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Garcia, Emilien. "Rôle de la tyrosine kinase SYK dans la régulation du processus métastatique du mélanome". Thesis, Université Côte d'Azur (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016AZUR4154/document.
Texto completoResumen
La progression tumorale en cancer métastatique implique la perte de fonctions oncosuppressives, comme c'est le cas dans le mélanome. Une migration cellulaire aberrante est caractéristique de la progression du mélanome. SYK (Spleen tyrosine kinase) est une tyrosine kinase cytoplasmique impliquée dans la suppression tumorale du cancer du sein et du mélanome. Dans la peau, SYK est exprimée dans les mélanocytes mais est fréquemment réprimée épigénétiquement dans le mélanome. Nous avions pu montré que cette perte était associée à un échappement de la sénescence. Qu'elle puisse réguler la migration des cellules tumorales et la formation des métastases reste peu connu. Dans mes travaux j'ai utilisé des approches gain et perte de fonction pour analyser l'effet de SYK sur les mélanomes humains et murins. Respectivement, la réexpression et l'extinction de SYK diminue et augmente la migration, l'invasion et les métastases des cellules de mélanome. L'extinction de SYK induit notamment un phénotype et une signature mésenchymateuse. Notre étude dévoile ce rôle pour SYK dans la répression d'une adhérence dépendante des intégrines, points de tractions et plateforme de signalisation de la migration, et souligne l'importance la perte de SYK dans la formation de métastases. Pour clarifier le rôle de SYK dans la progression du mélanome, j'ai généré un modèle murin de KO conditionnel de SYK spécifique des mélanocytes concomitants à une perte de Pten et de l'activation de BrafV600E. Des résultats préliminaires suggèrent que la perte de SYK n'accélère pas la formation de mélanome dans ce contexte mutationnel mais mène à une invasion plus profonde des cellules tumorales dans le dermeThe progression of tumors to metastatic disease involves the loss of metastatic suppressor functions, as it is the case in melanoma. Thus, aberrant cell migration is a key feature of melanoma progression, and is required for metastasis. SYK (Spleen tyrosine kinase) is a cytoplasmic tyrosine kinase that has been implicated in tumor suppression of breast cancer and melanoma. In skin cells, SYK is found expressed in melanocytes but SYK is frequently downregulated in melanoma by epigenetic silencing. We showed previously that its loss has been associated with senescence escape. Whether it also regulates tumor cell migration and subsequent metastasis remains poorly understood. In this work we used gain- and loss-of-function approaches to analyze SYK’s effects on metastatic abilities of human and murine melanoma cells. Respectively, the reexpression or knockdown of SYK results in decreased or increased migration, invasion and metastasis of melanoma cells. Notably, SYK knockdown cells displayed a mesenchymal-like phenotype with upregulation of mesenchymal markers. Our study unveils a novel role for SYK in suppressing integrin-mediated adhesion, both a points of traction and a signaling platform during cell migration, and outlines the importance of SYK inactivation in acquisition of a metastatic phenotype. To clarify the role of SYK in melanoma formation and progression, we have generated a conditional Syk KO mouse model in melanoma based on melanocyte-specific Pten loss and BrafV600E activating mutation. Preliminary results suggest that Syk loss does not accelerate Pten/Braf-driven melanoma formation but leads to deep invasion of Braf/Pten tumor cells into the dermis
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Pechloff, Konstanze. "Conditional in vivo expression of the fusion kinase ITK-SYK". Diss., Ludwig-Maximilians-Universität München, 2013. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:19-159471.
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Nys, J. "Role of the Syk tyrosine kinase in mature B cell function". Thesis, University College London (University of London), 2010. http://discovery.ucl.ac.uk/20243/.
Texto completoResumen
Signal transduction through the antigen receptor of B cells (BCR) is crucial in controlling their development and maintenance, and is also needed for B cell immune responses. Syk, a protein tyrosine kinase, has already been implicated in signalling downstream of the BCR. Mice deficient for Syk show a developmental block at the immature to mature B cell stage such that no mature B cells are generated. Thus it has not been possible to use these targeted mice to study the role of Syk in the activation of mature B cells or in antigen-driven B cell responses. To get around this, I used mice with an inducible conditional knock out (CoKO) of Syk to generate mature B cells lacking Syk. This has allowed me to study the role of Syk in mature B cell activation and its involvement in the immune response. In this work I show that B cells from Syk CoKO mice are unable to respond to BCR stimulation. I also addressed the requirement in Syk for T-dependent immune responses, looking at both primary and secondary responses. The primary response was Syk-dependent, while, surprisingly, the secondary response seems to be Syk-independent. Finally, I investigated the role of Syk downstream of TLR receptors. Unexpectedly, Syk CoKO B cells were unresponsive to TLR4 stimulation. This defect is B cell autonomous and may be due to reduced signaling through the Akt/Gsk-3/cMyc pathway, downstream of the BCR.
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Garcia, Emilien. "Rôle de la tyrosine kinase SYK dans la régulation du processus métastatique du mélanome". Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016AZUR4154.
Texto completoResumen
La progression tumorale en cancer métastatique implique la perte de fonctions oncosuppressives, comme c'est le cas dans le mélanome. Une migration cellulaire aberrante est caractéristique de la progression du mélanome. SYK (Spleen tyrosine kinase) est une tyrosine kinase cytoplasmique impliquée dans la suppression tumorale du cancer du sein et du mélanome. Dans la peau, SYK est exprimée dans les mélanocytes mais est fréquemment réprimée épigénétiquement dans le mélanome. Nous avions pu montré que cette perte était associée à un échappement de la sénescence. Qu'elle puisse réguler la migration des cellules tumorales et la formation des métastases reste peu connu. Dans mes travaux j'ai utilisé des approches gain et perte de fonction pour analyser l'effet de SYK sur les mélanomes humains et murins. Respectivement, la réexpression et l'extinction de SYK diminue et augmente la migration, l'invasion et les métastases des cellules de mélanome. L'extinction de SYK induit notamment un phénotype et une signature mésenchymateuse. Notre étude dévoile ce rôle pour SYK dans la répression d'une adhérence dépendante des intégrines, points de tractions et plateforme de signalisation de la migration, et souligne l'importance la perte de SYK dans la formation de métastases. Pour clarifier le rôle de SYK dans la progression du mélanome, j'ai généré un modèle murin de KO conditionnel de SYK spécifique des mélanocytes concomitants à une perte de Pten et de l'activation de BrafV600E. Des résultats préliminaires suggèrent que la perte de SYK n'accélère pas la formation de mélanome dans ce contexte mutationnel mais mène à une invasion plus profonde des cellules tumorales dans le dermeThe progression of tumors to metastatic disease involves the loss of metastatic suppressor functions, as it is the case in melanoma. Thus, aberrant cell migration is a key feature of melanoma progression, and is required for metastasis. SYK (Spleen tyrosine kinase) is a cytoplasmic tyrosine kinase that has been implicated in tumor suppression of breast cancer and melanoma. In skin cells, SYK is found expressed in melanocytes but SYK is frequently downregulated in melanoma by epigenetic silencing. We showed previously that its loss has been associated with senescence escape. Whether it also regulates tumor cell migration and subsequent metastasis remains poorly understood. In this work we used gain- and loss-of-function approaches to analyze SYK’s effects on metastatic abilities of human and murine melanoma cells. Respectively, the reexpression or knockdown of SYK results in decreased or increased migration, invasion and metastasis of melanoma cells. Notably, SYK knockdown cells displayed a mesenchymal-like phenotype with upregulation of mesenchymal markers. Our study unveils a novel role for SYK in suppressing integrin-mediated adhesion, both a points of traction and a signaling platform during cell migration, and outlines the importance of SYK inactivation in acquisition of a metastatic phenotype. To clarify the role of SYK in melanoma formation and progression, we have generated a conditional Syk KO mouse model in melanoma based on melanocyte-specific Pten loss and BrafV600E activating mutation. Preliminary results suggest that Syk loss does not accelerate Pten/Braf-driven melanoma formation but leads to deep invasion of Braf/Pten tumor cells into the dermis
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Saen, Michaël Bastien. "La tyrosine kinase Syk influence négativement la progression du cycle cellulaire à travers la phosphorylation de la kinase Cdk1". Montpellier 2, 2009. http://www.theses.fr/2009MON20200.
Texto completoResumen
La tyrosine kinase cytoplasmique Syk a longtemps été étudiée dans les cellules hématopoïétiques en tant qu'acteur de la réponse immunitaire. Notre laboratoire a montré, pour la première fois, une expression de Syk dans les cellules et tissus mammaires humains sains et faiblement tumorigéniques, alors qu'elle est absente ou peu exprimée dans les cellules et carcinomes mammaires invasifs. La transfection de Syk dans une lignée de cancer du sein fortement tumorigénique, abolit sa capacité tumorale et métastastique chez la souris athymique, conférant à Syk un rôle de suppresseur de tumeurs. Curieusement, la surexpression de Syk par transfection provoque des défauts de division cellulaire, et induit une mort cellulaire, évoquant la catastrophe mitotique. De plus notre laboratoire a montré que Syk est localisée et catalytiquement active au niveau des centrosomes, et que son expression y est régulée de façon spatio-temporelle au cours du cycle cellulaire. Néanmoins, les mécanismes moléculaires ainsi que les effecteurs de Syk responsables de son activité anti-oncogénique demeurent inconnus. Dans cette thèse nous montrons que Syk pourrait agir de façon négative sur le déroulement de la division cellulaire à travers la phosphorylation d'une protéine clef de la mitose: la kinase Cdk1. Nous avons observé que Syk interagit avec le complexe Cdk1/cycline B1 et phosphoryle Cdk1 sur différents résidus tyrosine aux centrosomes dont la tyrosine 15, connue pour influencer négativement le déroulement de la mitose. Etonnamment, la surexpression transitoire de Syk provoque une accumulation des cellules en phase G1 du cycle cellulaire. Enfin, nous démontrons que des agents anticancéreux provoquant du stress génotoxique et bloquant le cycle cellulaire, induisent la phosphorylation de Cdk1 sur tyrosine dépendant de l'activation de Syk. Ces fonctions nouvelles de Syk contribueront à une meilleure compréhension de son activité anti-oncogénique dans les cellules de cancer du seinThe non-receptor Syk tyrosine kinase has mainly been studied in haematopoietic cells in which it plays a key role in the immune-response signalling. Our laboratory demonstrated for the first time that Syk is expressed also in normal human breast cells and tissue and low-tumorigenic breast cancer cell lines, whereas its expression is low or undetectable in invasive breast carcinoma tissue and cell lines. Transfection of Syk in a highly tumorigenic breast cancer cell line suppressed its tumorigenic and metastatic capacity in athymic mice, suggesting that Syk acts as a tumour suppressor. Surprisingly, overexpression of transfected Syk provokes abnormal cell division and a non-apoptotic cell death, reminiscent of mitotic catastrophe. Furthermore, our laboratory demonstrated that Syk is localized and catalytically active at the centrosomes, in which Syk expression is controlled in a spatio-temporal manner. Nevertheless, the molecular mechanisms and the Syk effectors responsible for its anti-oncogenic activity remain unknown. In this PhD thesis, we demonstrate that Syk could negatively affect cell division through the phosphorylation of a key protein involved in the control of mitosis: the Cdk1 kinase. We observed that Syk interacts with the Cdk1/cyclin B1 complex and that it phosphorylates Cdk1 on different tyrosine residues, amongst which we identified the tyrosine 15 residue, known to negatively affect the progression of mitosis. Surprisingly, transient Syk overexpression induced an accumulation of cells in the G1 cell cycle phase. Finally, we demonstrate that anti-cancer drugs that provoke genotoxic stress and a cell cycle block induce phosphorylation of Cdk1 on tyrosine and this in a Syk activation-dependent manner. These novel aspects of Syk function will undeniably contribute to a better understanding of its onco-suppressive activity in breast cancer cells
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Schweighoffer, Edina. "The role of Syk protein tyrosine kinase in B cell development and function". Thesis, Open University, 2002. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.250493.
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Mayanglambam, Azad. "Regulation of Protein Kinases (Syk and PKC zeta) in platelets". Diss., Temple University Libraries, 2010. http://cdm16002.contentdm.oclc.org/cdm/ref/collection/p245801coll10/id/91635.
Texto completoResumen
PhysiologyPh.D.
