Littérature scientifique sur le sujet « Mielodisplasie »

Results on myelodysplastic syndromes (MDS) from population-based studies are rare and these data are infrequently collected by cancer registries because diagnostic difficulties and under-reported data.Our is the first regional Lazio study about medical coding, diagnosis, classification and mortality of MDS patients. This study is aimed at evaluating MDS medical miscoding and conducting a mortality follow-up in a cohort of 644 MDS patients enrolled in the Gruppo Romano-Laziale Mielodisplasie (GROM-L) registry from 2002 to 2010.We linked the MDS cohort with 2 regional health information systems: the Hospital Information System (HIS) and the regional Mortality Information System (MIS).About the first objective 92% of the patients had at most 12 hospitalization, but 28.5% of them had no hospitalization with the 238.7 ICD-9-CM. About the second objective we observed 45.5% of death during the follow-up, Myelodysplastic Syndrome was the second cause of death, other frequent causes of death were myeloid leukemia and aplastic anemia.This study highlights for the first time in Lazio that a disease like MDS, involving many resources for care assistance, tends to be under-documented in the HIS archive. This may be due to the evolution of the disease over the time, the inappropriate use of existing ICD-9-CM and the limitations of current ICD-9-CM classification. Moreover, the most frequent causes of death other than MDS might suggest a miscoding of MDS in the death causes too.In conclusion our registry could be a useful investigational tool to make a continued surveillance on medical miscoding and collect epidemiological data.

Purpose The definition of disease-specific prognostic scores plays a fundamental role in the treatment decision-making process in myelodysplastic syndrome (MDS), a group of myeloid disorders characterized by a heterogeneous clinical behavior. Patients and Methods We applied the recently published Revised International Prognostic Scoring System (IPSS-R) to 380 patients with MDS, registered in an Italian regional database, recruiting patients from the city of Rome (Gruppo Romano Mielodisplasie). Patients were selected based on the availability of IPSS-R prognostic factors, including complete peripheral-blood and bone marrow counts, informative cytogenetics, and follow-up data. Results We validated the IPSS-R score as a significant predictor of overall survival (OS) and leukemia-free survival (LFS) in MDS (P < .001 for both). When comparing the prognostic value of the International Prognostic Scoring System (IPSS), WHO Prognostic Scoring System (WPSS), and IPSS-R, using the Cox regression model and the likelihood ratio test, a significantly higher predictive power for LFS and OS became evident for the IPSS-R, compared with the IPSS and WPSS (P < .001 for both). The multivariate analysis, including IPSS, WPSS, age, lactate dehydrogenase, ferritin concentration, Eastern Cooperative Oncology Group performance status, transfusion dependency, and type of therapy, confirmed the significant prognostic value of IPSS-R subgroups for LFS and OS. Treatment with lenalidomide and erythropoiesis-stimulating agents was shown to be an independent predictor of survival in the multivariate analysis. Conclusion Our data confirm that the IPSS-R is an excellent prognostic tool in MDS in the era of disease-modifying treatments. The early recognition of patients at high risk of progression to aggressive disease may optimize treatment timing in MDS.

Relata-se o caso de uma gata Siamês de seis meses de idade que desde o nascimento apresentava paraplegia espástica associada à incontinência fecal e urinária. No exame neurológico, exibia paralisia, analgesia, hiperreflexia e perda das reações posturais nos membros posteriores. Radiografias simples e contrastadas (mielografia) da coluna vertebral toracolombar evidenciaram estreitamentos do canal vertebral na região lombar e da medula espinhal, vértebras torácicas e lombares. Na necropsia e exame histopatológico, verificou-se hipoplasia segmentar caracterizada pelo afinamento localizado da medula espinhal em T4-T6 e L2-L3, depleção neuronal na substância cinzenta e filetes nervosos interligando as partes craniais e caudais, todos recobertos por dura mater íntegra e espessada. Essas alterações permitiram concluir o diagnóstico de mielodisplasia segmentar múltipla.

Latar belakang : Systemic Lupus Erythematosus adalah penyakit kronik inflamatif autoimun dengan manifestasi multiorgan. Pemeriksaan bone marrow punction mengkonfirmasi gangguan hematologi. Imunoassai ANA, anti-dsDNA dan anti Sm mengkonfirmasi imunopatogenesis. Tujuan studi kasus ini adalah untuk menganalisis aspek laboratorium dalam diagnosis dan tatalaksana nefritis Lupus kelas IV dan neuropsikiatri lupus dengan Sindroma Mielodisplasia. Kasus : Seorang wanita 35 tahun mengeluh lemas. Pemeriksaan fisik : hipertensi, konjungtiva palbebra pucat, ulkus dimulut, echimosis dikulit, pleural friction rub paru kanan, edema pitting ekstremitas. Pemeriksaan laboratorium : peningkatan LDH, hiperlipidemia, hipofibrinogenemia, peningkatan D-dimer, proteinuria, hematuria dan silinderuria. Pemeriksaan ANA dan Sel LE positif. Pansitopenia darah tepi dikonfirmasi pemeriksaan BMP didapatkan gambaran MDS. Pasien mengalami kejang, dikonfirmasi MSCT kepala terdapat infark serebri multipel. Anti ds-DNA positif moderate, C3/C4 rendah namun anti Sm negatif. Kesimpulan : Berdasarkan data klinis dan laboratoris pasien ini didiagnosis SLE derajat berat, nefritis lupus kelas IV, sindroma mielodisplasia dan neuropsikiatrilupus. Anti Sm negatif kemungkinan disebabkan fenomena “cross reactivity” atau “Hook Effect” sehingga menyebabkan interferensi hasil negatif palsu. Anti Sm negatif tidak dapat menyingkirkan diagnosis SLE

RESUMO: Apesar da prevalência da peritonite infecciosa felina (PIF) ser alta em praticamente o mundo todo, estudos anatomopatológicos recentes acerca dessa doença são escassos. Não obstante, as características microscópicas da medula óssea de gatos com PIF estão ausentes da literatura consultada. O objetivo deste artigo é descrever alterações medulares ósseas vistas em casos espontâneos de PIF. As medulas ósseas colhidas sistematicamente da região diafisária dos fêmures de 16 gatos necropsiados no Laboratório de Patologia Veterinária (LPV) da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Rio Grande do Sul, entre janeiro de 2000 e junho de 2017, e que tiveram diagnóstico definitivo de PIF, foram avaliadas fenotípica (histopatologia - hematoxilina e eosina e histoquímica - reação de Perls) e imunofenotipicamente (utilizando marcadores mieloides (anti-MAC387) e de linfócitos (anti-CD79αcy e anti-CD3). Os resultados permitem afirmar que, independentemente da apresentação clinicopatológica da doença ocorrem as seguintes alterações: 1) hiperplasia mieloide; 2) hipoplasia eritroide, 3) displasia megacariocítica (dismegacariocitopoiese) e 4) plasmocitose medular. Exclusivamente nos casos de PIF seca há hemossiderose medular óssea e hepática. Essas alterações permitem estabelecer que gatos com PIF desenvolvem mielodisplasia, uma lesão mieloproliferativa muito semelhante àquela relatada em humanos infectados pelo HIV. Sugere-se que a partir dos achados aqui descritos, a mielodisplasia seja considerada a principal responsável pelas alterações hematológicas observadas na PIF, especialmente pela anemia e trombocitopenia arregenerativas frequentemente desenvolvidas pelos pacientes com essa doença.

