Tesis sobre el tema "Techniques chromatographiques"

L'authentification exacte de l'origine des huiles d'olive devient une des priorites de la communaute europeenne, tant aux niveaux commercial et legislatif qu'au niveau du consommateur. Pour cela, la determination des teneurs en isotopes stables employant la spectrometrie de masse de rapport isotopique et la resonance magnetique nucleaire quantitative du deuterium et le dosage chromatographique sont a l'heure actuelle parmi les techniques les plus performantes. Le dosage des acides gras chromatographie en phase gazeuse (cpg), les mesures isotopiques en carbone-13 realisees par le couplage chromatographie phase gazeuse-interface de combustion-spectrometrie de masse de rapport isotopique (cg-c-smri) et les mesures isotopiques quantitatives en deuterium par resonance magnetique nucleaire du fractionnement isotopique naturel specifique (rmn-fins) ont ete mis en uvre, developpes et optimises. Ceci a permis une etude sur 200 echantillons d'huiles d'olive provenant de differents pays, de plusieurs regions de grece et ce sur trois annees de production. Des analyses de donnees par statistiques univariees (analyse de la variance) et multidimensionnelles (analyse en composantes principales et analyse factorielle discriminante) ont ensuite ete employees pour l'exploitation des resultats. Ces analyses ont non seulement permis de distinguer les huiles d'olive en fonction de leur pays d'origine, mais surtout, ont mis en evidence l'influence de la region et de l'annee de production sur les compositions en acides gras et en isotopes stables. Ainsi, pour une annee donnee (1995 ou 1996), il a ete possible d'authentifier la region de production (crete ou peloponnese). De meme, pour une region de production (crete ou peloponnese), cette approche a permis de determiner l'annee de production. Ces resultats mettent en evidence le pouvoir discriminant des parametres chromatographiques et isotopiques pour permettre une appellation d'origine controlee des huiles d'olive.

Les complexants organiques constituent une famille particulière de molécules organiques caractérisées par la propriété de former des complexes plus ou moins stables avec des cations métalliques. La première partie de la thèse montre comment ces complexants favorisent la mobilisation des espèces métalliques, par exemple à partir d'un stockage de déchets radioactifs ou encore comment ils permettent la remédiation des sols pollués. Dans la seconde partie du document, nous montrerons comment certains complexants peuvent se former au sein d'un colis de déchets nucléaires par radiolyse des matériaux organiques présents dans le colis. Ainsi, nous montrons par exemple que 22 % en masse de la cellulose constituant les blouses en coton est radiolysé sous forme de carbone organique lixiviable après une irradiation sous 4,2 MGy. La troisième partie décrit les méthodologies mises au point afin de permettre le dosage à basse teneur de ces complexants organiques en phase aqueuse. Les techniques mises en œuvre sont : - la chromatographie d'échange ionique, qui est appliquée au dosage des mono, bi et tri carboxylates ainsi qu'aux produits de dégradation du tributylphosphate (TBP) à savoir le dibutyl et le monobutyl phosphate (DBP et MBP), mais aussi aux amines issues de la dégradation radiolytique des résines échangeuses d'ions ainsi qu'à la morpholine. - la chromatographie d'exclusion ionique, appliquée essentiellement aux ions carboxylate. - la chromatographie de recul d'ionisation et d'appariement d'ions, mises en œuvre pour le dosage des molécules chélatantes aminopolycarboxyliques telles que l'EDTA, le NTA, le DTPA et le CDTA. - la chromatographie liquide en phase inverse, couplée à la spectrométrie de masse via les interfaces d'ionisation à pression atmosphérique (électrospray et APCI) qui a été appliquée au dosage du TBP, de l'EDTA ainsi qu'aux dérivés du TBP (DBP et MBP). - l'électrophorèse capillaire, que nous avons appliquée au dosage des complexants carboxyliques et des amines. La dernière partie de la thèse porte sur la mise au point d'un test qui permet une estimation du pouvoir complexant global d'une solution aqueuse. Ce test consiste en l'ajout d'un excès d'un cation métallique faiblement hydrolysable (Co2+) qui va se complexer avec les éventuelles molécules complexantes présentes. Les complexes métalliques ainsi formés sont anioniques ou neutres en solution et sont retenus sur une résine échangeuse d'anions alors que le Co (II) non complexé est élué. Le dosage de ce Co (II) élué permet alors de connaître le Co (II) complexé et par conséquent d'accéder au pouvoir complexant global de la solution exprimé par exemple en mmole de Co complexé par litre de solution aqueuse
Organic complexants constitute a particular family of organic molecules, characterised by the property to form more or less stable complexes with metal cations. The first part of the thesis shows how these complexants support the mobilisation of the metal species, for example those which are present in a disposal of radioactive waste, or how they allow the remediation of polluted soils. In the second part of the document, we will show how certain complexants can be formed by radiolysis of organic materials present in nuclear waste packages. Thus, we show for example that 22 % in mass of cellulose constituting the cotton blouses is radiolysed in the form of leachable organic carbon, after an irradiation under 4,2 MGy. The third part describes the methodologies developed in order to allow the measurement of these organic complexants at low level. The implemented techniques are : - ionic chromatography which is applied to the measurement of mono and poly carboxylates and also to the breakdown products of tributylphosphate (TBP) : mono and dibutyl phosphate (MBP, DBP). Ion chromatography is also applied to the measurement of the amines resulting from the radiolytic degradation of ion exchange resins. - ion exclusion chromatography was primarily applied to carboxylate ions. - ion suppression chromatography and ion pairing chromatography were implemented in order to measure aminopolycarboxylic chelating molecules such as EDTA, NTA, DTPA and CDTA. - reverse phase liquid chromatography coupled with mass spectrometry through electrospray (ESI) and atmospheric pressure chemical ionisation (APCI) interfaces, was applied to the measurement of TBP, EDTA and to the degradation products of TBP (DBP and MBP). - capillary electrophoresis was applied to the measurement of carboxylic complexants and amines. The last part of the thesis relates to the development of a test which allows an assessment of the global complexing capacity of an aqueous solution. This test consists in the addition of a metallic cation weakly hydrolysable (Co2+) which will be complexed with the possible chelating molecules present in the solution. The metal complexes thus formed are anionic or neutral species in solution, and are thus retained over an anion exchanging resin, whereas uncomplexed Co (II) is eluated from the resin. The measurement of this eluated Co (II) then makes it possible to know the quantity of complexed Co (II) and consequently to determine the global complexing power (or capacity) of the solution. This complexing power being expressed for example in mmole (or mg) of Co complexed per litre of aqueous solution

