Dissertations / Theses on the topic 'Tecniche in vitro'

The aim of the first part of the PhD was the study and the improvement of the in vitro differentiation conditions of pluripotent human liver stem cells, HLSCs, into hepatocytes. After the evaluation that these cells cultivated in collagen sponge and in static conditions do not allow a good distribution in all the scaffold and that cells remain in a indifferential status, dynamic cultures were performed by using a bioreactor to assure a correct medium perfusion. Moreover, we performed co-coltures of HLSCs with hepatic stellate cells (Ito) in a medium for hepatocytes and in a medium for stem cells to investigate how the variation of a medium can influence the stem condition of cells. Morphological, histological, cells proliferation and genic expression analysis demonstrated how the use of a bioreactor and the employment of a stem cells medium, guarantee first of all HLSC’s organization in typical liver clusters up to the sponges deepest layers and the increase of the functional differentiation in a population of mature hepatocytes. In the second part of the PhD, the in vitro stem cells differentiation in Langerhans Islet by using biomaterials was studied. During the first step of the study we used Beta cells in order to understand in which form of benzilic ester scaffold cells can grow better. The more appropriate conditions concerns the use of sponges. However, cells showed a low proliferation rate and so we used Mesenchymal Stem Cells (MSC). Co-coltures of MSC with Beta cells by using different medium are still in progress to evaluate the differential status of Mesenchymal Stem Cells.
Nella prima parte del dottorato è stato effettuato lo studio e il miglioramento delle condizioni del differenziamento in vitro di cellule staminali pluripotenti presenti nel fegato, le HLSC, in senso epatico. Dopo aver valutato che la semina in condizioni statiche di tali cellule in spugne di collagene non permetteva una buona distribuzione in tutto lo scaffold e queste rimanevano per lo più indifferenziate, sono state effettuate delle colture dinamiche utilizzando un bioreattore per garantire una corretta perfusione del terreno di coltura. Inoltre sono state effettuate sia delle co-colture di HLSC con le cellule Ito del fegato sia semina in un terreno normalmente utilizzato per la coltura di epatociti e in un medium per cellule staminali, per valutare come la variazione di un terreno di coltura potesse influire sulla staminalità delle cellule. Sono state effettuate analisi morfologiche, istologiche, di proliferazione cellulare e di espressione genica delle colture. Queste hanno dimostrato come l’utilizzo di un bioreattore e di un terreno per cellule staminali possa permettere l’organizzazione delle HLSC in clusters tipici del fegato fino a strati profondi della spugna e l’aumento del differenziamento funzionale in una popolazione di epatociti maturi. Un’altra parte del dottorato è stata improntata nello studio del differenziamento in vitro di cellule staminali in Isole di Langerhans all’interno di biomateriali. Durante una prima fase di studio si sono utilizzate cellule Beta del pancreas per capire in quale forma di scaffold a base dell’estere benzilico dell’acido ialuronico potessero crescere meglio. La situazione migliore riguardava l’uso di spugne. Avendo però le cellule una scarsa capacità proliferativa, si è deciso di utilizzare come alternativa le Cellule Staminali Mesenchimali (MSC) e sono state effettuate prove di co-colture con cellule Beta utilizzando terreni diversi per valutare lo stato differenziativo delle MSC. Tali prove sono ancora in corso.

The increase of chronic diseases, such as cardiovascular diseases, is leading to a high burden on the healthcare system. Moreover, the rise in life expectancy determined a demographic change accompanied by a boost of noncommunicable diseases and a corresponding demand for healthy aging. Diet is a well-established modifiable lifestyle factor able to reduce the risk of chronic diseases, but also the complications associated with an overall beneficial impact on health status. In the last years, evidence has been increasing on the protective role of dietary bioactives, non-nutritive substances mainly found in plants. In particular, (poly)phenols are the most studied compounds over the last 20 years. Several clinical trials showed a protective effect of these bioactives through the modulation of different health outcomes. However, it is less clear the mechanisms through which (poly)phenols may exert their beneficial effect. This is mainly due to their wide diversity, their extensive and complex metabolism, but also to the paucity of reliable, sensitive and validated biomarkers able to bridge the gap between the intake of (poly)phenols and the different endpoints under investigation. Thus, there is a need of more evidence based nutrition able to fill this gap. Within this context, the aim of the present PhD thesis was to evaluate the role of different (poly)phenolic compounds in the modulation of several functional and metabolic biomarkers, through in vivo and in vitro approaches. The first part of the thesis was dedicated to assessing the effect of different (poly)phenols and their metabolites on cardiovascular risk biomarkers by using two different in vitro models of atherosclerosis. Specifically, the first model was a co-culture model of human vascular endothelial cells (HUVECs) and THP-1 used to study the capacity of different (poly)phenols in counteracting THP-1 adhesion process and resolve a TNF-alpha mediated pro-inflammatory process through the modulation of different adhesion molecules. The second in vitro model consisted in a monoculture of monocytes (THP-1) derived macrophages used to study the capacity of (poly)phenolic compounds to reduce lipid accumulation (pivotal step of atherogenesis) and modulate the expression of different genes involved in lipid metabolism. The results obtained have shown the capacity of different (poly)phenols and their metabolites to reduce the THP-1 adhesion to HUVEC, the inflammatory process, including the production of adhesion molecules. In addition, (poly)phenols have shown to reduce lipid accumulation in macrophages and this reduction was accompanied by a modulation of lipid metabolism related genes. The second part of the thesis was carried out at the Departments of Nutrition and Environmental Toxicology, University of California (Davis, USA) and devoted to investigate the role of certain phenolic compounds in the modulation of metabolic features of the adipose tissue, critically involved in the reduction of cardiovascular risk through both in vivo and in vitro models. Specifically, by using 3T3-L1 pre-adipocytes cell line, it has been studied the effect of anthocyanins and their metabolites in the promotion of mitochondrial function and differentiation from white to brown adipocytes. Furtherly, the effect of anthocyanins and metabolites was also investigated in vivo by using an animal model of C57BL/6J mice fed with a high-fat diet. The results obtained documented the capacity of anthocyanins and their metabolites to promote mitochondrial biogenesis and beiging of white adipose tissue via regulation of mitochondrial dynamics both in 3T3-L1 adipocytes cell line and in mice fed with a high fat diet. In the third part of the thesis, the study was devoted to the evaluation of markers able to provide more insight on a novel hypothesis about the effect of (poly)phenols on intestinal permeability and related markers. Specifically, the effect of a polyphenol-rich diet (PR-diet) was evaluated on markers of oxidative stress and vascular function in a group of older subjects with increased intestinal permeability. This last part was carried out in the context of the MaPLE (Microbiome mAnipulation through Polyphenols for managing Leakiness in the Elderly) European project, in which a positive modulation of intestinal permeability was documented. The analysis performed failed to show an effect of the intervention on markers of oxidative stress (e.g. cell resistance to DNA damage and endogenous DNA damage) and vascular function (e.g. serum levels of sVCAM-1 and sICAM-1) in this target vulnerable subjects. In conclusion, this PhD thesis contributed to increase evidence about the beneficial effects of (poly)phenolic compounds through the exploitation of different biomarkers in in vitro and in vivo models. In particular, the in vitro studies contributed to elucidate several biological mechanisms (i.e. related to inflammation, oxidative stress and lipid accumulation/metabolism) of single metabolites and parent compounds also at physiological relevant concentrations. Finally, the studies performed on the animal model and in humans, contributed to demonstrate the potential impact of dietary polyphenols in vivo where more factors can affect and/or interfere on the final effect. The overall results seem to further support the potential benefit of these dietary bioactives even if depending on marker/outcome under study. Future in vitro, but above all, in vivo studies should be designed to better clarify the effectiveness of (poly)phenols by considering the actual dose, their complex pharmacokinetics and extensive metabolism. However, the selection, analysis, exploitation and combination of traditional and candidate biomarkers is highlighted as a critical aspect to address.

Lo scopo di questa tesi è lo sviluppo di una protesi valvolare sensorizzata per la valutazione e il monitoraggio dei parametri funzionali della valvola e di conseguenza la realizzazione un prototipo di PHV (Prosthetic Heart Valve) che integri all’interno delle protesi valvolari in commercio una tecnologia utile alla realizzazione di queste specifiche. Il segnale di impedenza intravalvolare (IVI) è ottenuto grazie ad un sistema di elettrodi utili alla generazione di un campo elettrico locale e alla successiva registrazione della differenza di potenziale. Il lavoro sperimentale è stato suddiviso in due parti: una prima parte deputata alla scelta della posizione ottimale degli elettrodi rispetto ai lembi, al piano e all’anello valvolare, al fine di determinare due prototipi, ed una seconda parte in cui sono stati testati i prototipi in una situazione più fisiologica, cioè in un tratto di aorta bovina, ed è stata simulata una dinamica valvolare alterata. Il maggior segnale di impedenza riscontrato è stato ottenuto ponendo gli elettrodi ortogonalmente al cardine dei lembi valvolari e sovrapponendo elettrodo di eccitazione e ricezione al fine di ottenere un campo elettrico costante e ricezione puntuale della variazione del campo. Infine è stato riscontrato che il segnale di impedenza intravalvolare è in grado di riflettere alterazioni simulate dei lembi.

Milk and dairy products are an excellent source of bioavailable calcium thanks to the presence of casein phosphopeptides (CPPs), that with their phosporylated serines, bind calcium ions, keeping them in a soluble and bio-absorbable state. Digestion and absorption are limiting steps for the peptide bioavailability; thus the in vitro digestion procedures combined with the use of intestinal cell models allowed to mimic the physiological milieu, where digestion occurs and the interactions between peptides and intestine determine their fate. The purpose of this PhD thesis was to identify the biological potential of casein phosphopeptides after in vitro digestion. The first step was about the bio accessibility property of a CPP purified mixture using a culture of intestinal human cells. Next step was about the bioactivity study of a complete food containing CPPs, represented by Grana Padano (GP) and Trentin Grana (TN) at 13, 19 and 26 months of ripening. Present data show that after in vitro digestion, preformed aggregates (CPP + Ca) in a commercially mixture still maintain their conformation and retain their bioactivity as promoters of
calcium uptake in intestinal cells, regardless of calcium mechanism transport (TRPV6 in Caco2 cells and depolarizing L-type calcium channels in HT-29 cells). GP and TN digestates, were also able to induce a calcium uptake in a co-culture of Caco2 and HT-29, a model of human intestinal epithelium more complete and useful. Moreover, they shown the capacity to induce the bone mineralization in human osteoblast-like cells. Since the biological potential after digestion was verified, CPPs could be considered as a nutraceutical and GP and TN cheeses as potential functional foods.

The Ph.D. project has been structured in three different parts: The first one focused on setting up and characterizing a 70/30 Caco2/HT-29 co-culture as an in vitro model to mimic the physiology of the human intestinal epithelium starting from the two parental cell populations already differentiated. The co-culture morpho-functional features were analyzed at confluence (T0) and 3, 6, 10 and 14 days after T0 (T3, T6, T10 and T14, respectively). Morphological analysis revealed: at T6, the presence of microvilli, a complete paracellular junctional apparatus and mucus; at T14, abundant microvilli and mucus absence. The functional analysis showed: an increase of Alkaline Phosphatase, Aminopeptidase N and Dipeptidyl Peptidase IV specific activity with days in culture, indicative of a progressive acquisition of a differentiated intestinal phenotype; permeability values comparable to the ones of the human small intestine and indicative of a good status of the tight junctions. This co-culture could be considered a more versatile, suitable and simpler in vitro model of human small intestinal epithelium, than the previous published ones, able to reach the intestinal differentiated phenotype already after six days from the confluence. The second part focused on the validation of the 70/30 Caco2/HT-29 co-culture as model to study absorption and nutrient/food-intestine interactions at molecular and biochemical level. Five different experimental water biscuits and breads were subjected to an in vitro gastrointestinal digestion and the obtained digestates were administered to the co-culture at physiological doses, calculated starting from the daily recommended dose in relation to the total surface area of intestinal absorption, and in excess. The effect of digestates administration on co-culture cell viability, paracellular permeability, oxidative status and anorectic hormones production were evaluated: all the digestates were not able to affect co-culture viability or to modify the paracellular permeability; all the water biscuit digestates were able to reduce intracellular ROS formation due to the natural presence of antioxidant compounds in the flours used to prepare them; all the bread samples were able to modulate the co-culture anorectic hormone production. These studies showed the suitability of the co-culture to study a wide range of interactions between nutrients/food/nutraceuticals and intestine. The third part focused on setting up and characterizing an in vitro cellular model of obese/overweight intestine using the 70/30 Caco2/HT-29 co-culture. The nutrient excess was mimed increasing the frequency of medium change compared to the standard condition and the co-culture morpho-functional features were analyzed at 3, 7, 11 and 15 days after confluence (T3, T7, T11 and T15, respectively). The obtained in vitro model, after 15 days of post-confluence and compared to our standard co-culture, showed a higher: i) inflammatory and oxidative status; ii) paracellular permeability; iii) microvilli enzyme activity; iv) production of anorectic hormones. These features were comparable to the ones revealed in vivo in the intestine of obese subjects, thus validating the present cellular model to study obesity-associated modifications at the molecular level.

È noto che il melanoma si sviluppa in conseguenza di alterazioni multifattoriali. Fin ad oggi numerosi studi indicano che l’alterazione di p16 individuato come gene soppressore del tumore, ha un ruolo importante nello sviluppo e/o nella progressione del melanoma umano. La crescita non regolata delle cellule del melanoma è stata associata con mutazioni nella via del ciclo cellulare che riguarda la fase G1: p16-cyclin D/cdk4-pRb. Recentemente le terapie anticancro si sono focalizzate sul ripristino della funzione oncosoppressoria di p16 e di altre proteine coinvolte nello stesso pathway che regola il ciclo cellulare nel melanoma (per esempio, c-myc, p27). Tra i nuovi agenti antitumorali stanno emergendo gli inibitori dell’ Istone deacetilasi (HDAC), che mostrano capacità nell’arrestare lo sviluppo di cellule tumorali essendo forti induttori di differenziamento cellulare ed attivando il processo apoptotico. Recentemente, si è studiata la capacità degli inibitori di HDAC di modulare le proteine che regolano il ciclo cellulare (per esempio, p21CIP1) e di determinare la down-regolazione dei fattori che inducono la proliferazione cellulare incontrollata. In questo studio abbiamo esaminato l'effetto dell’ acido valproico (VPA) in vitro, su due linee cellulare di origine umane di melanoma: M14 e JR8. Abbiamo osservato che il VPA induce arresto del ciclo cellulare e apoptosi del 50% nelle cellule M14 e del 55% nelle cellule JR8, con conseguente sensibilizzazione del tumore al trattamento di etoposide e cis-Platino. Il VPA, determinando il 75% d’arresto delle cellule in G1 del ciclo cellulare, favorisce l’aumento d’espressione di p16 sia a livello genico che proteico, in concomitanza ad una aumentata espressone delle proteine p21 e della ciclina D1. Per valutare la possibilità di usare il VPA come co-adiuvante nel protocollo terapeutico per il melanoma, sono state disegnate due differenti sequenze di somministrazione in vivo, di VPA e cis-Platino. Il trattamento concomitante del tumore (M14) in vivo, con VPA+cis-Platino determina una inibizione della crescita tumorale del 48%, confrontato con il controllo ed un effetto anti-metastatico di circa il 45%. La sequenza di trattamento con la combinazione cis-PlatinoVPA ha inibito la crescita tumorale di circa il 61% inducendo un significativo effetto anti-metastatico di circa il 70%. Inoltre l'espressione del gene p16 aumentava di circa 2,5 volte nei tumori trattati con il VPAcis-Platino confrontato con il controllo e il tumore trattato in singolo con il cis-Platino. L'abilità dell’acido valproico di ristabilire la fase G1 del ciclo cellulare nel melanoma sia in vitro che in vivo suggerisce una sua potenziale applicazione nei protocolli terapeutici del melanoma.
It is known that melanoma develops as a consequence of multifactorial alterations. To date several studies indicate the effective implication of p16 as a tumor suppressor gene with a major role in either the development or progression of human melanoma. Deregulation of melanoma cell growth has been widely associated with mutations in the p16-cyclin D/cdk4-pRb pathway. Recently anticancer therapies are focused on restoration of p16 CDK inhibitory function and other proteins unregulated in melanoma cell cycle pathway (e.g., c-myc, p27). A combined strategy for restoration of normal homeostasis in the melanoma skin with targeted delivery of apoptosis-inducing agents does not seems to be far obtain. New class of antitumoral agents are emerging: histone deacetylase (HDAC) inhibitors have attracted much interest because of their ability to arrest cell growth, induce cell differentiation, and in some cases, induce apoptosis of cancer cells. Recently, attention has been focused on the ability of HDAC inhibitors to induce perturbation in cell cycle regulatory protein (e.g., p21CIP1) and down-regulation of survival signalling pathway. In the present study, we have examined the effect of valproic acid (VPA) on M14 and JR8 human melanoma cell lines. Here we observed that VPA induces cell cycle arrest and apoptosis sensitising melanoma cells to cis-Platin and etoposide treatment. VPA was able to induce G1 arrest (up to 75 %) in association with up-regulation of p16, p21 and cyclin-D, inducing apoptosis (50 %) in M14 and JR8 (55%) cells. To evaluate the possibility of VPA to be used as co-adjuvant in the chemotherapy protocol for melanoma, two different sequences of in vivo administration of VPA and cis-Platin were designed. The concomitant treatment of tumour (M14) in vivo, with VPA+cis-Platin induced a growth inhibition of 48% compared to control with an anti- metastatic effect of about 45%. The treatment sequence with VPAcis-Platin combination inhibited tumour growth in M14 of about 61% and induced an anti-metastatic effect of about 70%. Moreover p16 gene expression was found up-regulated 2,5-fold in tumor treated with the sequence VPAcis-Platin compared to control and cis-Platin single treated tumor. The ability of valproic acid to re-established the G1 pathway in melanoma both in vitro and in vivo suggests a potential application of VPA in melanoma therapeutic protocols.

