Dissertations / Theses: 'Voie de signalisation RASSF'

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Tocqueville, Camille. "Implication de la Striatin3 dans la régulation des voies Wnt et Hippo dans le carcinome hépatocellulaire et son rôle de suppresseur de tumeur dans l’hépatoblastome." Electronic Thesis or Diss., Bordeaux, 2024. http://www.theses.fr/2024BORD0495.

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Abstract:

L’objectif de cette thèse est d’étudier le rôle de la Striatine3 (STRN3) dansl’hépatoblastome (HB) et le carcinome hépatocellulaire (CHC), deux cancers du foiecaractérisés par des dérégulations géniques, des réarrangements chromosomiques et desmutations dans les gènes liés à la voie de signalisation Wnt/bêta-caténine (Wnt). Cesaltérations conduisent à une activation anormale de cette voie. Des mutations sur le gènecodant pour la β-caténine (CTNNB1) sont très fréquentes dans ces cancers, avec environ80 % des cas dans l’HB et 30 % dans le CHC.STRN3 appartient à une famille de protéines d'échafaudage, les striatines, qui font partiedu complexe STRIPAK. Ce complexe régule la phosphatase PP2A et joue un rôle dans demultiples voies de signalisation, telles que la voie Hippo. Dans les cancers, STRN3 a étéassociée à un rôle oncogène en modifiant l’action de PP2A, transformant ce suppresseurde tumeur en un oncogène.Nos résultats montrent que STRN3 est sous-exprimée dans des cohortes de patientsatteints d’HB, ainsi que dans des lignées cellulaires dérivées d’HB. La surexpression deSTRN3 entraîne une diminution de la prolifération des lignées cellulaires issues d’HB etdes lignées dérivées de patients (HB-PDX). Cependant, elle n’a pas d’effet sur laprolifération des cellules Huh7, une lignée provenant de CHC qui possèdent une formesauvage de la β-caténine. Cette réduction de la prolifération des lignées HB a étéconfirmée par un arrêt irréversible du cycle cellulaire. Par ailleurs, nous avons montré quel'introduction de mutations inhibitrices du complexe de dégradation de la β-caténine dansles cellules Huh7 induit une diminution de leur prolifération.De plus, dans les Huh7, la surexpression de STRN3 entraîne une diminution de l’activitéde la voie Wnt, parallèlement à une augmentation de l’activité nucléaire des protéinesYAP/TAZ soit une inhibition de la voie Hippo. En revanche, aucun effet sur l’activité desvoies Wnt et Hippo n’a été observé dans des lignées possédant des formes mutées de laβ-caténine. Nos données suggèrent que STRN3 agit sur la voie Wnt indépendamment ducomplexe de dégradation de la β-caténine. STRN3 intervient également sur la régulationde la voie Hippo, non pas en agissant sur les kinases MST1/2 et LATS1/2, mais via lecomplexe de dégradation de la β-caténine.Par ailleurs, nous avons cherché à déterminer l’impact de mutations du gène CTNNB1retrouvées dans l’HB au cours des différentes phases du développement embryonnairedu foie. Pour cela, nous avons initié le développement d’un nouveau modèle dedéveloppement embryonnaire chez le xénope permettant une expression contrôlée deforme mutée de la β-caténine retrouvée dans l’HB, afin d’étudier la transformation malignedes cellules hépatiques. Bien que le développement de ce modèle n’ait pas encore aboutien raison de difficultés techniques, il devrait présenter une étape importante dans l’étudedes mécanismes de carcinogenèse de l’HB.Cette thèse contribue à une meilleure compréhension du rôle de STRN3 dans les cancershépatiques, en particulier dans la modulation des voies de signalisation Wnt et Hippo, ainsique dans la régulation du cycle cellulaire
The aim of this thesis is to study the role of Striatin-3 in hepatoblastoma (HB) andhepatocellular carcinoma (HCC), two liver cancers characterized by genederegulations, chromosomal rearrangements, and mutations in genes related to theWnt/beta-catenin (Wnt) signaling pathway. These alterations lead to abnormalactivation of this pathway. Mutations in the gene encoding β-catenin (CTNNB1) arevery frequent in these cancers, with around 80% of cases in HB and 30% in HCC.The STRN3 protein belongs to a family of scaffold proteins, the striatins, which are partof the STRIPAK complex. This complex is known to regulate the phosphatase PP2A,which plays a role in multiple signaling pathways, such as the Hippo pathway and theMAPK cascade. In cancers, STRN3 has been associated with an oncogenic role bymodifying the action of PP2A, transforming this tumor suppressor protein into anoncogenic protein.Our results show that STRN3 is under-expressed in patient cohorts with HB, as wellas in cell lines derived from HB. STRN3 overexpression leads to a decrease in theproliferation of HB-derived cell lines and patient-derived lines (HB-PDX). However, ithas no effect on the proliferation of Huh7 cells, a line derived from HCC that has a wildtypeform of β-catenin. This reduction in HB cell line proliferation was confirmed by anirreversible cell cycle arrest. Furthermore, we showed that introducing mutationsinhibiting the β-catenin degradation complex in Huh7 cells induces a decrease in theirproliferation.Additionally, in Huh7 cells, STRN3 overexpression leads to a decrease in Wnt pathwayactivity, along with an increase in the nuclear activity of YAP/TAZ proteins,corresponding to inhibition of the Hippo pathway. In contrast, no effect of STRN3 onWnt and Hippo pathway activity was observed in lines with mutated forms of β-catenin.Our data suggests that STRN3 acts on the Wnt pathway independently of the β-catenindegradation complex. STRN3 also affects the regulation of the Hippo pathway, not byacting on the MST1/2, SAV1, and LATS1/2 kinases, but through the β-catenindegradation complex.Moreover, we sought to determine the impact of CTNNB1 gene mutations found in HBduring the different phases of liver embryonic development. To do this, we initiated thedevelopment of a new embryonic development model in Xenopus, allowing forcontrolled expression of the mutated form of β-catenin found in HB, to study themalignant transformation of hepatic cells. Although the development of this model hasnot yet been completed due to technical difficulties, it should represent an importantstep in studying the mechanisms of HB carcinogenesis.This thesis contributes to a better understanding of the role of STRN3 in liver cancers,particularly in the modulation of the Wnt and Hippo signaling pathways, as well as inthe regulation of the cell cycle

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Moretti, Julien. "Déubiquitinations dans la voie de signalisation Notch." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00726110.

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Abstract:

La signalisation Notch est une voie extrêmement conservée depuis Caenorhabditis elegans jusqu'aux mammifères en passant par Drosophila melanogaster. Elle est requise dès le développement embryonnaire et contrôle de nombreux processus comme la différenciation et le choix du destin cellulaire, la prolifération, ou encore le maintien de stocks de cellules souches et l'apoptose. La voie est basée sur l'activité du récepteur Notch, un hétérodimère transmembranaire qui est activé lors de contacts intercellulaires par la liaison de ses ligands qui sont également des protéines transmembranaires. Suite à cette activation, le récepteur subit une série de deux clivages protéolytiques internes, respectivement catalysés par une métalloprotéase ADAM et par le complexe multi-protéique γ-secrétase. Ce dernier clivage libère le domaine intracellulaire de Notch dans le cytoplasme, cette forme étant ensuite transportée dans le noyau où elle active directement la transcription des gènes cibles de la voie Notch en se liant à ses co-facteurs de transcription, CSL et Mastermind. Le récepteur Notch est régulé à diverses étapes par des processus d'ubiquitination : la monoubiquitination du récepteur Notch activé contrôle son clivage γ-secrétase, la polyubiquitination du récepteur Notch non activé et endocytosé contrôle sa dégradation dans les lysosomes. Les processus d'ubiquitination sont réversiblement contrôlés par la déubiquitination. Or, aucune déubiquitination n'a été identifiée dans la voie de signalisation Notch. Mon projet consistait à identifier les déubiquitinases - les enzymes responsables de la déubiquitination - impliquées dans les deux processus d'ubiquitination décrits précédemment. Nous avons pour cela mis au point deux cribles en immunofluorescence permettant de tester une banque de shRNA qui cible l'expression des 91 déubiquitinases connues ou putatives du génome humain. Le premier crible m'a permis d'identifier eIF3f, une sous-unité du facteur d'initiation de la traduction eIF3, comme une nouvelle protéine portant une activité déubiquitinase. eIF3f est recrutée au récepteur Notch via l'E3 ubiquitine ligase Deltex, et régule positivement la voie de signalisation Notch en déubiquitinant le récepteur Notch activé avant le clivage γ-secrétase, favorisant ainsi la production de la forme transcriptionnellement active de Notch. Par ailleurs, le deuxième crible a identifié plusieurs déubiquitinases candidates, dont le rôle dans la régulation du trafic intracellulaire du récepteur Notch non activé est en cours de validation.

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Moretti, Julien. "Deubiquitinations dans la voie de signalisation Notch." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066365.

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Abstract:

La signalisation Notch est une voie extrêmement conservée, requise dès le développement embryonnaire et contrôlant le choix du destin cellulaire au cours de nombreux processus. Elle est basée sur l’activité du récepteur transmembranaire Notch qui est activé lors de contacts intercellulaires par ses ligands également transmembranaires. Le récepteur subit alors deux clivages protéolytiques, par une métalloprotéase ADAM puis par le complexe multi-protéique γ-secrétase, qui libèrent le domaine intracellulaire de Notch dans le cytoplasme, forme qui est ensuite transportée dans le noyau où elle active la transcription de ses gènes cibles. Le récepteur Notch est régulé par divers processus d’ubiquitination : la monoubiquitination du récepteur Notch activé contrôle son clivage γ-secrétase, la polyubiquitination du récepteur Notch non activé contrôle sa dégradation lysosomiale. L’ubiquitination est réversiblement contrôlée par la déubiquitination. Or, aucune déubiquitination n’a été identifiée dans la voie de signalisation Notch. Mon projet consistait à identifier les déubiquitinases – enzymes catalysant la déubiquitination – impliquées dans les deux processus d’ubiquitinationde Notch, en utilisant deux cribles permettant de tester une banque de shRNA qui cible l’expression des 91 déubiquitinases humaines. Le premier m’a permis d’identifier eIF3f, une sous-unité du facteur d’initiation de la traduction eIF3, comme une nouvelle déubiquitinase qui agit sur Notch activé avant le clivage γ-secrétase. Par ailleurs, le deuxième crible a identifié plusieurs candidates, parmi lesquelles USP12 dont le rôle dans la régulation du trafic de Notch non activé est en cours de validation

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Fouillade, Charles. "Voie de signalisation Notch3 dans les artères cérébrales." Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05T043.

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Abstract:

Le gène Notch3 code pour un récepteur transmembranaire hétérodimérique exprimé principalement dans les cellules musculaires lisses des petites artères. Les travaux de ces dernières années ont montré que le récepteur Notch3 joue un rôle clé dans la physiologie et la pathologie des petites artères. Chez la souris, Notch3 est requis pour l’intégrité structurale et fonctionnelle des artères de résistance en contrôlant l’identité artérielle, la maturation postnatale des cellules musculaires lisses et le tonus myogénique des artères de résistance. Chez l’Homme, les maladies des petites artères cérébrales (MPAC) regroupent un ensemble hétérogène de maladies parmi lesquelles un petit pourcentage, probablement encore sous-estimée, est héréditaire. A ce jour, très peu de gènes responsables de formes familiales de MPAC ont été identifiés. CADASIL est la forme familiale la plus fréquente de MPAC causée par des mutations du gène NOTCH3. Il s’agit de mutations extrêmement stéréotypées siégeant dans les répétitions EGF qui constituent le domaine extracellulaire de Notch3. Les résultats du laboratoire suggèrent fortement que l’effet pathogène de ces mutations résulte de l’acquisition par le récepteur muté d’une nouvelle fonction. Les deux objectifs de ce travail ont été : 1°) Tester l’hypothèse qu’il existe des maladies des petites artères cérébrales causées directement par une modification de l’activité du récepteur Notch3 2°) Identifier les effecteurs du récepteur Notch3 dans le contexte du développement et de la maturation des artères cérébrales Nous avons identifié chez une patiente présentant une MPAC distincte de CADASIL une nouvelle mutation siégeant dans le domaine d’hétérodimérisation du récepteur Notch3. In vitro, la mutation L1515P induit une activation ligand indépendante du récepteur Notch3. L’analyse biochimique suggère que cette activation est causée par une déstabilisation du domaine d’hétérodimérisation de Notch3.Nous avons réalisé une analyse du transcriptome des artères caudales de souris Notch3-/- et Notch3+/+. Cette analyse a permis d’identifier un groupe de 17 gènes régulés par Notch3 dans l’artère caudale ou les artères cérébrales. L’invalidation du facteur de transcription CSL/RBPJK dans les cellules musculaires lisses, pendant la période postnatale immédiate, phénocopie les altérations structurales et moléculaires observées chez les souris Notch3-/-. L’administration chez la souris d’un inhibiteur pharmacologique de la voie Notch a permis d’identifier 6 gènes (Grip2, Nrip2, Kv1.5, Pgam2, Susd5, Xirp1), en plus de Notch3, dont l’expression dans les artères cérébrales est rapidement diminuée par ce traitement. Nous avons ensuite concentré nos efforts sur le gène Grip2 dont l’expression était la plus fortement diminuée dans les différents modèles d’inactivation de la voie Notch. Grip2 était jusqu’alors connu pour son interaction avec les récepteurs au glutamate dans les neurones. Nous avons montré que Grip2 était également exprimé dans les cellules musculaires lisses vasculaires et identifié une isoforme vasculaire régulée spécifiquement par Notch3/CSL/RBPJK. L’analyse des souris Grip2neo/neo, exprimant une protéine Grip2 tronquée dans sa partie N-terminale, a révélé une atteinte sélective du tonus myogénique des artères cérébrales.En conclusion, nous avons démontré l’existence d’une mutation activatrice de NOTCH3 associée à une MPAC chez l’Homme. Nos résultats indiquent que dans le contexte de la maturation des artères cérébrales, la fonction de Notch3 est médiée par le facteur de transcription CSL/RBPJK dans les cellules musculaires lisses durant la période postnatale immédiate. Nous avons identifié plusieurs nouveaux effecteurs potentiels de Notch3 et validé l’un d’entre eux, Grip2, pour son implication dans les réponses myogéniques des artères cérébrales. Nous proposons que des mutations dans les gènes codant pour ces effecteurs puissent rendre compte de certaines formes monogéniques de MPAC
Notch3 encodes a transmembrane receptor primarily expressed in arterial smooth muscle cells. Human and mouse genetics studies demonstrated that Notch3 is a key player in physiology and diseases of small vessels. Studies in mice revealed that Notch3 is required to generate functional arteries in regulating arterial differentiation, maturation of vascular smooth muscle cells and myogenic tone. Cerebral Autosomal Dominant Arteriopathy with Subcortical infarcts and Leukoencephalopathy (CADASIL) is the most frequent hereditary small vessels disease in human adults caused by NOTCH3 mutations. Pathogenic mutations lead to an odd number of cysteine residues within the NOTCH3 extracellular domain. Data from the laboratory suggest a model that invokes novel pathogenic roles from the mutant NOTCH3 protein. The main goals of this work are: 1°) To determine if there is small vessels disease caused by modification of Notch3 activity 2°) To identify Notch3 effectors involved in development and maturation of cerebral arteries We identified a novel heterozygous missense mutation (L1515P) in the heterodimerization domain of NOTCH3 in a patient with cerebral small vessel distinct from CADASIL. In vitro analysis showed that the L1515P mutant exhibits increased canonical NOTCH3 signaling in a ligand-independent manner. Biochemical analysis suggests that the mutation renders NOTCH3 hyperactive through destabilization of the heterodimer. Transcriptome analysis using tail arteries of Notch3-/- and Notch3+/+ mice identified a core set of 17 novel Notch3-regulated genes confirmed in tail or brain arteries. Postnatal deletion of RBP-Jκ in smooth muscle cells recapitulated the structural, functional, and molecular defects of brain arteries induced by Notch3 deficiency. Transient in vivo blockade of the Notch pathway with γ-secretase inhibitors uncovered, in addition to Notch3, 6 immediate responders, including the voltage-gated potassium channel Kv1.5, which opposes to myogenic constriction of brain arteries, and the glutamate receptor-interacting protein-2, with no previously established role in the cerebrovasculature. We identified a vascular smooth muscle cell isoform of Grip2. We showed that Notch3-RBP-Jκ specifically regulates this isoform. Finally, we found that cerebral arteries of glutamate receptor-interacting protein-2 mutant mice, which express an N-terminally truncated glutamate receptor-interacting protein-2, exhibited selective attenuation of pressure-induced contraction. In conclusion, we have demonstrated the existence of a NOTCH3 activating mutation associated with small vessels disease in human. Our results show that, in the context of cerebral arteries maturation, Notch3 functions are mediated by CSL/RBPJK transcription factor. We have identified several new Notch3 effectors and validated Grip2 as a novel regulator of myogenic tone in cerebral arteries. One can expect that mutations in these Notch3-regulated genes could be responsible of some monogenic form of small vessel diseases of the brain

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Moutal, Aubin. "CRMP5 dans les glioblastomes : fonction et voie de signalisation." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01056757.

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Abstract:

CRMP5 appartient à la famille des Collapsin Response Mediator Protein. Ces protéines sont très exprimées dans le cerveau en développement et les zones de neurogénèse chez l'adulte. Dans un contexte tumoral, l'expression des messagers de CRMP5 émergent dans un cluster de gènes associés à la plus faible survie des 20 patients suivis, et à la prolifération (Liang et al., 2005). Nous avons confirmé ces résultats dans une série rétrospective de 183 GBM où la forte expression protéique de CRMP5 est corrélée à une plus faible survie des patients (7.14 mois vs 10 mois) ; de plus les tumeurs exprimant fortement CRMP5 présentent un index mitotique 2 fois plus important (p = 0.0009) que les tumeurs exprimant faiblement CRMP5. Dans des cultures primaires ou lignées cellulaires de GBM nous montrons que la prolifération des glioblastomes est dépendante de l'expression de CRMP5 et de la voie de signalisation Notch. Des analyses en western blot démontrent que CRMP5 protège les récepteurs Notch de la dégradation lysosomale. Nous avons approfondi ce mécanisme et montré une nouvelle voie de régulation de Notch par CRMP5 qui par une interaction protéique avec Numb, l'inhibiteur de Notch empêche la dégradation du récepteur. Parallèlement, l'analyse en immunohistochimie sur les biopsies de GBM montrent une forte expression Notch et sa cible Hes1 dans les tumeurs exprimant fortement CRMP5. Ces résultats montrent la corrélation entre l'expression de CRMP5 dans les GBM, l'activation de la voie Notch et la faible survie des patients. Le ciblage de l'interaction CRMP5-Numb est une stratégie potentielle pour un traitement ciblé des glioblastomes

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Girardin, Stephen. "Régulation de la voie de signalisation intracellulaire JNK/SAPK." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2001. http://www.theses.fr/2001STR13179.

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Moreau, Manon. "Analyse de la voie de signalisation TOR chez arabidopsis thaliana." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA112328.

