Tesis sobre el tema "Α-amilasi"

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-09. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:30Z : No. of bitstreams: 1 000859578.pdf: 2407454 bytes, checksum: 8f8cd1ebd5ec7774fbfb7c2dd87ffc81 (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Em conjunto com outras enzimas que degradam amido, as α-amilases e CGTases são incluídas na família 13 glicosilhidrolases caracterizada por uma conformação (α/β)8-barril. As amilases são grupo importante de enzimas industriais, representando cerca de 25% do mercado mundial de enzima.. Foram isoladas linhagens bacterianas de áreas do Cerrado que apresentaram alta produção de amilases em estudos anteriores. Devido ao interesse em ampliar os conhecimentos de α-amilases e CGTase com potencial de aplicação industrial, no presente trabalho, propôs-se realizar estudos de análises físico-químicas e do efeito da fonte de carbono, na produção de α-amilase das linhagens microbianas A-1.2 e A-18 e de CGTase produzida por Paenibacillus campinasensis H69-3 utilizando na fermentação submersa os amidos solúvel, trigo, milho, batata e mandioca; farelo de trigo e mandioca; Maizena e Arrozina como diferentes fontes de carbono alternativas Além disso, propôs-se aperfeiçoar os estudos de produção de amilases pela linhagem microbiana A-1.2 por meio da otimização dos constituintes nutricionais do meio de cultivo em que cada um dos ensaios do planejamento fatorial foi executado em triplicata e dessa forma, consideraram-se as médias dos resultados obtidos dessas repetições. Iniciar estudos de biologia molecular com a CGTase produzida por P. campinasensis H69-3 buscando estratégias para a clonagem e expressão da CGTase em hospedeiro heterólogo (Escherichia coli). As linhagens A-1.2 e A-18 tiveram as fontes de carbono amido solúvel, amido de mandioca, amido de milho e farelo de mandioca como os substratos que maximizaram a produção da enzima por ambas as linhagens, e o tempo de fermentação com maiores atividades foi entre 72 e 96 horas. O perfil de produção ao longo do tempo da CGTase de P. campinasensis H69-3 indicou o amido solúvel, amido de mandioca e a Maizena como as fontes de carbono que propiciaram as mais altas...
Together with other enzymes that degrade starch, α-amylases and CGTases are included in the family 13 glycosylhydrolases, characterized by a conformation (α/β)8-barrel. Amylases are an important group of industrial enzymes, accounting for approximately 25% of the world enzyme market. Bacterial strains from the Cerrado areas, which have shown a high production of amylase in the previous studies, have been isolated. Due to the interest in expanding the knowledge of α-amylase and CGTase with potential for industrial application, the present work proposes to conduct studies of physical and chemical analysis and the effect of carbon source on the production of α-amylase of A-1.2 and A-18 microbial strains, as well as CGTase produced by Paenibacillus campinasensis H69-3 in submerged fermentation using the soluble starch, wheat, corn, potato and cassava; wheat bran and cassava; Maizena and Arrozina like various alternative sources of carbon. Furthermore, it proposes enhancing the amylase study of the microbial strain A-1.2 by optimizing the nutritional components of the culture medium in which each of the factorial design experiments has been carried out in triplicate, and thus considering the average results of these repetitions. To initiate molecular biology studies with CGTase produced by P. campinasensis H69-3 searching strategies for the cloning and expression of the CGTase in a heterologous harbourer (E. coli). The A-1.2 and A-18 strains were the carbon sources of soluble, cassava and corn starch, and cassava bran as the substrate that maximized the enzyme production by both strains. And the fermentation time with higher levels of activity was between 72 and 96 hours. The production profile over the CGTase P. campinasensis H69-3 time has indicated the soluble and cassava starch and Maizena as carbon source that provided the highest enzymatic activities. The 72 hours period of time has been more appropriate in enzymatic tests, ...

Orientador: Heloiza Ferreira Alves do Prado
Banca: João Cláudio Thoméo
Banca: Ana Maria Rodrigues Cassiolato
Resumo: Em conjunto com outras enzimas que degradam amido, as α-amilases e CGTases são incluídas na família 13 glicosilhidrolases caracterizada por uma conformação (α/β)8-barril. As amilases são grupo importante de enzimas industriais, representando cerca de 25% do mercado mundial de enzima.. Foram isoladas linhagens bacterianas de áreas do Cerrado que apresentaram alta produção de amilases em estudos anteriores. Devido ao interesse em ampliar os conhecimentos de α-amilases e CGTase com potencial de aplicação industrial, no presente trabalho, propôs-se realizar estudos de análises físico-químicas e do efeito da fonte de carbono, na produção de α-amilase das linhagens microbianas A-1.2 e A-18 e de CGTase produzida por Paenibacillus campinasensis H69-3 utilizando na fermentação submersa os amidos solúvel, trigo, milho, batata e mandioca; farelo de trigo e mandioca; Maizena e Arrozina como diferentes fontes de carbono alternativas Além disso, propôs-se aperfeiçoar os estudos de produção de amilases pela linhagem microbiana A-1.2 por meio da otimização dos constituintes nutricionais do meio de cultivo em que cada um dos ensaios do planejamento fatorial foi executado em triplicata e dessa forma, consideraram-se as médias dos resultados obtidos dessas repetições. Iniciar estudos de biologia molecular com a CGTase produzida por P. campinasensis H69-3 buscando estratégias para a clonagem e expressão da CGTase em hospedeiro heterólogo (Escherichia coli). As linhagens A-1.2 e A-18 tiveram as fontes de carbono amido solúvel, amido de mandioca, amido de milho e farelo de mandioca como os substratos que maximizaram a produção da enzima por ambas as linhagens, e o tempo de fermentação com maiores atividades foi entre 72 e 96 horas. O perfil de produção ao longo do tempo da CGTase de P. campinasensis H69-3 indicou o amido solúvel, amido de mandioca e a Maizena como as fontes de carbono que propiciaram as mais altas...
Abstract: Together with other enzymes that degrade starch, α-amylases and CGTases are included in the family 13 glycosylhydrolases, characterized by a conformation (α/β)8-barrel. Amylases are an important group of industrial enzymes, accounting for approximately 25% of the world enzyme market. Bacterial strains from the Cerrado areas, which have shown a high production of amylase in the previous studies, have been isolated. Due to the interest in expanding the knowledge of α-amylase and CGTase with potential for industrial application, the present work proposes to conduct studies of physical and chemical analysis and the effect of carbon source on the production of α-amylase of A-1.2 and A-18 microbial strains, as well as CGTase produced by Paenibacillus campinasensis H69-3 in submerged fermentation using the soluble starch, wheat, corn, potato and cassava; wheat bran and cassava; Maizena and Arrozina like various alternative sources of carbon. Furthermore, it proposes enhancing the amylase study of the microbial strain A-1.2 by optimizing the nutritional components of the culture medium in which each of the factorial design experiments has been carried out in triplicate, and thus considering the average results of these repetitions. To initiate molecular biology studies with CGTase produced by P. campinasensis H69-3 searching strategies for the cloning and expression of the CGTase in a heterologous harbourer (E. coli). The A-1.2 and A-18 strains were the carbon sources of soluble, cassava and corn starch, and cassava bran as the substrate that maximized the enzyme production by both strains. And the fermentation time with higher levels of activity was between 72 and 96 hours. The production profile over the CGTase P. campinasensis H69-3 time has indicated the soluble and cassava starch and Maizena as carbon source that provided the highest enzymatic activities. The 72 hours period of time has been more appropriate in enzymatic tests, ...
Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade em Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017.
Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-03-29T19:02:21Z No. of bitstreams: 1 2017_LorenaFerreiraGomes_Parcial.pdf: 226967 bytes, checksum: d00af9fafbe2e2bd391079ffd56e7e47 (MD5)
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O Brasil possui a maior biodiversidade vegetal do mundo. Porém, apesar de tamanha riqueza, muitas espécies vegetais ainda não foram estudas química e biologicamente. Miconia chamissois (Melastomataceae) é uma espécie frequentemente encontrada no bioma Cerrado e é descrita basicamente pelos benefícios ecológicos. Seu potencial químico e biológico é pouco explorado. Assim, o objetivo desde trabalho foi estudar, preliminarmente, os compostos presentes no extrato aquoso das folhas de M. chamissois, sua ação citotóxica e atividades antioxidante, antimicrobiana e de inibição enzimática. O estudo fitoquímico foi realizado pelas técnicas de Cromatografia em camada delgada (CCD) e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Os teores de polifenóis e flavonoides foram determinados com reagente de Folin e cloreto de alumínio, respectivamente. A atividade antioxidante foi avaliada pelos métodos DPPH e fosfomolibdênio. Os métodos de microdiluição em caldo e difusão em disco foram utilizados para determinação da atividade antimicrobiana frente à Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Candida albicans. A atividade de inibição da tirosinase e α-amilase foram determinadas. A citotoxicidade do extrato foi avaliada frente às linhagens celulares de queratinócito humano (HaCat), fibroblasto de camundongo (L929) e macrófago de camundongo (Raw 264.7) pelo método do MTT. É sugerido a presença de compostos devidos da vitexina. O extrato aquoso de M. chamissois apresentou atividade antioxidante, equivalente a 18,35 μg/mL de ácido ascórbico pelo método fosfomolibdênio e IC50 de 2,91 μg/mL pelo método DPPH. Inibição do crescimento de S. aureus foi observado em ambos os métodos e a inibição do crescimento de C. albicans foi observada apenas frente ao método de microdiluição. Os valores de IC50 encontrados para a inibição da tirosinase e α-amilase foram de 183,2 e 15,06 μg/mL, respectivamente. O extrato não apresentou citotoxicidade frente às linhagens avaliadas. Os resultados encontrados sugerem potencial biológico do extrato aquoso de M. chamissois, sendo necessários mais estudos para a elucidação dos compostos presentes na espécie.
