Dissertations / Theses: 'Virus de l'hépatite B – Morphogenèse'

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Le, Duff Yann. "Etude de déterminants d'entrée virale et de morphogenèse du virus de l'hépatite B." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077232.

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Abstract:

Le mécanisme de bourgeonnement du virus de l'hépatite B (HBV) repose entièrement sur ses protéines d'enveloppe. Celles-ci s'oligomérisent et bourgeonnent spontanément dans la lumière du réticulum endoplasmique (RE), essentiellement sous la forme de particules sous-virales vides, sécrétées en abondance par une cellule infectée. Occasionnellement, les protéines d'enveloppe recrutent la nucléocapside HBV et conduisent à la formation de virions complets, ou particules de Dane. Ce mode de bourgeonnement atypique est parasité par les ribonucléoprotéines du virus de l'hépatite delta (HDV), qui s'associent aux protéines d'enveloppe et sont sécrétées sous la forme de virions HDV. Les protéines d'enveloppent HBV sont au nombre de trois : la petite, S-AgHBs, la moyenne, M-AgHBs et la grande, L-AgHBs. Elles partagent un domaine C-terminal commun et diffèrent par la taille de leur extrémité N-teminale. La protéine S est constituée du seul domaine S, la protéine M des domaines S et preS2 et la protéine L-AgHBs, des domaines S, preS2 et preSl. La protéine S-AgHBs est le moteur du bourgeonnement des particules HBV et HDV. C'est une protéine intégrale synthétisée à la membrane du RE. Son domaine N-terminal contient deux domaines transmembranaires délimitant une boucle cytosolique et une boucle antigénique (BAG), présentée à la surface des virus. Sa partie C-terminale est très hydrophobe et prédite comme membranaire. Par ailleurs, deux déterminants d'infectiosité ont été identifiés sur preSl et la BAG. La première partie de nos travaux a consisté à caractériser le mode de fonctionnement des deux déterminants d'infectiosité. Nos résultats sont en faveur d'un fonctionnement indépendant de preSl et de la BAG à l'entrée virale. De plus, le rôle de la BAG nécessiterait la coordination de nombreuses protéines de surface alors que seulement quelques domaines preSl sont suffisants à l'infection. Finalement, le mode de fonctionnement de preSl semble reposer sur une coopération allostérique des différents sous-éléments qu'il contient. La deuxième partie de nos travaux a consisté à préciser la topologie du domaine C-terminal de la protéine S-AgHBs de manière à caractériser plus précisément son rôle dans la morphogénèse HBV et HDV. Cette région s'associerait aux membranes cellulaires vraisemblablement par les domaines 154-174 et 202-226. Les résidus 202-226 sont très hydrophobes et pourrait participer, avec la région 71-102, à la dimérisation des protéines de surface. La région 154-174 est probablement organisée en hélice amphiphile positionnée parallèlement aux membranes ; elle pourrait participer au recrutement du cholestérol. Enfin, les résidus 193-204 serait cytoplasmiques, en accord avec leur fonction dans le recrutement de la ribonucléoprotéine HDV
The budding mechanism of the Hepatitis B Virus (HBV) is entirely dépendent on its envelope proteins. These proteins form oligomers and spontaneously bud into the lumen of the endoplasmic réticulum (ER), mainly as empty subviral particles that are secreted in large quantities by infected cells. The envelope proteins occasionally recruit HBV nucleocapsids leading to the formation of complete virions also called Dane particles. Ribonucleoproteins of the Hepatitis Delta Virus (HDV) take advantage of this unusal budding mechanism: they bind to the envelope proteins and are secreted as HDV virions. There are three HBV envelope proteins: the small protein S-AgHBs, the medium protein M-AgHBs, and the large protein L-AgHBs. They share a common C-terminal domain but the size of their N-terminal domains differs. The S protein contains only the S domain, while the M and the L proteins consist respectively of the S and preS2 domains, and the S, preS2, and preSl domains. The S-AgHBs protein drives HBV and HDV budding. This integral protein is synthesized at the ER membrane. Its N-terminal region contains two transmembrane domains forming a first cytosolic loop and an antigenic loop (AGL) that is presented at the surface of the viruses. Its C-terminal domain is highly hydrophobic and predicted as a membrane domain. In addition two infectivity determinants have been identified on the preSl domain and the AGL. First our study aimed at characterizing the mechanism of action of the two infectivity determinants. Our results indicate that these determinants are functionaly independant at viral entry. The role of the AGL may require the intervention of many surface proteins while only a few domains of preSl are sufficient for infection. Finally, the mode of action of the preSl domain seems to be mediated by an allosteric cooperation of its sub-elements. The second part of our study aimed at specifying the topology of the C-terminal domain of the S-AgHBs protein in order to further characterize its role in HBV et HDV morphogenesis. This region most likely associates with cellular membranes through the 154-174 and 202-226 domains. The 202-226 residues are highly hydrophobic and may be implicated, together with the 71-102 region, in the surface proteins dimerization. The 154-174 region is presumably organized as an amphipathic helix, which is parallel to membranes. It may participate in cholesterol recruitment. Lastly, residues 193-204 may be exposed cytoplasm in agreement their role in HDV ribonucleoprotein recruitment

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Patient, Romuald. "Obtention de particules sous-virales d'enveloppe du virus de l'hépatite C." Thesis, Tours, 2008. http://www.theses.fr/2008TOUR3108.

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Abstract:

En 1989, près de quinze ans après la mise en évidence d’une forme d’hépatite virale « non A-non B », le virus de l’hépatite C (VHC) a pu être isolé et son génome séquencé. En presque vingt ans, de nombreuses avancées techniques majeures ont permis de mieux comprendre le cycle de réplication de ce virus. Cependant, l’infection par ce virus représente actuellement la première indication de transplantation hépatique dans les pays industrialisés. On estime que 3% de la population mondiale est constituée de porteurs chroniques du VHC ; faisant de cette maladie un problème majeur de santé publique. De plus, même si des thérapies anti-virales sont disponibles pour enrayer la réplication du VHC, ces traitements ne sont vraiment efficaces que pour la moitié des patients traités. Malgré une recherche intensive, il n’existe toujours pas de vaccin préventif contre le VHC ayant fait la preuve définitive de son efficacité. La plupart des candidats vaccins en développement reposent sur l’utilisation de formes tronquées des protéines d’enveloppe du virus, constituant des immunogènes probablement moins pertinents que les formes complètes retrouvées sur l’enveloppe virale. L’objectif de ce travail de thèse a donc été de développer et de produire des particules dites sous-virales d’enveloppe constituées uniquement de l’enveloppe lipoprotéique du virus comme candidat vaccin potentiel contre le VHC, en exploitant les stratégies utilisées pour la production du vaccin contre le virus de l’hépatite B (VHB). En effet, le vaccin contre l’hépatite B repose sur la capacité de la petite protéine d’enveloppe S du VHB à générer spontanément des particules d’enveloppe vides sécrétées et non infectieuses. L’utilisation de ces particules comme vaccin a fait ses preuves depuis maintenant plus de vingt ans. Au cours de ce travail, nous avons dans un premier temps développé un modèle d’étude de la morphogenèse de ces particules sous-virales du VHB, basé sur la production de la protéine S du virus à l’aide d’un vecteur dérivé du génome du virus de la Forêt de Semliki (SFV). Ce modèle s’est avéré déterminant pour apporter des informations originales sur la morphogenèse et le trafic intracellulaire des particules sous-virales d’enveloppe du VHB. Nous avons pu montré que le bourgeonnement de ces particules au sein du réticulum endoplasmique (RE) se fait initialement sous forme de structures filamenteuses ; contrairement à ce qui était présumé dans le modèle couramment admis. Empaquetés et transportés vers un compartiment intermédiaire entre le RE et l’appareil de Golgi (ERGIC), ces filaments sont ensuite convertis en particules sphériques qui seront sécrétées. Dans un second temps, ce modèle nous a permis d’étudier les capacités d’assemblage en particules sous-virales d’enveloppe de différentes protéines chimères d’enveloppe VHC-VHB. Nous avons démontré que ces protéines de fusion, contenant la totalité de la protéine d’enveloppe E1 ou E2 du VHC, étaient capables de s’assembler puis d’être sécrétées sous forme particulaire lorsqu’elles étaient co-produites avec la protéine S sauvage du VHB. De telles particules, morphologiquement similaires à celles du vaccin contre l’hépatite B, pourraient donc constituer la base d’un vaccin prototype. Le système d’expression transitoire utilisé pour ces expériences ne permettant pas de produire ces particules en grande quantité, des clones cellulaires de la lignée CHO produisant de manière stable les particules d’enveloppe chimèriques ont été développés. Si comme nous l’espérons ce vaccin prototype donnait des résultats encourageants, sa production pourrait s’appuyer à terme sur les procédures industrielles existantes pour la production du vaccin contre le VHB, dans le but d’obtenir à grande échelle un vaccin protégeant à la fois contre l’hépatite B et l’hépatite C
N/a

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Hourioux, Christophe. "Interactions entre les protéines d'enveloppe et les protéines de capside au cours de la morphogenèse virale : étude comparée du virus de l'hépatite B, de son satellite delta, et du virus de l'immunodéficience humaine de type 1." Tours, 1999. http://www.theses.fr/1999TOUR3307.

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Abstract:

L'objectif de ces travaux était de rechercher pour ces trois virus les domaines de l'enveloppe potentiellement impliqués dans la morphogenèse virale. L'enveloppe du VHB est constituée par trois protéines S, M et L dont les domaines cytosoliques ont été cartographiés en peptides de synthèse. Leur affinité pour des nucléocapsides purifiées a été évaluée par des tests d'interaction de type E. L. I. S. A. Le même type d'étude a été réalisé avec le VHD qui s'enveloppe dans les protéines S, M et L du VHB. Les mécanismes de morphogenèse du VHD ont été étudiés par mesure des interactions protéines-protéines entre le panel de peptides utilisé précédemment pour le VHB et les deux formes delta 24 et delta 27 de l'Ag HD constituant la pseudocapside virale. Pour le VIH-1, l'affinité de particules Pr55Gag immatures a été testée pour 12 peptides chevauchants, couvrant le domaine cytoplasmique de la glycoprotéine d'enveloppe gp41TM et 4 peptides couvrant les domaines cytoplasmiques de protéines HLA-DR connues pour être incorporées dans l'enveloppe virale. Des travaux préliminaires montrent que des peptides présentant une affinité pour les capsides pourraient présenter des perspectives en stratégie antivirale en entrant en compétition avec les protéines d'enveloppe lors des étapes d'assemblage et de sécrétion virale.

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Julithe, Romain. "Etude fonctionnelle des protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite B dans l'assemblage et le caractère infectieux des virions HBV et HDV." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077256.

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Abstract:

Il existe 10 génotypes du virus de l'hépatite B (HBV) dans le monde. Les protéines d'enveloppe HBV et du virus de l'hépatite delta (HDV) possèdent en position 146 de leur domaine commun un site de N-Glycosylation. Seules 50% de ces protéines sont toujours glycosylées quel que soit le génotype. La première partie de mon projet a consisté à étudier l'influence de la variabilité génétique HBV sur l'activité des protéines d'enveloppe à différentes étapes du cycle viral et sur l'efficacité de neutralisation par des anticorps anti-AGHBS. Les résultats montrent que les variations de séquence des protéines HBV ont peu de conséquences sur l'efficacité d'assemblage/sécrétion des particules sous virales (PSV) et virions HDV, et sur le caractère infectieux. En revanche, les variations de séquences des épitopes du déterminant-A de la boucle antigénique (BAG) affectent l'activité neutralisante des anticorps. La seconde partie de mon projet a pour but de déterminer la (ou les) fonction(s) associée(s) au phénomène de glycosylation N146 des protéines d'enveloppe. Nos résultats montrent que la glycosylation N146 n'est pas essentielle à la production des PSV HBV et des virions HDV, mais elle est importante pour l'assemblage/sécrétion des virions HBV. Cette glycosylation n'est pas nécessaire au caractère infectieux, et une hyperglycosylation des protéines d'enveloppe -par ajout de plusieurs sites de N-glycosylation- est compatible avec la production de PSV, et avec la préservation du caractère infectieux si la BAG porte moins de 4 glycanes. Nous montrons aussi qu'une hyperglycosylation bloque l'accès d'anticorps monoclonaux anti-AGHBS à certains épitopes du déterminant-A
There are 10 genotypes of hepatitis B virus (HBV) in the world. The HBV and hepatitis delta virus (HDV) envelope proteins have, in the position 146 of the common's domain, a N-Glycosylation site. Only 50% of these proteins are always glycosylated, whatever the genotype. The first part of my project consists in studying the influence of the HBV genetic variability with regard to the envelope protein's activities at different step of the viral circle and with regard to the neutralization's efficiency of anti-HBSAG antibodies. The results show that variations in the aminoacid sequence of the HBV proteins have minor consequences on the assembly/secretion of subviral particles (SVP), HDV virions and the infectivity. However, sequence variations in the epitope of the A-determinant of the antigenic loop (AGL) affect the neutralizing activity of the anti-HBSAG antibodies. The second part of my project consists on determining the function(s) associated with the N146 glycosylation of the envelope proteins. Our results show that N146 glycosylation isn't essential for the HBV SVP and HDV virions production, but important for the assembly/secretion of the HBV virions. This glycosylation is not required for infectivity and hyperglycosylated envelope proteins - by adding several glycosylation sites in the AGL - is compatible with the SVP production and the conservation of the infectivity, in the AGL presents less than 4 glycans. We also show that hyperglycosylation prevents access of the anti-HBSAG Monoconal antibodies to epitope of the A-determinant

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Jammart, Baptiste. "Étude in vitro de l'association du virus de l'hépatite C avec les lipoprotéines de l'hôte." Thesis, Lyon 1, 2012. http://www.theses.fr/2012LYO10082/document.

