival. For all patients we collected: data coming from the Umbrian Cancer Registry (CR) about variables that describe age, gender, status in life, diagnosis, tumor characteristics and treatment; individual socio-economic information about marital status, educational level and employment status, provided by every Umbrian municipality Registry; the variables that describe the socio-economic characteristics of the Census tract where every considered patient used to live (Census of Population and Housing 2001), made available by the Regional Statistics Office. The Umbria region was chosen for the high quality of the data that the regional information system can make available, in particular as regards the local CR, thanks to the strong operational integration that exists between the different data sources. The datasets for the considered diseases have been built by deterministic record linkage, which put in connection information from the CR with those from the municipal Registry Offices and the Census. It was possible to automatically link the data of 8,209 women with breast cancer (98.7% of the total) and 11,749 cancer patients of colorectal cancer (97.2% of the total). Manual procedures for the identification and correction of errors allowed to recover also the unrelated cases, reaching 100%. A multilevel mixed effects parametric survival model, which allowed to use all the individual and area variables as responsible for the fixed effects and the Census tract of residence as responsible for the random effects, was used for survival analysis. In addition to the effects generated by the medical variables, the results showed that marital status at the individual level will help to change the survival, with better chances of overcoming the disease for married than unmarried or widowed. This is obviously an indirect effect, which expresses the need for social and family support, also occurring at the area level for breast cancer, where the structural dependency index decrease the chances of survival. For colorectal cancer, however, the relevant area-wide variable is the ageing index. The results seem to confirm what was found by recent national and international studies, which attached to the social and family capital a particularly significant role in having an early diagnosis, properly following the care and thus improving the chances of surviving to cancer. It is, however, reduced the role of the socio-economic characteristics that traditionally are associated with health inequalities, i.e. the education level and the professional status.

Il cancro del colon-retto è una delle neoplasie più frequenti, ad alto tasso di mortalità, causato dall’interazione di fattori genetici e ambientali. Parallelamente al modello stocastico, secondo il quale tutte le cellule tumorali (CT) hanno una stessa probabilità di rigenerare un tumore, sta prendendo piede il modello che vede solamente in un piccolissimo sottogruppo di cellule staminali tumorali (CST) la capacità di dar luogo e sostenere la crescita tumorale. Dalla letteratura si evince come le CST mostrino deregolazioni a carico di geni implicati in: chemio-resistenza, transizione epitelio-mesenchimale (EMT), auto-rinnovamento incontrollato, processi peculiari delle CST, che favoriscono l’insorgenza di un fenotipo tumorale. Lo scopo del progetto di Dottorato è stato quello di isolare e caratterizzare le CST sia da linee cellulari tumorali che da biopsie di tumore al colon-retto, per identificare marcatori tumorali utili a delineare le fasi di progressione del tumore e di individuare potenziali bersagli terapeutici. Inoltre, ho sottoposto le CT e le CST di una linea di adenocarcinoma del colon-retto (HCA7), a trattamento con l’estratto naturale di T. cordifolia, pianta utilizzata della medicina Ayurvedica, ed uno dei suoi principi attivi, la berberina, allo scopo di verificarne l'efficacia antitumorale. Ho osservato importanti deregolazioni nelle popolazioni cellulari trattate, a carico di diversi geni coinvolti principalmente nella EMT, nella regolazione del ciclo cellulare e della apoptosi e nel favorire un fenotipo chemio-resistente. I livelli di espressione di questi geni sono risultati essere significativamente sotto-espressi, sia nelle CT trattate che nelle CST trattate. I risultati che ho ottenuto depongono a favore di un potenziale ruolo attivo della sostanza naturale sottoposta ad indagine, nel contrastare molti di quei processi fondamentali per lo sviluppo di un fenotipo tumorale. Inoltre, i miei dati avvallano anche l’ipotesi che vede le CST come potenziali bersagli terapeutici, per ottenere un effetto mirato su questa popolazione cellulare tumorale.
Colorectal cancer is one of the most frequent cancer, with a high mortality rate, caused by the interaction of genetic and environmental factors. Parallel to the stochastic model, according to which all tumor cells (CT) have the same probability of regenerating a tumor, there is a new model that look in a very small subset of cancer stem cells (CST) the responsible of tumor growth. In the literature, CSTs shows important deregulations on genes implicated in: chemo-resistance, epithelial-mesenchymal transition (EMT), uncontrolled self-renewal, peculiar processes of this small subpopulation, which favor the onset of a tumor phenotype . The aim of my PhD project was to isolate and characterize CSTs both from tumor cell lines and from colorectal cancer biopsies, in order to identify tumor markers useful for delineating the phases of tumor progression and identifying potential therapeutic targets. In addition, I treated the CT and CST of a line of colorectal adenocarcinoma (HCA7) with the natural extract of T. cordifolia, a plant used in Ayurvedic medicine, and one of its active ingredients, berberine, in order to verify its antitumor efficacy. I observed important deregulations in treated cell populations, dependent on several genes involved mainly in EMT, in cell cycle regulation and apoptosis, but also in promoting a chemo-resistant phenotype. The expression levels of these genes were found to be significantly under-expressed, both in the treated CTs and in the treated CSTs. The results I have obtained are in favor of a potential active role of the investigated natural substance, in countering many of those fundamental processes for the development of a tumor phenotype. Furthermore, my data also support the hypothesis that CSTs are potential therapeutic targets for the purpose of achieving a targeted effect on this cell tumor population.