Brazil has the largest plant biodiversity in the world. However, despite such wealth, many plant species have not yet been studied chemically and biologically. Miconia chamissois (Melastomataceae) is a species frequently found in the Cerrado biome and is basically described by its ecological benefits. Its chemical and biological potential is little explored. The aim of this work was to study, preliminarily, the compounds present in the aqueous extract of the leaves of M. chamissois, its cytotoxic action and antioxidant, antimicrobial and inhibitory enzymatic activities. The phytochemical study was performed by the techniques of thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC). The total polyphenols and flavonoids contents were determined with Folin reagent and aluminum chloride, respectively. The antioxidant activity was evaluated by DPPH and phosphomolybdenum methods. Broth microdilution and disk diffusion methods were used to determine the antimicrobial activity against Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans. The extract cytotoxicity was evaluated against human keratinocyte (HaCat), mouse fibroblast (L929) and mouse macrophage (Raw 264.7) cell lines by the MTT method. The presence of due vitexin compounds is suggested. The aqueous extract of M. chamissois presented antioxidant activity, equivalent to 18.35 μg/mL of ascorbic acid by the phosphomolybdenum method and presented IC50 of 2.91 μg/mL by DPPH method. Inhibition of S. aureus growth was observed in both methods and inhibition of C. albicans was observed only in the microdilution method. The IC50 values found for tyrosinase and α-amylase were 183.2 and 15.06 μg/mL, respectively. The extract did not present cytotoxicity against cell lines evaluated. The results suggest a biological potential of M. chamissois aqueous extract, and further studies are needed to elucidate the compounds present in the species.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-12T11:55:14Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Amália Cristine Medeiros Ferreira.pdf: 1292292 bytes, checksum: cf06788df2c672bca8f740e4286d5815 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5)
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CNPq
A α-amilase é uma endocarboidrase que atua na hidrólise de ligações glicosídicas α(1→4) presentes em polissacarídeos como o amido e glicogênio, gerando como produtos oligossacarídeos, dextrinas e maltose. Esta enzima corresponde à segunda classe de enzimas mais utilizadas na indústria, apresentando diversas aplicações biotecnológicas, principalmente nas indústrias alimentícia e de detergentes. A α-amilase é encontrada em diversos organismos, e pode ser obtida através de bactérias, fungos e tecidos animais e vegetais. Com o intuito de reduzir o impacto causado pelo avanço da indústria pesqueira, essas e outras classes de enzimas vêm sendo extraídas através do reaproveitamento dos resíduos pesqueiros. Neste trabalho, α-amilases foram obtidas através dos cecos pilóricos e intestinos do tambaqui, Colossoma macropomum, caracterizadas e avaliadas quanto ao seu uso como aditivo de limpeza em detergentes comerciais. Para isso, o extrato bruto obtido foi submetido a fracionamento salino utilizando sulfato de amônio, a fração 30-60% apresentou maior atividade, foi em seguida dialisada e aplicada a uma coluna de cromatografia p-aminobenzamidine-agarose (Sigma®). Após esse processo de purificação, foram realizados zimogramas e eletroforese SDS-PAGE, os resultados obtidos sugerem uma purificação parcial, e presença de isoformas. As α-amilases apresentaram atividade ótima no pH 7.0 e 8.5, respectivamente para AMY-1 (intestinos) e AMY-2 (cecos pilóricos). Foram termoestáveis durante 30 minutos a 40°C, e apresentando temperatura ótima de 40 e 45°C, respectivamente. As α-amilases foram fortemente inibidas pelos íons Hg+3 e Cu+2. Quanto ao seu uso como aditivo de detergentes, as α-amilases extraídas do tambaqui, foram significativamente estáveis durante incubação de 60 minutos com agente oxidante (H2O2 15%), surfactantes coleato de sódio, tween 20, tween 80 e SDS, sendo também compatíveis e estáveis com todas as marcas de sabão utilizadas neste trabalho. Estes resultados sugerem que estas enzimas possuem potencial aplicação na indústria de detergentes, podendo ser utilizadas como aditivo de limpeza. Adicionalmente, pode-se concluir que o reaproveitamento dos resíduos do tambaqui corresponde a uma fonte inovadora de α-amilase com alta atividade e aplicabilidade industrial.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006.
Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-12-01T01:14:58Z No. of bitstreams: 1 Janaina%20do%20Nascimento%20Lima%20Matias%20de%20Paula%20Dissertacao.pdf: 938650 bytes, checksum: ceb07c334e0caf8cec361835356eb0c4 (MD5)
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Inibidores de α-amilase de plantas apresentam um grande potencial para uso biotecnológico, através de tranformação de plantas visando resistência a insetos- praga. Neste contexto, estudou-se o potencial inseticida do inibidor de α-amilase 0.53 sobre os insetos-praga de grãos armazenados de feijão, visando sua utilização em programas de melhoramento genético. Plantas de trigo foram escolhidas como fonte vegetal devido a presença de inúmeras isoformas de inibidores de α-amilases em suas sementes. Os inibidores de α-amilases, presentes em sementes de trigo (Triticum aestivum), foram purificados e caracterizados e o gene para o inibidor 0.53 foi isolado utilizando técnicas de RT-PCR, utilizando cDNAs como molde. A sequência para o inibidor 0.53 foi então subclonada no vetor de expressão pPICZαA (pFSP-pPICZαA-0.53) e a expressão da proteína recombinante foi realizada em células de levedura metilotrófica Pichia pastoris. Após estabelecimento das condições de expressão, a proteína recombinante, expressa e secretada no meio de cultura, foi purificada por HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Performance). Ensaios in vitro utilizando as α-amilases dos insetos-praga: Acanthocelides obtectus, Zabrotes subfasciatus, Callosobruchus maculatus e a α-amilase pancreática de Porco (PPA), mostraram que a atividade desse inibidor é altamente dependente das condições de pH. Em pH 4,5, o inibidor 0.53 foi capaz de inibir unicamente as α-amilases dos diferentes insetos, não apresentando nenhuma atividade para a amilase de mamífero PPA. Porém, em pH 7,2, o inibidor recombinante 0.53 atuou unicamente sobre a PPA, inibindo cerca de 90% de sua atividade, não sendo ativo para α-amilases dos diferentes insetos alvo testados. Desta forma, o inibidor recombinante 0,53 poderá ser utilizado em diversos estudos de toxicidade em mamíferos, estudos complementares de interação molecular, a fim de verificar sua segurança alimentar e potencial uso biotecnológico. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT
α-Amylase plant inhibitors exhibit a great potential for biotechnological use, using plants of transformation aiming resistance against insects-pest. This work studies the potential insecticidal effects of α-amylases inhibitor 0.53 against insects-pest in stored bean grains, and also the possibility of its use for the plant genetic improvement. Seeds from wheat plants were chosen as a vegetable source due to their presence of several α-amylases inhibitors isoforms. Firstly, the α-amylases inhibitors synthesized in wheat seeds (Triticum aestivum), were isolated, characterized and the gene encoding the 0.53 inhibitor isolated by RT-PCR techniques, using cDNAS as template. The 0.53 inhibitor coding sequence was then subcloned into the expression vector pPICZαA (pFSP-pPICZαA-0.53) and the recombinant protein expression was carried by metilotrofic yeast Pichia pastorisI cell. After the establishment expression conditions, the recombinant protein, secreted in the culture, medium was purified by HPLC (High Performance Liquid Chromatography). In vitro assays using α-amylases from the insect-pest: Acanthocelides obtectus, Zabrotes subfasciatus, Callosobruchus maculatus and α-amylase from pancreatic porcine (PPA), had shown that the activity of this inhibitor is highly dependent of the pH conditions. In pH 4,5, the 0.53 inhibitor was able capable to inhibit solely insects α-amylases, but showed no activity for PPA. Otherwise, in pH 7,2, 0.53 recombinant inhibitor act only against PPA, inhibiting about 90%, not being active for insects α-amylases tested. Due to the characteristics described above the 0.53 recombinant inhibitor could be used in several studies in mammals toxicity tests, complementary studies of molecular interaction, in order to verify its alimentary security and potential biotechnological use.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-13. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:40Z : No. of bitstreams: 1 000846543_20161013.pdf: 94059 bytes, checksum: 52d1e440ba36450ea75a541fdabf2bad (MD5) Bitstreams deleted on 2016-10-17T11:54:13Z: 000846543_20161013.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-10-17T11:54:52Z : No. of bitstreams: 1 000846543.pdf: 539999 bytes, checksum: 353a91a394b4f6fa217af06030109771 (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Amido resistente (AR) é definido como a fração de amido que não sofre a ação das enzimas digestivas do trato gastrointestinal apresentando comportamento semelhante ao da fibra alimentar. AR tipo 3 é o amido retrogradado composto principalmente por amilose ou amido desramificado devido a sua maior tendência à reassociação. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da β-amilase e da α- amilase fúngica na formação de AR3 a partir de amidos de batata e araruta. Suspensões de amido (6,5% m/v) foram gelatinizadas e submetidas à hidrólise com β-amilase (400U/g) ou α-amilase fúngica (5U/g para batata e 10U/g para araruta), por 6 h. Alíquotas do sobrenadante foram coletadas e o grau de hidrólise determinado pela quantificação de açúcares totais (método fenol-sulfúrico). Os hidrolisados foram desramificados com pululanase (40U/g), por 10 h, refrigerados a 4°C por 16 h para potencializar a retrogradação, precipitados com etanol e secos. Amostras controle foram produzidas a partir da gelatinização e desramificação dos amidos sem a utilização das amilases. Os amidos retrogradados foram caracterizados quanto ao tamanho molecular dos componentes do amido (GPC), distribuição do comprimento das cadeias ramificadas da amilopectina (HPAEC-PAD), padrão cristalino e cristalinidade relativa (difracção de raios-X), propriedades térmicas (DSC) e teor de AR. A amilólise dos amidos de batata e araruta resultou em grau de hidrólise semelhante (~25%), independente das enzimas utilizadas. O amido nativo de batata apresentou padrão cristalino tipo B, 20,7% de amilose e alta proporção de cadeias laterais longas da amilopectina (DP ≥ 37), enquanto o amido de araruta mostrou padrão cristalino tipo A, 19,5% de amilose, e alta proporção de cadeias laterais curtas (DP 6-12). A ação da β-amilase provocou, em ambos os amidos aumento expressivo na proporção de cadeias com GP 25-36 e expressiva redução...
