Tesis: "Cellules en cycle"

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Girard, Franck. "Régulation du cycle cellulaire des cellules somatiques mammifères : rôle de de la cycline A en phase S : importance de la compartimentation dans l'activation du MPF à la transition G2/M". Montpellier 1, 1993. http://www.theses.fr/1993MON1T027.

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PAOLETTI, JOLY ANNE. "Etude du cycle de duplication du centrosome dans les cellules animales". Paris 11, 1996. http://www.theses.fr/1996PA112456.

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Resumen

Une premiere partie du travail concerne la centrine, proteine centrosomienne qui possede une forte similitude avec le produit du gene cdc31 implique dans la duplication du centrosome chez la levure. Il est demontre que la centrine, bien que specifiquement enrichie au niveau du centrosome, est majoritairement distribuee dans d'autres compartiments cellulaires. Au centrosome, elle est concentree dans la lumiere distale des centrioles. L'existence d'isoformes multiples suggere que la centrine puisse etre la cible de regulations multiples et que des genes de centrine non encore caracterises existent. La fonction de la centrine a ete etudiee par microinjection de centrine heterologue dans des embryons de xenope au stade deux cellules. Un ralentissement du clivage des embryons et la formation de blastomeres anormaux possedant de multiples asters de microtubules ont ete observes. La centrine pourrait donc intervenir dans la coordination entre le cycle de duplication du centrosome et la division cellulaire ou dans la cytokinese. Une deuxieme partie du travail concerne le deroulement du cycle de duplication du centrosome et ses implications dans la morphogenese du fuseau mitotique. Il est montre que dans les cellules hela, l'application transitoire avant la mitose de docetaxel (taxotere), qui stabilise les microtubules, induit une desorganisation du centrosome, le materiel pericentriolaire etant dissocie des centrioles, et perturbe la separation des centrosomes. Le traitement induit la formation de fuseaux asymetriques avec des poles sans centrosome mais contenant la proteine numa et des poles organises par les centrosomes ne contenant que tres peu de numa. Le materiel pericentriolaire dissocie des centrioles pourrait organiser a la transition g2/m un aster de microtubules capturant la proteine numa quand elle est liberee du noyau, ce qui induirait la formation de poles sans centrosome. Des cellules anueploides micronuclees sont formees a la sortie de mitose du fait de l'absence de bloquage du cycle cellulaire en mitose en depit des anomalies du fuseau. Ceci indique que ni la nature des poles du fuseau, ni leur nombre, ne sont controles par les systemes de surveillance de sortie de mitose

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Lapillonne, Hélène. "Le contrôle de la phase G1 du cycle cellulaire dans les cellules souches embryonnaires de souris". Lyon 1, 1999. http://www.theses.fr/1999LYO1T129.

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Voisin, Benjamin. "Impact of the hair follicle cycle on Langerhans cell homeostasis". Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ118.

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Resumen

Le follicule pileux (FP) est un appendice cutané animé par un cycle régénératif dynamique provoquant des modifications de son microenvironnement. Les cellules de Langerhans (CLs), sentinelles de l’épiderme, sont en partie localisées à proximité du FP. Cette association spatiale nous a conduit à explorer le possible impact du cycle pileux sur l’homéostasie des CLs. Durant mon doctorat, nous avons mis en évidence (1) une augmentation de la prolifération des CLs au cours de l’anagène (phase de pousse du poil), (2) le mécanisme moléculaire sous-jacent impliquant une variation d’expression folliculaire de l’IL-34, une cytokine cruciale dans l’homéostasie des CLs et (3) un départ accru des CLs vers les ganglions lymphatiques en catagène (phase de régression du FP) concomitant avec le recrutement de cellules susceptibles d’être des précurseurs des CLs.Par ailleurs, la structure de la peau ainsi que la densité et le type de FP peuvent varier selon la région corporelle considérée. Nous avons émis l’hypothèse de variations locales dans la composition du système immunitaire cutané. Notre étude, focalisée sur les cellules dendritiques cutanées, a démontré l’existence d’une hétérogénéité de ces cellules en fonction de la zone de peau considérée
The hair follicle (HF) is a skin appendage endowed with a dynamic regenerating cycle. This renewal remodels the HF microenvironment. Langerhans cells (LCs) are epidermal immune sentinels, a part of which localizes close to the HF. This spatial association led us to explore whether the HF cycle could impact on LC homeostasis. During my doctorate, we uncovered an anagen (HF growing phase)-associated burst of LC proliferation with dividing cells associated with the HF. Using mouse models of HF loss and hair cycle manipulation, we showed that HFs are dispensable for initial formation of the LC network but critical for the proliferation burst. We correlated it to a cyclic variation of IL-34 expression, a crucial cytokine for LC homeostasis, by a specific subset of HF cells. In addition, catagen (HF regression phase) is characterized by the departure of LCs to draining lymph nodes and the concomitant recruitment of a potential LC precursor.The skin structure as well as the density and type of HFs vary across body areas. This observation led us to assess the possibility of local variations in skin immune cells composition. Our study, focused on cutaneous dendritic cells, highlighted an heterogeneity in those cells according to the skin area considered

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Bessard, Anne. "Mécanismes moléculaires de la cascade de signalisation des MAPKinases contrôlant la motilité et la prolifération des cellules hépatiques normales et transformées". Rennes 1, 2006. http://www.theses.fr/2006REN1S035.

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Resumen

Ce travail est centré sur l'étude des mécanismes d'induction et de répression des signaux mitogènes et de motilité des hépatocytes. Le blocage de la prolifération et de la survie des cellules transformées représente un enjeu important dans le développement de traitement anti-cancéreux. Cet objectif, nous a conduit à : 1/ préciser l'implication de la voie MEK/ERK dans l'équilibre prolifération / motilité et démontrer l'incidence de MLCK dans l'intégration des signaux mitogènes dans les hépatocytes normaux ; 2/ analyser les mécanismes MEK/ERK dépendants, régulant la motilité et la prolifération des cellules issues d'hépatocarcinomes ; 3/ appréhender plusieurs techniques d'imagerie afin de visualiser au mieux la tumeur induite suite à l'injection de cellules cancéreuses en ectopique et en orthotopique. Toutes les informations obtenues à l'issue de ces différentes approches devraient nous permettre un meilleur suivi de la croissance tumorale in vivo et de définir de nouvelles cibles thérapeutiques.

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Veiga, Fernandez Henrique. "Caractérisation des propriétés des cellules T CD8 mémoires". Paris 5, 2002. http://www.theses.fr/2002PA05N127.

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Resumen

Nous avons démontré que les cellulles T CD8 mémoires sont plus efficaces que les cellules nai͏̈ves après stimulation antigénique in vivo. Cette caractéristique unique des cellules mémoires est due à leurs propriétés de division et de différenciation en fonctions effectrices. Après stimulation antigénique, les cellules mémoires, comparées aux cellules naives se divisent plus tôt, ont un taux de division supérieur et un taux de perte réduit. Ces propriétés expliquent l'expansion trés importante des cellules mémoires après stimulation antigénique in vivo. Pour déterminer les mécanismes responsables de ces capacités uniques nous avons étudié l'arrêt et la progression dans le cycle cellulaire des cellules nai͏̈ves. .
We showed that on a per cell basis memory T cells are more efficient in dealing with the antigenin vivo than their counter partners, the naive T cells. This different capacity is due to qualitative differences of memory T cells related to division and differentiation into effector functions. Compared to na^ive T cells, memory cells divide after a shorter lag time, have an increased division rate and a lower loss rate. Altogether, these parameters justify the efficient expansion of memory T cells upon in vivo stimulation. To assess the mechanisms underlying these unusual proliferative capacities, we studied the cell cycle arrest and progression of nai͏̈ve and memory T cells ex vivo. Despite the high levels of D cyclins and CDKs, memory T cells

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Brauner, Nadia. "Ordonnancement dans des cellules robotisées". Grenoble 1, 1999. https://theses.hal.science/tel-00628917.

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Resumen

Ce travail concerne la production cyclique de pièces identiques dans un flow-shop robotisé. La Conjecture des 1-cycles, proposée par Sethi et al. , suppose que le taux maximum de production peut être atteint en répétant un cycle particulier qui produit une seule pièce. Cette conjecture simplifie la recherche du meilleur cycle de production. Nous présentons de nouvelles preuves (approche par les graphes et approche algébrique) de la validité de cette conjecture pour des cellules à 2 et 3 machines et nous montrons qu'elle est fausse à partir de 4 machines. Nous délimitons ensuite plus précisément son cadre de validité en imposant des restrictions sur les paramètres : distances inter-machines égales ou temps d'usinage égaux. Puis, nous étudions d'autres formes de cellules robotisées en relaxant des contraintes de la cellule robotisée de base. La première variante est l'association de l'entrée et de la sortie de la cellule. Nous proposons quelques remarques sur la recherche du meilleur cycle de production. La deuxième variante est le HSP (Hoist Scheduling Problem) : le temps pendant lequel une pièce peut rester sur une machine admet une borne supérieure. Nous montrons que des propriétés des cellules robotisées ne peuvent pas être étendues au HSP. La troisième variante est l'ajout de zones de stockage entre les machines. Nous montrons que la Conjecture des 1-cycles est vraie et nous analysons le gain par rapport à une cellule sans stockage. Enfin, nous supposons que les distances inter-machines sont quelconques. Nous montrons que trouver le meilleur cycle de production d'une pièce est un problème NP-complet. Ce travail a permis de résoudre complètement une conjecture ouverte depuis 1989 et de décrire l'influence de la relaxation de certaines contraintes des cellules robotisées sur la recherche du meilleur cycle de production. La principale perspective est, pour les cas où la conjecture est fausse, de trouver le meilleur cycle de production

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Sobolewski, Cyril. "Effets d'inhibiteurs de la cyclooxygénase-2 sur la prolifération et la survie de cellules cancéreuses hématopoïétiques". Thesis, Nancy 1, 2011. http://www.theses.fr/2011NAN10102/document.

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Resumen

Les cyclooxygénases (COXs) sont une famille d'enzymes impliquées dans la biosynthèse des prostaglandines. COX-2 est la forme inductible qui est induite pendant l'inflammation et qui est surexprimée dans plusieurs cancers. Plusieurs évidences suggèrent que COX-2 joue un rôle dans la prolifération cellulaire et l'apoptose. Ces évidences concernent surtout les tumeurs solides et les mécanismes impliqués ne sont pas complètement connus et surtout pour les cancers d'origine hématopoïétique. Pour notre étude, nous avons étudié l'effet d'inhibiteurs de COX-2 (nimésulide, NS-398 et célécoxib) sur la prolifération et l'apoptose de lignées cellulaires leucémiques et lymphoblastiques, Hel, Jurkat, Raji et U937. Nous avons montré que les différents inhibiteurs de COX-2 diminuent la prolifération des différentes lignées cellulaires. Les cellules U937 sont apparues comme les cellules les plus sensibles à ces inhibiteurs alors que les cellules K562 étaient les plus résistantes. Nous avons montré que cette modulation correspond à une accumulation des cellules en phase G0/G1 du cycle cellulaire, accompagnée d'une diminution précoce de l'expression de c-Myc et d'une augmentation de l'expression de marqueurs de différenciation dans les cellules U937 (CD15) et Hel (CD41a et CD61). Dans la deuxième partie de ce projet, nous avons étudié les effets des différents inhibiteurs de COX-2 sur l'apoptose induite par différents agents chimiothérapeutiques dans nos modèles cellulaires. Nous avons ainsi montré que les inhibiteurs de COX-2 inhibent fortement l'apoptose induite par plusieurs agents chimiothérapeutiques. Nous avons démontré que la prévention de l'apoptose se situe avant l'activation de Bax et de Bak. Par ailleurs, cet effet est caractérisé par une incapacité des agents chimiothérapeutiques à déclencher un stress apoptotique. Toutes nos données ont donc démontré un effet anti-apoptotique des inhibiteurs de COX-2 sur l?apoptose intrinsèque vs l'apoptose extrinsèque à un stade précoce de l'induction de l'apoptose. Ces données suggèrent des précautions quant à l'utilisation des inhibiteurs de COX-2 en combinaison avec la chimiothérapie. Dans la troisième partie de notre projet, nous avons étudié la combinaison des inhibiteurs de COX-2 avec la curcumine, une substance naturelle connue pour ses propriétés antitumorales. Nos travaux ont montré que la curcumine seule conduit à une accumulation des cellules U937 en phase G2/M du cycle cellulaire, suivie d'une induction d'apoptose. Cependant, le prétraitement des cellules U937 avec du célécoxib à des concentrations non-apoptogéniques contrecarre l'apoptose induite par la curcumine, suggérant ainsi que ce type de combinaison ne serait pas une bonne stratégie dans les cellules hématopoïétiques. L'utilisation chronique des inhibiteurs de COX-2 peut être associée à des effets secondaires importants consécutifs à l'inhibition de l'activité de COX-2. Dans la dernière partie de notre projet, nous avons démontré que le 2,5 diméthyl-célécoxib (DMC), un analogue du célécoxib qui n'inhibe pas l'activité de COX-2, induit une diminution de la prolifération cellulaire et induit l'apoptose des cellules U937 et K562. Par ailleurs, ces effets sont plus importants que ceux observés avec le célécoxib. Par conséquent, ce composé a démontré de meilleures propriétés antitumorales et représente une voie thérapeutique prometteuse contre les leucémies. Tous nos résultats soutiennent donc l'idée que les inhibiteurs de COX-2 présentent les effets anti-tumoraux les plus efficaces que lorsqu'ils sont administrés seuls. Les effets observés avec le DMC suggèrent que ce composé pourrait représenté une voie alternative aux inhibiteurs de COX-2 en thérapie anti-cancéreuse
Cyclooxygenases (COXs) are a family of enzymes, which catalyze the rate-limiting step in prostaglandin biosynthesis. COX-2 is the inducible isoform, upregulated during inflammation and overexpressed in various cancers. There are evidences of a role for COX-2 in cell proliferation and apoptosis especially in solid tumors, whereas little is known for cancers of hematopoietic origin. In our study, we analyzed the effect of COX-2 inhibitors (nimesulide, NS-398 and celecoxib) on cell proliferation and apoptosis of a panel of leukemic and lymphoblastic cell lines, Hel, Jurkat, K562, K562, Raji and U937. We found that the different inhibitors slow down cell proliferation in the different hematologic cell lines tested. U937 cells appeared as the most sensitive, whereas K562 were the most resistant to this effect. We provide evidence that this modulation corresponds to an accumulation of the cells in G0/G1 paralleled by an early downregulation of c-Myc and the expression of cell type-specific differentiation markers in U937 (CD15) and Hel (CD41a and CD61). In the second part of our study, we investigate the effect of COX-2 inhibitors on apoptosis induced by chemotherapeutic agents in our cell models. We demonstrated that COX-2 inhibitors strongly prevent apoptosis induced by a panel of chemotherapeutic agents. We demonstrated an early prevention of apoptotic signaling, prior to Bax/Bak activation. The preventive effect is associated with an impairment of the ability of chemotherapeutic agents to trigger their apoptogenic stress. Altogether, our results demonstrate an anti-apoptotic effect of COX-2 inhibitors on intrinsic vs. extrinsic apoptosis at early steps of apoptosis commitment. These results suggest cautions in the use of COX-2 inhibitors with chemotherapy. In the third part of our project, we investigated the combination of COX-2 inhibitors with curcumin, a natural product known for its anti-tumor properties. Our findings show that curcumin alone leads to an accumulation of U937 cells in G2/M phase of cell cycle, followed by an induction of apoptosis. However, the pretreatment of U937 cells with celecoxib at non-apoptogenic concentrations, counteracted curcumin-induced apoptosis, thus showing that this combination is not a good anti-cancer strategy in our cell models. The chronic use of COX-2 inhibitors can be associated with severe side effects due to the inhibition of COX-2 enzyme. In the last part of our project, we demonstrated that 2,5 dimethyl-celecoxib (DMC), a structurally analogue of celecoxib, which is not able to inhibit COX-2 activity, induces an inhibition of cell proliferation and an induction of apoptosis in U937 and K562 cells. These effects are stronger than those observed with celecoxib. Thus, this compound demonstrated better anti-tumor properties and may represent a promising therapeutic approach against leukemia. Altogether, our study supports the idea that COX-2 inhibitors display anti-tumor effects in our cell models, but only when administrated alone. The effects observed with DMC suggest that this compound may represent an alternative approach to COX-2 inhibitors in cancer therapy

