Thèses sur le sujet « ARN – Cancer – Recherche »

La première partie de la thèse traite de la recherche de biomarqueurs du cancer. Lors de la transcription, il apparaît que certains nucléotides peuvent être remplacés par un autre nucléotide. On s'intéresse alors à la comparaison des probabilités de survenue de ces infidélités de transcription dans des ARNm cancéreux et dans des ARNm sains. Pour cela, une procédure de tests multiples menée sur les positions des séquences de référence de 17 gènes est réalisée via les EST (Expressed Sequence Tag). On constate alors que ces erreurs de transcription sont majoritairement plus fréquentes dans les tissus cancéreux que dans les tissus sains. Ce phénomène conduirait ainsi à la production de protéines dites aberrantes, dont la mesure permettrait par la suite de détecter les patients atteints de formes précoces de cancer. La deuxième partie de la thèse s'attache à l'étude de l'allergie à l'arachide. Afin de diagnostiquer l'allergie à l'arachide et de mesurer la sévérité des symptômes, un TPO (Test de Provocation Orale) est réalisé en clinique. Le protocole consiste à faire ingérer des doses croissantes d'arachide au patient jusqu'à l'apparition de symptômes objectifs. Le TPO pouvant se révéler dangereux pour le patient, des analyses discriminantes de l'allergie à l'arachide, du score du TPO, du score du premier accident et de la dose réactogène sont menées à partir d'un échantillon de 243 patients, recrutés dans deux centres différents, et sur lesquels sont mesurés 6 dosages immunologiques et 30 tests cutanés. Les facteurs issus d'une Analyse Factorielle Multiple sont également utilisés comme prédicteurs. De plus, un algorithme regroupant simultanément en classes des intervalles comprenant les doses réactogènes et sélectionnant des variables explicatives est proposé, afin de mettre ensuite en compétition des règles de classement. La principale conclusion de cette étude est que les mesures de certains anticorps peuvent apporter de l'information sur l'allergie à l'arachide et sa sévérité, en particulier ceux dirigés contre rAra-h1, rAra-h2 et rAra-h3.

BRCA1 est l'un des deux gènes majeur de prédisposition au cancer du sein. Les multiples partenaires protéiques de BRCA1 lui confèrent de nombreuses fonctions par lesquelles elle peut assurer la surveillance de l'intégrité cellulaire. L'équipe dans laquelle j'ai mené ma thèse a identifié un nouveau partenaire protéique de BRCA1, la protéine de liaison au poly(A) des ARN messagers PABP1, et a ainsi mis en lumière l'implication de BRCA1 dans la régulation de la traduction. De plus, de récents travaux suggèrent que dans des conditions dangereuses pour la cellule et potentiellement oncogéniques, comme par exemple un stress endommageant l'ADN (génotoxique), la synthèse protéique est fortement altérée. Mon travail de thèse a eu pour objectif de démontrer que cette nouvelle fonction de BRCA1 contribue, comme ses fonctions nucléaires, à son rôle de suppresseur de tumeur. Durant ma thèse, j'ai identifié les ARNm « cibles » de BRCA1 par la technique d'immunoprécipitation des complexes ribonucléoprotéiques (RIP), j'ai validé que ces ARNm « cibles » de BRCA1 lui sont associés pour leur régulation traductionnelle en réalisant une analyse comparative du contenu des polysomes de cellules épithéliales mammaires MCF-7 exprimant de façon transitoire un ARN interférent dirigé contre BRCA1 par la technique que j'ai mise en place au laboratoire, les profils polysomiques. Par la suite, j'ai établi les conditions de stress génotoxique induisant la localisation cytoplasmique de BRCA1, et en collaboration avec des cliniciens du Centre Léon Bérard j'ai permis l'acquisition d'échantillons tumoraux. Ceci nous permettra d'identifier parmi ces cibles de nouveaux marqueurs diagnostiques ou encore de nouvelles cibles thérapeutiques pour les cancers du sein déficientes en BRCA1
BRCA1 is one of the two major breast cancer susceptibility genes. The numerous binding partners of BRCA1 allow it to participate to several cellular pathways which globally contribute to its cell surveillance capacity. The team in which I performed my PhD identified a new binding partner of BRCA1, the Poly(A)-Binding Protein 1 and, consequently, a new function of this tumor suppressor, namely, the translation regulation. Moreover, recent studies suggest that under conditions dangerous for the cell and potentially oncogenic, such as a genotoxic stress, protein synthesis is strongly altered. My thesis work was aimed at demonstrating that this new function of BRCA1 contributes, like its nuclear functions, to its role of tumor suppressor. During my thesis, I identified the mRNAs "targets" of BRCA1 by the technique of immunoprecipitation of the ribonucleoprotein complexes (RIP), I validated that these mRNAs "targets" of BRCA1 are associated to it for their translational control by realizing a comparative analysis of the contents of the polysomes of MCF-7 mammary epithelial cells transiently expressing an interfering RNA directed against BRCA1 by the technique that I have set up in the laboratory, the polysomal profiles. Subsequently, I established the conditions of genotoxic stress inducing the cytoplasmic localization of BRCA1, and in collaboration with clinicians of the Center Léon Bérard Hospital, I allowed the acquisition of tumor samples. This will allow us to identify among these targets new diagnostic markers or new therapeutic targets for breast cancers deficient in BRCA1

Les facteurs de transcription du groupe PEA3, Erm, Er81 et Pea3 (famille ETS) sont exprimés dès les stades d'embryogenèse précoce dans un grand nombre de tissus et organes. Leur surexpression est souvent corrélée au statut tumorigène des cellules et à l'évolution métastatique, notamment dans le modèle mammaire. Des cellules mammaires murines à caractère «normal» surexprimant les facteurs Erm et Pea3 présentent la capacité de faire spontanément de la morphogenèse et des propriétés invasives in vitro. Ces modèles ont permis la mise en évidence de nouvelles cibles moléculaires de ces facteurs. Les gènes bax, cycline D2 et p55cdc. Le travail de thèse s'est orienté autour de deux axes. La mise au point de modèles cellulaire, manmaires d'inhibition de l'expression des facteurs Erm et Pea3 et l'étude de la régulation des gènes cibles bax,cycline D2 et p55cdc. Nous avons pour cela utilisé deux lignées de cellules mammaires murines, une lignée de cellules à caractère «normal », les TAC (comme modèle cellulaire de morphogenèse) et une lignée cancéreuse, les MMT (comme modèle cellulaire de tumorigenèse), et le processus d'ARN interférence pour réprimer l'expression des facteurs Erm et Pea3. L'étude des modifications morphogénétiques des cellules MMT dont l'expression du facteur Enn comme celle du facteur Pea3 est inhibée, montre que ces cellules présentent une perte de leur capacité de prolifération, de migration et d'invasion in vitro
Injectées en sous-cutané à des souris immunodéficientes, ces même cellules induisent la formation de tumeurs de taille réduite par rapport aux cellules contrôles, confinnant l'implication des facteurs du groupe PEA3 dans les événements conduisant à la cancérogenèse. La caracténsation de la régulation du gène bax par les facteurs du groupe PEA3 a permis de mettre en évidence un nouveau mode de régulation non encore décrit pour ces facteurs, impliquant une interaction avec le facteur USF-I sans liaison directe des facteurs PEA3 à l'ADN. Celle des deux autres gènes cibles cycline D2 et p55cdc est en cours. La modulation de leur expression a été confirmée dans les modèles cellulaires de répression de l'expression des facteurs Erm et Pea3. L'étude de leur région promotrice a permis de définir des sites de régulation dont la caractérisation reste à affiner. La mise au point des différents modèles dans lesquels l'expression des membres du groupe PEA3 est modulée nous a conduit à initier une recherche plus complète des cibles moléculaires des facteurs Erm et Pea3 par utilisation de micro-arrays (Applied Biosystems) avec pour but la corrélation avec les modifications phénotypiques liées à la modulation de l'expression des facteurs du groupe PEA3

