Littérature scientifique sur le sujet « Anticorpo monoclonale HIV-1 »

Tecidos de 27 cães que morreram de hepatite infecciosa canina (HIC) foram avaliados por imunoistoquímica (IHQ) para detecção de antígeno de adenovírus canino tipo 1 (CAV-1), por meio de um anticorpo monoclonal. Os tecidos examinados incluíram fígado, rim, baço, linfonodos, tonsilas, pulmão, intestino delgado, encéfalo e medula óssea. Para cada órgão foram atribuídos graus crescentes (de leve a acentuada) de intensidade de imunomarcação. O antígeno de CAV-1 estava presente na maioria dos órgãos examinados, principalmente em células endoteliais. Relacionando o tempo de evolução clínica da HIC com a intensidade da imunomarcação, o maior número de casos com evolução clínica hiperaguda ou aguda coincidiu com a maior intensidade de marcação do antígeno viral. A IHQ demonstrou ser um teste adequado para a detecção do antígeno de CAV-1 e pode ser usado para o estudo da patogênese da doença.

Les fonctions catalytiques de l'intégrase (IN) du Virus de l'Immunodéficience humaine (VIH-1) sont strictement nécessaires pour l'intégration du génome viral dans les cellules hôtes. Aujourd'hui, trois inhibiteurs anti-IN appartenant à la famille des dikétoacides sont utilisés en thérapie : le raltegravir, l'elvitegravir et le dolutegravir. Cependant, les patients traités par ces médicaments développent des mutations de résistance. Dans ce travail, nous cherchons à mieux comprendre le mécanisme d'interaction de ces drogues avec l'ADN viral. Ce travail a également contribué à la conception de molécules qui devraient être dotées d'une affinité augmentée pour l'ADN, permettant de surmonter le problème de la résistance virale. La compréhension du mécanisme d'inhibition de IN s'est poursuivie par l'étude de deux anticorps monoclonaux anti-K159 (peptide 147-175 du coeur catalytique de IN), 4C6 et 4F4. Les résultats montrent que les anticorps reconnaissent leurs épitopes dans l'IN. D'autre part, du fait de son implication dans de nombreuses étapes du cycle du VIH-1, nous ciblons la protéine 7 de la nucléocapside (NCp7). Pour ce faire, nous avons étudié la structure de nos systèmes (NCp7 et NCp7-ADN) et nous avons pu déterminer les interactions clés responsables de la structuration, ainsi que des fonctions, de ces systèmes. Dans un second temps, nous avons évalué les interactions de NCp7 avec un inhibiteur éjecteur de zinc (C247) de la famille des thioesters. Enfin, sur le plan méthodologique, nous avons raffiné dans le potentiel SIBFA (Sum of Interaction Between Fragments Ab initio computed) la représentation des doublets libres de type sp et sp2 dans les molécules conjuguées
The catalytic functions of integrase (IN) of Human Immunodeficiency Virus (HIV-1) are strictly necessary for the integration of the viral genome into the host cells. To this day, three anti-IN inhibitors belonging to the diketoacids are used in therapy: raltegravir, elvitegravir and dolutegravir. However, under treatments with these drugs, patients develop resistance mutations. In this work, we seek to better understand the interaction of the three drugs with viral DNA. This work also contributed to the design of novel molecules. These should be endowed with increased DNA binding affinities as a step towards overcoming viral resistance. The understanding of the inhibition mechanism of IN was pursued by the study of two monoclonal antibodies, 4F4 and 4C6, which are directed against sequence 147-175 of the catalytic core of HIV-1 IN, a peptide denoted K159. The results show that the antibodies recognize their epitopes in IN. We also aim to target an HIV-1 nucleocaspid protein NCp7 involved in many stages of the viral cycle. We have thus studied the structure of NCp7 and its viral DNA complex. We were able to determine the interactions responsible for the structuring and thus the functions of these complexes. Then, we evaluated the interactions of NCp7 with an inhibitor of the thioester family, C247, which acts as a zinc ejector. Finally, from the methodological standpoint, we have refined in SIBFA (Sum of Interaction Between Fragments Ab initio computed) the representation of the sp2 and sp lone pairs in conjugated molecules