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Bedessem, Baptiste. "Contributions à l'étude de la réponse moléculaire à l'hypoxie : Modélisation mathématique et expérimentations sur cellules FUCCI". Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015GREAS024/document.

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Resumen

Les effets biologiques de l'hypoxie sont très étudiés aujourd'hui, principalement en raison du rôle crucial que jouent les conditions d'oxygénation dans le développement des cancers.Depuis plusieurs années, une littérature foisonnante tente ainsi de décrire les multiples aspects de la réponse moléculaire, cellulaire et physiologique à l'hypoxie. La complexité des voies de signalisation impliquées et la diversité de leurs effets cellulaires rendent la tâche délicate. Cet état de fait se reflète dans la pluralité des méthodes utilisées, depuis les simulations numériques jusqu'aux approches expérimentales.Dans cette thèse, j'ai abordé ce sujet sur la base de deux outils: la modélisation mathématique et une démarche expérimentale utilisant les cellules HeLa-FUCCI. Cette lignée cellulaire récemment développée est en effet un instrument de choix encore peu exploité. Par une construction génétique liant des protéines du cycle cellulaire à un fluorophore, elle rend possible l'étude, en continue, de la dynamique du cycle en microscopie de fluorescence. Nous avons ainsi pu analyser plusieurs aspects de la réponse cellulaire à l'hypoxie, dans un contexte tumoral.Dans un premier temps, nous avons cherché à caractériser mathématiquement les liens tissés entre le cycle cellulaire et les voies de signalisation de l'hypoxie, centrées sur le facteur de transcription HiF-1. Ce modèle propose un explication simple à l'arrêt du cycle observé notamment dans les cellules tumorales en conditions hypoxiques. Nous avons ainsi montré que l'induction de chimiorésistance pouvait se concevoir comme une entrée facilitée en quiescence des cellules cancéreuses. Dans le but de valider ces observations, nous avons ensuite cherché à quantifier expérimentalement la dynamique de la prolifération cellulaire en utilisant les cellules HeLa-FUCCI. Comme il est apparu que les fluorophores qu'elles portent sont sensibles au manque d'oxygène, nous avons testé différentes molécules couramment utilisées pour induire HiF-1 et mimer l'hypoxie (DFO et CoCl2). De cette étude ont émergé des résultats originaux quant à la dynamique de blocage du cycle des cellules HeLa en présence de chélateurs du fer.Si les conditions hypoxiques ne sont pas favorables à l'utilisation des cellules FUCCI, nous avons pu en revanche montrer qu'elles étaient tout à fait adaptées à l'étude de la dynamique du cycle cellulaire en condition de réoxygénation. De manière intéressante, nous avons alors pu observer un ralentissement significatif de la phase S après retour à la normoxie. Afin d'apporter un éclairage théorique à cette observation, nous avons proposé un modèle mathématique de la dynamique de régulation de HiF-1 en conditions d'oxygène fluctuantes, basé sur le couple HiF-1/pVHL, dont les relations sont pensées dans un cadre compartimenté (noyau/cytoplasme). Ce modèle simple reproduit fidèlement les caractéristiques principales de la réponse cellulaire à l'hypoxie. En outre, en simulant les conséquences d'une réoxygénation brutale, nous avons observé la genèse de fortes instabilités du niveau intracellulaire de HiF-1. Enfin, nous avons mené une étude expérimentale de la compartimentation de HiF-1. L'outil FUCCI permet en effet d'observer simultanément l'avancement du cycle (en microscopie de fluorescence), et la localisation intra-cellulaire de HiF-1(par immunomarquage). Nous avons pu montrer que la variabilité de la localisation de HiF-1α n'était pas due à la progression dans le cycle. Elle est donc certainement liée soit à des différences génétiques inter-cellulaire, soit à une stochasticité de la régulation de HiF-1
The biological effects of hypoxia are intensively studied today, mainly because of the crucial role played by oxygenation conditions during the development of cancers.For several years, a huge literature aims at describing the multiple aspects of the molecular, cellular and physiological responses to hypoxia. The complexity of the pathways which are involved and the diversity of their cellular effects make this task difficult.This situation is reflected in the plurality of the methods used, from the numerical simulations to the experimental approaches.In this thesis, I studied this subject using two tools: mathematical modeling and experimental approaches using HeLa-FUCCI cells.This recently developed cell line is an interesting tool not yetmuch exploited. By a genetic construction linking cell cycle proteins to a fluorophore, it makes possible the study of cell cycle dynamics using fluorescent microscopy.We could analyze various aspects of the cellular response to hypoxia, in a tumoral context. In a first time,we tried to mathematically characterize the links existing between cell cycle and the hypoxia pathways,driven by HiF-1.This model proposed a simple explanation to the cell cycle arrest notably observed in the tumor cells in hypoxicconditions.We then showed that the induction of chemoresistances could be considered as an entry into quiescence of tumor cells.In order to validate these observations we then tried to experimentally quantify the dynamics of cell proliferation using HeLa-FUCCI cells. As it appeared that the fluorophores were sensitive tothe lack of oxygen, we tested different molecules currently used to induceHiF-1 and mimic hypoxia (DFO and COCl2).From this study have emerged original results about the dynamics of cell cyclearrest of HeLa cells in presence of iron-chelators.If hypoxic conditions are not favorable to the use of HeLa-FUCCI cells, we could show that they were totally adapted to the study of cell cycle dynamics during reoxygenation.Interestingly, we then could observe a significant slowing down of the S-phase after the return to normoxia. In order to bring theoretical elements to this observation, we proposed a mathematical model of the dynamics of HiF-1 regulation in fluctuating oxygen conditions, based on thepVHL/HiF-1 couple, in the frame of a nucleo-cytoplasmic compartmentalization of HiF-1.This simple model well reproduce the main characteristics of the cell response to hypoxia.Besides, by simulating the consequences of a sudden reoxygenation, we observed the genesis of strong instabilities of HiF-1 intracellular level.Finally, we propose an experimental study of HiF-1 compartmentalization.Indeed, the FUCCI cells allow to simultaneously observe cell cycle progression (using fluorescent microscopy),and HiF-1 intra-cellular localization (with immunomarkage). We then could show that the variability of HiF-1 localization was not due to the progression into the cell cycle. Then, it is certainly linked to inter-cellular genetic differences, or to a stochasticity of HiF-1 regulation

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Tabet-Helal, Sana Zouleykha. "Impacts moléculaire et cellulaire de mutations de la partie N-terminale de la stathmine". Thesis, Evry-Val d'Essonne, 2014. http://www.theses.fr/2014EVRY0010/document.

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Resumen

Les microtubules (MTs) sont des éléments majeurs du cytosquelette, ils participent à un ensemble de fonctions cellulaires d’importance comme la migration, le trafic des vésicules et des organelles ainsi qu’{ la division cellulaire au cours de laquelle ils forment le fuseau mitotique, permettant une ségrégation correcte des chromosomes. Ce sont des polymères cylindriques composés de protofilaments parallèles faits d’hétérodimères de tubulines α/β. Pour exercer ces fonctions, les MTs nécessitent une dynamique d’assemblage et de désassemblage régulée.La stathmine est une phosphoprotéine cytosolique de 17 kDa qui séquestre la tubuline dans un complexe non polymérisable formé de deux hétérodimères de tubuline par molécule de stathmine (complexe T2S). Les autres protéines de la famille stathmine (SCG10, SCLIP, RB3 et ses deux variants d’épissage RB3' et RB3″) forment aussi des complexes de séquestration appelés T2-SLD (Stathmin Like Domain) ayant des stabilités variables.En s’appuyant sur ces observations, des travaux ont montré qu’une chimère SN-CR constituée de la partie N-terminale de la stathmine et de la partie C-terminale du SLD de la protéine RB3 forme un complexe T2S remarquablement stable avec la tubuline (Jourdain et al., 2004). En parallèle à ces travaux, Clément et collaborateurs ont découvert que de courts peptides issus de la région N-terminale des SLD peuvent à eux seuls inhiber la polymérisation de la tubuline. Le peptide le plus efficace est le peptide I19L issu de la stathmine (peptide I19L (IQVKELEKRASGQAFELIL)). Il correspond à la région repliée en «β-hairpin» observée dans les cristaux T2S-SLD formés avec le domaine RB3-SLD (Clement et al., 2005). Pour augmenter l'efficacité de l’interaction entre les peptides issus de la région N-terminale des SLD et la tubuline, différentes mutations ont été introduites au niveau du peptide I19L. Les expériences de polymérisation in vitro de tubuline en présence d’une série de mutants de peptide I19L montrent que les peptides I19L-K4R et I19L-K4R-A10R sont les plus efficaces pour l’inhibition de l’assemblage de la tubuline.L’objectif de mes travaux { été d’introduire ces mutations au niveau de la partie N-terminale de la protéine stathmine et de la chimère NS-CR, afin d’analyser leurs efficacités sur l’inhibition de l’assemblage des MTs et la dynamique des MTs dans des cellules en culture de type HeLa, et de voir leur impact sur le cycle cellulaire.Mes résultats montrent que la stathmine mutant 2 (possédant les mutations K9R-A15R homologues aux mutations K4R-A10R du peptide I19L) induit une dépolymérisation des MTs dans des cellules en mitose par formation de fagots de MTs, réduit la dynamique de MTs et induit une cytotoxicité. L’ensemble des résultats suggère que nous pouvons améliorer la stabilité de liaison de la stathmine avec la tubuline par l’introduction de ces mutations, ce qui aurait in vitro un impact dans certains aspects cellulaires comme la prolifération cellulaire et la dynamique des MTs. Cela pourrait conduire à développer de nouvelles stratégies anticancéreuses visant à perturber le fuseau mitotique
Microtubules (MTs) are major constituents of the cytoskeleton and are involved in many cellular processes such as the determination of cell architecture, the formation of the mitotic spindle and intracellular trafficking. These tubular structures, composed by tubulin α/β heterodimers assemble and disassemble with a finely regulated dynamics.Stathmin is a cytosolic phosphoprotein that sequesters tubulin in a non polymerizable complex consisting of two tubulin heterodimers per stathmin molecule (T2S complex).The other stathmin family proteins (SCG10, SCLIP, RB3 and its two splice variants RB3 'and RB3 ") can also bind two tubulin heterodimers through their SLD (Stathmin Like Domain), but the different tubulin/SLD complexes display varying stabilities.Based on these observations, current works showed that one chimera protein consisting of the N-terminal domain of stathmin (NS) and of the C-terminal domain of RB3 (CR) forms a T2-SLD complex remarkably stable with tubulin (NS-CR chimera). Molecular simulation experiments in silico suggest that we can increase the affinity of the NS-CR chimera by introducing mutations in the NS subdomain (Jourdain et al., 2004).In parallel to this work, Clement and colleagues found that short peptides derived from the N-terminal region of SLD alone can inhibit tubulin polymerization. Among the N-terminal part of SLD, the most effective peptide is the peptide I19L (IQVKELEKRASGQAFELIL) derived from stathmin. It corresponds to region folded into a "β-hairpin" structure observed in the T2S crystals (Clement et al., 2005). To increase the efficiency of this interaction, different mutations were introduced at the level of the I19L peptide from the stathmin N-terminal domain and tested in vitro. The results showed that the peptides I19L-K4R and I19L-K4R-A10R are the most effective to in inhibit the assembly of MTs.In this work, we introduce these mutations in the N-terminal domains of stathmin and in the NS-CR chimera with the aim of analyzing their efficiencies on MTs disassembly in cancer cell cultures like HeLa, and the impact of the mutation on MTs dynamic and cell cycle.Results from overexpression experiments of WT and stathmin mutant 2 containing the double mutation (K9R-A15R similar to the mutations K4R-A10R for the I19L peptide), suggest that this mutant significantly induces depolymerization of mitotic MTs. In its less phosphorylated state on serine 16; this mutation also reduces MTs dynamics and induces cytotoxicity.We thus suggest that we can ameliorate the binding and efficiency of the N-terminal stathmin part by including this double mutation. This variation has an impact in vitro and in some cellular aspects such as cell proliferation and MTs dynamics. These findings may lead to a targeted therapy for this type of cancer

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Dompierre, Jim. "Implication du complexe moteur dynéine cytoplasmique/dynactine dans l'orientation du fuseau de division dans les cellules épithéliales polarisées". Paris 5, 2003. http://www.theses.fr/2003PA05S002.