Resistant starch (RS) is defined as the fraction of starch that does not suffer from the action of digestive enzymes from the gastrointestinal tract showing a similar behavior to that of dietary fiber. Retrograded starch, defined as RS3, is composed mainly of amylose and debranched starch due to its greater tendency to reassociation. In this work the effect of β-amylase and fungalα-amylase on the formation and physicochemical properties of RS3 from potato and arrowroot starches were investigated. Starch suspensions (6,5%w/v) werefirst gelatinized and then hydrolyzed by β-amylase (400U/g) or fungal α-amylase (5U/g potato starch, 10U/g arrowroot starch) for 6h. Aliquots of the supernatant were collected and hydrolysis degree was determined by measuring total carbohydrate content (phenol−sulfuric method).The hydrolysates were debranched by pullulanase (40U/g), for 10h, cooled to 4°C for 16h to enhance the retrogradation, precipitated using ethanol, and dried. Control samples were produced from the gelatinization and debranching of the starch without the use of amylase. The retrograded starches were characterized for molecular weight distribution of starch components (GPC), amylopectin branched-chain length distribution (HPAEC-PAD), crystalline pattern (X-ray diffraction), thermal properties (DSC) and RS content. The amylolysis of potato and arrowroot starches resulted in a similar hydrolysis degree (~25%) independent of used enzymes. Native potato starch displayed type B crystalline pattern, 10,7% of amylose,and a high proportion of long branch chains of amylopectin (DP≥37) while arrowroot starch displayed type A crystalline pattern, 19,5% of amylose, and a high proportion of short branch chains (DP 6-12). The action of β-amylase resulted in both starches significant increase in the proportion of chains with DP 25-36 and significant reduction in chains with DP 13-24, while the fungal α-amylase...

Orientador: Célia Maria Landi Franco
Banca: Thaís de Souza Rocha
Banca: Ana Carolina Conti
Resumo: Amido resistente (AR) é definido como a fração de amido que não sofre a ação das enzimas digestivas do trato gastrointestinal apresentando comportamento semelhante ao da fibra alimentar. AR tipo 3 é o amido retrogradado composto principalmente por amilose ou amido desramificado devido a sua maior tendência à reassociação. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da β-amilase e da α- amilase fúngica na formação de AR3 a partir de amidos de batata e araruta. Suspensões de amido (6,5% m/v) foram gelatinizadas e submetidas à hidrólise com β-amilase (400U/g) ou α-amilase fúngica (5U/g para batata e 10U/g para araruta), por 6 h. Alíquotas do sobrenadante foram coletadas e o grau de hidrólise determinado pela quantificação de açúcares totais (método fenol-sulfúrico). Os hidrolisados foram desramificados com pululanase (40U/g), por 10 h, refrigerados a 4°C por 16 h para potencializar a retrogradação, precipitados com etanol e secos. Amostras controle foram produzidas a partir da gelatinização e desramificação dos amidos sem a utilização das amilases. Os amidos retrogradados foram caracterizados quanto ao tamanho molecular dos componentes do amido (GPC), distribuição do comprimento das cadeias ramificadas da amilopectina (HPAEC-PAD), padrão cristalino e cristalinidade relativa (difracção de raios-X), propriedades térmicas (DSC) e teor de AR. A amilólise dos amidos de batata e araruta resultou em grau de hidrólise semelhante (~25%), independente das enzimas utilizadas. O amido nativo de batata apresentou padrão cristalino tipo B, 20,7% de amilose e alta proporção de cadeias laterais longas da amilopectina (DP ≥ 37), enquanto o amido de araruta mostrou padrão cristalino tipo A, 19,5% de amilose, e alta proporção de cadeias laterais curtas (DP 6-12). A ação da β-amilase provocou, em ambos os amidos aumento expressivo na proporção de cadeias com GP 25-36 e expressiva redução...
Abstract: Resistant starch (RS) is defined as the fraction of starch that does not suffer from the action of digestive enzymes from the gastrointestinal tract showing a similar behavior to that of dietary fiber. Retrograded starch, defined as RS3, is composed mainly of amylose and debranched starch due to its greater tendency to reassociation. In this work the effect of β-amylase and fungalα-amylase on the formation and physicochemical properties of RS3 from potato and arrowroot starches were investigated. Starch suspensions (6,5%w/v) werefirst gelatinized and then hydrolyzed by β-amylase (400U/g) or fungal α-amylase (5U/g potato starch, 10U/g arrowroot starch) for 6h. Aliquots of the supernatant were collected and hydrolysis degree was determined by measuring total carbohydrate content (phenol−sulfuric method).The hydrolysates were debranched by pullulanase (40U/g), for 10h, cooled to 4°C for 16h to enhance the retrogradation, precipitated using ethanol, and dried. Control samples were produced from the gelatinization and debranching of the starch without the use of amylase. The retrograded starches were characterized for molecular weight distribution of starch components (GPC), amylopectin branched-chain length distribution (HPAEC-PAD), crystalline pattern (X-ray diffraction), thermal properties (DSC) and RS content. The amylolysis of potato and arrowroot starches resulted in a similar hydrolysis degree (~25%) independent of used enzymes. Native potato starch displayed type B crystalline pattern, 10,7% of amylose,and a high proportion of long branch chains of amylopectin (DP≥37) while arrowroot starch displayed type A crystalline pattern, 19,5% of amylose, and a high proportion of short branch chains (DP 6-12). The action of β-amylase resulted in both starches significant increase in the proportion of chains with DP 25-36 and significant reduction in chains with DP 13-24, while the fungal α-amylase...
Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008.
Submitted by Jaqueline Oliveira (jaqueoliveiram@gmail.com) on 2008-11-20T18:39:27Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_ EvertonMacedoSilva.pdf: 1736502 bytes, checksum: 0be5a2d852e64d2c266dca5f1edb4431 (MD5)
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As α-amilases são enzimas digestivas amplamente distribuídas em microrganimos, plantas e animais, que catalisam a hidrólise de ligações glicosídicas α-1,4 e atuam no metabolismo de carboidratos. A inibição de α-amilases pode ser aplicada no controle de insetos-praga dependentes de dieta rica em amido para obtenção de energia, reduzindo a quantidade de nutrientes para evitar seu desenvolvimento. Essa ação permite o uso desses inibidores como bioinseticidas. A inibição da captação de carboidratos na saúde humana pode ser uma alternativa terapêutica no controle glicêmico, reduzindo picos de glicose pós-prandial no tratamento de doenças crônicas, tais como diabetes, obesidade e hiperlipidemia. Este projeto propõe a prospecção de moléculas ativas sobre as α- amilases. Nesse contexto, as plantas são fontes ricas em compostos que possam ser estudados. Assim, o potencial biológico do Banco de Extratos de Plantas do Bioma Cerrado, do Laboratório de Farmacognosia da Universidade de Brasília, foi avaliado sobre α-amilases de Acanthoscelides obtectus, Zabrotes subfasciatus e α-amilase salivar humana. Foram testados cento e oitenta e cinco extratos vegetais hexânicos, diclorometânicos, etanólicos e hidroetanólicos pertencentes a vinte e quatro espécies de dez famílias. O extrato hidroetanólico da casca do caule de Kielmeyera coriacea foi selecionado para estudo químico-biológico devido ao seu forte perfil inibitório, com IC50 110,00 µg.mL-1 e 272,12 µg.mL-1 sobre α-amilases de Z. subfasciatus e de A. obtectus, respectivamente. O extrato apresentou 97,09% de inibição sobre a isoforma humana a 125 µg.mL-1. A parttição líquido-líquido forneceu duas fazses com alto potencial inibitório, a fase 1, precipitado metanol/hexano, que inibiu 96,35%, e a fase 5, metanol/água, que apresentou 99,35% de inibição a 125 µg.mL-1. O fracionamento químico da fase 1 em coluna cromatográfica aberta de sephadex LH-20 permitiu a obtenção de 11 grupos. Dentre esses, os mais ativos sobre α-amilase humana foram o grupo 10 (95,24%) e o grupo 11 (99,00%). O conteúdo de fenóis totais e taninos foi analisado para o extrato bruto, fases e grupos ativos. A fase 1 demonstrou um forte teor de compostos fenólicos, com 1 mg.mL-1, sendo 53,56% de taninos e a fase 5 apresentou 0,95 mg.mL-1 de polifenóis, dos quais 35,96% são taninos. O grupo 11 mostrou 81,03% de constituintes taninos e inibiu 82% da α-amilase salivar humana a apenas 50 µg.mL-1. A avaliação de extratos e taninos sobre α-amilases demonstraram atividade promissora na inibição de captação de carboidratos, representando uma alternativa para o controle do diabetes e obesidade, assim como um potencial bem interessante na inibição de α- amilases de insetos. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT
α-amylases are digestive enzymes widely distributed in microrganims, plants and animals, that catalyze hidrolysis of α-1,4 glicosidic bonds and act in carbohydrate metabolism. The inhibition of α-amylases can be applied on control of insect pests that depends on starch-rich diet to energy production, reducing the amount of nutrients to avoid its development. This action allow the use of these inhibitors like bio-insecticides. The inhibition of carbohydrate uptake in human health could be an alternative therapeutic on glicemic control, reducing post-prandial glucose peaks in chronic diseases treatment, such as diabetes, obesity an hyperlipidaemia. This project purposes the prospection of active molecules. In this context, plants are rich sources of compounds that could be studied. Then, the biologic potential of Cerrado Biome Plant Extract Bank, of University of Brasilia Pharmacognosy Laboratory, was evaluated on Acanthoscelides obtectus α-amylases, Zabrotes subfasciatus α-amylases and human saliva α-amylase. One hundred eighty-five hexanic, dichlorometanic, ethanolic and hidro-ethanolic extracts belonging to twenty-four species from ten families. The hidroethanolic bark stem extract of Kielmeyera coriacea was selected to chemical-biological study because of its strong inhibitory profile, with IC50 110,00 µg.mL-1 and 272,12 µg.mL-1 towards Z. subfasciatus and A. obtectus α-amylases, respectively. The extract presented 97,09% of inhibition of human isoform at 125 µg.mL-1. The liquid-liquid partition yielded two phases with a great inhibitory potential, phase 1, methanol/hexan precipitated, that inhibited 96,35%, and phase 5, methanol/water, that presented 99,35% of inhibition at 125 µg.mL-1. The chemical frationation of fase 1 in open chromatographic sephadex LH-20 column alowed the separation of 11 groups. Among them, the most active on human α-amylase were group 10 (95,24%) and group 11 (99,00%). The content of total phenols and tannins was analysed to crude extract, phases and active groups. Phase 1 demonstrated a high teor of phenolic compounds, with 1 mg.mL-1, including 53,56% of tannins and phase 5 showed 0,95 mg.mL-1 of polyphenols content, in wich 35,96% are tannins. Group 11 showed 81,03% of tannins content which inhibited 82% of human saliva α-amylase at only 50 µg.mL-1. The evaluation of extracts and tannins on α-amylases demonstrated a promising activity in carbohydrate uptake inhibition, representing a alternative to control diabetes and obesity, as well as a really interesting potential to insects α-amylases inhibition.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2012.
