Thèses sur le sujet « Coût – Contrôle »

Grado de doctor en ciencias biomédicas.
Melanoma es la neoplasia cutánea más agresiva, con una incidencia ascendente a pesar de numerosos esfuerzos de prevención. En la actualidad existen diversas estrategias de tratamiento, sin embargo, no todos los pacientes responden a ellas. En nuestro laboratorio se ha ensayado una inmunoterapia basada en células dendríticas (DCs) maduradas con un lisado de líneas celulares de melanoma (TRIMEL), que ha incrementado hasta 3 veces la sobrevida en pacientes que desarrollan una respuesta inmunológica de hipersensibilidad retardada (DTH+). Hasta la fecha no se han desarrollado avances en el estudio de la fracción no peptídica de este lisado ni de su capacidad de activar células iNKT, capaces de reconocer antígenos glicolipídicas en contexto CD1d. Hipótesis: Células iNKT infiltran tumores de pacientes con melanoma avanzado y son capaces de ser activadas in vitro por células dendríticas utilizadas en inmunoterapia antitumoral. Objetivo General: Determinar el rol en pacientes con melanoma de células iNKT infiltrantes de tumor y activadas por células dendríticas maduradas ex vivo utilizadas en inmunoterapia antimelanoma. Métodos: Se determinaron células iNKT infiltrantes de tumor mediante inmunofluorescencia y se correlacionó su presencia en lesiones de melanoma primario en todos los estadios según Breslow con la sobrevida de la enfermedad. Se evaluó la capacidad de las fracciones glicolipídica y proteica de TRIMEL para inducir maduración en células dendríticas. Para este fin, las fracciones se obtuvieron mediante gradiente de densidad con MTBE (Metil-terbutil-éter) y se usaron para estimular DCs generadas en base a rhIL-4 y GM-CSF. En estas condiciones se evaluó la presencia de diversas moléculas de superficie y la producción de citoquinas. Para evaluar la capacidad de estas DCs de activar células iNKT, desde PBMC se aisló la población CD3+ mediante cell-sorting y cultivadas con distintas DCs generadas. Se analizó la proliferación celular utilizando el ensayo CFSE. También se evaluó la presencia de células iNKT mediante inmunofluorescencia en tacos de parafina de las DTH realizadas a pacientes de inmunoterapia. Resultados: Encontramos infiltración por células iNKT en todos los estadíos de la enfermedad, siendo mayor en Breslow avanzados, sin una correlación con la sobrevida global. Al evaluar la maduración de DCs, esta fue mayor en el grupo estimulada con la fracción peptídica de TRIMEL. DCs estimuladas con la fracción glicolipídica de TRIMEL no mostraron diferencias con la condición no tratada. Al evaluar mediante ensayo de proliferación realizado con CFSE, se evidenció mayor proliferación en la condición tratada con la fracción peptídica. Finalmente, sólo en 1 de 3 pacientes en los que se analizó la presencia de iNKT en las DTH se encontraron estas células. Conclusiones: unificando todos los hallazgos discutidos previamente, células iNKT infiltran tumores de melanoma, las que podrían ser inducidas a proliferar por DCs estimuladas con la fracción peptídica de TRIMEL y de esa forma migrar a sitios inflamados como representan las lesiones DTH.
Melanoma is the most aggressive skin tumor, with a growing incidence worldwide, despite of prevention strategies. Nowadays, there are several new therapies to treat it, however the overall survival continues to be low. Our lab has been studying a Dendritic Cell (DC) based immunotherapy maturated with a melanoma cell lines lysate (TRIMEL), which has increased survival up to 3 times in patients that developed a delayed type hypersensitivity response (DTH+). To this date no studies have been made regarding the non peptidic fraction of this lysate or its capability to activate a subpopulation of T Cells called iNKT cells, characterized by their ability to recognize glycolipids in a CD1d manner. Hypothesis: iNKT Cells infiltrate melanoma patient’s tumors and are capable to be activated in vitro by Dendritic cells Main Objective: To determinate the role of tumor infiltrating iNKT cells activated by matured Dendritic Cells ex vivo used in antimelanoma immunotherapy in melanoma patients Methods: The presence of tumor infiltrating iNKT Cells in primary melanoma in all of Breslow stages was evaluated by expression of TCR Vα24Jα18 by Immunofluorescence microscopy. To evaluate the capability of glycolipid and peptidic TRIMEL fraction to induce DCs maturation, they were isolated from TRIMEL using a MTBE (Metil-terbutil-ether) density gradient. Afterwards, these fractions were used to stimulate DCs generated with a rhIL-4 and GM-CSF protocol and surface molecules expression were assessed, as well as cytokine secretion. To evaluate DCs effectiveness to activate iNKT Cells’ proliferation, CD3+ population was isolated from Buffy Coats using cell-sorting technology and they were cultured with DCs. Proliferation was accessed with CFSE dye assay. Finally, DTH infiltrating iNKT cells were asessed in paraffined embedded samples by immunofluorescence microscopy. Results: We found that iNKT cells infiltrated melanoma tumors in every Breslow stage, with higher infiltration on advanced stages,with no correlation with overall survival. The peptidic fraction of TRIMEL induced higher expression of maturation related surface molecules in addition to cytokine secretion, whereas glycolipidic fraction showed no difference with the untreated condition. iNKT cell had a higher proliferation rate when cultured with DCs treated with the peptidic fraction of TRIMEL. And finally, we found the infiltration of iNKT in 1 of the 3 patients DTH. Conclusions: Taking together all the previous results, iNKT cells infiltrate melanoma Tumors, and they could be induced to proliferate by DCs stimulated with the peptidic fraction of TRIMEL and as well supporting their migration to inflamed tissues like the DTH samples.
2022

This work presents a contribution to the study of control of dead-time systems. Within this context, it is presented a literature review covering from the Smith predictor until its recent variations. For the state space representation dead-time is normally dealt under the discrete-time perspective, where it is included as state augmentation. In the first case, this work proposes a novel control structure with simple tuning rules, able to deal with single input and output systems that presents multiple delays due to multiple internal paths. However, the design method allows the proposed structure to be readily applied for the single delay case. The study is extended for the state space representation, where it is presented a modification to a predictor recently presented in literature, in order to use it as a predictor-observer within the state space representation. In this case, all the matrices involved in the observer have the same order as those of the plant, i. e., there is no need of the state augmentation to deal with dead-time. Hence, the well known techniques for the optimal and robust control may be applied for multivariable delayed systems. Besides, an alternative way of tuning for the LQG control, based on the T-polynomial approach, is proposed. In this case, the technique may be applied for both the delay free systems and dead-time systems. The latter by applying the modified predictor mentioned earlier in the observer structure. Additionally, it is also proposed a new predictor structure, based on the CARIMA model with T-polynomial, for dead-time systems. This work is full of examples throughout the text which are suitable for both the control strategies studied herein and the proposed ones, applicable for stable, unstable or integrating systems, as well as multivariable systems. Case studies for laboratories plants validate the effectiveness of the discussed methods.
Este trabalho apresenta uma contribuiÃÃo ao estudo de controle de sistemas dinÃmicos que exibem atraso de transporte. Nesse contexto, apresenta-se uma revisÃo bibliogrÃfica que traz desde o surgimento do preditor de Smith atà algumas de suas variaÃÃes mais recentes. Na representaÃÃo baseada em espaÃo de estados à comum que se tenha a abordagem em tempo discreto, em que o atraso de transporte à normalmente incluÃdo atravÃs do aumento da ordem do estado. No primeiro caso, este trabalho traz a proposta de uma nova estrutura de controle, de sintonia simplificada, capaz de lidar com sistemas de entrada e saÃda Ãnicas, mas que apresentam mÃltiplos atrasos em caminhos diversificados internamente. A metodologia considerada, entretanto, permite que a estrutura proposta possa ser facilmente aplicada a sistemas com atraso simples. O estudo à ampliado para a representaÃÃo em espaÃo de estados no tempo discreto, em que apresenta-se uma abordagem que leva à adaptaÃÃo de um preditor proposto recentemente na literatura para atuar como observador de estados. Neste caso, tem-se a vantagem de que todas as matrizes envolvidas tem a mesma ordem daquelas que descrevem o sistema, ou seja, nÃo hà aumento da ordem do estado. Assim, as tÃcnicas conhecidas de controle robusto e Ãtimo para a representaÃÃo em espaÃo de estados podem ser aplicadas a sistemas com mÃltiplas entradas e saÃdas. Apresenta-se ainda uma forma alternativa de sintonia do controle LQG, baseada no polinÃmio-T. Neste caso, a sintonia proposta pode ser aplicada tanto para sistemas sem atraso de transporte quanto para aqueles com atraso quando se considera a adaptaÃÃo da estrutura do preditor no observador de estados. AlÃm disso, este trabalho apresenta ainda a proposta de um novo preditor cuja estrutura à baseada no modelo CARIMA com polinÃmio-T, aplicado a sistemas com atraso de transporte. O trabalho à repleto de exemplos em que aplicam-se tanto as estratÃgias de controle estudadas quanto as propostas, a sistemas estÃveis, instÃveis ou integradores em malha aberta, bem como a sistemas multivariÃveis. Estudos de caso aplicados a plantas de laboratÃrio comprovam a eficiÃncia dos mÃtodos discutidos.

