Littérature scientifique sur le sujet « Glicosidi »

La digossina è un farmaco appartenente alla famiglia dei glicosidi cardioattivi, che hanno importanti effetti inotropi, neuro-ormonali ed elettrofisiologici e che viene tuttora impiegata nel trattamento sintomatico dello scompenso car-diaco con compromissione della funzione ventricolare sinistra e della fibrillazione/flutter atriale. La conoscenza della sua farmacologia e dei suoi effetti clinici è di fondamentale importanza al fine di selezionare i pazienti che possano trarre beneficio da tale terapia ed al fine di evitare l’intossicazione digitalica, che è tuttora un importante problema con il quale il clinico deve confrontarsi. Parole chiave: Digossina; Intossicazione digitalica; Scompenso cardiaco; Iperpotassiemia.

Allo scopo di approfondire i fattori che portano ad un accumulo elevato dei flavonoli e in particolare dei glicosidi della quercetina nell'uva abbiamo valutato in campo l'influenza della defogliazione precoce e all'invaiatura e di altre variabili viticole sulla sintesi di questi composti. Nello stesso tempo abbiamo studiato l'influenza della refrigerazione del vino e della formazione di complessi con altre sostanze presenti nel vino sulla solubilità della quercetina aglicone. I risultati ottenuti hanno confermato che: i) la defogliazione, in particolare quella precoce, inducono un incremento della sintesi dei flavonoli nell'uva, ii) la quercetina aglicone forma complessi, presumibilmente con gli antociani monomeri e con certe classi di pigmenti polimeri, con un incremento sensibile della sua solubilità, iii) la refrigerazione dei vini in cui la quercetina aglicone è presente sopra la sua soglia di solubilità porta alla sua precipitazione.

Los desechos agrícolas son una excelente fuente de materia orgánica renovable y su principal compuesto es la lignocelulosa formada por lignina, pectina, celulosa y hemicelulosas. El xilano es el principal componente de las hemicelulosas y es el segundo polisacárido renovable natural más abundante disponible en la tierra. Es un heteropolisacárido complejo formado por diferentes monosacáridos como D-xilosa, L-arabinosa, D-galactosa, D-manosa y ácidos orgánicos como ácido acético, ácido ferúlico, ácido glucurónico entrelazados con la ayuda de enlaces éster y glicosídico. La biodegradación del xilano es un proceso complejo que necesita la participación de una serie de esterasas y glicosil hidrolasa. La idoneidad de las glicosil hidrolasa para su aplicación en papel y pulpa, alimentos, biorrefinería ha llevado a un aumento en la demanda de estas enzimas a nivel mundial. La presente revisión da una idea de la bioquímica y el uso de las glicosil hidrolasas fúngicas en la industria como una herramienta ecológica emergente.

Dos extratos benzênico e clorofórmico da madeira de Swartzia brachyrachisHarms var. brachyrachis foram isolados, por métodos cromatográficos, uma isoflavona inédita (7,4'—diidroxi -5,3'5'-trimetoxi-6-metilisoflavona), denominada brachyrachisina, c um glicosídio (3-O-β-D-glicopiranosilsitosterol). As estruturas foram elucidadas através de análises espectroscópicas.

The fruits or seeds of Keben (Barringtonia asiatica L. Kurz) were used traditionally for fish poisons, to curvestomach and headeach. The aim of this research was to isolate and identify bioactive compound of n-butanolfraction of active compound against Artemia salina Leach larvae. Isolation and purification of n-butanol fractionwere carried out by column chomatography (SiO2, CHCl3-MeOH) and high pressure liquid chromatography (RP,MeOH). The result of purification was than tested using BSLT methode. The test showed that, BABU-2.4 had thehighest activity with LC 50 value was 30.19 ppm. BABU-2.4 was identified with FT-IR spectrophotometer and NMR(proton and carbon) spectrophotometer as derivate of glicoside.

Na síndrome de isquemia e reperfusão os pulmões podem ser alvo de lesão a distância como nos casos de choque, trauma ou ainda nos casos de transplante hepático. Objetivo: Avaliar o efeito protetor da N-acetilcisteína (NAC) sobre os pulmões após isquemia hepática. Métodos: Foram utilizados 12 ratos, machos, linhagem EPM-1 Wistar, separados aleatoriamente em dois grupos com seis animais (controle e experimento). Os animais de ambos os grupos foram submetidos à anestesia com cloridrato de quetamina e cloridrato de xilazina. Realizou-se a incisão mediana longitudinal, identificação do hilo hepático e da veia cava caudal. Quinze minutos antes do clampeamento injetou-se solução glicosada a 5% no grupo controle e NAC diluída em solução glicosada a 5% no grupo experimento. Os animais foram mantidos em isquemia hepática durante 30 minutos, sendo em seguida realizada toracotomia e remoção cirúrgica dos pulmões para avaliação histológica com coloração pela hematoxilina-eosina. Resultados: A análise dos cortes do parênquima pulmonar mostrou semelhança nos dois grupos estudados, ocorrendo colapso alveolar, infiltrado neutrofílico, congestão vascular e áreas hemorrágicas, compatíveis com a repercussão sistêmica da isquemia hepática. Conclusão: A NAC não modifica a lesão pulmonar decorrente da isquemia, à microscopia óptica.

Abstract An improved method to obtain naringin, a bitter flavored flavanone glicoside with proven biological activities, from grapefruit (Citrus x paradisi L.) peel waste is described. The proposed modification of the known process, which involves extraction with methanol and crystallization in water with the addition of dichloromethane, requires shorter processing time and reduced solvent volume. Due to the direct method employed, which did not require the 3-day air-drying stage, the hot extraction of fresh grapefruit albedo using methanol led to higher yields of naringin extract in half the time required. To evaluate the obtained naringin which possessed a wide range of pharmacological properties, it was subjected to chemical transformation into the flavone apigenin, an expensive and naturally-occurring flavonoid obtained in low yields.