Abstract Abstract 4958 Erythropoietin (EPO) have been widely employed in the treatment of patients with low-risk Myelodysplastic Syndromes (MDS) and anemia, with response rates ranging from 30 to 60%. These data, however, have been derived only from controlled clinical trials or unicentric single-arm studies; it is still lacking a wider survey evaluating the use of EPO in the real-life clinical practice. To address this issue, the Gruppo Romano Mielodisplasie (GROM) revised retrospectively 394 MDS patients (M/F 225/169, median age at diagnosis 73. 9 yrs, IR 67. 0 – 79. 3) treated with EPO from 1/2002 to 12/2010 by 11 Hematological Centers (5 university hospitals and 6 community-based hospitals) in the metropolitan area of Rome. According to WHO classification, there were 81 (20. 6%) patients with RA, 7 (1. 8 %) with SA, 160 (40. 7%) with RCMD, 17 (4. 3%) with RCMD-S, 75(19. 0%) with RAEB-1, 27 (6. 8%) with RAEB-2 and 27 (6. 8%) with isolated del5q. The IPSS score was calculated in the 307 patients with an available karyotype: 145 (47. 2%) patients were low-risk, 135 (44. 0%) int-1, 24 (7. 8%) int-2 and 3 (1. 0%) high-risk. Median interval from diagnosis to EPO start was 3. 7 months (IR 0. 9 – 12. 1). At EPO start, median age was 74. 5 yrs (IR 68. 3 – 79. 9) with a median haemoglobin level of 8. 9 g/dl (IR 8. 2 – 9. 6). Creatinine level was elevated in 64 (16. 2%) cases: 138 patients (35. 3%) had a previous transfusion requirement. Median serum EPO level was 50. 0 mU/L (IR 26. 2 – 110. 0). The initial doses of EPO were ≤ 40. 000 UI/week in 259 patients (65. 7%) (standard doses, α-EPO in 104 patients, β-EPO in 143 patients, darbepoietin in 12 patients) and 80000 UI/week in 135 patients (34. 3%) (high doses, α-EPO in 130 patients, β-EPO in 5 patients). An erythroid response was observed in 228 (57. 9%) patients, with Hb increase > 1. 5 g/dl in 210 patients (53. 3%) and disappearance of transfusion requirement in 18 (4. 6%): patients receiving initial high doses had a higher response rate compared to patients receiving standard doses [94/135 (69. 6%) vs 134/259 (51. 7%), p=0. 002]. Only 5 thrombotic events (1. 2%) were reported during the treatment. Predicting factors for erythroid response were no previous transfusion requirement (p<0. 001), serum EPO levels at baseline < 50 mU/l (p<0. 001), creatinine levels above the normal values (<0. 001), ferritin levels < 250 ng/ml (p=0. 009) and hemoglobin level at baseline > 8 g/dl (p=0. 017). Median overall survival from EPO start was 70. 7 months (CI 95% 52. 5 – 88. 8) in responders versus 41. 7 months (CI 95% 27, 6 – 55, 7) in resistant patients (p= 0. 018). Our real-life data from a single homogeneous geographic area outline that EPO treatment is safe and effective also in the current clinical practice, beyond controlled clinical trials. However, this latter type of studies is warranted to define the best initial dose of EPO in such patients. Disclosures: No relevant conflicts of interest to declare.

Myelodysplastic syndromes (MDS) include a heterogeneous group of disease characterized by dysplasia of one or more bone marrow cell lineages, usually with prominent ineffective erythropoiesis and genomic instability leading to anaemia and enhanced risk to transformation to secondary acute myeloid leukemia (AML) . Thus MDS is often diagnosed on the basis of chronic macrocytic anaemia accompanied or not by leukocytopenia and/or thrombocytopenia. The deletion of 5q (5q-) is a frequent clonal chromosomal abnormality in patients with MDS. MDS with 5q- as a sole chromosome alteration is characterized by isolated anaemia, elevated platelet count and a favourable prognosis when compared to other forms of MDS . When the 5q- accompanies additional chromosome defects, it leads to poor-risk karyotypes with dramatically different prognostic features . NPM1 is a versatile nuclear phosphoprotein that plays multiple roles in ribosome biogenesis and transport, cytoplasmic-nuclear trafficking, centrosome duplication and regulation of p53 . The NPM1 gene is located in chromosome 5q35 and is involved in a number of human haematopoietic malignancies, such as promyelocytic leukaemia , anaplastic large cell lymphoma , and AML. NPM1 has also been found mutated in approximately 35% of acute myeloid leukaemia cases . Furthermore the 5q region to which NPM1map is deleted in a number of MDS and loss of chromosome 5 is a frequent finding in MDS . In a recent paper, Grisendi and co-workers showed that NPM1 is essential to maintain genomic stability. They demonstrated that NPM1 is haploinsufficient for regulating centrosome duplication as NPM1 heterozygous cells show aberrant centrosome numbers, genomic instability and aneuploidy. We analyzed the presence of NPM1 gene deletion, methylation and mutations in 45 patients affected by MDS and in 5 patients with AML secondary to MDS carrying the 5q- abnormality as sole chromosomal alteration or associated with additional chromosome defects. Group 1 (17 patients) consisted of patients who present the 5q deletion as sole anomaly as determined by cytogenetics: 10 AR (59%), 1 ARS (6%), 1 AREB (6%), 4 AREB-T (23%) and 1 AML (6%). Group 2 ( 33 patients) consisted of patients who present the 5q deletion associated with additional chromosome defects: 5 AR (15%), 1 ARS (3%), 10 AREB (24%), 13 AREB-T (46%) e 4 AML (12%) The CpG island of the NPM1 gene was unmethylated in all the samples analyzed including patients with isolated 5q- and with complex karyotype. The mutational status of NPM1 exon 12 showed wild type NPM1 in all patient. The FISH analysis of the NPM1 locus revealed deletion of one copy of the gene in 7 cases. Interestingly all the cases with NPM1 deletion are always associated with complex karyotypes and a high-risk disease. May be considered that the aploinsufficienza of the NPM1 gene is not sufficient alone to determine the occurrence of a complex karyotype but may contribute with other genetic mechanisms for its establishment. With the test of Fisher, has shown a trend of association between the deletion of NPM1 and complex karyotype (p = 0.08); most likely by increasing the number of cases analyzed could be obtained a statistical significance.

Recenti evidenze hanno dimostrato come la predisposizione rivesta un ruolo cruciale nel 5-10% dei tumori pediatrici. Ciò nonostante, è ancora un ambito nebuloso, che va ulteriormente investigato. Nell’adulto, l’evoluzione clonale agisce in modo simile: l’accumulo di mutazioni somatiche dovuto all’età, aumenta la prevalenza di neoplasie mieloidi tra gli individui più anziani. Come specifici pathway di co-occorrenza predispongano a tumori ematologici, è da indagare in modo più approfondito. In questo studio, ci siamo focalizzati sul ruolo della predisposizione genetica nei tumori ematologici del bambino e dell’adulto, allo scopo di migliorare le conoscenze riguardo alle alterazioni genetiche che agiscono nella fase pre-leucemica. Abbiamo realizzato il nostro studio attraverso diverse tasks, caratterizzate dall’obiettivo comune di scandagliare il ruolo della predisposizione genetica nel promuovere la trasformazione neoplastica. Innanzitutto, abbiamo sequenziato una corte di 120 diagnosi consecutive di pazienti pediatrici affetti da Leucemia Linfoblastica Acuta e casi sporadici con altri tumori ematologici, così come casi con ricorrenza familiare. Il profiling genetico ha confermato il ruolo cruciale di alcuni geni nella Leucemogenesi, come quelli appartenenti al pathway di RAS, sia in termini di incidenza, sia di patogenicità. Inoltre, ha fatto luce sulle mutazioni germinali nelle Coesine: queste alterazioni, solitamente associate a sindromi genetiche denominate Coesinopatie, non sono eventi sporadici, ma si presentano con una frequenza non trascurabile (6%) e degna di ulteriori approfondimenti. Considerando questa evidenza, ci siamo focalizzati sulle varianti germinali dei geni STAG1 e RAD21. I nostri risultati hanno dimostrato che queste alterazioni sono responsabili di una scarsa coesione cromatinica, promuovono quindi instabilità genetica spontanea e sono caratterizzati da meccanismi di riparo al danno del DNA difettivi. Pertanto, geni che non sono classicamente correlati alla fase conclamata delle neoplasie ematologiche pediatriche promuovono condizioni che predispongono al cancro, aggravando infatti il rischio di eventi somatici responsabili dell’insorgere della neoplasia. Al fine di valutare il contributo della predisposizione genetica considerando tutto l’arco della vita, abbiamo investigato il ruolo dell’Evoluzione Clonale nell’adulto. Nonostante sia considerato un fenomeno fisiologico nell’invecchiamento, è anche significativamente associato a malattie cardiovascolari, tumori solidi e neoplasie ematologiche. Lo screening mutazionale di 1794 individui anziani (oltre 80 anni) ha permesso di stabilire un modello basato su tre gruppi di rischio, in cui l’accumulo differenziale di mutazioni somatiche dipendente dall’età aumenta la prevalenza di neoplasie mieloidi o malattie associate all’infiammazione. Nello specifico, le mutazioni dei geni dello Splicing, di JAK2, o la presenza di mutazioni multiple (DNMT3A, TET2, ASXL1 con lesioni genetiche aggiuntive), nonché le varianti con frequenza allelica ≥ 0,096, hanno un valore predittivo positivo per le neoplasie mieloidi. Infine, abbiamo sottolineato il ruolo delle mutazioni dei geni dello Splicing non solo come eventi precoci nella patogenesi, ma anche in una fase precedente, figure chiave nel determinare l’insorgenza della malattia mielodisplasica. In conclusione, una migliore conoscenza e caratterizzazione di queste alterazioni può avere impatti clinici differenti. In primo luogo, può garantire una migliore comprensione del processo di tumorigenesi, aprendo nuovi scenari in merito al contributo della Predisposizione genetica e dell’Evoluzione Clonale nelle neoplasie ematologiche. Inoltre, può avere conseguenze significative sia nella terapia dei pazienti, sia nella consulenza genetica familiare: consentirebbe quindi strategie di sorveglianza mirate e aggiustamenti terapeutici paziente-specifici.
Despite genetic predisposition occurs in 5-10 % of pediatric cancer, it is still a nebulous field, that has to be better characterized. In the adult setting, clonal evolution acts similarly, and age-dependent accumulation of somatic mutations increases the prevalence of myeloid neoplasms among older individuals. How the specific co-occurrence of somatic events predisposes to hematological malignancies have to be further clarified. In the present project, we focused our attention in dissecting the role of genetic predisposition in both childhood and adult hematological malignancies, with the purpose of improving knowledge about genetic alterations that act in pre-leukemic phase. We planned and developed our study through several tasks, characterized by the joint purpose of investigating the contribution of genetic predisposition in promote tumor transformation. Firstly, we screened a cohort of 120 consecutive diagnosis of pediatric patients affected by Acute Lymphoblastic Leukemia and sporadic cases with other hematological malignancies, as well as cases with familiar recurrence. Genetic profiling confirmed the crucial role of some genes in Leukemogenesis, like those belonging to Ras pathway, both in term of incidence and pathogenicity. Moreover, it shed light on germline mutations in Cohesins: these alterations, usually associated to genetic syndromes called Cohesinopathies, are not random or sporadic events, but occur with a frequency (6%) that is not negligible and worthy of further study. Considering this evidence, we made a focus on STAG1 and RAD21 germline variants. Our results demonstrated that they lead to a poor chromosomal strength and promote spontaneous instability, resulting in a lowered response to exogenous and endogenous agents, as well as defective DNA repair mechanisms. So, genes that are not classically related to full-blown stage of hematological disease, promote cancer prone conditions in pediatric patients, aggravating the risk of somatic events that are responsible of the disease’ onset. In order to evaluate the contribution of genetic predisposition in cancer considering overall the time of life, we investigated the role of clonal evolution in the adult setting. Despite it is considered normal in aging, it is also significantly associated with cardiovascular disease, as well as solid tumors and hematological malignancies. The mutational screening of 1794 oldest-old individuals allowed to establish a model based on 3 risk groups, in which differential age-dependent accumulation of somatic mutations increases prevalence of myeloid malignancies or inflammatory-associated diseases. Specifically, mutations in Splicing genes, JAK2 or the presence of multiple mutations (DNMT3A, TET2, ASXL1 with additional genetic lesions), as well as variants with allele frequency ≥0.096, have a positive predictive value for myeloid neoplasms. Finally, we underlined the role of Splicing genes mutations not only as early events in pathogenesis, but also in a previous phase, as key players in determine the onset of myelodysplastic disease. Overall, a better knowledge and characterization of these alterations will have different impacts: it will improve the understanding of tumorigenesis, opening new scenarios regarding the contribution of genetic predisposition and clonal evolution to hematological malignancies. Moreover, it could have significative effects on both patients’ care and familial genetic counseling, enabling targeted surveillance strategies, and tailored therapeutical adjustments that include familiar screening in case of familiar donor in hematopoietic stem cell transplantation.