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Abstract:

TOR (Target Of Rapamycin) est une protéine kinase de la famille des PIKK (PhosphatidylInositol Kinase-related Kinases), essentielle à la survie, et très conservée entre les organismes eucaryotes. TOR fonctionne sous forme de deux complexes multiprotéiques, TORC1 et TORC2, intégrant des signaux environnementaux (les facteurs de croissance, l’état énergétique, les stress, la disponibilité en nutriments) et régulant la croissance via le contrôle de différentes fonctions cellulaires (la traduction, la biogenèse des ribosomes, la transcription, l’autophagie, le cycle cellulaire, le métabolisme, l’organisation du cytosquelette d’actine). TORC1 et TORC2 sont composés de protéines partenaires différentes et ont des rôles distincts au sein de la cellule. TORC1 comprend principalement les protéines TOR, RAPTOR et LST8, et TORC2 est composé de TOR, LST8 et RICTOR. Le génome d’Arabidopsis contient un gène Tor, deux gènes Lst8 et deux gènes Raptor mais pas d’orthologue du gène Rictor, ce qui remet en cause l’existence d’un complexe TORC2 chez les plantes. L’objectif de ma thèse est d’étudier les éléments en amont et en aval de la voie de signalisation TOR, et l’organisation du complexe TOR chez Arabidopsis. L’étude de la protéine LST8 a révélé un rôle très important de cette protéine dans la croissance, le développement, l’induction de la floraison, le métabolisme azoté et l’adaptation à des conditions de jour long. En parallèle, l’étude, via différentes approches, de lignées d’Arabidopsis permettant une inactivation inductible par l’éthanol de l’expression du gène Tor a permis de mettre en évidence des cibles et des fonctions cellulaires potentielles du complexe TOR chez Arabidopsis
The TOR (Target Of Rapamycin) protein is a serine/threonine kinase related to the PIKK (PhosphatidylInositol Kinase-related Kinases) family, which is essential for survival and highly conserved between eukaryotes. TOR functions in two multiprotein complexes, TORC1 and TORC2 which integrate various environmental signals like growth factors, energy level, stress, and nutrient availability, thus regulating growth by controlling translation, transcription, ribosome biogenesis, autophagy, cell cycle, metabolism, and actin cytoskeleton organization. TORC1 and TORC2 are composed of different protein partners and play different roles in cells. TORC1 is composed of TOR, RAPTOR and LST8 while TORC2 is formed by TOR, LST8 and RICTOR. The Arabidopsis genome contains a single Tor gene, two Raptor genes, and two Lst8 genes but no obvious ortholog of Rictor gene which raises the question of the presence of a second TOR complex in plants. The goal of my thesis is to better understand the upstream and downstream components of the TOR signalization pathway as well as organization of the TOR complex in Arabidopsis. The LST8 protein study revealed that LST8 plays an important role in growth, development, flowering, nitrogen metabolism and long-day acclimatation. We also used ethanol inducible Tor RNAi lines to perform transcriptomic, translatomic, metabolomic and cytologic studies and unveiled potential targets and cellular functions of the TOR complex in Arabidopsis

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Boutet, Nathalie. "Etudes moléculaires de la voie de signalisation Hedgehog chez l'homme." Bordeaux 2, 2003. http://www.theses.fr/2003BOR20990.

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Abstract:

Les hedgehogopathies regroupent un ensemble de syndromes dysmorphiques héréditaires caractérisés par une altération de la voie de signalisation Hedgehog (Hh). Dans cette voie, le gène patched code pour un récepteur qui agit en opposition à la protéine Hh. En l'absence d'une protéine PTCH fonctionnelle, les facteurs de transcription GLI sont surexprimés. Chez l'homme, ptch1 est muté dans le syndrome de Gorlin ou Naevomatose baso-cellulaire, et gli3 est muté dans les syndromes de Greig (GCPS) et de Pallister-Hall (PHS). Nous avons étudié le spectre des mutations géniques dans 151 échantillons de patients atteints du qyndrome de Gorlin et 52 échantillons de patients présentant les syndromes GCPS et PHS, par différentes techniques dont la dHPLC. 27 mutations du gène ptch1 ont été identifiées, dont une mutation récurrente dans l'exon 8, et 5 mutations du gène gli3. Alors qu'il semble exister une corrélation génotype/phénotype dans les syndromes de Greig et Pallister-Hall, aucune corrélation n'a été identifiée dans le syndrome de Gorlin. Les patients atteints du syndrome de Gorlin développent des carcinomes baso-cellulaires (CBC), dans lesquels la protéine GLI1 est surexprimée. Nous émettons l'hypothèse que des oligonucléotides leurres, contenant le site de fixation de GLI1 sur l'ADN, pourraient capturer GLI1, empêchant la transactivation de gènes essentiels de la voie Hh et inhiber ainsi la prolifération. Nous avons construit un système expérimental in vitro basé sur la transactivation d'un gène rapporteur, la luciférase, par l'expression des prtéines GLI1 et GLI3, permettant ainsi de visualiser la fixation de GLI sur l'ADN. Malheureusement les essais d'inactivation de la surexpression de GLI1 par les oligonucléotides leurres se sont révélés négatifs
"Hedgehogopathy" defines in human a group of hereditary dysmorphic syndromes with an alteration of the Hedgehog (Hh) pathway. In this pathway, the patched gene encodes a receptor that acts in opposition to Hh protein. In the absence of a functional PTCH protein, GLI transcription factors are overexpressed. In human, ptch1 gene mutations are involved in Gorlin syndrome or Nevoid Basal Cell Carcinoma Syndrome, and gli3 is mutated in Greig syndrome (GCPS) and Pallister-Hall syndrome (PHS). We have studied gene mutations spectrum in 151 patients cases of Gorlin syndrome, 52 cases of Greig and Pallister-Hall syndromes, with different techniques including dHPLC. 27 ptch1 mutations have been identified, where one recurrent mutation in exon 8, and 5 gli3 mutations. While a phenotype-genotype correlation seems to exist in Greig and Pallister-Hall syndromes, no correlation was found in the Gorlin syndrome. Patients affected by Gorlin syndrome generally develop basal cell carcinoma (BCC), in which GLI1 protein is overexpressed. We hypothesize that decoy oligonucleotides containing the GLI1 DNA binding site would effectively bind GLI1, preventing the transactivation of essential genes of the Hh pathway and thereby inhibiting proliferation. In this way, we design an experimental in vitro system, based on the transactivation of a reporter gene, the luciferase, which allows the visualisation of GLI DNA binding. However we were unable to demonstrate any inactivation of GLI1 by using decoy oligonucleotides

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Dubacq, Caroline. "Laprotéine kinase Snf1 et le facteur de transcription Mig3 sont impliqués dans une nouvelle voie de réponse aux stress génotoxiques chez la levure Saccharomyces cervisiae." Paris 11, 2003. http://www.theses.fr/2003PA112187.

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Abstract:

Les stress génotoxiques provoquent des dommages de l'ADN ou un blocage de la réplication cellulaire. Chez S. Cerevisiae, la voie de signalisation permettant l'arrêt du cycle cellulaire afin de réparer ces lésions comprend deux kinases essentielles Mec1 et Rad53, homologues des kinases ATR et Chk2 de Mammifères. Nous avons mis en évidence une interaction génétique entre l'allèle toxique RAD53-GFP et le gène MIG3 qui code pour un répresseur transcriptionnel de la famille MIG. La kinase Snf1, homologue des AMPK de Mammifères, est activée en absence de glucose dans le milieu et inactive le facteur Mig1. Nos résultats suggèrent que l'activité basale de la kinase Snf1 est nécessaire pour une tolérance optimale à l'hydroxyurée, un inhibiteur des ribonucléotide réductases (RNR), au méthyl méthanesulfonate (MMS), un agent alkylant de l'ADN, ou au cadmium, un métal génotoxique. La kinase Snfl n'est pas essentielle pour l'arrêt du cycle cellulaire ou l'induction des gènes RNR2-4 dépendante de Mec1 et Rad53. Par contre, Snf1 pourrait jouer un rôle dans la réparation de l'ADN ou la reprise de la réplication. Mig3 est une des cibles de Snf1 dans la réponse à ces composés génotoxiques ou lors d'une privation en glucose et les modifications post-traductionnelles de Mig3 sont en corrélation avec le degré d'activation de Snf1 selon les conditions. Une étude transcriptomique indique que les facteurs de transcription Yap1 et Aft1 semblent activés en présence d'hydroxyurée, favorisant probablement le maintien de l'homéostasie redox ou du fer. Nous supposons que la kinase Snf1 est nécessaire pour restaurer la fonctionnalité des RNR en présence d'hydroxyurée, de MMS ou de cadmium. D'autres éléments suggèrent que l'activité de la kinase participe aux remaniements de la structure chromatinienne ou à la régulation transcriptionnelle de gènes impliqués dans les fonctions vacuolaires, la dégradation spécifique des protéines ou la synthèse des lipides lors d'un stress génotoxique
Genotoxic stresses induce DNA damage or DNA replication block that can impair the transmission of genetic information. In the budding yeast S. Cerevisiae, the signal transduction pathway allowing cell cycle arrest and DNA repair is under the control of the essential Mec1 and Rad53 kinases, homologues of the ATR and Chk2 mammalian kinases. We show here a genetic interaction between a toxic RAD53-GFP allele and the MIG3 gene, encoding a transcriptional repressor of the MIG family. The Snf1 kinase, homologous to the mammalian AMPK, is activated during glucose starvation and is partly responsible for derepression of glucose repressed genes through phosphorylation of the Mig1 repressor. We demonstrate that the basal activity of Snf1 is required for an optimal tolerance to hydroxyurea, an inhibitor of ribonucleotide reductases (RNR) and thus DNA replication, to methyl methanesulfonate (MMS), a DNA alkylating agent, or to cadmium, a genotoxic metal. Snf1 is not required for cell cycle arrest or RNR2-4 transcriptional activation mediated by the Mec1 pathway. The Snf1 kinase may participate in DNA repair or in replication resumption. The Mig3 repressor is among the Snf1 targets in response to genotoxic stress or during glucose privation and dissimilar post-traductional modifications of Mig3 correlate with Snf1 kinase activity levels in both conditions. We determined through DNA microarray analysis that the Yap1 and Aft1 transcription factors seem to be activated during hydroxyurea exposure, probably enhancing redox and iron homeostasis that are two conditions required for RNR function. We suggest that Snf1 could be required to restore RNR function during hydroxyurea, MMS or cadmium induced genotoxic stress. Some evidence also suggests that Snf1 kinase activity is implicated in chromatin structure remodelling or in the transcriptional regulation of genes involved in vacuolar functions, in protein targeted degradation, or in membrane lipid synthesis during genotoxic stress

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Nivlet, Laure. "Etude de la voie de signalisation Artn/Gfrɑ3 dans le pancréas." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ087/document.

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Abstract:

L’identification de signaux impliqués dans la formation des cellules endocrines pancréatiques permettra d’apporter de nouvelles connaissances sur les mécanismes régissant la différenciation des cellules endocrines et de nouvelles applications dans le domaine de la génération de cellules sécrétrices d’insuline afin de traiter des patients atteints de diabète. C’est dans ce contexte que nous avons étudié l’expression et la fonction du récepteur membranaire Glial cell line derived neurotrophic factor Family Receptor α 3 (Gfrα3) et de son ligand Artemin au cours du développement du pancréas et dans le pancréas adulte chez la souris. Des techniques de PCR quantitatives, d’hybridations in situ et d’immunofluorescences nous ont permis de caractériser l’expression de Gfrα3, d’Artn mais aussi d’autres ligands et récepteurs de cette famille. Nous avons aussi utilisé un modèle de souris perte de fonction et générer un modèle de souris transgénique sur exprimant Artn dans le pancréas afin d’étudier la fonction de la voie de signalisation Artn/Gfrα3 dans le pancréas. Nous avons ainsi découvert que le récepteur Gfrα3 est exprimé au cours du développement du pancréas par les progéniteurs endocrines, les cellules insulines-positives et glucagon-positives ainsi que les cellules embryonnaires neuronales. Au stade adulte, Gfrα3 n’est pas exprimé par les cellules à insuline et est exprimé par quelques cellules à glucagon. A ce stade, son expression est aussi observée au niveau des cellules gliales, ainsi que des neurones du système nerveux sympathique et parasympathique. Les différentes expériences de perte et de gain de fonction réalisées afin de comprendre le rôle pancréatique de Gfrα3, ont révélé que ce récepteur n’est pas essentiel à la différenciation et au maintien des cellules endocrines, ni à la formation et au maintien de l’innervation endocrine. En conclusion, nous avons découvert et caractérisé un nouveau marqueur de surface exprimé dans les cellules endocrines pancréatiques en développement. Cette caractéristique pourrait s’avérer utile pour purifier par cytométrie en flux et étudier des sous populations cellulaires générées au cours des protocoles de différentiation in vitro visant à générer de nouvelles cellules sécrétrices d’insuline pour une thérapie cellulaire du diabète
The generation of therapeutic ß-cell from human embryonic stem cells relies on the identification of growth factors that faithfully mimic pancreatic ß-cell development in vitro. In this context, the aim of the study was to determine the expression and function of a novel endocrine progenitor surface marker, the Glial cell line derived neurotrophic factor receptor α3 (Gfrα3) and its ligand Artemin in islet cell development and function.RT-PCR, In situ hybridization and immunochemistry were used to characterize the expression of Gfra3 and Artn mRNAs and proteins as well as of other members of the GDNF receptor and ligand family. We used Gfra3-deficient mice to study Gfrα3 function and generated a transgenic mice over expressing Artn in the embryonic pancreas to study Artn function. We found that Gfrα3 is expressed at the surface of a subset of Ngn3-positive endocrine progenitors as well as of embryonic α- and ß-cells, while Artn is found in the pancreatic mesenchyme. Adult ß-cell lack Gfrα3, but rare ß cell express the receptor. Gfrα3 is also found in parasympathetic and sympathetic intra islets neurons as well as in glial cell in the embryonic and adult pancreas. The loss of Gfrα3 or overexpression of Artn has no impact on Ngn3-and islet cell formation and maintenance in the embryo. Islet organisation and innervation as well as glucose homeostasis is normal in Gfrα3-deficient mice. Our data show that Gfrα3 is dispensable for islet cell differentiation and innervation suggesting functional redundancy. Gfrα3 could be instrumental as a surface marker for antibody–mediated sorting and characterization of relevant cell population during islet cell differentiation

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Munier-Bousseton, Fabienne. "Neuroblastome, résistance in vivo à l'irinotecan et voie de signalisation ALK." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00829102.

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Abstract:

Les neuroblastomes, même de haut risque répondent bien à la chimiothérapie initiale mais deviendront fréquemment résistants au traitement. Les inhibiteurs de topoisomérase I représentent un outil thérapeutique important dans la prise en charge des neuroblastomes réfractaires. Pour étudier la résistance aux inhibiteurs de topoisomérase I acquise dans un contexte thérapeutique, un modèle murin de neuroblastome résistant au CPT-11 a été développé. La chimiorésistance est connue comme un phénomène multifacoriel. Nous avons donc utilisé plusieurs approches pour mieux caractériser les mécanismes à l'origine de la résistance dans notre modèle. Une approche génomique a permis d'identifier la dérégulation de la voie de signalisation formée du récepteur ALK et de deux ligands PTN et MDK. Alors que ALK est décrit comme gène majeur de prédisposition au neuroblastome, principalement par le biais de mutations activatrices, nous avons démontré que l'activation du récepteur survenait par des mécanismes alternatifs aux mutations dans une large majorité de cas et participerait à l'initiation de la maladie. En revanche, nous n'avons pas pu prouver l'implication de ce récepteur dans la progression de la maladie ou dans sa réponse au traitement. Il semble que la régulation de ALK soit complexe et le rôle exact de ce récepteur dans la progression du neuroblastome reste à établir. En revanche, nous avons démontré l'importance du ligand MDK dans la régulation de l'expression et de l'activation de ALK ainsi que dans le contrôle de la survie des cellules neuroblastiques. Inhiber cette cytokine représente une stratégie thérapeutique intéressante, complémentaire des thérapies anti-ALK, actuellement en développement clinique dans le neuroblastome. D'autre part, la caractérisation phénotypique du modèle a permis de mettre en évidence une signalisation altérée des dommages à l'ADN associée à une instabilité génétique accrue dans les tumeurs résistantes. Celles-ci présentent également une modification de progression dans le cycle cellulaire et une proportion plus importante de cellules quiescentes. Au final, ce travail a permis d'identifier différents mécanismes de résistance qui représentent des marqueurs de réponse au traitement et des cibles thérapeutiques intéressantes dans le neuroblastome.

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Bousseton, Munier. "Neuroblastome, résistance in vivo à l'irinotecan et voie de signalisation ALK." Thesis, Paris 11, 2012. http://www.theses.fr/2012PA11T025/document.

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Abstract:

Les neuroblastomes, même de haut risque répondent bien à la chimiothérapie initiale mais deviendront fréquemment résistants au traitement. Les inhibiteurs de topoisomérase I représentent un outil thérapeutique important dans la prise en charge des neuroblastomes réfractaires. Pour étudier la résistance aux inhibiteurs de topoisomérase I acquise dans un contexte thérapeutique, un modèle murin de neuroblastome résistant au CPT-11 a été développé. La chimiorésistance est connue comme un phénomène multifacoriel. Nous avons donc utilisé plusieurs approches pour mieux caractériser les mécanismes à l'origine de la résistance dans notre modèle. Une approche génomique a permis d'identifier la dérégulation de la voie de signalisation formée du récepteur ALK et de deux ligands PTN et MDK. Alors que ALK est décrit comme gène majeur de prédisposition au neuroblastome, principalement par le biais de mutations activatrices, nous avons démontré que l'activation du récepteur survenait par des mécanismes alternatifs aux mutations dans une large majorité de cas et participerait à l'initiation de la maladie. En revanche, nous n'avons pas pu prouver l'implication de ce récepteur dans la progression de la maladie ou dans sa réponse au traitement. Il semble que la régulation de ALK soit complexe et le rôle exact de ce récepteur dans la progression du neuroblastome reste à établir. En revanche, nous avons démontré l'importance du ligand MDK dans la régulation de l'expression et de l'activation de ALK ainsi que dans le contrôle de la survie des cellules neuroblastiques. Inhiber cette cytokine représente une stratégie thérapeutique intéressante, complémentaire des thérapies anti-ALK, actuellement en développement clinique dans le neuroblastome. D’autre part, la caractérisation phénotypique du modèle a permis de mettre en évidence une signalisation altérée des dommages à l'ADN associée à une instabilité génétique accrue dans les tumeurs résistantes. Celles-ci présentent également une modification de progression dans le cycle cellulaire et une proportion plus importante de cellules quiescentes. Au final, ce travail a permis d'identifier différents mécanismes de résistance qui représentent des marqueurs de réponse au traitement et des cibles thérapeutiques intéressantes dans le neuroblastome
Neuroblastoma, including high-risk cases, show a good initial response to chemotherapy but will frequently become resistant to treatment. Topoisomerase I inhibitors represent an important therapeutic option for refractory neuroblastoma. To study the reisitance to topoisomerase I inhibitors acquired in a therapeutic setting, we developed in vivo a resistant model to irinotecan (CPT-11). Chemoresistance is known as a multifactorial phenomenon. We have therefore used several approaches to better characterize mechanisms leading to resistance in our model. A genomic approach enabled us to identify the deregulation of a signaling pathway, constituted with a receptor (ALK) and two lignads (PTN and MDK). While ALK is decsribed as a major neuroblastoma predisposition gene, mainly through activating mutations, we demonstrated that the activation of ALK occurs via mechanisms others than mutation in a large majority of cases. Moreover ALK activation is an important event in the initiation of the disease. However, we couldn’t prouve the implication of the receptor in the progression of the disease or in its response to treatment. It seems that the regulation of ALK is complex and its precise role in the progression of neuroblastoma remains to be precisely defined. Nevertheless, we have demonstrated the importance of MDK, one of ALK ligands in the regulation of the expression and activation of ALK as well as in the control of the neuroblastoma cells survival. The inhibition of the cytokine, MDK represents an interesting therapeutic strategy, complementary to anti-ALK therapies, currently in clinical development in neuroblastoma. On another hand, the phenotypic characterization of the model, showed an alteration of the signaling of DNA damage and an increased genomic instability in the resistant tumors. Those tumors also harbor a modification in the cell cycle progression, particularly an increased proportion of quiescent cells. Finally, this work enables us to identify several resistance mechanism that represent markers of response to chemotherapy and relevant therapeutic targets in neuroblastoma

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Deny, Ludovic. "Nouveaux inducteurs covalents de la voie de signalisation Keap1/Nrf2/ARE." Thèse, Université de Sherbrooke, 2016. http://hdl.handle.net/11143/9858.

