Tesis: "Transfert de Lipides"

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Réthoré, Gildas. "Analogues de lipides membranaires d'archaebacéries : nouveaux vecteurs synthétiques pour le transfert de gènes". Rennes 1, 2005. http://www.theses.fr/2005REN1S093.

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Resumen

L'utilisation de l'ADN comme moyen thérapeutique nécessite le développement de vecteurs capables de protéger, transporter et faciliter la pénétration des gènes dans les cellules cibles. Notre travail a consisté à développer de nouveaux vecteurs synthétiques capables de complexer l'ADN. Dans une première partie, nous avons synthétisé des lipides de type tétraéther du glycérol neutres et dicationiques analogues de lipides membranaires d'archaebactéries et nous avons déterminé leurs propriétés physico-chimiques ainsi que leur auto-organisation au sein des membranes liposomiales. Ces différents vecteurs ont ensuite fait l'objet de tests de transfection afin d'étudier leur potentiel de transfection in vitro (sur deux lignées cellulaires) et in vivo. Dans la dernière partie de ce travail, nous avons synthétisé de nouveaux analogues de ces lipides incorporant une structure triantennée, constituée de trois unités lactose ou mannose, comme agent de ciblage.

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Charvolin, Delphine. "Études structurales des protéines de transfert de lipides du mais et du blé : caractérisation de l'interaction entre protéine et lipide". Grenoble 1, 1997. http://www.theses.fr/1997GRE10008.

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Resumen

Les proteines de transfert de lipide forment une famille de petites proteines, tres abondantes dans les plantes et qui presentent une forte homologie de sequence. Leur fonction est assez mal connue et plusieurs hypotheses ont ete emises: elles peuvent etre des transporteurs de phospholipides membranaires entre les membranes cellulaires, ou bien des transporteurs des monomeres de cutine vers les couches externes des plantes ; elles peuvent jouer un role dans la defense des plantes ou encore participer aux mecanismes de stockage des graisses lors de la maturation des graines. Les structures de la proteine de transfert de lipide du ble en presence de lyso-myristoyl-phosphatidyl-choline et de la proteine de transfert de lipide du mais, en absence de lipide ont ete resolues par diffraction des rayons x, respectivement a 2,6 et 1,9 angstroms de resolution. Les structures obtenues sont proches des autres structures de cette famille, determinees par rmn ou cristallographie: elles sont formees de quatre helices, stabilisees par quatre ponts disulfure. On observe la formation d'une cavite cylindrique allongee au sein de la proteine du mais cristallisee sans lipide: elle mesure environ 20 sur 3 sur 4 angstroms et est formee d'une zone hydrophobe et d'une zone polaire, limitee par une tyrosine et deux arginines. La structure de la proteine du ble cristallisee en presence du lipide met en evidence que la zone hydrophobe de la cavite fixe deux chaines carbonnees de lipide et que la zone polaire fixe vraisemblablement la tete polaire du lipide, les residus tyrosine et arginine jouant probablement un role fondamental dans l'attache de la tete polaire

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Boulanger, Caroline. "Nouveaux lipides fluorés et conjugués acridine-peptide de localisation nucléaire pour le transfert de gènes". Nice, 2004. http://www.theses.fr/2004NICE4017.

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Resumen

Les travaux réunis dans cette thèse concernent la synthèse et l’évaluation de nouveaux lipides fluorés et conjugués acridine-peptide de localisation nucléaire (NLS)) pour le transfert de gènes. Ainsi, dans l’optique d’optimiser les performances des vecteurs synthétiques, deux familles de molécules ont été développées. La première est constituée par des lipides cationiques fluorés analogues du GAP-DLRIE et du DOSPA et des co-lipides fluorés analogues de DOPE. La présence de chaînes fluorées confère un caractère hydrophobe plus marqué mais surtout lipophobe aux lipoplexes qu’ils forment améliorant ainsi leur stabilité et leur résistance dans des milieux biologiques agressifs (en présence de surfactants par exemple). La seconde famille comprend des conjugués acridine-espaceur-NLS pour améliorer l’import nucléaire de l’ADN qui représente une des étapes les plus limitantes du transfert de gènes par les vecteurs synthétiques
The present work is about the synthesis and evaluation of new fluorinated lipids and acridine-nuclear localisation signal (NLS) for gene transfer. Indeed, in order to increase the performances of synthetic vectors, two kinds of molecules have been developed. The first one regroups fluorinated analogs of the synthetic gene carriers agents GAP-DLRIE and DOSPA and of the “helper”lipid DOPE. The presence of the fluorinated tails increases the hydrophobicity and confers lipophobicity to the lipoplexes their form. So, their stability and resistance in aggressive biological medium (for example pulmonary surfactant). The second family is made of acridine-linker-NLS conjugates to improve the nuclear import in gene transfer using synthetic vectors

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Jemaiel, Aymen. "Etude du trafic membranaire vésiculaire et non-vésiculaire chez la levure". Thesis, Paris 11, 2013. http://www.theses.fr/2013PA112348/document.

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Resumen

Les cellules eucaryotes sont caractérisées par le cloisonnement des organelles par des membranes. La communication entre les différents compartiments cellulaires est assurée par deux voies de transport : le transport vésiculaire et transport non-vésiculaire. Le transport vésiculaire permet à la fois le trafic des protéines et des lipides d'un compartiment à un autre, alors que le transport non-vésiculaire permet uniquement le trafic des lipides. En effet, les lipides jouent un rôle essentiel dans l'organisation cellulaire. Au cours de ma thèse, je me suis intéressé au rôle des lipides dans le trafic intracellulaire, en utilisant la levure comme organisme modèle. Dans une première partie de ma thèse, j'ai étudié les hélices amphipathiques qui permettent le ciblage des protéines vers des compartiments cellulaires spécifiques. Dans une étude précédente, réalisé au laboratoire a montré que ces hélices amphipathiques interagissaient directement avec les lipides membranaires, ce qui permet un adressage spécifique des protéines en fonction des environnements lipidiques dans la cellule. Deux hélices amphipatiques ont fait l’objet de cette étude : le motif ALPS qui cible les vésicules de la voie sécrétoire précoce, et alpha-synucléine qui reconnaît et fixe les vésicules du compartiment trans-Golgi-membrane plasmique. Dans cette première partie de la thèse j’ai cherché à identifier des motifs similaires à celui d’alpha-synucléine dans les protéines de levure, et de déterminer leurs rôles dans la cellule. Dans une seconde partie de ma thèse, en collaboration avec le laboratoire du Dr Thierry Galli, j'ai étudié de nouveaux composants impliqués dans le métabolisme lipidique aux sites de contact entre le réticulum endoplasmique et la membrane plasmique. Les sites de contact membranaires sont des régions de proches appositions (de l'ordre de 10 à 30 nm) entre deux membranes, généralement entre la membrane du réticulum endoplasmique (RE) et une autre organelle. Ce sont principalement des sites de transfert des lipides et d'ions. Maja Petkovic dans le laboratoire de Thierry Galli a fait la découverte que la protéine SNARE du RE, Sec22, interagit avec une syntaxine (Stx1) de la membrane plasmique dans les neurones, ce qui permet un nouveau mécanisme de contact entre ces deux membranes. J’ai donc essayé de voir si ce mécanisme est conservé chez la levure. Les résultats que j'ai obtenus ont confirmé que la levure Sec22 est capable d'interagir avec une protéine SNARE SSO1 localisée à la membrane plasmatique et homologue de Stx1. J'ai trouvé par co-immunoprecipitation que Sec22 et SSO1 deux interagissent avec les protéines de transfert des lipides localisées aux sites de contact. L'utilisation d'une sonde spécifique au Phosphatidylinositol-4 phosphate (PI4P), nous a permis de montrer que Sec22 est impliquée dans la régulation du niveau de PI4P à la membrane plasmique. Pour disséquer les deux fonctions de Sec22, dans la voie sécrétoire et aux sites de contact, nous avons utilisé l'approche des suppresseurs multicopies dans la levure. Parmi les suppresseurs identifiés, nous avons trouvé le Sfh1, une protéine qui a un rôle potentiel dans le transfert des lipides. Ces résultats confirment bien ceux obtenus par l’équipe de Thierry Galli, montrant que Sec22 a un nouveau rôle aux sites de contact entre le RE et la membrane plasmique et suggèrent que ce complexe SNARE pourrait être impliqué dans transfert de lipides chez la levure
Eukaryotic cells are characterized by their internal membrane compartmentalization, with the various specialized organelles of the cell bounded by lipid membranes. Communication between different cellular compartments occurs via two transport pathways: vesicular transport and non-vesicular transport. Vesicular transport carries both proteins and lipids from one compartment to another in cells, whereas non-vesicular transport carries only lipids. An emerging idea is the important role that lipids play in cellular organization. Lipid binding amphipathic helices such as the ALPS (amphipathic lipid packing sensor) motif are targeted to membranes of a specific lipid composition, and hence act to transfer information encoded in membrane lipids to the vesicle trafficking machinery. The lipid composition of the membranes of different organelles is therefore of great importance. One mechanism that cells use to maintain the distinct lipid compositions of organelles is lipid transport, which occurs preferentially at membrane contact sites (MCS). MCS are regions of close appositions, on the order of 10 to 30 nm, between two membranes, generally between the membrane of the endoplasmic reticulum (ER) and another organelle. In my thesis, I addressed two aspects of how lipids and their transport function in intracellular trafficking, using yeast as a model system. First, I studied amphipathic motifs that mediate targeting of proteins to specific compartments in cells. Lipid binding amphipathic helices were shown in a previous study in the laboratory to mediate specific targeting to distinct lipid environments via direct protein-lipid interactions, both in vitro and in cells. One of these, the ALPS motif, targets vesicles of the early secretory pathway. The other, alpha-synuclein, targets vesicles travelling between the late Golgi, the plasma membrane and endosomes. I studied new potential alpha-synuclein-like motifs in yeast proteins, and their roles in cells. In a second project, in collaboration with the laboratory of Dr. Thierry Galli, I studied new compenents involved in lipid metabolism at contact sites between the endoplasmic reticulum and the plasma membrane. Maja Petkovic in the laboratory of Thierry Galli made the important discovery that the ER-localized SNARE protein Sec22 interacts with a plasma membrane syntaxin in neurons, thus providing a novel mechanism for mediating close contact between these two membranes. I addressed the question of whether this mechanism is conserved in yeast. The results I obtained confirmed that yeast Sec22 is able to interact with a SNARE protein localized to the plasma membrane, Sso1. I found by co-immunoprecitation that Sec22 and Sso1 both interact with lipid transfer proteins localized to ER-plasma membrane contact sites. Using a specific probe for phosphatidylinositol-4 phosphate (PI4P), we showed that Sec22 was involved in regulating the level of PI4P at the plasma membrane. These results extend to yeast those obtained by Maja Petkovic, Thierry Galli and colleauges showing that Sec22 has a novel role at ER-plasma membrane contact sites, and suggest that this SNARE complex might be implicated in lipid transfer at these sites in yeast

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Borges, Jean-Philippe. "Caractérisation structurale et immunologique d'allergènes alimentaires : les protéines de transfert de lipides de fruits". Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/209/.