A dioctofimatose é uma doença parasitária causada pelo helminto Dioctophyme renale, tendo como hospedeiros definitivos, cães, gatos, animais silvestres e também o homem, pois este parasito possui potencial zoonótico. Acomete os rins dos seus hospedeiros definitivos, geralmente o direito, mas podem ser encontrados também em outros locais. Embora seja descrito maior ocorrência de casos em cães, também há relatos desta parasitose em gatos. Uma das formas de diagnóstico é através da visualização de ovos do D. renale através do exame de urina. Porém, pelas características comportamentais dos gatos, a coleta de urina nesta espécie é de difícil execução. Portanto, através do estudo de técnicas para pesquisa de ovos deste parasito na urina dos gatos em sílica, presente nas caixas de areia, procura-se facilitar o diagnóstico nestes animais. Para realização deste trabalho, amostras de sílica foram contaminadas com urina contendo ovos de D. renale. As técnicas utilizadas para pesquisa de ovos foram: centrífugo-flutuação em solução hipersaturada glicosada, em duas densidades: 1.230g/ml e 1.275g/ml; flutuação espontânea em solução hipersaturada glicosada, em duas densidades: 1,230g/ml e 1,275g/ml e centrífugo-sedimentação. A avaliação das amostras foi realizada em diferentes tempos, distribuídos da seguinte forma: momento zero, 6 horas, 12 horas, 18 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 72 horas, 120 horas, 168 horas, 240 horas e 336 horas após contaminação do material. A técnica de centrífugo-sedimentação foi a que apresentou o melhor resultado, sendo possível identificar ovos morfologicamente viáveis de D. renale durante os 14 dias de análise.

Contesto scientifico. I glicani rivestono un ruolo cruciale nel sistema nervoso centrale (SNC) e il loro studio è fondamentale per un'accurata comprensione della neurochimica, ma la conoscenza scientifica riguardo ai glicani presenti nel SNC è ancora limitata. Lo scopo di questa tesi è fornire nuovi strumenti al glicochimico e al glicoanalista per condurre studi di neurochimica, funzionali all'esplorazione del ruolo dei glicani nel SNC. Questa tesi presenta un nuovo metodo analitico per lo studio degli N-glicani da tessuti cerebrali (LSD); lo stato dell'arte di un lavoro in corso riguardante l'investigazione di N-glicani e N-glicoproteine differentemente espresse in tessuti cerebrali appartenenti a diverse specie; un efficiente metodo di marcatura chimica per (glico)proteine, applicato con successo a una N-glicoproteina, Neuroserpina (NS), che polimerizza nel SNC con conseguenze patologiche; e le sintesi di glicosidi e glicodendrimeri con potenziali applicazioni in studi neurochimici. Metodi. LSD si sviluppa a partire dalla lisi chimica di tessuti cerebrali (tc), con conseguente precipitazione del proteoma (i.e., metanolo/cloroformio), deglicosilazione enzimatica (i.e., PNGase F), purificazione degli N-glicani, marcatura chimica (i.e., amminazione riduttiva su N-acetilglucosammina terminale) e analisi tramite approcci LC-MS. LSD è stato ottimizzato su campioni di tc e accuratamente validato (i.e., sensibilità, precisione, linearità, range dinamico, selettività, robustezza). L'analisi degli N-glicani è stata anche effettuata tramite deglicosilazione enzimatica in-gel da elettroforesi di proteine, mentre un protocollo di digestione con Tripsina in-gel è stato usato per l'identificazione di N-glicoproteine e siti di N-glicosilazione tramite approcci LC-MS su peptidi. NS è stata dimetilata chimicamente (i.e., amminazione riduttiva su lisina), nella sua forma monomerica (mhNS) e polimerica (phNS) e l'esito della reazione è stato valutato tramite MS, per l'investigazione dei determinanti molecolari coinvolti nel meccanismo di polimerizzazione. I glicosidi sono stati sintetizzati usando una reazione di glicosilazione di tipo Fischer, condotta su monosaccaridi deprotetti, usando alcol allilico e decenolo come accettori glicosidici, mentre i glicodendrimeri sono stati ottenuti sfruttando la chimica delle ossime per la decorazione con gruppi maltosilici di dendrimeri sintetizzati tramite metatesi delle olefine. Risultati. LSD presenta il più basso limite di rivelabilità (1 mg di tc) rispetto a molti altri lavori riportati in letteratura ed è attualmente il metodo di neuro-N-glicomica più accuratamente validato. La deglicosilazione in-gel per l'analisi degli N-glicani cerebrali ha prodotto cromatogrammi informativi per ogni frazione del proteoma con elevata risoluzione (e.g., sensibilità fino a 100 EU da una singola banda di gel), permettendo l'analisi dei peptidi deglicosilati dallo stesso campione (i.e., un totale di 1200 peptidi, 570 proteine, 57 N-glicoproteine, e nuovi siti di N-glicosilazione identificati). La marcatura chimica di NS si è dimostrata efficiente (i.e., 80-90% di resa), compatibile con la struttura nativa della proteina, e funzionale all'uso designato, in quanto capace di evidenziare differenze statisticamente significative nel profilo di marcatura di mhNS e phNS (i.e., 9 lisine). La sintesi di glicosidi ha fornito prodotti con buona resa (e.g., 70%) e alfa-stereoselettività, mentre quella dei glicodendrimeri ha generato molecole esponenti gruppi maltosilici, utilizzabili nel contesto di studi di neurochimica. Conclusioni. I metodi e le molecole contenuti in questa tesi apporteranno beneficio alla comunità scientifica glicochimica, incrementando il numero di strumenti che il glicochimico e il glicoanalista possono utilizzare per portare avanti lo studio degli effetti dei glicani in contesto neurologico e neuromedico.
Background. Glycans play crucial roles within the central nervous system (CNS) and their study is essential for a thorough comprehension of neurochemistry, but the scientific knowledge about CNS glycans remains scarce. The aim of this thesis is to provide the glycochemist and glycoanalyst with novel tools for neurochemistry studies, towards the exploration of glycan roles in the CNS. This thesis presents a novel analytical method for brain N-glycans investigation (LSD); the state of the art of an ongoing work for the investigation of N-glycans and N-glycoproteins differentially expressed in brain tissues of different species; an efficient chemical labelling method for (glyco)proteins, successfully applied on Neuroserpin (NS), a pathologically-polymerising CNS N-glycoprotein; and the syntheses of glycosides and glycodendrimers with potential room for neuromedical studies. Methods. LSD comprised brain tissue (bt) chemical lysis, proteome precipitation (i.e., methanol/chloroform), enzymatic deglycosylation (i.e., PNGase F), N-glycans purification, chemical labelling (i.e., reductive amination on terminal N-acetylglucosamine), and LC-MS bioanalysis. The method has been optimised on bt and thoroughly validated (i.e., sensitivity, precision, linearity, range, selectivity, robustness). N-glycans analysis has also been carried out through protein electrophoresis in-gel deglycosylation, while in-gel trypsinisation was used for the LC-MS identification of N-glycoproteins and N-glycosylation sites. NS has been dimethylated (i.e., reductive amination on lysine) in its monomeric (mhNS) and polymeric (phNS) forms, and the reaction outcome has been evaluated using MS, towards the investigation of NS polymerisation-driving molecular features. Glycosides were synthesised with a Fischer- type glycosylation reaction on unprotected monosaccharides using either allyl alcohol or decenol as glycosyl acceptors, while glycodendrimers were obtained decorating olefin-metathesis-synthesised dendrimers with maltose moieties, exploiting oxime chemistry. Results. LSD displayed the lowest detection limit (1 mg of bt) in comparison to many other works reported in the literature and is the most thoroughly validated neuro-N-glycomic method reported to date. In-gel deglycosylation for brain N-glycans analysis furnished informative chromatograms for every proteome fraction with high resolution (e.g., sensitivity up to 100 EU from a single gel band), permitting the analysis of deglycosylated peptides from the same sample (i.e., a total of 1200 peptides, 570 proteins, 57 N-glycoproteins, and novel N-glycosylation sites identified). NS chemical labelling displayed high efficiency (i.e., 80-90% yield), compatibility with the protein folding, and suitability towards the intended purpose, being able to highlight statistically significant differences in mhNS and phNS labelling patterns (i.e., 9 lysines). The syntheses of glycosides furnished products with good yield (i.e., 70%) and a- stereoselectivity, while that of glycodendrimers afforded molecules exposing several maltose moieties, employable in the context of neurochemistry studies. Conclusions. Methods and molecules delivered within this thesis will benefit the glycochemistry community, by enlarging the glycochemist and glycoanalyst toolkits to carry on the investigation of glycans- related effects in neurological and neuromedical context.