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Abstract:

Le virus de l’hépatite C (HCV) infecte les hépatocytes. Il est remarquable par le fait q’ilperturbe fortement le metabolisme lipidique de l’hôte, conduisant à des dysfonctions majeures telles qu’une stéatose ou une résistance à l’insuline. In vivo, les virions sériques présentent une densité faible et variable reflétant leur association aux lipoprotéines de faible et de tres faible densité (LDL et VLDL). Ainsi, l'existence de lipo-viro-particules (LVP), contenant à la fois les constituants viraux et les apolipoprotéines B (apoB) et E (apoE) a été suggerée. Ces LVP joueraient un rôle important dans la persistance virale. Cependant, cette association entre HCV et apoB n'a pas été retrouvée in vitro avec les modeles cellulaires disponibles.Mes travaux de thèse se sont donc concentrés sur la mise en place d'un nouveau modèle deculture cellulaire capable de produire a la fois des VLDL et des particules virales HCV, permettantainsi d’étudier l’interaction entre les deux voies de synthèse. Dans un premier temps, lacaracterisation de la production de lipoproteines par differentes lignees d'hepatocytes a permis demontrer l'existence d'un défaut de secretion de VLDL en cellules Huh7.5, classiquement utiliséespour étudier HCV in vitro, alors que les cellules HepG2 et HepaRG sont capables de produire des VLDL physiologiques. Dans un second temps, des cellules HepG2 repliquant HCV de manière persistante ont été utilisées pour caractériser les particules virales produites. Etonnamment, a l'instar des cellules Huh7.5 et malgré leur capacité a produire des VLDL, les cellules HepG2 ne secreteraient pas de LVP mais des particules virales positives pour apoE et négatives pour apoB
Hepatitis C virus (HCV) mainly infects hepatocytes. It is unique in its ability to impair host lipidmetabolism, leading to major liver dysfunctions as, for instance, hepatic steatosis or insulinresistance. In vivo, serum virions have a low and variable density, reflecting their association withlow- and very-low-density lipoproteins (LDL and VLDL). Hence, the existence of lipo-viro-particles(LVP), containing both viral components as well as apolipoprotein B (apoB) and E (apoE), has beensuggested. These LVPs could play an important role in viral persistence. However, this associationbetween HCV and apoB has not been observed in vitro, using the currently available cell culturemodels.Therefore, during my PhD, I have worked at setting up a new cell culture model, which wascapable of producing both VLDL and HCV particles, and therefore would enable the study of theinterplay between both synthesis pathways. First of all, we characterized lipoprotein production indifferent hepatocyte cell lines and confirmed that Huh7.5 cells, usually used to study HCV in vitro,were deficient for VLDL secretion, whereas two other cell lines, HepG2 and HepaRG, were able toproduce quasi-physiological VLDLs. Therefore, in a second time, we used HepG2 cells to replicate aHCV strain containing a selection gene and to characterize viral particle production. Surprisingly,VLDL-producing HepG2 cells were also unable to secrete LVPs, but rather secreted apoE-positive andapoB-negative viral particles, which were similar to ones Huh7.5 cells produced. This suggests thatthe ability to produce LVPs does not correlate with the ability to produce VLDL

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Pastor, Florentin. "Etude des intéractions protéine-protéine entre l'enveloppe et la capside virale au cours de la morphogénèse du Virus de l'Hépatite B (VHB)." Thesis, Tours, 2019. http://www.theses.fr/2019TOUR3810.

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Abstract:

Certaines phases tardives du cycle viral du Virus de l’Hépatite B (VHB) restent encore mal connues, comme l’assemblage de la particule virale. Il est connu que la capside formée par multimérisation de la protéine core autour de l’ADN viral acquiert ses trois protéines d’enveloppe (S, M, L) par bourgeonnement viral, cependant les signaux moléculaires impliqués restent mal identifiés. Pour explorer les interactions entre ces protéines virales, des approches comme la microscopie confocale et la réalisation de co-immunoprécipitations spécifiques ont été développées. Dans un contexte mimant ou non le cycle complet du VHB, ces approches montrent l’existence d’interactions spécifiques ciblant le domaine matrice (MD, protéine L) et le domaine d’interaction à la matrice (MBD, protéine core). Ces résultats, en accord avec les données de la littérature, permettent de préciser à un niveau moléculaire les interactions requises entre les protéines structurales au cours de la morphogenèse du VHB
Some late phases of the hepatitis B virus (HBV) cycle are still poorly understood, such as the viral particle assembly. It is known that the capsid formed by the multimerization of the core protein around the viral DNA acquires its three envelope proteins (S, M, L) by viral budding, however the involved molecular signals remain poorly known. To explore the interactions between these viral proteins, approaches such as confocal microscopy and the realization of specific co-immunoprecipitations have been developed. In a context that may or may not reflect the complete HBV lifecycle, these approaches show the existence of specific interactions between the matrix domain (MD, L protein) and the matrix interaction domain (MBD, core protein). These results, in accordance with the data in the literature, make it possible to specify at a molecular level the required interactions between structural proteins during the HBV morphogenesis

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Abdul, Fabien. "Développement et évaluation de nouvelles stratégies pour le traitement des hépatites B chroniques, dans le modèle du canard de Pékin infecté par le DHBV." Thesis, Lyon 1, 2010. http://www.theses.fr/2010LYO10284.

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Abstract:

Développement et évaluation de nouvelles stratégies pour le traitement des hépatites B chroniques, dans le modèle du canard de Pékin infecté par le DHBVL’infection chronique par le HBV est la cause majeure de cirrhose hépatique et de carcinome hépatocellulaire, conduisant à plus d’un million de décès chaque année. Le faible taux de réussite des thérapies actuelles des hépatites B montre la nécessité du recours à des méthodes thérapeutiques alternatives. Ainsi, nous avons étudié une stratégie pertinente reposant sur l’utilisation de molécules antisens (PNAs) couplées à des peptides perméabilisants (CPPs). Nous avons démontré que les PNAs ciblant le signal d’encapsidation du DHBV couplés au CPP pénétraient dans les cellules et conduisait à une inhibition de la réplication virale. De plus, nous avons mis en évidence une activité antivirale du CPP (Arg)8 seul. Nous avons ensuite évaluer le mécanisme d’action antivirale du CPP in vitro et avons démontré qu’il inhibait les stades tardifs de la morphogénèse virale, conduisant à une inhibition forte de la sécrétion des particules virales. Par ailleurs, nous nous sommes intéressés à l’évaluation de stratégies immunothérapeutiques, reposant sur la vaccination génétique. Nous avons démontré les bénéfices de la co-administration de cytokines (IFNγ), avec un vaccin à ADN dirigé contre la grande protéine d’enveloppe du DHBV (preS/S), sur l’amplitude de la réponse humorale et sur le pouvoir neutralisant des anticorps induits. Enfin nous avons évalué les bénéfices d’une approche d’immunisation hétérologue « prime-boost » associant l’immunisation à ADN et un vecteur viral (AdénoCELO) recombinant, codant la protéine preS/S du DHBV et l’IFNγ. Nous avons montré que l’immunisation hétérologue induisait une réponse humorale plus forte que celle induite par l’immunisation homologue
Development and evaluation of new strategies for treating chronic hepatitis B in the model of Peking duck infected with DHBVChronic infection with Hepatitis B virus (HBV) is the major cause of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma, leading to more than one million deaths each year. The low success rate of current therapies against HBV infection shows the need of alternative therapeutics. Thus, we studied a new strategy based on the use of antisense molecules (PNAs) coupled with cell penetrating peptides (CPPs). We have shown that PNAs targeting the DHBV encapsidation signal coupled to CPPs penetrated into the cells and led to an inhibition of viral replication. In addition, we have demonstrated an antiviral activity of the CCP (Arg)8 itself. We then evaluate the mechanism of antiviral action of this CPP in vitro and have shown that it inhibited the late stages of viral morphogenesis, leading to a strong inhibition of the release of viral particles. Furthermore, we were interested in evaluating immunotherapeutic strategies, based on DNA vaccination. We have demonstrated the benefits of co-administration of cytokines (IFNy), with a DNA vaccine directed against the DHBV large envelope protein (preS/S), enhancing the magnitude of humoral response and enhancing neutralizing anti-DHBV antibody response. Finally we evaluated the benefits of a heterologous immunization approach or prime-boost immunization involving DNA vaccination and a recombinant viral vector (AdenoCELO) encoding the DHBV preS/S and IFNy proteins. We have shown that heterologous immunization induced a humoral response stronger than that induced by homologous immunization. By contrast, the heterologous prime-boost strategy was less effective than homologous DNA immunization for therapy of chronic DHBV-carrier ducks

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Jenna, Sarah. "Etude de la morphogenèse du virus de l'hépatite delta." Aix-Marseille 1, 1998. http://www.theses.fr/1998AIX11042.

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Abstract:

Le virus de l'hepatite delta (vhd) est un virus defectif, satellite du virus de l'hepatite b (vhb). L'assemblage des particules et pseudoparticules virales vhb et vhd se fait a la membrane d'un compartiment pre-golgien. Parmi les trois proteines d'enveloppe codees par le genome du vhb (l, m et s), la proteine s est necessaire et suffisante a l'assemblage et a la secretion des particules du vhd. L'une des deux proteines codees par le genome du vhd, la proteine -l est indispensable a l'assemblage des particules delta. Le recrutement de la nucleocapside du vhd par les proteines d'enveloppe codees par le vhb semble necessiter l'interaction directe de la proteine s et de la proteine -l. Afin de determiner les domaines de la proteine s impliques dans le recrutement de la nucleocapside du vhd par la proteine s, nous avons genere une batterie de mutants de la proteine s et analyse leurs caracteristiques fonctionnelles dans un systeme cellulaire homologue. La proteine s est une proteine membranaire polytopique, de 226 residus amines, presentant quatre domaines transmembranaires, nommes signaux i, ii, iii et iv. Les deux domaines hydrophiles majeurs delimites par les signaux i-ii et ii-iii sont localises dans le cytoplasme et dans le lumen du reticulum endoplasmique et sont nommes domaine cytoplasmique et boucle antigenique. Cette etude nous a permis de determiner des domaines de la proteine s importants pour l'expression et la secretion des proteines d'enveloppe. Nous avons de plus, identifie trois domaines importants pour l'enveloppement et la secretion des particules du vhd, situes respectivement dans le domaine cytoplasmique, la boucle antigenique et dans le domaine hydrophobe constitue par les signaux iii et iv. Suite a cette etude, nous proposons un modele d'assemblage des particules du vhd suivant lequel la proteine -l interagirait avec la proteine s au niveau d'un site non lineaire.

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Kassab, Somar. "Variabilité du virus de l'hépatite B." Thesis, Bordeaux, 2014. http://www.theses.fr/2014BORD0056/document.

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Abstract:

Le polymorphisme génétique du virus de l’hépatite B (VHB) a déjà été étudié pourtenter de comprendre les facteurs viraux influençant l'évolution de la maladie, mais les étudessont discordantes. Ceci peut être lié au fait que les précédents travaux n’ont été menés quedans des populations avec une faible variété de génotypes et présentant des charges viralesplasmatiques (CVP) élevées.Nous avons donc étudié la variabilité du génome complet du VHB chez 422 individusinfectés chroniquement, naïfs de traitements anti-viraux et dont 38% présentaient une CVPinférieure à 103 UI/mL. L’optimisation de l’amplification par PCR du génome complet duVHB nous a permis de séquencer en technique Sanger plus de 90% du génome pour 320échantillons. Le séquençage direct a mis en évidence des co-infections. Ceci a été confirmé enséquençage clonal par pyroséquençage de 27 échantillons qui a montré des proportions departicules défectives variables mais toujours en co-infections avec des sous-populationssauvages. Le génotypage des séquences obtenues par technique Sanger a montré une grandereprésentativité des génotypes les plus fréquents (A à E) ainsi que 60 potentiels recombinantsinter-génotypiques. Cependant le séquençage clonal par pyroséquençage et clonage vectorielclassique de ces derniers montre la présence de co-infections de plusieurs génotypes ou laprésence de génotypes intermédiaires entre génotypes proches. Ceci est en défaveur derecombinaison par échange de matériel génétique comme ce qui a été suggéré dans lalittérature.Cette étude sera complétée par l’analyse de corrélation entre les polymorphismes et lesmarqueurs de mauvaise évolution de la pathologie
The genetic polymorphism of hepatitis B virus (HBV) has been investigated tounderstand its impact on disease evolution, with discordant results. This could be due to thenarrow range of genotype and plasmatic viral load in these studies.We analysed complete genome variability of circulating HBV, in 422 chronicallyinfected patients. All were naive of anti-viral treatement and 38% had a plasmatic viral loadbelow 103 UI/mL. After optimisation of full length genome PCR amplification, we obtainedSanger sequences for more than 90% of HBV genome in 320 samples. We detected by directsequencing multiples co-infections that were confirmed by clonal pyrosequencing in 27samples. Defective viruses were always observed in co-infection with wild type virus. Directsequences showed a large representation of the most frequent genotypes (A to E), but also 60potential inter-genotypic recombinants. Clonal pyrosequencing and vectorial sequencingshowed that these potential recombinants were co-infections with different genotypes orintermediate genotypes located between close genotypes. These observations are incontradiction with the hypothesis described in the literature on recombination by geneticmaterial exchange.This study will be completed by a correlation analysis between the polymorphisms andmarkers of bad prognosis during HBV-induced disease

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Ait, Goughoulte Malika. "Etude de la morphogenèse de pseudo-virions du virus de l'hépatite C." Tours, 2006. http://www.theses.fr/2006TOUR3304.

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Abstract:

Notre laboratoire a développé une stratégie qui permet d’obtenir des pseudo-particules du virus de l’hépatite C (VHC) en cellule de mammifère. En l’absence de bourgeonnement complet des pseudo-particules, ce travail a d’abord permis d’exclure l’éventuel rôle que pouvaient jouer les protéines p7, F et les extrémités non codantes du génome viral dans la morphogenèse des particules virales. Ce système a par ailleurs été utilisé comme outil pour étudier les éléments requis pour les premières étapes d’assemblage du VHC. Ainsi, nous avons montré que la protéine de capside seule était capable d’initier le bourgeonnement en pseudo-particules du VHC et montré la nécessité de son clivage par une enzyme cellulaire, la signal peptide peptidase (SPP) pour le bourgeonnement viral. Ce travail a également permis de mieux préciser les résidus impliqués dans ce clivage
Our laboratory has developed a system allowing the production of HCV-like particles (HCV-LPs) in mammalian cells. In the absence of a complete HCV-LPs budding, this system was first used to exclude the putative role of cofactors such as the untranslated regions of the HCV genome, the p7 and F proteins in the virus particle morphogenesis. Although this model displays abortive HCV-LPs budding, it remains an useful tool for studies of the early events of HCV assembly mammalian cells. Inded this model allowed us to demonstrate that the HCV core proteine alone was able to generate HCV-LPs. This work further showed that the cleavage of the core protein by a cellular enzyme, the signal peptide peptidase (SPP), is required for HCV budding. Our study shed also some light on the HCV core residues involved in the SPP cleavage

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Fourel, Isabelle. "Étude des agents inhibiteurs de la réplication du virus de l'hépatite B : intérêt des modèles animaux de l'hépatite B humaine." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO1T012.