Platelets are crucial components of the hemostatic machinery of the body. When the endothelial continuity is disrupted due to injury or atherosclerotic plaque rupture, one of the earliest responses to arrest the bleeding is the adhesion of circulating platelets to the exposed subendothelial collagen matrix. Subsequent intracellular signaling mediated downstream of various receptor systems leads to alpha IIb beta 3 activation, thromboxane generation, ADP release, etc., culminating in platelet clot or thrombus formation. The protein kinase family of enzymes mediates a significant number of these intracellular signaling events that culminate in platelet activation. These enzymes can be broadly classified into two classes- tyrosine kinases and serine/threonine kinases. Syk (spleen tyrosine kinase) is an important non-receptor tyrosine kinase present in platelets and plays an important role downstream of GPVI-FcR gamma chain receptor complex activation. We studied the effects of curcumin (diferuloylmethane), which is the active ingredient found in the herbal remedy and food spice turmeric, on the GPVI-mediated platelet activation. We have found that it significantly inhibits the kinase activity of Syk without affecting its phosphorylation. Pre-incubating the platelets with curcumin for only a minute resulted in a concentration-dependent inhibition of aggregation and secretion, with approximately 75% inhibition observed at 50 mM curcumin. Additionally, the activation-dependent phosphorylation of tyrosines 753/759 on PLC gamma2 and phosphorylation of tyrosine 191 on the transmembrane scaffold protein LAT, were inhibited (p<0.05). However, the phosphorylation of the activation loop tyrosines 525/526 on Syk and of the tyrosine 145 on intracellular adaptor molecule SLP-76 were not significantly affected. Furthermore, the inhibitory action of curcumin on the catalytic activity of Syk was independent of any of its effects on the thromboxane generation because all our studies were performed using aspirin-treated platelets. PKC zeta is an atypical member of the PKC family of serine/threonine kinases. In this study, we have confirmed that it is expressed in human platelets and is constitutively phosphorylated at the activation loop threonine 410 as well as the turn motif threonine 560, which is an autophosphorylation site. Phosphorylation at these two residues has been shown to be important for its kinase activity. Furthermore, agonist-mediated platelet aggregation under stirring condition results in dephosphorylation of the Thr410 residue, which can be prevented by blocking integrin alpha IIb beta 3 by its antagonist SC-57101 (p<0.01). The dephosphorylation of Thr410 can also be prevented by okadaic acid, a Ser/Thr protein phosphatase inhibitor, at concentrations above 100 nM. However, in PP1c gamma null mice, we did not observe any effect on the dephosphorylation, suggesting that other isoforms of PP1 or other classes of the phosphatases could be responsible for this phenomenon, at least in these knockout mice. The basal phosphorylation of Thr560, however, remained unaffected by agonist stimulation, integrin activation, integrin blockade, okadaic acid treatment and in the PP1c gamma null mice. It can be speculated that PKC zeta may be constitutively active under basal resting conditions and acts as a negative regulator of platelet activation or functional responses. The Thr560 autophosphorylation signal alone may not be sufficient to sustain its full enzymatic activity.
Temple University--Theses
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Le, Roux Delphine. "Régulation des interactions entre endosomes et cytosquelette pendant la présentation antigénique : un rôle pour la protéine tyrosine kinase Syk". Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066472.
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Fargier, Guillaume. "Comportement dynamique au centrosome de la tyrosine kinase Syk, un nouveau suppresseur de tumeur dans le sein : étude par microscopie à haute résolution". Montpellier 2, 2009. http://www.theses.fr/2009MON20241.
Texto completoResumen
Très étudiée pour son rôle dans la signalisation des immuno-récepteurs, la tyrosine kinase Syk agirait comme suppresseur de tumeur et de métastase dans l'épithélium mammaire. Le mécanisme de cette activité anti-oncogénique reste inconnu. En plus de la localisation cytoplasmique, Syk est localisée aux extensions membranaires et au centrosome où elle est catalytiquement active, avec une variation de la concentration au cours du cycle cellulaire. Les localisations de mutants de Syk dans la cellule dépendent du type du site tyrosine muté d'une part, et les effecteurs potentiels de Syk reconnus par analyse protéomique d'autre part, font penser à un code de phosphorylation qui dépendrait du résidu tyrosine activé pour cibler la kinase à des sites sub-cellulaires différents. Afin de caractériser la dynamique des échanges de Syk entre compartiments subcellulaires et surtout dans le centrosome, nous avons employé des approches d'imagerie à haute résolution sur cellules vivantes de cancer du sein transfectées par des formes sauvage ou mutantes de DsRed-Syk. L'approche de FRAP et l'utilisation d'une chimère photo-activable (PA-GFP-Syk) montrent que Syk est recrutée activement au centrosome, avec un τ de 18,54 ± 3,63 sec. L'utilisation d'inhibiteurs de polymérisation de microtubules ou du moteur moléculaire dynéine/dynactine, la visualisation par TIRF des déplacements de particules de Syk à la base des cellules, la co-localisation par immunofluorescence, l'observation confirmée par modélisation d'une dérive directionnelle de PA-GFP-Syk après activation, tout indique que cytosquelette microtubulaire et moteur moléculaire sont nécessaires pour le recrutement de Syk au centrosomeInitially studied for its role in immunoreceptor-mediated downstream signalling, the tyrosine kinase Syk acts like a tumor and metastasis suppressor within breast cancer cells. The mechanism of its anti-oncogenic activity remains, however, to be identified. In addition to its cytoplasmic localization, Syk is also visualized at plasma membrane extensions and at the centrosome in which it exhibits a catalytic activity and is tightly regulated along the cell cycle. Considering both the action sites of potential effectors as identified by proteomic approach and differently targeted DsRed-Syk following the tyrosine residue mutated, we hypothesize a phosphorylation code targeting the kinase at different sub-cellular compartments depending on the tyrosine residue activated. In order to determine whether a dynamic exchange occurs between the subcellular compartments, we applied different imaging techniques on living breast cancer cells transiently expressing wild-type and mutant fluorescent Syk chimeras. Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) with DsRed-Syk and photoactivatable GFP-Syk clearly evidenced rapid exchanges at the centrosomes with a recruitment τ of 18,54 ± 3,63 sec. Treatments affecting the microtubule skeleton or the molecular motor dynein, TIRF imaging of Syk clusters, antibody co-localization, directional drift of activated PA-GFP-Syk corroborated by mathematical modelling, together show that the tubulin cytoskeleton and the microtubule motor dynein/dynactin are necessary for Syk recruitment at the centrosome
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Yamamoto, Noriyuki. "Development of a selective inhibitor for Syk tyrosine kinase and investigation of its pharmacological activities". 京都大学 (Kyoto University), 2003. http://hdl.handle.net/2433/148369.
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Pechloff, Konstanze [Verfasser] y Daniel [Akademischer Betreuer] Krappmann. "Conditional in vivo expression of the fusion kinase ITK-SYK / Konstanze Pechloff. Betreuer: Daniel Krappmann". München : Universitätsbibliothek der Ludwig-Maximilians-Universität, 2013. http://d-nb.info/1038152178/34.
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Zyss, Déborah. "Syk, protéine kinase impliquée dans le cancer du sein : localisation centrosomale et rôle dans la division cellulaire". Montpellier 2, 2006. http://www.theses.fr/2006MON20038.
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Then, Cornelia. "Die Bedeutung der Tyrosinkinase Syk für die Aktivierung der PI3-Kinase bei der β2-Integrin-abhängigen Leukozytenmigration". Diss., lmu, 2008. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:19-86071.
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Larive, Romain. "Identification et caractérisation fonctionnelle des effecteurs du suppresseur de tumeurs Syk dans les cellules de cancer du sein". Montpellier 2, 2008. http://www.theses.fr/2008MON20165.
Texto completoResumen
La protéine tyrosine kinase cytoplasmique Syk a été principalement étudiée dans les cellules hématopoïétiques, et intervient dans la signalisation en aval des immuno-récepteurs. Plus récemment, de nombreuses études ont mis en évidence que Syk est également exprimée dans différents types cellulaires non-hématopoïétiques et qu'elle est impliquée dans la tumorigenèse et la progression tumorale. Plus précisément, la perte de son expression dans les tumeurs mammaires a été corrélée avec un risque accrue de métastases et la ré-expression de Syk par transfection dans des cellules de cancer du sein diminue leurs capacités tumorigéniques et métastatiques après injection chez la souris. Les protéines effectrices en aval de Syk dans ces cellules restent inconnues jusqu'à présent et ont été identifiées par spectrométrie de masse avec une approche de phospho-protéomique quantitative en utilisant la méthode SILAC (Stable Isotope Labelling with Amino acids in Cell culture). Deux stratégies basées sur l'inhibition de l'activité catalytique de Syk avec l'inhibiteur pharmacologique le picéatannol, et sur sa perte d'expression dans les cellules de cancer du sein métastatiques ou résistantes à la doxorubicine, ont permis d'obtenir des données quantitatives sur plus de 350 protéines purifiées par immuno-affinité phospho-tyrosine. Parmi les 41 effecteurs potentiels présentant une phosphorylation dépendante de l'activité catalytique et de l'expression de Syk, une dizaine sont impliqués dans l'adhésion intercellulaire et la polarisation épithéliale, deux fonctions cellulaires souvent dérégulées lors de la progression tumorale. De façon intéressante, nous avons mis en évidence que Syk phosphoryle l'ezrine, un composant du cytosquelette lié à l'actine, ainsi que les principaux composants des jonctions adhérentes (E-cadhérine et différentes caténines), induisant des effets comparables ou opposés aux tyrosine kinases oncogéniques phosphorylant ces mêmes protéines. Les conséquences fonctionnelles de ces modifications permettront d'élucider le mécanisme de l'activité onco-suppressive de Syk dans les cellules épithélialesThe cytoplasmic protein tyrosine kinase Syk (Spleen tYrosine Kinase) has predominantly been studied in hematopoietic cells in which it is involved in immunoreceptor-mediated downstream signaling. Recently, numerous studies evidenced that Syk is also expressed in multiple non-hematopoietic cells and that it is involved in tumor formation and progression. More particularly, loss of Syk expression in breast tumors has been correlated with an increased risk for metastasis formation and re-expression of Syk by transfection reduced the tumorigenic and metastatic capacities in breast cancer cells injected in mice. The downstream Syk signaling effectors in these cells remain presently unknown and were identified by mass spectrometry using the quantitative phosphoproteomic SILAC (Stable Isotope Labelling with Amino acids in Cell culture) approach. Two strategies based on the inhibition of the Syk catalytic activity with the pharmacological inhibitor piceatannol and on the loss of Syk expression in metastatic or doxorubicin-resistant breast cancer cell lines allowed to quantify over 350 proteins purified on phosphotyrosine-dependent immuno-affinity columns. Amongst the 41 potential effectors that are both dependent on the Syk expression and catalytic activity, ten proteins are involved in intercellular adhesion and epithelial polarization, two cell activities frequently deregulated during tumour progression. Most interestingly, we evidenced that Syk phosphorylates ezrin, a component of the actin-based cytoskeleton, as well as the principal adherens junction components (E-cadherin and several catenins), thereby triggering analogous or opposite effects as compared to oncogenic tyrosine kinases phosphorylating the same proteins. The functional consequences of these modifications will allow to elucidate the mechanism of the Syk onco-suppressive activity in epithelial cells
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Baudot, Alice. "Rôle de la protéine kinase Syk dans la survie des cellules de leucémie lymphoïde chronique de type B". Nice, 2010. http://www.theses.fr/2010NICE4024.
Texto completoResumen
La leucémie lymphoïde chronique de type B (LLC-B) constitue la forme de leucémie de l’adulte la plus fréquente en occident. Une caractéristique majeure des cellules de LLC-B est leur résistance accrue à une apoptose physiologique. Cette résistance est le seul résultat d’une combinaison de facteurs intrinsèques à la cellule et facteurs extrinsèques liés au microenvironnement. Parmi ces facteurs, la signalisation issue du récepteur de l’antigène (le BCR) est directement impliquée dans l’expansion clonale et la survie des cellules leucémiques. Ce processus met en jeu de nombreuses molécules de signalisation, dont la proétine tyrosine kinase Syk. Le but de notre travail a été de mettre en évidence le rôle de Syk dans la régulation de la survie des cellules leucémiques de patients atteints de LLC-B et d’étudier les mécanismes moléculaires impliqués dans les phénomènes de survie. Au cours de nos travaux, nous avons pu mettre en évidence que la protéine tyrosine kinase Syk, constitutivement active dans les cellules de LLC-B était essentielle à leur survie. En effet, le ciblage pharmacologique ainsi que l’extinction par ARN interférence de cette protéine induit l’apoptose rapide et massive des cellules leucémiques de 44 patients testés et ceci, indépendamment du statu clinique ou biologique des malades. Nous avons mis en évidence un nouveau modèle où Syk, via la régulation de l’activité de PKCδ et d’Akt, stabilise l’expression de la protéine anti-apoptique Mcl-1 et participe à la régulation de la survie des cellules de LLC-BB-cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) is characterized by the accumulation of mature monoclonal CD5+ B cells. The disease results mainly from a failure of cells to undergo apoptosis, a process largely influenced by the existence of constitutively activated components of BCR signalling and the deregulated expression of anti-apoptotic molecules. Recent evidence pointing to a critical role of spleen tyrosine kinase (Syk) in ligand-independent BCR signalling prompted us to examine its role on CLL cells survival. Using primary leukemic cells, we show that pharmacologic inhibition of constitutive Syk activity and depletion of tis expression by siRNAs led to a dramatic decrease of cell viability in all tested CLL samples (n=44/44), regardless of clinical and biological status, and induced typical apoptotic cell death, with mitochondrial failure followed by caspase 3-dependent cell death. These events were accompanied by a decreased phosphorylation of PKCδ, but not PKCα/δ, and by a down-regulation of Mcl-1, but not XIAP. Moreover, the degradation of Mcl-1 following Syk inhibition elide on a caspase-independent, but proteasome-dependent process, and was rescued by the expression of B-Cll cell viability and represents an attractive therapeutic target
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Lhermusier, Thibault. "Régulation plaquettaire : ciblage de la protéine kinase Syk dans les HIT et rôle du transporteur lipidique ABCA1 dans les fonctions plaquettaires". Toulouse 3, 2012. http://thesesups.ups-tlse.fr/1698/.