Objetivo: Retrovirus Endógeno Humano (HERV) compreende ao redor de 8% do genoma humano. Apesar do fato de que em sua maioria são genes não-funcionais devido a processos de mutação ou perda de material genético no processo de retrotransposição, existem evidências do aumento da expressão de HERVs em tecido de câncer de próstata. Nós estudamos e comparamos a imunogenicidade de peptídeos da família HERV em 2 coortes de pacientes com câncer de próstata. Posteriormente examinamos o estado de ativação e senescência linfocitária nestas coortes. Desenho Experimental: Células Mononucleares de Sangue Periférico (CMSP) de 65 pacientes com câncer localizado da próstata em situação de hormônio-sensibilidade e de 24 pacientes com câncer de próstata metastático e em situação de resistência à castração, comparados a um grupo controle de 12 indivíduos normais foram avaliados em relação ao seu estado de resposta imune pela técnica de ELISPOT contra um conjunto de peptídeos derivados dos exons gag e env do gene da família HERV-K HML-2. Como parte de nosso estudo, foi realizado de forma preliminar uma análise genômica in silico de 500 pacientes com câncer de próstata sequenciados e disponíveis para análise pública do banco de dados TCGA, com o objetivo de reforçar o racional de nossa interrogação científica. Além disso , como estudo de correlação, fizemos uma análise por citometria de fluxo da ativação celular de linfócitos T de nossas coortes para determinarmos a imunofenotipagem e ontogenia linfocitária em nossos indivíduos investigados, no momento de nossa pesquisa de sua resposta imune. Resultados: Nossa análise da resposta imune contra peptídeos de HERV-K HML-2 por ELISPOT-Interferon Gama não mostrou nenhum resultado significativo. Nenhum paciente apresentou dados significativos de resposta de acordo com nossos critérios, apesar de nossos dados preliminares de expressão gênica terem mostrado expressão gênica em torno de 17% em pacientes com doença localizada. Nossos dados de ativação linfocitária mostraram maior ativação e senescência nos pacientes com doença disseminada e resistente à castração. Conclusões: Este parece ser o primeiro estudo a interrogar a presença de resposta celular imune contra peptídeos de HERV-K em pacientes com câncer de próstata. Nosso achados não mostraram resposta imune relevante em doença localizada ou disseminada e em diferentes estados de ativação linfocitária ou status de integridade hormonal. Apesar destes resultados, pesquisa posterior poderia utilizar diferente metodologia, como por exemplo a utilização de citometria de fluxo bem como a busca de diferentes citoquinas envolvidas, tais como as relacionadas a resposta Th2, ao invés de Th1
Purpose: Human Endogenous Retrovirus (HERV) comprises 8% of human genome. Despite the fact that most of it is non-functional due to mutations or loss of genetic material in the process of retrotransposition, there are some evidence of increased expression of HERV in prostate cancer tissue. We studied the cellular immunogenicity of peptides from HERV-K family in 2 cohorts of prostate cancer patients. Experimental Design: PBMCs from 65 patients with hormone-intact localized prostate cancer and 24 patients with castrate-metastatic disease, matched with 12 normal controls were evaluated for cellular immune response by ELLISPOT against a pool of gag and env peptides from HERV-K family of HML-2 type. As an independent supportive study we did in silico genomic analysis of 500 prostate cancer patients from TCGA database to give another evidence of the prevalence of HERV-K gene expression in prostate cancer genome, reinforcing the rational of our questions. Results: Our analysis of cellular immune response against HERV-K HML-2 peptides by Interferon-gama ELISPOT did not show any meaningful results. No patient showed any minimal criteria of response, despite the fact that in our preliminary genomic analysis we obtained HERV expression in about 17% of a cohort of 500 patients with localized prostate cancer. In regards to the flow cytometry data of the lymphocytes we showed stronger activation and senescence status in the cohort of patients with castration sensitive and resistant disseminated disease, compared to the localized disease cohort. Conclusions: To the authors\'s knowledge this is the first study to look for cellular immune response against peptides derived from coding HERV-K transcripts in prostate cancer patients. Our findings did not show relevant immune response in neither localized nor metastatic castrate prostate cancer patients. Despite those results, further research could continue using different methodology, like flow cytometry as well as looking for different cytokines involved, such as those related to a Th2 response, instead of Th1

A leishmaniose é considerada como uma das seis endemias prioritárias no mundo. Sua gravidade vai depender da espécie contaminante, podendo variar de uma lesão cutânea relativamente branda a uma infecção visceral que pode ser fatal na ausência de tratamento. Atualmente, um dos grandes desafios encontrados nos estudos acerca da crescente urbanização da leishmaniose visceral (LV), é o desenvolvimento de vacinas com elevada eficácia para induzir proteção contra infecção por Leishmania. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a resposta imune humoral e celular de uma nova formulação vacinal contra a leishmaniose visceral (VL) usando hamster (Mesocricetus auratus) como modelo experimental. A formulação vacinal foi constituída por dois peptídeos sintéticos da protease gp63 na Leishmania major com alta predição de MHC-I e II. A preparação dos peptídeos teve início com a sua predição, utilizando o software SYFPEITHI, seguida da sintetize química destes, usando a metodologia de fase sólida, segundo o protocolo padrão de Merrifield (1963). A purificação e identificação dos peptídeos foi realizada por meio de cromatografia liquida sob condições de baixa pressão. Nove animais com idade de 4-8 semanas foram selecionados de forma aleatória e dividos em três grupos experimentais: o grupo controle, o grupo imunizado com o adjuvante montanide (ISA) e o grupo imunizado com a associação dos peptideos + ajuvante Montanide (Pep+ISA), cada grupo contendo três animais. Os inóculos dos diferentes grupos experimentais foram administrados via subcutânea em três doses vacinais em intervalos de 14 dias. O grupo controle recebeu 100 μL de solução salina estéril a 0,85%, o grupo ISA recebeu 30 μL do adjuvante oleoso Montanide ISA-61VG diluído em 70 μL de solução salina 0,85% e o grupo Pep+ISA recebeu 30 μL do peptídeo MHC-I + 30 μL do peptídeo MHC-II, emulsionados em 30 μL do adjuvante Montanide ISA-61VG e diluídos em 10 μL de solução salina 0,85%. Seis dias após a última dose da vacina, os animais foram sedados com Clortamina® (50 mg/mL) por via intraperitoneal e o sangue coletado para prosseguir com as análises hematológicas, bioquímicas e sorológica. Após 205 dias da última dose vacinal, os animais foram eutanasiados e seus baços coletados para avaliação da resposta linfoproliferativa. Os resultados bioquímicos demostraram que a composição vacinal não teve ação tóxica, apresentando níveis séricos de ureia, creatinina e das enzimas hepatocelulares dentro das taxas normalidade do funcionamento renal e hepático. A formulação vacinal também exibiu níveis significativos de anticorpos e a existência de memória imunológica, evidenciada pelo aumento da atividade linfoproliferativa nas culturas de esplenócitos, quando comparado o grupo que recebeu a vacina com os demais grupos experimentais.
Leishmaniasis is considered one of the six endemics priority in the world. Its severity will depend on the contaminating species, and may range from a relatively mild cutaneous lesion to a visceral infection that can be fatal in the absence of treatment. Now a days, one of the major challenges encountered in studies of the increasing urbanization of visceral leishmaniasis (VL) is the development of highly effective vaccines to induce protection against Leishmania infection. In this context, the present study aimed to evaluate the humoral and cellular immune response of a new vaccine formulation against visceral leishmaniasis (VL) using hamster (Mesocricetus auratus) as an experimental model. The vaccine formulation consists of two synthetic peptides of the gp63 protease in Leishmania major with high prediction of MHC-I and II. The preparation of the peptides started with their prediction, using SYFPEITHI software, followed by their chemical synthesis, using the solid phase methodology, according to the standard protocol of Merrifield (1963). The peptides’ purification and identification of th was performed by liquid chromatography under low pressure conditions. Nine animals aged 4-8 weeks were randomly selected and divided into three experimental groups: the control group, the group immunized with the adjuvant montanide (ISA) and the group immunized with peptide + adjuvant montanide association (Pep + ISA), each group containing three animals. Inoculations of the different experimental groups were administered subcutaneously at three vaccine doses at 14 day intervals. The control group received 100 μL of 0.85% sterile saline, the ISA group received 30 μL of the Montanide ISA-61VG oily adjuvant diluted in 70 μL of 0.85% saline and the Pep + ISA group received 30 μL of the MHC-I peptide + 30 μL of the MHC-II peptide, emulsified in 30 μL of the Montanide ISA-61VG adjuvant and diluted in 10 μL of 0.85% saline solution. Six days after the last vaccine dose, the animals were sedated with Chlortamine® (50 mg / mL) intraperitoneally and the blood collected to proceed with hematological, biochemical and serological analyzes. After 205 days of the last vaccine dose, the animals were euthanized and their spleens collected for evaluation of the lymphoproliferative response. The biochemical results showed that the vaccine composition had no toxic action, presenting serum levels of urea, creatinine and hepatocellular enzymes within the normal range for renal and hepatic functioning. The vaccine formulation also showed significant levels of antibodies and the existence of immunological memory evidenced by the increase in lymphoproliferative activity in splenocyte cultures, when compared to the group that received the vaccine with the other experimental groups.

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Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES
Respiratory syncytial virus (RSV) is the most common etiologic agent in severe lower respiratory tract infections (LRTI) in children. RSV-associated LRTI is the main cause of bronchiolitis, pneumonia and exacerbation of asthma. This infection is responsible for the high rates of hospitalizations related to respiratory diseases worldwide, especially in children younger than 2 years. Currently, annual mortality rate due to RSV infections is worrying worldwide and is estimated at approximately two hundred thousand cases. The treatment strategies to RSV infections are limited. Ribavirin is an approved drug for use in RSV infections, but its use is limited due to adverse side-effects and risks posed to health professionals who handle it. Palivizumab is a monoclonal antibody which targets RSV F glycoprotein and its use is only indicated as a prophylactic measure. This treatment is already accepted in several countries for groups of high risk children (premature children, with chronic lung disease and with congenital heart disease). However, palivizumab has a high cost for public health and is not available in all countries. The development of an effective RSV vaccine to generate a long-lasting immunological memory response that prevents infection may be the best alternative because it will reduce high public health expenditures with antiviral drugs and monoclonal antibodies. The first attempt in the search for a vaccine against RSV was in the 1960s. This vaccine produced high levels of serum antibodies but could not protect against infection. Children who were vaccinated developed a more serious disease when later infected with the same virus. To date, there is no licensed vaccine for RSV, so the search for effective vaccines is an important focus of research. Natural RSV infections do not induce lasting protective memory, and multiple reinfections can occur lifetime. Nasal secretions from infected infants presented a small number of regulatory CD4 T cells (Treg) in peripheral blood, an increase in interleukin 4 (IL-4) production and T helper type 2 (Th2) response. Treg cells are important for controlling an exacerbated increase in immune responses. A reduction of the Tregs caused by the RSV infection generates an exacerbation of the pulmonary disease due to a Th2 response. The M209-223 RSV peptide was identified to increase IFN-? production by peptide-specific CD4 T cells after challenge with the virus. The treatment with this peptide also induced an increase in pulmonary Treg frequency in infected mice. Recently, it has also been shown that Tregs aid in the development of a T CD8+ effector response, which is crucial for the control of RSV viral load. Our hypothesis is that the RSV M209-223 peptide impacts in the differentiation of CD4 T cells, increasing the population of specific Treg, reducing lung inflammation and modulating the anti-RSV immune response. This peptide in animal model induces the differentiation of specific Treg. Our findings suggest that vaccination with M209-223 peptide results in the differentiation of specific CD4 T cells into conventional effectors and Treg cells. Vaccination with this peptide decreased the expansion of a Th2 response in animals infected with RSV, protecting both the infection site and systemically. We believe that this approach could be an important component in vaccination strategies against this virus.
O v?rus sincicial respirat?rio (VSR) ? o agente etiol?gico mais comum nas infec??es graves do trato respirat?rio inferior (TRI) em crian?as. As infec??es do TRI associada com o VSR s?o a principal causa de bronquiolite, pneumonia e exacerba??o da asma. As TRI causadas pelo VSR s?o respons?veis pelas altas taxas das hospitaliza??es relacionadas ?s doen?as respirat?rias em todo o mundo, principalmente em crian?as menores de dois anos. Atualmente a taxa de mortalidade anual mundial devido ?s infec??es pelo VSR ? preocupante e ? estimada em aproximadamente duzentas mil crian?as. As estrat?gias de tratamento contra o VSR utilizadas s?o limitadas. A ribavirina ? um f?rmaco aprovado no uso para infec??es pelo VSR, por?m sua utiliza??o ? limitada devido aos efeitos secund?rios adversos e aos riscos que representam para os profissionais da sa?de que o manipulam. O palivizumabe ? um anticorpo monoclonal dirigido contra a glicoprote?na F do v?rus e sua utiliza??o ? apenas como medida profil?tica. Este tratamento j? ? aceito em v?rios pa?ses nos grupos de crian?as de alto risco (crian?as prematuras, com doen?a pulmonar cr?nica e com cardiopatia cong?nita). Entretanto o palivizumabe tem um alto custo para sa?de p?blica, n?o sendo disponibilizado em todos os pa?ses. O desenvolvimento de uma vacina eficaz contra o VSR pode ser a melhor alternativa, pois ao gerar resposta de mem?ria duradoura que previne a infec??o e reduz, desta forma, os altos gastos com a sa?de p?blica, com os f?rmacos antivirais e com os anticorpos monoclonais. A primeira tentativa na busca de uma vacina contra o VSR foi na d?cada de 60. A vacina produzida estimulou n?veis moderadamente elevados de anticorpos no soro, mas n?o conseguiu proteger contra ? infec??o. As crian?as que foram vacinadas desenvolveram uma doen?a mais grave quando mais tarde infectados com o v?rus. At? o presente momento n?o existe nenhuma vacina licenciada para o VSR. Desta forma, a busca de vacinas eficazes constitui um importante foco de pesquisa em todo mundo. As infec??es naturais pelo VSR n?o induzem mem?ria protetora duradoura, ocorrendo m?ltiplas reinfec??es ao longo da vida. Em crian?as infectadas, observou-se um n?mero reduzido de c?lulas T CD4+ regulat?rias (Treg) no sangue perif?rico, um aumento na produ??o de interleucina 4 (IL-4) e uma resposta T helper do tipo 2 (Th2) nas secre??es nasais. As c?lulas Treg s?o importantes para controlar um aumento exagerado da resposta imunol?gica. Por este fato acredita-se que quando h? uma redu??o das Tregs causada pela infec??o do VSR ocorre uma exacerba??o da doen?a pulmonar devido uma resposta Th2. Foi identificado que o pept?deo M209-223 do VSR aumenta a produ??o de IFN-? nas c?lulas T CD4+ ap?s o desafio com VSR. O tratamento com este mesmo pept?deo tamb?m apresentou um aumento na frequencia de c?lulas Treg ap?s infec??o prim?ria pelo VSR. Recentemente tamb?m foi demonstrado que as Tregs auxiliam no desenvolvimento de uma resposta efetora T CD8+, que ? crucial para o controle da carga viral do VSR. Nossa hip?tese ? que o pept?deo M209-223 do VSR influencia na diferencia??o das c?lulas T CD4+, aumentando a popula??o de c?lulas T efetoras e regulat?rias espec?ficas, reduzindo a inflama??o pulmonar e modulando a resposta imune. Os nossos resultados sugerem que a vacina??o com pept?deo M209-223 resulta na diferencia??o de c?lulas T CD4+ espec?ficas em efetoras convencionais, que produzem mais IFN-? e em c?lulas Treg. A vacina??o com este pept?deo diminuiu a expans?o de uma resposta Th2 nos animais infectados com o VSR, protegendo da inflama??o exacerbada tanto no local da infec??o como sistemicamente. Acreditamos que esta abordagem pode constituir um componente importante nas estrat?gias de vacina??o contra este v?rus.