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Rollier, Christine. "Etude, à l'aide du virus de l'hépatite B du canard, de l'immunisation génétique pour la prévention et le traitement de l'hépatite B." Lyon 1, 2000. http://www.theses.fr/2000LYO10086.

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Abstract:

Les traitements actuels visant a inhiber la replication du virus de l'hepatite b (vhb) chez les patients chroniquement infectes, et ainsi a prevenir l'evolution des hepatites b chroniques vers l'hepatocarcinome, ont une efficacite insuffisante. Des donnees recentes suggerent que les approches immunotherapeutiques, et en particulier l'immunisation par adn nu ou vaccin genetique, pourraient etre particulierement interessantes pour le controle de l'infection chronique par le vhb. Cette nouvelle approche de vaccination est basee sur l'induction de puissantes reponses immunitaires par injection de l'adn exprimant une proteine antigenique virale. L'objectif de notre travail etait d'utiliser le modele du virus de l'hepatite b du canard (dhbv), etroitement apparente au vhb, afin d'evaluer l'efficacite de la vaccination genetique pour la protection et la therapie de l'hepatite b. Dans un premier temps, nous avons mis au point l'immunisation par adn nu de canards avec un plasmide codant pour la grande proteine d'enveloppe (l) du dhbv. Nos resultats montrent que l'immunisation d'animaux adultes non infectes avec ce plasmide induit une reponse humorale forte, specifique de la proteine l du dhbv, et capable de neutraliser le pouvoir infectieux du virus. De plus, les anticorps induits sont transmis verticalement de la cane immunisee aux canetons, via l'uf, et sont capables de les proteger contre une epreuve virulente par le dhbv. Dans un deuxieme temps, nous avons demontre que la combinaison de l'immunisation par adn avec la production d'anticorps dans les ufs permet d'obtenir rapidement des quantites tres importantes d'anticorps specifiques de l'enveloppe virale et neutralisants (brevet depose). De plus, l'immunisation d'animaux nouveau-nes par adn nu non seulement n'induit pas d'immunotolerance mais est egalement capable d'induire une reponse primaire memoire superieure a celle induite par l'immunisation avec une proteine recombinante. Enfin, l'immunotherapie par adn nu d'animaux chroniquement infectes par le dhbv induit une baisse de la replication virale chez tous les animaux traites, et meme dans quelques cas l'elimination de la forme d'adn viral superenroule intrahepatique responsable de la chronicite de l'infection. L'ensemble de ces resultats suggere que l'immunisation par adn pourrait representer la base de nouvelles approches protectrices et therapeutiques de l'infection par le vhb.

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Blanchet, Mathieu. "Etude des déterminismes de maturation et d’infectiosité des virus des hépatites B et Delta." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077031.

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Abstract:

Les protéines d'enveloppe HBV bourgeonnent spontanément dans la lumière du RE, majoritairement sous la forme de particules sous virales vides. Dans de rares cas, elles recrutent la nucléocapside HBV, aboutissant à la formation de virions HBV. Ce mode de bourgeonnement profite à l'HDV, un virus défectif qui emprunte les protéines d'enveloppe HBV pour accomplir son cycle infectieux. Ces protéines, au nombre de trois, possèdent une extrémité C-terminale commune. La protéine S-AgHBs est formée du seul domaine S, la protéine M-AgHBs des domaine S et pre-S2, et L-AgHBs des domaines S, pre-S2, et pre-S1. S- et L-AgHBs sont requises pour la maturation d'HBV alors que S-HBsAg suffit à l'assemblage de virions HDV. Le domaine S contient quatre domaines transmembranaires qui délimitent deux boucles cytosoliques (BCY-I et -II) et une boucle disposée dans la lumière du RE, appelée boucle antigénique. Nous avons recherché, sur les BCY-I et -II, des déterminants de maturation et d'infectiosité HBV et HDV. Nos résultats montrent l'absence de déterminant dans la BCY-I. Par ailleurs, la BCY-II n'a pas de fonction à l'entrée virale. Nous avons ensuite étudié la région pre-S de L-AgHBs, qui porte le déterminant majeur d'entrée virale HBV et le domaine matrice de maturation HBV. Nous avons utilisé le modèle HDV pour cette étude. Nos résultats montrent que les déterminants d'infectiosité HDV dans la région pre-S sont confinés aux 75 premiers acides aminés, éliminant tout rôle du domaine matrice. Ces résultats vont dans le sens d'un mécanisme d'entrée virale commun pour les virions HBV et HDV
The HBV envelope proteins bud spontaneously at the ER membrane, mainly as subviral empty particles. In rare cases, the HBV nucleocapsid is recruited, leading to the formation of virions. This peculiar budding process is to the benefit of HDV, a defective virus that needs the HBV envelope proteins to complete its life cycle. Three envelope proteins are encoded by the HBV genome. They differ from each other by the size of their N-terminal extension. The S-HBsAg protein is made of the S domain only, M-HBsAg is made of the S and pre-S2 domains, and L-HBsAg is made of the pre-S1, pre-S2, and S domains. S- and L-HBsAg are required for HBV maturation. S-HBsAg is sufficient for HDV maturation. The S domain contains four transmembrane domains, two cytosolic loops (CYL-I and -II), and a loop located in the ER lumen. The first part of our work consisted in the identification of HBV and HDV infectivity and maturation determinants in CYL-I and -II. Our results show the absence of maturation and infectivity determinants for HBV and HDV in CYL-I. CYL-II does not contain any amino-acid indispensable for viral entry. The second part of our work consisted in a study of the L-HBsAg pre-S domain, which harbours the main HBV infectivity determinant. The pre-S domain also contains the matrix domain for HBV maturation, whose role at viral entry could not be tested in the HBV model. We used the HDV model to study this region. Our results show that HDV infectivity determinants are confined to the first 75 N-terminal amino-acids of pre-S1, excluding any role of the matrix domain in the infection process. These results are in favour of common infectivity determinants for HBV and HDV

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Jeantet, Damien. "Caractérisation moléculaire et biologique des virus de l'hépatite B cryptiques." Lyon 1, 2002. http://www.theses.fr/2002LYO10253.

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Abstract:

Le virus de l'hépatites B (VHB) appartient à la famille des Hepadnaviridae caractérisés par leur génome à ADN, leur réplication par une transcriptase inverse et leur hépatotropisme. Ces virus sont à l'origine d'hépatites aiguës ou chroniques qui favorisent l’apparition de cirrhoses conduisant souvent vers le développement d'un carcinome hépatocellulaire. Malgré l'existence d'un vaccin efficace contre le VHB et l'utilisation de tests performants pour la détection de ce virus, l'infection par le VHB lors de transfusion sanguine demeure la transmission virale la plus importante. Ces tests ont été récemment remis en cause chez certains individus qui sont infectés par des variants du VHB qui se répliquent peu ou qui sont mutés dans différents gènes viraux et qui ne sont détectés par aucun des tests commerciaux de diagnostic utilisés en routine. Ces mutants particuliers ont été dénommés : "VHB cryptiques". Dans ce contexte, nos travaux ont permis de déterminer les particularités qui distinguent certains virus de l’hépatite B cryptiques des VHB sauvages et par quels moyens ces variants échappent aux tests classiques de dépistage du VHB. L’objectif de ce travail était d’amplifier, cloner et séquencer tout ou une partie de ces génomes viraux afin de les comparer avec des séquences de VHB sauvage et enfin analyser biologiquement ces génomes de VHB cryptiques. Dans un premier temps, nous avons comparé plus d’une centaine de fragment sous génomiques ou génomiques de ces virus. Nous avons pu observer que la charge virale sérique des VHB cryptiques est 100 à 1000 fois plus faible que pour les VHB sauvages. Des mutations importantes ont été aussi constatées au niveau du déterminant "a" de l'AgHBs qui est l’épitope principalement reconnu par les tests de diagnostic. Dans un deuxième temps, nous avons sélectionné 12 séquences ayant des mutations uniques ou rares au niveau de l’AgHBs parmi toutes celles étudiées. Elles ont été ensuite clonées dans un vecteur d’expression dans le but d’étudier la capacité des tests de détection à reconnaître ce type de mutation. Les résultats de cette étude montrent que la majorité des mutations analysées (75%) sont parfaitement détectées. On peut donc expliquer le défaut de reconnaissance des tests par un défaut de sensibilité plutôt qu’un défaut de spécificité. Notre dernière étude a consisté à amplifier et cloner les génomes entiers de VHB infectant un patient (X27). Nous avons montré l’existence d’une double population virale de génotypes différents (A et D). La population de génotype D est prédominante par rapport à la population de génotype A mais nous avons aussi établi l’obligation d’une complémentation entre ces deux populations qui ne pourraient exister seule chez un hôte. A terme, l’ensemble de nos travaux a pour but de mieux connaître les caractéristiques particulières de ces VHB cryptiques afin d’améliorer les tests de détection existants et permettre ainsi l'identification des individus porteurs de VHB cryptiques qui n'ont pas, ou n'ont pas encore, de signes cliniques d’une infection virale

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Iskandar, Nouhad. "Contribution à l'étude épidémiologique du virus de l'hépatite delta." Paris 12, 1990. http://www.theses.fr/1990PA120062.

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Abstract:

La repartition du virus de l'hepatite delta (vhd) et son association aux hepatites aigues, aux maladies hepatiques chroniques et au carcinome hepatocellulaire (chc) ont ete etudiees chez des sujets presentant des signes serologiques d'infection actuelle par le virus de l'hepatite b (vhb) en milieu maghrebin, en afrique noire et dans une population francaise tres exposee au vhb. Aucune positivite pour les anticorps anti-delta n'a ete retrouvee chez 66 enfants algerois presentant une hepatite aigue b ou apparentee (presence transitoire de marqueurs non conventionnels de vhb). En tunisie centrale, anti-delta etait retrouve, parmi les sujets positifs pour aghbs, chez 12/42 donneurs de sang, 16/26 cirrhotiques dans chc et 17/23 sujets atteints de chc. Parmi les 211 sujets porteurs d'aghbs originaires du mali et du senegal, 4 sujets etaient positifs pour anti-delta. Par contre, au senegal, ce marqueur etait retrouve chez 4/13 cirrhoses sans chc et 26/114 chc (22,8%) positifs pour aghbs. Au mozambique, l'etude a porte sur 227 sujets aghbs positifs (105 hepatites aigues, 20 cirrhoses sans chc, 102 chc); ces sujets etaient negatifs pour anti-delta a deux exceptions pres (1 cirrhose et 1chc). Seulement 1 des 28 homosexuels francais aghbs positifs testes pour anti-delta etait positif. Ces resultats montrent que la repartition de l'infection par le vhd presente d'importantes variations geographiques

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Cao, Qian. "Caractérisation moléculaire des carcinomes hépatocellulaires liés au virus de l'hépatite B." Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05S010/document.

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Abstract:

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est le plus fréquent des tumeurs primitives du foie. La carcinogenèse hépatique est un processus complexe et multifactoriel qui fait intervenir à la fois des facteurs génétiques de prédisposition (e.g. les SNPs) et environnementaux. Près de 50% des CHC ont pour étiologie une infection par le virus de l'hépatite B (VHB). Au cours de cette infection, de multiples altérations génétiques et virales s'accumulent et favorisent le développement tumoral. Nous avons montré que les CHC liés au VHB présentaient des caractéristiques cliniques et pathologiques différents que ceux d’autres étiologies : 1). Les mutations inactivatrices d’HBx sont sélectionnées dans les tissus tumoraux des CHC liés au VHB, suggérant qu’il existe une pression de sélection spécifique au cours de l’hépatocarcinogenèse. 2). Chez les patients ayant un faible nombre de copies d'ADN VHB par cellule dans le foie non-tumoral, une corrélation avec les facteurs de risque supplémentaires (VHC/OH/NASH) a été identifiée, suggérant un effet coopératif pour la carcinogenèse induite par le VHB. 3). Les mutations TP53 sont associées à un pronostic moins favorable chez les patients ayant un CHC liés au VHB. 4). Les CHC liés au VHB montrent plus fréquemment des phénotypes progéniteurs, avec une surexpression des gènes impliqués dans la régulation du cycle cellulaire et codant pour les protéines onco-fœtales. Quatre SNPs précédemment identifiés par des études pangénomiques (GWAS) asiatiques ont été validés dans la population européenne. Les distributions alléliques semblent varier selon l’étiologie de la pathologie hépatique. Ces résultats soulignent la complexité de la prédisposition génétique au CHC, dont l’étude doit prendre en considération l’origine géographique des patients ainsi que les facteurs de risque associés
Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most common primary liver tumors. Hepatic carcinogenesis is a complex and multifactorial process involving both genetic predisposition (e.g. SNPs) and environmental factors. Nearly 50% of HCC are caused by the hepatitis B virus (HBV) infection worldwide. During HBV infection, multiple genetic and viral alterations accumulate and promote tumor development. By analyzing resected HCC in France, we identified specific molecular features related to HBV infection. First, HBx inactivating mutations are selected in HCC tissues suggesting specific pressure of selection during hepatocarcinogenesis. Second, in patients with a low number of HBV DNA copies per liver cell, we identified additional risk factors like HCV infection, alcohol intake or NASH, suggesting a cooperative effect of these factors with HBV to induce the malignant transformation. Third, TP53 mutations associated with a poor prognostic for HBV infected resected HCC patients. At last, HBV-related tumors demonstrate more frequent progenitor phenotype compared to non-HBV HCC, with an up-regulation of genes that involved in cell cycle regulation and encoded onco-fetal/progenitor proteins. Four SNPs previously identified by genome-wide studies (GWAS) in Asian, have been validated in our European population. Allelic distributions seem to vary according to the etiologies of adjacent liver diseases. These findings underscore the complexity of the genetic predisposition of HCC; further study must consider the geographical origin of patients and associated risk factors

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Amaddeo, Giuliana. "Altérations génomiques des carcinomes hépatocellulaires liées au virus de l'hépatite B." Thesis, Paris 5, 2013. http://www.theses.fr/2013PA05S012.

