Dissertations / Theses on the topic 'SERPINI1'
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Furtado, Clara Fernanda Barbirato. "Investigação de mutações nos genes LEPRE1, CRTAP, PPIB, FKBP10, SERPINH1 e SERPINF1 causadoras da osteogênese imperfeita recessiva." Universidade Federal do Espírito Santo, 2015. http://repositorio.ufes.br/handle/10/4522.
Full textA Osteogênese Imperfeita (OI) é uma doença clínica e geneticamente heterogênea caracterizada, predominantemente, por fragilidade e deformidade ósseas e por fraturas recorrentes. A maioria dos casos de OI resulta de mutações autossômicas dominantes nos genes COL1A1 e COL1A2, que codificam as cadeias formadoras do colágeno tipo I, principal proteína dos ossos. Nos últimos anos, um número crescente de casos decorrentes de mutações recessivas vem sendo relatado em genes associados à biossíntese do colágeno tipo I ou à formação e a mineralização óssea, como os genes LEPRE1, CRTAP, PPIB, FKBP10, SERPINH1 e SERPINF1. Mutações nesses genes, em geral, levam ao desenvolvimento de fenótipos graves e letais de OI. Neste trabalho, foram analisados os genes LEPRE1, CRTAP, PPIB, FKBP10, SERPINH1 e SERPINF1 de 25 pacientes com OI utilizando-se as técnicas de SSCP e sequenciamento. Ao todo, 29 variações genéticas foram detectadas, entre mutações e polimorfismos. Das onze variações encontradas no gene LEPRE1, estão a já bem descrita c.1080+1G>T e as mutações potencialmente deletérias c.2024G>A / p.Lys363Glu e c.1501C>T / p.Arg501Trp. No gene FKBP10, foi encontrada a também descrita duplicação c.831dupC, além da c.1546G>A / p.Leu516Phe, predita como causadora da doença. Observou-se que os genes FKBP10 e LEPRE1 contêm as principais mutações encontradas neste trabalho e sugere-se que os mesmos sejam preferencialmente analisados em estudos de triagem e identificação de mutações em OI. Até o momento, não existem relatos de mutações nos genes LEPRE1, CRTAP, PPIB, FKBP10, SERPINH1 e SERPINF1 em pacientes brasileiros e este trabalho fornece novas informações sobre os aspectos genéticos da OI recessiva
Osteogenesis Imperfecta (OI) is a clinically and genetically heterogeneous disease predominantly characterized by bone fragility and deformity and recurrent fractures. Most cases of OI result of autosomal dominant mutations in COL1A1 and COL1A2 genes that encode the chains forming type I collagen, the main protein in bones. In the past few years, an increasing number of cases due to recessive mutations has been reported in genes associated with the biosynthesis of type I collagen or to the formation and bone mineralization, such as LEPRE1, CRTAP, PPIB, FKBP10, SERPINH1 and SERPINF1. Mutations in these genes, in general, lead to the development of severe and lethal OI phenotypes. In this work, LEPRE1, CRTAP, PPIB, FKBP10, SERPINH1 and SERPINF1 of 25 OI patients were analyzed using SSCP and automated sequencing. Altogether, 29 genetic variations were detected, mutations and polymorphisms. Among the eleven variants found in LEPRE1 gene, there are the already well described c.1080 + 1G> T and the potentially deleterious mutations c.2024G> A / p.Lys363Glu and c.1501C> T / p.Arg501Trp . In FKBP10 gene, the previously described duplication c.831dupC, and c.1546G>A / p.Leu516Phe, predicted to be disease causing, were detected. It was observed that FKBP10 and LEPRE1 contain the most important mutations found in the patients studied in this work and it is suggested that LEPRE1 and FKBP10 should be preferably analyzed in studies of screening and identification of mutations in patients with OI. To date, there are no reports of mutations in LEPRE1, CRTAP, PPIB, FKBP10, SERPINH1 and SERPINF1 genes in Brazilian patients and this study provides new information on the genetic aspects of recessive OI.
Prévot, Pierre-Paul. "Rôles de la protéine Iris dans l'accomplissement du repas sanguin de la tique Ixodes ricinus." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2007. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/210730.
Full textLa protéine Iris appartient à la famille des inhibiteurs de sérine protéases et présente une homologie significative avec l’inhibiteur d’élastase de leucocytes. Une analyse in silico a confirmé qu’Iris présentait la structure des serpines, et notamment le RCL (Reactive Center Loop), boucle responsable de l’activité anti-protéasique. Comme attendu (sur base de l’analyse in silico), Iris inhibe de manière spécifique l’activité de plusieurs sérine protéases, et en particulier l’élastase de leucocyte. Ces tests effectués, nous avons essayé de comprendre quel(s) pouvai(en)t être le(s) rôle(s) d’Iris dans l’accomplissement du repas sanguin de la tique, c’est à dire dans la lutte contre les différents systèmes de défenses de l’hôte.
Tout d’abord, des tests ont démontré la capacité d’Iris à inhiber les mécanismes de l’hémostase. Des tests sur du plasma et du sang complet ont montré qu’Iris allonge le temps de fibrinolyse, la voie intrinsèque de la coagulation et l’adhésion plaquettaire. L’utilisation de mutants a également démontré que si les deux premières activités sont dépendantes du RCL, et donc d’un mode de fonctionnement anti-protéolytique, l’adhésion plaquettaire est indépendante de ce système. Ce résultat met en évidence l’existence d’autres sites actifs, isolés par analyse in silico, nommés Receptor Binding Domain (RBD).
Un travail antérieur du laboratoire avait permis d’indiquer la capacité de la protéine recombinante Iris semi-purifiée à inhiber la production de TNF-a, d’IL-6, et d’IL-8 (cytokines pro-inflammatoires) ainsi que l’IFN-g par des PBMCs (Peripherical Blood Mononuclear Cells) humaines. Ces résultats ont été confirmés avec de la protéine purifiée. Des analyses complémentaires ont démontré qu’un mutant d’Iris - dépourvu d’activité anti-protéasique - conserve l’activité pro-inflammatoire. Là encore, ce mécanisme semble impliquer un ou plusieurs RBD. L’utilisation d’anticorps dirigés contre ces zones a permis de déterminer le domaine d’interaction (aa :105-120) impliqué dans cette fonction. D’autre part, une analyse par FACS a permis de démontrer qu’Iris interagit uniquement avec les cellules d’origine monocytaire.