El documento digital no refiere asesor
Determina los factores intraoperatorios y postoperatorios, que están asociados en la mayor sobrevida, en 20 pacientes intervenidos de metástasis Hepática de cáncer colorrectal, en el hospital Edgardo Rebagliati Martins con especial énfasis en los factores postoperatorios, que podrían informar acerca de la agresividad del tumor y de la eficacia curativa de la cirugía realizada. Se realizaó un estudio retrospectivo en 20 pacientes intervenidos de MHCCR entre Enero del 2002 y Diciembre de 2009, en el que analizamos factores de supervivencia preoperatorios, intraoperatorios y postoperatorios. El seguimiento fue de 55 ± 3 (intervalo, 12-124) meses. La mortalidad postoperatoria fue del 5% y la morbilidad, del 10%. Entre los factores preoperatorios analizados, la edad > 65 años y el tamaño de la metástasis > 5 cm fueron factores de mal pronóstico independientes, mientras que dos factores significativos de mal pronóstico fueron obtenidos del análisis postoperatorio: microsatelitosis y cifras postoperatorias de CEA > 5 ng/ml (al 1 mes). Se ha encontrado que el sexo, la localización del tumor primario, el tipo de resección, y localización de las metástasis y el CEA pre operatorio son factores que no tienen importancia pronóstica. Se concluye que la cirugía de la Metástasis Hepática ha demostrado ser segura y eficaz. Sin embargo, en pacientes con MHCCR es necesario tener en cuenta los factores postoperatorios que pueden informarnos acerca de la agresividad del tumor y de la eficacia de la cirugía.
Trabajo de investigación

Orientador : Prof. Dr. José Ederaldo Queiroz Telles
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 04/08/2009
Inclui referências : f. 102-111
Resumo: A capacidade de predizer a agressividade biológica pela identificação das vias carcinogenéticas através da análise tecidual é de valor inestimável para o tratamento dos pacientes com câncer. Se tumores não responsivos aos tratamentos usuais pudessem ser identificados, estes pacientes poderiam ser poupados da toxicidade terapêutica e, assim poderiam ser candidatos a novas modalidades terapêuticas não convencionais. Nesta pesquisa objetiva-se identificar as vias carcinogenética clássica (p53) e mutadora (MSI-H) e correlacionaá-las com o fenótipo neoplásico de 51 tumores colorretais esporádicos. Métodos: Blocos de tecidos fixados em formalina a 10% e incluídos em parafina foram submetidos a cortes histológicos de 4?, para avaliação histológica. A técnica de (TMAs) foi utilizada para uma melhor uniformidade e um menor custeio das reações imunoistoquímicas para detecção das proteínas de reparo hMLH1, hMSH2, hMSH6 e a proteína p53. Resultados: Nos 51 casos de CCR esporádico estudados, quanto à distribuição das características clínico-patológicas, observou-se que 57% eram do sexo masculino, 60% do tipo histológico tubular, 51% com grau de diferenciação moderado, 58,82% com profundidade de invasão da subserosa pT3 e estádio IIA com média de idade de 59,4 anos. Nesta pesquisa, 84,31% dos tumores apresentaram hiperexpressão da proteína p53 (p<0,05) e 27,50% apresentaram ausência das proteínas de reparo EPR - (p<0,05). Na análise imunoistoquímica das proteínas hMLH1, hMSH2 e hMSH6 observou-se ausência da imunoexpressão em 15,68%, 11,76% e 17,65% dos tumores respectivamente. Em 19,60% dos casos foram decorrentes da via carcinogenética mutadora (MSI-H) destes, 70% foram do gênero feminino, 90% do tipo não mucinoso e 80,% apresentavam localização preferencial no cólon distal com média de idade de 57,10 anos. Por outro lado 66,66% eram decorrentes da via carcinogenética clássica (p53+). Destes 61,76% foram do gênero masculino, 85,29% do tipo histológico não mucinoso e 88,24% apresentavam localização preferencial no cólon distal com média de idade de 60,55 anos. Conclusão: Nesta pesquisa as vias carcinogenéticas clássica e mutadora não ocorrem com a mesma freqüência, sendo que a via predominante na carcinogênese colorretal esporádica é a via clássica. Houve correlação significativa (p>0,05) entre as características patológicas e os marcadores imunoistoquímicos.