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Abstract:

Le stress électrophile et oxydant est un souci grandissant pour la santé avec l'évolution de nos modes de vie. L'exposition aux ultraviolets, à la pollution, aux substances carcinogènes, à la fumée de cigarette et la pratique intensive d'activités sportives sont autant de causes de stress oxydant pour l'organisme. Ces dommages sont associés à plusieurs maladies et conditions pathologiques telles que cancers, diabètes, infections pulmonaires et maladies neurodégénératives. L'élément de réponse antioxydant (ARE) est un des composants principaux des défenses de la cellule contre ce phénomène. Ce promoteur agit sous le contrôle de Nrf2 (Nuclear factor erythroid 2-related factor 2). Une stratégie populaire pour l'activation de ce mécanisme est l'utilisation d'inducteurs covalents. Ces molécules agissent par la formation de liens covalents avec les nombreux résidus cystéine de Keap1 (Kelch-like ECH-associated protein 1), une protéine chaperonne qui contrôle l'activité de Nrf2. Cette thèse présente la synthèse, les propriétés biologiques et l'étude des relations structure-activité d'une librairie d'électrophiles capables d'induire la transcription des gènes cibles de la voie de signalisation Keap1/Nrf2/ARE. Le premier volet fait état de la comparaison d'une variété d'électrophiles simples pour étudier les préférences de la cible. Le deuxième volet montre que la présence d'une seconde fonction capable de piéger un résidu cystéine fournit des analogues très puissants.

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Guillemain, Ghislaine. "Étude des premières étapes d'une nouvelle voie de signalisation du glucose." Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077252.

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PELICANO, LUIS. "Modulation de la voie de signalisation des interferons par l'acide retinoique." Paris 6, 1998. http://www.theses.fr/1998PA066278.

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Abstract:

Les ifn, essentiellement connus pour leur activite antivirale, possedent egalement des effets antiproliferatifs, immunoregulateurs et differenciants dont les proprietes ont ete utilisees dans le traitement de la tricholeucocytose. L'acide retinoique (atra) est utilise dans l'induction de remissions chez des patients atteints de leucemie aigue promyelocytaire (lam3) et pour l'acne grave. Ces donnees ont conduit a tester l'effet de la combinaison des deux sur differentes lignees cellulaires. Les effets biologiques observes lors d'un traitement combine ont ete superieurs par rapport aux monotraitements dans des lignees d'origine diverse (myeloide, renale, uterine, mammaire). Afin de comprendre les bases de la cooperation entre ifn et atra, nous avons analyse les mecanismes moleculaires potentiellement impliques. L'etude sur deux lignees cellulaires (hl-60, wish) a montre que le niveau de l'activite 2-5 synthetase (2-5oas), pml, sp100, pkr est accru en presence d'atra. L'atra seul induit un effet antiproliferatif et un effet antiviral vis-a-vis du vsv. Un double traitement est accompagne d'un effet cooperatif sur les trois phenomenes. L'utilisation d'anticorps anti-ifn a permis de montrer que l'arta induit la secretion d'ifn-. Les donnees publiees suggerent qu'irf-1, un candidat au role d'inducteur d'ifn, est directement induit par l'atra. Nous avons donc etudie le promoteur d'irf-1. Un site gas est decrit et un site potentiel de reponse a l'atra a ete localise en amont du site gas. Nos resultats suggerent que le site gas est suffisant pour expliquer l'effet de l'atra sur le promoteur d'irf-1. Des experiences de retards sur gel montrent que le pretraitement a l'atra augmente la fixation de complexes stat 1 sur un site gas. Cela s'explique par l'induction de stat 1 par l'atra. Par ailleurs, nous avons montre que la proteine pml, impliquee dans la translocation t(15 ; 17) qui fusionne une partie de son gene avec celui du recepteur aux retinoides rar, est inductible par les ifn. Le gene chimere pml/rar est sous le controle du promoteur de pml, et donc inductible par les ifn. Cette donnee permet de mettre en garde contre un traitement combine atra/ifn dans le cas particulier de la lam3, soulignant ainsi le role complementaire des test cliniques et des etudes in vitro.

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Amsellem-Ouazana, Delphine. "Implications de la voie de signalisation ERBB dans la carcinogénèse urothéliale." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N13S.

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Abstract:

Le cancer de la vessie, 5è cause de mortalité par cancer en France et 4è aux Etats-Unis, voit son incidence croître depuis 30 ans 1-3. Le carcinome à cellules transitionnelles, forme la plus fréquente des cancers de vessie, prédomine nettement chez l’homme. Les tumeurs vésicales se répartissent en tumeurs superficielles (60 à 70 % des cas lors du diagnostic) et en tumeurs infiltrantes. Les tumeurs superficielles posent deux problèmes évolutifs différents mais pouvant s’associer : le risque de récidive et/ou de progression. Les tumeurs superficielles sont cependant, dans l’immense majorité des cas, accessibles à un traitement conservant la vessie 4, 5. Aux tumeurs superficielles on peut opposer les tumeurs infiltrantes de vessie. Celles-ci sont soit infiltrantes au moment du diagnostic (20 à 30 % des cas), soit résultent de l’évolution vers l’infiltration d’une tumeur
ERBB-driven growth pathway has been implicated in most human epithelial malignancies including transitional cell carcinoma (TCC) of the bladder. Using quantitative real-time RTPCR we showed the interest of simultaneously quantifying the mRNA expression levels of the four ERBB and their eleven ligand genes in a series of bladder TCC. We were able to show an excellent correlation between TT-PCR results and immunohistochemistry for the evaluation of ErbB2 overexpression. We also confirmed that in bladderTCC,ERBB2 gene amplification only accounts for a small number of protein

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Fattet, Laurent. "TIF1gamma, nouveau régulateur négatif de la voie de signalisation du TGFbeta." Thesis, Lyon 1, 2013. http://www.theses.fr/2013LYO10038/document.

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Abstract:

Le TGFbeta intervient dans la régulation de nombreux processus cellulaires comme la prolifération, la différenciation, la migration, l'apoptose, du développement embryonnaire jusqu'à la vie adulte. Le TGFbeta est aujourd'hui bien décrit pour son rôle de suppresseur de tumeur de par ses activités anti-prolifératives et pro-apoptotiques, en particulier sur les cellules épithéliales. Cependant, au cours de la progression tumorale, le TGFbeta devient un promoteur de tumeur en favorisant l'angiogenèse, l'échappement de la tumeur vis-à-vis du système immunitaire et en induisant la transition épithélio-mésenchymateuse. Après fixation du ligand TGFbeta , le complexe de récepteurs active les protéines cytoplasmiques Smad2 et Smad3 qui s'associent à Smad4 pour former le complexe transcriptionnel qui se transloque alors dans le noyau pour réguler la transcription de nombreux gènes cibles. Récemment, la protéine TIF1gamma a été décrite pour intervenir dans la régulation négative de la voie du TGFbeta , en monoubiquitinant Smad4 ou en interagissant avec Smad2/3 en compétition avec Smad4. Cette voie de signalisation devant être finement contrôlée pour cibler son action en fonction du contexte cellulaire, nous analysons ici la régulation des interactions fonctionnelles entre la voie canonique du TGFbeta et la protéine TIF1gamma. Dans cette étude, nous montrons que TIF1gamma agit comme un régulateur négatif des fonctions de Smad4 dans la voie de signalisation du TGFbeta au cours du processus de transition épithélio-mésenchymateuse et au cours de la différenciation terminale des cellules épithéliales mammaires et de la lactation. Nous étudions également la SUMOylation de TIF1gamma comme nouveau niveau de régulation de la réponse cellulaire au TGFbeta . Nous avons ainsi caractérisé les sites fonctionnels de SUMOylation de TIF1gamma et montré que cette modification post-traductionnelle inhibe la formation du complexe transcriptionnel Smad et est nécessaire pour réguler temporellement la résidence de Smad4 au niveau du promoteur de gènes cibles du TGFbeta . Nos résultats montrent le rôle important de la SUMOylation de TIF1gamma dans la régulation de la transition épithélio-mésenchymateuse induite par le TGFbeta . En conclusion, notre travail met en avant le rôle majeur de TIF1gamma dans la régulation de la réponse transcriptionnelle au TGFbeta . De plus, nous montrons que la SUMOylation de TIF1gamma est nécessaire à son activité répressive sur Smad4
The cytokine TGFbeta regulates several cellular processes such as proliferation, differentiation, migration and apoptosis, from embryonic development to adulthood. TGFbeta is well described for its tumor suppressor role through antiproliferative and proapoptotic activities, in particular in epithelial cells. During tumor progression however, TGFbeta becomes a tumor promotor, favoring angiogenesis, immune suppression and inducing the epitheliomesenchymal transition. Binding of TGFbeta ligand to its receptors activate cytoplasmic messenger Smad2 and Smad3 to complex with Smad4 and shuttle into the nucleus to regulate TGFbetatarget genes expression. Recently, TIF1gamma has been described as a new negative regulator of TGFbeta signaling, through monoubiquitination of Smad4 or direct competition with Smad4 to bind activated Smad2/3. This signaling pathway has to be finely tuned to target an action dependent on a cellular context, which is why we analyze here the regulation of functional interactions between the TGFbeta canonical signaling and TIF1gamma. In this study, we show that TIF1gamma acts as a negative regulator of Smad4 functions in TGFbetasignaling during the epithelio-mesenchymal transition and during terminal differentiation of mammary epithelial cells and lactation. We are also interested in studying TIF1gamma SUMOylation as additional level of regulation of cell response to TGFbeta. Thus we characterized four functional SUMOylation sites in TIF1gamma and we found that this post-translational modification inhibits the formation of Smads transcriptional complex and is needed to temporally restrict Smad4 residence on the promoter of TGFbetatarget genes. Our results show the critical role of TIF1gamma SUMOylation in the regulation of TGFbeta- induced epithelio-mesenchymal transition. As a conclusion, our study unveils the major role of TIF1gamma in the regulation of TGFbeta transcriptional responses. Moreover, we show that TIF1gamma requires SUMOylation to exert its repressive activity on TGFbetasignaling

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Barrier, Marjorie. "Intérêt thérapeutique de la voie de signalisation STAT3 dans l'hypertension artérielle pulmonaire." Thesis, Université Laval, 2014. http://www.theses.ulaval.ca/2014/30208/30208.pdf.

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Abstract:

L’hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est une pathologie affectant les artères pulmonaires distales, qui s’obstruent progressivement. Cette obstruction est à l’origine d’une augmentation de la résistance vasculaire pulmonaire et de la pression artérielle pulmonaire qui entrainent alors une hypertrophie ventriculaire droite, puis une défaillance cardiaque droite, dont la majorité des patients HTAP décèdent. Les traitements restent inefficaces pour améliorer la survie des patients. L’obstruction des artères pulmonaires est principalement due à la prolifération et une résistance à l’apoptose des cellules musculaires lisses des artères pulmonaires (CMLAP). Ce phénotype n’est pas sans rappeler un phénotype cancéreux. D’ailleurs, le laboratoire a montré qu’un facteur connu pour être surexprimé dans le phénotype cancéreux, NFATc2, est aussi impliqué dans l’HTAP. Ce facteur joue en effet un rôle dans la prolifération et dans la résistance à l’apoptose, en régulant le taux de calcium intracellulaire, le courant potassique (prolifération) et le potentiel de membrane mitochondrial (résistance à l’apoptose). Des travaux plus récents ont également montré le rôle de STAT3 dans l’implication de la surexpression de NFATc2. Nous avons montré dans le chapitre 2 que la molécule d’origine végétale plumbagin (PLB), connue comme étant un inhibiteur de la voie STAT3 dans certaines lignées cellulaires cancéreuses, permet d’inhiber l’augmentation de l’expression et de l’activation de STAT3 des CMLAP. Cette inhibition entraine également la diminution de l’expression et de l’activation de NFATc2, une diminution de la prolifération et de la résistance à l’apoptose. Les mêmes résultats ont pu être répétés sur 2 modèles différents d’HTAP (monocrotaline -MCT- et SUGEN 5416+hypoxie). En effet, le traitement au PLB per os permet de prévenir (MCT) et de renverser (MCT et SU5416) l’HTAP, en diminuant la prolifération et la résistance à l’apoptose. Durant ces travaux de doctorat, j’ai ainsi pu mettre en évidence que le ciblage de la voie STAT3/NFATc2 par le PLB pourrait grandement bénéficier aux patients souffrant d’HTAP de par son effet sur la prolifération, la résistance à l’apoptose et probablement aussi par l’inhibition de l’effet Warburg dans les CMLAP de patients HTAP ainsi que dans 2 modèles pertinents d’HTAP, en prévention et en réversion.
Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease affecting distal pulmonary arteries, which progressively display obstruction. This obstruction is due to the increase of vascular pulmonary resistance and pulmonary arterial hypertension, which thus lead to a right ventricular dysfunction and then to a right heart failure from which most of the patients die. Treatments are still inefficient to improve patients’ outcome. Pulmonary arteries’ obstruction is mainly due to the proliferation and the apoptosis resistance of the pulmonary arteries smooth muscle cells (PASMC), reminding cancer phenotype. Interestingly, the laboratory has demonstrated that NFATc2, a well known overexpressed transcription factor in cancer, is involved in pulmonary arterial hypertension as well. This factor is involved in both proliferation and apoptosis resistance by regulating intracellular calcium rate, potassium current (proliferation) and mitochondrial membrane potential (apoptosis resistance). Earlier results showed that STAT3 is responsible for the overexpression of NFATc2. In Chapter 2, we demonstrated that the vegetal molecule plumbagin (PLB) inhibits STAT3 pathway overexpression and over-activation in PASMC. This inhibition leads to the decrease of the overexpression and over-activation of NFATc2, a proliferation and apoptosis resistance decrease. The same experiments were done in 2 different models of PAH, (monocrotaline –MCT- and SUGEN 5416+hypoxie). Indeed, per os PLB treatment prevents (MCT) and reverses (MCT and SU5416) PAH, by decreasing the proliferation and the apoptosis resistance. During my doctorate work, I was able to highlight that targeting STAT3/NFATc2 by PLB could greatly benefit to PAH patients, by its action on proliferation, apoptosis resistance and probably on the Warburg effect in the human PASMC as well as in 2 relevant PAH animal models, in prevention and reversion.

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Bedel, Aurélie. "Signalisation mitogène des agents pro-athérogènes, implication de la voie béta-caténine." Toulouse 3, 2010. http://www.theses.fr/2010TOU30149.

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Les maladies cardiovasculaires constituent un problème majeur de santé publique. L'athérosclérose en est la principale étiologie. La prolifération des cellules musculaires lisses (CML) vasculaires est un des éléments clé du processus complexe de l'athérogenèse. Dans ce travail, nous mettons en évidence l'implication de la voie de signalisation E-cadhérine/beta-caténine dans l'effet mitogène des LDL oxydées sur les CML d'aorte humaine. Nous proposons plusieurs mécanismes d'activation de cette voie : clivage de la E-cadhérine, dissociation du complexe E-cadhérine/ beta-caténine et inhibition de la dégradation protéasomale de la beta-caténine. Les métalloprotéases matricielles, les tyrosine kinases et la sphingosine-1-phosphate sont impliquées. L'analyse de l'expression de la ß-caténine dans des plaques d'endartérectomies humaines confirme l'implication de cette voie de signalisation dans l'athérogenèse en montrant sa forme active dans les plaques. Par ailleurs, nous montrons l'implication d'un complexe multiprotéique composé de uPAR, MT1-MMP, MMP-2 et de l'intégrine avß3 dans la signalisation mitogène de l'uPA. L'ensemble de ces travaux nous permet de mieux comprendre certains aspects de la physiopathologie de l'athérosclérose
Cardiovascular diseases are an important healthcare problem. Atherosclerosis is the main etiology. During atherogenesis, vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation, and fibrous cape build-up are essential. In this study, we show for the first time E-cadherin/beta-catenin/Tcf4 pathway implication in human VSMC proliferation elicited by oxidized LDL. We highlight several mechanisms for ß-catenin activation by oxidized LDL: E-cadherin shedding, and dissociation of beta-catenin/E-cadherin complex and decrease of its proteasomal degradation. Metalloproteinases, sphingolipids pathway and tyrosine kinases, known to be activated by oxidized LDL, are implicated in this activation. These results on cell cultures are strengthening by immunohistochemistry staining with anti-active ß-catenin antibody on human carotid endarterectomies. These results establish an important role for ß-catenin activation in atherogenesis. In addition, we focus on mitogenic property of uPA, implicated in atherogenesis. We report that neutral sphingomyelinase-2 activation by uPA is mediated in a multi-protein complex with uPAR, MT1-MMP, MMP-2 and avß3 integrin. This complex formation seems to be necessary for ERK1/2 activation and cell proliferation induced by uPA. These data help us to better understand some aspects of atherosclerosis physiopathology

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Morice, Sarah. "Rôle de la voie de signalisation Hippo dans le développement des ostéosarcomes." Thesis, Nantes, 2019. http://www.theses.fr/2019NANT1037.