Enfin, nous avons également analysé l’importance d’Iris au cours du repas sanguin de la tique par une approche vaccinale. Les résultats observés indiquent que 30 % des tiques nourries sur des lapins immunisés par la protéine rIris ne survivent pas au repas.
Doctorat en sciences, Spécialisation biologie moléculaire
info:eu-repo/semantics/nonPublished
Ulbricht, David, Jan Pippel, Stephan Schultz, René Meier, Norbert Sträter, and John T. Heiker. "A unique serpin P1′ glutamate and a conserved β-sheet C arginine are key residues for activity, protease recognition and stability of serpinA12 (vaspin)." Portland Press, 2015. https://ul.qucosa.de/id/qucosa%3A33439.
Full textGötzfried, Jessica Tanja Tamara [Verfasser], and Karl-Peter [Akademischer Betreuer] Hopfner. "Genetic, biochemical and preclinical studies on a tandem cluster of two human serpins: alpha-1-antitrypsin and serpina2 / Jessica Tanja Tamara Götzfried ; Betreuer: Karl-Peter Hopfner." München : Universitätsbibliothek der Ludwig-Maximilians-Universität, 2018. http://d-nb.info/1160876223/34.
Full textMkaouar, Héla. "Rôle des serpines, inhibiteurs de protéases à serine, du microbiote digestif humain dans les maladies inflammatoires de l'intestin." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS108.
Full textSerine protease inhibitors (Serpins) are a class of proteins that reamin poorly studied in bacteria. In this thesis we are interested in the study of serpins originating from the intestinal microbiota and the investigation of their anti-inflammatory potential for the treatment of inflammatory bowel diseases (IBD) in humans. For this we have identified serpins from the human gut microbiota and analyzed their diversity as well as their distribution between healthy and IBD patients. These data allowed isolating serpins significantly associated with IBD. The purification of four of them led us to demonstrate that they inhibit human proteases involved in IBD. Biochemical and kinetic analysis of these proteins showed that they exhibit original properties, in particular their high inhibition efficiency. The study of the protective effect of three serpins in an animal model of colitis demonstrated for the first time the efficacy of serpins in vivo demonstrating thus their therapeutic potential
Souza, Lucas Rodrigo de. "Desenvolvimento de bibliotecas baseadas em serpinas para geração de inibidores de calicreínas teciduais humanas." reponame:Repositório Institucional da UFABC, 2017.
Find full textTese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2017.
As calicreinas teciduais humanas (KLKs) compreendem uma familia de quinze serino proteases encontradas em uma diversidade de fluidos e tecidos biologicos. Estas enzimas sao identificadas como possuindo papel em diferentes doencas como Alzheimer, cancer, dermatite atopica, esclerose multipla, Parkinson, psoriase e outras. Existe, portanto, uma crescente demanda por inibidores especificos para cada uma das calicreinas e este e o objetivo do nosso grupo de pesquisa na UFABC. Neste trabalho pretendemos gerar inibidores para as calicreinas teciduais humanas 3, 5 e 7, utilizando bibliotecas baseadas em duas serpinas diferentes: uma expressando a forma Pittsburgh do inibidor de proteinase-¿¿1 (IP-¿¿1 M358R), randomizada nos residuos 352-356 (P7-P3); e outra expressando a serpina bacteriana vioserpina, randomizada nos residuos 343-347 (P3-P2f). A abordagem do phage display foi eficaz para gerar as bibliotecas e o protocolo de bioselecao utilizado adequado para enriquecer diversas variantes reativas. Na selecao da biblioteca do IP-¿¿1 M358R, consensos PSEAL e PSRIL foram observados, para KLK5 e KLK7, respectivamente, e varias das sequencias selecionadas exibiram maiores taxas de inibicao para ambas as calicreinas, quando comparadas a molecula molde (IP-¿¿1 M358R). A variante HDVIL e o consenso PSRIL foram identificados como sendo altamente seletivos para a KLK7, com constantes de segunda ordem 14 e 33 vezes maiores que as para KLK5. Pudemos realizar uma selecao efetiva da biblioteca de vioserpina contra a KLK7, cujas variantes enriquecidos demonstraram uma preferencia geral pelo aminoacido Serina ocupando as posicoes P3, P1f, P2f e P1, seguido por uma Tirosina, tambem preferida em P2. A tecnica de phage display foi, portanto, eficiente como base para um estudo de especificidade, e para o desenvolvimento de melhores e mais especificos inibidores para as Calicreinas Teciduais Humanas, e pode ser utilizada para o desenvolvimento de novas bibliotecas, com outras regioes da RCL randomizadas, ou mesmo baseadas em outras serpinas.
The human tissue kallikreins (KLKs) comprise a family of fifteen serine proteases found in a diversity of biological fluids and tissues. These enzymes are identified as having a role in different diseases such as Alzheimer's, cancer, atopic dermatitis, multiple sclerosis, Parkinson's, psoriasis, and others. Thus there is a growing demand for specific inhibitors for each of these kallikreins, and this is the aim of our group at UFABC. In this work we intended to generate inhibitors for the human tissue kallikreins 3, 5 and 7, using libraries based on two different serpins: one expressing the Pittsburgh form of the human serpin á1-proteinase inhibitor (á1-PI M358R), randomized at residues 352-356 (P7-P3); and another one expressing the bacterial vioserpin, randomized at residues 343-347 (P3-P2¿). The phage display approach was effective to generate the libraries and the biopanning protocol used suitable to enrich numerous reactive variants. On the á1-PI M358R selection, loose consensus of PSEAL and PSRIL were observed, for KLK5 and KLK7, respectively, and several of the selected sequences exhibited higher inhibition rates when compared to the template molecule for both kallikreins. The variant HDVIL and consensus PSRIL were found to be highly selective for the KLK7, with second order constants 14- and 33-fold higher than the ones for KLK5. We could only perform an effective selection with the vioserpin library for the KLK7, whose enriched variants demonstrated a general preference for the amino acid Serine occupying the positions P3, P1¿, P2¿ and P1, followed by a Tyrosine, also preferred on the P2. The phage display approach was therefore effective as basis for a specificity study, and for the development of improved, more specific inhibitors for the Human Tissue Kallikreins, and can be used to develop new libraries, with other randomized RCL regions, or even based on other serpins.
Evans, Dyfed Ll. "The heparin activateable serpins." Thesis, University of Cambridge, 1991. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.385390.