O transporte de α-metil glicosídio ( α-MG) em Saccharomyces cerevisiae foi recentemente reportado como transporte ativo, do tipo simporte de &$945;-MG com H+ mediado pela permease Agt1p. A cepa AP77-11B (cepa selecionada em nosso laboratório) 14C-α-MG pelo mecanismo descrito como difusão facilitada porque não existe co-transporte de H+ durante o transporte de α-MG. Os genes HXT1-HXT17 pertencem à família dos transportadores de hexoses em Saccharomyces cerevisiae. Então, nós decidimos investigar a possibilidade que o transporte de α-MG poderia ser mediado pelos transportadores de hexoses. Nós demonstramos que cepa MC966A (tipo selvagem), KY73 (isogênica com MC966A mas deletada nos HXT1-7), BSY08 (isogênica com KY73 com o AGT1 deletado), BSY09 (isogênica com MC966A com o AGT1 deletado) e a EBY.VW4000 (hxt1-17 agt1 gal2-null), não cresceram em α-MG como fonte de carbono. Além disso, estas cepas não transportaram α-MG por difusão facilitada quando as células foram cultivadas em meio com maltose, levando-nos a concluir que os transportadores de hexoses não estavam envolvidos no transporte de α-MG. Nós observamos que a cepa AP77-11B apresentou alta atividade de α-metilglicosidase periplásmica quando as células foram cultivadas em α-MG. Esta atividade enzimática foi ensaiada usando um método descrito primeiramente para invertase periplásmica, no qual as células eram incubadas com fluoreto de sódio, um inibidor da enolase, antes da incubação com α-MG. Então, a glicose produzida durante a hidrólise do -MG poderia ser determinada. A atividade extracelular só está presente em células cultivadas em -αMG. Células de-reprimidas não mostraram atividade de alpha-metilglicosidase. Os parâmetros cinéticos determinados para α-metilglicosidase, indicaram que esta enzima tem baixa afinidade para o alpha-MG. Além do mais, a atividade específica da alpha-metilglicosidase periplásmica aumentou ao longo da curva de crescimento em α-MG. Os resultados reportados mostraram que existem duas vias de utilização de α-MG em Saccharomyces cerevisiae. Uma via é mediada pela Agt1p, responsável pelo transporte ativo de α-MG. Na outra via, a α -metilglicosidase é secretada para o espaço periplásmico das células. Então, a glicose produzida pela hidrólise do α-MG é transportada pelos transportadores de hexoses por difusão facilitada.
Alpha-Methyl glucoside ( alpha-MG) transport in Saccharomyces cerevisiae was previously reported to be an active transport, a H+ -symport mediated by the Agt1p permease. Strain AP77-11B (a strain obtained in our laboratory) takes up 14C- alpha-MG by a mechanism which was ascribed to be facilitated diffusion since there is no H+-cotransport during the alpha-MG uptake. The HXT1-HXT17 there is no H genes belong to a family of hexose transporters in Saccharomyces cerevisiae. Therefore, we decided to investigate the possibility that -MG transport could be mediated by hexose transporters. We demonstrated that strains MC966A (w.t.), KY73 (isogenic to MC966A but hxt1-hxt7-null), BSY08 (isogenic to KY73 with AGT1 deleted), BSY09 (isogenic to MC966A with AGT1 deleted) and even strain EBY.VW4000 (hxt1-hxt17 agt1 gal2-null), were not able to grow on alpha-MG as the sole carbon source. Moreover, none of them presented alpha-MG transport by facilitated diffusion when the strains were grown on maltose leading us to conclude that the HXT glucose transporters were not involved in alpha-MG transport. We found that strain AP77-11B displayed a high periplasmic alpha-methylglucosidase activity when cells were grown on alpha-MG. This enzymatic activity was assayed using a method first described for periplasmic invertase in which cells were incubated with sodium fluoride, an inhibitor of enolase, prior to the incubation with alpha-MG. Then the glucose produced during alpha-MG hydrolysis could be accurately measured. The extracellular activity was present only in cells grown on alpha-MG. Glucose derepressed cells did not show periplasmic alpha-methylglucosidase activity.