The aim of this study was the in vitro reconstruction of "soft and hard tissue". Adult Stem Cells were seeded onto three-dimensional scaffolds with appropriate differentiation factors. In particular, the following constructs were prepared: (a) hyaluronic acid or fibrin scaffolds seeded with Skin Precursors Cells (SKPs) and Adipose Derived Stem Cells (ADSCs) for the regeneration of nervous tissue; (b) hydroxyapatite scaffold seeded with ADSCs to regenerate a vascularized bone tissue substitute; (c) hyaluronic acid biomaterial seeded with Dental Pulp Stem Cells (DPSCs) to generate a dental pulp-like tissue. First of all, the differentiation of stem cells was assessed in monolayer cultures by means of immunofluorescence analysis. Subsequently, the same differentiation conditions were applied on three-dimensional cultures. Proliferation test, scanning electron microscopy morphological analysis and gene expression analysis by Real Time PCR were performed at different time points. Furthermore, the genetic stability of the differentiated cells was verified by means of karyotype and CGH array analysis. The overall data showed: (a) the neuronal and glial commitment of SKPs and ADSCs on hyaluronic acid and fibrin scaffolds and the chromosomal stability of these three-dimensional cultures. (b) The concurrent osteogenic and endothelial commitment of ADSCs on hydroxyapatite scaffold and the in vitro generation of a tissue-engineered bone graft with a great osteointegration potential. (c) The concurrent glial, neuronal, and endothelial commitment of DPSCs onto non-woven hyaluronic acid scaffold, defining a possible model to restore the nervous and vascular components of the dental pulp tissue.
In questo lavoro sono stati ricostruiti in vitro 'soft and hard tissue' seminando Cellule Staminali Adulte su supporti tridimensionali in presenza di opportuni fattori differenziativi. In particolare, sono stati preparati i seguenti costrutti: (a) tessuto nervoso a partire da cellule staminali di pelle (SKP) e tessuto adiposo (ADSC) seminate su un supporto a base di acido ialuronico o fibrina; (b) tessuto osseo vascolarizzato utilizzando ADSC seminate su scaffold a base di idrossiapatite e (c) tessuto simil-dentale associando le cellule staminali della polpa dentale (DPSC) a un biomateriale a base di acido ialuronico. Lo studio ha previsto una fase preliminare in monostrato, in cui il differenziamento delle cellule staminali è stato valutato mediante analisi di immunofluorescenza. Stabilita la plasticità  delle cellule staminali ai fattori differenziativi, sono stati effettuati gli esperimenti nelle tre dimensioni. A diversi tempi, i costrutti sono stati sottoposti a test di proliferazione, ad analisi morfologica mediante microscopia elettronica a scansione e ad analisi dell'espressione genica mediante Real Time PCR. Inoltre sono state condotte analisi di citogenetica mediante cariotipo e CGH array per verificare la stabilità  genetica delle cellule durante il differenziamento. I dati raccolti hanno mostrato: (a) il differenziamento neuronale e gliale delle SKP e delle ADSC su supporti a base di acido ialuronico e fibrina mediante un processo che non altera l’assetto cromosomico delle cellule differenziate. (b) Il co-differenziamento osteogenico ed endoteliale delle ADSC su supporti a base di idrossiapatite e la generazione in vitro di un sostituto osseo bioingegnerizzato privo di alterazioni geniche e dalla promettente osteointegrazione. (c) Un possibile modello per la rigenerazione della polpa dentale che associa le DPSC a un supporto tridimensionale a base di acido ialuronico sottoforma di tessuto non tessuto, dove il co-differenziamento gliale, neuronale ed endoteliale delle DPSC favorisce la rigenerazione della componente nervosa e vascolare del tessuto pulpare.

Background: The tumor microenvironment (TME) is a complex system, shaped by direct interactions among different cell types and by the interactions between cells and extracellular matrix (ECM). Given the emerging importance of the TME in modulating cells’ morphology and function, more sophisticated tumor models incorporating TME features are needed to elucidate cellular, molecular, and immunologic mechanisms of tumor response or resistance. An intensive investigation of in vitro models able to study tumor biology has led to the generation of different three-dimensional (3D) culture methods that better mimic in vivo conditions compared to the usual 2D culture methods. The 3D mono- and co-cultures are able to reproduce some “in vivo features” such as 3D cell morphology, which permits cells to better execute their function and enables them to deposit significant increased amount of ECM. Aim of this study is the development of an accurate in vitro 3D tumor model to study the impact of tumor ECM on the cells of the microenvironment. The understanding of the specific contributions that ECM proteins make to the tumor microenvironment became crucial due to the emergency of find alternative cures to the many cancer harboring patients resistant to the existing therapies. Methods: Our experimental approach can be divided in two main experimental plans: • the development of tumor spheroid model, helpful to understand the beginning stage of the nascent tumor; at day 7, 14 and 21 of spheroids culture we evaluated ECM deposition through immunofluorescence (IF) analysis of collagen type VI; we also analyzed how much the 3D co-culture model we generated was similar compared to the in vivo microenvironment regarding gene expression; • the development of a scaffold obtained by murine tumor tissue decellularization, utilized for the study of the advanced tumor stage, with a more complex ECM compared to the spheroid model; some scaffolds underwent to collagen type VI IF analysis while other scaffolds were used for recellularization experiments with B16f10 or NIH/3T3 cell lines. Some scaffolds were also used for scanning electron microscopy analysis (SEM). Results and Discussion: Spheroids generated by the co-culture of B16f10 and NIH/3T3 cells were the only ones lasting for 21 days and the only ones where collagen type VI was detected, compared to spheroids made just by B16f10. These results let us deduce that ECM deposition is fibroblast-dependent. According to the 3D morphology classification of Kenny et al. 2007, B16f10 + NIH/3T3 derived spheroids we generated belong to the Mass class, characterized by cells organized in a regular manner around the center of the colony; B16f10 derived spheroids seems to belong instead to the Grape-like class, characterized by colonies with poor cell-cell contacts and distinguished by their grape-like appearance. B16f10-spheroid’s morphology clearly show a lack of robust cell-cell adhesion, result that has to be overlapped with the absence of collagen type VI. Therefore, fibroblasts are needed for the generation of an early tumor stage 3D model because of their major role as ECM producers and tumor micro-environment organizers. We even investigated spheroid gene expression signature. We focused on the genes that were expressed at the same level between the tumor cells derived from the 3D coculture and the actual in vivo tumor microenvironment. Clusters analysis highlights the similarity between the 2 groups showing 23.1% of the found pathways referring to cancer microenvironment, giving grand importance to the spheroid as in vitro model compared to the 2D systems. To define an in vitro 3D model suitable to the experimentation on advanced solid tumor phase, murine B16f10 derived tumors were processed for decellularization and studied to verify the efficacy as a natural scaffold for 3D culture system. As observed also from other research groups, cell attachment was limited to the border of the tissue, and it seems cells were not able to pass through the ECM. Control experiment with polyurethane demonstrate the capability of cells to infiltrate a synthetic matrix. To have a better understanding of the ECM structure, frozen sections of decellularized tissue were analyzed by confocal microscope for detection of collagen type VI. Interestingly, both immunofluorescence and histochemistry analysis showed an increase of ECM in decellularized tissue compared to the not decellularized one. This may be due to a slight collapse of the tumor structure since cells have been removed from it. We implemented the ECM observation with the support of SEM: after the decellularization treatment the extracellular fibres are exposed and as hypothesized, the lack of cells makes the fibres twist on themselves, generating a complex net, probably impenetrable from cells. To create a method to measure the collapse of the extracellular matrix that a decellularization treatment may provokes, we compared a fresh and a decellularized specimen of mouse pulmonary parenchyma, where structural modifications are easy to be detected. In this way we were able to quantify the collapse of the ECM through alveoli area reduction. Conclusions: The development of the spheroid made by tumor and fibroblast cells is a more realistic environment compared to the usual 2D culture and to the spheroid made simply by tumor cells. Fibroblasts are needed for the generation of a better 3D model because of their major role as ECM producers and tumor micro-environment organizers. The limit of the spheroid model is the time, since, to date, the system does not provide oxygen import, necessary for the tumor bulk growth. Tumor derived 3D scaffolds by decellularization most truthfully represents the real in vivo scenario of a tumor 3D model, but the recellularization lack is very often a big limit. Our data demonstrate that the decellularizzation process provokes the collapse of the matrix that does not allow the tissue to be utilized as scaffold for in vitro cell experimentation. Here we also provide, for the first time, a method to test the damage that the treatment provokes on the samples, avoiding the loss of precious materials.

My PhD project has developed in two main research areas, both related to antimalarial drug discovery. The first part was focused on the study of the antimalarial and anti-inflammatory activity of medicinal plants used in Burkina Faso to treat malaria; the second part was dedicated to the development of new tools to measure in vitro the pharmacodynamic characteristics of current or new drugs to predict early on their clinical behavior. The work was conducted in the Laboratory of Parasitology, Department of Public Health- Microbiology -Virology of the University of Milan and at the Liverpool School of Tropical Medicine, Liverpool, UK. The antiplasmodial activity, the inhibition of cytokine production, and the antiproliferative activities of three different plants, Canthium henriquesianum (K. Schum), Gardenia sokotensis (Hutch) and Vernonia colorata (Willd) were investigated. Crude and organic plant extracts were tested in vitro for antimalarial activity against chloroquine susceptible (D10) and resistant (W2) strains of P. falciparum. Cell cytotoxicity was assessed on Human Dermal Fibroblast (HDF) and melanoma cells by the MTT assay. The selectivity index (SI) was used as the ratio of the activity against the parasites compared to the toxicity of the plant extract against HDF. C. henriquesianum aqueous extract had a moderate antimalarial activity (IC50<50µg/ml) with a good selectivity index (SI(HDF/D10)˃7). C. henriquesianum diisopropyl ether extract was the most potent inhibitor of parasite growth with an IC50 9.5 µg/ml on W2 and 8.8 µg/ml on D10 and limited toxicity (SI(HDF/D10)<2). On the contrary, G. sokotensis and V. colorata aqueous extracts were shown to be weakly active on the plasmodium parasites (IC50≥ 50µg/ml) with limited toxicity. In addition, when the production of IL-1β and TNFα by human THP1 monocyte was assayed by ELISA, it was found that the extract of C. henriquesianum induced a dose-dependent inhibition of IL-1β, but not TNFα production, thus confirming its traditional use as antipyretic. By NMR analysis, we identified the chromone as the compound mostly represented in the diisopropyl ether extract of C. henriquesianum. Chromone however was less active as antimalarial than the crude extracts and it did not inhibit cytokine production at not toxic doses, indicating that other molecules in the total extracts contribute to the anti-inflammatory activity. In conclusion, out of the three plants examined, only C. henriquesianum seems to possess antimalarial activity in vitro and the capacity to inhibit pyrogenic cytokine production. Gardenia sokotensis extract showed moderate cytotoxic activity on melanoma cell line and it could be further investigated for its antitumor activity. The second part was related to the in vitro study with the objective to develop new tools to measure in vitro the pharmacodynamic features of different antimalarials. Three type of assays were used: dose response curves to measure IC50 and IC90 variables and calculate the slope of the curve; time to kill kinetics using SYBR Green I-based fluorescence (MSF) assay and high content in vitro assays using the Perkin Elmer Operetta High Content Screening microscope to measure the stage specificity of antimalarial action. These tests were first set up with current antimalarials, but the intent is to use them to prioritize the development of new drugs. The results of the dose–response curves confirmed that DHA, atovaquone and CQ are more potent antimalarials compared to pyrimethamine., with a IC50 less than 4 nM for DHA and atovaquone; and 10 nM for CQ. The slope factor, which represents the steepness of the curve, appears to be characteristic of drug class and was >1 for all the drugs suggesting that binding does not follow the law of mass action with a single site and the ligand binds cooperatively to a multivalent receptor. Time to kill studies indicated that DHA has a noticeable effect before 5h as well as CQ and the parasites are irreversibly inhibited after 12hrs of exposure to the drug. The results from the High Content Screening showed that for all the compounds, at the highest dose, the surviving parasites after 48 h are 80-90% young forms and only10-20% mature parasites. No major changes are seen in the distribution of young vs mature forms at doses lower than the IC50. However, at higher doses the percentage of young is increasing and in parallel the percentage of mature forms is decreasing. This indicates that a small number of parasites was able to complete the cycle and re-invade new RBC.The Operetta technique seems to be able to quickly assess the potency as well as the stage specificity of a drug. It should be able to predict the parasite reduction ratios (PRR) without the need to perform the time to kill assays which are more laborious, time consuming and less adaptable to high throughput screenings (HTS). The compounds that inhibit the ring stage would be predicted to have faster time-kill profiles and would be prioritized for further studies in the process of antimalarial drug development.

The objective of the PhD thesis was to study the effect of blueberry and its bioactives in the modulation of biomarkers of oxidative stress, inflammation and endothelial function through in vitro and in vivo approaches. In particular, acute and chronic interventions were exploited in subjects with risk factors for cardiovascular disease to investigate the role of blueberry consumption in the modulation of DNA damage, pro-inflammatory cytokines, reactive hyperemia index, arterial stiffness, nitric oxide. At the same time, anthocyanin and phenolic blueberry fractions were used to explore their ability to reduce lipid accumulation in THP-1 macrophages, and to counteract THP-1 attachment to endothelial cells (HUVEC cell line) following stimulation with pro-inflammatory cytokines. The main results obtained in vivo showed that blueberry intake increased cell resistance against DNA damage and improved endothelial function; on the contrary, no effect was observed on markers of inflammation. The in vitro studies showed the capacity of blueberry bioactives to affect lipid accumulation and THP-1 adhesion to endothelial cells. In conclusion, the studies developed documented the beneficial role of blueberry in the modulation of biomarkers of oxidative stress and endothelial function in subjects exposed to risk factors. In addition, the potential antiatherogenic and antiatherosclerotic effect of blueberry bioactives was supported by the exploited in vitro approach.