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Resumen

Le positionnement du fuseau de division dans l'espace cellulaire détermine le plan de clivage des cellules et est important au cours du développement des organismes et du maintien de l'intégrité tissulaire. Dans les cellules des épithéliums simples, le plan de division ne peut être que parallèle ou perpendiculaire au plan de la monocouche cellulaire. Si le plan de division est parallèle au plan de l'épithélium, l'une des deux cellules filles est exclue de la monocouche. Si le plan de division est perpendiculaire au plan de l'épithélium, les deux cellules filles restent dans la monocouche et participent à la croissance bidimensionnelle de l'épithélium. Etant donné que le plan de division est perpendiculaire à l'axe du fuseau mitotique, un mécanisme d'orientation du fuseau de division apparaît nécessaire à l'intégrité de l'épithélium. Un tel mécanisme a été mis en évidence dans les cellules MDCK polarisées : le fuseau mitotique, s'oriente en métaphase dans le plan de la monocouche cellulaire. En mitose, une sous-population de microtubules (MTs), appelés MTs astériens, émane des pôles pour se diriger vers la périphérie de la cellule. Nous avons montré qu'en mitose, dans ces cellules, la dynéine cytoplasmique, un moteur moléculaire rétrograde, se localise sur ces MTs astériens et sur des sites corticaux interagissant avec ces derniers. Ces sites apparaissent en parfait alignement avec l'axe du fuseau en métaphase. Nous avons dévelppé un système de vidéo microscopie rapide 4-5D à déconvolution, permettant l'étude de la dynamique de processus in vivo dans l'espace et dans le temps. Ce système nous a permis de suivre in vivo la dynamique tridimensionnelle de l'orientation du fuseau de division et des sites corticaux contenant la dynéine cytoplasmique dans le temps, dans les cellules MDCK. Nous avons pu observer que les sites corticaux accumulant la chimère LISI/DsRed sont activement impliqués dans le positionnement du fuseau de division, et que leur dynamique d'apparition et de disparition au cortex de la cellule dépend de la dynamique des Mts astériens. Ces observations suggèrent l'existence d'un dialogue entre les MTs et le cortex cellulaire conduisant à l'orientation correcte du fuseau de division dans les cellules épithéliales, et impliquant la dynéine cytoplasmique dans ce mécanisme
Mitotic spindle positioning within the cell determines the site of the cell cleavage and is an important process during organism development and maintenance of tissue integrity. In epithelial cells, the division plane is not random and must be parallel or perpendicular to the plane of the epithelium. If the division plane is parallel to the epithelium, one of the two daughter cells is lost from the epithelial sheet. If the division plane is perpendicular to the cell monolayer, both cells remain within the epithelium and contribute to its bidimensional growth and development. Since the division plane is perpendicular to the axis of the mitotic spindle, a spindle orientation mechanism seems necessary to preserv the epithelium integrity. Such a mechanism has been described in mitotic polarized MDCK cells : the mitotic spindle orients in metaphase parallel to the cell monolayer. In mitosis a subpopulation of microtubules (MTs), called astral MTs, emanates from the spindle poles toward the cell periphery. We have ghown that cytoplasmic dynein, a molecular retrograde motor, localizes along astral MTs and on cortical spots into which many astral MTs dock, in mitotic MDCK cells. . .

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Zgheib, Racha. "Les mécanismes moléculaires de la méthionine dépendance des cellules souches cancéreuses". Thesis, Université de Lorraine, 2017. http://www.theses.fr/2017LORR0342/document.

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Resumen

Certaines cellules cancéreuses sont méthionine dépendantes cependant les mécanismes de cette méthionine dépendance sont inconnus. Les cellules initiatrices de tumeur, qui représentent un faible pourcentage des cellules d’une tumeur, sont impliquées dans la récidive du cancer, phénocopient les cellules souches cancéreuses et forment des sphéroïdes 3D ou «tumor spheres (TS)» dans des conditions de culture non adhérentes. Nous montrons que, contrairement aux cellules monocouches adhérentes U251, les TS dérivées de cellules de glioblastome U251 ont besoin de méthionine exogène pour se développer. Cette méthionine-dépendance est caractérisée par une courbe en forme de cloche dans laquelle la croissance des TS est ralentie par des concentrations élevées de méthionine (> 0,01mM). Pendant la restriction en méthionine, le 5-méthyle-tétrahydrofolate restaure la formation des TS. Si les TS sont privées de méthionine pendant 24h, puis supplémentées en acide folique, elles présentent des concentrations d'isoformes des folates significativement inférieures à celles retrouvées dans les cellules adhérentes maintenues dans les mêmes conditions. Ceci suggère que le cycle des folates est réprimé dans les TS comparativement aux cellules adhérentes. L'annotation fonctionnelle des données ARN-Seq montre des changements nets dans plusieurs fonctions moléculaires et dévoile dans les TS un cycle cellulaire réduit, une augmentation du caractère « stemness » et une diminution du métabolisme des folates affectant particulièrement DHFR, SHMT et MTFHD. L'analyse du méthylome révèle des changements de méthylation dans le cycle cellulaire, la signature « stemness » et le cycle des folates, malgré des profils globaux de méthylation de l'ADN qui restent stables. Cependant, contrairement à la méthylation importante des promoteurs observée pour le cycle cellulaire et les gènes « stemness » (+ 25%), seuls 10 gènes du cycle des folates sur 139 gènes impliqués dans le métabolisme des mono-carbones sont significativement modifiés. En conclusion, un cycle des folates avec activité réduite fait partie de la reprogrammation métabolique qui déclenche la dédifférenciation en cellules souches cancéreuses et cette répression ne s'explique qu’en partie par la modification de méthylation des promoteurs
Some cancer cells are methionine dependent however little is known about the mechanisms of this dependency. Tumor initiating cells are a rare population of cancer cells, implicated in disease recurrence, that phenocopy cancer stem cells and form 3D spheroids or ‘tumor spheres (TS)» under non adherent conditions. We show that, unlike U251 adherent monolayer cells, TS derived from U251 glioblastoma cells need exogenous methionine to grow. This methionine dependency is characterized by a bell shape curve in which high methionine concentrations (>0.01mM) slow down TS growth. During methionine restriction, 5- methyltetrahydrofolate restores TS formation. When TS are deprived from methionine for 24h, then supplemented with folic acid, they exhibit lower levels of folate isoforms than adherent cells maintained in the same conditions, suggesting that folate cycle is repressed in TS relative to adherent cells. Functional annotation of the RNA-seq data shows clear changes in several molecular functions and reveals in TS a reduced cell cycle, an increased stemness and a diminished folate metabolism affecting particularly DHFR, SHMT and MTFHD. Methylome analysis shows methylation changes in cell cycle, stemness and folate cycle, despite global DNA methylation patterns remaining stable. However, unlike the important promoter methylation observed for cell cycle and stemness genes (+25%), only 10 folate cycle genes out of 139 genes involved in one-carbon metabolism are significantly altered. In conclusion, reduced folate cycle is part of the metabolic reprogramming triggering dedifferenciation into cancer stem cells and this repression is only partly explained by the alteration of promoter methylation

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Jeanblanc, Michaël. "Etude du rôle de l'ICBP90 dans le cycle cellulaire". Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2005. http://www.theses.fr/2005STR13124.

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Carlisi, Didier. "Etudes des mécanismes moléculaires régulant l'effet antimitogène du "Nerve Growth Factor" sur les cellules PC12". Lyon, École normale supérieure (sciences), 2000. http://www.theses.fr/2000ENSL0150.

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Guez, Fanny. "Etude des mécanismes moléculaires impliqués dans le cycle cellulaire des cellules β pancréatiques humaines". Thesis, Paris 5, 2013. http://www.theses.fr/2013PA05T094.

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Resumen

Le diabète est une maladie qui touche 347 millions de personnes dans le monde (90% ayant un diabète de type 2) (OMS, septembre 2012). Elle se définit par une perturbation de la régulation de l’homéostasie glucidique avec un déficit dans la fonction des cellules ß du pancréas. Dans le diabète de type 1, ce déficit est provoqué par une destruction autoimmune. Dans le diabète de type 2, il est dû à une insulino-résistance périphérique conduisant à un épuisement des cellules ß qui ne peuvent plus maintenir leur fonction. Une stratégie pour restaurer une masse fonctionnelle de cellules ß est, soit d’induire la prolifération de ces cellules in vitro avant de les greffer, soit d’induire leur prolifération in vivo. Cependant, ceci implique une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires impliqués dans le cycle cellulaire des cellules ß pancréatiques humaines. L’objectif de ma thèse a été de disséquer ces mécanismes. Pour cela, nous disposons au laboratoire d’un outil unique, deux lignées de cellules ß pancréatiques humaines. Dans l’une d’elle, les transgènes immortalisant peuvent être délétés. Les cellules arrêtent alors de proliférer donnant des cellules ß pseudo-primaires. En comparant l’expression des régulateurs du cycle cellulaire de la lignée de cellules ß humaine immortalisées aux cellules ß humaine pseudo-primaires, nous avons pu montrer que le cycle de ces cellules était bloqué en phase G1. L’absence de plusieurs protéines responsables de la progression du cycle cellulaire en aval de cette phase a été confirmée dans les îlots humains. Nous avons également observé une diminution du temps de doublement des cellules ß humaines suite à leur traitement avec de la GH et de l’EPO. Suite à ce traitement nous observons également une activation du facteur de transcription STAT5 connue pour son implication dans la prolifération cellulaire des cellules ß de rongeurs. Enfin nous avons étudié l’effet que provoquait un apport nutritif sur la fonction et la prolifération des cellules ß humaines. Nous avons ainsi pu voir que les cellules répondaient mieux à la fonction ß avec un temps de doublement du nombre de cellules plus court dans un milieu enrichi en nutriment. De plus, dans ces conditions, l’autophagie, préexistante avant l’apport de nutriments et vraisemblablement due à un manque en énergie cellulaire, disparait. Ces résultats nous permettent de mieux comprendre les mécanismes contrôlant la prolifération des cellules ß pancréatiques humaines et d’envisager de nouvelles thérapies du diabète
Diabetes is a disease that affects 347 million people worldwide (90% with type 2 diabetes) (WHO, September 2012). It is defined by a disturbance in the regulation of glucose homeostasis with a deficit in function of pancreatic beta cells. In type 1 diabetes, this deficit is caused by autoimmune destruction. In type 2 diabetes, it is due to peripheral insulin resistance leading to a depletion of beta cells that can no longer maintain their function. A strategy to restore a functional beta cell mass is, or of inducing proliferation of these cells in vitro prior to transplant, or to induce proliferation in vivo. However, this implies a better understanding of the molecular mechanisms involved in the cell cycle of human pancreatic beta cells. The aim of my thesis was to dissect these mechanisms. For this, we have a unique laboratory tool, two lines of human pancreatic beta cells. In one of them, immortalizing transgenes may be deleted. Then, the cells stop to proliferate giving pseudo- primary beta-cells. By comparing the expression of cell cycle regulators of the lineage of human beta cells immortalized pseudo- primary human beta- cells, we could show that the cycle of these cells was blocked in the G1 phase. The lack of several proteins responsible for cell cycle progression downstream of this phase has been confirmed in human islets. We also observed a decrease in the doubling time of human beta cells following treatment with GH and EPO. Following this treatment we also observe an activation of the transcription factor STAT5 known for its involvement in cell proliferation of rodent beta cells. Finally, we studied the effect that caused a nutrient supply on the function and proliferation of human beta cells. We have seen that the cells responded better to beta function with a doubling time shorter amount of cells in a nutrient enriched environment. In addition, under these conditions, autophagy, existing before the supply of nutrients and likely due to a lack of cellular energy, disappears. These results allow us to better understand the mechanisms controlling proliferation of human pancreatic ß and consider new diabetes therapies cells

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Déry, Marie-Claude. "Régulation de l'apoptose dans les cellules endométriales durant le cycle oestral chez le rat /". Trois-Rivières : Université du Québec à Trois-Rivières, 2004. http://www.uqtr.ca/biblio/notice/resume/18214607R.pdf.

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Déry, Marie-Claude. "Régulation de l'apoptose dans les cellules endométriales durant le cycle oestral chez le rat". Thèse, Université du Québec à Trois-Rivières, 2004. http://depot-e.uqtr.ca/4674/1/000111503.pdf.

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Sakabedoyan, Caline. "La voie LIF/gp130/STAT3 régule le cycle cellulaire des cellules souches embryonnaires (ES) de souris". Lyon, École normale supérieure (sciences), 2006. http://www.theses.fr/2006ENSL0378.

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Jacquet, Bernard. "Quantification des protéines AgNOR par cytométrie de flux et analyse de leur dynamique dans les cellules induites à proliférer". Université Joseph Fourier (Grenoble), 2001. http://www.theses.fr/2001GRE19010.

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Resumen

Les AgNORS sont des protéines nucléaires qui précipitent les sels d'argent. De nombreuses études ont montré que la durée du cycle cellulaire est d 'autant plus courte que la quantité d'AgNORS dans les cellules en cycle est élevée. La mesure simultanée des quantités d'AgNORS dans les cellules en cycle et de la proportion de cellules en cycle permet donc une mesure exhaustive de l'activité proliférative des populations cellulaires normales et pathologiques. Des travaux récents ont également montré la valeur pronostique des AgNORS pour les taux de survie à 5 ans dans de nombreux cancers. Toutefois, la quantification des AgNORS dans les cellules en cycle repose sur l'analyse d'image qui est une méthodologie coûteuse en temps et qui manque souvent de reproductibilité entre laboratoires. Nous avons donc développé et validé une nouvelle approche pour la quantification des AgNORS dans les cellules en cycle fondée sur la cytométrie en flux. Par ailleurs, nous nous sommes attachés à étudier les modifications quantitatives des trois protéines AgNORS UBF1, Nucléoline et B23 dans les cellules entrant en prolifération après hépatectomie partielle de rat. Les résultats montrent une augmentation des quantités d'UBF1 qui est corrélée à l'augmentation d'activité transcriptionnelle de l'ARN Polymérase de type 1 suivies par une augmentation des quantités de Nucléoline et de B23. L'activité de ribogenèse qui implique ces protéines apparaît donc bien liée directement au déroulement du cycle cellulaire
AgNORS are nuclear proteins that interact specifically with silver salts. Numerous studies have shown that AgNORS are as large as the cell cycle time short. (. . . ) We have developed and validated a new approach to AgNORS quantitation based on flow cytometry. Moreover, we have studies the quantitative modifications of the three AgNORS proteins UBF1, Nucleolin and B23 in cells committed to proliferation after partial rat hepatectomy. Results show an increase in UBF1 quantity wich is correlated with an increase in transcriptional RNA Polymerase 1 activity followed by an increase in Nucleolin and B23 quantity. The ribogenesis activity that involves these proteins is thus confirmed as a driving force of the cell cycle progression

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Louvet, Emilie. "Dynamique et compartimentation de la machinerie de maturation des ARN ribosomiques en cellules vivantes". Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05S025.