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Abstract:

Contexte: Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est la plus fréquent des tumeurs primitives du foie. Près de 50% des CHC sont causés par une infection par le virus de l'hépatite B (VHB). Au cours des différents stades de l’infection par le VHB, des multiples altérations génétiques et/ou chromosomiques s'accumulent et favorisent ainsi le développement tumoral. Objectives: a) étudier, in vitro et in vivo, le rôle potentiel d’un nouveau gène susceptible d’être impliqué dans la carcinogénèse hépatique : IRF-2 (Interferon regulatory factor 2). Ce gène a été identifié comme fréquemment délété par analyse CGH-SNP dans les CHC liés à l’infection par le VHB. b) caractériser une série de CHC liés au VHB en étudiant le statut viral, les altérations génétiques et l’expression de différents gènes afin de mieux comprendre le rôle du VHB dans l’hépato-carcinogenèse et comparer ces différents paramètres avec une série de CHC non liés au VHB. Résultats : a) Dans une série de 125 CHC, Sandrine Imbeaud, au sein du laboratoire, a effectué une analyse CGH-SNP microarray et a identifié une région commune de délétion homozygote localisée en 4q34.3-35 comprenant le gène IRF-2 dans 4 échantillons. Nous avons ensuite mis en évidence par séquençage des mutations somatiques inactivatrices dans 2 autres tumeurs. In vitro, la sousexpression d’IRF-2 a entrainé une augmentation de la prolifération cellulaire et sa sur-expression a induit une promotion de l'apoptose cellulaire. In vivo, l’extinction d’IRF-2 était responsable de la formation de tumeurs de grande taille. Les 6 tumeurs inactivées pour IRF-2 étaient associées au VHB (p = 0.0003), et les mutations de TP53 et d’IRF-2 étaient mutuellement exclusives. La sousexpression de IRF-2 induisait une sous-expression de TP53 et une forte corrélation entre les expressions protéiques de p53 et de IRF-2 a été observée (r2 = 0,72, p = 0,004). En plus, on a observé que l’expression des gènes cibles directs de TP53 était modulée par le niveau d‘expression d’IRF-2. Nous avons émise l'hypothèse que IRF-2 pourrait altérer la fonction de p53 car IRF-2 est connue pour se lier à MDM2, un régulateur négatif de l’expression de p53. Le traitement des cellules inactivées pour IRF-2 avec MG132, un inhibiteur du protéasome, a induit la restauration de l'expression de p53. In vivo, le traitement avec bortézomib, un inhibiteur du proteasome utilisé en oncologie, a entrainé une régression des tumeurs inactivées pour IRF-2. b) Nous avons caractérisé sur le plan clinique et moléculaire une série de CHC liés au VHB et, ensuite, nous avons comparé nos résultats avec ceux d’une série de CHC liés à autres étiologies. Nous avons montré que les CHC liés au VHB présentaient des caractéristiques cliniques et pathologiques différentes de celles des CHC non liés au VHB : ils survenaient chez des patients plus jeunes (P < 0.0001), d'origine Africaine ou Asiatique (P < 0.0001), avec un taux sérique d'alpha-foeto protéine élevé (P = 0.008) et étaient sur le plan histologique des tumeurs peu différenciés (P = 0.04). Nous avons identifié des mutations inactivatrices du gène HBX dans 71% des tumeurs et dans 33% des tissus non tumoraux adjacents (P < 0.0001). Dans 63% des cas, le nombre de copies virales dans les tumeurs était plus faible que dans les tissus non tumoraux adjacents (P < 0.0001). Le gène TP53 était le gène le plus fréquemment muté dans les CHC liés au VHB (41%, P = 0.0002), avec des mutations R249S présentes dans 14 échantillons (16%, p < 0.0001). Ce type de mutation est classiquement associé à l'aflatoxine B1. Nous avons observé que les mutations de TP53 étaient un prédicteur indépendant de survie uniquement pour les patients infectés par le VHB. Enfin,
Pas de résumé en anglais
Introduzione: Il carcinoma epatocellulare (HCC) è il tumore primitivo più comune del fegato. Nel mondo, quasi il 50% di tutti gli HCC sono causati dal virus dell'epatite B (HBV). Durante le fasi dell’ infezione da HBV, si possono accumulare alterazioni genetiche e / o cromosomiche e quindi promuovere lo sviluppo del tumore. Obiettivi: a) analizzare in vitro e in vivo il ruolo potenziale di un nuovo gene potenzialmente coinvolto nella carcinogenesi epatica: IRF-2 (Interferon regulatory factor 2). Questo gene è stato identificato mediante l’analisi CGH-SNP come frequentemente deleto negli HCC correlati all’ HBV. b) caratterizzare una cohorte di HCC correlati all’HBV studiandone lo stato virale, le alterazioni genetiche e l’espressione di differenti geni al fine di comprendere meglio il ruolo di HBV nella carcinogenesis epatocellulare e confrontare questi parametri con una cohorte di HCC a diversa eziologia. Risultati: a) In laboratorio, Sandrine Imbeaud ha condotto un'analisi SNP-CGH microarray su una cohorte di 125 HCC che ha evidenziato una regione deleta in maniera omozigote localizzata sul braccio lungo del cromosoma 4 (4q34.3-35) in 4 campioni tumorali. La regione comprende un unico gene: IRF2. In altri due campioni sono state identificate mutazioni somatiche inattivatrici mediante sequenziamento della regione codante di IRF-2. In vitro, la soppressione di IRF-2 ha indotto un aumento della proliferazione cellulare, al contrario, la sua sovra-espressione ha causato un aumento dell’apoptosi cellulare. In vivo, la soppressione di IRF-2 è responsabile della formazione di tumori più grandi nei topi nude. I 6 tumori mutati per IRF2 sono tutti correlati all’ HBV (p = 0,0003. Nella cohorte di tumori studiati, le mutazioni di TP53 e di IRF-2 erano vicendevolmente esclusive. Inoltre, la soppressione dell’espressione della proteina IRF-2 induceva una riduzione dell’espressione della proteina p53 ed una stretta correlazione tra l’espressione delle due proteine è stata osservata (r2 = 0,72, p = 0,004). Inoltre, abbiamo dimostrato che il livello di espressione di IRF-2 è in grado di modulare l'espressione di alcuni geni target di TP53. Abbiamo, quindi, ipotizzato che IRF2 possa alterare la funzione di p53. Come è noto IRF2 può legarsi a MDM2, un regolatore negativo di p53 che induce la sua degradazione proteasomica. Il trattamento di cellule inattivate per IRF2 con MG132, un inibitore del proteasoma, induceva il restauro dell’espressione di p53. In vivo, il trattamento con bortezomib, chemioterapico inibitore del proteasoma, ha determinato la regressione del tumore inattivato per IRF2. b) 86 HCC correlati all’HBV sono stati caratterizzati dal punto di vista clinico e molecolare ed in seguito sono stati confrontati una serie di 90 HCC correlati ad altre eziologie. Gli HCC correlati all’HBV hanno delle caratteristiche cliniche e patologiche diverse da quelle degli HCC d’altra eziologia: insorgenza in pazienti più giovani (p <0,0001), di origine africana o asiatica (P <0.0001), alfa-fetoproteina sierica elevata (P = 0.008) e scarsa differenziazione istologica (P = 0,04). Mutazioni inattivatrici del gene HBX sono state identificate nel 71% dei tumori e il 33% dei tessuti non tumorali adiacenti (P <0.0001). Nel 63% dei casi, il numero di copie virali nel tessuto tumorale era inferiore rispetto al tessuto non tumorale adiacente (p <0,0001). Il gene TP53 è stato il gene più frequentemente mutato nella serie di HCC correlati a HBV (41%, p = 0,0002), con una considerevole presenza di mutazioni al codone 249 (R249S) (16%, p <0,0001). Questo tipo di mutazione è associate classicamente all’ aflatossina B1. Abbiamo osservato, inoltre, che TP53 mutato era un predittore indipendente di sopravvivenza solo per i pazienti infetti da HBV. Infine,

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Chapel, Cynthia. "Étude de la morphogenèse du virus de l'hépatite C et de son inhibition par des antiviraux de nouvelle génrération." Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10241.

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Abstract:

De nouvelles molécules sont nécessaires pour mieux combattre les infections par le virus de l’hépatite C (VHC). La morphogenèse du VHC est une cible intéressante pour le développement de nouveaux antiviraux. La N-glycosylation jouant un rôle important dans le repliement des glycoprotéines VHC, des inhibiteurs de glucosidases pourraient affecter l’assemblage du VHC. En utilisant différents modèles d’études nous avons démontré qu’en présence d’inhibiteurs, E1 et E2 contenaient des contenaient des N-glycanes triglycosylés, n'interagissaient pas correctement avec la calnexine et étaient mal repliées. En raison de cette inhibition, nous avons trouvé que les particules VHC sécrétées étaient moins infectieuses conduisant à une inhibition de l'entrée virale. Ces approches nous ont permis de démontrer l’effet antiviral des inhibiteurs des -glucosidases sur le repliement et l’assemblage des glycoprotéines du VHC, sur la morphogenèse et la sécrétion ainsi que sur l’infectiosité virale

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Cova, Lucyna. "Le virus de l'hépatite B du canard (DHBV) comme modèle pour l'étude de la réplication du virus de l'hépatite B humaine (VHB) et de son rôle dans l'oncogenèse hépatique." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO10001.

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Abstract:

Au cours de la derniere decennie deux facteurs principaux ont ete impliques dans l'etiopathogenie du cancer hepatocellulaire (chc) chez l'homme: le virus de l'hepatite b (vhb) et un carcinogene chimique l'aflatoxine b1 (afb1). Nous avons utilise le canard infecte par le virus de l'hepatite b du canard (dhbv), tres proche du vhb, pour etudier le mecanisme de l'oncogenese hepatique. Apres avoir demontre la presence du dhbv dans les populations des canards domestiques francais et de canards sauvages colvert, nous avons isole differentes souches de ce virus, compare leurs proprietes biologiques et recherche leur eventuel pouvoir oncogene. En administrant l'afb1 pendant deux ans a des canards, infectes ou non par dhbv, nous avons reussi a induire des chc dans ces deux groupes et montrer un effet synergique de l'afb1 et de l'infection virale dans l'oncogenese hepatique chez le canard. D'autre part, nous avons utilise le modele du canard pour l'etude du role de proteines pre-s, composantes d'enveloppe virale, dans la replication du dhbv. En transfectant in vivo les canetons avec l'adn du dhbv mute au niveau de la region pre-s, nous avons demontre que ce virus peut se repliquer en depit de deletions ou insertions portant sur un total de neuf aminoacides introduits dans la partie c terminale de la proteine pre-s. A l'aide d'anticorps monoclonaux murins, nous avons identifie et localise au niveau des proteines pre-s, un epitope neutralisant conserve chez les differentes souches du virus dhbv et localise a la surface du virus

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Abou, Jaoude Georges. "Etude des protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite B à l'étape d'entrée virale : utilisation du virus de l'hépatite Delta comme modèle expérimental." Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066331.

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Abstract:

Le virus de l’hépatite B (HBV) est un virus enveloppé à ADN. Sa nucléocapside est incluse dans une enveloppe composée de lipides et des protéines d’enveloppe virales dénommées grande (L), moyenne (M), et petite (S). Une caractéristique unique du cycle de réplication de l’HBV concerne le mécanisme d’assemblage des virions. Ces derniers sont produits en quantités mineures par rapport à l’abondante production de particules sous-virales (PSV) dépourvues de nucléocapside, que l’on retrouve en majorité dans un sérum infectieux. Les PSV sont constituées de lipides d’origine cellulaire et des protéines d’enveloppe HBV. Ces dernières assurent la dynamique d’assemblage des particules lipoprotéiques et recrutent la nucléocapside pour l’exporter sous forme de virions. Elles ont aussi la charge d’adresser les virions spécifiquement à la surface de la cellule cible, l’hépatocyte humain. Par ailleurs, les protéines d’enveloppe HBV peuvent également véhiculer la ribonucléoprotéine du virus de l’hépatite delta (HDV), un virus satellite occasionnel d’HBV dépourvu de système de propagation. Mon travail de thèse a consisté à étudier la fonction des protéines d’enveloppe HBV à l’entrée virale en utilisant le modèle HDV, et les cellules sensibles HepaRG. Il a permis de mettre en place un système sensible et fiable pour l’étude des fonctions des protéines d’enveloppe HBV à l’entrée virale. L’utilisation de ce système a permis de démontrer un rôle indispensable à l’entrée virale HDV du groupement myristate lié à la protéine L en son extrémité N-terminale. En outre, il a permis d’identifier, sur les protéines d’enveloppe, un nouveau déterminant d’infectiosité situé dans la boucle antigénique (BAG). Ce domaine constitue la cible principale des anticorps neutralisants, et il porte 8 résidus cystéine qui semblent jouer un rôle majeur à l’infection. La BAG porte donc un site actif à l’entrée virale qui pourrait faire l’objet d’un ciblage spécifique par de nouveaux antiviraux.

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Baginski, Isabelle. "Apport de l'amplification moléculaire à l'étude de la biologie du virus de l'hépatite B humaine (VHB)." Aix-Marseille 2, 1991. http://www.theses.fr/1991AIX22060.

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Abstract:

La technique d'amplification de l'adn ou polymerase chain reaction (pcr) du fait de son extreme sensibilite a de multiples applications dans le domaine du diagnostic des infections virales et l'etude approfondie des phenomenes qui leur sont associees. Nous avons applique cette technique au diagnostic et au suivi des infections chroniques par le virus de l'hepatite b humaine (vhb) et montrer en particulier la persistance du virus apres traitement antiviral et meme apres seroconversion hbs/anti-hbs indiquant la guerison du malade. C'est cependant dans les infections atypiques ou toutes les autres techniques diagnostiques s'averent insuffisantes que la pcr est precieuse. Ainsi nous avons analyse l'hypothese de l'existence d'un agent responsable d'hepatite non-a, non-b post-transfusionnelle (hpt). Trois donneurs et 2 receveurs impliques dans deux cas d'hpt sans aucun marqueur serologique du vhb ont ete etudies. Des sequences d'adn et vhb ont pu etre identifiees dans le serum et les lymphocytes des donneurs et receveurs impliques. L'absence de changement significatif au niveau de ces sequences permet de supposer que la transmission simultanee du virus de l'hepatite c (vhc) demontree chez ces patients est a l'origine du caractere silencieux de ces infections par le vhb. Une des explications possible a la persistance du vhb dans ces infections atypiques est l'existence de virus non ou peu repliquant dans les cellules lymphoides. Nous avons donc analyser la capacite du vhb a se repliquer au sein des lymphocytes infectes et montrer la presence d'adn et d'arn viral dans ces cellules

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Ghibaudo, David. "Caractérisation du virus GBV-B : développement d'un nouveau modèle d'étude du virus de l'hépatite C." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077081.