Scopo della ricerca sviluppata durante questi tre anni di Dottorato è quello di spiegare i meccanismi sottesi alla risposta allo stress ossidativo nell'uomo a livello integrativo e molecolare. Per questo fine, nel primo anno di Dottorato, si è innanzi tutto implementato un metodo quantitativo assoluto atto a valutare la produzione dei radicali liberi. Come è noto ciò che importa è l’equilibrio tra produzione di Specie Reattive dell’Ossigeno (ROS) e la disponibilità di difese antiossidanti. Quando questo equilibrio viene meno, si parla di Stress Ossidativo, con conseguenze a carico degli acidi nucleici, dei lipidi e delle proteine, compromettendo il metabolismo e la vitalità cellulare, fino a indurre apoptosi o necrosi. Questo è un fenomeno ricorrente in molte malattie acute e croniche oltre che nel fisiologico processo di invecchiamento. Allo scopo si è utilizzata la tecnica di Risonanza Paramagnetica Elettronica (EPR) accoppiata a specifiche sonde molecolari (spin trapping) per sviluppare un metodo quantitativo “in vivo” in grado di monitorare la produzione di ROS in campioni biologici quale il sangue e sue frazioni. Gli inizi del mio periodo di Dottorato sono fortunatamente coincisi con l’acquisizione da parte dell’Istituto di Bioimmagini e Fisiologia Molecolare (IBFM) del CNR (Lita di Segrate), di uno strumento EPR che risponde alle esigenze di maneggevolezza e portabilità (e-scan Bruker BioSpin, Germania), di recente immissione sul mercato, che opera in onda continua (CW), nella banda X delle µW, in grado di rilevare concentrazioni molto basse (nM) in piccoli campioni (50 µl), utilizzando una cavità risonante le cui proprietà ottimizzano il fattore di riempimento, conferendo un’elevata sensibilità allo strumento. L’attendibilità dell'efficacia del metodo sviluppato è stata verificata con correlazioni tra metodi classici enzimatici e misure EPR in vari stati: fisiologici e parafisiologici. Trattandosi della messa a punto di un metodo di misura completamente innovativo e mancando pertanto dati di letteratura cui fare riferimento, si sono rese necessarie molte prove sperimentali da campioni ematici, in un vasto gruppo di soggetti, con tantissime acquisizioni modificando e ottimizzando di volta in volta i parametri e le condizioni (T, pO2) Questo procedimento è stato lento e laborioso; una volta superate le difficoltà tecniche, si è avuto a disposizione un piccolo catalogo di misurazioni che è servito ad ottenere i primi dati sperimentali che saranno illustrati nei primi paragrafi di questa tesi. Si è inoltre cercata una correlazione statistica tra la produzione di ROS determinata con tecnica EPR ed i marcatori dello stress ossidativo ottenuti dai vari test convenzionali enzimatici riportati in letteratura quali il dosaggio da sostanze reattive all'acido tiobarbiturico (TBARS) e carbonili proteici (PC) in grado di quantizzare il danno “a posteriori” prodotto dai ROS su lipidi e proteine rispettivamente. Una correlazione sistematica tra i dati EPR e i dati enzimatici non era certa, in quanto questi ultimi rivelano un danno conclamato. Tuttavia, è stata trovata una significativa correlazione (ANOVA, p<0.05) in soggetti a riposo, tra la produzione di ROS/TBARS e PC (rispettivamente: r2=0.74 e r2=0.60). Per rispondere allo scopo della ricerca, abbiamo assunto come modello l’ipossia studiata 1) come situazione che induce uno sbilanciamento tra Stress Ossidativo e capacità antiossidante e 2) nel tentativo di identificare i possibili meccanismi di ripristino dell’equilibrio. Dall'insieme dei dati raccolti, al di là dei risultati specifici, possiamo evincere che anche se la misura quantitativa assoluta della produzione di ROS (umol . mim-1) non può essere un parametro generalizzato, perché funzione di variabili fisico-chimiche (pO2, Temperatura, concentrazione della sonda), acquisizione ed elaborazione dei parametri vanno comunque prese in considerazione. Dal calcolo dei limiti di detenzione (LOD): 30 · 10-3 mM, e quantificazione (LOQ): 100 · 10-3 mM, lo strumento si è rilevato sensibile e affidabile. Allo stesso tempo, va tenuto presente che il dato ottenuto rappresenta la produzione di ROS non tamponati dal sistema antiossidante. Per questo, si è ritenuto che la misura su campione ematico fosse rappresentativa della risposta sistemica integrativa. In particolare, il sangue capillare, oltre alla sua elevata sensibilità e riproducibilità (0,5% di differenza tra misure ripetute), ci ha permesso di disegnare un protocollo agile mini-invasivo. Da quanto fin qui esposto, possiamo ricavare che, al di là della ricerca di un dato assoluto da riportare in letteratura, è una valida procedura che ogni soggetto, monitorato nel tempo risulti controllo di se stesso, ovvero che a indice della risposta equilibrio/squilibrio vengano quantizzate le variazioni. Nel tentativo di identificare i possibili meccanismi di ripristino dell’equilibrio dello stress ossidativo, gli esperimenti sono stati condotti su: A) soggetti sani, che come tali sono caratterizzati da una condizione di equilibrio tra ROS e difese antiossidanti, B) soggetti affetti da patologie neurodegenerative, per i quali era logico attendersi, come confermato dalla realtà, che fossero caratterizzati da una condizione di conclamato squilibrio, rivelabile da un significativo incremento di ROS prodotti in condizioni di riposo. In soggetti sani, si sono disegnati, messi a punto e applicati differenti protocolli sperimentali, per testare l’effetto: a) dell’esercizio fisico (stato ipossico transitorio) di breve (hockeisti e nuotatori) e lunga durata (atleti di triathlon); b) dell’allenamento (nuotatori); c) dell’ipossia normobarica e ipobarica acuta e prolungata (giovani soggetti sedentari); d) dell’assunzione di molecole antiossidanti sulla produzione di ROS. In patologie neurodegenerative (pazienti affetti da: Neuropatia Diabetica (tipo II DN), decadimento cognitivo lieve (MCI) e Sclerosi Laterale Amiotrofica sporadica (sSLA)) dopo aver rilevato uno squilibrio in condizioni basali, è stato studiato l’effetto dell’esercizio/allenamento (SLA) o dell’assunzione di antiossidanti (tipo II DN) sulla possibilità di un potenziale ripristino a valori di equilibrio. Importanti risultati sono emersi dall’analisi dei dati registrati nelle varie condizioni sperimentali e sono illustrati in questa tesi. ll tema comune di tutti i test, oltre all’evidente studio sulla produzione dei ROS, è stato quello dell’ipossia. Infatti l’Ipossia, nelle sue varie espressioni (intese come deficienze parziali o totali di O2 nel nostro organismo), è stato elemento caratterizzante in tutti i protocolli che abbiamo testato. I protocolli di studio su pazienti sono tuttora in corso; pertanto i dati illustrati devono intendersi come preliminari. Nei soggetti patologici si è costatata una differente produzione di ROS in condizioni di riposo, mostrando un valore significativamente (p<0,05) più alto nei pazienti affetti da SLA (+20%) rispetto ai soggetti sani. L’allenamento, in questi pazienti, sembra giocare un ruolo favorevole nel diminuire la produzione di ROS: un decremento del 7% è stato calcolato nei valori a riposo pre e post allenamento. Un sicuro effetto positivo dell’allenamento controllato, dopo otto settimane, è stato osservato nei nuotatori (-25%) sulla produzione di ROS (2.24 ± 0.14 μmol · min-1). Tutti questi esperimenti sono stati condotti e i risultati ottenuti durante il secondo e terzo anno della mia Scuola di Dottorato. A parte gli specifici risultati ottenuti dal set di dati raccolti, osservazioni generali possono essere riassunte come segue: 1) Non vi è alcun modo per ottenere dati per quantificare il volume totale di ROS prodotta da un soggetto in qualsiasi condizione. Il dato EPR ricavato dalle misurazioni rappresenta l’eccesso di ROS che il sistema ha prodotto (μmol · min-1) in una determinata condizione, ed è quindi un tasso di produzione di ROS Inoltre si è scelto di effettuare la misura da sangue invece che da campioni di tessuto in modo da ottenere dati il più possibile sistematici. In particolare, il sangue capillare (rispetto al sangue venoso o plasma) ha dato la possibilità di sviluppare un metodo di misurazione affidabile, relativamente semplice e mini-invasivo. Tuttavia quando si passa da misurazioni di sangue capillare a venoso, bisogna prendere in considerazione la differente pO2. (la produzione di ROS in sangue venoso è stata trovata circa il 18% inferiore a quella nel sangue capillare: 1.79 ± 0.12 vs 1.48 ± 0.29 μmol·min-1 rispettivamente). 2) I dati non possono essere presi come parametri generali, poiché dipendono strettamente da variabili fisico-chimiche (T, pO2) Da tutti questi punti, si può evincere che, al di là della ricerca di un dato assoluto da riportare in letteratura, è una valida procedura che ogni soggetto, monitorato nel tempo risulti controllo di se stesso, ovvero che a indice della risposta equilibrio/squilibrio vengano quantizzate le variazioni. 3) Tuttavia si è consapevoli che il dato fornito da EPR deve essere integrato con dati sistemici quali: analisi ematochimiche di laboratorio (ematocrito, ferro, colesterolo, piastrine, neutrofili, linfociti, monociti), saturazione dell’ossigeno, cinetica degli scambi gassosi (VO2max). Si ritiene che il metodo possa trovare applicazione i) medicina dello sport offrendo un valido aiuto nei centri sportivi per monitorare l’efficacia dell’allenamento e gli eventuali effetti dello stress provocato ed eventualmente migliorare i protocolli; ii) alla medicina di montagna per lo studio delle patologie da alta quota, poiché l’ipossia è il primo e più delicato problema dell’altitudine sin dalla quota media (1800m); iii) ai centri clinici/diagnostici per monitorare gli effetti delle terapie/trattamenti sulla progressione di patologia. Seconda parte della mia attività di ricerca, è stato lo studio in vitro dell’ipossia da un punto di vista molecolare mediante misurazioni spettroscopiche EPR. Partendo da una visione molecolare, l’ipossia orchestra una moltitudine di processi e di pathway molecolari. Nel tradizionale meccanismo dell’ipossia si ha la presenza di una proteina eme in grado di rilevare il legame reversibile di O2 il quale causa un cambiamento allosterico nell’emo-proteina: da inattivo (forma ossigenata) ad attivo (forma de-ossigenata). Quindi l'attività di una proteina emo è determinata dalla presenza o assenza dell’ossigeno legato. Nella presente ricerca, la rilevanza di stati ipossici, dal punto di vista molecolare, atti ad essere rilevati sia in condizioni fisiologiche che patologiche è stato attribuito all’Ossido Nitrico (NO) e al ruolo della Mioglobina (Mb). E’ noto, infatti, che l’NO è un radicale libero particolarmente espresso in condizioni ipossiche in quanto è in grado di regolare la vasodilatazione, quindi aumenta l’afflusso di sangue e al tempo stesso può essere però dannoso andando ad inibire la catena respiratoria a livello del complesso IV. In letteratura sono riportate cinque isoforme di Mb umana (Mb I-V) presenti nel muscolo scheletrico in percentuali diverse (Mb I: 75%; Mb II: 20%; Mb III-V: 5%) le cui funzioni non sono ancora state chiarite. Prendendo a riferimento Mb II, queste proteine differiscono solo per un singolo residuo aminoacidico: E54K (Mb I), K133N(Mb III), R139Q (Mb IV) a R139W (Mb V). Inoltre popolazioni tibetane, native dell’alta quota, presentano come risposta all’ipossia alte capacità antiossidanti, alto flusso ematico sistemico, metabolismo ed efficienza meccanica migliore, alti livelli di metaboliti circolanti biologicamente attivi all’NO e sono caratterizzate da un significativo aumento della concentrazione di Mb a livello muscolare con particolare riferimento all’ isoforma 54E (Mb II). Il presente studio, grazie all’analisi combinata EPR e simulazioni di Dinamica Molecolare (MD), contribuisce ulteriormente a sottolineare il ruolo importante svolto dalla Mb in condizioni di ipossia; inoltre segna un primo passo verso l'identificazione dei diversi ruoli svolti dalle isoforme della Mb Importanti risultati funzionali si sono ottenuti dallo studio EPR: l’NO ha capacità di legame significativamente maggiore con l’isoforma 54E rispetto all’isoforma 54K; questa è più circoscritta alla struttura dello stato de-ossigenato e la capacità di legame diventa significativamente inferiore (p<0.01) e quasi identica per le due proteine in presenza di O2 anche a differenti livelli di pO2 (40 e 100 mmHg). Concludendo, osservazioni e prospettive future possono essere condensate nella convinzione, che confidiamo saranno condivise e verificate anche dal lettore, della validità del nuovo del metodo sviluppato e dei dati raccolti. Alcuni risultati, in particolar modo quelli concernenti gli stati patologici, sono da considerarsi preliminari; tuttavia la strada da percorrere è estremamente interessante e richiede ulteriori indagini.
The aim of the research developed in the time course of the three years of my Doctoral course in Molecular Medicine was to shed light into the mechanisms involved in Oxidative Stress responses in man at both integrative and molecular levels. To reach this general and high-level purpose we firstly focused our attention towards developing a method capable of returning an absolute quantitative estimation of Free Radicals production level. This particular aim was the subject of the first year of my researching activity. As a matter of fact, as is well known, in any physiological and/or pathological condition a subject could be involved, ‘oxidative stress’ results from the imbalance between Reactive Oxygen Species (ROS) production and his antioxidant capacity. Electron Paramagnetic Technique (EPR) resulted the method of choice since, as is well known, it is the only technique capable of returning, in a non-invasive way, the ‘intrinsic’ quantitative information (the signal is proportional to the number of excited electron spins). Indeed the beginning of my Doctoral period fortunately coincided with the acquisition by the Molecular Bioimaging and Physiology (IBFM) Institute of CNR (Lita Segrate) of an EPR instrument (e-scan Bruker BioSpin, Germany) of recent design, responding to the innovative characteristics of easy portability and handling. The spectrometer operates at the common X-Band microwave frequency and deals with very low concentration levels (nM) even in small sample volumes (50 μl). Aware of the novelty of the method, we first looked for a correlation between the attained EPR experimental data and those returned when adopting the classical enzymatic methods (e.g. ThioBarbituric Acid Reactive Substances (TBARS) and Protein Carbonyls (PC) data collected from the same subject). Indeed, a correlation could not, by principle, be expected, since, compared to the EPR data, enzymatic methods give a quantitative “a posteriori” evaluation of the damage produced by ROS, on lipids and cellular proteins. As a matter of fact, a positive correlation (ANOVA, p<0.05) was found between EPR ROS production data and TBARS (r2 ~ 0.7) as well as PC concentration (r2 ~ 0.6), which was found in resting subjects. Then, in order to achieve the overall objective of the research, we assumed ‘hypoxia’ as the ‘particular’ condition to be investigated, since it was viewed as a peculiar state capable of: 1) producing un imbalance between oxidative stress and anti-oxidant capacity; 2) offering the possibility of the identification of mechanisms involved in the perturbed balance restoring. To attain this ‘secondary’ aim, the experiments were carried out on: A) healthy subjects, that as such, were expected to start from a balance equilibrium condition; B) subjects affected by neurodegenerative pathologies, for whom, on the contrary, a sure imbalance condition was expected, that would be confirmed by a significant increment of ROS production, even at rest. However a fully innovative method had been developed, so that we lacked of referring literature data: a series of preliminary measurements on a homogeneous group of healthy subjects had to be firstly carried out, not only to optimize the acquisition and environmental conditions (T, pO2 that have to be carefully defined since they greatly affect EPR data), but also to reach reliable resting physiological values and range of variability. A great reproducibility of the data (μmol . min-1) was found on blood capillary samples taken from the same healthy subject six hours apart (r² = 0.99, ~ 0.5% discrepancy) and was calculated; limit of detection (LOD) and quantification (LOQ) of 30 ∙ 10-3 mM and 100 ∙ 10-3 mM were calculated respectively. In healthy subjects, the experimental protocols were designed in order to study the effects of: a) exercise (as inducing a transitory hypoxic state) of both short (in hockey players, swimmers) and long duration (in triathletes); b) training (as inducing a balance restore, in swimmers); c) hypoxia, both hypo- and normobaric (to study the effect of the assumed model condition itself, in young sedentary subjects); d) antioxidant molecules administration as an external way helping to restore the balance. In neurodegenerative pathologies (patients affected by: type II Diabetic Neuropathy (type II DN), Mild Cognitive Impairment (MCI) and sporadic Amyotrophic Lateral Sclerosis (sALS)) after checking the expected unbalance throughout a significant increase of ROS production (sALS versus healthy subjects: +20%, p<0.05) under resting conditions, the effect of training on the possibility of approaching a normal ROS production level was investigated. The collected data thus far, that have to be nevertheless considered as preliminary results, of the training effect in sALS patients showed a beneficial effects; an decrease ROS production resting value (about -7%) was calculated after twelve weeks of training by the patients. in swimmers a significantly lower (about -25%) basal ROS production value (2.24 ± 0.14 μmol · min-1) after eight weeks training period was calculated. All these experiments were carried out and results obtained during my second and third year of my Doctoral School. Besides and beyond the specific results obtained from the collected data set, pointed out throughout my thesis, general observations can be summarized as follows: 1) There is no way to obtain data quantifying the total amount of ROS produced by a subject under any condition. Rather, EPR data return amount of ROS there were not scavenged by the antioxidant system. In other words, under a given condition, they represent the excess of the ROS produced in a given time, that is ROS production rate (μmol · min-1). Moreover we chose to carry out the measurement on blood instead of tissue samples to obtain most possible integrative data. In particular capillary blood (with respect to venous blood or plasma) gave us the opportunity of developing a mini-invasive, reliable and easy measurement method. Nevertheless when going from capillary to venous data, the different blood pO2 must be taken into account. (ROS production in venous was found about 18% lower than in capillary blood: e.g. 1.79 ± 0.12 vs 1.48 ± 0.29 µmol · min-1 respectively). 2) The obtained data cannot be taken as general parameters, since they strictly depend on the physic-chemical variables (T, pO2) assumed for the measurement that must be taken into great account. From all these considerations, we can therefore conclude that beyond the possibility of obtaining absolute data to report for the first time in literature, this method was found as quite a sensitive and reliable mean to monitor the changes of each subject during time progression, therefore making each subject the control. 3) Despite the reliability and high reproducibility of the afore-developed method, we are anyway aware that EPR data have to be compared and integrated by collecting systemic data: hematochemical parameters (e.g. hematocrit, iron, cholesterol, platelets, neutrophils, lymphocytes, monocytes), oxygen saturation, maximal oxygen consumption (VO2max). Finally we are confident that our method will be in the near future considered suitable to be applied into different medical fields: i) sport medicine, as an effective available help in sports centers to set up and adjusts training protocols by monitoring training effects on oxidative stress. ii) mountain medicine, in studying pathologies induced by hypoxia following high altitude acute and chronic staying; iii) clinic and diagnostic centers, helping in monitoring progression of pathologies and/or effects of therapies. On the other side, second part of my researching activity, the study of hypoxia throughout EPR measurements, was carried out in vitro at a molecular level. In fact, hypoxia orchestrates a multitude of processes of molecular pathway responses. Nevertheless the traditional mechanism of sensing hypoxia involves the presence of a heme protein so that hypoxia can be detected by a reversible binding of O2 at the heme site, which causes an allosteric shift in the hemoprotein from inactive (oxyform) to active (deoxy) form. The activity of a hemoprotein is therefore determined by the presence or absence of bound oxygen. Among heme proteins, the relevance of hypoxic states, suitable to be encountered in both physiological and pathological conditions was, in the present research, made in conjunction with the supporting role recently attributed to deoxy-Myoglobin (Mb) as a ROS scavenger, with particular attention to a peculiar reactive species molecule, that is nitric oxide (NO). NO is a highly diffusive and reactive molecule, produced, in the cells, by the NO synthases enzymes (NOS), using L-arginine and O2 as substrates. Under normoxic conditions, if NO concentration becomes too high, oxy-Mb is able to scavenge and oxidize it into NO3-, maintaining mitochondrial O2 consumption, thus cellular respiration, at the optimum. On the contrary, under hypoxia, the low O2 availability leads to NOS inactivation (being substrate limited). The NO produced by Mb down-regulates mitochondria O2 consumption, contributing to elongate the intracellular oxygen gradient and limiting the formation of deleterious reactive oxygen species. In addition, Mb-produced NO might contribute to hypoxic vasodilatation. Thus, Mb’s nitrite reductase activity (very low pO2 level) might participate both in the modulation of tissue mitochondrial respiration and in the limitation of ischemia-reperfusion injury, under hypoxic. The relevance of hypoxic states, in conjunction with the supporting role recently attributed to deoxy-Myoglobin throughout its scavenging and vasodilatory properties was the rational basis for this study. As regard as Mb, in human’s skeletal muscle, up to five different Mb isoforms are reported in the literature (Mb I-V). Also different Mb percentages are present in the muscle: Mb I 75%, Mb II 29%, Mb III-V 5%. Taking Mb-II as a reference, these proteins differ only for one external amino acid and, namely, they can be seen as the E54K (Mb I), K133N (Mb III), R139Q (Mb IV) and R139W (Mb V) mutants, whose specific functions, if any, are completely unknown. In addition, these general observations were supported by specific findings on populations born and living in extreme hypoxic conditions possibly explaining their better metabolic and mechanic efficiency by the increase of Mb concentration, with particular reference to the 54E isoform (Mb II). Throughout a combined EPR and MD simulations analysis, the present study aimed to give experimental evidenced able to further underline the relevant role played by Mb under hypoxic conditions, then marking a first step towards the identification of different roles played by Mb isoforms, whose presence, among mammals, is a distinct feature of human Mb. Functional results obtained by the EPR study showed up not only a significantly greater NO binding capacity (more than double; p<0.01) of the 54E with respect to the 54K isoform was calculated from the EPR spectra integrated areas but even more circumscribed this property to the deoxygenate state, the binding capacity becoming significantly lower and almost the same for the two proteins in the presence of O2 at the two analyzed pO2 levels (40 and 100 mmHg). This novel and quite intriguing result was supported by structural considerations emerged by the MD simulation analysis and in turn mutually supported by structural EPR results. Concluding remarks and future perspectives can be summarized in our firm belief, which we are confident will be verified and accorded by the reader as well, of the novelty of the developed method and of the reported data. Indeed some of them, especially when concerning pathological subjects, have to considered ‘in fieri’, nevertheless the road to take is extremely interesting, and calls for further investigations.