Abstract: The ability to predict the carcinogenetic biological aggressiveness by identifying the pathways through tissue analysis is invaluable for the treatment of patients with cancer. If tumors that are not responsive to usual treatments could be identified, patients could be spared the toxicity and therapy, thus could be candidates for new unconventional therapeutic modalities. This research aims to identify and correlate the phenotype of the neoplastic tumor carcinogenetic classic pathways (p53) and mutated (MSI-H) in 51 sporadic colorectal tumors. Methods: Blocks of tissues fixed in formalin at 10% and included in paraffin were subjected to histological sections of 4_ for histological evaluation. The technique of (TMAs) was used for better uniformity and Immunohistochemistry of the cost of repair proteins hMLH1, hMSH2, hMSH6 and p53. Results: Of the preliminary parameters, on the distribution of the 51 cases of sporadic CRC studied at the clinical and pathological characteristics, we observed that 57% were male, 60% of tubular histological type, 51% with moderate degree of differentiation, 58, 82% with depth of invasion of the sub-serousa PT3 and stage IIA with a mean age of 59.4 years. In this research, 84.31% of the tumors showed hyperexpression of P53 protein (p <0.05) and 27.50% showed absence of protein repair EPR - (p <0.05). In immunohistochemical analysis of the repair proteins hMLH1, hMSH2 and hMSH6 were observed absence of expression in 15.68%, 11.76% and 17.65% respectively. In 19.60% of cases were caused by the mutated carcinogenetic (MSI-H) they were 70 % female, 90% of non-mucinous type and 80% showed preferential localization in distal colon with average age of 57.10 years. While 66.66% were caused by the classic carcinogenetic (p53 +) they were 61.76% male, 85.29% of non-mucinous histological type and 88.24% had preferential location in the distal colon with a mean age of 60.55 years. Conclusion: In this study carcinogenetic as classical ways and mutated not occur with equal frequency and the predominant pathway in sporadic colorectal carcinogenesis is the classic way. There was significant correlation between pathological features and immunohistochemical markers.

Recentemente è stato identificato un nuovo antigene associato al carcinoma del colon retto (CRC), denominato colorectal tumor-associated antigen-1 (COA-1), riconosciuto dai linfociti T CD4+ in associazione a specifiche molecole MHC di classe II e codificato del gene UBXD5. In questo studio abbiamo valutato se COA-1 sia in grado di evocare una risposta immunitaria mediata da linfociti T tumore-specifici nei pazienti affetti da CRC e se tale antigene possa rappresentare un nuovo mezzo per disegnare protocolli di immunoterapia e un marker di progressione della malattia. A tale scopo, i PBMC isolati dai pazienti con CRC sono stati stimolati in vitro con l’epitopo immunogenico di COA-1441-460 (FSTFPPTLYQDDTLTLQAAG) e la risposta immunitaria, sia antigene che tumore specifica, è stata analizzata mediante rilevazione del rilascio di IFN-g, tramite saggio ELISPOT. In tal modo, è stato possibile isolare linfociti T specifici per COA-1 e tumorereattivi da tutti i pazienti HLA-DRb1*0402 o *1301 con malattia in progressione (7/7, stadio C e D di Dukes), ma non dai pazienti con tumore in fase iniziale (4/4, stadio A e B di Dukes). I linfociti T TAA-specifici hanno mostrato un fenotipo CD3+, CD4+, CD69+, CD45RA+, compatibile con quello del subset dei linfociti T di tipo effettore. Inoltre, la maggior parte di queste cellule ha evidenziato un’attività citotossica diretta nei confronti delle cellule tumorali positive per COA-1 e per gli specifici elementi di restrizione di classe II. Abbiamo anche verificato se una risposta specifica nei confronti di COA-1 potesse essere isolata dai PBMC dei pazienti con CRC mediante l’impiego di cellule dendritiche (DC) autologhe caricate con il lisato tumporale. I nostri dati indicano che linfociti T CD4+ specifici per COA-1 e dotati di reattività anti-CRC possono essere isolati mediante stimolazione in vitro dei PBMC sia con le cellule tumorali intatte sia con le DC pulsate con il lisato del tumore autologo, suggerendo che tale TAA sia in grado di generare una risposta immunitaria dominante diretta contro il CRC. In conclusione, i risultati di questo studio indicano che COA-1 può essere considerato un antigene rilevante per la risposta immunitaria anti-tumorale nei pazienti con CRC, dal momento che correla con la progressione della malattia, e ne suggeriscono un possibile impiego nei protocolli di immunoterapia per i pazienti affetti da CRC.
Recently, a new colorectal cancer (CRC)-associated antigen, denominated colorectal tumorassociated antigen-1 (COA-1), recognized by CD4+ T lymphocytes in a HLA class IIrestricted way and encoded by UBXD5 gene, was identified. In this study, we evaluated whether COA-1 can evoke a specific T cell-mediated response in CRC patients and whether this antigen can represent a tool to design new protocols of immunotherapy and a marker for the progression of the disease. Peripheral blood lymphocytes isolated from CRC patients have been in vitro stimulated with the immunogenic epitope of COA-1441-460 (FSTFPPTLYQDDTLTLQAAG) and the antigen- and tumor immunological response was analyzed by IFN-g ELISPOT assay. We could isolate COA-1 specific and tumor reactive T lymphocytes from all (n= 7) HLADRb1* 0402+ or *1301+ CRC patients with progressive disease (Dukes’ C and D), but not in patients (n= 4) with early stage tumor (Dukes’ A and B). Furthermore, these T lymphocytes had a CD3+CD4+CD69+CD45RA+ phenotype, compatible with the activated effector-type T cell subset, and most of them exerted cytotoxic activity against tumor cells expressing COA-1 and the specific MHC restriction elements. In addition, we have verified whether COA-1 specific reactivity could be isolated from PBMCs of CRC patients by the usage of autologous dendritic cells loaded with tumor lysate. Tumor reactive and COA-1 specific CD4+ T cells colud be isolated by in vitro stimulation of PBMCs either with intact tumor cells and with DC pulsed with tumor lysate, suggesting that this antigen can generate a dominant immunological response against CRC. In conclusion, the results of this study indicate that COA-1 can be a relevant antigen for the anti-tumor immune response in CRC patients, correlating with the progression of the disease, and suggest that this molecule is suitable for immunotherapeutic protocols of these patients.