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L'ostéosarcome (OS) est la tumeur osseuse primitive maligne la plus fréquente chez les enfants et les adolescents dont le pronostic reste mauvais, surtout lorsque des métastases sont présentes au diagnostic. Des analyses transcriptomique de biopsies de patients atteint d’OS révèlent la présence d’une signature génique de la voie de signalisation Hippo dans l’OS. Son principal effecteur, YAP, est connu pour son rôle oncogène dans un certain nombre de cancer. Afin d’étudier son rôle dans le développement de l’OS, nous avons développé une approche moléculaire en surexprimant une protéine YAP capable ou non d’interagir avec son facteur de transcription TEAD. Des expériences in vitro et in vivo révèlent le rôle crucial de TEAD dans la prolifération cellulaire et la croissance tumorale médiée par YAP. De plus nous avons montré que la surexpression de YAP augmente la migration cellulaire in vitro et la dissémination métastatique in vivo, indépendamment de son interaction avec TEAD. Des analyses transcriptomique ont montré un enrichissement de gènes liés à la transition épithéliaux-mésenchymateuse, à la migration cellulaire et au TGF-β dans les cellules surexprimant YAP, quel que soit sa capacité à interagir avec TEAD. Des expériences de PLA et d’immunoprécipitation montrent une interaction YAP/Smad3, le principal effecteur de la voie du TGF-β. A l’aide d’un inhibiteur spécifique du TGF-β, le SD-208, nous montrons le rôle essentiel de la signalisation TGF-β/Smads dans la dissémination métastatique médiée par YAP. Ces résultats ont défini le rôle spécifique de TEAD et Smad3 dans la progression tumorale de l’OS, et identifié YAP comme un acteur central du développement de l’OS. Ainsi, YAP pourrait être une cible thérapeutique prometteuse dans l’OS
Osteosarcoma (OS) is the most common primary malignant bone tumour in children and adolescents for whom the prognosis remains poor, especially when metastases are present at diagnosis. Transcriptomic analyses of biopsies from OS patients reveal the presence of an Hippo signalling pathway gene signature in the OS. Its main effector, YAP, is known for its oncogenic role in a number of cancers. In order to study its role in the development of OS, we developed a molecular approach by overexpressing YAP that could or not interact with its transcription factor TEAD. In vitro and in vivo experiments revealed the crucial role of TEAD in cell proliferation and tumor growth mediated by YAP. In addition, we showed that overexpression of YAP increases cell migration in vitro and metastatic dissemination in vivo, regardless of its interaction with TEAD. Transcriptomic analysis showed a genes enrichment related to epithelial-mesenchymal transition, cell migration and TGF-β in cells overexpressing YAP, regardless of its ability to interact with TEAD. PLA and immunoprecipitation experiments showed YAP/Smad3 interaction, the main effector of the TGF-β pathway. Using a specific inhibitor of TGF-β, SD-208, we demonstrated the essential role of TGF- β/Smads signalling in YAP-mediated metastatic dissemination. These results defined the specific role of TEAD and Smad3 in the tumor progression of OS, and identified YAP as a central actor in the development of OS. Thus, YAP could be a promising therapeutic target in OS

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Ragot, Hélène. "Rôle de la voie de signalisation de Notch3 dans le myocarde adulte." Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066323/document.

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Abstract:

Notch3, récepteur exprimé dans les cellules musculaires lisses (CML), est impliqué dans la maturation des artères de résistance. La délétion de Notch3 aggrave les atteintes cardiaques induites par une hypertension artérielle (HTA), mais les mécanismes impliqués sont inconnus. Mes objectifs étaient de déterminer le rôle de la voie Notch3 dans le myocarde lors du remodelage cardiovasculaire induit par une surcharge de pression ou de débit. Nous avons étudié l'impact de l'absence de Notch3 lors l'HTA induite par l'Angiotensine II via deux modèles de souris (1- Notch3 KO et 2- invalidation induite de cette voie dans les CML, via RBPJk). Nous montrons que la voie Notch3-RBPJk est nécessaire à l'intégrité coronaire à l'âge adulte. Lors d'une HTA, son absence altère la réponse vasculaire et la microcirculation conduisant à un stress oxydant et une inflammation cardiaque. Puis, nous avons exploré les conséquences d'une surcharge de débit (exercice physique chez le mâle ou gestation chez la femelle Notch3-/-). Les mâles Notch3-/- ne présentent pas de signes de réponse angiogénique après 5 semaines de course, mais ce protocole a un effet bénéfique sur l'hypertrophie cardiaque. En parallèle, l'analyse des coeurs femelles Notch3-/- montre un défaut artériolaire similaire aux mâles Notch3-/-, mais sans hypertrophie ventriculaire. En post-partum, la densité capillaire augmente chez ces souris. Alors que le c¿ur post-partum se caractérise par un environnement anti-angiogénique, ces voies ne sont pas activées chez les femelles Notch3-/-. Ces résultats démontrent que la voie Notch3 est nécessaire à la réponse adaptative du réseau coronaire en réponse à une surcharge de pression ou de débit
Notch3, a receptor expressed in the smooth muscle cells (SMC), is involved in the maturation of resistance arteries. Notch3 knockout aggravates cardiac disorders induced by hypertension (HT), however mechanisms are unknown. My objectives were to determine the role of Notch3 signaling during cardiovascular remodeling induced by pressure or volume overload. First, we studied the Angiotensin II-induced HT consequences on two mouse models (1- congenital: Notch3 KO or 2- induced invalidation of Notch signaling in SMC via RBPJκ). We showed that Notch3-RBPJκ signaling is required for the maintenance of coronary structure in the adult. During HT, Notch3 signaling defect impaired the media hypertrophic response and the microvasculation leading oxidative stress and inflammation. Then we aimed to define the consequences of volume overload (moderate exercise training in males or pregnancy in female Notch3-/- mice). The Notch3-/- males doesn’t exhibit any signs of angiogenic responses in the microvascular compartment after 5 weeks of exercise training, however this protocol had positive effect on the basal hypertrophy. In parallel, female Notch3-/- mice exhibited the same arteriolar defect as males, without ventricular hypertrophy, suggesting a better adaptation. The post-partum hearts showed a microvascular adaptation in these mice. While cardiac status in post-partum is characterized by an anti-angiogenic environment leading to a physiological hypertrophy regression, these signaling pathways didn’t seem to be active in the Notch3-/- mice. These results showed that Notch3 signaling pathway was necessary to the adaptive coronary network response to pressure or volume overload

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Dadone-Montaudié, Bérengère. "La voie de signalisation FGF/FGFR : nouvelle cible thérapeutique dans les liposarcomes." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2020. http://www.theses.fr/2020COAZ6024.

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Abstract:

Les sarcomes, tumeurs conjonctives malignes, constituent un groupe hétérogène de tumeurs en fonction de la ligne de différenciation. Les liposarcomes (LPS), de différenciation adipocytaire, représentent une classe de sarcomes de tissus mous fréquente chez l’adulte. Parmi les LPS, on distingue deux types histologiques majoritaires : les tumeurs lipomateuses atypiques (TLA) ou liposarcomes bien différenciés (LBD) et les liposarcomes dédifférenciés (LDD). Alors que les TLA/LBD sont de malignité intermédiaire c’est-à-dire d’agressivité essentiellement locale, les LDD ont un potentiel métastatique et leur taux de mortalité à 5 ans est de l’ordre de 30%. Les chimiothérapies standard ou les nouveaux agents cytotoxiques demeurent peu efficaces. Les TLA/LBD et LDD sont caractérisés par une amplification de la région 12q incluant notamment les gènes MDM2, HMGA2, CDK4 et FRS2. Cette amplification récurrente des oncogènes MDM2 et CDK4 a conduit au développement de nouvelles thérapies anti-MDM2 ou anti-CDK4. Par ailleurs en oncologie, la dérégulation fréquente de la voie du Fibroblast Growth Factor (FGF)/ Fibroblast Growth Factor Receptor (FGFR) constitue une cible d’intérêt dans la prise en charge thérapeutique de nombreux cancers. Or, le gène FRS2 qui se trouve amplifié dans les TLA/LBD code pour une protéine adaptatrice cruciale de la voie de signalisation FGF/FGFR. Peu d’études ont exploré l’implication de cette voie de signalisation dans la tumorigenèse des TLA/ LBD et LDD. Nos objectifs étaient d’évaluer l’implication de la voie FGF/FGFR dans la liposarcomagenèse et d’étudier les effets d’un inhibiteur pan-FGFRs très spécifique, le JNJ42756493 (erdafitinib) seul ou en association avec d’autres molécules sur la tumorigénicité des cellules de LPS in vitro et in vivo.Nous avons démontré qu’un sous-groupe de LBD et LDD présentait une surexpression de FGFR1 et/ou FGFR4 et que cette surexpression était corrélée à un mauvais pronostic, sur une série de 694 cas de LBD/LDD. Nous avons mis en évidence les effets anti-tumorigeniques du JNJ42756493 ainsi que la synergie de la combinaison JNJ42756493 + RG7388 (un antagoniste de MDM2 de la classe des nutlines) sur la viabilité cellulaire, l’apoptose, le cycle cellulaire, la survie à long terme et l’activation des voies de signalisation en aval des FGFRs. Ces effets synergiques in vitro étaient confirmés in vivo, sur un modèle de xénogreffe de souris. De plus, l’efficacité du JNJ42756493 (erdafitinib) a été testée chez un patient atteint d’un LDD métastatique, réfractaire à plusieurs lignes de chimiothérapie et a permis une stabilisation de la maladie pendant 12 semaines. En conclusion, nous avons mis en évidence que la voie de signalisation FGF/FGFR était impliquée dans la liposarcomagenèse avec un potentiel thérapeutique pour un sous-groupe de LBD/LDD et que l’expression de FGFR1 et/ou FGFR4 pouvait constituer un puissant biomarqueur pour sélectionner les patients à inclure dans des essais cliniques
Liposarcoma is the most common soft tissue sarcoma in adults. Effective treatments for metastatic dedifferentiated liposarcoma (DDLPS) patients are lacking. We aimed to evaluate the therapeutic potential of the pan-FGFR inhibitor erdafitinib for these patients. We assessed FGFRs expression and their prognostic value in a series of 694 samples of well-differentiated/dedifferentiated liposarcoma (WDLPS/DDLPS). We investigated the effect of erdafitinib -alone or in combination with other antagonists- on tumorigenicity was evaluated in vitro and in vivo. We detected overexpression of FGFR1 and/or FGFR4 in a subset of WDLPS/DDLPS and demonstrated correlation of this expression with poor prognosis. Erdafitinib treatment induced a decrease in cell viability, cell cycle arrest in G1, apoptosis and strong inhibition of the ERK1/2 pathway. The association of erdafitinib with the PI3K/mTOR antagonist BEZ235 was not synergistic. Combining erdafitinib with the MDM2 antagonist RG7388 exerted a synergistic effect on viability, apoptosis and clonogenicity in three WDLPS/DDLPS cell lines. Efficacy of this combination was confirmed in vivo on DDLPS xenograft. Importantly, we report the efficacy of erdafitinib in one patient with metastatic DDLPS refractory to four prior lines of treatment showing disease stabilization for 12 weeks.In conclusions, we provided evidence that the FGFR pathway had therapeutic potential for a subset of DDLPS and that FGFR1 and FGFR4 expression might constitute a powerful biomarker to select patients for FGFR inhibitor clinical trials. In addition, we showed that combining erdafitinib with RG7388 is a promising strategy for patients with DDLPS that deserves further investigation in the clinical setting

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Jabrani, Amira. "Régulation de la voie Hedgehog : Étude structurale et fonctionnelle de protéines de signalisation." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00737495.

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Abstract:

La voie de signalisation HH joue un rôle crucial dans le contrôle de la prolifération et la différenciation cellulaires. Le dérèglement de cette voie est responsable de nombreux cancers. J'ai ainsi mis en place les outils moléculaires nécessaires pour identifier des régions importantes dans les interactions protéines-protéines au sein du complexe intracellulaire de la voie qui vont permettre de mieux comprendre les mécanismes de régulation du facteur de transcription CI en fonction de l'état d'activation de la voie. Mes travaux ouvrent la voie à de nombreuses études structurales et fonctionnelles de ces protéines jusqu'ici peu étudiées.

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Bernard, Florent. "La voie de signalisation activée par les acides aminés extracellulaires chez Saccharomyces cerevisiae." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2001. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/211613.

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Sèdes, Lauriane. "Voie de signalisation et gènes cibles de l'AMH dans le tractus génital femelle." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2014. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00989662.

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Abstract:

L'hormone anti-Müllerienne (AMH) est un membre de la famille TGF-β impliquée dans la différenciation du tractus reproductif mâle. Elle est aussi exprimée par les cellules de la granulosa de l'ovaire adulte. Cependant, son rôle physiologique chez la femelle n'a pas encore été entièrement établi. Mon projet de thèse a pour objectif d'élucider le(s) rôle(s) de l'AMH dans le tractus reproductif femelle. L'AMH transduit ses effets par l'intermédiaire de deux récepteurs transmembranaires sérine/thréonine kinase : un récepteur de type II qui lui est spécifique (AMHR-II) et un récepteur de type I (ActR-IA, BMPR-IA, BMPR-IB) qu'elle partage avec les BMPs. Après fixation de l'hormone sur le récepteur de type II, celui-ci recrute et phosphoryle le récepteur de type I. Ce dernier phosphoryle à son tour les Smads spécifiques (Smad1, 5 et 8) qui s'associent à la Smad commune, Smad4. L'ensemble transloque dans le noyau et en association avec des facteurs de transcription régule les gènes cibles de l'hormone. L'utilisation de souris KO conditionnelles pour les récepteurs Acvr1 et Bmpr1a et d'une technique de siRNA dirigés contre chacun des trois récepteurs de type I a permis de mettre en évidence que le récepteur BMPR-IA est un acteur essentiel de la voie de signalisation de l'AMH dans les cellules de la granulosa. Pour déterminer la ou les Smad(s) impliquées, une technique de gènes rapporteurs, Smad-Gal4/UAS-luciférase, a été utilisée. Nous avons pu montrer que les Smad1 et 5 sont importantes pour la transduction du signal de l'AMH dans les cellules de la granulosa. Récemment des corécepteurs aux BMPs, les Repulsive Guidance Molecule (RGMs), ont été mis en évidence. L'AMH partageant sa voie de signalisation avec les BMPs, nous avons cherché à déterminer si ces corécepteurs pouvaient également intervenir dans la voie de signalisation de l'AMH. Il existe 3 types de RGMs: RGMa, RGMb et RGMc. Nous avons montré en q-PCR que seul RGMb est exprimé dans les cellules de la granulosa alors que les 3 RGMs sont exprimés dans l'ovaire. L'utilisation de siRNA dirigés contre RGMb a permis de montrer que ce récepteur n'est pas nécessaire à la transduction du signal de l'AMH. Actuellement, seuls deux gènes cibles de l'AMH sont connus dans les cellules de la granulosa : l'aromatase et le récepteur LH. Nous avons réalisé des analyses de puces à ADN (ou micro-array) pour décrire de nouveaux gènes cibles de l'AMH. L'analyse des puces a permis de décrire de nouveaux gènes régulés par cette hormone tels qu'Ovgp1 ou Kcnj2. La dernière partie de mon projet visait à déterminer un rôle potentiel de l'AMH dans l'utérus. En effet, le récepteur de cette hormone est exprimé dans le myomètre utérin de souris permettant de supposer qu'elle peut agir sur cet organe. Nous avons pu mettre en évidence une expression faible du gène de l'Amh dans l'utérus. En revanche, l'expression et la localisation de la protéine restent encore à définir. Une expérience de PCR-array a permis de montrer que de nombreux gènes sont différentiellement exprimés entre l'utérus Wt et l'utérus KO Amh. Ceci indique que l'AMH jouerait un rôle sur la régulation de la fonction utérine qu'elle soit exprimée ou non dans cet organe.

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Jouannet, Stéphanie. "Compartimentation membranaire d’ADAM10 par les tétraspanines : conséquences pour la voie de signalisation NOTCH." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T066/document.

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Abstract:

Il est maintenant reconnu que la ségrégation latérale des composants de la membrane plasmique, ou compartimentation membranaire, joue un rôle important dans la régulation de la fonction de nombreuses protéines membranaires. Les tétraspanines constituent une famille de protéines intégrales à quatre régions transmembranaires possédant une capacité unique à s’associer entre elles et avec des nombreuses autres molécules de surface pour former un réseau d'interactions moléculaires, le « tetraspanins web ». Il a été proposé que via l’organisation de ce réseau, les tétraspanines joueraient un rôle dans la compartimentation membranaire des protéines auxquelles elles s’associent. Elles jouent également un rôle dans la compartimentation cellulaire en contrôlant le trafic de certaines des protéines associées. Le laboratoire a précédemment démontré que six tétraspanines conservées (Tspan5, 10, 14, 15, 17 et 33) de la sous-Famille des TspanC8 (caractérisées par la présence de huit cystéines dans le grand domaine extracellulaire) interagissent directement avec la métalloprotéase ADAM10 et régulent sa sortie du réticulum endoplasmique. Cette protéase ancrée à la membrane est responsable du clivage protéolytique de l'ectodomaine de diverses molécules de surface et est indispensable pour l'activation de la voie de signalisation NOTCH. Nous démontrons que Tspan5 et Tspan14 sont des régulateurs positifs de la voie de signalisation Notch et que Tspan15 est un régulateur négatif, agissant en amont de la γ-Sécrétase. Cette régulation négative est associée à un changement d’environnement membranaire ainsi qu’à une dynamique différente d’ADAM10 comme le montre un suivi de la protéase à l’échelle de la molécule unique. Par ailleurs, l’analyse par spectrométrie de masse quantitative a montré que la capacité d’ADAM10 à s’associer à des composants connus du réseau de tétraspanines était influencée par son interaction avec ces tétraspanines. Enfin, nous avons identifié une région de la cellule enrichie en CD9 qui contenait également ADAM10 lorsque Tspan5 est exprimée, mais ce n’est pas le cas avec Tspan15. Cette étude démontre que les différentes TspanC8 influencent différemment la capacité d’ADAM10 à cliver certains de ses substrats et illustre la capacité des tétraspanines à réguler l’activité de leurs protéines partenaires en contrôlant leur compartimentation membranaire
It is now recognized that the lateral segregation of components of the plasma membrane or membrane compartmentalization, play an important role in the regulation of many membrane proteins functions. Tetraspanins are a family of integral membrane proteins with four transmembrane domains with a unique ability to associate with one another and with many other surface molecules to organize a molecular interactions network, the “tetraspanins web”. It was suggested that via the organization of this network, the tetraspanin play a role in membrane compartmentalization of proteins to which they associate. Tetraspanins also play a role in cellular compartmentalization by controlling the trafficking of some associated proteins. In the lab, it has been shown that six conserved tetraspanin (Tspan5, 10, 14, 15, 17 et 33) of the TspanC8 subgroup (characterized by the presence of eight cysteines in the large extracellular domain) interact directly with the metalloproteinase ADAM10 et mediates its exit from the endoplasmic reticulum. This membrane-Anchored metalloprotease mediated ectodomain shedding of various integral molecules and is essential for Notch signaling pathway activation. We demonstrate that both Tspan5 and Tspan14 are positive regulators of Notch signaling pathway, whereas Tspan15 appears as negative regulator, acting in upstream γ-Secretase. This downregulation is associated with a modification of membrane environment as well as different dynamics of ADAM10, as shown by monitoring of protease using single molecule tracking. Furthermore, quantitative mass spectrometry analysis revealed that ADAM10 ability to associate with known components of “tetraspanin web” was influenced by its interaction with these tetraspanins. Finally, we have identified a CD9 enriched cell area which also contained ADAM10 when Tspan5 is expressed but not with Tspan15.This study demonstrates that different TspanC8 influence differently the ADAM10 ability to cleave some of its substrates and illustrate the ability of tetraspanins to regulate the activity of their proteins partners by controlling their membrane compartmentalization

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Sèdes, Lauriane. "Voie de signalisation et gènes cibles de l’AMH dans le tractus génital femelle." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T014/document.