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Les protéines de transfert de lipides possèdent, à leur surface, des régions responsables des interactions avec les molécules du système immunitaire. Ainsi, la liaison de ces régions appelées " épitopes ", avec les IgE de patients allergiques représente une étape importante dans l'étude des bases de la réaction allergique. Nous avons prédit et caractérisé ces régions épitopiques grâce à la combinaison d'outils de bioinformatique d'une part et, d'autre part, une étude biochimique et immunologique complétée par une étude de biologie moléculaire. La carte épitopique de cette famille d'allergènes de fruits a permis de mettre en évidence des zones consensus, certainement impliquées dans des réactions croisées entre les fruits. Des dosages de ces allergènes dans les fruits comestibles ont également été réalisés, ainsi que l'étude fine de leur localisation cellulaire. Des allergènes recombinants ont été produits; ils devraient permettre d'envisager le démarrage dans un futur proche de protocoles de désensibilisation des patients allergiques
Non-specific Lipid Transfer Proteins (nsLTP) share, on their molecular surface, some IgE-binding areas responsible for their allergenicity. Analyzing the conformation of these epitopes is an important step for understanding the molecular basis of the allergic reaction. IgE-binding epitopes of nsLTP from plants were predicted using a combination of predictive tools and subsequently characterized by biochemical and immunological approaches using IgE from allergic patients. Consensus epitopic regions responsible for some IgE-binding cross-reactivity among different Rosaceae fruits were identified by epitope mapping and conformational analysis. The localization and distribution of nsLTP allergens in the skin and pulp of different fruits has been investigated. NsLTP essentially concentrate as surface allergens in the pericarp of the fruits whereas the pulp contains lower amounts of allergens. NsLTP from apple and peach were produced as correctly-folded and reactive recombinant allergens, usable as standardized allergens for diagnosis and immunotherapy purposes

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Belmadi, Nawal. "Développement, formulation et biodistribution de vecteurs synthétiques pour le transfert de gènes dans le cadre de la thérapie génique de la mucoviscidose". Thesis, Brest, 2015. http://www.theses.fr/2015BRES0093/document.

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La mucoviscidose est une maladie monogénique, caractérisée par des mutations survenant au niveau du gène CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator). Le clonage en 1989 du gène CFTR a permis d’envisager de traiter cette maladie par thérapie génique. Cela consiste à transférer à l’aide d’un vecteur, une version normale du gène CFTR dans les cellules atteintes des patients. En raison de la gravité des complications pulmonaires, c’est l’épithélium respiratoire qui constitue aujourd’hui le tissu cible pour le transfert de gènes. Le principe de la thérapie génique est évidemment très séduisant et un certain nombre d’essais cliniques ont d’ores et déjà été réalisés. La thérapie génique nécessite des outils de vectorisation efficaces et compatibles avec une utilisation répétée en clinique.Mon sujet de thèse a porté donc sur le développement, la biodistribution et l’optimisation de vecteurs synthétiques (lipides cationiques) pour le transfert de gènes dans l’épithélium respiratoire. Au cours de mes travaux, nous avons donc pu mettre au point des lipophosphoramidates KLN47 fluorescents utiles pour les études de biodistribution in vivo. Comparés au KLN47 non fluorescent, ces nouveaux composés présentent les mêmes propriétés physicochimiques, à savoir une taille relativement petite et un potentiel zêta positif. Sur lignées cellulaires, nous avons montré que les nouvelles formulations étaient aussi efficaces que le KLN47, et pas ou peu toxiques. Ensuite, sur modèle animal, les profils de biodistribution de lipoplexes pégylés et non-pégylés ont été comparés après injection systémique. Les profils de biodistribution des lipoplexes pégylés et non-pégylés étaient similaires, cependant, la pégylation des complexes a conduit à une circulation prolongée dans la circulation sanguine, alors que l’expression du transgène (luciférase) était équivalente dans les deux cas. De plus, l’activité luciférase était similaire à celle obtenue avec le KLN47 non fluorescent. Nous avons ainsi démontré que l’ajout des sondes lipidiques fluorescentes dans la solution liposomale du KLN47, ne modifie pas ses propriétés physicochimiques et transfectantes. L’ensemble des résultats montre que nous disposons d’outils prometteurs pour les études de biodistribution in vivo. D’autres molécules ont également été testées avec succès
Cystic fibrosis is a monogenic disease characterized by mutations occurring at the CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator) gene. The clonining in 1989 of the CFTR gene has enabled to consider treating this disease by gene therapy. This consists of transferring a normal version of the CFTR gene in the affected patients’ cells, using a vector. Due to the severity of pulmonary complications, it is obvious that the respiratory epithelium constitutes the target tissue for the gene transfer. The principle of gene therapy is indeed very attractive and a number of clinical trials have already been made. Gene therapy requires vectorization tools that are efficient and compatible with repeated clinical use.My thesis has focused on the development, biodistribution and optimization of synthetic vectors (cationic lipids) for gene transfer in the respiratory epithelium. During my work, we were able to develop useful fluorescent KLN47 lipophosphoramidates for in vivo biodistribution studies. Compared to non fluorescent KLN47, these new compounds exhibit the same physicochemical properties: a relatively small size and a positive zeta potential. On cell lines, we found that the new formulations were as effective as the KLN47, with little or no toxicity. Then, in animal models, the biodistribution profiles of pegylated and non-pegylated lipoplexes were compared after systemic injection. The biodistribution profiles of pegylated and non-pegylated lipoplexes were similar. However, the pegylation of the complex resulted in prolonged circulation in the bloodstream, whereas transgene expression (luciferase) was equivalent in both cases. In addition, luciferase activity was similar to that obtained with the non-fluorescent KLN47. We have demonstrated that the addition of fluorescent lipid probes in the liposomal solution KLN47, does not change its physicochemical and transfectant properties. The overall results show that we have promising tools for in vivo biodistribution studies. Other molecules have also been tested successfully

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Dieryck, Wilfrid. "ETUDE DES GENES CODANT POUR LES PROTEINES DE TRANSFERT DE LIPIDES DE 9 ET 7 kDa DE BLE DUR. PRODUCTION DE LA PROTEINE DE TRANSFERT DE LIPIDES DE 9 kDa DANS E. COLI". Clermont-Ferrand 2, 1993. http://www.theses.fr/1993CLF21504.

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Les proteines de transfert de lipides (ltps) sont des proteines capables de realiser, in vitro, un transfert de lipides entre deux membranes. Le role physiologique de ces proteines est, a ce jour, inconnu. Cependant, les ltp du ble pourraient etre impliquees en technologie de la panification. C'est a ce titre que nous nous interessons a ces proteines et aux genes qui les codent. Deux clones d'adnc, ptd 4. 90 et ptd 18, codant respectivement pour une ltp de 9 kda et une ltp de 7 kda de ble dur (triticum durum) ont ete caracterises. Ces ltp sont synthetisees sous la forme de preproteines presentant un peptide signal. L'accumulation des transcrits de ltp a ete suivie au cours de la maturation et de la germination du grain de ble mettant en evidence d'une part, une regulation temporelle et spatiale et, d'autre part, une regulation differente des genes codant pour les ltp de 9 et 7 kda. Chez les bles durs il existe au moins 3 genes de ltp de 9 kda, un quatrieme gene est present chez les bles tendres (triticum aestivum). En utilisant les lignees nullitetrasomiques de chinese spring, deux de ces genes ont ete respectivement localises sur les chromosomes 5b et 5d. Par ailleurs, la presence d'un intron a ete mise en evidence dans les genes de ltp de 9 kda. L'analyse d'une part, des structures primaires des ltp de 9 et 7 kda de ble et, d'autre part, des donnees de structure secondaire et tertiaire de la ltp de 9 kda de ble suggere l'existence d'un site de fixation des lipides constitue de 2 helice- amphiphiles maintenues par un pont disulfure. La relation des ltp de 9 et 7 kda avec des inhibiteurs -amylases et de proteases des cereales est discutee. Dans le but d'etudier les relations entre la structure de la ltp de 9 kda de ble et la fonction de transfert de lipides, la ltp de 9 kda de ble a ete produite dans e. Coli sous la forme d'une proteine de fusion avec une proteine bacterienne fixant le maltose (mbp). Cette proteine de fusion a ete purifiee

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Averlant-Petit, Marie-Christine. "Etude par rmn 2d de la structure tridimensionnelle en solution aqueuse, de proteines de transfert de lipides, et de leurs interactions avec les lipides". Paris 6, 1994. http://www.theses.fr/1994PA066424.

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Les proteines de transfert de lipides (ns-ltp) d'origine vegetale, forment une famille de petites proteines (environ 9000 daltons), basiques, qui comprennent dans leurs sequences huit cysteines organisees en quatre ponts disulfure. Le role biologique de ces proteines est encore mal connu. In vitro, elles transferent les lipides d'une membrane artificielle a une autre. Ce travail presente la determination par resonance magnetique nucleaire (rmn), de la structure tridimensionnelle en solution de la ns-ltp extraite du mais. Dans ce but des experiences de rmn 2d du type tqf cosy et cosy dq, ont ete utilisees pour resoudre les problemes d'attribution des spectres, inherents a la repetition de certains acides amines (ser, ala, gly). A partir des contraintes deduites des experiences noesy, la structure de la ns-ltp de mais pu etre modelisee. Il s'agit d'un enroulement droit de quatre helices. Afin d'apprehender les relations structure/fonction de ces proteines, des etudes ont ete entreprises sur les interactions entre la ns-ltp de mais et des phospholipides tels que la lysolauroyl-phosphatidylcholine et la lyso-palmitoyl-phosphatidylcholine. Pour pouvoir etablir une comparaison avec une proteine de la meme famille, dont la structure a ete resolue au laboratoire, ces memes etudes ont ete realisees avec la ns-ltp de ble. Les donnees de la rmn suggerent une fixation du lipide a l'interieur des poches hydrophobes des deux proteines

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Arondel, Vincent. "Les proteines de transfert de lipides chez les vegetaux superieurs : purification, biosynthese, caracterisation d'adn complementaire". Paris 6, 1989. http://www.theses.fr/1989PA066543.

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Une proteine de transfert de lipides (ltp) a ete isolee et purifiee a partir de semences de tournesol. Elle presente des caracteristiques communes avec la plupart des ltp vegetales et est, en outre, capable de fixer les acyl-coa. La biosynthese de la ltp de mais a ete etudiee in vivo et in vitro. Des anticorps specifiques ont reconnu deux bandes qui correspondent, d'une part a la proteine purifiee et, d'autre part, a une proteine de plus faible masse moleculaire. Ces deux proteines sont tres abondamment synthetisees 4 jours apres la germination, sous forme de precurseurs de masse moleculaire plus elevee. Un adn complementaire (adnc) correspondant a la ltp de mais a ete obtenu. La comparaison de la sequence proteique deduite avec celle de la proteine purifiee montre l'existence d'un extrapeptide, qui presente toutes les caracteristiques d'un peptide signal. Un autre adnc codant pour la ltp de mais a ete obtenu, qui presente une insertion de 74 nucleotides situee a la fin de la partie codante, ce qui modifie la sequence c-terminale de la proteine deduite. Des analyses effectuees par hybridation southern montrent que la ltp de mais est codee par un ou deux genes, et suggerent que les deux adnc derivent d'un meme gene. Les ltp vegetales presentent entre elles de nombreuses homologies de sequences, notamment au niveau de certains residus charges, ainsi que des 8 residus cysteine qui sont tous conserves. Une banque d'adnc de tournesol a ete constituee, et criblee avec les sondes d'adnc de mais, mais aucun clone correspondant a la ltp de tournesol n'a pu etre isole

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Jacq, Adélaïde. "Caractérisation fonctionnelle d'AtLTP2, une protéine de transfert de lipides impliquée dans le contrôle de l'intégrité de la cuticule chez Arabidopsis thaliana". Thesis, Toulouse 3, 2016. http://www.theses.fr/2016TOU30316.