Orientador: Nelson Rodrigues Netto Junior
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-07-20T13:56:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_PauloAugusto_D.pdf: 1913506 bytes, checksum: 4bc4cfa6b4dc011c6b5a36042a0d32fc (MD5) Previous issue date: 1995
Resumo: No período de 1990 a 1994, 331 pacientes do sexo masculino com infertilidade primária foram tratados no ambulatório da Disciplina de Urologia da Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP. O tratamento compreendeu uma fase inicial, denominada convencional, que incluiu o tratamento clínico e cirúrgico (varicocelectomia). Os pacientes que não engravidaram nesta fase foram a seguir encaminhados para tratamento através de reprodução assistida. O tratamento convencional incluiu 258 pacientes (77,95%) que receberam tratamento clínico através do uso de citrato de clomifeno (50 mg ao dia por via oral) ou administração de gonadotrofina coriônica humana (2000 UI por via intramuscular por semana) associada à gonadotrofina da menopausa (1000 UI por via intramuscular por semana) e acompanhados por 12 meses. Ao término deste período, quatro pacientes apresentaram gravidez (1,55%). Os outros 73 pacientes (22,05%) receberam tratamento cirúrgico (varicocelectomia) e clínico por apresentarem varicocele uni ou bilateral ao exame físico especial. Após seguimento de 18 meses, 1 O pacientes apresentaram gestação (13,70%). O resultado geral do tratamento convencional foi de 4,23%. Dentre os 317 casais que não apresentaram gestação, 63 foram tratados por reprodução assistida. Empregou-se a técnica de inseminação intra-uterina (AIH) quando foi possível recuperar inicialmente, através das técnicas de capacitação, dois ou mais milhões de espermatozóides com motilidade progressiva (graus A e B). Trinta e seis casais (57,14%) foram '1' tratados através de um a nove ciclos de AIH, num total de 131 ciclos. Observou-se 14 gestações (38,89%) com taxa de gravidez de 10,69% por ciclo. Não houve diferença estatisticamente significante quando se comparou os resultados em função do número de espermatozóides inseminados (entre dois e cinco milhões ou entre cinco e 10 milhões). Empregou-se a técnica de fertilização in vitro quando a recuperação inicial de espermatozóides foi inferior a dois milhões. Vinte e sete casais (42,86%) foram tratados por esta técnica, num total de 37 ciclos. Ocorreu gravidez em três casos (11,11 % por ciclo). com taxa de gravidez de 8,11 % Não houve diferença estatisticamente significante quando se comparou os resultados em relação ao número de espermatozóides utilizados no procedimento (entre um e dois milhões ou menos de um milhão de espermatozóides com motilidade progressiva). O resultado geral do tratamento por reprodução assistida foi de 26,98%. Concluiu-se que a reprodúção assistida deve ser o tratamento deI escolha para os pacientes com infertilidade primária, portadores ou não de varicocele, por ser mais eficaz que o tratamento convencional
Abstract: From 1990 to 1 994, 331 male patients with primary infertility were treated at the Department of Urology of the University of Campinas Medical School - UNICAMP. The initial approach included conventional medical and surgical (varicocelectomy) regimens. Patients who did not achieve pregnancy with these modalities underwent assisted reproduction therapy. The conventional treatment group included 258 patients treated medically (clomiphene citrate, 50 mg qd, or chorionic human gonadotropin, 2000 UI/week, assodated with human menopausa I gonadotropin, 1000 UI/week, administered for 12 months). A total of 4 patients achieved pregnancy (1,55%). Surgical Aof total 73 patients underwent (varicocelectomy) nd medical treatment and were followed for 18 months. Pregnancy was achieved in 10 patients (13,70%). The pregnancy rate for conventional treatment was 4.23%. A total of 317 patients did not achieve pregnancy with conventional treatment. Of these, 63 were submitted to assisted reproduction. Intrauterine insemination (AIH) was selected when initial capacitation could recover at least 2 million motile sperms (grades A and B). A total of 36 patients (57,14%) received 1 to 9 cycles of AIH, totalizing 131 cycles. Pregnancy was observed in 14 patients (38.89%) with a pregnancy rate of 10.69% per cycle. There was not statistically significant difference when the results were compared according to the number of spermatozoa inseminated (2 to 5 and 5 to 10 million sperms). In vitro fertilization (IVF) was used when the initial capacitation could recover less than 2 million motile sperms. A total of 27 patients (42.86%) were treated with 37 cycles of IVF and 3 (11.11 %) achieved pregnancy (pregnancy rate per cycle of 8.11 %). There was not statistically significant difference when the results were compared according to the number of spermatozoa used for the in vitro fertilization (1 to 2 millions or lower than 1 million motile sperm). The total pregnancy rate for assisted reproduction was 26.98%. In conclusion, assisted reproduction is the treatment of choice for mal e patients with primary infertility, with or without varicocele, in view of its higher efficacy rate compared to conventional treatment
Doutorado
Doutor em Cirurgia

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde.
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Orientador: Luiz Valdrighi
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-07-21T00:45:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bueno_CarlosEduardodaSilveira_M.pdf: 3316193 bytes, checksum: bb28101b750557cd6b5c7d1a0a4b1f12 (MD5) Previous issue date: 1995
Resumo: o objetivo deste trabalho foi a avaliação "in vitro" da efetividade de cinco solventes de guta-percha e de quatro técnicas utilizadas na desobturação de canais radiculares de dentes humanos extraídos. Numa primeira etapa, analisou-se a atuação dos seguintes solventes : clorofórmio, eucaliptol, halotano, terebintina e xilol, nos tempos de 5 e 10 min., em relação à perda de massa dos cones de guta-percha testados. Constatou-se uma equivalência estatística de efetividade do clorofórmio, halotano e xilol, e uma menor efetividade do eucaliptol, no tempo teste de 5 min, e uma superioridade do clorofórmio, seguido pelo halotano e xilol, e posteriormente, pelo eucaliptol, no tempo teste de 10 min., enquanto que a terebintina, nos dois tempos, proporcionou apenas o amolecimento da guta-percha e nenhuma dissolução dos cones testados. Na segunda fase deste trabalho, analisou-se a efetividade na remoção de material obturador e o tempo gasto na desobturação de canais radiculares retos em 4 técnicas distintas, tendo como sol vente auxiliar o clorofórmio, da seguinte forma: Grupo I - Limas + Solvente; Grupo II - Gates-Glidden + Limas + Solvente; Grupo III - Gates-Glidden + Ultra-som + Solvente e Grupo IV Gates-Glidden + Canal Finder + Solvente. Segundo os testes realizados, o Grupo II supera os outros tanto em quantidade de limpeza obtida quanto em tempo gasto na desobturação, enquanto que os outros são menos efetivos e, estatisticamente, equivalentes entre si. Analisou-se também o uso de um procedimento que foi denominado de "Complementar", que consistiu no uso de um algodão embebido em solvente, e depois de um algodão seco, envoltos numa lima tipo Hedstrõen, após o emprego de cada técnica, por um tempo determinado. Este procedimento foi realizado no intuito de descobrir uma maneira simples e rápida de aumentar a limpeza dos canais, antes de iniciar a reinstrumentação dos mesmos. Os resultados obtidos demonstram, em média, um aumento de 60% na limpeza dos canais, em todas as técnicas testadas, após a aplicação deste procedimento
Abstract: The purpose of this paper was an "in vitro" evaluation of the efficiency of five usual gutta-percha solvents and four techniques of removing gutta-percha from root canais. At first, the efficacy of the following solvents was appreciated : chloroform, eucalyptol, halothane, turpentine oi! and xylene, according to the loss of gutta percha tested points mass, after tive and ten minutes. After five minutes, an estatistic equivalency between chloroform, halothane and xylene, and a minor efficacy of eucalyptol was observed. After ten minutes, a superiority of chloroform, followed by halothane and xylene, and finally, eucalyptol, was noted. The turpentine oil just softened the gutta-percha points (with no loss of mass) after five and ten minutes. In the second part of this study, the efficacy of four techniques of removing gutta-percha from root canal and the time lost in this removing, having the chloroform as auxiliar solvent, was evaluated in the following way: Group I - Files + Solvent; Group II - Gates-Glidden + Files + Solvent; Group III - Gates-Glidden + Ultrasonic + Solvent; Group IV - Gates-Glidden + Canal Finder + Solvent. According to the realized tests, the Group II was better than the others, which were estatisticaly inferior and equivalent. The Group II was superior in cleaning and also in time lost in removing gutta-percha. The use of a procedure that was called "Complement" was also evaluated. That consisted of a piece of cotton absorbed in chloroform and then a dry cotton, wrapped in a Hedstrõen file, after each technique, during an especific time. This procedure was realized to try to find a simple and fast way to improve the cleaning of root canais, before starting their reinstrumentation. The results showed, as an average, an increase of 60% in root canais cleaning, in all of the tested techniques, after the realization of this "Complement"
Mestrado
Endodontia
Mestre em Clínica Odontológica

Orientador : Fabricio Batista Teixeira
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-01T21:19:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_DanielPintode_M.pdf: 2108033 bytes, checksum: ba94b8ab1f280447cfa9f633362c9f6f (MD5) Previous issue date: 2002
Resumo: O presente estudo avaliou a eficiência entre diferentes técnicas de remoção de material obturador quanto à limpeza das paredes dos canais radiculares e extrusão apical de debris. Foram utilizados 120 pré-molares inferiores humanos, armazenados em solução de formol a 10% e divididos aleatoriamente em 6 grupos. Os dentes foram instrumentados e obturados, sendo em seguida, armazenados em estufa a 370C e umidade durante 60 dias. O retratamento foi realizado de acordo com as seguintes técnicas: limas Flexofile com Xilol; limas Flexofile e Hedstrom com Xilol; Profile GT com Xilol; Flexofile com clorexidina gel; limas Flexofile e Hedstrom com clorexidina gel; Profile GT com clorexidina gel. A extrusão apical de debris foi mensurada no decorrer dos procedimentos e a capacidade de limpeza das paredes por três procedimentos distintos: radiograficamente, através da lupa estereoscópica e do microscópio eletrônico de varredura (M.EV.). Os dentes foram radiografados no sentido orto e mesio-radial, sendo as radiografias analisadas quanto à presença de remanescentes de material obturador por dois examinadores simultaneamente. Em seguida foram fraturados longitudinalmente e as imagens capturadas através da lupa estereoscópica e transferidas ao computador. A quantidade de material obturador residual, foi mensurada utilizando o programa "Imagelab 98" e os resultados analisados estatisticamente. Cinco elementos de cada grupo foram analisados em M.E.V. nos 5 mm apicais. Os resultados indicaram que os grupos que utilizaram a clorexidina gel, com instrumentação manual ou rotatória, apresentaram menor extrusão de debris, sendo similar ao grupo com xilol e instrumentação rotatória, não diferindo estatisticamente entre si. Analisando-se a limpeza das paredes dos canais radiculares, os grupos que utilizaram clorexidina gel, independente da instrumentação empregada, apresentaram melhores resultados
Abstract: The present study evaluated the efficiency among different techniques of endodontic retreatment analyzing the cleaning of the root canal walls and apical extrusion of debris. The cleaning ability was analyzed by three different methods: radiografically, using the stereoscopic loupe and the scanning electronic microscope (SEM). Hundred twenty human lower pre-molars recently extracted stored in formol solution to 10% were used these teeth were divided randomly in six groups. They were instrumented, filled and stored at 37°C for 60 days. The canais were retreated in agreement with each group: Flexofile + xylene; Flexofile/ Hedstrom + xylene; Profile GT + xylene; Flexofile + chlorhexidine gel; Flexofile/ Hedstrom + chlorhexidine gel; Profite GT + chlorhexidine gel. After the accomplishment of ali procedures, including the collecting of the debris apically extruded, the teeth were radiographed in two different angles. They were fractured longitudinally and the images were captured using the stereomicroscope and transferred to the personal computer. The residual obturation material total area, was calculated by the program " Imagelab 98 " and the results statistically analyzed. Five elements of each group were observed in the SEM to compare the cleaning of the root canal walls, including the- apical thirds. The groups that used the chlorhexidine gel, with manual or rotary instrumentation, showed smaller debris extrusion, as well as the group with xylene and rotary instrumentation, not differing statistically to each other. Considering the cleaning of the root canal walls, the groups that used chlorhexidine gel showed better results independently the instrumentation used.
Mestrado
Endodontia
Mestre em Clínica Odontológica

Orientador : Fabricio Batista Teixeira
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-01T21:32:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cortez_DouglasGiordaniNegreiros_M.pdf: 3843826 bytes, checksum: 72eecd8c24ccbe3161da045baefa0490 (MD5) Previous issue date: 2002
Resumo: O objetivo do presente estudo foi comparar in vitro o selamento apical e coronário, densidade radiográfica e tempo operatório entre as técnicas do Cone único modelado, Onda contínua de condensação, Híbrida de Tagger e Condensação lateral. O estudo foi dividido em duas etapas. Na primeira, noventa raízes mesiais de molares inferiores extraídos foram instrumentadas, divididas em quatro grupos de acordo com a técnica usada para obturação. O tempo gasto para as obturações foi devidamente registrado. Em seguida, radiografias foram realizadas, digitalizadas e a densidade radiográfica foi avaliada em computador através do programa Digora 2.0. Os espécimes foram imersos em nanquim por 10 dias e diafanizados. A infiltração linear apical foi mensurada através do programa Imagelab 2.3, considerando as quatro faces radiculares. Na segunda etapa do experimento, quarenta e quatro raízes palatinas de molares superiores foram utilizadas para a avaliação da infiltração coronária. Estas raízes, depois de instrumentadas e obturadas empregando-se técnicas idênticas da primeira etapa, permaneceram em saliva humana por sete dias antes da imersão em nanquim. Os resultados demonstraram que a técnica do Cone único modelado apresentou menor tempo gasto (p<0,01). A técnica da Condensação lateral apresentou a melhor densidade radiográfica, destacando-se principalmente da Onda contínua de condensação. Em relação à infiltração coronária, a Onda contínua de condensação foi estatisticamente superior a Condensação lateral, apresentando também resultados superiores à Condensação lateral e Híbrida de Tagger quanto _à infiltração apical. A técnica do Cone único modelado apresentou resultados semelhantes à técnica da Onda contínua de condensação tanto no selamento coronário quanto apical, não diferindo estatisticamente entre si
Abstract: The purpose of this in vitro study was to compare the apical and coronal seal, radiographic density and operative time between the Shaped single cone, Continuous wave of condensation, Tagger Hybrid and lateral Condensation techniques. The study was divided in two parts. In the first stage, ninety extracted inferior molars mesial roots were prepared, divided in four groups and filled by the proposed techniques. The time spent to the development of the obturations was properly registered. Then, clinical and proximal view radiographs of each root were taken, scanned and the radiographic density was analyzed using the software Digora 2.0. The specimens were immerged in Indian Ink for 10 days and cleared. The apical infiltration was measured with the software Imagelab 2.3, in its four faces. In the second stage of the experiment, forty four extracted superior molars . palatine roots were used to evaluate the coronal seal. These roots were prepared and filled by the same techniques of the first stage and stayed in human saliva for 7 days before the immersion in Indian Ink. The results showed that the Shaped single cone technique was faster than the others (p<0,01). The lateral Condensation presented the best radiographic density, mainly when compared with the Continuous wave of condensation. The Continuous wave of condensation was statistically superior to the Lateral condensation comparing the coronal Isealing. This technique, also presented better results in the apical seal than Lateral condensation and Tagger Hybrid techniques. The Shaped single cone technique presented similar results of coronal and apical seal than the Continuous wave of condensation, without statistical difference
Mestrado
Endodontia
Mestre em Clínica Odontológica

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:45:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Made available in DSpace on 2014-10-09T14:08:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 07547.pdf: 3406360 bytes, checksum: 406686ad4b2502e338bc7922d8dd8788 (MD5)
Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia)
IPEN/D-MPLO
Intituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares, IPEN/CNEN-SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de Sao Paulo

Orientador: William Belangero Dias
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Eletrica
Made available in DSpace on 2018-07-20T02:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Louzada_MarioJeffersonQuirino_D.pdf: 8658429 bytes, checksum: db0966abf845e53d4bbf02ba7e9d7b29 (MD5) Previous issue date: 1994
Resumo: Foi objetivo deste estudo determinar a sensibilidade e precisão da Densitometria Óptica Radiográfica através da setorização das curvas características dos filmes radiográficos utilizando-se a equação matemática descrita por PELÁ et aI. (1990), programa de computador (PELÁ et aI. 1992) adaptado e a correção do efeito da não uniformidade da radiação X no campo radiográfico. Na primeira parte deste estudo, 20 peças ósseas de frangos e 20 peças ósseas de boi, com 4,5 cm e 1,5 cm de comprimento, respectivamente, foram radiografadas com técnica convencional. Foi utilizado um penetrômetro de alumínio de 18 degraus, como referencial densitométrico. As peças foram divididas em grupos e submetidas à descalcificação por 2, 4, 7 e 9 dias (frangos) e 7, 14, 21 e 28 dias (boi), objetivando correlacionar a perda de massa óssea com a densidade óssea obtida em milímetros de espessura de alumínio. A quantificação da perda da massa óssea em cada grupo foi feita através da calcinação e da determinação do conteúdo mineral por técnica de titulação. Obteve-se nesta fase elevada correlação linear (r > 0,97, para p < 0,02) entre a média das percentagens de cálcio nas peças e os valores médios de espessura de alumínio. Foi observado também, para as peças de boi, excelente correlação entre a perda de massa óssea e a perda de cálcio com relação ao tempo de descalcificação (r = 0,96, para p = 0,007). Na segunda parte do experimento 64 fragmentos ósseos de cães, com 1,2 cm de comprimento, foram seguidos ao longo do tempo durante o processo de descalcificação. A perda do conteúdo mineral foi determinada pela quantidade de massa óssea seca através de balança de precisão. Nesta fase, procurou-se avaliar o efeito da dispersão dos raios X, colocando-se outras duas chapas de alumínio (três milímetros de ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital
Abstract: This experiment was designed in order to determine the sensibility and precision of radiographic optical densitometry by the characteristic curves setorization of radiographics films. We used the mathematic expression describted by PELÁ et aI. (1990), a special computer software (PELÁ et aI., 1992) adapted for to this analysis and the correction of X radiation not uniformity effects. In the first part of this study, twenty pieces of chicken bone and twenty pieces of ox bone, 4,5 cm and 1.5 cm long, respectively, were radiographied by the conventional technique. An eighteen stepped aluminium wedge was used as a densitometric reference. The bones pieces were divided into groups to be descalcified for 2. 4, 7 and 9 days (chicken) and 7. 14. 21 and 28 days (ox). in order to correlate bone mass loss with bone density (values measured in mmAI). Quantification of bone mass loss in each group was done by the titulation technique, after calcination. Linear correlation was high (r> 0,97; p < 0.02) for the mean values of mmAI. We also observed an excelent correlation between bone mass loss and calcium loss (r = 0,96; P = 0.007) in ox bone. In the second part of the experiment 64 bone pieces of dog (diaphysis of tibia), 1.2 cm long, were observed during the descalcifjcation process and the mineral loss was determined by quantifyng the dried bone mass with a precision balance. To evaluate the X-ray dispersion effect we used two aluminium plates (3 mm wide) beside the stepped wedge. The bone pieces ~ were analysed in shorter periods of descalcification (6, 12, 18, 24, 36 and 48 hours), and the sensibility of this methodology was determined. Correlation for this group (dog bone) was greater than that one observed for the chicken and ox bones (r> 0,97 for 68.19% of the analysed pieces)
Doutorado
Mestre em Engenharia Elétrica

Orientador: Luis Bahamondes
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-08-03T19:55:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Biazotti_MariaCristinaSantoro_D.pdf: 1341579 bytes, checksum: 8d625309421d12fbabd4541b332908b4 (MD5) Previous issue date: 2004
Resumo: Este foi um estudo de coorte retrospectivo, que teve como objetivo comparar as técnicas de fertilização in vitro (FIV) convencional e injeção intracitoplasmática (ICSI), tendo como base algumas características do sêmen. Foram analisados 4.016 procedimentos de reprodução assistida, sendo 1.832 de fertilização in vitro convencional e 2.184 de injeção intracitoplasmática. A avaliação dos gametas e as técnicas de FIV foram realizadas no Laboratório de Reprodução Humana da Clínica Saint-Antoine na cidade de Bois Guillaume ¿ França. Para análise dos dados foram consideradas variáveis independentes o ano de realização dos procedimentos de FIV convencional e ICSI, a idade das mulheres submetidas à FIV, a concentração de espermatozóides, a porcentagem de espermatozóides progressivos rápidos, a porcentagem de espermatozóides normais, a qualidade espermática, o número de óvulos e a técnica de fertilização in vitro. A variável dependente foi a taxa de fertilização. Para avaliação estatística utilizou-se a análise de regressão logística múltipla. A única variável que teve influência na taxa de fertilização foi a técnica utilizada. As variáveis espermáticas estudadas não tiveram influência na taxa de fertilização quando se considerou a amostra de sêmen normal. Concluindo, em mulheres até 38 anos de idade, cujos companheiros tinham sêmen normal ou anormal leve e moderado, a técnica de FIV foi superior à técnica de ICSI, considerando-se a taxa de fertilização
Abstract: This was a retrospective cohort study, which compared the conventional in vitro fertilization technique (IVF) and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) according to some characteristic of the semen. A total of 4,016 procedures of assisted reproductive procedures, included 1,832 conventional IVF and 2,184 ICSI. The evaluation of gametes and the IVF¿s techniques were performed at the Laboratory of Human Reproduction of the Clínica Saint-Antoine Bois Guillaume, France. For the analysis of the data, it considered as independent variables the year when the procedures (conventional IVF and ICSI) was done, the women's age, the concentration of spermatozoa, the percentage of fast progressive spermatozoa, the percentage of normal spermatozoa, the sperm quality, number of the oocytes and the technique of IVF. The dependent variable was the fertilization rate. For statistical analysis it was use the multiple logistic regression. It was observed that the variable with high association to the fertilization rate was the technique (conventional IVF and ICSI) used. The sperm variables did not have influence in the fertilization rate when it considered sample of normal semen. In conclusion, in women up to 38 years old, whose partners had norm al semen or some anormality, the conventional IVF technique was superior than ICSI, taking into account the fertilization rate
Doutorado
Tocoginecologia
Doutor em Tocoginecologia