Protein-carbohydrate interactions are at the heart of many important biological processes as the adesion of bacteria and viruses to the cell surfaces. It is widely accepted that nature compensates for the low intrinsic affinity of carbohydrate for proteins through the cooperative binding between multiple copies of ligands and receptors so that a strong adhesion results. This important concept, termed cluster effect, has stimulated the search for the construction of highly glycosylated ligands to inhibit polyvalent processes as well as probe for cell-surfaces-binding events. The aim of this PhD research work was the synthesis of calix[4]arene-based glycoclusters via Cu(I)-catalyzed azide-alkyne coupling reaction (CuAAC), as well as the investigation of their biological proprieties. The first research conducted dealt with the synthesis of sialoside clusters as potential inhibitors of viruses infectivity. Tetra- and octavalent sialoside clusters were prepared exploiting the multiple copper-catalyzed cycloaddition of a propargyl thiosialoside with calix[4]arene polyazides. It was demonstrated that these unnatural motifs did not hamper the desired biological activity of the sialoclusters. In fact, they were able to inhibit, at submillimolar concentrations, the hemagglutination and the viral infectivity mediated both by BK and influenza A viruses. Then, this thesis focused on the possibility to support C-glycoside clusters on microarrays to study their affinity against lectins. To this aim C-glycosylated calix[4]arenes have been synthesized in which four galactose residues are linked through a triazole tether to the upper rim of the macrocycle cavity while an azido group is present on the opposite side. Next the calixsugars were grafted through CuAAC on mono or dipropargyloxymethyl-propanediol moieties allowing the synthesis of oligonucleotides bearing one or two calixarene glycoclusters, respectively. Finally, their affinity for lectins PA-IL and RCA 120, galactose specific lectins from Pseudomonas aeruginosa and Ricinus communis, respectively, were compared to that displayed by linear and antenna-type glycoclusters. During the last period of the PhD work it was performed the immobilization of calix[4]arenebased glycoclusters on TiO2 nanoparticles via Cu(I)-catalyzed azide-alkyne coupling reaction. The strategy that has been followed involved first the grafting of bis-functionalized calix[4]arenes (azido groups at upper rim and fenolic or carboxylic groups at the lower rim) onto TiO2 and then multiple click copper(I)-catalyzed cycloaddition to propargil glycosides. The glyconanoparticles obtained were characterized by thermogravimetric analysis (TGA) and infrared spectroscopy. This constitutes the first example of TiO2 nanoparticles coated by a monolayer of calix[4]arene-based glycoclusters.

Mestrado em Química Orgânica e Produtos Naturais
As 2-estirilcromonas, uma pequena classe de compostos heterocíclicos naturais, têm vindo a cativar o interesse dos químicos orgânicos devido às suas actividades biológicas, nomeadamente a actividade antioxidante. Por outro lado, nos últimos anos, a química dos compostos C-glicosilados, ainda pouco explorada, tem sofrido avanços muito significativos motivados pelo carácter hidrofílico e a estabilidade hidrolítica que a ligação C-glicosídica pode conferir a potenciais agentes farmacológicos, suscitando um promissor impacto medicinal. Nesta dissertação, e no seguimento da química dos compostos naturais explorada pelo grupo de investigação de química orgânica, é apresentado o estudo da rota sintética linear que permitiu a obtenção da (E)-3’,4’,5,7-tetra-hidroxi-2-estirilcromona, pelo método de Baker-Venkataraman. É também estudado o processo de C-glicosilação de compostos polifenólicos através da adopção de dois métodos distintos de C-glicosilação, o uso de D-glucose e o uso de fluoreto de 2,3,4,6-tetra-O-benzil--D-glucopiranosilo. Na elucidação estrutural dos compostos sintetizados recorreu-se essencialmente à espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) [espectros de 1H, 13C e estudos bidimensionais de correlação espectroscópica heteronuclear – HSQC e HMBC], mas também à espectrometria de massa (EM) e à análise elementar.
2-Styrylchromones, a small class of heterocyclic natural compounds, have been attracting the organic chemist’s interest due to their known biological activities, namely the antioxidant activity. On the other hand, in the latter years, the chemistry of C-glycosylated compounds, still little explored, has gained important and significant advances motivated by the electrophilic character and hydrolytic stability that C-glycoside linkage may confer to potential pharmacological agents, arising a promising medicinal impact. In this dissertation, and following the chemistry of natural compounds explored by the organic chemistry group, it is presented the study of the synthetic linear route leading to (E)-3’,4’,5,7-tetra-hydroxy-2-styrylchromone, by the Baker-Venkataraman method. It is also studied the process towards the C-glycosylation of polyphenolic compounds, following two distinct C-glycosylation methods, the use of D-glucose and the use of 2,3,4,6-tetra-O-benzyl--D-glucopyranosyl fluoride. In the structural elucidation of the synthesized compounds the mainly used technique was the nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR) [1H, 13C and 2D-NMR techniques HSQC and HMBC], but also mass spectrometry (MS) and elemental analysis.