Texto completoResumen
Les plaquettes sanguines jouent un rôle essentiel dans le maintien de l'intégrité vasculaire. Outre leur rôle physiologique conduisant à la formation du clou hémostatique en cas de brèche vasculaire, elles sont impliquées dans des pathologies thrombotiques comme l'athérothrombose ou les thrombopénies induites par l'héparine (TIH), ce qui en fait des cibles pharmacologiques de choix dans ces situations. Nous avons étudié les mécanismes mis en jeux par les plaquettes dans deux situations pathologiques ; les TIH avec la tyrosine kinase Syk comme acteur majeur et la maladie de Tangier résultant d'une mutation perte de fonction du transporteur de lipide ABCA1. Les TIH sont des complications rares mais graves des traitements à l'héparine dues au développement d'anticorps dirigés contre le complexe héparine-facteur 4 plaquettaire (PF4). Ces anticorps induisent la clairance des plaquettes (thrombopénie) et activent les récepteurs Fc à la surface des plaquettes (FcgRIIA) et des monocytes (FcgRI et FcgRII) conduisant à l'agrégation plaquettaire et l'expression du facteur tissulaire par les monocytes responsable des complications thrombotiques. Nous montrons que Syk est une kinase essentielle à l'activation des plaquettes (signalisation, sécrétion, agrégation, microparticules) par les anticorps dirigés contre le complexe héparine-PF4 présents dans le sérum de patients atteints de TIH. Parallèlement, l'inhibition de Syk bloque fortement l'expression du facteur tissulaire et l'activité procoagulante des monocytes induites par les anticorps TIH. Les inhibiteurs de Syk, en développement clinique avancé en immunothérapie, apparaissent donc prometteurs dans le traitement des TIH. ABCA1 est impliqué dans le transport réverse du cholestérol et de phospholipides vers les lipoprotéines de haute densité. Son déficit est associé à de profondes anomalies du bilan lipidique mais aussi à un phénotype hémorragique. Grâce à un modèle de souris déficientes en ABCA1, nous avons caractérisé son rôle dans l'activation plaquettaire. Contrairement à ce que l'on aurait pu penser, ABCA1 n'est pas impliqué dans l'exposition des phosphatidylsérines et l'activité procoagulante des plaquettes activées, et ne régule pas le contenu en cholestérol des membranes plaquettaires. Par contre, un défaut de taille des plaquettes et de leurs réponses fonctionnelles sont observés en son absence. ABCA1 apparaît comme un régulateur des mécanismes de signalisation pouvant expliquer le phénotype hémorragique rapporté dans la maladie de Tangier. L'ensemble de ces travaux a permis de caractériser des acteurs moléculaires de l'activation plaquettaire dans des situations pathologiques et de proposer de nouvelles stratégies thérapeutiquesPlatelet activation at sites of vascular injury is essential for haemostasis. Next to this critical role in bleeding arrest, platelets are involved in thrombotic diseases such atherothrombosis or heparin-induced thrombocytopenia (HIT). Therefore, they are targets of antithrombotic therapies. We have studied the mechanisms of platelet activation in two pathological situations; HIT with the tyrosine kinase Syk as a key player and Tangier disease resulting of a loss of function of the ABCA1 lipid transporter. HIT is a prothrombotic and potentially devastating complication of heparin therapy due to formation of platelet-activating antibodies directed against complexes of platelet factor 4 (PF4) and heparin. These antibodies contribute to clear platelet from the circulation and activate, by their Fc fragment, Fc?RIIA receptors on platelet surface or FcgRI and FcgRII receptors on monocyte, leading to platelet aggregation and tissue factor expression by monocytes. We have shown that Syk activation is crucial for platelet activation (signalization, secretion, aggregation, microparticle generation) initiated by anti-PF4/heparin antibodies from sera of patients suffering from HIT. Interestingly, Syk inhibition also prevented tissue factor expression and procoagulant activity of moncytic cells induced by these antibodies. We propose that Syk inhibitors, initially developed as a potential treatment of autoimmune disease, may be of therapeutic interest in the treatment of HIT. ABCA1 has been demonstrated to be crucial in the reverse cholesterol transport pathway by loading cholesterol and phospholipids into ApoA-I to generate high density lipoproteins. Its defect is associated to circulating lipid disturbance but also to hemorrhagic diathesis. Surprisingly, using ABCA1 knock-out mice, we have demonstrated that this transporter is neither implicated in phosphatidyserine exposure, a mechanism leading to the procoagulant activity of activated platelets, nor in the control of platelet membranes cholesterol content. However, mouse platelets deficient for ABCA1 have an increased size and a defect in response to low doses of agonists such as thrombin and collagen. Our data indicate that ABCA1 is involved in the efficiency of platelet signal transduction, particularly in the activation of Akt. These studies have characterized key players of platelet activation and suggest new strategies in the development of antithrombotic therapies
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Kassouf, Toufic. "Rôle de la tyrosine kinase Syk, un candidat suppresseur de tumeur, dans l'adhérence intercellulaire et l’intégrité épithéliale de la glande mammaire". Thesis, Montpellier, 2016. http://www.theses.fr/2016MONT3518.
Texto completoResumen
La spleen tyrosine kinase (Syk) est une protéine kinase cytoplasmique qui intervient dans la signalisation immunitaire. Notre équipe a montré pour la première fois que Syk est exprimée aussi dans les cellules épithéliales mammaires et que son expression est perdue au cours de l’acquisition d’un phénotype invasif/métastatique. Syk agit comme un suppresseur de tumeurs et de métastases dans des modèles de xénogreffes de cancer du sein. Ces observations ont été étayées par des études cliniques qui montrent que la perte d’expression de Syk correspond à un risque accru de développement de métastases (facteur de mauvais pronostic) dans le cancer du sein et d’autres carcinomes. Par une approche de phospho-protéomique quantitative (SILAC), nous avons pu identifier de nouveaux substrats potentiels de Syk dans les cellules de cancer du sein. De façon intéressante, ressortent de nombreuses protéines impliquées dans l'adhésion intercellulaire (E-cadhérine/caténines) et la polarisation épithéliale (eg ZO3, occludine, claudine-3). Ces protéines, qui se localisent aux jonctions d'adhésion et d'occlusion, sont connues comme composants plate-formes de signalisation et exercent souvent une fonction de suppresseur de tumeur.Dans ce travail de thèse je me suis focalisé principalement sur :(i) le rôle de l’activité kinase de Syk dans la régulation du complexe E-cadhérine/caténines et(ii) les conséquences de l’invalidation conditionnelle de Syk dans la glande mammaire murine (développement mammaire et tumorigenèse).Par une approche de phosphorylation in vitro, nous avons montré que la E-cadhérine et différentes caténines sont des substrats directs de Syk. Les résidus tyrosines phosphorylés dans ces protéines ont été identifiés par spectrométrie de masse et les anticorps phospho-spécifiques correspondants ont été générés. En immunofluorescence, Syk endogène colocalise avec la E-Cadhérine au niveau des jonctions adhérentes et la surexpression de Syk stimule la phosphorylation de la E cadhérine et différentes caténines au niveau des jonctions intercellulaires. Des expériences d’immunoprécipitation montrent que les protéines E-cadhérine et caténines phosphorylées restent associées dans un complexe au niveau des jonctions adhérentes. L’extinction de Syk par shRNA dans une lignée de cancer de sein inhibe partiellement la ré-agrégation intercellulaire (2D/3D) et augmente l’invasion et la migration cellulaires et la croissance en 3D dans le Matrigel. Inversement, la surexpression de Syk inhibe la migration et l’invasion et favorise l'adhérence intercellulaire. Syk semble par la phosphorylation du complexe E-cadhérine/caténines consolider leurs interactions renforçant ainsi les jonctions intercellulaires et l’intégrité de l’épithélium, ce qui pourrait révéler un mécanisme majeur responsable de son activité anti-invasive. Leurs mécanismes moléculaires ont été explorés.Ces modèles cellulaires in vitro ont ensuite été étendus vers un modèle intégré murin. L'invalidation homozygote du gène SYK étant létale, nous avons développé un modèle d’invalidation conditionnelle de Syk dans la glande mammaire (Syk-flox:WAP-Cre). Ce modèle nous a permis tout d’abord d’étudier le rôle de Syk dans le développement et la physiologie de la glande mammaire au cours de la lactation et de l’involution, les glandes Syk-négatives montrant des défauts de développement. Il permet à plus long terme également d’évaluer l'implication de Syk dans la formation et la progression du cancer du sein chez des souris cKO Syk, après croisement ou non avec des souris transgéniques exprimant l’oncogène MMTV-Neu/Her2.Déterminer si Syk est un bona fide suppresseur de tumeurs est crucial car un inhibiteur de Syk est en cours d’étude clinique pour le traitement de l’arthrite rhumatoïde. L’identification des voies de signalisation gouvernées par Syk pourrait ultérieurement déboucher sur le développement de nouvelles thérapies ciblant ces protéines et bloquant l'évolution cancéreuseThe spleen tyrosine kinase (Syk) is a cytoplasmic protein kinase involved in immune-response signaling. Our team showed for the first time that Syk is also expressed in mammary epithelial cells and that its expression is lost during acquisition of an invasive/metastatic phenotype. Syk acts as a tumor and metastasis suppressor in breast cancer xenograft models. Clinical studies corroborated that loss of Syk expression is correlated with a decreased survival and an increased risk of metastasis development (poor prognosis) in breast cancer and other carcinomas. Using a quantitative phospho-proteomic SILAC approach in breast cancer cells, our group identified new potential Syk substrates. Interestingly, many proteins are involved in intercellular adhesion (E-cadherin/catenin) and epithelial polarization (eg ZO3, occludin, claudin-3). These proteins are localized at the adherens and tight junctions and are known as signaling platforms and components often presenting a tumor suppressor function.In this thesis I mainly focused on:(i) the role of the Syk kinase activity in the regulation of the E-cadherin/catenin complex and(ii) the consequences of the conditional Syk knockout in the mouse mammary gland on breast development and tumorigenesis.Using in vitro kinase assays, we demonstrated that E-cadherin (E-Cdh) and different catenins are direct Syk substrates. The phosphorylated tyrosine residues were identified by mass spectrometry and corresponding phospho-specific antibodies were generated. By immunofluorescence, we observed that endogenous Syk and E-Cdh colocalize at adherens junctions (AJ) and that Syk overexpression stimulates Syk-dependent phosphorylation of E-cadherin and different catenins at AJ. Immunoprecipitation experiments indicate phosphorylated E-cadherin and catenin proteins are associated in a complex. Using functional tests, Syk knockdown by shRNA in breast cancer cells partially inhibited intercellular re-aggregation (2D/3D) and increased cell invasion, migration and 3D-growth in Matrigel. Conversely, Syk overexpression inhibited migration and invasion and promoted intercellular adhesion. Thus, Syk seems to strengthen the intercellular junctions and the integrity of the epithelium via the phosphorylation of the E-cadherin/catenin complex of which its molecular mechanisms were explored. This could be a major mechanism responsible for its anti-invasive activity.These in vitro observations were subsequently extended to an integrated mouse model. As the homozygous SYK gene knockout is lethal; we developed a conditional Syk deletion model in the murine mammary gland (Syk-flox:WAP-Cre).This model allowed us to study the role of Syk in the development and physiology of the mammary gland during lactation and involution, the Syk-negative glands showing developmental defects. On a long-term basis, it also allows to assess the involvement of Syk in the formation and progression of breast cancer in aging cKO Syk mice, bred or not with transgenic mice expressing the MMTV-Neu / Her2 oncogene.Whether Syk is a bona fide tumor suppressor is a crucial issue as Syk inhibitors are being evaluated in clinical studies for the treatment of rheumatoid arthritis. Identification of the signaling pathways governed by Syk could lead to the development of new therapies targeting these proteins and blocking tumor development and progression
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Bailet, Olivier. "Étude de la protéine tyrosine kinase Syk, un nouveau suppresseur de tumeur dans la transformation des mélanocytes en mélanome". Nice, 2008. http://www.theses.fr/2008NICE4051.
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Une étape cruciale de la transformation maligne est la perte de voie suppresseur de tumeur qui contrôle la sénescence cellulaire. La protéine tyrosine kinase cytoplasmique syk (spleen tyrosine kinase) a été récemment décrite comme un suppresseur de tumeur des mélanomes, un cancer issu de la transformation maligne des mélanocytes, cellules produisant les pigments mélaniques. Le mécanisme par lequel syk diminue la croissance des mélanomes reste à déterminer. Tout d’abord, nous avons observe que l’expression de syk est perdue dans la plupart des lignées de mélanome. L’inactivation de syk est épigénétique due a une hyperméthylation d’îlots cpg de son promoteur. Le traitement avec l’agent déméthylant 5-aza-2-desoxycytidine restaure son expression. Nous avons constate que la réintroduction de syk dans les cellules de mélanome réduit de façon spectaculaire leur croissance en deux et trois dimensions, leur capacité migratoire et invasive. La réexpression de syk favorise la senescence des cellules de mélanomes caracterisée par une diminution de la prolifération, une morphologie large et aplatie, une activité bêta galactosidase associe a la senescence et des foci d’hétérochromatine. De plus, syk induit une hypophosphorylation de rb et active la voie suppresseur de tumeur p53, regule positivement l’expression de p21 dépendamment de p53. Nous avons également identifie les protéines nck1 et nck2 comme de nouveaux partenaires de syk. Nos résultats démontrent que syk est un nouveau candidat suppresseur de la croissance des mélanomes et suggèrent que l’inactivation de syk dans ces tumeurs participe a la levéee de la sénescence qui conduit a la progression maligne des cellulesLoss of tumor suppressive pathways that control cellular senescence is a crucial step in malignant transformation. Spleen tyrosine kinase (syk) is a cytoplasmic tyrosine kinase that has been recently implicated in tumor suppression of melanoma, a deadly skin cancer deriving from pigments-producing melanocytes. However, the mechanism by which syk suppresses melanoma growth remains unclear. Here we report that re-expression of syk in melanoma cells induces a p53-dependent expression of the cyclin-dependent kinase inhibitor p21 and a senescence program. We first observed that syk expression is lost in a subset of melanoma cell lines, primarily by dna methylation mediated gene silencing and restored after treatment with the demethylating agent 5-aza-2-deoxycytidine. We analysed the significance of epigenetic inactivation of syk and found that reintroduction of syk in melanoma cells dramatically reduces clonogenic survival and three-dimensional tumor spheroid growth and invasion. Remarkably, melanoma cells re-expressing syk display hallmarks of senescent cells, including reduction of proliferative activity and dna synthesis, large and flattened morphology, senescence-associated beta galactosidase activity and heterochromatic foci. This phenotype is accompanied with hypophosphorylated retinoblastoma protein and accumulation of p21, which depends on functional p53. Futhermore, we showned that the proteins nck 1/2 are new effectors of syk in melanoma cells. Our results highlight a new role for syk tyrosine kinase in regulating cellular senescence and identify syk-mediated senescence as a novel tumor suppressor pathway whose inactivation may contribute to melanoma tumorigenicity
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Back, Steven. "TULA-2: A Novel Protein Tyrosine Phosphatase That Regulates Osteoclast Differentiation and Function". Diss., Temple University Libraries, 2014. http://cdm16002.contentdm.oclc.org/cdm/ref/collection/p245801coll10/id/254886.