Cette these est consacree a l'etude de la spiraline, proteine majoritaire de la membrane des spiroplasmes. Notre objectif etait d'approfondir l'analyse de sa topologie et de developper une methode rapide de purification en conditions non denaturantes. L'etude topo-fonctionnelle a ete realisee sur la proteine complete et sur une copie de synthese d'un segment susceptible de former une helice , en utilisant des techniques de prediction de structure secondaire, le dichroisme circulaire, la microscopie electronique (coupes ultrafines et cryofractures), la technique des bicouches lipidiques planes et des marquages a l'aide d'anticorps. Les resultats que nous avons obtenus indiquent que la spiraline est une proteine monotopique ancree a la surface des spiroplasmes pour y former une couche parietale de protection d'un type nouveau. Le segment de 20 residus localise dans le dernier tiers de la sequence de la spiraline contient un epitope de type b et constitue tres vraisemblablement une helice de surface d'un domaine globulaire de la proteine. Par une etude comparative de la dissolution de la membrane de spiroplasma melliferum par dix-sept tensioactifs (nouveaux ou commerciaux), nous avons determine des conditions optimales d'extraction de la spiraline (selectivite, rendement et preservation de l'antigenicite et developpe des methodes de purification par chromatographie en hplc et fpic en systeme micellaire. Ces methodes sont rapides, non denaturantes et permettent de preparer des quantites de proteine pure compatibles avec les besoins de l'etude structuro-fonctionnelle de la proteine