Orientador: Jaime Portugheis
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Elétrica e de Computação
Made available in DSpace on 2018-08-17T00:51:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sharma_Manish_D.pdf: 1122815 bytes, checksum: ac184067a2eeb2f29617e0a5da608708 (MD5) Previous issue date: 2010
Resumo: O objetivo deste trabalho é analisar o desempenho da recepção e detecção conjunta e iterativa para canais de acesso múltiplo. A análise se concentrou em torno de um canal ruidoso com N frequências compartilhado por T usuários. Encontramos valores para a capacidade do canal para detecção conjunta e individual. Embora a eficiência espectral do sistema seja relativamente baixa, a combinação deste fator com uma grande faixa de frequências permite altas taxas de transmissão com baixa relação sinal ruído. O receptor foi modelado como um grafo de fatores e foi analisado através de curvas EXIT, que também são utilizadas para otimizar os códigos corretores de erro dos usuários. Propomos alguns sistemas baseados nesta técnica e simulamos a sua probabilidade de erro de bit. Os resultados indicam que é possível transmitir informação com taxas próximas da capacidade do canal. Tanto o grafo do receptor como as análises subsequentes podem ser aplicadas para outros canais de acesso múltiplo, especialmente para sistemas com N símbolos de transmissão ortogonais.
Abstract: The aim of this work is to analyze the performance of iterative joint reception and detection for multi-user channels. The analysis is centered around an N-frequency MFSK noisy channel shared by T users. Channel capacity values are obtained for joint and single user detection. Although the system's spectral efficiency is low, high rates at low signal to noise ratio are achievable by using a wide-bandwidth channel. The receiver is modeled as a factor graph and analyzed by its EXIT charts, which were also used to analyze the users' error correcting codes. Some systems are proposed and simulated to obtain the bit error probability. Results indicate that it is possible to transmit information with rates close to channel capacity. The proposed receiver and the performed analysis can be applied to other types of multiple access channels, in particular for systems with N orthogonal transmission symbols.
Doutorado
Telecomunicações e Telemática
Doutor em Engenharia Elétrica

La enfermedad de Crohn (EC) es una enfermedad Inflamatoria que puede afectar a cualquier parte del tracto digestivo. Aunque su etiología no está del todo clara, la hipótesis prevalente indica que se produce a causa de una pérdida de tolerancia contra la mlcrobiota comensal. La presencia de anticuerpos en el suero en un porcentaje importante de los pacientes con EC refuerza esta hipótesis. Esto sugiere que debe existir una respuesta T específica contra la microbiota comensal. No obstante, aunque las células T son consideradas uno de los elementos más importantes en la patogénesls de la EC, su especificidad antlgénlca y su naturaleza no se han estudiado con profundidad. En el primer estudio se demuestra la existencia de células T memoria especificas para diferentes antígenos de la mlcroblota comensal en Individuos sanos y en pacientes con EC. Las células presentes en los enfermos presentan una mayor capacidad prollferatlva. Además, las células T CD4+ específicas para 3 proteínas de la mlcroblota comensal (FlaX, A4-fla2 y YldX), presentan un perfil Th17/Th1 únicamente en los pacientes con EC. Esta respuesta caracterizada por la producción de IL-17A, IL-17F, IL-22, CCL20, IFN-y y TNF-o promueve la sobreexpreslón de qulmloclnas capaces de atraer a células Thl 7 y a neutrófilos, siendo un mecanismo para amplificar y mantener la Inflamación en estos pacientes. En el segundo estudio se testó un antagonista de RORyt (81119) que Inhibe de manera específica la transcripción de los genes relacionados con la vía Th17 en las PBMCs estimuladas con los antígenos derivados de la mlcroblota comensal. Sin embargo, este lnhlbidor ocasiona una sobreexpreslón de los genes relacionados con la vía de las células Treg pero preserva las respuestas Thl y Th2. Por otro lado, las criptas Intestinales que se hablan cultivado con los sobrenadantes que provenían de los linfocitos T CD4+ que se hablan tratado con el lnhlbldor, muestran una menor expresión de CXCLl, CXCL8 y CCL20. Además, el 81119 reduce significativamente la transcripción de Ill 7 y de IL26 en muestras que provienen de colon y de íleon de pacientes con EC, sin afectar la transcripción de IL22. El 81119 muestra un efecto más Intenso en las muestras fleales, ya que la expresión de los genes IL23R, CSF2, CXCL1, CXCL8 y S100A8 disminuye en presencia del antagonista, mientras que la expresión de DEFAS aumenta. Finalmente, el B1119 es capaz de reducir los marcadores cllnlcos, macroscópicos y moleculares de la colitis en un modelo experimental de esta enfermedad. Asl pues, nuestros resultados muestran fa existencia de una respuesta T memoria contra la mlcrobiota comensal, así como también apoyan el desarrollo clínico de fármacos inhlbldores de RORyt para modular la vla Th17 en la EC.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:07:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RenatoKF_DISSERT.pdf: 1459716 bytes, checksum: ca307f9c6e4626cb4ec352ece74b4ff5 (MD5) Previous issue date: 2014-04-16
Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior
This dissertation is a research on the marked topic construction (CT) in Brazilian personal letters from eighteenth, nineteenth and twentieth centuries. The goal of our research is to verify if CT are present in the writing of Brazilians born in the centuries in question. Our research focus is based on the assumptions of generative theory (CHOMSKY 1981; 1986), which states that grammar is internalized in the mind / brain of the writers, with the emphasis on studies of grammatical change, as pointed texts by Paix?o de Sousa (2004), Carneiro (2005); Galves, Namiuti and Paix?o de Sousa (2006) and Martins (2009). Our corpus was extracted from Projeto Para a Hist?ria do Portugu?s Brasileiro (PHPB) and Cartas Brasileiras colet?nea de fontes para o estudo do portugu?s. We selected forty-six correspondents who should be inserted into the two criteria set out in this research: to be Brazilian and be born in the centuries mentioned above, so that we could find legitimate topic constructions of PB. This work is based on researches by Pontes (1987), Mateus et al. (2003), Araujo (2006, 2009), Berlinck, Duarte and Oliveira (2009), which actively support us in the study of this linguistic phenomenon in Portuguese. The results show that the marked topic construction in our corpus appear on the writing of Brazilians since the second half of the eighteenth century, while the typical constructions in Brazilian Portuguese locative topic, subject topic and copy topic - are already reflected in the I-language of the writers born in the second half of the nineteenth century and the first of the twentieth century
Esta disserta??o consiste em um estudo sobre as constru??es de t?pico marcado (CT) em cartas pessoais brasileiras dos s?culos XVIII, XIX e XX. O objetivo de nossa pesquisa ? verificar que CT est?o presentes na escrita de brasileiros nascidos nos s?culos em quest?o. O nosso foco de investiga??o se fundamenta nos pressupostos da teoria gerativa (CHOMSKY 1981; 1986), a qual afirma que a gram?tica se encontra internalizada na mente/c?rebro dos missivistas, tendo como ?nfase os estudos acerca da mudan?a gramatical, conforme apontam os textos de Paix?o de Sousa (2004); Carneiro (2005); Galves, Namiuti e Paix?o de Sousa (2006); e Martins (2009). O nosso c?rpus foi extra?do do Projeto Para a Hist?ria do Portugu?s Brasileiro (PHPB) e de Cartas Brasileiras colet?nea de fontes para o estudo do portugu?s. Selecionamos quarenta e seis missivistas que deveriam estar inseridos nos dois crit?rios estipulados nesta pesquisa: ser brasileiro e ter nascido nos s?culos mencionados, a fim de que pud?ssemos encontrar as CT leg?timas do PB. Este trabalho est? ancorado nas pesquisas de Pontes (1987), Mateus et al. (2003), Ara?jo (2006; 2009), Berlinck, Duarte e Oliveira (2009), as quais nos respaldar?o no estudo desse fen?meno lingu?stico na l?ngua portuguesa. Os resultados mostram que as constru??es de t?pico marcado em nosso c?rpus aparecem na escrita de brasileiros desde a segunda metade do s?culo XVIII, enquanto que a constru??es t?picas do Portugu?s Brasileiro t?pico locativo, t?pico sujeito e t?pico c?pia j? se encontram refletida na l?ngua-I dos missivistas nascidos na segunda metade do s?culo XIX e na primeira do s?culo XX