Determina cuáles son los marcadores tumorales (MT) más utilizados en el monitoreo posquirúrgico de los pacientes con cáncer colorectal sometidos a resección quirúrgica y analizar su tendencia a la normalización, así como su utilidad para discriminar las recurrencias. Estudio de tipo cohorte retrospectivo en el cual se revisaron las historias clínicas de pacientes que fueron sometidos a cirugía resectiva por cáncer colorectal en el Hospital Militar Central “Luis Arias Schreiber”, durante el periodo Enero 2003-Diciembre 2007, con el objetivo de analizar los resultados del monitoreo por MT. Durante el periodo de estudio se registraron un total de 56 casos (61% varones, con una edad promedio de 67.9 ± 13.2 años) de pacientes con cáncer colorectal sometidos a cirugías resectivas. En la mayoría de los casos el cáncer se localizó en colon (83%), era de tipo carcinoma (98%) y se encontraba en estadíos IIIA (48%) o IV (39%) de la clasificación TNM. En el 53% de los casos no se dosó ningún MT en el prequirúrgico, siendo los marcadores más utilizados el ACE (41%) y el CA-19.9 (29%). En promedio durante el prequirúrgico se pudo observar que el número de MT utilizados fue significativamente mayor en el postquirúrgico que en el prequirúrgico (2.2± 0.6 vs 0.9 ± 1.1, p <0.001). En total se registraron 4 (7.1%) de recurrencias, registrándose diferencias significativas entre las medias de los MT pre y post quirúrgicos ACE (13.2 ± 21.3 vs. 83.8 ± 21.3, p <0.001), Ca-19.9 (28.9 ± 31.2 vs. 82.9 ± 84.8, p <0.001) y CA-72.4 (17.2 ± 22.6 vs. 235.5 ± 199.3, p <0.001). no encontrándose mayores diferencias entre los niveles pre y posquirúrgicos de los MT AFP (5.9 ± 7.9 vs. 2.9 ± 0.4, p =0.440) ni CA-125 (18.6 ± 21.3 vs. 10.0 ± 1.5, p =0.569). En la experiencia del Hospital Militar Central el ACE, es el marcador tumoral más utilizado en el seguimiento de los pacientes con cáncer colorectal sometidos a resección quirúrgica; el cual tuvo utilidad en identificar casos de recurrencia al año de seguimiento. El resto de marcadores tumorales no tuvieron utilidad significativa.
Trabajo académico

Background At present the only prognostic system routinely employed for the management of gastric cancer patients is the TNM staging classification, that identifies broad risk categories with a significant prognostic variability within each stage, which makes TNM a suboptimal predictive tool on the single patient basis. Only 10-20% of patients with liver metastases from colorectal cancer is resectable with radical intent and 60-70% will develop a relapse despite apparently curative surgery. Both these classes of patients therefore would benefit from additional treatments after surgery such as adjuvant chemotherapy. We need new prognostic factors that can identify patients at high risk to be submitted to treatment. Aim of the study To study circulating tumor cells by gene profiling the peripheral blood in order to identify prognostic biomarkers that add independent prognostic power to the conventional staging systems. This might allow for a better stratification of patients’ risk and thus a better therapeutic management of gastric cancer and metastatic colorectal cancer patients, especially in the adjuvant setting. Patients, materials and methods 70 patients, affected with gastric adenocarcinoma at different TNM stages of disease who underwent radical surgery and 50 patients undergoing liver resection for metastases from colorectal cancer (stage IV) were enrolled in the study. Immediately before surgery, a sample of peripheral blood was withdrawn from each patient. For each sample, RNA was extracted and utilized for quantitative real time PCR evaluation of the expression of the following genes: CK19, CEA, VEGF, and Survivin for gastric cancer patients; CK19, CK20, CEA, VEGF, EGFR, CD133 and Survivin for colorectal liver metastases patients. Univariate and multivariate survival analysis was performed to investigate on the prognostic role of these biomarkers. Results After stepwise variable selection, Cox multivariate analysis of survival showed a significant association between overall survival and both TNM stage ad Survivin gene expression levels in peripheral blood of gastric cancer patients, while multivariate analysis confirmed the statistically significant association between both the radical resection and the transcriptional levels of CD133 and overall survival in colorectal liver metastases patients. In addition, Survivin transcriptional levels were higher in patients with gastric cancer as compared to the calibrator reference (obtained from the peripheral blood of healthy donors) in 98.6% of cases; analogously, CK19 was upregulated in 97.1% of cases. These findings support the hypothesis that the peripheral blood gene profile might be utilized also as a diagnostic marker in gastric cancer. Concluding remarks The positive findings of this pilot study are the basis for larger prospective studies in larger groups of gastric cancer and colorectal liver metastases patients, aimed to validate the prognostic power of Survivin and CD33 expression in peripheral blood of these two groups, respectively. Moreover it would be interesting to further explore also the potential diagnostic value of the peripheral blood gene profile in gastric cancer.