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Etienne, Loïc. "Assemblage et sécrétion du virus de l'hépatite C : identification de dix résidus de la protéïne de capside importants pour optimiser la production du virus in vitro." Thesis, Tours, 2014. http://www.theses.fr/2014TOUR3309/document.

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Abstract:

La mise au point en 2005 d’un modèle de propagation sur lignée d’hépatocarcinome basé sur la souche hautement réplicative JFH-1 fut une formidable opportunité d’étudier les différentes étapes du cycle infectieux du VHC. Nous avons souhaité étudier les étapes de morphogenèse et de sécrétion du virus, des phases du cycle viral qui sont largement mal connues encore aujourd’hui, mais ou la protéine de capside joue probablement un rôle majeur. Des études comparatives des séquences de capsides de différentes souches du VHC nous ont permis de mettre en évidence 10 résidus spécifiques à la souche JFH-1 qui pourraient expliquer les déficits fonctionnels connus de cette protéine. En effet, le remplacement de ces 10 résidus par ceux plus communément retrouvés dans les souches de génotype 1 et 2 a permis une amélioration significative de l’assemblage et de la sécrétion des particules infectieuses produites. La mise au point de cette souche optimisée pour la production de virus pourrait par ailleurs permettre constituer un atout pour mieux comprendre la structure du virus par des techniques de microscopie électronique ; ce type d’étude n’ayant pas pu être véritablement menée jusqu’à présent, en raison des titres infectieux insuffisants obtenus avec la souche JFH-1 sauvage
Development and cloning in 2005 of the highly replicative strain JFH-1 was a great opportunity to study the different stages of the infectious cycle of HCV as this strain easily propagate in the hepatocellular carcinoma cell line. Until now, these lates phases of particles assembly remain poorly understood, although the core protein is thought to probably play a major role in initiation of these mechanisms. Comparative studies of the capsid sequences of different strains of hepatitis C have allowed us to identify 10 specific residues in the JFH-1 strain that could explain the functional deficits of this protein. Indeed, the replacement in JFH-1 strain of these 10 residues by those most commonly found in strains of genotype 1 and 2 showed improvement of the assembly and secretion of new infectious particles and new subcellular localization of core. In addition, replacement of these ten residues by most common amino acid found in patients show a great enhancement of in vitro virus production and secretion. As a perspective, development of this optimized virus could also represent a valuable model to better purify and determine viral structure, and true viral assembly site; HCV fields that remain till now largely unknown

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Bouffard, Pascal. "Infection des cellules d'origine hématopoiétique par le virus de l'hépatite B humaine." Lyon 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LYO1T064.

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Lucifora, Julie. "Réplication du virus de l'hépatite B et réponse intracellulaire à l'infection virale." Lyon 1, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/34/25/83/PDF/211-2008_-_Manuscrit_These_Julie_Lucifora.pdf.

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Abstract:

Le VHB est un problème majeur puisque les 350 millions de porteurs chroniques existant ont un risque accru de développer une cirrhose ou un carcinome hépatocellulaire. Compte tenu du manque de système d'étude du VHB in vitro qui soit facile d'accès et pleinement satisfaisant, l'objectif était d'améliorer l'un de ceux qui utilisent des baculovirus VHB recombinants pour délivrer le génome VHB dans des cellules hépatocytaires. La pertinence de ce système pour réaliser des tests phénotypiques et étudier le « fitness » des mutants résistants aux antiviraux a ensuite été démontrée. Enfin, l'utilisation de ces baculovirus VHB recombinants dans des cellules HepaRG a permis de mettre en évidence une réponse IFN efficace de l'hépatocyte suite à la synthèse des protéines du VHB. Ceci constitue une donnée nouvelle dans l'étude des interactions virus/cellules puisque le VHB était considéré jusqu'à présent comme un virus silencieux vis-à-vis de la réponse innée cellulaire. L'ensemble de ces résultats a des implications importantes dans la compréhension des mécanismes de persistance du VHB et le développement de nouveaux modèles cellulaires d'infection
HBV is a major problem issue since the 400 million existing chronic carriers have greater risk to develop cirrhosis or hepatocellular carcinoma. Because of the lack of relevant and convenient in vitro HBV studying model, the aim was to improve the one that uses HBV recombinant baculoviruses to deliver HBV genome in hepatocytes. Relevance of this improved system was then demonstrated for phenotypic and resistant mutant fitness analysis. Finally, with the use of HBV recombinant baculovirus in HepaRG cells, an HBV-mediated effective IFN response within cells was highlighted. This constitutes new data in the study of virus/host cell interaction since HBV was considered as a “stealth” virus until now. Taken together, these results have important implications in the comprehension HBV persistence mechanisms and in the development of new cellular models of infection

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Peltekian, Cécile. "Activité antivirale de la protéine MxA contre le virus de l'hépatite B." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077139.

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Boyer, Audrey. "Caractérisation de mécanismes mis en jeu lors des étapes précoces de l'assemblage des lipoviroparticules du virus de l'hépatite C." Thesis, Tours, 2015. http://www.theses.fr/2015TOUR3308/document.

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Abstract:

Lors d’une infection chronique, le virus de l'hépatite C (HCV) circule sous forme de lipoviroparticule (LVP) : particules hybrides associant des composants viraux (ARN, les protéines structurelles) et des composants cellulaires (apolipoprotéines, cholestérol). Au cours de ma thèse, nous nous sommes intéressés à identifier la plateforme d'assemblage du HCV, et le rôle du rassemblement des protéines virales par NS2 dans sa formation. Nous avons montré que des interactions de natures différentes sur la membrane du RE sont impliquées dans cette association protéique. Nos résultats suggèrent que des interactions complexes (directes ou via des « membranes résistantes aux détergents » (DRM)) entre les protéines complexées par NS2, peuvent immédiatement précéder la formation LVP. Nous avons également démontré que l’hétérodimère E1E2, les apolipoprotéines B et E (ApoB, ApoE) s’associent en un complexe de protéines dans le réticulum endoplasmique (RE) lorsqu'elles sont exprimées ensembles. Ce complexe se forme au début de l'assemblage du HCV, quelle que soit l'expression des autres protéines virales, et est conservée sur les LVP sécrétées. Basé sur ces données, nous avons proposé un mécanisme expliquant l’initiation de la morphogenèse des LVP. Ensuite, nous avons évalué l'importance de l'association E1E2/ApoE pour le cycle de vie du virus. Nous avons initié une étude pour identifier les acides aminés E1E2 impliqués dans l'interaction avec les apolipoprotéines. Avec ces données, nous souhaitons proposer une meilleure compréhension des mécanismes de la morphogenèse du HCV
In chronic infection, the hepatitis C virus (HCV) circulates as lipoviral particles (LVP): hybrid particles associating viral (RNA, structural proteins) and cellular components (apolipoproteins, cholesterol). During my PhD, we were interested in identifying the HCV assembly platform, and the role of the association of the viral proteins by NS2 during its formation. We showed that different natures of interactions on the ER membrane are involved in this proteic association. Our results suggest that a complex interplay between proteins of the complex formed by NS2, directly or through “detergent resistant membranes” (DRMs) may be immediately followed by LVPs formation. We also demonstrated that E1E2 heterodimer, apolipoproteins B and E (ApoB, ApoE) associate as a protein complex in the endoplasmic reticulum (ER) when expressed together. This complex is formed early in HCV assembly, regardless the expression of other viral proteins, and is conserved on the secreted LVPs. Based on these data, we proposed a mechanism explaining LVP morphogenesis initiation. Then we assessed the importance of E1E2/ApoE association for viral life cycle. We initiate a study to identify the E1E2 amino acids involved in the interaction with apolipoproteins. With these data, we wished to provide a better understanding of the mechanisms of the HCV morphogenesis

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Thermet, Séverine. "Étude moléculaire et biologique de variants du VHB." Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10139.

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Abstract:

L'Organisation Mondiale de la Santé estime à plus de 370 millions le nombre de porteurs chroniques du virus de l'Hépatite B (VHB). L'éradication de cette maladie, même dans les pays développés ayant accès à tous les équipements médicaux, est difficile. Ceci est due en partie à l'existence de variants du VHB. Leur étude est indispensable pour mieux comprendre la biologie du VHB et lutter toujours plus efficacement contre ce virus. Toutefois l'amplification des génomes entiers des variants du VHB est souvent difficile. Ainsi durant ma thèse je me suis intéressée à différents variants du VHB. Dans un premier temps, mon travail s'est basé sur un patient (Z1) présentant à la fois de forts taux d'AgHBs et d'anticorps anti-HBs. Les analyses moléculaires et biologiques ont montré que le patient était infecté par un VHB d'apparence sauvage. L'étude de l'affinité des anti-HBs de Z1 a permis d'établir qu'il avait développé une réponse immunitaire quasi-monoclonale vis-à-vis d'un épitope antigénique différent de celui porté par le virus circulant. Dans un second temps, j'ai développé une nouvelle technique d'amplification pour l'étude des variants de VHB difficiles à obtenir par les techniques standard de PCR. Pour ce faire, j'ai appliqué une technique innovante et hautement sensible, nommée amplification en cercle roulant (RCA). La RCA associée à une PCR spécifique du VHB amplifie l'ADNccc avec une sensibilité similaire à celle d'une PCR en temps réel. La RCA présente un avantage certain puisqu'elle permet d'obtenir le génome viral entier et non des fragments sous génomiques. L'étude d'un patient infecté par un VHB résistant à la lamivudine a validé l'efficacité, la fidélité et la haute sensibilité de la RCA. En conclusion, ce travail a montré qu'il était indispensable d'étudier de grandes cohortes de patients pour pouvoir dégager des consensus concernant les différents types de variants du VHB. La RCA devrait être un atout majeur dans l'étude des variants du VHB, et aussi pour l'étude de l'ADNccc qui est à l'origine de la persistance viral et de la propagation des mutations

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Lainé, Sébastien. "Identification et caractérisation de PAP22 : partenaire cellulaire de la protéine P22 du virus de l'hépatite B humaine." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2003. http://www.theses.fr/2003VERS0040.

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Abstract:

L'hépatite B est encore, à ce jour, responsable de l'apparition de nombreux hépatocarcinomes. Ces derniers sont le résultat de l'hépatite chronique, caractérisée par le maintien du virus dans l'organisme. Dans le but de comprendre quel(s) mécanisme(s) est(sont) responsable(s) du développement de la chronicité, nous avons axé nos recherches sur une protéine semblant jouer un rôle dans l'établissement de la persistance virale : l'antigène " e " du VHB (HBe). Néanmoins, les mécanismes mis en jeu sont encore obscurs. A l'inverse de son rôle, la voie de biosynthèse d'HBe a été bien décrite. HBe est issue de la maturation du précurseur P25, dans la voie de sécrétion. Notre laboratoire s'est plus particulièrement intéressé au rôle de l'un des précurseurs de HBe, la protéine P22. Nous avons montré que P22 interagit spécifiquement avec une protéine cellulaire de 32 kDa, nommée PAP22 pour Protéine Associée à P22, non identifiée au début de ces travaux de thèse. Grâce à la mise au point d'un système 'interaction in vitro basé sur la sur-expression d'une protéine P22 recombinante, nous avons identifié PAP22 comme étant la protéine cellulaire gC1qR. Les études bibliographiques ont montré que gC1qR est impliquée dans différents mécanismes allant de l'épissage, à l'apoptose en passant par la régulation de la réponse immunitaire. Nous avons élaboré et testé des hypothèses quant à l'implication du complexe P22/gC1qR dans l'établissement de la persistance virale via un contrôle du niveau apoptotique cellulaire. Ainsi, nous avons démontré que ce complexe peut agir sur l'épissage de l'ARN prégénomique du VHB et ainsi contrôler la synthèse d'une protéine virale pro-apoptotique nommée HBSP. De plus, nous avons montré que gC1qR peut contrôler le niveau apoptotique cellulaire et que ce contrôle peut être régulé par la présence de la protéine P22 Ces travaux de thèse permettent d'ouvrir une nouvelle voie d'étude du rôle de l'antigène HBe, en mettant en évidence un rôle plus important de la protéine P22, que celui de simple précurseur
The HBV virus responsible for hepatitis B is still a worldwide health issue. Its ability to stay as an episome in infected cells is responsible for chronicity, which can lead to hepatocarcinoma and cirrhosis. We focused our research on the HBe antigen of HBV, which seems implicated in viral persistence. Hbe is a cleavage product of the p22 protein. We have show a specific interaction between P22 and 32kDa cellular protein we named PAP for protein associated to P22. Using an in vitro interaction assay based on over expressing recombinant P, we identified PAP22 as gClqR. Bibliographical data indicate roles of PAP22 in spicing, apoptosis and the immune response. We could demonstrate a rôle of the P22/gC1qR complex into the HBV pre-genome spicing, which, therefore, implies a control of the pro-apoptotic HBSP protein by P22/gC1qR. Moreove, we have shown thet gClqR regulates apoptosis in a p22-sensitive manner. Our data suggest a possible role of this complex in allowing viral persistence through a tight control of apoptosis. This work opens new avenues in studying HBe functions by demonstrating specific functions of P22 thet are independent from its precursor role

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Bachelot, Etienne. "Production in vitro par les lymphocytes circulants d'anticorps spécifiques du virus de l'hépatite B." Montpellier 1, 1990. http://www.theses.fr/1990MON11212.

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Vauloup-Fellous, Christelle. "Morphogenèse du virus de l'hépatite C : rôle du clivage de la protéine de capside par la signal -peptide-peptidase." Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066380.

