Thèses : « Cellules musculaires humaines »

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Dimicoli-Salazar, Sophie. « Conversion myogénique striée de cellules humaines non musculaires ». Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077057.

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Résumé :

Peu de thérapeutiques efficaces existent pour les patients souffrant de myopathies ou de cardiomyopathies. La greffe de cellules du tissu à soigner a d'abord été testée en clinique mais n'a pas conduit à un réel bénéfice. Dans le contexte de la plasticité cellulaire, le potentiel myogénique de nombreux autres types de cellules a alors été testé sur l'animal avec des taux de conversion modestes. La reprogrammation de cellules non myogéniques par des facteurs clés paraît une alternative intéressante. Pour le muscle squelettique, Myf5 est un facteur maire. Pour le muscle cardiaque, les facteurs Nkx2. 5, Gata4 et Tbx5 sont essentiels. Nous avons mené des expériences de reprogrammation musculaire striée avec ces différents transgènes. Concernant le muscle squelettique, au contraire de ce qui a été observé avec les cellules souches hématopoïétiques (CSH), nous avons obtenu des résultats encourageants avec les fibroblastes de peau, les cellules souches mésenchymateuses (CSM), les cellules endothéliales provenant de la veine de cordon ombilical (HUVEC) et les progéniteurs endoméliaux de sang de cordon. Dans le cas du muscle cardiaque, nous avons utilisé la combinaison double Nkx2. 5/Gata4. Aucun résultat probant n'a été constaté dans les CSH. En revanche, cette combinaison a conduit à une initiation du programme cardiaque pour les 10T1/2, les CSM, les HUVECs, les cellules satellites. Dans ce dernier cas, la combinaison triple Nkx2. 5 /Gata4/ Tbx5 a amélioré cette réorientation. Ce travail permet d'ouvrir la discussion sur l'intérêt thérapeutique potentiel de ces outils et d'avoir une nouvelle approche concernant la compréhension des phénomènes de transdifférenciation cellulaire
Treatments for patients suffering from myopathies and cardiovascular diseases are not always very efficient. Therefore, injection in the diseased organs of some of their healthy precursors has been tested as possible replacement sources, with no significant improvement. Therefore, with all the enthusiasm linked to the stem cell plasticity phenomenon, the therapeutic efficiency of numerous other cell types has been experimentally tested, with modest myogenic conversion. Several teams have experimentally tested the efficacy of reprogrammed non myogenic cells by using factors which have a key role in muscle regulation. For skeletal muscle, Myf5 is a master gene. For heart myogenesis, Nkx2. 5, Gata4 and Tbx5 are important. In our work, we followed this strategy. In the skeletal muscle case, we used Myf5 to reprogram several primary human cells. Except for the haematopoietic stem cells (HSC), we observed promising results with skin fibroblasts, mesenchymal stem cells (MSC), human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), endothelial progenitors from umbilical cord blood. In thé heart muscle case, we co-transduce cells with Nkx2,5 and Gata4. We observe no change for HSC. Mesenchymal stem cells, HUVEC and satellite cells could only initiate cardiac transcriptional program. The combination of the three transgenes Nkx2. 5, Gata4 and Tbx5 in satellite cells could improve significantly the cardiac program activation. This work allows us to evaluate the myogenic potential of several reprogrammed primary human cells expressing particular transgenes. It opens discussion on the cell replacement therapy area and may give new informations on the transdifferenciation phenomenon

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Chevillotte, Emmanuel. « Régulation transcriptionnelle des protéines découplantes dans les cellules musculaires humaines ». Lyon 1, 2003. http://www.theses.fr/2003LYO10042.

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Résumé :

Dans cette thèse, nous présentons une revue bibliographique sur les acides gras, les facteurs de transcriptions de la famille des PPARs, les protéines découplantes et les méthodes de culture des cellules musculaires humaines. Dans ces cellules, nous vous avons montré que les acides gras n-6 augmentent l'expression du gène de la protéine découplantes UCP2 en impliquant la formation de prostaglandines et l'activation du récepteur nucléaire PPAR(beta). L'étude du promoteur du gène UCP2 humain suggère qu'il n'existe pas de site de fixation direct pour les PPARs. Nous avons aussi montré que l'expression d'UCP2 est modulé par l'insuline, probablement par phosphorylation de PPAR(alpha) ou de PPAR. Enfin, nous avons montré que les hormones thyroidiennes augmentent l'expression d'UCP2 et d'UCP3 dans différents tissus chez l'homme. Les mécanismes de régulation transcriptionnelle observés pourraient mettre en évidence de nouvelles implications physiologiques pour la protéine UCP2.

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Croissant, Coralie. « Le rôle des Annexines dans la réparation membranaire des cellules musculaires squelettiques humaines ». Thesis, Bordeaux, 2019. http://www.theses.fr/2019BORD0316/document.

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Résumé :

Les dystrophies musculaires sont un groupe de pathologies génétiques qui cause une faiblesse et une perte progressive des muscles squelettiques. Parmi elles, la dystrophie des ceintures de type 2B (LGMD2B) est caractérisée par des mutations dans le gène de la dysferline, entrainant de sévères dysfonctionnements, dont un défaut de réparation membranaire. Les ruptures de la membrane plasmique sont des évènements physiologiques induits par des contraintes mécaniques, comme lors de la contraction des fibres musculaires. Les cellules eucaryotes possèdent donc une machinerie protéique assurant une réparation rapide de larges ruptures membranaires. La liste exhaustive des composants de la machinerie de réparation et leur mode d’action reste à établir.Les annexines (Anx) sont de petites protéines solubles, au nombre de 12 chez les mammifères, qui partagent la propriété de lier les membranes exposant des phospholipides chargés négativement en présence de Ca2+. De nombreuses études ont montré l’implication de certaines Anx (AnxA1, A2, A4, A5, A6 et A7) dans la réparation membranaire de différents types cellulaires (muscle, cancer, endothélium…) et dans différentes espèces (souris, poisson-zèbre, homme…). La présence des Anx dans le muscle squelettique, et la participation de plusieurs membres de cette famille dans la réparation membranaire, soulèvent la question d’un rôle collectif de ces protéines dans la protection et la réparation des ruptures du sarcolemme.Les objectifs de ce travail ont été 1) d’identifier les Anx impliquées dans la réparation membranaire des cellules musculaires squelettiques humaines, 2) développer une stratégie de microscopie corrélative pour étudier le site de rupture et la distribution subcellulaire des Anx à haute résolution, 3) élucider la fonction des Anx dans le mécanisme de réparation, et 4) analyser les Anx dans des cellules musculaires dystrophiques. Avec des approches en biologie cellulaire et moléculaire, et en microscopie de fluorescence et électronique, nous avons donc étudié le comportement des Anx lors d’un dommage du sarcolemme.Nous avons ainsi montré que les AnxA1, A2, A4, A5 et A6 sont exprimées dans les myoblastes et les myotubes humains, et sont recrutées au site de rupture quelques secondes après le dommage, en formant une structure dense à l’extérieur du myotube endommagé appelé domaine « cap ». De plus, nous avons pu déterminer l’ordre relatif de recrutement des Anx au site membranaire endommagé. Les premières Anx à être recrutées sont l’AnxA1, suivies des AnxA6 et A5, les moins sensibles au Ca2+. Les dernières Anx recrutées sont les plus sensibles au Ca2+, les AnxA4 puis A2, qui semblent se lier à des vésicules intracellulaires initialement éloignées du site de rupture. Nous avons également étudié l’ultrastructure du site de rupture à haute résolution. Nos résultats ont révélé que le domaine « cap » correspondait à une accumulation de matériel membranaire qui est associé au Anx. En s’appuyant sur nos résultats et la littérature, nous avons proposé un modèle de réparation membranaire, impliquant les AnxA1, A2, A4, A5 et A6, dans les cellules musculaires squelettiques humaines. Nous nous sommes également intéressés à l’expression des Anx dans des lignées de cellules musculaires dystrophiques issues de patients atteints de dystrophies musculaires des ceintures de type 2B (déficients en dysferline) et 1C (déficients en cavéoline-3). Nous avons ainsi montré que le contexte pathologique perturbait l’expression de certaines Anx, sans en modifier leur localisation subcellulaire.En conclusion, ce travail de thèse montre que plusieurs membres de la famille des Anx sont impliqués dans la réparation membranaire, et agissent de concert pour réparer un dommage de la membrane plasmique. L’implication des Anx dans d’autres pathologies, comme le cancer et la pré-éclampsie, renforce l’intérêt de leur étude dans les processus de réparation membranaire et en font une cible thérapeutique potentielle
Muscular dystrophy encompasses a group of genetic disorders which cause progressive weakness and wasting of skeletal muscle. Among them, limb girdle muscular dystrophy type 2B (LGMD2B) is characterized by mutations in the dysferlin gene leading to several dysfunctions including a failure in cell membrane repair process. Cell membrane disruption is a physiological phenomenon induced by mechanical stress, such as contraction of muscle fibers. Thus, eukaryotic cells have a repair protein machinery ensuring a rapid resealing of large cell membrane ruptures. The exhaustive list of components of the repair machinery and their interplay remain to be established.The annexin (Anx) family consists of twelve soluble proteins in mammals and share the property of binding to membranes exposing negatively charged phospholipids in a Ca2+-dependent manner. Several studies have shown the involvement of Anx (AnxA1, A2, A4, A5, A6 and A7) in membrane repair of different cell types (muscle, cancer, endothelium…) in different species (mouse, zebrafish, human…). The presence of different Anx in skeletal muscle, together with the participation of several members of the Anx family in membrane repair processes, raise the question of a collective role of these proteins in the protection and repair of sarcolemma injuries.The PhD project aimed 1) at identifying Anx that are essential for membrane repair in human skeletal muscle cells, 2) developing a correlative light and electron microscopy to study the wounded site and the Anx distribution at high resolution, 3) elucidating the function of each Anx in this process and 4) analyzing Anx in dystrophic muscle cells. Using approaches including cellular and molecular biology, fluorescence microscopy and transmission electron microscopy, we studied the behavior of Anx during sarcolemma damage.We showed that AnxA1, A2, A4, A5 and A6 are expressed in human myoblasts and myotubes, and are recruited at the disruption site within seconds after the sarcolemmal damage, forming a dense structure outside the cell, named the “cap” domain. Furthermore, we determined the relative order of Anx recruitment at the disruption site. The first Anx recruited are AnxA1, followed by AnxA6 and A5, the less sensitive to Ca2+. The last Anx recruited are the most sensitive to Ca2+, AnxA4 and A2. AnxA2 and A4 are instead rapidly recruited to intracellular vesicles present deeper in the cytosol. We also studied the ultrastructure of the disruption site at high resolution. Our results revealed that the “cap” domain correspond to a disorganized membrane structure, associated with the Anx. Thanks to our results and the literature, we have proposed a model for membrane repair involving Anx in human skeletal muscle cells. We also looked at the expression of Anx in dystrophic muscle cell lines from patients with limb girdle muscular dystrophy type 2B (dysferline deficient) and 1C (deficient in cadaveoline-3). We have thus shown that the pathological context disrupts the expression of some Anx, without altering their subcellular location.In conclusion, this work shows that several members of the Anx family are involved in membrane repair and act together to repair plasma membrane damage. The implication of Anx in other pathologies, such as preeclampsia or cancer, reinforces the interest of their study in the process of membrane repair

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Imbert, Nathalie. « Perméabilités et homéostasie calciques des cellules musculaires humaines, normales et dystrophiques, se contractant in vitro ». Poitiers, 1995. http://www.theses.fr/1995POIT2338.

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Résumé :

L'absence de la dystrophine dans les cellules musculaires squelettiques est responsable de la dystrophie musculaire de duchenne (dmd). La localisation de cette proteine au niveau de la face cytoplasmique du sarcolemme semble lui conferer des roles multiples qui se resument a (i) un maintien de la stabilite mecanique de la membrane et (ii) une regulation fonctionnelle des proteines sarcolemmales, notamment celles assurant le transit des ions ca#2#+. La cellule musculaire dmd, se caracterise par une augmentation de la ca#2#+#i#, supposee deletere par activation d'enzymes proteolytiques ca#2#+-dependantes. La culture de muscle humain recree in vitro une partie de la myogenese, constituant ainsi un modele d'etude de la mise en place des mecanismes regulateurs du ca#2#+ interne. Afin d'augmenter le degre de maturation des cellules musculaires humaines, des cocultures nerf-muscle ont ete realisees permettant d'obtenir des cellules humaines se contractant. La ca#2#+#i au repos et apres stimulations pharmacologiques a ete etudiee grace a la cytofluorimetrie laser. Les resultats ont confirme que la contraction pouvait etre un facteur determinant dans l'apparition des anomalies de l'homeostasie calcique: (i) les myotubes dmd cocultives presentent une ca#2#+#i anormalement elevee, a partir du moment ou ils se contractent ; (ii) cette augmentation n'est plus observee lorsqu'ils sont cocultives en presence de ttx (inhibition de la contraction) ; (iii) sur ces memes myotubes (avec ttx), les augmentations transitoires de ca#2#+ lors de stimulations mettant en jeu des mecanismes de regulation calcique membranaire (ach et k#+ 100 mm), ont une amplitude similaire aux cellules normales (a la difference des reponses obtenues sans ttx). Des chocs hypoosmotiques ayant pour but de faire gonfler la cellule et d'exercer une tension sur la membrane, entrainent une augmentation de calcium plus frequemment chez les dmd (81%) que dans les cellules controles (54%). L'etude pharmacologique (gd#3#+) est en faveur d'une intervention de canaux mecanosensibles dans les cellules dmd. Enfin, l'etude des canaux calciques voltage-dependants confirme que des alterations du cytosquelette peuvent modifier les cinetiques des canaux de type l. Ces resultats semblent confirmer l'hypothese selon laquelle la cellule musculaire deficiente en dystrophine doit se contracter pour que se developpent les anomalies calciques. Les canaux mecanosensibles actives par l'etirement pourraient constituer une voie d'entree importante du calcium dans ces cellules, a condition qu'elles se contractent

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XUEREB, JEAN-MARIE. « Regulation de l'expression du facteur tissulaire par les cellules musculaires lisses arterielles humaines en culture ». Toulouse 3, 1998. http://www.theses.fr/1998TOU30052.