Les facteurs de transcription STAT 3 sont activés par nombre de stimuli extracellulaires. Après phosphorylation sur un résidu tyrosine, les protéines STAT3 dimérisent et migrent dans le noyau pour activer leurs gènes cibles. Au cours de notre étude, nous avons identifiés de nouveaux coactivateurs des facteurs STAT3. Le cofacteur SRC-1 interagit avec STAT3 et potentialise d'activité transcriptionnelle de STAT3 par un mécanisme dépendant de son domaine d'interaction avec l'histone acétylase CBP. De même, la sous-unité ATPase du complexe de remodelage Swi/Snf, BRG1, s'associe à STAT3 et est recrutée au niveau du promoteur proximal de p21waf1. Ce recrutement est corrélé à une augmentation de l'acétylation des histones H3 et au remodelage de la chromatine ce qui facilite l'accès de l'ARN polymérase à l'ADN dans les cellules HepG2. Enfin, STAT3 recrute la kinase cdk9 ce qui induit la phosphorylation de l'ARN polymérase sur la sérine 2 de son domaine C-terminal. Une fois phosphorylée, cette dernière induit l'élongation de la transcription. Ainsi STAT3 participe à la régulation de la transcription, tant au niveau de la phase d'initiation ou du remodelage de la chromatine que de la phase d'élongation
Signal transducer and activator of STAT3 are activated in response to various cytokine. Following tyrosine phosphorylation, STAT3 proteins dimerize and translocate to the nucleus and activate specific target gene. In the present study, we have identified new cofactors of STAT3. SRC-1 interacts with STAT3 ant enhances transcriptional activation by STAT3 through its CBP interacting domain. As a next step, we have shown that BRG1, the ATPase subunit of the Swi/Snf chromatin-remodelling complexe interacts with STAT3 and is recruited to p21waf1 proximal promoter. BRG1 recruitment is associated with H3 acetylation and followed by increased accessibility of p21waf1 proximal promoter. Finally, STAT3 recruits cdk9 kinase to phosphorylate the C-terminal domain of RNA polymerase at serine 2. The elongating form of the polymerase then promotes the elongation phase of transcription. Therefore, STAT3 regulate transcription at different levels: initiation, chromatine remodelling and elongation

Il est largement documenté que les patrons épigénétiques sont altérés dans les cancers. Pour autant, l’étendue et la nature précise de ces altérations, tout comme leur impact sur l’expression des gènes, restent encore peu appréciés. Mon projet de thèse est bâti sur ce constat, et s’inscrit en particulier dans la recherche des causes et conséquences des altérations épigénétiques dans les gliomes. Ces tumeurs du système nerveux central représentent en effet un excellent modèle, car elles présentent des défauts de méthylation de l’ADN permettant de discriminer deux populations de tumeurs avec des caractéristiques cliniques différentes. Notre stratégie, basée sur des analyses moléculaires exhaustives, s’est appuyée sur une cohorte de 70 échantillons tumoraux, classés sur la base de leur statut IDH, et de six lignées de cellules souches de glioblastomes (CSG).Ces travaux ont tout d’abord permis de relativiser la contribution de la méthylation de l’ADN dans les dérégulations transcriptionnelles observées dans les gliomes. Il apparait en effet que ce sont plutôt les altérations au niveau de la chromatine bivalente, et plus spécifiquement de la marque H3K27me3, qui sont la cause principale de ces dérégulations transcriptionnelles. Spécifiquement, nos données supportent un modèle selon lequel l’altération dans le contrôle de la marque H3K27me3, et plus spécifiquement dans les interactions entre le complexe PRC2 et la machinerie de transcription spécifique au cerveau, est la cause principale des altérations transcriptionnelles dans les gliomes.Cette étude révèle également que les gènes à homéodomaine, et en particulier les gènes HOX, constituent une catégorie à part dans les gliomes les plus agressifs (IDHwt). Leur signature moléculaire, associant gain d’expression et gain de méthylation de l’ADN, est en effet atypique. Nos données révèlent que cette altération est généralisée aux quatre clusters HOX, et que la réactivation de ces gènes est liée à la perte drastique et spécifique de la marque H3K27me3 sur ces régions. Cette étude conduit également à proposer un modèle original selon lequel l’hypométhylation globale de l’ADN est un élément déclencheur de l’expression ectopique détectée au niveau de nombreux gènes, et dont l’altération des gènes HOX aurait, via un effet domino, un rôle central. L’observation de l’altération de la marque H3K27me3 dans les gliomes, et en particulier aux clusters HOX, nous a également amené à nous interroger sur le rôle des ARN non codants dans ces mécanismes. En ce sens, un transcrit non codant encore peu caractérisé, nommé HOXA-AS2 (situé en antisens au niveau du cluster HOXA), a été identifié. Ce transcrit est significativement et spécifiquement surexprimé dans les gliomes IDHwt. Des approches de sous-expression dans des lignées bien caractérisées de CSG suggèrent un rôle central de HOXA-AS2 dans la biologie de ces cellules. Il contribuerait ainsi au caractère pathologique des CSG en inhibant les voies de l’inflammation et en favorisant la capacité des cellules à proliférer.Dans son ensemble, ce travail revisite le lien entre altérations épigénétiques et défauts d’expression dans les cancers et met en évidence qu’une altération dans le contrôle de la marque H3K27me3 est la principale cause des défauts d’expression des gènes
Epigenetic alterations are a well-known signature of cancer cells. However, the causes of these defects, as well as their consequence on gene expression, remain elusive. My thesis project specifically lies in this thematic, and focuses on the causes and consequences of epigenetic alterations in gliomas. These brain tumors can be divided into two subsets, based on IDH mutation status, that are characterized by different methylation profiles. Interestingly, the mutation of IDH is also associated with a better prognosis. Our strategy, based on exhaustive molecular analyses, relies on the study of 70 glioma samples, classified according to their IDH status, and of six glioblastoma stem cell (GSC) lines.We found that most transcriptional alterations in tumor samples were DNA methylation-independent. Instead, altered histone H3 trimethylation at lysine 27 (H3K27me3) was the predominant molecular defect at deregulated genes. Our results also suggest that the presence of a bivalent chromatin signature at CpG island promoters in stem cells predisposes not only to hypermethylation, as widely documented, but more generally to all types of transcriptional alterations in transformed cells. In addition, the gene expression strength in healthy brain cells influences the choice between DNA methylation- and H3K27me3-associated silencing in glioma. Highly expressed genes were more likely to be repressed by H3K27me3 than by DNA methylation. Our findings support a model in which altered H3K27me3 dynamics, more specifically defects in the interplay between Polycomb protein complexes and the brain-specific transcriptional machinery, is the main cause of transcriptional alteration in glioma cells. Also, our study revealed that homeodomain genes, and in particular HOX genes, are characterized by an atypical defect in aggressive gliomas (IDHwt), associating a gain of expression with an aberrant gain of methylation. We determined that this alteration affect all the four HOX clusters, and that the reactivation of these genes is likely a consequence of the aberrant loss of H3K27me3 that specifically affect these clusters. This study allows to propose a model whereby global DNA hypomethylation triggers ectopic expression of numerous genes through a cascade of events, in which HOX gene alteration would have a central role.The observation that H3K27me3 is deregulated in gliomas, and particularly on HOX genes, also lead us to investigate for the role of non-coding RNA in these mechanisms. We have identified HOXA-AS2, a yet poorly characterized long non-coding RNA located at HOXA locus, that is specifically and significantly overexpressed in IDHwt gliomas. The inhibition of HOXA-AS2 in well-characterized CSG lines suggests that this transcript play a central role in the biology of these cells. Thus, it would contribute to the aggressiveness of CSG by inhibiting inflammatory pathways and promoting cell proliferation. Altogether, these works revisit the relationship between epigenetic alterations and aberrant transcription, and present the control of H3K27me3 as the main cause of transcriptionnel defects in cancer