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Resumen

La cuticule est une couche hydrophobe déposée à la surface des organes aériens des plantes terrestres. Elle joue de nombreux rôles allant de la résistance face à divers stress biotiques et abiotiques à son implication dans divers processus de développement. Bien que la compréhension de la biosynthèse des composés cuticulaires a considérablement augmenté ces dernières années, les mécanismes de transport de ces lipides cuticulaires à travers la paroi et d'assemblage au sein de la cuticule, sont encore peu caractérisés. Les nsLTPs (non-specific Lipid Transfer Protein), sont codées par une famille multigénique impliquée dans de nombreuses fonctions biologiques. Parmi les rôles proposés pour les nsLTPs, il est supposé depuis longtemps qu'elles pourraient transporter les précurseurs cuticulaires à travers la paroi et ainsi contribuer à la formation de la cuticule. Dans ce travail de thèse, nous nous sommes servis du modèle des hypocotyles étiolés d'A. thaliana afin de caractériser le fonction biologique d'AtLTP2. En effet, AtLTP2 est une protéine de transfert de lipides présente de façon abondante et est la seule représentante des nsLTPs dans le protéome pariétal des hypocotyles étiolés. Nous avons tout d'abord confirmé que l'expression d'AtLTP2 est forte dans les très jeunes stades de développement de la plantule étiolée et est restreinte aux cellules de l'épiderme des organes aériens, sur lesquelles se dépose la cuticule. Conformément aux résultats de protéomique obtenus au préalable, AtLTP2 fusionnée à un marqueur fluorescent est localisée au niveau de la paroi mais également et de façon surprenante au niveau des plastes. Cette remarquable double localisation d'une nsLTP dans la paroi et dans les plastes n'a à ce jour, jamais été décrite. De plus, le mode de transport d'AtLTP2 vers les plastes est particulièrement original puisque la protéine emprunte d'abord la voie de sécrétion avant d'être finalement adressée aux plastes. En analysant l'adressage de différentes versions d'AtLTP2 tronquée, nous avons pu montrer que c'est certainement sa conformation tertiaire qui est cruciale pour sa localisation plastidiale. Par des approches de génétique inverse, nous avons pu montrer que les mutants atltp2 présentaient une augmentation importante de la perméabilité de sa cuticule fortement corrélée à une ultrastructure de l'interface cuticule-paroi très perturbée alors qu'aucun changement dans la composition biochimique de la cuticule n'a été détecté. Ces résultats nous ont permis de proposer un nouveau rôle structural pour AtLTP2, elle interviendrait pour maintenir l'adhésion des deux couches que sont la cuticule hydrophobe et la paroi hydrophile. Ainsi, en maintenant l'intégrité de l'interface entre la cuticule et la paroi, AtLTP2 participerait au maintien de la fonction de barrière cuticulaire limitant les pertes d'eau. De façon intéressante, la double localisation d'AtLTP2 dans la paroi et les plastes nous laisse supposer que d'autres fonctions pourraient être assignées à AtLTP2. L'identification des mécanismes moléculaires mis en jeu dans le maintien de l'homéostasie cuticule-paroi et dans la double localisation d'AtLTP2 constituera un challenge pour de futures recherches visant à toujours mieux identifier les acteurs de la formation de cette barrière protectrice, la cuticule
The cuticle is a hydrophobic layer that covers the surface of the aerial organs of land plants. The cuticle plays numerous roles in plants from resistance against biotic and abiotic stresses to several developmental processes. Although the understanding of the biosynthesis of cuticle has considerably increased last years, the mechanisms underlying the transport of cuticular lipids through the cell wall and their assembly within the cuticle have been poorly characterized. nsLTPs (non-specific Lipid Transfer Proteins) are encoded by a multigenic family in A. thaliana and are involved in several biological processes. Among the different roles proposed for nsLTPs, it has long been suggested that they could transport cuticular precursor across the cell wall and then could contribute to the cuticle formation, despite the absence of formal evidence for individual members. Here we took advantage of the A. thaliana etiolated hypocotyls model to characterize the biological function of AtLTP2. Indeed, AtLTP2 was found to be abundant and the unique nsLTP member in the cell wall proteome of etiolated hypocotyls. We have first confirmed the high level of AtLTP2 expression during the young developmental stages of etiolated seedlings that was restricted to the epidermal cells of aerial organs, that are covered by the cuticle. In agreement with the cell wall localization determined by previous proteomic studies, we localized AtLTP2 fused to a fluorescent marker to the cell wall, but also and surprisingly to the plastids. This remarkable dual localization in the cell wall and plastids was never described before for a nsLTP. Furthermore, the mechanism of AtLTP2 transport to the plastids was particularly original because AtLTP2 can first undergo import into the ER/ secretory pathway and then sorting to the cell wall and the plastids. By studying the sub-cellular localization of truncated version of AtLTP2, we have shown that its tertiary conformation was crucial for the plastidial localization. By using reverse genetic approaches, we have shown that atltp2 mutants displayed a high increase in cuticle permeability strongly correlated with a deep modification of the ultra-structure at the cuticle-cell wall interface, while no changes in biochemical composition of the cuticle were detected. These results prompt us to suggest a novel structural role for AtLTP2. AtLTP2 could be involved in maintaining the accurate sealing between the hydrophobic cuticle and the hydrophilic underlying cell wall. Then, by preserving the integrity of the cuticle-cell wall interface, AtLTP2 could act on the barrier function of the cuticle limiting water loss. Interestingly, the dual localization to the cell wall and plastids suggested that other functions could be assigned to AtLTP2. The elucidation of the molecular mechanisms by which AtLTP2 establish cell wall-cuticle homeostasis and the exact function of the dual targeting will be challenging tasks in the future to better identify the main actors of the formation of the cuticle

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SOUFLERI, IOANNA. "Etude de l'expression des genes codant pour les proteines de transfert de lipides chez brassica napus". Paris 6, 1995. http://www.theses.fr/1995PA066210.

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Les proteines de transfert de lipides (ltp) sont definies par leur capacite a transferer in vitro des phospholipides entre deux systemes membranaires. Certaines ltp sont egalement capables de fixer in vitro des acides gras. Cependant, le role physiologique in vivo de ces proteines reste speculatif. Le protocole de rapid amplification of cdna ends (race-pcr) a ete employe, afin d'isoler les adnc codant pour les ltp chez le colza (brassica napus l. ). Ce travail a abouti a l'isolement de quatre differents clones adnc: ltp1, ltp2, ltp3 et ltp4. Une etude de l'expression temporelle et spatiale de genes codant pour ces quatre clones a ete effectuee. Cette etude a permis de montrer que trois d'entre eux (ltp1, ltp2 et ltp3) sont specifiques de la germination. De plus, les etudes d'immunocytolocalisation et d'hybridation in situ ont demontre leur presence dans l'ensemble des tissus cotyledonaires. L'effet de facteurs lies au stress sur l'expression des genes codant pour les ltp a ete etudie. Enfin, l'hypothese d'une intervention des ltp dans les mechanismes de defense des plantes contre les pathogenes a ete testee par l'infection des plantules de brassica napus par le pathogene leptosphaeria maculans. Une expression des genes codant pour les ltp lors de l'installation du pathogene chez la plante a ete constatee

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Fabio, Karine. "Nouveaux lipides galactosyles et détergents dimérisables pour la formulation de vecteurs synthétiques de transfert de genes". Nice, 2004. http://www.theses.fr/2004NICE4104.

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Le sujet de cette thèse s’articule autour de deux axes et concerne l’élaboration de nouveaux vecteurs pour le transfert de gènes. Le premier axe concerne des bolaamphiphiles galactostylés pour le ciblage d’hépatocytes via une internalisation spécifique par le récepteur asialoglycoprotéique. L’évaluation in vitro de ces lipides démontre leur efficacité comme agents de transfert de gènes non spécifiques et une spécificité de transfection d’hépatocytes sous certaines onditions. Le second axe concerne des détergents dimérisables perfluoralkyle et des polymères hydrophiles (polyéthylène glycol) pour l’amélioration de la biodisponibilité des vecteurs de transfert de gènes et le ciblage du récepteur folate de cellules tumorales. Utilisés en-dessous de leur concentration micellaire critique ces détergents condensent efficacement l’ADN en particules nanométriques et monomoléculaires en ADN. Les évaluations in vitro ne montent pas d’efficacité de transfection de ces nanoparticules.

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Desbourdes, Céline. "Nucléoside diphosphate kinase D : une protéine mitochondriale bifonctionnelle". Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017GREAV004/document.

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Les nucléosides diphosphate kinases (NDPK) sont essentielles pour la génération des nucléosides triphosphates (NTPs) en utilisant l’ATP et des NDPs. L’isoforme mitochondriale de NDPK (NDPK-D), située dans l’espace intermembranaire des mitochondries, possède deux modes de fonctionnement. Dans le premier mode (« phosphotransfert »), la protéine a une activité de kinase comme les autres enzymes NDPK. Dans ce mode de fonctionnement, NDPK-D produit du GTP pour la protéine optique atrophy 1 (OPA1), une GTPase impliquée dans la fusion des mitochondries, et de l’ADP pour le translocateur à adénine (ANT) et l’ATPase mitochondriale pour la régénération d’ATP. Le second mode de fonctionnement est appelé « transfert de lipide » et est lié à la capacité de la protéine à se lier aux phospholipides anioniques, particulièrement la cardiolipine (CL). Dans ce mode NDPK-D peut réticuler les deux membranes mitochondriales et transférer CL de la membrane interne vers la membrane externe des mitochondries, pouvant servir de signal pour la mitophagie et l’apoptose. Ce travail a pour objectif d’étudier plus en détails ces différentes fonctions de NDPK-D. En utilisant des cellules HeLa exprimant de façon stable la protéine sauvage, kinase inactive (mutation H151N) ou incapable de se lier aux lipides (mutation R90D) et des cellules épithéliales de poumons de souris, nous montrons (i) une grande proximité entre NDPK-D et OPA1 qui conduit au channeling de GTP par NDPK-D pour OPA1, (ii) le rôle essentiel de NDPK-D pour l’externalisation de CL vers la surface des mitochondries pendant la mitophagie, servant de signal de reconnaissance pour le complexe LC3-II-autophagosomes afin d’éliminer les mitochondries endommagées, (iii) la possible inhibition de l’externalisation de CL par la présence de complexes NDPK-D/OPA1, et (iv) un phénotype pro-métastatique des cellules HeLa exprimant la NDPK-D mutée (H151N ou R90D), caractérisé par un fort potentiel invasif et migratoire, un profil protéique altéré, et des modifications au niveau structural et fonctionnel du réseau mitochondrial. Finalement, une première stratégie d’expression et de purification de la protéine OPA1 entière a été établie pour de futures études in vitro des complexes NDPK-D/OPA1
The nucleoside diphosphate kinases (NDPK) are essential for generation of nucleoside triphosphates (NTPs) using ATP and NDPs. The mitochondrial NDPK isoform (NDPK-D) located in the mitochondrial intermembrane space is found to have two modes of function. First, the phosphotransfer mode in which the protein has a kinase activity like other NDPK enzymes. In this mode, NDPK-D produces GTP for the optic atrophy 1 protein (OPA1), a GTPase involved in mitochondrial fusion, and ADP for the adenylate translocator (ANT) and the mitochondrial ATPase for ATP regeneration. The second mode of function is called lipid transfer and is related to the capacity of NDPK-D to bind anionic phospholipids, especially cardiolipin (CL). In this mode, the protein can cross-link the two mitochondrial membranes and transfer CL from the inner to the outer mitochondrial membrane, which can serve as a signal for mitophagy and apoptosis. This work aims to study these NDPK-D functions in more detail. With the use of HeLa cells stably expressing the wild-type, kinase inactive (H151N mutation) or lipid binding deficient (R90D mutation) NDPK-D and mouse lung epithelial cells, we show (i) the close proximity between NDPK-D and OPA1 that leads to GTP channeling from NDPK-D to OPA1, (ii) the essential role of NDPK-D for CL externalization to the mitochondrial surface during mitophagy, serving as a recognition signal for LC3-II-autophagosomes to eliminate damaged mitochondria, (iii) the possible inhibition of CL externalization due to the presence of NDPK-D/OPA1 complexes, and (iv) a pro-metastatic phenotype of HeLa cells expressing either of the NDPK-D mutants (H151N or R90D), characterized by high invasive and migratory potential, altered proteomic profile and changed mitochondrial network structure and function. Finally, a first bacterial expression and purification strategy for full-length OPA1 has been established for future in vitro studies of NDPK-D/OPA1 complexes

