Littérature scientifique sur le sujet « Fenilpropanoidi »

El verbascósido, también denominado acteósido, se ha encontrado en más de 23 familias de plantas, demostrando, entre muchas otras propiedades, utilidad in vivo como antihipertensivo. Sin embargo, su efecto en el sistema vascular no es conocido por completo. Este trabajo tiene como objetivo el estudio de la reactividad vascular del verbascósido sobre aorta de rata, hipotetizando un posible efecto relajante vascular responsable de la actividad antihipertensiva. Las curvas concentración-respuesta se llevaron a cabo sobre anillos de 3mm de longitud de aorta de rata, evaluando la respuesta a verbascósido y a fenilefrina, acetilcolina, nitroprusiato sódico y calcio en presencia de verbascósido a diferentes concentraciones molares (10-6, 10-5 y 10-4 M). Los resultados obtenidos muestran que el verbascósido, in vitro, no tiene un efecto relajante vascular y no afecta al tono basal de la aorta, no potencia la acción contracturante de la fenilefrina, pero, no obstante, sí reduce la relajación vascular derivada de acetilcolina. Por otro lado, potencia ligeramente la acción relajante vascular del nitroprusiato, no interfiriendo en la entrada de calcio extracelular. Así pues, la actividad antihipertensiva in vivo del verbascósido no se explica a través de la actividad in vitro vista en estos experimentos.

AbstrakTelah berhasil diisolasi senyawa golongan fenilpropanoid dengan nama “skopoletin” dari kulit umbi ubi jalar (Ipomoea batatas L.). Ekstraksi senyawa dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol, dilanjutkan dengan partisi menggunakan n-heksana dan etil asetat. Pemisahan dan pemurnian senyawa dilakukan menggunakan teknik kromatografi kolom gravitasi. Struktur senyawa dianalisis berdasarkan data spektroskopi UV/Vis, 1D, dan 2D-NMR. Kata kunci : fenilpropanoid, skopoletin, Ipomoea batatas L. AbstractIt has been isolated phenylpropanoid group compound named scopoletin from the tuber peel of Ipomoea batatas L. Extraction of this compound was done by maceration method using methanol solvent, followed by partition with n-hexane and ethyl acetate. Separation and purofication of compound was done by gravity column chromatography techniques. Structure of compound was analyzed by UV/Vis, 1D and 2D NMR spectroscopies. Keywords : phenylpropanoid, scopoletin, Ipomoea batatas L.

AbstrakTelah berhasil diisolasi senyawa golongan fenil propanoid dengan nama “skopoletin” dari ekstrak etil asetat umbi Ubi Jalar (Ipomoea batatas L.). Ekstraksi senyawa fenolik dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol, dilanjutkan partisi menggunakan n-heksana dan etilasetat. Pemurnian dilakukan dengan kromatografi kolom gravitasi dan ktomatografi radial menghasilkan senyawa golongan fenil propanoid. Struktur skopoletin diidentifikasi berdasarkan data spektrum UV, 1D dan 2D NMR.Kata kunci : fenil propanoid, skopoletin, dan Ipomoea batatas L. AbstractPhenylpropanoid group compound has been isolated as “scopoletin” from ethylacetate extract of tuber flesh Sweet potatoes (Ipomoea batatas L.). Extraction of phenolic compound was done by maceration method using methanol solvent, then partition with n-hexana and ethylacetate, respectively. The process of purification using various chromatographic techniques yielded compound of phenylpropanoid group. Structure of scopoletin is identified based on UV, 1D, and 2D NMR spectra.Keyword : phenyl propanoid, scopoletin, dan Ipomoea batatas L.

El aceite esencial se obtuvo de las hojas de Piper aduncum L. procedentes del Departamento de Loreto, mediante destilación por arrastre de vapor de agua con un rendimiento de 1,1 % v/p. La composición química se determinó mediante Cromatografía de Gases / Espectrometría de Masas (CG/EM), identificándose 35 componentes químicos, de los cuales ocho representan el 76,53 % del área total. Los principales compuestos fueron fenilpropanoides (1, 2, 4-trimetoxi-5-(1-propenil)- benceno (39,32 %) y metileugenol (12,85 %)), hidrocarburos sesquiterpenoides (germacreno D (7,52 %), biciclogermacreno (5,88 %), β-cariofileno (2,82 %) y δ- cadineno (2,81 %)), un hidrocarburo monoterpenoide (β-ocimeno (2,34 %)) y un monoterpenoide oxigenado (4,7,7-trimetilbiciclo [2.2.1] heptan-3-ona (2,99 %)). La actividad antioxidante fue evaluada mediante los métodos de captación de los radicales DPPH● y ABTS●+. La capacidad antioxidante equivalente a Trolox (TEAC- DPPH) (TEAC-ABTS) fue de 1,839 y 17,79 μg Trolox/mg del aceite esencial, respectivamente. El efecto fungistático fue evaluado mediante el método de microdilución colorimétrica en caldo, mostrando actividad con un MIC de 1,24 mg/mL. Los resultados demuestran que a pesar de que la actividad antioxidante y el efecto fungistático del aceite esencial fueron limitados; el alto contenido de fenilpropanoides lo hace un candidato prometedor para futuras investigaciones.

El eugenol es un fenilpropanoide con potencial farmacológico, este estudio determinó teóricamente las propiedades fisicoquímicas del eugenol y derivados. Se encontró que estos cumplen con las reglas de cinco de Lipinski, lo que los posiciona como posibles fármacos. Asimismo, se estudió la reactividad de estas moléculas frente al citocromo P450 y en microorganismos aeróbicos. Utilizando programas de acceso libre se encontró que estas reacciones se dan, principalmente, en los átomos de carbono 1, 2, 3 y 7. Por último, se encontró una correlación entre el desplazamiento químico del 1H RMN y la energía de activación de los átomos de carbono.