Submitted by Gabriela Botelho (gabrielabotelho@bce.unb.br) on 2012-06-29T13:12:56Z No. of bitstreams: 1 2012_MurieleTabordaLottermann.pdf: 2431324 bytes, checksum: 6ce4316335a6c074d43d053cafea80ce (MD5)
Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-29T14:10:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_MurieleTabordaLottermann.pdf: 2431324 bytes, checksum: 6ce4316335a6c074d43d053cafea80ce (MD5)
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A crise energética que vem atualmente sendo estabelecida mundialmente deve-se principalmente à elevação de preços e escassez de fontes de petróleo. Em virtude disso, novas fontes para a produção de combustíveis tem sido exploradas, entre elas, o amido para a produção de bioetanol. Para fermentação alcoólica o amido deve ser clivado para liberação das moléculas de glicose presentes em sua estrutura. Uma das enzimas necessárias nesse processo é a α-amilase, responsável pela hidrólise das ligações α-1,4 do amido liberando maltose e oligossacarídeos. Neste trabalho apresentamos estudo biofísico e estrutural de uma α-amilase (Amy1), proteína da levedura Cryptococcus flavus, expressa em Saccharomyces cerevisiae. A Amy1 foi obtida a partir do crescimento da levedura recombinante por 72 horas em meio de cultura com extrato de levedura como fonte de nitrogênio e purificada por cromatografia de troca iônica e de exclusão molecular. Essa enzima apresenta atividade ótima em pH 5,5. Estudos de dicroísmo circular (CD) da Amy1 recombinante em comparação com a proteína selvagem mostraram que a expressão em um organismo diferente não alterou significativamente a estrutura da α-amilase recombinante. A estrutura secundária da Amy1 recombinante em água a 25°C é constituída de 9,1% de α-hélice e 32,7% de folhas-β e da Amy1 selvagem de 8,2% de α-hélice e 34,7% de folhas-β. Nenhuma das proteínas apresentou padrão de desnaturação com a elevação da temperatura até 95°C, indicando a estabilidade estrutural dessas moléculas. Estudos de atenuação de fluorescência, utilizando atenuadores carregados e neutros e ajustes de Stern-Volmer, revelaram que a proteína recombinante apresenta uma população de triptofano predominantemente semi-enterrada. O microambiente desse aminoácido é parcialmente carregado positivamente, indicado pelos valores das constantes de Stern-Volmer (Ksv) obtidas para a partir da atenuação de fluorescência pela acrilamida, cloreto de césio e iodeto de potássio, nos pHs 5,5; 7,0 e 9,0. Mudanças conformacionais da proteína ocorrem em pHs neutro e alcalino levando a inativação da enzima. No entanto, as mudanças ocorridas em pH 5,5 são importantes para o aumento da atividade catalítica dessa enzima. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT
The energy crisis currently established worldwide has been the main motivation to explore new sources for fuel production, as starch used for bioethanol. In this process the α-amylase, responsible for the hydrolysis of the starch α-1-4 covalent bonds, is used to release maltose and oligosaccharides. Here, we present structural and biophysical studies of the α-amylase (Amy1) from yeast Cryptococcus flavus, expressed in Saccharomyces cerevisiae. The Amy1 was obtained from recombinant yeast in culture medium for 72 hours with yeast extract as nitrogen source. The enzyme was purified by ion exchange and molecular exclusion chromatography and presents optimal activity in pH 5.5. Structural studies using circular dichroism (CD) spectroscopy showed that recombinant and wild type amylases (Amy1) are structurally similar. The secondary structure content of recombinant and wild Amy1 in water at 25°C consists of 9.1% and 8.2% α-helix, 32.7% and 34.7% β-sheet, respectively. The amylases were characterized as thermal stable proteins, since none denaturation profile was observed under increasing temperature up to 95°C. Fluorescence decay studies using charged and neutral quenchers and Stern-Volmer approximation revealed that the recombinant protein has a population of tryptophan predominantly semi-buried. The tryptophan microenvironment is partially positively charged, indicated by the values of the Stern-Volmer constant (KSV) obtained from attenuation of fluorescence by acrylamide, cesium chloride and potassium iodide at pH 5.5, 7.0 and 9.0. Protein conformational changes occur in neutral and alkaline pH leading to inactivation of the enzyme. However, at pH 5.5 these conformational changes are important for increasing the catalytic activity of this enzyme.

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2016-09-26T14:16:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Simone_Pacheco_Frutos da família Myrtaceae_Caracterização físico-química e potencial .pdf: 1364587 bytes, checksum: 6df19769efc9216d28d9614070c8e6af (MD5)
Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2016-09-26T18:34:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Simone_Pacheco_Frutos da família Myrtaceae_Caracterização físico-química e potencial .pdf: 1364587 bytes, checksum: 6df19769efc9216d28d9614070c8e6af (MD5)
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Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq
As espécies vegetais Campomanesia xanthocarpa (guabiroba), Eugenia uniflora (pitanga), Eugenia pyriformis (uvaia), Psidium cattleianum (araçá) e Syzygium cumini (jambolão) estão presentes na Floresta Atlântica e são utilizadas pela população, para tratar diversas patologias, especialmente o diabetes melito tipo 2. Entretanto, a eficácia destes tratamentos e o mecanismo envolvido ainda não foram totalmente elucidados. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo principal avaliar o potencial dos compostos naturais destes frutos em inibir as enzimas α-amilase e α- glicosidase que estão envolvidas no metabolismo de carboidratos. Estes frutos também foram avaliados físico-quimicamente, realizando-se dentre outras análises a quantificação dos compostos fenólicos totais e a determinação da atividade antioxidante (métodos ABTS e DPPH). Os extratos metanólicos de P. cattleianum (acesso 44), S. cumini e E. pyriformis (acessos 11 e 15) inibiram de forma significativa a atividade da α-amilase. Os extratos metanólicos de P. cattleianum (acessos 44 e 87) também inibiram a atividade da α-glicosidase, utilizando-se os substratos maltose e sacarose. Em virtude da atividade antioxidante, da elevada quantidade de compostos fenólicos e da capacidade de inibição das enzimas digestivas do metabolismo de carboidratos, os frutos de P. cattleianum (acessos 44 e 87), S. cumini e E. pyriformis (acessos 11 e 15) podem apresentar potencial uso no manejo da hiperglicemia pós-prandial.
Campomanesia xanthocarpa (guabiroba), Eugenia uniflora (pitanga), Eugenia pyriformis (uvaia), Psidium cattleianum (araçá) and Syzygium cumini (jambolão) grow in the Brazilian Atlantic Forest and their fruits are commonly used as medicine to treat diseases related to carbohydrate metabolism, such as diabetes. The effectiveness of these treatments has not been demonstrated neither the biochemical mechanism involved. Therefore this study was devised to evaluate the potential of natural compounds of these fruits to inhibit key enzymes α-amylase and α- glucosidase involved in the carbohydrate metabolism. The fruits were also subjected to physicochemical characterization, quantification of phenolics compounds and antioxidant activity (ABTS and DPPH methods). The methanolic extracts of P. cattleianum (access 44), S. cumini, E. pyriformis (accesses 11 and 15) distinctively inhibited α-amylase activity. The methanolic extracts of P. cattleianum. (accesses 44 and 87) also inhibited α-glycosidase activity, with either maltose or sucrose as substrate. By having antioxidant activities, a fairly content of phenolic compounds, and capacity to inhibit carbohydrate digestive enzymes, P. cattleianum (access 44 and 87), S. cumini and E. pyriformis (accesses 11 and 15) could be good candidates to be used in the management of postprandial hyperglycemia.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2008.