Orientador: Sara Teresinha Olalla Saad
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-08-26T18:19:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 XavierFerrucio_JulianaMartins_D.pdf: 4222784 bytes, checksum: e2845997ddb128f2d29a2cabc667da17 (MD5) Previous issue date: 2015
Resumo: A hematopoiese, processo pelo qual a célula-tronco hematopoiética (CTH) dá origem a todas as células do sangue, é regulada através do seu contato com diversos tipos celulares que compõem o estroma da medula óssea, mantendo o balanço entre autorrenovação e diferenciação das CTHs, processos também regulados por vias de sinalização como a via Hedgehog e proteínas reguladoras de citoesqueleto como RhoGTPases. Sendo assim, os objetivos gerais do trabalho foram investigar a via Hedgehog na medula óssea de pacientes com síndromes mielodisplásica (SMD) e a função da ARHGAP21 na autorrenovação das CTH. Através de imunohistoquímica de bióspias de medula óssea de pacientes com SMD em comparação com anemia megaloblástica (usada como controle) observamos o aumento de células marcadas para os ligantes Sonic e Dessert Hedgehog e células positivas para c-Kit nas amostras de SMD. Em seguida, analisamos a expressão gênica dos membros da via Hedgehog em células totais de medula óssea de pacientes SMD e doadores normais. Não houve diferença na expressão de Patched (PTCH) em SMD em comparação com doadores saudáveis, porém quando as amostras são classificadas de acordo com a WHO 2008, observamos aumento significativo de PTCH nos pacientes com <5% de blastos na medula óssea (AR, ARSA e CRDM). As expressões tanto de GLI1 como de SUFU foram reduzidas nos pacientes SMD e no grupo de pacientes com ARSA, CRDM e CRDU quando comparados aos doadores normais. A expressão de SUFU também foi reduzida em grupo de pacientes SMD com > 5% de blastos na medula óssea (AREB-1 e 2). Observamos aumento de 7 vezes na expressão de SMO no grupo de SMD e de 14 vezes no grupo AREB-1 e 2 em comparação com doadores normais. Análises de sobrevida de Cox demonstraram que o aumento na expressão de SMO e a redução na expressão de PTCH são fatores independentes na sobrevida global dos pacientes com SMD. Além disso, confirmamos o aumento da ativação da via Hedgehog em células CD34+ de pacientes com SMD através do aumento da expressão dos alvos da via: GLI1, BMI1 e Nanog. Nossos dados indicam que a via Hedgehog está desregulada na medula óssea dos pacientes com SMD e o possível envolvimento dessa via na progressão da doença. Através do modelo murino Arhgap21+/- estudamos a importância dessa proteína na hematopoiese normal e observamos que esses animais apresentam redução nas diferenciações eritroide e megacariocítica juntamente com aumento da mobilização mielóide. Observamos ainda o aumento na frequência das CTHs de curta e longa duração na medula óssea dos heterozigotos. Esse aumento foi responsável pela maior recuperação no número de neutrófilos após indução de estresse hematopoiético nos animais Arhgap21+/-. Durante o transplante seriado de células de medula óssea observamos menor reconstituição após 4 semanas, juntamente com menor reconstituição a longo prazo nos animais que receberam células dos heterozigotos, sugerindo menor autorrenovação das CTHs nas células com redução da Arhgap21. O nicho medular dos animais Arhgap21+/- demonstrou redução no suporte inicial da hematopoiese o que foi relacionado à maior produção de ROS após irradição subletal dos heterozigotos. Juntos, esses resultados indicam que a ARHGAP21 tem importante papel na hematopoiese normal, pois participa de processos como a diferenciação, mobilização e autorrenovação das CTHs
Abstract: Hematopoiesis is a process by which hematopoietic stem cell (HSC) gives rise to all blood cells and it is regulated by HSC contact with different cell types that compose the bone marrow stroma and maintain the balance between HSC self-renewal and differentiation, processes that are also regulated by signaling pathways such as the Hedgehog and regulatory proteins of the cytoskeleton as RhoGTPases. The overall aims of this work were to investigate the Hedgehog pathway in myelodysplastic syndrome (MDS) bone marrow and the ARHGAP21 role in hematopoiesis. Immunohistochemistry assays revealed that MDS bone marrow biopsies showed increased Sonic and Dessert Hedgehog together with c-kit positive stained cells compared to megaloblastic anemia (used as control).We also analyzed gene expression of the Hedgehog pathway members in total cells from MDS bone marrow and healthy donors. There was no difference in Patched (PTCH) expression in MDS compared to healthy donors, however, when MDS samples were classified according to WHO 2008, we observed a significant increase in PTCH1 expression in MDS patients <5% bone marrow blast (RCUD, RCMD, ARSA). GLI1 and SUFU expressions were significantly reduced in the MDS patients and in the group of patients with RCUD, RCMD, ARSA, when compared to healthy donors. SUFU expression was also decreased in MDS patients > 5% bone marrow blast (RAEB-1 and RAEB-2) compared to controls. We also observed 7-fold increase of SMO transcripts in the MDS group and 14-fold increase in RAEB-1 and RAEB-2. Cox survival analyses showed that increased SMO and decreased PTCH expression were considered as independent factors influencing the survival of these patients. We also confirmed the enhanced Hedgehog activation in CD34+ cells from MDS patients through increased expression of the pathway targets: GLI1, BMI1 and Nanog. Together, our data indicate that the Hedgehog pathway is deregulated in MDS bone marrow and the possible role of that pathway in disease progression. Arhgap21+/- murine model study showed the importance of this protein in normal hematopoiesis as these animals showed alterations in erythroid and megakariocyte differentiation along with increased myeloid mobilization. We also observed increased short and long term HSC frequency in the heterozygous bone marrow. This increase was responsible for enhanced neutrophil reconstitution during induced hematopoietic stress in Arhgap21+/-. Serial bone marrow transplantation assay showed lower chimerism in peripheral blood 4 weeks after the transplant together with lower long term reconstitution in animals who received Arhgap21+/- bone marrow, indicating decreased HSC self-renew from heterozygous cells. Bone marrow niche of Arhgap21+/- animals showed a reduction in initial support hematopoiesis and this result was correlated with the increased ROS production from Arhgap21+/- bone marrow after sublethally irradiation. Taken together, our data indicate that ARHGAP21 has an important role in hematopoiesis regulating process such as differentiation, mobilization and self-renewal of HSC
Doutorado
Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento
Doutora em Fisiopatologia Médica