Dalla lavorazione industriale degli agrumi derivano i sottoprodotti di scarto, essenzialmente scorza e polpa residua denominati in gergo "pastazzo". Il lavoro di ricerca e' stato incentrato sull'utilizzo di pastazzo come fonte energetica e come induttore per funghi del genere Aspergillus, per la produzione di enzimi glicosidici quali à à à ±-L-ramnosidasi (Rha; EC 3.2.1.40) e à à à ²-D-glucosidasi (à à à ²G; EC 3.2.1.21). Sono stati scelti quattro ceppi di Aspergillus: Aspergillus aculeatus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger e Aspergillus terreus, scelti in base alla loro capacita' di sintetizzare glicosidasi in presenza di esperidina. Tutti i ceppi sono stati coltivati in terreno liquido utilizzando come induttore il pastazzo, e Aspergillus terreus e' stato scelto come ceppo migliore, in quanto ha presentato un'alta attivita' ±-L-ramnosidasica. Lo scopo ultimo e' quello di applicare tali enzimi nelle bevande di origine vegetale, soprattutto succhi di agrumi, in quanto là à ¢ à à à ±-L-ramnosidasi e la à à à ²-D-glucosidasi agiscono come idrolasi andando a scindere i legami glicosidici dei disaccaridi presenti nei polifenoli naturali come ad es. l'esperidina e convertendola rispettivamente in esperitina-7-glucoside ed esperitina, il corrispettivo aglicone. E' stata effettuata la caratterizzazione chimico-fisica e cinetica della Rha e della à à à ²G, al fine di determinare le relative Km e vmax, temperatura e pH ottimale, e le inibizioni in presenza di zuccheri. L'enzima e' stato parzialmente purificato tramite inattivazione termica, che ha permesso di eliminare l'attivita' à à à ²-D-glucosidasica. Sono anche state effettuate prove di immobilizzazione su silice MS3030. Dai risultati ottenuti emerge una possibile applicazione nel campo dei succhi di frutta.