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Résumé :

Les cellules musculaires lisses (cmls) assurent la vasomotricite des arteres. Elles sont quiescentes, contractiles, synthetisent peu de matrice extracellulaire et n'expriment pas le facteur tissulaire (ft), le principal initiateur de la coagulation. Dans les plaques d'atherome ou lors des phenomenes de restenose apres angioplastie, les cmls perdent le phenotype contractile au profit d'un phenotype secreteur, proliferent et expriment le ft qui participe aux complications thrombotiques associees a la rupture des plaques d'atherome. Cette modulation phenotypique est observee in vitro. Les cmls ressemblent a celles localisees dans la neointima des lesions vasculaires. L'objectif etait d'etudier l'expression du ft par les cmls en culture et sa modulation par differents agonistes ou agents pharmacologiques. Nous montrons qu'en presence de serum, les cmls expriment le ft et son activite fonctionnelle. Dans les cmls quiescentes l'expression de ft est faible et induite par differents agonistes. L'expression du ft induite par svf et pdgf, depend de l'activation d'erk 1/2, emprunte les voies ras et pkc, celle induite par le lps depend de la pkc. L'augmentation de la concentration d'ampc intracellulaire bloque l'activation d'erk et la synthese de ft induite par le pdgf. L'heparine et certains polysaccharides sulfates (sps) inhibent la migration, la proliferation et la synthese de matrice extracellulaire in vitro et in vivo. Nous montrons que ces molecules inhibent la synthese de ft, la proliferation et les activites erk et pkc des cmls stimulees par le svf. Dans les cmls stimulees par egf ou pdgf, l'inhibition de l'expression du ft par l'heparine n'est pas associee a une inhibition des activites erk, pkc ou de la proliferation. L'heparine n'inhibe pas l'expression de ft et l'activite pkc induites par le lps. Outre leur effet sur la proliferation, les sps pourraient diminuer le risque de thrombose associe aux lesions vasculaires en modulant l'expression du ft par les cmls.

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Riendeau, Valérie. « Rôle du 27-hydroxycholestérol sur le sort cellulaire et les voies de signalisations dans les macrophages et les cellules musculaires lisses humaines ». Master's thesis, Université Laval, 2009. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20911.

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Résumé :

Exprimé dans les macrophages et les cellules vasculaires musculaires lisses, le récepteur nucléaire hépatique X (LXR) a un rôle méconnu sur la survie ou la mort des cellules vasculaires musculaires lisses humaines, et ce, malgré une découverte récente de son implication dans la survie des macrophages de souris. L'objectif de mon étude est de comparer Peffet du ligand synthétique T0901317 des LXRs sur la viabilité cellulaire et la déstabilisation lysosomale des macrophages et des cellules vasculaires musculaires lisses humaines en présence de cholestérol ou de 27-hydroxycholestérol (27-OH) et de vérifier si la voie de survie Akt est impliquée. Les macrophages humains U937 et les cellules musculaires lisses aortiques humaines (HASMC) ont été incubés en présence ou non de cholestérol ou de 27-OH, suivie ou non d'un traitement avec le ligand T0901317. Nous avons également étudié les effets du ligand synthétique GW101516 du récepteur activé par les proliférateurs des péroxisomes-β/? (PPAR β/?) et du ligand synthétique T090 1317 des LXRs sur la viabilité cellulaire des macrophages seulement en présence ou non de différents oxystérols comme le 7β-hydroxycholestérol (7β-OH), le 7α-hydroxycholestérol (7α-OH), le 7-kétocholestérol (7KC) et le 5β-6β-époxycholestérol (β-Epox). La proportion relative des cellules viables ou mortes ainsi que des cellules présentant une déstabilisation de leurs membranes lysosomales ont été mesurées simultanément par cytométrie à flux. Les résultats nous montrent que dans les macrophages 0937, le cholestérol stimule la survie cellulaire tandis que le 27-OH induit soit la survie (faible concentration) soit une mort cellulaire sans présence de déstabilisation lysosomale (concentration élevée), suggérant une mort par apoptose. Comparativement à l'effet du T090 1317 seul, son effet sur la viabilité en présence de cholestérol ou de 27 -OH est négligeable. Dans les HASMC, le cholestérol induit une mort cellulaire par apoptose sans effet additionnel du T090 1317. Par contre, le 27-OH additionné de T0901317 permet de prévenir l'apoptose. L'induction de la voie de survie dans les macrophages par le cholestérol est associée à la phosphorylation d'Akt sur le résidu Thr308. Aussi, la survie cellulaire induite par LXR est altérée en présence de cholestérol ou en présence de concentration élevée de 27-0H dans les macrophages U937, ce qui n'est pas observé dans les HASMCs. Le 7KC démontre un effet plus fort que les 7β-OH, le 7α-OH ou le p-Epox sur l'induction de la mort cellulaire. L'induction de la survie par les ligands de LXR et de PPAR β/? ne semble pas être inhibée lorsque le macrophage est incubé en présence d' oxystérols autres que le 27-OH.

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Bonavaud, Sylvie. « Différenciation des cellules satellites musculaires humaines et microenvironnement cellulaire : implication de l'urokinase et de la fibronectine ». Paris 12, 1995. http://www.theses.fr/1995PA120036.

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Notre travail a ete oriente vers un objectif, comprendre le role de l'urokinase (upa) et de la fibronectine au cours de la differenciation des cellules satellites humaines. Dans une premiere partie, nous avons mis au point un modele simple et reproductible de culture primaire de cellules humaines. Nous avons caracterise le comportement de ces cellules dans nos conditions de culture. Dans une deuxieme partie, nous avons montre que les interactions entre l'upa, son recepteur specifique membranaire et l'inhibiteur de type 1 sont essentielles pour le processus de differenciation des cellules satellites. L'internalisation du complexe recepteur/upa/inhibiteur semble egalement importante pour ce processus. Nous avons discute de la necessite, pour la differenciation des cellules satellites, de la presence, sur les cellules, du recepteur multiligand responsable de l'internalisation du complexe. Dans une troisieme partie, nous avons montre un role possible pour un fragment issu du clivage de la fibronectine par la cathepsine d. Ce fragment possede une activite gelatinase potentielle et favoriserait la differenciation des cellules satellites. Dans nos conditions de travail, l'interaction de la fibronectine avec son recepteur membranaire ne semble pas indispensable au processus de differenciation. Nous avons termine ce travail en discutant du role et des interactions possibles entre ces deux systemes lors de la differenciation des cellules satellites humaines. Nous mettons en avant une action synergique possible de ces deux systemes

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Vandebrouck, Clarisse. « Caractérisation de canaux cationiques perméables aux ions calcium sur les cellules musculaires humaines normales et dystrophiques ». Poitiers, 1999. http://www.theses.fr/1999POIT2361.

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Résumé :

Ce projet vise a determiner le lien entre l'absence de dystrophine et la surcharge calcique observee sur les cellules musculaires humaines dystrophiques (dmd) durant la myogenese in vitro. L'etude porte principalement sur les mecanismes sarcolemmiens qui interviennent dans le maintien de l'homeostasie calcique. Dans ce but, des cellules musculaires normales et dystrophiques sont cocultivees afin d'atteindre un degre de maturation suffisant, permettant a ces cellules de se contracter. Cette contraction produit un stress mecanique sur la membrane plasmique et les proteines qui y sont ancrees. L'absence de la dystrophine sur les cellules dmd pourrait moduler l'activite de certaines de ces proteines et en, particulier, les canaux sensibles au stress. Le but de cette etude est donc d'identifier grace a la technique de patchclamp en configuration cellule-attachee, des canaux mecanosensibles laissant transiter du calcium dans les myotubes humains dmd. Les myotubes humains normaux et dmd cocultives presentent des canaux cationiques qui sont spontanement actifs au potentiel de membrane de repos en absence d'un stress. Cette activite est plus importante sur les cellules dmd ce qui est a rapprocher du manque de stabilisation de la membrane de ces cellules. La seconde observation est que ces cellules possedent des canaux permeables aux ions calcium qui sont actives lors d'un stress (depression ou milieu hypotonique via la pipette). Ces canaux permettent donc une entree significative de calcium lors d'un stress comme cela est le cas lors de la contraction musculaire. Nous pouvons supposer que le taux eleve de calcium de repos des myotubes dmd se contractant peut etre du en partie a une entree de calcium plus importante de calcium par ces canaux sensibles a un stress. Ces resultats nous montrent le role important que detienne la dystrophine et les consequences de son absence dans les cellules dystrophiques.

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Pernelle, Jean-Jacques. « Expression de différentes protéines myofibrillaires au cours de la myogénèse in vitro de cellules musculaires humaines normales et dystrophiques ». Paris 11, 1989. http://www.theses.fr/1989PA112369.

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Résumé :

Ce travail porte sur la caractérisation des anomalies d'expression des protéines musculaires par les cellules satellites en culture provenant de sujets atteints de myopathie de Duchenne et ceci dans le but de mieux comprendre les phénomènes impliqués dans la myogénèse normale et pathologique. Le développement et le perfectionnement d'une nouvelle technique de séparation électrophorétique en double dimension, utilisant un gradient immobilisé de pH en première dimension, nous a permis de caractériser les différentes formes de chaînes légères de myosine et d'en établir une carte très précise. Nous avons pu montrer que les chaînes légères de type 2, lentes et rapides présentent chacune 2 isoformes distinctes, phosphorylables et phosphorylées. La caractérisation des différentes formes exprimées à différents stades du développement embryonnaire et fœtal nous a permis de disposer d'un ensemble de marqueurs permettant d'analyser un système de cultures in vitro. Par la suite, lors de la découverte du gène responsable de la dystrophie de Duchenne, nous avons pu démontrer que la nébuline, candidat alors proposé comme étant le produit de ce gène, ne pouvait pas l'être.

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Tabet, Yacine. « Relation entre les effets de la Bradykinine au niveau des bronchioles humaines et la synthèse endogène des époxy-éicosanoïdes ». Mémoire, Université de Sherbrooke, 2013. http://hdl.handle.net/11143/6363.

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Les études des voies métaboliques de l'acide arachidonique ont permis de démontrer l'implication de plusieurs dérivés de ce lipide (leucotriènes et prostaglandines) dans certaines pathologies telles que l'asthme. Les époxy-éicosanoïdes (EET) ont été décrits comme ayant des effets anti-inflammatoires et broncho-relaxants importants et ils représentent une nouvelle cible thérapeutique potentielle. Plusieurs groupes de recherches ont permis d'élucider les mécanismes d'action par lesquels les EET ont leurs effets bénéfiques. Cependant, les connaissances sur cette voie spécifique ne sont pas complètes puisqu'à ce jour, nous ne savons pas quels stimuli endogènes modulent la synthèse et la dégradation de ces lipides. En raison de leurs effets hyperpolarisants sur les cellules musculaires lisses, principalement par l'activation des courants K[indice supérieur +], les EET ont été proposés à titre de facteur hyperpolarisant dérivé de l'épithélium (EpDHF). Il a également été démontré que la synthèse d'autres EpDHF, tels que le NO et la PGI?, est induite par l'action de la Bradykinine. Notre hypothèse de recherche était donc que les effets de la Bradykinine au niveau des bronchioles humaines sont en partie causés par la synthèse endogène des époxy-éicosanoïdes. Le but du projet était, d'une part de démontrer la relation potentielle entre l'action de la BK et la synthèse des EET et, d'autre part de mettre au point un nouveau modèle d'hyperréactivité bronchique pour mieux caractériser les effets des EET. De façon spécifique, les objectifs étaient de : 1) comparer les effets relaxant de la BK à ceux du 14,15-EET sur des bronchioles humaines en présence ou non d'inhibiteurs spécifiques, 2) quantifier l'effet de la réduction de la biodisponibilité des EET sur les effets électrophysiologiques de la BK au niveau des cellules musculaires lisses et épithéliales, 3) caractériser l'effet d'un prétraitement à l'IL-1? ou à l'IL-13 sur la réactivité bronchique à différents agents pharmacologiques et 4) déterminer l'effet d'un prétraitement à la 15(R)-épi-Lipoxine A? sur l'hyperréactivité bronchique induite au TNF?. Les résultats obtenus nous indiquent que la BK et le 14,15-EET induisent le même cours et le même niveau de relaxation. De plus, l'utilisation d'inhibiteurs qui interagissent avec la biodisponibilité et les effets des EET réduisent significativement les effets relaxants et hyperpolarisants de la BK. Tous ces résultats nous indiquent qu'il existerait une relation entre l'action de la BK et la synthèse d'EET endogènes au niveau de bronchioles humaines. Les données que nous avons obtenues indiquent que l'IL-13, mais pas l'IL-1?, suite à un prétraitement de 48h induit un statut d'hyperréactivité bronchique à différents agents pharmacologiques. Nous avons démontré qu'un prétraitement à la Lipoxine A? permet d’abolir l'hyperréactivité bronchique induite par le TNF?. La modulation de la biodisponibilité des lipides anti-inflammatoires endogènes, tels que les EET ou la Lipoxine A?, s'avère une option potentielle dans le traitement de l'asthme. [symboles non conformes]

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Riendeau, Valérie. « Rôle du 27-hydroxycholestérol sur le sort cellulaire et les voies de singalisations dans les macrophages et les cellules musculaires lisses humaines ». Thesis, Université Laval, 2009. http://www.theses.ulaval.ca/2009/26395/26395.pdf.

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Parent, Victor. « Développement d'un milieu sans sérum et d'un procédé à grande échelle pour la prolifération de cellules humaines précurseurs du muscle ». Doctoral thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27863.