Les microARNs (miARNs) sont de petit ARNs non codant présents dans tous les eucaryotes qui régulent, positivement ou négativement, l'expression des ARN messagers (ARNms). Les miARNs ont un potentiel important pour de futurs traitements du cancer et d'autres maladies. Les interactions miARN-ARNm dépendent d'une variété de mécanismes complexes, tels que la complémentarité des séquences, l'accessibilité et la conservation. Cette thèse se concentre sur deux de ces mécanismes, à savoir l'accessibilité et la conservation intra-espèce du site d'interaction, en utilisant des données expérimentales de Cross-linking, Ligation And Sequencing of Hybrids (CLASH). Bien que l'accessibilité des sites d'interaction sur les ARNms soit généralement observée, cela n'est pas le cas pour toutes les interactions. La conservation intra-espèce est un mécanisme peu considéré que nous avons étudiée au travers la recherche de motifs conservés dans les ARNms. Bien que les résultats obtenus soient bruités, il est possible de retrouver via ces motifs certains sites d'interaction sur les ARNms
MicroRNAs (miRNAs) are non-coding RNAs present in eukaryotes that regulate the expression of messenger RNAs (mRNAs) up or down. These miRNAs have significant potential in future treatment of cancer and other diseases. The miRNA-mRNA interactions are intricate and involve various mechanisms, such as sequence complementarity, accessibility, and conservation. This thesis focuses on two such mechanisms, namely accessibility and intra-species conservation of the site of interaction, using experimental data from Cross-linking, Ligation And Sequencing of Hybrids (CLASH). Although the accessibility of interaction sites on mRNAs is generally observed, it is not consistent for all interactions. Intra-species conservation is a rare feature, which we explore by inferring conserved motifs from mRNA interaction sites. Although the results are noisy, in some specific cases, we manage to retrieve some mRNA interaction sites from the inferred motifs

Élucider les processus transcriptionnels et épigénétiques dérégulés dans les cancers est fondamental pour mieux comprendre les voies biologiques impliquées et proposer une thérapie adaptée au phénotype moléculaire de chaque tumeur. Les approches classiques de classification non supervisée définissent des groupes moléculaires principaux pour chaque type tumoral. Cependant, ces méthodes, appliquées à des tumeurs complexes comme le carcinome hépatocellulaire (CHC), le 3ème cancer le plus mortel au monde, définissent des groupes qui restent relativement hétérogènes et ne reflètent qu’imparfaitement la diversité des mécanismes biologiques à l’œuvre dans ces tumeurs. Au cours de ma thèse, j’ai développé une stratégie d’analyses innovante, basée sur l’analyse en composantes indépendantes (ACI), pour extraire des signatures de processus biologiques précis à partir de grands jeux de données transcriptomiques et épigénétiques. Grace à cette nouvelle approche, j’ai identifié des groupes de gènes co-régulés, associés à des phénotypes ou altérations moléculaires précises. De même, l’analyse en composantes indépendantes du méthylome de 738 CHC m’a permis d’isoler 13 signatures épigénétiques stables, préférentiellement actives dans certaines tumeurs et certains sites CpG. Ces signatures incluent des signatures de méthylation précédemment associées au vieillissement et au cancer, mais aussi de nouvelles signatures d'hyper- et d'hypométhylation liées à des événements « drivers » et sous-groupes moléculaires spécifiques. Ces résultats nous éclairent sur la diversité des mécanismes moléculaires impliqués dans la carcinogenèse hépatique. Les outils d’analyse biostatistique innovants que j’ai développés ont été incorporés dans un package R librement utilisable par la communauté scientifique
Elucidating deregulated transcriptional and epigenetic processes in cancers is fundamental to better understand the biological pathways involved and to propose a therapy adapted to the molecular phenotype of each tumor. Classical unsupervised classification approaches define, for each tumor type, the main molecular groups. However, these methods, applied to complex tumors such as hepatocellular carcinoma (HCC), the 3rd cause of cancer-associated mortality worldwide, define groups that remain relatively heterogeneous and only imperfectly reflect the diversity of biological mechanisms at work in these tumors. During my PhD, I developed a, innovative strategy involving independent component analysis (ICA) to extract signatures of precise biological processes in large transcriptomic and epigenetic tumor data sets. This new approach allowed me to identify groups of co-regulated genes associated with specific phenotypes or molecular alterations. Similarly, independent component analysis of the methylomes of 738 HCC revealed 13 stable epigenetic signatures preferentially active in specific tumors and CpG sites. These signatures include signatures previously associated with ageing and cancer, but also new hyper- and hypomethylation signatures related to specific driver events and molecular subgroups. The work presented in this thesis sheds light on the diversity of molecular processes remodeling liver cancer transcriptomes and methylomes, improve the understanding of the molecular mechanisms involved in hepatic carcinogenesis and provides a statistical framework to unravel the signatures of these processes

