Thèses : « Hydrolysats de protéines – Purification »

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Kobbi, Sabrine. « Purification de la RuBisCO à partir de la Luzerne, hydrolyse enzymatique, identification, structure-fonction des peptides bioactifs et leur valorisation dans des produits alimentaires ». Electronic Thesis or Diss., Lille 1, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL10201.

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Résumé :

La luzerne est la plante la plus cultivée dans le monde et est une excellente source de protéines. Cependant, la RuBisCO a montré le plus d'intérêt. Cette protéine a été étiquetée comme la protéine la plus abondante sur terre, elle constitue environ 65% (p/p) des protéines solubles de la luzerne. Dans ce travail une nouvelle méthode a été mise en place pour la purification de la RuBisCO à partir de la poudre de luzerne 10% (p/v) en utilisant deux solvants différents et l’effet du pH. Premièrement, des méthodes d’analyse qualitative et quantitative ont été utilisées pour confirmer l’efficacité de la méthode de purification qui pourrait remplacer certains procédés industriels classiques. Puis, une hydrolyse pepsique a été réalisée sur la RuBisCO purifiée qui aboutit à une forte population peptidique bioactive. Les peptides finaux de 24h d’hydrolyse ont montré une meilleure activité antibactérienne ou antioxydante par rapport aux autres hydrolysats. 9 nouveaux peptides antibactériens ont été identifiés et caractérisés par SM et qui ont un CMI entre 2-6mM contre quatre espèces de bactéries: B subtilis, E coli, L innocua et M luteus. En plus, des fractions peptidiques antioxydantes ont également été identifiées dans ce travail. Et leur activité antioxydante a été évaluée par différents tests in vitro et in vivo sur l’huile de Colza. Enfin, l’addition du peptide RDRFL issu de l’hydrolyse pepsique de la RuBisCO a montré un effet positif sur la prolongation de la durée de conservation de la viande hachée et de la purée de tomate
Alfalfa is an excellent source of protein. However, RuBisCO proteins showed most interest. Indeed, this protein has been labelled the most abundant on earth; it constitutes about 65% (w/w) of soluble leaf protein of Alfalfa. In this work, a new method was introduced for the purification of RuBisCO from alfalfa powder 10% (w /v), using two different solvents and pH effect. In a first step, the performance of the proposed RuBisCO recovery method was evaluated through qualitative and quantitative analysis and the results obtained showed that this new method could replace some conventional industrial processes. In a second step, enzymatic hydrolysis was carried out on the purified RuBisCO, which resulted in a large bioactive peptide population. The final peptides after 24h of hydrolysis showed better antibacterial or antioxidant activity compared to the other peptide hydrolysates. Nine new antibacterial peptides have been identified and characterized by MS and have a MIC of 2-6 mM against four species of bacteria: B subtilis, E coli, L innocua and M luteus. In addition, antioxidants peptide fractions were identified in this work, their antioxidant activity was evaluated by various in vitro and in vivo tests on oil of Colza. Finally, the addition of peptide RDRFL derived from the peptic hydrolysis of RuBisCO has a positive effect on the prolongation of the shelf life of minced meat and of tomato puree

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Tauzin, Jérôme. « Biofonctionnalités de peptides issus de caséines αs bovines : Cinétique d'hydrolyse trypsique de la caséine αs2 et activité inhibitrice de l'ECA des peptides ». Nancy 1, 2003. http://www.theses.fr/2003NAN10224.

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Résumé :

La caséine αS2 est la protéine majeure du lait la moins étudiée pour l'obtention de peptides bioactifs. Après sa purification par chromatographie d'échange d'ions puis d'interactions hydrophobes, elle a été hydrolysée par la trypsine et les peptides résultants ont été identifiés. La cinétique de libération des peptides a mis en évidence trois zones d'accessibilité différente à la protéolyse. Ces éléments et la prédiction de structure secondaire ont permis de proposer un modèle d'organisation de la caséine αS2 en solution. Quatre de ces peptides trypsiques inhibent l'enzyme de conversion de l'angiotensine I (IEC) avec des IC50 allant de 4 à 15 micro M. Leurs séquences, comparées à celles d'autres inhibiteurs, ont été discutées afin d'établir des relations séquence-activité
αS2-Casein is the less studied substrate to obtain bioactive peptides among the major milk proteins. After its purification by ion exchange chromatography followed by hydrophobic interactions chromatography, it was hydrolysed by trypsin and resulting peptides were identified. Their release kinetics revealed three areas having different susceptibility to proteolysis. These data and secondary structure prediction helped to define a hypothetical model of protein organisation in solution. Four tryptic peptides inhibited angiotensin-I converting enzyme (CEI) with IC50 values comprised between 4 and 15 micro M. Their sequences were confronted with others inhibitors to discuss sequence-activity relationships

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Kobbi, Sabrine. « Purification de la RuBisCO à partir de la Luzerne, hydrolyse enzymatique, identification, structure-fonction des peptides bioactifs et leur valorisation dans des produits alimentaires ». Thesis, Lille 1, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL10201.

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Résumé :

La luzerne est la plante la plus cultivée dans le monde et est une excellente source de protéines. Cependant, la RuBisCO a montré le plus d'intérêt. Cette protéine a été étiquetée comme la protéine la plus abondante sur terre, elle constitue environ 65% (p/p) des protéines solubles de la luzerne. Dans ce travail une nouvelle méthode a été mise en place pour la purification de la RuBisCO à partir de la poudre de luzerne 10% (p/v) en utilisant deux solvants différents et l’effet du pH. Premièrement, des méthodes d’analyse qualitative et quantitative ont été utilisées pour confirmer l’efficacité de la méthode de purification qui pourrait remplacer certains procédés industriels classiques. Puis, une hydrolyse pepsique a été réalisée sur la RuBisCO purifiée qui aboutit à une forte population peptidique bioactive. Les peptides finaux de 24h d’hydrolyse ont montré une meilleure activité antibactérienne ou antioxydante par rapport aux autres hydrolysats. 9 nouveaux peptides antibactériens ont été identifiés et caractérisés par SM et qui ont un CMI entre 2-6mM contre quatre espèces de bactéries: B subtilis, E coli, L innocua et M luteus. En plus, des fractions peptidiques antioxydantes ont également été identifiées dans ce travail. Et leur activité antioxydante a été évaluée par différents tests in vitro et in vivo sur l’huile de Colza. Enfin, l’addition du peptide RDRFL issu de l’hydrolyse pepsique de la RuBisCO a montré un effet positif sur la prolongation de la durée de conservation de la viande hachée et de la purée de tomate
Alfalfa is an excellent source of protein. However, RuBisCO proteins showed most interest. Indeed, this protein has been labelled the most abundant on earth; it constitutes about 65% (w/w) of soluble leaf protein of Alfalfa. In this work, a new method was introduced for the purification of RuBisCO from alfalfa powder 10% (w /v), using two different solvents and pH effect. In a first step, the performance of the proposed RuBisCO recovery method was evaluated through qualitative and quantitative analysis and the results obtained showed that this new method could replace some conventional industrial processes. In a second step, enzymatic hydrolysis was carried out on the purified RuBisCO, which resulted in a large bioactive peptide population. The final peptides after 24h of hydrolysis showed better antibacterial or antioxidant activity compared to the other peptide hydrolysates. Nine new antibacterial peptides have been identified and characterized by MS and have a MIC of 2-6 mM against four species of bacteria: B subtilis, E coli, L innocua and M luteus. In addition, antioxidants peptide fractions were identified in this work, their antioxidant activity was evaluated by various in vitro and in vivo tests on oil of Colza. Finally, the addition of peptide RDRFL derived from the peptic hydrolysis of RuBisCO has a positive effect on the prolongation of the shelf life of minced meat and of tomato puree

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Albe, Slabi Sara. « Développement et optimisation d'un procédé extrapolable de production d'isolats de protéines de tournesol ». Electronic Thesis or Diss., Université de Lorraine, 2019. http://www.theses.fr/2019LORR0167.

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Résumé :

Le tourteau de tournesol, coproduit du procédé d’extraction d’huile, est une source importante de protéines (30−70 % de la matière sèche). Ces protéines sont composées de deux fractions principales : les globulines (hélianthinines) et les albumines (SFA). Grâce à un profil équilibré en acides aminés et de bonnes propriétés fonctionnelles, elles présentent un fort potentiel d’utilisation comme isolat pour l’alimentation humaine. Cependant, la littérature montre de nombreux verrous scientifiques quant à la production d’isolats de protéines de tournesol. Ces verrous sont liés aux interactions protéine-acide chlorogénique (composé phénolique principal hydrosoluble du tournesol), à la faible extractabilité des protéines du tourteau et la dénaturation irréversible des helianthinines lors de la purification par précipitation acide. L’objectif de ces travaux a donc été de lever ces verrous et, ainsi, de proposer des voies extrapolables de production d’isolats de protéines de tournesol. La première partie de thèse a reposé sur le développement d’une méthode de dosage simultané des protéines, des isomères de l’acide chlorogénique libres et de l’acide chlorogénique lié aux protéines. Cet outil analytique a permis d’avoir un accès rapide et fiable sur les critères de performances cruciaux pour la mise au point et l’optimisation des conditions de production. Dans la deuxième partie de thèse, une condition optimale d’extraction des protéines totales de tourteau de tournesol qui maximise le rendement et minimise les interactions protéine-phénol a été recherchée. Pour cela, une démarche d’optimisation multicritère reposant sur des outils de planification expérimentale et des algorithmes génético-évolutionnaires a été mise en œuvre. Ensuite, une méthode alternative de purification des protéines par ultrafiltration a été mise au point. Cette partie a permis d’améliorer le niveau de compréhension scientifique de l’extraction des protéines de tournesol et a abouti à un produit satisfaisant. Toutefois, il s’avère que le tourteau résiduel post-extraction a été appauvri en protéines et reste riche en acide phytique (facteur antinutritionnel). La troisième partie de thèse a donc été focalisée sur la mise en place d’une stratégie alternative de l’extraction sélective des albumines. Pour ce faire, la méthodologie de modélisation et d’optimisation multicritère, utilisée dans la deuxième partie de thèse, a permis d’identifier des conditions optimales d’extraction sélective des albumines, avec un bon rendement et maintiennent une valeur satisfaisante du tourteau résiduel. Les albumines ainsi extraites étaient très peu colorées, riches en acides aminés soufrés et d’une solubilité plus importante que les protéines totales. Les propriétés fonctionnelles des albumines (moussantes, émulsifiantes) ont été supérieures ou proches de celles de protéines de soja. La stratégie mise en place a donc permis de développer un procédé durable de production des albumines ayant un fort potentiel d’utilisation en nutrition humaine et un tourteau résiduel pour des applications en alimentation animale
Sunflower meal, by-produced after oil extraction process, is a valuable source of proteins (30−70% on dry matter basis). These proteins are composed of two main fractions: globulins (helianthinins) and albumins (SFA). Thanks to well-balanced amino acid composition and good functional properties, they are considered very promising for human nutrition as protein isolates. However, the literature shows many scientific drawbacks during sunflower protein extraction and purification. These drawbacks lie on interaction between proteins and chlorogenic acid (major hydrosoluble phenolic compound of sunflower), poor extraction yield and helianthinin denaturation during protein purification by acidic precipitation. The goal of this thesis work was to overcome these limitations and to propose a scalable process for production of sunflower protein isolates. The first part of the thesis was based on the development of a new method for simultaneous quantification of proteins, free chlorogenic acid isomers and chlorogenic acid bound to proteins. This analytical tool provided fast and reliable access to performance criteria crucial for further development and optimization of sunflower protein production process. In the second part of the thesis, an optimal condition for extraction of total proteins from sunflower meal allowing maximizing extraction yield and minimizing protein-phenol interaction was searched. For this purpose, multicriteria optimization based on modelling by design of experiments and genetico-evolutionary algorithms was applied. Then, an alternative method for protein purification by ultrafiltration was developed. This part of study has improved the global understanding of sunflower protein extraction process and yielded in a satisfactory product. However, the residual meal produced after protein extraction was poor in proteins and rich in phytic acid (antinutritional factor). The third part of the thesis was therefore focused on the implementation of an alternative strategy of selective extraction of albumins. To do so, the methodology of modelling and multicriteria optimization, used in second part of the thesis, allowed to identify the optimal conditions for selective extraction of albumins with good yield keeping a satisfactory value of the residual meal. The extracted albumins were light-coloured, rich in sulphur-containing amino acids and more soluble than total sunflower proteins. The functional properties of albumins (foaming, emulsifying) were improved or comparable to those of soy proteins. Therefore, the established strategy provided a sustainable process for production of albumins that would be used in human nutrition and residual meal for feed applications

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Abou-Diab, Mira. « Production éco-circulaire de peptides antibactériens, antifongiques et antioxydants déminéralisés à partir d'hémoglobine bovine par électrodialyse avec membranes bipolaires : étude de faisabilité, mécanisme enzymatique, optimisation des paramètres, comparaison avec l'hydrolyse conventionnelle et prévention du colmatage ». Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2018-2021), 2021. http://www.theses.fr/2021LILUR031.