L'epandage des boues est une facon economique de gerer les grosses quantites produites chaque annee lors du traitement des eaux usees. Mais, les epandages repetes induisent un risque de pollution diffuse. Il est donc necessaire de developper des protocoles analytiques pour controler la qualite des boues, en particulier en ce qui concerne les teneurs en polluants organiques. Nous nous sommes interesses a deux groupes de polluants hydrophobes : les hydrocarbures polyaromatiques (hpa) et les polychlorobiphenyles (pcb), ainsi qu'a un groupe de tensioactifs : les alkylbenzenes sulfonates lineaires (absl). Du fait de la complexite de ce type de matrice tres riche en composes organiques interferents, les protocoles analytiques sont plus contraignants que ceux mis en uvre avec des sols ou des sediments. Les principales difficultes se situent pendant le traitement des echantillons. Differentes techniques modernes d'extraction ont ete mis en uvre pour extraire simultanement les hpa et les pcb. Par ailleurs, la purification non selective des extraits sur silice s'est averee etre bien adaptee pour une analyse simultanee de ces deux groupes de composes par chromatographie en phase gazeuse. Nous avons egalement montre l'efficacite d'une purification selective sur immunoadsorbant, et valide un protocole applicable au controle des hpa dans les stations d'epuration. Des protocoles analytiques, incluant la chromatographie en phase liquide ou en phase gazeuse couplee a des detections de fluorescence et d'absorbance uv en serie (avec barrette de diodes), par capture d'electrons, ou encore par spectrometrie de masse, ont ete developpes pour caracteriser les hpa et les pcb a des concentrations satisfaisant la legislation, et les absl aux concentrations generalement retrouvees dans les boues (1 a 10 g. Kg -). Ces protocoles ont ete compares en termes de repetabilite, sensibilite, rapidite, facilite de mise en uvre ; et ils ont ete valides avec des matrices certifiees quand elles existaient.

Pour répondre à l'objectif national de réduction des pesticides dans l'agriculture, les stratégies de lutte employées dans le biocontrôle comme la confusion sexuelle sont privilégiées. La clef de la réussite dans l'application de cette stratégie nécessite un dispositif de relargage contrôlé de phéromone pour maintenir une concentration suffisante et constante dans l'air pendant la période d'activité du ravageur (plusieurs jours à plusieurs mois). Différents traitements et technologies ont été mis au point notamment par M2i Group où la phéromone est encapsulée dans une matrice solide appelée "Press". Cependant, divers inconvénients subsistent concernant les diffuseurs actuels tels que la difficulté à maintenir un taux de libération de phéromone suffisant sur une période prolongée ainsi que la difficulté d'évaluation des concentrations autour du diffuseur. Par conséquent, le mode d'action du ou des composé(s) sur les insectes cibles et la relation dose/réponse sont souvent mal connus. Ainsi, pour répondre à ces problématiques, la cinétique de libération de la phéromone à partir du diffuseur a été étudiée à la fois sur le terrain, en extrayant et en quantifiant la phéromone restante dans le diffuseur et en laboratoire, et par des tests en chambre d'émission dans des conditions contrôlées. Les résultats ont conduit au développement d'un modèle prédictif à partir d'une phéromone modèle (similaire à la phéromone sexuelle de Lobesia botrana) et de la formulation Press. Il permet de décrire la libération de la phéromone à partir de la matrice en fonction de facteurs abiotiques (température, vitesse d'air) et géométriques du diffuseur. De plus, le développement d'un échantillonnage actif sur cartouches de Tenax TA suivi d'une thermodésorption et analyse en GC-MS a permis de déterminer des concentrations de phéromone entre 16 ng/m3 et 0,1 µg/m3 dans l'air après la pose de diffuseur sous une serre. Ainsi, le taux de libération de phéromones par diffuseur (1,6 mg/jour) se trouve être bien au-dessus de la quantité émise par une femelle du ravageur Lobesia botrana qui est de 7,2 ± 0,1 ng/jour et donc permet la confusion sexuelle. Enfin, grâce à ces travaux, une corrélation a été démontrée entre le taux d'émission et les concentrations dans l'air. Ainsi, les niveaux de concentration régnant dans un espace traité peuvent être simplement déterminés en exploitant l'enregistrement des paramètres environnementaux température et vitesse d'air, et en estimant le taux d'émission par le modèle. L'ensemble de ces travaux met en évidence des pistes d'optimisation pour M2i group sur la répartition et le nombre de diffuseurs par hectare mais aussi sur l'optimisation des systèmes de diffusion pour induire le leurre désiré
To meet the national objective of reducing the use of pesticides in agriculture, biocontrol strategies such as mating disruption are favored. The key to the successful application of this strategy is a controlled release of pheromone to maintain a sufficient and constant concentration in the air during the pest's period of activity (several days to several months). Various treatments and technologies have been developed, notably by M2i Group, where the pheromone is encapsulated in a solid matrix called "Press". However, there are still a few drawbacks to current dispensers, such as the difficulty of maintaining a sufficient release rate over an extended period, and the difficulty of assessing the concentrations around the dispenser. As a result, the mode of action of the compound(s) on target insects and the dose/concentration relationship are often poorly understood. To address these issues, the release kinetics of the dispenser were studied both in the field, by extracting and quantifying the pheromone remaining in the dispenser, and in the laboratory, using emission chamber tests under controlled conditions. The results led to the development of a predictive model based on a model pheromone (close to the structure of the pheromone of the butterfly Lobesia botrana) which describes the release of the pheromone from the matrix as a function of abiotic factors (temperature, air velocity) and diffuser geometry. In addition, the development of an active sampler on Tenax TA cartridges, followed by GC-MS thermodesorption analysis, enabled us to determine concentrations ranging from 16 ng/m3 to 0.1 µg/m3 in the air after diffuser installation in a greenhouse. Thus, the rate of pheromone release per diffuser (1.6 mg/day) is above the quantity emitted by a female of the pest Lobesia botrana, which is 7.2 ± 0.1 ng/day, thus enabling mating disruption. Thanks to this work, a correlation was demonstrated between emission rates and air concentrations. Concentration levels in a treated area can therefore be determined simply by recording environmental parameters (temperature and air speed) and estimating the emission rate by using the model. All this work make possible optimization to M2i group strategy, not only in terms of the distribution and number of diffusers per hectare, but also in terms of optimizing the diffusion systems to induce the desired lure