Le génome humain contient environ 200 000 séquences d'origine rétrovirale (HERV), intégrées au fil de l'évolution et organisées aujourd'hui en familles multicopies complexes globalement réprimées par un contrôle épigénétique. L'étude du transcriptome HERV au niveau locus est compliquée par les similarités phylogénétiques au sein d'une famille et par la profusion des sites d'intégration, deux propriétés inhérentes aux éléments transposables. Dans ce travail, nous avons utilisé une méthode de conception de sondes de détection de 25 mer afin d'adresser la question de l'expression individuelle des HERV. Une puce à ADN haute densité intégrant plus de 5 500 séquences HERV et permettant une lecture fonctionnelle de l'activité de leurs LTRs a été utilisée sur un panel de tissus sains et cancéreux. Cela a permis d'identifier 1 718 séquences HERV actives, dont 326 LTRs promotrices et 209 LTRs polyA. L’étude de l’environnement génomique a mis en évidence une fenêtre d’environ 8 kb en amont des LTRs promotrices, caractérisée par une sous-représentation en gènes cellulaires en orientation sens. Nous avons également montré que le transcriptome des rétrovirus endogènes humains suit des règles de tropisme d’expression, qu’il est sensible aux états de différenciation cellulaire et qu’il ne semble pas être corrélé à l’âge des familles. Une première tentative d’exploitation de ce répertoire HERV dans un contexte clinique a visé à rechercher de nouveaux marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate à partir de prélèvements urinaires, par la réalisation d’une étude pilote sur 45 patients
The human genome contains around 200,000 endogenous retroviral sequences (HERV) integrated during the evolution and which are nowadays organized into complex multicopy families, globally repressed by epigenetic control. The study of the HERV transcriptome at the locus level is complicated by phylogenetic similarities within one family and by the profusion of integration sites, two inherent characteristics of transposable elements. In this work, we used a method aiming to optimally characterize individual loci associated with 25 mer probes. A custom microarray dedicated to more than 5,500 HERV sequences and allowing a functional interpretation of the LTRs expression was used on a panel of normal and tumor tissues. We therefore identified 1,718 active HERV sequences, including 326 promoter LTRs and 209 polyA LTRs. The study of the genomic environment has highlighted an approximately 8 kb zone upstream of promoter LTRs characterized by a drastic reduction in sense cellular genes. We also showed that the HERV transcriptome follows tropism rules, is sensitive to the state of cell differentiation and, unexpectedly, seems not to correlate with the age of the families. In a first attempt to use the HERV repertoire in clinical, we sought to identify new markers of prostate cancer from urine samples. This goal was pursued by conducting a pilot study on 45 patients

Dans les cancers, le paysage épigénétique est altéré avec notamment une hyperméthylation ciblée des promoteurs de certains gènes suppresseurs de tumeurs, ce qui participe à leur inactivation. Afin de comprendre ce phénomène, nous avons cherché à identifier de nouveaux partenaires protéiques des enzymes responsables de la méthylation de l’ADN, les méthyltransférases d’ADN (DNMT). L’originalité du travail consiste à développer deux techniques qui utilisent des inhibiteurs de DNMT comme outil moléculaire afin d’identifier les partenaires de la méthylation. La première partie du manuscrit est consacrée à la caractérisation d’inhibiteurs de DNMT (Champion et al. , 2010 ; Cecccaldi et al. , 2011). La seconde partie décrit le développement de deux techniques fondées soit sur le principe de chromatographie par affinité, soit sur l’utilisation d’une sonde chimique photoactivable qui peut ponter l’enzyme ou ses partenaires et être couplée à une étiquette par une réaction de «click chemistry»

Comme le nucléole joue un rôle fondamental dans l’expression des protéines, via la synthèse des ARN ribosomiques, il n’est donc pas surprenant que des études aient révélé un lien étroit, entre des dysfonctionnements nucléolaires et l’origine de certaines maladies humaines. La découverte, il y a plusieurs années, d’un taux anormalement élevé de protéines nucléolaires dites argyrophiles ou AgNORs, dans les cellules tumorales, a permis d’envisager leur utilisation comme outil diagnostique ou pronostique du cancer. Détectées, de manière in vitro grâce à leur affinité pour l’argent, l’identification de quelques protéines AgNORs n’a pourtant pas permis d’établir une caractéristique commune à toutes les protéines argyrophiles détectées dans les extraits nucléolaires. Ainsi, bien que le test colorimétrique AgNOR soit utilisé dans de nombreux laboratoires académiques, l’absence d’identification de protéines AgNORs spécifiques du processus de cancérisation, a limité son utilisation en laboratoire clinique. Comme certaines limites technologiques et expérimentales ont limité leur caractérisation chez l’humain, nous avons donc décidé de reprendre les recherches sur ce sujet et de le réactualiser grâce aux avancées technologiques et scientifiques. Les protéines AgNORs étant étroitement liées à la biogenèse des ribosomes, nous avons donc décidé d’amorcer nos recherches chez la levure Saccharomyces cerevisiae, dans laquelle, la voie de biosynthèse des ribosomes a été particulièrement bien décrite. Devant l’intérêt biologique et médical de ces protéines, l’objectif de ce projet a donc été triple :

1-identifier des protéines AgNORs chez la levure

2-caractériser les propriétés physico-fonctionnelles et physico-chimiques de ces protéines AgNORs.