Submitted by Kelly Marques (pereira.kelly@gmail.com) on 2009-11-03T18:29:13Z No. of bitstreams: 1 TESE DE DOUTORADO.pdf: 9729892 bytes, checksum: 86dc32db2bd0d4bbddc8a4764a79ab08 (MD5)
Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-27T14:40:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE DE DOUTORADO.pdf: 9729892 bytes, checksum: 86dc32db2bd0d4bbddc8a4764a79ab08 (MD5)
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α-Amilases têm aplicações nas indústrias de processamento do amido, produção de álcool, têxtil e outras. Na busca por fontes de amilases na biodiversidade do cerrado, uma levedura foi isolada e classificada como Cryptococcus flavus. Embora esta levedura seja capaz de metabolizar amido, ela não pode ser usada na indústria por não possuir status GRAS. Por outro lado, S. cerevisiae, amplamente utilizada na indústria de etanol, não é capaz de degradar amido para produzir açúcares fermentescíveis, sendo necessária a clonagem e expressão heteróloga de enzimas amilolíticas nesse microrganismo. Neste trabalho, o gene da amilase de C. flavus (AMY1) codificando uma amilase extracelular foi clonado e expresso com sucesso em S. cerevisiae. A seqüência de nucleotídeos do cDNA revelou uma ORF de 1896 pb codificando uma cadeia polipeptídica de 631 aminoácidos apresentando uma homologia (97%) com a amilase da levedura Cryptococcus sp S-2. A presença das quatro regiões conservadas, (I) 144DVVVNH149, (II) 235GLRIDSLQQ243, (III) 263GEVFN267 e (IV) 327FLENQD332 classificou essa enzima na família 13 das glicosil hidrolases (G13). A cinética de produção da amilase recombinante alcançou a atividade amilolítica máxima (3,93 U/mL) em 60 horas de cultivo. A proteína recombinante apresentou uma massa molecular similar a amilase nativa (~ 67 kDa), parte devido à N-glicosilação. Além disso, a amilase recombinante foi caracterizada bioquimicamente apresentando um pH ótimo de 5,5, temperatura ótima de 60 °C e Km= 0,37 mg/mL para o amido. Com o objetivo de desenvolver uma cepa de S. cerevisiae capaz de degradar o amido de forma mais eficiente, o gene da glicoamilase de Aspergillus awamori foi clonado no vetor YEp352-PGK para co-expressão com o gene da amilase de C. flavus, clonado previamente no vetor YEp351-PGK. O clone de S. cerevisiae expressando as duas enzimas foi capaz de crescer em meio contendo amido como única fonte de carbono. Dados preliminares de fermentação em frasco mostraram que esse clone é capaz de produzir 116 g de ethanol/L durante 120 horas de cultivo. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT
α-Amylases have applications in starch processing, alcohol production, textile and others industries. On screening for amylolytic yeasts in the Brazilian Cearrado, a yeast was isolated and classified as Cryptococcus flavus. Although C. flavus is able to metabolize starch, it cannot be used in industry because it does not possess GRAS status. On the other hand, S. cerevisiae, which is widely used in ethanol industry, cannot degrade starch to fermentable sugars, requiring for that the cloning and heterologous expression of amylolytic enzymes from other microrganisms. In this work, a C. flavus α-amylase gene (AMY1) encoding an extracelullar α-amylase has been cloned and successfully expressed in S. cerevisiae. The nucleotide sequence of the cDNA revealed an ORF of 1896 pb coding for a 631 amino acid polypeptide with high identity (97%) to a homologous protein isolated from Cryptococcus sp S-2. The presence of four conserved regions, (I) 144DVVVNH149, (II) 235GLRIDSLQQ243, (III) 263GEVFN267 and (IV) 327FLENQD332, places the enzyme in the GH13 α-amylase family. The assessment of the time course of amylase secretion in S. cerevisiae revealed a maximal extracellular amylolytic activity (3.93 U/mL) at 60 hours of incubation. The recombinant protein had an apparent molecular mass similar to the native enzyme (~67 kDa), part of which was due to N-glycosylation. On further characterization it was found that the recombinant amylase has optimal activity on pH 5.5 at 60 °C. Its for starch is Km= 0.37 mg/mL . In order to develop a S. cerevisiae strain able to degrade starch more efficiently, the Aspergillus awamori glucoamylase gene was cloned into the YEp352-PGK vector with a view to co-expression with the C. flavus α-amylase gene, previously cloned into YEp351-PGK. This new strain expressing both enzymes was able to grow in medium containg starch as sole carbon source. Preliminary data of flask fermentation suggest that this strain is able to produce 116g ethanol/L in 120 h of incubation.

Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2018-12-21T13:19:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Pamela Thaisa.pdf: 1195732 bytes, checksum: 0da9cde7a5b7b6d64fcef7d3e8a47ff0 (MD5)
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
A germinação das sementes de cevada é essencial para a produção do malte e a degradação enzimática do amido em açúcares solúveis é parte do processo de germinação dessas sementes. O objetivo desse trabalho foi avaliar o parâmetro fisiológico de sementes de cevada, através de testes de germinação e de vigor, em função de diferentes momentos de colheita, armazenadas ou não, e a influência da expressão diferencial dos genes, que codificam as enzimas α-amilase e β-amilase. Assim, as sementes das cultivares BRS Cauê e Irina foram produzidas em 2017 e colhidas aos 99 (32% de água), 104 (19,18% de água), 107 (17,92% de água) e 114 (15,89% de água) dias após a semeadura (DAS) para BRS Cauê e 102 (32,76% de água), 107 (20,27% de água), 121 (13,63% de água) e 127 (17,43% de água) DAS para a Irina. A qualidade das sementes foi avaliada logo após a colheita e após o armazenamento por 111 dias (BRS Cauê) e 107 dias (Irina). As sementes mantiveram dormência, principalmente na avaliação inicial; a qualidade das sementes foi superior quando colhidas aos 114 DAS (15,89% de água) para as sementes da cultivar BRS Cauê e aos 107 (20,27% de água) para Irina, sem variação da qualidade das sementes avaliadas após o armazenamento. O nível da expressão diferencial do gene da α-amilase para as sementes da cultivar BRS Cauê colhidas aos 114 DAS foi superior, independentemente da época de avaliação e aos 99 DAS inicialmente. Para Irina os maiores níveis de expressão foram obtidos quando as sementes foram colhidas aos 127 DAS. O nível de expressão do gene da β-amilase foi superior para as sementes colhidas aos 99 DAS para BRS Cauê e aos 102 DAS para Irina avaliadas logo após a colheita, com redução após o armazenamento. A dormência das sementes favoreceu a manutenção da qualidade fisiológica, independentemente do momento em que foram colhidas. Não é possível estabelecer correlação entre os resultados dos testes de germinação e de vigor das sementes de cevada e a expressão gênica para este experimento, evidenciando a complexidade dessa relação e a necessidade de mais estudos que possam melhor elucida-la.
The germination of the barley seeds is essential for the production of malt and enzyme degradation of the starch to soluble sugars, makes part of this seed germination process. The objective of this study was to evaluate the physiological parameters of barley seeds, from germination and vigor tests, depending of the harvests close to physiological maturity, stored or not, and the influence of the differential expression of the genes which codify to α amylase and β-amylase enzymes. The seeds of BRS Cauê and Irina were cultivate in 2017 and harvested at 99 (32% water), 104 (19.18% water), 107 (17.92% water) and 114 (15.89% water) days after sowing (DAS) to BRS Cauê and 102 (32.76% water), 107 (20.27% water), 121 (13.63% water) and 127 (17.43 % water) DAS to Irina. The seed quality was evaluated immediately after harvesting and storage for 111 days (BRS Cauê) and 107 days (Irina). The seeds kept dormancy, mainly in the initial evaluation; (15.89% water) for seeds from BRS Cauê and 107 (20.27% water) for Irina, without variation in the quality of the seeds evaluated after storage. The differential expression level of gene coding to α-amylase, to the seeds of BRS Cauê harvested at 114 DAS, was higher, regardless of the evaluation time and the 99 DAS. For Irina the highest levels of expression were obtained when the seeds were harvested at 127 DAS. The level of expression of the gene coding to β-amylase was higher for seeds harvested at 99 DAS for BRS Cauê and 102 DAS for Irina initially evaluated, with decrease after storage. Seed dormancy favored the maintenance of seed quality, regardless of when they were harvested. It is not possible to establish a correlation between the results of germination and vigor tests of barley seeds and gene expression for this experiment, evidencing the complexity of this relationship and the requirement for research that can better elucidate it.

Made available in DSpace on 2017-07-21T18:53:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rafael Ramires.pdf: 1391472 bytes, checksum: d654b07d1ed32bf9cb04ee7c55886419 (MD5) Previous issue date: 2009-12-22
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Waste generation represent a daily problem for most of the agriculture industry due to its toxicity and/or volume produced. Nowadays these residues demands treatment before its discard in the environment. Besides, the amounts spent with treatment are aggregated to manufacturing costs. Rational use of the residues seems to be the best way to handle with this problem. Cassava roots processing industry, produces significant amount of solid and liquid wastes from which valuable products could be extracted. Cassava bagasse is one of these residues containing high amounts of starch and dietary fibers. Before processing, the starch, through amylolitic enzyme digestion yields glucose and maltose syrups, products with wide uses in industry, for example, brewing industry. Classic laboratory analyses were already used in the characterization of cassava bagasse, but too much time were necessary to obtain results. Hence the present study aims for the analysis of cassava bagasse from multiple ways, being the thermal analysis the most important of all. The thermal techniques employed were thermogravimetry (TG), differential thermal analysis (DTA), derivate thermogravimetry (DTG) and differential scanning calorimetry (DSC). As in other past studies, optic microscopy proved its use in the identification of this kind of sample. X ray powder diffractometry is classically employed in the study of semi-cristalinity starch granule structure and was used to analyze the cassava bagasse. When a hydrolytic process is applied to starchy material, significant amount of reducing sugars are produced. Dinitrosalicylic acid (DNS) reducing reaction was performed in the hydrolyzed liquid fraction. The degradation temperatures obtained through thermogravimetric analysis of the native and hydrolyzed solid fractions of the cassava bagasse suffer reduction as well as changes in enthalpy and combustion values were noticed. DSC also showed fusion temperature of the starch in the cassava bagasse around 170 °C. This value gradually reduced to 162.5 °C and 152.3 °C when the samples were hydrolyzed for twelve and twenty-four hours, respectively.
A geração de resíduos é um problema diário para grande parte das agroindústrias em virtude da toxicidade ou grande volume gerado. Atualmente, políticas ambientais exigem o tratamento de resíduos antes do descarte na natureza. Além disso, este tratamento de resíduos é repassado aos custos de produção para o produto final. Propostas estão sendo apresentadas pelo setor ambiental com a finalidade de um uso racional para esses resíduos gerados. A indústria do amido, em especial o extraído da mandioca, produz quantidades significativas de rejeitos que podem ser empregados de forma racional, evitando seu descarte na natureza e gerando novos produtos. O bagaço da mandioca é esse tipo de resíduo, pois apresenta em sua composição alto teor de amido e fibras alimentares. Após o processamento, esse amido, por meio de ação de enzimas amilolíticas, pode ser convertido em xarope de maltose ou glicose, produtos de maior valor agregado, utilizados principalmente na indústria cervejeira. As análises via úmida para caracterizar a composição deste bagaço já foram realizadas, mas suas principais desvantagens estão associadas ao tempo requerido para a obtenção de resultados. Em função disso, o presente estudo visa analisar o bagaço de mandioca por várias frentes, sendo a análise térmica a principal entre as demais. As técnicas termoanalíticas empregadas foram a termogravimetria (TG), análise térmica diferencial (DTA), termogravimetria derivada (DTG) e a calorimetria exploratória diferencial (DSC). Assim como em trabalhos anteriores, a microscopia óptica foi utilizada provando-se de grande utilidade na identificação desse tipo de amostra. A difratometria de raios X pelo método do pó, classicamente utilizada no estudo de amidos em virtude de sua semi-cristalinidade, foi empregada neste tipo de resíduo. Como o processo hidrolítico quando empregado em fontes amiláceas produz quantidades significativas de açúcares redutores, a fase líquida resultante do processo foi analisada pela reação de redução com o ácido dinitrossalicílico (DNS). As temperaturas de degradação térmica obtidas a partir da análise termogravimétrica do bagaço de mandioca nativo e hidrolisado apresentaram redução, bem como alteração nas entalpias dos eventos de decomposição e combustão. A análise da calorimetria exploratória diferencial evidenciou uma temperatura de fusão do amido presente no bagaço de mandioca em 170C. Essa temperatura reduziu gradativamente à medida que as amostras foram hidrolisadas durante doze e vinte quatro horas, respectivamente 162.5 C e 152.3C.