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Résumé :

La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie génétique affectant un garçon sur 3500. Elle entraîne une dégénération progressive et irréversible des muscles. Actuellement, la maladie est incurable et aucune thérapie ne permet de traiter les patients de façon efficace et sécuritaire. La thérapie cellulaire, qui consiste à injecter des cellules musculaires humaines saines, les myoblastes, dans les muscles des personnes atteintes de la DMD, a déjà donné des résultats cliniques prometteurs. Par contre, quelques problèmes entravent le développement de cette thérapie. Entre autre, le milieu de culture utilisé pour l’expansion des myoblastes contient du sérum fœtal bovin (FBS). Le FBS est un produit animal non défini pouvant être contaminé par des bactéries, des virus ou des prions. Les risques possibles pour la santé des patients peuvent entraver l'acceptation de la thérapie. Il est donc préférable de remplacer le FBS par un mélange d'additifs définis, notamment par des cytokines. De plus, les procédés de production actuels sont inadéquats pour répondre à la demande en cellules musculaires. Ce projet vise à élaborer un milieu de culture sans sérum pour la prolifération in vitro des cellules musculaires et à développer un procédé de production à grande échelle de ces cellules. Pour développer un milieu sans sérum, une méthode en boucle a été utilisée. Celle-ci se divise en 3 étapes : a) monter une banque de facteurs potentiels en identifiant les récepteurs cellulaires par RT-PCR et par un criblage de la littérature, b) tester ces facteurs en culture en utilisant, entre autre, une planification statistique des expériences (DOE) permettant de vérifier les effets individuels et synergiques de ces additifs et c) ajouter les additifs générant une réponse bénéfique au milieu de culture. Cette boucle a été itérée jusqu'à ce que le nombre de facteurs testés soit suffisant pour que la réponse cellulaire avec le nouveau milieu soit comparable au milieu avec FBS. Pour atteindre l'objectif de mise à l’échelle, le projet s’est limité à la sélection de microporteurs permettant une adhésion efficace des myoblastes. Suite à l'essai par DOE de 9 milieux de base et de 72 additifs, un milieu sans sérum, le LOBSFM, a été développé. Il s'agit, à notre connaissance, du seul milieu de culture sans sérum existant qui est aussi efficace que le milieu traditionnel pour la prolifération des myoblastes. Un brevet a été déposé pour protéger ce milieu. Il permet la prolifération spécifique des myoblastes (~80% myoblastes dans la culture, vérifié par marquage immunocytochimique) aussi efficacement que le milieu standard contenant 15% de FBS, durant au moins 60 jours de culture. De plus, les myoblastes cultivés dans le LOBSFM conservent leur capacité de fusionner et ainsi former des fibres musculaires. Pour ce qui est du procédé de culture, les microporteurs poreux Cytoline2™ ont permis d'obtenir une concentration cellulaire finale de 1,5E6 cell/mL, comparable à la culture en flacon statique. Les pores protègent les myoblastes contre les contraintes hydrodynamiques et permettent une récupération simple des cellules.
Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a genetic disease affecting one boy out of 3500. It leads to progressive and irreversible muscle degeneration. Currently, there is no cure for this disease and no therapy allows an efficient and safe treatment. Cell therapy consists in injecting healthy human muscle cells, myoblasts, into the muscles of DMD patients. Promising results have been obtained in clinical trials using this approach. However, some problems need to be overcome. Particularly, the original culture medium used to expand myoblasts contains Foetal Bovine Serum (FBS). FBS is an undefined product derived from animal, which can be contaminated with bacteria, viruses or prions. The possibility of harmful consequences for the patients hampers the acceptability of the therapy, so FBS must be replaced by a mixture of defined factors such as specific recombinant cytokines. Moreover, the production processes are currently inappropriate to meet the demand for muscle cells. Therefore, this project aims to develop a serum-free medium for the in vitro proliferation of muscle cells and a large-scale process for the production of those cells. A multi-step method was used to develop the serum-free medium. It is divided into three main steps: a) to build a panel of potential factors from a screen of the literature followed by the detection of more than 100 receptors and autocrine factors using RT-PCR, b) to test those factors in culture using statistical design of experiment (DOE) allowing to verify individual and synergistic effects and c) to add the factors that generate beneficial response to the culture medium. Those steps are followed until a cellular response comparable to the culture in standard medium is obtained. To achieve the scale-up objective, the project was limited to the selection of microcarriers that allowed the proper adhesion of myoblasts. The potential factors identified in the first stage, together with additional ones taken from the literature, formed a panel of 9 basal culture media and 72 additives that have been tested by means of DOE. At the end of this process, a serum-free medium, LOBSFM, was developed. To our best knowledge, it is the only existing efficient serum-free medium for myoblast proliferation and a patent has been obtained to protect its use. It allows a specific expansion of myoblasts (~80% myoblasts, verified by immunostaining) comparable to a standard medium containing 15% FBS over a 60-day culture period. Moreover, myoblasts kept their ability to form muscle fibers. Porous microcarriers Cytoline2 allowed a final cell concentration of 1.5E6 cells/mL, comparable to cell expansion in static culture plate. The pores protected the cells against mechanical stresses while the cell recovery remained easy.

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Bouglé, Adrien. « Caractérisation du comportement des cellules souches musculaires humaines au cours du choc septique et mécanismes de protection grâce aux cellules souches mésenchymateuses Micro-fragmented fat injection reduces sepsis-induced acute inflammatory response in a mouse model ». Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. https://wo.app.u-paris.fr/cgi-bin/WebObjects/TheseWeb.woa/wa/show?t=2195&f=14462.

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Résumé :

Le sepsis s'accompagne de plusieurs mécanismes physiopathologiques à l'origine des défaillances d'organes pouvant entraîner le décès du patient à la phase aiguë, et de séquelles motrices dans le cadre de la neuromyopathie de réanimation (NMR). Cependant, la physiopathologie de l'atteinte musculaire liée au sepsis est complexe et incomplètement comprise. Une caractérisation du tissu musculaire et des cellules responsables de la régénération musculaire, les cellules satellites, est nécessaire afin de mieux comprendre les mécanismes physiopathologiques à l'origine de cette atteinte chez l'Homme. Dans la première partie pré clinique de la thèse, nous montrons que le tissu adipeux humain micro-fragmenté atténue la réponse inflammatoire et améliore le pronostic dans un modèle murin de sepsis par ponction - ligature cæcale. Chez les souris septiques, le tissu adipeux micro-fracturé diminue de façon significative le Murine Sepsis Score par rapport au sérum salé isotonique ou au produit de lipoaspiration. La survie, la température corporelle, les paramètres biologiques, les taux de cytokines plasmatiques et l'infiltration des organes cellulaires sont également significativement améliorés chez les souris septiques ayant reçu le tissu adipeux micro-fracturé par rapport aux souris septiques ayant reçu du sérum salé isotonique. Ce mécanisme est dépendant de Cox-2. Dans la deuxième partie de cette thèse, nous cherchons à décrire par une approche multimodale innovante les modifications musculaires présentes à la phase aiguë de la réanimation, en étudiant à la fois le tissu musculaire dans son ensemble et spécifiquement les cellules satellites. Soixante-sept patients ont été inclus entre juin 2016 et avril 2018, répartis comme suit : sepsis n=18, état de mort encéphalique n=18, choc cardiogénique n=12 et témoins n=9. Nous avons réalisé une étude morphologique en microscopie électronique à transmission et une étude protéomique en chromatographie liquide couplée à de la spectrométrie de masse (LC-MS/MS) sur le tissu musculaire, ainsi qu'une étude fonctionnelle par analyse de la fonction mitochondriale sur les cellules satellites et sur le plasma. L'analyse protéomique a permis de mettre en évidence plusieurs différences significatives entre les différentes conditions. Comparés aux autres conditions inflammatoires, les muscles de patients septiques présentent une diminution de l'expression des protéines du métabolisme oxydatif et une augmentation de l'expression des protéines associées à la réponse immunitaire. Lorsque nous comparons spécifiquement les patients en choc cardiogénique et les patients en choc septique, on observe chez ces derniers un enrichissement de la voie PI3K-AKT associée à la synthèse protéique, et dans les deux groupes un enrichissement en protéines associées à la protéolyse (ubiquitine, protéasome). L'analyse des paramètres mitochondriaux n'a montré aucune différence sur les cellules satellites, mais l'étude du sérum des patients a montré une différence significative entre les groupes pour la quantité d'espèces radicalaires de l'oxygène, d'Acétyl CoA et d'ATP circulant. À la phase aiguë d'un sepsis chez l'Homme, nous montrons donc pour la première fois une atteinte fonctionnelle du muscle avec ce que nous pouvons interpréter comme une dysfonction mitochondriale, et une atteinte structurelle avec l'implication de protéines de la synthèse musculaire et de la protéolyse. En revanche, nous ne mettons pas en évidence d'atteinte spécifique des cellules satellites. Le tissu adipeux microfracturé pourrait représenter une voie thérapeutique innovante chez l'Homme dans la prise en charge du sepsis et de ses conséquences à long terme
Sepsis is accompanied by several mechanisms that cause organ failure that can lead to death in the acute phase, and to long-term consequences associated with Intensive Care Unit - Acquired Weakness (ICU-AW). However, the pathophysiology of sepsis-associated myopathy is complex and incompletely understood. A characterization of the muscle tissue and muscle stem cells, the satellite cells, is necessary in order to better understand the mechanisms at the origin of human sepsis-associated myopathy. In the first preclinical part of the thesis, we show that micro-fragmented human fat tissue attenuates the inflammatory response and improves prognosis in a mouse model of sepsis by cecal ligation and puncture. In septic mice, micro-fractured fat tissue significantly decreases Murine Sepsis Score compared to saline or lipoaspirate. Survival, body temperature, biological parameters, plasma cytokine levels and cellular organ infiltration are also significantly improved in septic mice that received micro-fractured fat tissue compared to septic mice that received saline. This mechanism is dependent on Cox-2. In the second part of this thesis, we seek to describe through an innovative multimodal approach the muscle modifications present in the acute phase of critical illness, by studying both the muscle tissue as a whole and specifically the satellite cells. Sixty-seven patients were included between June 2016 and April 2018, distributed as follows: sepsis n=18, brain death n=18, cardiogenic shock n=12 and controls n=9. We performed a morphological study in transmission electron microscopy and a proteomic analysis in liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS/MS) on muscle tissue, as well as a functional study by mitochondrial function analysis on satellite cells and plasma; The proteomic analysis revealed several significant differences between the different conditions. Compared to other inflammatory conditions, the muscles of septic patients exhibit decreased expression of oxidative metabolism proteins and increased expression of proteins associated with the immune response. When we specifically compare patients in cardiogenic shock and patients in septic shock, we observe in the latter an enrichment of the PI3K-AKT pathway associated with protein synthesis, and in both groups enrichment in proteins associated with proteolysis (ubiquitin, proteasome). Analysis of mitochondrial parameters showed no difference on satellite cells, but the patient serum study showed a significant difference between groups for reactive oxygen species, Acetyl CoA and circulating ATP levels. In the acute phase of sepsis in humans, we therefore show for the first time functional muscle damage with what we can interpret as mitochondrial dysfunction, and structural damage with the involvement of muscle synthesis proteins and proteolysis. However, we do not find any evidence of specific damage to satellite cells. Microfractured fat tissue could represent an innovative therapeutic approach in humans in the management of sepsis and its long-term consequences

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Altério, Jeanine. « Isolement d'un clone d'ADNc du Facteur de Croissance des Fibroblastes (FGF) acide et son expression dans la rétine et le cerveau bovins : comparaison de l'expression des FGF acide et basique dans des cellules endothéliales humaines et dans les cellules satellites musculaires de rat ». Paris 12, 1990. http://www.theses.fr/1990PA120002.

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Résumé :

Nous avons isole un adn complementaire (adnc) bovin qui code pour la forme acide du facteur de croissance des fibroblastes (fgfa). Cet adnc fgfa nous a servi de sonde pour mettre en evidence l'expression du gene dans la retine et le cerveau bovins. Le gene fgfa est exprime sous forme de quatre arn messagers (arnm) de 9. 9, 6. 0, 4. 2 et 2. 5 kilobases (kb). Seuls les arnm de 4. 2 et 9. 9 kb contiennent la sequence nucleotidique codant le fgfa bovin. Ces resultats suggerent que les 2 arnm de 6. 0 et 2. 5 kb appartiendraient peut etre a un autre gene. Nous avons aussi mis en evidence l'expression de 2 arnm de 7. 0 et 3. 7 kb codant le fgf basique (fgfb) dans la retine et le cerveau bovins. Dans les cellules endotheliales humaines de capillaires et de gros vaisseaux, seule l'expression du gene du fgf basique est detectee sous forme de 5 especes d'arnm (6. 6, 3. 7, 2. 2, 2. 0 et 1. 0 kb). Le fgfb exprime dans les cellules participerait ainsi au processus de neovascularisation (angiogenese) par voie autocrine ou/et paracrine puisqu'elles possedent des recepteurs membranaires specifiques aux fgfs. Dans les cellules satellites de muscles de rat, une seule espece d'arnm fgfa (4. 0 kb) et une seule d'arnm fgfb (6. 0 kb) sont exprimees quand les cellules sont en proliferation. Quand les cellules se differencient en myotubes, ces arnm ne sont plus exprimes. Les fgfs joueraient donc un role dans la myogenese en stimulant la proliferation cellulaire et en inhibant la differenciation myogenique. L'action d'un phorbol ester sur le niveau d'expression des arnm fgfa et b depend du type de cellule (endotheliale ou myogenique)

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Hodroj, Wassim. « Étude comparative de l'angiotensine II et de l'angiotensine IV in vitro au niveau des cellules musculaires lisses vasculaires humaines : caractérisation fonctionnelle des effets de l'angiotensine IV sur le transport de glucose insulino-dépendant ». Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10138.

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Hugou, Isabelle Anne. « Etude des enzymes de peroxydations lipidiques au cours du processus athéroscléreux : expression des PGH [prostaglandines] synthétases, de la 15 lipoxygénase et des no synthétases dans les cellules musculaires lisses vasculaires humaines et de lapin ». Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR28300.

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Résumé :

Les lésions athéroscléreuses résultent d'une importante réponse inflammatoire et fibroproliférative dûe à une modification de l'endothélium et des cellules musculaires lisses. Les principales molécules agissant sur la prolifération de ces cellules vers le PDGF, l'IL1. . . Pour les activateurs et la PGI2 et le NO pour les inhibiteurs. La synthèse de PGI2 dans les cellules musculaires lisses artérielles est diminuée au cours du processus athéroscléreux et rendrait compte en partie de la progression fibroproliférative. La diminution de cette synthèse pourrait s'expliquer par l'augmentation de l'activité lipoxygénase dans ces cellules. Les dérivés monohydroxylés (L5 et 12-HETE) sont connus comme étant des inhibiteurs de la synthèse de PGI-2. Nous avons montré que l'augmentation de la synthèse du 15-HETE dans les plaques résultait de l'induction du gène de la 15-lipoxygénase dans les macrophages et les cellules musculaires lisses. Au cours de l'établissement des plaques, on peut observer ube augmentation de la synthèse de la PGI-2, resonsable, semble-t-il, de la réponse inflammatoire. Grâce à l'hybridation, in situ, nous avons pudsémontrer que cette synthèse accrue provenait d'une induction du gène de la PGH Synthétase-2 dans les macrophages. Par cette même technique, nous montrons qu'il n'y a pas d'induction des gènes des NO Synthétases dans la paroi vasculaire. Ces études ont été réalisées sur des sortes de lapins nains et athéroscléreux ainsi que sur des prélèvements humains obtenus en per-opératoires. Nous avons mis en évidence une synthèse de 15-HETE par la PGH Synthétase 2 dans les tissus humains préincubés avec de l'aspirine. Les outils moléculaires que nous avons développés (Hybridation in situ), vont pouvoir permettre des études plus fines concernant la régulation de l'expression de ces enzymes dans l'athérosclérose L'effet de l'aspirine sur la synthèse du 15-HETE mériterait des études plus approfondies quant au rôle de cette molécule dans la pathogénie
Atherosclerotic lesions arise from an important inflammatory and fibroproliferative response due to endothelial and smooth muscle cells modification. The main molecules acting on cells proliferation are PDGF, IL1. . . As inducers and PGI2, NO as inhibitors. PGI2 synthesis in arterial smooth muscle cells is diminished during atherosclerotic process and should account for a part of the fibroproliferative progression. In these cells, lipoxygenase activity enhancement should explain this decrease in prostacyclin synthesis. Monohydroxylated derivatives (15- and 12-HETE) are known as inhibitors of this synthesis. We have showed that 15-HETE synthesis enhancement in plaques result in 15-lipoxygenase gene induction in macrophages and smooth muscle cells. During plaques installation, we observed PGH2 synthesis augmentation, maybe responsible of the inflammatory response. With in situ hybridization, we demonstrated PGH Synthase-2 gene induction in macrophages accountable for this increased synthesis. With the same technic, NO Synthases genes induction is not seen in vascular cells. Studies have been carried out on healthy and atherosclerotic rabbit aortas, and humans arteries obtained during cardiac surgery. Human tissues preincubated with aspirin are able to synthesize 15-HETE by PGH Synthase-2 pathway. Molecular tools developed (in situ hybridization), should allow more precise studies concerning regulation of enzymes expression in atherosclerosis. Aspirin action on 15-HETE synthesis should worth studing more extensive as for this molecule effect in this disease

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Negroni, Elisa. « Potentiel myogénique des cellules humaines : conséquences en thérapie cellulaire ». Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066080.