Full textAymonnier, Karen. "La protease Nexine-1, une cible prometteuse dans le traitement de l'hémophilie et son rôle dans les polynucléaires neutrophiles." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2019. http://www.theses.fr/2019USPCC049.
Full textHemophilia is a disease caused by the lack of Factor VIII (FVIII), leading to insufficient thrombin production, and therefore bleeding. Recently, new therapeutic strategies for hemophilia treatment, that do not rely on clotting factor replacement, have emerged. We propose an innovative approach consisting in targeting a natural and potent thrombin inhibitor, expressed by platelets and called protease nexin-1 (PN-1). Our results demonstrated that blocking PN-1 increased, in vitro, thrombin generation in plasma from patients with hemophilia, and reduced blood loss in hemophiliac mice. Our study provides proof-of-concept that PN-1 neutralizing can be a a novel approach for future clinical care in hemophilia. The potential role of PN-1 in regulating inflammatory processes is not known. Vascular cells, platelets and inflammatory cells express PN-1, but no data are available concerning its expression and potential function in neutrophils. For the first time, we demonstrated the presence of PN-1 in neutrophils. Our data have shown that neutrophil recruitment was much less important in peritoneal cavity of PN-1-/- mice than in those of WT mice. These novel findings suggest that PN-1 is a serpin regulating positively PMNs functions
Pippel, Jan, E. Bartholomeus Kuettner, David Ulbricht, Jan Daberger, Stephan Schultz, John T. Heiker, and Norbert Sträter. "Crystal structure of cleaved vaspin (serpinA12)." De Gruyter, 2016. https://ul.qucosa.de/id/qucosa%3A33438.
Full textCrowther, Damian C. "The bioengineering of targeted serpins." Thesis, University of Cambridge, 1992. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.260598.
Full textPemberton, Philip A. "The serpins : structure: function relationships." Thesis, University of Cambridge, 1989. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.315252.
Full textAfridi, Junaid. "Small Molecules Binding to Serpins." VCU Scholars Compass, 2006. http://scholarscompass.vcu.edu/etd/1301.
Full textHopkins, Paul Charles Richard. "The serpin hinge region." Thesis, University of Cambridge, 1993. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.306982.
Full textHermans, Josephine Margaret. "The nature of serpine-enzyme complexes." Thesis, University of Cambridge, 1993. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.309323.
Full textRau, Jill Camille Church Frank C. "Engineering of serpins for vascular application." Chapel Hill, N.C. : University of North Carolina at Chapel Hill, 2008. http://dc.lib.unc.edu/u?/etd,1558.
Full textTitle from electronic title page (viewed Sep. 16, 2008). "... in partial fulfillment of the requirements for the degree of Doctor of Philosophy in the Department of Pathology and Laboratory Medicine." Discipline: Pathology and Laboratory Medicine; Department/School: Medicine.
Andrade, Regina Aparecida de. "Desenvolvimento de Vioserpina para estudo de especificidade e inibição da calicreína tecidual humana 5 recombinante, utilizando mutantes da vioserpina." reponame:Repositório Institucional da UFABC, 2017.
Find full textDissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, São Bernardo do Campo, 2017.
Serpina é o nome dado à superfamília de proteínas com uma vasta diversidade de funções biológicas, que tem como principal característica a inibição irreversível de serino proteases. A característica estrutural mais marcante das serpinas é a presença de uma alça na sua porção C-terminal, composta por 20 aminoácidos denominados alça do centro reativo (RCL). A RCL é a região da serpina que se liga covalentemente ao sítio ativo da serino protease, promovendo a inibição irreversível da enzima pela desarticulação de estruturas funcionais essenciais para a catálise enzimática. As calicreínas teciduais humanas (KLKs) são um grupo de 15 serino proteases (KLK1-KLK15) expressas em uma gama de tecidos. A rKLK5, estudada neste trabalho, é expressa abundantemente na pele humana, e parece que exerce importante papel no processo de descamação epidermal, podendo estar relacionada à patologias, como a psoríase e dermatite atópica. Assim, nesse trabalho foi realizada subclonagem, expressão e caracterização bioquímica da atividade inibitória dos mutantes (VSR344G e VSA345G) da serpina oriunda da cianobactéria Gloeobacter violaceus, identificada pelo nosso grupo e nomeada vioserpina. Os genes codificadores da vioserpina foram previamente clonados no vetor de expressão pET-28a e por meio da técnica de mutação sítio-dirigida foram produzidos dois mutantes substituindo os resíduos de aminoácidos arginina e alanina nas posições P1 e P2 da alça do centro reativo (RCL) da vioserpina, respectivamente, por um resíduo de aminoácido glicina (VSR344G e VSA345G). O sucesso das mutações foi avaliado através de sequenciamento de DNA. As vioserpinas mutantes foram expressas na cepa bacteriana E. coli BL21(D3), purificadas pela técnica de cromatografia de afinidade em resina de níquel (Ni-NTA) e obtidas na forma solúvel. Foi possível visualizar a formação do complexo covalente entre a vioserpina e a KLK5 por análise em SDS-PAGE 10% confirmados pela espectrometria de massas. Também foi analisada a ação inibitória dos mutantes (VSR344G e VSA345G) frente a KLK5. Os valores de SI (estequiometria de inibição) apresentaram valores altos o que indica que é preciso uma concentração grande de inibidor, no caso os mutantes da vioserpina, para que a enzima tenha sua atividade inibida, apresentando-se desta forma uma inibição ineficiente frente a rKLK5. Nesse estudo foi possível obter um inibidor específico (vioserpina) para a rKLK5, podendo assim contribuir para o desenvolvimento de novos procedimentos terapêuticos para patologias envolvidas com o processo de descamação epidermal.