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Resumen

L'organisation fonctionnelle du noyau dépend de machineries nucléaires distribuées dans des domaines appelés corps nucléaires. Pour comprendre comment cette distribution est régulée,nous avons choisi le nucléole comme modèle d'étude. Nous nous sommes intéressés au trafic et à la compartimentation de la machinerie de maturation des ARNr pendant l'interphase et la mitose. Cette étude a nécessité l'utilisation de techniques de microscopie permettant le suivi de protéines en cellules vivantes telles que : le FRAP, la vidéomicoscopie et le tdFLIMFRET. Grâce à un système permettant de séparer réversiblement les machineries de transcription et de maturation des ARNr en interphase, nous avons montré que la machinerie de maturation est déconnecté des sites de transcription et se concentre dans des masses nucléaires issues du composant granulaire nucléolaire. Nous les avons nommées masses granulaires. Ce processus réversible, nous a permis d'étudier la reformation nucléolaire. Dans des cellules contrôles et grâce à un système de cellules perméabilisées, mis au point dans le laboratoire, nous avons montré que la reformation nucléolaire dépend de l'hydrolyse de l'ATP et que CK2 intervient dans la régulation de la compartimentation du nucléole. En sortie de mitose, nous avons montré que le recrutement des machineries de maturation précoce et tardive passe par les même PNB. La convergence des machineries dans un même site pourrait être l'origine de la formation des PNB. De plus, nous avons mis en évidence l'interaction des protéines B23 et Nop52 dans les PNB. Aussi, nous proposons, pour les PNB, un rôle de plateformes d'assemblage des complexes de maturation des ARNr
The functional organisation of the nucleus depends on machineries that are distributed in domains named nuclear bodies. To understand how this distribution is regulated we have chosen the nucleolus as example. We have focused our attention on traffic and compartmentation of the rRNA processing machinery during interphase and mitosis. To follow proteins in living cells we have used microscopy technologies such as: FRAP, videomicroscopy and tdFLIM-FRET. A reversible system capable of disconnecting the processing from the transcription machineries during interphase permitted us to show that the processing machinery can be disconnected from the transcription sites and accumulates in nuclear masses originating from the nucleolar granular component. We named these granular masses. This reversible process permitted us to study reformation of the nucleolus. In control cells and in an assay using permeabilized cells set up in the laboratory, we have shown that nucleolar reformation depends on ATP hydrolysis and that CK2 is involved in nucleolar compartmentation. At the exit of mitosis, we have shown that early and late processing machineries pass through the same PNB. The convergence of the machineries in a single site could be at the origin of PNB formation. Furthermore, we have demonstrated that Nop52 and B23 interact in the same PNB. For this reason, we propose that PNB are preassembly platforms for rRNA processing complexes

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Aksoy, Irène. "Identification et caractérisation fonctionnelle des gènes cibles de la voie LIF/STAT3 impliqués dans le contrôle de l’autorenouvellement des cellules souches embryonnaires de souris". Lyon 1, 2008. http://n2t.net/ark:/47881/m6nc5z9x.

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Resumen

Le LIF active le facteur STAT3 et permet le maintien en autorenouvellement des cellules ES de souris en inhibant leur différenciation en endoderme et mésoderme. Afin de mettre en évidence les mécanismes qui contrôlent la pluripotence des cellules ES nous avons identifié les gènes cibles de la voie LIF/STAT3 et caractérisé leur rôle dans l’inhibition de la différenciation. Nous avons identifié 58 gènes cibles de STAT3. L’inactivation de 22 d’entre eux induit une augmentation du nombre de colonies différenciées et du niveau d’expression de marqueurs de différenciation. Pim1 et Pim3 inhibent la différenciation des cellules ES, induite par privation de LIF, suite à leur surexpression. Ainsi, nous avons montré qu’ils jouent un rôle important dans le maintien de la pluripotence. L’analyse de marqueurs endodermiques et mésodermiques nous a permis de distinguer deux catégories de gènes cibles : ceux qui inhibent la différenciation en mésoderme et ceux en endoderme. Deux gènes, Klf4 et Klf5, ont fait l’objet de plus d’analyses. L’inactivation de Klf4 induit l’expression de gènes régulateurs de la différenciation endodermique et une augmentation des cellules se différenciant en endoderme. L’inactivation de Klf5 induit l’expression du régulateur mésodermique Brachyury et une augmentation des cellules se différenciant en mésoderme. La voie LIF/STAT3 permet donc le maintien en autorenouvellement des cellules ES en activant l’expression de gènes cibles impliqués dans l’inhibition de la différenciation en mésoderme et endoderme. Cette étude met également en lumière le rôle central joué par Klf4 et Klf5 dans l’équilibre autorenouvellement/différenciation des cellules ES de souris
LIF activates the transcription factor STAT3, resulting in the maintenance of mouse pluripotent ES cells in the undifferentiated state by inhibiting mesodermal and endodermal differentiation. To unravel the mechanisms of LIF/STAT3-dependant pluripotency, we identified target genes of this pathway and characterize their role in the inhibition of differentiation. We identified 58 targets of STAT3. Functional analysis showed that 22 of them showed an increase of differentiated colonies in a self-renewal assay, and an elevation of early differentiation markers upon knockdown. Pim1 and Pim3 were shown to protect ES cells from differentiation induced by LIF starvation when overexpressed, demonstrating their role in the maintenance of pluripotency. The 22 STAT3 target genes analysed fell into two categories, one suppressing mesoderm and the other endoderm differentiation, as evidenced by the differential expression of mesoderm and endoderm markers after knockdown. Two genes, Klf4 and Klf5 were examined in more details. We demonstrated that knockdown of Klf4 induced ectopic expression of endodermal regulators and resulted in an increase of cells differentiating into extraembryonic and definitive endoderm. Whereas Klf5 knockdown induced expression of the panmesodermal regulator Brachyury and an increase of cells differentiating into mesoderm. Our work shows that the LIF/STAT3 pathway maintains the undifferentiated state of ES cells by activating the expression of target genes involved in the suppression of mesoderm or endoderm differentiation. And it highlights the central role played by Klf4 and Klf5 in self-renewal and commitment of mouse ES cells into mesoderm and endoderm

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Piel, Matthieu. "Étude cinématique et fonctionnelle du centrosome des cellules de vertébré". Paris 6, 2001. https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00012067.

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As an organelle coupling nuclear and cytoplasmic divisions, the centrosome is essential to mitotic fidelity and its inheritance could be critical to understanding cell transformation. Investigating the behavior of the centrosome in living mitotic cells, we have documented a transient and remarkable post-anaphase repositioning of this organelle which apparently controls the release of central microtubules from the midbody and the completion of cell division. We further observed that the absence of the centrosome leads to cytokinesis defects. Like the yeast SPB, the mother-centriole could possess a specifically associated activity. That activity would trigger the narrowing of the bridge, for example by disrupting the matrix anchoring MTs in the midbody. A second event would trigger abscission when the mother-centriole moves away from the bridge. The main implication of our work is that disassembly of the central spindle and of the cleavage furrow, both necessary for abscission, are distinct events and would be, like the metaphase spindle disassembly, under checkpoint control. Together with recent results in yeasts, our data point to a conserved centrosome-dependent pathway integrating spatial controls into the decision of completing cell division, which would rely on the repositioning of the centrosome organelle.

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Le, Bourhis Xuefen. "Mécanisme d'action du facteur de croissance épithélial et de son interaction avec le système stéroidien dans des lignées épithéliales mammaires tumorales humaines". Aix-Marseille 2, 1991. http://www.theses.fr/1991AIX22056.

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L'effet de l'egf sur la proliferation cellulaire de differentes lignees epitheliales tumorales humaines, possedant des taux differents de recepteur de l'egf (egf-r), a ete etudiee. Les resultats suggerent qu'un nombre restreint de sites est implique dans la stimulation de la croissance cellulaire. Dans une etude visant a analyser la relation entre la presence de er et l'effet de l'antistrogene oh-tam sur le cycle cellulaire ainsi que le mecanisme d'interaction entre oh-tam et l'egf dans les cellules mcf-7, nous avons pu (1) confirmer que oh-tam bloque les cellules en phase g1 via son interaction avec er, (2) demontrer que l'egf inhibe l'effet des antistrogenes sur la proliferation cellulaire en diminuant l'accumulation des cellules en phase g1, (3) supposer que des variations dans l'expression de er et egf-r associee specifiquement a des phases du cycle cellulaire peuvent introduire des variabilites dans la sensibilite cellulaire aux hormones et aux facteurs de croissance. Enfin, le travail sur le mode d'action de l'egf au niveau du cycle cellulaire des cellules mcf-7 nous amene a suggerer que l'egf agit comme un facteur de progression en synergie avec des facteurs seriques /et/ ou des facteurs secretes par les cellules

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Malcles, Marie-Hélène. "Aspects de la régulation de la réplication des papillomavirus dans les cellules de mammifères". Montpellier 2, 2002. http://www.theses.fr/2002MON20075.

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El, yakoubi Warif Abdelhamid. "Rôle des répresseurs transcriptionnels Hes1/4 dans la maintenance des cellules souches rétiniennes chez Xenopus laevis". Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00743085.

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Contrairement aux mammifères, la rétine des amphibiens et des poissons croît tout au long de la vie de l'animal grâce à l'activité de cellules souches neurales présentes dans une région de neurogenèse continue appelée zone marginale ciliaire (ZMC). Leur caractérisation moléculaire et la compréhension des mécanismes qui sous-tendent leur activité et leur maintenance pourraient trouver des applications majeures dans le traitement par thérapie cellulaire des patients atteints de pathologies neurodégénératives de la rétine. Au cours de ma thèse, je me suis principalement penché sur deux problématiques majeures : quelle est l'origine ontologique de ces cellules souches adultes et comment se maintiennent-elles au cours de la rétinogenèse embryonnaire ? J'ai abordé ces deux questions via l'analyse descriptive et fonctionnelle de deux gènes, Hes1 et Hes4, identifiés dans mon laboratoire comme des marqueurs spécifiques des cellules souches rétiniennes. Ces gènes codent pour des répresseurs transcriptionnels de type bHLHO. L'étude de leur dynamique d'expression au cours du développement montre que ces gènes marquent un territoire restreint, situé initialement à la frontière entre l'épithélium pigmenté rétinien (EPR) présomptif et la rétine neurale, dont l'évolution au cours du temps suggère qu'il est à l'origine de la cohorte des cellules souches adultes. Ces résultats permettent pour la première fois de proposer que ces dernières seraient ségrégées très tôt au cours de l'embryogenèse rétinienne des cellules destinées à se différencier. Je me suis ensuite posé la question du rôle de Hes1/4 dans la maintenance de ces cellules souches présomptives. Mes expériences de gain de fonction suggèrent que ces gènes contribuent de façon autonome cellulaire (i) à les empêcher de se différencier vers un destin EPR ou neuronal, (ii) à les maintenir en prolifération et (iii) à ralentir leurs divisions. Enfin, j'ai également travaillé à positionner les gènes Hes1/4 dans le réseau de signalisation qui contrôle les cellules souches rétiniennes en étudiant leur régulation par les voies Wnt, Hedgehog et Notch. L'ensemble de mes données me permet de proposer un modèle selon lequel les facteurs Hes1/4, sous contrôle positif de la voie Wnt, permettent au cours du développement la maintenance à l'état indifférencié et en prolifération lente d'une population cellulaire destinée à former la cohorte des cellules souches adultes de la ZMC.

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Barakat, AbdelHamid. "Régulation de MPF au cours du premier cycle méiotique de l'ovocyte d'étoile de mer". Montpellier 2, 1994. http://www.theses.fr/1994MON20204.

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Resumen

Avant d'etre en mesure de se diviser, chaque cellule eucaryote passe par un certain nombre de phases dont la succession constitue le cycle cellulaire. La progression coordonnee de ces phases est gouvernee par la formation et l'activation de complexes constitues d'une sous-unite regulatrice, une cycline (a, b, c, d, e, h), et d'une sous-unite catalytique, cdk (pour cyclin dependent kinase), possedant une activite kinase (cdk1-7). Nous nous sommes plus particulierement interesses a la regulation du complexe cycline b/cdc2 au cours de la meiose i de l'ovocyte d'etoile de mer. L'activite kinase du complexe cycline b/cdc2 est regulee grace au controle de deux parametres: la regulation des modifications post-traductionnelles et la regulation de la synthese et de la degradation des cyclines. L'etude de cette derniere nous a permis de montrer que la kinase cycline b/cdc2 doit etre active pendant la prometaphase et la metaphase: la cellule fait en sorte de maintenir un niveau d'activite suffisant pour assurer une metaphase normale, en particulier par la synthese de cycline. Par le jeu de la synthese et de la degradation de la cycline, egalement des eventuelles modifications post-traductionnelles des deux constituants de mpf, la cellule adapte l'activite kinase aux exigences de chaque etape du cycle cellulaire. D'autre part, pour etre efficace la kinase mitotique doit etre non seulement active mais aussi correctement localisee. D'autre part, nous avons etudie le mecanisme d'amplification de mpf. En effet, la phase d'initiation de mpf correspond a un changement du statut du cytoplasme qui devient apte a amplifier le mpf, et ce changement n'est pas l'apparition d'une petite quantite de mpf. Il est provoque par le transfert de cytoplasme actif, grace en particulier a un facteur nucleaire en absence duquel la kinase injectee est aussitot inhibee

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Van, Grunsven Leonardus Adrianus. "Régulation du cycle cellulaire dans les cellules PC12 : effet du NGF ou «Nerve Growth Factor»". Lyon, École normale supérieure (sciences), 1996. http://www.theses.fr/1996ENSL0025.