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Résumé :

Le muscle squelettique humain est une cible pour le développement d’approches de thérapie cellulaire pour le traitement des maladies neuromusculaires. La réparation du muscle squelettique adulte est effectuée par une population de cellules appelées cellules satellites. Leur capacité proliférative réduite chez l’homme et l’épuisement dans les maladies dégénératives, limite la réussite d’une thérapie par transfert de myoblastes. Un objectif de mon étude a consisté à déterminer si l’induction d’un choc thermique sur des myoblastes humains améliore l’efficacité de transplantation in vivo. Cette approche entraîne une amélioration du potentiel myogénique des myoblastes humains et représenterait une stratégie applicable dans les essais cliniques. La seconde partie du projet a consisté à évaluer le potentiel myogénique de cellules souches humaines, comme candidats alternatifs aux myoblastes. Nous montrons que deux populations de cellules du muscle adulte exprimant les antigènes AC133 et CD34 ont une meilleure potentiel myogénique in vivo comparée à celui des myoblastes humains. Suggérant une leur utilisation dans certaines dystrophies musculaires

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Lafuste, Peggy Authier François-Jérôme. « Mécanismes moléculaires impliqués dans la fusion des cellules précurseurs myogéniques humains ». Créteil : Université de Paris-Val-de-Marne, 2004. http://doxa.scd.univ-paris12.fr:80/theses/th0214091.pdf.

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DECARY, STEPHANIE. « Consequences du vieillissement de la cellule satellite humaine sur la regeneration musculaire : applications a la therapie genique et aux dystrophie musculaires ». Paris 7, 1998. http://www.theses.fr/1998PA077033.

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Résumé :

Afin de determiner si la capacite proliferative de cellules satellites humaines est liee a l'age du donneur, j'ai mis en culture des populations de cellules satellites isolees de sujets d'ages differents. La capacite proliferative et la longueur telomerique initiale diminuent significativement au cours des vingt premieres annees de la vie correspondant a la phase active de la croissance musculaire. Une fois la croissance terminee, les cellules satellites peuvent etre sollicitees uniquement suite a une blessure, ainsi le nombre de divisions cellulaires et la longueur telomerique initiale restent constants. Afin de determiner si l'amplification cellulaire modifie l'expression du programme myogenique, j'ai aussi etudie la capacite des cellules satellites a se differencier et fusionner au cours des divisions realisees. Alors que les cellules pre-senescentes s'engagent tardivement dans la differenciation musculaire et que leur fusion est retardee, les cellules devenues senescentes sont incapables de se differencier. Ces resultats indiquent qu'il est important de considerer l'age du donneur comme un facteur limitant dans le but d'obtenir un nombre optimal de cellules satellites a injecter dans le cadre d'une therapie genique a mediation cellulaire. J'ai aussi etudie l'evolution de la longueur telomerique du tissu musculaire humain avec l'age. La longueur telomerique minimale des myonuclei diminue de 10-15 pb par an. L'alteration du renouvellement des myonuclei dans le cas de dystrophies musculaires a aussi ete envisage. Le raccourcissement telomerique mesure dans les biopsies issues de sujets dystrophiques est 14 fois superieur a celui mesure chez les sujets sains. Ce resultat indique que les modifications histologiques observees dans les muscles de sujets dystrophiques peut etre le resultats d'une senescence proliferative des cellules satellites.

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Kandalla, Prashanth Kumar. « Progéniteurs musculaires humains : participation des cellules quiescentes à la régénération musculaire : effet in vitro d'un facteur de croissance, le MGF de la famille des IGF-1 ». Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066453.

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Résumé :

Les cellules satellites (progéniteurs musculaires) sont responsables de la capacité de régénération des fibres du muscle squelettique. Localisées entre la lame basale et la membrane plasmique des fibres musculaires, elles sont à l’état normal dans un état de quiescence dans le muscle adulte, et sont activées après exercice ou une lésion d’origine traumatique ou pathologique (dystrophie musculaire). Une fois le processus de régénération terminé, une minorité des cellules satellites non-engagés dans le processus de différenciation retournent à un état quiescent. Il a été montré chez la souris que la transplantation intra-musculaire de fibres isolées avec leurs cellules satellites résidentes était beaucoup plus efficace que tout autre type de greffe cellulaire, qu’il s’agisse de myoblastes (cellules satellite amplifiées) ou de cellules souches myogéniques, ce qui pourrait suggérer que c’est l’état de « quiescence » qui confère cette efficacité élevée. Les expériences décrites dans le premier chapitre de cette thèse ont été menées pour tester cette hypothèse dans un contexte humain. Les cellules satellites étant activées lors de leur isolation, elles se prêtent mal à cette étude. Par conséquent, nous avons comparé des modèles de culture cellulaire pour générer des cellules quiescentes, proches des cellules satellites : cultures en suspension et modèle de cellules réserves (RC). La viabilité des cellules étant bien meilleure dans le modèle RC, nous l’avons utilisée pour évaluer (1) in vitro : l’expression de marqueurs myogéniques, la capacité proliférative, la fusion, ainsi que le profil du cycle cellulaire de ces cellules réserves et (2) in vivo: leur efficacité à participer à la régénération musculaire après transplantation dans des souris immunodéficientes. Les résultats obtenus sur les RC ont ensuite été comparés avec ceux obtenus avec des myoblastes contrôles, et nous n’avons pas observé de différence significative entre les deux types cellulaires comparés dans cette étude, ce qui suggère que la quiescence n’a pas d’effet sur la capacité régénérative des myoblastes humains. Le groupe de G. Goldspink a montré que les fibres musculaires soumises à une déformation mécanique produisent un facteur de croissance appelé MGF (Mecano Growth Factor). Des études ont montré que le MGF protège contre les dommages des radicaux libres d'oxygène et joue un rôle au cours de la réparation et de l'adaptation musculaire. De plus on observe une diminution du MGF dans des muscles de souris âgées associée à une perte de masse et de force musculaire. Les expériences décrites dans la seconde partie de cette thèse ont été réalisées pour étudier les effets du peptide E de MGF, issu d’épissage alternatif, sur la prolifération et la différenciation des myoblastes humains isolés de biopsies de sujets nouveaux-nés, adultes jeunes et âgés. Nous avons comparé dans ces trois groupes, la capacité proliférative, la différenciation, ainsi que le pourcentage de cellules réserves, en présence ou en absence du peptide MGF. Les données obtenues indiquent que le MGF pourrait avoir un rôle important dans la réparation des muscles et l'adaptation au cours du vieillissement

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GALMICHE, MARIE C. « Caracterisation des cellules stromales generees en culture de moelle osseuse humaine au long cours ». Besançon, 1993. http://www.theses.fr/1993BESA3708.

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Chakroun, Tasnim. « Étude du comportement des cellules humaines en présence de l'interleukine 13 humaine in vitro et in vivo dans le cadre de la thérapie cellulaire pour la dystrophie musculaire de Duchenne ». Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27027/27027.pdf.

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Ferry, Arnaud. « Les immunomodulations liées à l'exercice musculaire : Etude des leucocytes humains et des cellules mononucléaires chez le rat ». Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05SA17.

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Résumé :

Le but de ce travail est d'étudier l'effet de l'exercice musculaire isolé (une seule séance d'exercice) et chronique sur le nombre et certaines activités des cellules immunocompétentes, chez l'homme te le rat. L'exercice musculaire isole (course sur tapis roulant et nage) : 1) chez l'homme, augmente le nombre absolu de presque toutes les populations de leucocytes, 2) chez le rat induit parfois (course) une diminution du nombre absolu (démarginalisation) des cellules mononucléaires spléniques, la pyruvate déshydrogénase des cellules mononuclméaires sanguines, mais augmente celle de la citrate synthase, 4)chez le rat augmente la proliferation des lymphocytes T spléniques dans le cas de la nage. Chez le rat, la naltrexone (antagoniste des opiacés endogènes) bloque complètement l'effet de l'exercice musculaire isolé sur la prolifération lymphocytaire lors de l'exercice musculaire isolé (course sur tapis roulant ou nage). . . .

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Pouillot, Séverine Peschanski Marc Monville Christelle. « Validation de méthodes de transfert de cellules souches embryonnaires humaines pour la thérapie de la cardiomyopathie associée à la dystrophie musculaire de Duchenne ». S. l. : Evry-Val d'Essonne, 2008. http://www.biblio.univ-evry.fr/theses/2008/2008EVRY0022.pdf.

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Bara, Imane. « Le rôle de la cellule musculaire lisse bronchique humaine dans le remodelage des voies aériennes dans l’asthme ». Thesis, Bordeaux 2, 2010. http://www.theses.fr/2010BOR21778/document.

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Résumé :

Le déclin de la fonction respiratoire dans l’asthme est associé à une augmentation de la massedu muscle lisse bronchique. La cellule musculaire lisse (CML) bronchique joue un rôle central dans la physiopathologie de l'asthme. Elle participe à l'inflammation et constitue une composante importante du remodelage des voies aériennes. Récemment, le rôle de la chitinaseYKL-40 comme bio marqueur de ce remodelage dans l'asthme a été évoqué. Dans ce contexte, la question centrale ayant motivé une partie de ce travail de thèse, a été d'étudier les effets d'YKL-40 sur différentes propriétés des CML. Nous nous sommes également intéressés au récepteur activé par les protéases, de type 2 (PAR-2), potentiel récepteur d'YKL-40, mais aussi acteur principal de l’inflammation bronchique.Ce travail a permis d'établir qu'YKL-40 est plus qu'un simple bio marqueur dans l'asthme puisqu’elle altère les propriétés physiologiques de la CML, et semble jouer un rôle dans le remodelage musculaire lisse bronchique. Par ailleurs, ce travail a également permis de mettre en évidence une surexpression du PAR-2 dans les CML d’asthmatiques ainsi qu’une augmentation de son expression et de la prolifération cellulaire, en réponse à une stimulation chronique. Ce travail a enfin permis d’optimiser la technique de l’interférence ARN lentivirale dans les CML bronchiques humaines
The decline in lung function in asthma is associated with an increased bronchial smooth muscle (BSM) mass. BSM cells play a central role in the pathophysiology of asthma. They are involved in inflammation and are an important component of airway remodelling. Recently, the role of the chitinase YKL-40 as biomarker of this remodelling in asthma has been evoked. In this context, the central question that motivated part of this thesis was to study the effects of YKL-40 on various properties of BSM cells. We also studied the protease activated receptor 2 (PAR-2), as a potential receptor of YKL-40, as well as an important actor of airway inflammation.This work has established that YKL-40 is more than just a biomarker for asthma since YKL-40 alters physiological properties of BSM cells and appears to play a role in BSM remodelling. Moreover, this work has also highlighted an overexpression of PAR-2 in asthmatic BSM cells, as well as an increase of both PAR-2 expression and BSM cell proliferation in response to chronic stimulation. This work has finally allowed us to optimize lentiviral RNA interference in human BSM cells

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Mayrand, Dominique. « Expression à long terme de fix humain chez des souris immunosupprimées après injection de cellules musculaires transformées génétiquement ». Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1999. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk2/ftp01/MQ41960.pdf.

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Jacquemin, Virginie. « Mécanismes cellulaires et moléculaires impliqués dans l'hypertrophie des myotubes humains induite par l'IGF-1 ». Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077195.

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Résumé :

L'IGF-1 (Insulin-like Growth factor 1) est un facteur de croissance sécrété par le foie, mais aussi exprimé localement au niveau du muscle où il joue un rôle majeur dans la régulation de la masse. Ainsi, surexprimé au niveau du muscle de souris, l'IGF-1 est capable d'induire une hypertrophie des fibres musculaires et de limiter la perte de masse musculaire liée à l'âge. Dans cette étude, réalisée sur modèle de myoblastes primaires humains, la capacité de l'IGF-1 à induire une hypertrophie des myotubes a pu être retrouvée. En traitant les cultures par l'IGF-1 après 3 jours de différenciation, nous avons développé un modèle d'hypertrophie des myotubes humains indépendant de toute induction de prolifération, et caractérisé par une augmentation de l'index de fusion, résultant du recrutement accru des cellules « de réserve » pour la différenciation et la fusion. Dans ce modèle, nous montrons que l'IGF-1 active les voies Akt et p42MAPK au niveau des myotubes mais pas des cellules réserve, suggérant l'existence d'un second signal émis par les myotubes et aboutissant au recrutement des cellules réserve pour la fusion. Des expériences de milieu conditionné ont permis de montrer que ce second signal était un facteur soluble, sécrété par les myotubes en réponse au traitement par l'IGF-1, et responsable du recrutement des cellules réserve. Grâce à l'utilisation d'anticorps neutralisant, confirmé par un traitement exogène, j'ai montré que l'interleukine 13, dont l'expression est stimulée dans les myotubes par le facteur de transcription NFATc2 en réponse à l'IGF-1, était responsable du recrutement des cellules réserve pour la fusion au cours de l'hypertrophie induite par l'IGF-1 chez l'homme
IGF-1 (Insulin-like Growth factor 1) is a growth factor secreted by the liver in response to GH, but also expressed locally in muscle where it plays a key role in the control of muscle mass. Overexpressed in the muscle of mice, IGF-1 induces muscle hypertrophy and prevents the loss of muscle mass that occurs with aging. In the present study, the ability of IGF-1 to induce myotube hypertrophy has been confirmed in a model of primary human myoblasts. By treating cultures with IGF-1 after 3 days of differentiation, we developed a model of human myotube hypertrophy independent of cell proliferation and charaterized by an increase in fusion index, resulting from the increased recruitment of reserve cells for differentiation and fusion. Using this model, we show that IGF-1 exclusively signals on myotubes but not on reserve cells, suggesting the existence of a secondary mechanism triggered by the myotubes inducing reserve cell recruitment for fusion. Using conditioned medium we observed that a soluble factor secreted by myotubes is responsible for this increase in reserve cell recruitment for fusion in response to IGF-1. This factor was identified as Interleukin-13 using a neutralizing antibody and exogenous treatment. We demonstrate that the expression of IL-13 is induced via the transcription factor NFATcl in response to IGF-1, and is responsible for the increased recruitment of reserve cells for fusion during human myotube hypertrophy induced by IGF-1

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Antoine, Marie-Hélène. « Mécanisme d'action des activateurs des canaux potassiques : études sur la fibre musculaire lisse vasculaire et sur la cellule B des îlots pancréatiques ». Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1993. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/212750.