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Elchebly, Mounib. "Transfert des lipides entre les lipoprotéines, chez les diabétiques non insulino-dépendants : influence des protéines de transfert et des propriétés physico-chimiques des lipoprotéines". Lyon 1, 1995. http://www.theses.fr/1995LYO1T025.

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Tranchant, Isabelle. "Conception et synthèse de vecteurs non cationiques pour le transfert de gènes". Paris 6, 2002. http://www.theses.fr/2002PA066356.

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Guyard, Valentin. "Régulation de la biogenèse des Gouttelettes Lipidiques aux sites de contacts membranaires Réticulum Endoplasmique-Mitochondrie". Electronic Thesis or Diss., université Paris-Saclay, 2024. http://www.theses.fr/2024UPASL062.

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Les cellules eucaryotes possèdent la capacité de stocker une grande quantité de lipides neutres au sein des gouttelettes lipidiques (GLs), des organites spécialisés composés d'un cœur de lipides neutres entouré d'une monocouche de phospholipides. Les GLs sont des organites hautement dynamiques qui se remodèlent en réponse aux changements métaboliques, permettant ainsi à la cellule de s'adapter aux fluctuations d'énergie. Les GLs se forment directement à partir du réticulum endoplasmique (RE) à des sites qui sont marqués par seipin, une protéine insérée dans le RE dont les mutations provoquent des maladies neurodégénératives ou des lipodystrophies. Cependant, les mécanismes permettant la formation des GLs dans la cellule restent mystérieux. De plus, il n'est toujours pas clair où les GLs émergent du RE. Mes études de doctorat ont contribué à découvrir une fonction cruciale des sous-domaines du RE en contact avec les mitochondries (connus sous le nom de membranes associées aux mitochondries (MAM)), dans la régulation de la biogenèse des gouttelettes lipidiques (GL), révélant une nouvelle jonction tripartite Mitochondrie-RE-GL. J'ai découvert que deux protéines de transfert de lipides, ORP5 et ORP8, sont recrutées dans les MAM aux premières étapes de la biogenèse des GL, où elles facilitent leur formation grâce à leur activité de transfert de lipides. Il est intéressant de noter que les MAM où ORP5 se localise sont enrichies en acide phosphatidique (PA), un lipide dont on pense qu'il influence la biogenèse des GL. De plus, j'ai découvert une nouvelle interaction entre ORP5 et seipin, une protéine majeure de la biogenèse des GL, qui régule sa localisation à la jonction Mito-RE-GL. Mes derniers résultats suggèrent que les protéines ORP5/8 et seipin pourraient coopérer pour réguler le métabolisme du PA et que les contacts Mito-RE-GL sont des sites importants pour le transfert de lipides et le stockage d'énergie à l'intérieur de la cellule
Eukaryotic cells possess the ability to store large amounts of neutral lipids in lipid droplets (LDs), specialized organelles composed of a core of neutral lipids surrounded by a monolayer of phospholipids. LDs are highly dynamic organelles that constantly remodel in response to metabolic changes, allowing cells to adapt to energy fluctuations. They arise from the endoplasmic reticulum (ER) at sites that are physically marked by seipin, an integral ER protein whose mutations result in lipodystrophies and neurological disorders. However, the molecular mechanisms underlying LDs biogenesis and maintenance within the cell remain poorly understood. Also, where LDs originate from the ER is still unclear. My PhD studies contributed to uncover a crucial function of ER subdomains in contact with Mitochondria (known as Mitochondria-Associated Membranes (MAM), in the regulation of lipid droplet biogenesis, revealing a novel tripartite Mito-ER-LD junction. I have found that two lipid transfer proteins, ORP5 and ORP8, are recruited to MAM at early steps of LD biogenesis where they facilitate their formation, through their lipid transfer activity. Interestingly, I found that the MAM where ORP5 localizes are enriched in phosphatidic acid (PA), a lipid proposed to influence LD biogenesis. I uncovered a novel interaction between ORP5 and seipin, a major protein of LD biogenesis, regulating its localization to the Mito-ER-LD junction. My latest results suggest that ORP5/8 and seipin proteins could cooperate to regulate PA metabolism and that Mito-ER-LD contacts are important sites for lipid transfer and energy storage inside the cell

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Gaucheron, Jérôme. "Synthèse et évaluation de nouveaux lipides comme composants de vecteurs non-viraux pour le transfert de gènes". Nice, 2000. http://www.theses.fr/2000NICE5483.

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Les travaux réunis dans cette thèse concernent la synthèse et l'évaluation in vitro et in vivo de nouveaux lipides comme composants de vecteurs non-viraux pour le transfert de gènes destinés à la thérapie génique. Ainsi, deux séries de lipides ont été développées et évaluées. La première est constituée par des lipides fluorés pour la formulation de lipoplexes "fluorés", la seconde, par des lipides bi-fonctionnels glyco-polyaminés pour la formulation de lipoplexes fonctionnels destinés à transfecter plus spécifiquement des cellules qui possèdent des récepteurs à glycosides.

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Sturbois, Bénédicte. "Transfert vésiculaire des lipides chez Allium porrum L. : effet de la température in vivo, reconstitution in vitro, isolement des intermédiaires vésiculaires". Bordeaux 2, 1996. http://www.theses.fr/1996BOR28416.

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Monnet, François-Paul. "Caractérisation d'une protéine de fixation de lipides du blé dur (purification, séquençage, ADN complémentaire) : relations aux protéines végétales de transfert de lipides et aux inhibiteurs d'amylase/trypsine des céréales". Montpellier 2, 1990. http://www.theses.fr/1990MON20311.

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Dans le cadre de l'etude des interactions lipides/proteins du ble dur, trois proteines ont ete purifiees. La premiere (7kda) est capable de realiser in vitro un transfert de lipides entre des liposomes et des mitochondries et est nommee proteine de transfert de lipides de 7kda ou 7kda ltp (lipid transfer protein). Les deux autres proteines (9kda) montrent des compositions en acides amines similaires a celles de ltps d'origine vegetale precedemment caracterisees. Une helice alpha a caractere amphiphile est predite du cote n-terminal de la ltp 7kda qui pourrait expliquer l'activite de transfert de lipides associee. Pour les ltps 9kda aucune structure de ce type n'a ete mise en evidence. La ltp 7kda est synthetisee sous la forme d'un precurseur de plus forte masse moleculaire, l'extension n-terminale presentant les caracteristiques d'un peptide signal. Les ltps semblent donc traverser la membrane du r. E. Et ceci semble incompatible avec un role de transporteur cytosolique de lipides in vivo. Les ltps sont semblables aux inhibiteurs d'alpha-amylase/trypsine des cereales du point de vue de leur faible masse moleculaire, leur organisation autour d'un squelette cysteine conserve, leur synthese sous forme d'un precurseur comprenant un peptide signal et leurs proprietes d'interaction avec les lipides. L'etude du routage et de la localisation de ces ltps sera poursuivie

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DA, SILVA Pedro. "ÉTUDE STRUCTURALE ET DYNAMIQUE PAR RÉSONANCE MAGNÉTIQUE NUCLÉAIRE, D'UNE PROTÉINE DE TRANSFERT DE LIPIDES ISOLÉE DANS LE TABAC". Phd thesis, Université d'Orléans, 2004. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00009320.

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La LTP1 extraite de feuille de Nicotiana tabacum, nommée LTP1_1, a été produite dans Pichia pastoris. Nous avons ainsi déterminé sa structure tridimensionnelle par RMN 2D, 3D et modélisation moléculaire. Différentes études d'interaction et de dynamique ont ensuite mis en évidence des propriétés de fixation particulières comparativement aux autres LTPs. Ces travaux ont servi de base à la détermination de structures d'autres LTP1 de tabac par modélisation comparative et à des simulations de dynamique moléculaire à température ambiante et à haute température. De plus, nous avons cartographié la cavité hydrophobe de la LTP1_1 en utilisant la RMN du xénon hyperpolarisé.
L'ensemble de ces travaux a permis d'identifier les acides aminés impliqués spécifiquement dans la fixation des lipides. Nous avons découvert que les propriétés remarquables de fixation des LTP1 sont liées non seulement à leur structure originale mais également à leur dynamique particulière.

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Da, Silva Pedro. "Etude structurale et dynamique par résonance magnétique nucléaire, d'une protéine de transfert de lipides isolée dans le tabac". Orléans, 2004. http://www.theses.fr/2004ORLE2062.

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La LTP1 extraite de feuille de Nicotiana tabacum, nommée LTP1_1, a été produite dans Pichia pastoris. Nous avons ainsi déterminer sa structure tridimensionnelle par RMN 2D, 3D et modélisation moléculaire. Différentes études d'interaction et de dynamique ont ensuite mis en évidence des propriétés de fixation particulières comparativement aux autres LTPs. Ces travaux ont servi de base à la détermination de structures d'autres LTP1 de tabac par modélisation comparative et à des simulations de dynamique moléculaire à température ambiante et à haute température. De plus, nous avons cartographié la cavité hydrophobe de la LTP1_1 en utilisant la RMN du xénon hyperpolarisé. L'ensemble de ces travaux a permis d'identifier les acides aminés impliqués spécifiquement dans la fixation des lipides. Nous avons découvert que les propriétés remarquables de fixation des LTP1 sont liées non seulement à leur structure originale mais également à leur dynamique particulière.

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Gallo, Alessandra. "Role of non-vesicular secretion in neuronal development". Thesis, Université de Paris (2019-....), 2019. https://theses.md.univ-paris-diderot.fr/GALLO_Alessandra_va.pdf.