Serpin is the name given to the superfamily of proteins with wide range of biological functions, and that has as main feature the irreversible inhibition of serine proteases. The most striking structural feature of serpins is the presence of a loop in the C-terminal portion of the protein, composed by 20 aminoacids called Reative Center Loop (RCL). The RCL is the region of the serpin that binds covalently to the serine protease active site, which causes the irreversible inhibition of the enzyme by the disarticulation of functional structures essencial for the enzymatic catalysis. Human tissue kalikreins (KLKs) are a group of 15 serine proteases (KLK1-KLK15) expressed in a plethora of tissues. The rKLK5, studied in this work, is abundantly expressed in human skin, and seems to play an important role in the epidermal desquamation process, and may be related to pathologies such as psoriasis and atopic dermatitis. Therefore, in this work the subcloning, expression and biochemical characterization of the inhibitory activity of serpin mutants (VSR344G e VSA345G) of the cyanobacteria Gloeobacter violaceus, recently described by our group and named vioserpin, was proposed. The genes coding for vioserpin were previously cloned into the pET-28a expression vector and through the site-directed mutation technique two mutants were produced by substituting the arginine and alanine amino acid residues at the P1 and P2 positions of the serine reactive center loop (RCL), respectively, by a glycine amino acid residue (VSR344G e VSA345G). The success of the mutations was assessed by DNA sequencing. The mutant vioserpin was expressed in the bacterial strain E. coli BL21 (D3), purified by the nickel resin affinity chromatography technique (Ni-NTA) and obtained in the soluble form. Covalent complex formation between vioserpin and rKLK5 could be visualized by 10% SDS-PAGE analysis confirmed by mass spectrometry. We also analyzed the inhibitory action of mutants (VSR344G and VSA345G) against rKLK5. The SI values (inhibition stoichiometry) presented high values indicating that a large inhibitor concentration is required in the case of the vioserpin mutants, so that the enzyme has its inhibited activity, thus presenting an inefficient inhibition in front To rKLK5. In this study it was possible to obtain a specific inhibitor (vioserpin) for rKLK5, thus contributing to the development of new therapeutic procedures for pathologies involved with the epidermal desquamation process.
Emmerich, Joseph. "Pathologie moleculaire des serpines et anomalies de l'hemostase." Paris 7, 1995. http://www.theses.fr/1995PA077191.
Full textBaek, Kyuwon. "Serpin expression and structural studies." Thesis, University of Cambridge, 2004. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.615861.
Full textSilva, Aline Correa da. "Polimorfismo do gene SPi2 na obstrução recorrente das vias aéreas e na doença inflamatória das vias aéreas em cavalos puro sangue de corrida." Universidade Federal de Santa Maria, 2008. http://repositorio.ufsm.br/handle/1/10026.
Full textRecurrent airway obstruction (RAO) and inflammatory airway disease (IAD) show high prevalence and are economically important in equine athletes. RAO is considered a multifactorial disease due to genetic and environmental components in their patophysiology. The aim of this study was to determine the presence of polymorphism at exons 2, 3, 4 and 5 of the SPi2 gene and a possible association between them and ORA or IAD on 51 thoroughbred horses through single-strand conformational polymorphism (SSCP). Exons 2, 3 and 4 of the Spi2 gene showed no polymorphism. On exon 5, 3 alleles and 6 genotypes were identified. Frequency of allele A (0.6388) and genotype AA (0.3888) were higher in horses affected by RAO but no association was found between any polymorphism and horses with RAO or IAD.
A obstrução recorrente das vias aéreas (ORA) e a doença inflamatória das vias aéreas (DIVA) são doenças de alta prevalência e economicamente importantes em cavalos atletas. A ORA é considerada uma enfermidade multifatorial por apresentar componentes ambientais e genéticos em sua fiosiopatologia. O presente trabalho teve por objetivo determinar a presença de polimorfismos nos éxons 2, 3, 4 e 5 do gene SPi2 e verificar uma possível associação destes com a ORA e/ou DIVA em 51 cavalos Puro Sangue de Corrida através da técnica de polimorfismo conformacional de fita simples (SSCP). Os éxons 2, 3 e 4 não apresentaram polimorfismo. No éxon 5 do gene Spi2 foram identificados três alelos e seis genótipos. Apesar do alelo A e o genótipo AA apresentarem freqüência (0,6388 e 0,3888, respectivamente) mais elevada nos animais com ORA, não houve associação entre os polimorfismos observados e ORA ou DIVA.
Chang, Wun-Shaing Wayne. "Conformational mobility and interactions of the serpins." Thesis, University of Cambridge, 1995. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.387511.
Full textStein, Penelope E. "Structure and function of non-inhibitory serpins." Thesis, University of Cambridge, 1990. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.358806.
Full textPolderdijk, Stéphanie Gabriëlle Irene. "Engineering serpins for the treatment of haemophilia." Thesis, University of Cambridge, 2015. https://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.709430.
Full textOliveira, Jocélia Pereira de Carvalho. "Estudo de inibidores de serino proteases : serpinas bacterianas e compostos peptideomiméticos derivados do isomanídeo." reponame:Repositório Institucional da UFABC, 2014.
Find full textTese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Ciência & Tecnologia - Química, 2014.
Serpina é o nome dado a uma superfamília de proteínas com grande diversidade de funções biológicas, e que tem como principal característica a inibição de serino proteases. Até meados do ano de 2002, acreditava-se que as serpinas eram exclusivas de organismos eucarióticos. No entanto, com o desenvolvimento das técnicas de sequenciamento de genomas, essas proteínas passaram a ser identificadas também em organismos procariotos. Assim com o objetivo de avaliar a capacidade de duas serpinas bacterianas (G. violaceus e M. xanthus) em inibir serino proteases foi realizado nesse trabalho a clonagem, expressão e caracterização bioquímica da atividade inibitória de duas serpinas bacterianas descritas no banco de dados de genoma "genbank". As serpinas que foram alvo de nosso estudo possuem diferentes sequências de aminoácidos na sua RCL (alça do centro reativo), visando produzir serpinas com diferentes especificidades para serino proteases. Os genes codificadores das duas serpinas foram clonados em vetor de expressão pET-28a(+). As serpinas S1 (Gloeobacter violaceus) e S2 (Myxococcus xanthus) foram expressas na cepa bacteriana E. coli Bl21 (D3), purificadas pela técnica de cromatografia de afinidade em resina de níquel Ni-NTA e obtidas na forma solúvel. Foram realizados ensaios para determinar a atividade inibitória das serpinas S1 (G. violaceus) e S2 (M. xanthus) contra as enzimas tripsina, quimotripsina, elastase, subtilisina, NS3 (dengue) e ainda da serpina S1 frente as calicreínas teciduais humanas 1, 3 e 5. A eficiência da reação de inibição da serpina S1 contra essas enzimas também foi testada na presença de glicosaminoglicanos (GAG¿s): heparina, sulfato de dermatan e sulfato de condroitina. A serpina S1 (G. violaceus) apresentou atividade inibitória frente à tripsina na ausência e também na presença dos GAG¿s heparina, sulfato de dermatan e sulfato de condroitina, sendo que na presença de heparina foi possível observar o menor valor de constante de velocidade de segunda ordem (k¿) em relação aos demais GAG¿s testados, sugerindo que a heparina atua de alguma forma na diminuição da velocidade na reação de inibição da tripsina pela serpina S1. Foi possível visualizar a formação do complexo covalente entre a serpina S1 (G. violaceus) e a tripsina por análise em SDS-PAGE 10%. Também analisamos a ação inibitória de compostos sintéticos derivados do isomanídeo frente às calicreínas teciduais humanas 1, 3, 5, 6 e 7. Nesse estudo foi possível obter inibidores seletivos para as calicreínas humanas teciduais 5 e 7, a partir dos compostos sintéticos derivados do isomanídeo e através dos estudos de docking, juntamente com a análise das estruturas das KLK5 e KLK7, foram fornecidas informações sobre as diferenças observadas entre as afinidades de ligação dos diferentes compostos derivados do isomanídeo refletidos nos resultados dos testes de inibição.