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Bertin, Benjamin. « Analyses moléculaires et fonctionnelles de la diversification musculaire par de nouvelles approches génomiques cellules-spécifiques chez la drosophile ». Thesis, Université Clermont Auvergne‎ (2017-2020), 2017. http://www.theses.fr/2017CLFAS002/document.

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Résumé :

Les muscles squelettiques présentent des propriétés individuelles de taille, forme, orientation, site d’attachement, nombre de noyaux, déterminées par l’expression d’une combinaison de facteurs d’identité. Les processus par lesquels ces gènes déterminent les caractéristiques finales du muscle ne sont pas pleinement compris. Découvrir comment ces régulateurs de l’identité sont connectés entre eux, à travers un réseau de gènes spécifiant le destin cellulaire de chaque type de muscle, reste un enjeu majeur. Pour identifier de nouveaux acteurs qui déterminent les caractéristiques individuelles du muscle au cours de l’embryogenèse chez la drosophile, nous avons optimisé l’approche cellule-spécifique TRAP (Translating Ribosome Affinity Purification) permettant l’isolation des ARNs messagers en cours de traduction. Cette méthode a été utilisée sur deux populations restreintes de muscles (Lms- et Slou-positives) et sur la population musculaire globale (Dufpositive) à trois fenêtres de temps ciblant des processus clés de la myogenèse tels que la spécification de cellules fondatrices, la fusion des myoblastes, l’attachement aux cellules de tendon et l’innervation par les motoneurones. Pour avoir une vue d’ensemble de l’expression des gènes dans ces différentes conditions, des analyses transcriptomiques à l’aide de puces ADNc ont été réalisées. Une étude spatiale nous a permis d’identifier de nouveaux acteurs potentiels du code d’identité nécessaires à la diversification de la population Slou ainsi que l’implication de la protéine de liaison à l’ARN, Boule, dans l’organisation des filaments d’actine au sein des fibres musculaires. Dans un second temps une analyse temporelle des données a révélé un ensemble de gènes codant pour des protéines de liaison à l’actine avec un enrichissemen tspécifique dans la population Lms positive. L’étude plus approfondie des gènes gel et dCryABa permis de déterminer leur rôle au cours de la myogenèse. Ces deux protéines participent de manière importante à la régulation de la croissance des muscles Lms positifs en régulant le nombre d’évènement de fusion, l’élongation et l’attachement des myotubes.A travers ce projet nous avons identifié de nouveaux acteurs potentiels du code d’identité, impliqués dans l’acquisition des propriétés distinctes des sous populations musculaires Slou et Lms au cours de l’embryogenèse en participant soit au contrôle de l’expression des gènes soit à l’acquisition des caractéristiques morphologiques finales. Nous espérons que les données générées permettront dans le futur d’acquérir de nouvelles connaissances sur les fonctions des orthologues de ces gènes au cours de la myogenèse desvertébrés et que cela aura un impact sur la compréhension de certaines myopathies
Skeletal muscles display specific features (size, shape, orientation, attachment site,number of nuclei), which are tightly controlled by the combinatorial expression of identity factors. Currently, process by which identity genes determine muscle characteristics is not fully understood. Uncovering how identity factors are interconnected and how they control network of genes specifying muscle cell fate remains a major challenge. To discover new actors of the identity code allowing the acquisition of individual muscle characteristics during Drosophila embryogenesis we optimised a genome wide cell specific approach called TRAP (Translating Ribosome Affinity Purification), which allows the isolation of mRNA engaged in translation. This method has been used on two restricted populations of muscle cells (Slou and Lms positive) and on the global musculature (Dufpositive) at three time windows covering key muscle developmental steps such as founder cell specification, myoblast fusion, attachment to the epidermis via tendon cells and the innervation by motoneurons.To assess gene expression at a global level in these muscle subsets, we performed transcriptomic analyses at targeted developmental windows by using microarray. First, a comparison of spatial gene expression allowed us to identify new potential actors of the identity code for Slou-positive muscles and the involvement of the RNA binding protein Bol in the structural organisation of muscle fibers. We also performed analyses of temporal transition profiles of genes differentially expressed in Slou- and Lms-positive muscles and identified cluster of genes enriched preferentially in the Lms population and encoding actin interacting proteins. We focused on two genes from this cluster, gel and dCryAB and determined their functions during myogenesis. These two proteins control a coordinated growth of the Lms-positive muscles by fine-tuning of both the number of fusion events and the elongation of myotubes to tendon cells. With this project, we have identified new potential actors of the identity code that govern the acquisition of individual properties of Slou and Lms muscle subsets during Drosophila embryogenesis. We hope that the newly generated data will enable to gain further knowledge on the corresponding orthologues during vertebrate myogenesis and will help to understand why particular muscles are affected in some myopathies

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Gravel, William-Édouard. « Expression de la dystrophine humaine dans le Tibialis anterior de souris Rag/mdx suite à une greffe de cellules myogéniques dérivées d'hiPSCs dystrophiques et corrigées génétiquement ». Master's thesis, Université Laval, 2016. http://hdl.handle.net/20.500.11794/26698.

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Résumé :

Les cellules souches embryonnaires humaines (hESCs) et les cellules souches pluripotentes induites humaines (hiPSCs) ont démontré leur capacité d'auto-renouvellement et peuvent potentiellement se différencier en tous les types de lignées cellulaires. Elles représentent donc une source illimitée de cellules pour le développement de thérapies curatives pour les maladies dégénératives, telles que la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD). Cette maladie héréditaire est le résultat de diverses mutations dans le gène de la dystrophine. Ces mutations engendrent un changement dans le cadre de lecture du gène de la dystrophine, abolissant ainsi son expression. Elle se caractérise cliniquement par une progression rapide de la dégénérescence musculaire qui débute tôt dans la vie. Les hiPSCs dystrophiques ont été corrigées par notre collaborateur, le Dr. Hotta, en insérant une paire de bases dans l’exon 45 avec les Transcription Activator-Like Effector Nucleases (TALENs) pour rétablir le cadre de lecture du gène. Notre laboratoire a mis au point une procédure en deux étapes pour différencier des hiPSCs en cellules myogéniques. Nous avons d'abord utilisé un milieu de culture myogénique préparé spécialement dans le laboratoire (appelé MB1) pour promouvoir la différenciation des hiPSCs en cellules de type mésenchymateuses. Nous les avons ensuite transduites avec un lentivirus exprimant MyoD, un facteur de transcription myogénique sous le contrôle du promoteur synthétique CAG, afin d'induire leur différenciation en myoblastes. Ces myoblastes modifiés ont été greffés dans le muscle Tibialis anterior d’une souris Rag/mdx, un animal immunodéficient et dystrophique, et ont par la suite fusionné avec les fibres musculaires existantes. La présence de la protéine dystrophine humaine a été confirmée par immunohistofluorescence dans les muscles greffés avec les cellules corrigées génétiquement ainsi que dans le contrôle positif réalisé avec des myoblastes provenant d'un donneur sain. La thérapie cellulaire homotypique à partir de cellules corrigées génétiquement présente de grands avantages pour les patients souffrant de DMD, car elle permet l’expression d’un gène capable de produire une dystrophine fonctionnelle dans les fibres musculaires, de diminuer les risques de rejet de la greffe et d’accroitre la capacité de régénération du muscle et la force musculaire.
Human embryonic stem cells (hESCs) and human-induced pluripotent stem cells (hiPSCs) have shown self-renewal capacity and can potentially differentiate into all types of cell lineages. They represent an unlimited source of cells for the therapy of degenerative diseases, such as Duchenne Muscular Dystrophy (DMD), a disease characterized by a rapid degeneration of muscles that starts early in life. Dystrophic hiPSCs have been corrected by our collaborator, Dr. Hotta, by inserting of a single base pair in the exon 45 with Transcription Activator-Like Effector Nucleases (TALENs) to restore the reading frame of the gene. Our laboratory has developed a two-step procedure to differentiate hiPSCs into myogenic cells. We first used a myogenic culture medium especially developped in the laboratory (called MB-1) to promote the differentiation of hiPSCs into mesenchymal-like precursor cells. We next transduced them with a lentivirus expressing the myogenic transcription factor MyoD under the control of the composite CAG promoter, in order to induce their differentiation into myoblasts. Transduced cells have been grafted in the Tibialis anterior muscle of Rag/mdx mice where they fused with existing muscle fibers. The presence of the human dystrophin protein has been confirmed by immunohistofluorescence in muscles grafted with the genetically corrected cells and in a control graft with myoblasts of a healthy donor. Cell therapy shows great promises for DMD patients since it allows the expression of a normal gene capable of producing a functional dystrophin in muscle fibers and increase the regenerative capacity of the muscle and the muscle strength.

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Senouvo, Farid Yannick. « Conséquences fonctionnelles de l'inhibition de l'époxyde hydrolase soluble sur la biodisponibilité des époxy-éicosanoïdes dans les muscles lisses du poumon humain ». Mémoire, Université de Sherbrooke, 2011. http://hdl.handle.net/11143/5541.

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Résumé :

Les poumons soumis à des stimulations immuno-inflammatoires fréquentes peuvent développer une hyperréactivité et se retrouvent souvent en broncho-constriction sévère et éventuellement morbide, ce qui justifie l'étude des mécanismes moléculaires sous-jacents à la mise en place de cette augmentation de réactivité aux stimuli pharmacologiques. L'hyperréactivité induite peut être inhibée par l'action d'eicosanoides comme le 14, 15-EET, un dérivé mono-époxydé produit par les cytochromes P450 époxygénases à partir de l'acide arachidonique, un acide gras de type oméga 6 ([omega]6). D'autres acides gras poly-insaturés (PUFA) de type oméga 3 (?3) peuvent également être époxydés par cette enzyme.Les PUFA sont produits par l'activation de la PLA[indice inférieur 2] par les médiateurs de l'inflammation. La bio-disponibilité des EET endogènes est limitée à cause de leur dégradation rapide en dérivés di-hydroxylés (DHET) par l'époxyde hydrolase soluble (sEH), qui est une enzyme impliquée dans l'étape clé du métabolisme des EET. Le but du projet est d'évaluer les changements physiologiques des muscles lisses bronchiques et artériels suite à l'inhibition de la sEH. Plusieurs études récentes ont démontré une hausse d'expression de la sEH dans des modèles murins et humains d'hyperréactivité pulmonaire induite.Les objectifs de recherche sont de 1) Déterminer, par des études fonctionnelles, si les EET peuvent interagir avec le récepteur au thromboxane A[indice inférieur 2], 2) Tester l'effet des traitements avec des inhibiteurs de sEH sur la réactivité bronchique et enfin 3) Tester l'efficacité de nouveaux inhibiteurs de sEH développés récemment.Les résultats obtenus montrent qu'il y a une différence de sensibilité et de réactivité au 14, 15-EET, des tissus des voies respiratoires en fonction de l'espèce de mammifères.Les données démontrent que, dans les tissus humains et murins, le 14, 15-EET était capable d'interagir avec le récepteur au thromboxane A[indice inférieur 2]. De ce fait, il prévient partiellement la tension induite par l'activation des récepteurs thromboxane-prostanoïdes (TP). Il a également été démontré que l'inhibition chronique de la sEH, dans les bronches humaines, permettait de réduire la réactivité au U-46619, un analogue du thromboxane A[indice inférieur 2] tandis que l'inhibition des cytochromes P450 époxygénases augmentait cette réactivité.Les bronches humaines possèdent des activités contractiles spontanées. Ces spasmes bronchiques étaient totalement inhibés lors de l'ajout exogène de 14, 15-EET.Les résultats obtenus avec l'AR 9273-08, un nouvel inhibiteur de sEH, montrent une absence d'influence sur le tonus de base des muscles lisses artériels ainsi que sur le tonus actif induit par la sérotonine dans les artères pulmonaires.Les traitements des artères pulmonaires avec ce nouvel inhibiteur ont également permis d'amplifier la relaxation induite par le 17, 18-époxy-éicosatétraénoïque (17, 18-EpETE). Enfin, un traitement prolongé des artères pulmonaires avec le nouvel inhibiteur de sEH induit une diminution de la sensibilité des fibres musculaires artérielles au Ca[indice supérieur 2+] libre intracellulaire. L'inhibition de la sEH constitue donc une intéressante voie de traitement contre l'inflammation pulmonaire.

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Pouillot, Séverine. « Validation de méthodes de transfert de cellules souches embryonnaires humaines pour la thérapie de la cardiomyopathie associée à la dystrophie musculaire de Duchenne ». Thesis, Evry-Val d'Essonne, 2008. http://www.theses.fr/2008EVRY0022/document.

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Résumé :

La cardiomyopathie associée à la DMD est une atteinte pour laquelle il n’existe pas actuellement de traitement. Les cellules souches embryonnaires humaines (hES), par leurs propriétés d’autorenouvellement et de différenciation, sont envisagées comme outil thérapeutique. Pour une recherche sur l’implantation de cellules, il n’existait pas de modèle in vitro au long cours. Nous avons ainsi développé un modèle de culture organotypique de tranches de cœur dans lequel nous avons, plusieurs mois après transplantation, retrouvé les cellules hES greffées, différenciées en cardiomyocytes. Par ailleurs, nous avons optimisé la différenciation cardiaque pour améliorer le rendement en cardiomyocytes, en induisant la différenciation cardiaque et en cultivant les cellules hES en bioréacteur. Le modèle d’étude au long terme permettant le suivi des cellules greffées dérivées de cellules hES nous permettra de valider les premières étapes précédant les études in vivo dans des modèles pathologiques
Cardiomyopathy associated with DMD is a frequent occurrence with no treatment. Human embryonic stem cells (hESC), because of their self-renew differentiation properties are the best candidates to cardiac cellular therapy. To investigate cells implantation, there was no long term in vitro model. Thus, we have developed an organotypic model of heart slices in which we have, several months after transplantation, found grafted hES cells with evidence of cardiac differentiation. In addition, we have optimised cardiac differentiation to improve cardiac yield, inducing cardiac differentiation and cultivating hES cells in bioreactors. During long term culture model allows the study of grafted hES cells, combines to hESC-derived cells in reasonable number and purity, will constitute validation of the first steps before in vivo studies in pathological models

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Badja, Cherif. « Optimisation de la différenciation neuronale et musculaire de cellules pluripotentes induites humaines pour la modélisation des maladies rares : exemple du syndrome de DiGeorge ». Thesis, Aix-Marseille, 2015. http://www.theses.fr/2015AIXM5027/document.