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Résumé :

Le cruor bovin, déchet des abattoirs est produit en très grande quantité dans le monde. Ce coproduit est composé principalement d'hémoglobine, une protéine riche en peptides bioactifs après son hydrolyse enzymatique. Cependant, lors de l'hydrolyse conventionnelle par la pepsine, des agents chimiques sont nécessaires pour ajuster et réguler le pH de la solution et, les hydrolysats finaux produits contiennent des niveaux élevés en sels minéraux. Pour pallier ces inconvénients, il a été proposé d'appliquer dans cette étude, pour la première fois, une technologie verte, appelée électrodialyse avec membrane bipolaire (EDMB), comme méthode alternative à l'hydrolyse enzymatique conventionnelle de l'hémoglobine afin d’obtenir des peptides bioactifs purifiés. Les objectifs de cette thèse étaient de tester la faisabilité de ce nouveau procédé pour la production de peptides bioactifs à partir d'hémoglobine bovine, d'établir les conditions optimales, d'éviter le colmatage membranaire et d'appliquer un nouveau procédé original d’EDMB à « multiple-étapes » permettant la production de peptides bioactifs déminéralisés sans ajout de produits chimiques. Des configurations bipolaires/monopolaires (anioniques ou cationiques) utilisant les ions H+ et OH- générés par les membranes bipolaires pour réguler le pH ont été étudiées et comparées à un procédé conventionnel utilisant des acides et des bases chimiques. La configuration d’EDMB formée avec les membranes cationiques a permis la production d'hydrolysats contenant une faible concentration en sels minéraux mais avec la présence d’un colmatage sur la membrane cationique, alors que la configuration d’EDMB utilisant des membranes anioniques a permis la production d'hydrolysats sans colmatage mais avec une concentration en sel similaire à celle de l’hydrolyse conventionnelle (contrôle). En se basant sur ces résultats, une nouvelle configuration d’EDMB à 3 compartiments a été mise en place et étudiée pour dénaturer l'hémoglobine, inactiver la réaction enzymatique et déminéraliser à 85% l'hydrolysat peptidique en simultané. Cependant, un colmatage a encore été observé sur la membrane anionique en raison de la précipitation de l'hème. Pour cette raison, une étape supplémentaire de décoloration a été réalisée avant la déminéralisation pour éviter le colmatage en utilisant l'acide électro-généré. Les peptides décolorés et déminéralisés récupérés ont montré une activité antioxydante, une activité antibactérienne contre plusieurs souches bactériennes (Gram + et Gram -) et pour la première fois une activité antifongique contre de nombreuses souches de moisissures et de levures. Dans un contexte d’économie circulaire, cette technologie durable s'avèrerait efficace pour effectuer plusieurs opérations simultanément et présente un potentiel important au niveau industriel pour l'hydrolyse du sang, puisqu'elle produit des bio-peptides purifiés ayant une faible teneur en sels minéraux et pouvant être utilisés comme conservateurs naturels sur la viande
Bovine cruor, a slaughterhouse waste, is produced in large quantities all around the world. This co-product was mainly composed of hemoglobin, a protein rich in bioactive peptides after its enzymatic hydrolysis. However, during conventional hydrolysis, chemical agents are necessary to adjust/regulate the pH of the solution and the final hydrolysates produced contain high levels of mineral salts. Therefore, in this study, it is proposed to apply, for the first time, a green technology, named electrodialysis with bipolar membrane (EDBM), as an alternative method to the conventional enzymatic hydrolysis of hemoglobin to obtain purified bioactive peptides. The main objectives of the present thesis were to test the feasibility of this new process to produce bioactive peptides from bovine hemoglobin, to establish the optimal conditions, to avoid membrane fouling and to apply a new original « multiple-step » EDMB process allowing the production of demineralized bioactive peptides without the addition of chemical salts. Bipolar/monopolar (anionic or cationic) configurations using the H+ and OH- generated by the bipolar membranes to regulate the pH were investigated and compared to a conventional process using chemical acid and base. The EDBM configuration formed with cationic membranes allowed the production of hydrolysates containing a low concentration of mineral salts but with fouling formation on the cationic membrane, while EDBM configuration formed with anionic membranes allowed the production of hydrolysates without fouling but with a similar salt concentration than the control. Based on these results, a new 3 compartments EDBM configuration was carried-out for denaturing the hemoglobin, inactivating the enzymatic reaction and demineralizing up to 85% the hemoglobin hydrolysate simultaneously. However, a fouling was still observed on the anionic membrane due to hem precipitation. For this reason, an additional step of discoloration was tested before the demineralization to avoid fouling using the electrogenerated acid. The discolored and demineralized peptides recovered showed antioxidant activity, antibacterial activity against many bacterial strains (Gram + and Gram -) and for the first time antifungal activity against many molds and yeasts strains. Moving towards a circular economy, this sustainable technology has found to be effective in performing multiple operations simultaneously and has a great potential for industrial hydrolysis of blood, since it produces purified biopeptides with a low mineral content and can be used as natural preservatives on meat

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Rulence, Alexandre. « Mise en œuvre de procédés membranaires pour la séparation sélective de la nisine à partir de surnageants de culture complexes ». Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2022-....), 2023. https://pepite-depot.univ-lille.fr/ToutIDP/EDSMRE/2023/2023ULILR034.pdf.

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Résumé :

La nisine, une bactériocine produite par les bactéries lactiques du genre lactococcus présentent des propriétés physico-chimiques d'intérêt tel qu'une thermorésistance ainsi qu'une activité antimicrobienne contre certaines souches pathogènes alimentaires. Elle est actuellement la seule bactériocine reconnue comme GRAS (Generally Recognized As Safe) par la FDA (U.S. Food and Drug Administration) et donc la seule bactériocine pouvant être utilisée comme conservateur naturel en agroalimentaire. La nisine représente donc une alternative d'intérêt à l'utilisation de conservateur chimique. Cependant, la nisine est actuellement sous-exploitée du fait de problèmes liés à sa production et sa purification à grande échelle. En effet, les bactéries lactiques nécessitant des milieux riches et complexes rendent la production par fermentation coûteuse et peu rentable. De même, sa purification à l'échelle industrielle ne se fait actuellement que par des procédés à faible rendement tels que le foisonnement ou la précipitation aux sels couplés à des techniques chromatographiques.Dans le cadre de cette thèse, nous nous sommes donc d'abord intéressés à la recherche de co-produit pour la fermentation de Lactococcus lactis en tant qu'alternative à l'utilisation des milieux riches comme le MRS. Le lactosérum est actuellement le principal co-produit usuellement employé. La recherche de co-produits de grade alimentaire pour la production efficace et à faibles coûts de la nisine par fermentation pourrait répondre au problème actuel de rendement de la production. Différents hydrolysats de protéines issus de co-produits végétaux et de poissons ont été testés dans la production de la biomasse bactérienne et de la nisine à l'aide de deux souches productrices afin d'optimiser la production de nisine. Ces résultats ont permis de montrer une meilleure production avec la souche L.lactis UL719 en comparaison avec une souche commerciale. Ils ont aussi permis de montrer l'efficacité de certaines sources de peptones végétales et d'une peptone de poisson dans la production de nisine en comparaison avec le lactosérum et le milieu MRS. Durant ce travail, des alternatives à la purification de la nisine ont aussi été étudiées. Pour cela, des procédés d'électrodialyse (ED) et d'ultrafiltration (UF) ont été appliqués à la purification de la nisine. Une première étude de la purification par électrodialyse, non reportée dans la littérature pour la purification de la nisine, a été mise en place pour la purification d'une solution commerciale, mettant en évidence des phénomènes d'interaction de la nisine avec les membranes échangeuse d'ions. L'application de l'ED pour la purification de la nisine a aussi été mise en place sur le traitement d'un surnageant de culture complexe produit des suites des études de la production. L'utilisation du procédé d'ultrafiltration a aussi été étudiée pour la purification de la nisine à partir d'un surnagent de culture complexe, mettant en parallèle les résultats issus des deux types de procédés membranaires. Ces études ont donc permis de démontrer l'efficacité de l'UF et de l'ED dans la purification de la nisine, l'ED qui de plus pourrait s'inscrire dans une démarche écocirculaire, de la production de la nisine à l'aide de co-produit, à sa purification par le traitement des effluents salins issus de la précipitation aux sels de la nisine lors de sa purification
Nisin, a bacteriocin produced by lactic acid bacteria (LAB) presents physicochemical properties such as a thermal resistance and an antimicrobial activity against food pathogens bacteria. Nisin is actually the only bacteriocins labelled as Generally Recognized As Safe (GRAS) by the U.S Food and Drug Administration (FDA) and is thus the only bacteriocin used as a natural preservative in the food industry, making it an interesting alternative to the use of chemical preservatives. However, its uses are hampered at industrial scale due to low yields et high cost linked to its production on commercial broth and its purification necessity the combination of low yields techniques such as salting out coupled with chromatography.In this case we investigated in this work the use of food grade by-product produces by the food industry in replacement of costly commercial broth. Several by-products composed of vegetal and fish peptones were tested for the production of nisin. Whey being the most used by-product employed for production of nisin and several bacteriocin, we tested and compared different vegetal and fish proteins hydrolyzates regarding biomass production and nisin yields obtained. Several vegetal and fish protein hydrolyzates were tested with two different strains of Lactococcus lactis in order to optimize nisin production. Results showed a greater nisin production using L.lactis UL 719 when compared to a commercial strain. Results also showed the efficacy of some vegetal and one fish by-product for the production of nisin when compared to whey medium and commercial broth MRS. During this work was also investigating alternatives for nisin purification. Electro- and pressure-driven membrane process were studied for nisin purification and especially ultrafiltration (UF) and electrodialysis for which no literature reported the use of ED for nisin purification. ED was applied to the purification of nisin from a commercial solution and from a cell-free supernatant produced with whey permeate as broth for fermentation. UF was applied to the purification of nisin from a cell-free supernatant and permit to compare UF and ED in this application. This work enables us to demonstrate nisin interaction with ion exchange membrane never reported and enable its purification with purification factor comparable to conventional method actually used. Moreover, we demonstrated the use of ED not only efficient for nisin purification but with the possibility to implement ED in an eco-circularity concept, from nisin production using by-products, to its purification with ED and the recycling of salts from saline effluent produced during nisin salting-out

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Le, Coeur Catherine. « Contribution à l'étude d'un hydrolysat pepsique de myoglobine de muscle squelettique rouge de thon Thunnus Albacares : caractérisation des peptides issus de l'hydrolyse étude de l'association hème-peptide ». La Rochelle, 1996. http://www.theses.fr/1996LAROS011.

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Résumé :

L’hydrolyse pepsique de la myoglobine de muscle squelettique rouge de thon Thunnus Albacares génère un mélange de peptides et d'heme. En vue de caractériser les peptides de cet hydrolysat, nous les avons purifiés par une méthode de chromatographie liquide haute performance mise au point au laboratoire. Il a ainsi été montré que la chromatographie d'exclusion, associée à la chromatographie en phase inverse permettait de résoudre efficacement ce mélange de peptides, malgré sa complexité. La composition en acides aminés des peptides a été déterminée par la méthode du picotag complétée par la méthode de la dérivée seconde qui est une méthode spectrale permettant de détecter et de quantifier les acides aminés aromatiques. La séquence des peptides a ensuite été déduite de la comparaison de leur composition en acides aminés avec la séquence connue de la myoglobine de thon. Ce travail nous a permis de définir les sites de coupure de la pepsine dans nos conditions expérimentales et de les comparer avec ceux décrits dans la littérature. La recherche de peptides actifs n'a pas permis de mettre en évidence dans notre mélange de peptides opioïdes, ni de peptides activateur ou inhibiteur de la croissance cellulaire. Par contre, certaines fractions peptidiques présentent une activité inhibitrice de l'enzyme de conversion de l'angiotensine et d'autres une activité inhibitrice des contractions de l'iléon de cobaye. Des fractions présentent en outre une capacité de fixation de l'heme supérieure à celle de la molécule native. Le type de liaisons existant entre l'heme et les peptides en mélange n'a pas été clairement défini, mais il semblerait que l'heme se lie aux peptides, non pas par des liaisons fortes de type covalentes mais plutôt par des liaisons faibles, facilement détruites lors des processus de purification ou simplement par variation de PH.

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Ravallec, Rozenn. « Valorisation d'hydrolysats d'origine marine : optimisation de la concentration en peptides apparentés aux facteurs de croissance et aux agents sécrétagogues : essais in vitro et in vivo ». Brest, 2000. http://www.theses.fr/2000BRES2041.

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Résumé :

L'utilisation d'hydrolysats d'origine marine dans les aliments destinés à l'aquaculture est en pleine expansion face au plafonnement des pêches mondiales. Cependant les besoins des animaux sont encore mal définis orientant les recherches vers la fabrication d'aliments plus spécifiquement adaptés. Les objectifs de ce travail étaient d'identifier et de caractériser des facteurs de croissance et des agents sécrétagogues présents dans des hydrolysats d'origine marine et pouvant avoir un effet in vivo sur la croissance et le développement des larves de la crevette tropicale Litopenaeus vannamei. Cette recherche a été réalisée en trois parties : l'optimisation de la fabrication des hydrolysats, la caractérisation des activités biologiques et l'effet in vivo de l'incorporation des hydrolysats dans l'alimentation des larves de l. Vannamei. L'optimisation de l'hydrolyse du muscle de morue, Gadus morhua, par l'alcalase a défini les conditions opératoires permettant de détecter la présence d'activités biologiques. L'affinité que possèdent les facteurs de croissance et les agents sécrétagogues pour certains récepteurs présents sur les cellules ar4-2j a été exploitée afin de caractériser les activités biologiques détectées dans les hydrolysats de morue et de crevette (litopenaeus aztecus). Des fractions partiellement purifiées ont présenté des caractéristiques d'élution ainsi que des affinités de liaisons comparables à celles retrouvées avec les peptides de la famille des cholecystokinines et les facteurs de croissance. La purification d'une enzyme spécifique du système digestif des crevettes pénaeides, la chymotrypsine, a permis la fabrication d'un hydrolysat de muscle de morue en quelque sorte plus spécifique des larves cultivées. L'influence de ces hydrolysats sur la croissance et le développement des larves de la crevette l. Vannamei a été étudiée. Bien qu'il soit difficile de conclure à l'effet stimulateur de croissance et de digestion des peptides précédemment détectés, l'hydrolysat de morue par la chymotrypsine a un effet bénéfique sur le développement des animaux. Ces différents types d'approches de recherche sont des étapes essentielles afin de caractériser de nouveaux hydrolysats susceptibles de favoriser la croissance, la survie et le développement des larves de poissons et de crustacés.

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Chabanon, Gérald. « Hydrolyses enzymatiques d'isolats protéiques issus de tourteaux de colza : cinétique, modélisation, caractérisation et fonctionnalité des peptides ». Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2005. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/INPL/2005_CHABANON_G.pdf.