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Cell BiologyPh.D.
The human skeleton is a dynamic organ that serves multiple functions to maintain normal physiology and health. It protects vital organs, provides support for movement, houses marrow and maintains calcium homeostasis. The skeleton is maintained by the work of two cells with opposing functions: osteoblasts, cells that synthesize organic bone matrix and osteoclasts that degrade and resorb it. These cells interact with one another in a tightly regulated process known as the bone remodeling cycle. This cycle maintains the health of bone by removing and replacing weak or damaged bone and responding to stress loads by remodeling portions of the skeleton that require reinforcement. Osteoblasts differentiate from mesenchymal stem cells and respond to hormonal stimuli by synthesizing and secreting cytokines necessary for osteoclast differentiation. Osteoblasts may become embedded within mineralized matrix, becoming osteocytes, cells that can sense changes in mechanical loading and facilitate localization of the remodeling cycle. Osteoclasts differentiate from hematopoietic stem cells (HSC) when the cell surface receptors, c-FMS and RANK, are activated by ligands produced by osteoblasts, M-CSF and RANKL respectively. In addition to c-FMS and RANK stimulation, another calcium-mediated, co-stimulatory pathway must be activated to ensure proper osteoclast differentiation. This pathway is activated by two immunoreceptors, OSCAR and TREM-2 that interact with adaptor proteins termed FcRγ and DAP12 respectively. These adaptor proteins harbor immunoreceptor tyrosine-based activation motifs (ITAM), which exist on their cytoplasmic tail. Once the immunoreceptors are triggered, specific tyrosines within the ITAM motifs become phosphorylated and act as docking points for the tyrosine kinase, Syk. Once bound, Syk autophosphorylates and acts on its downstream targets. Syk dephosphorylation is, therefore, necessary to attenuate this signal to prevent over activation of osteoclasts. Recently, a novel tyrosine phosphatase, T-cell Ubiquitin ligand -2 (TULA-2) has been shown to dephosphorylate specific phosphotyrosine residues on Syk in various systems and has shown an increased specificity to dephosphorylate tyrosine 352. The goal of this project is to determine how TULA-2 mediated dephosphorylation of Syk regulates osteoclast differentiation and function. TULA-2 is a member of the TULA family of proteins, TULA and TULA-2. In spite of a significant homology and similar domain organization between TULA and TULA-2, only TULA-2 has significant phosphatase activity. Furthermore, whereas TULA is expressed only in lymphocytes, TULA-2 is expressed in most tissues albeit a higher level of expression is seen in cells of hematopoietic origin. In vivo analysis including Micro-computed tomography (Micro CT) and histomorphometry indicated that mice that lack both TULA and TULA-2 (DKO) have decreased bone mass compared to wild-type (WT) counterparts. An in vitro cell differentiation assay revealed that a larger population of osteoclast-like cells (OCL) could be cultivated from bone marrow isolated from DKO mice compared to OCL derived from WT bone marrow. An in vitro resorption pit assay revealed that DKO osteoclasts could resorb bone at a faster rate than WT counterparts. Additionally, over-expression of phosphatase-dead TULA-2 in WT osteoclasts increased the ability of the cells to resorb bone. At the molecular level, activation of the co-stimulatory pathway revealed increased tyrosine phosphorylation of Syk 352 in DKO pre-osteoclasts when compared to phosphorylation of Syk isolated from WT pre-osteoclasts. Cumulatively, the above data indicates that the absence of TULA-2 results in an increased signaling response leading to a larger population of hyperactive osteoclasts, which contributes to decreased bone mass in mice. These data suggest that the phosphatase activity of TULA-2 is required for negative regulation of bone resorption.
Temple University--Theses
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Then, Cornelia. "Die Bedeutung der Tyrosinkinase Syk für die Aktivierung der PI3-Kinase bei der 2-Integrin-abhängigen [Beta2-Integrin-abhängigen] Leukozytenmigration". kostenfrei, 2008. http://edoc.ub.uni-muenchen.de/8607/.
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Getz, Todd Michael. "The Regulation of Phosphorylation Events in Platelets". Diss., Temple University Libraries, 2012. http://cdm16002.contentdm.oclc.org/cdm/ref/collection/p245801coll10/id/213114.
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PhysiologyPh.D.
Platelets play a vital role in processes of hemostasis and thrombosis under physiological and pathological conditions. Following vascular damage, platelets will accumulate and stably adhere to exposed subendothelial matrixes. The binding of platelet surface receptor Glycoprotein VI (GPVI) to exposed collagen initiates a signaling cascade, which culminates in platelet activation. Stimulation of GPVI pathways results in the generation of thromboxane and causes the platelets to secrete their granule contents. This generated thromboxane as well as constituents released from dense granules such as ADP, and serotonin, play an essential role in potentiating the platelet response through activation of other surface receptor mediated pathways. Importantly, downstream of all these separate pathways, kinases become activated and play a crucial role in phosphorylating their substrates to elicit critical cellular responses. Previously published studies have established the importance for myosin kinase in its role for phosphorylating the myosin light chain (MLC) downstream of ADP receptors. These studies have shown MLC phosphorylation occurs rapidly and is essential for shape change following the stimulation of ADP receptors. Technological advances in antibody development have resulted in the generation of commercially available phospho-specific antibodies for MLC phosphorylated on either threonine (Thr) 18 or serine (Ser) 19. These antibodies allowed us to revisit these prior studies and address whether phosphorylation on MLC (Ser) 19 would elicit one response while phosphorylation on (Thr) 18 may result in another functional response. Our result show, that MLC is phosphorylated rapidly on (Ser) 19 and plays an important role in shape change downstream of Gq pathways, while MLC (Thr) 18 phosphorylation occurs at a slower rate downstream of G12/13 pathways and contributes to platelet dense granule secretion. Protein kinase C's (PKC) are serine/threonine kinase, which become activated following the stimulation of many of the platelet surface receptors. PKCs are classified into three groups, classical (α, βI, βII, γ), novel (δ, ε, η, θ), and atypical (ζ, ι, λ, μ) based on their cofactor requirements for activation. The classical PKCs, which require diacylglycerol and calcium for their activation were investigated using the specific inhibitor Go6976. Much to our surprise, we demonstrated that downstream of GPVI pathways, Go6976 caused non-selective inhibition of Spleen tyrosine kinase (Syk) activity. This inhibition of Syk activity resulted in a concentration-dependent reduction in phosphorylation of downstream molecules Lat and PLCγ2 as well as platelet aggregation and secretion. Stimulation of surface receptors GPVI, CLEC-2, GPIb, and FcRIIa, all lead to the activation of tyrosine kinase pathways. The role for Syk in these pathways is essential and in the absence of its activity these pathways are completely shut down. We inadvertently discovered dextran sulfate (DxS) actives platelets. Our results show that DxS activates a Src-dependent pathway which does not utilize surface receptors GPVI, CLEC-2, GPIb, or FcRIIa. Platelets pretreated with Syk inhibitors OXSI-2 or Go6976 failed to cause αIIbβ3 activation in response to convulxin, however, platelets activated with DxS under the same conditions retained the ability to activate αIIbβ3. In response to DxS, platelet aggregation, intracellular calcium mobilization, and αIIbβ3 activation were significantly inhibited in platelets pre-treated with PI-3K inhibitors. Taken together these results for the first time establish a novel tyrosine kinase pathway in platelets that cause fibrinogen receptor activation in a PI-3K dependent manner without a role for Syk. In conclusion, we have evaluated the role of myosin light chain kinase, Syk, and PI-3 kinase downstream of platelet receptor-mediated pathways. We have examined the phosphorylation status of several of their effector molecules and have correlated these events with their functional responses in platelets. Here we have highlighted several roles for platelet kinases and their relative importance in regulating platelet functional outcomes.
Temple University--Theses
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Bohnenberger, Hanibal Verfasser], Jürgen [Akademischer Betreuer] [Wienands y Thomas [Akademischer Betreuer] Pieler. "Regulation der „spleen tyrosine kinase“ Syk im B-Zell-Antigen-Rezeptor-Signalweg / Hanibal Bohnenberger. Gutachter: Jürgen Wienands ; Thomas Pieler. Betreuer: Jürgen Wienands". Göttingen : Niedersächsische Staats- und Universitätsbibliothek Göttingen, 2013. http://d-nb.info/1046721801/34.
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Liu, Jie. "Activation of the phagocyte NADPH oxidase (NOX2) in human neutrophils : study of p47phox phosphorylation during phagocytosis". Electronic Thesis or Diss., Université Paris Cité, 2024. http://www.theses.fr/2024UNIP5213.