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Abstract:

L’hormone anti-Müllerienne (AMH) est un membre de la famille TGF-β impliquée dans la différenciation du tractus reproductif mâle. Elle est aussi exprimée par les cellules de la granulosa de l’ovaire adulte. Cependant, son rôle physiologique chez la femelle n’a pas encore été entièrement établi. Mon projet de thèse a pour objectif d’élucider le(s) rôle(s) de l’AMH dans le tractus reproductif femelle. L’AMH transduit ses effets par l’intermédiaire de deux récepteurs transmembranaires sérine/thréonine kinase : un récepteur de type II qui lui est spécifique (AMHR-II) et un récepteur de type I (ActR-IA, BMPR-IA, BMPR-IB) qu’elle partage avec les BMPs. Après fixation de l’hormone sur le récepteur de type II, celui-ci recrute et phosphoryle le récepteur de type I. Ce dernier phosphoryle à son tour les Smads spécifiques (Smad1, 5 et 8) qui s’associent à la Smad commune, Smad4. L’ensemble transloque dans le noyau et en association avec des facteurs de transcription régule les gènes cibles de l’hormone. L'utilisation de souris KO conditionnelles pour les récepteurs Acvr1 et Bmpr1a et d'une technique de siRNA dirigés contre chacun des trois récepteurs de type I a permis de mettre en évidence que le récepteur BMPR-IA est un acteur essentiel de la voie de signalisation de l'AMH dans les cellules de la granulosa. Pour déterminer la ou les Smad(s) impliquées, une technique de gènes rapporteurs, Smad-Gal4/UAS-luciférase, a été utilisée. Nous avons pu montrer que les Smad1 et 5 sont importantes pour la transduction du signal de l'AMH dans les cellules de la granulosa. Récemment des corécepteurs aux BMPs, les Repulsive Guidance Molecule (RGMs), ont été mis en évidence. L’AMH partageant sa voie de signalisation avec les BMPs, nous avons cherché à déterminer si ces corécepteurs pouvaient également intervenir dans la voie de signalisation de l’AMH. Il existe 3 types de RGMs: RGMa, RGMb et RGMc. Nous avons montré en q-PCR que seul RGMb est exprimé dans les cellules de la granulosa alors que les 3 RGMs sont exprimés dans l’ovaire. L'utilisation de siRNA dirigés contre RGMb a permis de montrer que ce récepteur n'est pas nécessaire à la transduction du signal de l'AMH. Actuellement, seuls deux gènes cibles de l’AMH sont connus dans les cellules de la granulosa : l’aromatase et le récepteur LH. Nous avons réalisé des analyses de puces à ADN (ou micro-array) pour décrire de nouveaux gènes cibles de l'AMH. L'analyse des puces a permis de décrire de nouveaux gènes régulés par cette hormone tels qu’Ovgp1 ou Kcnj2. La dernière partie de mon projet visait à déterminer un rôle potentiel de l'AMH dans l'utérus. En effet, le récepteur de cette hormone est exprimé dans le myomètre utérin de souris permettant de supposer qu’elle peut agir sur cet organe. Nous avons pu mettre en évidence une expression faible du gène de l’Amh dans l’utérus. En revanche, l’expression et la localisation de la protéine restent encore à définir. Une expérience de PCR-array a permis de montrer que de nombreux gènes sont différentiellement exprimés entre l’utérus Wt et l’utérus KO Amh. Ceci indique que l’AMH jouerait un rôle sur la régulation de la fonction utérine qu’elle soit exprimée ou non dans cet organe
Anti-Müllerian hormone (AMH) is a member of the TGF-ß superfamily. AMH is well known for its role in Müllerian duct regression in male fetuses. Postnatally, AMH is secreted by granulosa cells (GCs) of small growing follicles (preantral and small antral). However, despite the increasing interest of ovarian AMH in clinics, little is known on its mechanism of action and its role in female reproductive tract. My PhD project focuses on the identification of AMH function in the female reproductive tract.AMH signals through a type II transmembrane serine/threonine kinase receptor (AMHR-II) which forms a complex with a type I serine/threonine kinase receptor (ActR-IA, BMPR-IA, BMPR-IB). The type II receptor phosphorylates serine and threonine residues of type I receptor. Once activated, the type I receptor phosphorylates the receptor-regulated Smads (R-Smad1/5/8) which interact with a common partner Smad4. The Smad complex accumulates into the nucleus and regulates target gene expression. This canonical signalling pathway is regulated at different levels, in particular by co-receptors which amplify or antagonize TGF-ß family members action. The type I receptors and R-Smads involved in AMH effects on post-natal GCs remain unknown. In addition, to date, no co-receptor has been found for AMH. To define the involvement of the different type I receptors, we used siRNA technology to inactivate Acvr1, Bmpr1a and Bmpr1b in GC. In parallele, we analysed GC extracted from conditional mutant mice for Acvr1 and Bmpr1a. We found that BMPR-IA is the most important type I receptor for AMH to transduce its signal in GC. A Smad-Gal4/UAS-luciferase reporter gene technology allowed us to show that Smad1 and 5 are involved in AMH signaling pathway. Recently, new BMPs coreceptors were found, RGMs for Repulsive Guidance Molecules. There are three RGMs : RGMa, b and c. Because AMH shares with BMPs its type I receptors and R-Smad proteins, we hypothesized that they also share the same co-receptors, the RGM. We showed that RGMb was the only one expressed in GC and after siRNA transfection we demonstrated that this coreceptor is not essential for AMH to transduce its signal.To date, only few AMH target genes have been identified. Aromatase (Cyp19a1) and LH receptor (Lhcgr) are down-regulated by AMH in rat and porcine GCs. We used micro-array technology (Affymetrix) by comparing Wt and knockout immature ovaries to find new AMH target genes. This experiment evidenced that Ovgp1 and Kcnj2 are two new potential AMH target genes in the ovary.The last part of my project was to define a potential role of AMH in murine uterus. Only one study showed that AMHR-II is expressed in the mouse myometrium. We showed that Amh gene is slightly expressed in uterus but the results are not confirmed at the protein level. Using PCR-array, we found a lot of differentially expressed genes between Wt and Amh KO uterus. Therefore, AMH could regulate uterine function through the modulation of different genes located in the myometrium

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Wang, Hui. "Implication de la voie de signalisation Bmp au cours de la myogenèse fœtale." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066346.

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Abstract:

La myogenèse correspond à la formation de fibres musculaires multinucléés à partir de progéniteurs mononucléés. Les progéniteurs musculaires sont responsables de croissance musculaire au cours du développement (myogenèse embryonnaire et fœtale), de la période périnatale et lors du processus de régénération chez l’adulte. Les cellules progénitrices musculaires, exprimant le facteur de transcription Pax7, sont responsables de la croissance musculaire pendant la myogenèse fœtale. On ne connaît pas la nature et la source des facteurs régulant ces progéniteurs. Ce travail de thèse met en évidence qu’une sous-population de progéniteurs musculaires fœtaux localisée aux extrémités des muscles, proche des tendons répondent à la voie Bmp «Bone morphogenetic protein». Des expériences de gain et de perte de fonction de la voie de signalisation Bmp, chez l’embryon de poulet, en utilisant le système rétroviral RCAS, montre que la voie Bmp est impliquée dans la régulation de la myogenèse fœtale. La surexpression du ligand Bmp4 ou d’une forme constitutivement active du récepteur BmpRIA dans les membres de poulet conduit à une augmentation du nombre des progéniteurs fœtaux et des fibres musculaires fœtales. Inversement, le blocage de la voie Bmp en surexprimant l’antagoniste Noggin réduit le nombre de progéniteurs et de fibres musculaires. Cet effet de la voie Bmp est différent de celui observé au cours de la myogenèse embryonnaire et déduit des études in vitro. Cette étude souligne les différences entre les progéniteurs embryonnaires et progéniteurs fœtaux. Cette étude indique que la voie Bmp est impliquée dans la croissance longitudinale des muscles au cours du développement du membre.

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Hercor, Mélanie. "Régulation des réponses immunes humorales par la voie de signalisation IL-6 / STAT3." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2015. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/222305/4/TheseMH.pdf.

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Abstract:

L’aide fournie aux lymphocytes B par les lymphocytes T CD4+ est cruciale pour une réponse humorale de qualité. Les lymphocytes T helper folliculaires (Tfh) jouent un rôle majeur dans l’aide apportée aux lymphocytes B au sein des centres germinatifs et peu de choses sont connues sur la capacité d’aide des autres populations de cellules T CD4+. Le but de notre étude est d’évaluer la capacité d’aide aux lymphocytes B des lymphocytes T helper de type 2 (Th2), une population considérée, à l’origine, comme responsable de l’aide apportée aux lymphocytes B in vivo ainsi que d’analyser le rôle de l’axe IL6 / STAT3 dans la différenciation des lymphocytes Tfh et leur plasticité phénotypique. Nous montrons que les lymphocytes Th2 co-expriment des formes actives des facteurs de transcription STAT6 et STAT3 et que l’expression de STAT3 est requise pour la fonction d’aide aux lymphocytes B des lymphocytes Th2. Nous avons également pu montrer que la voie de signalisation IL-6 / STAT3 durant le développement des lymphocytes Tfh s’oppose à l’expression des gènes associés au programme de différenciation Th2.
Option Biologie moléculaire du Doctorat en Sciences
info:eu-repo/semantics/nonPublished

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Jarriault, Sophie. "Analyse structurale et fonctionnelle de la voie de signalisation notch chez les vertebres." Paris 6, 1998. http://www.theses.fr/1998PA066525.

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Abstract:

La voie de signalisation notch, du nom du recepteur transmembranaire transmettant le signal, a d'abord ete decrite chez la drosophile, ou elle regule la determination de nombreux types cellulaires tout au long du developpement. Les composants de cette voie de signalisation incluent chez la drosophile : le ligand transmembranaire delta, le recepteur transmembranaire notch, la metalloprotease kuzbanian, une proteine liant l'adn nommee suppressor of hairless et les proteines a domaine helice-boucle-helice (bhlh) codees par les genes du complexe enhancer of split, qui sont supposes etre les genes cibles de cette voie de signalisation. Mon travail de these a porte sur l'etude structurale et fonctionnelle de la voie de signalisation notch chez les vertebres. J'ai dans un premier temps etudie les relations fonctionnelles qui existent entre les proteines rbp-j, un facteur homologue de suppressor of hairless, hes-1, un homologue des genes enhancer of split, et une forme activee de notch-1 murin. Des formes constitutivement actives du recepteur notch-1 murin, en s'associant a la proteine nucleaire rbp-j, sont capables de stimuler le promoteur hes-1. Ces resultats nous ont conduit a postuler un modele selon lequel, a la suite d'un signal extracellulaire, le recepteur est clive puis la region intracellulaire est transportee dans le noyau, ou elle se comporterait comme une sous-unite transactivatrice. L'etude de la structure du recepteur notch chez les vertebres nous a permis de montrer que le recepteur notch-1 est mature de facon constitutive, lors de son transport vers la membrane, par la furine. La mise en contact de cellules exprimant notch-1 avec des cellules exprimant delta-1, un homologue de delta chez les vertebres, m'a permis de montrer que delta-1 se comporte comme un ligand fonctionnel de notch-1 et que la forme maturee de notch-1 represente la forme activable de ce recepteur. De plus, l'activation de notch-1 par delta-1 conduit a l'activation de la transcription du gene hes-1, et ce processus est dependant de l'activite des proteines kuzbanian et rbp-j. L'ensemble de ces resultats montrent que la voie de signalisation notch a ete en partie fonctionnellement conservee au cours de l'evolution.

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Landraud, Patricia. "Étude de la voie de signalisation pH chez le champignon phytopathogène Magnaporthe grisea." Thesis, Lyon 1, 2009. http://www.theses.fr/2009LYO10099.

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Abstract:

La perception de l’environnement extérieur est importante pour des interactions efficaces entre plantes et champignons. Chez les champignons filamenteux, l’information associée au pH extracellulaire est transmise via une voie de signalisation conservée et impliquant sept protéines. Parmi ces protéines, la protéine transmembranaire PalH est un récepteur présumé initier la réponse aux pH neutre ou alcalin. Le facteur de transcription PacC, présent sous forme inactive dans le cytoplasme de la cellule fongique, est clivé en réponse à l’activation de la voie, et migre dans le noyau où il active la transcription des « gènes alcalins » et réprime la transcription des « gènes acides ». Chez Magnaporthe grisea, un Ascomycète responsable de la principale maladie du riz, le rôle de cette voie dans la physiologie du champignon est encore inconnu. Les deux homologues des gènes PACC et PALH ont été identifiés. Dans le but d’analyser le rôle des deux protéines PacC et PalH chez M. grisea, la délétion de ces gènes a été réalisée. Plusieurs phénotypes ont été analysés chez les deux souches mutantes, notamment la croissance, la sporulation et le pouvoir infectieux. Ceci a permis d’étudier le rôle de la signalisation liée au pH extracellulaire dans le cycle de développement de M. grisea. De plus, une analyse du profil des gènes exprimés chez le mutant ΔpacC a été initiée. Les résultats obtenus indiquent que cette voie est importante pour l’adaptation du champignon à un environnement alcalin et qu’elle joue un rôle dans la pathogénicité du champignon
Perception of external environment is important for successful infection of plants by fungi. In these organisms, the information about extracellular pH is provided to the cell by a conserved signalling pathway that involves seven proteins. Among these proteins, the transmembrane protein PalH is the putative receptor which would initiate the pH response. The transcription factor PacC, existing in an inactive form in the fungus cell cytoplasm, is activated through proteolysis in response to the pathway activation, and migrates into the nucleus where it activates the « alkaline » genes transcription and represses that of the « acidic » genes. In Magnaporthe grisea , an ascomycete responsible for the main rice disease, the role of this pathway is still unknown. In this work, the PACC and PALH genes have been identified. In order to analyse the role of the two corresponding proteins PacC et PalH, the deletion of these two genes has then been performed. Several phenotypes were studied in the two mutant strains, including growth rate, conidiation and ability to infect host plants. This enabled the investigation of the involvement of the pH signalling pathway in the M. grisea development cycle. Furthermore, a gene expression profiling analysis of the ΔpacC mutant has been undertaken and revealed the multiple cellular responses to pH changes. Taken all together, the results collected in this work indicate that the pH signalling pathway is important for M. grisea's adaptation to an alkaline environment and that it plays a significant role in the fungus pathogenicity

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Tartarin, Pauline. "Rôle de la voie de signalisation AMPK/mTOR dans la fonction de reproduction." Thesis, Tours, 2013. http://www.theses.fr/2013TOUR4009/document.

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Abstract:

Chez les mammifères, le métabolisme énergétique exerce une influence importante sur la fertilité. Chez la femelle comme chez le mâle, une chute ou un excès dans l’apport des besoins nutritionnels induisent des modulations des synthèses hormonales et de la production de gamètes viables. L’objectif de ce travail était 1) de définir le rôle de l’AMPK, AMP-activated protein kinase, un senseur cellulaire des réserves énergétiques de l’organisme, dans la reproduction mâle ; 2) d’étudier l’implication de mTORC1, mammalian target of rapamycin complex 1, un autre indicateur du métabolisme, dans les cellules du système nerveux central régulant la reproduction. Nous avons montré une baisse de la fertilité, associée à une hyperandrogénie Leydigienne et à un dysfonctionnement des spermatozoïdes chez des souris invalidées pour le gène de l’α1 AMPK. De plus, l’exposition in utero à la metformine, un activateur de l’AMPK, induit une baisse du volume testiculaire et de la concentration en testostérone à 17jpc. Enfin, l’inactivation du complexe mTORC1, par ARN interférent ciblant Raptor, dans les cellules bordant l’hypothalamus tend à augmenter la taille de portée, associée à une hausse de la FSH et de la folliculogenèse terminale.En conclusion, ce travail confirme le rôle de ces deux complexes protéiques (AMPK et mTORC1), senseurs énergétiques, dans la fonctionnalité de l’axe hypothalamo-hypophyso-gonadique
In mammals, the energy metabolism exerts a strong influence on fertility. In females as in males, either a drop or an excess of the nutritional supplies induce modulations of the hormonal synthesis as well as viable gametes production. Our objective was 1) to define the role of AMPK, the AMP-activated protein kinase, a cell sensor of the energy reserves, in male reproduction; 2) to study the involvement of mTORC1, the mammalian target of rapamycin complex 1, another indicator of metabolism, in the cells of the central nervous system that regulate fertility. We have shown a decrease of fertility, linked to a testicular hyperandrogenia and dysfunctional spermatozoa in α1AMPK deficient mice. Moreover, in utero exposure to an AMPK activator, the metformin, induced a decrease in testicular volume and testosterone concentration (17dpc). Finally, inactivation of mTORC1 by interferent RNA in the adjacents cells of the hypothalamus tends to increase litter size, linked to a rise of FSH and the terminal folliculogenesis. In conclusion, this study confirms the role of these two complexes, energetic sensors, on the functionality of the hypothalamo-pituitary-gonadal axis

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Ouarné, Marie. "ALK1 : une nouvelle voie de signalisation dans le développement vasculaire physiologique et tumoral." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017GREAV052/document.

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Abstract:

ALK1 (Actlivin receptor-Like Kinase 1) est un récepteur exprimé spécifiquement sur les cellules endothéliales. ALK1 possède deux ligands de haute affinité BMP9 (Bone Morphogenic Protein) et BMP10. Cette voie de signalisation joue des rôles cruciaux dans l'angiogenèse et la lymphangiogenèse qui sont des processus critiques dans le développement mais aussi le cancer. Ainsi, l'objectif de cette thèse était de caractériser les fonctions de BMP9 et BMP10 dans le développement vasculaire physiologique et tumoral à l'aide de souris invalidées pour ces deux facteurs.Nous avons montré que BMP9 et BMP10 sont essentiels à la fermeture du canal artériel. Ce vaisseau permet de dévier le sang hors des poumons foetaux non fonctionnels et sa fermeture au moment de la naissance est nécessaire à la survie postnatale. L'absence de BMP9 et BMP10 mène à une réouverture du canal artériel chez le souriceau du fait de problèmes de remodelage. Chez l'Homme, une région critique contenant Bmp10 peut être corrélée à des problèmes de fermeture du canal artériel.Des essais cliniques ciblant ALK1 dans le traitement du cancer sont en cours du fait de son implication dans l'angiogenèse. Néanmoins, les rôles spécifiques de BMP9, BMP10 et ALK1 dans le cancer sont encore mal connus. Nous avons montré que BMP10 n'est pas impliqué dans la tumorigenèse mammaire au contraire de BMP9 qui agit comme un facteur de quiescence et de maturation dans l'angiogenèse tumorale. Ainsi, il serait plus intéressant de cibler spécifiquement BMP9 plutôt qu'ALK1 afin d'éviter d'altérer les fonctions physiologiques de BMP10
ALK1 (Actlivin receptor-Like Kinase 1) is a receptor specifically expressed at the surface of endothelial cells. BMP9 (Bone Morphogenic Protein) and BMP10 are the high affinity ligands of ALK1. This pathway has been proved to play important roles in angiogenesis and lymphangiogenesis which are critical processes in development as well as in cancer. Thus, the purpose of my PhD was to characterize BMP9 and BMP10 functions in physiological and tumoral vascular development using mice invalidated for those proteins.We show that BMP9 and BMP10 are essentials to ductus arteriosus closure, a shunt allowing blood to avoid inoperative foetal lungs. Its closure is mandatory to survival after birth. Loss of BMP9 and BMP10 leads to ductus arteriosus reopening in mice pups due to remodeling issues. In human, a critical region including Bmp10 was correlated to patent ductus arteriosus.Clinical trials targeting ALK1 in cancer treatment are in progress due to its involvment in angiogenesis. However, little is known about the specific roles of BMP9, BMP10 and ALK1 in carcinogenesis. We show that BMP10 is not involved in mammary cancer development while BMP9 acts as a quiescent and maturation factor in tumoral angiogenesis. Thus, it may be more interesting to target only BMP9 instead of ALK1 to avoid interferences with BMP10 physiological functions

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Makamté, Kemdib Staëlle Sonia. "Etudes des protéines Patched et SUFU impliquées dans la voie de signalisation Hedgehog." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCC102/document.