Mestrado em Engenharia Alimentar - Instituto Superior de Agronomia / UL
Os subprodutos gerados na filetagem de tilápia (Oreochromis niloticus) resultantes do corte ‘V’ são ricos em proteínas, sendo muitas vezes eliminados sem qualquer aproveitamento. Para a valorização deste material produziram-se hidrolisados proteicos (HP) por processos enzimáticos. Assim, os objetivos deste trabalho foram: preparar HP com 1% de Alcalase, 1% de Flavourzyme e Alcalase (0,5%) + Flavourzyme (0,5%), a 50ºC, pH 7,5, durante 2h e avaliar as atividades antioxidantes (capacidade inibidora do DPPH• e ABTS•+, poder redutor e atividades quelantes do cobre e do ferro) e inibidora da α-amilase. O teor proteico destes hidrolisados foi: 84,1% (HP Al, HP AF) e 86,1% (HP Fl) e o grau de hidrólise foi: 22,62±0,39% (HP Al), 30,27±1,42% (HP AF) e 31,20±0,60% (HP Fl). A maior capacidade inibidora do DPPH• foi obtida nos HP Fl e HP AF (EC50=1,94±0,05 mg/mL e 2,00±0,02 mg/mL). O HP AF exibia a maior capacidade inibidora do ABTS•+ (EC50=2,01±0,15 mg/mL) relativamente aos HP Al e HP Fl (EC50=2,72±0,20 mg/mL e EC50=3,10±0,07 mg/mL, respetivamente). O HP AF exibia o menor poder redutor (AC0,5=6,68±0,07 mg/mL). A maior atividade quelante do Fe2+ verificou-se nos HP Fl e HP AF (EC50=7,97±0,26 mg/mL e 9,09±0,71 mg/mL, respetivamente), tal como na capacidade quelante do Cu2+ no HP AF (EC50=0,84±0,02 mg/mL). A maior capacidade inibidora da α-amilase foi registada no HP Fl (EC50=6,57±0,56 mg/mL) seguido do HP Al, enquanto o HP AF apresentava uma atividade muito baixa. O HP AF foi o hidrolisado que apresentou de forma geral, uma maior atividade antioxidante, evidenciando a formação de uma maior percentagem de péptidos exibindo esta atividade. Os resultados obtidos sugerem também que a atividade da Flavourzyme teria sido relevante na formação destes péptidos. Porém, tal não se verificou no que respeita a atividade inibidora da α-amilase
N/A

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario.
Se desarrolló un estudio con el fin de evaluar el efecto de la incorporación de una enzima fitasa y de un complejo multi enzimático (CME) compuesto por α-amilasas, proteasas y xilanasas sobre los parámetros productivos, algunos indicadores de la calidad externa del huevo, margen bruto y digestibilidad ileal aparente de calcio y fósforo. Se utilizaron 144 gallinas Leghorn Hy-line W-36 durante 34 semanas a partir de las 18 semanas de edad, siendo distribuidas aleatoriamente en 36 jaulas de 4 gallinas cada una (338 cm2 por ave) en un diseño factorial de 2 x 2. El diseño tuvo 4 tratamientos con 3 repeticiones de 3 jaulas cada una, en el cual las variables evaluadas fueron la incorporación o no de 300 unidades de fitasa/kg. de alimento y la inclusión o no de 375 gr. /ton. del CME, cuya composición es de 600 u/g. xilanasa, 800 u/g. α-amilasa y 8000 u/g. proteasa. Las dietas empleadas fueron a base en maíz, soya y afrechillo de trigo. Al término del período experimental, se realizó un estudio de digestibilidad ileal aparente de calcio y fósforo. Los resultados no mostraron un efecto significativo (p>0,05) de la fitasa o del CME sobre la masa del huevo, la ECA, el porcentaje de huevos sin cáscara, huevos trizados y la digestibilidad ileal aparente de calcio. La suplementación de fitasa aumentó significativamente (p < 0,05) el porcentaje de postura, disminuyó el peso de huevo, el consumo de alimento y el peso corporal (p<0,05), sin embargo, no afectó significativamente (p>0,05) el porcentaje de huevos quebrados o la digestibilidad ileal de fósforo. Por otra parte, la incorporación del CME aumentó (p<0,05) el peso del huevo, la digestibilidad ileal del fósforo, el consumo de alimento y peso corporal (p<0,05), disminuyendo (p<0,05) el porcentaje de postura y el porcentaje de huevos quebrados. También, se registró una interacción entre la incorporación de ambas enzimas para el peso de huevo, consumo de alimento, porcentaje de huevos sin cáscara y huevos quebrados. Con respecto al calculo de margen bruto, la fitasa mejoró la rentabilidad de las dietas en un 7,38%, equivalente a $193 por ave alojada, mientras el C.M.E. disminuyó la rentabilidad de las dietas en un 4,71%, equivalente a $120 por ave alojada. Si bien en este estudio la fitasa ratificó su efecto mejorador de la postura y MB, y una disminución en el consumo de alimento y el peso corporal y el CME reafirmó su efecto de aumentar el peso del huevo, al usar ambos suplementos combinados no se evidenciaron mejoras superiores a los efectos producidos en forma individual, sino mas bien tendieron a atenuarse. Por otra parte, el efecto del CME sobre la digestibilidad ileal del P fue inesperadamente alto. Este hecho genera una serie de interrogantes que aún no han sido aclaradas, por lo que se hace necesario realizar más estudios para conocer sus respuestas

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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
The utilization of Gluconacetobacter diazotrophicus in agriculture has shown promise in optimization morphophysiological aspects, biochemical and yield of plants. The culture of red rice (Oryza sativa L.) presents great socioeconomic and environmental importance in the semi- arid northeast. The production of this culture still suffers by the not full use of appropriate technologies, due to scarcity of studies and development of technologies. Given the above, the objective of this study was to evaluate the potential effect of G. diazotrophicus on germination and initial growth of red rice.The experiment was conducted in a completely randomized design, with six treatments (SNE-seeds not soaked in water, SE H2O-seeds soaked in water for 24 hours, SE H2O + GA3 seed soaked in gibberellic acid solution for 24 hours, SE H2O + GD-seeds soaked in water for 24 + G. diazotrophicus, SE H2O + GA3 + GD-seeds soaked in gibberellic acid solution for 24 hours + G. diazotrophicus and SNE + GD-seeds not soaked in water + G. diazotrophicus) with six replicates.The concentration of gibberellic acid (GA3) used was 50 mg -1 L . Evaluated were the aspects physiological, biochemical, molecular and initial growth of red rice seedlings. Data were submitted to analysis of variance, mean test and Pearson correlation. Treatments significant effect on the growth variables, physiological, biochemical and molecular.It was verified that treatment with non-imbibed seeds inoculated with G. diazotrophicus promote increase of 28.7; 41.7; 28.7; 49.5; 69.6; 48.5; 61.5; 38.5; 46; 97; 86 and 89% for the variables: germination, germination speed index, first count, root length, shoot length, total fresh mass, total dry mass of α-amylase activity, activ acid phosphatase, expression GAMYB transcription factor, α-amylase and S-adenosyl-L-methionine (SAM) synthase, respectively, in relation to the treatment of seeds not soaked in water and not inoculated.It was concluded that the inoculation with G. diazotrophicus red rice seeds enhances the speed of germination and seedling germination, root length, shoot length, and acid phosphatase activities of α-amylase, total fresh mass, total dry mass, GAMYB expression of the transcription factor, α- amylase expression and SAM. Therefore presents great potential agronomic and biotechnology for use as growth promoter in the red rice crop, increasing the germination and early growth independently of seed imbibition.
A utilização de Gluconacetobacter diazotrophicus na agricultura tem-se mostrado promissora na otimização de aspectos morfofisiológicos, bioquímicos e rendimento das plantas. Acultura do arroz vermelho(Oryza sativa L.) apresenta grande importância socioeconômica e ambiental no semiárido nordestino. Aprodução dessa cultura ainda padece pela não utilização plena de tecnologias apropriadas, devido a escassez de estudos e desenvolvimento de tecnologias. Diante do exposto, objetivou-se com este trabalho avaliar o efeito potencial da G. diazotrophicussobre a germinação e crescimento inicialde arroz vermelho. O experimento foi realizado emdelineamento inteiramente casualisado, constando de seis tratamentos (SNE-sementes não embebidas em água, SE H2O-sementes embebidas em água por 24h, SE H2O + GA3-sementes embebidas em solução de ácido giberélicopor 24h, SE H2O + GD-sementes embebidas em água por 24h + G. diazotrophicus, SE H2O + GA3 +GD-sementes embebidas em solução de ácido giberélicopor 24h + G. diazotrophicuse SNE + GD-sementes não embebidas em água + G. diazotrophicus), com seis repetições. A concentração da solução de ácido giberélico (GA3) usada -1 foi de 50 mg L . Avaliaram-se os aspectos fisiológicos, bioquímicos, moleculares e de crescimento inicial das plântulas de arroz vermelho. Os dados foram submetidos à análise de variância, teste de médias e correlação de Pearson. Os tratamentos exerceram efeito significativo sobre as variáveis de crescimento, fisiológicas,bioquímicas e moleculares. Registrou-se que o tratamento com sementes não embebidas e inoculadas com G. diazotrophicuspromoveram incrementos de 28,7; 41,7; 28,7; 49,5; 69,6; 48,5; 61,5; 38,5; 46; 97; 86 e 89% para as variáveis: germinação, índice de velocidade de germinação, primeira contagem de germinação, comprimento radicular, comprimento da parte aérea, massa fresca total, massa seca total, atividade da α-amilase, ativida da fosfatase ácida, expressão do fator de transcrição GAMYB, α- amilase e S-adenosil-L-metionina (SAM) sintetase, respectivamente, em relação ao tratamento das sementes não embebidas em água e não inoculadas. Concluiu-se que a inoculação de G. diazotrophicus em sementes de arroz vermelho aumenta a velocidade de germinação e germinação das plântulas, comprimento radicular, comprimento da parte aérea, atividade s da fosfatase ácida e α-amilase, massa fresca total, massa seca total, a expressão do fator de transcrição GAMYB, expressão de α-amilase e SAM.Portanto apresenta grande potencial agronômico e biotecnológico para aplicação como promotora de crescimento na cultura do arroz vermelho, incrementando a germinação e crescimento inicial de modo independente de embebição das sementes.