Serpin is the name given to the superfamily of proteins with wide range of biological functions, and that has as main feature the inhibition of serine proteases. Until mid-year 2002 it was believed that the serpins were unique to eukaryotic organisms. However, with the development of genome sequencing techniques, these proteins are now also been identified in prokaryotic organisms. Thus, with the objective of evaluate the ability of two bacterial serpins (G. violaceus and M. xanthus) to inhibit serine proteases was performed in this work the cloning, expression and biochemical characterization of the inhibitory activity of two bacterial serpins described in the database of genome "genbank". Serpins that have been the target of our study have different sequences of amino acids in RCL (the reactive center loop), to produce serpins with different specificities for serine proteases. The genes encoding the two serpins were cloned into the expression vector pET-28a (+). S1 (Gloeobacter violaceus) and S2 (Myxococcus xanthus) serpins were expressed in the bacterial strain E. coli BL21 (D3), purified by the technique of affinity chromatography on nickel Ni-NTA resin and obtained in soluble form. Assays were performed to determine the inhibitory activity of serpins S1 (G. violaceus) and S2 (M. xanthus) against the enzymes trypsin, chymotrypsin, elastase, subtilisin, NS3 (dengue) and also the serpin S1 against human tissue kallikrein 1, 3 and 5. The efficiency of the inhibition reaction against these enzymes serpin S1 was also tested in the presence of glycosaminoglycans (GAG's) heparin, dermatan sulfate and chondroitin sulfate. S1 serpin (G. violaceus) had inhibitory activity against trypsin in the absence and presence of GAGs heparin, dermatan sulfate and chondroitin sulfate, and in the presence of heparin was observed the lowest value of the rate constant of the second order (k') compared to the other GAG's tested, suggesting that heparin acts in some way in reducing the speed in inhibiting reaction of trypsin by serpin S1. It was possible to visualize the formation of a covalent complex between S1 (G. violaceus) serpin and trypsin by SDS-PAGE 10% analysis. We also analyzed the inhibitory activity of synthetic compounds derived from isomannide against human tissue kallikrein 1, 3, 5, 6 and 7. In this study it was possible to obtain specific inhibitors for human tissue kallikrein 5 and 7 from synthetic compound derived from the isomannide and through docking studies, together with the analysis of the structures of KLK5 and KLK7, were provided information about the differences between the various binding affinities of compounds derived from isomannide and reflected in the results of the inhibition tests.
Padrón-Barthe, Laura. "LEI/L-DNase II : mécanisme d'activation et régulation de la mort cellulaire." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05D044.
Full textThe first proteases implicated in apoptosis were the caspases. But their participation in this process is no longer considered as indispensable. Other non-caspases proteases have been implicated in apoptosis, such as LEI/L-DNase II. LEI/L-DNase II belongs to the serpin superfamily. We show that LEI (antiprotease) is transformed into L-DNase II by a conformational modification. This conformational change also uncovers a nuclear translocation site, allowing this L-DNase II (endonuclease) to go to the nucleus to degrade DNA. When cells are induced with etoposide, wich does not permit the conformational change of LEI, this serpin protect cells from caspase-8 activation by indirect inhibition of cathepsin D. We have also implicated L-DNase II into two models of caspase independent cellular death : light-induced retinel degeneration and paraptosis of somato-lactotropes cells
Minillo, Renata Moldenhauer [UNIFESP]. "Caracterização clínica, radiológica e molecular de osteogênese imperfeita autossômica recessiva em família brasileira com consanguinidade parental." Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013. http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22833.
Full textCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Objetivo: Descrever clinica e radiologicamente os individuos afetados pela Osteogenese Imperfeita (OI) (OMIM 613982) em uma familia endocruzada procedente de Bueno Brandao, MG; definir a mutacao genetica responsavel pela doenca e identificar variabilidade fenotipica intrafamiliar. Metodologia: Levantamento genealogico com visitas domiciliares de familia demonstrando consanguinidade em 8 geracoes, com tres individuos apresentando baixa estatura deformante diagnosticados com OI autossomica recessiva. Outro individuo afetado foi avaliado na regiao. Apos a avaliacao clinica morfologica classica e estudo radiologico do esqueleto foram coletadas amostras de sangue dos afetados e individuos saos da familia e encaminhadas para sequenciamento. Resultados: Os achados clinicos e radiologicos foram diferentes entre os afetados, ja que somente um deles apresenta ossos wormianos, afilamento de costelas e calcificacoes oem pipocao. As informacoes da genealogia permitiram levantar a hipotese de modelo de heranca autossomica recessiva. Nao foi possivel atraves dos dados clinicos e radiologicos definir um dos diversos tipos de OI descritos na literatura. No entanto, o sequenciamento do exoma revelou que o probando tem uma delecao de 19 pb em homozigose no exon 8 do gene SERPINF1, atualmente associado a OI tipo VI. Os demais afetados tambem apresentam a mesma delecao em homozigose e seus genitores apresentam esta delecao em heterozigose, o que foi confirmado pelo sequenciamento de Sanger. Discussao: Embora mutacoes no gene SERPINF1 tenham sido relacionadas a OI, esta mutacao nao havia sido descrita e a variabilidade fenotipica intrafamiliar provavelmente esta associada a interacao com outros genes e fatores epigeneticos ate o momento nao esclarecidos, sugerindo efeito fundador da doenca na populacao estudada Conclusao: Este estudo e pioneiro em identificar uma delecao parcial patogenica no exon 8 do gene SERPINF1 em brasileiros consanguineos de ancestralidade Portuguesa/Holandesa/Indigena causando OI autossomica recessiva deformante grave com variabilidade fenotipica intrafamiliar clinica e radiologica
BV UNIFESP: Teses e dissertações
Dufour, Erick. "Caractérisation des propriétés biochimiques de serpines modifiées ciblant la furine." Thèse, Université de Sherbrooke, 2004. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4186.