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Résumé :

Cette thèse a permis d'étudier l'obtention de peptides biologiquement actifs ou à propriétés fonctionnelles à travers la mise en œuvre et le développement de procédés de préparation et d'hydrolyse d'isolats de protéines issus de tourteaux de colza. Tout d'abord, un procédé de préparation de deux isolats protéiques se différenciant par le type de protéines les constituant (Globuline ou Albumine) a été développé. Les deux isolats ne possèdent pas de bonnes propriétés fonctionnelles mais leur hydrolyse partielle par l'Alcalase 2,4L permet d'en améliorer certaines. Puis, l'action hydrolytique de protéases commerciales (Alcalase 2,4L, Pronase SG, Neutrase 0,8L, Prolyve BS, Lypaïne 6500, Orientase 90N, Espérase 7,5L) sur l'isolat de globulines a été comparée. La valorisation des hydrolysats a porté sur leur capacité à promouvoir la croissance de cellules animales cultivées dans un milieu sans sérum de veau fœtal. Il a été montré que les cinétiques d'hydrolyse, la taille des peptides produits et l'activité biologique des hydrolysats sont significativement influencées par la spécificité de l'enzyme et qu'il existe une relation enzyme / degré d'hydrolyse (DH) / activité ciblée. Enfin, nous avons montré pour trois systèmes enzyme/substrat différents (Alcalase/Globuline, Pronase/Globuline et Alcalase/Albumine) qu'à un DH et à un pH donnés, la composition peptidique des hydrolysats est indépendantes des concentrations initiales en enzyme et en substrat et de la température. Ainsi, la prédiction de l'évolution temporelle du DH, quelles que soient les valeurs de ces paramètres, permet de contrôler la génération d'un mélange peptidique aux propriétés ciblées. Un modèle phénoménologique basé sur le schéma réactionnel de Michaelis-Menten a alors été construit afin de simuler les cinétiques d'hydrolyse en réacteur discontinu. Pour cela, les phénomènes limitants impliqués dans l'hydrolyse (inhibition ou inactivation de l'enzyme, modification du substrat) ont été mis en évidence
This thesis made it possible to study obtaining biologically active peptides or with functional properties through the development of processes for the preparation and the hydrolysis of protein isolates resulting from rapeseed cakes. First, a method of preparation of two protein isolates being different by the type of proteins (Globulin or Albumin) was developed. The two isolates do not have good functional properties but their partial hydrolysis by Alcalase 2. 4L improves some of them. Then, the hydrolytic action of commercial proteases (Alcalase 2. 4L, Pronase SG, Neutrase 0. 8L, Prolyve BS, Lypaïne 6500, Orientase 90N, Espérase 7. 5L) on the isolate of globulins was compared. The valorisation of the hydrolysates related to their capacity to promote the growth of animal cells cultivated in a serum-free medium. It was shown that the kinetics of hydrolysis, the size of produced peptides and the biological activity of the hydrolysates are significantly influenced by the specificity of the enzyme and there is a relation enzyme/ degree of hydrolysis (DH)/ targeted activity. Lastly, we showed for three different enzyme/substrate systems (Alcalase / Globulin, Pronase / Globulin and Alcalase / Albumin) that at given DH and pH, the peptide composition of the hydrolysates is independent of the initial enzyme and substrate concentrations and of the temperature. Thus, the prediction of the temporal evolution of the DH, whatever the values of precedent parameters, allows to control the generation of a peptide mixture with targeted properties. A model based on the reaction pathway of Michaelis-Menten was then built in order to simulate the hydrolysis kinetics in batch reactor. For that, limiting phenomena implied in the hydrolysis (inhibition or inactivation of the enzyme, modification of the substrate) were highlighted

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Debrabant, Alain. « Étude de la protéolyse de la protéine P126 de Plasmodium falciparum ». Lille 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LIL10067.

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Résumé :

A la fin du cycle intraérythrocytaire de plasmodium falciparum, agent pathogène du paludisme, l'éclatement des schizontes matures semble être un phénomène actif impliquant des activités enzymatiques. La protéine P126 est protéolysée au moment de l'éclatement des schizontes en 2 fragments de 50 kd (p50) et 73 (p73) qui sont libérés dans le milieu de culture. Nous avons montré que 2 inhibiteurs de protéases, la leupeptine et le E64 inhibent l'éclatement des schizontes et modifient simultanément le processus de protéolyse de la P126: on observe en effet l'accumulation d'un fragment intermédiaire de 56 kd (p56) au détriment de la P50. L'incubation de la P56 avec des schizontes en phase de libération, dans un milieu de culture débarrassé des protéines sériques produit une molécule de 50 kd. Nous avons ainsi caracterisé, par son profil d'inhibition, une protéase de type responsable de la coupure 56/50, dont l'activité paraît très instable dans le milieu de culture. La détermination des séquences n-terminales des fragments de protéolyse a permis de les replacer sur la séquence protéique déduite du gène de la P126, et de déterminer 2 des 3 sites de protéolyse. La localisation du troisième site (56/50) nécessitera la détermination de l'extrémite c-terminale de la P50. La relation éventuelle entre la protéolyse de la P126 et la libération des mérozoïtes reste encore à démontrer. L'analyse de ces activités protéasiques permettra une meilleure compréhension du mécanisme de la libération des mérozoïtes

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Odoux, Eric. « Contribution à l'étude de l'hydrolyse de la glucovanilline en vanilline dans la "gousse" du vanillier (vanilla planifolia G. Jackson) ». Montpellier 2, 2004. http://www.theses.fr/2004MON20057.

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Prévôt-d'Alvise, Nathalie. « Mise au point d'un procédé d'hydrolyse enzymatique de protéines de luzerne (Medicago sativa var. Europe) dans un réacteur à membrane et extrapolation à l'échelle pilote ». Lille 1, 2000. https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/Th_Num/2000/50376-2000-47.pdf.

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Résumé :

Le reacteur enzymatique a membrane (rem) est couramment utilise pour la preparation et la valorisation d'hydrolysats proteiques. Les matieres proteiques vegetales tels que les extraits foliaires, connaissent un essor considerable depuis quelques annees. L'interet croissant porte au concentre proteique de luzerne (cpl) repose sur son abondance naturelle, mais aussi sa composition equilibree en acides amines et sa teneur elevee en ribulose 1,5-biphosphate carboxylase-oxygenase, proteine hydrophobe dotee d'excellentes proprietes fonctionnelles et nutritionnelles. Afin de valoriser ce potentiel proteique dans des domaines aussi divers que l'alimentation, la pharmacie et la cosmetique, un procede pilote d'hydrolyse du cpl dans un rem a ete realise. A ph 9,5 et a 40\c, l'hydrolyse du cpl a 30gn. L 1 par la delvolase (2,4 g. L 1) avec un temps de sejour de 180 minutes, permet d'atteindre a l'etat stationnaire un taux de conversion de 75,9% mais egalement d'acceder a une capacite et une productivite elevees de 37,9 gn. G d'enzyme 1. Min 1 et 454,4 gn. G d'enzyme 1 respectivement. Le couplage du reacteur a une membrane inorganique d'un seuil de coupure de 10000 daltons permet de produire en continu un permeat peptidique soluble, reproductible et d'une teneur azotee de 23 gn. L 1. Les composes phenoliques, responsables de la coloration brune du permeat, sont extraits avec un rendement de 92% par une resine polystyrenique, l'amberlite ira900cl, a ph 5,0 et a 25\c. Apres electrodialyse et atomisation du permeat decolore, une poudre peptidique de luzerne soluble sur toute la gamme de ph et avec une composition en acides amines equilibree est obtenue. Elle pourra etre utilisee comme supplement proteique en alimentation humaine.

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Gevrey, Jean-Claude. « Mécanismes de réponse de la cellule endocrine intestinale aux hydrolysats protéiques : aspects sécrétoire et transcriptionnel ». Lyon 1, 2002. http://www.theses.fr/2002LYO1T170.

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Giardina, Thierry. « Purification, caractérisation et relation structure-fonction de l'acylase I de l'entérocyte de porc ». Aix-Marseille 3, 1997. http://www.theses.fr/1997AIX30047.

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Résumé :

L'acylation du groupement amine n-terminal est une modification frequemment rencontree dans les proteines des cellules eucaryotes et dans un bon nombre de proteines alimentaires. L'acylase i joue un role important dans la degradation terminale des proteines acylees puisqu'elle catalyse la reaction suivante : -n-acylaminoacide neutre ou hydrophobe + h#2oacide + aminoacide. Nous avons purifie a l'homogeneite une acylase a partir de muqueuse intestinale de porcs adultes avec un facteur de purification superieur a 10 000. L'enzyme est un dimere de 90 kda constituee de deux sous-unites apparemment identiques de 45 kda. Son extremite n-terminale est bloquee et sa composition en acides amines comparable a celle de l'enzyme de rein du meme animal. Son activite est maximale a un ph de 8 et a une temperature de 40c ; l'energie d'inactivation par la chaleur etant de 260 kj. Mol#-#1. Les parametres cinetiques de l'hydrolyse de la furylacryloyl-l-methionine ont ete determines : la valeur du km etant de 0,2217,8. S#-#1. La l-methionine, produit de la reaction, se comporte comme un inhibiteur competitif. La specificite de substrats vis a vis des acides amines neutres et hydrophobes confirme que nous avons bien purifie une acylase de type i. L'etude du site actif de cette enzyme intestinale, permet de conclure qu'il s'agit d'une metalloprotease dans laquelle un groupement thiol est implique dans la catayse. Nous avons egalement pu mettre en evidence que, dans certaines conditions, l'acylase i est capable de catalyser la synthese de derives acyles de la l-methionine en milieu aqueux. Cette enzyme est repartie de maniere equivalente le long du tractus digestif chez le porc. Sa localisation subcellulaire a egalement ete entreprise au niveau de l'enterocyte, et montre qu'il s'agit d'une enzyme exclusivement soluble.

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Moyne, Pascale. « Contribution à l'étude de l'apport azoté en nutrition parentérale par des hydrolysats enzymatiques de protéines du lait de vache ». Montpellier 1, 1994. http://www.theses.fr/1994MON13510.

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Vinot-Renaud, Catherine. « Contribution à la connaissance et à la valorisation d'hydrolysats industriels de protéines de poissons ». Compiègne, 1989. http://www.theses.fr/1989COMPD208.

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Résumé :

Des hydrolysats enzymatiques de protéines de poissons sont produits industriellement par la CTPP (Boulogne sur Mer) à partir des déchets engendrés par l'industrie locale de la pêche. Ils présentent des propriétés intéressantes notamment en alimentation animale comme substituts des protéines laitières ou en microbiologie comme stimulateurs des cultures. Toutefois aucune molécule active n'a pu jusqu'alors être identifiée. Le travail effectué a eu pour but d'approfondir notre connaissance de ces hydrolysats industriels afin d'en améliorer la valorisation. Il présente dans un premier temps une synthèse bibliographique des propriétés mises en évidence, un bref exposé du procédé d'obtention des hydrolysats ainsi que les résultats de la détermination de leur composition. La démarche chromatographique ayant permis la mise au point d'un fractionnement des hydrolysats par échange d'ions est ensuite décrite. Enfin la composition des fractions obtenues est déterminéee et la mise en place de deux tests d'activités est réalisée, d'une part sur des cul¬tures bactériennes, d'autre part sur des cultures de lymphocytes. Ainsi nous avons pu mettre en évidence des propriétés immunostimulantes remarquables pour certaines fractions, ouvrant ainsi la voie à une obtention potentielle de molécules à haute valeur ajoutée à partir d'hydrolysats de protéines de poissons.

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Robert, Marie. « Développement d'hydrolysats pour l'alimentation des animaux d'aquaculture : caractérisation moléculaire et fonctionnelle ». Caen, 2014. http://www.theses.fr/2014CAEN2050.

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Résumé :

L’aquaculture est un secteur en pleine extension et produit aujourd’hui la moitié des produits aquatiques destinés à la consommation humaine. Elle constitue ainsi un secteur clé pour le maintien et l’amélioration de la sécurité alimentaire dans le monde. Cependant sa croissance rapide a déjà un impact important sur l’environnement, notamment sur les stocks de poissons sauvages dont elle dépend pour la fabrication des aliments aquacoles. Dans ce contexte, l’alimentation destinée aux poissons d’élevage a considérablement évolué et a dû s’adapter aux nombreuses contraintes économiques et environnementales. L’utilisation des farines de poisson pour la formulation des aliments a particulièrement diminué au profit des farines d’origine végétale. Néanmoins, ces dernières sont moins adaptées aux besoins nutritionnels des poissons et engendrent une baisse des performances de croissance des animaux. Les hydrolysats protéiques issus des co-produits de la pêche et de l’aquaculture sont des ingrédients à fort potentiel nutritionnel et bioactif développés pour restaurer les performances de croissance obtenues avec des aliments à haute teneur en farine d’origine végétale. Ces derniers sont des mélanges complexes riches en peptides hydrolytiques et en acides aminés libres mais dont la composition est peu connue. Une approche expérimentale a été développée pour caractériser la fraction peptidique de deux hydrolysats de co-produits. Cette dernière est basée sur une approche transcriptomique permettant d’obtenir des données transcriptomiques ciblées sur les co-produits d’intérêt, associée à une approche peptidomique. En associant l’optimisation des étapes de fractionnement et la complémentarité de deux techniques de spectrométrie, il a été possible d’aboutir à l’identification de plus de 1000 peptides dans chacun de ces mélanges complexes. En parallèle, des expériences de conditionnement alimentaire menées chez le bar commun, Dicentrarchus labrax, ont permis de mettre en évidence des propriétés nutritionnelles au moins équivalentes et souvent supérieures à celles des farines de poisson chez les bars maintenus en élevage. En effet, l’inclusion de 5% de l’un ou l’autre des deux hydrolysats étudiés dans des aliments contenant 95% de farine d’origine végétale permet de maintenir des performances de croissance équivalente à celles obtenues avec des aliments contenant 80% de farine d’origine végétale et 20% de farine de poisson. Les hydrolysats agissent par ailleurs sur la physiologie digestive du bar commun comme le montrent les profils d’expression des biomarqueurs de l’absorption intestinale suivis dans cette étude. Enfin, les deux hydrolysats possèdent une activité antibactérienne in vitro et l’hydrolysat de Tilapia stimule le système immunitaire du bar commun. Ces résultats démontrent l’intérêt de l’utilisation de ces deux hydrolysats en aquaculture en complément ou en remplacement des farines de poisson
Global production of farmed fish and shrimp has grown dramatically over the past decades and now contributes to half of the aquatic products intended for human consumption. Aquaculture is a key sector for the maintenance and improvement of food security worldwide. However, its rapid growth has a significant impact on the environment, particularly on the stocks of wild fish used to produce aqua feed. In this context, aqua feed has dramatically evolved and has been adapted to many economic and environmental constraints. The use of fishmeal has particularly declined in favor of plant protein sources. But plant proteins are less adapted to the nutritional needs of fish and result in lower growth performances. Protein hydrolysates from fishing and aquaculture by-products are ingredients of high nutritional and bioactive potential developed to restore growth performances in high-level plant protein diets. They are rich in hydrolytic peptides and free amino acids, but they are complex mixtures whose composition is not well known. We developed an experimental approach to characterize the peptide fraction of two by-product hydrolysates based on two complementary approaches: a transcriptomics approach aimed at getting transcriptomics data about the targeted by-products, and a peptidomics approach. The peptidomics approach combined the optimization of fractionation steps and two complementary mass spectrometry techniques. Thus we identified more than 1,000 peptides in the two by-product hydrolysates. Furthermore, diet conditioning experiments conducted in sea bass, Dicentrarchus labrax, highlighted their interesting nutritional properties to maintain growth performances of farmed fish. Indeed, dietary inclusion of 5\% of these hydrolysates in a high-level plant protein diet (95%) maintained growth performances at similar levels to those obtained with diets containing 80% of plant protein. In addition, we demonstrated an influence of these by-product hydrolysates on the digestive physiology of sea bass, as shown by biomarker expression in the intestinal absorption profiles observed in the study. Finally, our work shows that (i) both hydrolysates possess in vitro antibacterial activity and (ii) tilapia hydrolysate stimulates the immune system of sea bass. These results demonstrate the interest of using these two hydrolysates in aquaculture in addition to or instead of fishmeal

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Meynial, Isabelle. « Glycosylation des protéines in vitro par voie enzymatique ». Toulouse, INSA, 1994. http://www.theses.fr/1994ISAT0049.