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:55:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EricoCB_DISSERT.pdf: 1960043 bytes, checksum: 7c0ebefa8d09683721a890c3c7d00bbb (MD5) Previous issue date: 2010-03-26
The Methods for compensation of harmonic currents and voltages have been widely used since these methods allow to reduce to acceptable levels the harmonic distortion in the voltages or currents in a power system, and also compensate reactive. The reduction of harmonics and reactive contributes to the reduction of losses in transmission lines and electrical machinery, increasing the power factor, reduce the occurrence of overvoltage and overcurrent. The active power filter is the most efficient method for compensation of harmonic currents and voltages. The active power filter is necessary to use current and voltage controllers loop. Conventionally, the current and voltage control loop of active filter has been done by proportional controllers integrative. This work, investigated the use of a robust adaptive control technique on the shunt active power filter current and voltage control loop to increase robustness and improve the performance of active filter to compensate for harmonics. The proposed control scheme is based on a combination of techniques for adaptive control pole placement and variable structure. The advantages of the proposed method over conventional ones are: lower total harmonic distortion, more flexibility, adaptability and robustness to the system. Moreover, the proposed control scheme improves the performance and improves the transient of active filter. The validation of the proposed technique was verified initially by a simulation program implemented in C++ language and then experimental results were obtained using a prototype three-phase active filter of 1 kVA
Os m?todos para compensa??o de correntes e tens?es harm?nicas v?m sendo bastante utilizados, visto que esses m?todos permitem reduzir a n?veis aceit?veis as distor??es harm?nicas nas tens?es ou correntes em um sistema el?trico de pot?ncia, e ainda, compensar reativos. A redu??o de harm?nicas e reativos contribuem para: a diminui??o das perdas nas linhas de transmiss?o e nas m?quinas el?tricas, o aumento do fator de pot?ncia e a redu??o de ocorr?ncias de sobretens?es e sobrecorrentes. O filtro ativo de pot?ncia ? o m?todo mais eficiente para compensa??o de correntes e tens?es harm?nicas. No filtro ativo de pot?ncia ? necess?ria a utiliza??o de controladores para as malhas de corrente e tens?o. Convencionalmente, o controle dessas malhas tem sido feito por controladores proporcionais integrativos. Neste trabalho, ? investigado o uso de uma t?cnica de controle adaptativo robusto nas malha de corrente e tens?o, do filtro ativo de pot?ncia em paralelo trif?sico, para aumentar a robustez e melhorar o desempenho desse filtro ativo na compensa??o de harm?nicos. A t?cnica de controle proposta ? baseada na combina??o das t?cnicas de controle adaptativo por posicionamento de p?los e de estrutura vari?vel. As vantagens do m?todo proposto sobre os convencionais s?o: menor taxa de distor??o harm?nica, maior flexibilidade, capacidade de adapta??o e robustez para o sistema. Al?m disso, a t?cnica de controle proposta aumenta o desempenho e melhora o transit?rio do filtro ativo. A valida??o da t?cnica proposta foi verificada inicialmente atrav?s de um programa de simula??o implementado em linguagem C ++ e em seguida foram obtidos resultados experimentais usando um prot?tipo de um filtro ativo trif?sico de 1 kVA

Made available in DSpace on 2016-12-12T17:38:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Horacio B Polli.pdf: 1930439 bytes, checksum: e2cdd47fd6b93e6b07a2e903760c35a4 (MD5) Previous issue date: 2012-11-23
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
In this work is shown the study of the modeling and control of a two-phase induction machine with a Scott-T conection in the stator. The proposal is to use this type of motor in setups that uses single-phase induction machines where better efficiency and variable speed are desirable, for example, in appliances. The mathematical model of the motor is dissed and a transformation is presented in order to obtain a symmetrical model of the motor. Following, the indirect vector control and a slide mode observer are discussed. Simulation and experimental results are obtained, and the proposed control technique is analyzed.
Neste trabalho é apresentado um estudo do modelamento e controle de um motor de indução bifásico com uma conexão Scott-T no estator. A proposta é utilizar esse tipo de motor em plataformas que utilizem motores monofásicos e se deseja a melhoria de eficiência e o uso de velocidade variável, como por exemplo, eletrodomésticos. O modelo matemático do motor é discutido e em seguida é apresentada uma transformação que faz com que o motor, a principio assimétrico, se torne simétrico. O controle vetorial indireto é discutido em sequência, assim como o observador de modos deslizantes para estimação de velocidade. Através de resultados de simulação e experimentais a técnica de controle proposta é analisada.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-12T15:01:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_PrevalenciaAutoanticorposAntigenos.pdf: 1132786 bytes, checksum: d78b20055a83ffb70095aa8e136e7c8a (MD5)
Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-03T14:22:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_PrevalenciaAutoanticorposAntigenos.pdf: 1132786 bytes, checksum: d78b20055a83ffb70095aa8e136e7c8a (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5)
Made available in DSpace on 2014-04-03T14:22:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_PrevalenciaAutoanticorposAntigenos.pdf: 1132786 bytes, checksum: d78b20055a83ffb70095aa8e136e7c8a (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2009
A pesquisa de anticorpos contra antígenos celulares requer permanente revisão das informações sobre a interpretação dos resultados, visto que a positividade é observada em parte da população normal e desencadeada transitoriamente por processos infecciosos. O objetivo deste trabalho foi determinar, através da técnica da pesquisa de auto-anticorpos anti-nucleares (ANA) em células HEp-2, a prevalência de auto-anticorpos contra antígenos celulares em três grupos de pessoas: Grupo 1- pacientes com infecção pelo Virus da dengue (VD) (n= 30); Grupo 2 - pacientes com infecção pelos HTLV 1 e 2 (n= 30), Grupo 3 - indivíduos doadores de sangue (n= 100) não infectados e sem manifestações clínicas aparentes. A prevalência de ANA nos Grupos 1 (40%) e 2 (40%) foi altamente significativa em relação ao Grupo 3 (2%) (p<0,0001), com predomínio do padrão citoplasmático em relação ao padrão nuclear. Os indivíduos do Grupo 1 estavam infectados por três espécies do VD, com predominância (p= 0,002) para o DEN 3 (66,7%), entretanto a distribuição da freqüência de ANA de acordo com a espécie, mostrou uma diferença significante (p= 0,0260) entre as infecções pelo VD1 (p= 0,0644) e VD2 (p= 0,0249), em relação ao VD3, mas sem diferença entre os padrões (p= 0,2479). No Grupo 2 a prevalência e o padrão de ANA não mostraram correlação com o tipo de HTLV, embora tenha predominado indivíduos infectados pelo HTLV 1 (p= 0,0035) (76,7%); a maioria não apresentava sintomas clínicos (p= 0,0136), 36,7% mostrava doença compatível com PET/MAH, e a presença de ANA não mostrou diferença significativa entre sintomáticos e assintomáticos (p> 0,05). Não houve correlação de soropositividade com sexo entre os grupos. Concluiu-se que o quadro infeccioso é um importante desencadeador de respostas auto-imunes detectadas laboratorialmente, não se observando influencia nas manifestaçõe clínícas dos agravos. Estudos prospectivos, com controles destes casos, poderão trazer as respostas quanto a importância e significado dos resultados obtidos.
The antibodies against cellular antigens requires ongoing review of information on the interpretation of results, whereas the positivity is observed in the normal population and transiently triggered by infectious processes. The objective of this study was to determine, through the technique for auto-anti-nuclear antibody (ANA) on HEp-2, the prevalence of autoantibodies to cellular antigens in three groups: Group 1 - infected patients Dengue virus (RV) (n = 30), Group 2 - patients infected by HTLV 1 and 2 (n = 30) Group 3 - blood donors (n = 100) uninfected and without apparent clinical manifestations. The prevalence of ANA in Group 1 (40%) and 2 (40%) was highly significant compared to Group 3 (2%) (p <0.0001), predominantly cytoplasmic pattern in relation to nuclear pattern. Individuals in Group 1 were infected by three species of the RV, with prevalence (p = 0.002) for the DEN 3 (66.7%), though the frequency distribution of NAA in accordance with the species showed a significant difference (p = 0.0260) between VD1 infections (p = 0.0644) and VD2 (p = 0.0249), compared to VD3, but no difference between the patterns (p = 0.2479). In Group 2, the prevalence and pattern of ANA showed no correlation with the type of HTLV, although dominated individuals infected with HTLV 1 (p = 0.0035) (76.7%), most had no clinical symptoms (p = 0 , 0136), 36.7% showed disease compatible with HAM / TSP, and the presence of NAA showed no significant difference between symptomatic and asymptomatic patients (p> 0.05). There was no correlation of seropositivity with sex between the groups. It was concluded that the stage of infection is an important trigger of autoimmune responses detected by laboratory testing, with no significant influence on the clinical manifestations of diseases. Prospective studies, with controls these cases, may bring answers regarding the importance and significance of the results.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:55:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ArmandoSS_TESE.pdf: 2110397 bytes, checksum: c6ade2a7219938325c34c1856e93d29f (MD5) Previous issue date: 2013-02-01
In this Thesis, the development of the dynamic model of multirotor unmanned aerial vehicle with vertical takeoff and landing characteristics, considering input nonlinearities and a full state robust backstepping controller are presented. The dynamic model is expressed using the Newton-Euler laws, aiming to obtain a better mathematical representation of the mechanical system for system analysis and control design, not only when it is hovering, but also when it is taking-off, or landing, or flying to perform a task. The input nonlinearities are the deadzone and saturation, where the gravitational effect and the inherent physical constrains of the rotors are related and addressed. The experimental multirotor aerial vehicle is equipped with an inertial measurement unit and a sonar sensor, which appropriately provides measurements of attitude and altitude. A real-time attitude estimation scheme based on the extended Kalman filter using quaternions was developed. Then, for robustness analysis, sensors were modeled as the ideal value with addition of an unknown bias and unknown white noise. The bounded robust attitude/altitude controller were derived based on globally uniformly practically asymptotically stable for real systems, that remains globally uniformly asymptotically stable if and only if their solutions are globally uniformly bounded, dealing with convergence and stability into a ball of the state space with non-null radius, under some assumptions. The Lyapunov analysis technique was used to prove the stability of the closed-loop system, compute bounds on control gains and guaranteeing desired bounds on attitude dynamics tracking errors in the presence of measurement disturbances. The controller laws were tested in numerical simulations and in an experimental hexarotor, developed at the UFRN Robotics Laboratory
Nesta Tese, s?o apresentados os desenvolvimentos da modelagem din?mica de um ve?culo a?reo n?o tripulado multirrotor com capacidade de decolagem e pouso vertical, considerando as n?o linearidades de entrada e o desenvolvimento de um controlador robusto por backstepping. A formula??o do modelo din?mico ? expressa usando-se as leis de Newton-Euler, visando ? obten??o de uma melhor representa??o matem?tica do sistema mec?nico para a an?lise e projeto das leis de controle, n?o apenas quando est? pairando, como tamb?m de decolagem, de pouso, ou de voo executando uma tarefa. As n?o linearidades de entrada s?o a zona morta e a satura??o, onde o efeito gravitacional e as inerentes restri??es f?sicas dos rotores s?o relacionadas e abordadas. O microve?culo experimental est? equipado com uma unidade de medida inercial e um sonar, que devidamente instrumentada fornece as medidas da atitude e altitude. Foi desenvolvido um estimador em tempo real para atitude usando quat?rnios e baseado em filtro de Kalman estendido. Para a formula??o robusta do controlador, os sensores foram modelados como o valor real, que ? o valor ideal com a adi??o de um vi?s e mais um ru?do branco desconhecidos e limitados. Os controladores de atitude e altitude foram derivados usando-se o crit?rio globalmente uniformemente praticamente assintoticamente est?vel para sistemas reais, que permanece globalmente uniformemente assintoticamente est?vel se e somente se suas solu??es s?o globalmente uniformemente limitadas, lidando com a converg?ncia e estabilidade dentro de uma regi?o com raio n?o nula, levando em considera??o algumas suposi??es como as incertezas nas medi??es. A t?cnica de an?lise de Lyapunov foi usada para: provar a estabilidade do sistema em malha fechada; calcular os limites dos ganhos de controle, e, obter a garantia limitada pretendida sobre o erro de rastreamento da din?mica de atitude na presen?a de dist?rbios nas medi??oes. As leis de controle foram testadas em simula??es num?ricas e em um hexarrotor experimental, desenvolvido no Laborat?rio de Rob?tica da Universidade Federal do Rio Grande do Norte