La hidrólisis de celulosa a azúcares fermentables es una de las etapas clave que deben ser optimizadas para disminuir el costo de producción de bioetanol producido a partir de lignocelulosa, materia prima abundantemente disponible en Chile en desechos agrícolas y forestales. La hidrólisis de celulosa es catalizada por enzimas celulasas, pertenecientes al grupo de las glicosil hidrolasas. Este Trabajo de Memoria de Título tiene como objetivo la identificación y clonación de glicosil hidrolasas, con énfasis en enzimas potencialmente útiles en procesos de producción de bioetanol. La estrategia general de trabajo consistió en la identificación y selección de cepas capaces de degradar celulosa cristalina, a las cuales se dirigió un método de obtención de fragmentos de DNA codificantes de glicosil hidrolasas, enfocado a la actividad exoglucanasa. Un análisis in sílico de la secuencia de los fragmentos de DNA obtenidos indicó que se obtuvieron fragmentos de genes con actividades putativas β-1,3(4)-glucanasa y α-glucosidasa provenientes de cepas de Lentinula edodes y Peniophora gigantea, respectivamente. Estos resultados poseen altos niveles de confianza (con e-values del orden de 10-9 y 10-30, respectivamente). El fragmento correspondiente a la β-1,3(4)-glucanasa contiene el dominio catalítico conservado característico de este tipo de enzimas. Se estima que los fragmentos encontrados representan un 38% de una β-1,3(4)-glucanasa y un 12% de una α-glucosidasa. El método también produjo la obtención de fragmentos de DNA que codificarían enzimas con otras actividades no relacionadas con glicosil hidrolasas, específicamente una transcriptasa reversa y un transportador de urea. Las enzimas β-1,3(4)-glucanasas y α-glucosidasas son potencialmente aplicables en la etapa de pretratamiento de lignocelulosa en la producción de bioetanol de segunda generación y en la etapa de degradación de almidón en la producción de bioetanol de primera generación, respectivamente, entre otras aplicaciones industriales de menor interés para este trabajo. En conclusión, se logró clonar fragmentos de dos glicosil hidrolasas potencialmente aplicables en un proceso de producción de bioetanol. La estrategia utilizada deberá ser perfeccionada para hacerla más específica, logrando el diseño de partidores degenerados más específicos o bien considerando una estrategia global alternativa, tal como utilizar una genoteca de cDNA como templado del método en lugar de DNA genómico.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005
Objetivo: detectar as alterações macroscópicas e microscópicas do mesentério e do peritônio parietal, quando se administra a solução aquosa de glicose hipertônica a 10% e a 25% na cavidade peritoneal de rato. Métodos: Utilizou-se as amostras de 90 ratas (n=90) “Wistar”, adultas jovens, variando entre 180 – 250 g e enumeradas de 1 a 90, constituindo grupo único e distribuído aleatoriamente em três sub-grupos: A, B e C, contendo cada sub-grupo 30 animais com procedimentos idênticos diferindo apenas no período de observação: 6h; 24h; 48h. Em todos os animais praticou-se incisão longitudinal de pele na linha média ventral. As ratas do sub-grupo A ou grupo-controle, receberam 2 ml de uma solução de cloreto de sódio a 0,9% (NaCl 0,9%) distribuída diretamente na cavidade peritoneal. Usou-se, para isso, seringas descartáveis de 3 ml e posteriormente, seguiu-se de uma síntese em massa da parede abdominal anterior com fio de mononylon 3-0 e excluiu-se o peritônio parietal. Para as ratas dos grupos B e C, (grupo-glicose 10% e grupo-glicose 25%) respectivamente, realizou-se a introdução de 2 ml de soluções de glicose a 10% e 25% na cavidade peritoneal com síntese em massa das paredes abdominais, semelhantes a do grupo A. Resultados: Esses animais foram reoperados nas 6h, 24h e 48h e definiu-se a avaliação macroscópica. Na cavidade peritoneal, observou-se a presença de líquido com uniformidade da serosa e com coloração rósea em toda extensão da área e local estudado. Evidenciou-se presença de congestão vascular. Completou-se a retirada de 90 fragmentos de mesentério e 90 fragmentos de peritônio parietal bilateralmente, totalizando 180 fragmentos. Nenhum animal apresentou necrose e na microscopia do mesentério, as alterações histológicas foram assim distribuídas: 16 casos (17,8%) com inflamação crônica inespecífica; 30 casos (33,4%) com linfonodos hiperplásicos; 10 casos (11,1%) com intensa congestão vascular; 6 casos (6,6%) com fibrose reacional e 28 casos (31,1%) sem alteração, além de ausência de células gigantes, comprovouse uma reação inflamatória de leve intensidade. Nas alterações microscópicas do peritônio parietal, apenas 6 casos apresentaram fibrose reacional (3,3%). Os demais, sem alteração histológica (96,7%). Na análise estatística, não há existência de diferença significativa entre os grupos analisados e as alterações observadas (p>0,05). Conclusões: Concluiu-se, portanto, com base na presente pesquisa, que o uso das soluções de glicose hipertônica e de cloreto de sódio a 0,9% no mesentério e no peritônio parietal não causa necrose tecidual e que o processo inflamatório é de igual intensidade.
Purpose: The objective is to detect the macroscopic and microscopic alterations of the mesenterium and parietal peritoneum when hypertonic glucose aqueous solution 10%- 25% is administrated into the peritoneal cavity of the rat. Methods: Were used 90 Wistar females young rats with weight between 180-250 g, enumerated of 1 to 90, establishing unique group and divided in three groups (A, B, C) of 30 animals chosen aleatory manner. Was used 0,9% saline solution called control group, or group A, 10% glucose solution named group B, and in the others 30 was used 25% glucose solution named group C, differing as soon as in the observation period, (06h, 24h and 48h), but with the same procedure. Was realized a midline abdominal laparotomy wall and in the animals of the control group was injected 2 ml of a 0,9% saline solution into the peritoneal cavity. After, we made a suture in mass without to include the peritonium for the others groups (B, C) the rats received 10% glucose solution and 25% glucose solution injected into the peritoneal cavity respectively. Results: A new surgery was realized in 6h, 24h and 48h, and we observed in macroscopic avaluation presence of fluid and serous uniforme and rosy in all over the cavity. The vascular congestion was present. We made dry out of 90 fragments of mesenterium and 90 fragments of parietal peritonium bilateral. In the microscopic study necrosis doesn´t was present. For the mesenterium histological study we observed 16 cases (17,8%) unspecific chronic inflammation, 30 cases (33,4%) hiperplasic linfonod, 10 cases (11,1%) high vascular congestion, 6 cases (6,6%) reaction fibrosis and 28 cases (31,1%) no alteration. For the parietal peritonium histological study we observed 6 cases (3,3%) reaction fibrosis and 174 cases (96,7%) no alteration. Giant cell was not present. In the analisys statistic there is no significance between the groups (p>0,05). Conclusions: So, we concluded, according to the present research, that hypertonic glucose solution and NaCl 0,9% on the mesenterium and parietal peritonium don´t produce tissue necrosis in a rat`s model and the inflammation process has the same intensity
BV UNIFESP: Teses e dissertações