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Résumé :

Une methode generale de glycosylation des proteines in vitro par voie enzymatique a ete recherchee. Afin de mettre au point une telle methodologie, plusieurs strategies ont ete envisagees. Dans un premier temps, la proteine acceptrice est modifiee par addition sequentielle d'oses. La glycosyltransferase selectionnee pour cette etude a ete l'udp-glucuronyltransferase qui catalyse le transfert d'acide glucuronique a partir d'udp-acide glucuronique, et la proteine acceptrice choisie est le lysozyme. . . .

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Kriaa, Habib. « Enrichissement du son en protéines par fermentation ». Compiègne, 1989. http://www.theses.fr/1989COMPD282.

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Résumé :

Les protéines occupent une place primordiale dans l'alimentation humaine. Cependant, le déficit mondial en cette matière ne fait qu'augmenter en dépit des efforts fait pour améliorer la productivité des sources de protéines végétales. En Tunisie, le son du blé constitue une matière première très abondante. Ce substrat est pauvre en protéines, toutefois, vue sa richesse en amidon (25 à 30%), cette matière première est susceptible d'être enrichi en protéines d'organismes unicellulaires en particulier par culture de levures. Pour parvenir à cet objectif, nous avons utilisé une méthode enzymatique permettant de transformer l'amidon du son en sucres fermentescibles. L'utilisation des enzymes amylolytiques nous a permis de transformer l'amidon en sucres simples avec un rendement égal à 95%. L'hydrolysat ainsi obtenu a été testé comme milieu de culture pour la croissance d'Hansenula anomala en batch et en continu en vue de son enrichissement en protéines. L'emploi de cet hydrolysat enzymatique de l'amidon du son à 20 (g/l) de glucose pour la croissance d'Hansenula anomala en réacteur fermé nous a conduit aux caractéristiques cinétiques suivantes, une vitesse spécifique maximale, max(x)=0,25h-1 et un rendement en protéines Y(P/s)=22%. La culture en continu de cette souche sur l'hydrolysat du son dans les mêmes conditions, nous a amené à déduire les caractéristiques cinétiques suivantes max(x)=0,3h-1 avec un rendement en protéines Y(P/s)=23%
Proteins are very important for human food. Nevertheless the world shortage in protein is increasing despite all the efforts made to improve productivity of vegetable protein sources. In Tunisia, the bran of the corn is a very abundant raw material. This substrate is poor in proteins, however because of its richness in starch (25 - 30%), this raw material can be enriched in proteins of unicellular organisms in particular by yeast culture. To reach this objective, we’ve used an enzymatic method transforming the starch of the bran in a fermentiscible sugar. The use of amylotic enzymes has allowed us to transform starch in simple sugar with a yield of 95%. The hydrolysate thus obtained has been tested as a culture medium for the growth of Hansenula anomala in batch and continue culture to its enrichment in proteins. The use of that enzymatic hydrolysate of the starch of the bran at 20 (g/l) of glucose for the growth of Hansenula anomala in a closed reactor has led to the following kinetic characteristics : a specific maximal speed : max(x)=0,25h-1 and a protein yield Y(P/s)=22%. The continue culture of this strain on the bran hydrolysate in the same conditions has led to the deduction of the following kinetic characteristics : max(x)=0,3h-1 with a protein yield Y(P/s)=23%

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Rivoyre, Matthieu de. « Expression et purification de protéines membranaires mammifères impliquées dans des pathologies ». Nice, 2006. http://www.theses.fr/2006NICE4062.

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Résumé :

À l’interface entre la cellule et le milieu extérieur, les protéines membranaires ont un rôle indispensable au fonctionnement cellulaire. Elles jouent un grand nombre de fonctions et peuvent être impliquées dans des pathologies graves. La connaissance de ces protéines membranaire peut permettre de mieux comprendre de nombreux phénomènes biologiques et pathologiques et leur localisation, accessible, en fait de bonne cibles thérapeutique. La connaissance de la structure des protéines apporte une quantité d’information très importante sur leur fonctionnement. À ce jour si plusieurs dizaines de milliers de structures de protéines solubles ont pu être résolues, moins de deux cents structures de protéines membranaires sont connues. Cette différence provient des difficultés à produire des protéines membranaires pures et stables en quantités nécessaires à la détermination des structures tridimensionnelles. Les conditions d’expression des protéines membranaires est très variables en fonction de la protéine. Notre équipe de recherche s’intéresse au développement de stratégies pour l’expression hétérologue et la purification de protéines membranaires impliquées dans des pathologies humaines dans le but d’en étudier la structure et les relations structurefonction et par une approche protéine. Dans cette thèse sont présentés les résultats obtenus sur l’expression et la purification des récepteurs humains de la voie de signalisation Hedgehog, Patched et Smoothened, dont le disfonctionnement est mis en cause dans de nombreux cancers mais également dans des maladies neuro-dégénératives. Ces protéines ont pu être exprimées dans différents systèmes hétérologues : les levures Saccharomyces cerevisiae et Pichia pastoris et dans les Cellules S2 de drosophile. Nous avons pu mettre en évidence que Smoothened était exprimé sous sa forme native dans les levures et qu’il était possible de la purifier et la produire dans l’optique d’une étude structurale à partir de Pichia pastoris (de Rivoyre et al, FEBS letters, 2005). Patched et Smoothened ont également pu être exprimé stablement et fonctionnellement par des clones de cellules S2. Ce système qui permet la purification de ces protéines s’est également avéré très intéressant pour une étude comparative du fonctionnement des protéines humaines et des protéines de drosophile (de Rivoyre et al, JBC, 2006)
Membrane-bound proteins play a significant role in cell function due to their position in between the cell and the external medium. These proteines are for this reason, involved in a number of human diseases. Knowing membrane-bound proteins will allow us to better understand several biological and pathophysiological functions. Furthermore, their localisations make them interesting therapeutic targets. Knowing the structure of proteins gives a tremendous amount of information on their functions. To date, even if several thousands structures of soluble proteins have been solved; only less than two hundred structures of membrane-bound proteins are known. This important difference is partly due to the fact that membrane-bound proteins are difficult to obtain pure in a stable conformation in order to determine their three-dimensional structures. Recombinant expression of membrane-bound proteins has a high variability depending on the nature of the protein studied. Our research team is therefore interested in the development of recombinant expression and purification strategies of membrane-bound proteins involved in numerous human diseases, in order to study their functions but also to establish structurefunction relationships. My thesis work has focused on the expression and the purification of human receptors of the Hedgehog pathway, Patched and Smoothened. Alteration of these two proteins is known to be involved in numerous cancers but also in some neurological diseases. These two proteins have been expressed in two different systems : yeast cells Saccharomyces cerevisiae and Pichia pastoris and also in drosophila cells S2. We have been able to show that the protein Smoothened is expressed in Pichia pastoris in its native conformation in yeast cells an dit is therefore possible to purify it in order to perform structural studies. Patched and Smoothened have also been stably and functionaly expressed in S2 cells. This system is also interesting to perform comparative studies between drosophila and human proteins

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Sarramegna, Valérie. « Solubilisation et purification du récepteur u-opoi͏̈de humain surexprimé dans la levure méthylotrophe pichia pastoris ». Toulouse 3, 2002. http://www.theses.fr/2002TOU30034.

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Le, Borgne Sylvie. « Conception d'un système d'expression-purification de protéines de fusion par échange d'ions ». Toulouse, INSA, 1994. http://www.theses.fr/1994ISAT0023.

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Résumé :

Un systeme d'expression-purification de proteines recombinantes intracellulaires chez e. Coli, base sur la technologie des proteines de fusion, a ete developpe. Il comporte une etiquette chargee facilitant la separation par chromatographie d'echange d'ions (cei) et un site de clivage par la thrombine pour recuperer la proteine native apres cei. Six et douze residus d'acide glutamique ou aspartique, suivis du site thrombine, sont fusionnes du cote n-terminal de la beta-galactosidase d'e. Coli utilisee comme proteine modele. Un promoteur inductible a l'arabinose controle l'expression des genes. Les proteines fusionnees ont la meme activite specifique que la beta-galactosidase, mais ont un comportement different en cei. Grace au modele de deplacement stoechiometrique, decrivant l'adsorption des proteines en cei, il est montre que le nombre de points d'attache de (glu)6-site thrombine-beta-galactosidase sur l'echangeur d'ions est identique a celui de la beta-galactosidase, par contre sa constante de liaison au support est plus elevee. Situee en amont du gene de la beta-galactosidase, la sequence n-terminale supplementaire de (asp)6-site thrombine provoque une amplification de l'expression au niveau traductionnel. La presence d'etiquettes chargees facilite la purification de la beta-galactosidase a partir d'extraits bacteriens bruts par cei classique ou sur membranes. Les fusions possedant six residus acides sont clivees par la thrombine, contrairement a celles en possedant douze. L'efficacite du clivage augmente en presence de faibles concentrations en polyethyleneglycol ou glycerol. Ces additifs protegent la thrombine contre la denaturation thermique. Le chlorure de sodium affecte le clivage de (glu)6-site thrombine-beta-galactosidase, alors qu'un effet inverse est note avec un substrat chromogene synthetique

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Rakotozafy, Randrianasolo Lalatiana Rasata. « Application de réactions enzymatiques énantiosélectives au dédoublement de synthons chiraux utilisables dans l'industrie pharmaceutique ou en chimie fine ». Paris 6, 1991. http://www.theses.fr/1991PA066301.

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Résumé :

Une étude systématique du dédoublement de deux types d'alcools secondaires a été entreprise en évaluant les coefficients d'énantiosélectivité E de différentes préparations enzymatiques commerciales ou non vis-a-vis de ces molécules. Les poudres ace toniques d'un champignon filamenteux, mucor plumbeus préparées au laboratoire sont particulièrement efficaces pour dédoubler des alcools secondaires acétyléniques ainsi que l'oct-1-en-3-ol et l'octan-3-ol. Les coefficients d'énantiosélectivité sont compris entre 20 et 100. Ces alcools optiquement purs sont des synthons chiraux pour la synthèse de molécules d'un grand intérêt biologique comme les leucotrienes, les prostaglandines, les vitamines, les alcaloi͏̈des ou les phéromones. . . Le (s)-5-hydroxy-hept-6-ynoate de méthyle qui sera utilisé pour la synthèse du leucotriene b4 marqué au tritium est obtenu par hydrolyse par l'alpha-chymotrypsine du mélange racémique correspondant. (E=17,9). La pig liver esterase (ple) et la horse liver esterase (hle) ont permis de dédoubler d'autres alcools secondaires encombrés utilisables comme auxiliaires chiraux et dont certains se sont révèlés de bons substituts de 8-phenylmenthol pour la réaction d'hydrogénation asymétrique d'énamino-esters. Pour le 2,2-diphenylcyclepentanol, le 1,1-diphenyl-2-butanol et le 1,1-diphenyl-2-propanol, le dédoublement par hydrolyse enzymatique des acétates racémiques correspondants en tampon contenant 10% de dmso est une méthode de préparation des deux énantiomères plus facile et plus pratique, sinon plus économique, que les méthodes chimiques actuellement employées

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Raphel, Véronique. « Purification et caractérisation de la N-acycleptide hydrolase intestinale de porc ». Aix-Marseille 3, 1994. http://www.theses.fr/1994AIX30036.

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En 1978, il a ete montre au laboratoire que des rats en croissance sont capables d'utiliser efficacement pour leur synthese proteique de la caseine dont tous les residus de lysine sont acetyles par de la n-acetyl-l-methionine. Une activite de type acetylamino-peptidasique est responsable au niveau intestinal de l'hydrolyse de la liaison isopeptidique. Il nous a semble important de caracteriser cette enzyme afin de preciser sa fonction dans la digestion des substrats proteiques alimentaires ou le catabolisme des proteines cellulaires. Nous avons purifie jusqu'a l'homogeneite une acylpeptide hydrolase a partir de muqueuse intestinale de porcs adultes en combinant des precipitations par le sulfate d'ammonium et des chromatographies d'echange d'ions, d'affinite et de filtration. L'enzyme est un tetramere de 280 kda constitue de sous-unites apparemment identiques de 762,4 kda. Son extremite n-terminale est bloquee, probablement par acetylation, et sa composition en acides amines est comparable a celle trouvee pour l'enzyme hepathique de porc et de rat. Son extremite c-terminale est une serine et son ph optimum d'action est voisin de 8. Les parametres cinetiques de l'hydrolyse de petits peptides de type n-acetyl-(l-alanine)#n avec n=2 a 4 catalysee par l'enzyme, montrent que la vitesse maximale de liberation de la n-acetyl-l-alanine diminue lorsque la longueur de la chaine augmente, le km etant de 0,70,1 mm. L'alanine n-acetylee est un inhibiteur competitif de l'enzyme lors de l'hydrolyse de son substrat synthetique, le n-acetyl-l-alanine-p-nitroanilide. Avec le d-stereoisomere, l'inhibition serait de type mixte, avec une forte composante incompetitive. L'etude du site actif de l'acylpeptide hydrolase intestinale de porc realisee par marquage au dfp et par l'action d'inhibiteurs montre que cette enzyme appartient a la classe des proteases a serine comme c'est le cas de plusieurs endopeptidases digestives, alors qu'ici il s'agit d'une exopeptidase. A l'aide d'anticorps polyclonaux diriges contre l'enzyme intestinale de porc, il a ete possible de montrer que cette proteine, ou son homologue structural, est vraisemblablement presente dans d'autres tissus chez le porc et le rat. Dans cette derniere espece la distribution de l'activite enzymatique ne varie pas le long de l'axe crypte-villosite au niveau intestinal. Outre son intervention dans les etapes ultimes de la digestion des proteines alimentaires naturellement ou artificiellement n-acetylees, l'acylpeptide hydrolase est probablement impliquee dans le catabolisme des proteines intracellulaires dont on sait qu'une fraction tres importante est n-acetylee

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Garreau, Isabelle. « Les protéines plasmatiques, sources potentielles de peptides biologiquement actifs : purification et caractérisation de peptides apparentés aux enképhalines libérés par hydrolyse enzymatique in vitro ». Limoges, 1993. http://www.theses.fr/1993LIMO0186.