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Résumé :

Le syndrome de DiGeorge ou microdélétion 22q11.2, est la délétion chromosomique la plus fréquente chez les êtres humains. Cette délétion est liée à la recombinaison homologue non-allélique au cours de la méiose induisant la perte d’en moyenne 40 gènes. Les études de corrélation génotype/phénotype chez les patients ont révélé des différences phénotypiques entre individus et cela indépendamment de la taille des microdélétions. L’hypothèse de l’implication des mécanismes épigénétiques dans la variabilité phénotypique observée a été soulevée mais reste encore inexplorée. C’est dans ce contexte que nous nous intéressons à l’étude des mécanismes épigénétiques au cours du développement, dans cette pathologie à travers l’utilisation d’un modèle de cellules souches pluripotentes induites humaines (hiPSs). En particulier, nous avons ciblé nos travaux sur le rôle de la chaperonne d’histone HIRA dont le gène est localisé dans la région délétée. HIRA est impliquée dans la déposition du variant d’histone H3.3, une histone majeure dans le cerveau. Afin de comprendre l’implication de HIRA dans les manifestations neurologique du syndrome de DiGeorge et en particulier dans la schizophrénie, nous avons développé et optimisé un nouveau protocole pour la différenciation de cellules hiPSCs en progéniteurs neuronaux, neurones corticaux et neurones dopaminergiques. L’ensemble de ces travaux ouvre donc de nouvelles perspectives pour la modélisation d’un grand nombre de pathologies, et dans le contexte du laboratoire, pour l’exploration des mécanismes épigénétiques associés à la variabilité phénotypique dans différentes maladies génétiques
The DiGeorge syndrome also known as 22q11.2 microdeletion syndrome, is the most common deletion in humans. This deletion is linked to a non-allelic homologous recombination that occurs during meiosis and involves sequences called LCRs for "Low Copy Repeats". Depending on the LCRs involved, different deletions are observed, inducing the loss of approximately 40 genes. The absence of genotype/phenotype correlation in patients and the phenotypical differences regardless of the size of the microdeletion suggests the involvement of additional parameter. The hypothesis of epigenetic changes associated with the onset or variability of symptoms has been suggested but never investigated. In order to tackle this question, we decided to focus our attention of the role of the HIRA histone chaperone encoded by a gene located in the 22q11.2-deleted region. HIRA is involved in the deposition of the H3.3 histone variant, one of the main histone in the brain. In order to determine whether HIRA is implicated in the neurological manifestations in DiGeorge patients and particularly in schizophrenia, we developed and optimized a new protocol for the direct differentiation of human induced pluripotent stem cell (hiPSCs) into neural progenitors, cortical and dopaminergic neurons. In parallel, we developed a new protocol for hiPSCs differentiation toward the skeletal muscle lineage and the production of multinucleated muscle fibers. Altogether, these results open new perspectives for the modeling of a large number of pathologies, and in the context of our laboratory, the exploration of epigenetic mechanisms associated with phenotypic variability in different genetic diseases

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Boyer, Jean-Christophe. « Réponse contractile des cellules musculaires lisses isolées du colon humain normal et inflammatoire : [Thèse soutenue sur un ensemble de travaux] ». Montpellier 1, 1998. http://www.theses.fr/1998MON13501.

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Desdouits, Marion. « Myopathies virales : étude des interactions entre les cellules musculaires et les virus HTLV-1 et Influenza A ». Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077181.

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Résumé :

Ce travail de thèse porte sur l'étude des myopathies associées à l'infection par les virus HTLV-1 et Influenza A chez l'Homme. Les myopathies inflammatoires associées à HTLV-1 (HAIM) présentent des points communs avec les myopathies inflammatoires idiopathiques (IIM) et avec la paraparésie spastique tropicale ou myélopathie associée à HTLV-1 (TSP/HAM). Une étude basée sur l'analyse de prélèvements musculaires et sanguins de 13 patients atteints d'HAIM nous a permis de montrer que ces patients présentent une charge provirale faible, similaire à celle de personnes infectées asymptomatiques, alors qu'une charge provirale élevée est un facteur de risque connu de la TSP/HAM. D'autres analyses ont permis de mettre en évidence le possible rôle de ITFNy dans la pathogénèse des HAIM, ainsi que la présence d'autoanticorps chez ces patients comme chez des témoins infectés par HTLV-1. Ces résultats apportent un nouvel éclairage sur la pathogénèse des HAIM en suggérant qu'elle diffère de celle de la TSP/HAM, et. Est très semblable à celle des IIM. D'autre part, l'utilisation d'un modèle in vitro des interactions entre lymphocytes infectés par HTLV-1 et cellules musculaires primaires humaines nous a permis de montrer que l'expression de la protéine Tax par les lymphocytes infectés inhibe la différenciation des cellules musculaires, ce qui pourrait conduire à aggraver les symptômes musculaires lors d'une HAIM. Enfin, nous mettons en évidence l'infection productive de cellules musculaires humaines en culture primaire par des virus Influenza A (H1N1), un mécanisme qui pourrait expliquer la survenue de rhabdomyolyses et myopathies aiguës lors d'une infection par Influenza A
This thesis aimed at deciphering the pathogenesis of myopathies associated with human viral infections and study the interactions between muscle cells and these viruses, namely HTLV-1 and Influenza A. HTLV-1 associated inflammatory myopathies (HAIM) present similarities with idiopathic inflammatory myopathies (IIM) and with tropical spastic paraparesis or HTLV-1 associated myelopathy (TSP/HAM). Using a series of blood and muscle samples from 13 patients with HAIM, we showed that the pro viral load of these patients is low, similar to that of asymptomatic HTLV-1 carriers, whereas an elevated proviral load is a known risk factor for TSP/HAM. Other experiments allowed us to highlight the possible role of IFNγ in the disease, as well as the presence of autoantibodies in HTLV-1 infected individuals, with or without HAIM. Thèse results shed a new light on the pathogenesis of HAIM, suggesting that it may differ from that of TSP/HAM and be more similar to that of IIM. Besides, we modelized in vitro the effect of HTLV-1 on muscle reneration using a coculture of infected lymphocytes and primary human muscle cells. The expression of Tax by infected lymphocytes inhibited the differentiation of muscle cells, a mechanism that could worsen the muscle symptoms during HAIM. Eventually, using field isolates of Influenza A (H1N1) and human muscle cells in primary culture, we showed that differenciated muscle cells can be productively infected by Influenza A, which leads to their lysis. This could explain the development of acute myopathies with rhabdomyolysis after Influenza infection

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Dominique, Jean-Christophe. « Amélioration du taux de greffe de cellules myogéniques pour la dystrophie musculaire de Duchenne : surexpression du récepteur à l'IGF-1 sur des cellules humaines et utilisation du facteur de croissance MGF ». Thesis, Université Laval, 2009. http://www.theses.ulaval.ca/2009/25962/25962.pdf.

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Résumé :

La transplantation de myoblastes est une thérapie envisagée pour le traitement de la Dystrophie musculaire de Duchenne (DMD). La mort précoce des cellules injectées et leurs faibles migrations limitent son succès. Le MGF-Ct24E, un peptide synthétique qui représente le peptide E de l’isoforme Ec de l’IGF-1, a été utilisé. Il a augmenté la prolifération cellulaire en médiant son effet par un récepteur différent de celui à l’IGF-1. Des injections systémique et intramusculaire ont amélioré le taux de greffe, ce qu’un pré-traitement et une co-injection du peptide n’a pas permis. La surexpression du récepteur à l’IGF-1 avec un lentivirus a augmenté la prolifération des cellules et n’a eu aucun effet sur leur différentiation. La sélection de cellules surexprimant fortement le récepteur à l’IGF-1 et phosphorylant fortement Akt a amélioré le succès de transplantation. Ces résultats offrent une perspective encourageante pour l’amélioration de la transplantation cellulaire pour des patients atteints de DMD.
Myogenic cells transplantation is one of the promising therapies to treat dystrophic patients. Early cells death and poor migration are important problems who limit this therapy’s success. MGF-Ct24E, a synthetic copy of the peptide E from the IGF-1 Ec isoform, was used. The peptide increases the proliferation of cells and did no effect on the differentiation. Injected systematically and intramuscularly, MGF-Ct24E increased the graft success. When the cells were pretreated with the peptide and co-injected with it, no increase in the graft success was seen. The overexpression of IGF-1 receptor on human cells with a lentivirus increased the proliferation rate and did no effect on their differentiation. When the cells were selected for a high expression of the IGF-1 receptor and for a high phosphorylation of Akt, the graft success was increased. Together, those results are offering an interesting avenue for the amelioration of cells transplantation in DMD.

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Massoudi, Ari. « Les cellules souches mésenchymateusesdu tissu adipeux humain :Etude de leur potentiel myogénique ». Phd thesis, Université de Nice Sophia-Antipolis, 2007. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00156629.

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Résumé :

Notre laboratoire a isolé à partir de tissu adipeux provenant de nouveau-né, une population de cellules souches mésenchymateuses, dénommée cellules hMADS (human Multipotent Adipose-tissue Derived Stem cells). Les cellules hMADS présentent à l'échelle clonale les propriétés fondamentales associées aux cellules souches telles que la multipotentialité et l'auto-renouvellement.
Après extravasion, in vitro ou consécutive à leur transplantation dans un organe secondaire, les cellules souches mésenchymateuses pourraient se différencier en des types cellulaires inhabituels. Nos résultats antérieurs montraient en effet que les cellules hMADS pouvaient, après transplantation dans le muscle Tibialis anterior de la souris mdx, contribuer à la formation de myofibres contenant des noyaux humains et exprimant la dystrophine humaine.
L'objectif de ce travail a été d'élucider le mécanisme par lequel les cellules hMADS contribuent à la formation de myofibre squelettique. Dans ce but, nous avons essayé « d'engager » le programme myogénique en testant sur ces cellules de nombreuses conditions de culture. Seules les expériences de co-cultures avec des myoblastes ont permis de mettre en évidence la contribution des cellules hMADS à la formation de myotubes hybrides. Ces myotubes présentent un phénotype « normale » et expriment de nombreux gènes musculaires dont la dystrophine, codés par les noyaux issus de la fusion de cellules hMADS avec les myoblastes murins ou humains.
Enfin, nous avons démontré que la conversion myogénique des cellules hMADS dans ces conditions n'était pas due à un processus de « détermination/différenciation », mais à une programmation subie des noyaux hMADS. Cette programmation se produirait après la fusion et nécessiterait l'action des facteurs de transcription myogénique (Myogenic Regulatory Factors) codés par les noyaux issus des myoblastes.

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Doucet, Gilles. « Les vecteurs viraux pour le développement de thérapies géniques ex vivo dans les cellules du muscle squelettique humain ». Master's thesis, Université Laval, 2007. http://hdl.handle.net/20.500.11794/19481.

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Dhaouadi, Nedra. « Le facteur de croissance transformant beta (TGF-β) dans les cellules musculaires lisses vasculaires (CMLV) de l'athérome humain : contrôle transcriptionnel et impact fonctionnel ». Thesis, Lyon 1, 2014. http://www.theses.fr/2014LYO10325.

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Résumé :

Il est admis que le Transforming Growth Factor-bêta (TGF-ß) est athéroprotecteur. Son apport bénéfique dans l'athérosclérose semble être contrarié par l'Interleukine-1-bêta (IL-1ß) qui est l'archétype des cytokines pro-inflammatoires. Notre but est, d'une part, de comprendre la régulation transcriptionnelle du TGF-ß dans les cellules musculaires lisses vasculaires (CMLv) humaines, dans l'athérome carotidien humain à partir des données du transcriptome obtenues sur 32 patients à la fois dans les plaques athéromateuses (ATH) et dans le tissu avoisinant macroscopiquement sain (TMS) et, d'autre part, d'étudier l'antagonisme des effets du TGF-ß et de l'IL-1ß sur des CMLv en culture provenant du TMS. Nous avons abordé nos problématiques par deux approches : (1) une analyse bioinformatique de données transcriptomiques issues de biopuces. (2) une étude in vitro sur des CMLv de la carotide humaine. in vitro. Grace à l'analyse in silico nous avons montré que l'implication de KLF6 dans la transcription du TGFB1 était assez spécifique des cellules musculaires lises vasculaires (CMLv). Nos résultats permettent également de proposer de nouveaux FT potentiels, spécifiques des CMLv (SLC2A4RG, GABP et SALL2), qui pourraient favoriser le rôle athéroprotecteur de TGFB1 dans les CMLv de la carotide. Enfin, il semble qu'il existe un équilibre entre les FT activateurs ou inhibiteurs de l'expression de TGFB1 qui permet d'en moduler finement la transcription. Notre approche in vitro, à montre que l'IL-1ß induisait un phénotype inflammatoire associé à une activité élastolytique consécutive, pour l'essentiel, à l'augmentation de l'expression de la cathépsine S (CTSS). La neutralisation du TGF-ß endogène dé-réprime l'expression de la CTSS et exerce un effet additif à celui de l'IL-1ß sur l'expression de l'enzyme. En conclusion, l'expression du TGFB1 dans les CMLv étant soumise à un contrôle transcriptionnel spécifique du type cellulaire, il est envisageable de développer des approches pharmacologiques qui permettent de maintenir l'expression du TGFB1 dans la paroi artérielle au niveau requis pour qu'il y exerce ses effets athéroprotecteurs
It is accepted that the TGF-β is atheroprotective. Its beneficial contribution atherosclerosis seems to be opposed by IL -1β that is the archetype of the pro-inflammatory cytokines. Our goal is, first, to understand the transcriptional regulation of TGF-β in human vSMCs in carotid atherosclerosis from the transcriptomic data obtained from 32 patients in both atherosclerotic plaques (ATM) and in the adjacent macroscopically intact tissue (MIT) and, secondly, to study the antagonism of the effects of TGF-β and IL-1β on vSMCs cultured from MIT samples. We followed two approaches: (1) a bioinformatic analysis of transcriptomic data from the microarrays; (2) an in vitro study of the human vSMCs. In silico, we have shown that the involvement of KLF6 in the transcription of TGFB1 was specific to the vSMCs. Our results also identify potential new transcription factors (SLC2A4RG, GABP and SALL2) that are vSMC-specific and could promote the atheroprotective role of TGFB1 in carotid vSMCs. The balance between the FT activating or inhibiting the expression of TGFB1 allows the fine tuning of its transcription. Our in vitro approach showed that IL-1β induces in the vSMCs an inflammatory phenotype associated with an elastolytic activity resulting mainly from the increase in the expression of cathepsin S (CTSS). Neutralization of endogenous TGF-β in the vSMCs de-represses the expression of the CTSS and exerts an additive effect to that of IL-1β on the expression of the enzyme. In conclusion, the expression of TGFB1 in the vSMCs is submitted to a cell-specific transcriptional control. It is possible to develop pharmacological approaches that maintain the expression the expression of TGFB1 in the arterial wall at the level required allowing TGF-β1 to exert its atheroprotective effects

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Saury, Charlotte. « Cellules souches dérivées du muscle humain « MuStem » : modalités de préparation in vitro et caractéristiques biologiques pour une application clinique ». Thesis, Nantes, Ecole nationale vétérinaire, 2017. http://www.theses.fr/2017ONIR105F.