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La croissance des neurites au cours du développement neuronal nécessite une expansion de la membrane plasmique (MP) via l’insertion de nouveaux lipides et protéines. Cet événement se produit à la suite de la fusion des vésicules de sécrétion avec la MP. Cependant, plusieurs études ont montré que le transfert non-vésiculaire de lipides au niveau des sites de contact entre le réticulum endoplasmique (RE) et la MP joue aussi un rôle dans la croissance des cellules. Des membres de la famille de synaptotagmines étendues (E-Syts) ont été identifiés comme protéines de transfert des lipides dépendantes du Ca2+ au niveau des jonctions RE-MP.Nous avons découvert qu’un nouveau complexe SNARE aux sites de contact RE-MP, composé par Sec22b et Stx1, est impliqué dans la croissance des neurites bien qu’il soit incapable de favoriser la fusion membranaire. Cependant, la manière dont ce complexe participe à l’extension des neurites reste à élucider. Chez la levure, Sec22 interagit avec les protéines de transfert des lipides de la famille OSH, enrichis aux sites de contact RE-MP.Sur la base de ces observations, notre hypothèse est que le transfert non-vésiculaire de lipides induit par E-Syts au niveau des jonctions RE-MP contenant Sec22b pourrait contribuer à la croissance neuronale. L’objectif de ma thèse était d’explorer cette hypothèse. Nous montrons que Sec22b interagit avec E-Syt2 et Stx1 dans les cellules PC12 et avec E-Syt2, E-Syt3 et Stx3 dans les cellules HeLa. L’interaction Sec22b/E-Syt2 dépend du domaine Longin de Sec22b. La surexpression des E-Syts stabilise l’association Sec22b/Stx1, alors que l’inactivation des E-Syts provoque l’effet inverse. La surexpression de E-Syt2 de type sauvage, mais pas des mutants incapables de transférer les lipides ou non fixés au RE, augmentent la formation de filopodes axonaux et la ramification de neurites dans les neurones en développement. Cet effet est inhibé par une neurotoxine clostridiale clivant Stx1, par l’expression du domaine Sec22b Longin et par un mutant Sec22b ayant une extension entre les domaines SNARE et transmembranaire.En conclusion, mes résultats soutiennent l’idée que les sites de contact Sec22b/Stx1 contribuent à l’expansion de la MP via une interaction avec des protéines de transfert de phospholipides comme E-Syts
The growth of neurites during neuronal development requires a massive increase of surface area via the insertion of new proteins and lipids. This event occurs through the fusion of secretory vesicles with the plasma membrane (PM), the final step of the secretory pathway. Recently, non-vesicular transfer of lipids at contacts between endoplasmic reticulum (ER) and PM was shown to contribute to membrane expansion. Members of the ER-integral membrane protein Extended-Synaptotagmin (E-Syt) family have been identified as Ca2+-dependent lipid transfer proteins at ER-PM contact sites, and shown to transfer glycerophospholipids via their lipid binding domains. The laboratory previously found that a novel ER-PM SNARE complex, composed of the ER-resident Sec22b and the neuronal plasmalemmal Stx1, is involved in neurite growth despite being unable to mediate membrane fusion. However, how this complex participates to neurite extension remained to be elucidated. In yeast, Sec22 interacts with lipid transfer proteins of the OSH family, enriched at the ER- PM contacts, supporting a role for Sec22b-populated ER- PM junctions in non-vesicular lipid transport between these bilayers. Based on these observations, our starting hypothesis was that E-Syts-mediated non-vesicular lipid transfer at Sec22b-populated ER-PM contacts, might contribute to neurite growth. The goal of my PhD was to explore this hypothesis with two specific questions: 1-What are the partners of Sec22b complexes which might be involved in the unconventional mechanisms of membrane expansion? 2-What is the mechanism whereby the non-fusogenic SNARE Sec22b/Stx1 complex acts in neuronal development?Here we show that Sec22b interacts with E-Syt2 and Stx1 in PC12 cells and with E-Syt2, E-Syt3 and Stx3 in HeLa cells. Overexpression of E-Syt2 stabilized Sec22b-Stx3 association, whereas silencing of E-Syt2 had the opposite effect. Overexpression of E-Syt2 full length, but not the mutant forms which are unable to transfer lipids or attach to the ER, increased the formation of filopodia particularly in the growing axon. Finally, this effect was inhibited by a clostridial neurotoxin cleaving Stx1, by the expression of Sec22b Longin domain and a by a Sec22b mutant with extended linker between SNARE and transmembrane domains.In conclusion, these results support the hypothesis that Sec22b/Stx1 junctions may contribute to membrane expansion via an interaction with phospholipid transfer proteins like E-Syts

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Morillon, Valérie. "Etude des transferts d'eau au travers d'enrobages comestibles à base de lipides, à différentes températures". Dijon, 1999. http://www.theses.fr/1999DIJOS071.

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Les dégradations des aliments sont souvent dues à des transferts de matière, et en particulier des transferts d'eau qui provoquent des modifications telle que la perte de croustillance des produits céréaliers peu hydratés. Des emballages comestibles doivent alors être utilisés comme couche barrière, dans les produits hétérogènes pour limiter ces transferts. A ce jour, très peu de données ont été publiées concernant l'influence des températures négatives et de l'état physique de l'eau sur la perméabilité des films comestibles et synthétiques. Ce travail a porté sur l'étude des mécanismes du transfert d'eau au travers d'enrobages à base de lipides, en fonction de leur formulation, de la température et de l'état physique de l'eau au contact du film. Bien que l'enrobage soit à base de lipides, ses propriétés barrière à l'eau dépendent de la sorption et plus particulièrement des possibilités de dissolution du saccharose. L'état physique de l'eau affecte son transfert au travers de films hydrosensibles. La diminution de la température réduit les transferts, parce qu'elle augmente la teneur en solides de la matière grasse et parce qu'elle diminue fortement la diffusivité de l'eau dans la matrice. L'étude de la structure des enrobages, par différentes approches, apporte des informations complémentaires à celles de l'efficacité barrière à l'eau. La résistance mécanique des enrobages est ainsi due aux composés solides. Des calculs de durée limite d'utilisation optimale ont montré qu'a -10°C, la perméabilité à l'eau des enrobages déterminée au laboratoire explique bien le comportement du produit industriel alors que ce n'est plus le cas a -18°C, indiquant que d'autres paramètres doivent être pris en compte.

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Moulin, Philippe. "Modifications des lipoprotéines induites in vivo par la protéine de transfert des esters de cholestérol : études chez l'homme et les souris transgéniques". Lyon 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LYO1H259.

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Méjanelle, Laurence. "Transfert et degradation du carbone organique dans les eaux profondes : pigments et acides gras de differentes classes de lipides". Paris 6, 1995. http://www.theses.fr/1995PA066393.

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Les chlorophylles et carotenoides de particules atlantiques de 50 a 1700m permettent d'etudier deux transports verticaux de matiere organique oceanique vers les eaux profondes: la sedimentation d'agregats phytoplanctoniques, et celles de pelotes fecales. Des experiences de degradation sont realisees in situ par 3100 et 4600 m de fond, les analyses de carbone organique et d'acides gras de sept classes de lipides permettent de discerner quels organismes degradent les detritus (bacteries et protozoaires) et quelles sont leurs relations trophiques. D'un point de vue geochimique, les caracteristiques lipidiques des bacteries et des protozoaires profonds (barophiles) mises en evidence presentent un interet certain. Des acides gras polyinsatures et des acides de 20 a 26 atomes de carbone caracterisent les bacteries profondes, cette empreinte bacterienne est inaccoutumee. Ces resultats remettent en cause certaines assertions geochimiques

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TALLEUX, REIDIBOYM LYDIA. "Embryogenese somatique chez le merisier (prunus avium l. ). Recherche de marqueurs lipidiques et d'une proteine de transfert des lipides". Compiègne, 1998. http://www.theses.fr/1998COMP1127.

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Des lignees embryogenes de prunus avium ont pu etre entretenues en presence d'auxine et de cytokinines, sous forme d'un tissu embryogenes, au sein du quel se differencient des pro-embryons et des embryons globulaires. Le transfert du tissu embryogene sur un milieu sans regulateur de croissance permet le developpement synchronise des embryons somatiques cotyledonaires. Afin de caracteriser d'un point de vue biochimique les etapes tardives de l'embryogenese somatique, une comparaison de la composition lipidique des tissus embryogenes et du cal non embryogene a ete effectuee. Le tissu embryogene presentent des teneurs plus elevees en phospholipides, notamment en phosphatidylcholine. Il est caracterise par la presence de phosphatidylcholine riche en acide linoleique alors que le cal contient de la phosphatidylcholine riche en acide oleique. Le tissu embryogene presente des teneurs plus elevees en triglycerides que le cal. Leurs compositions en sterols sont egalement differentes. Ainsi, le tissu embryogene presentent un rapport stigmasterol/sitosterol 9 fois superieures a celui du cal non embryogene. Une proteine de transfert des lipides de 9 kda a ete mise en evidence parmi les proteines liees aux parois cellulaires du tissu embryogene, et celles secretees dans le milieu de culture. Cette proteine est presente dans certaines cellules du tissu embryogene, associee a des composes de nature lipophile. La synthese de cette proteine diminue progressivement dans les embryons somatiques au cours de leur developpement. Les embryons somatiques cotyledonaires ne sont pas capables de convertir en plantes. L'analyse de leur composition en lipides et en acides gras a montre que leur profil lipidique etait proche de celui des embryons zygotiques immatures. Un traitement a 4\c augmente leurs teneurs en lipides neutres, en phosphatidylethanolamine et en phosphatidylcholine, jusqu'a des teneurs superieures ou equivalentes a celles des embryons zygotiques matures. Le froid a egalement permis 15% de conversion.

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Vignols, Florence. "Etude de l'expression des genes codant pour les proteines de transfert de lipides chez le riz (oryza sativa l. )". Paris 6, 1993. http://www.theses.fr/1993PA066482.

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Chez le riz, l'identite de deux proteines initialement caracterisees comme inhibiteurs probables d'amylases et de proteases a ete re-evaluee. Ces proteines ressemblent en effet a des proteines de transfert de lipides (ou ltp) qui sont supposees jouer un role important dans la biogenese des membranes. Des tests de transfert de lipides in vitro indiquent que ces proteines sont capables de transferer des lipides entre membranes artificielles. Elles sont d'autre part reconnues par des anticorps anti-ltp. Leur identite a donc ete modifiee en proteines de transfert de lipides de riz. L'immunocytolocalisation de ces proteines in situ dans les tissus de riz a permis de les detecter dans les regions meristematiques. L'existence de deux proteines caracterisees comme ltp chez le riz suggerait la presence d'autres isoformes de ces proteines. Le criblage d'une banque adnc de graines de riz a donc ete realise en utilisant une sonde ltp et un sequencage systematique des clones positifs a permis d'isoler cinq adnc codant pour des isoformes differentes de ltp. Ces differents genes sont regroupes en familles d'homologie (trois) et sont exprimes differemment dans les tissus de riz. Une analyse en southern blot indique qu'il existerait six genes en tout codant pour ces proteines dans ce materiel. Un clone genomique codant pour une ltp de riz a ete isole et caracterise. L'analyse de son promoteur revele la presence de sequences qui sont reconnues par des facteurs de transcription intervenant dans la regulation. Des experiences en expression transitoire ont permis de delimiter une region du promoteur qui contiendrait des elements importants pour l'expression. Cette region contient notamment un element de type myb. L'analyse du promoteur dans des plants de tabac transgeniques a permis de montrer que l'expression du gene dirigee par le promoteur est detectee dans les cellules meristematiques, dans les cellules specialisees de l'epiderme des feuilles et dans les grains de pollen. Une expression du gene est par ailleurs induite par la blessure. Ces resultats suggerent un role de ces proteines dans la division cellulaire

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Kandilian, Razmig. "Etude du couplage entre limitation azotée et transfert de lumière pour la production de lipides par microalgues en photobioréacteur". Nantes, 2015. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=d891c15e-e6c6-4aa1-8ef7-c9612ca8a2ab.