Los compuestos volátiles de la albahaca (Ocimum basilicum L.) fueron extraídos mediante la microextracción en fase sólida (SPME) y analizados con cromatografía de gases-espectrometría de masas (GC-MS). Se evaluaron dos fibras, Polidimetilsiloxano/Divinilbenceno (PDMS/DVB, 65 μm) y Carbowax/Divinilbenceno (CW/DVB, 65 μm), para comparar la extracción de componentes. Entre los 25 compuestos volátiles recuperados en la albahaca, se identificaron fenilpropanoides, monoterpenos, sesquiterpenos, ésteres, y aldehídos. Hubieron diferencias significativas (P < 0,05) entre las fibras analizadas. La comparación de las dos fibras mostró que la extracción con la fibra CW/DVB es aparentemente mejor tanto en el número de componentes aislados como en la concentración total de los compuestos. Cuantitativamente, el componente más importante fue el cinamato de metilo, seguido por el linalol.

Gomphrena globosa es una planta que produce diferentes metabolitos secundarios que son de interés debido a la actividad biológica que presentan, por ejemplo: actividad antiinflamatoria, citotóxica, antioxidante y antimicrobiana. Los principales metabolitos que se han encontrado en cultivos in vitro son fenoles simples y flavonoides. La ruta biosintética de estos compuestos es bien conocida, siendo útil como herramienta para manipulación genética al existir amplia información sobre sus genes estructurales. Sin embargo, no hay suficiente información sobre su regulación, lo que abre campo para investigar la correlación entre los niveles de expresión de los genes correspondientes y la regulación de la ruta en G. globosa, con aplicaciones en la ingeniería metabólica. Por lo tanto, se realizó un análisis bioinformático para identificar posibles enzimas candidatas que ejerzan regulación o que fueran puntos de ramificación en la ruta. Las secuencias de nucleótidos se obtuvieron de enzimas altamente relacionadas, debido a que no hay secuencias reportadas de enzimas de G. globosa al momento, sin embargo la información disponible para estas moléculas relacionadas permitió seleccionar un grupo de seis enzimas como nodos de regulación en la vía biosintética de fenilpropanoides en G. globosa. Los oligonucleótidos diseñados por homología de secuencia reunieron las consideraciones de diseño para ser utilizados en subsecuentes análisis de expresión génica y son un importante aporte a la investigación genética y de regulación metabólica en G. globosa.

Este trabalho objetivou avaliar o efeito inseticida de produtos alternativos sobre Thaumastocoris peregrinus, bem como o potencial em atuar no processo de indução de resistência em plantas. Folhas de Eucalyptus camaldulensis foram imersas na solução dos produtos Orobor®, Topneem®, Rotenat®, Rotenat CE®, Baicao®, Compostonat®, Pironat®, Assist®, Extrato de Alho e Calda Bordalesa. Posteriormente, foram transferidas para tubos contendo 10 adultos de T. peregrinus, avaliando-se diariamente o número de insetos mortos. Os produtos que apresentaram efeito inseticida foram testados quanto ao seu potencial como indutores de resistência, avaliando-se em cotilédones de soja a síntese da fitoalexina gliceolina (pterocarpanoide) e a ativação da rota dos fenilpropanoides pela atividade da enzima fenilalanina amônia-liase. Água foi utilizada como testemunha e quitosana (1%) como indutor de referência. Rotenat®, Compostonat®, Rotenat CE® e Topneem® apresentaram efeito inseticida; destes Rotenat CE® e Topneem® apresentaram potencial como indutores de resistência, expressando valores significativos de fitoalexinas e atividade da FAL (fenilalanina-amônialiase).

Se evaluó el efecto de extractos, el aceite esencial y los componentes principales del perejil (Petroselinum crispum (Mill.) Fuss.) contra el hongo fitopatógeno Collectotrichum acutatum mediante el método del agar envenenado. Los resultados mostraron que todos los extractos, junto con elaceite esencial, inhibieron significativamente el crecimiento radial de C. acutatum en concentraciones superiores a 100 μg mL-1. La mayor actividad se encontró para el aceite esencial, seguido por el extracto de n-hexano. El análisis por cromatografía de gases con espectroscopia de masas (CG-EM)del extracto de n-hexano y el aceite esencial de P. crispum mostró que los componentes principales corresponden a los fenilpropanoides miristicina y parsley-apiol. Ambos compuestos fueron aislaron por técnicas cromatográficas convencionales y sus estructuras elucidadas por métodos espectroscópicos. La miristicina y el parsley-apiol mostraron un efecto inhibidor significativo contra C. acutatum. La actividad fungistática más alta se encontró para parsley-apiol con un valor CI50 de 40 μg mL-1. Enconclusión, el perejil puede ser una buena fuente de compuestos antimicóticos para controlar el C. acutatum.