A química de carboidratos têm sido um importante link entre a síntese orgânica, a biologia e a química medicinal devido ao papel fundamental que açúcares apresentam na glicobiologia. Neste contexto, a ligação amida glicosídica é uma importante conexão encontrada na natureza, sendo uma das formas de ligar um núcleo de carboidrato a outras biomoléculas e produtos naturais, como glicopeptídeos e N-glicosil amidas. Dessa forma, o desenvolvimento de métodos sintéticos para a introdução de núcleos de carboidratos em diferentes estruturas é fundamental. Tendo em vista o interesse do nosso grupo de pesquisa em desenvolver novas estratégias utilizando a química de selênio na funcionalização de derivados de carboidratos, o presente projeto descreve uma metodologia de síntese de N-glicosil amidas e de glicoconjugação via formação de ligação amida, envolvendo a reação entre selenocarboxilatos, gerados in situ, com azidas glicosídicas. Foi possível sintetizar com sucesso uma série de derivados de carboidratos, para uma variedade de substratos que incluíram: N-glicosil amidas furanosídicas (20 exemplos), piranosídicas (13 exemplos) e também N-glicoconjugados graxos (10 exemplos). A metodologia foi baseada na geração in situ de selenocarboxilatos de lítio, a partir de Se0/ LiEt3BH e derivados de ácidos carboxílicos, e suas reações com azidas derivadas de açúcares. Um aspecto importante deste protocolo é que a reação se inicia com selênio elementar e apresenta como subprodutos N2 e Se0. O isolamento e manipulação de espécies intermediárias reativas de selênio são evitadas durante o curso reacional, conferindo ao selenocarboxilato o status de reagente traceless.
Carbohydrate chemistry has been an important link between organic synthesis, biology and medicinal chemistry due to the fundamental roles that sugars play in glycobiology. In this context, the glycosyl amide linkage is an important connection found in nature, since it is one of the ways in which a sugar unit can be found attached to other biomolecules and natural products, such as N-glycosyl amides and glycopeptides that are known for possessing a wide range of bioactivities. Therefore, the development of synthetic methods for the introduction of sugar moieties into various different scaffolds is of paramount importance. In connection with our interest on the development of new strategies using selenium chemistry for the functionalization of carbohydrate derivatives, we describe herein an efficient synthesis of glycosyl amides and glycoconjugation methodology via amide bond-formation, enabled by the reaction of in situ generated selenocarboxylates with glycosyl azides. Carbohydrate-derived amides were successfully prepared in good yields for a broad range of substrates, including: furanosyl (20 examples), pyranosyl (13 examples) N-glycosil amides derivatives and also fatty acids glycoconjugates (10 examples). The methodology relied in the in situ generation of lithium selenocarboxylates, from Se/LiEt3BH and acyl chlorides or carboxylic acids and their reaction with sugar azides. A key aspect of the present protocol is that we start from elemental selenium and as by-products we have harmless gaseous nitrogen and elemental selenium. Isolation and handling of all reactive and sensitive seleniumcontaining intermediates is avoided, therefore assigning to the selenocarboxylate the status of a traceless reagent.

Orientadores: Everson Alves Miranda, Sindélia Freitas Azzoni
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química
Made available in DSpace on 2018-08-25T03:57:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarinoBohorquez_MayraAlejandra_M.pdf: 2274078 bytes, checksum: b43b1a849020cc996eb872607460441e (MD5) Previous issue date: 2014
Resumo: O crescente interesse pelo aproveitamento da matéria-prima renovável vem demandando novas tecnologias eficientes na produção de etanol de segunda geração a fim de reduzir os altos custos associados com as enzimas envolvidas na sacarificação. Este estudo teve como objetivo principal concentrar, através de precipitação com etanol, glicosil hidrolases responsáveis pelas atividades de endoglucanase, ?-glicosidase, FPase e xilanase produzidas por Trichoderma harzianum P49P11. As variáveis de precipitação testadas foram temperatura, concentração de etanol e pH do fermentado. O etanol demonstrou potencial para recuperar ao redor de 98% da atividade de xilanase correspondente a 17,6 U/mL através de precipitações com 90% de etanol (v/v) em todas as temperaturas testadas (5,0, 15 e 25°C) e pH 5,0. Sob estas mesmas condições de precipitação, 90% de etanol (v/v) e pH 5,0, porém a 5°C, foi obtida a máxima recuperação da atividade de celulase (FPase) sendo 77% correspondente a 0,08 U/mg. Esta última formulação causou precipitação instantânea. Desta forma, a precipitação com etanol pode ser considerada uma técnica eficiente para concentrar xilanase e, em certa medida, para o complexo de celulase
Abstract: Growing interest in the use of renewable raw materials for the production of second generation ethanol has led to the need of new efficient technologies to reduce the high costs associated with saccharification enzymes. This study aimed to concentrate by ethanol precipitation glycosil hydrolases responsible for FPase, ?-glicosidase, endoglucanase and xylanase activities produced by Trichoderma harzianum P49P11. The precipitation variables tested were temperature, ethanol concentration and pH of the fermentation broth. The results showed that the precipitation by ethanol recovered more than 98% of the total xylanase activity using ethanol at concentration of 90% (v/v) at all temperatures tested (5.0, 15 e 25°C) and pH 5.0. The maximum recovery of cellulose activity as FPase was 77% by precipitation carried out at this same ethanol concentration and pH (90% v/v and pH 5.0) but at 5.0°C. This last set of conditions caused almost instantaneous precipitation. Therefore, ethanol precipitation can be considered an efficient technique for xylanase concentration and, to a certain extent, for the cellulase complex
Mestrado
Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos
Mestra em Engenharia Química