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Abstract:

Parmi les voies de signalisation, la voie hedgehog (HH) intervient dans la formation de la polarité segmentaire. Si elle est défectueuse, elle entraine plusieurs malformations. De nombreux cancers présentent une suractivation de cette voie. La voie HH activée par la fixation du ligand HH sur le récepteur Patched (hPtc) et fait intervenir plusieurs partenaires cytoplasmiques dont Supressor of Fused (SUFU).Peu de données moléculaires et structurales sont disponibles pour cette voie et pourtant, ces données sont nécessaires pour comprendre sans ambiguïté son fonctionnement. De plus, la voie HH a été proposée comme pouvant être la cible de traitements chimio thérapeutiques mais, la protéine hPtc est impliquée dans l’efflux des drogues anticancéreuses. Une inhibition de hPtc par la fixation de son ligand entraine l’inhibition de l’efflux de drogues. Néanmoins, le site de fixation de HH sur son récepteur n’a pas encore été déterminé.Durant cette thèse, les travaux effectués ont permis l’étude structurale de la protéine hPtc notamment la détermination du site de fixation de HH. Dans un deuxième volet de cette thèse, j’ai effectué des études structurales de certaines protéines SUFU.Dans un premier temps, je me suis concentrée sur les domaines extracellulaires de hPtc qui ont été décrits comme nécessaires pour la fixation du ligand HH. J’ai cloné une protéine chimère constituée de ces deux domaines liés par le lysozyme du phage T4 (hPtcD1D2). Cette construction a été exprimée dans la bactérie E.coli. Les conditions d’expression testées permettent d’obtenir la protéine sous forme de corps d’inclusion dans le cytoplasme de la bactérie. Dans un deuxième temps, j’ai cloné la protéine dans un vecteur d’expression en levure. De manière concomitante, j’ai exprimé la protéine hPtc tronquée de ses régions N et C terminales (hPtcΛNΛC). Ce sont des régions intrinsèquement désordonnées qui ne permettraient pas une bonne cristallisation de la protéine. L’expression a été effectuée dans la levure. La solubilisation de cette protéine membranaire est en cours d’expérimentation.Ce travail a permis de poser les bases de l’expression de hPtcD1D2 et de hPtcΛNΛC. Ceci va notamment permettre la surexpression de la protéine et sa cristallisation afin de déterminer sa structure 3D et de caractériser le site de fixation de son ligand.Enfin, j’ai entrepris des études structurales des protéines SUFU. Un nouveau site de fixation du Zn a été caractérisé. En effet, après purification de la protéine, j’ai effectué des mesures d’affinité à l’aide d’un composé colorimétrique, le PAR et des expériences de spectroscopie d’émission atomique dans lesquelles j’ai fait varier le pH et la concentration en Zn. Ainsi, j’ai pu déterminer que SUFU a une affinité nanomolaire pour le Zn meilleure à pH 8 qu’à pH 6,5. La fixation du Zn se ferait donc sur un site basique. La structure de SUFU a été publiée en 2013 par deux équipes, je me suis inspirée des conditions de cristallisation de ces deux articles, pour cristalliser SUFU en présence de Zn. Les expériences de dichroïsme circulaire ont permis d’affirmer que ces protéines sont organisées en hélices α et en feuillets β. De plus, grâce à la diffusion des rayons X aux petits angles, j’ai pu déterminer que dSUFU, hSUFU et zSUFU n’ont pas la même conformation en solution. Alors que SUFU de drosophile est un monomère globulaire, les protéines humaine et de poisson zèbre seraient plutôt allongées et dimériques. La région N-terminale potentiellement impliquée dans la dimérisation de hSUFU a été tronquée et hSUFUΛ30 présente des différences d’état d’oligomérisation
The hedgehog (HH) signalling pathway is involved in the segmentary polarity formation. A dysfunction of this pathway is involved in several malformations. Many cancers are caused by an overactivation of this pathway. The HH signalling pathway is activated by the binding of HH on the receptor Patched (hPtc) and included many cytoplasmic partners such as Suppressor of Fused (SUFU). Few molecular and structural data are available on this pathway even if these data are important to fully understand the pathway functioning. Furthermore, the HH signalling pathway maybe be the target of chemotherapy treatments. However, hPtc is involved in drugs efflux. Inhibition of hPtc by the binding of its ligand HH may lead to this efflux inhibition. Yet, the binding site of HH on its receptor hPtc is not yet determined.During this thesis, the structural study of hPtc have been engaged especially the study of the binding site of HH. On the second hand, I have structurally studied some SUFU proteins.First of all, I have expressed the extracellular domains of hPtc. These domains have been described as necessary for HH binding. I have cloned a chimeric protein made by the extracellular domains of hPtc associated with the lysozyme T4 (hPtcD1D2). This protein have been expressed in the E.Coli bacteria. The protein expressed in inclusion bodies in the cytoplasm of the bacteria. In the other hand, I have cloned the protein in a yeast expression vector. Part of this, I have also expressed the protein hPtc without its N and C terminus regions (hPtcNC). These regions are intrinsically disrupted. They may lead to crystallization problems. The protein has been expressed in yeast.This work permits to expressed hPtcD1D2 and hPtcΛNΛC. This will lead to the expression of the protein and its crystallisation in order to determine its 3D structure and to characterize its ligand binding site.Finally, I structurally studied the protein SUFU. A novel Zn binding site has been characterized. In fact, after the protein purification, I have made affinity measures using a colorimetric compound, PAR. I also performed spectroscopic experiments in which I varied the pH and the Zn concentration. I determined the SUFU has a nanomolar affinity for the Zn best at pH 8 than pH 6.5. Indeed, the Zn binding site may be basic.The SUFU 3D structure has been published in 2013 by two teams. Inspired by their crystallization conditions, I crystallized SUFU with Zn. Circular dichroism experiments permitted to know that the proteins are organized in  helices and  sheets. Moreover, small angles X ray spectroscopy experiments show that dSUFU, hSUFU and zSUFU did not have the same conformation in solution. Drosophila SUFU is globular and human and zebrafish SUFU are long and dimeric. The N-terminal region involved in hSUFU has been removed and hSUFUΛ30 is present in different oligomerization forms

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Ayers, Katie Louise. "Étude de la régulation de la voie de signalisation Hedgehog chez Drosophila melanogaster." Nice, 2009. http://www.theses.fr/2009NICE4052.

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Abstract:

Les morphogènes de la famille Hedgehog (Hh) contrôlent la prolifération cellulaire et la différentiation tissulaire au cours de développement des invertébrés et des vertébrés. La dérégulation du morphogène Hh ou des composants de sa voie de signalisation aboutit à des malformations développementales importantes, et à de nombreux cancers. Durant ma thèse j'ai tenté de répondre à plusieurs questions en suspends concernant le mouvement de Hh, sa réception et sa signalisation en utilisant comme modèle le disque imaginal d'aile de Drosophila melanogaster. Le ligand Hh est sécrété à partir d'un groupe de cellule et se propage au tissue environnent pour y déclencher une réponse cellulaire selon un gradient de concentration. Les mécanismes exacts de la propagation du ligand Hh à travers la matrice extracellulaire ne sont pas encore élucidés. Pour résoudre ceci, nous avons analysé le gradient morphogénétique de Hh dans l'épithélium du disque imaginal d'aile en formation. Nous observons deux gradients différents: l'un se situe au niveau du compartiment baso-lateral et est impliqué dans la signalisation à courte distance, l’autre se forme à la surface apicale et est nécessaire pour l'action à longue distance de Hh. En modifiant la quantité de Hh à l’apicale des cellules productrices nous avons démontré qu’il est biologiquement actif. De plus nous avons montré que le glypican Dally stabilise Hh à la surface apicale des cellules et que son clivage (probablement via l'hydrolase Notum) est impliqué dans la propagation du gradient de Hh. Ces résultats aident à la compréhension des mécanismes de propagation du signal Hh. La seconde partie de ma thèse s'est attachée à comprendre la signalisation Hh dans les cellules réceptrices. Nous savions déjà que le glypican Dally et l'hydrolase Notum étaient impliquées. Nous avons donc caractérisé le rôle de ses protéines en montrant qu'elles sont exclusivement impliquées dans l'activation des gènes cibles nécessitant de haut niveau de Hh. De plus Dally apparaît internalisée de façon Ptc-dépendante (le récepteur de Hh). En plus l'activité Notum semble promouvoir l’internalisation de Dally avec Hh, et ainsi augmenter le niveau de signalisation. Nous suggérons que Dally et Notum jouent un rôle important dans la pour le haut niveau de signalisation d’Hh. En absence de Hh, le récepteur Ptc inhibe l'activité de Smoothened (Smo) qui ne peut transmettre le signal dans la cellule. Le mécanisme exact de répression de Ptc sur Smo n'est pas résolu. Cependant, nous avons identifié un nouveau composant, Tow (Target of Wingless), qui agit comme répresseur de la voie Hh en aval de Ptc et en amont de Smo. Ainsi Tow est un lien intéressant pour élucider les mécanismes de répression mis en jeux entre Ptc et Smo. Tow est un nouveau répresseur de la voie qui pourrait représenter l'homologue de Drosophile, d'une famille de protéine encore non caractérisée fonctionnellement
The Hedgehog (Hh) family of morphogens control cellular proliferation and tissue patterning during organogenesis, in both invertebrates and vertebrates. Deregulation of the Hh morphogen or its signalling pathway can lead to devastating developmental defects, and inappropriate Hh pathway signalling has been implicated in the cause and maintenance of numerous cancers. My thesis has aimed to address several key questions remaining concerning Hh morphogen spreading, reception and signalling, using Drosophila melanogaster, particularly the wing imaginal disc, as a model system. The Hh ligand is secreted from a subset of cell, and spreads to surrounding tissue to turn on its signalling pathway, eliciting a cellular response in a gradient dependant manner. The exact mechanism of Hh spreading through the extracellular matrix has not been apparent. To address this, we have closely monitored the endogenous Hh gradient in the wing imaginal disc. We describe two different Hh gradients, one which is presented at the baso-lateral cell pole and appears to spread short-range, the second which is apical and represents a long range gradient. By augmenting or reducing the levels of Hh presented apically in secreting cells, we have been able to modify this long range gradient, indicating that apically released Hh forms the biologically active gradient. Furthermore, we have demonstrated that the extracellular matrix protein, Dally, regulates apical levels of Hh, and that its release, perhaps by the hydrolase Notum, promotes Hh spreading through the apical plane. These data have filled an important gap in understanding how Hh forms its morphogen gradient. The second part of my thesis has been directed at understanding Hh signalling in the Hh receiving cells. Previous data has suggested a role for the glypican Dally, and hydrolase Notum. Thus, we have characterised the role of these proteins, establishing that they are involved in the activation of high level targets of Hh, but are dispensable for low level signalling. Furthermore, Dally appears to be internalised in a Ptc dependant manner, and regulation by Notum appears to promote this internalisation with Ptc and Hh, thus increasing signalling. We suggest that Dally and Notum play an important role in high level signalling response of Hh receiving cells. In the absence of Hh, the Hh-receptor Patched (Ptc) represses the protein Smoothened (Smo), and turns off all pathway signalling. The exact mechanism of Ptc repression of Smo is still unclear. We have identified a novel pathway protein, Tow (Target of Wingless). On closer inspection, we have found that Tow represses the Hh pathway upstream or at the level of Smo, but downstream of Ptc, thus representing an interesting link between these two proteins. We show that Tow represents the Drosophila member of a previously uncharacterised protein family, and is a novel repressor of the Hh pathway

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Chevalier, Elodie. "Place de la signalisation Hippo dans l'histoire naturelle du Mésothéliome Pleural Malin (MPM) : dissection de ses rôles dans les lignées mésothéliales pleurales humaines et application à la caractérisation moléculaire des 448 patients atteints de MPM inclus dans l'essai clinique de phase 3 "MAPS"." Thesis, Normandie, 2018. http://www.theses.fr/2018NORMC405/document.

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Abstract:

Le mésothéliome pleural malin (MPM) est une tumeur primitive de la plèvre, rare, très agressive, avec un pronostic sombre. Nous avons souhaité au cours de ce travail de thèse, identifier de nouveaux biomarqueurs du MPM en testant l’influence de l’inactivation des membres de la famille RASSF/Hippo sur la survie des 448 patients inclus dans l’essai clinique MAPS (IFCT-GFPC-0701). Nous souhaitions également comprendre quelles fonctions et signalisations essentielles à l’homéostasie cellulaire, auxquelles participe la voie de signalisation RASSF/Hippo, sont perturbées lors du processus de transformation des cellules mésothéliales. L’inactivation des membres de la voie a été étudiée par PCR spécifique de méthylation (MS-PCR) et leur influence sur la survie des 448 patients inclus dans l’essai clinique MAPS testée en analyse uni- et multivariée avant d’être validée par boostrap. D’autre part, nous avons mimé in cell, l’inactivation par ARN interférence de plusieurs membres de la voie Hippo dans des cellules de lignées mésothéliales humaines (MSTO-211H, H2452, H28 et H2052). Nous avons pu identifier plusieurs biomarqueurs du MPM : i) la kinase MST1 dont l’inactivation est un facteur de mauvais pronostic, ii) l’amphiréguline dont l’expression cytoplasmique est au contraire un facteur de bon pronostic et enfin iii) le CD44 dont l’expression élevée constitue un outil diagnostique du MPM. Les approches in cell, nous ont permis de démontrer que les altérations de la voie RASSF/Hippo induisent une activité inappropriée de l’effecteur terminal YAP : le moins bon pronostic des patients présentant une inactivation de MST1 s’explique ainsi par le fait qu’en régulant l’activité de YAP, MST1 contrôle la balance apoptose/prolifération et prévient l’invasion et la croissance sans adhésion. En son absence, ces processus cellulaires sont dérégulés. Ce travail démontre l’importance de l’axe CD44/RASSF1A/MST1 dans le contrôle d’une activité appropriée de YAP et de l’homéostasie des cellules mésothéliales. La compréhension des désordres cellulaires induits par la dérégulation de le voie RASSF/Hippo, désigne YAP comme cible thérapeutique potentielle chez les patients atteints de MPM et présentant des altérations de cette voie de signalisation
Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare, very aggressive, primary tumor with a poor prognosis. During this thesis, we wanted to identify new biomarkers of MPM by testing the influence of the RASSF/Hippo pathway inactivation on the survival of the 448 patients included in the clinical trial MAPS (IFCT- GFPC-0701). We also wanted to understand which functions and signals essential to cellular homeostasis, linked to RASSF/Hippo signaling pathway, are disturbed during the mesothelial cell transformation process. Inactivation of RASSF/Hippo members was studied by methylation-specific PCR (MS-PCR) and their influence on the survival of the 448 patients included in the MAPS clinical trial tested in uni- and multivariate analysis before being validated by bootstrap. We also mimed in cell, by RNA interference, several members of the Hippo pathway inactivation in human mesothelial cells lines (MSTO-211H, H2452, H28 and H2052). We have identified several biomarkers of MPM: i) MST1 kinase whose inactivation is a factor of poor prognosis, ii) amphiregulin whose cytoplasmic expression is on the contrary a factor of good prognosis and finally iii) CD44 whose high expression is a diagnostic tool for MPM. In cell we demonstrate that RASSF/Hippo pathway alterations induce an inappropriate activity of YAP, one Hippo end effector: the poorer prognosis of patients with inactivation of MST1 is thus explained by the fact that, by regulating YAP activity, MST1 controls the apoptosis/proliferation balance and prevents invasion and growth without adhesion from mesothelial cells. In its absence, these cellular processes are deregulated. This work finally demonstrates the importance of the CD44/RASSF1A/MST1 axis in controlling appropriate YAP activity and mesothelial cell homeostasis. The understanding of the cellular disorders induced by the of the RASSF/Hippo pathway deregulation designates YAP as a potential therapeutic target in patients with MPM and presenting alterations of this signaling pathway

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Chautard, Emmanuel. "Rôle de la voie de signalisation Interleukine-6 dans la radiorésistance des glioblastomes humains." Phd thesis, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00726307.

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Abstract:

L'identification et la neutralisation des cibles moléculaires impliquées dans les mécanismes de radiorésistance des glioblastomes, approche développée au laboratoire, vise à diminuer le risque de récidive à l'intérieur du volume irradié et donc à allonger la survie des patients. Les travaux antérieurs du laboratoire ont démontré le rôle potentiel de l'interleukine-6 (IL-6) dans les mécanismes anti-apoptotiques impliqués dans la radiorésistance. Nous avons tout d'abord contribué à la validation de l'Interleukine-6 en tant que cible potentielle en rapportant l'association entre une amplification avec surexpression du gène IL-6 et un mauvais pronostic dans une série de 36 glioblastomes. La médiane de survie chute de 22 à 6 mois entre le groupe IL-6 non amplifié et amplifié. Bien que nous n'ayons pas établi de corrélation entre la radiorésistance intrinsèque et le niveau d'expression et de production d'IL-6 in vitro, les données de la littérature nous ont incité à explorer le potentiel thérapeutique d'un blocage des voies PI3K/Akt et JAK/STAT3 situées en aval de l'IL-6. L'inhibition de la voie Akt, dont l'activation a été corrélée à la radiorésistance intrinsèque, permet de radiosensibiliser les glioblastomes in vitro alors que celle de la voie STAT3 s'est révélée sans impact sur la sensibilité à l'irradiation. En accord avec ces résultats, la 2ème approche, consistant en l'utilisation d'anticorps dirigés contre l'IL-6 ou les sous unités qui composent son récepteur conduit à une inactivation de la voie STAT3 sans impact sur la radiorésistance. Au vu des données apportées par ce travail il semble que l'IL-6, malgré son statut de facteur de pronostique, et la voie STAT3 ne soient pas impliqués dans la radiorésistance intrinsèque. Notre hypothèse, en accord avec la littérature, est que l'activation aberrante de la voie STAT3 dans les gliomes, via la production d'IL-6, serait impliquée dans les modifications du micro-environnement telles que l'immunosuppression et l'angiogénèse. Pour tenter d'expliquer la différence de survie entre les deux groupes de patients de la série de 31 glioblastomes, une analyse comparative est en cours d'une part sur les profils génomiques et transcriptomiques par micro-arrays, et d'autre part sur l'état d'activation des voies de signalisation anti-apoptotiques Akt et STAT3 par immunohostochimie. Les données obtenues seront interprétées conjointement avec le niveau d'amplification/expression de l'IL-6 et la survie des patients. Les résultats présentés ici constituent un argumentaire pour l'utilisation d'inhibiteurs d'Akt en combinaison avec l'irradiation dans de futurs essais cliniques.