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Résumé :

La découverte de cellules souches adultes (CSAs) à potentiel myogénique est à l’origine de nouveaux espoirs pour le traitement des dystrophies musculaires (DMs). L’UMR a identifié une population de CSAs résidentes du muscle, nommées MuStem, et fait la preuve de concept/efficacité de son administration systémique dans le modèle animal cliniquement pertinent de la dystrophie musculaire de Duchenne qui appartient au groupe des maladies orphelines. L’identification de cette population chez l’Homme avec des propriétés phénotypiques et comportementales similaires a conforté son positionnement comme potentiel candidat au traitement des DMs. Cette thèse s’est inscrite dans une démarche préclinique de définition de modalités de préparation in vitro compatibles avec un usage clinique. Des études comparées in vitro ont permis de définir un protocole de production respectant les bonnes pratiques de fabrication par remplacement des produits de grade recherche. L’étude de la signature phénotypique et de l’engagement myogénique in vitro a positionné le sérum humain et le lysat plaquettaire comme alternatives au sérum de veau fœtal pour la culture des cellules hMuStem. En considérant l’équilibre entre la quantité de cellules nécessaire pour les protocoles in vivo et les propriétés biologiques d’efficacité/sécurité, la démarche expérimentale mise en place pour évaluer l’impact du temps d’expansion in vitro a abouti à une amplification maximale de 22-24 doublements au regard de l’hétérogénéité phénotypique et de l’expression de marqueurs de sénescence. Ces résultats ont contribué à améliorer la préparation de l’agent hMuStem en vue d’un essai clinique pour les patients atteints de DMs
The discovery of adult stem cells (ASCs) with myogenic potential had caused new hopes for the treatment of muscular dystrophies (MDs). UMR PAnTher identified a population of muscle-derived stem cells, named MuStem cells, and provided the proof of concept/efficacy of its systemic delivery in the clinically relevant animal model for the orphan disease Duchenne Muscular Dystrophy. The identification of this population in Human with similar phenotypic and behavioral properties reinforced the positioning of MuStem cell population as potential candidate for the treatment of MDs. This thesis is a part of the preclinical approach toward the definition of clinical-compliant in vitro preparation modalities. First, comparative in vitro studies allowed defining a production process with respect to the good manufacturing practices by replacement of research grade products. A more extensive study of phenotypic signature and in vitro myogenic commitment enabled the positioning of human serum and platelet lysate as alternatives to fetal bovine serum for the stage of in vitro expansion of the hMuStem cell population. Then, according to the balance between the required cell number for the in vivo protocols and the biological properties in terms of efficacy/safety, the experimental approach designed to evaluate impact of ex vivo expansion time revealed an amplification duration that should not exceed 22-24 population doublings regarding phenotypic heterogeneity and expression of senescence markers. Overall, these results contributed to the improvement of hMuStem cell population preparation in the prospect of the implementation of a clinical trial devoted to patients affected by MDs

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Faucher, Karine. « Clonage de l'ADN complémentaire de la glutathion peroxydase cytosolique humaine, effets de la surexpression de l'enzyme : -in vitro : cellules endotheliales et musculaires lisses - in vivo : souris transgeniques APOE-/- ». Limoges, 2001. http://www.theses.fr/2001LIMO105E.

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Costa, Pierre. « Effets d'un alpha-bloquant, le moxisylyte, sur les cellules musculaires lisses du corps caverneux humain : action sur les récepteurs membranaires post-synaptiques : études pharmacocinétiques et pharmacodynamiques ». Montpellier 1, 1993. http://www.theses.fr/1993MON1T006.

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Berger, Patrick. « Tryptase mastocytaire et hyperréactivité induite par la sensibilisation passive de la bronche humaine ». Bordeaux 2, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR28716.

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Vahidi, Ferdousi Leyla. « Etude de la réparation des cassures double-brin de l'ADN dans les cellules souches du muscle squelettique et leurs progéniteurs ». Thesis, Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066335.

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Résumé :

Les cassures double brin (CDB) de l’ADN sont des lésions dangereuses qui peuventêtre produites par des agents physiologiques et environnementaux. La réparation inefficace desCDB dans les cellules souches adultes (CSA), qui sont au sommet de la hiérarchie cellulaire,peut affecter leur capacité d’auto-renouvellement et également le processus de régénération.Le maintien de la stabilité génomique est fondamental et l’altération de ce processus accélèrele vieillissement et peut engendrer des cancers (cellules souches cancéreuses).Les CSA du muscle squelettique (cellules satellites, CS) sont responsables del’homéostasie et de la régénération musculaire. Après activation, les CS quiescentesprolifèrent, régénèrent les myofibres et reconstituent le pool, en s’auto-renouvelant.Ce projet de thèse a eu pour but d’étudier la réparation des CDB dans les CS et leursdescendants, au cours de la différenciation. Nous avons montré que les CS réparent les CDBplus efficacement et plus fidèlement que les cellules différenciées, avec l’implication du NHEJet de DNA-PK. Cette efficacité dépend plus de l’état de différenciation que de la proliférationet la niche a un impact mineur. De plus, des expériences avec des mutants de réparation,apoptose et différenciation suggèrent un mécanisme spécifique de réparation des CDB dans lesCS, qui pourrait être lié à l’architecture distincte de la chromatine de ces cellules. Ces étudesdevraient aider à comprendre comment le maintien de l’intégrité de l’ADN préserve le pooldes CS, influence la régénération et le vieillissement et protège de la carcinogenèse
DNA double strand breaks (DSBs) are dangerous DNA lesions that are generated byphysiological and environmental DNA agents. Mismanagement of DSBs in adult stem cellsthat are at the top of the hierarchy generating the differentiated tissue, can affect their selfrenewalcapacity and the fate of their progeny. Maintenance of genome stability throughrobust DNA repair is fundamental for tissue regeneration, and impairment of this processaccelerates aging and may lead to cancers (cancer stem cells).Adult muscle stem cells (satellite cells, SCs) sustain skeletal muscle homeostasis andregeneration. Upon activation, quiescent SCs proliferate thereby regenerating muscle fibersand reconstituting the satellite cell pool by self-renewing.This thesis project aims to study DSB repair in SCs and their progeny, duringdifferentiation. We showed that muscle SCs repair DSBs more efficiently and, surprisingly,more accurately than differentiated cells by implicating NHEJ and DNA-PK. The repairefficiency is more a function of the differentiation status than of the replication status ofmyogenic cells, and the niche has a minor effect on the repair efficiency of SCs. Moreover,experiments with DSB repair, apoptosis and differentiation mutants suggest that SCs repairDSBs through a specific mechanism, that may be linked to the distinct chromatin architectureof these cells. These studies should help understanding how the maintenance of genomestability preserves SCs pool, influence regeneration and aging and protect fromcarcinogenesis

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Collard, Laura. « Rôle du facteur de transcription Srf au cours de l'atrophie du muscle squelettique et dans les cellules satellites ». Phd thesis, Université René Descartes - Paris V, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00937290.

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Résumé :

Le muscle squelettique adulte est un tissu possédant la capacité fondamentale d'adapter sa taille à la demande fonctionnelle : il peut s'atrophier ou s'hypertrophier en réponse à une variation de la charge mécanique qui lui est appliquée. A l'heure actuelle, les facteurs impliqués dans la plasticité musculaire demeurent méconnus. D'une part, grâce à différents modèles d'atrophie musculaire, nous démontrons que le facteur de transcription Srf joue le rôle de médiateur de la mécano-transduction par la voie actine/Mrtfs/Srf. L'arrêt de l'activité mécanique provoque une accumulation nucléaire d'actine monomérique, une délocalisation de Mrtf-A, coactivateur de Srf, et une diminution de l'activité de Srf, se traduisant notamment par une baisse de la transcription Srf-dépendante. Les gènes cibles de Srf comptant un grand nombre de protéines sarcomériques, telles que l'α-actine squelettique, la réduction de leur expression pourrait participer à l'atrophie musculaire. De plus, nos travaux suggèrent que la diminution de l'activité de Srf pourrait influencer l'organisation du réseau mitochondrial et le flux autophagique par des mécanismes qui restent à élucider. D'autre part, en tirant parti d'un modèle d'invalidation conditionnelle et inductible de Srf dans les cellules satellites, nous montrons que le phénomène d'hypertrophie compensatoire requiert l'expression de Srf par les cellules satellites. L'absence de Srf n'altère ni la prolifération ni l'entrée en différenciation des myoblastes, néanmoins elle provoque un défaut de fusion des myoblastes aux fibres au cours de l'hypertrophie induite par surcharge. Ainsi, nos travaux démontrent que Srf est un acteur majeur de la plasticité musculaire, à la fois en tant que médiateur de la mécano-transduction par la voie actine/Mrtfs/Srf et par son implication dans la fusion des cellules satellites aux fibres musculaires, nécessaire à l'hypertrophie compensatoire.

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Dudhal, Swati. « Selenoprotein N as a novel regulator of the muscle progenitor’s cell fate decision process : balancing differentiation and self-renewal ». Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCC288.

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Résumé :

Les mutations du gène codant la sélénoprotéine N (SEPN1) provoquent une myopathie congénitale nommée SEPN1-related myopathy (SEPN1-RM), caractérisée par une faiblesse et une amyotrophie majeures des muscles du cou et du tronc, une scoliose et une insuffisance respiratoire potentiellement létale. SEPN1-RM a été associée avec un stress oxydant, une diminution de la population de cellules souches musculaires (cellules satellites) et des défauts de la régénération musculaire. Avec l’objectif de rechercher les mécanismes impliqués dans ces défauts, et en particulier un rôle potentiel de SEPN1 dans la régulation de l’équilibre entre le renouvellement et la différentiation du pool de cellules satellites, j’ai étudié des cellules satellites primaires de souris knocked-out pour Sepn1et la lignée musculaire murine C2C12 knocked-down pour Sepn1à différents stades de différentiation (cellules quiescentes, myoblastes etmyotubes). Utilisant un système de suspension pour générer une quiescence synchronisée des C2C12, j’ai trouvé que l’absence de SEPN1 dans les cellules en G0 n’est pas incompatible avec la sortie et le retour dans le cycle cellulaire, mais entraîne une moindre sous-régulation de l’expression de deux facteurs clé de la différentiation myogénique (augmentation des transcrits de MYOD1etMYOG par rapport aux contrôles) et une augmentation des niveaux de Cycline D1 (mRNAdeCCND1) en conditions de quiescence. Des études de microarrayet deqRT-PCR ont montré que la déplétion de SEPN1 dans des C2C12 prolifératives est associée à une augmentation significative de l’expression des facteurs de transcription myogéniques MYOG and MYOD1. En parallèle, des études d’immunoblot ont confirmé un niveau augmenté des protéines régulatrices du cycle cellulaire p21 and Cyclin D3 en conditions de prolifération. De plus, des cellules satellites primaires isolées à partir des muscles gastrocnemiusetplantarisde souris KO Sepn1ont montré une fusion accélérée des myoblastes au cours de la différentiation myogénique initiale. Par la suite, j’ai explore les voies mécanistiques impliquées dans ce phénotype cellulaire par western blot et/ou qRT-PCR utilisant des cellulesC2C12 knocked-down pour Sepn1. J’ai pu montrer l’absence de changements nets des voies de l’AMPK et p38, ainsi que du taux d’expression des marqueurs de stress du réticulum endoplasmique GRP78 oucalnexine. Par contre, nos données suggèrent que les voies HDAC5 etmTOR pourraient être impliquées dans le phénotype de différentiation musculaire accélérée. En conclusion, la déplétion de SEPN1 entraîne une quiescence incomplète et une différentiation myogénique accélérée. Par conséquent, ce travail identifie SEPN1 comme un nouveau régulateur du processus de décision du destin cellulaire des progéniteurs musculaires, l’absence de SEPN1 favorisant la différentiation au détriment du renouvellement cellulaire. Ces résultats peuvent contribuer à expliquer la déplétion de la population de cellules satellites et les défauts de régénération observés dans les modèles de SEPN1-RM, et aider à identifier de nouveaux biomarqueurs cellulaires qui seront utiles à l’avenir pour évaluer des approches thérapeutiques
Mutations of Selenoprotein N (SEPN1) cause a congenital myopathy, SEPN1-related myopathy (SEPN1-RM), characterized by severe weakness and wasting of neck and trunk muscles, scoliosis and lethal respiratory failure. SEPN1-RM has been associated with oxidative stress, reduced satellite cell population and defective muscle regeneration. To investigate the underlying mechanisms, particularly a potential role of SEPN1 in regulating the balance between self-renewal and differentiation of the satellite cell pool, I used Sepn1 KO mice primary satellite cells and C2C12 cells knocked down for Sepn1, at different stages of differentiation (quiescent cells, myoblasts and myotubes). Using a suspension system to generate synchronized quiescence on C2C12, I found that Sepn1 absence in G0 cells does not prevent cell cycle exiting and re-entering but prevents normal downregulation of two key myogenic factors (MYOD1 and MYOG mRNAs) and leads to higher Cyclin D1 levels (CCND1 mRNA) in quiescence conditions. Microarray and qRT-PCR studies showed that Sepn1 depletion in proliferative C2C12 cells leads to significant increase in the levels of the transcription factors MYOG and MYOD1. In parallel, immunoblot analysis showed an increased expression of the cell cycle regulator proteins p21 and Cyclin D3. Moreover, primary murine satellite cells isolated from gastrocnemius and plantaris muscles from the Sepn1 KO mice showed increased myoblast fusion during early myogenic differentiation. Next, I explored the mechanistic pathways leading to this cell phenotype by western blots and/or qRT-PCR using Sepn1 knockdown C2C12 cells. I found no clear-cut abnormalities of the AMPK or the p38 mediated pathways, and no consistent changes in the expression of the ER stress markers GRP78 or calnexin. In contrast, our data suggest that HDAC5 and mTOR could be involved in the accelerated differentiation phenotype. Other mechanistic studies are in the progress. In conclusion, lack of SEPN1 leads to incomplete quiescence and accelerated myogenic differentiation. Thus, we identify SEPN1 as a novel regulator of the muscle progenitor’s cell fate decision process and SEPN1 depletion favors differentiation over self-renewal. These results potentially explain the depletion of the satellite cell population and the regeneration defect in SEPN1-RM models, and identify novel biomarkers useful to assess potential therapeutic interventions

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Jacquin, Sophie. « Rôle de la protéine p53 dans l’hypertension artérielle pulmonaire humaine et expérimentale ». Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA114838/document.