Orientador: Sara Teresinha Olalla Saad
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-08-26T00:22:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maso_Victor_D.pdf: 2835269 bytes, checksum: f3165794df6b39b4fa01215914687cc9 (MD5) Previous issue date: 2014
Resumo: Síndromes mielodisplásicas (SMD) abrangem um espectro de doenças hematológicas caracterizadas por hematopoese ineficaz e risco de evolução para leucemia mielóide aguda (LMA). As leucemias agudas apresentam altas taxas de mortalidade devido, principalmente, à sua capacidade de resistir a diversos tipos de quimioterápicos, sendo necessário buscar novos compostos capazes de interferirem no crescimento tumoral. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos da quercetina in vitro e in vivo, na linhagem celular P39/Tsugane, a qual foi estabelecida a partir de células leucêmicas do sangue periférico de paciente que possuía síndrome mielodisplásica, como modelo. O desenho experimental compreendeu o tratamento in vitro e in vivo com quercetina das células leucêmicas, verificando-se vias de apoptose, ciclo celular e autofagia. O modelo xenográfico de tumor de células leucêmicas subcutâneo foi utilzado para os ensaios in vivo. A quercetina induziu pronunciada apoptose das células leucêmicas P39, seguida por supressão da expressão de BcL-2, BclxL, Mcl-1, aumento da expressão de Bax e modulação do potencial de membrana mitocondrial com liberação de citocromo c e ativação de caspases. O tratamento com quercetina resultou em retenção das células na fase G1 do ciclo celular, com pronunciada diminuição das proteínas CDK2, CDK6, ciclina D, ciclina E e ciclina A, diminuição na fosforilação de Rb e aumento na expressão de p21 e p27. Quercetina induziu a formação do autofagossomo nas células P39, com ativação de PI3K classe III, Beclina 1, Atg5-Atg12, Atg7, conversão de LC3-I em LC3-II e desfosforilação de Akt e mTOR. A inibição da autofagia induzida por cloroquina juntamente com quercetina viii desencadeou aumento na apoptose, mas não alterou a modulação da fase G1 do ciclo celular induzida por quercetina. As células P39 tratadas com a combinação de quercetina e inibidores seletivos de ERK1/2 e/ou JNK (PD184352 e SP600125, respectivamente) apresentaram diminuição na retenção em fase G1 do ciclo, Este tratamento combinado, entretanto, não alterou a percentagem de células apoptóticas. Além disso, administração in vivo de quercetina reduziu significativamente o volume tumoral em camundongos inoculados com células P39 e confimar os resultados in vitro relacionados com apoptose, autofagia e ciclo celular. Assim, quercetina demonstra uma potente atividade antileucêmica através de sinalizações que causam parada do ciclo celular, apoptose e indução da autofagia. Esta última, por sua vez, parece proteger as células do alto grau de apoptose
Abstract: This study proposes to investigate quercetin antitumor efficacy in vitro and in vivo, using P39 cell line as a model. The experimental design comprised leukemic cells or xenografts of P39 cells, treated in vitro or in vivo, respectively, with quercetin; apoptosis, cell cycle and autophagy activation were then evaluated. Quercetin caused pronounced apoptosis in P39 leukemia cells, followed by Bcl-2, Bcl-xL, Mcl-1 downregulation, Bax upregulation and mitochondrial translocation, triggering cytochrome c release and caspases activation. Quercetin also induced the expression of FasL protein. Furthermore, our results demonstrated an antioxidant activity of quercetin. Quercetin treatment resulted in an increased cell-arrest in G1 phase of the cell cycle, with pronounced decrease in CDK2, CDK6, cyclin D, cyclin E and cyclin A proteins, decreased Rb phosphorylation and increased p21 and p27 expression. Quercetin induced autophagosome formation in P39 cell line, with upregulation of PI3K class III proteins, Beclin-1, Atg5-Atg12, Atg7, conversion of LC3-I to LC3-II, and dephosphorylation of Akt and mTOR. Autophagy inhibition induced by quercetin with chloroquine triggered apoptosis but did not alter quercetin modulation in the G1 phase. P39 cell treatment with a combination of quercetin and selective inhibitors of ERK1/2 and/or JNK (PD184352 or SP600125 respectively), significantly decreased cells in G1 phase, this treatment however did not change the apoptotic cell number. Furthermore, in vivo administration of quercetin significantly reduced tumor volume in P39 xenografts and confirmed in vitro results regarding apoptosis, autophagy and cell cycle arrest
Doutorado
Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento
Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientadores : Irene Lorand-Metze, Carmen Silvia Passos Lima
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-08-02T16:54:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_Elisangela_M.pdf: 23459196 bytes, checksum: e3c3f69e1b6470bb9cfa7570a9a84ff0 (MD5) Previous issue date: 2002
Resumo: Síndromes mielodisplásicas (SMD) são um grupo heterogêneo de doenças clonais caracterizadas por citopenias periféricas persistentes de uma ou mais linhagens e com possibilidade para transformação leucêmica. Níveis aumentados de apoptose nas células precursoras hematopoéticas (células CD34l foram observados em pacientes com SMD de baixo risco (AR e ARSA), sugerindo esse mecanismo como o responsável pela hematopoes e ineficaz nessa doença. A Amifostina (AMF) é considerada um agente citoprotetor, com ação antioxidante, potente estimulador da hematopoese normal e supressor apoptótico nos precursores mielodisplásicos. Analisamos a expressão dos marcadores da apoptose, (Fas e FasL) nas células CD34+ em pacientes com SMD de baixo risco, submetidos ao tratamento com a AMF. Foram estudados 17 pacientes, sendo 11AR e 6 ARSA. A resposta terapêutica em relação ao nível da hemoglobina, ao número de neutrófilos e às plaquetas, aos critérios de inclusão e às respostas foi definida pelo protocolo de tratamento da AMF. Dos 17 pacientes tratados, 10 apresentaram critérios de resposta em pelo menos uma série do hemograma após 2 ciclos de AMF, os quais receberam mais 4 ciclos adicionais. Quatro pacientes (3 não respondedores e um respondedor) apresentaram evolução da SMD (aumento de blastos medulares) durante ou após o tratamento. As atipias celulares na medula óssea (MO) e o número de células CD34+ diminuíram nos pacientes respondedores após o ciclo 2. No grupo dos não respondedores não houve alterações significativas em nenhum desses parâmetros. Os pacientes que responderam à amifostina tinham, antes do tratamento, uma percentagem menor de expressão de Fas e FasL nas células CD34+ e de linfócitos na medula óssea em relação aos que não responderam. A percentagem de linfócitos aumentou ainda mais após o tratamento neste último grupo. Esse resultado sugere que, no grupo que não respondeu à amifostina o sistema imune pode estar impedindo a resposta ao tratamento. Esses resultados favorecem a hipótese de que a resposta à AMF é influenciada pela expressão dos marcadores apoptóticos e/ou pela percentagem de linfócitos na MO. A resposta à AMF não depende apenas da supressão apoptótica. Um seguimento maior de pacientes é necessário para observar a durabilidadede resposta
Abstract: Not informed.
Mestrado
Ciencias Basicas
Mestre em Clinica Medica