In questa tesi di dottorato viene approfondita la caratterizzazione degli inibitori delle amilasi esogene di frumento (α-AIs) e si valuta il ruolo di questa famiglia di proteine nelle manifestazioni allergiche al frumento di carattere alimentare. Gli α-AIs sono responsabili dell’insorgenza dell’asma del panificatore, e solo raramente sono stati associati a manifestazioni allergiche di tipo alimentare. Una proteina per essere definita un allergene alimentare deve soddisfare determinati parametri tra i quali la stabilità alla digestione gastro-enterica. Poiché in letteratura non vi sono dati relativi alla stabilità alla digestione degli inibitori dell’α-amilasi, in questa tesi è stata studiata l’attività biologica e la stabilità di uno tra i principali inibitori di frumento (l’inibitore dimerico 0.19) mediante protocolli in vitro ed in vivo. La prima parte della tesi è stata dedicata alla messa a punto di una metodica anti-zimografica per evidenziare in gel l’attività inibitoria α-AIs. È stato così possibile osservare per la prima volta forme eterodimeriche di queste proteine. In seguito è stata analizzata in vitro la stabilità alla digestione peptica dell’inibitore 0.19. In particolare, si è osservato come il realizzarsi di un’emulsione a livello gastrico contribuisca alla stabilità di questa proteina che quindi potrebbe ragionevolmente raggiungere l’intestino e sensibilizzare o scatenare reazioni allergiche, nonché fungere da fattore anti-nutrizionale inibendo l’attività di enzimi amilolitici. Questa ipotesi è stata saggiata mediante uno studio in vivo che ha permesso di evidenziare la presenza di inibitori delle amilasi immunologicamente attivi nell’intestino di animali alimentati con un prodotto cotto a base di frumento. L’analisi mediante IgE-blotting dei digeriti prelevati dagli animali non ha però permesso di evidenziare alcun inibitore allergenicamente attivo. Questo risultato concorderebbe con i dati in letteratura secondo i quali gli inibitori delle amilasi sarebbero coinvolti in allergie inalatorie ma non alimentari. Non bisogna però escludere che le condizioni sperimentali possono aver in qualche modo alterato l’allergenicità degli inibitori: in particolare la riduzione dei ponti disolfuro potrebbe aver denaturato importanti epitopi conformazionali, impedendo quindi il legame delle IgE. Diventa quindi estremamente interessante promuovere la messa a punto di nuovi protocolli sperimentali per l’analisi dell’allergenicità di proteine ricche in ponti disolfuro come quelle appartenenti alla superfamiglia delle prolammine.
This doctorate thesis deals with the characterization of wheat exogenous α-amylase inhibitors (α-AIs) e with the evaluation of their role in food allergy to wheat. α-AIs are responsible for the onset of Baker’s asthma, and less frequently they have been associated with food allergy to wheat. In order to define a protein a food allergen, this must fulfil some prerequisites, among which the stability to gastro-enteric digestion. Since in scientific literature there are no data concerning the stability of α-AIs to digestion, the objective of this thesis was to study the biologic activity and the stability of one of the major wheat amylase inhibitor (the dimeric inhibitor 0.19) by means of in vitro and in vivo protocols. The first part of the thesis was addressed to the development of and anti-zymographic method in order to detect the inhibition activity of α-AIs directly in the electrophoresis gel. Thanks to this technique, it was possible to study for the first time the heterodimeric forms of these proteins. The stability to in vitro peptic digestion of 0.19 inhibitor showed that the occurrence of an emulsion contributes to the stability of the protein. This means that the inhibitor could reasonably reach the gut and sensitize/elicit an allergic reaction. In addition it may act as an antinutritional factor by inhibiting the human amylolytic enzymes. This hypothesis was tested by an in vivo study that led to the immunodetection of α-AIs in the intestine contents of rats fed a wheat cooked product. The IgE-blotting analysis of the same samples did not allow to observe any allergologically active α-AI. This result is in accordance with previous publications that indicated α-AIs as responsible for inhalant but not food allergic manifestations to wheat. However, it must not be excluded that the experimental condition might have altered the allergenicity of the α-AIs. In particular, the reduction of the disulfide bridges might have denatured some conformational epitopes, hindering the binding of IgEs. It is evident that the development of new experimental protocols for the analysis of the allergenicity of disulfide-rich proteins, i.e. prolamins, is a crucial issue.

Dissertação de Mestrado, Biologia Molecular e Microbiana, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade do Algarve, 2016
A diabetes é uma doença que afeta milhões de pessoas em todo o mundo e condiciona a qualidade de vida das mesmas. A diabetes tipo 2 tem merecido destaque pelo aumento da sua incidência e pelo facto de ser uma doença evitável. O tratamento atualmente resume-se a medicação específica juntamente com uma dieta bastante restritiva. As microalgas sendo conhecidas como tendo várias aplicações biotecnológicas, como a aquacultura e indústria farmacêutica, poderão ainda constituir uma fonte natural de compostos bioativos com propriedades antidiabéticas que poderão fornecer uma alternativa menos dispendiosa e com menos efeitos colaterais ao tratamento atual da diabetes tipo 2. Este trabalho visa avaliar as atividades biológicas de extratos orgânicos e aquosos preparados a partir de biomassa seca de Scenedesmus sp., nomeadamente antidiabética (inibição da α-amilase e α-glucosidase), antioxidante (captação dos radicais DPPH, ABTS e NO), quelante de ferro e de cobre e de inibição da lipase. Nos ensaios foi testado o extrato de etanol e frações resultantes do fracionamento em sílica do extrato etanólico. A fração 3A apresentou a maior atividade inibitória na α-glucosidase (IC50 = 0.29 mg/mL) e α-amilase (IC50 = 0.80 mg/mL). O extrato cru de etanol revelou maior atividade antioxidante, nomeadamente na capacidade de capturar os radicais DPPH (IC50 = 3.03 mg/mL) e ABTS (IC50 = 2.41 mg/mL). Esta fração foi também a que revelou maior atividade quelante para o ferro (IC50 = 1.10 mg/mL) e para o cobre (IC50 = 3.66 mg/mL). A composição química da fração 3A foi analisada por HPLC e GC-MS tendo-se identificado 6 compostos, nomeadamente, neofitadieno, fitol, ácido α-linolénico, ácido palmítico, ácido araquidónico e ácido palmitelaidico. Os resultados mostraram que a Scenedesmus sp. é uma boa fonte de compostos bioativos com aplicação no tratamento da diabetes. No entanto, será ainda necessária uma melhor caracterização química da fração ativa e identificar o ou os compostos responsáveis pela atividade antidiabética.
Diabetes is a disease that affects millions of people throughout the world and affects the quality of life of the same. Type 2 diabetes has been highlighted by its increasing incidence and in that it is a preventable disease. The treatment currently boils down to specific medication with a very restrictive diet. Microalgae have several biotechnological applications, such as aquaculture and pharmaceutical industry, and can be a natural source of bioactive compounds with anti-diabetic properties that can provide a less expensive alternative, with fewer side effects alternative to the current treatment of Type 2 Diabetes. This study aims to assess the biological activities of an ethanolic extract prepared from dried biomass of Scenedesmus sp., namely anti-diabetic (inhibition of the α-amylase and α- glucosidase enzymes), antioxidant (scavenging of radicals DPPH, ABTS and NO), chelation of the redox metals iron and copper and inhibition of lipase. In the experiments the crude ethanol extract was tested and fractions resulting from silica column fractionation. Fraction 3A showed the greatest inhibitory activity against α-glucosidase (IC50 = 0.29 mg/ml) and α- amylase (IC50 = 0.80 mg/ml). The crude ethanol extract showed a higher antioxidant activity given its higher capacity to scavenge the radicals DPPH (IC50 = 3.03 mg/ml) and ABTS (IC50 = 2.41 mg/ml). However, fraction 3A presented the higher chelating activity of iron (IC50 = 1.10 mg / ml) and copper (IC50 = 3.66 mg / ml). The chemical characterization of fraction 3A by HPLC and GC-MS resulted in the identification of 6 compounds (neophytadiene, phytol, α-linolenic acid, palmitic acid, arachidonic acid and palmitelaidic acid). These results show that Scenedesmus sp. is a promising source of bioactive compounds with applications in the treatment of Type 2 Diabetes. However, a better characterization of the chemical composition of the active fraction should be performed and the compound or compounds responsible for the anti-diabetic activity should be identified.