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Resumen

La lignée cellulaire PC12, provenant d'un phéochromocytome de rat, est largement utilisée comme modèle pour l'étude de la régulation de la différenciation neuronale par rapport à la prolifération. Cultivées en présence du facteur neurotrophique «Nerve Growth Factor» (NGF), ces cellules cessent de se diviser, forment des neurites et deviennent stimulables par voie électrique. Dans un premier temps, nous avons montré qu'une culture de cellules PC12 en phase exponentielle de croissance était composée de cellules au contenu en ADN 2c, 4c, et 8c. Lors du traitement au NGF, une augmentation de cellules au contenu en ADN 2c et 4c est observée, mais celles-ci expriment la cycline D1 et correspondent donc à des cellules en phase G1 du cycle cellulaire (van Grunsven et coll. 1996 a). L'arrêt en phase G1 après 3 à 5 jours de traitement au NGF est corrélé à une diminution de l'expression des cyclines A et B, des «Cyclin dependent kinases» Cdc2, Cdk2 et Cdk4 ainsi que de PCNA. De plus, une diminution de la phosphorylation de Rb, ainsi que de la quantité totale de protéine Rb, sont aussi observées. Par contre, une hausse du niveau d'expression de la protéine cycline D1 est mis en évidence, reflétant l'augmentation du pourcentage de cellules en G1. Une accumulation de l'inhibiteur p21Cipl est observée dans les complexes cycline D1/Cdk4 au cours du traitement des cellules PC12 au NGF. Ce phénomène est corrélé à une inhibition de l'activité kinase associée à ces complexes, et à un arrêt de prolifération des cellules (van Grunsven et col. , 1996b). L'augmentation de p21 est probablement due à un effet du NGF sur le promoteur de p21 et pourrait impliquer le facteur p300. L'ensemble de ces études devraient contribuer à notre compréhension des mécanismes d'arrêt du cycle cellulaire lors de l'initiation de la différenciation neuronale.

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Ha, Thi Binh Minh. "Contributions à l'étude des méthodes de production de masse des cellules endothéliales cornéennes humaines". Thesis, Saint-Etienne, 2014. http://www.theses.fr/2014STET001T/document.

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Resumen

La bioingénierie de greffons endothéliaux cornéens est une des solutions réalistes en cours de développement dans quelques laboratoires pour palier au grand déséquilibre entre pénurie mondiale de dons de cornée et besoins immenses et croissant des populations. Cette véritable médecine régénérative consistera à injecter des cellules endothéliales (CEs) dans la chambre antérieure aux stades précoces des dystrophies endothéliales et, pour les stades avancées des pathologies endothéliales, à reconstruire in vitro des greffons endothéliaux composés d'un support transparent et biocompatible colonisé par une monocouche des CEs. Dans les 2 cas, la première étape obligatoire est la production de masse de CEs ou de "CE-like". Dans ce travail, nous avons exploré les différentes possibilités pour obtenir suffisamment de CEs fonctionnelles pour envisager des applications cliniques : 1- L'expansion de CEs natives prélevées sur des cornées de donneurs, ou culture primaire, se heurtent aux capacités prolifératives limitées des CEs in vitro. Un des prérequis étant la compréhension des mécanismes d'arrêt de la prolifération des CEs humaines, nous avons fait la synthèse bibliographique des connaissances sur leur cycle cellulaire et leur sénescence, et présentons 2 articles originaux: le premier utilise un microarray spécifique de 112 gènes de contrôle du cycle cellulaire pour comparer les profils transcriptionnels des CEs de 6 modèles biologiques comportant théoriquement un stimulus prolifératif croissant: in vivo, post mortem, organoculture, culture primaire confluente, culture primaire non confluente et lignée immortalisée. Nous identifions de nombreux acteurs impliqués dans l'arrêt du cycle, en particulier ceux impliquant une réponse à des dommages oxydatifs de l'ADN. Le second article explore les capacités prolifératives résiduelles des CEs de donneurs âgés de plus de 50 ans, sont les plus nombreux en Europe et donc les pourvoyeurs habituels de CEs pour la bioingénierie. Nous montrons qu'une optimisation des techniques de culture permet d'obtenir in vitro une mosaïque endothéliale de 2000 cellules/mm2. Enfin, un troisième article montre qu'un stimulus physique inattendu constitué d'un train d'impulsion électrique permet d'obtenir un très grand nombre de figures mitotiques mais uniquement dans des zones de faible DCE, démontrant encore une fois l'importance majeur de l'inhibition de contact dans l'arrêt prolifératif. 2- La sélection et l'expansion, par culture en sphère, des progéniteurs endothéliaux de la périphérie endothéliale pourrait être un moyen de contourner la sénescence de la majorité des CEs. La synthèse bibliographique montre que la plupart des travaux publiés émanent d'une seule équipe japonaise. Dans notre second article, nous avons montré l'existence de rares "label-retaining cells" dans les cornées de donneurs âgés, qui pourraient correspondre à ces progénieteurs. Nous avons aussi montré qu'il était possible d'obtenir des sphères avec ces donneurs. 3- La différenciation de cellules souches embryonnaires, mésenchymateuses ou des cellules pluripotentes induites est enfin la troisième voie qui pourrait permettre de produire des CEs en grand nombre. La méthode d'induction de la différenciation pourrait reproduire le schéma physiologique et désormais bien caractérisé de formation de l'endothélium à partir du mésenchyme périoculaire dérivé de la crête neurale et que nous rappelons au début de notre mémoire bibliographique. Nous rappelons également les méthodes utilisables pour caractériser les cellules obtenues: vérification de leur identité par immunomarquage d'un panel de protéines caractéristique (en absence de marqueur unique spécifique) et vérification de leur fonctionnalité par mesures de leurs capacités de pompage ionique, au minimum de façon indirecte sur chambre d'électrophysiologie de type Ussing, au mieux de façon directe en quantifiant la déturgescence d'une cornée humaine conservée dans le bioréacteur breveté du BiiGC
Corneal endothelial engineering is becoming a more and more realistic solution to restore vision from corneal edema. This method focus to regenerate corneal endothelium by direct injection of corneal endothelial cells (ECs) into patient anterior chamber at the early stage of endothelial dystrophies, or by grafting a transparent biocompatible material covered by a monolayer of ECs. These two techniques require both in vitro isolation and amplification of ECs or endothelial-like cells. In this thesis, different strategies to obtain a high quantity of functional ECs for clinical application are explored: 1- Due to the limit proliferative capacity of EC, the first strategy consists to analyze mechanisms implicated EC cell cycle arrest and then to optimize protocol for native EC isolation or for cell proliferation activation ex vivo. This is summarized in three publications. The first publication describes the cell cycle regulation by comparing transcriptional expression of 112 genes in 6 biological models of EC with different proliferative profile: in vivo, postmortem, organ-culture, confluent primary culture, non confluent primary culture and immortalized cell line. , The key molecular actors identified using the combining microarray analysis and gene ontology methods are consistent with previous findings about oxidative DNA damage mechanism. The second publication characterizes EC differentiation process and its impact on EC proliferative capacity in old donor corneas. Analyses of differentiation/progenitor markers and of proliferative capacity underline the differentiation process of EC from the centre to the peripheral corneal endothelium. Thereby, an optimized culture protocol was developed, allowing the formation of high-density monolayer (> 2000 cells/mm2) with stable endothelial morphology. We proved the possibility to make profit from a majority of old-donor cornea grafts invalidated for penetrating graft In the third publication, the activation of endothelial cell cycle by electric pulses directly in corneal graft was characterized. We confirm the activation of endothelial cell cycle at different phases but also the damage of tissue during electroporation. 2- Second strategy consists of the amplification of ECs from potential EC progenitors. Using sphere forming culture and a new method to detect slow-cycling cells, we demonstrate the existence of "young" ECs population with higher proliferative capacity in corneal periphery. The isolation of ECs by sphere formation is one possible step for ECs selection in vitro. 3- The differentiation of embryonic stem cells, mesenchymal stem cells or induced pluripotent stem cells into corneal endothelial cells is the third approach considered by our laboratory. The manipulation of stem cells differentiation would be based on the molecular mechanisms implicated in the formation of corneal endothelium from periocular mesenchymal cells described in the first part of the bibliography. Finally, in order to validate the quality of endothelial cell mass obtained, we revisited recent methods for the evaluation of corneal endothelial identity (immunolocalisation of specific markers), for the measurement of pump activity of cell monolayer (Ussing chamber, perfusion chamber) or directly in deswelled cornea using the bioreactor patented by the BiiGC laboratory

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Turcotte, Vanessa. "Synthèse, bioisostérisme et évaluation biologique de nouveaux dérivés N-Phényluréidobenzène sulfonates et N-Phényluréidobenzène sulfonamides anticancéreux bloquant le cycle cellulaire en phase S". Thesis, Université Laval, 2012. http://www.theses.ulaval.ca/2012/28991/28991.pdf.

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Gallay, Nathalie. "Etude du rôle du microenvironnement médullaire sur la prolifération, le cycle cellulaire, l'apoptose et la migration des cellules de leucémies aiguës myéloïdes". Tours, 2007. http://www.theses.fr/2007TOUR3302.

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Resumen

Les leucémies aiguës myéloïdes sont caractérisées par la prolifération de cellules bloquées dans leur différenciation. Le microenvironnement médullaire, qui comprend des cellules stromales, des cellules endothéliales et une matrice extracellulaire, pourrait jouer un rôle dans ces pathologies. Nous avons étudié 3 niveaux d'interaction entre les cellules leucémiques et le microenvironnement : avec les cellules souches mésenchymateuses (CSM), avec les protéines de la matrice et avec les cellules endothéliales médullaires. Nous avons montré que le contact avec les CSM influence le quiescence et la résistance des cellules leucémiques aux chimiothérapies, et mis en évidence le rôle de CD31 et CD38 dans le contrôle de la dissémination des blastes. Les résultats de cette thèse permettent de mieux connaître le rôle des cellules stromales et des protéines matricielles et d'envisager de nouvelles approches thérapeutiques visant à moduler les interactions microenvironnement / cellules leucémiques
Acute myeloblastic leukemia is characterized by uncontrolled proliferation within the bone marrow (BM) of malignant myeloid progenitors arrested in their maturation process. BM microenvironment is composed of stromal cells, endothelial cells and extracellular matrix (ECM) and is attended to play a role in leukemia cell survival and drug resistance. We studied interactions of leukemic cells with mesenchymal stem cells (MSC), BM endothelial cells and ECM proteins (fibronectin). We showed that close contact with MSC protects leukemic cells from drug-induced apoptosis by promoting quiescence, with a role of α4 integrin in this process. We demonstrated that CD31 and CD38 are involved in the control of the retention or dissemination of leukemic cells. These results give new insights about the mechanisms of drug resistance induced by marrow microenvironment, and provide new therapeutic strategies consisting in disturbing interactions of leukemic cells with their supportive microenvironment

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Sakr, Samer. "Régulation de la différenciation par le cycle cellulaire chez la cyanobactérie Anabaena PCC 7120". Aix-Marseille 2, 2006. http://www.theses.fr/2006AIX22024.

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Resumen

La cyanobactérie Anabaena PCC 7120 est utilisée comme organisme modèle pour l'étude des processus de différenciation cellulaire chez les procaryotes. En réponse à une carence en azote combiné dans le milieu, cette cyanobactérie filamenteuse différencie en 24 heures des cellules spécialisées dans la fixation de l'azote atmosphérique, les hétérocystes. Un échange de métabolites entres les cellules végétatives et les hétérocystes assurent la croissance des filaments dans des conditions de carence en azote combiné. Les cellules végétatives qui réalisent la photosynthèse approvisionnent les hétérocystes en composés carbonés et les hétérocystes, assimilant l'azote moléculaire, fournissent aux cellules végétatives des composés azotés. Les hétérocystes représentent environ 10% des cellules sur chaque filament et se répartissent selon un profil semi-régulier. L'objectif de la thèse est de comprendre le choix des cellules à se différencier en hétérocystes au moment de l'induction. Nous postulons que le cycle cellulaire constitue un signal pour permettre à une cellule à se différencier. Au cours de mon travail de thèse, utilisant des approches de biologie cellulaire et de biologie moléculaire, j'ai analysé divers paramètres du cycle cellulaire, étudiant la synthèse de l'ADN, et la division cellulaire, des étapes clefs du cycle cellulaire. J'ai également mis en évidence un lien étroit entre le cycle cellulaire et la différenciation chez cet organisme. L'inhibition de la progression du cycle cellulaire supprime la différenciation. Le cycle cellulaire constituerait une nouvelle voie de signalisation indépendante du 2-oxoglutarate qui a été montré comme signal initiateur de la différenciation des hétérocystes. L'interaction entre FtsZ, une protéine de la division cellulaire, et HetN, une protéine nécessaire pour le maintien du profil des hétérocystes, pourrait représenter la connexion entre ces deux processus physiologiques. FtsZ, modérément surexprimée serait favorable pour la différenciation et HetN inhiberait la différenciation en perturbant la division cellulaire. Nous proposons que les cellules appartenant à une phase particulière du cycle cellulaire seront compétentes pour percevoir la carence en azote combiné et initier la différenciation
The filamentous cyanobacterium Anabaena PCC 7120 is a model organism for studies on cell differentiation. This strain, under combined nitrogen starvation, can differentiate heterocysts, cells specialized in nitrogen fixation. Heterocysts are distributed according to a semi-regular pattern along each filament, representing 10% of all cells. Heterocysts provide fixed nitrogen to vegetative cells and receive from the latter carbohydrates. In this study, we investigated if the initiation of heterocyst differentiation may be coupled to a favourable position in cell cycle. Using multi-disciplinary approaches, we analysed key steps of the bacterial cell cycle such as DNA synthesis and cell division. Inhibition of cell division arrests the progression of cell cycle and suppresses heterocyst differentiation. Cell cycle could regulate the early steps of heterocyst differentiation independent of the 2-oxoglutarate signal, a trigger of heterocyst formation. The interaction between FtsZ, a protein known to initiate cell division, and HetN that plays an important role in the maintenance of the heterocyst pattern, may represent the molecular connection between cell cycle and heterocyst differentiation. A moderate overexpression of FtsZ favours heterocyst differentiation. Overexpression of HetN inhibits heterocyst differentiation probably by preventing FtsZ polymerisation. We propose that cells in a critical stage of the cell cycle are competent to initiate differentiation

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Petitprez, Amélie. "Influence de l'exposition prolongée à l‘Irinotecan sur la biologie des cellules cancéreuses colorectales : implications thérapeutiques". Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05P607.