Submitted by PPG Letras (letraspg@pucrs.br) on 2017-12-28T11:47:01Z No. of bitstreams: 1 Ivanete Mileski.pdf: 3589221 bytes, checksum: c2d786fecdfd47b13e137eee863562bd (MD5)
Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-12-29T12:15:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Ivanete Mileski.pdf: 3589221 bytes, checksum: c2d786fecdfd47b13e137eee863562bd (MD5)
Made available in DSpace on 2017-12-29T12:18:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ivanete Mileski.pdf: 3589221 bytes, checksum: c2d786fecdfd47b13e137eee863562bd (MD5) Previous issue date: 2017-03-30
Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq
This study describes and analyzes variable linguistic processes in speech data of descendants of Polish immigrants living in Rio Grande do Sul. The general goal of this research was to verify to what extent Portuguese-Polish bilingualism is related to the variable lowering of the tonic and pretonic mid vowels /e, o/, as well as the variable raising of the pretonic mid vowels by vowel harmony. The corpus of this study is composed of two samples, one referring to speech data produced by 24 speakers from three different locations in the Serra Ga?cha region (Nova Prata, Nova Bassano and Vista Alegre do Prata), and the other referring to data produced by 24 speakers from Aurea, both stratified by sex and age group. Data were collected through recording sociolinguistic interviews in order to obtain spontaneous speech data, as well as elicited speech of words containing the seven oral tonic vowels. The study is based on the theoretical-methodological assumptions of Variationist Sociolinguistics (LABOV, 2008 [1972], 1994; WEINREICH; LABOV; HERZOG (2006 [1968])), Sociophonectis (THOMAS, 2011) and studies on Languages in Contact (WEINREICH, 1974 [1953]; WINFORD, 2003). The variationist analysis of the tonic mid vowels lowering allowed us to verify that the process is modest in both samples and is characterized by the interindividual variation. In both communities, an impressive number of speakers do not present the process. In addition, speakers of the older age group who speak Polish frequently tend to have higher rates of lowering while speakers of any age group who do not speak Polish frequently show relatively lower rates. The analysis of the data showed that the lowering process is influenced by the variables Type of Vowel, Precedent Context, Type of Word and Word Frequency. The acoustic analysis of the tonic mid vowels showed that the F1 value of the front and back mid vowels presents statistically significant variation associated with the Type of Vowel, the Precedent Context and the Age of the speaker. As for the variation of the pretonic vowels, the variationist analysis of the lowering of the mid vowels showed that the process (i) is relatively more restricted and less frequent than the lowering of the tonic mid vowels, (ii) constitutes a phenomenon of harmony with the vowel of the following syllable (iii) shows particular conditioning related to the speech variety, since it is relatively productive only in contexts of lowering of tonic mid vowels. The study of the variable raising of the pretonic mid vowels by vowel harmony showed that the process presents conditioning similar to that found in other speech varieties of Portuguese spoken in Southern Brazil, since it is more frequent for the vowel /o/ than for the vowel /e/ and is also influenced by the variables Contiguity, Precedent Context, Atonicity, Nasality, Following Context, Tonicity, Age Group and Community. It is concluded that the variable lowering of the tonic and pretonid mid vowels /e, o/ shows similar conditioning in the speech of the communities under study. The variable lowering also tends to occur in the bilingual speech of the age group of older people who speak Polish frequently while it does not occur in monolingual speech, so that it can be understood as a process of interference in speech (WEINREICH, 1974 [1953]), which is not widespread in the variety and does not occur independently of bilingualism.
Este estudo descreve e analisa processos lingu?sticos vari?veis em dados de fala de descendentes de imigrantes poloneses que vivem no Rio Grande do Sul. A pesquisa teve como objetivo geral verificar em que medida o bilinguismo portugu?s-polon?s est? relacionado ao abaixamento vari?vel das vogais m?dias /e, o/ t?nicas e pret?nicas, bem como ao al?amento vari?vel das vogais m?dias pret?nicas por harmonia voc?lica. O corpus deste estudo contou com duas amostras, uma referente a dados de 24 informantes de tr?s localidades da Serra Ga?cha (Nova Prata, Nova Bassano e Vista Alegre do Prata), e outra amostra com dados de 24 informantes da localidade de ?urea, ambas estratificadas por sexo e faixa et?ria. A coleta dos dados ocorreu com a realiza??o de entrevistas sociolingu?sticas para obten??o de dados de fala espont?nea, bem como com o registro de fala elicitada a partir de uma lista de palavras contendo as sete vogais orais t?nicas. O estudo fundamenta-se nos pressupostos te?rico-metodol?gicos da Sociolingu?stica Variacionista (LABOV, 2008 [1972], 1994; WEINREICH; LABOV; HERZOG (2006 [1968])), da Sociofon?tica (THOMAS, 2011) e dos estudos de L?nguas em Contato (WEINREICH, 1974 [1953]; WINFORD, 2003). A an?lise variacionista do abaixamento das vogais m?dias t?nicas permitiu verificar que o processo ? modesto em ambas as amostras e caracteriza-se pela varia??o interindividual. Em ambas as comunidades, um n?mero expressivo de informantes n?o apresenta o processo, informantes da faixa et?ria dos mais velhos que falam polon?s frequentemente tendem a apresentar taxas mais altas de abaixamento, e informantes que falam polon?s pouco frequentemente mostram taxas relativamente mais baixas. A an?lise dos dados mostrou que o abaixamento sofre influ?ncia das vari?veis Tipo de Vogal, Contexto Precedente, Tipo de Voc?bulo e Frequ?ncia da Palavra. O estudo ac?stico das vogais m?dias t?nicas mostrou que o valor de F1 das vogais m?dias anteriores e posteriores apresenta varia??o significativa a depender do Tipo de Vogal, do Contexto Precedente e da Idade do informante. Quanto ? varia??o das pret?nicas, a an?lise variacionista do abaixamento das vogais m?dias mostrou que o processo (i) ? relativamente mais restrito e menos frequente do que o abaixamento das vogais m?dias t?nicas, (ii) constitui um fen?meno de harmonia com a vogal da s?laba seguinte e (iii) mostra condicionamento particular ? variedade, pois ? relativamente produtivo apenas em contextos de abaixamento de vogais m?dias t?nicas. O estudo do al?amento vari?vel das vogais m?dias pret?nicas por harmonia voc?lica mostrou que o processo apresenta condicionamentos semelhantes aos encontrados para outras variedades de fala do sul do Brasil, uma vez que ? mais frequente para a vogal /o/ do que para a vogal /e/ e ? influenciado pelas vari?veis Contiguidade, Contexto Precedente, Atonicidade, Nasalidade, Contexto Seguinte, Tonicidade, Faixa Et?ria e Comunidade. Conclui-se que o abaixamento vari?vel das vogais m?dias /e, o/ t?nicas e pret?nicas apresenta condicionamentos semelhantes nas comunidades em estudo, tende a ocorrer na fala de bil?ngues da faixa et?ria dos mais velhos que falam polon?s frequentemente e n?o ocorre na fala de monol?ngues, de tal maneira que pode ser compreendido como um processo de interfer?ncia na fala (WEINREICH, 1974 [1953]), que n?o ? difundido na variedade e n?o ocorre independentemente do bilinguismo.