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:02:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6663.pdf: 3464569 bytes, checksum: 56765698cbf2bedabdd5b1e555a404ae (MD5) Previous issue date: 2015-03-20
Financiadora de Estudos e Projetos
Currently the great challenge for the production of second generation ethanol is to reduce thecost of the enzymes. It is possible to reduce part of this cost by carrying out an optimization ofthe process fermentation using sources of cellulase-induction that allow further growth of fungalbiomass, and increased secretion of proteins. The use of a mutant strain with overexpression ofhemicelulolytics activators could increase expression of the enzymes of interest and therebycontribute to cost reduction. This work aimed to study the production of enzymes involved inthe degradation of biomass by the newly isolated strain of Trichoderma harzianum P49P11focusing on the improvement of the submerged fermentation processes and on the use molecularbiology tools to improve the fungal strain. Regarding the fermentation process, the effects ofdifferent inducing sources were evaluated in flasks and bioreactor using statistical experimentaldesign tools and strategies to enhance biomass in the pre-culture step. For fungal strainimprovement, it was used molecular biology tools for the overexpression of two activators ofcellulases (xyr1 and lae1). A proteomic analysis of the T. harzianum enzymatic extract obtainedusing sugarcane bagasse pretreated by steam explosion followed by delignification (BED) wasperformed. The results showed that the best source for inducing cellulase was BED + sucrose(3: 1), reaching values of 1.21 FPU/mL 80.0U/mL of xylanase and 17.30 U/mL of β-glucosidase. The proteomic analyis identificated 24 different glycoside hydrolases and fourCBM proteins, within 12 different CAZy families. From this study, the enzymatic cocktailproduced "on site" could be supplemented using two accessory enzymes, pectinase and α-Larabinofuranosidase,leading to an increase of 100% of the hydrolysis yield. Regarding thestudy of carbon sources in the pre-culture step, it was possible to increase cellulases productionin 2 times using glycerol as the initial carbon source, followed by inducing carbon source(BED). The xyr1 and lae1 overexpression influencied positively the FPase, CMCase, xylanaseand β-glucosidase production, representing a new approach to increase production of theseenzymes.
Atualmente o grande desafio para a produção de etanol de segunda geração consiste emdiminuir o custo das enzimas degradantes da fibra lignocelulósica. Uma alternativa quepode levar a redução de parte desse custo é a otimização do processo fermentativoutilizando fontes indutoras das enzimas (hemi)celulolíticas que permitam um maiorcrescimento da biomassa fúngica e maior secreção de proteínas. A utilização de umalinhagem mutante com a superexpressão dos ativadores dessas enzimas também podecontribuir nesse sentido. Portanto, o objetivo deste trabalho foi estudar a produção deenzimas envolvidas na degradação da biomassa pelo fungo recém-isolado Trichodermaharzianum P49P11 com foco no melhoramento dos processos fermentativos submersose no uso de ferramentas de biologia molecular para o melhoramento da linhagemfúngica. Em relação ao processo fermentativo foi avaliado o efeito de diferentes fontesindutoras em frascos agitados e em biorreator utilizando ferramentas estatísticas deplanejamento de experimentos e estratégias de aumento de biomassa na fase de préinóculo.Em relação ao melhoramento da linhagem fungica foram utilizadas ferramentasde biologia molecular para a superexpressão de dois ativadores de celulases (xyr1 elae1). Para um melhor entendimento das proteínas produzidas em cultivo submerso foirealizado o proteôma do extrato enzimático secretado pelo fungo selvagem em bagaçode cana pré-tratado. Os resultados mostraram que a melhor fonte de carbono indutora decelulases foi o bagaço de cana explodido e deslignificado (BED) + sacarose naproporção 3:1, alcançando valores de 1,21 FPU/mL, 80.0U/mL de xilanse e 17,30 U/mL de β-glicosidase. O proteôma do extrato enzimático de T. harzianum resultou naidentificação de 24 hidrolases glicosídicas diferentes, 4 proteínas CBM dentro de 12diferentes famílias do CAZy. A partir deste estudo pode-se suplementar o coquetelenzimático on site com duas enzimas acessórias, pectinase e α-L-arabinofuranosidaseque aumentaram o rendimento de hidrólise em mais de 100%. Em relação ao estudo dasfontes de carbono na fase de pré-inóculo foi possível aumentar a produção de celulasesem 130% utilizando o glicerol como fonte de carbono inicial, seguida de fonte de18carbono indutora (BED). A aplicação de técnicas de biologia molecular para a mutaçãodo T. harzianum visando a superexpressão de xyr1 e lae teve influência positiva naprodução das enzimas FPase, CMCase, xilanase e β-glicosidase, representando umanova abordagem para aumentar a produção dessas enzimas.

Introdução: As lacases são o grupo de enzimas mais amplamente estudado entre as oxidases, pois podem catalisar a oxidação de compostos fenólicos usando oxigênio molecular como aceitador de elétrons. Além disso, usando mediadores de baixo peso molecular e os substratos de lacase podem ser ampliados para incluir compostos não fenólicos. As lacases são aplicadas a nível industrial em diversos setores, na remediação de diversos tipos de contaminante, na degradação de corantes sintéticos de efluentes de indústrias têxteis e sucroalcooleiras no solo, na deslignificação de compostos celulósicos entre outros. A produção dessa classe de enzimas ocorre principalmente por fungos filamentosos. Objetivo: Sendo assim, o presente trabalho objetivou selecionar e produzir a enzima lacase por meio de fungos filamentosos do gênero Aspergillus. Material e Métodos: Foram estudadas sete linhagens fungicas, Aspergillus UCP 1274, 1276, 1279, 1281, 1290, Aspergillus niger URM 5741 e Aspergillus serratalhadensis URM 79/18 a maioria delas isoladas da Caatinga, as mesmas foram reatividas da solução de oleo mineral em meio caldo glicosado e posteriormente foram inoculadas em meio BDA (Batata- Dextrose- Agar) sendo mantidas por 7 dias para esporulação. Em seguida foi realizada a fermentação em estado sólido, utilizando como substrato o resíduo agroindustrial, farelo de trigo, com teor de umidade de 40% e concentração de esporos de 107 esporos/mL, a fermentação ocorreu durante 72h à 30°C. Resultados: Todas as linhasgens fungicas estudadas foram produtoras de lacase, porém a linhagem Aspergillus serratalhadensis URM 79/18 apresentou a maior atividade enzimática de 450,429 U/mL, sendo a atividade especifica para lacase desta linhagem de 268,176 U/mL. Conclusão: Contudo, percebe-se que o potencial desse microrganismo para produção de lacase é inédito e rendeu resultados satisfatórios quando comparado com outros estudos de diversos microrganismos encontrados na literatura.