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Les microalgues sont connues pour leur fort potentiel à accumuler les TAG, qui peuvent se convertir en biodiesel. Cependant, la culture des microalgues en photobioréacteurs (PBRs) souffre généralement d'une perte au niveau de la productivité, en raison des limitations du transfert de la lumière au sein de la culture. Afin d’améliorer les productivités de TAG, l'analyse du transfert radiatif doit être effectuée afin d’étudies son rôle dans le processus. La première partie de cette étude a porté sur la détermination des propriétés optiques des microorganismes photosynthétiques. Des méthodes théoriques et expérimentales de détermination de ces propriétés ont été comparées. De plus, une nouvelle méthode expérimentale a été développée pour déterminer la section efficace d'absorption des cellules. La deuxième partie s’est focalisée sur la compréhension de la réalisation entre la vitesse spécifique des photons par la culture et la production intracellulaire de TAG pour des cultures de microalgues en limitation et carence azotées. Une forte accumulation en TAG ainsi qu’une productivité importante en TAG ont ainsi coïncidé avec une vitesse élevée d'absorption d’énergie, ce qui signifie que la production de TAG en carence ou limitation azotée est également limitée par la vitesse spécifique d’absorption des photons par la culture
Microalgae are tipped as the feedstock for biodiesel production due to their ability to produce large amounts of triacylglycerols (TAGs) that can be converted to biodiesel. However, microalgae cultivation in photobioreactors (PBRs) typically suffers from low productivity due to light transfer limitations. To optimize microalgae growth rate and productivity, radiation transfer analysis should be performed and light availability in PBR must be optimized. The first part of this study deals with the determination of the radiation characteristics of photosynthetic microorganisms. First, the radiation characteristics of two microalgae Chlamydomonas reinhardtii and Chlorella vulgaris were experimentally measured and theoretically predicted. Then, a new experimental method was developed to determine the absorption cross-section of the cells. The second part of the thesis focused on understanding how light absorption rate by the culture influences their TAG production rate. Microalgae were grown in nitrogen limited conditions in batch or continuous modes. Large TAG accumulation and productivity coincided with large rate of photon absorption suggesting that TAG production is limited by the light absorption rate in the PBR

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Klein, Cécile. "Production de quatre isoformes de protéines de transfert de lipides du blé dans "Pichia pastoris". Expression des gènes codant ces protéines dans le blé". Montpellier 2, 1998. http://www.theses.fr/1998MON20065.

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Les proteines de transfert de lipides (ltp) sont des proteines des faible masse moleculaire qui sont capables de realiser in vitro un transfert de lipides entre deux membranes. Dans le ble, les genes de ltp forment une famille mutigenique et il existe au moins cinq genes de ltp exprimes dans le grain de ble. Dans un premier temps, nous avons utilise le systeme d'expression levurien pichia pastoris pour produire quatre isoformes de ltp de ble dur (triticum durum) et de ble tendre (triticum aestivum). Ce systeme permet de secreter trois ltp recombinantes solubles dans le milieu de culture en quantite variable (1,1 g/l, 700 mg/l et 80 mg/l). Quand l'acide amine n-terminal de la proteine deduite de l'adnc est un residu alanine et non un residu isoleucine, la maturation de la ltp recombinante correspondante est optimale. Nos resultats ont montre qu'il y a une grande diversite de production selon le clone considere et les conditions de cultures utilisees. Dans un deuxieme temps, nous avons suivi l'expression des genes de ltp de ble au cours de la maturation et de la germination du grain de ble dur, et l'effet de stress abiotiques sur l'expression de ces memes genes dans des plantules de ble dur. Au cours de la maturation, ce sont les transcrits des genes ltp4. 90 et ltp8. 3 qui sont les plus abondants. Apres application des stress abiotiques, une variation de la quantite de transcrits des genes ltp6. 48 et ltpd2 est observee dans les pousses. Chaque gene de ltp de ble etudie semble avoir une expression spatiale et temporelle specifique.

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Tchobo, Fidèle Paul. "Caractérisation du beurre de Pentadesma butyracea Sabine : fonctionnalisation des triacylglycérols par transfert acyle sélectif en biocatalyse". Montpellier 2, 2008. http://www.theses.fr/2008MON20022.

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Le, Bihan Olivier. "Etude par microscopie électronique des mécanismes d'action de vecteurs synthétiques pour le transfert de gènes". Thesis, Bordeaux 1, 2009. http://www.theses.fr/2009BOR13972/document.

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La grande majorité des essais cliniques de transfert de gènes in vivo utilise des vecteurs viraux. Si ces derniers sont efficaces, ils présentent des risques immunogènes, toxiques, voire mutagènes avérés. Les vecteurs synthétiques (non viraux), par leur grande modularité et leur faible toxicité représentent une alternative très prometteuse. Le principal frein à leur utilisation est leur manque d’efficacité. L’objectif majeur de ce travail de thèse a été de comprendre le mécanisme de transfert de gènes associé à différents complexes vecteurs synthétiques/ADN plasmidique, ce qui est indispensable pour une conception rationnelle de nouveaux vecteurs. Nous avons étudié, sur cellules en culture, le mécanisme de transfert de gènes associé à deux lipides cationiques ; le BGTC (bis(guanidinium)-tren-cholesterol) et la DOSP (DiOleylamine A-Succinyl-Paromomycine) qui sont connus pour être des vecteurs efficaces in vitro. Nous avons ainsi pu visualiser par microscopie électronique leurs voies d’entrée, leurs remaniements structuraux ainsi que leur échappement endosomal qui représente une étape clé du processus de transfert de gènes. L’identification non ambigüe des lipoplexes tout au long de leur trafic intracellulaire a été rendue possible grâce au marquage de l’ADN par des nanoparticules de silice dotées d’un cœur de maghémite (Fe2O3) dense aux électrons. Cette stratégie de marquage a également été appliquée à l’étude du mécanisme d’action d’un autre vecteur synthétique de type polymère, le copolymère à blocs non ionique P188 ou Lutrol. Contrairement à la plupart des vecteurs synthétiques, celui-ci présente une efficacité de transfection in vivo chez la souris par injection in situ pour le tissu musculaire ou en intra trachéale dans le poumon. En revanche, il est totalement inefficace in vitro. Nous avons montré que le Lutrol permet une augmentation de l’internalisation d’ADN par les cellules mais n’induit pas son échappement endosomal, ce qui expliquerait son absence d’efficacité in vitro. D’autres voies d’entrée sont alors à envisager in vivo pour comprendre son mécanisme d’action
The vast majority of clinical trials of gene transfer in vivo use viral vectors. Although they are effective, they induce immunogenic, toxic or mutagenic risks. Due to their high modularity and low toxicity, synthetic vectors (non viral), represent a promising alternative despite their lack of effectiveness. The major objective of this work was to understand the mechanism of gene transfer using two prototypic synthetic vectors, in the context of a rational design of new vectors. We studied on cultured cells, the mechanism of action of two cationic lipids; BGTC (bis(guanidinium)-tren-cholesterol) and DOSP (DiOleylamine A-Succinyl-Paromomycine) formulated with plasmid DNA (lipoplexes) which are in vitro efficient vectors. We have been able to visualize by electron microscopy, their intracellular pathways, their structural alterations and their endosomal escape, the latter being a key step in the process of gene transfer. The unambiguous identification of lipoplexes throughout their intracellular trafficking has been made possible thanks to the labelling of DNA by core-shell silica nanoparticles with an electron dense maghemite core (Fe2O3). The labeling strategy has also been applied to study the mechanism of action of a nonionic block copolymer (P188 or Lutrol). Interestingly, these synthetic vectors have an in vivo transfection efficiency in mice lung and muscle tissue while they are totally inefficient in vitro. We have shown that Lutrol induces an increase of DNA internalization into cells and fails to trigger endosomal escape, which would explain the lack of in vitro efficacy. These findings suggest that the in vivo mechanism of action of Lutrol would involve other internalization pathways

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Lopez-Montero, Ivan. "Translocation de lipides non marqués mesurée par changements de forme de vésicules géantes : le cas de la céramide". Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077189.

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Resumen

Une asymétrie de surface de 0. 1 % entre les deux monocouches dans des vésicules géantes (GUVs) suffit pour déclencher un changement de leur forme. L'incorporation des molécules exogènes dans le feuillet externe d'une vésicule prolate produit la formation d'un bourgeonnement. La redistribution par diffusion transversale (flip-flop) des molécules dans les deux feuillets induit la récupération à la forme prolate. Le temps moyen de flip-flop spontané des molécules non marqués incorporées peut être calculé à partir des temps mesurés des deux transitions de forme. Un temps de flip-flop inférieur à une minute à 37 °C a été mesuré pour la céramide naturelle (C6-Cer, C10-Cer, C16-Cer). La méthode a été validée par des mesures spectroscopiques (RPE) du flip-flop d'analogues de céramide dans des LUVs. Les changements de forme des vésicules permettent également la détection du flip-flop de lipides endogènes par des protéines possédant une fonction de translocation lipidique (flippases). Nous avons reconstitué la P-gP (purifiée) et l'aminophospholipide translocase (à partir de membrane de globule rouge humain) dans des GUVs. L'activation de ces protéines par l'ajout d'ATP à l'extérieur des vésicules produit des changements des formes en accord avec un transport lipidique actif
A 0. 1% of surface asymmetry between both monolayers of giant vesicles (GUVs) suffices to trigger shape changes in vesicles. The incorporation of exogenous molecules to the external leaflet of vesicles produces a shape change from prolate to pear that is reversed when the molecules redistribute in both monolayers, by transmembrane diffusion (flip-flop). The spontaneous flip-flop half-time of unlabelled molecules can be inferred by measuring the time of both shape transitions. A half-time for unlabeled ceramide (C6-Cer, C10-Cer, C16-Cer) flip-flop below 1 min at 37°C was measured. The method was validated by spectroscopic measures (EPR) of labelled ceramide flip-flop in LUVs. Shape changes in vesicles can also be used to detect the flip-flop of endogenous lipid by the action of a flippase protein. A purified P-gP and the Aminophospholipid Translocase were reconstituted into GUVs. The protein activation by the addition of external ATP produced vesicle shape changes according to an active lipid transport

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Viens, Laurence. "Effet des activités de transfert des lipides et d'hydrolyse des triglycérides sur la composition lipidique, la structure et l'oxydabilité des LDL". Dijon, 1996. http://www.theses.fr/1996DIJOMU09.

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Buhot, Nathalie. "Rôle des élicitines et des protéines de transfert de lipides dans l'induction de la résistance des plantes à leurs agents pathogènes". Dijon, 2003. http://www.theses.fr/2003DIJOS018.