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Este trabalho descreve o estudo fitoquímico do extrato etanólico de Paspalum atratum Swalen (Poaceae). O gênero Paspalum é o mais importante das gramíneas no Brasil e possui características compatíveis com a utilização no pastejo. Fenilpropanoides foram isolados por métodos cromatográficos (CC, CLAE) pela primeira vez neste gênero. Estes fenilpropanoides foram identificados como: (R)-ácido rosmarínico, (AR, 1), ácido 3-O-cafeoilquínico (2), fenilalanina (3), ácidos cis- e trans-coumaroilquínico (4 e 5), ácido 5-O-cafeoilquínico (6), ácido 4-O-cafeoilquínico (7) e ácido cafeico (8) pela análise de seus dados de EM, RMN de 1H e de 13C, incluindo COSY, HMBC, HSQC, TOCSY-1D e DOSY, e pela comparação destes dados com aqueles descritos na literatura para estas substâncias. A substância majoritária no extrato etanólico foi o AR (4,4%). Esta foi usada como padrão em análises qualitativas e quantitativas do extrato. Um método eficiente em CLAE-DAD para determinação de AR no extrato foi estabelecido (r2 = 0,9979). O limite de detecção (LD) e limite de quantificação (LQ) foram 4,00 e 12,13 μg/mL respectivamente, e a faixa de linearidade foi 12,1-100,0 μg/mL. As precisões intradia e interdia do método foram avaliadas pela análise das soluções de padrão AR. O desvio padrão da área do pico do analito foi utilizado como parâmetro de avaliação da precisão intradia, compreendendo o intervalo de 1,57-2,06%. A precisão interdia (7 dias) do método compreendeu o intervalo de 0,54-1,69%. A recuperação, avaliada pela adição do padrão AR, foi satisfatória (75-78%.
This work describes the phytochemical study on ethanol extract from aerial parts of Paspalum atratum Swalen (Poaceae). The Paspalum genus is one of the most important grasses in Brazil and has characteristics compatible with its utilization in pastures for cattle. Phenylpropanoids were isolated by chromatographic methods (CC and HPLC) for the first time in this genus. These phenylpropanoids were identified as (R)-rosmarinic acid (RA, 1), 3-O-caffeoylquinic acid (2), phenylalanine (3), cis- and trans-3-O-coumaroylquinic acids (4 and 5), 5-O-caffeoylquinic acid (6, chlorogenic acid), 4-O-caffeoylquinic acid (7), and caffeic acid (8) by analyses of their MS, 1H and 13C NMR data, including COSY, HMBC, HSQC and DOSY, and comparison of these data with those reported in the literature for these type of compounds. The major compound isolated from the ethanol extract was RA (4.4%). It was used as standard for qualitative and quantitative analyses of extract. An efficient HPLC-DAD method for determination of RA in extract was established (r2 = 0.9979). The limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) were 4.00 and 12.13 μg/mL, respectively, and the validated range was 12.1-100.0 μg/mL. The intra-day and inter-day precisions of the method were evaluated by analyzing the blank solution spiked by RA. The standard deviation (SD) as evaluation parameter for the intra-day precision of peak area of target analyte was in the range of 1.57-2.06%. The inter-day precision (7 days) of the method was in the range of 0.54-1.69%. Satisfactory recovery (75-78%), evaluated by standard additions method, was achieved.

Orientador: Lucia Maria Xavier Lopes
Co-orientador: Isabele Rodrigues Nascimento
Banca: Lourdes Campaner dos Santos
Banca: Antonio Laverde Junior
Resumo: Este trabalho descreve o estudo fitoquímico do extrato etanólico de Paspalum atratum Swalen (Poaceae). O gênero Paspalum é o mais importante das gramíneas no Brasil e possui características compatíveis com a utilização no pastejo. Fenilpropanoides foram isolados por métodos cromatográficos (CC, CLAE) pela primeira vez neste gênero. Estes fenilpropanoides foram identificados como: (R)-ácido rosmarínico, (AR, 1), ácido 3-O-cafeoilquínico (2), fenilalanina (3), ácidos cis- e trans-coumaroilquínico (4 e 5), ácido 5-O-cafeoilquínico (6), ácido 4-O-cafeoilquínico (7) e ácido cafeico (8) pela análise de seus dados de EM, RMN de 1H e de 13C, incluindo COSY, HMBC, HSQC, TOCSY-1D e DOSY, e pela comparação destes dados com aqueles descritos na literatura para estas substâncias. A substância majoritária no extrato etanólico foi o AR (4,4%). Esta foi usada como padrão em análises qualitativas e quantitativas do extrato. Um método eficiente em CLAE-DAD para determinação de AR no extrato foi estabelecido (r2 = 0,9979). O limite de detecção (LD) e limite de quantificação (LQ) foram 4,00 e 12,13 μg/mL respectivamente, e a faixa de linearidade foi 12,1-100,0 μg/mL. As precisões intradia e interdia do método foram avaliadas pela análise das soluções de padrão AR. O desvio padrão da área do pico do analito foi utilizado como parâmetro de avaliação da precisão intradia, compreendendo o intervalo de 1,57-2,06%. A precisão interdia (7 dias) do método compreendeu o intervalo de 0,54-1,69%. A recuperação, avaliada pela adição do padrão AR, foi satisfatória (75-78%.
Abstract: This work describes the phytochemical study on ethanol extract from aerial parts of Paspalum atratum Swalen (Poaceae). The Paspalum genus is one of the most important grasses in Brazil and has characteristics compatible with its utilization in pastures for cattle. Phenylpropanoids were isolated by chromatographic methods (CC and HPLC) for the first time in this genus. These phenylpropanoids were identified as (R)-rosmarinic acid (RA, 1), 3-O-caffeoylquinic acid (2), phenylalanine (3), cis- and trans-3-O-coumaroylquinic acids (4 and 5), 5-O-caffeoylquinic acid (6, chlorogenic acid), 4-O-caffeoylquinic acid (7), and caffeic acid (8) by analyses of their MS, 1H and 13C NMR data, including COSY, HMBC, HSQC and DOSY, and comparison of these data with those reported in the literature for these type of compounds. The major compound isolated from the ethanol extract was RA (4.4%). It was used as standard for qualitative and quantitative analyses of extract. An efficient HPLC-DAD method for determination of RA in extract was established (r2 = 0.9979). The limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) were 4.00 and 12.13 μg/mL, respectively, and the validated range was 12.1-100.0 μg/mL. The intra-day and inter-day precisions of the method were evaluated by analyzing the blank solution spiked by RA. The standard deviation (SD) as evaluation parameter for the intra-day precision of peak area of target analyte was in the range of 1.57-2.06%. The inter-day precision (7 days) of the method was in the range of 0.54-1.69%. Satisfactory recovery (75-78%), evaluated by standard additions method, was achieved.
Mestre