La protéine Tat (Trans-activator of transcription) est certainement l’une des cibles présentant le plus d’intérêts dans la lutte contre le VIH-1. En effet, synthétisée précocement, elle joue un rôle central dans le cycle viral et protège les cellules infectées. Secrétée dans le milieu extracellulaire, elle participe à l’immunodéficience en inhibant certaines fonctions ou en induisant l’apoptose des cellules du système immunitaire. Elle est également impliquée directement dans de nombreuses pathologies associées au VIH-1. Dans une première étude, nous avons voulu savoir si la trithérapie était capable d’inhiber la synthèse et la sécrétion de la protéine Tat. Nous avons proposé à des patients infectés, sous trithérapie, ayant une charge virale indétectable, de nous permettre de faire cinq prélèvements sanguins (un tous les trois mois pendant un an) afin de vérifier la présence d’anticorps anti-Tat. Nous avons pu constater que 86% des patients avaient des anticorps anti-Tat mais que ces anticorps pouvaient disparaître ou apparaître chez une majorité de patients, démontrant que la protéine Tat continue d’être sécrétée malgré les antiviraux. Une deuxième étude, sur des sérums de patients, a été effectuée afin de déterminer si la protéine Tat était structurée dans le sang des patients. Il existait une polémique, dans la littérature, sur le fait que la protéine Tat soit naturellement non structurée. Nous avons démontré que la protéine Tat est structurée dans le sérum de patients. De plus, l’activité biologique de la protéine Tat est étroitement liée à l’acquisition de sa conformation. Dans le cadre du développement clinique d’un vaccin anti-Tat dans le laboratoire, nous avons effectué des vaccinations sur des souris afin de déterminer la dose, l’adjuvant, la voie d’administration et le nombre de rappels à effectuer ainsi que la vérification de la tolérance et de la toxicité du vaccin. Des essais cliniques sont en préparation dans le cadre d’un protocole thérapeutique. Le laboratoire développe également une autre approche thérapeutique avec un anticorps monoclonal de souris capable de reconnaitre et de neutraliser les variants Tat représentatifs des cinq principaux sous-types du VIH-1. Cet anticorps qui sera humanisé, servirait à une future immunothérapie en combinaison à la trithérapie pour des patients en phase précoce ou tardive ou encore pour des nouveaux nés dont le système immunitaire est peu fonctionnel
The protein Tat (Trans-activator of transcription) is definitely one of the most interesting targets in the fight against HIV-1. Synthesized early, it plays a central role in the viral life cycle and protects infected cells. Secreted into the extracellular medium, it participates in the immunodeficiency by inhibiting some functions or inducing apoptosis of immune cells. It is also directly involved in many diseases associated with HIV-1. In a first study, we examined whether HAART was able to inhibit the synthesis and secretion of the Tat protein. We proposed to HIV-1 infected patients under HAART, with undetectable viral load, to allow us to do five blood samplings (one every three months for one year) to verify the presence of antibodies against Tat. We found that 86% of patients had antibodies against Tat but these antibodies could disappear or appear in a majority of patients showing that Tat protein continues to be secreted in spite of antiviral treatment. A second study of patient sera was carried out to determine if Tat was structured in the blood of patients. There was a controversy in the literature about the fact that Tat could be naturally unstructured. We showed that Tat is structured in the serum of patients. In addition, the biological activity of Tat is closely related to the acquisition of its conformation. As part of a clinical development of a Tat vaccine in the laboratory, we carried out vaccinations in mice to determine the dose, the adjuvant, the route of administration, the number of boosts, tolerance and toxicity of the vaccine. Clinical trials are planed with a therapeutic protocol. The laboratory is also developing another therapeutic approach with a mouse monoclonal antibody able to recognize and neutralize Tat variants representative of the five major subtypes of HIV-1. This antibody will be humanized and could be used for future immunotherapy, in combination with HAART for patients in early or late stage of the pathology or to newborn babies who have a weak immune system