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Resumen

L’irinotecan est un agent anticancéreux majeur utilisé dans le traitement du cancer du côlon où il agit à la fois comme un agent causant des dommages à l’ADN et un inhibiteur de l’angiogenèse. L’activité de l’irinotécan dans les cancers colorectaux est limitée par le développement d’une résistance acquise au médicament. Le but de ce travail est de caractériser l’influence d’une exposition prolongée à l’irinotécan sur la biologie des cellules cancéreuses colorectales in vivo et in vitro. Résultats majeurs : Nous avons exposé les cellules de cancer colorectal, HT-29 (LOH) et HCT-116 (MSI), au SN-38 (le métabolite actif de l'irinotécan) pendant un an. Ceci a permis de sélectionner des cellules résistances à l’irinotécan et ceci de manière stable. Une caractérisation plus approfondie a révélé que la résistance acquise à l’irinotécan était accompagnée d’altérations multiples, y compris la diminution de la formation de complexes clivables et de cassures double brins. Nos études ont montré des changements inattendus dans la distribution du cycle cellulaire et la vitesse de croissance des deux lignées résistantes. La pertinence in vivo de nos modèles cellulaires a ensuite été confirmée dans des modèles de xénogreffe.D’autres résultats basé sur l’inhibition de l’angiogenèse montrent que l'exposition prolongée à l’irinotécan est accompagnée d’une modification majeure de la voie HIF, VEGF / VEGFR dans les cellules tumorales. Ces travaux ont permis d’identifier des modifications biologiques dans les cellules résistantes susceptibles de les rendre plus résistantes ou sensibles à d’autres classes d’agents anticancéreux afin de proposer de nouvelles combinaisons thérapeutiques.Ce travail est financé par l’Institut National du Cancer
Colorectal cancer (CRC) is one of the most common tumors and a leading cause of cancer death worldwide. Until recently, fluorouracil in combination with leucovorin was the only effective systemic treatment for CRC. During the last few years, four new treatments have been approved for advanced CRC including the topoisomerase I (topo I) inhibitor irinotecan, the epidermal growth factor receptor (EGFR)-directed monoclonal antibody cetuximab and the vascular endothelial growth factor (VEGF)-directed monoclonal antibody bevacizumab. Unfortunetly their clinical activity is often limited by the development of resistance. Several lines of experimental evidence suggest a functional interaction between topo I and EGFR. Furthermore, topo I can regulate hypoxia-inducible factor 1 alpha (HIF-1alpha), a key regulator of cellular response to hypoxia, leading to VEGF production.We propose to study the EGFR-signaling pathway on the cellular response to cytotoxic agents with the topo I inhibitor irinotecan/SN-38 as model.Resistant cells were obtained by culturing HT-29 and HCT-116 cells in increasing concentrations of irinotecan. After obtaining, their drug resistance was 5 to 25 times increased compared to the parental cells. We first showed that the proliferation of the two resistant cell lines was slower than the sensitive ones. We were able to confirm it with different in vitro and in vivo experiment. It is interesting to notice that topo I expression was unchanged in our resistant cell lines. We then demonstrated that the resistant cells are less affected by the formation of DNA strand breaks (led by SN38) than the sensitive ones. Moreover, the EGFR expression is increased in the resistant cell lines. We also shown by western blot and ELISA that resistance development comes along with an increase of VEGF.Our data should provide important clues on the irinotecan acquired resistant cells and should help to set up new combinations for colorecal cancer treatment

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Faradji, Floria. "Rôle de cycline G de Drosophila melanogaster dans la régulation de la croissance et du cycle cellulaires". Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066416.

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Resumen

Les cyclines G sont des cyclines atypiques dont le rôle est complexe. Chez les mammifères, Cycline G1 est un régulateur négatif du cycle cellulaire qui induit un arrêt à la transition G2/M ainsi que de l’apoptose en réponse à des dommages de l’ADN. Dans certains contextes cellulaires, elle joue cependant un rôle positif dans la prolifération cellulaire. CyclineG2 est un régulateur négatif du cycle cellulaire, impliquée dans l’arrêt du cycle en G1/S. Chez la drosophile, CycG est le seul gène codant pour la Cycline G. Les dérégulations de CycG induisent une forte létalité et une instabilité du développement. Au cours de ma thèse, j’ai cherché à mieux comprendre le rôle de CyclineG de D. Melanogaster dans la prolifération et le cycle cellulaires. Ainsi, j’ai montré que la surexpression ubiquitaire de CycG produit des individus de petite taille. La surexpression de CycG inhibe la croissance cellulaire alors que son inactivation par ARN interférence tend à promouvoir la croissance. De plus, la surexpression de CycG induit un allongement du cycle cellulaire et une diminution du nombre de cellules. L’étude du cycle cellulaire après incorporation d'EdU m'a permis de montrer que Cycline G est impliquée dans la transition G1/S et dans la progression de la phase S. Par ailleurs, l'analyse du nombre de cellules des ailes où CycG est dérégulé montre que l'instabilité du développement observée est principalement due à une perte de la compensation entre croissance cellulaire et prolifération cellulaire. Ainsi, CyclineG est impliquée dans le contrôle négatif de la croissance et du cycle cellulaire. Ces deux fonctions semblent en faire un acteur important pour la stabilité du développement.

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Ait, Ghezala Hayet. "La terminaison de la traduction et la régulation traductionnelle de l'activateur de la transcription ATF4 chez les mammifères". Paris 6, 2012. http://www.theses.fr/2012PA066315.

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Resumen

Le taux de synthèse protéique est un des déterminants majeurs de la croissance des cellules, de leur progression à travers le cycle cellulaire et de leur prolifération. Il est contrôlé par plusieurs voies de signalisation qui mettent en jeu des protéines kinases et des cascades de phosphorylation qui ont pour cibles des facteurs agissant principalement dans les étapes d'initiation et d'élongation du processus de traduction de l'ARN messager en protéine. Ces voies de signalisation, et en particulier la voie de la protéine kinase mTOR (mammalian Target of Rapamycin), permettent d'adapter le taux de synthèse protéique à la disponibilité en nutriments et en énergie et à diverses stimulations extracellulaires provoquées par des hormones, des facteurs de croissance ou des stress. Notre équipe a montré qu'une déplétion du facteur de terminaison de la traduction eRF3a dans des cellules humaines en culture entraînait un arrêt du cycle cellulaire par inhibition de la voie mTOR chez les eucaryotes. Cette déplétion induit parallèlement une augmentation de l’expression d’un certains nombre de gènes, en particulier des gènes impliqués dans la biosynthèse des acides aminés et des gènes sous le contrôle de ATF4 comme les gènes REDD1 ou TRIB3 qui sont connus pour être des inhibiteurs de la voie mTOR. Ces gènes sont habituellement exprimés en condition de stress à travers la voie eIF2α. Nous avons montré que la déplétion du facteur eRF3a agit sur la voie mTOR par l’intermédiaire du gène REDD1, et ceci indépendamment de la voie eIF2α. Nous avons ainsi identifié un nouveau mécanisme de régulation de la voie mTOR qui passe par l’induction de l’expression d’ATF4
The rate of protein synthesis is a major determinant of cell growth, proliferation through the cell cycle and cell proliferation. It is controlled by several signaling pathways involving protein kinases and phosphorylation cascades that target factors acting mainly in the initiation and elongation steps of the mRNA translation process. These signaling pathways, and in particular the protein kinase mTOR (mammalian Target of Rapamycin), adjust the rate of protein synthesis to nutrient and energy availability and to various extracellular stimuli caused by hormones, growth factors or stress. We have shown that the depletion of the translation termination factor eRF3a in human cells induces a cell cycle arrest by inhibiting the mTOR pathway in eukaryotes. This depletion induces in parallel an increase in the expression of numerous genes, especially genes involved in the biosynthesis of amino acids and genes under the control of ATF4, as REDD1 or TRIB3, known to be inhibitors of the mTOR pathway. These genes are usually expressed under stress conditions through the eIF2α pathway. We have shown that eRF3 depletion acts on the mTOR pathway through the REDD1 gene, independently of the eIF2α pathway. We have characterized a new mTOR regulation mechanism, which involves ATF4 induction

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Voisset, Edwige. "Etude de l'implication des protéines fes et fer dans la signalisation des recepteurs à activité tyrosine kinase kit et FLT3". Aix-Marseille 2, 2008. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2008AIX22027.pdf.

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La recherche de nouveaux acteurs de la signalisation du récepteur tyrosine kinase KIT, nous a conduit à étudier les protéines tyrosine kinase cytoplasmiques FES et FER. Trois projets ont émané de cette identification. Une première étude a porté sur le récepteur oncogénique KITD816V (mutant retrouvé chez la majorité des patients atteints de mastocytose). Dans ce contexte, FES est phosphorylée sur tyrosines, reflétant son activation constitutive. De plus, en aval de ce récepteur, FES est un régulateur positif de la prolifération cellulaire et plus précisément, cette kinase est impliquée dans la transition des phases G1/S du cycle cellulaire. Au plan moléculaire, FES n’est pas nécessaire à l’activation de la MAP Kinase p38, mais pour celles des protéines STAT et p70S6K. Alors que l’action de FES sur la phosphorylation des STAT semble dépendante du modèle d’étude, son action sur la p70S6K s’avère toujours être une régulation positive. De plus, en aval de KITD816V, FER n’est pas impliquée dans la prolifération cellulaire. Un deuxième sujet tente de déterminer la ou les fonction(s) de FES dans le contexte du récepteur KITWT. Ainsi, nous avons déjà pu montrer que FES interagissait avec KIT stimulé par son ligand et que selon la même cinétique, FES était activée. Ces deux événements sont d’une part, relativement tardifs et d’autre part, transitoires. D’un point de vue fonctionnel, FES et FER interviennent dans le chimiotactisme en réponse au SCF mais pas dans la prolifération cellulaire. Un troisième travail a été mené sur les rôles des protéines FES et FER en aval du récepteur oncogénique FLT3ITD (mutation majoritaire chez les patients atteints de LAM). Pour ces deux kinases, leurs activations sont dépendantes du contexte oncogénique induit par FLT3ITD. L’absence de FES ou de FER dans le système FLT3ITD provoque une diminution de la prolifération cellulaire. Dans le cas de FER, cet effet est consécutif à des défauts de transition entre les phases G1/S et G2/M du cycle cellulaire. Dans le cas de FES, sa présence semble nécessaire à la survie cellulaire. Au niveau moléculaire, ces deux protéines sont des régulateurs positifs de l’activation de STAT5 et des protéines en aval de la PI3Kinase. Ces études ont donc conduit à révéler les protéines FES et FER comme des effecteurs indispensables en aval des récepteurs KIT et FLT3.

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Chassot, Anne-Amandine. "Régulation de la prolifération cellulaire au cours de la cicatrisation cutanée : rôle de p27KIP1, un inhibiteur des Kinases Dépendantes des Cyclines". Nice, 2005. http://www.theses.fr/2005NICE4076.

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La cicatrisation cutanée consiste en un programme dynamique et coordonné d'événements, dont les signaux initiateurs conduisent des cellules quiescentes, situées aux berges de la blessure, à migrer, proliférer et déposer une nouvelle matrice dans le lit de la blessure, de manière à restaurer à la peau son intégrité physique et fonctionnelle. La prolifération, en particulier celle des fibroblastes dermiques, est une étape essentielle de ce processus. Des pathologies cicatricielles comme les chéloïdes, les cicatrices hypertrophiques et les ulcères sont des exemples de désordres fibroprolifératifs et il est actuellement admis que la chronicité du processus de cicatrisation contribue à l'apparition de certains carcinomes spinocellulaires. Si la cicatrisation est bien étudiée d'un point de vue descriptif, il n'existe en revanche aucun système biologique performant permettant une étude moléculaire. Pour contourner cette difficulté, nous avons développé un système original et reproductible qui mime in vitro les différentes étapes du processus et permet la détection et la quantification des événements moléculaires associés. Mon travail de thèse a eu pour but de comprendre les mécanismes moléculaires à l'origine 1) de l'entrée des fibroblastes dermiques dans le cycle cellulaire en réponse à une blessure, et 2) de leur arrêt de prolifération une fois la blessure refermée. Nous décrivons pour la première fois que la blessure mécanique d'un tapis confluent de fibroblastes provoque une entrée synchrone des cellules dans le cycle cellulaire. Cette entrée en cycle s'accompagne d'une diminution de l'ARN messager de p27, un inhibiteur de l'activité des cyclines-dépendantes kinases qui joue un rôle clef dans le contrôle de la prolifération cellulaire, et de la stimulation de l'expression d'Id3, un gène de réponse précoce codant un inhibiteur de l'activité transcriptionnelle des facteurs de type bHLH. Grâce à une approche siRNA, nous démontrons qu'Id3 contrôle la diminution de p27, permettant l'entrée en cycle et la division cellulaire. Lorsque la lésion est comblée, la prolifération cellulaire s'arrête et les cellules entrent dans une nouvelle phase de quiescence. Nous avons démontré que cette sortie de cycle est précédée i) d'une stabilisation pré-mitotique de l'inhibiteur p27, ii) de son association avec les complexes cycline A-Cdk1/2 et cycline D1-Cdk4/6, iii) d'une diminution de la phosphorylation des " pocket " protéines pRb et p130. En revanche, p27 ne s'associe pas avec les complexes cycline B1-Cdk1 et n'inhibe pas leur activité enzymatique. Les fibroblastes dermiques entrent donc en mitose puis sortent du cycle de manière réversible dans la phase G1 suivante. La réduction du niveau d'expression de p27 par une approche siRNA réverse partiellement ce phénotype. En conclusion, notre travail démontre pour la première fois dans le contexte physiologique de la cicatrisation cutanée, que p27 est l'élément clef qui contrôle à la fois l'entrée des cellules en cycle et leur sortie en fin de cicatrisation, et qu'il est un médiateur de signaux antiprolifératifs agissant après le point de restriction et avant la mitose
Skin wound healing is a complex phenomenon that involves multiple cellular processes (migration, proliferation, differenciation. . . ) and cell types allowing the reconstruction of skin lesions. Many genetic or acquired defects can perturb the normal wound healing process, leading to skin pathologies like hypertrophic scars, keloïds or ulcers, in which fibroblasts are characterised by an abnormal proliferation. However, the molecular abnormalities at the origin of these pathologies are still unknown notably because the classical experimental systems do not allow a molecular approach of the process. To circumvent this hurdle, we have developed an original device that performs calibrated injuries and enables the detection of a wide range of molecular events activated during wound healing. Using this experimental system, we show that mechanical lesions performed within confluent human dermal fibroblasts provoke a synchronous cell cycle entry followed by a cell cycle exit after mitosis. We demonstrate that the mRNA of p27Kip1, a cyclin-dependent kinase (Cdk) inhibitor which plays a key role in negative control of cell proliferation, is transiently downregulated after injury. We identify Id3, a bHLH transcriptional repressor, as a candidate for p27 down regulation. Id3-siRNA reversed the injury–mediated p27 down-regulation and blocks the cell cycle progression, demonstrating that Id3 is involved in the transcriptional repression of p27 and that this early regulation is required for cell proliferation. When cells reach confluence, the cell cycle exit is preceded by pre-mitotic stabilization of p27 and association with cyclin A-Cdk1/2 and cyclin D1-Cdk4/6 (but not cyclin B1-Cdk1) complexes, and decreased pocket protein phosphorylation. Reduction of p27 by siRNA partially reverses this phenotype, supporting a role for p27 as a mediator of anti-proliferative cues occurring after the restriction point

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Chauffert, Bruno. "Résistance multidrogue (MDR) et résistance dépendant de la confluence (CDR) dans les cellules cancéreuses coliques". Dijon, 1995. http://www.theses.fr/1995DIJOMU02.