A epidemia causada pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) é a mais importante das ultimas décadas. A despeito dos avanços no conhecimento da patogenia do vírus e da resposta imune à infecção, até o momento não existe uma vacina eficaz contra a aquisição do HIV. Diversas linhas de evidência indicam que anticorpos neutralizantes ou ligadores, linfócitos T CD4+ e T CD8+ desempenham um papel importante na imunidade contra o HIV. Os anticorpos que são capazes de neutralizar o HIV são direcionados principalmente à glicoproteína do envelope do vírus (env), mas os candidatos vacinais baseados na proteína de envelope gp120 monomérica testados até hoje falharam em induzir proteção nos ensaios de eficácia. Avanços no entendimento da estrutura e função da glicoproteína env tem facilitado o desenvolvimento de uma nova geração de imunógenos baseada em trímeros mais estáveis e solúveis da glicoproteína gp140. Em uma formulação vacinal além da escolha do antígeno, os adjuvantes desempenham um papel fundamental. Os adjuvantes são conhecidos por aumentar a imunogenicidade das vacinas, e nos últimos anos vários compostos, incluindo agonistas de receptores do tipo Toll (TLR) e NOD (NLR) têm demonstrado eficácia em ensaios clínicos. Em estudos prévios, nosso grupo demonstrou que a imunização de camundongos com uma vacina de DNA codificando 18 epítopos para linfócitos T CD4+ do HIV-1 (HIVBr18), foi capaz de induzir resposta específica e ampla de linfócitos T CD4+ e T CD8+. Devido ao importante papel do efeito auxiliar de linfócitos T CD4+ na resposta humoral nas imunizações assistidas por diversos adjuvantes, o objetivo central do trabalho foi verificar se a imunização inicial com a vacina de DNA HIVBr18 seria capaz de aumentar a magnitude/qualidade de resposta imune humoral e celular induzida pelo trímero de gp140 na presença de diferentes adjuvantes. Para tal, camundongos BALB/c foram imunizados inicialmente com a vacina HIVBr18 ou com o vetor vazio e posteriormente com a proteína gp140 na presença dos adjuvantes: completo de Freund (ACF), poly IC, CpG ODN 1826, Monofosforil lipídeo A (MPL), Muramildipeptídeo (MDP), Imiquimod (R837), e Resiquimod (R848). Observamos que a imunização inicial com HIVBr18 foi capaz de fornecer um auxílio cognato para a proliferação específica de linfócitos T CD4+ e T CD8+ e também para a produção da citocina IFNy. A análise da xx resposta humoral mostrou que a imunização inicial com a vacina HIVBr18, foi capaz de influenciar a produção das subclasses de imunoglobulinas, independente do adjuvante testado. No presente trabalho, também analisamos a influência dos adjuvantes na imunogenicidade da gp140. Os animais que receberam os adjuvantes MPL, poly IC e CpG ODN 1826 apresentaram títulos de anticorpos estatisticamente superiores quando comparados aos animais que receberam os adjuvantes Alum, MDP, R837 e R848. Observamos que os animais imunizados com a gp140 na presença dos diferentes adjuvantes desenvolveram células B do centro germinativo e células TCD4+ auxiliar foliculares. Estes resultados nos permitem concluir que a imunização inicial com HIVBr18 é capaz de alterar a qualidade da resposta humoral e celular gp140- específica. Assim, essa formulação poderia ser utilizada para auxiliar e/ou direcionar a resposta imune induzida por outros imunógenos como por exemplo o trímero de gp140. Podemos concluir também que diferentes formulações de adjuvantes que se encontram em ensaios clínicos como poly IC, CpG ODN e MPL podem ser capazes de induzir um resposta imune humoral e celular tão ou mais potente que aquela induzida pelo ACF
The epidemic caused by the human immunodeficiency virus (HIV) is the most important in the last decades. Despite advances in the knowledge about virus pathogenesis and immune response to infection, until now there is not an effective vaccine against HIV acquisition. Several evidences indicate that neutralizing or binding antibodies, CD4+ and CD8+ T lymphocytes play an important role in immunity against HIV. The antibodies that are able to neutralize HIV are primarily directed against the virus envelope glycoprotein (env), but the vaccine candidates based on monomeric gp120 envelope protein tested so far failed to induce protection in efficacy trials. Advances in understanding the structure and function of the env glycoprotein have facilitated the development of a new generation of immunogens based on trimers, a more stable and soluble form of gp140 glycoprotein. In a vaccine formulation, in addition to the antigen, adjuvants play a pivotal role. Adjuvants are known to increase the immunogenicity of vaccines and, in the last years, several compounds, including agonists of Toll-like receptors (TLR) and NOD (NLR), have presented efficacy in clinical trials. In previous work, our group demonstrated that immunization of mice with a DNA vaccine (HIVBr18) encoding 18 CD4+ T cells epitopes from HIV-1 was able to induce a broad CD4+ T and CD8+ T cells specific response.. Given the important role of CD4+ T cells in the humoral response after adjuvant-assisted immunization, the aim of the study was to verify whether an initial immunization with the DNA vaccine HIVBr18 could increase the magnitude/quality of humoral and cellular immune response induced by gp140 trimer in the presence of different adjuvants. Therefore, BALB/c mice were initially immunized with the vaccine HIVBr18 or empty vector and then with gp140 in the presence of the following adjuvants: Freund\'s complete (CFA), poly IC, CpG ODN 1826, monophosphoryl lipid A (MPL), Muramyl dipeptide (MDP), Imiquimod (R837), and Resiquimod (R848). We observed that initial immunization with HIVBr18 was able to provide cognate help for specific CD4+ and CD8+ T cells proliferation and also for IFN-y production. Analysis of humoral response showed that initial immunization with the HIVBr18 vaccine was able to alter the production of immunoglobulin subclasses independent of the adjuvant tested. This work also analyzed the influence of adjuvants on the immunogenicity of gp140. Mice that received the adjuvant MPL, poly IC and CpG ODN 1826 presented higher antibody titers when compared to animals that received Alum, MDP, R837 and R848. We observed that mice immunized with gp140 in the presence of all adjuvants tested developed germinal center B cells and follicular helper T cells (TFH). We conclude that initial immunization with HIVBr18 is able to alter the quality of specific humoral and cellular immune responses.. Therefore, this formulation could be used in combination with other immunogens, such as gp140, to help/redirect the immune response. We also conclude that the adjuvants that are in clinical trials such as poly IC, MPL and CpG ODN 1826 may be able to induce stronger humoral and cellular response than CFA

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This study was divided in chapters that include various aspects of the interaction between the entomopathogenic fungus M. anisopliae with rice stink bug T. limbativentris as follows: Chapter 1 (Theoretical considerations) describes an introduction about the elements involved in this study as: the importance of rice crops for Brazil, as well as socio-economic and planted areas with this crop. It also covers information about life cycle and ecology of the rice stink bug, Tibraca limbativentris stal (1869) along with its importance as a pest. Chemical and biological control measures are discussed as well. Regarding the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin, general aspects of taxonomy, morphology, infection process of this fungus to their hosts and virulence factors were also addressed. To sum up, chemical ecology was explored addressing intraspecific and interspecific interactions among insect family pentatomidae with emphasis on studies of chemical compounds of defense in order to understand the natural resistance of this group of insects to entomopathogenic fungi. Chapter 2 (Toxicity of compounds extracted from the cuticle and the stink methatoracic gland (MTG) of T. limbativentris to the fungus M. anisopliae) describes the susceptibility of different life stages of T. limbativentris to M. anisopliae and correlates these results with the fungicidal activity of aldehydes (E)-2-octenal and (E)-2-dedecenal extracted from metathoracic scent glands (MTG) of adults as well as the (E)-2-hexenal, extracted from dorsal abdominal scent glands (DAG) of nymphal stages (second to fifth instar), by collecting exuviae. All compounds extracted were characterized by GC-MS and their fungistatic potential determined measuring the minimum inhibitory concentration (MIC) of these compounds, which expresses the ability of these compounds to inhibit the conidial germination of this fungus entirely. The aldehyde (E)-2-decenal was the most harmful to M. anisopliae germination, with MIC of 0.003% (30 ppm) compared to the (E)-2-hexenal and (E)-2-octenal, which in turn showed MIC of 0.012 and 0.025%, respectively. Chapter 3 (Effect of pesticides used in conventional rice cultivation with the entomopathogenic fungus M. anisopliae.) Describes the assessment of the compatibility of M. anisopliae to eight insecticides, five herbicides and four fungicides registered for rice cultivation. In this study we evaluated the germination (GER), vegetative growth (VG) and sporulation (ESP) of the fungus after three hours in the mixture, stirring with agrochemicals. The parameters evaluated were the fungus equated using the following formula: BI = [(VG * 47) + (ESP * 43) + (10 * GER)] / 100, in which through the biological index value (BI) was possible to determine the compatibility level of agrochemicals to the fungus. Among the tested pesticides, insecticides Bravic™, Actara™, Karate Zeon™; herbicide Roundup™, Basagran™, Kifix™ and fungicide Priori ™ were the only products compatible with M. anisopliae. Chapter 4 (enhanced pathogenicity toT. limbativentris with sublethal doses of chemical insecticides.) describes the interaction of M. anisopliae combined with sublethal concentrations of thiamethoxam against adults of T. limbativentris. This combination as hypothesis has to overcome the natural chemical resistance of T. limbativentris to M. anisopliae. The results showed that T. limbativentris was more susceptible to M. anisopliae (strain CG-168) associated with sublethal doses of thiamethoxam (Actara™) or lambda-cyhalothrin (Karate Zeon™) than the fungus alone. In addition, the optimum concentration was observed for the fungus at 5x107 conidia combined with concentrations of the insecticide thiamethoxam. The fungus in xxi this concentration mixed with thiamethoxam at 3.1 ppm caused 80% adult mortality, whereas the mortality rates in treatments with the fungus and 3.1 ppm thiamethoxam both applied alone were 38 and 35% respectively. Sublethal doses of Actara™ (3.1 ppm) and Karate Zeon™ (186 ppm) was estimated by Probit equation. For the purpose of using a commercial strain of M. anisopliae, the virulence of strain CG-168, used in all previous tests, was compared to strain 1037-ESALQ, registered commercially. According to the results both strains had similar virulence to adult T. limbativentris. commercially registered in Brazil market. According to the results, adults of T. Limbativentris were similarly susceptible to both strains of M. anisopliae. In the field experiment, five treatments were prepared: Fungus + Actara™ sublethal dose (50g ha), Fungus, Actara™ sublethal dose (50g./ha) Actara™ full dose (200g./ha) and control; which were applied on rice plants infested with insects inside nylon cages under field conditions. After seven and 14 days of application, 20 insects were collected from each cage and evaluated in the laboratory. According to the results, the evaluation of the first collection, mixture of M. anisopliae with 50g/ha Actara™ caused 54% mortality compared with 40, 32, 26 and 18% respectively for the full dose of Actara™ (200g/ha), fungus alone, Actara™ sublethal dose (50g/ha) and control. In the second collection, fungus + Actara™ highlightedin relation to the others, causing a 50% mortality, while treatment with the fungus alone the mortality was16% and the others treatment was 0% As a result, we found a synergism effect between fungus and sublethal dose of the insecticide. In summary, our results highlight the potential of sublethal concentrations of the neonicotinoid insecticide thiamethoxan in increasing the susceptibility of adults of T. Limbativentris to the fungus M. anisopliae. In fact, this strategy consists in a control method effective and feasible to combat this stink rice bug in the field from a viewpoint of an integrated pest management and sustainability.
O presente estudo foi dividido em capítulos que inclui diversos aspectos da interação entre o fungo entomopatogênico M. anisopliae com o percevejo do colmo do arroz T. limbativentris como se seguem: O capítulo 1 (Considerações teóricas) descreve uma introdução sobre os elementos envolvidos neste estudo como: A importância da cultura do arroz para o Brasil, assim como aspectos sócio-econômicos e fitossanitário dessa cultura. O mesmo capítulo também aborda informações sobre o percevejo do colmo do arroz, Tibraca limbativentris stal (1869) como aspectos morfológicos, biológicos, importância como praga e métodos de controle químico e biológico. Sobre o fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin esse capítulo aborda aspectos gerais como taxonomia, morfologia, processo de infecção desse fungo aos seus hospedeiros e fatores de virulência. Para finalizar o capítulo foi explorado o assunto sobre ecologia química abordando as interações interespecíficas e intraespecíficas entre os insetos da família pentatomidae com ênfase nos estudos sobre compostos de defesas já elucidados nesta família de insetos. O capítulo 2 (Toxicidade de compostos extraídos da Glândulas Metatorácica (GMT), de adultos, e da Abdominal Dorsal (GAD), de ninfas, de T. limbativentris a M. anisopliae) descreve os resultados relacionados a diferença de susceptibilidade entre os estágios de vida do T. limbativentris ao fungo M. anisopliae e correlaciona estes resultados a atividade fungitóxica dos aldeídos (E)-2-octenal e (E)-2-decenal, extraído da glândula metatorácica (MTG) de adultos, e também o (E)-2-hexenal, extraído da glândula abdominal dorsal (DAG) nos estágios ninfais de segundo a quinto instar deste percevejo, por meio de coleta de exúvias. Todos os compostos extraídos foram caracterizados por CG-EM e o potencial fungitóxico determinado por meio da concentração inibitória mínima (MIC) desses compostos capaz de inibir totalmente a germinação do fungo. O aldeído (E)-2-decenal foi o mais ativo, apresentando MIC de 0,003% (30 ppm), em comparação com o (E)-2-hexenal e o (E)-2-octenal que apresentaram MIC de 0,012 e 0,025% respectivamente. O capítulo 3 (Efeito de agroquímicos convencionais utilizados na cultura do arroz ao fungo M. anisopliae.) descreve a avaliação da compatibilidade do M. anisopliae à oito inseticidas, cinco herbicidas e quatro fungicidas registrados para a cultura do arroz. Neste trabalho avaliou-se a germinação (GER), o crescimento vegetativo (CV) e a esporulação (ESP) do fungo após três horas em mistura, sob agitação, com os agroquímicos. Os parâmetros avaliados do fungo foram equacionados segundo a fórmula: IB = [(CV*47)+(ESP*43)+(GER*10)]/100; no qual através do valor índice biológico (IB) determinou-se a seletividade dos agroquímicos ao fungo. Entre os agroquímicos testados, os inseticidas Bravic™, Actara™, Karate Zeon™; os herbicidas Roundup™, Basagran™, Kifix™ e o fungicida Priori™ foram compatíveis ao M. anisopliae. No entanto, o fungicida Priori™ retardou a germinação do fungo, até 20 horas após o contato nenhum conídio germinado foi observado neste tratamento e após 48 horas foi observado 43% germinação. O capítulo 4 (Aumeto da patogenicidade de M. anisopliae a T. limbativentris com doses subletais de inseticidas químicos.) descreve a interação do M. anisopliae combinado com concentrações subletais de tiametoxam contra adultos do T. limbativentris. A combinação tem como hipótese superar resistência química natural do T. libentriventris ao M. anisopliae. Os resultados mostraram que o T. limbativentris foi mais susceptível ao M. anisopliae associado a doses subletais de tiametoxam (Actara™) ou λ-cialotrina (Karate Zeon™) do que ao xix fungo isolado. E ainda foi verificado uma concentração ótima para o fungo (5x107 conídios.mL), através de correlação com concentrações do inseticida tiametoxam. O fungo nesta concentração misturado ao tiametoxam a 3.1 ppm causou mortalidade de 80%, enquanto a taxa de mortalidade nos tratamentos com o fungo isolado e o tiametoxam 3.1 ppm foi de 38 e 35% respectivamente. As doses sobletais de Actara™ (3,1ppm) Karate Zeon™ (186ppm) foi estimada pela equação Probit. Com a intenção de utilizar uma cepa comercial do M. anisopliae foi comparada a virulência da cepa CG-168, utilizadas em todos os ensaios anteriores, com a cepa ESALQ-1037, registrada comercialmente. Segundo resultados ambas as cepas tiveram virulência semelhante para adultos de T. limbativentris. No experimento de campo, foram preparados cinco tratamentos: Fungo + Actara™ dose subletal (50g/há), Fungo, Actara™ dose subletal (50g/há), Actara™ dose cheia (200g/ha) e o controle; os quais foram aplicados nos insetos contidos em gaiolas em campo. Após um e sete dias da aplicação, foram coletados 20 insetos de cada gaiola e avaliados em laboratório. Segundo resultados, na avaliação da primeira coleta, o tratamento com a mistura do M. anisopliae com 50g/ha Actara™ apresentou taxa de mortalidade 54% contra 40, 32, 26 e 18% respectivamente para os tratamentos Actara™ dose cheia (200g/ha), Fungo, Actara™ dose subletal (50g/há) e Controle. Na avaliação da segunda coleta, o tratamento com o fungo + Actara™ destacou em relação aos demais, causando taxa de mortalidade de 50% enquanto o tratamento com o fungo isolado foi de 16% e os demais de 0%. Nesta avaliação constatou-se um sinergismo entre o fungo e a dose subletal do inseticida. Em resumo, nossos resultados destacam o potencial de concentrações subletais do inseticida tiametoxam (neonicotinóide) em aumentar a susceptibilidade dos adultos de T. limbativentris ao fungo M. anisopliae. Na verdade, esta estratégia consiste em um método de controle eficaz e viável para combater o percevejo do colmo do arroz em campo, do ponto de vista de um manejo integrado pragas com sustentabilidade.