Orientador: Mary Luci de Souza Queiros
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-23T19:13:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bincoletto_Claudia_D.pdf: 4247184 bytes, checksum: a0026bf456d6bf0cd05ab5acf14add45 (MD5) Previous issue date: 1998
Resumo: Neste trabalho estudamos o crescimento e diferenciação dos precursores hematopoiéticos da medula óssea, na ausência de fatores estimuladores de colônias (autoproljferação) em vinte e oito pacientes com Leucemia Mielóide Aguda (LMA), doze pacientes com Síndrome Mielodisplásica (SMD) e dezenove controles (indivíduos normais). Os nossos resultados demonstraram que pacientes com LMA e SMD apresentam um aumento autócrino no número de colônias hematopoiéticas que é significativamente superior ao observado em indivíduos normais (p = 0.001). Além disso, verificamos que a presença de autoproliferação celular está associada a um mau prognóstico nas leucemias agudas, pois os pacientes com autoproliferação celular (n = 15) apresentaram uma sobrevida menor em relação aos pacientes com ausência de capacidade autoproliferativa (n = 13), (p = 0.01). O estudo da sobrevida celular, realizado através da caracterização morfológica por microscopia óptica de células apoptóticas, revelou um baixo índice de células apoptóticas em pacientes com LMA (n = 18, P = 0.001) em relação aos controles. Por outro lado, pacientes com SMD apresentaram um alto índice de apoptose celular quando comparado aos indivíduos normais (n = 11, p = 0.001). Em relação à expressão do proto-oncogene bcl-2, verificamos novamente resultados opostos entre os pacientes com LMA e SMD, pois observamos um alto índice de expressão do bcl-2 em células mononucleares de pacientes com LMA (n = 28, P = 0.002) em relação aos controles, e um baixo índice de expressão do proto-oncogene bcl-2 em células mono nucleares de pacientes com SMD (n = 15, p = 0.002). Além disso, verificamos uma correlação linear negativa entre a expressão do proto-oncogene bcl-2 e apoptose celular em pacientes com LMA (rs = - 0.664; P < 0.001). A elevada expressão do bcl-2 verificada nos pacientes com LMA também indica uma interferência deste proto-oncogene na resposta celular à quimioterapia, pois sua expressão estava significativamente maior em pacientes refratário& à quimioterapia (p = 0.03). Sendo assim, os resultados obtidos neste trabalho contribuem para uma melhor compreensão dos mecanismos envolvidos no processo de resistência celular à quimioterapia nos pacientes com LMA e também ajudam a esclarecer, pelo menos em parte, alguns processos envolvidos na hematopoiese desordenada nos casos de SMD
Abstract: In this work we studied the growth and differentiation of early bone marrow progenitor cells in the absence of exogenous growth factors (autonomous proliferation), the bcl-2 expression and the number of apoptotic cells in mononuclear bone marrow cells from patients with confirmed diagnosis of Acute Myeloid Leukaemia (AML) and Myelodysplastic Syndrome (MDS). Bone marrow cells from normal individuals were used as controls. We observed an increased percentage of bcl-2 expression on mononuclear bone marrow cells from AML patients in relation to controls (p = 0.002). Accordingly, the number of apoptotic cells was reduced (p = 0.001) and there was a negative correlation between bcl-2 expression and the number of apoptotic cells (r= - 0.664, P < 0.001) in these patients. In addition, bcl-2 expression was significantly increased in the chemotherapy resistant group in relation to the responsive group (p = 0.03). Survival in the group of AML patients with autonomous proliferation was reduced (p = 0.01). These results suggest that a high bcl-2 expression and the presence of autonomous proliferation are related with a poor prognosis in AML. In the MDS patients, the autonomous proliferation and the percentage of apoptotic cells were also significantly greater when compared to controls (p = 0.001). However, bcl-2 expression was significantly lower on mononuclear bone marrow cells from MDS patients In relation to normal individuals (p = 0.002 - Wilcoxon). These results suggest that the autonomous proliferation observed in these patients is counteracted by the high range of cell death which is probably related to the lower bcl-2 expression
Doutorado
Doutor em Ciências Biológicas

As síndromes mielodisplásicas (SMD) se caracterizam por terem uma hematopoese displásica, citopenias e pelo risco de progressão para leucemia mielóide aguda. O diagnóstico baseia-se na clínica e nos achados citomorfológicos da medula óssea (MO) e citogenéticos. Na fase inicial ou quando a MO é hipocelular o diagnóstico é difícil e a citogenética frequentemente é normal. A imunofenotipagem (IMF) tem sido cada vez mais utilizada nos casos de SMD em adultos e pouco explorada na SMD pediátrica. Os nossos objetivos foram: estudar os casos de SMD e doenças correlatas (LMA relacionada à SMD: LMA-rMD; leucemia mielomonocítica crônica: LMMC e leucemia mielomonocítica juvenil: LMMJ) em adultos e crianças, associando os dados clínicos e laboratoriais aos obtidos pela IMF, que utilizou um painel de anticorpos monoclonais para as várias linhagens medulares. No período compreendido entre 2000 e 2010 foram estudados 87 pacientes (64 adultos e 23crianças) oriundos do HUPE/UERJ e IPPMG/UFRJ e 46 controles (23 adultos e 20 crianças). Todos os doentes realizaram mielograma, biópsia óssea, citogenética, citoquímica e estudo imunofenotípico. Segundo os critérios da OMS 50 adultos foram classificados como SMD, 11 como LMA-rMD e 3 LMMC. Entre as crianças 18 eram SMD, 2 LMA e 3 LMMJ. Os pacientes adultos com SMD foram divididos em alto risco (n = 9; AREB-1 e AREB-2) e baixo risco (n=41; CRDU, CRDM, CRDM-SA, SMD-N e SMD-5q-). As crianças com SMD em CR (n=16) e AREB (n = 2). Anormalidades clonais recorrentes foram encontradas em 22 pacientes adultos e em 7 crianças. Na análise da IMF foi utilizada a metodologia da curva ROC para a determinação dos valores de ponto de corte a fim de identificar os resultados anormais dos anticorpos monoclonais nos pacientes e nos controles, permitindo determinar a sensibilidade e especificidade desses em cada linhagem. A IMF foi adequada para a análise em todos os pacientes e 3 ou mais anormalidades foram encontradas. A associação da IMF aumentou a sensibilidade da análise morfológica na linhagem eritróide de 70 para 97% nos adultos e de 59 para 86% nas crianças; na linhagem granulocítica de 53 para 98% nos adultos e de 50 para 100% nas crianças. Nos monócitos, onde a morfologia não foi informativa, mostrou uma sensibilidade de 86% nos adultos e 91% nas crianças. Enquanto que na linhagem megacariocítica, não analisada pela IMF, a morfologia mostrou uma sensibilidade de 95% nos adultos e 91% nas crianças. Na população de blastos foi expressiva a ausência de precursores linfóide B (em 92% dos adultos e em 61% das crianças). Os resultados observados nas crianças com SMD foram semelhantes aos encontrados nos adultos. Em conclusão, nossos resultados mostraram que a IMF é um método complementar ao diagnóstico da SMD e doenças correlatas tanto em adultos quanto em crianças podendo contribuir para o reconhecimento rápido e precoce dessas enfermidades, devendo ser incorporado aos procedimentos de rotina diagnóstica.
As síndromes mielodisplásicas (SMD) se caracterizam por terem uma hematopoese displásica, citopenias e pelo risco de progressão para leucemia mielóide aguda. O diagnóstico baseia-se na clínica e nos achados citomorfológicos da medula óssea (MO) e citogenéticos. Na fase inicial ou quando a MO é hipocelular o diagnóstico é difícil e a citogenética frequentemente é normal. A imunofenotipagem (IMF) tem sido cada vez mais utilizada nos casos de SMD em adultos e pouco explorada na SMD pediátrica. Os nossos objetivos foram: estudar os casos de SMD e doenças correlatas (LMA relacionada à SMD: LMA-rMD; leucemia mielomonocítica crônica: LMMC e leucemia mielomonocítica juvenil: LMMJ) em adultos e crianças, associando os dados clínicos e laboratoriais aos obtidos pela IMF, que utilizou um painel de anticorpos monoclonais para as várias linhagens medulares. No período compreendido entre 2000 e 2010 foram estudados 87 pacientes (64 adultos e 23crianças) oriundos do HUPE/UERJ e IPPMG/UFRJ e 46 controles (23 adultos e 20 crianças). Todos os doentes realizaram mielograma, biópsia óssea, citogenética, citoquímica e estudo imunofenotípico. Segundo os critérios da OMS 50 adultos foram classificados como SMD, 11 como LMA-rMD e 3 LMMC. Entre as crianças 18 eram SMD, 2 LMA e 3 LMMJ. Os pacientes adultos com SMD foram divididos em alto risco (n = 9; AREB-1 e AREB-2) e baixo risco (n=41; CRDU, CRDM, CRDM-SA, SMD-N e SMD-5q-). As crianças com SMD em CR (n=16) e AREB (n = 2). Anormalidades clonais recorrentes foram encontradas em 22 pacientes adultos e em 7 crianças. Na análise da IMF foi utilizada a metodologia da curva ROC para a determinação dos valores de ponto de corte a fim de identificar os resultados anormais dos anticorpos monoclonais nos pacientes e nos controles, permitindo determinar a sensibilidade e especificidade desses em cada linhagem. A IMF foi adequada para a análise em todos os pacientes e 3 ou mais anormalidades foram encontradas. A associação da IMF aumentou a sensibilidade da análise morfológica na linhagem eritróide de 70 para 97% nos adultos e de 59 para 86% nas crianças; na linhagem granulocítica de 53 para 98% nos adultos e de 50 para 100% nas crianças. Nos monócitos, onde a morfologia não foi informativa, mostrou uma sensibilidade de 86% nos adultos e 91% nas crianças. Enquanto que na linhagem megacariocítica, não analisada pela IMF, a morfologia mostrou uma sensibilidade de 95% nos adultos e 91% nas crianças. Na população de blastos foi expressiva a ausência de precursores linfóide B (em 92% dos adultos e em 61% das crianças). Os resultados observados nas crianças com SMD foram semelhantes aos encontrados nos adultos. Em conclusão, nossos resultados mostraram que a IMF é um método complementar ao diagnóstico da SMD e doenças correlatas tanto em adultos quanto em crianças podendo contribuir para o reconhecimento rápido e precoce dessas enfermidades, devendo ser incorporado aos procedimentos de rotina diagnóstica.