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Abstract:

La capside du virus de l’hépatite C (VHC) semble constituée par la forme mature de la protéine de capside (protéine C), la p21. Sa forme immature, la p23, est libérée de la polyprotéine par clivage par la signal peptidase (SP). La p21 est issue du clivage intramembranaire de la p23, par la signal peptide peptidase (SPP). Nous avons étudié le rôle du clivage de la protéine C par la SPP au cours de la morphogenèse virale grâce à 2 systèmes expérimentaux : l’un permettant de visualiser des pseudo-particules de VHC bourgeonnant dans le RE grâce à un vecteur basé sur les propriétés de réplication du virus de la forêt de Semliki, et l’autre permettant de produire des pseudo-particules de VHC, basé sur l'infection de cellules d’insecte par des baculovirus recombinants contenant la portion d’ADNc codant les protéines structurales du VHC. L’inhibition de la SPP a été obtenue grâce à un inhibiteur pharmacologique et/ou grâce à l’introduction de mutations au sein du domaine transmembranaire de la protéine C. Les stabilité respectives des capsides formées de p21 et de p23 ont été analysées. Les expérimentations ont montré que l’inhibition du clivage de la p23 en p21 n’empêchait pas le bourgeonnement mais semblait au contraire le favoriser, et que les capsides composées de p21 seraient moins stables que celles formées de p23. Nous avons ensuite montré que le clivage de la protéine C par la SP était un pré-requis à son clivage par la SPP. L’ensemble de ces résultats conduit à proposer un modèle pour le bourgeonnement du VHC dans lequel la p23, serait la forme de protéine C vouée à l’assemblage des capsides tandis que la p21, serait vouée au désassemblage de la capside.

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Hernandez, Céline. "Morphogenèse du virus de l'hépatite C : rôle de l'éthanol et d'une tyrosine critique de la protéine de capside virale." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077190.

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Abstract:

Chez les patients infectés par le virus de l'hépatite C (VHC), l'alcoolisme aggrave la maladie du foie, mais les mécanismes sous-tendant cette comorbidité restent mal compris. Nous avons étudié l'effet de l'éthanol sur l'infection par le VHC dans notre système original d'infection productive en cultures primaires d'hépatocytes humains adultes, et montré que l'éthanol augmentait la production des particules virales les plus infectieuses qui sont liées aux lipoprotéines de très basse densité (VLDL). La combinaison VHC/éthanol induisait un effet synergique sur l'induction de certains gènes cibles de la réponse au stress du réticulum endoplasmique (RE) impliqués dans la restauration de l'homéostasie du RE et la survie cellulaire. L'ensemble de ces données suggèrent que l'éthanol favorise la morphogenèse du VHC en augmentant la fonctionnalité du RE et peut-être en stimulant la lipogenèse, l'une des cibles du stress du RE. La morphogenèse du VHC reste l'étape la moins connue du cycle du VHC. Nous avons recherché des déterminants viraux de ce processus en lignée hépatocytaire en nous intéressant aux tyrosines conservées de la protéine de capside (C). Nous avons identifié la tyrosine en position 136, au sein d'un potentiel motif YXXØ, comme un déterminant essentiel de la morphogenèse des particules infectieuses du VHC au niveau du RE. Nos résultats désignent une fonction encore méconnue de la protéine C dans une étape ultérieure à l'initiation de l'assemblage viral, probablement de bourgeonnement des particules virales en liaison avec l'apolipoprotéine B, un composant clé de la biogenèse des VLDL dans le RE
Excessive alcohol consumption by patients infected with hepatitis C virus (HCV) increases the viral load and aggravates the liver disease but the mechanisms underlying this comorbidity remain elusive. Here we took advantage of our unique model of productive HCV infection in primary human adult hepatocytes (PHH) to assess the impact of ethanol. In this relevant model, addition of ethanol increased the production of the most infectious viral particles, which are associated with very-low-density lipoproteins (VLDL). Combination of HCV and ethanol showed additive effects on the expression of genes involved in endoplasmic reticulum (ER) homeostasis recovery and maintenance of cell survival. Collectively, these results suggest that ethanol promotes morphogenesis of infectious HCV by improving EF functionality and maybe lipogenesis, which is one of the ER stress targets. Considering that HCV morphogenesis remains elusive, we searched in parallel for viral determinants involved in this process using the infectious HCV cell culture system based on human-derived hepatoma cell line Huh-7. Because tyrosine-based motifs have been implicated in the late budding of other viruses, we investigated by reverse genetics the role of the four conserved tyrosines of core protein in HCV life cycle. We identified the tyrosine in position 136, within a potential YXXØ motif, as a critical determinant of HCV morphogenesis in the ER. Collectively our results designate a previously unrecognized core protein-dependent step subsequent to the initiation of viral assembly, maybe the viral budding linked to the apolipoprotein B, a key player in VLDL biogenesis in the ER

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Hallez, Camille. "Impact des facteurs de restriction sur la réplication du virus de l'hépatite B." Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066390.

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Abstract:

Le Virus de l'Hépatite B (VHB) infecte 350 millions d'individus à l'échelle mondiale. Il est responsable d'hépatites aigües pouvant évoluer vers la chronicité puis le carcinome hépatocellulaire. Le génome du VHB est constitué d'un ADN partiellement bicaténaire. De par sa nature, il pourrait être sensible à l'action de certaines nucléases cellulaires qui hydrolysent l'ADN double brin. Nous avons ainsi mis en évidence la capacité de la Désoxyribonuclase I (DNase I) à être incorporée dans les virions du VHB, ce qui permet la dégradation du génome viral et la diminution de son infectivité. La DNAse I est particulièrement surexprimée en hypoxie et pourrait contribuer à l'élimination du virus chez les individus cirrhotiques. Par ailleurs, nous avons montré que la cytidine désaminase APOBEC3DE appartenant à une famille de facteurs de restriction viraux possède un rôle proviral. En effet, son association avec APOBEC3F et APOBEC3G mène à une diminution de l'activité de ces dernières et ceci favorise la réplication du VHB. La formation d'hétérodimères APOBEC3DE/APOBEC3F et APOBEC3DE/APOBEC3G semble génèrer un encombrement stérique ne permettant pas l'encaspidation d'APOBEC3F et APOBEC3G, raison pour laquelle le génome du VHB est moins muté lorsqu'APOBEC3DE est exprimée
Hepatitis B Virus (HBV) infects 350 millions people worldwilde. It triggers accute hepatitis that can turn into cirrhosis then hepatocellular carcinoma. HBV genome is composed of a partially double-stranded DNA.Thus, it could be targeted by some cellular nucleases that hydrolyze double-stranded DNA. We have highlighted that Deoxyribunuclease I (DNase I) can be incorporated into HBV virions and degrade its genome, leading to a loss of viral infectivity. Moreover, DNase I is upregulated under hypoxia which is a caracteristic of liver cirrhosis. DNase I could be involved in HBV elimination in cirrhotic patients. In an other study, we found that APOBECDE, a cytidine deaminase of the same family than some restriction factors, has a proviral activity. Indeed, association of APOBEC3DE with APOBEC3F or APOBEC3G leads to a loss of cytidine deaminase activity and a better viral replication. When APOBEC3DE is associated with those two proteins, APOBEC3F and APOBEC3G cannot be incorporated into HBV virions. This is the reason why HBV is more infectious when APOBEC3DE is expressed

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Tong, Shuping. "Molecular characterization of hepatitis B virus variants unable to express HBe protein." Lyon 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LYO1T109.

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Ancelin, Valérie. "Politique de santé publique vis-à-vis de l'hépatite B en France." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05P008.

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Mrani, Saad. "Caractérisation moléculaire des infections à VHB occultes au cours des hépatites C chroniques." Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10064.

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Abstract:

L’infection par le virus de l’hépatite B occulte, définie par la présence de l’ADN du VHB en l’absence d’AgHBs dans le sérum, a été retrouvée de manière fréquente dans les hépatites C chroniques. Afin de mieux cerner les mécanismes d’échappement du VHB occulte aux tests diagnostiques classiques et de déterminer les conséquences de cette co-infection sur l’évolution de l’hépatite C chronique, nous avons analysé, par des techniques moléculaires très sensibles développées au laboratoire, les sérums de 203 patients atteints d’hépatite C chroniques avant qu’ils ne soient traités. Les résultats de cette première étude ont montré que la prévalence des infections occultes chez les patients porteurs chroniques du VHC pourrait atteindre 20% en France et que la présence de l’infection à VHB occulte est associée à une mauvaise réponse au traitement ainsi qu’à l’aggravation des lésions hépatiques et à l’accélération de l’évolution vers l’hépatocarcinome. Afin de permettre la caractérisation moléculaire du VHB occulte, le génome entier a été amplifié, puis cloné et séquencé dans le cas particulier d’un patient VHC transplanté. L’analyse des différents clones n’a pas montré les mutations connues susceptibles d’expliquer l’absence de détection de l’AgHBs. Ces résultats suggèrent d’une part, l’implication d’autres facteurs dans la suppression de la réplication et l’altération de l’expression du VHB, d’autre part, l’importance des sites extrahépatiques dans l’infection à VHB occulte. Ces travaux soulignent la nécessité de développer de nouvelles approches diagnostiques et thérapeutiques dans la prise en charge du VHB occulte et particulièrement dans les co-infections avec le VHC
Occult Hepatitis B infection (HBV), defined by HBV DNA positivity in absence of HBsAg in the serum was found in 30% of hepatitis of unknown aetiology and frequently among HCV chronic carriers. In order to better understand how HBV escape to diagnosis tests and determine the consequences of this co-infection on HCV chronic infection, we analyzed by ultra sensitive molecular tests developed in the lab, serum samples from 203 HCV chronic carriers before any antiviral treatment. The results from this first study showed that occult HBV infection frequency could reach 20% in France and that occult HBV infection may worsen the course of HCV infection being associated to a bad response to antiviral therapy and aggravation of liver disease. In order to perform the molecular characterization of hepatitis B viruses in cases of occult HBV infections, the whole HBV genome was amplified by a new technique developed in the lab, named Rolling Cycle Amplification (RCA), cloned and sequenced in a HCV transplanted case. The analysis of the cloned sequences did not show the presence of any of the known mutations in the viral genome that may explain HBsAg negativity. Our results suggest, on one hand, the implication of other factors in the suppression of the HBV replication and altered expression of HBV, on the other hand, the importance of extra hepatic sites of HBV replication during occult HBV infections, since it was able to persist after liver transplantation. Our work emphasise the need to develop new diagnostic and therapeutic tools in the case of occult HBV infections especially during co-infection with HCV

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Gheit, Tarik. "Mise en place d'un nouveau modèle primate pour l'étude du VHB." Lyon 1, 2004. http://www.theses.fr/2004LYO10050.

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Abstract:

Malgré l'existence d'un vaccin efficace, l'infection par le virus de l'hépatite B (VHB) demeure un problème majeur de santé publique. En effet, il demeure 400 millions de porteurs chroniques du VHB dans le monde dont 25% environ évoluant vers la cirrhose et/ou le carcinome hépatocellulaire. Actuellement, le Chimpanzé est le seul animal susceptible à l'infection par le VHB mais cet animal est protégé et onéreux. Le développement de nouveaux modèles primates infectables par le VHB est donc un enjeu majeur pour l'étude du cycle viral de ce virus et pour la recherche de nouveaux traitements anti-VHB. Actuellement, deux modèles sont actuellement utilisés pour tester l'efficacité de nouvelles approches thérapeutiques tel que le vaccin par ADN nu ou de nouvelles molécules antivirales. Il s'agit du canard de Pékin infecté par le DHBV et de la marmotte américaine infectée par le WHV. Afin d'étudier les mécanismes de l'infection par le VHB et tester de nouvelles approches antivirales, il serait essentiel de disposer d'un modèle primate tel que le Macaque qui est plus facile d'utilisation et d'accès que le chimpanzé tout en étant proche de l'homme. Dans le cadre d'une transfection intrahépatique expérimentale de 3 Macaques sylvanus par l'ADN du VHB nous avons pu observer que 2/3 M. Sylvanus développent des marqueurs propres à l'infection par le VHB avec des AgHBs et des séquences virales dans le sérum et le foie. Nous avons donc démontré pour la première fois la susceptibilité du M. Sylvanus au VHB humain. Nous travaillons également sur un autre modèle appartenant à une espèce voisine du M. Sylvanus, il s'agit du M. Cynomolgus originaire de l'île Maurice. Des marqueurs propres à l'infection par le VHB ont été retrouvés dans le foie et le sérum chez 42% des animaux. Récemment, il est admis que des primates, essentiellement de l'ancien monde, ont leurs propres virus de l'hépatite B. En effet, ces dernières années, des hépadnavirus propres à certaines espèces de primates ont été décrits. Ils concernent les Chimpanzés, les Gibbons, les Orangs-outans, les Gorilles mais aussi un seul singe du nouveau monde, le singe laineux. L'objectif principal est d'obtenir un modèle d'infection chronique par le VHB. En effet, en l'absence de modèle primate autre que le Chimpanzé, nous espérons à terme mettre en place un nouveau modèle pour tester l'efficacité thérapeutique de nouvelles molécules anti-VHB applicables en thérapie chez l'homme, et aussi pour évaluer la capacité de réplication de variants détectés chez des patients porteurs chroniques su VHB

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Tout, Issam. "Rôle du TLR9 et des lymphocytes B dans l'échappement du virus de l'hépatite B à l'immunité innée." Thesis, Lyon, 2017. http://www.theses.fr/2017LYSE1308/document.