A imunização materna com a vacina acelular para pertussis (dTpa) é uma intervenção adicional que visa fornecer proteção aos recém-nascidos (RN). No entanto, tem sido relatado que altos níveis de anticorpos adquiridos por transferência placentária podem afetar adversamente a resposta imune desses RN após a imunização ativa, devido ao mascaramento antigênico. Neste estudo, avaliamos a aquisição passiva neonatal de anticorpos específicos para pertussis e sua influência na resposta imune celular dos neonatos. A casuística foi composta por gestantes vacinadas com a vacina dTpa (grupo caso, n=66) ou por gestantes que não receberam a vacina (grupo controle, n=101). As concentrações de anticorpos IgG séricos específicos para Bordetella pertussis total (Bp), toxina pertussis (PT), hemaglutinina filamentosa (FHA) e pertactina (PRN) foram quantificadas em soro materno e de cordão umbilical de seu respectivo RN, e as concentrações de anticorpos IgA específicos para Bp e PT foram dosadas nas amostras de colostro por meio de ensaio imunoenzimático. A responsividade dos linfócitos do sangue neonatal foi avaliada após estimulação ex vivo com Bp inativada por citometria de fluxo com o intuito de detectar a proliferação, produção de citocinas e fenótipo de ativação dos linfócitos T em um contexto de altas concentrações de IgG específicas adquiridas após a vacinação materna. As concentrações de anticorpos IgG anti-Bp, PT, FHA e PRN foram maiores nas amostras de soro materno e de cordão umbilical do grupo caso quando comparadas ao grupo controle (p < 0,0001), com índices de correlação positivos em ambos os grupos para todos os antígenos estudados (p < 0,0001). As vacinações realizadas entre 26 e 31 semanas de gestação foram associadas com as melhores taxas de transferência placentária, embora índices significativamente menores foram detectados no grupo caso (p < 0,01). As concentrações de anticorpos IgA anti-Bp e anti-PT no colostro não foram afetadas pelo estado vacinal da parturiente. Os ensaios de cultura celular revelaram que os RN responderam ao estímulo com Bp, com maior expressão de CD40L, CD69 e proliferação de células T CD4, em comparação com células não estimuladas. Também foi observada uma menor resposta Th1, enquanto a resposta Th2 foi preservada, em comparação com os adultos, mas sem diferenças entre os grupos de neonatos em nenhum dos parâmetros estudados. Nossos resultados indicam que níveis mais altos de anticorpos IgG específicos para B. pertussis no soro dos RN após a vacinação materna não afetam a resposta imune neonatal mediada por células
Maternal immunization with pertussis acellular vaccine (Tdap) is an additional intervention that provides protection to newborns. However, it has been reported that high antibody levels acquired via placental transfer may adversely affect the immune response of newborns after active immunization due to epitope masking. In this study, we evaluated neonatal passive acquisition of pertussis-specific antibodies and their influence on the neonatal cell-mediated immune response. The sample consisted of pregnant women vaccinated with the Tdap vaccine (case group, n=66) or pregnant women who received no vaccine (control group n=101). Whole-cell Bordetella pertussis (Bp), pertussis toxin (PT), filamentous hemagglutinin (FHA) and pertactin (PRN)-specific serum IgG concentrations were quantified in paired maternal-cord sera, and Bp- and PT-specific IgA concentrations were evaluated in colostrum samples by immunoenzymatic assay. Ex vivo neonatal blood lymphocyte responsiveness after inactivated Bp stimulation was assessed using flow cytometry to detect the proliferation, cytokine production and activation phenotype of T lymphocytes in the context of high specific IgG concentrations acquired after maternal vaccination. Anti-Bp, PT, FHA and PRN IgG antibody concentrations in maternal and cord serum samples from case group were higher than those in control group (p < 0.0001), with positive correlation indexes in both groups for all pertussis antigens (p < 0.0001). Vaccinations performed between 26 and 31 gestation weeks were associated with the best placental transfer ratios, although significantly lower ratios were detected in case group (p < 0.01). Anti-Bp and anti-PT IgA concentrations in colostrum were not affected by vaccine status. Cell culture assays revealed that newborns responded to Bp stimulation with higher expression of CD40L CD69 and CD4+ T cell proliferation compared to unstimulated cells. It was also observed a lower Th1 response, while a preserved Th2 response compared to adults, but there were no differences between neonatal groups for any of the studied parameters. Our results indicate that higher pertussis-specific IgG levels in newborn sera after maternal vaccination do not affect the neonatal cell-mediated immune response

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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
The MTHFR 677C>T variant (rs1801133) has been analysed as a putative genetic risk factor for oral clefts within various populations worldwide. To test the role of the MTHFR 677C>T variant in nonsyndromic cleft lip with or without cleft palate (NSCL/P) predisposition in the Brazilian population, we conducted a study combining a family-based association test (transmission disequilibrium test-TDT) and a structured association analysis (case-control study) based on the individual ancestry proportions. The rs1801133 polimorphism was genotyped in 197 trios with NSCL/P, 318 isolated samples of NSCL/P and 598 healthy controls using the TaqMan 5′- exonuclease allelic discrimination assay. Genomic ancestry was characterized by a set of 40 biallelic short insertion/deletion markers. TDT revealed a strong association of rs1801133 polymorphism with case-parent trios of NSCL/P (p=0.002) and non-syndromic cleft lip and palate (NSCLP, p=0.001), but not with non-syndromic cleft lip (NSCL). Analyses of parent-oforigin effects demonstrated modest excess transmission of the risk allele from mothers of NSCLP (OR: 1.47, 95% CI: 1.10-2.14, p=0.04). The structured case-control analysis supported these findings, revealing that the risk T allele was significantly more frequent in NSCL/P group (OR: 1.37, 95% CI: 1.12-1.69, p=0.002) and NSCLP (OR: 1.41, 95% CI: 1.12-1.79, p=0.01) than the control group. Our findings provide evidence for the involvement of rs1801133 in the development of NSCL/P in the Brazilian population, and reinforce the importance of genetic screening in populations at risk in order to optimize the implementation of preventive strategies.
Entre os prováveis fatores de risco genético para as fissuras orais, está o polimorfismo rs1801133 do gene MTHFR (677C>T). O papel desse polimorfismo com relação à predisposição para fissuras não-sindrômicas do lábio com ou sem o envolvimento do palato (FL/P) foi analisado na população Brasileira. Utilizou-se duas abordagens, um teste de associação de base familiar (teste de desequilíbrio de transmissão TDT) e um estudo casocontrole baseado nas proporções individuais de ancestralidade. Na análise TDT o polimorfismo rs1801133 foi genotipado em 197 trios (o afetado e seus respectivos pais). No estudo casocontrole foram incluídos 318 indivíduos fissurados e 598 controles não portadores de fissuras ou qualquer outra anomalia. Realizou-se ensaio de discriminação alélica TaqMan 5′- exonuclease. A ancestralidade genômica foi caracterizada por um conjunto de 40 marcadores bialélicos de curta inserção / deleção. O TDT revelou uma forte associação entre o polimorfismo rs1801133 nos trios de portadores de FL/P (p=0,002) como também nos trios de fissuras labiopalatinas (FLP, p=0,001), mas não apresentou associação com fissuras labiais isoladas (FL). A análise da origem parental do alelo T mostrou excesso de transmissão, por parte das mães, nos trios de portadores de FLP (OR: 1.47, 95%CI: 1.10-2.14, p=0,04). O estudo caso-controle corroborou com os resultados obtidos no TDT, demonstrando que o alelo polimórfico 677T foi significantemente mais frequente no grupo de portadores de FL/P (OR: 1.37, 95% CI: 1.12-1.69, p=0,002) e de FLP (OR: 1.41, 95% CI 1.12-1.79, p=0,01) quando comparada ao grupo controle. Em conclusão, o presente estudo sugere correlação entre o polimorfismo rs1801133 e o desenvolvimento de FL/P na população brasileira, e reforça a importância da triagem genética nas famílias dos afetados para otimizar a aplicação de medidas preventivas.