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Paulin, Roxane. "Implication de la voie de signalisation Src/Stat3 dans l'étiologie de l'hypertension artérielle pulmonaire." Thesis, Université Laval, 2011. http://www.theses.ulaval.ca/2011/28720/28720.pdf.

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Abstract:

L’hypertension artérielle pulmonaire (PAH) est une vasculopathie obstructive caractérisée par une oblitération du lumen des artères pulmonaires distales et une augmentation des résistances vasculaires menant à une augmentation des pressions pulmonaires (PAP) et une hypertrophie ventriculaire droite (RVH) compensatrice. Aucun médicament n’est capable à ce jour de stopper le processus, et lorsque l’hypertrophie compensatrice devient insuffisante, le ventricule droit (RV) se dilate et défaille. A l’origine de ce processus se trouve une hyper-prolifération, une résistance à l’apoptose et une augmentation de la motilité des cellules musculaires lisses vasculaires de l’artère pulmonaire (PASMCs), les rendant « pseudo-malignes ». Le laboratoire a précédemment démontré que le facteur de transcription NFAT (Nuclear factor of activated T-cells) est en partie impliqué dans ces désordres cellulaires en provoquant une augmentation des concentrations calciques intracellulaires et stimulant la prolifération ; et une hyperpolarisation du potentiel de membrane mitochondriale (ΔΨm) inhibant ainsi l’apoptose dépendante des mitochondries. Dans le chapitre 2 nous avons démontré pour la première fois dans le réseau vasculaire pulmonaire que le facteur de transcription STAT3 (Signal transducer and activator of transcription 3) est activé et impliqué de façon directe dans la régulation de l’expression de NFAT et de façon indirecte dans son activation via l’oncoprotéine serine/thréonine kinase Pim1 (Provirus integration site for Murine Moloney leukemia virus). L’inhibition de Pim1 in vitro et in vivo (modèle de rat injecté à la monocrotaline) est associée à une diminution de l’activité de NFATc2 et à un retour à un phénotype normal. De plus, les souris déficientes pour le gène Pim1 sont résistantes à une induction de la PAH par hypoxie ou monocrotaline. De plus nous avons démontré que l’expression de Pim1 corrèle avec la sévérité de la maladie dans le modèle expérimental et le modèle humain. Nous avons donc souligné l’intérêt de Pim1 comme cible thérapeutique et outil de diagnostic. Dans le chapitre 3, nous avons mis en évidence l’implication de la plateforme signalétique c-Src (sarcoma Schmidt-Ruppin A-2 viral oncogene homolog)/FAK (Focal adhesion kinase) dans la régulation du phénotype « pseudo malin » en partie par activation de STAT3. L’inhibition de FAK in vitro diminue la prolifération des cellules pathologiques, augmente leur sensibilité a l’apoptose et réduit leur motilité. In vivo, l’inhibition de FAK réduit les pressions pulmonaires et le remodelage vasculaire faisant de FAK une cible thérapeutique intéressante. Dans le chapitre 4 nous proposons finalement une autre option thérapeutique par l’utilisation de la dehydroepiandrosterone. Cette hormone naturelle a précédemment été remarquée comme bénéfique dans le traitement de l’hypertension artérielle pulmonaire de par ses propriétés vasodilatatrices. Nous avons montré ici qu’en inhibant STAT3 la DHEA possède également des propriétés antiprolifératives et que son utilisation clinique est prometteuse. Durant mes travaux de doctorat, j’ai pu donc mettre en évidence l’implication majeure de l’axe Src/FAK/STAT3/Pim1 dans la pathogénèse de l’hypertension artérielle pulmonaire. J’ai pu proposer diverses solutions thérapeutiques qui pourraient apporter de nouvelles issues cliniques plus ou moins rapidement.
Pulmonary arterial hypertension (PAH) is an obstructive vasculopathy characterized by distal pulmonary arteries lumen obliteration and increased vascular resistances, leading to a rise in pulmonary arterial pressure (PAP) and a compensatory right ventricular hypertrophy. Currently available therapies do not permit to reverse the established process and when the hypertrophy become insufficient, the right ventricle dilates and fails. This phenomenon is due to enhanced proliferation, survival and motility of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs), which acquire a pseudo malignant phenotype. Our group previously described that the transcription factor NFAT (Nuclear factor of activated T-cells) is involved in these cellular disorders by increasing intracellular calcium level and enhancing proliferation; and by hyperpolarizing the mitochondrial membrane potential and decreasing mitochondrial-dependant apoptosis. In the Chapter 2, we demonstrated for the first time in the pulmonary vasculature, that STAT3 (Signal transducer and activator of transcription 3) regulates directly NFATc2 expression and indirectly NFATc2 activity via the oncoprotein serine/threonine kinase Pim1 (Provirus integration site for Murine Moloney leukemia virus). In vitro and in vivo Pim1 inhibition (in the monocrotaline rat model) is associated with decreased NFATc2 activity and reversion of the malignant phenotype. Moreover, Pim1 deficient mice are resistant to monocrotaline or hypoxia-induced PAH. Finally, we demonstrated that Pim1 expression correlates with disease progression both in animal and human model. Thus, we underlined Pim1 as a potent therapeutic target and an interesting diagnosis tool. In the chapter 3, we showed that the signaling hub c-Src (sarcoma Schmidt-Ruppin A-2 viral oncogene homolog)/FAK (Focal adhesion kinase) is implicated in the regulation of the PASMCs pseudo malignant phenotype, in part by activating STAT3. FAK inhibition in vitro decreases PASMCs proliferation, survival and motility. In vivo, FAK inhibition is associated with decreased PAP and decreased vascular remodeling, making FAK as an interesting therapeutic target. In the chapter 4, we suggest dehydroepiandrosterone (DHEA) as another therapeutical option. This natural hormone is known to be beneficial in PAH through their vasodilating properties. We showed here that by inhibiting STAT3 activation, DHEA also has anti-proliferating properties. Therefore, clinical use of DHEA for PAH can be promising. During my PhD studies, I showed the critical implication of the Src/FAK/STAT3/Pim1 in PAH pathogenesis. I contributed to increase the knowledge on PAH pathogenesis and suggested some therapeutical solutions that can be useful to improve patient outcome.

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Rondet, Damien. "Caractérisation d'une nouvelle voie de signalisation impliquée dans la défense stomatique et applications agronomiques." Thesis, Aix-Marseille, 2018. http://www.theses.fr/2018AIXM0083.

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Abstract:

La défense pré-invasive ou stomatique est un mécanisme qui consiste en la fermeture des pores stomatiques présents sur les organes aériens des plantes lorsque celles-ci sont en contact avec certains agents pathogènes. Cette fermeture empêche ces derniers de pénétrer dans l’hôte et de le coloniser. Ce mécanisme s’active chez Arabidopsis inoculée par la bactérie Pseudomonas syringae pv tomato (Pst) DC3000. Des travaux préliminaires de notre groupe avaient montré que la carbonylation de protéines cibles par des espèces réactives électrophiles (EREs) représentait une étape cruciale de la signalisation cellulaire nécessaire à la mise en place de cette défense. Par des approches de marquage ciblé et de purifications couplées à des identifications par spectrométrie de masse en tandem (nanoLC-MS/MS), nous avons pu caractériser une sérine-thréonine protéine kinase qui joue un rôle déterminant dans ce mécanisme de défense. En effet, des plantes mutées sur le gène codant cette protéine ont perdu la capacité à induire la fermeture de leurs stomates et à déployer la défense stomatique vis-à-vis de la bactérie. De plus, l’introduction de la chimie click (cycloaddition alcyne-azide catalysée par le cuivre), dans nos approches de marquage, nous a permis d’identifier un ensemble de protéines très probablement carbonylées et susceptibles de jouer un rôle crucial dans ces évènements cellulaires qui contribuent à une part de l’immunité végétale. Enfin, les EREs étant capables d’induire la fermeture des stomates, nous avons cherché à savoir, dans le cadre de l’établissement d’une preuve de concept, si leur application sur des plantes permettrait la protection de ces dernières contre Pst
Pre-invasive or stomatal defense is a mechanism which consists of closing the stomata present at surface of aerial organs of plants when they are in contact with certain pathogens. This closure prevents them from entering and colonizing the host. This mechanism is activated in Arabidopsis inoculated by the bacterium Pseudomonas syringae pv tomato (Pst) DC3000. Preliminary work by our group had shown that carbonylation of target proteins by reactive electrophile species (RES) was a crucial step of the cell signaling required to set up this defense. Through targeted tagging and purifications approaches coupled with tandem mass spectrometry identifications (nanoLC-MS/MS), we have been able to characterize a serine-threonine protein kinase that plays a crucial role in this defense mechanism. Indeed, plants mutated on the gene encoding this protein have lost their ability to trigger stomatal closure and to deploy the stomatal defense against the bacteria. In addition, the use of the click chemistry and notably, the copper-catalyzed alkyne-azide cycloaddition, in our tagging approaches has enabled us to identify a set of proteins that are most likely carbonylated and likely to play a significant role in these cell events that contribute to part of plant immunity. Finally, since RES are able to induce stomatal closure we sought to find out, in the context of establishing a proof-of-concept, whether their application to plants would enable them to be protected against the Pst

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Barthélémy, Philippe. "Voie de signalisation des androgènes, altérations génomiques et progression du cancer de la prostate." Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAJ022/document.

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Abstract:

La voie de signalisation du récepteur des androgènes (RA) reste une cible thérapeutique privilégiée dans les cancers de la prostate (CaP). Ce travail de thèse a abordé trois thématiques : 1) l’identification et l’étude fonctionnelle des mutations du RA, 2) l’étude du lien existant entre les RA tronqués, résultant de mutations non-sens, et l’angiogenèse tumorale et 3) l’étude exploratoire de l’hétérogénéité tumorale dans les CaP. Au cours de la 1e partie, nous avons identifié 90 mutations du RA à l’aide d’un test fonctionnel chez la levure et émis des hypothèses concernant leur implication dans de potentiels mécanismes de résistance à l’hormonothérapie (HT). La 2e partie nous a permis de montrer un lien entre les variants tronqués et l’expression du VEGF-A, médiateur principal de l’angiogenèse. Enfin dans la dernière partie nous avons étudié, par approche de séquençage à haut-débit, l’hétérogénéité tumorale en fonction du temps et du stade de la maladie. L’ensemble du travail a permis une meilleure connaissance des altérations de la voie de signalisation du RA, leur rôle dans les étapes clés de la progression tumorale et l’évolution des anomalies génomiques
The androgen receptor signaling pathway (AR) remains a prime therapeutic target in prostate cancer (PCa). This work focused on three topics: 1) the identification of AR mutations and their functional impact, 2) the assessment of a link between the truncated AR, resulting from nonsense mutations and tumor angiogenesis and 3) an exploratory study of tumor heterogeneity in PCa. In the first part, we identified 90 AR mutations using a yeast-based functional assay and speculated about their involvement in potential mechanisms to hormone therapy (HT) resistance. In the second part we assessed a link between the truncated AR and the overexpression of VEGF-A, the main proangiogenic factor. In the last part we investigated the tumor heterogeneity within the primary tumor and metastasis using a whole exome sequencing approach. This work leads to a better knowledge of the AR signaling pathway alterations, their role in the key steps of tumor progression and the evolution of genomic abnormalities

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Faresse, Nourdine. "Identification de PCTA, un nouvel effecteur de la voie de signalisation du TGF-beta." Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066428.

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Abstract:

La stimulation des cellules au TGF- entraîne l’assemblage des protéines cytoplasmiques Smad2/3 avec Smad4. Ce complexe activé se transloque dans le noyau et régule la transcription des gènes cibles du TGF-. Dans le noyau, le complexe Smad peut soit recruter un co-répresseur tel que TGIF. Le TGIF peut inhiber la transcription dépendante du TGF- par différents mécanismes. Récemment, il a été démontré que le TGIF est capable de séquestrer la protéine cytoplasmique cPML dans le noyau inhibant ainsi la phosphorylation de Smad2/3. Dans cette étude, nous avons identifié un nouveau partenaire du TGIF que nous avons nommé PCTA (PML Competitor for TGIF Association). PCTA s’associe à TGIF dans les cellules de mammifères et cette association est stimulée par le TGF-. L’expression de PCTA stimule la transcription induite par le TGF-, une activité qui est due à l’inhibition de la séquestration nucléaire de cPML à travers une compétition de liaison au TGIF. Par ailleurs, nous avons démontré que la surexpression de PCTA peut inhiber la progression tumorale. Ces résultats nous permettent de classer PCTA comme une nouvelle protéine anti-tumorale effectrice de la voie du TGF-.

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Triffaux, Emily. "Identification des canaux Cav1 impliqués dans la voie de signalisation calcique des lymphocytes Th2." Toulouse 3, 2013. http://thesesups.ups-tlse.fr/1959/.

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Abstract:

L'asthme est une maladie pulmonaire qui touche environ 10% de la population. Les lymphocytes T helper de type 2 jouent une rôle important dans la physiopathologie de l'asthme en produisant de l'interleukine 4,5,13. Mon équipe a montré dans une étude précédente que les cellules Th2 mais pas Th1 de souris exprimaient des canaux CaV1. Un oligonucléotide antisens (CaV1AS) inhibe la réponse calcique et la production de cytokines Th2 sous stimulation par le TCR sans toucher les cellules Th1 chez la souris. De plus, CaV1AS prévient l'asthme allergique expérimental. Durant ma thèse, j'ai montré que les cellules T au repos expriment CaV1. 4. Les isoformes CaV1. 2 et CaV1. 3 prédominent dans les cellules Th2 et leur expression est perdue dans les Th1. Un inhibiteur pharmacologique des canaux CaV1, un CaV1AS et CaVbAS diminue l'expression protéique de CaV1. 2 suggérant que CaVb est requis pour la stabilité des lymphocytes Th2. Finalement, l'inhibition de la PKCa/b diminue la réponse calcique et la production de cytokines par les lymphocytes Th2 mais pas Th1 suggérant que la PKC pourrait contribuer à la régulation de CaV1 dans les lymphocytes Th2. Ces résultats suggèrent que la PKC pourrait contribuer à la régulation de CaV1 dans les lymphocytes Th2. Ces résultats suggèrent que l'inhibition des canaux CaV1. 2 pourrait être bénéfique dans les maladies allergiques
Asthma is an allergic pulmonary disease which affects around 10% of the population. Allergen-specific type 2 T helper lymphocytes Th2 have a crucial role in the asthma physiopathology by producing interleukin IL4,5,13. Previously, my team reported that mouse Th2 but not Th1 cells express voltage gated calcium CaV1 channels. CaV1 channel specific antisense oligonucleotide CaV1AS inhibit calcium response and Th2 cytokine production (IL4,5,13) upon TCR stimulation without any effect on Th1 cells in mice. In addition, CaV1AS prevent experimental allergic asthma. During my PhD, I showed the CaV1. 4 expression in human resting cells. Conversely, CaV1. 2 and CaV1. 3 predominated in Th2 cells and were lost in Th1 cells. CaV1 channel inhibitors, CaV1. 2 AS and CaVbAS decreased calcium signaling and cytokine production in Th2 but not in Th1 cells. Moreover, CaVbAS decrease the CaV1. 2 protein suggesting that CaVb is required for CaV1. 2 stability in Th2 cells. Finally selective PKCa/b inhibition decreased calcium response and cytokine production by Th2 but not Th1 cells suggesting that PKC may contribute to CaV1 regulation in Th2 cells. These results suggest that the inhibition of CaV1. 2 channels could be beneficial in allergic diseases while sparing Th1 cell responses

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Zablocki, Laurent. "Identification de facteurs de régulation de la voie de signalisation TLR3 par crible génétique." Thesis, Sorbonne université, 2018. http://www.theses.fr/2018SORUS533.

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Abstract:

La défense de l’organisme contre des pathogènes passe par la détection de motifs moléculaires spécifiques de ces derniers. Dans l’arsenal de récepteurs capables de reconnaître ces motifs figure la famille des Toll-like receptors (TLR) endosomaux, spécifiques d’acides nucléiques. Parmi eux, TLR3 détecte la présence anormale d'ARN double brin dans les endosomes et initie une forte réponse immunitaire innée. Cependant, la régulation de TLR3 reste encore mal comprise. Pour identifier de nouveaux acteurs moléculaires impliqués dans la voie TLR3, nous avons réalisé un crible à l'échelle du génome en utilisant la technologie CRISPR / Cas9. Nous avons développé une lignée de cellules rapporteuses de la voie TLR3, puis générés des mutants en transduisant ces cellules avec une banque d’ARNg. Les cellules ont ensuite été soumises à des cycles de stimulation par du poly (I:C) suivi de tri des cellules GFP-. L’enrichissement de certains ARNg au sein de la population triée, souligne l’importance des gènes correspondant dans la voie TLR3. Cinq gènes, dont TLR3, connu pour être nécessaire à la voie de TLR3, ont été identifiés par le crible, validant ainsi notre stratégie. Nous avons étudié les 40 meilleurs candidats issus du crible. Parmi les candidats confirmés, nous nous sommes concentrés sur AhR (récepteur d’aryl d’hydrocarbone). En l’absence d’AhR la réponse médiée par TLR3 est impactée de deux manières avec une perte de production d'IL-8 et une augmentation de celle d'IP-10. Dans les macrophages humains primaires exposés au poly(I:C), l’activation d’AhR améliore la production d’IL-8 et inhibe celle d’IP-10. Ainsi, AhR semble capable de moduler la réponse du TLR3
The fight of the organism against pathogens involves the detection of molecular patterns that are conserved among pathogens. Among the arsenal of receptors capable of recognizing these patterns, there is the family of endosomal Toll-like receptors (TLRs) that are specific for nucleic acids. Among them, TLR3 senses the abnormal presence of double-stranded RNA in the endosomes and initiates a potent innate immune response. Nevertheless, mechanisms governing TLR3 regulation still remain poorly understood. To identify new molecular players involved in the TLR3 pathway, we performed a genome-wide screen using the CRISPR/Cas9 technology using reporter cells expressing GFP when stimulated via TLR3. Mutagenesis was achieved by transducing these cells with the lentiviral GeCKO v2 sgRNA library. Cells were then subjected to sequential rounds of stimulation with poly(I:C) and sorting of the GFP- cells. Enrichments in sgRNA estimated by deep-sequencing identified genes required for TLR3-induced activation of NF-κB. Five genes, including TLR3 itself and the chaperone UNC93B1, known to be critically involved in the TLR3 pathway, were identified by the screen, thus validating our strategy. We further studied the best 40 hits. Among the hits confirmed, we focused on AhR (aryl hydrocarbon receptor). Depletion of AhR had a dual effect on the TLR3 response, abrogating the IL-8 production and enhancing the IP-10 release. Interestingly, in primary human macrophages exposed to poly(I:C), AhR activation enhanced IL-8 and inhibited the IP-10 one. Overall, AhR appears able to modulate the TLR3 response

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Bernet, Agathe, and Agathe Bernet. "Caractérisation et rôle des cils primaires de l'épididyme dans la voie de signalisation Hedgehog." Master's thesis, Université Laval, 2018. http://hdl.handle.net/20.500.11794/31455.