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L'hydrolyse in vitro de proteines plasmatiques par la pepsine genere des peptides a activites biologiques diverses. Notre modele d'etude peptides apparentes aux enkephalines permet d'apporter des arguments experimentaux en faveur de l'existence in vivo d'une voie de liberation de sequences peptidiques mimant les effets biologiques de peptides endogenes. La caracterisation des peptides apparentes aux enkephalines est basee sur une approche methodologique qui associe des techniques separatives (chromatographie d'exclusion, clhp en phase inversee) a un dosage radioimmunologique utilisant des anticorps diriges contre les enkephalines; le caractere enkephaline-like des peptides identifies est demontre par des tests bases sur l'interaction ligand/recepteurs opioides. Le serum albumine bovine est la source principale sinon exclusive des peptides immunoreactifs de type met-enkephaline. L'un de ces peptides correspond a la sequence e-k-l-g-e-y-g-f-q (motif 394-402 du serum albumine bovine); un second peptide immunoreactif serait l'hexapeptide g-e-y-g-f-q deja identifie dans un hydrolysat de serum albumine de rat. Nos resultats designent les immunoglobulines comme source majeure de peptides immunoreactifs de type leu-enkephaline. Nous avons identifie les sequences immunoreactives y-l-v-l- et y-f-l respectivement dans les produits d'hydrolyse de plasma bovin et de -globulines, la sequence y-f-l est incluse dans le domaine ch3 des igg1 et igg2 bovines; la proteine plasmatique d'origine de la sequence y-l-v-l n'a pu etre determinee. Ces sequences peptidiques sont reconnues de maniere specifique par les anticorps anti-leu-enkephaline et leur caractere enkephaline-like a ete etabli par des tests cellulaires in vitro. Notre demarche experimentale est un modele applicable a la recherche de sources proteiques diverses susceptibles de liberer des peptides enkephaline-like et a la caracterisation d'autres activites biologiques dans les produits d'hydrolyse enzymatique de ces proteines. Des developpements de ce travail consisteraient a demontrer une liberation in vivo de peptides actifs, a partir de proteines plasmatiques, dependante de l'existence et de l'activite d'enzymes circulantes

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Michalke, Kerstin. « Expression, purification and biophysical characterisation of mammalian GPCRs for structural studies ». Aix-Marseille 1, 2008. http://www.theses.fr/2008AIX11018.

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Résumé :

Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) représentent la plus large famille de récepteurs transmembranaires. En raison de leur rôle central dans la transduction des messages, les RCPG sont impliqués dans de nombreuses pathologies et représentent donc des cibles de la plus haute importance pour l’industrie pharmaceutique. La résolution de leur structure tridimensionnelle devrait faciliter le développement de nouvelles familles de médicaments. Cependant, en raison de leur nature hydrophobe et de leur faible abondance dans les tissus, seules 3 structures de ces RCPG ont pu être résolues. Dans le cadre du projet MePNet, nous avons donc entrepris de produire et de caractériser un certain nombre de ces récepteurs pour les soumettre à des essais de cristallogenèse. Nous avons exprimé sous forme de corps d’inclusion dans E. Coli 45 des 100 RCPG que contient notre collection. Presque la moitié d’entre eux ont été produits en grande quantité. Leur expression n’a pas été plus dépendante de la température d’induction que de leur composition en cystéine ou leur taille. Les vecteurs Gateway se sont révélés être bien plus efficaces que les vecteurs de la famille pET et la souche C43 a été la plus prometteuse. Les récepteurs ont ensuite été produits à l’échelle préparative en fioles et dans des bioréacteurs. Le récepteur de l’hormone parathyroïdienne PTH1R (huPTH1R) et le récepteur cannabinoïde (muCB1R) exprimés en fermenteur ont ensuite été solubilisés avec du SDS et renaturés à l’aide de cyclodextrine (« artificial chaperon assisted refolding »). 280 mg de PTH1R et 370 mg de CB1R ont ainsi été obtenus en partant d’un litre de culture. L’analyse par BIAcore et par spectroscopie de fluorescence des interactions entre le PTH1R et son ligand, le PTH(1-34), ont permis de trouver un Kd de 6,5 nM et 56 nM, respectivement. Des tests de fixation à l’équilibre entre le CB1R et deux de ses ligands marqués au tritium, l’agoniste [3H]CP55,940 et l’inverse agoniste [3H]SR141716A, ont révélé des affinités de 38,2 nM et 19,4 nM, respectivement. Au moins 30 % des récepteurs CB1R renaturés sont donc apparus comme étant pleinement fonctionnels. Des analyses par chromatographie d’exclusion couplée à une détection UV-visible, la spectroscopie infrarouge et la mesure dynamique de la lumière ont permis de montrer que ces récepteurs étaient contaminés par des agrégats. On pouvait réduire la quantité d’agrégats par ultracentrifugation et chromatographie d’affinité ou bien en modifiant les conditions de renaturation et de gel filtration. Des fragments d'anticorps à chaîne lourde (VHH) de camélidés spécifiques de ces deux récepteurs ont été synthétisés et caractérisés par BIAcore. Tous ces fragments ont présenté des affinités de l’ordre du nanomolaire (de 12 à 70 nM). Les épitopes des différents VHH générés pour le PTH1R, tous distincts les uns des autres, n’ont pas semblé se lier au site actif, ce qui nous a permis d’utiliser différents VHH pour des essais de co-cristallisation en présence également du peptide PTH(1-34). Ces essais, ~ 1400 conditions de cristallisation au total, sont restés jusqu’à présent infructueux
G protein–coupled receptors represent the largest family of eukaryotic transmembrane signal transduction proteins. Because of their central role in the body, GPCRs are linked to many human diseases and are therefore important targets for therapeutics. The knowledge of high resolution x-ray structures for GPCRs would facilitate the development of those therapeutics. However, because of their hydrophobic nature and their low abundance in the body, only a few GPCR x-ray structures are known. Within the project MePNet, we therefore produced and characterised GPCRs to subject them to cristallisation assays. We have expressed 45 out of 100 GPCRs in inclusion bodies, almost the half of them with high yields. Expression is neither dependent on the expression temperature nor the cystein content nor the size of individual receptors. Gateway vectors appeared to be superiour to pET vectors and C43 proved to be the most successful expression strain. Expression was successfully scaled up in flasks and fermentors. Fermentor expressed huPTH1R and muCB1R were solubilised in SDS and refolded by artificial chaperone assisted refolding, yielding 280mg and 370mg of refolded PTH1R and CB1R per litre fermentor culture, respectively. Native receptor folding was verified by binding tests. For PTH1R/PTH(1-34) interaction a Kd of 6,5 nM was measured by BIAcore and 56 nM by tryptophan fluorescence quenching assay. CB1R showed an affinity of 38,2 nM for inverse agonist [3H]SR141716A and 19,4 nM for agonist [3H]CP 55,940 in the radioligand binding assay. The CB1R preparation contained 30% of active receptor. Analytic SEC coupled to LS/UV/RI detectors showed that the receptor preparations were contaminated with aggregates, which could be reduced by ultracentrifugation and ligand affinity chromatography, and by changing refolding and gelfiltration conditions. PTH1R and CB1R specific camel heavy chain antibodies fragments (vHHs) were generated and characterised by BIAcore. All tested fragments showed receptor binding activities in the nanomolar range (12- 70nM). Epitopes of PTH1R specific vHHs seem neither to overlap one another nor the binding site of ligand PTH (1-34), which might allow the usage of PTH1R/ PTH (1-34)/ vHH complexes with more than one vHH in crystallisation. PTH1R and CB1R were tested in up to 1400 crystallisation condition, none of these leading to the formation of crystals

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Yvon, Stéphane. « Purification de protéines recombinantes du virus de l'hépatite C. Application au diagnostic ». Aix-Marseille 3, 1997. http://www.theses.fr/1997AIX30121.

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Résumé :

Le virus de l'hépatite C (VHC), découvert en 1988, est responsable de la plupart des hépatites non-A non-B à transmission parentérale. Véritable problème de santé publique, l'infection chronique par le VHC touche 1 à 2 % de la population française. Son dépistage est donc de la plus grande importance du fait d'un mode de contamination mal défini et de l'absence de vaccin. En absence d'antigène natif, la mise au point d'un test de dépistage détectant les anticorps spécifiques du VHC présents dans les sérums des patients infectés nécessite l'obtention de protéines recombinantes du virus. La protéine structurale de nucléocapside (Core), la protéine d'enveloppe E2 et la protéine non structurale C33 possèdent de nombreuses régions antigéniques. L'objet de ce travail a donc été de développer des stratégiesde purification de ces protéines, surexprimées sous forme de protéines fusion, de les intégrer dans des applications diagnostiques (détection d'anticorps anti-VHC et antigénémie) et de sélectionner les constructions les plus adaptées au diagnostic du VHC. Fortement glycosylée, la protéine E2 est produite dans un système hétérologue eucaryote (cellules d'insectes infectées par un baculovirus recombinant) tandis que les protéines Core et C33 sont surexprimées chez Escherichia coli. Des constructions génétiques différentes en fusion avec un motif 6-His et incluant les acides aminés 1-48, 1-119, 1-120 et 1-191 de la protéine Core (191 acides aminés) ont été purifiées sur supports chromatographiques et par des méthodes électrophorétiques. La séquence nucléotidique de la protéine C 33 (272 ou 93 acides aminés) a été exprimée en fusion avec la glutathione S-transférase ou avec le motif 6-His et les protéines ont été purifiées sur des supports d'affinité. L'étude comparée des protéines GST-C33 (272 aa) et C33-H a montré que le système histidine aboutit d'une part à une purification plus aisée des protéines et d'autre part, à une augmentation de la sensibilité de détection des anticorps lors de l'utilisation de ces constructions C33 à des fins diagnostiques. La sensibilité de détection des immunoglobulines anti-Core est optimisée avec une protéine recombinante ne comprenant que les 119 premiers acides aminés de la protéine Core
The Hepatitis C virus (HCV), first isolated in 1988, is the causative agent of most parenterally transmitte non-A, non-B hepatitis. Chronic HCV infection affects 1-2 % of the French population, and is a major public healthcare problem. The mode of contamination of HCV is poorly defined, and no vaccine is currently available, making detection of the disease essential. Since no native antigen has been isolated, the development of a screening test for the detection of HCV-specific antibodies present in the sera of infected patients requires recombinant proteins of the virus to be obtained. The structural nucleocapside protein (Core), the E2 envelope protein and the non-structural protein C33 possess numerous antigenic regions. The purpose of this research was therefore to develop purification techniques for these proteins, which are overexpressed in the form of fusion proteins, to integrate these techniques in diagnostic applications (detection of anti-HCV antibodies and antigenemia) and to select the constructions most adapted to HCV diagnosis. Highly glycosylated, the E2 protein is produced in a heterologous eucaryote system (insect cells infected with a recombinant baculovirus), whereas the Core and C33 proteins are overexpressed in Escherichia coli. Different genetic constructions in fusion with a 6-His tag, and including the amino acids 1-48, 1-119, 1-120 and 1-191 of the Core protein (191 amino acids), were purified on chromatographic supports and using electrophoretic techniques. The nucleotide sequence of the C33 protein (272 or 93 amino acids) was expressed in fusion with the glutathione S-transferase or the 6-His tag, and the proteins were purified on affinity supports. A comparative study of proteins GST-C33 (272 aa) and C33-H showed that the histidine system results in both easier purification of the proteins and increased detection sensitivity of the antibodies when using these C33 constructions for diagnostic purposes. The detection senstivity of anti-Core immunoglobulins is optimized with a recombinant protein which uses only the first 119 amino acids of the Core protein

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Dion-Poulin, Alexandra. « Étude de la fonctionnalité d’hydrolysats protéiques d’insectes générés par le couplage de l’hydrolyse enzymatique et des hautes pressions hydrostatiques et de l’acceptabilité d’un ingrédient d’insectes auprès de cuisiniers novateurs ». Master's thesis, Université Laval, 2021. http://hdl.handle.net/20.500.11794/68780.

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Résumé :

L’intérêt pour l’entomophagie est grandissant en raison de ses nombreux avantages tant environnementaux que nutritionnels. L’acceptabilité sociale de cette pratique dans les sociétés occidentales est un obstacle majeur de cette industrie. Il est reconnu que l’incorporation des insectes sous forme d’ingrédients plutôt qu’entiers favorise l’acceptabilité des consommateurs. Toutefois, la farine d’insectes possède une faible fonctionnalité et est davantage utilisée comme agent de remplissage dans des aliments. L’hydrolyse enzymatique est une méthode largement utilisée afin de modifier la fonctionnalité de diverses protéines et son efficacité peut être améliorée par l’utilisation d’un prétraitement aux hautes pressions hydrostatiques (HPH). Dans le cadre de ce projet, la fonctionnalité de farines d’insectes brutes et d’hydrolysats protéiques générés à partir de farines prétraitées ou non par pressurisation avant l’hydrolyse enzymatique a été déterminée. La solubilité et la capacité de rétention d’huile ont été améliorées par ce procédé contrairement à la capacité de rétention d’eau et aux propriétés moussantes et gélifiantes. Laviscosité et les propriétés émulsifiantes ont été peu améliorées. Cependant, leurs fonctionnalités généralement améliorées en comparaison de celles des farines pourraient faciliter leur acceptabilité. Plus spécifiquement, il est reconnu qu’une expérience positive de consommation favorise l’acceptabilité notamment lorsque des chefs sont inclus dans ce type de processus. Pour ce projet, une étude qualitative basée a priori sur la théorie de la diffusion de Rogers a également été effectuée afin de déterminer la perception de cuisiniers novateurs sur l’utilisation d’ingrédients d’insectes. Tous les participants avaient une opinion positive envers l’entomophagie, mais trouvaient que les inconvénients majeurs de la farine étaient sa texture, son odeur et sa faible acceptabilité par les consommateurs. Comprendre ces perceptions permettra d’accroître l’utilisation des ingrédients d’insectes dans la gastronomie et éventuellement l’acceptabilité sociale.
Interest in Entomophagy increases due to several environmental and nutritional benefits, but the social acceptability of this practice is a major obstacle in Western societies. Studies have shown that incorporating insect as an ingredient rather than whole insects promotes consumer acceptability. As a result of their poor functionality, insect meals arecommonly used as a filler agent. Enzymatic hydrolysis is a widely used method to modify and improve the functionality of various proteins, but the effectiveness of this method can be enhanced by using high hydrostatic pressures (HHP) as a pre-treatment. In this project, the functionality of insect meals and protein hydrolysates prepared from meals that were pretreated or not prior enzymatic hydrolysis by pressurization has been determined. The solubility and oil binding capacity were enhanced by this process in contrast to water binding capacity as well as foaming and gelling properties. Viscosity and emulsifying property were slightly increased comparatively to insect meal. However, their different functionalities from those of insect meals could facilitate their acceptability. Specifically, it is acknowledged thata positive consumption experience promotes the entomophagy acceptability especially whenchefs are included in the process. For this project a qualitative study based a priori on Roger’sdiffusion of innovation theory was also conducted to explore the perceptions of innovative chefs on the use of insect ingredients. All participants had a positive opinion of entomophagy and the majority was ready to use it. Understanding these perceptions will increase the use of insect ingredients in the gastronomy and eventually social acceptability.