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Abstract:

L'infection chronique par le virus de l’hépatite B (HBV) est un problème de santé majeur dans le monde et peut conduire à la cirrhose et à l’hépatocarcinome. Des réponses défectives des cellules T ont été démontrées, mais les événements précis qui peuvent contribuer à l'insuffisance des réponses des cellules B restent à déterminer. L'expansion et la différenciation optimales des cellules B reposent sur l'activité du récepteur Toll Like Receptor 9 (TLR9) qui détecte l'ADNdb et est exprimée chez l'homme principalement par les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) et les cellules B. L'impact de HBV sur TLR9 dans les cellules B humaines reste à explorer. Dans cette étude, nous avons exploré les effets de HBV sur l’expression et les fonctions médiées par TLR9 dans les cellules B humaines en utilisant une lignée cellulaire de cellules B ainsi que des lymphocytes B primaires. De plus, on a corroboré nos résultats dans une cohorte de patients HBV chroniques. L'expression de TLR9 a été réduite chez les toutes les sous-populations de cellules B du sang périphérique, exposées au VHB. Les fonctions des cellules B médiées par TLR9 comme la prolifération et la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires ont été abrogées en présence de HBV. Nos résultats montrent que l’antigène de surface HBsAg inhibe la phosphorylation du facteur de transcription CREB qui ne peut plus se lier sur son site CRE situé sur le promoteur TLR9 ce qui affecte la transcription de ce dernier. Enfin, nous avons corroboré nos résultats in vitro dans une cohorte de porteurs chroniques du HBV et constaté que l'expression et la fonction de TLR9 étaient significativement diminuées. Nos résultats révèlent le mécanisme qui induit une réponse immunosuppressive par HBV sur la fonction TLR9 dans les cellules B humaines, ce qui peut contribuer à la persistance de ce virus chez l'hôte et la complication de la phase chronique de la maladie
Chronic HBV infection is a major health problem worldwide. Ineffective T cell and antibody responses have been demonstrated, yet the precise events that may contribute to insufficient B cell responses remain to be determined. Optimal B cell function, expansion and differentiation rely on Toll Like Receptor 9 (TLR9) activity which senses dsDNA and is expressed in human mainly by plasmacytoid dendritic ( pDC) and B cells. The impact of HBV on TLR9 in human B cell subsets remains to be explored.Here, we investigated the effects of HBV on TLR9 function in human B cells. Both primary and B cell lines were used to analyze the effect of HBV on TLR9 expression and function. These results were corroborated in a cohort of chronically infected HBV patients. TLR9 expression was reduced in all peripheral blood B cells subsets exposed to HBV. B cell function mediated by TLR9, such as proliferation and pro-inflammatory cytokines secretion were abrogated in the presence of HBV. Our results show that the viral surface antigen HBsAg inhibited the phosphorylation of the transcription factor CREB which could no longer bind the CRE site located on the TLR9 promoter. Finally, we corroborated our in vitro findings in a cohort of chronic HBV carriers (CHB) and found that TLR9 expression and function were significantly suppressed.Our findings reveal the mechanism that induces an immunosuppressive response by HBV on TLR9 function in human B cells, which may contribute to HBV persistence in the host

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Bekondi, Claudine. "Aspects cliniques et épidémiologiques des infections à virus de l'hépatite B en République Centrafricaine." Thesis, Nancy 1, 2008. http://www.theses.fr/2008NAN10129/document.

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Abstract:

La population du virus de l’hépatite B (VHB) a été classée en huit génotypes allant de A à H. Des études récentes ont montré que le génotype E du VHB (VHB/E) prédomine sur un vaste territoire allant du Sénégal à l'Angola. La République centrafricaine (RCA) est située en zone de forte endémie où la prévalence de l’infection chronique par le VHB est estimée à 15,4% chez les adultes. Une étude menée chez 196 patients atteints d’hépatite B chronique a permis d’obtenir 66 séquences complètes ou partielles d’ADN des VHB. L’analyse phylogénétique a montré que 62 souches appartenaient au génotype E, une au génotype A1 et 3 au génotype D. Une souche était un recombinant des génotypes E/D. Comme dans la plupart des pays d’Afrique Sub-saharienne le génotype E du VHB prédomine nettement en RCA, avec une faible variabilité (1,67%) sur l’ensemble des souches du génotype E déjà décrites. Ces résultats sont en faveur d’une introduction récente du génotype E dans l’espèce humaine avec un essaimage rapide dans les populations concernées. Une origine simienne de ces souches est possible étant donné les identités de séquences entre l’ADN du VHB/E et l’ADN du VHB du chimpanzé. La deuxième partie du travail est une étude clinique et biologique chez 68 patients hospitalisés pour une suspicion de carcinome hépatocellulaire (CHC). Tous les patients recrutés (100%) étaient infectés par le VHB. L’échographie a permis de confirmer un CHC chez 43 patients et la cytoponction a permis un diagnostic de certitude chez 14 malades. L’antigène HBs (AgHBs) était présent chez 10 de ces 43 patients et 7 sur ces 10 étaient co-infectés par le VHD. La moyenne du dosage de l’alpha-foetoprotéine était de 10394 UI/mL. Chez les 25 autres patients, 21 avaient de l’AgHBs, parmi ceux-ci 11 étaient co-infectés par le VHD. La moyenne du dosage de l’AFP était de 9 UI/mL. Le CHC est donc fréquent en RCA et les patients consultent à un stade terminal de la maladie. Ce travail confirme aussi la relation entre VHB et CHC en RCA. Le VHD est associé aux formes graves d’hépatite B chronique. Les prélèvements de sérum et de lésions hépatiques qui ont été obtenus permettront par la suite d’étudier la variabilité du gène X et ses relations avec le CHC
Hepatitis B virus (HBV) strains have been classified into eight genotypes A to H. Recent studies have shown that the HBV genotype E (HBV/E) predominates in a vast crescent spanning from Senegal to Angola. The Central African Republic (CAR) is an endemic country for HBV infection and prevalence of chronic infection in adults is estimated to be about 15.4%. A survey of 196 patients attending local hospital with symptoms of hepatitis has permitted to obtain 66 complete or partial sequences of HBV DNA. Phylogenetic analyses have shown that 62 strains belonged to Genotype E while one was of genotype A1, and three of genotype D. One strain presented a recombination between genotypes E and D. Genotype E is thus predominant in RCA as in most Sub-Saharan countries. The variability of strains is limited not only among CAR strains but when all strains isolated so far are compared (1.67 %), suggesting a recent introduction of HBV in the human species with a rapid expansion. A simian origin of the genotype E is possible considering the DNA sequence identities with chimpanzee HBV DNA. The second part of this study is a clinical and biological survey of 68 patients attending the “Hôpital de l’Amitié” of Bangui for a suspicion of hepatocellular carcinoma (HCC). All the patients (100 %) have been infected by HBV. Echography confirmed the suspicion of HCC in 43 patients and cytopathology ascertained the diagnosis for 14 patients for whom cytoponction was feasible. Hepatitis B surface antigen (HBsAg) was present in 10 of these 43 patients, of whom 7 were co-infected with HDV. The average level of alpha-fetoprotein (AFP) was 10394 UI/mL. For the 25 other patients, HBsAg was detected in 21 of whom 11 were co-infected with HDV. Low level of AFP was observed (mean: 9UI/mL). This study shows that HBV related HCC is common in the country and that patients come to hospital late in the evolution of this disease. This study also confirms the association between HBV and HCC in CAR. HDV is associated with severe symptoms of hepatitis B. Serum and HCC lesions samples will be used to study variability of X gene and its relation with HCC

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Gourion, Delphine. "Etude des différents vaccins recombinants dirigés contre l'hépatite B, disponibles en officine en 1996." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05P099.

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Fournier, Maëlenn. "Implication du gène core dans l'accumulation de l'ADN circulaire clos de façon covalente du virus de l'hépatite B." Thesis, Lyon 1, 2014. http://www.theses.fr/2014LYO10058/document.

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Abstract:

La particularité de ce virus de l'hépatite B est la synthèse d'un ADN circulaire clos covalent (ADNccc) qui est la forme de persistance du virus dans la cellule. Cet ADN est maintenu à une copie par cellule en moyenne chez l'homme grâce à un recyclage des nucléocapsides dans le noyau. En effet, durant le cycle viral, les nucléocapsides sont soit redirigées dans le noyau pour former de l'ADNccc, soit enveloppées puis sécrétées pour former de nouveaux virions. Du fait de son maintien au sein de l'hépatocyte, la formation et la régulation de l'ADNccc restent des éléments clés du traitement antiviral. Il a été montré in vitro que l'accumulation de cet ADN était régulée par les protéines d'enveloppe. Lors de l'étude du taux d'ADNccc dans des biopsies de foie de patients coinfectés HIV-HBV chronique, il a été découvert un patient présentant 300 fois plus d'ADNccc intrahépatique que la moyenne de la cohorte. L'objectif de ma thèse a été de comprendre quel était le mécanisme conduisant à cette accumulation d'ADNccc in vivo. Cela nous a permis de mettre en évidence le rôle du gène core dans l'accumulation de l'ADNccc
The feature of hepatitis B virus is the synthesis of a covalently closed circular DNA (cccDNA) which is the persistence form of the virus in cell. cccDNA is maintained to 1 copy per human cell thanks to the recycling of capsids into the nucleus. Indeed, during the viral cycle, capsids are either transported into the nucleus to form cccDNA or enveloped and secreted to form new infectious virions. Because of its maintenance in the hepatocyte, cccDNA formation and regulation are still key elements of antiviral treatment. It has been shown that, in vitro, cccDNA accumulation was regulated by envelope proteins. Upon the study of cccDNA levels in liver biopsies of HIV-HBV co-infected patients, an individual with a cccDNA level 300 fold higher than the average of the cohort was identified. My thesis objective was to understand which is the mechanism leading to the cccDNA accumulation observed in vivo. This allowed us to highlight the role of core gene in cccDNA accumulation

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Lambert, Véronique. "Le virus de l'hépatite B du canard : modèle expérimental pour l'étude de la biologie des infections par les hépadnavirus." Lyon 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LYO1T255.

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Desrames, Alexandra. "Etude de la structure de la petite protéine d'enveloppe du virus de l'hépatite B." Paris 7, 2014. http://www.theses.fr/2014PA077161.

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Abstract:

L'infection chronique par le virus de l'hépatite B (HBV) reste un problème de santé publique majeure à l'échelle mondiale puisqu'elle touche près de 300 millions d'individus. Le HBV est un virus à ADN de la famille des Hepadnaviridae, dont l'enveloppe du virion est composée de lipides d'origine cellulaire et de glycoprotéines transmembranaires de trois types, S-, M- et L-AgHBs. La protéine S- AgHBs, majoritaire dans l'enveloppe virale, est l'élément moteur de l'assemblage, et elle porte dans le domaine exposé à la surface des particules virales, un déterminant immunodominant appelé "déterminant- a" contre lequel la majorité des anticorps neutralisants sont dirigés. Ce déterminant antigénique est intimement associé à un déterminant du caractère infectieux qui assure l'interaction avec les sulfates d'héparane à l'étape initiale d'entrée. A ce jour, nous possédons très peu d'information sur la structure de la boucle antigénique (BAG) de la protéine S-AgHBs qui sous-tend le caractère antigénique et fonctionnel d'entrée virale. L'objectif du travail de thèse était d'obtenir des informations sur l'organisation tridimensionnelle du polypeptide BAG, afin de mieux comprendre son rôle à l'étape d'entrée virale. La première étape a été de déterminer la sous-unité minimale de l'enveloppe des particules virales, qui porte le déterminant-a, en utilisant une série d'anticorps monoclonaux spécifiques de ce déterminant. Nous avons montré que la plupart des anticorps étaient bien spécifiques d'épitopes conformationnels, qu'ils étaient neutralisants, et qu'ils réagissaient avec des formes dimériques de protéines S-AgHBs. La majorité des épitopes du déterminant-a sont donc présents sur des dimères de protéines S-AgHBs solubles. De plus, nous avons mis en évidence la présence de deux isoformes de dimères à la surface des particules virales, que nous pouvons distinguer par leur comportement électrophorétique en gel SDS et par leur réactivité avec les anticorps monoclonaux. Nous pensons que les deux isoformes de protéines S-AgHBs correspondent à deux combinaisons de ponts disulfures inter- ou intra-chaînes entre les nombreux résidus cystéine de la BAG. Dans le but d'obtenir des préparations homogènes et pures de dimères de protéines S-AgHBs comme substrat de cristallisation, nous avons suivi plusieurs stratégies : la production de la protéine S- AgHBs par traduction in vitro, la production dans Escherichia coli, et la purification de particules virales à partir de surnageant de culture de cellules Huh-7 ou de plasmas infectieux. La stratégie de purification de particules produites en culture de cellules Huh-7 est apparue la plus fiable en termes de qualité et rendement, et la plus adaptée à l'analyse de mutants de la protéine S-AgHBs
Chronic infection with the hepatitis B virus (HBV) represents a major public health concern worldwide because an estimated 300 million individuals are affected. HBV is the prototype of the Hepadnaviridae family, a DNA virus with an envelope consisting of cell derived lipids associated to three types of transmembrane glycoproteins: S-, M- et L-HBsAg. S-HBsAg, the most abundant in the viral envelope, is the driving force of viral particle assembly, but it also bears in its ectodomain, an immunodominant determinant, referred to as the a-determinant, against which most of the neutralizing antibodies are directed. This antigenic determinant is also closely associated to an infectivity determinant responsible for interacting with cell surface heparan sulfate at the initial step of viral entry. As of today, we have little information on the structure of the antigenic loop (AGL) of the S-HBsAg protein that underlies the antigenic and function at viral entry. The aim of this thesis project was to gather information on the three dimensional organization of the AGL polypeptide, for a better understanding of its function at viral entry. The first step of the study was to identify the minimum subunit of the viral envelope, which bears the a-determinant. This was achieved using a panel of monoclonal antibodies that are specific for the a-determinant. We have shown most of the antibodies were: i) directed to conformational epitopes, ii) neutralizing, and iii) reactive with the dimeric forms of S-HBsAg. We concluded that most of a-determinant epitopes are conserved on the soluble dimeric forms of S-HBsAg. Furthermore, we demonstrate the presence in the HBV envelope, of two isomers of S- HBsAg dimers, which can be separated by SDS-PAGE and identified by isomer-specific antibodies. We propose that the two isomers correspond to two distinct networks of disulfide bonds between the numerous AGL cystein residues. In an effort to obtain pure and homogenous preparations of S-HBsAg dimers, as substrate for crystallization, we adopted several strategies: i) production of S-HBsAg by in vitro translation, ii) production in E. Coli, and iii) the purification of viral particles from transfected Huh-7 cell culture medium or from infectious plasmas. The purification of S-HBsAg dimers from cell culture-derived particles clearly appeared as the strategy of choice, in terms quality and yield, and flexibility of the approach in case of S- HBsAg mutants analysis

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Foss, Michael. "Etude de l'effet de l'interaction entre la nucléoporine 153 et la capside du virus de l'hépatite B." Thesis, Bordeaux 2, 2009. http://www.theses.fr/2009BOR21687/document.