3-utiliser ces caractéristiques physico-chimiques pour rechercher de nouvelles AgNORs humaines, spécifiques de processus de cancérisation et potentiellement utilisables comme marqueurs tumoraux./The nucleolus is a subnuclear compartment that organized around ribosomal gene (rDNA) repeats NORs, which encode for ribosomal RNA. A peculiar group of acidic proteins which are highly argyrophilic are also localized at the same sites as NORs, thus allowing NORs to be very clearly and rapidly visualized by silver nitrate staining procedures. However, if three human argyrophilic proteins, UBF, C23 (nucleolin) and B23 (nucleophosmin), have been associated for staining of NOR, the exact number of AgNOR proteins and their intrinsic biochemical feature are unclear. Here, we have performed an heterologous screen in a genetically tractable eukaryotic organism (budding yeast) for the identification of novel AgNOR proteins and in vitro characterized an intrinsic feature that underlies silver binding and offers a strong predictive value for the identification of novel human AgNOR proteins.
Doctorat en Sciences
info:eu-repo/semantics/nonPublished

Un lien de causalité fort existe entre infection genitale à papillomavirus (HPV) à haut risque et cancer du col de l'utérus : ces virus sont retrouvés dans 99,70/0 des tissus cervicaux cancéreuxs Des techniques sensibles et reproductibles sont actuellement disponibles pour détecter les HPV dans les cellules exfoliées du col utérin, En particulier le test Hybrid Capture II (HCII), seul test commercialisé validé par la FDA (Etats-Unis) et I'AFSSAPS (France), permet la détection globale de 13 types d'HPV à haut risque. Si le dépistage des lésions précancéreuses du col repose depuis les années 1950 sur la cytologie cervico-utérine, il paraît aujourdffiui important de repenser la pratique clintque en fonction des données nouvellesr à la fois en ce qui concerne les méthodes de prévention du cancer cervical et la prise en charge des lésions préinvasives. Après une première partie consacrée à une revue de la littérature, nous présentons une comparaison de la performance du test HCII par rapport au frottis pour le dépistage primo-secondaire des lésions précancéreuses du col utérin (CIN2/3+). Cette étude concerne une population hospitalière de 3574 patientes, caractérisée par une forte prévalence en HPV haut risque. La sensibilité du test HPV a été évaluée à 94,30/0, plus importante que celle de la cytologie (65,1 à 86,80/0 selon l'entité diagnostique choisie comme seuil de positivité), La combinaison des 2 tests a permis datteindre une sensibilité et une valeur prédictive négative de 1000/0. Nos résultats montrent que le test HPV, seul ou en complément de la cytologie, améliore la détection des lésions pré-invasives du col chez les femmes qui consultent à l'hôpital. Ces résultats sont en accord avec ceux de la littérature, qui ont été généralement obtenus dans des populations participant à un dépistage, dont la prévalence de l'infection à HPV est plus faible. Dans une seconde étude, nous nous sommes intéressée à déterminer les caractéristiques de l'infection à HPV qui pourraient être prédictives du développement de lésions précancéreuses. Pour ce faire, nous avons réalisé une étude longitudinale incluant 781 femmes présentant initialement un frottis normal, ASCUS ou LGSIL, infectées ou non par les HPV. Ces femmes ont été suivies tous les 6 mois par frottis et test HPV, sur une durée moyenne de 22 mois. Nous avons démontré qu'aucune femme HPV négative à l'entrée dans l'étude n'a développé de lésion de haut grade au cours de la période de suivi. Seules des patientes ayant été testées positives en HPV/ pendant toute la durée du suivi ont présenté des lésions cervicales préinvasives, quelle que soit la cytologie initiale. En plus d'une positivité en HPV persistante, les fortes valeurs du test HCII, considéré comme semi-quantitatif, étaient associées à un risque plus élevé de développer de telles lésions. Afin d'explorer la signification de la valeur donnée par le test HCII en tant qu'estimation de la charge virale HPV, nous avons dans un premier temps validé une technique de PCR en temps réel pour les gènes dE6HPV16 et de l'albumine, afin d'être en mesure de tenir compte de la cellularité des échantillons, les résultats étant exprimés en copies d'HPV16 par cellule. Nous avons alors sélectionné parmi des échantillons connus pour être positifs en HCII, 40 échantillons contenant de l'ADN de HPV16 amplifiable par Cette technique de PCR en temps réel. Nous avons montré que les résultats des 2 techniques, HCII et PCR en temps réel, sont bien corrélées, et que la cellularité nqnfluence pas ces résultats de façon significative La valeur donnée par le test HCII peut donc être considérée comme un reflet de la charge virale, avec la restriction suivante : un prélèvement spécifique réalisé de façon standardisée (nous n'avons pas étudié la corrélation avec des résidus d'échantillons destinés à la cytologie liquideL Enfin, il nous a semblé intéressant d'étudier l'évolution de la charge virale HPV16 par PCR en temps réel, dans un groupe de 13 patientes infectées par HPV16 et ayant développé une lésion de haut grade, et dans un second groupe de 26 patientes infectées par HPV16, n'ayant pas développé de lésion cervicale au courS du suivi, et ayant négativé leur test HPV en fin de suivi, Les résultats préliminaires montrent une augmentation souvent forte de la charge virale avant l'apparition de la lésion de haut grade. En revanche, chez les patientes présentant une infection à HPV transitoire et asymptomatiquet après une éventuelle phase diaugmentation, la charge virale diminue jusqu'à négativationï et les valeurs de charge virale retrouvées tout au long du suivi restent globalement faibles. Si l'étude de la charge virale HPV demande encore à être approfondie, elle pourrait se révéler être un critère pronostique intéressant dans les infections HPV, en permettant de sélectionner les cas qui développeront des lésions pré-invasivesr ou au contraire ceux qui niévolueront pas, ou encore de différencier les infections persistantes des infections L'ensemble de nos résultats viennent augmenter les nombreuses données de la littérature concernant l'intérêt du test HPV en pratique clinique, Il semble qu'il est temps à présent pour les institutions de santé publique d'évaluer ces résultats, de considérer les coûts et les bénéfices impliqués, et d'appliquer ces connaissances à leurs recommandations, guides de pratique clinique et politique de santé publique