Fenolinės rūgštys ir fenilpropanoidai pasižymi reikšmingu biologiniu aktyvumu ir yra vaistinių žaliavų veiklieji komponentai. Įteisintų tyrimo metodikų vystymas šių junginių nustatymui (kokybiniam ir kiekybiniam žaliavų tyrimui) yra ypač svarbus augalinių vaistinių preparatų efektyvumo, saugumo ir kokybės kontrolei. Iš skirtingų Lietuvos regionų buvo surinkta 18 propolio pavyzdžių. Atlikto darbo tikslas - analitiniais metodais ištirti Lietuvoje surinktų propolio pavyzdžių cheminę sudėtį, bei kiekybiškai ir kokybiškai įvertinti šias fenolines rūgštis ir fenilpropanoidus: chlorogeno rūgštį, cinamono rūgštį, galo rūgštį, ferulo rūgštį, kavos rūgštį, kumaro rūgštį, protokatecho (3,4-dihidroksibenzoinę) rūgštį, rozmarino rūgštį, vaniliną ir vanilino rūgštį. Atlikti tyrimai paprastos ir greitos atvirkštinių fazių efektyviosios skysčių chromatografijos metodikos optimizavimui ir įtiesinimui. Sukurto crhromatografinio metodo judrioji skystoji fazė yra metanolis ir 0,5 procento acto rūgšties tirpalas vandenyje. Esant optimalioms atskyrimo sąlygoms (aprašytoms skyriuje „Tyrimo metodas“), analizė atliekama 27 min., sulaikymo laikas 4,04 min (galo rūgštis), 6,93 min (protokatecho rūgštis), 11,30 min (chlorogeno rūgštis), 12,26 min (vanilinė rūgštis), 12,93 min (kavos rūgštis), 13,80 min (vanilinas), 16,97 min (kumaro rūgštis), 17,95 min (ferulo rūgštis), 22,29 min (rozmarino rūgštis) ir 26,30 min (cinamono rūgštis). Aptikimo riba ir nustatymo riba buvo atitinkamai tarp 0,004–0,021 ir 0,0... [toliau žr. visą tekstą]
The phenolic acids and phenylpropanoids have an important biological activity and are therapeutic agents of crude drugs. Development of validated analysis techniques of these phytotherapeutic agents (fingerprinting and assay procedures) is an important practice for efficacy, safety and quality control of herbal drug preparations. 18 samples of propolis were collected from different districts of Lithuania. The aim of the present work was to study chemical composition of collected samples and estimate analytical capabilities of the evaluation of selected phenolic acids and phenylpropanoids: caffeic acid, chlorogenic acid, cinnamic acid, coumaric acid, ferulic acid, gallic acid, protocatechuic (3,4-dihydroxybenzoic) acid, rosmarinic acid, vanillic acid and vanillin. Optimization and validation procedures of rapid and simple method of reversed phase high performance liquid chromatography were carried out. The mobile phase of the optimized chromatographic method consisted of methanol and 0.5 per cent acetic acid solvent in water. Under the optimal separation conditions (described in Methods), analysis was done in 27 min, with the retention times 4.04 min (gallic acid), 6.93 min (protocatechuic acid), 11.30 min (chlorogenic acid), 12.26 min (vanillic acid), 12.93 min (caffeic acid), 13.80 min (vanillin), 16.97 min (coumaric acid), 17.95 min (ferulic acid), 22.29 min (rosmarinic acid) and 26.30 min (cinnamic acid). The limits of detection and the limits of quantitation were between... [to full text]

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CAPES
Os extratos etanólicos obtidos a partir das folhas e do caule de Myrcia guianensis foram particionados sequencialmente com hexano, diclorometano ou clorofórmio e acetato de etila. As fases em diclorometano e acetato de etila das folhas, bem como, as fases clorofórmica e hexânica do caule foram submetidas a vários procedimentos cromatográficos em coluna e em camada delgada preparativa. A partir da fase diclorometânica das folhas foram obtidos os sesquiterpenos 5-(6-metilheptan-2-ona)-biciclo-[3.1.0]-hexan-3-ona, 6-metil-5-(2-hidroxi-3-cloro-5-metilfenil)heptan-2-ona, 6-metil-5-(2-hidroxi-5-metilfenil)heptan-2-ona (sesquichamaenol) e oplopanona, sendo os dois primeiros inéditos. O estudo da fase acetato de etila resultou no isolamento do ácido gálico e dos flavonóides quercetina, quercitrina e guaijaverina. Da fase hexânica do caule foram isolados um sesquiterpeno aromático inédito do tipo cadinano, 7-hidroxi-5-isopropil-3,8-dimetil-2-metóxi-1,4-naftoquinona, e os esteróides β–sitosterol e seu derivado glicosilado, o daucosterol. A partir da fase clorofórmica foi isolada a lignana (-)-(8R,8’R)-9,9’-di-O-(E)-feruloil-secoisolariciresinol e sete triterpenos, sendo eles, ácido maslínico, ácido estáclico A e seu novo derivado p-cumárico, ácido 3β-trans-p-oxicumaroil-2α,23,29-triidroxi-olean-12-en-28-oico, ácido arjunólico e os derivados, ácido 3β-trans-p-oxicumaroil-2α,23-diidroxi-olean-12-en-28-oico, ácido 23-trans-p-oxicumaroil-2α,3β-diidroxi-olean-12-en-28-oico e o novo ácido 3β-trans-feruloil-2α,23-diidroxi-olean-12-en-28-oico. As estruturas destas substâncias foram determinadas e/ou identificadas por análises de Espectrometria no Infravermelho, Espectrometria de massas, RMN de 1H e 13C, DEPT 135º, HMBC, HMQC, COSY e NOESY.
Salvador