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Les polymorphonucléaires neutrophiles, sont des acteurs essentiels du système immunitaire inné, responsables de la phagocytose des agents pathogènes. Lors de la phagocytose, les neutrophiles produisent des quantités substantielles d'anion superoxyde, qui génèrent ensuite des espèces réactives de l'oxygène (ERO) telles que le peroxyde d'hydrogène, les radicaux hydroxyles et l'acide hypochloreux, indispensables à la destruction des microbes. L'enzyme responsable de la production de superoxyde est le complexe NADPH oxydase, composé de protéines membranaires (gp91phox/NOX2 et p22phox) et de protéines cytosoliques (p47phox, p67phox, p40phox et Rac1/2). Lors de l'activation, ces composants cytosoliques transloquent vers la membrane, entraînant l'assemblage et l'activation de l'enzyme. Une régulation adéquate de l'activité de la NADPH oxydase est essentielle pour équilibrer une élimination efficace des pathogènes et éviter les dommages tissulaires excessifs dus aux ERO. L' objectifs de ma thèse vise à examiner la phosphorylation de la p47phox dans les neutrophiles humains stimulés par le zymosan opsonisé par le sérum (OZ), un agent connu pour induire la phagocytose. Nous nous concentrons sur l'identification des sites de phosphorylation spécifiques et l'élucidation des voies de signalisation impliquées dans ce processus. Les neutrophiles humains ont été isolés du sang veineux de volontaires sains par sédimentation au Dextran et centrifugation sur Ficoll. Le zymosan a été opsonisé en utilisant du sérum autologue riche en immunoglobulines (IgG) et en protéines du complément (C3b et C3bi). Les neutrophiles ont ensuite été stimulés avec du zymosan non opsonisé ou opsonisé, et la phosphorylation de p47phox a été évaluée par SDS-PAGE et Western blot avec des anticorps spécifiques. La production de ROS a été mesurée en utilisant la chimioluminescence amplifiée par le luminol. La microscopie confocale a été utilisée pour visualiser les interactions des neutrophiles avec le zymosan opsonisé fluorescent. Divers inhibiteurs de kinases ont été utilisés pour disséquer les voies de signalisation conduisant à la phosphorylation de p47phox. Les résultats montrent que le zymosan opsonisé par le sérum (OZ) a induit une phosphorylation rapide et transitoire de p47phox aux sites Ser304, Ser315, Ser320 et Ser328, détectable en 20 secondes et atteignant un pic à 40-60 secondes. Cette phosphorylation diminue sur 10 minutes, tandis que la production de ROS est restée soutenue pendant plus de 30 minutes. Le zymosan non opsonisé n'a pas induit de phosphorylation significative ni de production de ROS. La phosphorylation a eu lieu lors du contact avec le OZ, avant la phagocytose, et a été principalement induite par les opsonines IgG et C3bi via leurs récepteurs respectifs, Fc-gamma R et CR3. Les études utilisant des inhibiteurs ont révélé que les kinases tyrosine Src et Syk, PI3K, PLC, PLD, le calcium et PKC-beta2 sont essentiels pour la phosphorylation de p47phox et l'activation subséquente de la NADPH oxydase. Cette étude élucide les événements de phosphorylation spécifiques et les voies de signalisation qui régulent l'activation de la NADPH oxydase dans les neutrophiles humains pendant la phagocytose. Le zymosan opsonisé par le sérum induit une phosphorylation rapide de p47phox aux sites Ser304, Ser315, Ser320 et Ser328, nécessaire pour initier mais non maintenir l'activité de la NADPH oxydase. Les IgG et C3bi sont les principales opsonines conduisant ce processus via les récepteurs Fc-gamma R et CR3. Les voies de signalisation clés impliquent les kinases tyrosine Src et Syk, PI3K, PLC, PLD, le calcium et PKC-beta2. Ces résultats améliorent notre compréhension de l'activation des neutrophiles et offrent des cibles thérapeutiques potentielles pour moduler les réponses immunitairesNeutrophils, also known as polymorphonuclear leukocytes (PMNs), are essential players in the innate immune system, responsible for the phagocytosis of pathogens. During phagocytosis, neutrophils produce substantial amounts of superoxide anion, which subsequently generates reactive oxygen species (ROS) such as hydrogen peroxide, hydroxyl radicals, and hypochlorous acid, crucial for microbial killing. The enzyme responsible for superoxide production is the NADPH oxidase complex, composed of membrane-bound proteins (gp91phox/NOX2 and p22phox) and cytosolic proteins (p47phox, p67phox, p40phox, and Rac1/2). Upon activation, these cytosolic components translocate to the membrane, leading to the assembly and activation of the enzyme. Proper regulation of NADPH oxidase activity is essential to balance effective pathogen clearance and avoid excessive tissue damage due to ROS.The objectives of my thesis aims to investigate the phosphorylation of p47phox in human neutrophils stimulated by serum-opsonized zymosan (OZ), an agent known to induce phagocytosis. We focus on identifying the specific phosphorylation sites and elucidating the signaling pathways involved in this process. Human neutrophils were isolated from the venous blood of healthy volunteers using Dextran sedimentation and Ficoll centrifugation. Zymosan was opsonized using autologous serum rich in immunoglobulins (IgG) and complement proteins (C3b and C3bi). Neutrophils were then stimulated with either non-opsonized or opsonized zymosan, and p47phox phosphorylation was assessed using SDS-PAGE and Western blotting with specific antibodies. ROS production was measured using luminol-enhanced chemiluminescence. Confocal microscopy was employed to visualize neutrophil interactions with fluorescently labeled opsonized zymosan. Various kinase inhibitors were used to dissect the signaling pathways leading to p47phox phosphorylation. The results showed that serum-opsonized zymosan (OZ) induced rapid and transient phosphorylation of p47phox at Ser304, Ser315, Ser320, and Ser328, detectable within 20 seconds and peaking at 40-60 seconds. This phosphorylation declined over 10 minutes, while ROS production remained sustained for over 30 minutes. Non-opsonized zymosan did not induce significant phosphorylation or ROS production. Phosphorylation occurred upon contact with OZ, prior to phagocytosis, and was primarily induced by IgG and C3bi opsonins through their respective receptors, Fc-gamma R and CR3. Inhibitor studies revealed that Src and Syk tyrosine kinases, PI3K, PLC, PLD, calcium, and PKC-beta2 are crucial for p47phox phosphorylation and subsequent NADPH oxidase activation. This study elucidates the specific phosphorylation events and signaling pathways that regulate NADPH oxidase activation in human neutrophils during phagocytosis. Serum-opsonized zymosan induces rapid phosphorylation of p47phox at Ser304, Ser315, Ser320, and Ser328, which is necessary to initiate but not sustain NADPH oxidase activity. IgG and C3bi are the primary opsonins driving this process through Fc-gamma R and CR3 receptors. Key signaling pathways involve Src and Syk tyrosine kinases, PI3K, PLC, PLD, calcium, and PKC-beta2. These findings enhance our understanding of neutrophil activation and provide potential therapeutic targets for modulating immune responses
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BRIKEN, VOLKER. "Role des regions intracytoplasmiques des immunorecepteurs et de la proteine kinase syk, dans le transport intracellulaire de l'antigene et la selection du repertoire peptidique presente par des cellules presentatrices d'antigenes". Paris 7, 1998. http://www.theses.fr/1998PA077190.
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Le recepteur de l'antigene (bcr) a la surface des lymphocytes b ou les recepteurs pour le domaine fc des immunoglobulines iggs (fcgrii ou fcgriii) a la surface des cellules dendritiques ou des macrophages facilitent l'internalisation et la presentation des antigenes aux lymphocytes t (cd4 +). Le bcr est compose d'une immunoglobuline membranaire qui reconnait l'antigene, associee a un heterodimere (ig-alpha/ig-beta). Le fcgriii est compose d'une chaine alpha qui fixe des complexes antigene-anticorps, associee a un homodimere de chaines gamma. Dans les deux cas, les chaines associees permettent l'internalisation de leur ligand et la transduction des signaux d'activation cellulaire par une sequence consensus itam (immunoreceptor tyrosine-based activation motif). Par contre, le fcgrii, compose d'une seule chaine est capable d'inhiber l'activation cellulaire par une sequence cytoplasmique nommee itim (immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif). Nous avons etudie le role des motifs cytoplasmiques de ces immunorecepteurs dans le transport et la presentation de l'antigene et l'activation cellulaire. Nous avons tout d'abord analyse la capacite de ces recepteurs entiers ou de leurs regions intracytoplasmiques isolees a induire la presentation des peptides par les molecules de classe ii du complexe majeur d'histocompatibilite (cmh). Ainsi, nous avons demontre que la sous-unite ig-alpha du bcr et la chaine gamma du fcgriii sont capables d'induire la presentation par les molecules de cmh classe ii d'un large panel des peptides, comme le bcr et le fcgriii entier. Par contre, la sous-unite ig-beta du bcr et le fcgrii peuvent seulement induire la presentation d'un sous-ensemble de ces peptides. Une analyse mutationnelle de l'itam, ainsi que la surexpression des mutants dominants negatifs de la proteine tyrosine kinase (ptk) syk nous ont permis de mettre en evidence l'importance de l'interaction de syk avec l'itam des recepteurs dans deux de leurs fonctions. Premierement, syk est necessaire pour la presentation d'un large repertoire peptidique par la sous-unite ig-alpha du bcr ou par la chaine gamma du fcgriii. Deuxiemement, apres l'aggregation du recepteur fcgriii, la ptk syk induit le tri post-endocytique du recepteur vers des compartiments lysosomaux.
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Aponte, Emilie. "Régulation de la signalisation de Src par son domaine N-terminal intrinsèquement désordonné". Thesis, Montpellier, 2018. http://www.theses.fr/2018MONTT095.
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La tyrosine kinase cytoplasmique Src est un régulateur essentiel de la croissance et de l’adhésion cellulaires induites par de nombreux stimuli extracellulaires, dont les facteurs de croissance et certains composants de la matrice extracellulaire. La dérégulation de son activité catalytique lui confère des propriétés oncogéniques importantes conduisant à la formation de tumeurs agressives chez l’Homme. La plupart des connaissances actuelles sur sa régulation catalytique repose sur des données structurales de cristallographie qui ont révélé l’importance des interactions intramoléculaires SH2 et SH3-dépendantes dans le contrôle des conformations ouvertes et actives de Src. Les domaines SH3, SH2 et kinase de Src sont associés au domaine SH4 N-terminal d'ancrage à la membrane plasmique via un domaine unique (DU) flexible. Le rôle du DU dans la régulation de Src reste obscur car il est intrinsèquement désordonné et par conséquent, cette région n'a pas été incluse dans les analyses structurales originelles. L'analyse par RMN de l'extrémité N-terminale de Src a révélé une conformation partiellement structurée du DU par le contact de séquences peptidiques spécifiques avec les lipides membranaires et le domaine SH3 (Perez et al, 2013; Maffei et al, 2015). De plus, cette interaction est régulée par phosphorylation des Ser69 et Ser75 localisées à proximité de ce domaine. L’objectif de ma thèse était d’adresser la relevance biologique de ces données structurales en me focalisant sur le rôle d’une partie du DU identifiée comme importante par RMN. J’ai montré que l’inactivation de cette région par des mutations perte de fonction, diminue fortement la signalisation de Src dans les cellules non transformées humaines ainsi que ses propriétés tumorales dans les cellules cancéreuses colorectales métastatiques révélant la pertinence biomédicale du système. Des analyses de protéomique m’ont permis de révéler un mécanisme original par lequel cette région contrôle la capacité de Src à phosphoryler ses substrats. En conclusion, ces données confirment un rôle important du DU sur l'activité et la signalisation de Src et révèlent un rôle critique des domaines désordonnés dans les tumeurs chez l’Homme. L’inhibition de cette région unique par de petites molécules devrait conduire à de nouvelles stratégies thérapeutiques dans le cancerThe membrane-anchored non-receptor tyrosine kinase Src is involved in numerous signal transduction pathways and hyperactive Src is a potent oncogene and driver of human metastasis. Most of our knowledge on Src kinase regulation relies on structural data, which revealed SH2 and SH3-dependent intramolecular interactions to control active conformations of the protein. The kinase, SH3 and SH2 domains of Src are attached to the membrane-anchored SH4 domain through the flexible unique domain (UD). The role of this UD remains obscure due to its intrinsically disordered properties for which reason it was not included in original structural analyses. Interestingly, membrane-associated intrinsic disordered domains are more prevalent among signaling and cancer-related proteins and they are thought to play critical roles in human disease. NMR analysis of Src N-terminus in the presence of lipids revealed a partially structured conformation of the UD through the contact of a small peptide sequence with membrane lipids and the SH3 domain of the protein (Perez et al, 2013; Maffei et al, 2015). This interaction was regulated by phosphorylation of Ser69 and Ser75 surrounded this central region. The aim of my thesis project was to assess the biological relevance of this structural data. Interestingly, I showed that expression of Src mutants with UD loss of function drastically affected Src activity and signaling in human non-transformed cells as well as Src oncogenic properties in metastatic colorectal cancer cells. This highlights the biomedical relevance of the system. Further proteomic analysis revealed an unsuspected mechanism by which this region controls the Src capacity to phosphorylate specific substrates involved in cancer cell activity. These data support a previously unrecognized important role of the UD on Src activity and signaling and reveals a critical role of intrinsic disordered domains in the regulation of kinase signaling in human disease. Targeting this unique region by small molecules may be of therapeutic value in human cancer
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Luhovy, Artem. "The activation of protein kinase SLK". Thesis, McGill University, 2011. http://digitool.Library.McGill.CA:80/R/?func=dbin-jump-full&object_id=97038.
Texto completoResumen
The inappropriate expression, localization, or activation of kidney protein kinases may precipitate renal dysplasia or cystic diseases. The expression and activation of the Ste20-like kinase, SLK, is increased during renal development and recovery from ischemic acute renal failure (ARF). Activation of SLK promotes apoptosis and, during development and healing, SLK may regulate cell growth. Alternatively, in glomerular diseases, the activation of SLK and apoptosis of glomerular epithelial cells (GEC) may be harmful and lead to sclerotic glomerular injury. The overall aim of the project is to elucidate the regulation of SLK activity in order to better understand the role of SLK in kidney development and injury. It is proposed that activation of SLK may be due to upregulation of expression, which may then favor homodimerization and autophosphorylation. Serine and threonine residues were mutated in the putative activation segment of the SLK catalytic domain. Wild type (WT) and mutant proteins were expressed in COS-1 cells or GEC. Compared with SLK WT, the S189A mutant and the T183A/S189A double mutant showed trivial in vitro kinase activity, while kinase activity was reduced significantly by the T183A mutation. Expression of SLK WT increased activation-specific phosphorylation of c-Jun N-terminal kinase (JNK) and p38 kinase, reflecting enhanced signaling via stress kinase pathways. In contrast, activation of JNK by SLK T183A, S189A, and T183A/S189A and p38 by T183A/S189A was impaired. Similarly, expression of SLK WT stimulated activator protein-1 (AP1) reporter activity, but activation of AP1 by the three SLK mutants was ineffective. To test if homodimerization of SLK affects phosphorylation, the cDNA encoding the SLK catalytic domain (amino acids 1-373) was fused with a cDNA for a modified FK506 binding protein, Fv (SLK-Fv). After transfection, addition of AP20187 (an FK506 analog) induced regulated dimerization of SLK-Fv. AP20187-stimulated dimerization enhanced the kinase activity of SLK-Fv WT. In contrast, kinase activities of SLK-Fv T183A/S189A and activation site mutants E79A, K63R, T193A were weak, and were not enhanced after dimerization. Surprisingly, phosphomimetic mutants of SLK-Fv, including T183D, T183E, S189D, and S189E showed weak kinase activity, which was unaffected by dimerization. Co-transfection of SLK and T183A/S189A failed to silence the kinase activity of the WT in an in vitro kinase assay. Finally, apoptosis and late apoptosis were increased after expression of SLK-Fv WT, but not T183A/S189A. Thus, phosphorylation of T183, S189 and T193 plays a key role in the activation and signaling of SLK and could represent a target for novel therapeutic approaches to renal injury.Une expression, une localisation ou une activation inappropriée des protéines kinases rénales peut provoquer une dysplasie rénale ou une maladie cystique prématurée. L'expression et l'activation de la protéine Ste20-like kinase (SLK) sont plus élevées pendant le développement des reins et durant la guérison d'une insuffisance rénale ischémique aiguë. Une activation de la protéine SLK entraîne l'apoptose des cellules in vitro et in vivo. Au cours du développement et de la régénérescence cellulaire, SLK peut réguler la croissance cellulaire. Par contre, dans les glomérulonéphrites, l'activation de la SLK et une apoptose des cellules épithéliales glomérulaires (GEC) peuvent être dommageables et peuvent provoquer des lésions glomérulaires sclérotiques. L'objectif de ce projet est d'élucider la régulation de l'activité de la SLK dans le but de mieux comprendre son rôle dans le développement et les lésions ou maladies glomérulaires rénales. Ce projet postule que l'activation de la protéine SLK peut être due à une régulation à la hausse de l'expression, qui peut alors favoriser une homodimérisation et une autophosphorylation. Pour étudier le rôle de la phosphorylation dans la régulation de l'activation, les résidus sérine (S189) et thréonine (T183) ont été mutés dans le segment putatif du domaine catalytique de la SLK. Deux mutants simples (T183A et S189A) et un double mutant (T183A/S189A) ont été créés. La forme sauvage (WT) et les mutants de la SLK ont été exprimés dans les cellules cos-1 et GEC. SLK WT phosphorylais la protéine basique de myéline (MBP) contrairement aux mutants S189A et T183A/S189A qui montraient une activité kinase in vitro non significative. La mutation T183A diminuait la phosphorylation de MBP significativement. L'analyse des voies de signalisation de la kinase N-terminal c-jun (JNK) et de la p38 par la SLK a été étudiée sachant que l'expression de la SLK WT stimule la phosphorylation de la JNK et de la p38. Tant que T183A/S189A n'a pas pu activer la JNK et la p38, les mutants T183A et S189A ont activé la JNK à un degré moindre que la SLK WT. Ces résultats démontrent que la phosphorylation de T183 et de S189 est importante pour l'activation de la SLK. De façon similaire, l'expression de la SLK WT a stimulé l'activation de la protéine activatrice 1 (AP1), un facteur de transcription de la famille c-fos et c-Jun, tandis que les trois mutants ont été incapables de stimuler AP1. Pour déterminer si l'homodimérisation de la SLK affecte la phosphorylation, l'ADN complémentaire de la SLK codant le domaine catalytique (1-373) a été fusionné avec l'ADN complémentaire d'une protéine modifiée qui s'attache à des molécules FK506 (Fv), pour créer SLK-Fv. Après la transfection, l'addition du AP20187, un analogue de FK506, induit la dimérisation de la SLK-Fv. La dimérisation occasionnée par l'AP20187 a augmenté l'activité catalytique de la SLK-Fv. Par contre, tous les mutants Fv fusionnés T183A/S189A, E79A, K63R et T193A démontraient une activité catalytique faible, que la dimérisation n'a pas pu augmenter. Ce qui est particulièrement intéressant, les mutants phosphomimétiques T183D, T183E, S189D et S189E montraient aussi une activité catalytique faible qui n'a pas été affectée par la dimérisation. Finalement, l'apoptose et la nécrose sont accrues suite à une surexpression de la SLK-Fv WT, mais pas avec le mutant T183A/S189A-Fv. Ainsi, les acides aminés K63 et E79 et la phosphorylation de T183, S189 et T193 jouent un rôle important dans la régulation de la SLK et pourraient être ciblés par des approches thérapeutiques pour le traitement des néphropathies.