La Poly(ADP-ribosyl)ation est une modification post-traductionnelle des protéines catalysée par les poly(ADP-ribose) polymérases (PARPs), une famille de 17 membres. Nous avons débuté la caractérisation fonctionnelle d’un nouveau membre de cette famille : la Poly(ADP-Ribose) Polymérase-3 (PARP-3). Cette protéine était très peu étudiée. Le gène humain Parp3 permet l’expression de deux isoformes. Tandis que l’isoforme longue a été identifiée comme un composant centrosomal, l’isoforme courte est accumulée dans le noyau. En outre, seule l’isoforme courte est exprimée chez la souris. Pour étudier les conséquences fonctionnelles de l’absence de PARP-3 dans les cellules humaines, nous avons généré un modèle cellulaire de fibroblastes de poumons humains (MRC5) déplété en PARP-3 par la méthode de l’interférence ARN. Nos travaux ont permis d’identifier PARP-3 comme un nouvel acteur spécifique de la réponse cellulaire aux cassures double brin de l’ADN (DSB). Nous avons également entrepris une recherche de partenaires de PARP-3 par spectrométrie de masse. Nous avons identifié une interaction de PARP-3 avec la protéine NuMA, un régulateur essentiel de la division mitotique. Nos travaux ont mis en évidence l’existence d’un complexe protéique composé de PARP-3, NuMA et Tankyrase 1 (PARP-5a), impliquée dans les mécanismes mitotiques. PARP-3 a un rôle charnière dans la régulation de ce complexe qui joue un rôle fondamental dans la progression mitotique au travers de la maintenance du fuseau mitotique et de la résolution des télomères. Les rôles de PARP-3 dans les mécanismes de réparation des DSB ainsi que dans la progression mitotique en font une cible prometteuse en thérapie du cancer
Poly(ADP-ribosyl)ation is a post-translational modification of proteins mediated by poly(ADP-ribose) polymerases (PARPs), a family of 17 members. We started the functional characterization of a new member of this family : the Poly(ADP-Ribose) Polymerase-3 (PARP-3). This protein was poorly studied. The human Parp3 gene displays two splicing variants giving rise to two proteins. Whereas the full length hPARP-3 has been identified as a core component of the centrosome throughout the cell cycle, the shorter splice variant accumulates within the nucleus. Of note, only the shorter nuclear variant is found in mice. We generated PARP-3 depletion in human lung cell line (MRC5) using RNA interference to analyse functional consequences of PARP-3 absence. We identified PARP-3 as a new specific actor of Double-Strand Breaks (DSB) repair mechanism. We also identified a new protein partner of PARP-3, NuMA, which is an essential regulator of mitotic division. These cells also showed problems in mitosis entry, in mitotic spindle formation, an increased mitosis duration and chromosomes aberrations. Performing protein interaction studies and using biochemical approaches, we highlighted a protein complex composed of PARP-3, NuMA and Tankyrase 1 (PARP-5a), involved in mitotic mechanisms. PARP-3 has a key role in the regulation of this complex. It plays essential role in mitotic progression and in mitotic spindle integrity maintenance and in telomere stability. The roles of PARP-3 in both DSB repair mechanisms and in mitotic progression indicate PARP-3 as a possible promising therapeutic target in cancer therapy

Les progrès de la recherche sur le cancer du sein dépendent de la disponibilité d’outils appropriés, comme les lignées cellulaires qui peuvent être implantées chez des souris immunocompétentes. La souche de souris C57Bl/6 est la plus étudiée et c’est la seule pour laquelle certaines variantes génétiques sont disponibles. Étant donné qu'aucune lignée cellulaire de carcinome mammaire à récepteurs hormonaux positifs de souche C57Bl/6 n'est disponible, nous avons décidé d'établir des lignées cellulaires de ce type. Nous avons induit des cancers du sein chez des souris C57BL/6 femelles en utilisant un analogue synthétique de la progestérone combiné à un agent endommageant l'ADN. Des lignées cellulaires ont été établies à partir de ces tumeurs et sélectionnées pour leur positivité au niveau du double récepteur (estrogène + progestérone), ainsi que pour leur transplantabilité chez les femelles C57BL/6. Parmi plusieurs lignées, une lignée cellulaire, que nous avons appelée MD5, remplissait ces critères et a permis l'établissement de tumeurs mal différenciées et très prolifératives. Ces tumeurs ont réduit leur croissance (sans toutefois régresser) lors du traitement par des antagonistes des récepteurs d’œstrogènes, ainsi que par une chimiothérapie à base d'anthracylines. Cependant, ce dernier effet n'a pas été influencé par la déplétion des lymphocytes T et, en outre, ces tumeurs n'ont pas répondu au blocage de PD-1, ce qui suggère que les tumeurs MD5 sont immunologiquement froides. En conclusion, les cellules MD5, dérivées des animaux C57BL/6, constituent un modèle de cancer du sein à récepteurs hormonaux positifs de mauvais pronostic
Progress in breast cancer research relies on the availability of suitable cell lines that can be implanted in immunocompetent laboratory mice. The best explored mouse strain, C57Bl/6, is also the only one for which multiple genetic variants are available. Driven by the fact that no hormone receptor-positive C57Bl/6-derived mammary carcinoma cell lines are available, we decided to establish such cell lines. Breast cancers were induced in female C57BL/6 mice using a synthetic progesterone analogue combined with a DNA damaging agent. Cell lines were established from these tumors and selected for dual (estrogen + progesterone) receptor positivity, as well as transplantability into C57BL/6 females. One cell line, which we called MD5,fulfilled these criteria and allowed for the establishment of poorly differentiated, highly proliferative, immune cold tumors. Such tumors reduced their growth (though did not regress) upon treatment with estrogen receptor antagonists, as well as with anthracyline-based chemotherapy. However, the latter effect was not influenced by T cell depletion and MD tumors failed to respond to PD-1 blockade, suggesting that they are immunologically cold. In conclusion, C57BL/6-derived MD5 cells constitute a model of poor prognosis hormone receptor-positive breast cancer