Full textDufour, Erick. "Caractérisation des propriétés biochimiques de serpines modifiées ciblant la furine." Sherbrooke : Université de Sherbrooke, 2004.
Find full textSendall, Timothy James. "Investigating the molecular mechanism of serpin polymerisation." Thesis, University of Cambridge, 2012. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.610868.
Full textHorvath, Anita Julieanne. "Molecular characterisation of the murine α₁-antichymotrypsin-like serpins." Monash University, Dept. of Medicine, 2004. http://arrow.monash.edu.au/hdl/1959.1/9713.
Full textZhang, Bin. "The role and mechanism of a serpin angiogenic inhibitor in diabetic retinopathy." Oklahoma City : [s.n.], 2010.
Find full textPosarac, Vesna. "Characterization and anti-HIV activity of the proprotein convertase-directed serine protease inhibitor, Spn4A." Thesis, University of British Columbia, 2008. http://hdl.handle.net/2429/3434.
Full textRahman, Syeda Sharmin. "Measurement and characterization of HIV inhibitory Clade A Serpins in the cervical mucosa of highly HIV-1 exposed seronegative individuals." American Chemical Society (ACS) Publications, 2011. http://hdl.handle.net/1993/5065.
Full textWegehaupt, Oliver Philipp [Verfasser], and Michael [Akademischer Betreuer] Köttgen. "BAG2, BAT3, DNAJB11, GNB2L1 und SERPINH1 interagieren in einem Netzwerk mit dem Polycystin-1-TRPP2-Signalmodul." Freiburg : Universität, 2016. http://d-nb.info/1122647816/34.
Full textDevlin, Glyn L. "The mechanisms of serpin misfolding and its inhibition." Monash University, Dept. of Biochemistry and Molecular Biology, 2003. http://arrow.monash.edu.au/hdl/1959.1/9469.
Full textBrum, Lauren Morges. "Characterization of the poxvirus serpins SPI-1 and SPI-3." [Gainesville, Fla.]: University of Florida, 2003. http://purl.fcla.edu/fcla/etd/UFE0000653.
Full textGulley, Melissa M. "Biochemical characterization of serpins in the malaria vector, Anopheles gambiae." Thesis, Kansas State University, 2013. http://hdl.handle.net/2097/15870.
Full textDivision of Biology
Kristin Michel
To date malaria is the most important tropical disease, which is caused by Plasmodium sp. and vectored by anopheline mosquitoes. The mosquito’s immune system is one of the limiting factors of malaria transmission. Immune reactions, such as the prophenoloxidase (PPO) pathway result in the melanization of pathogens, and are effective at limiting parasite numbers. Novel strategies for malaria control aim to exploit the immune system to interrupt parasite transmission by boosting the immune responses in the mosquito vector. Serpins play a crucial role in regulating protease cascades involved in immunity of arthropods. In Anopheles gambiae, the major malaria vector in Sub-Saharan Africa, 18 SRPN genes encoding 23 distinct proteins have been identified. So far, two are identified as active inhibitors, and both affect parasite survival. This research aims to identify additional inhibitory serpins in An. gambiae and elucidate their potential function. Identification of such serpins will enhance our understanding of the immune system of this important vector species and may identify immunoregulators to be used in malaria control. SRPN7, 9, and 18 were tested for their ability to inhibit commercial proteases in vitro. Recombinant SRPN18 had no inhibitory activity, while SRPN7 and 9 inhibited several serine proteases. SRPN7, 9 and 18 were tested against two recombinant An. gambiae clip serine proteases (CLIPBs) that are required for activation of phenoloxidase and thus regulate melanization. Only SRPN9 strongly inhibited CLIPB9 in vitro, suggesting that this serpin is a potential negative regulator of melanization. This hypothesis is further supported by the finding that SRPN9 can inhibit PO activity in insect hemolymph, ex vivo. Taken together, this research identifies SRPN18 as the first non-inhibitory serpin described in mosquitoes. Additionally, this study describes the larval-specific SRPN7 as a functional inhibitor. Future studies on these proteins will elucidate their precise physiological functions. Finally, this thesis provides strong evidence that SRPN9 is a negative regulator of melanization in An. gambiae and may therefore affect pathogen survival within this important vector species.
Tirloni, Lucas. "Identificação e caracterização de inibidores de serino-endopeptidases (serpinas) em Rhipicephalus (Boophilus) microplus." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2012. http://hdl.handle.net/10183/60512.
Full textTicks are hematophagous animals vectors of several human and animal diseases. Rhipicephalus (Boophilus) microplus is a bovine-specific ectoparasite. It is causes significant economic losses in livestock-producing countries. Increasing tick acaricide-resistant populations and, possible contamination on the environmental and on bovine-derived products contamination such as meat and milk impel the study of new control methods. Immunological control is a strategy proved to be feasible, but it requires really efficient antigens. A strategy to achieve this purpose is the study of proteins acting in physiological processes of major importance for the tick, as blood intake and digestion. Proteins belonging to the superfamily of serpins (serine protease inhibitors) have a role in several mammalian physiological processes, including blood coagulation, fibrinolysis and complement activation. As ticks encode information for serpins synthesis it is assumed they disrupt homeostasis their hosts. Through analysis of the cDNA sequences database, we identified 16 sequences coding for serpins in cattle tick, which were named RmS (R. microplus serpin). RT-PCR analyses showed RmSs are expressed in most tick tissues and developmental stages. All identified sequences are conserved concerning other tick species serpins. Around 41% of RmS (7 out 16) are probably secreted, since they have sequences predicting for signal peptide. Similarly as other serpin, all RmSs have 1 to 4 N-glycosylation sites. Protein modeling showed all RmSs have a conserved tertiary structure with other mammal serpins. RmS-3 was chosen for further studies due to presence of signal peptide, conservation with serpin inform other ticks and the presence in saliva revealed by an initial a proteomic study of tick saliva. In these studies, its gene was cloned RmS-3 was obtained as a recombinant protein. Polyclonal antibodies were against the recombinant protein showed RmS-3 presence in all analyzed tissues and also in saliva, suggesting it have a role disturbing host responses.