Presupposti dello studio Attualmente l'unico sistema prognostico utilizzato in clinica per i pazienti con cancro gastrico è la stadiazione TNM, che crea classi di rischio con prognosi significativamente diversa, ma con un’alta variabilità del rischio all’interno delle singole classi, risultando così uno strumento prognostico non ottimale a livello di singolo paziente. Solo il 10-20% dei pazienti con metastasi epatiche da carcinoma del colon-retto (CRC) risulta resecabile con intento radicale e di questi il 60-70% svilupperà una recidiva nonostante l’intervento potenzialmente curativo. Entrambe queste classi di pazienti necessitano di trattamenti aggiuntivi alla chirurgia come la chemioterapia adiuvante. Sono quindi necessari fattori prognostici nuovi, che permettano di individuare i pazienti ad alto rischio da indirizzare alla terapia. Scopo dello studio Studiare le cellule tumorali circolanti, attraverso il profilo di espressione genica nel sangue periferico, per individuare fattori prognostici indipendenti, in modo da rendere migliore la stratificazione del rischio e di conseguenza la cura dei pazienti con adenocarcinoma gastrico e con metastasi epatiche da carcinoma del colon-retto, con particolare riguardo alla selezione dei pazienti da trattare con terapia adiuvante. Pazienti, materiali e metodi Nello studio sono stati inclusi 70 pazienti con adenocarcinoma gastrico in diverso stadio TNM sottoposti a gastrectomia con intento radicale e 50 pazienti con metastasi epatiche da CRC sottoposti a chirurgia. Prima dell’intervento chirurgico, a ogni paziente è stato eseguito un prelievo di sangue venoso periferico, se ne è estratto l’RNA totale ed il corrispondente cDNA è stato utilizzato per l’analisi di espressione genica mediante PCR quantitativa. Per i pazienti con carcinoma gastrico sono stati valutati i geni CK19, CEA, VEGF, Survivin; per i pazienti con metastasi epatiche da CRC sono stati valutati i geni CK19, CK20, CEA, VEGF, EGFR, CD133 e Survivin. Per valutare il ruolo prognostico di ogni marcatore sono state effettuate le analisi di sopravvivenza uni- e multivariata. Risultati All’analisi multivariata secondo Cox della sopravvivenza globale, dopo selezione stepwise, sono risultati fattori prognostici indipendenti per i pazienti con cancro gastrico la stadiazione TNM e l’espressione del gene codificante per Survivin, mentre per i pazienti con CRC metastatico sono risultati fattori prognostici indipendenti la radicalità dell’intervento e l’espressione di CD133 nel sangue periferico. Inoltre Survivin era maggiormente espressa nei pazienti con carcinoma gastrico rispetto al calibratore (ottenuto dal sangue di donatori sani) nel 98.6% dei casi; analogamente CK19 era maggiormente espressa nel 97.1% dei casi. Questi dati supportano la possibilità dell’utilizzo dell’espressione genica nel sangue periferico anche come marcatore diagnostico del carcinoma gastrico. Conclusioni I risultati positivi di queste analisi costituiscono la base per la conduzione di più ampi studi prospettici nelle due patologie considerate, al fine di poter validare il valore prognostico dell’espressione di Survivin e CD133 nel sangue periferico dei pazienti rispettivamente con carcinoma gastrico e con CRC metastatico. Sarebbe inoltre di sicuro interesse confermare il significato diagnostico del profilo genico del sangue periferico nel cancro gastrico.

BACKGROUND The number of patients with colorectal cancers (CRCs) invading the submucosa (pT1) resected during colonoscopy is increasing due to the screening. Such tumors are potentially metastatic, but only 15% of patients have nodal involvement. Histologic criteria currently used for selecting patients needing resection are imprecise and most patients are overtreated. Tumor infiltrating lymphocytes (TILs) and mismatch repair (MMR) status impact on CRC prognosis and could be risk factors of nodal metastasis. AIM To identify patients requiring completion surgery, the value of histologic variables, TILs, and MMR status as risk factors of nodal metastasis was investigated in screening detected and endoscopically removed pT1 CRCs. MATERIALS AND METHODS Histologic variables, CD3+ and CD8+ TILs, and MMR status were assessed in 102 endoscopically removed pT1 CRC. Univariate and multivariate analyses were used to evaluate the correlation with nodal metastasis. RESULTS Positive resection margin, evidence of vascular invasion and tumor budding, wide area of submucosal invasion, and high number of CD3+ TILs were associated with nodal metastasis in univariate analyses. Vascular invasion was statistically independent in multivariate analysis. Evidence of neoplastic cells in the vessels and/or at the excision border featured 5 out of 5 metastatic tumors and 13 out of 97 non-metastatic ones. CONCUSIONS Completion surgery should be mandatory only for patients with pT1 CRC with vascular invasion or with tumor cells reaching the margin. In all other cases, the treatment choice should be entrusted to the evaluation of the risk-benefit ratio of each patient considering the rarity of nodal metastasis.