La formation de nouveaux vaisseaux sanguins ou angiogenèse soutient la croissance tumorale en fournissant l'oxygène et les nutriments qui lui sont nécessaires. Le rôle clé du facteur de croissance de l'endothélium vasculaire VEGF dans ce processus a suscité le développement de stratégies anti-angiogéniques pour le traitement du cancer. Cependant, des travaux précliniques et des données cliniques suggèrent l'émergence de résistances aux anti-angiogéniques, en raison notamment de la redondance des facteurs de croissance pro-angiogéniques. Il est donc nécessaire de développer des stratégies alternatives plus efficaces. En 2010, notre laboratoire a apporté la preuve de concept d'une thérapie anti-tumorale et anti-angiogénique innovante basée la dégradation des ARNm à demi-vie courte par la protéine à doigts de zinc TIS11b. Néanmoins, l'instabilité de la protéine thérapeutique a entravé la caractérisation plus détaillée de cette stratégie. Dans ce contexte, l'objectif majeur de ma thèse était l'optimisation de la stabilité et de l'activité de TIS11b et l'évaluation de son efficacité thérapeutique. Pour cela, nous avons généré une nouvelle protéine TIS11b génétiquement modifiée sur la base d'études biochimiques et moléculaires. Notamment, nous avons observé que la phosphorylation de la sérine 334 située dans le domaine C-terminal de TIS11b augmente de façon très significative la stabilité de la protéine et potentialise son activité déstabilisatrice de l'ARNm du VEGF. De plus, la délétion du domaine N-terminal augmente également la stabilité de TIS11b sans altérer son activité. Nous avons alors généré deux nouvelles protéines thérapeutiques, la protéine ZnC et la protéine ZnC334D pour laquelle la troncation du domaine N-terminal et la substitution de la sérine S334 par un aspartate mimant une phosphorylation ont été combinées. Les nouvelles protéines ont été fusionnées à une étiquette polyarginine R9 leur permettant de traverser les membranes cellulaires (R9-ZnC et R9-ZnCS334D). Nous avons montré que R9-ZnC et R9-ZnCS334D inhibent l'expression de VEGF in vitro dans la lignée de cancer du sein murin 4T1. De plus, R9-ZnCS334D exerce une activité anti-proliférative, anti-migratoire et anti-invasive dans ces cellules. In vivo, l'injection intra-tumorale de R9-ZnCS334D dans des tumeurs 4T1 préétablies inhibe significativement l'expression du VEGF, la croissance et la vascularisation tumorales. De façon remarquable, l'analyse des extraits tumoraux indique que le traitement diminue l'expression de chimiokines clés dans les processus d'angiogenèse, d'inflammation et d'invasion (Fractalkine, MCP-1, NOV, SDF-1, Pentraxin…). Enfin, R9-ZnC et R9-ZnCS334D inhibent l'expression de marqueurs de la transition épithélio-mésenchymateuse, un processus impliqué dans la dissémination métastatique. L'ensemble de ces travaux indique que R9-ZnC et R9-ZnCS334D sont des molécules anti-tumorales multi-cibles, qui inhibent plusieurs étapes clés de la progression tumorale. Cette étude confirme que le ciblage de la stabilité des ARNm est une stratégie prometteuse et novatrice pour le développement de nouvelles thérapies anti-cancéreuses
One of the innovative aspects of anti-cancer therapies is the possibility of preventing tumor growth by blocking blood supply. Cancer cells induce the formation of their own blood vessels from pre-existing vasculature, a process called angiogenesis. One of the most important proangiogenic factors is vascular endothelial growth factor (VEGF). The success of bevacizumab (a humanized anti-VEGF monoclonal antibody) combined to chemotherapy for the treatment of human metastatic cancers has validated VEGF as an efficient target. However, despite the initial enthusiasm, resistance to these anti-angiogenic treatments resulting from compensatory mechanisms occurs upon time. For this reason, there is a real need for new anti-angiogenic drugs that will target the angiogenic process through distinct mechanisms. In 2010, our laboratory has successfully developed an anti-angiogenic and anti-tumoral therapy based on destabilization of short-lived mRNAs by the zinc finger protein TIS11b. However, the therapeutic protein was highly unstable, thus making it difficult to further characterize the experimental therapy. In this context, the main task of my thesis was the optimization of TIS11b stability and activity followed by the evaluation of the multi-target action of our novel protein on tumor development. In a first part of this work, biochemical and molecular approaches allowed us to demonstrate that phosphorylation of the C-terminal serine S334 in TIS11b protein markedly increases its stability. In addition, deletion of the N-terminal domain of TIS11b highly increases its protein stability without affecting its activity. Therefore, we integrated N-terminal truncation (ZnC) and C-terminal substitution of S334 by an aspartate to mimic a permanent phosphorylation at S334 (ZnCS334D) as a novel TIS11b engineering strategy. Both proteins were fused subsequently to a cell-penetrating peptide polyarginine (R9). In vitro studies revealed that R9-ZnC and R9-ZnCS334D inhibit VEGF expression in the murine breast cancer cells 4T1. In addition, R9-ZnCS334D impaired proliferation, migration, invasion and anchorage-independent growth of 4T1 cells. In vivo, intra-tumoral injection of either protein significantly reduced VEGF expression and tumor vascularization. Strikingly, antibody array analyses of tumor extracts demonstrated a reduced expression of several chemokines such as Fractalkine, MCP-1, NOV, SDF-1 and Pentraxin upon R9-ZnC or R9-ZnCS334D treatment. These factors, which are produced by several cell types within tumor tissue, are key drivers of tumor angiogenesis, tumor-promoting inflammation and invasion. Furthermore, the expression of markers of the epithelial-to-mesenchymal transition was also significantly reduced, suggesting an anti-metastatic effect of R9-ZnC and R9-ZnCS334D. Thus, we provide R9-ZnC and R9-ZnCS334D as potential novel multi-target agents which inhibit key hallmarks of cancer progression. This work supports the emerging link between mRNA stability and cancer and proposes novel concepts for the development of innovative anti-cancer therapies

L’organisation non-aléatoire du noyau des cellules eucaryotes et la compaction de l’ADN en chromatine plus ou dense peuvent influencer de nombreuses fonctions liées au métabolisme de l’ADN, y compris la stabilité du génome. Les cassures double-brin sont les dommages à l’ADN les plus néfastes pour la cellule. Pour préserver l’intégrité de leur génome, les cellules eucaryotes ont développé des mécanismes de réparation des cassures double-brin qui sont conservés de la levure à l’homme. Parmi ceux-ci, la recombinaison homologue utilise une séquence homologue intacte présente ailleurs dans le génome et peut se diviser en deux sous voies de réparation. La conversion génique transfère l’information génétique d’une molécule à son homologue, tandis que le Break Induced Replication (BIR) établit une fourche de réplication qui peut procéder jusqu’à la fin du chromosome.Mon travail de thèse s’est attaché à caractériser la contribution du statut chromatinien et de l’organisation tridimensionnelle du génome à la réparation des cassures double-brin. L’organisation du noyau de la levure S. cerevisiae ainsi que la propagation de l’hétérochromatine au niveau des régions subtélomériques peuvent être modifiées via la surexpression des protéines Sir3 et sir3A2Q. Nous avons montré que le groupement des télomères accroit la conversion génique entre deux séquences subtélomériques, soulignant le rôle clé de la proximité spatiale et de la recherche d’homologie. Nous avons également constaté que la présence d’hétérochromatine au niveau du site de cassure limite la résection, ce qui permet une disparition plus lente des extrémités, qui resteraient disponibles plus longtemps pour réaliser la recherche d’homologie et achever la réparation. Enfin, nous avons observé que la présence d’hétérochromatine au site donneur diminue l’efficacité de recombinaison et qu’elle doit moduler une étape commune aux deux voies de réparation, à savoir l’invasion de brin. Ces travaux nous ont permis de décrire de nouvelles voies de régulation de la réparation de l’ADN
The non-random organization of the eukaryotic cell nucleus and the folding of genome in chromatin more or less condensed can influence many functions related to DNA metabolism, including genome stability. Double-strand breaks (DSBs) are the most deleterious DNA damages for the cells. To preserve genome integrity, eukaryotic cells thus developed DSB repair mechanisms conserved from yeast to human, among which homologous recombination (HR) that uses an intact homologous sequence to repair a broken chromosome. HR can be separated in two sub-pathways: Gene Conversion (GC) transfers genetic information from one molecule to its homologous and Break Induced Replication (BIR) establishes a replication fork than can proceed until the chromosome end.My doctorate work was focused on the contribution of the chromatin context and 3D genome organization on DSB repair. In S. cerevisiae, nuclear organization and heterochromatin spreading at subtelomeres can be modified through the overexpression of the Sir3 or sir3A2Q mutant proteins. We demonstrated that reducing the physical distance between homologous sequences increased GC rates, reinforcing the notion that homology search is a limiting step for recombination. We also showed that heterochromatinization of DSB site fine-tunes DSB resection, limiting the loss of the DSB ends required to perform homology search and complete HR. Finally, we noticed that the presence of heterochromatin at the donor locus decreased both GC and BIR efficiencies, probably by affecting strand invasion. This work highlights new regulatory pathways of DNA repair