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Les cancers coliques humains sont intrinsèquement résistants à la plupart des médicaments anticancéreux actuellement disponibles. Les mécanismes de la résistance de cellules cancéreuses coliques de rats ou humaines aux anthracyclines ont été étudiés in vitro. Cette famille de médicaments, dont le chef de file est la doxorubicine, a été choisie en raison de leur activité majeure dans d’autres tumeurs que les cancers digestifs. De plus, ces molécules dont facilement localisables dans les cellules vivantes par microscopie de fluorescence. Deux mécanismes principaux ont été mis en évidence : La résistance multidrogues (MDR) : ce phénotype de résistance est dû à un processus d’efflux actif qui expulse certains médicaments (anthracyclines, alcaloïdes de la pervenche, mitoxandrone, taxanes) des cellules cancéreuses. Nous avons montré que les cellules cancéreuses coliques de rat DHD/K12 possèdent naturellement la MDR sans exposition préalable aux anthracycline. Les cellules chassent la doxorubicine de leur noyau dans l’heure qui suit le retrait du médicament du milieu d’incubation. L’efflux est bloqué en présence d’azide de sodium, un inhibiteur de la synthèse d’ATP, ou de vérapamil, l’inhibiteur de MDR de préférence. Nous avons montré que l’amiodarone était un inhibiteur plus puissant que le vérapamil in vitro mais que son activité était faible in vivo en raison de sa forte liaison aux protéines plasmatiques. La quinine paraît être un meilleur inhibiteur de MDR que le vérapamil ou l’amiodarone pour l’usage clinique en raison de sa faible toxicité et de sa liaison moindre aux protéines plasmatiques. Nous avons montré que le sérum de patients traités par la quinine (concentration optimale 8-10 µg/ml) faisait augmenter l’incorporation de doxorubicine dans les cellules MDR. L’évaluation clinique de l’association quinine-anthracycline est en cours dans les hémopathies. La résistance dépendant de la confluence (CDR). Les cancers coliques sont des tumeurs solides où les cellules sont étroitement liées entre elles. Nous avons montré que le degré de résistance des cellules s’accroissait in vitro quand la densité de la culture augmentait. Ce phénomène est observé pour des médicaments cytotoxiques de classes différentes (doxorubicine, vincristine, fluorouracile, melphalan, cisplatine, étoposide). La CDR est en fait un mécanisme complexe qui associe une diminution de la perméabilité des cellules confluentes aux médicaments et des modifications de la sensibilité de l’ADN aux agents cytotoxiques dues à l’accumulation des cellules dans la phase quiescente du cycle cellulaire. Les cellules confluentes expriment moins la topoisomérase II (cible des anthracyclines) que les mêmes cellules non confluentes en prolifération rapide. Il est possible de lutter contre la CDR en modifiant la distribution des cellules confluentes dans le cycle : un prétraitement des cellules confluentes par des concentrations peu toxiques d’agents alkylants ou de cisplatine fait augmenter le pourcentage de cellules en S ou G2/M et accroît l’expression de la topoisomérase II. Ce prétraitement sensibilise les cellules cancéreuses confluentes aux anthracyclines, dans des lignées de cellules cancéreuses coliques humaines qui exprime (Caco2) ou qui n’exprime pas (HT29) la MDR. Ces travaux expérimentaux ouvrent la voie à une amélioration des protocoles de chimiothérapie des tumeurs digestives.

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Dubrez-Daloz, Laurence. "Le rôle de l'apoptose dans la sensibilité de cellules leucémiques humaines aux inhibiteurs des topoisomérases". Dijon, 1996. http://www.theses.fr/1996DIJOMU06.

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Baptist, Mireille. "Nouveaux aspects de la régulation du cycle de division des cellules épithéliales thyroïdiennes par l'AMP cyclique". Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1995. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/212574.

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Mazars, Philippe. "Contrôle de la prolifération des cellules épithéliales par le Transforming Growth Factor-bêta (TGF-bêta) : mécanismes moléculaires". Toulouse 3, 1995. http://www.theses.fr/1995TOU30105.

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Resumen

Le tgf-b est un facteur de croissance polypeptidique multifonctionnel. Dans les cellules epitheliales, il regule negativement la proliferation et peut, dans certains modeles, induire la differenciation et la mort cellulaire par apoptose. Nous avons, a travers l'etude de differents modeles de cellules d'adenocarcinome en culture, caracterise et etudie les effets antiproliferatif et inducteur d'apoptose du tgf-b1, ainsi que les liens pouvant exister entre ces deux effets. Nous avons pu montrer que l'inhibition de proliferation induite par le tgf-b1 conduit a un arret du cycle cellulaire a la transition g1/s et necessite la presence du recepteur au tgf-b de type ii. De plus, cet arret de proliferation s'accompagne d'une regulation negative de l'activite de la proteine kinase cdk2, requise pour le franchissement de la transition g1/s du cycle cellulaire. Cependant, selon le modele cellulaire considere, les mecanismes moleculaires conduisant a une diminution de l'activite cdk2 peuvent resulter de la regulation de l'expression de cibles differentes. Nous avons aussi montre que dans certains modeles, en plus de l'effet inhibiteur de proliferation en phase g1 du cycle cellulaire, le tgf-b1 est capable d'induire la mort cellulaire par apoptose. Apres avoir caracterise ce phenomene d'apoptose par differentes approches, nous avons etudie les relations entre ces deux effets du tgf-b1 et avons pu montrer leur dissociation. En effet, l'induction d'apoptose ne necessite pas l'arret prealable des cellules a la transition g1/s. Enfin, nous avons etudie dans un modele de cellules d'adenocarcinome ovarien, au cours de l'induction d'apoptose par le tgf-b1, la regulation de l'expression et de l'activite des complexes cycline/cdc2, impliques dans la regulation de la transition g2/m du cycle cellulaire. Nous avons ainsi pu montrer que la proteine cdc2 pourrait etre impliquee, dans ce modele cellulaire, dans le mecanisme d'induction d'apoptose

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Gérus, Marie. "Caractérisation de facteurs requis pour la synthèse des ribosomes et étude des connexions entre synthèse des ribosomes et cycle cellulaire chez les Eucaryotes". Toulouse 3, 2011. http://thesesups.ups-tlse.fr/1180/.

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Resumen

La synthèse des ribosomes dans les cellules eucaryotes débute par la transcription des unités répétées d'ADN ribosomique par l'ARN polymérase I qui génère un transcrit ribosomique primaire précurseur des ARNr 18S, 5. 8S et 25S qui s'associe de manière co-transcriptionnelle avec certaines protéines ribosomiques, avec le précurseur du quatrième ARNr (5S) et avec un grand nombre de facteurs d’assemblage et de petites particules ribonucleoprotéiques (snoRNPs) pour générer une particule pré-ribosomique précoce de 90S aussi appelée SSU processome. Cette particule subit un processus de maturation complexe, qui abouti à la formation des deux sous-unités ribosomiques matures assurant la synthèse protéique. Des données de la littérature suggèrent que chez les Eucaryotes la synthèse des ribosomes est coordonnée à la progression du cycle cellulaire. Les facteurs impliqués dans cette coordination potentielle et les mécanismes impliqués restent cependant très mal caractérisés. Mes travaux de thèse se sont orientés suivant trois axes. La caractérisation de Rrp36p, un nouveau facteur essentiel à la synthèse des ribosomes chez la levure et l'humain. L'étude de la protéine HCA66 humaine, requise pour la duplication des centrosomes et la ségrégation des chromosomes en mitose. Nos résultats montrent qu’elle est également requise pour la synthèse de la petite sous-unité ribosomique dans les cellules HeLa. L'étude de la protéine Rpf2p de levure, nécessaire à la synthèse de la grande sous-unité ribosomique. Nos résultats montrent que Rpf2p pourrait intervenir dans des mécanismes de modification de la chromatine en relation avec la régulation de la transcription
Ribosome biogenesis in eukaryotic cells begins with transcription of repeated units of ribosomal DNA by the RNA polymerase I generating the primary transcript precursor of matures rRNA 18S, 5. 8S and 25S. This transcript associates co-transcriptionally with some ribosomal proteins, the precursor of the fourth rRNA (5S) and a large number of assembly factors and small ribonucleoprotein particles to generate an early pre-ribosomal particle of 90S also called SSU processome. This particle undergoes a complex maturation process leading to production of the two matures ribosomal subunits to provide protein synthesis. Literature data suggest that in Eukaryotes ribosome biogenesis is coordinated with other essentials cellular processes, especially with cell cycle progression. During my thesis I have worked on three projects. The characterization of Rrp36p, a new essential factor for ribosome biogenesis in yeast and human cells. Study of the human protein HCA66, involved in centrosome duplication and in chromosome segregation during mitosis. Our results show that HCA66 is also required for biogenesis of the small ribosomal subunit in HeLa cells. The study of yeast Rpf2p protein, required for the synthesis of the large ribosomal subunit. Our results show that Rpf2p could be involved in mechanisms of chromatin modification in relation to the regulation of transcription

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Ben-Sahra, Issam. "Métabolisme et cancer : cibler le métabolisme des cellules cancéreuses par des agents inducteurs du stress métabolique". Nice, 2010. http://www.theses.fr/2010NICE4042.

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Les maladies métaboliques comme le diabète sont associées à une incidence plus importante de certains cancers. En effet, la metformine, un médicament couramment prescrit contre le diabète de type II inhibe la croissance des cellules cancéreuses de prostate et ralentit la croissance tumorale en induisant un arrêt du cycle cellulaire en G0/G1. Cet effet s’accompagne d’une inhibition de la voie mTOR indépendamment de l’AMP Kinase, un régulateur majeur du métabolisme de la cellule. Bien que la Metformine active la voie AMPK, celle-ci n’est pas impliquée dans son effet antiprolifératif. Nous avons montré que REDD1 est la protéine médiatrice de cette action antiproliférative. De plus, nous montrons que la metformine ralentit significativement la croissance tumorale chez la souris nude. Afin d’augmenter l’action anti-tumorale, nous avons combiné la metformine, un inhibiteur du complexe I avec le 2-déoxy-D-glucose (2-DG), un inhibiteur de la glycolyse. Cette combinaison bloque de façon drastique la croissance cellulaire et induit l’apoptose des cellules cancéreuses de prostate. De plus nous montrons que cette induction de l’apoptose s’accompagne d’une suppression de l’autophagie induite par le 2-DG seul. Ainsi nos travaux montrent que la metformine seule ou en combinaison avec le 2-DG pourraient représenter un intérêt thérapeutique important dans le traitement du cancer de la prostate
Targeting cancer cell metabolism is a new promising strategy to fight cancer. Metformin is a widely used antidiabetic agent, which regulates glucose homeostasis. Recent studies suggest that metformin may reduce the risk of cancer, but its mode of action in cancer remained not elucidated. We investigated the effect of metformin on human prostate cancer cell proliferation in vitro and in vivo. Metformin inhibited the proliferation of DU145, PC-3 and LNCaP cancer cells with a 50% decrease of cell viability and had a modest effect on normal prostate epithelial cell line P69. Metformin did not induce apoptosis but blocked cell cycle in G0/G1. This blockade was accompanied by a strong decrease of cyclin D1 protein level, pRb phosphorylation and an increase in p27kip protein expression. Metformin activated the AMP kinase pathway, a fuel sensor signaling pathway. However, inhibition of the AMPK pathway using siRNA against the two catalytic subunits of AMPK did not prevent the antiproliferative effect of metformin in prostate cancer cells. Importantly, oral and intraperitoneal treatment with metformin led to a 50 and 35% reduction of tumor growth, respectively, in mice bearing xenografts of LNCaP. To enhance, metformin effect on cancer cell growth, we combined metformin and 2-deoxyglucose, an inhibitor of glycolysis, inhibited mitochondrial respiration and glycolysis in prostate cancer cells leading to a severe depletion in ATP. The combination of the two drugs was much more harmful for cancer cells than the treatment with metformin or 2DG alone, leading to 96% inhibition of cell viability in LNCaP prostate cancer cells via a p53-dependent apoptosis process

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Esnault, Catherine. "Pharmacologie cellulaire du ditercalinium, un agent antitumoral bis-intercalant de l'ADN : mécanisme d'action dans les cellules eucaryotes et caractérisation d'une lignée tumorale resistante". Paris 6, 1990. http://www.theses.fr/1990PA066128.