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Resumen

Les élicitines sont des protéines de transfert de lipides, sécrétées par Phytophthora et Pythium. Sur plantes de tabac ces protéines induisent une réponse hypersensible (RH) et une résistance spécifique acquise non spécifique (RSA). Cette induction est la conséquence de la fixation des élicitines sur un site à haute affinité de la membrane plasmique. Les LTP1 (protéines de transfert de lipides) de blé et de tabac partagent ce site de fixation. Au contraire de la LTP1 de blé, la LTP1 de tabac présente une activité biologique permettant l'induction de RH et de mécanismes de résistance. Le complexe LTP1 de tabac-jasmonate induit une protection contre P. Parasitica. L'oligandrine, produite par P. Oligandrum, protége le tabac contre P. Parasitica mais n'induit pas de RH. Les enzymes impliquées dans le processus de formation des nécroses sont pourtant induites et fonctionnelles. Cependant, la production d'acides gras peroxydés est inexistante ce qui suggère une inhibition de leur production
Elicitins are lipid transfer proteins secreted by Phytophthora and Pythium which are able to induce plant defense response. This induction is consecutive to the elicitin fixation on high affinity sites located on the plasmalemma membrane. LTPs are secreted plant proteins which are displaying some analogies with elicitins. Wheat and tobacco LTP1 share the same receptor than cryptogein but on the contrary of wheat LTP1, tobacco LTP1 has a biological activity. It is able to induce plant defence mechanisms. The research of natural ligand for this LTP1 led us to find that jasmonate can be a potential ligand and that the complex LTP1-jasmonate induces protection against P. Parasitica. Oligandrin, a pythin secreted by P. Oligandrum protects tobacco and tomato against their respective pathogens but it is not able to trigger necrosis. Enzymes implicated in the necrosis mechanisms are induced and functional but there is no production of hydroperoxydes. It suggests an inhibition of their production

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GOMAR, JEROME. "Structure et activite des proteines de transfert de lipides (ltp) : modelisation sur la base de donnees rmn et modelisation par homologie". Orléans, 1996. http://www.theses.fr/1996ORLE2065.

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La fonction des ltp de plantes reste toujours controversee. Deux nouvelles hypotheses fonctionnelles ont ete recemment proposees. La premiere envisage un role possible de transporteur d'acide gras, precurseurs des monomeres de la cutine, vers l'espace extracellulaire. Afin d'approfondir notre connaissance a l'echelle atomique des complexes molecule hydrophobe-ltp de plantes, l'etude structurale de la forme libre et d'une forme complexee de la ltp de mais a ete realisee sur la base de donnees rmn. Le volume mesure de la cavite de la proteine, de l'ordre de 300 a#3, est coherent avec ses proprietes complexantes non specifiques. Un site d'interaction possible avec les membranes est propose. Le modele du complexe lysophosphadidylcholine-ltp de mais, calcule sur la base de donnees rmn, ne met pas en evidence de changements conformationnels importants. La comparaison des formes libres et complexee de la ltp de mais en solution et dans le cristal, qui a mis en evidence la similarite globale des structures, ainsi que certaines divergences locales de conformation, a permis de positionner les zones flexibles de la proteine, desordonnees dans le cristal et moins bien resolues en solution. La deuxieme hypothese concerne leur role dans la defense des plantes. Les proprietes fongistatiques de ace-ampi, une proteine de sequence homologue aux ltp, extraite de l'oignon ont ete recemment mises en evidence. La modelisation par homologie de cette proteine, qui ne transfere par les lipides, a ete entreprise afin de comparer ses caracteristiques structurales predites, le volume de sa cavite ainsi que ses surfaces de potentiel electrostatiques, a celles connues d'autres ltp.

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Pato, Christine. "Encapsulation de molécules amphiphiles par une protéine de transfert de lipides, la LTP1 de blé : applications technologiques dans le domaine pharmaceutique". Bordeaux 1, 2001. http://www.theses.fr/2001BOR12424.

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Les protéines de transfert de lipides (LTP) sont de petites protéines basiques appartenant à la famille des protéines de fixation de lipides. Leur repliement assure en leur sein une cavité hydrophobe capable de piéger diverses molécules hydrophobes et de les transférer d'une membrane vers une autre. Par spectroscopie de fluorescence, nous avons montré que la LTP1 avait une affinité de l'ordre du æM vis à vis de quatre sphingolipides dont le n-palmitoyl sphingomyeline, un constituant essentiel de la peau. Une affinité du même ordre a été déterminée pour les éthers phospholipides (antitumorales et antiparasitaires). Des résultats intéressant, mais non quantifiable, ont également été obtenus avec l'amphotéricine B et le kétoconazole (antifongiques et antiparasitaires). Des essais sur la forme intracellulaire de Leishmania mexicana ont montré que l'encapsulation d'antiparasitaire par la LTP1 n'affectait pas l'activité du médicament in vitro. De plus, des tests réalisés sur des cellules de souris contaminées par la forme intracellulaire du parasite démontrait que l'encapsulation de l'amphotéricine B, de l'edelfosine et de la miltefosine augmentait leur activité inhibitrice d'un facteur variant de 5 à 30. Sur Aspergillus fumigatus, cette méthode d'encapsulation permettait de maintenir 100% de l'activité antifongique in vitro à l'exception de l' amphotéricine B pour laquelle l'activité inhibitrice avait triplée. De même, l'activité de l'amphotéricine B, de l'edelfosine et du kétoconazole a été augmentée respectivement de 2, 5 et 10 fois contre Candida albicans. Un modèle murin de candidose systémique a permis de montrer que l'encapsulation du kétoconazole permettait d'augmenter de 50% le pourcentage de survie des souris et de mieux protéger les tissus cardiaques et hépatiques comparé au kétoconazole libre. . . [etc. ]

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Moreau, Patrick. "Etude in vivo du transfert intermembranaire des lipides et des AGTC à la membrane plasmique de plantules étiolées d'Allium porrum L". Bordeaux 2, 1986. http://www.theses.fr/1986BOR22006.

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Les plantules etiolees d'a. Porrum representent le premier modele experimental qui permettra d'etudier in vivo chez les plantes, les mecanismes du transport intracellulaire des lipides et des acides gras. Par le biais des lipides membranaires, ce systeme permettra donc d'aborder l'etude des evenements qui dirigent et qui controlent la biogenese de la membrane plasmique chez un vegetal superieur.

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Moreau, Patrick. "Etude in vivo du transfert intermembranaire des lipides et des AGTLC à la membrane plasmique de plantules étiolées d'Allium porrum L". Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37599755f.

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Mercenne, Frédéric. "Influence de la composition des lipoproteines de haute densite sur les echanges de lipides avec les lipoproteines de tres basse densite en presence de cetp in vitro". Dijon, 1995. http://www.theses.fr/1995DIJOPE03.

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Delépine, Pascal. "Étude des voies d'administration et du devenir in vivo de vecteurs synthétiques pour le transfert de gènes : application à la mucoviscidose". Brest, 2004. http://www.theses.fr/2004BRES3103.

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La mucoviscidose, maladie la plus répandue da la population de type caucasien, est caractérisée par une grande variabilité génotypique et phénotypique. Certains symptômes, notamment les composantes digestive et pulmonaire, sont prédominants dans la maladie, cette dernière étant à l’origine de la majorité des décès. Malgré les récents progrès médicaux qui ont contribués à augmenter considérablement l’espérance de vie des patients mucoviscidosiques, les traitements disponibles ne sont encore que symptomatiques. Pour guérir la mucoviscidose, il faudrait pallier la déficience du gène responsable, le gène CFTR. L’identification de ce gène en 1989 a généré un grand espoir chez les personnes concernées et la recherche dans le domaine de la thérapie génique utilisant des vecteurs adénoviraux et synthétiques a été promue, donnant lieu à des essais cliniques. C’est dans ce contexte que ce travail de thèse a été réalisé. L’objectif était de définir les modalités d’administration optimales de vecteurs de gènes originaux, développés à Brest, chez le petit animal. Ceci impliquait l’étude de paramètres tels que la biodistribution et la cinétique d’expression, réalisées en partie au moyen de techniques d’imagerie. Ce travail a contribué à la reconnaissance des vecteurs de gènes brestois, mais comme pour tous les autres vecteurs disponibles, un travail considérable reste encore à produire avant de pouvoir utiliser une stratégie de thérapie génique en routine pour le traitement de la mucoviscidose
Cystic Fibrosis, the most common lethal genetic disease in Caucasian populations, is characterized by its great genotypic and phenotypic variability. This disease mainly affects both digestive and pulmonary functions, and the progressive respiratory degradation ultimately leads to death. Although many therapeutic strategies have emerged for the past decade, efficient treatments to cure permanently this disease are not available yet. Preventing the genetic defect would be the ideal way to achieve this goal. Since the CFTR gene, responsible for the disease was identified in 1989, gene therapy has become the major hope for CF patients. Many gene vectors, such as adenoviral-derived vectors and synthetic reagents have been evaluated to deliver therapeutic genes to the airways and numerous clinical trials have been initiated to assess both their safety and efficacy. Professor Férec, in Brest, has decided to penetrate this field by testing and developing a new family of cationic lipids for gene transfer to the lungs. Biodistribution of these reagents as well as kinetics of expression of the reporter genes were studied in vivo in mice following different ways of administration by various techniques, including imaging-based systems. Although we and others have collected a broad range of data including parameters influencing transfection efficiency and tissue targeting, a long and hard work is still to be done before gene therapy strategies can be routinely used as a common treatment to cure the CF disease

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Rogier-Floch, Virginie. "Etude de nouveaux vecteurs de synthèse de type lipides cationiques pour la transfection de cellules eucaryotes : application aux cellules souches hématopoi͏̈étiques (doctorat : sciences de la vie et de la santé)". Brest, 1998. http://www.theses.fr/1998BRES3101.

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François, Julie. "Purification, identification et analyse fonctionnelle de protéines de transfert de lipides (LTP) secrétées par des cellules embryogènes de Vigne (Vitis vinifera) de la lignée 41B". Poitiers, 2005. http://www.theses.fr/2005POIT2355.

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Les LTP non spécifiques des végétaux sont capables in vitro de transférer des lipides entre deux membranes. Elles seraient impliquées dans des processus physiologiques tels que l'embryogenèse ou la réponse aux stress. Cinq LTP ont été purifiées à partir du milieu de culture de cellules de Vigne. Les masses moléculaires, les séquences peptidiques des 5 VvLTP et les ADNc correspondant à VvLTP3 et 4 ont été obtenus. Le maximum de production de VvLTP par les cellules 41 B peut être corrélé avec le passage des embryons du stade globulaire au stade cœur. Une surproduction de l'ensemble des VvLTP étudiées est observée dans les cellules 41B surexprimant VvLTP1. Les embryons issus de ces cellules ne présentent pas de cotylédons et un épiderme désorganisé : les LTP auraient donc une fonction in vivo durant l'embryogenèse. La capacité de VvLTP à fixer l'acide jasmonique a été mise en évidence et le complexe, infiltré dans des plantules de Vigne induit une protection vis-à-vis de Botrytis cinerea
Non-specific lipid transfer proteins are characterized by their ability to transfer lipids between membranes, in vitro. They are believed to be involved in physiological processes such as embryogenesis or plant defense responses to stresses but their in vivo function is still controversial. Five LTP isoforms produced by 41B embryogenic cells have been purified. Amino-acid sequences and two cDNA corresponding to VvLTP3 and 4 were obtained. The maximum of production of VvLTP can be correlated with the embryo transition from globular to heart stage. Overexpression of VvLTP1 in 41B cells leads to an overproduction of all VvLTP. Somatic embryos induced from thess transgenic cells have no cotyledons and display an unorganised epidermic layer : VvLTP could play an in vivo function during embryogenesis. Another part of this work study the interaction of VvLTP with jasmonic acid. Infiltration of VvLTP4/JA complex in grapevine leaves induces protection of plantlets against Botrytis cinerea

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Ah, Kye Edouard. "Etude du transport intracellulaire des phospholipides membranaires dans les cellules tumorales et normales de côlon humain : renouvellement des phospholipides membranaires, Activités de transfert des lipides". Aix-Marseille 2, 1988. http://www.theses.fr/1988AIX22002.