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Delarosa, Sierra. "Regulation of the Ste20-like kinase, SLK". Thesis, McGill University, 2010. http://digitool.Library.McGill.CA:80/R/?func=dbin-jump-full&object_id=86512.
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Strict regulation of cell growth, apoptosis and differentiation is essential for normal kidney development. The expression and activation of the Ste20-like kinase, SLK, is increased during renal development and recovery from ischemic acute renal failure, which recapitulates certain aspects of kidney development. SLK promotes apoptosis and may, therefore, regulate cell growth during development and healing. We propose that activation of SLK may be due to upregulation of expression, which may then favor homodimerization and/or reversal of autoinhibition. To test this hypothesis, the cDNA encoding the SLK catalytic domain (amino acids 1-373) was fused with a cDNA for a modified FK506 binding protein, Fv2E (Fv2E-SLK(1-373)). The plasmid was transfected into COS-1 cells, and a fusion protein of the expected molecular mass was expressed. Addition of AP20187 (an analog of FK506) induced dimerization of Fv2E-SLK(1-373). In an in vitro immune complex kinase assay, the dimeric Fv2E-SLK(1-373) displayed 1.7 fold greater activity, compared with the monomer. Glomerular epithelial cells were transiently transfected with Fv2E-SLK(1-373) and were treated with or without AP20187. Compared with the monomer, dimeric SLK(1-373) increased activation- specific phosphorylation of c-Jun N-terminal kinase and p38 kinase (1.5-2.1 fold) reflecting enhanced signaling via stress kinase pathways. In a second assay of SLK signaling, we monitored p53 transactivation following transient transfection of a luciferase reporter plasmid that contains a p53 cis-acting enhancer element. Addition of AP20187 to cells transfected with Fv2E-SLK(1-373) enhanced p53 reporter activity, compared with untreated. Finally, we monitored the effect of SLK dimerization on the activation of the proapoptotic protein, Bax. Cells were cotransfected with Fv2E-SLK(1- 373) and Bax-luciferase reporter cDNAs. Stimulation of the Bax reporter by SLK was 2.5 fold in the presence of AP20187 and 1.8 fold inLa régulation de la croissance cellulaire, de l'apoptose et de la différentiation cellulaire sont essentielles pour le développement rénal. L'expression et l'activation de la protéine kinase SLK (« Ste20-like kinase ») sont augmentés durant le développement rénal et la récupération d'une ischémie suite a un dommage rénal, qui en fait récapitule certains aspects du développement rénal. La kinase SLK peut promouvoir la mort cellulaire et pourrait être impliquée dans la régulation de la croissance durant le développement et le processus de guérison. Nous proposons que l'activation de la kinase SLK soit due à l'augmentation de son expression favorisant ainsi son homodimérisation et/ou le déblocage de son auto-inhibition. Pour tester cette hypothèse l'ADN complémentaire (ADNc) codant pour le domaine catalytique de SLK (acides aminés 1-373) a été fusionné avec un ADNc codant pour une version modifiée de la protéine de liaison FK506, appelée Fv2E. La construction résultante, Fv2E-SLK (1-373), a été transfectée dans des cellules COS-1 pour exprimer la protéine fusion résultante. L'addition d'AP20187 (un analogue de FK506) peut ensuite induire la dimérisation de Fv2E-SLK (1-373). In vitro, le dimère Fv2E-SLK (1-373) montre une augmentation de son activité de 1.7 fois par rapport à la version monomère. Des cellules épithéliales glomérulaires ont ensuite été transfectées transitoirement avec la construction Fv2E-SLK (1-373) et traitées ou non avec l'AP20187. Comparée au monomère, la forme dimérique du Fv2E-SLK (1-373) augmente la phosphorylation de c-Jun N-terminal kinase et de la kinase p38 de 1.5 à 2.1 fois respectivement, reflétant ainsi une activation qui semble liée au stress. Dans une autre expérience visant à mesurer l'activité de SLK nous avons mesuré la transactivation de p53 suite a une transfection transitoire d'un plasmide rapporteur contenant l'élément de réponse cis de p53.$
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Hägebarth, Andrea. "Brk tyrosine kinase signaling in the gastrointestinal tract". Doctoral thesis, Humboldt-Universität zu Berlin, Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät I, 2005. http://dx.doi.org/10.18452/15379.
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Die Tyrosin Kinase Brk stellt den Prototypen nicht N-terminal myristoylierter, Nicht-Rezeptor Tyrosin Kinasen dar. Die Expression dieser Kinase ist auf epitheliale Gewebe beschränkt und wird während der Entwicklung differentiell reguliert. In normalen Geweben ist die Brk Expression auf nichtproliferierende, terminal differenzierte Zellen beschränkt. Um die regulatorische Funktion von Brk im murinen Darmepithel zu untersuchen, wurde das brk Gen in der Maus inaktiviert. Brk knockout Mäuse zeigten keine offensichtlichen Defekte in ihrer Entwicklung jedoch eine erweiterte Proliferationszone in den Krypten des Darmepithels und verlängerte Villi. Die Inaktivierung von Brk führte zu einer erhöhten Akkummulation von nukleärem (-catenin sowie einer Hochregulierung des (-catenin Zielgens c-myc in den Krypten der knockout Mäuse. Zusätzlich zeigten Brk knockout Mäuse eine Aktivierung des Akt-Signaltransduktionswegs in ihrem Darmepithel. Im Gegensatz zu Wildtyp Mäusen waren Brk knockout Mäuse resistent gegenüber (-Strahlung, was die Anhäufung onkogener Mutationen und damit die Entwicklung von Krebs fördert. Eine Induktion der Expression des Brk-Proteins im Darmepithel behandelter Wildtyp Mäuse wurde festgestellt. Weiterhin traten bei Brk knockout Mäusen chronische Entzündungen des Darmepithels sowie eine erhöhte Sensibilität gegenüber dem Reizmittel DSS auf. Im Gegensatz dazu, zeigten Wildtyp Mäuse eine mit der Literatur Übereinstimmende Reaktion zu DSS verbunden mit einer Induktion der Brk Expression im Darmepithel. Zusammenfassend kann gesagt werden, dass die Brk Tyrosin Kinase eine entscheidende Rolle in der Aufrechterhaltung der Homöstase und Integrität des Darmepithels spielt. Insbesondere scheint Brk als wichtiger Faktor zur Bestimmung der Sensitivität epithelialer Zellen zu genotoxischem Stress zu fungieren. Entgegen der bisher vermuteten onkogenen Funktion in epithelialen Tumoren scheint Brk im normalen Darmepithel "Tumor Suppressor" Ähnliche Funtionen innezuhaben.The Breast tumor kinase Brk is a prototypical non-myristoylated, non-receptor tyrosine kinase. Brk expression is epithelial-specific and ,in normal tissues, restricted to cells exiting the cell cycle and undergoing terminal differentiation. To determine the biological role of Brk in the gastrointestinal tract, we disrupted mouse brk by homologous recombination. Loss of Brk in the mouse resulted in increased intestinal epithelial cell turnover and the appearance of longer small intestinal villi. Brk deficient mice displayed enhanced accumulation of nuclear (-catenin and upregulation of the (-catenin target gene c-myc in the crypt compartment of small and large intestine. In addition, Brk deficient mice exhibited increased Akt kinase activity. Even though, there was no corresponding difference in base-line apoptosis in untreated wild-type and knockout animals. However, subjected to (-irradiation, Brk deficient animals were significantly impaired in the apoptotic response. Wild-type mice, however, exhibited normal levels of apoptosis following (-irradiation accompanied by a rapid induction of Brk expression in crypt cells. Furthermore, chronic inflammation was observed in Brk deficient mice, and they showed increased susceptibility to a colon injury model utilizing DSS. Interestingly, wild-type mice exhibited a significant upregulation of nuclear Brk protein throughout the intestinal epithelium in response to DSS. These recent findings suggest that Brk plays a crucial role in the maintenance of intestinal tissue homeostasis and integrity. In addition, Brk may function to protect the intestinal epithelium against DNA-replication-induced errors and hence the development of cancer. Contrary to reported oncogenic properties of Brk in other epithelial tissues, Brk appears to have tumor suppressor-like functions in the mouse gastrointestinal epithelium.
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Pryce, Benjamin. "Role of the Ste20 Like Kinase in Muscle Development and Muscular Dystrophy". Thesis, Université d'Ottawa / University of Ottawa, 2019. http://hdl.handle.net/10393/38710.
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Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) is a fatal X-linked disorder affecting 1 out of every 3500 male births. The underlying cause of DMD is mutations within the dystrophin gene resulting in loss of protein expression, which leads to myofiber instability and damage. The constant damage of skeletal muscle causes sustained immune infiltration, marked by increased levels of cytokines, such as TGF-beta. Interestingly, TGF-beta can decrease the myogenic potential of satellite cells, thus
preventing muscle regeneration. Previously, our lab has shown that knockdown of the Ste20 Like Kinase, SLK, in normal mammary epithelial cells was sufficient to delay TGF-beta induced epithelial to mesenchymal transition. Therefore, we speculated that decreasing SLK levels would be sufficient to decrease the anti-myogenic effects of TGF-beta both in cultured myoblasts and in a mouse model of muscular dystrophy. In the first section of this study, we explored the effect of muscle specific deletion of SLK on muscle development and regeneration. Skeletal muscle specific deletion of SLK did not impair muscle development, but caused a myopathy in older mice. Additionally, muscle regeneration was delayed, but not inhibited by SLK deletion. These
findings indicated that SLK has beneficial roles in skeletal muscle, but was not absolutely required for optimal muscle development and regeneration. In the second section, we investigated the potential for SLK knockdown to mitigate the anti-myogenic effects of TGF-beta in vitro. Decreasing levels of SLK restored myoblast differentiation in the presence of TGF-beta in a p38 dependent manner. In the final section, we determined that SLK levels are elevated in dystrophic muscle and that subsequent deletion of SLK in the mdx mouse enhances terminal differentiation of myoblasts without further exacerbating the pathology of the disease.
Collectively, this work demonstrates that SLK inhibition can provide a protective effect against the anti-myogenic effects of TGF-beta via upregulation of p38 activity.
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Fallah-Arani, Farnaz. "The role of Syk-family protein tyrosine kinases in B cell development". Thesis, Open University, 2006. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.424593.
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Al-Zahrani, Khalid. "The Role of the Ste20-like Kinase in Embryonic Development and Neu-induced Mammary Tumorigenesis". Thesis, Université d'Ottawa / University of Ottawa, 2018. http://hdl.handle.net/10393/38614.