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Résumé :

Le terme d’« hypertension artérielle pulmonaire » (HTAP) décrit une maladie vasculaire pulmonaire caractérisée par une augmentation progressive des pressions artérielles pulmonaires (PAP), définie par une PAP moyenne supérieure ou égale à 25 mmHg au repos et dont le principal symptôme est un essoufflement à l’effort. Un remodelage artériel pulmonaire intense conduisant à une obstruction des petits vaisseaux pulmonaires est responsable de la maladie. C’est une maladie rare mais néanmoins grave car pouvant aboutir à une insuffisance ventriculaire droite et entraîner le décès du patient.Le cadre général de notre étude est l’amélioration de la compréhension des mécanismes physiopathologiques de l’HTAP afin d’identifier de nouvelles cibles thérapeutiques potentielles. Nous nous sommes intéressés plus particulièrement au phénotype « pseudo-tumoral » des cellules musculaires lisses des artères pulmonaires (CML-AP) des patients atteints d’HTAP qui jouent un rôle primordial dans le remodelage vasculaire pulmonaire de l’HTAP et qui présentent des caractéristiques communes avec les cellules cancéreuses, notamment une hyper-prolifération, une résistance à l’apoptose, des désordres métaboliques et une instabilité génomique. Etant donné que la protéine p53, un des plus importants suppresseurs de tumeur, est largement décrite comme inactivée dans la plupart des cancers, nous avons émis l’hypothèse qu’elle pourrait également jouer un rôle important dans le développement de l’HTAP. Les résultats des études in vitro menées sur des CML-AP de patients atteints d'HTAP idiopathiques (HTAPi) versus des sujets contrôles semblent indiquer que la protéine p53 n’est pas altérée dans les CML-AP HTAPi. En effet, la séquence codante du gène TP53 ne présente pas de mutation dans les CML-AP HTAPi, les expressions génique et protéique de p53 (et de certaines de ses protéines cibles) ne semblent pas être différentes entre contrôles et HTAPi, ni à l’état basal ni en réponse à différents stress cellulaires inducteurs de p53 (étoposide et H2O2). Cependant, la régulation de p53 semble altérée puisque nous avons observé une augmentation du taux protéique de MDM2, principal régulateur de p53, dans les CML-AP HTAPi. Ce résultat peut être considéré comme une des caractéristiques « pseudo-tumorales » des CML-AP HTAPi mais également être un élément déterminant du mécanisme d’action de la Nutlin-3a, qui a montré des effets anti-prolifératifs accrus dans les CML-AP HTAPi.Dans des études in vivo menées chez le rat, la protéine p53 semble jouer un rôle dans l’initiation de la pathogénèse d’une HTAP. En effet, les taux protéiques pulmonaires de p53, de sa cible p21 et de son régulateur (mais également cible transcriptionnelle) MDM2 sont diminués lors de la première semaine dans un modèle d’induction d’HTAP par mono-injection de monocrotaline (MCT) chez le rat, au cours duquel la pathologie se développe à partir de la 2ème semaine. De plus, l’administration quotidienne à des rats d’un inhibiteur de l’activité transcriptionnelle de p53, le pifithrin-α (PFT), conduit au développement d’une HTAP en 14 jours, au même titre qu’une mono-injection de MCT, et aggrave l’HTAP induite par la MCT. Des effets pro-prolifératifs et anti-apoptotiques du PFT révélés sur des CML-AP indiquent que l’inhibition de l’activité transcriptionnelle de p53 est à l'origine d'une prolifération exagéree et une résistance à l'apoptose, deux composantes clés dans le remaniement vasculaire pulmonaire et le développement de l'HTAP.En conclusion, ces résultats mettent en évidence l’implication de l’inactivation de la voie de p53 lors de la phase initiatrice du développement de l’HTAP, alors qu’aux stades tardifs et sévères de la maladie, il semble il y avoir une normalisation de p53. En revanche, l’augmentation de l’expression de son principal régulateur MDM2 observée dans les CML-AP de patients HTAP semble être une cible thérapeutique potentiellement intéressante
Pulmonary artery hypertension (PAH) is a severe pulmonary vascular disease characterized by a progressive increase of the pulmonary arterial pressure (PAP), defined by a mean PAP greater than or equal to 25 mmHg at rest. The main symptom is a shortness of breath. An intense pulmonary arterial remodeling that leads to an obstruction of the small pulmonary vessels is responsible of the disease. PAH is a rare but severe disease that develops into right ventricular cardiac failure leading to the patient's death.The general framework of our study was to improve the understanding of the pathophysiology of PAH in order to identify new potential therapeutic targets and improve the clinical management of patients. In particular, we were interested in the “cancer-like phenotype” of PAH patient pulmonary arterial smooth muscle cells (PA-SMCs). PA-SMCs play a key role in the pulmonary vascular remodeling of PAH. These cells share characteristics with cancerous cells, such as: exaggerated proliferation, apoptosis resistance, metabolic disorders and genomic instability. Owing to the growth-suppressive and pro-apoptotic functions of p53 protein and its inactivation largely described in cancer, we hypothesized that the p53 pathway could also be altered during PAH development in PA-SMCs.The results of in vitro studies on PA-SMCs of late stage patients with idiopathic PAH (iPAH) versus control patients suggest that the p53 protein nor pathway is not altered in iPAH PA-SMCs. Indeed, the coding sequence of the TP53 gene presented no mutations in iPAH PA-SMCs. Analysis of mRNA and protein levels of p53 and its target proteins showed no difference between controls and iPAH PA-SMCs, neither in a basal state or in response to various cellular stresses such as etoposide and H2O2. However, regulation of p53 may be altered in iPAH PA-SMCs as we observed an increase of the MDM2 (the main p53 regulator) protein level compared to control. This last result may be considered as a “cancer-like” characteristic of iPAH PA-SMCs and also be a determining factor in the mechanism of action of Nutlin-3a, which had more important anti-proliferative effects in iPAH PA-SMCs than in control cells.In vivo studies in rats revealed, however, that the p53 pathway may play a role in the initiation stage of PAH pathogenesis. Indeed, kinetics evaluation of p53 lung expression in the PAH model, induced by a single injection of monocrotaline (MCT), revealed a decrease in the p53 protein level during the first week, followed by a normalization by the second week. PAH symptoms are developed in MCT rats after two weeks. Similarly, the protein levels of p21, a p53 target, and MDM2, the major p53 regulator, and also a transcriptional target of p53, decreased during the first week in the MCT-PAH model. In addition, daily treatment in rats with an inhibitor of p53 transcriptional activity, pifithrin-α (PFT), led to the development of PAH in 14 days, similarly to MCT, and worsened the PAH induced by MCT. Pro-apoptotic and anti-proliferative effects of PFT on PA-SMCs indicate that inhibition of p53 transcriptional activity causes an excessive proliferation and an apoptosis resistance, which are two key components of the pulmonary vascular remodeling and development of human and experimental PAH.In conclusion, these results demonstrate the involvement of the p53 pathway inactivation in the initiation stage of PAH development, whereas in late and severe stages of disease, its role seems to be less implicated. In contrast, the increased expression of MDM2 observed in PA-SMCs of PAH patients may be a potential therapeutic target

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Covan, Silvia Chezzi Carlo Foucrier Jean. « Aspetti morfologici e funzionali dei proteasomi durante il processo di differenziamento di cellule muscolari ed in corso di infezione da citomegalovirus umano in vitro Aspects morphologiques et fonctionnels des protéasomes au cours de la différenciation des cellules musculaires et pendant l'infection par le cytomégalovirus humain in vitro / ». Créteil : Université de Paris-Val-de-Marne, 2006. http://doxa.scd.univ-paris12.fr:80/theses/th0238220.pdf.

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Résumé :

Thèse de doctorat : Biologie cellulaire et moléculaire : Paris 12 : 2006. Tesi di dottorato : Biologia cellulare e molecolare : Università degli studi di Parma : 2006.
Thèse soutenue en co-tutelle. Titre provenant de l'écran-titre. Pagination : III-191 f. Bibliogr. f. 165-186.

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El, Khatib Nour. « Identification des mécanismes moléculaires et physiopathologiques impliqués dans la dystrophie facioscapulohumérale ». Thesis, Montpellier, 2016. http://www.theses.fr/2016MONTT039.

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Résumé :

La dystrophie musculaire facioscapulohumérale (FSHD) est une maladie autosomique dominante, caractérisée par une faiblesse et une atrophie progressive de certains muscles squelettiques. La FSHD est liée à une répression inefficace de la région des macrosatellites D4Z4 sur le chromosome 4, entraînant l'expression inappropriée dans le muscle squelettique, d’un gène à double homeobox 4 (DUX4), et la dérégulation des gènes avoisinants. La surexpression de DUX4 est responsable du phénotype atrophié des myotubes FSHD et induit la dérégulation de gènes impliqués dans la réponse au stress oxydant. Malgré les avancés majeures dans la compréhension du locus morbide, les mécanismes exacts impliqués dans la FSHD ne sont pas totalement compris et aucun traitement curatif n’est disponible. Cependant, de nombreuses données montrent le rôle prépondérant du stress oxydant dans la FSHD. Récemment, nous avons caractérisé la présence d’un stress oxydant dans les biopsies musculaires et les prélèvements sanguins des patients atteints de FSHD. Nous avons démontré que ce stress est corrélé à une altération de la fonction musculaire chez ces patients et qu’une supplémentation en antioxydants adaptée améliore la fonction musculaire et réduit les dommages oxydatifs. Par ailleurs, nous avons démontré que les myoblastes dérivés des biopsies FSHD sont plus sensibles à des agents pro-oxydants et présentent des défauts de différenciation. L’objectif de nos travaux est de caractériser les mécanismes moléculaires impliqués dans la FSHD afin de faciliter la mise en place d’approches thérapeutiques. Ce projet de thèse original réunit à la fois une approche fondamentale et clinique.Grâce à la mise en place d’un nouveau modèle in vitro de culture primaire de myoblastes de patients atteints de FSHD, nous avons montré la présence d’un stress oxydant dans ces myoblastes corroborant les observations précédemment obtenues aux niveaux systémiques et musculaires chez ces patients. Par ailleurs, les traitements par des agents pro-oxydants (paraquat et peroxyde d'hydrogène) ont un effet différentiel sur l’expression des enzymes antioxydantes par rapport aux contrôles suggérant un défaut dans les mécanismes d'adaptation au stress oxydant chez les patients atteints de FSHD.D’autre part, afin d'améliorer les procédures de réadaptation pour les patients atteints de FSHD, nous avons proposé d'étudier la faisabilité, la sécurité et l'efficacité de l’entraînement de force par électrostimulation neuromusculaire (ESNM) pour contrer la faiblesse musculaire des quadriceps chez ces patients. Cette étude, en cours, semble être une stratégie de réhabilitation prometteuse pour les patients atteints de FSHD et n’a montré aucun effets indésirables jusqu’à présent
Facioscapulohumeral muscular dystrophy (FSHD) is an autosomal dominant disease, characterized by progressive weakness and atrophy of specific skeletal muscles. FSHD is linked to an inefficient repeat-mediated epigenetic repression of the D4Z4 macrosatellite repeat array on chromosome 4, resulting in the unappropriated expression in skeletal muscle of the double homeobox 4 (DUX4) retrogene. DUX4 overexpression leads to atrophic myotubes phenotype and dysregulation of antioxidant genes. Despite major progress in the understanding of the genetic locus, exact mechanisms that lead to FSHD defects are not completely understood and no curative treatment is available. However, several lines of evidence have proposed oxidative stress and myogenesis defect as the major biological processes affected in FSHD. Recently, we characterized oxidative stress in skeletal muscle biopsies and blood samples from patients with FSHD. We demonstrated that oxidative stress is associated with reduced physical performance in patients with FSHD and that antioxidants adapted strategy was effective to reduce oxidative stress and maintain muscle functions. Furthermore, satellite cell-derived myoblasts from these patients were more susceptible to pro-oxidant agents than control myoblasts and showed a defect in differentiation. The originality of this project relies on creating a synergy between basic and clinical research. The major goal of this work is to identify molecular mechanisms involved in FSHD oxidative stress in order to identify therapeutic approaches.Using in vitro cell model of FSHD, recently developed and optimized in our team, we demonstrate the presence of oxidative stress in FSHD primary myoblast cultures that corroborates previous observations at systemic and muscular levels. Furthermore, treatments with different pro-oxidant agents (paraquat and hydrogen peroxide) have a differential effect on the expression of antioxidant enzymes compared to controls, suggesting a defect in the oxidative stress adaptive response in FSHD myoblasts.Furthermore, in order to improve rehabilitation procedures for patients affected with FSHD, we proposed to investigate the feasibility, safety, and effectiveness of neuromuscular electrostimulation (NMES) strength training to counteract quadriceps muscle weakness in these patients. This ongoing study appears to be a promising rehabilitation strategy and shows no adverse effect for patients with FSHD

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Boytard, Ludovic. « Analyse moléculaire des types cellulaires impliqués dans l'anévrysme de l'aorte abdominale ». Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00825204.

Texte intégral

Résumé :

L'anévrysme de l'aorte abdominale (AAA) est une maladie vasculaire consistant en une dilatationde l'aorte abdominale. Son caractère asymptomatique rend importante la recherche debiomarqueurs afin de faciliter la prise en charge des patients.Le but de mes travaux de thèse a été d'étudier spécifiquement les types cellulaires impliqués dansl'AAA.Après obtention d'une banque d'échantillons d'AAA, nous avons localisé ces types cellulaires etrepéré 3 zones d'intérêt : le thrombus intraluminal contenait des neutrophiles, lymphocytes T,mastocytes et macrophages M2. Les macrophages M1 étaient localisés dans l'adventice, avec leslymphocytes B et des mastocytes. La média contenait des cellules musculaires lisses (CML) dont lephénotype variait entre les états sain, anévrysmal et apoptotique.Ces résultats suggérant une implication différente des deux types de macrophages et uneévolution des CML au cours de l'AAA, nous avons isolé ces deux types cellulaires du tissu anévrysmalpar microdissection laser afin d'y étudier l'expression de biomarqueurs potentiels. Nous avons ainsimontré que l'augmentation plasmatique de peroxiredoxine-1 provient des macrophages M1 et quel'augmentation d'ADAMTS5 provient des CML anévrysmales allongées.Nous avons ensuite comparé les protéomes des macrophages M1 et M2 afin d'élucider leur rôledans l'AAA et d'identifier de nouveaux biomarqueurs. Cinq protéines différentielles ont étéidentifiées impliquées dans la phagocytose ou la réponse au stress.L'étude des différents types cellulaires impliqués dans l'AAA pourrait nous permettre unemeilleure compréhension de ses mécanismes et l'identification de biomarqueurs potentiels de cettepathologie.

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