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Abstract:

Environ 350 millions de personnes dans le monde sont infectées par le virus de l’hépatite B (VHB), dont un million meurent chaque année des conséquences d’une infection VHB chronique. Cette chronicité implique la capacité du VHB de moduler l’apoptose. Dans le cadre du projet présent, l’influence de la capside du VHB sur l’apoptose au niveau du clivage de la Nucléoporine153 (Nup153) par la caspase 3 et l’influence de la protéine core en général sur l’apoptose ont été analysées. Pour répondre à l’effet de la capside sur le clivage de la Nup153 par la caspase 3, des systèmes analytiques in vitro et in vivo ont pu être mis en place. Après avoir purifié la GST-Nup153, l’impact de la capside du VHB sur son clivage a été analysé. Il a été constaté que la capside du VHB n’avait pas d’influence sur le clivage de la Nup153. Ce résultat a été confirmé par le système in vivo qui consistait en des cellules HeLa perméabilisées par la digitonine dans lesquelles la Nup153 a été également clivée en présence ou absence de la capside du VHB. Pour accrocher la capside à la Nup153, des essais de transport ont été réalisés avant le clivage par la caspase 3 recombinante. Dans la deuxième partie, l’influence de la protéine core du VHB sur l’apoptose induite par le récepteur Fas a été étudiée. Des cellules HepG2 ont été transfectées soit avec un vecteur codant pour la construction GFP-core, soit avec le vecteur de contrôle codant pour la GFP sans fusion. Après induction de l’apoptose par le ligand IgFasL, l’apoptose a été mesurée soit par l’analyse de l’activité de la caspase 3, soit par réduction du signal GFP. Les cellules contenant la GFP-core démontraient un taux apoptotique fortement réduit, comparées aux cellules transfectées avec la GFP, indiquant une fonction anti-apoptotique de la protéine core du VHB
Around 350 million people worlwide are infected with the hepatitis B virus (HBV) and one million of people per year die because of the consequences of a chronic HBV-infection. The capacity of the HBV to become chronic suggests that this virus is capable to modulate the apoptosis. In the context of the present project, the influence of the HBV-capsid on the cleavage of the Nucleoporin153 (Nup153) by the caspase 3 and the influence of the HBV-core protein on the apoptosis in general have been investigated. In order to address the effect of the capsid on the cleavage of the Nup153 by the caspase 3, in vitro and an in vivo analytical systems have been developed. After the purification of the GST-Nup153, the impact of the HBV-capsid on his cleavage has been analyzed. It has been observed, that the HBV-capsid has no effect on the cleavage of the Nup153. This result has been confirmed by the in vivo system which has been represented by digitonin-permeabilized HeLa cells, in which the Nup153 has also been cleaved in presence or absence of the HBV-capsid. In order to attach the capsids on the Nup153, nuclear transport assays have been realized before the cleavage with the recombinant caspase 3. In the second part, the influence of the hepatitis core protein on the Fas induced apoptosis has been investigated. HepG2 cells have been transfected either with a vector coding for the construction GFP-core or with a control vector coding for the GFP-protein without any fusion. After induction of apoptosis by the ligand IgFasL, the apoptosis has been measured by the analysis of the caspase 3 activity and by the decreasing of the GFP signal. Cells containing GFP-core showed a strong decreasing regarding the amount of apoptosis compared to the cells transfected with GFP. This result suggests an anti-apoptotic function of the core protein of the HBV

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Schorr, Olivier. "Régulation et inhibition de la formation de l'ADN superenroulé du virus de l'hépatite B du canard." Lyon 1, 2002. http://www.theses.fr/2002LYO10097.

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Abstract:

L'infection chronique par le virus de l'hépatite B (VHB) induit hépatites aigue͏̈s et chroniques pouvant entraîner une cirrhose et un carcinome hépatocellulaire. Les thérapies actuelles ont une efficacité insuffisante, elles inhibent la réplication virale mais n'éliminent pas complètement la matrice transcriptionnelle du virus, l'ADN superenroulé (ADN CCC), persistant dans le noyau des cellules infectées. Dans ce contexte nous avons essayé de comprendre le devenir de la forme superenroulée de l'ADN viral lorsque les cellules se divisent. Nous avons montré, en utilisant des cultures primaires d'hépatocytes d'embryons de canards infectés expérimentalement, que cette entrée des hépatocytes dans le cycle cellulaire va favoriser l'amplification initiale d'ADN CCC. Nous avons ensuite regardé si l'entrée dans le cycle cellulaire avait un effet sur la transcription virale. Dans notre modèle, nous n'avons pas mis en évidence d'effet direct de l'entrée dans le cycle cellulaire sur les taux d'ARN viral. Cette étude nous a permis de conclure que, après la division d'hépatocytes chroniquement infectés, les cellules filles sont porteuses des protéines virales de capside ; suggérant que ces hépatocytes restent infectés après leur division. Enfin, nous avons cherché à inhiber la formation initiale de l'ADN CCC avec un nouvel analogue de nucléoside, l'adéfovir. Ce travail montre qu'un traitement préventif par l'adéfovir permet de diminuer fortement la réplication virale, de manière plus efficace que la lamivudine, sans toutefois inhiber totalement l'infection des hépatocytes par le virus de l'hépatite B. Nous avons donc montré très clairement que la persistance du virus dans les cellules lors du turn-over des hépatocytes est un point clé expliquant l'échec de l'élimination totale du virus lors des traitements de l'infection par le VHB. Ce travail a aussi permis de mettre en évidence la grande efficacité d'un nouvel analogue de nucléoside très prometteur : l'adéfovir.

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Samuel, Didier. "Mécanismes, prévention et traitement de la réinfection par le virus de l'hépatite B après transplantation hépatique." Paris 11, 1994. http://www.theses.fr/1994PA11T019.

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Gomez, Isabelle. "Les anticorps anti virus de l'hépatite C chez les hémophiles francais." Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05P189.

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Turin, Fabrice. "Utilisation des cultures primaires d'hépatocytes pour l'étude de la réplication des hépadnavirus et la recherche de molécules antivirales." Lyon 1, 1996. http://www.theses.fr/1996LYO10147.

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Abstract:

L'infection de l'homme par le virus de l'hepatite b (vhb) est un probleme de sante mondial. Plus de 300 millions d'individus sont actuellement porteurs chroniques de ce virus. Cette chronicite augmente de 100 fois leur risque de developper un carcinome hepatocellulaire. Si il existe des vaccins pour lutter de maniere preventive contre la propagation de ce virus, les traitements proposes aux porteurs chroniques n'ont qu'une efficacite limitee. La recherche de nouvelles molecules antivirales ainsi que de nouvelles approches therapeutiques reste donc d'actualite. Ces recherches sont facilitees par les differents modeles animaux du vhb (dhbv ou whv). Ainsi l'objectif de notre travail a ete de poursuivre la mise au point de modeles de culture in vitro du dhbv et du whv. Ces modeles de cultures primaires d'hepatocytes ont ensuite ete utilises pour le criblage in vitro de nouvelles molecules antivirales. Parmi ces molecules, des bloqueurs du cycle cellulaire ont montre un impact important sur la replication du dhbv. La place de ce resultat dans la comprehension des relations entre les hepadnavirus et le cycle cellulaire est discutee

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Martel, Nora. "Variabilité génétique du virus de l'hépatite B et implication sur le diagnostic et la pathogénèse." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00865253.

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Abstract:

L'infection chronique ou occulte par le virus de l'hépatite B (HBV) est l'un des facteurs de risque les plusimportants pour le développement de carcinome hépatocellulaire viro-induit. Malgré la petite taille dugénome et les contraintes imposées par l'organisation de ce génome, le HBV présente une grandevariabilité génétique qui est le résultat des erreurs générées lors de l'étape de reverse transcription maisaussi, lors des processus de sélection et d'adaptation. Durant l'infection, une relation étroite hôte-viruss'établit. La population virale est caractérisée par la présence de quasi-espèces pouvant influencerl'évolution de la maladie hépatique et favoriser les phénomènes d'échappement. Le but de notre travail aété 1) d'étudier la variabilité virale associée aux infections occultes et l'impact de certaines modificationsde l'AgHBs (sY100C) sur la reconnaissance des tests de détection enzymatiques, et l'impact des mutations(sK122R, sD144E) sur la reconnaissance des anticorps anti-HBs d'un patient 2) de développer un nouveloutil d'amplification de génomes entiers de HBV que nous avons appliqué à l'étude préliminaire de quasiespècesd'un mutant Core. Cet outil d'amplification est plus sensible que les techniques existantes, et ilpermet l'étude des propriétés moléculaires et fonctionnelles des isolats virales. En conclusion, nous avonspu montrer que les processus d'échappement sont complexes, et font intervenir des facteurs du virus et del'hôte. Ce travail contribue à l'amélioration de la compréhension de la biologie de l'infection par le HBV,et illustre la complexité des interactions hôte-virus.

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Saade, Fadi. "Évaluation de nouvelles combinaisons immunothérapeutiques à base du vaccin à ADN nu pour le traitement des hépatites B chroniques." Lyon 1, 2008. http://www.theses.fr/2008LYO10047.

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Abstract:

Malgré la disponibilité d’un vaccin prophylactique efficace, l’infection par le virus de l’hépatite B (HBV) demeure un problème majeur de santé publique ainsi qu’un défi thérapeutique. La thérapie vaccinale à base d’ADN nu est prometteuse pour le traitement des hépatites B chroniques. Toutefois, il serait nécessaire d’améliorer son efficacité thérapeutique pour permettre son utilisation ultérieure en clinique. L’objectif de ce travail était d’utiliser le modèle du HBV de canard (DHBV), apparenté au virus humain, pour évaluer les bénéfices de la co-administration génétique de cytokines (IL-2, IFN-γ) avec des plasmides exprimant des protéines structurales de DHBV, sur l’augmentation de l’efficacité du vaccin. Dans une 1ère étude, nous avons évalué, chez des animaux naïfs, les bénéfices de la co-administration de plasmides exprimant l’IL-2 ou l’IFN-γ (pCI-IL2, pCI-IFNγ respectivement) avec un vaccin à ADN exprimant la grande protéine d’enveloppe du DHBV (pCI-preS/S), sur la réponse humorale neutralisante. La co-immunisation avec pCI-IL2 ou pCI-INFγ augmente les titres et le potentiel neutralisant des anticorps anti-preS, comparée à l’immunisation avec pCI-preS/S seul. Dans une 2ème étude, nous avons testé chez des canards chroniquement infectés l’efficacité de la thérapie associant la co-administration de pCI-IL2 ou pCI-IFNγ avec un vaccin à ADN exprimant les protéines preS/S et core. Nous avons démontré que la co-immunisation avec pCI-IFNγ entraîne une élimination plus marquée de l’ADN viral sérique, associée à une séroconversion avec des titres anti-preS significativement plus élevés (P< 0. 05), comparés aux autres groupes traités. De plus, l’ADN viral intrahépatique, ADNccc y compris, étaient indétectables par des méthodes conventionnelles chez 25% et 57% des animaux co-immunisés avec pCI-IL2 et pCI-IFNγ respectivement. D’une manière intéressante, l’inoculation à des canetons nouveau-nés, des extraits hépatiques provenant de 7 animaux qui avaient apparemment résolu l’infection, gardant des traces d’ADNccc détectables uniquement par PCR en temps réel, a montré l’absence d’infectivité pour 4 foies, alors que les extraits hépatiques des 3 autres animaux ont induit une infection associée à une forte réplication virale chez des canetons nouveau-nés. L’infectivité des extraits hépatiques était associée pour 2 animaux à une expression hépatique évidente des antigènes viraux. Dans une 3ème étude, nous avons réalisé et validé différentes constructions d’adénovirus aviaires « CELO » (Chicken Embryo Lethal Orphin) recombinants exprimant la protéine preS/S et l’IFNγ respectivement. Nous avons déterminé la voie d’administration optimale de ces vecteurs qui permet l’induction de la réponse humorale la plus puissante. Cette validation a permis d’initier un protocole thérapeutique « prime-boost » associant une primo-immunisation « prime » par un plasmide codant la grande protéine d’enveloppe du DHBV suivie d’injection de rappel hétérologue « boost » par des adénovirus CELO recombinants exprimant l’enveloppe du DHBV seule ou en combinaison avec un adénoCELO exprimant l’IFN-γ. En conclusion, notre étude a démontré l’effet bénéfique de l’adjonction de l’IFNγ avec un vaccin à ADN nu, permettant d’améliorer la rupture de l’immunotolérance et la clairance virale chez un grand nombre d’animaux. Ces résultats sont particulièrement intéressants pour le développement de la thérapie vaccinale à base d’ADN nu chez des porteurs chroniques de HBV
In spite of the availability of an efficient prophylactic vaccine, hepatitis B virus (HBV) infection remains a major public health problem and a therapeutic challenge. DNA-based vaccine is a promising strategy for chronic HBV infections treatment, although it is crucial to improve its efficacy. The aim of this work was to assess the therapeutic benefits of co-administration of cytokine genes (IL-2, IFN-γ) with plasmids expressing DHBV proteins, using the duck HBV (DHBV) infection model, closely related to the human virus. In a 1st study, we explored first in naïve ducks, the impact co-delivery of IFN-γ or IL-2 encoding plasmids (pCI-IFNγ, pCI-IL2 respectively) on humoral neutralizing response induced by DNA-based vaccine encoding DHBV preS/S large envelope protein (pCI-preS/S). Co-delivery of either pCI-IL2 or pCI-IFNγ considerably increased the magnitude and the neutralizing efficacy of anti-preS humoral response, as compared to duck group immunized with pCI-preS/S alone. In a 2nd study, therapeutic efficacy was tested in chronic-DHBV carrier ducks receiving envelope and capsid expressing plasmids (pCI-preS/S, pCI-C) alone or in co-immunization with pCI-IFN or pCI-IL2 plasmids. Co-delivery of pCI-IFNγ led to a significantly lower mean viremia, associated with seroconversion to higher anti-preS titers (P< 0. 05) compared to other groups. Moreover, liver DHBV DNA, including cccDNA, was undetectable by conventional methods for 25% and 57% of animals co-immunized with IL-2 and IFN-γ, respectively. Inoculation of liver homogenates from 7 resolved animals, presenting cccDNA detectable by real-time PCR only, showed absence of infectivity for 4, however 3 induced high titer viremia in neonatal ducklings, associated with evidence of intrahepatic preS expression for two animals. In a 3rd study, we realized and validated different constructs of recombinant avian adenovirus "CELO" (Chicken Embryo Lethal Orphin) expressing the preS/S and IFN-γ proteins respectively. We determined the optimal administration route of these vectors which allowed induction of highest anti-preS antibody response. This optimization allowed us to initiate a prime-boost therapeutic protocol, associating a prime with naked DNA vaccine targeting DHBV large envelope protein, followed by boosts with recombinant adenovirus CELO expressing this protein alone or in combination with IFN-γ. In conclusion, co-delivery of IFN-γ plasmid enhanced therapeutic efficacy of DHBV DNA vaccine in terms of break of humoral immune tolerance and viral clearance. These results are of particular value for the development of DNA vaccine-based immunotherapy for HBV-chronic carriers

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Dissertations / Theses on the topic 'Virus de l'hépatite B – Morphogenèse'

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