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:48:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Made available in DSpace on 2014-10-09T14:07:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 09323.pdf: 3218381 bytes, checksum: 8d10b070f53276d6cf856f4c78b98075 (MD5)
Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia)
IPEN/D-MPLO
Intituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares, IPEN/CNEN-SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de Sao Paulo

Orientador: Jose Roberto de França Arruda
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica
Made available in DSpace on 2018-08-06T11:13:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Padilha_PauloEduardoFranca_M.pdf: 721382 bytes, checksum: 8fae387ba335cdb5b3e7b462935121c1 (MD5) Previous issue date: 2006
Resumo: Neste trabalho é feita uma comparação de técnicas analíticas e experimentais de Análise de Caminhos de Transferência Vibroacústicos. A Análise de Caminhos de Transferência, ou TPA como é conhecida pela abreviatura em inglês, é uma ferramenta para se avaliar a contribuição de diferentes caminhos de propagação de energia vibroacústica entre uma fonte e um receptor ligados entre si por várias conexões. Uma aplicação típica de TPA é quantificar e determinar a importância relativa desses caminhos numa dada banda de freqüência, verificando-se a contribuição mais significativa para o receptor. Nessa análise, basicamente duas quantidades devem ser obtidas: as forças operacionais em cada caminho de transferência e a Função de Resposta em Freqüência desses caminhos. Essas funções podem ser obtidas tanto experimentalmente quanto analiticamente, considerando-se ou não a impedância mecânica da fonte vibroacústica. As forças operacionais podem ser diretamente obtidas de medições, usando um transdutor de forças, ou indiretamente estimadas a partir de medições auxiliares. Neste trabalho são apresentados dois métodos de obtenção indireta das forças operacionais ¿ o Método da Rigidez Complexa e o Método da Inversão de Matrizes ¿ associados com as duas possíveis configurações para determinação das Funções de Resposta em Freqüência ¿ incluindo e excluindo a impedância da fonte. Essas técnicas são aplicadas a dois modelos: um analítico e um experimental. avaliadas com esse modelo analítico, comentando-se suas vantagens e desvantagens. São avaliados ainda os efeitos do acoplamento entre fonte e receptor e entre os caminhos de transferência. Os experimentos foram realizados numa estrutura concebida como um modelo simplificado de um automóvel. As forças foram obtidas através dessas duas técnicas indiretas e comparadas com as medidas com transdutores de força. Como no modelo analítico, as forças e FRF foram estimadas na presença e na ausência da fonte, e a contribuição de cada caminho calculada através dessas técnicas e configurações. A resposta do receptor, calculada como uma combinação dos diferentes caminhos de transferência, foi comparada à medida nas condições operacionais, de modo a se verificar a exatidão de cada método utilizado. As vantagens e limitações desses métodos e configurações experimentais são então comentadas para uso em aplicações práticas
Abstract: In the present work, analytical and experimental techniques of Vibro-Acoustic Transfer Path Analysis are compared and discussed. Transfer Path Analysis (TPA) is a tool to evaluate the contribution of different vibro-acoustic energy propagation paths between a source and a receiver linked to each other by a number of connections. TPA is typically used to quantify and rank the relative importance of these paths in a given frequency band, determining the most significant one to the receiver. When applying TPA two basic quantities have to be determined: the operational forces at each transfer path and the Frequency Response Functions of these paths. These functions can be obtained either experimentally or analytically, considering or not the mechanical impedance of the source. Operational forces can be directly measured by force transducers or indirectly estimated from auxiliary response measurements. Two methods to obtain the operational forces indirectly ¿ the Complex Stiffness Method and the Matrix Inversion Method ¿ associated with two possible configurations to determine the Frequency Response Functions ¿ including and excluding the source impedance ¿ are presented and discussed in this work. These estimation techniques are applied to two models: an analytical and an experimental model. Analytically, these techniques are applied to a lumped parameter model. The advantages and drawbacks of them are commented and the effect of coupling between source and receiver and among transfer paths is analyzed with this theoretical approach. The experiments are done in a test structure conceived as a simplified model of an automotive vehicle. The forces are obtained via these two techniques and compared to those measured by force transducers. Like in the analytical model, forces and Frequency Response Functions are estimated in the presence and in the absence of the source, and the contribution of each path is calculated based on the combinations of these different estimation methods and setups. The contributions of the different paths at the receiver location are calculated using each estimation method and are compared to those obtained in the operational condition in order to verify the accuracy of these methods. The advantages and limitations of the methods and test setups are then discussed for use in practical applications
Mestrado
Mecanica Computacional
Mestre em Engenharia Mecânica

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias da Saude
Made available in DSpace on 2012-10-16T06:35:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T18:35:56Z : No. of bitstreams: 1 94771.pdf: 1900164 bytes, checksum: 6eaf7b4b0a69efe8a63aa60cdc0dff8b (MD5)
Em quarenta dentes incisivos superiores permanentes, divididos em quatro grupos, foram executadas fraturas iniciais, as colagens de seus fragmentos e fraturas finais, de forma padronizada. Cada grupo foi restaurado, respectivamente, com resina composta quimicamente polimerizável (Grupo 1), resina composta fotopolimerizável (Grupo 2), resina composta quimicamente polimerizável conjugada à resina composta fotopolimerizável sobre bisel (Grupo 3) e cimento ionomérico fotopolimerizável conjugada à resina composta fotopolimerizável sobre bisel (Grupo 4). Após a análise dos resultados das forças necessárias à obtenção das fraturas iniciais e após as colagens, foi encontrado, para o Grupo 1, o valor médio de 19,94%, correspondendo ao restante de resistência do seu total. Para o Grupo 2, o valor médio de resistência final foi de 28,61%, bem como os valores de 60,53% e 34,43%, para os Grupos 3 e 4. Tais resultados demonstraram não serem as colagens de fragmento técnicas reprodutoras fiéis da resistência inicial de um dente, bem como a forma usada para a restauração dos dentes do Grupo 3, constatada como a mais eficiente.

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde.
Made available in DSpace on 2012-10-18T16:52:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-09T02:12:16Z : No. of bitstreams: 1 141870.pdf: 3913408 bytes, checksum: df1af5f539a2236be15b6841d40863b0 (MD5)

Orientador: Luiz Valdrighi
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-07-24T08:45:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bueno_CarlosEduardodaSilveira_D.pdf: 3436123 bytes, checksum: 4781a27ed92cf4aecd825e337b47d4dc (MD5) Previous issue date: 1998
Resumo: O objetivo deste trabalho foi a avaliação in vitro da influência de três cimentos obturadores na eficácia de três técnicas de desobturação de canais sadiculares, bem como da extrusão de material obturador através do ápice radicular e do tempo despendido durante a aplicação destas técnicas. Empregaram-se 90 dentes unirradiculares humanos, extraídos, que foram divididos em três grupos de 30 unidades, os quais foram preparados e obturados com guta-percha e os cimentos obturadores a saber: Grupo I - Cimento Endomethasone; Grupo 11 - Cimento Sealer 26 e Grupo 111 ¿ Cimento Ketac-Endo. A seguir, cada um destes três grupos foi subdividido em três subgrupos de 10 dentes, de acordo com a técnica de desobturação empregada: Subgrupo A - Gates-Glidden + Limas + Solvente; Subgrupo B - Gates-Glidden + Ultra-som + Solvente e Subgrupo C - Gates-Glidden + Canal Finder + Solvente. Para cada grupo e subgrupo estudado, foram anotados o tempo efetivamente gasto na desobturação, a quantidade de material extruída através do ápice radicular e a quantidade de material obturador remanescente, permitindo concluir que o subgrupo A (Gates-Glidden + Limas + Solvente) foi o mais eficiente e mais rápido na desobturação independentemente do cimento obturador dos canais radiculares. O grupo de canais obturados com Ketac¬endo apresentou uma quantidade de material obturador remanescente maior que a dos grupos dos outros dois cimentos estudados. Observou-se ainda que a extrusão de material obturador foi estatisticamente não significativa e sem diferenças entre todos os grupos e subgrupos estudados
Abstract: The purpose of this study was to compare the efficiency of 3 techniques (A- Gates-Glidden I hand files; B- Canal Finder; C- Ultrasonic) on removing filling material from root canal system filled with 3 different sealers (Endomethazone, Sealer 26 and Ketac Endo) and also the amount of filling material missed through the root apex during the application of these techniques. Ninety human extracted one root teeth were prepared using a step back technique and obtllrated with laterally condensed gutta-percha connected to one of the 3 sealers mentioned (3 groups of 30 teeth filled with each sealer). Each group of 30 teeth was divided in 3 groups of 10 teeth, and one of the 3 techniques in conjunction with chloroform were used to remove the filling material. During the removing of filling material from root canal, the tooth was fixed in a plastic box that had a filter paper (that was weighted before) under the tooth apex, where the lost material was received, making possible to obtain the loss of filling material in each tooth. Afier the use of the techniques, the teeth were radiographed. The total area of the canal and the area of remaining material were traced and afier quantified using a computerized image analysis system. The ratio of remaining obturation material to root canal periphery was encountered and statistically analyzed (Tuckey's test). Results showed 29,11 % of remaining gutta-percha I sealer in "A" technique, 43,94% in "B" and 48,33% in "C". Teeth filled with Endomethazone showed 33,60% of remaining material, Sealer 26 showed 33,90% and Ket~c Endo 53,45%. In conclusion, the most effective technique was liA", the worst sealer to be removed from root canal system was Ketac Endo and the loss of filling material through the root apex was the same for ali the techniques and sealers tested.
Doutorado
Endodontia
Doutor em Clínica Odontológica

Orientadores : Giselle Maria Marchi Baron, Luiz Andre Freire Pimenta
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-07-27T21:04:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Casanovas_RosanaCosta_M.pdf: 2671139 bytes, checksum: 49a86b76e273f9f804c328d6a384b208 (MD5) Previous issue date: 2001
Resumo: Neste trabalho, estudou-se a influência de quatro diferentes técnicas de inserção da resina composta condensável fotoativada em cavidades de classe 11, no vedamento marginal, através de testes de infiltração de um agente corante. Foram realizadas 120 cavidades em dentes bovinos extraídos, com parede gengival localizada em dentinalcemento, sendo divididas, aleatoriamente, em 4 grupos (n = 30), de acordo com as técnicas restauradoras: Grupo 1- Inserção Única, Grupo 2- Inserção em Incrementos Horizontais, Grupo 3- Inserção em Incrementos Oblíquos e Grupo 4- Inserção Mista. As cavidades foram restauradas empregando-se o sistema adesivo (Prime & Bond 2.1 Abstract: This work evaluated the influence of four different insertion techniques of light-cured condensable composite resin in class II restorations on marginal sealing by the mieroleakage tests of a dye agent. One hundred and twenty cavities were prepared in extracted bovine teeth with gingival wall located in dentine/cementum being randomly divided into four groups (n=30) according to the restorative techniques: group 1 - bulk insertion; group 2 - horizontal increments insertion; group 3 - oblique increments insertion and group 4 - mixed insertion. The eavities were restored with adhesive system (Prime & Bond 2.1 @) and composite resin (Surefil@). After the restoration had been polished, the teeth were submitted to a thermocycle proeess (5:t 22C and 55:t 22C during 1000 cycles) and properly impermeabilized, they were immersed in a dye solution of 2% Methylene Blue pH 7 for 4 hours. Following that proeess, the teeth were cut and evaluated for microleakage in gingival wall and restorative material interface by two examiners using a stereoseope magnifying glass (50x) with regard to previous criterion (0-4 seore). The Kruskal-Wallis test has showed no statistically significant difference in mieroleakage among different techniques in terms of 5% significance. No restorative technique was able to eliminate the mieroleakage in class 11 restorations with condensable composite resin in gingival margin located in dentine/cementum
Mestrado
Dentística
Mestre em Clínica Odontológica

Orientador: Maria Yolanda Makuch
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-11-09T15:39:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Filetto_JulianaNicolau_D.pdf: 899402 bytes, checksum: b505244b4e512938da35a1ca1479c305 (MD5) Previous issue date: 2009
Resumo: Objetivo: Descrever as vivências de homens e mulheres ao estarem iniciando os procedimentos de fertilização in vitro (FIV) e em longo prazo após o fracasso da terapêutica. Metodologia: Para cumprir com os objetivos propostos foram feitos dois estudos qualitativos, ambos realizados no Ambulatório de Reprodução Humana do Departamento de Tocoginecologia da Faculdade de Ciências Médicas (UNICAMP). Para o primeiro estudo foi escolhida uma amostra proposital por variedade de tipos - casais sem filhos, com filhos e que a mulher tinha filhos de um relacionamento anterior - que tinham realizado a FIV sem sucesso quatro a sete anos antes de serem entrevistados. O número de participantes foi definido conforme o critério de saturação da informação. Foram conduzidas entrevistas semi-estruturadas utilizando-se um roteiro temático, as quais foram gravadas e transcritas. Para o segundo estudo foi realizada uma re-análise das entrevistas de casais sem filhos realizadas quatro a seis anos após o fracasso da FIV do estudo acima e de casais sem filhos, que estavam iniciando pela primeira vez ou repetindo os procedimentos da FIV de outro estudo. O número de entrevistas analisadas foi definido conforme o critério de saturação da informação. Resultados: No primeiro estudo, homens e mulheres consideraram a FIV como uma experiência válida, apesar de alguns terem vivenciado dificuldades no relacionamento conjugal após o fracasso, as quais foram sendo superadas em longo prazo. Em relação às etapas do procedimento, alguns participantes se referiram ao desenvolvimento folicular como uma etapa difícil e dolorida e alguns acreditavam que a medicação tinha causado mudanças permanentes no corpo das mulheres. Os homens referiram a etapa da coleta do sêmen como uma experiência desconfortável. Após o fracasso da FIV, a maioria dos casais considerou a possibilidade da adoção, porém poucos adotaram e outros participantes se dedicaram a novos projetos de vida que não fosse o de terem um filho. Casais sem filhos decidiram realizar novas tentativas de FIV em outros serviços devido a necessidade de continuarem tentando. No segundo estudo, ao se contrapor as vivências de homens e mulheres, iniciando os procedimentos e em longo prazo, os participantes falaram que a decisão tinha sido baseada principalmente na certeza de sucesso e algumas mulheres mencionaram a necessidade de serem iguais às "mulheres férteis". Nas entrevistas dos homens, tanto no início do procedimento como em longo prazo, foi observado que a decisão tinha sido mais influenciada pelo desejo das parceiras pela gravidez. Em relação às etapas da FIV, as mulheres que estavam iniciando o procedimento, referiram as injeções de hormônios como preocupante, e em longo prazo, as consideraram doloridas e algumas, semelhante ao resultado do primeiro estudo, também acreditavam que a medicação tinha causado mudanças permanentes em seus corpos. Os homens, em geral, falaram da preocupação com a possível repercussão dos medicamentos na saúde da parceira. Algumas mulheres, tanto iniciando como em longo prazo, tinham a percepção de que a coleta do sêmen não tinha incomodado os parceiros. A mesma percepção foi mencionada pela maioria dos homens iniciando os procedimentos, embora a lembrança que prevaleceu em longo prazo foi a de ter sido uma experiência tensa e constrangedora. Conclusão: Homens e mulheres, devido à esperança pela gravidez, tendem a não se incomodarem com as exigências dos procedimentos, o que não ocorreu após o fracasso da FIV. Em longo prazo, homens e mulheres consideraram os procedimentos da FIV como uma experiência positiva e foram capazes de se dedicarem a outros projetos de vida, os quais foram considerados satisfatórios, exceto para os casais sem filhos.
Abstract: Objective: To describe the life experience of men and women at the beginning and after unsuccessful in vitro fertilization (IVF) procedures. Methods: Two qualitative studies were conducted to achieve the proposed aims, at the Department of Obstetrics and Gynecology, School of Medical Sciences, University of Campinas (UNICAMP). Participants for the first study were chosen using a purposive sampling per variety of types - couples without children, couples who already had children and wished to have another child, and couples in which the women had children from a previous relationship - that had experienced unsuccessful IVF four to seven years before the interviews. The number of interviews carried out was defined according to the criteria of information saturation. Semi-structured interviews were conducted using a thematic script, which were tape-recorded and transcribed. The second study was based on the re-analysis of the interviews of couples without children interviewed four to six years after an unsuccessful IVF from the study above and couples without children interviewed at the beginning of the procedures the first time they were participating or when repeating IVF from a previously conducted study. The number of interviews carried out was defined according to the criteria of information saturation. Results: In the first study, men and women considered IVF a positive experience, even though some couples recalled difficulties in their relationship after unsuccessful IVF, however they felt that their marital relationship had not been permanently affected. Regarding the stages of the procedure, some participants recalled follicular development as a difficult and painful stage in the treatment and some believed that the medication used during that phase had resulted in body changes, in some cases considered permanent. The men referred to semen collection as an uncomfortable experience. The majority of the couples had considered adoption, but only a few couples actually adopted and others participants had focused on new life projects other than having children. Couples who had no children recalled they had pursued treatment in other clinics due to the necessity to keep trying. In the second study, comparing men and women's life experiences at the beginning of the procedures and in the long-term, all participants recalled that their decision to undergo IVF had been based principally on the certainty of success, and some women referred to their need to be like "a fertile women". In men's interviews, at the beginning of procedures and in the long-term, it was observed that the decision to participate in IVF procedures had been mainly based on woman's desire of pregnancy. Regarding the stages of the procedures, women who were beginning the procedures referred the hormone injections as preoccupying and in the long term they remembered as painful stage and some, similar to the results of the first study, believed that had resulted in permanent body changes. Men, in general, referred to worries about the possible repercussion of the medicines used during this stage in their partner's health. Some women in the beginning and in long-term, had the perception that semen collection was not a stressful experience for the partners. A similar perception was mentioned by the majority of men beginning the procedures, although in the long term their recollection was of a stressful and embarrassing experience. Conclusion: Men and women due the hope for the pregnancy tend not to be bothered with the requirements of the procedures, different of what happened after IVF failure. In long-term, men and women, considered IVF procedures as a positive experience and were able to focus on other life projects, which were considered satisfactory, except for the couples without child.
Doutorado
Ciencias Biomedicas
Doutor em Tocoginecologia