Le but de cette these a consiste en la comprehension des forces presidant a la separation des petites molecules en electrophorese capillaire et en l'optimisation a priori des facteurs thermodynamiques pouvant engendrer une certaine selectivite du systeme. Ainsi, en ce qui concerne electrophorese capillaire de zone libre, nous avons situe notre travail sur l'optimisation du ph pour la separation des molecules ionisables et sur la prediction du comportement electrophoretique des molecules ioniques en fonction de leur taille. Pour ce qui est de la chromatographie electrocinetique micellaire, nous avons elabore une nouvelle technique analytique de determination des concentrations micellaires critiques et suivi l'evolution de cette grandeur en fonction des differents parametres usuels de l'optimisation electrophoretique (force ionique et teneur en solvant organique). Enfin, nous avons etabli l'electrophorese capillaire d'elution micellaire, nouvelle technique analytique qui nous a permis de quantifier les interactions des solutes entre les phases micellaire et aqueuse et ainsi de relier ces grandeurs au parametre de lipophilie tabule dans la litterature

L'extraction de solutes presents dans des matrices solides est realisee par utilisation d'un fluide a l'etat supercritique. Ce processus depend de nombreux parametres qui sont etudies un par un. L'analyse de ces extraits est ensuite effectuee par une methode chromatographique. Les diverses possibilites envisagees de recuperation de l'extrait autorisent une analyse soit exterieure au systeme (couplage off line), soit en ligne avec l'extraction (couplage on line). Les systemes actuels permettant cette derniere solution sont alors presentes. Les differents dispositifs experimentaux adoptes sont ensuite decrits; ils permettent les deux modes d'analyse precites. Le dosage des produits etudies, d'interet pharmaceutique et agrochimique, respectivement deposes dans des milieux alimentaires et vegetaux, est ainsi rendu possible. Les etudes effectuees grace a ces systemes ont pour objet la connaissance de l'influence des nombreux parametres intervenant sur le processus d'extraction, et l'evaluation du potentiel des differents modes de couplage