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Over the past two decades, the mammalian Ste20-like kinase (SLK) has been characterized for its role in regulating cellular migration, proliferation and apoptosis in fibroblasts and myoblasts. In mammary epithelial cells, SLK has been shown to be required for efficient epithelial-to-mesenchymal transition and to be activated downstream of the HER2/Neu-oncogene to control chemotactic cellular migration. Here, we assessed the role of SLK in HER2/Neu-induced mammary tumorigenesis in vivo. As SLK is activated downstream of HER2/Neu, we hypothesized that the loss of SLK would significantly delay tumor progression in a mouse model of HER2-positive breast cancer. As we have shown that global attenuation of SLK kinase activity results in embryonic lethality, a conditional SLK knockout mouse model was generated. To study the role of SLK in HER2-positive breast cancer, we crossed these conditional SLK knockout mice with mice expressing HER2/Neu linked to Cre recombinase in the mammary luminal epithelium. Unexpectedly, we have demonstrated that conditional deletion of SLK significantly accelerates Neu-induced mammary tumor onset and decreases overall survival. SLK deletion results in the induction of Sox10 which drives mammary stem/progenitor activity and cooperates with HER2/Neu to drive tumor growth. Using the Cancer Genome Atlas, we have supported previous findings and validated Sox10 as a potential biomarker of the Triple-negative Breast Cancer subtype. Furthermore, we have uncovered that SLK deletion results in enhanced activation of both PDK1 and AKT. We provide evidence that Sox10 induction requires signaling through a novel AKT/Sox9-dependent pathway following SLK deletion. Taken together, our data suggests that SLK may be required to maintain cells in a fully differentiated state and that loss of SLK in HER2/Neu-induced breast cancer drives a more basal/stem-like phenotype through the induction of Sox10.
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Ohanna, Mickaël. "Implication de la S6 kinase (S6K) dans la croissance musculaire". Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N01S.
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La croissance cellulaire est définie comme une augmentation de la taille de la cellule. En revanche le nombre de cellules dépend de la capacité des cellules à proliférer et à survivre. Chez les mammifères, mTOR (mammalian target of rapamycin), kinase activée par les nutriments (acides aminés et glucose), l'énergie et les facteurs de croissances, contrôle de manière coordonnée la prolifération et la taille des cellules mTOR est également impliqué dans le contrôle de la croissance du muscle squelettique, un tissu dans lequel la croissance peut se produire en l'absence de division cellulaire. Ia l'utilisation de souris invalidées pour le gène codant pour la S6K1 (S6K1-/-), S6K2 (S6K2-/-) et les doubles mutants (S6K1,2-/-). Nous avons montré. .The skeletal muscle size is modulated in case of exercise or during ageing and diseases. In mammals, mTOR (mammalian target of repamycin) pathway controlled by the nutriments and the growth factors is implicated in skeletal muscle growth. We are investigating molecular functions of two targets of mTOR in muscle growth : the proteins S6 kinase 1 (S6K2) & 2 (S6K2), by using mice knock out for S6K1 and S6K2. We show that myoblastes S6K1 -/- have reduce cell size and normal proliferation. In the differentiated state, S6K1 -/- myotubes have a normal number of nuclei but are smaller, and their hypertrophic response to IGF1, nutrients and membrane-targeted AKt is blunted. Thes growth defects reveal that mTOR requires distinct effectors for the control of muscle cell cycle and size, potentially opening new avenues of therapeutic intervention against neoplasia or muscle athrophy
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Irving, Carol. "Characterisation of the receptor tyrosine kinase, Sek-1, during vertebrate embryogenesis". Thesis, University College London (University of London), 1997. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.263644.
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Dempsey, Jamie Michelle. "SRPK2 Phosphorylation by the AGC Kinases, and mTORC1 Regulation of Alternative Splicing". Thesis, Harvard University, 2012. http://dissertations.umi.com/gsas.harvard:10602.
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The mechanisms through which a cell controls its proliferation, differentiation, metabolism, motility, and ultimate survival in response to extracellular cues are largely controlled by the Ras-extracellular signal-regulated kinase (Ras-ERK) and phosphatidylinositol 3-kinase mammalian target of rapamycin (PI3K-mTOR) signaling pathways. Originally delineated as two separate and linear signaling pathways, multitudes of evidence through experimentation have shown that these pathways can co-regulate downstream targets and cellular outcomes. Here, we provide evidence for an additional point of pathway convergence the serine/arginine protein kinase 2 (SRPK2). Originally identified as a target of the mTORC1/S6K signaling pathway, we have shown SRPK2 to be a target of the Ras-ERK-Rsk pathway, as well as the PI3K-AKT. We discovered the S6K, AKT and RSK all phosphorylate SRPK2 at serine 494 in a cell-type, stimulus dependent manner, emphasizing the redundant nature of the AGC kinases. SRPK2 regulates the phosphorylation of the constitutive and alternative splicing factors the SR proteins. This led us to question mTORC1 involvement in splice site selection, and we discovered several alternative splicing events downstream of mTORC1 signaling. We found that the protein levels of the splicing factors ASF/SF2 and hnRNPa2b1 are regulated by mTORC1 signaling, and we hypothesize this is through regulated unproductive splicing and translation (RUST). Interestingly, we found that BIN1, a target of both ASF/SF2 and hnRNPa2b1, is alternatively spliced, following modulations in mTORC1 signaling. These biochemical studies and knowledge gleaned from them will lead to a better understanding of how the cell can regulate protein expression by controlling alternative splicing.
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Warnke, Silke. "Funktionelle Charakterisierung der humanen Polo-Kinase Plk2-Snk im Zell- und Centrosomenzyklus". [S.l.] : [s.n.], 2004. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=971267154.
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Chaar, Ziad Y. "Molecular regulation of the Ste20-like kinase (SLK) by SRC-dependent pathways". Thesis, University of Ottawa (Canada), 2005. http://hdl.handle.net/10393/29203.
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The Ste20-like kinase (SLK) is a conserved serine/threonine kinase that induces the dissociation of actin stress fibers in a Rac1-dependent manner. Recently, our laboratory has shown that SLK is a microtubule-associated protein regulating migratory components at the cell periphery in membrane ruffles and lamellipodia (Storbeck et al.; Wagner et al. unpublished data).
To investigate the role of SLK during cell adhesion and migration, we used the Polyomavirus Enhancer Activator 3-null (PEA3(-/-/)) cell line, known to exhibit migration deficiencies. We observed that SLK redistribution to the cell periphery is altered in the PEA3(-/-) cells and that this phenotype could be rescued by the re-expression of PEA3 cDNA into PEA3(-/-) cells. Further analysis revealed that the PEA3(-/-) cells exhibit impaired c-src activation highlighted by decreased focal adhesion kinase (FAK) cleavage and reduced p130Cas tyrosine phosphorylation following fibronectin stimulation, suggesting that c-src activity and proper adhesion signaling may be required for SLK recruitment to the cell periphery.
To further investigate FAK and c-src involvement in SLK redistribution to the cell periphery, we used FAK- or src, yes and fyn (SYF)-deficient cells. We have shown that SLK redistribution to the cell periphery is also altered in SYF deficient cells but not in FAK-deficient cells, suggesting that c-src mediates SLK redistribution to the cell periphery independently of FAK.
SLK in vitro kinase assays performed on PEA3(-/-), FAK- and SYF-deficient cells revealed that SLK kinase activity is unaffected. However, v-src and c-srcY527F transformed cells displayed a 2- to 3-fold decrease in SLK kinase activity. Biochemical analysis revealed that SLK is hyperphosphorylated on serine residues in these cells with the kinase domain being the main target. Further analysis revealed that casein kinase II (CK2) phosphorylates the SLK kinase domain on serine 347/348 to downregulate SLK kinase activity. In addition, we also showed that CK2 kinase activity is dramatically increased in v-src-transformed cells and that the inhibition of CK2 restores SLK kinase activity.
Overall, we showed that SLK redistribution to the cell periphery requires c-src, which can also regulate SLK kinase activity via CK2 to allow the turnover of adhesion sites and cytoskeletal rearrangements.
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Baron, Kyla Doreen. "The Role of LMO4 in the Regulation of SLK Localization & Activation within Migrating Cells and in Murine Mammary Tumorigenesis". Thesis, Université d'Ottawa / University of Ottawa, 2016. http://hdl.handle.net/10393/34195.
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The Ste20-like kinase SLK plays a pivotal role in cell migration and focal adhesion turnover. SLK activity is regulated by the LIM domain-binding proteins Ldb1/2. In addition to playing role in tumor initiation and progression, these proteins have been demonstrated to interact with LMO4. Therefore, this project assessed the ability of LMO4 to interact and regulate SLK activity. Results show that LMO4 can directly bind to SLK and activate its kinase activity. LMO4 can be co-precipitated with SLK following the induction of cell migration by scratch wounding. Cre deletion of LMO4 inhibits cell migration and SLK activation, and impairs Ldb1 and SLK recruitment to the leading edge of migrating cells. Src/Yes/Fyn-deficient cells (SYF) express very low levels of LMO4 and do not recruit SLK to the leading edge. Src-family kinase inhibition impairs SLK recruitment to the leading edge, suggesting that both expression of LMO4 and the recruitment of SLK to the leading edge require c-Src activity. In conclusion, cell migration and activation of SLK requires its recruitment to the leading edge by LMO4 in a Src-dependent manner. This study also investigated whether LMO4 deletion through MMTV-Cre-driven excision would impair mammary tumorigenesis in a PyMT mouse model of breast cancer. No difference in Overall Survival was observed between animals with and without LMO4 expression. Western blot analysis and IHC showed that tumors expressed LMO4 protein in animals genotyped as Cre-positive. This result suggests that expression of LMO4 is required for tumor initiation in the PyMT model of murine mammary carcinoma. This project has established a novel cytosolic role for the transcriptional co-activator LMO4 and validated it’s involvement in the regulation of SLK and cell migration. This pathway may provide a novel therapeutic strategy as LMO4 appears to be critical to the initiation and progression of breast cancer.
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Van, Ziffle Jessica Ann Grant. "Src-family and Syk tyrosine kinases are required for neutrophil effector responses to infection and inflammation". Diss., Search in ProQuest Dissertations & Theses. UC Only, 2009. http://gateway.proquest.com/openurl?url_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info:ofi/fmt:kev:mtx:dissertation&res_dat=xri:pqdiss&rft_dat=xri:pqdiss:3390082.
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Doepfner, Kathrin T. "Targeting receptor tyrosine kinase signaling in acute myeloid leukemia /". Zürich, 2008. http://opac.nebis.ch/cgi-bin/showAbstract.pl?sys=000253043.
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Lanzendörfer, Martina. "Die Glukose-abhängige Regulation der Genexpression der humanen Serin-Threonin-Kinase h-sgk". [S.l.] : [s.n.], 2002. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=965349578.
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Didier, Jean-Philippe. "Rôle des sérine/thréonine protéine-kinases dans la virulence de Staphylococcus aureus". Thesis, Lyon 1, 2009. http://www.theses.fr/2009LYO10161.
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Ce travail porte sur l’étude des mécanismes de phosphorylation des protéines par les sérine/thréonine kinases chez Staphylococcus aureus. Nous avons, tout d’abord, mis en évidence et caractérisé une seconde Ser/Thr-kinase, nommée Stk2. Cette kinase présente peu d’homologies avec les autres Ser/Thr-kinases bactériennes décrites à ce jour, en particulier avec la première Ser/Thr-kinase mise en évidence précédemment chez S. aureus, Stk1. Nous avons ensuite caractérisé dix sites d’autophosphorylation de Stk2 et nous avons montré que trois sites sont nécessaires à son activité. Enfin, nous avons montré que le régulateur global de virulence, SarA, est phosphorylé à la fois par Stk1 et Stk2. La phosphorylation de SarA influence sa capacité de liaison à l’ADN. Cette étude contribue à mieux appréhender, au niveau moléculaire, le rôle des Ser/Thr-kinases dans le métabolisme des bactéries et, plus particulièrement, dans la régulation de leur virulenceWe report that protein phosphorylation on serine and threonine is required for controlling staphylococcal virulence. We identified and characterized a second serine/threonine kinase, Stk2, in S. aureus. Biochemical analyses revealed that this enzyme displays autokinase activity on both threonine and serine residues. Stk2 is atypical in the sense that it exhibits a weak similarity with the first Ser/Thr-kinase previously detected, Stk1, and its undergoes a different mechanism of activation compared to the other bacterial Ser/Thr-kinases described so far. We also showed that SarA, a major transcription factor that regulates more than a hundred virulence genes, is phosphorylated by both Stk1 and Stk2. Phosphorylation of SarA leads to strong effects on its ability to bind DNA. The study of Stk1 and Stk2, at the molecular level, provides a better understanding of the role of these staphylococcal Ser/Thr-kinases in bacterial metabolism and, in particular, in the regulation of virulence
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Shum, Michaël. "Rôle de la voie mTORC1/S6K et RSK dans le métabolisme énergétique". Doctoral thesis, Université Laval, 2016. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27988.