INTRODUZIONE Il numero di pazienti con cancro colo-rettale (CCR) infiltrante la sottomucosa (pT1) rimosso durante colonscopia è in aumento per via dello screening. Tale tumore potenzialmente è già metastatico, ma solo un 15% di pazienti ha coinvolgimento linfonodale. I criteri istologi attualmente utilizzati per selezionare i pazienti che necessitino di una resezione di completamento sono imprecisi e la maggior parte dei pazienti subisce un trattamento eccessivo. I linfociti intra-tumorali (TILs) e lo stato del mismatch repair (MMR) condizionano la prognosi del CRC e potrebbero essere fattori di rischio di metastasi linfonodale. OBIETTIVO Per identificare i pazienti che necessitano di chirurgia di completamento, è stato valutato nei CRC pT1 identificati dallo screening e rimossi endoscopicamente il valore delle variabili istologiche, dei TILS e dello stato del MMR come fattori di rischio di metastasi linfonodale. MATERIALI E METODI Le variabili istologiche, i TILS CD3+ e CD8+ e lo stato del MMR sono stati valutati in 102 CRC pT1 rimossi endoscopicamente. Analisi univariate e multivariate sono state utilizzate per valutare la correlazione con la metastasi lindonodale. RISULTATI Il margine di resezione positive, la presenza di invasione vascolare e di budding tumorale, l'ampia area di invasione e l'elevato numero di TILs CD3+ erano associata alla metastasi linfonodale nelle analisi univariate. L'invasione vascolare era l'unica variabili indipendente all'analisi multivariata. La presenza di cellule neoplastiche intravascolari e/o a livello del margine di resezione caratterizzavano tutti e 5 i tumori metastatici e solo 13 tumori non metastatici su 97. CONCUSIONI La chirurgia di completamento dovrebbe essere indicata solo per i pazienti con un CRC pT1 con invasione vascolare o con cellule neoplastiche che raggiungono il margine di resezione. In tutti gli altri casi, la scelta del trattamento dovrebbe essere affidata alla valutazione del rapporto rischi-benefici di ciascun paziente tenendo in considerazione la rarità del coinvolgimento linfonodale.

Comparazione fra chirurgia open e laparoscopica ed analisi dei risultati a breve e lungo termine anche in una categoria di pazienti trattati per neoplasia del retto basso. Open versus laparoscopic study for digestive surgery and short and long term outcomes after treatment for low rectal cancer.

L’isolamento di cellule tumorali circolanti (CTC) e di DNA tumorale circolante (ctDNA), prende il nome di “biopsia liquida”. Rispetto alla convenzionale biopsia del tessuto, che rappresenta un’immagine istantanea e statica di un tumore, la biopsia liquida presenta il grande vantaggio di fornire informazioni in “tempo reale” sulla malattia, mettendo in luce l'evoluzione del tumore e la sua eterogeneità, in particolare, le variazioni di popolazioni di cellule tumorali durante la progressione della malattia e in risposta alle terapie. Infatti, anche se è ampiamente accettato che l’eterogeneità intratumorale possa influenzare l'efficacia della terapia a bersaglio molecolare, lo studio della farmacoresistenza è ostacolato dal fatto che la biopsia di tessuto tumorale è una procedura invasiva e non sempre ripetibile. La complessa eterogeneità tumorale si traduce in una notevole instabilità del genoma, consentendo alle cellule tumorali di adattarsi a qualsiasi ambiente ostile, comprese le terapie mirate e di guidare l'evoluzione di cloni resistenti. Si rende pertanto necessario un adeguamento delle terapie a bersaglio molecolare che rifletta le continue alterazioni che si accumulano nel genoma delle cellule tumorali. Con l’obiettivo di avvicinarsi ad una medicina di precisione e di personalizzare le terapie, ogni strumento che consenta la stratificazione dei pazienti e l’ottimizzazione delle terapie appare di fondamentale importanza nell’era dell’oncologia molecolare. Tra le malattie in cui le terapie biologiche hanno determinato un significativo miglioramento della sopravvivenza, il carcinoma metastatico del colon-retto occupa un posto di assoluto rilievo. Nonostante tali approcci abbiano di fatto modificato la storia clinica di questa neoplasia, resta ancora molto da indagare sull’identificazione e sulla validazione di biomarcatori affidabili, con significato predittivo di risposta alla terapia. La biopsia liquida potrebbe rispondere a tale esigenza. Rispetto ad altri tumori, le CTC isolate da pazienti con tumore del colon-retto sono assenti o quasi sempre al di sotto del valore soglia, pertanto non sempre correlabili con l’andamento clinico della malattia, con meccanismi non pienamente compresi. Tale discrasia tra assenza di CTC e progressione clinica di malattia nei pazienti è particolarmente evidente nei pazienti candidati a terapia con