L'épitope mapping de 9 ACM dirigés contre la protéine majeure de core du virus HIV- 1, réalisé selon la technique développée par H. M. Geysen et al. A permis l'identification de 4 épitopes distincts de la p24, couvrant Les acides aminés 179-188, 209_217, 260-267 et 281-286 du précurseur gag p55. Les épitopes AAEWDRVHP (209-217) et EIYKRWII (260-267) se sont révélés immuogéniques lors de l'infection naturelle par HIV-1. La détection et le tirage des anticorps anti-AAEWDRVHP lors de l'infection par les virus HIV de types 1 et 2, a été rendue possible grâce à l'utilisation de l'ACM 23A5G4 ~< f reconnaissant la séquence AAEWDRVHP conjugué à la peroxydase dans 2 tests immunoenzymatiques par inhibition séquentielle, SIEIA-l et SIEIA-2. L'étude de sérums de patients se trouvant à différents stades de l'infection par HIV nous a permis de montrer que la séquence 209-217, ou le domaine antigénique couvrant cette séquence, était un épitope majeur des protéines p24 et p26 des virus HIV-1et HIV-2, reconnu à un stade précoce de l'infection virale. L'épitope mapping de 2 ACM humains anti-p24 a permis de localiser 2 épitopes supplémentaires, résidus 144-152 et 292-302 du précurseur gag p55. Un épitope de la protéine de core p17 a également été identifié en position 64-73 du précurseur gag, Les résultats d'épitope mapping des ACM murins et humains ont montré une bonne corrélation avec les programmes de prédictions d'épitopes globalisés ainsi qu'avec les modèles de structure tridimensionnelle des protéines p17 et p24. Deux grandes boucles exposées à la surface de la protéine p24 (190-228 et 257-295) semblent particulièrement immunogènes au cours de l'infection naturelle par HIV-1.

Dans l'objectif de la mise au point d'un vaccin contre le virus de l'immunodéficience humaine de type I (HIV-1), la glycoprotéine d'enveloppe a fait l'objet des principales investigations. A la suite de la description de caractéristiques particulières des glycoprotéines d'enveloppe d'isolats primaires de HIV-1, et en raison des échecs répétés lors de l'utilisation d'enveloppes de souches adaptés (ACLT), des études récentes ont souligné la nécessité d'utiliser de nouveaux immunogènes. Parmi ceux ci, les glycoprotéines d'enveloppe oligomérique de souches primaires de HIV pourraient constituer une alternative intéressante pour tenter d'induire une réponse humorale de large spectre contre ces souches virales. Une caractérisation de leurs propriétés antigéniques et immunogéniques est un préalable nécessaire à une éventuelle utilisation de ces immunogènes dans des études vaccinale. Le système d'expression dérivé du virus de la forêt Semliki (SFV) a été utilisé dans notre travail pour effectuer la caractérisation antigénique des glycoprotéines d'enveloppe de 10 isolats primaires et de 2 souches ACLT du HIV-1, de sous-types A à G. Nos études effectuées en radio-immunoprécipitation ont montré que le système SFV permettait la présentation des enveloppes virales sous leur forme oligomérique. La présente étude a également révélé des caractéristiques antigéniques particulières des enveloppes d'isolats primaires, en particulier vis à vis de l'anticorps monoclonal IgG1b12. L'épitope correspondant semble en effet peu ou pas accessible sur la glycoprotéine de surface gp120 des isolats primaires. Des études en cytofluorimétrie ont mis en évidence des défauts d'expression membranaires de certaines enveloppes d'isolats primaires. Les gp160 les moins exportées à la surface cellulaire montrent un clivage moindre en gp120+41 et des propriétés fusogéniques faibles, et les souches virales dont elles sont issues se répliquent plus lentement in vitro. D'autre part, les immunisations effectuées chez la souris et le lapin ont montré que ces enveloppes faiblement présentées à la membrane étaient de faibles immunogènes, et que la réponse humorale induite était dirigée contre des épitopes non neutralisants, au détriment d'une réponse protectrice. L'utilisation de vaccin multivalents présentant simultanément au système immunitaire un mélange de plusieurs enveloppes de HIV-1 a permis l'élargissement de la réponse humorale, sans toutefois augmenter l'activité neutralisante
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Lors de la primo-infection, la plupart des patients infectés par le VIH-1 développent des anticorps neutralisants autologues dirigés contre la glycoprotéine d’enveloppe virale. Ces anticorps exercent une pression de sélection conduisant à l’apparition de variants d’échappement. Nous avons montré que cette pression de sélection se répercute à l’échelle populationnelle, le VIH-1 en tant qu’espèce s’étant adapté au cours de l’épidémie à la réponse immunitaire de la population humaine en devenant de moins en moins sensible aux anticorps neutralisants. Cette adaptation du VIH‐1 a un impact sur les propriétés fonctionnelles de l’enveloppe. Nous avons ainsi observé une augmentation de l’infectivité associée à une augmentation de la cinétique d’entrée des virus qui circulent actuellement. Les virus contemporains montrent également une plus grande résistance à l’enfuvirtide, un inhibiteur de fusion, associée à une meilleure utilisation du co-récepteur CCR5 ainsi qu’une résistance accrue à l’inhibiteur du CD4 M48U1. L’ensemble de nos résultats est en faveur d’une adaptation progressive de l’espèce virale du VIH-1 à son hôte au cours de l’épidémie
Most of HIV-1 infected patients develop autologous neutralizing antibodies against the viral envelope glycoprotein during primary infection. These antibodies exert a selective pressure that leads to the selection of escape variants. We showed that HIV-1 evolved at the population level towards an enhanced resistance to antibody neutralization over the course of the epidemic, subsequently to the selective pressure exerted by the individual autologous neutralizing antibodies responses. This antigenic drift has an impact on the functional properties of the viral envelope. We showed an increasing infectivity associated with an increasing entry kinetic of the most recently transmitted viruses. The contemporary viruses are also more resistant to the inhibitor of fusion enfuvirtide, related to a better use of the CCR5 co-receptor as well as a progressive increasing resistance to the CD4 inhibitor M48U1. Together our results are in favor of a progressive adaptation of HIV-1 species to humans over the course of the epidemic