The myelodysplastic syndromes are a group of diseases characterized by impairment in hemopoiesis and variable tendency to progress to acute myeloid leukemia. Recent data regarding the MDS pathogenesis highlight the presence of alterations in several compartments of DNA replication, cell cycle control and genes expression machinery. As previously reported miRNA families are involved in MDS pathogenesis. Also, different miRNAs have been characterized in AML and MDS and allow the identification of prognostic risk categories that are independent from the revised international prognostic scoring system (R-IPSS). Herein we report the results and the possible scenarios regarding pathogenesis and disease progression secondary the evidence of large gene network derangement following miRNA evaluation in a cohort of patients.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior
Myelodysplastic syndrome (MDS) and aplastic anemia (AA) are two of the hematological disorders which present peripheral cytopenias, with extensive clinical manifestations that vary from slight anemia to severe pancytopenia; the latter requiring continuous transfusional reposition of red cell (RC) and platelet concentrates (PC), which can induce aloimunization in patients. Such patients can develop a post-transfusional refractory state, rendering further transfusions unviable. The objective of the present study was to investigate the incidence of anti-HLA antibodies in politransfused patients, and correlate the aloimmunity levels to the clinical profiles of MDS and AA patients. A total of 110 politransfused patients (70 with MDS, and 40 with AA) have been included in the study, with the MDS patients being subclassified into four clinical diagnostic categories: refractory anemia (RA), ringed-sideroblastic refractory anemia (RSRA), refractory anemia with excess blasts (RAEB) and refractory anemia with excess blasts in transformation (RAEB-t). Blood serum samples from these patients were treated with dithiothreitol for the detection of anti-HLA class I antibodies, using the complement-dependent cytotoxicity test (CDC), in a panel of lymphocytes constituted on the basis of the frequency of HLA antigens in our population (PRA). The results showed that a larger number of AA patients were aloimmunized than MDS patients (45% v 28.6%), with the aloreactivity being higher in AA patients who received higher mean transfusions of PC, than in MDS patients who received higher average number of EC transfusions. The degree of aloimmunization was different in the two disorders, and was generally related to: the number of transfusions received, the application of un-deleukocytised PC and EC, and the type of immunosuppressant drugs used in treatment [Cyclosporin (CsA) and/or antiglobulin (ALG) therapy significantly reduced aloimmunization, but corticoids alone were not sufficient]. The highest degree of aloimmunity (Grade 4) was observed only in MDS females, particularly in those who had multiple births. Persistent IgG was also associated with Grade 4 aloimmunity. These results reveal that significant numbers of MDS and AA patients, if politransfused with un-deleukocytised PC and EC and un-treated with immunosuppressants CsA and/or ALG, can develop anti-HLA antibodies and become refractory to further transfusions. Such aloimmunized patients can also become potentially unsuited to receive bone marrow transplants from HLA-matched donors.
As SÃndromes MielodisplÃsticas e Anemia AplÃstica sÃo desordens hematolÃgicas que apresentam citopenias perifÃricas, com desenvolvimento de caracterÃsticas clÃnicas extensas, com manifestaÃÃes clÃnicas variÃveis que vÃo desde uma leve anemia atà uma pancitopenia severa, necessitando, nos Ãltimos casos, de reposiÃÃo transfusional contÃnua de concentrados de hemÃcias (CH) e de plaquetas (CP), tornando-os alvos à aloimunizaÃÃo pÃs-transfusional e desenvolvimento do estado de refratariedade Ãs transfusÃes. Este estudo objetivou determinar a incidÃncia de anticorpos anti-HLA de classe I em pacientes politransfundidos e correlacionar a aloimunidade ao perfil clÃnico dos pacientes de SMD e AA. 110 pacientes foram incluÃdos nesta pesquisa (70 portadores das SMD e 40 de AA), com os portadores das SMD classificados em quatro sub-grupos clÃnicos: anemia refratÃria (AR), anemia refratÃria sideroblÃstica em anel (ARSA), anemia refratÃria com excesso de blastos (AREB) e anemia refratÃria com excesso de blastos em transformaÃÃo (AREB-t). Soros dos pacientes foram tratados com Dithiothreitol (DTT) para a pesquisa de Acs contra os Ag HLA de classe I, usando a tÃcnica de âcitotoxicidade dependente do complementoâ (CDC), no painel de linfÃcitos baseado na frequÃncia dos Ags HLA da nossa populaÃÃo (PRA). Os resultados demonstraram que os pacientes portadores das SMD desenvolveram um menor grau de aloimunizaÃÃo (28,6%), que os pacientes de AA (45%). A alorreatividade foi mais freqÃente nos portadores de AA que tinham recebido maiores mÃdias transfusionais de CP, em relaÃÃo aos pacientes de SMD que receberam maior nÃmero de transfusÃes com CH. O grau de alorreatividade se manifestou diferente nestas duas doenÃas e, de forma geral, se relacionou com: o maior nÃmero mÃdio de transfusÃes, a aplicaÃÃo de preparaÃÃes nÃo desleucotizadas de CH e CP e o uso de imunossupressores (ciclosporina e/ou soros anti-leucocitÃrios). Somente o uso de corticÃide nÃo foi suficiente para reduzir a aloimunizaÃÃo. O mais alto grau de alorreatividade (PadrÃo 4) nas SMD foi evidenciado somente em mulheres, principalmente nas multÃparas. IgG persistente esteve mais presente no PadrÃo 4. Estes dados revelam que alguns pacientes das SMD e AA podem desenvolver anticorpos anti-HLA, se forem politransfundidos com hemoconcentrados nÃo desleucotizados e sem o tratamento com os imunossupressores CsA e/ou GAL. Tal alorreatividade poderà tornar o paciente refratÃrio Ãs futuras transfusÃes e dificultar, em princÃpio, recebimento do transplante de medula Ãssea de doadores HLA compatÃveis.