A diabetes mellitus corresponde a uma patologia caraterizada por hiperglicémia crónica, sendo a diabetes mellitus tipo 2 (DM2) relacionada com a deterioração progressiva das funções das células β pancreáticas. A nutrição é considerada fundamental no controlo da DM2, com evidências crescentes dos benefícios das macroalgas, pelo seu teor de compostos antioxidantes (ação inibitória sobre enzimas do metabolismo de glícidos) e riqueza nutricional em macronutrientes torna-as um recurso alimentar de excelência. O presente estudo visa a avaliação da atividade inibitória das enzimas α-amilase, α-glucosidase e dipeptidil-peptidase-4 (DPP4) pelo extrato da macroalga Fucus spiralis, bem como a avaliação da sua capacidade antioxidante, com posterior validação em matriz alimentar como caso de estudo. As condições de extração dos compostos bioativos, por vortex, banho de ultrassons, homogeneizador e sonicador, foram otimizadas utilizando a metodologia de superfície de resposta (MSR) usando o desenho central rotacional (CRD) com base em três variáveis independentes (tempo de extração, biomassa e solvente), tendo como resposta: IC50 para DPPH; μmol EAA/g para FRAP; mg EAG/g para TPC. Posteriormente, as condições ótimas de extração selecionadas, tiveram em conta a maior extração de antioxidantes, requisitos de sustentabilidade ambiental e segurança alimentar (ausência de solventes orgânicos, recurso de materiais e tempo reduzido). A extração de antioxidantes otimizada foi obtida recorrendo ao homogeneizador, com as condições de extração: solvente de 50 ml etanol/100 ml com 26 % biomassa, durante 300 segundos. O extrato otimizado revelou capacidade antioxidante, segundo os métodos estudados (FRAP = 134,560 ± 91,738 mol EAA/g extrato; TPC = 271,310 ± 12,710 mg EAG/g extrato), bem como inibição da α-amilase (IC50 = 0,018 (0,011 – 0,028) mg/ml), α-glucosidase (IC50 = 0,0004 (5,485 x 10-7 – 0,003) mg/ml) e DPP4 (IC50 = 0,003 (0,002 – 0,004) mg/ml). O potencial de inibição enzimático, avaliado por metodologia in vitro com métodos espectrofotométricos, revelou-se superior à acarbose, inibidor da α-amilase e α-glucosidase, alcançando-se inibições semelhantes entre a DPP4 e a diprotina A. Como caso de estudo, desenvolveu-se e caracterizou-se um puré de maçã com adição de extrato de Fucus spiralis. Os resultados demonstraram que o produto desenvolvido revelou capacidade antioxidante (FRAP = 239,062 ± 42,651 mol EAA/g extrato; TPC = 303,880 ± 14,570 mg EAG/g extrato), bem como inibição enzimática (IC50 α-amilase =0,027 (0,023 -0,032) mg/ml; IC50 α-glucosidase = 0,020 (0,018 – 0,023) mg/ml; e IC50 mínimo de 0,010 (0,004 – 0,021) mg/ml para a DPP4). A avaliação química do puré revelou teores de humidade >80 %, aumento do pH com o tempo, teores de sacarose >15 g/ 100 g e índice de escurecimento, ao fim de 8 dias, superior a 90 % nas amostras de puré e de 77 % num produto comercial semelhante, indicando elevada atividade enzimática. Por último, o puré foi avaliado por uma painel sensorial semitreinado, verificando-se boa aceitabilidade indicando potencial do produto desenvolvido no mercado. Foram inquiridos 105 diabéticos tipo 2, visando a avaliação do seu perfil de consumo, bem como a sua facilidade em interpretar rótulos alimentares permitindo conhecer a potencialidade do puré de maçã com extrato de alga desenvolvido, como caso de estudo. A amostragem é representada por mulheres (67,6 %, n = 71) entre os 56 e 65 anos (27,6 %, n = 29), do distrito de Lisboa (63,8 %, n = 67), com ensino básico ou inferior (52,4 %, n = 55) e com consumo maioritário de cereais e derivados (31,4 %, n = 33). Verificou-se que o consumo de algas é unicamente explicado pela idade (Fisher = 13,488, p-value = 0,006) e habilitações académicas (Fisher = 10,329, p-value = 0,005), instigando a necessidade de desenvolvimento de estratégias de promoção dos benefícios do consumo de algas na restante população. O extrato de Fucus spiralis demonstrou elevada capacidade antioxidante e de inibição de enzimas alvo na prevenção e controlo da patologia, tornando-se promissor na prevenção da DM2.

Tese de mestrado, Doenças Metabólicas e Comportamento Alimentar, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2014
A obesidade representa um problema de saúde pública, associado a elevadas taxas de morbilidade com custos pessoais e económicos. Em muitos casos, a obesidade está associada à escolha de alimentos calóricos e palatáveis, existindo estudos que sugerem alterações na sensibilidade gustativa em obesos. Tendo a saliva uma participação na avaliação sensorial dos alimentos, alterações na sua composição podem modular a percepção dos alimentos. Por outro lado, este fluido apresenta potencial como fonte de biomarcadores de estados fisiológicos, mas a sua composição tem sido pouco estudada em obesos. No presente estudo comparou-se a composição proteica da saliva entre mulheres normoponderais e obesas submetidas (OCC) e não submetidas (OSC) a cirurgia bariátrica. Através da análise dos perfis SDS-PAGE observou-se um decréscimo de expressão da banda de 56,8 kDa, para mulheres OCC, tendo sido a mesma identificada como alfa-amilase por Western Blot. Já a actividade enzimática desta proteína observou-se estar aumentada em mulheres OSC. Nos perfis electroforéticos bi-dimensionais foram também observadas diminuições na expressão de 2 spots identificados como amilase nas mulheres OCC. Por outro lado mulheres OCC e OSC diferiram entre si em relação à expressão de isoformas diferentes desta proteína, sugerindo diferentes funcionalidades destas, as quais deverão ser exploradas no futuro. Os perfis 2D mostraram ainda aumentos na expressão da proteína zinco-α-2- glicoproteína em mulheres OSC e OCC, o que poderá ter a ver com o papel descrito desta proteína na lipólise. A nível da anidrase carbónica VI (CA VI), mulheres OCC apresentaram expressões mais baixas, estando os níveis de expressão desta proteína positivamente correlacionados com o Índice de Massa Corporal, em OCC e OSC. Tendo em conta a potencial relação da α-amilase com a percepção do gosto doce e da CA VI com a sensibilidade para o gosto amargo, é possível que a saliva esteja envolvida em alterações na percepção gustativa em indivíduos obesos.
Obesity represents a public health problem associated with high morbidity, presenting enormous personal and economical costs. In many cases, obesity is associated with the choice of palatable and caloric foods, with studies suggesting changes in taste sensitivity in obese individuals. Since saliva has a role in sensory evaluation, changes in its composition can modulate food perception. Moreover, this fluid presents potential as a source of biomarkers of physiological states. Nonetheless, its composition in obesity has been few studied. In the present study we compared the protein composition of saliva between normal weight and obese women submitted (OCC) and not submitted (OSC) to bariatric surgery. Through analysis of SDS-PAGE profiles, it was observed a decrease in expression of the band with 56.8 kDa in OCC women. This band was identified as α-amylase by Western blot. Concerning enzymatic activity, OSC women presented an increase comparatively to the other groups. In two-dimensional electrophoretic (2-DE) profiles decreases in expression of two spots in women identified as α-amylase were also observed. On the other hand, OCC and OSC women differed from each other in relation to the isoforms of this protein differently expressed, suggesting possible different functions for each of these isoforms. These must be explored in the future. The 2-DE profiles also demonstrated increases in expression of the protein zinc-α 2-glycoprotein for OSC and CCO women, which may be related to the known role of this protein in lipolysis. For carbonic anhydrase VI (CA VI) the expression levels were reduced in OCC women. Moreover, the expression levels of this protein were found to positively correlate with OCC and OSC women body mass index. Given the potential relationship of α-amylase with sweet taste and CA VI with bitter taste sensitivities, it is possible that saliva is involved in changes in taste perception in obese individuals.

Se desarrollo una pasta hojaldre con una metodología que permite obtener un producto con una concentración de grasa mucho menor con respecto a los productos comerciales similares.
Las masas laminadas se caracterizan por presentar una estructura dividida en múltiples capas mediante grasa incorporada a través de un proceso mecánico llamado “laminado”. Existen diferentes masas de este tipo, cada una de éstas presenta una textura diferente, las cuales se caracterizan por la forma en que se incorpora la grasa a la masa en su elaboración. La pasta hojaldre consiste en harina con suficiente agua para formar una masa de consistencia similar a la de la grasa que se utiliza en el proceso de laminado; caracterizada por su estructura crujiente. Esta masa no contiene azúcar ni levadura o algún agente leudante en su formulación, sin embargo es capaz de crecer hasta 600% su tamaño original mediante el vapor generado por la grasa atrapada en la masa durante el proceso de horneado a una temperatura elevada (210°C). En los últimos años el uso de tecnología enzimática en alimentos ha crecido, y en el área de panificación también es ampliamente utilizada. En especial las amilasas, las cuales son utilizadas como agente antienvejecimiento, dando suavidad y textura a los panificados, alargando su vida útil. Sin embargo, existen pocos trabajos de investigación respecto a los efectos relacionados con la adición de este tipo de enzimas en pastas laminadas y su interacción con el proceso de laminado, por lo que se considera importante ampliar los estudios de la aplicación de esta enzima en pasta hojaldre. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de diferentes concentraciones de un complejo enzimático comercial (Corbion Caravan Ingredients) de alfa amilasas (0.5, 1.0, 1.5%) sobre la microestructura de pasta hojaldre y como afecta en el contenido de grasa (100%, 80% y 60%) en base al peso de la masa), para llevar a cabo una reducción de la misma. Los resultados obtenidos demostraron que al utilizar el complejo comercial de enzimas α-amilasa al 0.5% en base al peso de la harina, mejora las propiedades térmicas y fisicoquímicas tanto de la pasta cruda, como del producto final, mejora y optimiza el proceso de horneado, debido a que acelera los procesos de gelatinización del almidón, además las enzimas hidrolizan los gránulos de almidón, creando micro-rupturas en la estructura laminar de la pasta hojaldre, haciendo que el vapor producido durante el horneado tenga una mejor difusión a lo largo de las láminas, Y que a su vez la pasta hojaldrada expulse 7.6% de grasa durante el horneado, optimizando así el tiempo de horneado y hace que sea posible reducir el porcentaje de grasa utilizado durante el laminado sin cambiar las características fisicoquímicas de la pasta hojaldre de 100% a 80%, es decir se puede reducir 20% de grasa que se utiliza durante el laminado.