La proteine centrale de la polyproteine gag du virus vih-1, la proteine p24, constitue la capside du virus, une enveloppe conique qui protege l'arn viral. Les structures des domaines n- et c-terminaux constituant la proteine p24 ont ete revelees separement par des travaux de rmn et de cristallographie des rayons x. Cette these presente la determination structurale, par cristallographie des rayons x, de la proteine p24 entiere en complexe avec un fragment d'anticorps. Le fab 13b5 est un fragment d'anticorps monoclonal de souris de type igg1k, dirige contre le domaine c-terminal de la proteine recombinante de p24. L'adnc codant pour le fab 13b5 a ete clone et sequence. Le fab 13b5 a ete cristallise, sa structure a ete determinee par la technique du remplacement moleculaire, puis affinee a 1,8a, jusqu'a un facteur rlibre de 26,8% et un facteur r de 23,7%. Par ailleurs, la structure du complexe fab 13b5-p24 a ete resolue par remplacement moleculaire avec les fragments connus de la proteine p24 ainsi que le fab 13b5 libre a partir de donnees cristallographiques jusqu'a 4a. L'etude de la structure du complexe fab 13b5-p24, affinee jusqu'a 3a de resolution, a permis : de determiner la structure entiere de la proteine p24, de montrer sa flexibilite interne qui est localisee a la region liant les domaines n- et c-terminaux, et d'observer un nouveau type de dimerisation p24-p24, le domaine n-terminal d'une molecule interagissant avec le domaine c-terminal de sa voisine. Cette structure a apporte aussi des informations sur la reconnaissance de la proteine p24 par ce fragment d'anticorps et en particulier a montre que la surface du fab reconnaissant l'antigene est plutot petite avec seulement 4 cdr impliques (h1, h2, h3 et l1) et formee a 82% par des acides amines de la chaine lourde. Finalement, la structure du fab 13b5 seul a 1,8a de resolution, a permis, par comparaison avec celle du fab 13b5 lie a son antigene (dans la structure du complexe), d'observer les changements structuraux du fab 13b5 sous l'effet de la complexation avec son antigene : les cdr-h1 et -h2 montrent quelques adaptations localisees aux chaines laterales des acides amines ; le cdr-h3 est plus largement deplace. On observe, au niveau de la structure quaternaire du fab 13b5, une rotation de 8 de la chaine legere et de la chaine lourde, l'une par rapport a l'autre dans le dimere variable (fv).

Sono stati studiati i complessi di fusione tra le proteine virali gp120/41 ed i recettori CD4 e CCR5. Sono stati immunizzati gruppi di topi per verificare la loro capacità di elicitare anticorpi neutralizzanti specifici.
Complex between viral glycoproteins gp120/41 and cellular recpetors CD4 and CCR5 have been studied. Mice were immunized to verify their ability to elicit specific neutralizing antibodies.