Contexte : les Plans Cancer 2 et 3 soulignent l'importance de la décision médicale partagée. Cependant, la littérature sur la reconstruction mammaire (RM) suite à un cancer du sein montre la place essentielle du médecin dans la prise de décision. Les proches apparaissent également comme peu pris en compte par les médecins dans le choix des traitements et en particulier le partenaire intime qui est le proche généralement le plus présent aux côtés de la patiente. À l'heure actuelle, aucune recherche n'a étudié les interactions conjugales dans le processus de décision d'une RM. Pourtant, plusieurs études ont montré l'interdépendance des deux membres du couple face à une maladie chronique et le rôle essentiel du partenaire dans l'ajustement des patientes au cancer du sein. Objectif : cette recherche a pour objectif principal d'étudier les interactions conjugales dans le processus de décision d'une RM suite au diagnostic d'un cancer du sein. Méthode : deux études ainsi qu'une revue systématique de la littérature ont été réalisées afin de répondre à cet objectif. Ces deux études étaient mixtes, comprenaient une partie quantitative (auto-questionnaires) et une partie qualitative (entretiens avec les femmes et leur partenaire). La première étude était rétrospective, en interrogeant des couples plusieurs années après le diagnostic du cancer. La seconde était prospective, en interrogeant des couples juste après le diagnostic du cancer. Les données quantitatives ont fait l'objet d'analyses non-paramétriques. Les données qualitatives ont fait l'objet d'une analyse de contenu thématique, d'une analyse lexicale (pour l'étude rétrospective) et d'une analyse phénoménologique interprétative (pour l'étude prospective). Résultats : les résultats de l'étude rétrospective montrent que l'ajustement émotionnel des femmes est le même quel que soit leur décision (RM immédiate, RM différée ou sans RM). Cependant, les femmes qui n'ont pas eu de RM recommanderaient moins leur décision comparées aux femmes qui ont eu une RM. Par ailleurs, les couples rapportent que la prise de décision de la RM est vécue et prise au sein du couple. Le partenaire y apparaît comme un soutien à la décision. La question de la temporalité apparaît différemment dans le discours des couples selon la décision. Les résultats de la revue systématique soulignent les différents rôles que les proches peuvent avoir dans la prise de décision d'un traitement pour une maladie chronique, notamment de manière directe (e.g., le partenaire communique ses préférences au patient) et indirecte (e.g., le choix du patient est guidé par sa perception de ses responsabilités familiales). Les résultats de l'étude prospective montrent qu'avant la mastectomie, les partenaires de femmes qui ne vont pas avoir de RMI expriment plus d'émotions négatives et un besoin d'information plus important que les partenaires de femmes qui vont avoir une RMI. De plus, les femmes et leurs partenaires pensent à la RM au moment de la mastectomie. Ces pensées leur permettent de se projeter dans le futur, où la RM est associée à une bonne santé. Penser à la RM pourrait alors permettre aux couples de s'ajuster face à la mastectomie et au diagnostic de cancer du sein. Conclusion : la prise de décision de la RM apparaît comme vécue au sein du couple, avec des spécificités en fonction de la décision prise (RM immédiate, RM différée ou pas de RM). Au niveau clinique, ce travail permet d'identifier les besoins des couples et de proposer des pistes d'interventions et d'outils à développer afin d'accompagner les femmes et leur partenaire. Au niveau de la recherche, il conviendrait d'investiguer plus largement comment la décision de la RM est prise entre la femme, son partenaire et les différents professionnels de santé impliqués dans la prise en charge médicale
Context: cancer Plans 2 and 3 emphasize the importance of a shared decision-making. However, the literature on breast reconstruction (BR) following breast cancer shows the physician essential place in this decision-making. Close others are also little included by physicians in this treatment choice and more specifically intimate partners. The latter is usually the most present near the women. To date, no research has studied couple interactions in the decision-making process of a BR. Yet, several studies have pointed out the interdependence of both members of a couple to face a chronic illness and partners' key role in women's adjustment facing breast cancer. Objective: the main objective of this research is to study couple interactions in the decision-making process of a BR following breast cancer diagnosis. Method: two studies as well as a systematic literature review were realized to meet this objective. These two studies were mixed, including a quantitative part (self-reported questionnaires) and a qualitative part (interviews with women and their partners). The first study was retrospective, interviewing couples several years after breast cancer diagnosis. The second study was prospective, interviewing couples just after breast cancer diagnosis. Quantitative data were subjected to non-parametric analysis. Qualitative data were subjected to a thematic content analysis, a lexical analysis and an interpretative phenomenological analysis. Results: the results of the retrospective study show that women's emotional adjustment is the same regardless their decision (immediate BR, delayed BR or no BR). However, women without BR would less recommend their decision compared to women with BR. In addition, couples report that BR decision was lived and taken within the couple. Partners were described as supportive in the decision-making process. The question of temporality emerged differently in couple's discourse according to the decision. The results of the systematic literature review highlight the different roles family members can have in treatment decision-making of a chronic illness, including direct (e.g., the partner says his/her preferences to the patient) and indirect influence (e.g., patient's choice is guided by his/her perception of his/her family responsibilities). The results of the prospective study shows that before the mastectomy, partners of women not having an immediate BR express more negative emotions and a greater need for information compared to partners of women having an immediate BR. Furthermore, women and their partners think to the BR at the time of the mastectomy. These thoughts allow couples to project themselves in the future, where BR is associated to a good health. Thinking to BR could allow couples to cope with the mastectomy and breast cancer diagnosis. Conclusion: BR decision-making appears as experienced within the couple, with specificities considering the decision (immediate BR, delayed BR or no BR). At the clinical level, this work allows to identify couples needs and to propose interventions and tools to develop in order to accompany women and their partners. At the research level, it should be distinguished more broadly how BR decision is made between the women, her partner and the health professionals involved in the medical care