Orientador: Luis Alberto Magna
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-11-07T17:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bottcher-Luiz_Fatima_D.pdf: 2915887 bytes, checksum: bd2b1488cc71b0228fa4e739ef95db4d (MD5) Previous issue date: 1996
Doutorado
Genetica
Doutor em Ciências Biológicas

A capsulotomia curvilínea contínua (CCC) é uma das etapas mais importantes da técnica de facoemulsificação. Em cataratas brancas e com reflexo de fundo de olho deficiente ou ausente, a identificação da cápsula anterior do cristalino é dificultada, e é necessária a utilização de substâncias, como os corantes vitais, para permitir a sua diferenciação. Contudo, antes da utilização de substâncias intraoculares, é necessário determinar se elas são seguras para as estruturas do globo ocular, principalmente para as células do endotélio corneano, que podem sofrer lesões irreversíveis. A indocianina verde é uma substância capaz de corar a cápsula do cristalino, tendo seu uso relatado em humanos, mas não existem dados sobre sua utilização em equinos. Objetivou-se determinar o efeito agudo da exposição do endotélio corneano de equinos à indocianina verde 0,5%. Foram estudadas 24 córneas provenientes de 12 equinos divididos em 2 grupos: 12 córneas dos bulbos oculares direitos (grupo controle) e 12 córneas dos bulbos oculares esquerdos (grupo tratamento). As córneas do grupo tratamento foram expostas à indocianina verde durante 1 minuto, e após lavadas com solução salina balanceada. Posteriormente, as córneas foram coradas pela técnica de coloração vital com alizarina vermelha e azul de tripano, visualizadas ao microscópio óptico e fotografadas. As córneas do grupo controle também foram coradas com alizarina vermelha e azul de tripano, visualizadas e fotografadas. Não foram encontradas áreas de perda celular com a coloração pela alizarina vermelha, e nem células com núcleo corado pelo azul de tripano, não havendo diferenças entre grupo controle e grupo tratamento. Baseado nos resultados do presente estudo foi possível concluir que a indocianina verde não induziu dano às células do endotélio da córnea de equinos.
The continuous curvilinear capsulotomy (CCC) is one of the most important steps on the phacoemulsification technique. In white cataract combined with poor or absent red reflex the identification of the anterior capsule is hampered, thus requiring the use of substances such as vital dyes to allow their differentiation. However, before the use of intraocular substances it is necessary to determine whether these substances are safe to the structure of the ocular globe, mainly to the corneal endothelium cells, which may suffer irreversible damage. The indocyanine green is a substance capable of staining the lens capsule with documented use in humans, but there are no data on its use in horses. This study aimed to determine the acute effect of exposure of equine corneal endothelium to indocyanine green 0.5%. The sample consisted of 24 corneas from 12 horses divided into 2 groups: 12 corneas of right eye bulbs (control group) and 12 corneas of left eye bulbs (treatment group). The corneas belonging to the treatment group were exposed to the indocyanine green for 1 minute, and then washed with balanced saline solution. Subsequently, the corneas were stained by the technique of vital staining with alizarin red and trypan blue, and so visualized and photographed under an optical microscope. The corneas of the control group were also stained with alizarin red and trypan blue, visualized and photographed. No areas of cell loss were found with alizarin red staining, and no cell nuclei stained with trypan blue was visualized, with no difference between control group and treatment group. Based on the results of this study, we concluded that the indocyanine green did not induce damage to equine corneal endothelium.

Orientadores: Luiz Andre Freire Pimenta, Renato Herman Sundfeld
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-07-28T13:03:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Briso_AndreLuizFraga_D.pdf: 13831318 bytes, checksum: 7d7c099568e1f19dd69b93aaf26115c6 (MD5) Previous issue date: 2001
Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a microinfiltração e a microdureza Knoop em restaurações classe II, quando empregadas 5 combinações de sistemas restauradores (Bond-1® Prime/Adesivo + ALERT; Bond -1® Prime/Adesivo + FLOW-IT + ALERT; Etch & Prime® 3.0 + DEFINITE; Prime & Bond NT + SUREFIL; e Solid Bond P + Solid Bond S + CHARlSMA) e 2 técnicas de inserção (incrementos horizontais e de incremento único). Para tanto, 230 cavidades tipo "slot" vertical confeccionadas nas faces mesial e distal com margens em dentina foram divididas aleatoriamente em 10 grupos, segundo o sistema restaurador e a técnica empregada. Após a execução das restaurações e do polimento, os dentes foram sujeitos a 2000 ciclos térmicos (5 ± 2°C e 55 ± 2°C). Em seguida, foram cobertos com esmalte para unha, com exceção das margens cervicais e do milímetro que as circunscreviam. Logo após, os dentes foram imersos em solução de azul de metileno a 2% por 4 horas, sendo, em seguida, seccionados e avaliados conforme o grau e o padrão de penetração da solução evidenciadora. Os cortes obtidos foram utilizados para análise da microdureza em diferentes profundidades. Para a avaliação da microinfiltração empregou se o teste de Kruskal-W allis, enquanto que para os valores do padrão de penetração foi usado o teste Exato de Fisher. A análise da microdureza foi submetida aos testes ANOV A e de Tukey. Observou-se que: nenhuma técnica ou material restaurador foi capaz de impedir a ocorrência de infiltração marginal em restaurações classe II, com margens em dentina; a variação das técnicas restauradoras não afetou o desempenho da resina de baixa viscosidade, FLOW-IT, associada ao material ALERT no controle da microinfiltração; todos materiais analisados se comportaram de forma semelhante no controle da infiltração marginal, quando se empregou a técnica de incremento único; a resina composta SUREFIL controlou de forma mais efetiva a ocorrência de infiltração marginal quando a técnica incremental foi empregada; a penetração de corante em tecido dentinário não foi influenciada pela técnica restauradora; o material ALERT não foi capaz de ser polimerizado de forma uniforme em incrementos superiores a 2mm, com 120 segundos de exposição à luz halógena
Abstract: The objective of this study was to evaluate the microleakage and the Knoop microhardness in class II restorations when using 5 combinations of restorative systems (Bond - 1® Prime/Adesive + ALERT; Bond - 1® Prime/Adesive + FLOW-IT + ALERT; Etch & Prime® 3.0 + DEFINITE; Prime & Bond NT + SUREFIL; and Solid Bond P + Solid Bond S + CHARISMA) and 2 restorative techniques (horizontal increments and bulk insertion). The 230 cavities with dentine margins were randomly divided into 10 groups according to the restorative systems and the technique used. After the restorative
Doutorado
Dentística
Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Luis Augusto Passeri
Tese doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-09T20:14:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brasileiro_BernardoFerreira_D.pdf: 9990302 bytes, checksum: ddce5ea3896243c2b52242b595e7946d (MD5) Previous issue date: 2007
Resumo: Um melhor entendimento biomecânico da fixação interna rígida (FIR) na osteotomia sagital dos ramos mandibulares (OSRM) pode ser baseado em pesquisas com o intuito de investigar sua função in vitro antes da aplicação clínica. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar comparativamente a resistência de três diferentes técnicas de FIR em réplicas de hemimandíbulas humanas de poliuretano simulando a OSRM para movimentos de 5 mm em avanço e recuo. As técnicas de FIR incluíram uma miniplaca ponte com 4 furos e 4 parafusos monocorticais (grupo miniplaca), uma miniplaca com 4 furos e 4 parafusos monocorticais mais um parafuso bicortical posicional (grupo híbrido) e 3 parafusos bicortical posicionais em configuração em ¿L¿ invertido (grupo ¿L¿ invertido). Os parafusos e as miniplacas utilizados eram de titânio e pertencentes ao sistema de 2,0 mm. Estes foram avaliados quanto à padronização dimensional por meio do coeficiente de variação, que evidenciou alta semelhança macroscópica. As hemimandíbulas foram submetidas a testes de carregamento linear vertical e lateral por uma unidade de testes mecânicos Instron 4411 para registro da carga de pico aos deslocamentos de 1 mm, 3 mm, 5 mm e 10 mm. Médias e desvio padrão foram avaliados aplicando-se a Análise de Variância e o teste de Tukey em nível de significância de 5%. O grupo miniplaca apresentou menores valores de carga de pico ao deslocamento (p<0,01) quando comparada com as outras técnicas de fixação considerando-se igual tipo de movimento e direção de carga. O grupo ¿L¿ invertido foi ainda superior em resistência (p<0,01) ao grupo híbrido em movimento de avanço e com aplicação de carga verticalmente. Concluiu-se que a utilização da técnica de FIR para a OSRM baseada em 3 parafusos bicorticais em ¿L¿ invertido foi a mais estável, e que a colocação de um parafuso bicortical pode otimizar significativamente a resistência da fixação com miniplacas e parafusos monocorticais
Abstract: A better understanding of the biomechanics of sagittal split ramus osteotomy (SSRO) rigid internal fixation (RIF) can be based on research aiming to evaluate its function in vitro before clinical application. Thus, the goal of this investigation was to evaluate comparatively the resistance of three different RIF techniques applied to polyurethane synthetic hemi-mandible replicas simulating the SSRO for 5 mm advancement and setback. RIF techniques included a 4-hole miniplate and 4 monocortical screws (miniplate group), a 4-hole plate and 4 monocortical screws with one additional bicortical positional screw (hybrid group), and 3 bicortical positional screws in a traditional inverted-L pattern (inverted-L group). Screws and miniplates were made of titanium and from 2.0 mm system. These were analyzed according to dimensional standardization by a coefficient of variation, which revealed high macroscopic similarity. The hemi-mandibles were submitted lateral and vertical loading tests in an Instron 4411 mechanical testing unit for recording of peak loading at 1 mm, 3 mm, 5 mm and 10 mm of displacement. Means and standard deviation were analyzed using Analysis of Variance and Tukey test with a 5% level of significance. Miniplate group showed lower load peak scores (p<.01) when compared to the others fixation techniques regarding equal type of movement and force direction. Inverted-L group demonstrated higher resistance (p<.01) than hybrid group during advancement and with application of vertical load. It was concluded the RIF technique for SSRO based on 3 bicortical screws in the inverted-L pattern was the most stable, and the installation of a bicortical screw may significantly optimize the resistance of the miniplate and monocortical screws fixation
Doutorado
Cirurgia e Traumatologia Buco-Maxilo-Faciais
Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Ladaslav Sodek
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-15T12:08:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mosquim_PauloRoberto_D.pdf: 5927069 bytes, checksum: 7b4e8b9f9157e2ebc2dc30742998fffb (MD5) Previous issue date: 1989
Resumo: No presente trabalho desenvolveu-se um sistema de ¿explant¿ que possibilitou verificar o transporte e o metabolismo de substâncias nitrogenadas, em caules, vagens, tegumentos das sementes e cotilédones das sementes de soja (Glycine Max [L] Merril) cv. Santa Rosa. O ¿explant¿ utilizado continha apenas uma vagem completatmente expandida com duas sementes (pesando em torno de 200 mg) um caule com cerca de 6 cm de comprimento e um pedaço de pecíolo remanescente. A base do caule era então mergulhada em frasco contendo um meio de cultura definido, pH 5.0, mantido a 2ºC, em banho de gelo. As vagens permaneceram a uma temperatura de 25ºC, sob luz contínua em uma câmara de germinação. Nos testes para verificar as melhores condições do meio de cultivo que assegurassem melhores crescimentos das sementes verificou-se que: Não houve necessidade da adição de cofatores ou vitaminas. A melhor composição de macronutrientes do meio foi a de CHANDLER et al (1983). As melhores concentrações de sacarose estão entre 33,3 e 66,6 mg/ml do meio e a de glutamina foi de 6,26 mg/ml. Os caules apresentaram pouca reserva de carboidratos, mas continham reservas de substâncias nitrogenadas. Não houve necessidade da substituição dos meios de cultivo durante o período de análise. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital
Abstract: Not informed.
Doutorado
Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Luis Alexandre Maffei Sartini Paulillo
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-13T02:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bueno_VanessaCastroPestanadaSilveira_D.pdf: 3504173 bytes, checksum: 488f4a8e60e6898ff6100d2f0988de61 (MD5) Previous issue date: 2009
Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a influência de diferentes proporções de cimentos resinosos e o uso de co-iniciadores químicos na resistência ao cisalhamento por extrusão, push - out, na interface de união dentina intra-radicular e pinos de fibra de vidro e ainda expressar o grau de infiltração do nitrato de prata na camada híbrida. Foram utilizadas 54 raízes bovinas, divididas em seis grupos experimentais. As técnicas de cimentação avaliadas foram: Grupo I - Clearfil SE Bond/ Panavia F na proporção base/ catalisador 1:1 (CP1), Grupo II - Clearfil SE Bond/ Panavia F 1:3 (CP3), Grupo III - Clearfil SE Bond/ ED primer/ Panavia F 1:1 (CPE), Grupo IV - Scotchbond Multi-Purpose/ RelyX ARC 1:1 (SR1), Grupo V - Scotchbond Multi-Purpose/ RelyX ARC 1:3 (SR3) e Grupo VI - Scotchbond Multi-Purpose/ Catalisador/ RelyX ARC 1:1 (SRC). O teste de Tukey para comparação múltipla (p<0,05) para o ensaio de resistência ao cisalhamento por extrusão de sistemas para a fixação dos pinos de fibra de vidro demonstrou que a maior média foi apresentada pelo sistema SRC (130,71Kgf) e a menor média foi apresentada pelo sistema CPE (16,57Kgf). Os resultados da nanoinfiltração, através da microscopia eletrônica de varredura (MEV), mostraram infiltração de prata na camada híbrida em todos os terços de todos os grupos estudados. Portanto, pôde-se concluir que o uso de co-iniciadores químicos favoreceu a técnica de cimentação com o adesivo Scotchbond Multi-Purpose e cimento RelyX ARC. Para o Clearfil SE Bond e Panavia F a alteração da proporção base/catalisador ou o uso de co-iniciadores químicos não aumentou os valores de resistência ao cisalhamento por extrusão
Abstract: The purpose of this in vitro study was to evaluate the push-out shearing resistance in the union interface of root dentin and fiber posts bonded with resin-based luting cement in different ratios between base and catalyst paste, the use of chemical catalysts and also demonstrate through nanoleakage, observed with SEM, the degree of silver nitrate infiltration in the hybrid layer. Fifty four bovine roots were divided into six experimental groups. For the fiber posts cementation, the following resin-based luting cements were used: Group I - Clearfil SE Bond+ Panavia F with 1:1 base/catalyst ratio (CP1), Group II - Clearfil SE Bond+ Panavia F with 1:3 base/catalyst ratio (CP3), Group III - Clearfil SE Bond + EDprimer + Panavia F with 1:1 base/catalyst ratio (CPE), Group IV - Scotchbond Multi-Purpose + Rely X with 1:1 base/catalyst ratio (SR1), Group V - Scotchbond Multi-Purpose + Rely X with 1:3 base/catalyst ratio (SR3) and Group VI - Scotchbond Multi-Purpose + activator + Rely X with 1:1 base/catalyst ratio (SRC). The push out test was performed using the universal essay machine EMIC D 500, capacity of 100KN in a speed up to the fracture calculated in MPa. The results were submitted to the Tukey test (p<0.05). The highest average was presented by CP1 system (130,71Kgf) and the lowest average was presented by CPE system (16,57Kgf). Moreover, the nanoleakage was evaluated with SEM and it revealed in the bond region the presence of silver in all portions of roots for all groups, however, for both Clearfil SE Bond and Scotchbond Multi-Purpose systems, in which the base/catalyst ratio was increased, it was observed some areas with a more effective adhesion. In accordance with the evaluated factors and considering the obtained results, it can be concluded that the use of chemical catalysts benefited the Scotchbond Multi-Purpose system; however, for the Clearfil SE Bond system, independent of the base/catalyst ratio used, no differences were noticed in the results
Doutorado
Dentística
Doutor em Clínica Odontológica

A técnica de inseminação artificial (IA) por laparoscopia em ovinos foi utilizada pela primeira vez em 1982, o que tornou viável a utilização econômica do sêmen congelado nesta espécie. Os experimentos foram realizados com o objetivo de determinar as taxas de prenhez de ovelhas inseminadas por laparoscopia, utilizando 50 x 106 espermatozóides descongelados e capacitados in vitro. No experimento 1, foi utilizado sêmen de um reprodutor e 67 ovelhas com estros sincronizados, divididas aleatoriamente entre os grupos: sêmen congelado (SC1) e sêmen congelado capacitado in vitro (SCC1). As ovelhas foram submetidas à IA, com 50x106 espermatozóides, 56 e 60 horas, respectivamente, após a retirada das esponjas impregnadas com progesterona. No grupo SCC1, a taxa de prenhez foi de 48,39% (15/31) significativamente superior a do grupo SC1 de 25% (9/36). No experimento 2, utilizou-se um reprodutor e 100 ovelhas com os estros sincronizados, distribuídas aleatoriamente entre três grupos: sêmen fresco (SF2), SC2 e SCC2. Nos grupos SF2 e SC2 as fêmeas foram inseminadas com 100x106 espermatozóides e 56 horas após a retirada da progesterona. No grupo das fêmeas inseminadas com espermatozóides capacitados in vitro, utilizou-se 50x106 espermatozóides e um intervalo de 60 horas após retirada da progesterona. As taxas de prenhez diagnosticadas nos diferentes grupos experimentais foram: SF2 60,9% (25/41), SC2 56,70% (17/30) e SCC2 44,90% (13/29), não existindo diferença estatística entre os grupos. Os experimentos realizados mostraram a viabilidade doemprego, na espécie ovina, da IA por laparoscopia utilizando 50x106 espermatozóides descongelados e capacitados in vitro.
The ovine artificial insemination (AI) by laparoscopy was described the first time in 1982, since this time frozen semen became a tool for use under field conditions. Today one research goal is to achieve high preganancies rates after AI using a reduced number of frozen/thawed spermatozoa per dosis. The experiments were carried out with the objective to determine the pregnancy rate of ewes inseminated by laparoscopy, using 50 x 106 thawed and in vitro capacited spermatozoa. In the experiment 1 was used semen of one fertily ram and 67 ewes with synchronized estrus. The females were randomly distributed among two experimental groups: inseminated with frozen semen (SC1) or frozen and in vitro capacitated semen (SCC1). The ewes were submitted to the AI with 50x106 spermatozoa, 56 (SC1) or 60 (SCC1) hours, respectively, after retreat of the intra vaginal device impregnated with progesterona. In the group SCC1 the pregnancy rate was 48,39% (15/31) significantly different from the 25% (9/36) observed in the group SC1. In the experiment 2 was used one fertily ram and 100 ewes with synchronized estrus, distributed randomly among three groups: inseminated with fresh semen (SF2), 100 x 106 spermatozoa, SC2, 100 x 106 frozen spermatozoa and SCC2, 50 x 106 frozen and in vitro capacited spermatozoa. The moment of the laparoscopic AI was the same as used in the experiment 1: 56 (SF2 and SC2) or 60 (SCC2) hours, respectively, after retreat of the intra vaginal device impregnated with progesterona. The observed pregnancy rates were similar among the experimental groups: SF2 60,9% (25/41), SC2 56,70% (17/30) and SCC2 44,90% (13/29). Our experiments showed the ability of frozen/thawed and in vitro capacitated ovine spermatozoa to in vivo fertilize and promote the development of pregancies. In conclusion, itis possible to use 50x106 frozen/thawed and in vitro capacited spermatozoa for ovine laparoscopic AI.