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Masson, David. "Modulateurs plasmatiques de la protéine de transfert des esters de cholestérol (CETP) : études chez l'homme et chez des animaux transgéniques exprimant des apolipoprotéines humaines". Dijon, 1998. http://www.theses.fr/1998DIJOMU08.

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Lottin, Hélène. "Proteine de transfert des esters de cholesterol (cetp) et mouvements des lipides neutres entre lipoproteines de haute et basse densite : role des enzymes lipolytiques affectant les hdl". Angers, 1996. http://www.theses.fr/1996ANGE0508.

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Gable-Guillaume, Christine. "Développement de vecteurs non viraux, de type lipides cationiques, pour la transfection, in vivo, chez la souris swiss : application à la mucoviscidose (doctorat : sciences de la vie et de la sante)". Brest, 1999. http://www.theses.fr/1999BRES3102.

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Moser, von Filseck Joachim. "Mécanismes du transport lipidique par les protéines ORP/Osh". Electronic Thesis or Diss., Nice, 2014. http://www.theses.fr/2014NICE4138.

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Une distribution lipidique hétérogène est essentielle à l’identité et fonction des organelles, mais l’échange par trafic vésiculaire tend à annuler cette distribution. Il existe donc des mécanismes qui assurent l’homéostasie des lipides. Les protéines Osh (S. cerevisiae) et les OSBP-Related Proteins (ORP, H. sapiens), sont des transporteurs de lipides. Osh4 est capable d’échanger de l’ergostérol contre le phosphatidylinositol-4-phosphate (PI4P), présent sur l’appareil de Golgi. Utilisant des outils fluorescents mesurant avec une précision inégalée le transport de stérol et de PI4P, nous démontrons qu’Osh4 transporte du stérol contre son gradient de concentration en utilisant l’énergie d’un gradient de PI4P. Un couplage au métabolisme du PI4P permettrait à Osh4 d’alimenter le Golgi avec du stérol, ainsi créant le gradient de stérol entre ces organelles. La protéine OSBP participe, via sa capacité à connecter la membrane du RE à celle du trans-Golgi, à la création de jonctions entre ces organelles. Nous avons montré qu’OSBP, par échange stérol/PI4P, utilise le PI4P pour transférer du cholestérol au Golgi, mais également pour autoréguler sa capacité à former les jonctions. Osh6 lie la phosphatidylsérine, nous permettant d’étudier un nouveau mécanisme d’échange. Nous avons résolu la structure cristallographique d’un complexe Osh6/PI4P et avons pu observer l’échange de ces deux ligands par Osh6 entre deux membranes. Cette étude nous permet de suggérer que l’échange de PI4P avec divers lipides, via les protéines Osh/ORP, serait un mécanisme général permettant aux cellules de maintenir le gradient lipidique entre le RE et les membranes tardives de la voie sécrétoire
An uneven lipid distribution is essential for the function of eukaryotic organelles. However, exchange of material by vesicular trafficking has a tendency to perturb this distribution; mechanisms must though exist to ensure lipid homeostasis. Osh proteins (S. cerevisiae) and OSBP-Related Proteins (ORPs, H. sapiens), are lipid transfer proteins (LTPs). Osh4 is capable of exchanging ergosterol for phosphatidylinositol 4-phosphate (PI4P), found on the Golgi. Using novel fluorescent tools to measure with unprecedented precision the transport of sterol and PI4P, we find that Osh4 can transport sterol against its concentration gradient using the energy of a PI4P gradient. Coupled to phosphoinositide metabolism, this allows Osh4 to transport sterol to the trans-Golgi and create the sterol gradients observed between these organelles. OSBP participates in the creation of membrane contact sites (MCSs) via its capacity to connect ER membranes to those of the trans-Golgi. We have shown that it uses PI4P for transporting cholesterol from the ER to the trans-Golgi by sterol/PI4P counterexchange, hence also autoregulating its tethering activity. Finally, the identification of phosphatidylserine as a ligand for Osh6 allowed us to analyze the possible extrapolation of the PI4P counterexchange mechanism. We have solved the crystal structure of Osh6 in complex with PI4P and have been able to follow counterexchange of PI(4)P and PS in vitro. Concluding, our studies allow us to suggest a general mechanism for ORP/Osh-mediated counterexchange of PI4P for other lipids to maintain lipid gradients between the ER and late membranes of the secretory pathway

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Runavot, Jean-Luc. "Maltage à faible hydratation : dégradation des structures pariétales, diffusion et modification des protéines aleuroniques et caractérisation des barrières hydrophobes cuticulaires". Nantes, 2011. http://www.theses.fr/2011NANT2066.

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L'industrie du malt tente actuellement de réduire les coûts énergétiques (touraillage) sans affecter la qualité de malt obtenu. Cette économie d’énergie passe nécessairement par une diminution de la teneur en eau du grain d’orge en fin de trempe et durant la germination. Nous avons choisi d'étudier des paramètres clés de la qualité brassicole des malts concernant leurs capacités diastasiques et pro-mousse. Ainsi la diffusion et les modifications de la LTP1, protéine pro-mousse du malt, ont montré des résultats équivalents pour un malt faiblement hydraté comparé à un malt fortement hydraté. Par contre, le taux d’hydratation du grain affecte la diffusion et l'activité des β-glucanases et en conséquence la dégradation des β-glucanes. Ces effets sont liés à une différence dans la cinétique de diffusion et de synthèse de ces enzymes et peuvent être fortement réduits en augmentant la durée de germination. La migration de l’eau dans le grain suit un cheminement particulier lié au contournement des barrières hydrophobes du grain situées en surface du péricarpe et à l’interface entre aleurone et péricarpe (testa). Sur des variétés produisant, au niveau pilote industriel, des malts qualitativement différents suivant le taux d’hydratation, nous avons remarqué de faibles différences de composition et d’épaisseur entre les assises cuticulaires. En revanche, nous avons mis en évidence une très grande variabilité de composition des cuticules dans les différentes parties du grain, par exemple le scutellum, le sillon ou les glumelles
During kilning, reduction of energy costs without impacting significantly the malt quality, represents a major challenge of the malting industry. This energy reduction requires a reduction of barley grain water content at the end of steeping and during germination. In the present work, we focused on key malting quality parameters involved in diastatic power and foam promoting capacities of malt. When analysed in a low hydrated malt and a high hydrated malt, the LTP1 (a foam promoting protein) modifications and its diffusion from the aleurone layer to the starchy endosperm were similar. The hydration level of the grain affects however β-glucanase diffusion and activity, and consequently the β-glucan degradation. These effects are linked to a delay in the synthesis and the diffusion of these enzymes. An increase of the time of germination allows to sharply reduce these effects. According to grain hydrophobic barriers localized at the pericarp surface and at the interface of aleurone and pericarp (testa), water diffusion inside the grain follows a specific pathway. Only weak, although significant, differences in cuticular thickness and composition were observed between cultivars with different malt qualities according to their hydration levels. On the contrary, we observed a great variability in the cuticular composition of the various tissues of the grain e. G. Scutellum, chalaza or husk

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Subra, Mélody. "VAP-A, un gymnaste moléculaire engagé dans les sites de contact membranaire". Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2023. http://www.theses.fr/2023COAZ6013.

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VAP-A est un récepteur ancré à la surface du réticulum endoplasmique (RE) pour des centaines de protéines contenant un motif FFAT. Ses partenaires possèdent des structures et des fonctions très variées. VAP-A participe à la formation des sites de contact membranaire (MCSs) entre le RE et les autres organelles et ceci permet notamment le trafic non vésiculaire des lipides entre les membranes. Par exemple, la protéine de transfert de lipide OSBP interagit avec VAP aux MCSs RE/Golgi afin de transporter le cholestérol contre son gradient de concentration par contre-échange et hydrolyse de phosphatidylinositol-4-phoshate (PI4P). L'interaction entre le domaine Major-Sperm-Protein (MSP) de VAP-A et le motif FFAT de ses partenaires était déjà caractérisé. Cependant, la façon dont ce récepteur universel peut s'adapter à toutes ses cibles dans tous les MCSs, qui sont très différents en terme de géométrie et de stabilité était inconnue.Dans cette étude nous avons utilisé une approche pluridisciplinaire afin de démontrer que VAP-A contient deux régions intrinsèquement désordonnées (IDRs) qui fournissent à la protéine une flexibilité indispensable à son organisation fonctionnelle dans les MCSs. Nous avons montré qu'un mutant de VAP-A sans ses linkers flexibles possède une localisation subcellulaire restreinte aux MCSs RE/mitochondrie. Ce mutant ne peut donc pas soutenir l'activité d'OSBP et CERT aux MCSs RE/Golgi. En revanche, il interagit avec VPS13A et PTPIP51 à la mitochondrie et permet ainsi le transport de lipides qui contribuent au métabolisme des cardiolipines et à la fusion mitochondriale.Ces résultats indiquent que la flexibilité de VAP-A fournie par ses IDRs, joue un rôle clé pour assurer son adaptabilité à différents contextes et plus précisément aux MCSs à durée de vie courte comme les MCSs RE/Golgi, cette étude démontre également l'implication de VAP-A dans la fusion mitochondriale
VAP-A is a receptor at the surface of the endoplasmic reticulum (ER) for hundreds of proteins containing a FFAT motif and having a wide range of structures and functions. VAP-A is also required for creating multiple membrane contact sites (MCSs) between the ER and other compartments, which notably enable non-vesicular lipid exchanges between membranes. For example, the lipid-transfer protein (LTP) OSBP interacts with VAP at ER/Golgi MCS to transport cholesterol through coupled counter-exchange and hydrolysis of PI4P. It is well known that VAP-A partners contain a FFAT motif specifically recognized by the Major-Sperm-Protein (MSP) domain of VAP, however, how this receptor adapts to its different targets in MCSs that are so different in geometry and lifetime is not understood.In this study, we used a multidisciplinary approach to demonstrate that VAP-A contains two intrinsically disordered linkers that provide it with a high degree of flexibility to enable functional organization of different MCSs. A VAP-A mutant without flexible linkers is restricted in its subcellular localization, and does not support lipid transport by OSBP and CERT at ER/Golgi MCS. However, this mutant is present at ER/mitochondria MCS by interacting with VPS13A and PTPIP51, and thus facilitates lipid transport contributing to cardiolipin metabolism and mitochondrial fusion.In conclusion, this work indicates that VAP-A conformational flexibility mediated by its intrinsically disordered regions is key to ensure membrane tethering especially at short-lived MCSs; it also demonstrates the implication of VAP-A in mitochondrial fusion

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Loisel, Séverine. "Optimisation et limites du transfert de gènes par voie intraveineuse à l'aide de vecteurs non viraux de type lipides cationiques chez la souris Swiss : application à une thérapie génique de la mucoviscidose (doctorat : sciences de la vie et de la santé)". Brest, 2000. http://www.theses.fr/2000BRES3104.

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Tesis sobre el tema "Transfert de Lipides"

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