TRANCOZO, M. "CARACTERIZAÇÃO DO PADRÃO DE MUTAÇÕES DOS GENES LEPRE1, CRTAP, PPIB, FKBP10, WNT1, SP7, SERPINF1 EM OSTEOGÊNESE IMPERFEITA." Universidade Federal do Espírito Santo, 2016. http://repositorio.ufes.br/handle/10/7096.
Full textA Osteogênese Imperfeita (OI) ou doença dos ossos frágeis é uma desordem hereditária dos tecidos conjuntivos que contém colágeno em sua formação. Mais de 15 genes relacionados com herança recessiva têm sido relatados dos últimos anos. A maioria destes genes codificam proteínas responsáveis por modificações pós traducionais do colágeno I. Com o objetivo de caracterizar o padrão de mutações em genes relacionados com a OI de padrão de herança autossômica recessiva no Espírito Santo foram estudados por meio das técnicas de Next Generation Sequencing (NGS) e Sequenciamento de Sanger os genes LEPRE1, RTAP, PPIB, SP7, SERPINF1, FKBP10 e WNT1 os quais apresentam maior frequência de mutações descritas atualmente de 22 pacientes não consanguíneos que apresentavam diagnóstico clínico compatível com a doença atendidos no Hospital Infantil Nossa Senhora da Glória de Vitória/ES. Foram encontradas alterações potencialmente patogênicas nos genes LEPRE1 e FKBP10 em cinco pacientes. Dois pacientes são heterozigotos para mutações missense no gene LEPRE1 (c.1087 A>G e c.2024 G>T). Os outros três pacientes são portadores de mutações no gene FKBP10, dois pacientes apresentam mutações frameshift em homozigose (c.825dupC e c.15dupC) e um pacientes é portador de duas mutações em heterozigose composta (c.A179C e c.1063+2T>C). A gravidade da doença nestes pacientes varia de moderado a grave. Os resultados deste trabalho sugerem que a maioria das mutações que causam OI de herança recessiva em pacientes do ES estão localizadas nos genes LEPRE1 e FKBP10. Além disto, de acordo com os resultados, mutações nos genes CRTAP, PPIB, SP7, SERPINF1 e WNT1 causando OI são raras na população estudada. A caracterização de mutações em genes relacionados com OI em diferentes populações ajuda a melhorar nosso conhecimento sobre o padrão de variações genéticas em OI e auxiliam no planejamento de estratégias mais eficientes que viabilizem o diagnóstico molecular da doença e o aconselhamento genético junto às famílias.
GOMEZ, C. M. F. "ANÁLISE DO POTENCIAL DA OSTEOPONTINA E DA SERPINA1 COMO BIOMARCADORES DO CARCINOMA EPIDERMÓIDE DE CABEÇA E PESCOÇO." Universidade Federal do Espírito Santo, 2017. http://repositorio.ufes.br/handle/10/7108.
Full textO carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECP) representa o tipo histológico mais frequente nos cânceres de cabeça e pescoço. Apesar dos numerosos estudos realizados ainda não foi estabelecido um conjunto comum de biomarcadores para o CECP que facilitem o prognóstico e o diagnóstico precoce. O objetivo deste estudo foi avaliar no CECP o possível potencial de biomarcador da Serpina1 e Osteopontina (OPN) por serem moléculas pouco avaliadas neste câncer. Os dados clínicos- patológicos e amostras biológicas foram obtidos de 40 pacientes com CECP e 11 indivíduos saudáveis. Foi realizada a detecção da expressão relativa do mRNA de Serpina1 e OPN por ensaio de qPCR em amostras de tecido tumoral e tecido normal. A avaliação da expressão proteica de OPN e Serpina1 foi realizada pela técnica de Western Blot em amostras soro de pacientes com CECP e indivíduos saudáveis. Foi observado aumento significativo no mRNA da Serpina1 em tecido tumoral em relação ao tecido normal (p=0.0014) e em relação às diferentes características clinico-patológicas avaliadas (sexo, hábito de beber e fumar, estadiamento e desenvolvimento linfonodal). A expressão proteica da Serpina1 no soro foi significativamente maior (p=0.0007) em pacientes com CECP quando comparados aos controles, assim como as características clinico-patológicas avaliadas. Os níveis de OPN no mRNA não foram diferentes entre os tecidos. A expressão proteica da OPN foi maior nos pacientes com estadiamento avançado da doença (III/IV) (p=0.0181). A Serpina1 mostrou-se como um potencial biomarcador do CECP, seus níveis aumentados nos pacientes com CECP podem ser detectados tanto no tecido tumoral como no sangue o que pode facilitar sua aplicação no desenvolvimento da doença. A OPN deve ser melhor avaliada para estabelecer as possíveis diferenças significativas. Palavras-chave: Carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço. Biomarcadores. Osteopontina. Serpina1.
Wong, Ching-mang Queenie. "Structural determination of antimicrobial peptides derived from human lactoferricin and ovalbumin." Click to view the E-thesis via HKUTO, 2006. http://sunzi.lib.hku.hk/hkuto/record/B36934732.
Full textWong, Ching-mang Queenie, and 王靜萌. "Structural determination of antimicrobial peptides derived from human lactoferricin and ovalbumin." Thesis, The University of Hong Kong (Pokfulam, Hong Kong), 2006. http://hub.hku.hk/bib/B36934732.
Full textGuérin, Jean-Luc. "Analyse biologique et fonctionnelle de serp3 et mv-lap,deux facteurs de pathogenicite du virus myxomateux (doctorat microbiologie)." Paris 11, 2001. http://www.theses.fr/2001PA114809.
Full textKutzner, Tanja Jasmin [Verfasser]. "Isolierung, Charakterisierung und phylogenetischer Vergleich von Serpinen basaler Vertebraten / Tanja Jasmin Kutzner." Bielefeld : Universitätsbibliothek Bielefeld, 2013. http://d-nb.info/1048175987/34.
Full textPelte, Nadège. "Serpines et protéases à sérine dans la réponse immunitaire de la drosophile." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2004. http://www.theses.fr/2004STR13086.