A fin de diseñar e implementar lenguajes de programación que tengan en cuenta el paradigma borroso modificaremos el lambda cálculo clásico, adjuntando a cada término un grado, y redefiniendo la beta-reducción, obteniendo que para que el nuevo cálculo verifique la propiedad de Church-Rosser la transmisión de los grados debe hacerse por medio de una función que sea una t-norma o s-conorma. Utilizando esta nueva herramienta diseñamos un lenguaje no determinista que satisface los requerimientos de la programación con datos borrosos.
With the aim of designing and implementing programming languages that take into account the fuzzy paradigm we will modify the classical lambda calculus by adding a degree to each term and by redefining the b-reduction. Thus, for the new calculus to verify the Church-Rosser property, the degree computed with can be made through a function that is a t-norm or an s-conorm. With this new tool we design a nondeterminist language that satisfies fuzzy dataprogramming requirements, and an example of its behaviour is shown.

Immunotherapy represents a therapeutic option for subgroups of paediatric patients with leukaemia who, despite the impressing advances of the last decades in the field, still show a poor prognosis because of high risk-disease or relapse. A deeper understanding of how the immune system physiologically recognizes and eradicates tumour cells is mandatory. Peptidic antigens are of great interest in the field of immunotherapy because they could be used as vaccines to boost immunity. TEL/AML1 mutant protein, whose sequence is known, is the result of a balanced t(12;21) translocation which generates a fusion gene. Peptides can be artificially synthetized from TEL/AML1 fusion protein and their HLA-binding capacity and immunogenicity can be predicted through bioinformatic tools. This project aimed to investigate whether the excellent prognosis showed by patients who suffer from a B-lineage ALL harbouring the TEL/AML1 mutation could be related to an immune response against peptidic antigens derived from the TEL/AML1 mutant protein. For such purpose, 8 priming experiments were performed with healthy donors’ leucocytes. Six experiments were carried out according to a dendritic cells-mediated protocol, whereas two experiments were performed according to a beads-mediated protocol. Successfully primed lymphocytes (identified by mean of intracellular cytokines production) were selected through flow cytometric sorting and single-cell seeded in order to get T-cell clones. This was possible in 3 out of 8 priming experiments. Growing T-cell clones were tested after stimulation with peptides (or through tetramer staining) but they did not show enough specificity. We also tried to show an immune response against fusion peptides in peripheral blood leucocytes of patients who survived a TEL/AML1 positive B-lineage ALL, through exposure to peptides and a short course stimulation with cytokines. We tested 22 patients, but unfortunately we weren’t able to show an answer against fusion peptides in any of them. Possible reasons might be the lack of specificity of the activation markers we used to identify reactive cells, the not enough restrictive gates we used for sorting, the fact that the HLA super type B*07 (for which the restricted peptides had the best prediction score) was underrepresented in our patients’ cohort. We suggest to perform further experiments using new activation markers, such as CD25 or PD-L1, or different techniques to identify reactive cells (such as Elispot), to use more restrictive gates for sorting and to exploit the beads priming protocol. In order to sample such lymphocyte populations (i.e. antigen specific T-cells) with an extremely low frequency, a possibility may be collect repeatedly blood samples from the same patient at different time points. Further studies are warranted to test the hypothesis of an autologous, spontaneously arising immune response against TEL/AML1 fusion peptides as reason for the good prognosis of TEL/AML1 positive leukaemia. Another possible approach in order to validate fusion peptides might be to test them in a situation of HLA B*07 mismatch between lymphocytes and APCs. The clinical counterpart could be the generation of reactive T-cell clones, cloning of their TCR and its transduction in the patient’s or donor’s lymphocytes, the latter in the perspective of a post-hematopoietic stem cell transplantation adoptive immunotherapy.
L’immunoterapia costituisce un’opzione terapeutica per alcuni sottogruppi di pazienti con leucemia dell’età pediatrica i quali, nonostante i notevoli progressi degli ultimi decenni, ancora non mostrano una prognosi soddisfacente perché affetti da malattia ad alto rischio oppure da ricaduta. Una comprensione più profonda di come il sistema immunitario fisiologicamente riconosce ed elimina le cellule tumorali è essenziale. Gli antigeni peptidici sono di grande interesse nel settore dell’immunoterapia perché possono essere utilizzati come vaccini per potenziare l’immunità. La proteina mutante TEL/AML1, la cui sequenza è nota, è il risultato di una traslocazione bilanciata t(12;21) che genera un gene di fusione. Dalla proteina di fusione TEL/AML1 si possono sintetizzare artificialmente peptidi, la cui capacità di legare le molecole HLA ed immunogenicità si può prevedere attraverso strumenti bioinformatici. Questo progetto ha l’obiettivo di indagare se l’eccellente prognosi dei pazienti affetti da leucemia linfoblastica di linea B con la mutazione TEL/AML1 possa essere correlata ad una risposta immunologica nei confronti di peptide di fusion derivati dalla proteina mutante TEL/AML1. A tale scopo, sono stati realizzati 8 esperimenti di priming con leucociti di donatori sani. Sei sono stati realizzati secondo un protocollo mediato da cellule dendritiche, mentre altri due esperimenti sono stati condotti secondo un protocollo mediato da beads. I linfociti responsivi al processo di priming (identificati mediante la produzione intracellulare di citochine) sono stati selezionati mediante sorting citofluorimetrico e coltivati a singola cellula in modo da ottenete cloni T-cellulari. Ciò è stato possibile in 3 esprimenti su 8. I cloni T-cellulari con evidenza di crescita sono stati testati dopo re-stimolazione con i peptidi (o mediante tetramer-staining) ma non hanno dimostrato sufficiente specificità- Abbiamo inoltre provato a dimostrare una risposta immunologica nei confronti dei peptidi di fusione nei leucociti (da sangue periferico) di pazienti con leucemia linfoblastica di linea B TEL/AML1 positiva in remissione, mediante esposizione ai peptidi e una breve stimolazione con citochine. Sono stati testati 22 pazienti, ma purtroppo non è stato possibile evidenziare una risposta nei confronti dei peptidi di fusione in nessuno di loro. Possibili spiegazioni potrebbero essere la mancanza di specificità dei marcatori di attivazione che sono stati utilizzati per identificare le cellule reattive, i gate non sufficientemente restrittivi utilizzati per il sorting, il fatto che il supertipo HLA B*07 (i peptidi B*07 ristretti avevano il migliore score predittivo) era sotto-rappresentato nella coorte di pazienti presa in esame. Ci riproponiamo di realizzare ulteriori esperimenti utilizzando nuovi marcatori di attivazione, come CD25 o PD-L1, oppure differenti tecniche per identificare le cellule reattive (come l’Elispot), di usare gates più restrittivi per il sorting e di utilizzare esclusivamente il protocollo mediato da beads per il priming. Per riuscire a includere nel campione popolazioni linfocitarie (cellule T antigene-specifiche) la cui frequenza è estremamente bassa, una possibilità potrebbe essere eseguire prelievi ematici ripetuti nel tempo nello stesso paziente. Sono necessari ulteriori studi per testare l’ipotesi di una risposta immune autologa, spontanea, nei confronti dei peptidi di fusione TEL/AML1 come spiegazione della buona prognosi della leucemia linfoblastica di linea B TEL/AML1 positiva. Un altro possibile approccio per validare i peptidi di fusione potrebbe essere quello di testarli in una situazione di HLA B*07 mismatch tra linfociti ed APCs. La ricaduta clinica potrebbe essere la generazione di cloni T-cellulari dalle cellule reattive al priming, il clonaggio del loro TCR e la sua transduzione nei linfociti del paziente o del suo donatore, in quest’ultimo caso nella prospettiva di un’immunoterapia adottiva post-trapianto di cellule staminali ematopoietiche.

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2016
Das principais complicações que ocorrem após transplante alogénico de células estaminais hematopoiéticas (TACEH), as infeções virais e a doença do enxerto contra o hospedeiro crónica (DECHc) encontram-se associadas a altas taxas de mortalidade e morbilidade [1]. Tirando partido da capacidade das células T reguladoras (Treg) de manter a tolerância periférica e suprimir respostas imunes, avalia-se com este trabalho a competência desta população infundida em doentes com DECHc de controlar a doença e possibilitar a diminuição da terapêutica imunossupressora. Simultaneamente, a capacidade das Treg de suprimirem respostas imunes levanta a possibilidade de estas células infundidas não só suprimirem os mecanismos responsáveis pela DECH, mas também respostas protetoras, aumentando assim o risco de infeções, nomeadamente a reativação de Citomegalovírus (CMV). Neste sentido, no contexto de um ensaio clínico de fase I, foram avaliadas as sintomatologias associadas a DECHc, bem como a infeção por CMV pré e pós infusão de Treg.
Viral infections (de novo or re-activation) and chronic Graft Versus Host Disease (cGVHD) are major complications associated to Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation (alloHSCT). Such pathologies result in high rates of mortality and morbility in the post-transplantation period [1]. Taking advantage of the ability of regulatory T cells (Treg) to maintain peripheral tolerance and suppress immune responses, this work evaluates the ability such cells to control cGVHD in patients with steroid-refractory disease. While the suppressive capacity of Tregs may have the positive effect of reducing cGVHD, the possibility that the suppressive effect may hamper protective immune responses resulting in increased incidence of infection, such as CMV must be taken into consideration and carefully evaluated. Thus, in the context of a phase I clinical trial, cGVHD symptomatology and Cytomegalovirus (CMV) infection were evaluated pre and post Treg infusion in patients with steroid-refractory cGVHD.