Orientador : Luiz Valdrighi
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-01T16:59:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yoshinari_GersonHiroshi_D.pdf: 2113509 bytes, checksum: 45c4480764ef1a3b55b9731c245bd355 (MD5) Previous issue date: 2001
Resumo: O presente trabalho teve por objetivo avaliar in vitro a capacidade de selamento de três diferentes técnicas de obturação de canal radicular com e sem barreira de proteção. Foram utilizados 144 canais de raízes mesiais de molares inferiores humanos, extraídos com raízes completamente formadas, armazenados em solução de formol a 10%. Os dentes foram separados aleatoriamente em três grupos experimentais contendo 48 canais obturados com três diferentes técnicas de obturação. Os grupos foram divididos em dois subgrupos A (com proteção) e B (sem proteção) com 24 canais cada. O preparo químico-mecânico dos canais radiculares foi realizado pela técnica mecanizada rotatória Crown-Down de BUCHANAN modificada, com limas GT (Greater Taper) e a matriz apical preparadas com limas manuais tipo K "step-back". Para as obturações foram utilizadas as técnicas da Condensação Lateral de NGUYEN, Compressão Hidráulica de DE DEUS e a Híbrida de TAGGER, tendo sido empregado, para todos os grupos o cimento AH plus. Os dentes foram impermeabilizados com esmalte para unha, imersos em tinta Nanquim por um período de 7 dias e submetidos ao vácuo por 30 minutos. Para a observação dos níveis de infiltração, as amostras foram desmineralizadas, desidratadas, diafanizadas e examinadas em lupa esteroscópio. Os resultados foram submetidos à análise de variância e teste Tukey para comparações entre as médias. Observou-se que não houve diferença estatística significante entre as técnicas de obturação, e evidenciou-se que os procedimentos complementares aplicados sobre o topo da obturação, assoalho e paredes laterais da câmara pulpar contribuiu significativamente para a prevenção da microinfiltração coronária
Abstract: The purpose of this in vitro study was to compare the ability of three different root canal filling techniques to prevent coronal microleakage. Seventy two extracted human mandibular posterior teeth (144 root canais) were prepared, to a size 35 (MAF). The Crown-Down and Step-Back techniques were associated and GT rotary files were used. Three groups of 48 root canais each and divided in two subgroups with 24 root canais each were randomly placed. The canais were filled with gutta-percha points and AH plus sealer using by Hybrid Technique, Hydraulic Compression and Lateral Condensation techniques. After the sealer had set, the whole roots surfaces were coated with two layers nail vanish. The specimens were placed in 60mm Hg vacuum for thirty minutes and then immersed in India ink for five days. These teeth were decalcified, dehydrated and cleared to allow direct measurement of linear dye penetration under stereomicroscope. The analysis of variance and Tukey test were used and no difference statistically significant was related to leakage among the groups
Doutorado
Endodontia
Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-04T04:19:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Berber_VanessaBellocchio_M.pdf: 2399742 bytes, checksum: 5b61f74adaec8d2617407274d650019d (MD5) Previous issue date: 2005
Resumo: Uma infecção pulpar pode resultar na colonização microbiana de todo sistema de canais radiculares incluindo os túbulos dentinários. Estes microrganismos e seus produtos metabólicos tóxicos são responsáveis pelo desenvolvimento e persistência de periodontite apical de origem endodôntica. Este estudo teve como objetivo testar in vitro o uso de substâncias químicas auxiliares do preparo mecânico (clorexidina (CLX) gel e líquida 2%, hipoclorito de sódio (NaOCl) 5,25%, 2,5% e 0,5% e soro fisiológico) e técnicas de instrumentação (Híbrida; Cérvico-Apical (FOP-UNICAMP); instrumentação rotatória com HERO 642) na redução de Enterococcus faecalis no canal radicular e nos túbulos dentinários. Para tanto, 270 raízes de pré-molares inferiores foram autoclavadas e contaminadas por 21 dias com Enterococcus faecalis. Em seguida, foram divididas em 18 grupos nos quais as técnicas de instrumentação foram testadas variando o uso das substâncias químicas auxiliares. Amostras bacteriológicas do canal radicular foram coletadas antes e imediatamente após o preparo químico-mecânico, as quais foram cultivadas a fim de se determinar as unidades formadoras de colônia (UFC). Após a instrumentação, as raízes foram seccionadas em 3 blocos: apical, médio e cervical. Amostras de dentina foram removidas seqüencialmente com brocas tronco-cônicas. As raspas obtidas foram coletadas em tubos com BHI e plaqueadas em BHI ágar-sangue. As placas foram incubadas por 48 horas para posterior contagem das UFC. Na luz do canal radicular, todas as substâncias, inclusive o soro fisiológico quando associados à instrumentação mecânica, promoveram uma redução de quase 100% nas coletas microbiológicas imediatamente após o preparo químico-mecânico. Nas coletas resultantes das raspas de dentina, em todos os terços, técnicas e profundidades o NaOCl 5,25% e a CLX gel 2% obtiveram os melhores resultados na redução bacteriana dos túbulos dentinários seguidos do NaOCl 2,5%, CLX líquida 2% e NaOCl 0,5%. Concluiu-se que, o NaOCl 5,25% seguido pela CLX gel 2% juntamente com as técnicas Cérvico-Apical da FOP-UNICAMP e HERO, foram mais efetivos na eliminação do E.faecalis dos túbulos dentinários e do canal radicular
Abstract: An infection of the pulp can result in microbial colonization of the entire root canal system, together with the dentinal tubules adjacent to the canal. These microorganisms and their toxic metabolic products are responsible for the development and persistence of apical periodontitis of endodontal origin. The aim of this study was to evaluate in vitro the efficacy of 6 chemical agents used during chemo-mechanical preparation (0.5%, 2.5%, 5.25% sodium hypochlorite; 2% chlorhexidine liquid and gel; sterile saline ¿negative control) and 3 instrumentation techniques (Hybrid, Crown-Down by FOP-UNICAMP; HERO 642 system) against Enterococcus faecalis within root canals and dentinal tubules.Two hundred and seventy freshly extracted human mandibular premolars were infected in vitro for 21 days with E.faecalis. The specimens were divided into 18 groups, according to the auxiliary chemical substances and instrumentation techniques used. Canals were sampled before and immediately after preparation. After serial dilution, samples were plated onto BHI agar, and the colony forming units (CFU) that were grown were counted. Then, the teeth were sectioned in thirds, and dentine chips were removed from the canals with sequential sterile conic burs at low speed. The samples obtained with each bur were immediately collected in separate test tubes containing BHI broth. The tubes were incubated at 37°C and plated onto BHI agar. The CFU were counted and analyzed. In the canal samples, all substances including sterile saline, promoted almost 100% of CFU reduction immediately after biomechanical procedures. In samples of dentinal chips, in all instrumentation techniques, in all thirds, in all dentinal depths tested, 5.25% NaOCl and 2% chlorhexidine gel obtained the best results, followed by 2.5% NaOCl, 2% chlorhexidine liquid and 0.5% NaOCl. It can be concluded that 5.25% NaOCl followed by 2% chlorhexidine gel together with Crown-Down by FOP-UNICAMP or HERO 642 system seem to be more effective in eliminating E.faecalis in the canal and dentinal tubules than the other ones tested in this study
Mestrado
Endodontia
Mestre em Clínica Odontológica

Orientador: Marcio de Moraes
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-04T05:16:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Asprino_Luciana_D.pdf: 2820978 bytes, checksum: 12a98cf496579afbd3ea8036f938836c (MD5) Previous issue date: 2005
Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar comparativamente a resistência de três técnicas de fixação interna rígida com uso de mini placas em fratura de côndilo mandibular. Foram obtidas 80 réplicas de hemimandíbulas humanas em resina de poliuretano, sendo 20 do grupo controle. As 60 hemimandíbulas restantes foram submetidas a seccionamento simulando fratura subcondilar e em seguida fixadas com três técnicas da aplicação de placas e parafusos do sistema 2,Omm, que deram origem a seis grupos experimentais, cada um com 10 hemimandíbulas. As técnicas de fixação foram: uma placa de quatro furos com quatro parafusos de 6mm; uma placa de quatro furos com quatro parafusos de 8mm; e duas placas de quatro furos com quatro parafusos de 6mm cada. Cada sistema foi submetido ao teste de carregamento com aplicação de carga no sentido médiolateral e antero-posterior em máquina de ensaio universal Instron 4411. Foram mensurados valores de carga e deslocamento de pico. Médias e desvio padrão foram avaliados aplicando-se Análise de Variância (P<.05), verificada a significância estatística, aplicou-se o teste de Tukey com nível de significância de 5%. Tanto para o valor de carga como de deslocamento de pico, as hemimandíbulas fixadas com duas placas tiveram melhor comportamento, seguidas de uma placa com quatro parafusos de 8mm e uma placa com quatro parafusos de 6mm. Os sistemas de fixação aplicados foram mais resistentes ao carregamento no sentido antero-posterior e a aplicação de parafusos de 8mm aumentou a resistência da fixação comparado à aplicação de parafusos de 6 mm somente no teste antero-posterior. Pode-se concluir, dentro das condições testadas, que a utilização do sistema de fixação com a utilização de duas placas traz maior resistência à fixação aplicada às fraturas condilares. E, pode-se sugerir, que o uso de parafusos mais longos aumentaria a resistência da fixação aplicada à fratura de côndilo mandibular
Abstract: The aim of this study was to comparatively evaluate the resistance of three plating rigid internal fixation techniques for mandibular condylar process fractures. Eighty synthetic hemi-mandible replicas made in polyurethane were used to evaluate a control, and three mandibular condyle plating techniques using 2.0mm system plates and screws. The plating techniques were fixation with a four-hole plate and four 6-mm screws, fixation with a four-hole plate and four 8-mm screws and fixation with two four-hole plates with four 6-mm screws each. Each one was subjected to linear loading in medial to lateral and anterior to posterior directions by an Instron 4411 servo hydraulic mechanical testing unit. Load peak value and peak displacement were measured. Means and standard derivations were derived and compared for statistical significance using an analyses variance (P<.05) and compared by Tukey test. Statistically significant differences were noted between fixation groups for the different mechanical measures evaluated under the different directions of linear loading. The two-plate fixation system presented better behavior, followed by one plate with four 8-mm screws and one plate with four 6-mm screws. The employed fixation systems were more resistant to antero-posterior load and the use of 8-mm screws improved the resistance of the fixation when compared to 6-mm screws only in the antero-posterior test. Under the conditions tested the two-plate fixation system provided the most favorable mechanical behavior. We can suggest that lengthy screws can increase the stability at fixation of mandibular condylar process fractures
Doutorado
Cirurgia e Traumatologia Buco-Maxilo-Faciais
Doutor em Clínica Odontológica

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias da Saude
Made available in DSpace on 2012-10-17T10:05:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T23:00:38Z : No. of bitstreams: 1 148731.pdf: 5791940 bytes, checksum: 7169ca9b1fbfb358e6d8c6ef9cd02970 (MD5)
Este estudo avaliou in vitro o selamento, no sentido cérvico-apical, de canais radiculares obturados pela técnica de condensação lateral de cones de guta-percha, sistema Ultrafil e obturadores Thermafil. O selamento foi testado por meio de suspensão de Staphylococcus aureus e saliva artificial. Houve passagem do microrganismo ao longo dos canais radiculares, em todas as obturações, independente da técnica utilizada. Os resultados revelaram um percentual de 85,71%, 100% e 68,42% para a técnica condensação lateral, sistema Ultrafil e obturadores Thermafil, respectivamente. Abstract : This study has evaluated in vitro the sealing in the cervical-apical direction of filled root canals by the lateral condensation method of gutta-percha points, the Ultrafil system, and the Thermafil "obturators". With that end, 68 teeth had their crowns sectioned and were prepared by the step back technique. Next, were gathered 5 experimental groups, 2 of these with 4 elements each, (positive and negative control group) and the remaining 3 made up by 20 teeth each, filled by the lateral condensation method of gutta-percha points, the Ultrafil system, and the Thermafil "obturators". The root canals of the teeth belonging to the positive control group remained empty, whereas those that were part of the negative control one were filled by the lateral condensation technique. In all of the specimens, the sealer applied was the canal Fill. Upon conclusion of the filling stage, the cavities of access, except for those belonging to the teeth pertaining to the positive control group, were sealed with Lumicon and were exposed to 37° C, in 100 % humidity, for 48 hours. After this period, the sealing was removed, except in the teeth belong to the negative control group. The root surface of all the teeth, except for the final millimeter, was made impermeable. The sealing was tested through the Staphylococcus aureus suspension and artificial saliva, which, as they were placed in the internal part of the device set up for the accomplishment of the experiment, got in touch with the coronary portion of the filling. The entrance of the microorganism in the apical region was detected by the color alteration of the selective means, in which the apices were emerged and that in the presence of Staphylococcus aureus, changed from pink into yellow. All of the devices (test bodies), were incubated at 37° and observed daily during the 90 days with the purpose of detecting the presence of microorganism. Infiltration occurred in all of the elements of the positive control group. However, in the specimens that made up the negative control group, the central color remained unaltered during the entire experiment period. There was passage of microorganism along the root canal, in all of the fillings, regardless of the technique employed. The results revealed a percentage of infiltration of 85,71%, 100%, and 68,42% for the lateral condensation technique, the Ultrafil system, and the Thermafil "obturators", respectively.

Orientador: Maria Beatriz Borges de Araujo Magnani
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-07T01:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kuramae_Mayury_D.pdf: 15126221 bytes, checksum: 69a444f9af9fdfb714e7271ab940c8fb (MD5) Previous issue date: 2006
Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar in vitro a força de atrito gerada na mecânica de distalização do canino superior pelo uso do gancho ¿J¿ na Técnica da Força Direcional Seqüencial de Tweed-Merrifield, de acordo com as variáveis: tipo e marcas dos braquetes; espessura e marcas dos fios; técnica de amarração e análise das superfícies dos fios e braquetes em microscopia eletrônica de varredura, microscopia de força atômica, além de rugosímetro. Foram utilizados 192 braquetes Edgewise de aço inoxidável de dois tipos e duas marcas comerciais e duas marcas de fios ortodônticos (Morelli, Sorocaba, São Paulo, Brasil e GAC, Central Islip, Nova Iorque, EUA) de aço inoxidável em quatro espessuras, amarrados por ligadura metálica e elastomérica em meio seco e à temperatura ambiente. Foi utilizada uma placa de acrílico retangular simulando um segmento de aparelho fixo composto por quatro braquetes duplos. Cada fio a ser testado teve suas extremidades dobradas justas aos braquetes terminais para que não deslizasse na canaleta e foi amarrado aos braquetes com ligadura de aço inoxidável. A placa de acrílico juntamente com o segmento do fio montado foi fixada no mordente da base da máquina de ensaio universal Instron 4411 (Instron Ltd., High Wycombe, Bucks, Reino Unido) de maneira a ficar posicionada em 45° em relação ao solo, o que foi realizado com o auxílio do esquadro, simulando a angulação do aparelho extrabucal gancho ¿J¿ com o plano oclusal, durante a mecânica de distalização do canino superior. O braquete foi puxado a velocidade de 0,5mm/minuto através do segmento do fio por uma distância de 5mm. Os testes foram repetidos três vezes, trocando-se a combinação braquete/fio a ser testada para cada três grupos. Os valores médios foram obtidos e a força de atrito foi calculada. Após o recorte das canaletas dos braquetes e limpeza dos fios e braquetes, esses foram analisados em microscopia eletrônica de varredura e de força atômica. Além disso, sobre a superfície dos fios foi efetuada a leitura da rugosidade de superfície em micrometros. Os dados foram submetidos à Análise de Variância e ao teste de Tukey (5%). Concluiu-se que: os braquetes duplos proporcionaram maior atrito do que os braquetes simples; os braquetes e fios da marca Morelli proporcionaram maior atrito do que os da GAC; quanto maior a espessura dos fios, maior foi o atrito; a técnica de amarração que gerou maior atrito foi com ligadura elástica quando comparada à ligadura de aço inoxidável; a rugosidade do fio diminuiu com o uso em alguns casos e os fios da marca GAC apresentaram qualitativamente lisura de superfície superior ao da marca Morelli
Abstract: This study aimed to evaluate in vitro frictional forces that result from upper cusp distalization due to using the J-Hook, according to the Tweed-Merrifield Sequential Directional Force technique; variables were: bracket type and manufacturer, wire diameter and manufacturer, ligation method and microscopic surface analysis of brackets and wires. One hundred and ninety-two stainless steel Edgewise brackets, of two different types and manufacturers were used, ligated to orthodontic wires of four diameters and two manufacturers (Morelli, Sorocaba, São Paulo, Brazil and GAC, Central Islip, New York, USA) by means of metallic and elastomeric ligatures, at extraoral environment and ambient temperature. A rectangular acrylic plate was manufactured, imitating a fixed appliance section of four double brackets. The ends of each wire were tightly bended to the terminal brackets, in order to eliminate sliding, and were fixed to the brackets by stainless steel ligatures. Each sample, comprising the acrylic plate, as well as the bracket and wire section, was fixed unto a Instron 4411 testing machine (Instron Ltd., High Wycombe, Bucks, United Kingdom), so that each of them was at a 45º inclination, relative to the horizontal plane, thus imitating the extraoral position of the J-hook, relative to the occlusal plane, during upper cusp distalization. The bracket was pulled for 5mm sliding at a speed of 0.5mm/minute. Tests were performed other three times, each for a different bracket/wire combination, over the three groups. The mean values were obtained and frictional forces were calculated. After cutting bracket slots and cleaning wires and brackets, these were analyzed by scanning electron and atomic force microscopy. Also, surface rugosity, in micrometers, was evaluated. Data underwent Variance analysis and Tukey test (5%). Final observations were: twin brackets provide greater frictional forces; brackets and wires manufactured by Morelli showed greater frictional forces than those by GAC; the larger the wire diameter, the greater the frictional forces; elastomeric ligatures resulted in greater friction than stainless steel ligatures; usage made the wires less roughness just in some cases, and GAC manufactured wires presented greater surface smoothness than those by Morelli
Doutorado
Ortodontia
Doutor em Radiologia Odontológica