farmaci inibitori dell’angiogenesi. Sulla base dei suddetti presupposti teorici, il presente lavoro di tesi ha avuto come scopo quello di ottimizzare la biopsia liquida in pazienti affetti da carcinoma del colon-retto con i seguenti obiettivi: - analizzare sensibilità e specificità di metodiche standard di isolamento delle CTC basate su arricchimento immunomagnetico (CellSeach® ,AdnaTest) e di metodiche di filtrazione che separano le cellule tumorali circolanti dalle altre cellule ematiche in base alle dimensioni. -analizzare i meccanismi attraverso i quali i farmaci inibitori dell’angiogenesi possono impedire un efficiente isolamento delle CTC - caratterizzare il profilo molecolare delle CTC isolate con particolare riferimento a marcatori di transizione epitelio mesenchima, marcatori di staminalità e marcatori predittivi di risposta ai farmaci a bersaglio molecolare. -costruire filtri ad hoc per l’isolamento di CTC clusterizzate

Valutazione della presenza delle cellule tumorali circolanti in pazienti con carcinoma del colon retto e loro possibili implicazioni prognostiche e terapeutiche,in rapporto al tipo di intervento chirurgico ed ad un follow up a sei mesi

Objectivo: Analisar a imunoexpressão do marcador tumoral bcl-2 no cancro do cólon e reto, a sua localização e grau de diferenciação e correlacionar com o prognóstico clínico-patológico. Métodos: Foram estudados 30 pacientes com adenocarcinoma do colon e reto, submetidos à resseção cirúrgica do tumor no Centro Hospitalar Cova da Beira no período compreendido entre 2001 a 2003. As peças cirúrgicas foram analisadas segundo técnicas de marcação imunohistoquímica para a proteína bcl-2, classificadas em adenocarcinoma bem, moderadamente ou pouco diferenciado, de acordo com a presença de padrão glandular. Os dados obtidos foram analisados pelos teste não paramétrico Teste U de Mann-Whitney para verificar a relação entre o prognóstico e percentagem de células positivas para o bcl-2 e os testes de ?2 e de Cramer para as variáveis localização do tumor e relação com o prognóstico e grau de diferenciação e relação com o prognóstico. Os dados foram analisados através do Pacote de Software para ciências Sociais (SPSS), versão 22.0®, e um valor-p inferior ou igual a 0,05 foi considerado significativo em todos os testes estatísticos. . Resultados: A expressão imunohistoquímica do bcl-2 foi positiva em 16 tumores (53%) e negativa em 14 (47%). Verificamos a existência de uma correlação estatisticamente significativa entre a percentagem de células marcadas para bcl-2 e o prognóstico do paciente (p=0,002). Não foi encontrada correlação entre o grau de diferenciação do adenocarcinoma ou a localização e o prognóstico do paciente (p=0,292 e p=0.563 respetivamente). Conclusões: A expressão imunohistoquímica do bcl-2 está associada ao prognóstico clinico-patológico do paciente, sendo que uma maior expressão do marcador confere um melhor prognóstico ao paciente. Relativamente ao grau de diferenciação e localização do adenocarcinoma não foi encontrada correlação significativa com o prognóstico do paciente.
Objective: To analyze the immunoexpression of the protein bcl-2 in colorectal adenocarcinomas, the degree of cell differentiation and localization of the tumor and correlate with the clinical-pathological prognostic factors. Method: Immunohistochemistry was used to detect the expression of bcl-2 in 30 cases of colorectal carcinoma who had undergone surgery at Cova da Beira Academic Hospital Centre between 2001 and 2003. The study variables were analyzed using the chi-square and Cramer to investigate associations between the degree of cell differentiation and localization of the tumor and the prognosis, and Mann-Whitney U Test to evaluate the expression of the protein bcl-2 and the prognosis. Data was analyzed using the Statistical Package for Social Sciences (SPSS), version 22.0®, and p-value less than or equal to 0,05 was regarded as significant for all statistical tests. Results: The immunohistochemical expression of bcl-2 was positive in 16 tumors (53%) and negative in 14 (47%). There was statistically significant correlation between the expression of bcl-2 and prognosis (p=0,002). However there is no significant association between the degree of cell differentiation and localization of the tumor and the clinical- pathological prognostic factors (p=0,292 e p=0,563 respectively). Conclusion: The immunohistochemical expression of bcl-2 may be valuable in predicting the prognosis of the patient. Higher expression of bcl-2 were related to patients with better prognosis. No significant correlation was found between the degree of cell differentiation and localization of the tumor and patients prognosis clinical – pathological factors.