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Guyot-Ferréol, Véronique. « Cristallisation d'enzymes à partir d'extraits protéiques bruts : étude des conditions physico-chimiques de cristallisation, détermination de la solubilité des enzymes majeures et analyse des cristaux ». Paris, ENMP, 2002. http://www.theses.fr/2002ENMP1088.

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Durand, Rachel. « Valorisation d'hydrolysat de poisson pour la santé humaine : séparation des composés bioactifs par électrodialyse avec membranes d'ultrafiltration et évaluation de leurs activités biologiques impliquées dans le développement du syndrome métabolique ». Doctoral thesis, Université Laval, 2019. http://hdl.handle.net/20.500.11794/66672.

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Résumé :

La valorisation des co-produits de poisson est un enjeu économique et environnemental. Depuis plusieurs années, des recherches ont montré que les co-produits de poisson contenaient des molécules actives pour la santé humaine comme des acides gras polyinsaturés et des peptides bioactifs. L’objectif principal de cette thèse était d’évaluer l’utilisation potentielle d’hydrolysats de laitance de hareng pour l’amélioration de la santé humaine, spécifiquement en agissant positivement sur certaines fonctions physiologiques associées au syndrome métabolique, et l’effet de leur séparation par électrodialyse avec membranes d’ultrafiltration (EDUF) sur la production de fractions bioactives. Dans un premier temps, il a été démontré qu’une supplémentation avec différents hydrolysats de laitance de hareng d’une diète riche en gras et en sucre chez des souris permettait de moduler certains paramètres physiologiques impliqués dans le développement du syndrome métaboliques (MetS) : amélioration de la tolérance au glucose, augmentation de l’apport énergétique total et protection de la population de Lactobacillus dans le microbiote intestinal. De plus, les hydrolysats ont aussi montré des activités antiinflammatoires in vitro à des concentrations de 1ng/ml et 100pg/ml. Dans un second temps, la faisabilité d’une séparation par EDUF de deux hydrolysats de laitance de hareng différents a été évaluée : le premier plus complexe était un mélange de molécules (lipides, acides nucléiques, peptides, acides aminés libres), alors que le second était principalement composé de peptides et d’acides aminés libres. Une nouvelle configuration utilisant quatre membranes d’ultrafiltrations (deux de 50kDa et deux de 20kDa) a permis un double fractionnement simultané des composés anioniques et cationiques en seulement une étape. Il a d’abord été montré que seuls les peptides chargés ainsi que les acides aminés libres pouvaient être séparés par EDUF alors que les lipides et les acides nucléiques ne migraient pas dans les fractions de récupérations. De plus, l’utilisation de membranes présentant deux tailles de pores distinctes a permis le fractionnement des hydrolysats en différentes classes de poids moléculaires. En effet, l’utilisation de membranes de 20kDa a permis la concentration de peptides de faibles poids moléculaires (< 600Da) et IV d’acides aminés libres, alors que les populations peptidiques des fractions obtenues avec les membranes de 50kDa présentaient des poids moléculaires supérieurs et plus variés. Dans un troisième temps, les bioactivités des fractions de récupérations et des hydrolysats de laitance de hareng ont été évaluées in vitro. Ainsi, la séparation du premier hydrolysat a permis l’obtention d’une fraction finale stimulant la captation du glucose in vitro et d’une fraction anionique antioxydante. Le fractionnement du second hydrolysat a permis quant à lui la production de deux fractions cationiques anti-inflammatoires ainsi que l’identification subséquente de deux séquences peptidiques bioactives. L’ensemble de cette thèse a donc démontré que les hydrolysats de laitance de hareng contenaient des composés actifs, comme des acides gras polyinsaturés et des peptides, modulant positivement certains paramètres physiologiques impliqués dans le MetS et pouvant ainsi permettre la diminution de son occurrence. De plus, la séparation des hydrolysats par EDUF a permis la production de fractions bioactives ainsi que l’identification de deux nouvelles séquences peptidiques anti-inflammatoires (IVPAS et FDKPVSPLL). Ces travaux ont démontré l’effet bénéfique pour la santé humaine des hydrolysats de laitance de hareng et de ses fractions, permettant d’envisager une valorisation plus efficace de ces coproduits de poisson par les industries de transformation dans les secteurs liés à la santé humaine.
Fish by-product valorization is an economic and environmental issue. For several years, scientific researches have shown that fish by-products contained active molecules for human health, as polyunsaturated fatty acids and peptides. The aim of this thesis was to evaluate the potential use of herring milt hydrolysates for human health, especially by evaluating their potential actions in physiological parameters involved in the metabolic syndrome and the effect of their separation by electrodialysis with ultrafiltration membrane (EDUF) for the production of bioactive fractions. First, we have demonstrated that the supplementation of three different herring milt hydrolysates in a high fat high sucrose diet in mice was able to modulate some physiological functions involved in the metabolic syndrome: improvement of glucose tolerance, increase of the total energy intake and protection against the Lactobacillus disappearance in the gut microbiota. Moreover, the hydrolysates decreased the inflammation induction in macrophages stimulated with LPS at 1ng/ml and 100pg/ml. Secondly, we have evaluated the separation of two herring milt hydrolysates by EDUF: the first one was more complex with a mix of different molecules (lipids, nucleic acids and peptides) while the second one was mainly composed of peptides. A new configuration using four ultrafiltration membranes (two of 50kDa and two of 20kDa) allowed a simultaneous double separation of anionic and cationic compounds. It has been shown that only charged peptides and free amino acids were fractionated in EDUF, while the lipids and nucleic acids didn’t migrate to the recovery fractions. Moreover, the use of membranes with different cut-off allowed a separation of the hydrolysates in different molecular weight ranges. Indeed, the use of 20kDa membranes allowed the concentration of peptides with small molecular weights (<800Da) and free amino acids, while the recovery fractions obtained with the 50kDa membranes were composed oh peptide with higher molecular weights.Thirdly, the potential bioactivities of the recovery fractions and the herring milthydrolysates were evaluated in vitro. Hence, the separation of the first hydrolysate allowed the production of a final fraction increasing the glucose uptake and an antioxidant anionicfraction. While the separation of the second hydrolysate allowed the production of two antiinflammatory cationic fractions as well as the identification of two bioactive peptides sequences. All these results showed that milt herring hydrolysate contained bioactive compounds such as polyunsaturated fatty acids and peptides, improving some physiological functions involved in the MetS and may decrease its occurrence. More over, the separation of the hydrolysates by EDUF allowed the production of bioactive fractions and the identification of two new anti-inflammatory peptide sequences. This work demonstrated the existence of a beneficial effect of herring milt hydrolysate and its fractions for the human health, allowing a better valorization of this by-product of the food industry for the health sector.

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Yerima, Hélène Alibada. « Purification et caractérisation des protéines membranaires entérocytaires de liaison de la vitamine B12 ». Nancy 1, 1995. http://www.theses.fr/1995NAN10436.

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Tapparo, Aurélie. « Purification de protéines de liaison du myo-inositol hexakisphosphate chez l'amibe Dictyostelium discoideum ». Université Joseph Fourier (Grenoble), 1998. http://www.theses.fr/1998GRE10202.

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Résumé :

Dans la plupart des cellules eucaryotes, l'inositol hexakisphosphate (insp#6, acide phytique) est le phosphoinositol le plus abondant. Chez l'amibe dictyostelium discoideum, la concentration d'insp#6 est de 0,7 mm et se maintient lors du cycle de differenciation de l'amibe. La fonction intracellulaire de cet inositol polyphosphate n'est pas clairement elucidee, toutefois un role regulateur de l'insp#6 dans le processus d'endocytose a recepteurs a ete propose chez les mammiferes. Un test de liaison de l'insp#6 radioactif a ete tout d'abord mis au point afin de pouvoir suivre les proteines capables de lier ce phosphoinositide, lors de purifications a partir d'extraits solubles de d. Discoideum. En combinant cette methode avec un test immunologique permettant de detecter les chaines lourdes des adaptines (proteines impliquees dans l'endocytose a recepteurs), le protocole de purification a permis de mettre en evidence cette proteine chez l'amibe. L'adaptine chez d. Discoideum ne semble pas fixer l'insp#6 contrairement a la situation dans les cellules de mammiferes. Une purification des proteines cytosoliques de liaison de l'insp#6 a permis l'identification de trois proteines non decrites jusqu'a present chez l'amibe : une nouvelle isoforme de cyclophiline et les proteines ribosomales s4 et s10. Le clonage de leur gene respectif ainsi que l'etude de leur expression au cours du developpement de l'amibe ont ete entrepris. Les trois genes sont specifiques du stade vegetatif : leur niveau de transcription s'effondre apres le commencement de la differenciation. La cyclophiline b purifiee est capable de lier la ciclosporine a et possede une extension n-terminale qui est clivee apres traduction de la proteine. Cette sequence signal permet son adressage vers le reticulum endoplasmique : la cyclophiline peut se trouver dans ce compartiment ou dans une vesicule de la voie de secretion, en effet aucun signal de retention dans le reticulum n'a ete trouve dans sa sequence. Une autre isoforme de cyclophiline localisee dans la mitochondrie a ete obtenue par chromatographie par affinite pour la ciclosporine a.

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Brouquisse, Renaud. « Etude des protéines fer-soufre des mitochondries végétales : caractérisation et purification de l'aconitase ». Grenoble 1, 1987. http://www.theses.fr/1987GRE10088.

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Résumé :

Les proteines a centre (fe-s) des mitochondries vegetales sont etudiees par resonance para magnetique (rpe), cette etude a permis de caracteriser les centres (fe-s) impliques dans la chaine respiratoire de la membrane interne puis d'etudier et de purifier l'aconitase matricielle. L'activite aconitase dans les cellules d'erable est associee a deux fractions proteique. L'une est presente dans le cytosol alors que la seconde est d'origine mitochondriale. La presence de l'aconitase et de l'isocitrate deshydrogenase nadp-dependante dans le cytosol permet de penser que ces enzymes pourraient avoir un role important dans le metabolisme des acides organiques

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Jabrani, Amira. « Régulation de la voie Hedgehog : Étude structurale et fonctionnelle de protéines de signalisation ». Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00737495.

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Résumé :

La voie de signalisation HH joue un rôle crucial dans le contrôle de la prolifération et la différenciation cellulaires. Le dérèglement de cette voie est responsable de nombreux cancers. J'ai ainsi mis en place les outils moléculaires nécessaires pour identifier des régions importantes dans les interactions protéines-protéines au sein du complexe intracellulaire de la voie qui vont permettre de mieux comprendre les mécanismes de régulation du facteur de transcription CI en fonction de l'état d'activation de la voie. Mes travaux ouvrent la voie à de nombreuses études structurales et fonctionnelles de ces protéines jusqu'ici peu étudiées.

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Silvestre, Marialice Pinto Coelho. « Nouvelles méthodes d'étude de la composition d'hydrolysats de caséine (cuprimétrie, spectrophotométrie, chromatographie d'exclusion stérique) : application à l'estimation de leur teneur en di- et tripeptides ». Paris 11, 1993. http://www.theses.fr/1993PA114820.

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Groleau, Paule Émilie. « Étude des interactions peptide-peptide dans un mélange de peptides issu d'un hydrolysat trypsique de ¿-lactoglobuline et de leur influence sur le fractionnement par nanofiltration ». Doctoral thesis, Université Laval, 2003. http://hdl.handle.net/20.500.11794/17853.

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Résumé :

Les hydrolysats enzymatiques de protéines de lactosérum sont riches en peptides fonctionnels et bioactifs, ce qui justifient l’intérêt de les fractionner afin de concentrer ou purifier ces molécules. Les techniques membranaires présentent un fort potentiel pour la séparation de ces hydrolysats à l’échelle industrielle, mais des interactions peptide-peptide semblent affecter leur efficacité. Cette étude visait donc à caractériser les interactions peptide-peptide dans un mélange de peptides issus d’un hydrolysat trypsique de β-LG, à identifier les conditions physico-chimiques et les peptides responsables de ces interactions, puis à évaluation l’influence de ces interactions sur le fractionnement de cet hydrolysat par nanofiltration. La focalisation isoélectrique a d’abord été utilisée pour fractionner l’hydrolysat et a permis de démontrer la formation d’agrégats peptidiques à pH acide. Une étude de turbidimétrie a par la suite mis en évidence la solubilité de l’hydrolysat en fonction du pH et de certaines conditions physico-chimiques. Les agrégats obtenus à pH 4 ont été centrifugés et séparés, puis les peptides responsables de cette agrégation ont été identifiés. Parmi ces peptides, la présence de fragments chymotrypsiques a justifié une étude subséquente sur l’activité résiduelle chymotrypsique dans la préparation trypsique, et son impact sur le phenomène d’agrégation des peptides à pH acide. La dernière partie de cette étude a permis d’évaluer l’impact des agrégats peptidiques sur le fractionnement par nanofiltration de l’hydrolysat trypsique de β-LG. Il a été démontré que les interactions peptide-peptide ne nuisent pas au fractionnement, mais semblent plutôt être bénéfiques, et ce en modifiant la couche de polarisation créée en cours de filtration.
Whey protein enzymatic hydrolysates contain several functional and bioactive peptides which justify their fractionatation to isolate such interesting molecules. Membrane separation technologies have an excellent potential for peptide separation but peptide-peptide interactions seem to reduce their efficiency. The objectives of this study were to demonstrate the occurrence of peptide-peptide interactions in a tryptic hydrolysate of β-LG, to identify the optimal physico-chemical conditions and peptides responsible of such interactions, as well as to evaluate the influence of such interactions on the fractionation of this hydrolysate by nanofiltration. Isoelectric focusing was used to fractionate the hydrolysate and to demonstrate a peptidic aggregation phenomena at acidic pH. Turbidimetry was then used to highlight the solubility of the hydrolysate according to the pH and some physico-chemical conditions. Peptide aggregates formed at pH 4 were centrifuged and separated, and peptides responsible for this aggregation were identified. From these peptides, the presence of chymotryptic peptides has justified a study of the impact of residual chymotryptic activity in the tryptic preparation on the aggregation phenomena. The second part of this work allowed the evaluation of the effect of these aggregates on the fractionation of the tryptic hydrolysate of β-LG by nanofiltration. It was shown that peptide-peptide interactions do not impair the fractionation. On the contrary, these interactions taking place in the polarized layer may have a positive impact on the fractionation.

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Randriamahatody, Zo. « Valorisation biotechnologique des co-produits de crevette : utilisation de la protéolyse enzymatique pour des applications avicoles à Madagascar ». Lorient, 2011. http://www.theses.fr/2011LORIS220.