Orientador: Alexandre Augusto Zaia
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-05T02:37:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_JoseLecio_M.pdf: 638995 bytes, checksum: e590348fae76b970939ad0028be1c3d7 (MD5) Previous issue date: 2005
Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar radiograficamente a obturação de canais laterais artificialmente confeccionados em dentes humanos instrumentados com diferentes substâncias auxiliares e obturados pela técnica da condensação lateral. Dois canais laterais foram confeccionados no terço médio e no terço apical de 40 dentes com uma lima #10. Condensação lateral e o cimento AH Plus foram usados para a obturação dos canais radiculares e radiografias vestíbulo-linguais foram feitas. Diferentes soluções foram usadas para irrigar o canal: Gluconato de Clorexidina gel, Hipoclorito de Sódio, EDTA e Solução salina. Os resultados obtidos não demonstraram diferenças estatísticas. Concluímos que o uso de diferentes substâncias auxiliares no preparo químico-mecânico não influencia a obturação de canais laterais artificialmente confeccionados em dentes humanos quando avaliados radiograficamente
Abstract: The aim of this study was to evaluate if the presence of smear layer interfere the filling of artificial lateral canals. Two lateral canals were produced in the medium and apical third of 40 teeth roots with #10 files. Lateral condensation and AH-Plus sealer were used to fill the root canals and buccolingual radiographs were performed. Different solutions were used to irrigate the canal: Chlorhexidine Gluconate Gel; Sodium Hypochlorite, EDTA and Saline solution. The results did not show any statistical difference. It was concluded that no differences were found among the different substances in used the lateral condensation on the ability to obturated lateral canals artificially in human teeth, in same third or in same groups radiographically
Mestrado
Endodontia
Doutor em Clínica Odontológica

L’amido è la maggiore fonte di energia per i ruminanti e la sua efficienza di utilizzazione nel tratto gastro-intestinale è importante per soddisfare i fabbisogni energetici dell’animale. La degradabilità dell’amido è misurata da diversi metodi (i.e., metodi in vivo, in situ, in vitro con inoculo ruminale e/o metodi enzimatici) e appare essere influenzata dal tipo di cereale, dai metodi di lavorazione e conservazione degli alimenti, dalla dimensione delle particelle, dal tipo di endosperma, etc.). La tesi è consistita di 4 esperimenti: Esperimento 1) la degradabilità dell’amido di diversi alimenti è stata valutata con un metodi condotto in situ ed il metodo in vitro proposto da Tilley&Terry: entrambi sono stati capaci di differenziare gli alimenti in base alla diversa degradabilità dell’amido. Esperimento 2) Un approccio enzimatico è stato studiato per determinare la quantità di amido degradato. Esperimento 3) Il metodo enzimatico ed il metodo Tilley&Terry sono stati comparati e sono risultati essere ben correlati, evidenziando la possibilità di utilizzare l’approccio enzimatico per studiare i fattori che influenzano la degradabilità dell’amido. Dato che pochi lavori scientifici hanno confrontato la degradabilità dell’amido di granelle e pastoni di mais, nell’Esperimento 4) sono stati raccolti campioni di mais conservati con diverse modalità (i.e., farina di mais, pastoni di granella e pastoni integrali di mais) per verificare quali le caratteristiche chimiche che influenzano la degradabilità dell’amido. I fattori che maggiormente condizionano la valutazione enzimatica della degradabilità dell’amido sono il contenuto in prolamine e l’umidità dei campioni. In conclusione, il metodo enzimatico può essere routinariamente utilizzato dai laboratori commerciali per la rapida valutazione della degradabilità dell’amido negli alimenti destinati all’uso animale.
Starch is the main energy source for ruminants and its efficient utilization in gastro-intestinal tract is important to meet animal energy requirements. The starch degradability is determined by several methods (i.e., in vivo, in situ, in vitro ruminal and/or enzymatic methods) and is affected by type of grain, processing and conservation methods, particle size, type of endosperm, etc.. Four experiments were conducted: Experiment 1) starch degradability of different feeds was evaluated with in-situ and in-vitro Tilley&Terry methods: both are able to differentiate starch degradability among feeds. Experiment 2) An in-vitro enzymatic approach was studied to determine the amount of starch degradation. Experiment 3) Enzymatic and Tilley-Terry methods were compared, resulting well correlated and highlighting the possible application of enzymatic method to investigate the factors affecting starch degradability. Because few works compared the starch degradability of dry-ground and high-moisture corns, in Experiment 4) a data set of different conserved corn samples (i.e., dry, high-moisture and high-moisture-ear corns) was produced and chemical factors affecting starch degradability were studied. The most important factors influencing the enzymatic starch degradability were prolamin and moisture. Concluding, the enzymatic method could be used by commercial laboratories as a routine method for rapid determination of feed starch degradability.

L’amido è la maggiore fonte di energia per i ruminanti e la sua efficienza di utilizzazione nel tratto gastro-intestinale è importante per soddisfare i fabbisogni energetici dell’animale. La degradabilità dell’amido è misurata da diversi metodi (i.e., metodi in vivo, in situ, in vitro con inoculo ruminale e/o metodi enzimatici) e appare essere influenzata dal tipo di cereale, dai metodi di lavorazione e conservazione degli alimenti, dalla dimensione delle particelle, dal tipo di endosperma, etc.). La tesi è consistita di 4 esperimenti: Esperimento 1) la degradabilità dell’amido di diversi alimenti è stata valutata con un metodi condotto in situ ed il metodo in vitro proposto da Tilley&Terry: entrambi sono stati capaci di differenziare gli alimenti in base alla diversa degradabilità dell’amido. Esperimento 2) Un approccio enzimatico è stato studiato per determinare la quantità di amido degradato. Esperimento 3) Il metodo enzimatico ed il metodo Tilley&Terry sono stati comparati e sono risultati essere ben correlati, evidenziando la possibilità di utilizzare l’approccio enzimatico per studiare i fattori che influenzano la degradabilità dell’amido. Dato che pochi lavori scientifici hanno confrontato la degradabilità dell’amido di granelle e pastoni di mais, nell’Esperimento 4) sono stati raccolti campioni di mais conservati con diverse modalità (i.e., farina di mais, pastoni di granella e pastoni integrali di mais) per verificare quali le caratteristiche chimiche che influenzano la degradabilità dell’amido. I fattori che maggiormente condizionano la valutazione enzimatica della degradabilità dell’amido sono il contenuto in prolamine e l’umidità dei campioni. In conclusione, il metodo enzimatico può essere routinariamente utilizzato dai laboratori commerciali per la rapida valutazione della degradabilità dell’amido negli alimenti destinati all’uso animale.
Starch is the main energy source for ruminants and its efficient utilization in gastro-intestinal tract is important to meet animal energy requirements. The starch degradability is determined by several methods (i.e., in vivo, in situ, in vitro ruminal and/or enzymatic methods) and is affected by type of grain, processing and conservation methods, particle size, type of endosperm, etc.. Four experiments were conducted: Experiment 1) starch degradability of different feeds was evaluated with in-situ and in-vitro Tilley&Terry methods: both are able to differentiate starch degradability among feeds. Experiment 2) An in-vitro enzymatic approach was studied to determine the amount of starch degradation. Experiment 3) Enzymatic and Tilley-Terry methods were compared, resulting well correlated and highlighting the possible application of enzymatic method to investigate the factors affecting starch degradability. Because few works compared the starch degradability of dry-ground and high-moisture corns, in Experiment 4) a data set of different conserved corn samples (i.e., dry, high-moisture and high-moisture-ear corns) was produced and chemical factors affecting starch degradability were studied. The most important factors influencing the enzymatic starch degradability were prolamin and moisture. Concluding, the enzymatic method could be used by commercial laboratories as a routine method for rapid determination of feed starch degradability.

Orientador : Lucia Pereira da Silva
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-08-02T23:42:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silveira_LeonardodosReis_D.pdf: 5178373 bytes, checksum: b6a1f4dd4f5fda026138aa19f6e9deda (MD5) Previous issue date: 2003
Resumo: Embora níveis moderados de ERas e NO possam exercer importantes funções fisiológicas no tecido muscular, como regulação do fluxo sanguíneo, angiogênese e aumento da força de contração, pouco é conhecido a respeito da formação intracelular de ERas e NO durante a atividade muscular. Por outro lado, uma excessiva produção dessas espécies pode ser prejudicial ao nosso organismo, superando a capacidade do sistema de defesa antioxidante e conduzindo a um desequilibro no estado redox intracelular. Em nosso estudo, examinamos a formação intra e extracelular do NO e H202 em culturas de células, a formação extracelular do H202 em músculo esquelético de rato in vivo e a formação de O2. - em culturas de células e músculos isolados. Para realização deste estudo nós utilizamos as sondas fluorescentes DAF-2-DA (reativa ao NO), DCFH-DA (reativa ao H2O2) e fluoróforo nitróxido (reativa ao ). Nossos resultados in vitro usando culturas de células musculares mostraram que o H2O2 e NO são formados em grandes quantidades no meio intracelular, seguido de um grande efluxo para o espaço extracelular durante atividade muscular intensa (P < 0,05). Por outro lado, durante atividade muscular moderada a produção dessas espécies é mantida em níveis basais sem nenhuma alteração significativa na sua produção (P > 0,05). Os resultados in vitro utilizando cultura de célula e músculos sóleo e EDL isolados mostraram um alto efluxo do do meio intra para o meio extracelular dirante contrações intensas (P < 0,05). O músculo EDL apresentou um maior efluxo do quando comparado que o músculo sóleo (P < 0,05). Os resultados in vivo utilizando o DCFH em combinação com a técnica de microdiálise mostraram uma alta detecção de H2O2 no meio intersticial quando os valores de repouso foram comparados com os valores durante a atividade muscular intensa, sugerindo um alto efluxo dessa espécie do meio intra para o meio extracelular. Nossos resultados mostram que estas sondas fluorescentes utilizadas em nosso estudo são de grande sensibilidade e especificidade na detecção de ERas e NO em tecido muscular submetido a contrações. Em adição, nossos resultados sugerem que a atividade muscular intensa aumenta significativamente a produção de ERas e NO e que essas espécies produzidas intracelularmente são amplamente transportadas para o meio extracelular, processo que protege as células contra os possíveis ataques oxidativos intracelulares gerados por essas espécies
Abstract: Although moderate levels of ROS and NO may exert important physiological functions in muscle tissue, such as regulation of blood flow, angiogenesis and contractile force, little is still known about ROS and NO formation in response to muscle activity. In addition, an excessive level of these species may be harmful as it may overcome the antioxidant capacity, leading to oxidative stress. In this study we examined intra- and extracellular H2O2 and NO formation during contractions in primary rat skeletal musc1e cell culture and isolated muscle. The fluorescent probes DCFH-DA/DCFH (2,7-DicWorofluoresceindiacetate/2,7-DicWorofluorescein) and DAF-2-DA/DAF-2 (4, 5-diamino fluorescein diacetate/4,5-diaminofluorescein) were used to detect H2O2 and NO, respectively. Intense electrical stimulation of musc1e cells increased the intra- and extracellular DCF fluorescence by 171% and 105% respectively, compared with control non-stimulated cells (P < 0.05). Addition of glutathione (GSH) or tiron prior to electrical stimulation inhibited the intracellular DCFH oxidation (P < 0.05), whereas addition of GSH-PX + GSH inhibited the extracellular DCFH oxidation (P < 0.05). Intense electrical stimulation also increased (P < 0.05) the intra- and extracellular DAF-2 fluorescence signal by 56% and 20%, respectively. Addition of W-nitro-L-arginine (L-NA) completely removed the intra- and extracellular DAF-2 fluorescent signal. In isolated musc1es intense estimulation increase superoxide release compared with control non-stimulated (P < 0.05). H202 detection in vivo through DCFH-BSA combined with microdia1ysis technique showed an significant increase on DCFH oxidation during intense contractions. GSH-PX antioxidant completely inhibited DCFH oxidation. The current results show that H2O2, NO and O-z are formed in skeletal musc1e cells during contractions. Our results also suggest that a rapid release of these species may constitute an important defense mechanism against the formation of intracellular 'OH and 'ONOO. Furthermore, our data show that DCFH and DAF-2 are suitable probes for the detection of ROS and NO both intra- and extra-cellulary in skeletal musc1e cell cultures
Doutorado
Fisiologia
Doutor em Biologia Funcional e Molecular

As fissuras palatinas são problemas frequentes na rotina hospitalar em humanos assim como nos animais. Nas últimas décadas, diferentes técnicas cirúrgicas foram empregadas para a correção dos defeitos palatinos, entretanto, não possuem uma eficácia satisfatória em fendas que apresentam um grande defeito ósseo. Através do exposto acima, buscam-se novas alternativas para a reconstrução de fendas palatinas, sendo a engenharia de tecidos uma alternativa de tratamento para tal afecção. Este estudo possui a finalidade de avaliar a utilização da tela de polipropileno acrescida com MSC (células-tronco mesenquimais) e selante de fibrina em um modelo experimental de correção de fenda palatina em suínos, avaliando-se a cicatrização de tecido mucoso e ósseo do palato duro. Com isso, objetiva-se desenvolver uma nova técnica de reconstrução de fendas palatinas baseada na engenharia de tecidos. O estudo foi desenvolvido em duas etapas, uma in vitro e outra in vivo. O projeto in vitro avaliou duas técnicas de cultivo de MSC em diferentes placas de cultura, utilizando dois tipos de telas de polipropileno (macroporosa e microporosa) durante um período de quinze dias, para obter as melhores condições de interação entre a tela e as células. Em todas as formas de cultivo houve aderências das MSC, entretanto, o melhor protocolo foi na tela microporosa no período de sete dias de cultivo e em placas sem metacrilato. Para o estudo in vivo, foram utilizados 12 suínos, distribuídos em quatro grupos de igual número: grupo que utilizou somente tela de polipropileno (GT); tela de polipropileno associada à MSC e selante de fibrina (GTCF); tela de polipropileno e MSC (GTC); tela de polipropileno e selante de fibrina (GTF). Em todos os animais foi realizada a fenda palatina e colocação do enxerto conforme cada grupo. Os suínos foram avaliados quanto à presença de inflamação, cicatrização e deiscência de sutura no implante do palato. Após quinze dias os animais foram eutanasiados e os palatos avaliados por histologia pela coloração de HE e Picrosirius Red. A tela de polipropileno associada com MSC demonstrou ser melhor, entre os demais protocolos estudados neste trabalho, para correção de fenda palatina. Forneceu completa cicatrização óssea e da mucosa oral e nasal em um período de quinze dias, demonstrando ser uma nova técnica segura e eficaz, possuindo um potencial significativo para correção de fenda palatina.
Cleft palates are common problems in the hospital routine in humans and animals. In recent decades, different surgical techniques were employed for the correction of palatal defects, however, do not have a satisfactory efficacy in cracks that have a large bone defect. Through the above, seek new alternatives for the reconstruction of cleft palates, and tissue engineering an alternative treatment for this condition. This study has the purpose of evaluating the use of enhanced polypropylene mesh with MSC (mesenchymal stem cell) and fibrin sealant in an experimental model of cleft palate repair in pigs, assessing the healing of mucosal tissue and bone of the hard palate. Thus, the objective is to develop a new technique for reconstruction of cleft palates based on tissue engineering. The study was conducted in two stages, one in vitro and another in vivo. The project in vitro evaluated two MSC cultivation techniques in different culture plates using two types of polypropylene meshes (macroporous and microporous) over a period of fifteen days, to get the best conditions for interaction between the screen and the cells. In all forms of cultivation were MSC adhesions; however the best protocol was the microporous screen in the seven days of culture plates and without methacrylate. For the in vivo study, we used 12 pigs, divided into four equal groups: group using only polypropylene mesh (GT); polypropylene mesh associated with MSC and fibrin sealant (GTCF); polypropylene mesh associated with MSC (GTC); polypropylene mesh and fibrin sealant (GTF). In all animals was performed cleft palate and graft placement as each group. The pigs were evaluated for the presence of inflammation, scarring and wound dehiscence in the palatal implant. After fifteen days the animals were euthanized and palates assessed by histology staining by HE and Sirius Red. The polypropylene mesh associated with MSC proved to be the best, among others protocols studied in this work, to cleft palate correction. Provided complete bone healing and oral and nasal mucosa in a period of fifteen days, proving to be a new safe and effective technique, having a significant potential for cleft palate correction.

Este estudio comparó la resistencia a la tracción y filtración marginal de coronas provisorias de distintas resinas acrílicas, fijadas con diferentes cementos temporarios. Se utilizaron 108 premolares sin caries, extraídos por razones ortodóncicas donde se tallaron pilares con paredes convergentes hacia oclusal (8°), desgaste de 0,8mm determinado por el diámetro del instrumento utilizado (piedras troncocónicas de extremo redondeado) y chánfer a nivel adamantino, siguiendo la conexión amelo-cementaria. Las muestras fueron distribuidas en dos grupos, 54 muestras para pruebas de Tracción y 54 muestras para pruebas de Filtración. Los materiales utilizados en la confección de las coronas fueron: A- Resina de Acrílico Reticulado con relleno de micropartículas (sistema cerec, Sirona Alemania), B- Resina Duralay (Reliance Dental Mfg.Co./USA.), C- Resina Luxatemp (DMG/Alemania). En el procedimiento de cementado se utilizaron: I- cemento de (HO)Ca, Dycal (Densply, Brasil). II- cemento de Ox de Zn con agregado de silicona y silano, Temposil (Coltene/Suiza), III – cemento de Ox de Zn con agregado de fluoruros, clorhexidina y nitrato de potasio, GC TempAdvantage (American In). En primer lugar se desarrolló el estudio in vitro, de resistencia a la tracción de coronas provisorias realizadas en distintas resinas acrílicas y cementadas con cementos temporales, sobre pilares tallados en premolares. Se realizó un análisis de correlación entre la fuerza (N) requerida para el desalojo de las coronas y la superficie de unión corona-diente (mm2), resultando la misma estadísticamente significativa (correlación de Pearson: 0,423; p=0,0001). Los valores medios obtenidos de resistencia a la tracción fueron: GRUPO A (41,09N); GRUPO B (43,52N); GRUPO C (41,26N) sin diferencias significativas, p=0,484. Con respecto al factor “cemento”, Subgrupo I (56,87N), II (40,75N) y III (28,25N), la diferencia fue estadísticamente significativa, p=0,0001. Luego se efectuó el estudio in vitro de filtración marginal de coronas provisorias realizadas en distintas resinas acrílicas y cementadas con cementos temporales, sobre pilares tallados en premolares y se establecieron valores estadísticos descriptivos, donde considerando solo el factor “categoría corona” (GRUPOS A, B Y C). Se observó que los valores de longitud de filtración estuvieron dentro de rangos similares en los tres grupos, aunque el B registró los valores más altos. Considerando sólo el factor “cemento” (subgrupos I, II y III), el subgrupo II registró los valores más bajos, en tanto que los subgrupos I Y III registraron valores semejantes y algo mayores, con valores de 0,94mm y 1,00mm de media respectivamente. La combinación que registró menor penetración fue: Grupo A con subgrupo II (0,62 mm de media), en tanto que la combinación con valores de longitud o profundidad de filtración más elevados fue: Grupo B con Subgrupo II (1,25mm de media). Conclusión: Se puede establecer que las coronas confeccionadas por el sistema CAD/CAM y cementadas con hidróxido de calcio generan las mejores condiciones referidas a resistencia a la tracción y que las coronas confeccionadas por el sistema CAD/CAM y cementadas con cemento de óxido de Zn con el agregado de fluoruros, clorhexidina y nitrato de potasio, ofrecen mejores propiedades referidas a filtración marginal.