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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
By means of oxidative coupling of phenylpropanoids, it was possible to develop a synthesis enantioselective method some natural lignans found in various plants that possess important biological activities. Through this method we obtained the novel synthesis of dihidrocarinatidina composed to be assigned valuable pharmacological activities. Thus, in patent (PI 1101946-8) submitted by our research group, describe the preparation of some natural process lignans, using this, peroxidase contained in coconut water (Cocos nucifera) that acts as a biocatalyst, and hydrogen peroxide as an agent oxidant in the oxidative coupling of acid p-(OH)-phenylpropanoids. Thus, dimeric forms of isoeugenol (Licarina A) and dihidrocarinatidina heterodimer production by oxidative cross-coupling between eugenol and isoeugenol were obtained. This technique was also carried out the synthesis of seringaresinol by dimerization sinapílico alcohol, once methylated provided in yangambin. Moreover, were made by this method, attempts to synthesize the conocarpan. It is noteworthy that all these substances have great pharmacological importance. Using an aqueous mixture of potassium ferrocyanide and ammonium hydroxide, promote oxidative coupling of eugenol, which provided the dehidrodieugenol, its methylation with methyl iodide and potassium carbonate provided mainly in the form monomethyl ether and minority, the dimethyl derivative. The products of the reactions were characterized by 13C-NMR and 1H-NMR spectra, which were then faced with spectral data of natural counterparts in the literature. Tests for leishmania activity licarina A, dehidrodieugenol and its mono and dimethyl ether derivatives were developed. Through these trials there were activities against Leishmania promastigotes and amastigotes of Leishmania major (licarina A) and promastigotes of Leishmania amazonensis (dehidrodieugenol), with more efficient results than the reference drug. The highlighted dehidrodieugenol monometilado showed antiparasitic activity against Leishmania amazonensis.
Por meio do acoplamento oxidativo de fenilpropanóides, foi possível desenvolver um método de síntese enantiosseletivo de algumas lignanas naturais encontradas em diversas plantas e que possuem importantes atividades biológicas. Através deste método obteve-se a síntese inédita da dihidrocarinatidina, composto ao qual se atribui importantes atividades farmacológicas. Destarte, em patente (PI 1101946-8) submetida por nosso grupo de pesquisa, descrevemos processo de preparo de algumas lignanas naturais, utilizando para isso, peroxidase contida na água de coco (Cocos nucifera) que atua como biocatalizador, e água oxigenada como agente oxidante nos acoplamentos oxidativos de ácidos p-(OH)-fenilpropanoides. Deste modo, foram obtidas formas diméricas do isoeugenol (Licarina A) e a produção do heterodímero dihidrocarinatidina por meio do acoplamento oxidativo cruzado entre eugenol e isoeugenol. Através desta técnica, foi também realizada a síntese do seringaresinol, pela dimerização do álcool sinapílico, que uma vez metilado nos forneceu iangambina. Além disso, foram realizadas por este método, tentativas de síntese do conocarpan. Vale ressaltar, que todas estas substâncias apresentam grande importância farmacológica. Utilizando uma mistura aquosa de ferrocianeto de potássio e hidróxido de amônia, promovemos o acoplamento oxidativo do eugenol, que nos forneceu o dehidrodieugenol, sua metilação com iodeto de metila e carbonato de potássio forneceu majoritariamente, a forma monometil éter e minoritariamente, o derivado dimetiléter. Os produtos das reações foram caracterizados pelos espectros de 13C-RMN e 1H-RMN, que depois foram confrontados com dados espectrais dos homólogos naturais encontrados na literatura. Foram desenvolvidos ensaios de atividade antileishmania para a licarina A, dehidrodieugenol e seus derivados mono e dimetil éteres. Por meio destes ensaios verificaram-se atividades antileishmania contra formas promastigotas e amastigotas de Leishmania major (licarina A) e formas promastigotas de Leishmania amazonensis (dehidrodieugenol), apresentando resultados mais eficientes que a droga de referência. O dehidrodieugenol monometilado mostrou destacada atividade antiparasitária contra Leishmania amazonensis.

A análise filogenética e reconstrução dos caracteres químicos em espécies de Piper indicou clados especializados na produção de ácidos benzoicos/cromenos, amidas e lignóides. Os perfis químicos das espécies foram determinados pela análise dos extratos brutos por RMN de 1H combinados com análise de componente principal (PCA). Destacou-se a ocorrência de lignanas dibenzilbutirolactônicas e furofurânicas no clado Macrostachys, enquanto que para Schilleria foi observado o acúmulo preferencial de fenilpropanóides, lignanas tetraidrofurânicas e benzofurânicas. Espécies de localidades distintas classificadas como Piper solmsianum apresentaram diferentes perfis químicos e características morfológicas. A análise da variabilidade química e genética por PCA e microssatélites, respectivamente, indicou a segregação das populações de acordo com o local de coleta e apontou o potencial para o uso conjunto das técnicas para distinguir os espécimens de P. solmsianum. As sequências dos genes acetiltransferase, propenilfenol sintase e proteína dirigente forneceram as primeiras informações sobre os genes envolvidos na biossíntese de lignanas/fenilpropanoides em P. solmsianum.
The phylogenetic analysis and reconstruction of chemical characters in Piper species distinguished clades specialized in the production of benzoic acids/chromenes, amides and lignoids. The chemical profiles of these species were determined by analysis of crude extracts by 1H NMR combined with principal component analysis (PCA). It is remarkable that lignans of dibenzylbutyrolactone and furofurans type occur in Macrostachys while Schilleria contains dimers of propenylphenols such as tetrahydrofurans lignans and benzofuran neolignans. Piper solmsianum specimens collected from distinct sites showed differences in their morphology and chemical profiles. The assessment of chemical and genetic variability by PCA and microsatellites, respectively, indicated the segregation of populations according to the sampling site and pointed out to the potential use for the combined approaches to distinguish P. solmsianum specimens. The sequences of the genes acetyltransferase, propenylphenol synthase and dirigent protein provided the first information about the genes involved in the biosynthesis of lignans/phenylpropanoids in P. solmsianum.