Submitted by Fernanda de Souza Monteiro (f.monteiro@unesp.br) on 2018-08-15T01:29:40Z No. of bitstreams: 1 FernandaMonteiroTESE.pdf: 1707798 bytes, checksum: 6902254db3112b853eeae6f8472782b4 (MD5)
Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 01) Falta a FICHA CATALOGRÁFICA (Obrigatório pela ABNT NBR14724) Problema 02) Como você recebeu financiamento da CAPES, o nome dela deve constar também na FOLHA DE APROVAÇÃO. Problema 03) A ordem correta das páginas pré-textuais (capa, folha de rosto, ficha catalográfica, folha de aprovação, dedicatória, agradecimentos, epígrafe, resumo na língua vernácula, resumo em língua estrangeira, listas de ilustrações, de tabelas, de abreviaturas, de siglas e de símbolos e sumário) Problema 04) A página 65 está em branco, o arquivo não pode conter páginas em branco. Problema 05) A paginação deve ser sequencial, iniciando a contagem na folha de rosto e mostrando o número a partir da introdução, a ficha catalográfica ficará após a folha de rosto e não deverá ser contada. OBS:-Estou encaminhando via e-mail o template/modelo das páginas pré-textuais para que você possa fazer as correções, sugerimos que siga este modelo pois ele contempla as normas da ABNT Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Agradecemos a compreensão. on 2018-08-15T12:18:38Z (GMT)
Submitted by Fernanda de Souza Monteiro (f.monteiro@unesp.br) on 2018-08-21T11:36:28Z No. of bitstreams: 1 FernandaMonteiroTESE.pdf: 1707798 bytes, checksum: 6902254db3112b853eeae6f8472782b4 (MD5)
Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 01) Falta a FICHA CATALOGRÁFICA (Obrigatório pela ABNT NBR14724) Problema 02) Como você recebeu financiamento da CAPES, o nome dela deve constar também na FOLHA DE APROVAÇÃO. Problema 03) A ordem correta das páginas pré-textuais (capa, folha de rosto, ficha catalográfica, folha de aprovação, dedicatória, agradecimentos, epígrafe, resumo na língua vernácula, resumo em língua estrangeira, listas de ilustrações, de tabelas, de abreviaturas, de siglas e de símbolos e sumário) Problema 04) A página 65 está em branco, o arquivo não pode conter páginas em branco. Problema 05) A paginação deve ser sequencial, iniciando a contagem na folha de rosto e mostrando o número a partir da introdução, a ficha catalográfica ficará após a folha de rosto e não deverá ser contada. OBS:-Estou encaminhando via e-mail o template/modelo das páginas pré-textuais para que você possa fazer as correções, sugerimos que siga este modelo pois ele contempla as normas da ABNT Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Agradecemos a compreensão. on 2018-08-21T11:47:18Z (GMT)
Submitted by Fernanda de Souza Monteiro (f.monteiro@unesp.br) on 2018-08-28T15:24:56Z No. of bitstreams: 1 FernandaMonteiroTESE.pdf: 1707798 bytes, checksum: 6902254db3112b853eeae6f8472782b4 (MD5)
Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 01) Falta a FICHA CATALOGRÁFICA (Obrigatório pela ABNT NBR14724) Problema 02) Como você recebeu financiamento da CAPES, o nome dela deve constar também na FOLHA DE APROVAÇÃO. Problema 03) A ordem correta das páginas pré-textuais (capa, folha de rosto, ficha catalográfica, folha de aprovação, dedicatória, agradecimentos, epígrafe, resumo na língua vernácula, resumo em língua estrangeira, listas de ilustrações, de tabelas, de abreviaturas, de siglas e de símbolos e sumário) Problema 04) A página 65 está em branco, o arquivo não pode conter páginas em branco. Problema 05) A paginação deve ser sequencial, iniciando a contagem na folha de rosto e mostrando o número a partir da introdução, a ficha catalográfica ficará após a folha de rosto e não deverá ser contada. Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Sua submissão será rejeitada para que você possa fazer as correções. Agradecemos a compreensão. on 2018-08-28T19:46:58Z (GMT)
Submitted by Fernanda de Souza Monteiro (f.monteiro@unesp.br) on 2018-09-25T16:14:04Z No. of bitstreams: 1 FernandaTESE correção 18.09.18.pdf: 1688049 bytes, checksum: 425632850484dc8bc0111fed0b6e427c (MD5)
Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2018-09-26T13:06:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 monteiro_fs_dr_sjrp.pdf: 4717252 bytes, checksum: ba2c67ffbe5c027002b90049ebbbfe2c (MD5)
Made available in DSpace on 2018-09-26T13:06:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 monteiro_fs_dr_sjrp.pdf: 4717252 bytes, checksum: ba2c67ffbe5c027002b90049ebbbfe2c (MD5) Previous issue date: 2018-05-07
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Síndromes Mielodisplásicas (SMDs) é a denominação de um grupo de doenças neoplásicas clonais das células hematopoéticas, mais frequentemente observadas em idosos, caracterizadas por citopenias, displasia, hematopoese ineficaz e risco elevado para leucemia mielóide aguda (LMA). Citopenia(s) persistente(s), por mais de seis meses, e ausência de critérios diagnósticos para SMD, caracteriza a Citopenia Idiopática de Significado Indeterminado (ICUS). ICUS foi definida recentemente e é pouco conhecida quanto aos fatores etiológicos. Já as SMDs são consideradas protótipos de doenças epigenéticas, uma vez que distúrbios na metilação de alguns genes que regulam proliferação e diferenciação celular têm sido considerados fatores causais. O gene SOX17, por exemplo, é um supressor de tumor expresso em vários tecidos e alterações no seu padrão de metilação já foram observadas em tumores sólidos e neoplasias hematológicas, entretanto, foram pouco estudadas nas SMDs e não há descrições de estudos em ICUS. Do mesmo modo, alguns microRNAs vem sendo utilizados como marcadores moleculares para diagnóstico e prognóstico para diversas anormalidades hematológicas, mas seu papel na etiologia e desenvolvimento das SMDs também é pouco conhecido. Neste contexto, este estudo propos investigar o padrão de metilação do gene SOX17 por MSP-PCR em células da medula óssea (MO) de pacientes com SMD e ICUS ao diagnóstico, e analisar alterações no padrão de expressão de microRNAs por RT-PCR em células da MO de adultos e de crianças com SMD. Em adultos foram investigados os microRNAs miR126, miR29a, miR20a, miR181a, miR19b, miR21, miR155, miR146, miR22, miR193, miR26a e miR29b, e em crianças, os microRNAs miR193, miR29b miR22 e miR26a. O padrão de metilação do gene SOX17 foi analisado em 26 pacientes com SMD e em 15 pacientes com ICUS. A hipermetilação da região promotora do gene foi identificada em 57,7% dos indivíduos com SMD e em 53,3% daqueles com ICUS, sugerindo que o silenciamento do SOX17 pode ser um evento frequente e participar do curso inicial destas doenças. A análise dos microRNAs foi realizada em 55 pacientes adultos com SMD e em oito controles saudáveis. Dos 12 microRNAs testados, sete apresentaram padrão de expressão anormal em relação ao grupo controle, e dos quatro micros investigados em 28 pacientes com SMD infantil, os micros, miR193, miR29b apresentaram expressão diminuída em relação ao grupo controle em aproximadamente 70% dos pacientes analisados e a expressão do miR22 foi maior em mais da metade das amostras analisadas, enquanto uma expressão diminuída do miR26a foi observada em 28 (100%) dos pacientes analisados. Considerando-se que os microRNAs estudados podem atuar como reguladores da hematopoese, os dados revelam a importância dos microRNAS na etiologia das SMDs, sugerindo esses como possíveis biomarcadores diagnósticos para a SMD adulto e infantil.
Myelodysplastic syndromes (MDS) denominates a group of neoplastic diseases of the hematopoietic cells, most commonly observed in elderly patients, characterized by cytopenias, dysplasia, ineffective hematopoiesis and high risk of acute myeloid leukemia (AML). Persistent cytopenia (s), for more than six months, and absence of diagnostic criteria for MDS, characterizes Idiopathic Cytopenia of Undetermined Significance (ICUS). ICUS has been recently defined, and little is known about its etiological factors. The MDSs are considered as prototypes of epigenetic diseases, due to the fact that methylation disorders of some genes that regulate cell proliferation and differentiation have been considered as causal factors. The SOX17 gene, for example, is a tumor suppressor expressed in several tissues and changes in its methylation pattern have already been observed in solid tumors and hematological malignancy, however, these changes have been little studied in MDS and there are no descriptions of studies in ICUS. Similarly, some microRNAs are being used as molecular markers for diagnosis and prognosis for various hematological abnormalities, but its role in the etiology and development of MDS is also poorly understood. In this context, this study aimed to investigate the methylation pattern of the SOX17 gene by MSP-PCR in bone marrow (BM) cells of patients diagnosed with MDS and ICUS, and to analyze changes in the expression pattern of microRNAs by RT-PCR in cells of BM for adults and children with MDS. In adults, the microRNAs miR29a, miR20a, miR181a, miR19b, miR21, miR155, miR146, miR22, miR193, miR26a and miR29b were tested, and in children, microRNAs miR193, miR29b miR22 and miR26a. The methylation pattern of the SOX17 gene was analyzed in 26 patients with MDS and in 15 patients with ICUS. The hypermethylation of the SOX17 promoter region was identified in 57.7% of the individuals with MDS and in 53.3% of those with ICUS, suggesting that the silencing of SOX17 can be a frequent event and participate in the initial course of these diseases. MicroRNAs were analyzed in 55 adult MDS patients and in 8 healthy controls. Among the 12 microRNAs tested in MDS adults, seven presented an abnormal expression pattern in relation to the control group, and of the four microRNAs investigated in 28 children with MDS, miR193 and miR29b presented decreased expression in relation to the control group in approximately 70% of the analyzed patients and miR22 expression was higher in more than half of the analyzed samples, whereas diminished expression of miR26a was observed in 28 (100%) of the patients analyzed. Considering that the studied microRNAs may act as regulators of hematopoese, the data reveal the importance of microRNAS in the etiology of MDS, suggesting these as possible diagnostic biomarkers and prognostic of adult and infant MDS.
88881.132788/2016-01