Introdução: Num mundo onde as neoplasias são cada vez mais causa de perda de qualidade de vida, ou até de morte, torna-se imprescindível o estudo do seu comportamento, tanto pelo interesse num diagnóstico precoce, como também no estabelecimento de um prognóstico. O Cancro Colorretal é a segunda neoplasia mais comum na Europa. O estadio do tumor, a classificação histológica, a presença/ausência de linfadenopatias e/ou metástases à distância, têm sido reconhecidos como factores de prognóstico. No entanto, estas características, por si só, não permitem prever na totalidade qual o resultado clínico final. Por esta razão, têm sido feitos esforços no sentido de tentar identificar novos marcadores moleculares que auxiliem, como factores de prognóstico isolados, ou em combinação com dados clínico-histopatológicos, a melhorar a previsão do desfecho e a determinar a abordagem terapêutica mais adequada. Um deles é o antigénio Ki-67, uma proteína expressa no núcleo das células durante todo o ciclo celular, com exceção da fase G0. A sua presença estritamente relacionada com o ciclo celular sugere o seu papel importante na regulação deste. Dos estudos até agora concretizados, a sua utilização como marcador de proliferação celular tem mostrado o seu reconhecimento como factor de prognóstico independente para o cancro da próstata, mama, entre outros. Contudo, no que concerne ao Adenocarcinoma Colorretal a literatura disponível revela resultados controversos quanto ao seu valor prognóstico. Objetivos: 1. Analisar a expressão imunohistoquímica da proteína Ki-67 e dos factores clínico-histopatológicos: “género”, “idade”, “prognóstico dos pacientes”, “grau de diferenciação histológica do tumor”, “localização do tumor” e “classificação TMN” de pacientes com Adenocarcinomas Colorretais. 2. Estudar o valor prognóstico da proteína Ki-67 em Adenocarcinomas Colorretais e a sua correlação com alguns parâmetros clínico-histopatológicos. Métodos: Foram estudados 35 pacientes com Adenocarcinoma Colorretal que foram submetidos a resseção cirúrgica do tumor com intenção curativa, entre janeiro de 2001 e janeiro de 2003, no Centro Hospitalar Cova da Beira. Nenhum recebeu terapia neoadjuvante, tendo sido depois sujeitos a um follow-up pós-operatório de 10 anos. As amostras foram processadas histologicamente, segundo o protocolo definido pela instituição anteriormente referida, para a marcação imunohistoquímica da proteína Ki-67. Foram depois classificadas de acordo com o “grau de diferenciação histológica do tumor”, e consideradas tanto a “intensidade” como a “percentagem” de células marcadas pela proteína Ki-67. Os dados foram analisados estatisticamente considerando-se um valor p<0,05 como estatisticamente significativo. Resultados: Foi encontrada correlação estatisticamente significativa (p<0,05) entre a “expressão imunohistoquímica de células marcadas pela proteína Ki-67” e o “prognóstico dos pacientes”. Contudo, não se verificaram resultados estatisticamente significativos entre a “expressão imunohistoquímica de células marcadas pela proteína Ki-67” relativamente à “localização do tumor” e “grau de diferenciação histológica do tumor”. Ao fim de 10 anos a mortalidade foi de 37,1%.
Introduction: In a world where cancer is increasingly a cause of loss of quality of life or death it is essential to study its behavior, either by an interest in early diagnosis as well as in establishing a prognosis. The Colorectal cancer is the second most common cancer in Europe. The tumour stage, histological type, the presence/absence of lymphadenopathy and/or distant metastases have been recognized as prognostic factors. However these characteristics, in itself, didn’t allow us to fully predict the clinical outcome. For this reason efforts have been made to try and identify new molecular markers that aid, as individual prognosis factors or in combination with clinicalhistopathological data, to improve prediction of the outcome and to determine the most appropriate therapeutic approach. One of them is the Ki-67 antigen, a protein expressed in the nucleus of cells throughout the cell cycle, except G0. Its presence strictly related to cell cycle suggesting its important role in the regulation thereof. From studies completed so far, its use as a marker of cellular proliferation has shown its recognition as an independent prognostic factor for prostate cancer, breast cancer and other cancers. However, regarding the Colorectal Adenocarcinoma available literature reveals conflicting results concerning its prognostic value. Goals: 1. Analyze the immunohistochemical expression of Ki-67 protein and clinicalhistopathological parameters: “gender”, “age”, “prognosis of patients”, “histological type of the tumour”, “location of the tumour” and “TMN classification” of patients with colorectal adenocarcinomas. 2. Study the prognostic value of Ki-67 protein in colorectal adenocarcinomas correlated with some clinicalhistopathological parameters. Methods: 35 patients with Colorectal Adenocarcinoma were studied who underwent surgical resection of the tumour with curative intent, between January 2001 and January 2003, at Centro Hospitalar Cova da Beira. None received neoadjuvant therapy, having been subjected to a post-operative follow-up of 10 years. Samples were histologically processed according to the protocol defined by the aforementioned institution for the immunohistochemical staining of the Ki-67 protein. They were then classified according to histological type of the tumour and considering both the intensity and the percentage of stained cells by the Ki-67 protein. The data were analyzed considering a p value <0.05 considered statistically significant. Results: Statistically significant correlation (p<0,05) was found between “immunohistochemical expression of cells stained by the Ki-67 protein” and the “prognosis of patients”. However, there were no statistically significant results within the “immunohistochemical expression of stained cells by the Ki-67 protein” with respect to the “location of the tumour” and “histological type of the tumour”. After 10 years, the mortality rate was 37.1%.