Les procédés chromatographiques multicolonnes continus se sont imposés comme technique séparative dans l’industrie pharmaceutique en raison de leur productivité élevée et de leur développement rapide. De nos jours, la modélisation, le dimensionnement et l’optimisation des procédés LMS et Varicol sont considérés comme établis. Le fonctionnement automatique optimisé et robuste de ces procédés reste cependant un sujet de recherche. Le plus souvent, les paramètres opératoires sont choisis en deçà du réglage optimal afin d’inclure une marge de robustesse. Ils sont ajustés manuellement par un opérateur expérimenté pour maintenir les produits à leurs spécifications de pureté. Le nombre élevé de séparations chromatographiques rend crucial le développement d’une application d’un contrôle avancé de ces procédés. Récemment, plusieurs méthodes de contrôle des procédés LMS ont été proposées. Ce travail de thèse présente une nouvelle approche de contrôle avancé. Cette commande ajuste les paramètres opératoires d’une séparation grâce à deux types de mesure : une mesure en ligne et une mesure hors ligne. Une validation expérimentale du schéma de contrôle a été effectuée sur un procédé Varicol. Les résultats présentés démontrent que la commande permet d’amener la pureté des produits à leurs spécifications, d’optimiser les performances du procédé et de répondre aux perturbations, tout en sécurisant la pureté du produit cible
Multicolumn continuous chromatographic processes became a key separation technology in the areas of pharmaceutical industry thanks to high productivity and short process development times. Today, modeling, design, and optimization of SMB and Varicol, are well established. However a robust and optimized operation of processes is still an open issue. The common practice is to operate processes under suboptimal operating conditions in order to gain the necessary robustness. The operating parameters are tuned manually by experienced operators in order to maintain the product specifications. Therefore, as chromatographic applications spread, process control problem becomes increasingly important. Recently, several control methodologies of SMB process have been proposed. This thesis work introduces a new advanced control system approach. This system adjusts operating parameters thanks to two kinds of measurements : an in-line measurement and an at-line measurement. The performance of this control scheme is demonstrated through several experiments on Varicol. The reported results aim to demonstrate that the controller is able to deliver the products within the specifications, to optimize the process performance and to answer to disturbances while protecting the key product

Dans la première partie, nous avons abordé les problèmes de séparation et de quantification rencontrés dans cas, se traduisant par des courbes d'élution caractéristiques. Nous avons ainsi décrit et étudié le phénomène de coalescence du second type sur des diastéréoisomères et isomères (esters aziridiniques, diaminophosphonates et composés éthyléniques phosphorés halogénés) en chromatographie de partition. La variation des paramètres chromatographiques nous a ainsi donné la possibilité de calculer les constantes cinétiques et thermodynamiques liées à ce phénomène, nous permettant de réaliser une approche plus précise du mécanisme régissant l'isomérisation due aux interactions soluté-phase stationnaire. Dans la deuxième partie, nous avons insisté sur les difficultés rencontrées lors de la quantification par espace de tête. Après une présentation des techniques d'espace de tête statique et dynamique, nous avons décrit les différentes méthodes de dosage existant actuellement. Nous avons ensuite appliqué celles-ci à deux quantifications originales: celle du phénol en présence de phénate dans des colles par espace de tête statique et celle du phénoxyéthanol dans les crèmes solaires par espace de tête dynamique. Nous avons ainsi pu comparer les résultats obtenus par les diverses méthodes envisagées et évoquer les problèmes inhérents à ces techniques