Penicillium digitatum es el agente causal de la podredumbre verde de los frutos cítricos y constituye uno de los patógenos más importantes durante la postcosecha de los mismos, llegando a causar hasta el 80 % de las podredumbres. Aunque el control de este patógeno se realiza en la actualidad con fungicidas químicos, existe una tendencia al abandono de los mismos y al empleo de estrategias alternativas de control. La inducción de resistencia natural en los frutos constituye una de estas alternativas. En el presente trabajo se pretende profundizar en las bases biológicas y moleculares de la inducción de resistencia en los frutos cítricos frente a un ataque por P. digitatum.Se han evaluado distintos métodos de inducción de resistencia frente a P. digitatum con el fin de optimizar y seleccionar uno de ellos con el que abordar los estudios posteriores. Se compararon diversos tratamientos químicos (metil jasmonato, ácido β aminobutírico y Brotomax®) y biológicos (hongos no patógenos de cítricos y paredes celulares de P. digitatum), así como un tratamiento de infección previa con P. digitatum y posterior inactivación térmica del patógeno. Se seleccionó este último sistema atendiendo a los buenos niveles de resistencia alcanzados (la incidencia se redujo más de un 70 % y la severidad más de un 85 %) y a la reproducibilidad del mismo.El tratamiento seleccionado se empleó para estudiar los cambios globales de expresión génica durante la inducción de resistencia. Estos cambios se analizaron en el flavedo y el albedo de frutos cítricos empleando dos micromatrices de cDNA desarrolladas por el Consorcio de Genómica Funcional de Cítricos, denominadas 7k y 12k, que contienen aproximadamente 7.000 y 12.000 genes respectivamente. Las mayores inducciones se detectaron en genes que codifican enzimas del metabolismo de fenilpropanoides, especialmente metiltransferasas (OMTs), de la síntesis de etileno, entre los que se encuentran varios genes ACO (ácido 1-metilciclopropano 1-carboxílico oxidasa), proteínas relacionadas con la patogénesis (proteínas PR) y oxidorreductasas. También se observó una importante reducción de la expresión de genes regulados por bajas temperaturas, de genes inducibles por la luz y de otros de función desconocida. El análisis de anotación funcional por ontologías génicas mostró que los procesos relacionados con el metabolismo de aminoácidos y de fenilpropanoides se indujeron en los frutos sometidos al tratamiento de inducción de resistencia respecto a los frutos no tratados, siendo estos cambios mayores en el tejido interno.Una vez finalizado el tratamiento de inducción de resistencia tiene lugar un aumento de la producción de etileno, que es comparable al que se observa en frutos infectados por P. digitatum. Sin embargo, en los frutos en los que se induce resistencia no hay desarrollo del hongo, por lo que todo el etileno procede del fruto. Mediante análisis Northern se ha comprobado que este aumento de los niveles de etileno coincide con una elevada inducción de la expresión del gen CsACO, al igual que ocurre en frutos infectados. Es de reseñar que las mayores inducciones tienen lugar en el albedo.Para profundizar en el estudio de la implicación de la ruta de fenilpropanoides se procedió a analizar la expresión de genes que codifican las enzimas PAL, 4CL, F3H, IRL1, CADs, SAD y OMTs mediante hibridación Northern. Se observó que la expresión de la mayor parte de estos genes aumentaba en respuesta al tratamiento inductor, con un patrón similar en ambos tejidos. Aunque en general los niveles de expresión fueron superiores en el flavedo, las mayores inducciones se detectaron en el albedo. Además, se realizó un estudio de la expresión de estos genes en respuesta a la infección por P. digitatum, observándose que los cambios fueron, en general, similares a los inducidos por el tratamiento de inducción de resistencia.El estudio de esta ruta se completó con la determinación del perfil metabólico de compuestos secundarios en los frutos cítricos mediante HPLC. En los frutos no tratados se observó en general una mayor abundancia y concentración de compuestos fenólicos en el flavedo respecto al albedo. Sólo la concentración de algunas flavanonas fue mayor en el albedo. La escoparona, 6,7-dihidroxicumarina, fue el compuesto con mayor inducción en respuesta al tratamiento inductor. Sin embargo, el mayor número de cambios como consecuencia de la infección y posterior inactivación térmica se observó en los derivados del ácido benzoico. Al igual que en respuesta al tratamiento inductor, durante la infección por P. digitatum se observó una modificación en la concentración de derivados del ácido benzoico.También se ha analizado la posible actividad antifúngica in vitro e in vivo de diversas cumarinas, flavanonas y alcaloides sobre diferentes hongos patógenos. Las cumarinas escoparona y umbeliferona y la flavanona hesperidina fueron los compuestos con mayor actividad antifúngica in vitro, aunque ninguno de ellos inhibió por completo el crecimiento de los hongos patógenos de cítricos. Sin embargo, sólo las dos cumarinas mostraron un efecto in vivo retrasando el desarrollo de P. digitatum en frutos inoculados con este patógeno. La adición al medio de cultivo de algunos alcaloides presentes en los cítricos redujo significativamente el crecimiento de P. digitatum, siendo la cafeina y el ácido 1, 2, 3, 4-tetrahidroharmane 3-carboxílico (THHCA) los compuestos más efectivos.Este trabajo constituye la primera aproximación en el que se aborda conjuntamente un análisis transcriptómico y metabolómico de procesos relevantes en patología postcosecha. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto la importancia que desempeñan tanto el metabolismo secundario, especialmente de fenilpropanoides, como el etileno en el proceso de resistencia inducida en frutos cítricos frente a la infección por P. digitatum.