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Le ditercalinium est un dimère cationique de 7H-pyridocarbazole relié par une chaîne rigide. Il possède une activité antitumorale et entraîne une toxicité retardée. En relation avec le potentiel de membrane, il se concentre dans les mitochondries et y induit un gonflement. Après un contact de 24 h avec le ditercalinium, les cellules ne peuvent se diviser que 5 a 6 fois et se figent aléatoirement dans toutes les phases du cycle cellulaire. Le ditercalinium induit la dégradation de l'ADN mitochondrial et l'inhibition indirecte de la respiration mitochondriale et l'inactivation de la dihydro-orotate-dehydrogenase. Les cellules peuvent tirer leur énergie de la glycolyse anaérobie et ne sont pas tuées par une atteinte de la respiration aérobie mitochondriale mais par une carence en pyrimidine-ribosephosphate. La toxicité du ditercalinium est diminuée spécifiquement en ajoutant de l'uridine au milieu de culture. Une lignée résistante au ditercalinium (L1210/dit) a été obtenue par une sélection in vivo de cellules traitées in vitro. Elle possède un facteur de résistance de 32 stable en absence de sélection. La lignée L1210/dit ne possède pas de mécanisme de résistance en relation avec le mécanisme de cytotoxicité du ditercalinium induisant la carence en uridine. Les cellules L1210/dit possèdent le phénotype de résistance pleiotropique (multi drug resistance) et accumulent deux fois moins de ditercalinium que les cellules parentales. La toxicité du ditercalinium et son accumulation intracellulaire sont augmentées par le verapamil spécifiquement dans les cellules résistantes. L'efflux de la rhodamine 123, beaucoup plus actif dans les cellules L1210/dit, est inhibe par le verapamil. Des lignées MDR témoins sont résistantes au ditercalinium. Les cellules L1210/dit surexpriment faiblement le gène MDR de façon constitutive sans amplification gnomique en absence de sélection

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Chopin, Valérie Françoise Julie Le Bourhis Xuefen. "Mécanismes d'action du butyrate sur la croissance des cellules cancéreuses de sein". [S.l.] : [s.n.], 2003. http://www.univ-lille1.fr/bustl-grisemine/pdf/extheses/50376-2003-179-180.pdf.

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Mademtzoglou, Despoina. "Coordinating growth arrest and myogenesis in muscle stem cells : a molecular and cellular analysis". Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066231/document.

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Resumen

Ce travail de thèse a porté sur l'étude de l'équilibre entre la prolifération et la différenciation dans le cadre de la myogenèse embryonaire et postnatale. Chez l'embryon, le sortie du cycle cellulaire est contrôlé par p57 et p21 pendant la myogenèse. Nous avons montré que la voie de signalisation Notch ainsi que les facteurs de régulation myogéniques (MRFs) régulent l'expression de p57 dans les cellules progénitrices et les myoblastes en différentiation. Chez l'adulte, p21 et p57 ne sont pas exriés dans la population quiescente de cellules souches du muscle (cellules satellites - SCs). p21 et p57 sont rapidement induits après activation et durant la différentiation des SCs. Ex vivo, les myoblastes déficients pour le gène p21 présentent des défauts de prolifération et de différenciation. In vivo, l'étude de la régénération musculaire chez les mutants p21 a montré une réduction précoce des SCs, avec un retard de reconstitution du tissu musculaire. Afin de pouvoir étudier le rôle de p57 après la naissance (les mutants p57 meurent à la naissance) nous avons généré un modèle murin permettant de muter le gène p57 de manière spatio-temporelle avec le système de recombinaison Cre/LoxP. Nous avons combiner notre allèle p57 conditionnel avec une Cre exprimée de manière ubiquitaire, et observé des phénotypes identiques aux phénotypes décrits précédemment chez les souris présentant une perte du p57. L'ablation conditionnelle de p57 dans les SCs adultes, a conduit à une diminution de la différenciation myogénique in vitro. Notre travail suggère que p21 et p57 jouent un rôle important dans la régulation de la différenciation et le cycle cellulaire dans le muscle adulte
This thesis focuses on the coordination of proliferation and differentiation in embryonic and adult myogenesis. During development, we demonstrated that skeletal muscle progenitors interact with the differentiating myoblasts via the Notch pathway to maintain their pool. It has previously been established that p57 and p21 redundantly promote cell cycle exit in developing muscle and we showed that Notch and Myogenic Regulatory Factors act through muscle-specific regulation of p57. We then examined p21 and p57 in adult skeletal muscle stem cells, called satellite cells (SCs). Although absent from quiescent SCs, p21 and p57 are expressed upon activation (including proliferating myoblasts) and differentiation. p21-null myoblasts exhibited proliferation and differentiation defects in myofiber cultures, implicating p21 at the early activation phase. In vivo muscle regeneration studies with p21 mutants showed an early impact on the SC pool, while SCs and muscle structure were re-established by the end of regeneration. Since p57-deficient mice die at birth, we generated a conditional knock-out (KO) allele for postnatal studies using the loxP/Cre recombination system. With a ubiquitous Cre we observed developmental and perinatal phenotypes similar to previously described KO embryos. The new p57 allele also includes a β-galactosidase reporter and we showed that it recapitulates p57 expression profile in embryonic and adult tissues. Conditional ablation of p57 in adult SCs reduced myogenic differentiation in primary myoblast culture. Our work suggests that p21 and p57 are involved in adult myogenesis and cell cycle exit, working at the early steps of satellite cell activation

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Czarnecki, Antonny. "Régulation du courant potassique transitoire au cours du cycle cellulaire dans les cellules hypophysaires tumorales de rat". Bordeaux 2, 2002. http://www.theses.fr/2002BOR28977.

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Depuis quelques années, des travaux effectués sur des modèles de cellules inexcitables ont montré l'implication des conductances potassiques (K +) dans les processus de prolifération. Dans ce contexte, nous avons cherché à savoir s'il existait une régulation des courants K + au cours du cycle cellulaire dans un modèle de cellules excitables : la lignée GH3. Dans une étude préliminaire, nous avons montré que le pic de densité du courant K + transitoire (Ito) était diminué dans les cellules en phase S par rapport aux cellules dans une autre phase du cycle. Puis, nous avons montré que ce changement s'opérait précisément à la transition entre l'état proliférant et l'état quiescent : la densité de Ito étant augmentée de 50 % dans les cellules quiescentes comparée aux cellules proliférantes. La potentiel-dépendance reste inchangée dans les deux groupes cellulaires mais les cinétiques d'inactivation sont modifiées. La détermination moléculaire des sous-unités α présentes dans les GH3 montre que les sous-unités Kv1. 4, Kv4. 1 et Kv4. 3 sont à l'origine de Ito. La régulation de Ito à la transition cellules quiescentes/cellules cyclées ne met pas en jeu l'activation de second messagers tels que les kinases ou les acides gras. Elle est due à une augmentation de la synthèse protéique de Kv1. 4. Parallèlement, nous avons mis en évidence une diminution de l'expression de Kv1. 5 dans les cellules quiescentes, suggérant que le passage de l'état quiescent à l'état proliférant s'accompagne d'une modification du ratio Kv1. 4/Kv1. 5. Cependant, ces changements d'expression des canaux n'entraînent pas de variation de l'activité électrique. Nous mettons ainsi en évidence pour la première fois une variation de l'expression de Ito au cours du cycle cellulaire des cellules GH3, suggérant son implication dans les mécanismes de prolifération. Ces nouvelles données pourraient ouvrir un nouveau champ d'investigation pour comprendre les processus de tumorisation hypophysaire.

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Lamy, Aude. "Contribution à l'étude des altérations du cycle cellulaire au cours du cancer bronchique primitif et des lésions précancéreuses". Rouen, 2002. http://www.theses.fr/2002ROUES010.

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Resumen

Il est important de caractériser les altérations moléculaires des lésions précancéreuses et des cancers bronchiques primitifs, principale cause de mortalité dans les pays industrialisés. Dans une première partie de ce travail nous avons étudié la chronologie de l'hyperméthylation de CDKN2A et de hRARb2 dans un modèle de cultures primaires de lésions précancéreuses. L'hyperméthylation de CDKN2A a été trouvée dans 19 % des lésions testées : (1) sa fréquence augmente avec le grade histologique de la lésion (2) elle est corrélée aux antécédents de cancers bronchiques ou ORL du patient mais n'est pas influencée par le tabagisme et l'exposition professionnelle à l'amiante, (3) elle n'est pas prédictive de l'évolution de la lésion. L'hyperméthylation de hRARb2 ne semble pas être un événement précoce de la cancérisation bronchique dans notre étude. Dans une deuxième partie de ce travail nous avons documenté une altération de l'expression des cyclines B1 et B2 dans 15 % des CNAPC
It is important to characterize the molecular changes occurring in precancerous lesions and invasive lung cancer the leading cause of cancer's mortality in industrial nations. In the first part of this work we studied the timing of aberrant methylation of CDKN2A and hRARb2 in primary cultures of precancerous lesions. Aberrant methylation of the CDKN2A gene promoter was found in 19 % of preinvasive lesions: (1) its frequency increased with the histological grade of the lesions, (2) methylation was significantly more frequent in patients with a previous history of lung or ENT cancer but was not influenced by tobacco or asbestos exposure, (3) there was no relationship between CDKN2A hypermethylation and the evolutivity of the lesions. In contrast, aberrant methylation of hRARb2 was not an early event of lung carcinogenesis in our study. In a second part of this work we found an altered expression of Cyclins B1 and B2 in 15 % of non-small cell lung cancer

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Damiens, Eve. "Activité antinéoplasique de la lactoferrine modulation de l'activité cytotoxique des cellules "natural killer" (nk) et régulation de la transition g1-s du cycle des cellules épithéliales cancéreuses mammaires et coliques". Lille 1, 1998. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1998/50376-1998-193.pdf.

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Resumen

La lactoferrine est une glycoproteine principalement secretee dans le lait et liberee dans le plasma par degranulation des polynucleaires neutrophiles. Il a ete demontre qu'elle augmente la cytolyse des cellules tumorales par les cellules nk, cependant le mecanisme reste mal defini. Afin de determiner ce mecanisme, nous avons recherche l'effet de la lactoferrine sur la cytolyse. Nous demontrons que la lactoferrine module l'activite cytotoxique des cellules nk en fonction de sa concentration et sensibilise les cellules tumorales a la lyse en fonction de leur phenotype. En particulier, la lactoferrine augmente la sensibilite a la lyse des cellules d'adenocarcinome mammaire et de colon probablement en les bloquant en phase g1 du cycle cellulaire. Nous avons recherche le mecanisme moleculaire de l'effet anti-proliferatif de la lactoferrine sur les cellules d'adenocarcinome mammaire mda-mb-231. Nous demontrons que la lactoferrine induit un arret en phase g1 en diminuant l'expression de cdk2 et de la cycline e et en augmentant celle de p21#w#a#f#1#/#c#i#p#1 par une voie independante de p53. Ceci est correle avec l'inhibition des activites kinases de cdk2 et cdk4 maintenant prb sous une forme hypophosphorylee. Nous avons caracterise deux types de sites de liaison de la lactoferrine sur les cellules mda-mb-231. Le premier correspond aux proteoglycannes. Le second, moins represente, correspond probablement au recepteur specifique. Nous montrons que la modulation de l'activite biologique de la lactoferrine sur ces cellules requiert la presence d'heparane sulfate proteoglycannes correctement sulfates. Nous suggerons que l'activite de la lactoferrine sur ces cellules est regulee par un equilibre entre la proportion d'hspg et de sites de haute affinite.

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Forand, Anne. "Caractérisation de la réponse des cellules germinales mâles néonatales à un stress génotoxique". Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077123.

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La fertilité d'un individu et l'intégrité du génome de sa descendance dépendent, en partie, du nombre et de la qualité des cellules germinales qui se mettent en place durant la vie fœtale et néonatale Nous nous sommes particulièrement intéressés aux gonocytes néonataux murins qui sont les précurseurs des spermatogonies souches. Nous avons étudié in vivo leur réponse à un stress génotoxique (irradiation y), à court et à moyen terme, en la comparant à celle des spermatogonies néonatales. Nous avons montré que les gonocytes sont plus sensibles à l'induction de cassures double brin de l'ADN (CDBs) que les spermatogonies. Après irradiation en phase S de leur cycle cellulaire, les gonocytes s'accumulent en phase G1 alors que les spermatogonies se bloquen préférentiellement en G2/M. Par ailleurs, la réparation des CDBs est plus rapide dans les gonocytes. Même si une dose de 2 Gy n'altère pas la fertilité des animaux irradiés, elle induit une diminution significative de la production spermatique. Ceci suggère une atteinte du pool de cellules souches due à l'apoptose massive des gonocytes après activation de la voie intrinsèque. Nous avons montré que PUMA est un régulateur essentiel de cette voie dans les gonocytes. L'irradiatior à la même dose de spermatogonies induit de la mort cellulaire, cependant des phénomène? compensatoires, probablement liés à la présence de cellules souches plus radio-résistantes, se mettent en place. Ainsi, à l'âge adulte, ni l'histologie testiculaire, ni la production spermatique ne sont altérées chez les animaux irradiés. L'ensemble de ces données suggère qu'il existe, dans le! cellules germinales, des mécanismes particulièrement sensibles permettant de diriger ces cellules vers la mort en réponse à un stress génotoxique, plutôt que de risquer la transmission d< mutations issues d'une mauvaise réparation des lésions de leur ADN
The fertility of an individual and the integrity of the genome of its progeny depend partly on the number and the quality of the germ cells, which are set up during foetal and neonatal life. We were particularly interested in the neonatal gonocytes, which are the precursors of the spermatogonia stem cells. We studied their short and long-term in vivo response to genotoxic stress (y-rays) by comparing it with that of neonatal spermatogonia. We showed that gonocytes are more sensitive to the induction of DMA double strand breaks (DSBs) than spermatogonia. After irradiation in phase S of their cell cycle, gonocytes are blocked in the following G1 phase whereas spermatogonia are blocked preferentially in G2/M. In addition, the repair of DSBs is faster in gonocytes than ir spermatogonia. Even if a dose of 2 Gy does not alter the fertility of the irradiated animals, it induces a significant reduction in sperm counts. This suggests an impairment of the spermatogonial stem pool due to a strong apoptosis of gonocytes after activation of the intrinsic pathway. We showed that PUMA is an essential regulator of this pathway in gonocytes. Irradiatior of spermatogonia with the same dose induces cellular death, however compensatory mechanisms probably related to the presence of more radio-resistant stem cells, are activated. Thus, in the adult, neither the testicular histology, nor the sperm counts were affected. Altogether, these date suggest the existence of particularly sensitive mechanisms in germ cells, permitting to direct these cells towards death in response to genotoxic stress, rather than to risk the transmission o-mutations resulting from DMA lesion misrepair

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Baghdassarian, Nathalie. "Inhibition de la prolifération des cellules lymphoïdes par les glucocorticoïdes". Lyon 1, 1999. http://www.theses.fr/1999LYO1T117.

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Tesis sobre el tema "Cellules en cycle"

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