Ce travail a été effectué au Département Physique et Métrologie des Oscillateurs (L. P. M. O. ), du laboratoire FEMTO-ST, UMR 6174 du CNRS, en collaboration avec l'U. F. R. Des Sciences Médicales et Pharmaceutiques de l'Université de Franche-Comté. Ces travaux de thèse ont été encadrés par le professeur Lysiane RICHERT et le docteur Wilfrid BOIREAU (Chargé de Recherches au C. N. R. S. ). Des colonnes chromatographiques en silicium mésoporeux ont été conçues et fabriquées. Après avoir appris à utiliser des techniques de salle blanche (RIE, Pulvérisation cathodique, photolithographie. . . ), j'ai procédé aux diverses étapes de fabrication à partir d'un substrat en silicium dopé au phosphore. Leur caractérisation a été effectuée à l'aide de microscopes électroniques à balayage et optiques. Une séparation chromatographique de deux molécules a été réussie en utilisant le pouvoir séparateur de la silice. La deuxième partie de mes travaux de thèse s'inscrit dans le cadre d'une étude de Biologie Cellulaire et de recherches en protéomique. En collaboration avec l'U. F. R. Des Sciences Médicales et Pharmaceutiques, les effets d'un traitement à la Nafénopine (un proliférateur de péroxisomes) sur les protéines microsomiales des cellules hépatiques de rats ont été étudié. Après la lyse des cellules hépatiques des sujets et la récupération des protéines microsomiales, l'échantillon est injecté dans un appareil de chromatographie liquide bidimensionnelle conçu pour la protéomique, le ProteomeLab PF2D. Cet appareil sépare un mélange de protéines suivant deux types de chromatographie liquide; suivant leur point isoélectrique par chromatofocusing et suivant leur hydrophobicité par RP-HPLC. Après étude différentielle des cartes protéiques obtenues, un bio-indicateur a été découvert et identifié par Western Blotting. Il s'agit du Cytochrome P450 4Al
This work was carried out within the Département de Physique et de Métrologie des Oscillateurs (L. P. M. O. ) of the institut FEMTO-ST, CNRS UMR 6174, in collaboration with the U. F. R. Des Sciences Médicales et Pharmaceutiques of the Université de Franche-Comté. This PhD has been supervised by Prof essor Lysiane RICHERT and Dr Wilfrid BOIREAU (CNRS Research Scientist). The first part of this thesis was devoted to the design and fabrication of mesoporous silicon chromatographic columns using different clean room techniques (RIE, Cathode sputtering, photolithography. . . ). 1 carried out the various fabrication stages starting from a silicon substrate doped with phosphorus. The colurons characterization was performed using SEM imaging and optical microscopy. A chromatographic separation of two molecules was managed by using silica as stationnary phase. The second part of this work dealt with a Cellular study on Biology and proteomic. The effects of Nafenopine (a peroxisomes proliferator) on the microsomiales proteins of the hepatics cells ofrodents were studied in collaboration with the U. F. R. Des Sciences Médicales et Pharmaceutiques. After the lysis of the hepatic cells of the subjects and the recovery of their microsomiales proteins, the sample was injected into a two-dimensional liquid chromatography device conceived for proteomic, the ProteomeLab PF2D. This apparatus separates proteins according to two types of liquid chromatography: their isoelectric point, by chromatofocusing, as weIl as their hydrophobicity, by RP-HPLC. After differential study of the proteins map, a bio-marker was discovered and identified by Westem Blotting. This is the Cytochrome P450 4Al

Among the numerous beneficial effects of phospholipides can highlight their role in protecting the cardiovascular system and improving memory and learning. These effects can be partially explained by the fact that phospholipids are rich in polyunsaturated (eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids) or essential fatty acids. Thus, it is very significant to explore potential food sources containing polyunsaturated rich phospholipids for the development new food products supplemented with phospholipids.This work allowed a series method for the extraction, purification, separation and quantification of phospholipids in order to characterize the polyunsaturated phospholipid sources. Food supplementation with polyunsaturated phospholipids rises however the question of their stability during food processing at high temperature. Then we have developed methods to identify phospholipids degradation products and determine their kinetics of the oxidation during thermal treatment which is a widespread food processing.Phospholipids (PE and PC) are more stable than triacylglyceride, this is due to the presence of an amino group in the molecule.

Depuis la mise au point des techniques de formation des lignées d'hybridomes, des efforts importants sont fournis pour améliorer la productivité des anticorps monoclonaux et pour mieux comprendre le métabolisme cellulaire. Les méthodes analytiques jouent un rôle important dans le contrôle des procédés en permettant la détermination quantitative et qualitative de plusieurs paramètres et variables. L'objectif général de cette étude consiste à contribuer à l'amélioration de la maitrise des bioprocédés en proposant une méthode analytique capable de quantifier les protéines présentes dans les cultures d'hybridomes. Afin d'atteindre cet objectif, les potentialités de l'HPLC ont été testées. Les protéines considérées dans cette étude sont d'une part, les composes protéiques propres au milieu de culture et d'autre part, les anticorps monoclonaux secrétés par les cellules. La première partie de cette étude présente l'optimisation des conditions opératoires de la méthode chromatographique. Les deux modes chromatographiques mis à profit sont l'HPLC d'affinité et la RP-HPLC. Une étude comparative des performances de la méthode par HPLC et du test ELISA est exposée dans une seconde partie. La troisième partie concerne l'application de la méthode chromatographique aux suivis des protéines de cultures cellulaires d'hybridomes. Enfin, la réalisation couplage automatise réacteur-échantillonneur-HPLC et son application à la détermination en ligne de la concentration des IgG d'une culture discontinue, constituent la dernière partie de ce travail