Penicillium digitatum is the causal agent of green mould and constitutes the major postharvest pathogen of citrus fruit, accounting for up to 80 % of losses due to fungal decay. Although control of this pathogen is achieved by chemical fungicides, there is a trend to adopt new and safer control alternatives. Induction of natural resistance in fruit constitutes one of these alternatives. The aim of this work was to gain an insight into the biological and molecular bases of the induction of resistance in citrus fruit against P. digitatum.Different methods to induce resistance against P. digitatum have been evaluated in order to optimize and to select one of them for further studies. Various chemical (methyl jasmonate, β-aminobutyric acid and Brotomax®), biological (non pathogenic fungi of citrus and cellular walls of P. digitatum) treatments, as well as the possible resistance induced by a previous infection with P. digitatum followed by its inactivation by a heat treatment were compared. The latter system was selected because of the high resistance achieved (the incidence was reduced more than 70 % and the severity more than 85 %) and its reproducibility.Global changes in gene expression induced by the selected treatment were analyzed in the flavedo and albedo of citrus fruit. To that end, two cDNA microarrays developed by the Citrus Functional Genomics Project, named 7k and 12k, which contain about 7.000 and 12.000 genes, respectively, were used. The highest inductions were detected in genes that code for enzymes involved in phenylpropanoid metabolism, mainly methyltransferases (OMTs), ethylene biosynthesis, among which there are several ACO genes (1-aminocyclopropane 1-carboxylic acid oxidase), pathogenesis-related proteins (PR) and oxidoreductases. An important reduction in the expression of genes regulated by either cold or light, together with others of unknown function, was also observed. Gene ontology comparisons showed that processes related to amino acids and phenylpropanoid metabolism were upregulated in treated fruits, being these changes more marked in the internal tissue.An increase in ethylene production was observed after the heat treatment, coincident with the resistance acquisition, reaching a concentration similar to that observed in fruits infected by P. digitatum. Nevertheless, in the treated fruits the fungus does not progress, so the rise in ethylene must be due to the fruit. Northern blot analysis showed that this increase in ethylene paralleled a high induction on CsACO expression, as it occurs in infected fruits, and that the highest induction takes place into the albedo.In order to get a deeper insight into the role of the phenylpropanoid metabolism in the induction of resistance, the expression of genes encoding PAL, 4CL, F3H, IRL1, CADs, SAD and OMTs was analyzed by Northern blot. The expression of most of these genes increased in response to the induction treatment, showing a similar pattern in both tissues. Although the overall expression levels were higher in the flavedo, the highest inductions were detected in the albedo. In addition, changes in the expression of these genes in response to the infection by P. digitatum were similar to those originated by the induction of resistance treatment.The putative involvement of this pathway was further studied by examining changes in the metabolic profile by means of HPLC. In the treated fruits a greater abundance and a higher concentration of phenolic compounds in the flavedo with respect to the albedo were observed. Flavanones were the only phenolics whose concentration was higher in the internal tissue. Although the coumarin scoparone was the phenolic compound showing the highest increase in response to the treatment, it has to be pointed out that, among the different phenylpropanoids, benzoic acid derivatives were the most affected. Similar changes were detected during the infection of fruits by P. digitatum.The possible antifungal activity of diverse coumarins, flavanones and alkaloids was tested both in vitro and in vivo against different pathogenic fungi. The coumarins scoparone and umbelliferone and the flavanone hesperidin showed the highest in vitro antifungal activity, although none of them inhibited completely the growth of the citrus fungal pathogens analyzed. However, only the coumarins had an effect in vivo delaying the development of P. digitatum in inoculated citrus fruit. On the other hand, addition of some alkaloids detected in citrus tissues to the culture medium significantly reduced the growth of P. digitatum, being caffeine and 1, 2, 3, 4-tetrahydroharmane 3-carboxylic acid (THHCA) the most effective.This is the first work undertaking both a transcriptomic and a metabolomic approach to study changes associated with relevant processes in postharvest pathology. The global results indicate that both the secondary metabolism, mainly phenylpropanoids, and ethylene play important roles in the induction of resistance in citrus fruit against P. digitatum infection.