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Les co-produits de la mer représentent des ressources biologiques valorisables pouvant générer différentes molécules d’intérêts nutritionnels et biologiques. L’objectif de ce travail est d’étudier les potentiels alimentaires des hydrolysats de têtes de crevette d'élevage et de pêche de Madagascar. Ainsi, 4 enzymes actives à pH extrême ont été testées : Pepsine, Novozym 37020, Protex 6L et Delvolase. La Pepsine s'est avérée être la plus appropriée, conduisant à la production de peptides de petite taille avec un poids moléculaire inférieur à 1 000 Da et l’amélioration du profil en acides aminés, favorisant la qualité nutritionnelle. L’hydrolyse pepsique a été optimisée par la condition de pH libre ou maintenu durant l’hydrolyse, et l’inactivation par la chaleur ou par le pH. L'introduction dans l'alimentation avicole traditionnelle malgache des hydrolysats obtenus a conduit à l'amélioration de la production, avec un gain de poids des poulets pouvant aller jusqu'à 2,3 fois supérieur aux témoins. Des activités antimicrobiennes sur de microorganismes pathogènes aquacoles et alimentaires ont été identifiées. L’hydrolyse pepsique pendant 2 heures à pH maintenu a été la plus efficace dans ces 2 domaines d'application. Elle a été aussi la plus favorable pour l’extraction de la chitine en produisant les résidus de carapaces les moins chargés en matières minérales et en protéines. Ces résultats suggèrent que l’hydrolyse enzymatique constitue une méthode efficace pour l’amélioration de la qualité nutritionnelle des têtes de crevette d’élevage et de pêche de Madagascar et la génération de substance à activité antimicrobienne, tout en favorisant l’extraction de la chitine
Marine by-products represent valuable biological resources able to generate molecules with biological and nutritional interests. The objective of the present study is to investigate nutritional potentials of hydrolysates from fished and farmed shrimp heads from Madagascar. Thus, 4 enzymes operational at extreme pH conditions were screened: Pepsin, Novozym 37020, Protex 6L and Delvolase. Pepsine was the most efficient enzyme conducing to the production of small-sized peptides with molecular weight inferior to 1 000 Da and the amelioration of amino acids profile, promoting the nutritional quality. Then, peptic hydrolysis was optimized by using different pH conditions and different enzyme inactivations. Introduction of resulting hydrolysates into traditional malagasy poultry feeding ameliorated the production, with weight gains 2,3 times higher. Some hydrolysates presented also growth inhibition activity again fishes pathogenic and food microorganisms. Two hours peptic hydrolysis at maintained pH seemed to be the most efficient condition in the 2 fields studied. It was also the most effective for chitin extraction by producing the poorest mineral and protein containing exoskeleton resides. Those results suggest the efficiency of enzymatic hydrolysis of shrimp heads from Madagascar to ameliorate their nutritional quality, while allowing partially chitin extraction

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Farges-Haddani, Bérangère. « Les peptides de colza : une alternative aux protéines animales dans les procédés de culture de cellules de mammifères ? » Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2005. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/INPL_T_2005_FARGES_HADDANI_B.pdf.

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Résumé :

En vue d'améliorer les performances de procédés de culture en masse de cellules animales pour la production de protéines thérapeutiques, et de limiter les risques de contamination par des molécules d'origine animale, nous avons étudié les effets d'une supplémentation, par des fractions peptidiques de colza, de milieux de culture sans sérum et/ou sans protéine animale. Des fractions peptidiques de diverses compositions ont été générées par hydrolyse enzymatique d'extrait protéique et fractionnement membranaire. Ces fractions, riches en matière azotée, montrent un effet variable sur les cellules CHO, avec un fort effet promoteur de croissance cellulaire d'une fraction composée d'une large gamme de taille de peptides. Des études cinétiques de cultures en masse en bioréacteurs agités ont confirmé l'impact de cette fraction sur : l'accélération de la croissance cellulaire, le prolongement de la survie cellulaire, l'augmentation de la production spécifique de la protéine produite, et le ralentissement du métabolisme central et du décès cellulaire. Nousavons également montré que les peptides présents dans le mélange ajouté au milieu de culture interviennent, non seulement, comme additifs nutritionnels, mais également, comme facteur de croissance et/ou de survie. D'autres atouts supplémentaires de ces peptidesont été mis en évidence, tels que : une adaptation plus facile de diverses lignées cellulaires à ce milieu sans sérum, une bonne cryoconservation des cellules, une bonne filtrabilité. Enfin, nous avons formulé un milieu de culture particulièrement simple, complètement exempt de molécule d'origine animale, et stimulant la croissance de différentes lignées cellulaires utilisées en industrie, soit adhérentes, soit en suspension, à différentes échellles de culture. L'ensemble de nos résultats converge vers un intérêt de cette nouvelle source peptidique comme additif dans les procédés de culture en masse de cellules animales
In order to improve the performances of animal cell culture processes for the production of therapeutic proteins, and to limit the risks of contamination by animal derived molecules, the effects of a supplementation of serum-free and animal-protein free culture media with rapeseed peptidic fractions were performed. Peptide fractions of various compositions were generated by enzymatic hydrolysis on proteic extract and membrane fractionation. These fractions, rich in nitrogen matter, displayed a variable effect on CHO cells, with a strong cell growth promoting effect of a fraction containing peptides with a broad range of size. In fact, this fraction increased the cell growth, prolonged cell survival, increased the specific production of the recombinant protein, and reduced the whole metabolism of carbohydrates. We also showed that tis peptidic fraction was utilized as nutritioinal additives, but also, as survival and/or growth promoting factors. Other additional advantages ot these peptides were highlighted, such as : an easier adaptation of various cell lines to serum-free conditions, a good cryoprotection of cells during the freezing process au good filterability. Indeed, a very simple culture medium was designed, completely free from animal molecules, and stimulating the growth of adherent or suspension cells from different industrial strains, for various culture scales. These results taken together suggest the use of this new particularly interesting peptidic source as an additive in animal cell culture processes

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Tbarka, Noureddine. « Purification et caractérisation de la protéine 90 KD de choc thermique : associée au récepteur des hormones glucocorticoï͏̈des du rat ». Lille 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LIL10089.

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Toillon, Robert-Alain. « Caractérisation des effets apoptotiques des cellules épithéliales mammaires normales sur les cellules cancéreuses du sein ». Lille 1, 2001. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/2001/50376-2001-229.pdf.

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Fargin, Annick. « Le site de liaison des antioestrogènes : solubilisation, caractérisation et recherche d'une méthode de purification ». Toulouse 3, 1987. http://www.theses.fr/1987TOU30311.

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Résumé :

Une synthese bibliographique de la pharmacologie des antioestrogenes utilises pour le traitement des cancers du sein suggere le role important de l'interaction de ces molecules avec leur site de liaison specifique (abs: antiestrogen binding site), different du recepteur des strogenes. Les travaux experimentaux rapportes par l'auteur lui ont permis de s'avancer dans la caracterisation de ce site de liaison. Une methode de solubilisation efficace et non denaturante a ete obtenue pour les abs microsomaux d'uterus de rate. Elle fait appel au detergent 3(3-cholamidopropyl) dimethylammonio-1-propane sulfonate (chaps) inclus dans un tampon de haute force ionique. Les sites sont extraits en totalite et conservent leurs caracteristiques de liaison vis a vis des divers antistrogenes etudies. Leur specificite de liaison a egalement ete etudiee pour une famille de molecules nouvellement synthetisees et derivees du motif structural phenoxyethanamine. Deux de ces molecules se lient avec affinite et representent des outils biochimiques potentiels. Il s'agit d'un azoture photoactivable dont les conditions de couplage covalent aux abs ont ete mises au point, et d'un derive biotinyle qui nous permettra d'envisager la purification des sites par chromatographie d'affinite dans un systeme avidine-biotine. La taille de la proteine abs a egalement ete etudiee. Dans les conditions les plus dissociantes, les complexes detergent-proteine se caracterisent par un coefficient de sedimentation s#2#0#,#w de 5,2 s. Cette valeur est en bon accord avec celle de la masse moleculaire des abs qui a ete determinee par l'auteur in situ dans les membranes en utilisant la technique d'inactivation par les radiations

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Rautureau, Gilles. « Expression, purification et étude structurale par RMN de PEBP de drosophile ». Orléans, 2006. http://www.theses.fr/2006ORLE2043.

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Résumé :

Les Phosphatidylethanolamine Binding Proteins (PEBP) sont des protéines d’environ 20 kDa conservées depuis les bactéries jusqu’aux mammifères. Elles sont caractérisées par leur capacité de fixer des ligands anioniques. Les PEBP agissent dans un grand nombre de processus cellulaires (notamment au niveau des voies de transduction du signal), et de processus physiologiques (comme la spermatogénèse) de l’organisme sain. Par ailleurs des modifications de l’expression de ces protéines sont corrélées à des situations pathologiques comme les cancers primaires et métastatiques, le diabète, la maladie d’Alzheimer et l’infertilité. Il existe 7 PEBP chez la drosophile. Durant ce travail de thèse nous avons exprimé 3 d’entre elles chez Escherichia coli et mis au point les protocoles pour les purifier en grande quantité. Parmi les protéines produites, la protéine CG7054 a été choisie pour une étude structurale par RMN. Nous avons réalisé l’attribution des signaux 1H, 13C et 15N du squelette peptidique et des chaînes latérales de cette protéine. L’étude de la dynamique de son squelette peptidique a été réalisée et sa structure 3D a été déterminée et analysée.

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Jan, Gwenaël. « Étude des protéines membranaires acylées de mycoplasma gallisepticum : purification et caractérisation d'antigènes de surface ». Rennes 1, 1995. http://www.theses.fr/1995REN10015.

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Résumé :

Cette these est consacree a l'etude des proteines membranaires acylees de mycoplasma gallisepticum, agent d'infections respiratoires chroniques chez les oiseaux d'elevage. Chez ce mycoplasme, 35 proteines acylees ont ete mises en evidence. Les acides gras incorpores (satures et insatures) ont ete identifies et quantifies. Le palmitate (c16:0) constitue l'acide gras quantitativement le plus incorpore. L'existence de lipoproteines a ete mise en evidence. Une etude comparative de la dissolution de la membrane de ce mollicute par 11 tensioactifs a ete effectuee. A partir de fractions enrichies ainsi obtenues, la combinaison de deux techniques chromatographiques de separation en systeme micellaire a permis de purifier trois proteines, p52, p67 (acylproteine majoritaire) et p77. Les antigenes p52 et p67 ont ete caracterises d'un point de vue structural, fonctionnel et immunologique. Ces proteines amphiphiles sont integrees dans la membrane et exposees a la surface de la cellule. P67 possede une sequence signal de 25 residus et subit une maturation lipidique complexe analogue a celle des lipoproteines bacteriennes. Elle presente de plus une activite lectine caracteristique des adhesines mycoplasmiques. Les proteines p52 et p67 sont des antigenes specifiques de m. Gallisepticum et provoquent une reponse humorale importante chez le poulet. P67 presente de plus une variation de taille et de phase caracteristique de certaines lipoproteines mycoplasmiques. L'immunogenicite des proteines caracterisees et la possibilite d'incorporer p67 dans des complexes immunostimulants offrent de nouvelles perspectives en matiere de vaccination et de serodiagnostic

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Demers, Mathieu Véronique. « Activité antimicrobienne d'un extrait peptidique issus d'un hydrolysat trypsique de protéines de lactosérum ». Thesis, Université Laval, 2011. http://www.theses.ulaval.ca/2011/28671/28671.pdf.

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Suwal, Shyam, et Shyam Suwal. « Fractionation of Peptides from Protein Hydrolysate by Electrodialysis with Filtration Membrane : process optimization, Fouling characterization and Control mechanisms ». Doctoral thesis, Université Laval, 2015. http://hdl.handle.net/20.500.11794/26619.

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Résumé :