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Le complexe 1 de la Ser/Thr kinase mTOR (mammalian Target Of Rapamycin) (mTORC1), son médiateur en aval, S6K1, (p70 S6 kinase) et RSK (p90 ribosomal S6 kinase) sont des régulateurs clés de la signalisation de l’insuline et du métabolisme énergétique. La voie mTORC1/S6K contrôle la prolifération, la croissance cellulaire, la synthèse protéique, la lipogenèse, la biogenèse mitochondriale et inhibe l’autophagie. L’une des particularités importantes de cette voie de signalisation est l’intégration de différents signaux tels les facteurs de croissance, le statut énergétique, l’oxygène et les nutriments. Ainsi, la voie mTORC1/S6K1 est suractivée par l’excès de nutriments et ses kinases sont bien connues pour être suractivées dans l'obésité. De plus, RSK est une kinase en aval de la voie des MAPK (mitogen-activated protein kinase) et est connue pour réguler la prolifération, la croissance cellulaire et activer la voie mTORC1. Parmi les activateurs de RSK, on retrouve l’insuline et l’hyperglycémie. Ainsi, mTORC1/S6K1 et RSK sont impliquées dans le développement de la résistance à l’insuline, de l’obésité et du diabète de type 2. Dans une première étude publiée dans la revue Diabetologia, nous avons évalué l’impact de l’inhibition pharmacologique de S6K1 par le PF-4708671 sur la résistance à l’insuline et le métabolisme énergétique. Pour ce faire, nous avons utilisé des myotubes (L6) et des hépatocytes (FAO) en culture et montrés que l’inhibition de S6K1 augmente le captage de glucose musculaire et diminue la production hépatique de glucose. Par la suite, nous avons utilisé un modèle de souris obèse induit par une diète riche en gras afin d’évaluer le potentiel thérapeutique de l’inhibition pharmacologique de S6K1. Ces études nous ont permis de montrer que l’utilisation d’un inhibiteur pharmacologique de S6K1 améliore la tolérance au glucose et la phosphorylation d’Akt. Mécanistiquement, nous avons démontré dans un 2ième temps que le PF inhibe non seulement l’activité de S6K1, mais inhibe aussi l’activité du complexe I mitochondrial causant une augmentation de l’activité de l’AMPK (AMP activated protein kinase) et une inhibition de l’ACC (acetyl-CoA carboxylase). Parallèlement, nous avons montré dans une 3e étude, publiée dans J. Biol. Chem., que l'inhibition de RSK1 par l’inhibiteur pharmacologique (BI-D1870) ou d’un mutant RSK1 dominant négatif (DN-RSK1), diminue la phosphorylation d’IRS-1 sur la S1101. Par ailleurs, l’expression du DN-RSK1 augmente l’action de l’insuline sur le transport du glucose musculaire et la production de glucose hépatique. Ainsi, nous avons montré que RSK1 est un nouveau régulateur de la signalisation de l’insuline en phosphorylant la S1101 d’IRS-1. Nous proposons ainsi que l’inhibition de S6K1 et de RSK1 sont des approches thérapeutiques potentielles afin de traiter la résistance à l’insuline et le diabète de type 2. Mots clés : mTORC1, S6K1, RSK, MAPK, résistance à l’insuline, obésité, PF-4708671The Ser/Thr kinase mTOR complex 1 (mammalian Target Of Rapamycin) (mTORC1), his downstream effectors S6K1 (p70 ribosomal S6 kinase) and RSK (p90 ribosomal S6 kinase) are key regulators of insulin signaling and energy metabolism. The mTORC1/S6K1 pathway regulates cellular proliferation, growth, protein synthesis, lipogenesis, mitochondrial biogenesis, insulin signaling and inhibits autophagy. One of the most important roles of this signaling pathway is to integrate differents signals such as growth factors, energy status, oxygen, and nutrients. Thus, the mTORC1/S6K1 pathway is overactivated by nutrient excess conditions such as obesity. In addition, RSK is a downstream kinase of MAPK (mitogen-activated protein kinase) and it is also known to regulates cell proliferation, growth and to activate the mTORC1 pathway. Insulin and hyperglycemia are known to be among RSK activators. Therefore, mTORC1/S6K1 and RSK are involved in insulin resistance, obesity and type 2 diabetes. In a first study published in Diabetologia journal, we evaluated the effect of S6K1 inhibition with a selective S6K1 inhibitor, PF-4708671, on insulin resistance and energy metabolism. We used myotubes (L6) and hepatocytes (FAO) and observed that S6K1 inhibition increases glucose uptake in muscle and decrease glucose production in hepatocytes. In both cell type, S6K1 inhibition increases insulin-stimulating Akt phosphorylation. In addition, we treated obese mice fed high-fat diet for 1-week with S6K1 inhibitor. Mice treated with PF-4708671 have improved glucose tolerance and insulin-stimulating Akt phosphorylation in muscle, adipose tissue, and liver compared to obese mice treated with vehicle. Mechanistically, we showed in a 2nd study that this inhibitor inhibits S6K1 activity but also mitochondrial complex 1 which is associated with an increase in AMPK activation. Along with this study, we showed in a 3rd study published in J. Biol. Chem., that RSK1 phosphorylates directly IRS-1 on Ser1101 and RSK inhibition, by using either a RSK inhibitor (BI-D1870) or dominant-negative RSK1, improves insulin stimulating Akt phosphorylation as well as increasing glucose uptake in myotubes and inhibiting hepatic glucose production in vitro. Therefore, we demonstrated that RSK is a novel regulator of insulin signaling by phosphorylation Ser1101 of IRS-1. In conclusion, we are proposing that S6K1 inhibition and RSK1 inhibition are potential therapeutics targets to treat insulin resistance and type 2 diabetes. Keywords : mTORC1, S6K1, RSK, MAPK, insulin resistance, obesity, PF-470867
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Schäfer, Ellen. "Bedeutung der Protein-Tyrosin-Kinase pp60Src für die Genese der akuten myeloischen Leukämie /". Hamburg, 2007. http://opac.nebis.ch/cgi-bin/showAbstract.pl?sys=000252854.
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Dedieu, Fabien. "Régulation de l'expression du facteur eIF4GII par le protéasome : rôle de la Polo-like Kinase Snk". Toulouse 3, 2007. http://thesesups.ups-tlse.fr/131/.
Texto completoResumen
Chez les Eucaryotes, l'initiation de la traduction se déroule en trois étapes essentielles : la formation d'un complexe de pré-initiation (43S), sa liaison à l'ARNm et son positionnement sur le codon initiateur. Ce complexe est recruté à l'extrémité coiffée de l'ARNm grâce au facteur protéique eIF4F. EIF4F est composé de trois sous-unités : eIF4E qui interagit directement avec la coiffe; eIF4A, une ARN hélicase; eIF4G, une protéine d'assemblage qui s'associe à la fois à eIF4E, eIF4A et eIF3, un autre facteur d'initiation lui même lié à la sous-unité 40S du ribosome. Ainsi, eIF4G joue le rôle d'un adaptateur permettant l'interaction entre l'ARNm (via la coiffe et eIF4E) et l'ARNr (via eIF3). Deux homologues fonctionnels d'eIF4G ont été clonés: eIF4GI et eIF4GII. La régulation de l'initiation par le complexe eIF4F s'effectue par le biais de phosphorylations. Le facteur eIF4G est une phosphoprotéine dont les fonctions sont régulées suivant son état de phosphorylation et peut ainsi soit activer ou réprimer la traduction Cap-dépendante. Les voies de signalisation régulant la phosphorylation des facteurs eIF4GI et eIF4GIIsont mal connues. La recherche de partenaires d'interaction (double hybride) avec les facteurs eIF4G nous a permis d'identifier la polo-like kinase 2 (Plk2 aussi appelée Snk), pour laquelle seule la protéine SPAR est connue comme substrat spécifique. Par homologie de séquence, Snk est classée dans la famille des polo kinases, laquelle compte 3 représentants majeurs : Plk1, Plk2 (ou Snk) et Plk3 (FGF-inducible kinase ou Fnk). Ces protéines kinases lient puis phosphorylent des substrats mitotiques, contrôlant ainsi la progression à travers la mitose. L'étude de l'interaction entre Plk2 et eIF4G a permis d'identifier les domaines impliqués dans cette interaction soulignant l'originalité de Plk2 car à la différence des autres polo-like kinases cette interaction ne requiert pas son domaine Polo. La localisation cytoplasmique de Plk2 et non pas nucléaire renforce encore cette originalité. .The eukaryotic translation initiation factors (eIF) 4GI and eIF4GII are scaffolding proteins critical for the assembly of translation initiation complexes. EIF4GI and eIF4GII are the target of different signaling pathways, and a recent report indicates that they may possess distinct functions. Here we show that the polo like kinase (Plk) 2 interacts directly with eIF4GII. In the cell, Plk2 targets eIF4GII to destruction. Plk2-dependent degradation of eIF4GII is sensitive to proteasome inhibition and necessitates both a physical interaction with and ubiquitination of Plk2 (but not that of eIF4GII), suggesting that Plk2 acts as a specific adaptor for the proteasome. We also show that both eIF4GII and Plk2 are destructed by the proteasome upon oxidative stress. Furthermore, although eIF4GI also interacts with Plk2, Plk2 does not target eIF4GI to destruction suggesting that eIF4GI binding to Plk2 may serve another function. Thus, we propose that Plk2 can control translation initiation rates at least through the regulation of eIF4GII cellular content
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CABRILLAC, DIDIER. "Etude biochimique du mode de fonctionnement du recepteur kinase srk chez le chou fourrager (brassica oleracea)". Lyon, École normale supérieure (sciences), 2000. http://www.theses.fr/2000ENSL0159.
Texto completoResumen
Les systemes d'auto-incompatibilite chez les plantes a fleurs sont des systemes qui favorisent le brassage genetique au sein d'une espece, en bloquant les processus d'autofecondation. Chez le chou fourrager (b. Oleracea), le phenomene est controle genetiquement par un locus unique et multiallelique, le locus s (pour self-incompatibility). Le rejet du pollen s'observe lorsque les memes alleles s sont exprimes a la fois dans le pollen et dans le stigmate. Dans le stigmate, le locus s code une glycoproteine secretee, slg (s-locus glycoprotein) et une proteine membranaire de type recepteur kinase, srk (s-locus receptor kinase), dont l'activite ser/thr kinase est indispensable au rejet de l'autopollen. Il a ete propose que srk, associee a slg, fixerait un ligand d'origine pollinique, et declencherait la reponse d'auto-incompatibilite via son domaine catalytique. Afin de mieux comprendre le role de la proteine srk, nous avons entrepris une serie d'etudes visant a comprendre son fonctionnement biochimique. Nous avons ainsi pu montrer que la proteine slg n'etait pas impliquee dans le mecanisme de reconnaissance du pollen lors de la reaction d'auto-incompatibilite. La phosphorylation de la proteine srk, controlee par des proteines de type thioredoxines lors d'un croisement compatible, est inductible lors de l'autopollinisation. Enfin, la proteine srk phosphorylee interagit in vivo avec la proteine phosphatase ubiquitaire kapp (kinase associated phosphoprotein phosphatase), dont le role serait de dephosphoryler srk apres stimulation. L'ensemble de ces resultats suggere que le fonctionnement de srk est proche de celui des recepteurs kinase caracterises chez les animaux et permettent de mieux comprendre le role de cette proteine dans la reconnaissance et le rejet de l'autopollen.
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Conway, Jillian. "A Novel Role for SLK in Transforming Growth Factor-Beta-Mediated Epithelial-to-Mesenchymal Transition". Thesis, Université d'Ottawa / University of Ottawa, 2017. http://hdl.handle.net/10393/35699.
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In the late stages of cancer, tumors acquire the ability to spread throughout the body and invade distant tissues in a process called metastasis. Studies have shown that metastasis is responsible for 90% of all cancer-related deaths, making this an important field of study. In breast cancers, 30% of patients overexpress the HER2 oncoprotein, causing a more invasive and metastatic disease. Invasion can be stimulated in vitro using the soluble ligand transforming growth factor-β (TGFβ) to induce a process called EMT (epithelial-to-mesenchymal transition), where epithelial cells transition into a migratory phenotype through cell-cell junction breakdown. SLK is a Ste20-like kinase that has been linked to many processes, including cell migration and signaling downstream of the HER2 receptor complex. Here we show that the cellular migration and invasion of TGFβ-treated normal mammary epithelial cells is significantly impaired in the absence of SLK. Additionally, immunofluorescence analyses demonstrate that SLK knockdown conditions decrease a cell’s ability to progress through EMT due to the visible staining of epithelial markers. We find that SLK-depleted cultures express significantly lower levels of Snail1,and fibronectin mRNA levels following TGF-β treatment. Surprisingly, our data demonstrates that SLK kinase activity is not activated downstream of TGF-β stimulation, and that a kinase-dead SLK rescues Snail1 mRNA expression levels. Together these data suggest that SLK plays a novel role in TGFβ-induced epithelial-to-mesenchymal transition in a kinase activity-independent manner.
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Schmidtko, Achim. "Cysteine-rich protein 2 : a substrate of cGMP-dependent protein kinase I in nociceptive processing /". Frankfurt a.M, 2008. http://opac.nebis.ch/cgi-bin/showAbstract.pl?sys=000254017.
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Beck, Sascha Daniel. "Modulation des epithelialen Natriumkanals (ENaC) und des Shaker-Kaliumkanals Kv1.3 durch die Aldosteron-induzierte Serin-Threonin-Kinase SGK". [S.l.] : [s.n.], 2003. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=96907915X.
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Ziegler, Katharina. "Tetrasubstituierte Imidazole als ATP-kompetitive p38 MAP Kinase Inhibitoren: Synthese, biologische Testung und Untersuchung zur metabolischen Stabilität /". Tübingen, 2008. http://opac.nebis.ch/cgi-bin/showAbstract.pl?sys=000253679.
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Yan, Yijian [Verfasser] y Ralf [Akademischer Betreuer] Baumeister. "TORC2 regulates endocytic trafficking via serum-and glucocorticoid-inducible kinase gene sgk-1 in the intestine of C. elegans". Freiburg : Universität, 2018. http://d-nb.info/1217193499/34.
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