Orientador: Ricardo Andrade Rebelo.
Co-orientador: Caio Mauricio Mendes de Cordova.
Dissertação (mestrado) - Universidade Regional Blumenau, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Programa de Pós-Graduação em Química.

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Musca domestica é um importante vetor mecânico de diversos patógenos para humanos e animais de criação, sendo essencial o estudo de novas alternativas de controle mais eficientes e seguras para este díptero. A busca por novas alternativas de inseticidas envolve experimentos que geralmente necessitam do uso de solventes que não interfiram nos resultados da substância testada. Assim, o presente estudo compreendeu duas etapas: investigar a sensibilidade de larvas e pupas de M. domestica aos solventes acetona, etanol, metanol e dimetilsulfóxido (DMSO) e ao surfactante Tween 80 em diferentes tempos de volatilização; e avaliar a toxicidade dos fenilpropanoides eugenol e (E)-cinamaldeído sobre os mesmo estágios deste díptero. Para ambos os experimentos utilizou-se o teste de contato, com 10 repetições (n=10) para cada solvente/surfactante e concentração das substâncias sobre cada estágio. No primeiro experimento foram testados acetona, etanol e metanol em pureza analítica e DMSO e Tween 80 na concentração de 5%. Os tempos avaliados foram zero, cinco, 10 e 15 minutos (23±2°C e 60±10% UR). Os resultados mostraram que o tempo de volatilização produz diferença significativa na mortalidade larval (ML) para os três primeiros solventes testados, e acetona mostrou-se semelhante ao controle após cinco minutos de volatilização (p>0,05). Metanol e etanol mostraram-se semelhantes ao controle após 15 minutos de volatilização (p>0,05). DMSO não apresentou ML significativa (p>0,05), no entanto apresentou percenbtual de mortalidade acumulada (PMA) superiores a 14% (p<0,05). Tween 80 não apresentou diferença na toxicidade sobre as larvas relacionada ao tempo. Para o teste com pupas somente etanol produziu diferença significativa entre os tempos de volatilização, enquanto acetona e metanol diferiram do controle em todos os tratamentos (p<0,05). DMSO e Tween 80 não diferiram significativamente do controle em nenhum tempo (p˃0,05). O surfactante Tween 80 foi o único que não apresentou toxicidade para ambos os estágios na concentração testada, porém acetona foi o solvente que volatilizou mais rapidamente, mostrando menor toxicidade entre aqueles testados em pureza analítica. Para o segundo experimento, foram utilizadas oito concentrações de cada substância para a determinação das concentrações letais (CL50 e CL90). Eugenol apresentou os menores valores de CL50 e CL90, para a eficácia do tratamento larval (ETL) (1,5 e 3,75 mg/mL, respectivamente) enquanto (E)-cinamaldeido apresentou os menores valores de CL50 e CL90 para a eficácia do tratamento pupal (ETP) (18,08 e 78,83 mg/mL, respectivamente). Ambas as substâncias apresentaram atividade larvicida a partir de 2,5 mg/mL e ETL de 100% a partir de 5 mg/mL. Para o tratamento pupal (E)-cinamaldeído diferiu do controle a partir da 13 concentração de 10mg/mL (p<0,05) e ambos os fenilpropanoides causaram má formação em adultos a partir de 10 mg/mL, e maior ETP na concentração de 30 mg/mL, sendo 67,2% para (E)-cinamaldeído e 32% para eugenol. Os produtos testados nesse estudo apresentaram elevado potencial larvicida, além de ambos apresentarem efeitos pupicida e causarem má formação nos adultros provenientes de pupas tratadas. Ainda, é possível sugerir a utilização conjunta de ambas substância para um controle mais eficiente, visto que (E)-cinamaldeído apresentou melhor atividade larvicida, enquanto eugenol teve melhor atividade pupicida. Desta forma, esses fenilpropanoides mostrando-se promissores para o uso no desenvolvimento de formulações mais seguras para a saúde e meio ambiente, sendo possível sua utilização em estratégias de Manejo Integrado de Pragas.
Musca domestica is an important mechanical vector of several pathogens to humans and domestic animals, being essential to study new alternatives to eficiente and safe control against this Diptera. The search for new insecticides alternative involves experiments that generally require the use of solvents that should not interfere in the results of the test substance. Thus, this study involved two stages: to investigate the sensitivity of M. domestica larvae and pupae to the solvents acetone, ethanol, methanol and dimethylsulfoxide (DMSO) and the surfactant Tween 80 at different times of volatilization; and evaluating toxicity of phenylpropanoid eugenol and (E)-cinnamaldehyde against the same stages of this Diptera. For both experiments were used the patch test with 10 repetitions (n=10) for each solvent/surfactant and concentration of substances against each stage. In the first experiment acetone, ethanol and methanol were tested in analytical purity while DMSO and Tween 80 at the concentration of 5%. The times evaluated were zero, five, 10 and 15 minutes (23±2°C and 60±10% RH). The results showed that the volatilization time produces significant difference in larval mortality (LM) for the first three solvents tested, and acetone was similar to the control after five minutes volatilization (p>0.05). Methanol and ethanol were similar to the control after 15 minutes of evaporation (p>0.05). DMSO showed no significant LM (p> 0.05), but its accumulated mortality percenbtual (AMP) was over 14% (p<0.05). Tween 80 showed no difference in toxicity againts larvae related to time. For the pupae test only ethanol produced significant difference between the evaporation time, while acetone and methanol differed from the control in all treatments (p<0.05). DMSO and Tween 80 did not differ significantly from control at any time (p>0.05). The surfactant Tween 80 was the only one that showed no toxicity for both stages at the concentration tested, however the solvent acetone was volatilized more quickly, showing lower toxicity among those tested in analytical purity. For the second experiment, we used eight concentrations of each substance for the determination of lethal doses (LC50 and LC90). Eugenol showed the lowest values of LC50 and LC90 for the effectiveness of larval treatment (ELT) (1.5 and 3.75 mg/mL, respectively) while (E)-cinnamaldehyde had the lowest values of LC50 and LC90 for effectiveness of pupal treatment (EPT) (18.08 and 78.83 mg/mL, respectively). Both substances exhibited larvicidal activity from 2.5 mg/mL and ELT of 100% from 5 mg/mL. For pupal treatment (E)cinnamaldehyde differed from the control from the concentration of 10mg/mL (p <0.05) and both phenylpropanoid caused malformation in adults from 10 mg/mL. The greater EPT was from concentration of 30 mg/mL, being 67.2% for (E)-cinnamaldehyde and 32% for eugenol. 15 The products tested in this study had high potential larvicide, and both present pupicida effects and cause malformation in adultros from treated pupae. Still, it is possible to suggest the combined use of both substance for more efficient control, as (E)-cinamaldeído showed better larvicidal activity, while eugenol had better pupicida activity. Thus, using these phenylpropanoids show promise in the development of safer formulations for health and the environment, and these could be used in Integrated Pest Management strategies.