Des peptides bioactifs ont déjà été fractionnés par électrodialyse avec membrane de filtration (ÉDMF) à partir d’hydrolysats de sous-produits de crabe des neiges. L’optimisation des paramètres apparaît maintenant indispensable pour perfectionner le procédé. Ainsi, le taux de migration des peptides, leur sélectivité et l'évolution des paramètres électrodialytiques ont été étudiés pour différents paramètres (configuration, concentration en KCl et types de champ électrique). La configuration (2) de la cellule d’ÉDMF comprenant deux compartiments d'alimentation et un compartiment de récupération a démontré des valeurs de champ électrique local relativement stables par rapport à la configuration (1) constituée d’un compartiment d’alimentation et de deux compartiments de récupération. Des peptides contenant des glutamates, des aspartates, et des glycines ont été séparés avec la configuration 1 et des peptides composés d’arginines et de lysines avec la configuration 2. Un taux de migration peptidique de 13,76 ± 3,64 g/m2h a été obtenu par le maintien constant de la conductivité des solutions. La sélectivité a été accrue en augmentant la concentration en KCl de 1 à 5 g/L dans le compartiment de récupération. Une augmentation de la force ionique a amplifié la charge de surface, agrandissant ainsi la taille effective des pores et réduisant la couche d'hydratation de la membrane d’ultrafiltration. Toutefois, les membranes échangeuses d’anions et de cations ont été colmatées par des peptides et des acides aminés et détériorées pendant l’ÉDMF. Pour résoudre ces problèmes, l’effet de l’application du champ électrique pulsé (PEF) et de l'inversion de polarité (PR) a été étudié. Le taux de migration des peptides n'a pas été affecté sauf avec PR à 40 V. La sélectivité a été maximale avec PEF à 20 V. La dissociation de l'eau a été réduite tout en conservant les propriétés physico-chimiques des membranes grâce à l’application du PEF et de la PR par rapport au courant continu (DC). En outre, la plus faible quantité d'énergie a été consommée avec le PEF. Par conséquent, il a été possible d’optimiser la technologie d’ÉDMF du point de vue de l’efficacité énergétique, de la sélectivité peptidique et de l’encrassement membranaire grâce à l’application du PEF et tout en maintenant la conductivité électrique des solutions.
Des peptides bioactifs ont déjà été fractionnés par électrodialyse avec membrane de filtration (ÉDMF) à partir d’hydrolysats de sous-produits de crabe des neiges. L’optimisation des paramètres apparaît maintenant indispensable pour perfectionner le procédé. Ainsi, le taux de migration des peptides, leur sélectivité et l'évolution des paramètres électrodialytiques ont été étudiés pour différents paramètres (configuration, concentration en KCl et types de champ électrique). La configuration (2) de la cellule d’ÉDMF comprenant deux compartiments d'alimentation et un compartiment de récupération a démontré des valeurs de champ électrique local relativement stables par rapport à la configuration (1) constituée d’un compartiment d’alimentation et de deux compartiments de récupération. Des peptides contenant des glutamates, des aspartates, et des glycines ont été séparés avec la configuration 1 et des peptides composés d’arginines et de lysines avec la configuration 2. Un taux de migration peptidique de 13,76 ± 3,64 g/m2h a été obtenu par le maintien constant de la conductivité des solutions. La sélectivité a été accrue en augmentant la concentration en KCl de 1 à 5 g/L dans le compartiment de récupération. Une augmentation de la force ionique a amplifié la charge de surface, agrandissant ainsi la taille effective des pores et réduisant la couche d'hydratation de la membrane d’ultrafiltration. Toutefois, les membranes échangeuses d’anions et de cations ont été colmatées par des peptides et des acides aminés et détériorées pendant l’ÉDMF. Pour résoudre ces problèmes, l’effet de l’application du champ électrique pulsé (PEF) et de l'inversion de polarité (PR) a été étudié. Le taux de migration des peptides n'a pas été affecté sauf avec PR à 40 V. La sélectivité a été maximale avec PEF à 20 V. La dissociation de l'eau a été réduite tout en conservant les propriétés physico-chimiques des membranes grâce à l’application du PEF et de la PR par rapport au courant continu (DC). En outre, la plus faible quantité d'énergie a été consommée avec le PEF. Par conséquent, il a été possible d’optimiser la technologie d’ÉDMF du point de vue de l’efficacité énergétique, de la sélectivité peptidique et de l’encrassement membranaire grâce à l’application du PEF et tout en maintenant la conductivité électrique des solutions.
Bioactive peptides were efficiently separated by using electrodialysis with filtration membrane (EDFM) from snow crab byproduct hydrolysate. Meanwhile, optimization of parameters is indispensable for scaling-up. The peptide migration rate and selectivity as well as evolution of electrodialytic parameters were studied with different parameters such as EDFM cell configuration, KCl concentration and type of electric field. The EDFM stack with two feed and one recovery compartments (configuration 2) has relatively stable electric field strengths (local) than the configuration with one feed and two recovery compartments (configuration 1). Peptides containing anionic amino acids: glutamic and aspartic acid as well as glycine and cationic amino acids: arginine and lysine were fractionated using configuration 1 and 2, respectively. Maintenance of solution conductivity upheld the local electric field and peptide migration throughout the treatment resulting in a higher peptide migration rate of 13.76±3.64 g/m2.h never observed so far. The selectivity of cationic peptides containing arginine and lysine increased significantly with increase in KCl concentration from 1 to 5 g/L. An increase in ionic strength amplified the surface charge density of filtration membrane subsequently increasing effective pore size and reducing hydration layer. However, both anion- and cation-exchange membranes were fouled by peptides and amino acids and were deteriorated during EDFM treatment. To address these problems, the effect of applying pulsed electric field (PEF) and polarity reversal (PR) was studied. The peptide migration rate was unaffected among PEF, PR and DC modes except with PR at 40 V. The selectivity of cationic peptides was maximum with PEF at 20 V. Fouling and water dissociation were significantly reduced and physicochemical properties of IEMs were better-protected with PEF and PR than DC. Moreover, the least amount of energy was consumed with PEF mode. Therefore, the parameters affecting EDFM process were optimized in terms of energy efficiency, selectivity and lower deterioration of membranes by applying PEF regime with configuration 2 and maintaining the constant electrical conductivity of solutions.
Bioactive peptides were efficiently separated by using electrodialysis with filtration membrane (EDFM) from snow crab byproduct hydrolysate. Meanwhile, optimization of parameters is indispensable for scaling-up. The peptide migration rate and selectivity as well as evolution of electrodialytic parameters were studied with different parameters such as EDFM cell configuration, KCl concentration and type of electric field. The EDFM stack with two feed and one recovery compartments (configuration 2) has relatively stable electric field strengths (local) than the configuration with one feed and two recovery compartments (configuration 1). Peptides containing anionic amino acids: glutamic and aspartic acid as well as glycine and cationic amino acids: arginine and lysine were fractionated using configuration 1 and 2, respectively. Maintenance of solution conductivity upheld the local electric field and peptide migration throughout the treatment resulting in a higher peptide migration rate of 13.76±3.64 g/m2.h never observed so far. The selectivity of cationic peptides containing arginine and lysine increased significantly with increase in KCl concentration from 1 to 5 g/L. An increase in ionic strength amplified the surface charge density of filtration membrane subsequently increasing effective pore size and reducing hydration layer. However, both anion- and cation-exchange membranes were fouled by peptides and amino acids and were deteriorated during EDFM treatment. To address these problems, the effect of applying pulsed electric field (PEF) and polarity reversal (PR) was studied. The peptide migration rate was unaffected among PEF, PR and DC modes except with PR at 40 V. The selectivity of cationic peptides was maximum with PEF at 20 V. Fouling and water dissociation were significantly reduced and physicochemical properties of IEMs were better-protected with PEF and PR than DC. Moreover, the least amount of energy was consumed with PEF mode. Therefore, the parameters affecting EDFM process were optimized in terms of energy efficiency, selectivity and lower deterioration of membranes by applying PEF regime with configuration 2 and maintaining the constant electrical conductivity of solutions.

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Zhou, Feng-Ling. « Supports à base de silice enrobée par des polysaccharides modifiés : préparation, caractérisation et applications pour la purification de protéines ». Paris 13, 1990. http://www.theses.fr/1990PA132027.

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Résumé :

L'extension de la chromatographie d'affinité dans les conditions de la HPLC ou à l'échelle préparative se limite à la difficulté d'obtention des phases stationnaires possédant à la fois des propriétés mécaniques suffisantes et une capacité de couplage des ligands actifs raisonnables. Dans cette étude, nous proposons de modifier la silice par enrobage avec un polysaccharide (dextrane ou agarose) substitué par une quantité calculée de fonctions diethylaminoethyl (DEAE) chargés positivement. Cette enrobage permet une neutralisation des fonctions silanoles présentes à la surface de la silice. L'étude des propriétés des supports en chromatographie d'exclusion stérique haute performance des protéines a permis de tester l'inactivation des phases minérales et de définir les conditions permettant une diminution des interactions non spécifiques du matériau mineral avec les protéines en solution. Ces supports qui conservent les propriétés mécaniques initiales de la silice peuvent aussi être facilement actives et couplés en utilisant les méthodes mises au point pour les supports de chromatographie d'affinité conventionnels. Nous avons pu ainsi coupler différents ligands naturels (proteine A, concanavaline A, heparine, fucane, dermatane sulfate) et synthétiques (CMDBS et phosphodextrane) en utilisant comme agent de couplage le 1,1'-carbonyl-diimidazole (CDI) ou le 1,4'-butanediol diglycidyl ether (EBDG). Ces supports d'affinité à base de silice enrobée ont été utilisés pour purifier differentes protéines plasmatiques. Ainsi les supports portant l'héparine ou le CMDBS permettent la séparation et la purification de l'antithrombine à partir d'une fraction plasmatique avec un rendement important conduisant à une protéine d'activation spécifique élevée (3, 4u mg). Ces supports ont permis ainsi la purification de la thrombine en une seule étape permettant d'obtenir à partir d'un échantillon commercial une thrombine d'activité élevée (2000-25000 unih/mg). Enfin, des essais préliminaires montrent que sur certains supports actifs il est ainsi possible de purifier le deuxième cofacteur de l'héparine à partir du plasma ou de séparer certains facteurs vitamine k dépendants de l'ensemble des facteurs actives.

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Miribel, Laurent. « Purification par chromatographie d'affinité et caractérisation de protéines humaines du plasma : applications méthodologiques, biologiques, génétiques et cliniques ». Lyon 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LYO1W264.

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Pozza, Alexandre. « Surexpression hétérologue et purification du transporteur membranaire ABCG2 : mécanisme d'interaction avec des substrats et des inhibiteurs spécifiques ». Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10327.

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Résumé :

ABCG2 est un demi-transporteur ABC impliqué dans le phénotype de résistance à de multiples drogues des cellules cancéreuses. Notre but est de comprendre le mécanisme de transport et d’interaction avec des inhibiteurs spécifiques. Après des tentatives infructueuses en bactérie, ABCG2 a été surexprimée sous forme fonctionnelle dans le système cellules d’insecte/baculovirus. L’effet de certains inhibiteurs sur l’activité ATPasique de la protéine a été étudié, ainsi que leur fixation sur le transporteur purifié. Cela a permis de mettre en évidence un mécanisme d’inhibition différent pour un même inhibiteur entre les formes sauvage et mutée R482T du transporteur. La différence dans le spectre des substrats transportés induite par la mutation n’est pas due à la fixation, mais plus probablement à la translocation membranaire des substrats. La protéine recombinante apparaît sous forme de deux bandes dont la différence est probablement de nature conformationelle
ABCG2 is an ABC half-transporter involved in multidrug resistance of cancer cells. Our aim is to understand the mechanism of transport and of interaction with specific inhibitors. After some unsuccessful attempts in bacteria, ABCG2 was functionally overexpressed with the insect cells/baculovirus system. The effects of some inhibitors on ATPase activity were studied, as well as the capacity of binding to the purified transporter. This allowed to bring evidence for a different inhibition mechanism for the same inhibitor between the wild-type and R482T mutant of the transporter. The difference in transport-substrate spectrum induced by the mutation is not due to binding, but more likely related to membrane translocation. The recombinant protein appears as two bands, the difference of which is probably of conformational origin

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Cerro, Rose-Marie. « Purification de produits d'intérêt biologique par électrophorèse de zone en écoulement continu ». Toulouse 3, 1996. http://www.theses.fr/1996TOU30108.

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Résumé :

L'electrophorese de zone en ecoulement continu est une technique separative performante pour produire des molecules tres pures a l'echelle de quelques mg/h. Dans ce procede, les differentes especes sont separees sous l'effet d'un champ electrique au sein d'une veine liquide en ecoulement. Ces conditions particulierement douces, (absence de support solide), sont tout a fait adaptees a la purification de molecules fragiles. Au cours de la separation, differents phenomenes de transport sont mis en jeu qui s'opposent a l'effet separatif, lie a la difference de mobilite electrophoretique entre les produits. Une approche theorique simplifiee est donc proposee pour determiner l'importance relative de 2 phenomenes majeurs, l'effet croissant et l'electrohydrodynamique, en fonction des parametres physico-chimiques et operatoires. Cette etude des phenomenes limitants permet par exemple de determiner s'il existe, pour un produit de proprietes connues des conditions conduisant a une separation totale. L'interet de cette analyse est ensuite illustree sur deux exemples. Le premier concerne la separation de 2 proteines du lactoserum bovin, la lactoferrine et l'albumine, presentant des interactions pouvant dans certains cas donner lieu a la formation d'un complexe. L'etude du comportement electrophoretique du melange a permi de realiser soit une separation totale des deux proteines soit d'isoler la forme complexe. La methodologie ainsi mise en place a ete appliquee a la purification d'un anticorps monoclonal a partir d'un liquide ascite brut de souris. Dans les meilleures conditions jusqu'a 5 mg/h d'anticorps ont ete produits avec une purete egale a 95% en une seule etape de purification

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Host, Hélène. « Caractérisation et purification partielle de l'activité méthyltransférase spécifique de la HBHA, adhésine majeure de M. Tuberculosis ». Lille 2, 2006. http://www.theses.fr/2006LIL2S060.

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Résumé :

Mycobacterium tuberculosis, l'agent responsable de la tuberculose, est à l'origine de deux millions de décès chaque année dans le monde. La HBHA de Mycobacterium tuberculosis est un facteur de virulence majeur impliqué dans le mécanisme de dissémination extrapulmonaire qui constitue une étape-clef de la pathogenèse de la tuberculose. Il a été montré que le domaine C-terminal fait l'objet d'une méthylation post-traductionnelle, nécessaire en particulier à l'induction d'une réponse protectrice contre une infection à Mycobacterium tuberculosis dans le modèle murin. Cette modification n'a pas lieu lorsque la HBHA est exprimée sous forme recombinante chez Escherichia coli. Le but de cette étude est de caractériser et purifier l'activité méthyltransférase responsable de la modification post-traductionnelle de la HBHA. Nous exposons ici la mise au point d'un test de méthylation in vitro hautement sensible, reposant sur l'anticorps monoclonal E4. En effet, E4 reconnaît de manière forte la HBHA lorsqu'elle est méthylée, et seulement faiblement la protéine recombinante non méthylée produite chez E. Coli. Ainsi, nous avons montré que la présence du domaine N-terminal n'est pas nécessaire à la modification du domaine C-terminal de la protéine : il est en effet possible de méthyler in vitro, en utilisant un lysat de mycobactéries comme source d'enzyme, une protéine hétérologue sur laquelle est greffé le domaine C-terminal de la HBHA. Ce résultat a été confirmé par des analyses en spectrométrie de masse. Dans le but de purifier le(s) méthyltransférase(s) mycobactérienne(s) responsable(s) de la modification post-traductionnelle de la HBHA, nous avons développé une approche biochimique consistant à réaliser des expériences de fractionnement d'un lysat de M. Bovis BCGΔhbhA sur une série de différentes matrices (échangeuses d'ions, affinité, interactions hydrophobes. . . ) et avons testé l'activité méthyltransférase spécifique de la HBHA dans les fractions obtenues. Ainsi, nous avons pu montrer de façon reproductible que l'activité méthyltransférase est présente dans plusieurs fractions contenant des protéines aux propriétés différentes d'interactions avec les matrices utilisées, ce qui suggère fortement que l'activité méthyltransférase responsable de la modification post-traductionnelle de la HBHA serait en fait le résultat de l'activité de plusieurs enzymes ou de plusieurs isotypes d'une même enzyme. Il n'a pour l'instant pas été possible, même après plusieurs étapes de chromatographie, d'obtenir une fraction assez enrichie pour pouvoir identifier par spectrométrie de masse l'une de ces enzymes ou isotypes. Ces résultats semblent indiquer que les enzymes recherchées sont extrêmement minoritaires au sein de la bactérie. Nous avons également testé l'antigénicité de la HBHA recombinante méthylée in vitro (mrHBHA) par un lysat de BCGΔhbhA. Après caractérisation par spectrométrie de masse du nombre de groupements méthyles portés par cette protéine (mrHBHA), nous avons évalué par méthode ELISA la présence d'anticorps dirigés contre cette protéine dans différents sera murins (souris immunisées par la HBHA native ou le BCG, et/ou infectées par M. Tuberculosis) et humains (primo-infectés ou en phase active de la maladie). Nous l'avons comparée avec la réponse obtenue contre la HBHA recombinante (non méthylée), la HBHA native (méthylée) et les formes recombinante et méthylée in vitro d'une protéine hétérologue sur laquelle est greffé le domaine C-terminal de la HBHA.

Thèses sur le sujet « Hydrolysats de protéines – Purification »

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