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Abstract:

Les cils primaires (CP) sont des antennes de signalisation présentes en un seul exemplaire à la surface de la plupart des cellules. Ils jouent un rôle de mécano/chimio-senseur pour le développement et le maintien de l’homéostasie des tissus, en réponse aux stimuli et à la voie de signalisation Hedgehog (Hh). En 2013, l’ultrastructure des CP a été mise en évidence au niveau de l’épithélium épididymaire d’équidés. L’épididyme, organe du système reproducteur masculin, est composé d’un épithélium pseudo-stratifié qui se différencie au cours du développement postnatal jusqu’à la maturité sexuelle. Les principaux types cellulaires qui composent cet organe au stade adulte, assurent des rôles distincts et bien orchestrés afin de contrôler la composition du micro environnement spermatique. Bien que la mutation de gènes codants pour les constituants majeurs des CP entraine une infertilité masculine, peu de choses sont connues concernant leur rôle au niveau du système reproducteur. Nous émettons donc l’hypothèse que les CP de l’épididyme joueraient un rôle dans le contrôle des fonctions épididymaires. Nos objectifs se définissent en deux points 1) la caractérisation spatiotemporelle de cette organelle le long de l’épididyme, 2) l’étude fonctionnelle des CP de l’épididyme dans la voie de signalisation Hh. Grâce à une souris double transgénique Ar13b/mCherry- EGFP/CETN2, nous avons révélé une évolution spatio-temporelle des CP au cours du développement postnatal. En effet, à la naissance, les CP sont localisés au pôle apical des cellules épithéliales alors que chez l’adulte, les CP sont exclusivement associés aux cellules basales cytokératine-V positives. De plus, par une approche pharmacologique nous avons évalué l’implication des CP de l’épididyme murin dans la voie de signalisation Hh. Bien que les fonctions des CP, au niveau de l’épididyme, restent à déterminer, notre étude préliminaire ouvre la porte à une meilleure compréhension du contrôle et maintien des fonctions épididymaires et de la fertilité masculine.
Les cils primaires (CP) sont des antennes de signalisation présentes en un seul exemplaire à la surface de la plupart des cellules. Ils jouent un rôle de mécano/chimio-senseur pour le développement et le maintien de l’homéostasie des tissus, en réponse aux stimuli et à la voie de signalisation Hedgehog (Hh). En 2013, l’ultrastructure des CP a été mise en évidence au niveau de l’épithélium épididymaire d’équidés. L’épididyme, organe du système reproducteur masculin, est composé d’un épithélium pseudo-stratifié qui se différencie au cours du développement postnatal jusqu’à la maturité sexuelle. Les principaux types cellulaires qui composent cet organe au stade adulte, assurent des rôles distincts et bien orchestrés afin de contrôler la composition du micro environnement spermatique. Bien que la mutation de gènes codants pour les constituants majeurs des CP entraine une infertilité masculine, peu de choses sont connues concernant leur rôle au niveau du système reproducteur. Nous émettons donc l’hypothèse que les CP de l’épididyme joueraient un rôle dans le contrôle des fonctions épididymaires. Nos objectifs se définissent en deux points 1) la caractérisation spatiotemporelle de cette organelle le long de l’épididyme, 2) l’étude fonctionnelle des CP de l’épididyme dans la voie de signalisation Hh. Grâce à une souris double transgénique Ar13b/mCherry- EGFP/CETN2, nous avons révélé une évolution spatio-temporelle des CP au cours du développement postnatal. En effet, à la naissance, les CP sont localisés au pôle apical des cellules épithéliales alors que chez l’adulte, les CP sont exclusivement associés aux cellules basales cytokératine-V positives. De plus, par une approche pharmacologique nous avons évalué l’implication des CP de l’épididyme murin dans la voie de signalisation Hh. Bien que les fonctions des CP, au niveau de l’épididyme, restent à déterminer, notre étude préliminaire ouvre la porte à une meilleure compréhension du contrôle et maintien des fonctions épididymaires et de la fertilité masculine.
Primary cilia (PC) are signaling antennas present in a single copy on the surface of most cells. They play a mechano / chemo-sensory role for the development and maintenance of tissue homeostasis, in response to extracellular stimuli. In 2013, the ultrastructure of PC was demonstrated in equine epididymal epithelium. The epididymis, an organ of the male reproductive system, is composed of a pseudo-stratified epithelium that differentiates during postnatal development until puberty. The different cell types populating this epithelium control discrete and well-orchestrated role in order to monitor the composition of the spermatic microenvironment. Although the mutation of genes coding for the major constituents of PC leads to male infertility, little is known regarding their role in the male reproductive system. Our hypothesis is that PC play a role in the control of the functions important to epididymis development and homeostasis. Our objectives are defined in two points: 1) to define the spatio-temporal localization of this organelle along the epididymis, and 2) to determine the function of PC in the transduction of the Hh signaling pathway, which is known to be important for proper sperm maturation. Using an Arl13b / mCherry- Cetn2 / GFP transgenic mouse model, we revealed for the first time a spatio-temporal change of PC cell-specificity during epididymis postnatal development, from birth to adulthood. After birth, PC are localized at the apical pole of undifferentiated cells whereas in the adult, elongated PC are exclusively associated with cytokeratin-V positive basal cells. In addition, we evaluated the involvement of epididymal PC in the transduction of the Hh signaling pathway through a pharmacological approach. Although the functions of PC in the epididymis remains to be determined, our preliminary in vitro studies open the door to a better understanding of the control and maintenance of epididymal functions and male fertility.
Primary cilia (PC) are signaling antennas present in a single copy on the surface of most cells. They play a mechano / chemo-sensory role for the development and maintenance of tissue homeostasis, in response to extracellular stimuli. In 2013, the ultrastructure of PC was demonstrated in equine epididymal epithelium. The epididymis, an organ of the male reproductive system, is composed of a pseudo-stratified epithelium that differentiates during postnatal development until puberty. The different cell types populating this epithelium control discrete and well-orchestrated role in order to monitor the composition of the spermatic microenvironment. Although the mutation of genes coding for the major constituents of PC leads to male infertility, little is known regarding their role in the male reproductive system. Our hypothesis is that PC play a role in the control of the functions important to epididymis development and homeostasis. Our objectives are defined in two points: 1) to define the spatio-temporal localization of this organelle along the epididymis, and 2) to determine the function of PC in the transduction of the Hh signaling pathway, which is known to be important for proper sperm maturation. Using an Arl13b / mCherry- Cetn2 / GFP transgenic mouse model, we revealed for the first time a spatio-temporal change of PC cell-specificity during epididymis postnatal development, from birth to adulthood. After birth, PC are localized at the apical pole of undifferentiated cells whereas in the adult, elongated PC are exclusively associated with cytokeratin-V positive basal cells. In addition, we evaluated the involvement of epididymal PC in the transduction of the Hh signaling pathway through a pharmacological approach. Although the functions of PC in the epididymis remains to be determined, our preliminary in vitro studies open the door to a better understanding of the control and maintenance of epididymal functions and male fertility.

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Perroy, Julie. "Le récepteur métabotropique du glutamate mGlu7 : voie de signalisation et fonction dans les neurones." Montpellier 2, 2001. http://www.theses.fr/2001MON20095.

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Leroy, Ingrid. "Nouveaux mécanismes d'induction et de régulation de la voie de signalisation apoptotique CD95/FAS." Toulouse 3, 2005. http://www.theses.fr/2005TOU30136.

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Abstract:

La voie apoptotique induite par le récepteur Fas et son ligand (FasL) est impliquée dans de nombreux mécanismes physiologiques et pathologiques. Cette voie se décompose en deux étapes : la formation du DISC (Death inducing signaling complex) puis la condensation de la cellule. Dans notre étude, nous nous sommes intéressés aux mécanismes de régulation et d'induction de la voie Fas. Dans ce travail nous avons montré que la protéine kinase C z est un nouveau partenaire du DISC qui régule négativement l'activation de la caspase 8. En parallèle, nous avons montré que la protéine LMP1 (Latent Membrane Protein 1) du virus d'Epstein-Barr sensibilise les cellules à l'apoptose induite par FasL. Enfin nous avons mis en évidence que le traitement de cellules par la Mithramycine A, un agent anti-cancéreux, induit l'activation de la voie apoptotique Fas de façon FasL-indépendante. Ces résultats contribuent à une meilleure compréhension de la voie Fas
Fas / CD95 apoptotic pathway is implicated in various physiological as well as pathological phenomenon. Ligation of CD95 with Fas ligand (FasL) induces DISC (Death Inducing Signaling Complex) formation with recruitment of FADD and caspase 8 and then a degradation of cell components leading to apoptosis. In our work, we studied new mechanisms of regulation and induction of this apoptotic pathway. First, we showed that protein kinase C z is a new DISC member which regulates caspase 8 activation. In a second part, we evaluated the role of Latent Membrane Protein 1 of Epstein-Barr virus on Fas death pathway: our results indicate that this viral protein can facilitate Fas apoptotic pathway. This is independent of LMP1 polymorphism and is inversely correlated to LMP1 expression level. Finally, we showed that Mithramycin A can induce Fas death pathway, independently of FasL. All these results could contribute to a better understanding of Fas apoptotic pathway

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Samba, Louaka Ascel Régis. "Détermination de la voie de signalisation cellulaire eucaryote détournée par la protéine bactérienne Cif." Toulouse 3, 2009. http://thesesups.ups-tlse.fr/614/.

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Abstract:

Cif est une protéine produite par certaines souches d'Escherichia coli entéropathogènes (EPEC). Ces bactéries disposent d'un arsenal d'effecteurs qui sont injectés dans la cellule hôte par une seringue moléculaire (le système de sécrétion de type III). Cif est l'un de ces effecteurs qui appartient à la famille des cyclomodulines. Cette dernière est composée de molécules bactériennes capables de moduler le cycle cellulaire des cellules eucaryotes. Dans les cellules épithéliales, Cif provoque un arrêt du cycle cellulaire (effet cytostatique) à la transition G2/M qui est associé à l'accumulation de la forme inactive de CDK1, inducteur universel de mitose. Cet effet est à l'origine de l'appellation Cif, Cycle inhibiting factor. J'ai démontré que l'effet cytostatique n'est pas uniquement la conséquence d'un arrêt des cellules à la transition G2/M. En effet, suivant la phase du cycle cellulaire lors de l'infection des cellules avec une EPEC qui exprime Cif, la translocation de Cif peut provoquer un arrêt en G1/S ou en G2/M. Ces arrêts sont associés à la stabilisation de protéines p21waf1 et p27kip1, qui régulent les complexes CDK/cyclines responsables des transitions des phases G1/S et G2/M du cycle cellulaire. Nous avons récemment démontré que des homologues fonctionnels de Cif étaient présents dans d'autres bactéries tels que Burkholderia pseudomallei, Yersinia pseudotuberculosis, Photorhabdus asymbiotica (pathogènes humains) et Photorhabdus luminescens (symbiote d'un nematode pathogène d'insecte). Ces protéines, qui partagent une structure commune et un même site catalytique, appartiennent à la superfamille des cystéine protéases et acétyl transférases. Même si le lien entre cette activité enzymatique et l'arrêt du cycle cellulaire reste à découvrir, on peut néanmoins définir Cif comme une nouvelle famille de protéines partagée par des souches phylogénétiquement très éloignées, pathogènes d'organismes variés, d'insectes comme de mammifères. .
The cycle inhibiting factor (Cif) belongs to a family of bacterial toxins, the cyclomodulins, that deregulate the host cell cycle. Upon injection into the host cell by pathogenic Escherichia coli, Cif inhibits G2/M transition via sustained inhibition of the mitosis inducer CDK1. I show that Cif induces not only G2 but also G1 cell cycle arrest depending on the stage of cells in the cell cycle during the infection. Those arrests were associated with stabilization of the cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors p21waf1 and p27kip1. CDKs complexes promote of the cell cycle transitions at both G1/S and G2/M. We recently demonstrated that functional Cif homologs are present in human pathogenic bacterial strains such as Burkholderia pseudomallei, Yersinia pseudotuberculosis, Photorhabdus asymbiotica and in symbiotic (for nematode) pathogenic (for insect) bacteria Photorhabdus luminescens. Those proteins, that share similar structures and catalytic sites, belong to the superfamily of enzymes including cystein proteases and acetyltransferases. Although the link between the activity and the cell cycle arrest remain to established, Cif proteins form a growing family of cyclomodulins that interact with very distinct hosts including insects, nematodes and humans. .

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Remaud, Sylvie. "Liens entre la voie de signalisation Notch et le cycle cellulaire chez la drosophile." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066361.

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Abstract:

Ma thèse a porté sur les liens entre le cycle cellulaire et la détermination cellulaire avec pour modèle d’étude, le lignage des microchaetes chez la drosophile. Dans ce lignage, à chaque division, la voie de détermination Notch (N) joue un rôle essentiel dans l’acquisition de destins cellulaires distincts. Je me suis intéressée à la façon dont la voie N et le cycle cellulaire interagissent dans le contrôle temporel de la détermination et de la prolifération au cours du développement. J’ai mis en évidence un nouveau mode d’action de la voie N qui dépend de l’état de la cellule. Tout d’abord, in vivo, l’activation des gènes de détermination cellulaire par N dépend de la phase S. Par ailleurs, N influence la progression du cycle cellulaire : (i) N régule négativement la transition G2/M (ii) Dans des conditions de stress réplicatif, N régule positivement la progression de la phase S alors que, dans une situation sauvage, celle-ci ne semble pas influencer le déroulement de la phase S. Ces données renforcent l’idée que la réponse cellulaire à N varie selon l’état même des cellules (ici défini par la phase du cycle cellulaire ou les conditions de stress réplicatif).

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Lecourtois, Magalie. "Analyse moleculaire de la voie de signalisation du recepteur transmembranaire notch chez drosophila melanogaster." Paris 11, 1998. http://www.theses.fr/1998PA112159.

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Abstract:

Du nematode a l'homme, les recepteurs transmembranaires de la famille notch (n) agissent tout au long du developpement embryonnaire et post-embryonnaire pour controler l'acquisition et le maintien d'un etat differencie. Nous avons cherche a comprendre les mecanismes moleculaires sous-jacents a la transduction du signal notch chez drosophila melanogaster. Nous avons montre que le gene suppressor of hairless su(h) joue un role essentiel dans la voie de signalisation notch. En effet, in vivo su(h) active de maniere directe l'expression des genes du complexe enhancer of split-m5 et m8 en reponse a l'activation du recepteur n lors de la formation du systeme nerveux central et peripherique. Puis, nous avons teste l'hypothese selon laquelle le recepteur active par son ligand subit une coupure de n dans sa partie sous-membranaire, liberant ainsi la partie intracellulaire de n (n#i#n#t#r#a). N#i#n#t#r#a passerait dans le noyau ou il se comporterait comme un activateur de la transcription, une fois ancree a l'adn par une interaction avec une proteine su(h). Nous avons montre que le domaine intracellulaire du recepteur n est un co-facteur nucleaire de su(h), et agit comme un activateur de la transcription in vivo. Nous avons egalement observe in vivo un evenement de coupure proteolytique intracellulaire d'un recepteur transmembranaire n active. Puis, nous avons etudie le controle negatif de voie notch par la proteine hairless (h). Nous avons montre que la proteine h inhibe l'activite transcriptionnelle de su(h), en empechant cette derniere de reconnaitre son site de fixation a l'adn par des interactions proteine-proteine directes in vitro. Finalement, nous avons etudie la fonction de la proteine h au cours de l'embryogenese precoce. Nous avons montre que bien que le gene h soit fortement exprime dans l'embryon precoce, de maniere surprenante la proteine h n'est pas requis au cours de l'embryogenese. Cependant l'activite h est requise dans la transduction du signal notch chez l'adulte.

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Grandbarbe, Luc. "Rôle de la voie de signalisation Notch dans la différenciation des cellules souches neurales." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2002. http://www.theses.fr/2002STR13050.

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Abstract:

Le système nerveux central est constitué de 3 types cellulaires majeurs : neurones, oligodendrocytes et astrocytes. Ces cellules dérivent toutes d'un précurseur commun capable d'auto-renouvellement, de prolifération quasi infinie in vitro et multipotentiel : la cellule souche neurale. Dans ce mémoire, nous avons étudié le rôle de la voie de signalisation Notch dans le déterminisme neurones versus cellules gliales, au cours du processus développemental qui conduit de la cellule souche neurale aux neurones, aux oligodendrocytes et aux astrocytes. Pour cela, nous avons utilisé le système in vitro des neurosphères, qui représente la descendance clonale des cellules souches neurales. La première partie de notre travail a consisté de mettre au point les cultures de neurosphères et à montrer que les neurosphères produisaient neurones, oligodendrocytes et astrocytes dans des proportions reproductibles. L'obtention de neurosphères à partir d'embryons Dll1LacZ, mutants pour le gène Delta like 1 (Dll1) a montré que Dll1 n'était pas nécessaire à la production et au maintien des cellules souches neurales. Les neurosphères mutantes Dll1Lac présentent une augmentation du nombre de neurones par rapport aux neurosphères de type sauvage. Cette augmentation a lieu aux dépens des cellules gliales, oligodendrocytes et astrocytes. Le phénotype des neurosphères mutantes peut être sauvé quand les neurosphères Dll1LacZ sont incubées en présence de milieu conditionné par des neurosphères sauvages pendant la phase de prolifération et/ou la phase de différenciation. Les expériences d'activation transitoire de la voie Notch par addition d'une forme soluble de ligand ont montré que la fonction Notch intervenait à deux stades de la neurogenèse : Dans une première étape, la voie Notch empêche les précurseurs de s'engager dans la voie de développement neuronal et les oriente irréversiblement vers la voie gliale. Dans une seconde étape, la voie Notch inhibe la différenciation neuronale et oligodendrocytaire, tandis qu'elle active la différenciation des astrocytes
The central nervous system comprises three major cell types: neurons, oligodendrocytes and astrocytes. All these cell-types derive from a common multipotential precursor cell, capable of self-renewing, and which is referred to as a neural stem cell. To elucidate the role of Notch signaling on the generation of neurons and glia, we made use of the in vitro neurosphère system which is clonally derived from neural stem cells through the selective action of EGF. Neurospheres prepared from Dll1lacZ mutant embryos display an increase of neurons at the expense of both oligodendrocytes and astrocytes. This mutant phenotype could be rescued when Dll1lacZ spheres were grown and/or differentiated in the presence of WT neurospheres conditioned medium. Time-dependant activation of Notch by soluble forms of ligands indicates that Notch acts in two steps. Initially, it acts on the cell fate choice by negatively regulating the neuronal fate and promoting the glial cell fate. In a second step, Notch promotes differentiation of astrocytes and inhibits differentiation of both neurons and oligodendrocytes

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Dissertations / Theses on the topic 'Voie de signalisation RASSF'

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