Introdução: Entre os anos de 2008 e 2016, a Organização Mundial da Saúde (OMS) publicou revisões sobre a classificação de neoplasias mieloides no livro WHO Classification of Tumors, que estabelece uma abordagem de achados moleculares, citogenéticos e morfológicos de diversas patologias. Essas revisões abordam mudanças recentes na perspectiva de diagnóstico e prognóstico de doenças hematológicas. A leucemia mieloide aguda (LMA), em específico, ocorre quando as células tronco mieloides sofrem alterações genéticas, formando blastos que não amadurecem e que se multiplicam descontroladamente. Objetivos: Analisar as diferenças entre as revisões de 2008 e 2016 a respeito da leucemia mieloide aguda, a fim de determinar o avanço científico apresentado nessa área. Materiais e métodos: Análise de comparação entre as revisões de classificação dos tumores da OMS de 2008 e 2016, com foco na leucemia mielóide aguda. Resultados: Entre as revisões de 2008 e de 2016, a OMS manteve foco em alterações citogenéticas e moleculares dos subgrupos da LMA. A classificação de alguns genes novos implicou em discussões sobre prognóstico. Antes considerava-se que a mutação em apenas um alelo do gene CEBPA já indicava melhor prognóstico, entretanto, agora apontam que somente há melhor prognóstico quando existem mutações nos dois alelos. Ademais, a classificação das LMA com mielodisplasia associada foi refinada, determinando que a presença de displasia de múltiplas linhagens não é suficiente para classificar como LMA com mielodisplasia associada, desde que presentes as mutações NPM1 ou bialélica em CEBPA. Não existia em 2008 e foi criada em 2016 uma categoria provisória para as LMA com alteração BCR-ABL1, para reconhecer casos que podem beneficiar-se da terapia com inibidores da tirosina quinase. De acordo com a revisão de 2016, dados preliminares sugerem que deleções em genes de receptores antigênicos (IGH, TCR), IKZF1 e/ou CDKN2A indicam diagnóstico de uma LMA nova, ao invés de uma LMC em crise blástica. Conclusão: Em decorrência do avanço na área de genética e biologia molecular, é possível observar que não existem mais questionamentos sobre morfologia e fenotipagem. Entramos na era da citogenética molecular e as classificações já demonstram essa mudança nos métodos diagnósticos, levando a redefinições diagnósticas, prognósticas e terapêuticas.

Introdução: A doença falciforme (DF) é um espectro de condições hematológicas caracterizado por alterações a nível molecular e estrutural da hemoglobina, implicando sua polimerização e alteração morfológica da hemácia quando há hipóxia. Isso causa obstruções no fluxo sanguíneo, implicando dor intensa e danos perfusionais. Está, portanto, associada à alta taxa de morbi-mortalidade. A hidroxiureia (HU) é o único tratamento licenciado para DF. Devido à capacidade de aumentar níveis de hemoglobina fetal (HbF), tem sido associada a melhora significativa de sintomas, principalmente dor. Objetivos: Pesquisar, através de uma revisão sistemática, a eficácia e os efeitos adversos da HU em falcêmicos. Material e Métodos: Revisão de literatura nas bases de dados MedLine e SciELO, em janeiro/2021. Os descritores usados foram “Hydrea”, “HbS Disease”, “Hematology” e variações encontradas no MeSH; já os filtros, “free full text”, “meta-analysis”, “english” e “10 years”. Foram encontrados 9 estudos e 6 fizeram parte do escopo deste trabalho. A escala PRISMA foi utilizada objetivando melhorar a revisão. Resultados: A HU mostrou-se eficaz na redução da frequência de episódios álgicos e outras complicações agudas, taxas de STA e transfusão, internações hospitalares, marcadores hemolíticos, aumento da hemoglobina basal. Indivíduos tratados com HU obtiveram taxa de sobrevida maior, comparando-se aos que não usaram; além de prevenir eventos neurológicos graves e ser bem tolerada. O uso da HU requer monitoramento, pois são reconhecidos efeitos adversos como erupções cutâneas, cefaleia, efeitos gastrointestinais e teratogênicos, neutropenia, plaquetopenia, anemia, mielotoxicidade e mielodisplasia. A HU não evitou sequestro esplênico/hepático. As evidências são inconsistentes quanto aos benefícios e riscos a longo prazo, dose recomendada, prejuízos na fertilidade masculina e uso em indivíduos HbSC. Conclusão: Sobretudo devido à ação nos níveis de HbF, é notória a eficácia e segurança da HU na expectativa e qualidade de vida na DF. A HU é considerada um agente modificador de doença.

Introdução: As síndromes mielodisplásicas (SMD) são resultado de alteração em um ou mais genes que controlam o desenvolvimento de células sanguíneas, causando displasia em pelo menos uma linhagem celular. A SMD afeta em sua maioria os idosos, podendo variar de um impacto mínimo ou se estender a um curso muito agressivo com progressão para leucemia mielóide aguda (LMA), que se dá através de mutações em determinados genes, em especial as que envolvem cariótipo complexo. Objetivos: Discutir, com base na literatura utilizada, a relação causal entre a SMD e LMA. Material e métodos: Foi realizada uma revisão integrativa da literatura de artigos das plataformas Scielo, PubMed e Nature, na busca por análise, registro e interpretação acerca dos resultados visando artigos de relevância para o resumo. Resultados: Há diferenças no padrão de progressão da SMD para LMA. Isso ocorre devido às diferentes mutações no curso da mielodisplasia. Assim, SMDs com mutações somáticas heterozigotas no gene SF3B1 (splicing fator 3b, subunit 1) apresentam uma característica de progressão lenta e crônica, raramente evoluindo para LMA. Quando ocorre a progressão, ela se deve a aquisições ou expansões de mutações somáticas com inativação dos genes RUNX1 ou EZH2. Em contrapartida, as SMDs com combinações de genes mutados, sobretudo os genes codificadores de splicing de RNA SRSF2 e U2AF1, evoluem com grande presença de blastos desde o início da doença e progridem, frequentemente, para LMA, quando a contagem de blastos na medula óssea supera 20%. Conclusão: Apesar de raros casos de SMD com mutações no gene SF3B1 evoluírem para LMA, outros genes comprovaram a relação causal entre SMD e LMA. Translocações envolvidas na patogênese da LMA também estão associadas à SMD, evidenciando um padrão de continuidade entre as doenças.

Introdução: a síndrome de Seckel é uma doença genética autossômica recessiva rara caracterizada por nanismo, microcefalia com deficiência mental e uma aparência facial de “cabeça de pássaro”. Objetivo: descrevemos aqui uma paciente com diagnóstico de síndrome de Seckel, apresentando alterações hematológicas. Material e métodos: foi feito o relato do caso junto com uma revisão da literatura. Os achados clínicos e os resultados de exames complementares foram obtidos através da revisão do prontuário da paciente. Os descritores Mesh e a base de dados PubMed/MEDLINE foram utilizadas para a revisão da literatura. Estudos em idiomas português/inglês e publicados após 2007 foram incluídos no trabalho, cujo tempo de montagem foi ao redor de 1 mês. Resultados: a paciente, uma menina, nasceu de parto cesáreo, com 8 meses de gestação, pesando 1220 gramas. Ela chegou a apresentar episódios de crises convulsivas e evoluiu com atraso no desenvolvimento neuropsicomotor. A tomografia computadorizada de crânio evidenciou atrofia cortical e microcefalia. A criança foi hospitalizada aos 3 anos de idade por apresentar quadro de anemia importante, sugestiva de anemia de Fanconi. A pesquisa complementar de quebras cromossômicas induzidas pela mitomicina-C foi normal. O raio-X de mãos e punhos para idade óssea, realizado aos 2 anos, mostrou uma idade óssea de 1 ano e 2 meses (atraso >2 desvios-padrões). Ela foi submetida a uma cirurgia de correção de luxação congênita do quadril com 6 anos de idade. No exame físico, com 10 anos e 8 meses, a paciente apresentava altura de 112 cm (média para 3 anos e 11 meses), microcefalia absoluta e relativa, face pequena com nariz proeminente e micrognatia, prega palmar única e clinodactilia de quintos dedos das mãos. O seu cariótipo foi feminino normal. Conclusão: a soma dos achados foi compatível com o diagnóstico de síndrome de Seckel. A chance de recorrência nestes casos é de 25%. Chama a atenção que anormalidades hematológicas, incluindo anemia, mielodisplasia e leucemia mieloide aguda, também têm sido relatadas em alguns casos desta síndrome.