Full textArthropods defend themselves against microbial aggression with an efficient battery of reactions, including activation of proteolytic cascades leading to coagulation, melanization and the production of antimicrobial peptides. These proteolytic cascades use serine proteases and they are regulated by serine protease inhibitors, such as the serpins. During my thesis, I studied the role of serpins and proteases in the Drosophila immune response. First proteolytic cascade found to be involved in the Drosophila immune response leads to activation of the Toll pathway, which controls the expression of numerous genes including those for the antimicrobial peptides. Spaetzle, the Toll ligand, is present as a precursor in Drosophila haemolymph. This precursor is proteolytically cleaved during Gram-positive bacterial or fungal infections, under the control of the serpin, Necrotic. Absence of Necrotic leads to constitutive activation of the Toll pathway and the development of a phenotype consisting of necrosis and adult mortality a few days after emergence. During a genetic suppressor screen using the Necrotic phenotype, Persephone, the first serine protease to be directly implicated in the immune activation of Spaetzle, was identified. Unexpectedly, the analysis of psh mutants revealed that two distinct proteolytic cascades can trigger immune activation of Spaetzle, dependant on either Gram-positive bacterial or fungal infection. In its N-terminal region, the serpin Necrotic has an atypically glutamine-rich extension. I was able to show that this section is removed during activation of the Toll pathway. A further analysis of this event revealed an unexpected level of complexity in relation with the proteolytic cascades activated by infections of Gram-positive bacteria or fungi. Another proteolytic cascade stimulated during the insect immune response leads to cleavage and activation of phenoloxidase (PO), the central enzyme of melanization. I isolated the first mutants involved in the proteolytic cascade controlling activation of PO in Drosophila. The first of these mutants, which displays a constitutive activation of PO, affects the Serpin27A gene. The study of Serpin27A revealed that protein production under the control of the Toll pathway must be underway before PO can be activated. The second mutant identified was in the gene encoding the serine protease Prophenoloxidase Activating Enzyme 1 (PAE1). This mutant has lost the capacity to activate PO during infections. The work carried out on PAE1 mutants allowed me to demonstrate that activation of PO in Drosophila depends on a proteolytic cascade
Zani, Marcelo Bergamin. "Incorporação de um aminoácido fluorescente em serpinas para inibição de serino-proteases." reponame:Repositório Institucional da UFABC, 2018.
Find full textTese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2018.
Serpinas sao proteinas inibidoras de serino-proteases, responsaveis pelo controle dos mais diversos processos fisiologicos e que cujo mecanismo de inibicao consite em formar um complexo covalente com a enzima alvo, em um processo de inibicao irreversivel. A alca de centro reativo (RCL) e responsavel por interagir com a protease, mimetizando um substrato, e quando clivada se insere como uma ¿À-fita no interior da serpina, trazendo a protease e causando uma distorcao no seu sitio ativo. Como as serpinas forma ligacoes covalentes com seus alvos durante a inibicao, essas proteinas tem sido utilizadas para o estudo do mecanismo de hidrolise das serino-proteases. No entanto, elas tambem oferecem a possibilidade do desenvolvimento de novas drogas contra enzimas relacionadas com patologias, como pode ser o caso da Vioserpina, uma serpina bacteriana capaz de inibir serino-proteases do tipo tripsina-like como a calicreina tecidual humana 5. Encontrar uma maneira de produzir uma Vioserpina fluorescente pode resultar no desenvolvimento de uma poderosa ferramenta para moniotramento e controle dessa e outras enzimas envolvidas com processos patologicos, como o antigeno prostatico especifico (PSA). Dessa maneira, realizamos mutacoes pontuais no gene da Vioserpina para a incorporacao do aminoacido cumarinico via par ortogonal tRNA/aaRS por supressao do codon ambar de parada. O aminoacido cumarinico e um aminoacido nao-canonico capaz de emitir fluorescencia na comprimento de onda de 450 nm quando excitado a 363 nm, permitindo o facil monitoramento e deteccao de uma proteina. Tres residuo distintos da Vioserpina foram escolhidos para a incorporacao do aminoacido cumarinico: Trp 208, Ile 342 (P4 da RCL) e Val 343 (P3 da RCL). A incorporacao nas posicoes Trp 208 e Ile 342 resultou em proteina fluorescentes, mas truncadas apos a insercao do aminoacido. Foi possivel obter uma Vioserpina completa com o aminoacido cumarinico na posicao Ile 342, embora com rendimento muito baixo. Tal mutante apresentou capacidade de inibicao e especificidade diferentes da Vioserpina wild type, em ensaios de inibicao enzimatica contra Tripsina e Quimotripsina, indicando que o aminoacido cumarinico em P4 parece causar diferentes interacoes no momento de inibicao da serpina. Para averiguar as melhores sequencias resultantes da incorporacao do aminoacido cumarinico, foi gerada uma biblioteca de genes da Vioserpina variando aleatoriamente as posicoes P4, P2, P1 e P1f da RCL, com incosporacao do aminoacido cumarinico na posicao P3 (Val 343). A biblioteca de Vioserpina foi apresentada por Phage Display no capsideo do fago M13 fusionada a proteina PIII, utilizando Biopanning para selecao das melhores sequencias com incorporacao do aminoacido nao-canonico, contra a serino-protease quimotripsina. A biblioteca de fagos gerou cinco sequencias com melhor inibicao que da Vioserpina, e mostrou que a insercao do aminoacido cumarinico parece acontecer com maior frequencia quando flanqueado por aminoacidos hidrofobicos ou sem cargas. A incorporacao do aminoacido cumarinico em sequencias da Vioserpina foi bem sucedida, sendo possivel avaliar a insercao de tal aminoacido na capacidade inibitoria dessa serpina. A investigacao da insercao de aminoacido nao-canonicos por Phage Display e Biopanning representa um grande passo para entender melhor como ocorre a incorporacao de tais aminoacidos, e quais residuos podem ocupar com maior naturalidade suas posicoes laterais.
Serpins are serine protease inhibitor proteins, responsible for the control of the most diverse physiological processes and whose mechanism of inhibition consists in forming a covalent complex with the target enzyme, in an irreversible inhibition process. The reactive center loop (RCL) acts as a bait for the protease, and when cleaved it inserts as a â-strand inside the molecule, distorting the protease active site. As serpins form covalent bonds with their targets, these proteins have been used to study the hydrolysis mechanism of serine proteases. However, they also offer the possibility of developing new drugs against disease-related enzymes, as is the case of Vioserpin, a bacterial serpin capable of inhibiting trypsin-like serine proteases such as human tissue kallikrein. Finding a way of producing fluorescent Vioserpin may result in the development of a powerful tool for monitoring and controlling this and other enzymes involved in pathological processes, such as prostate specific antigen (PSA). Thus, we performed point mutations in the Vioserpin gene for incorporation of the coumarin amino acid through tRNA/aaRS orthogonal pair by suppression of the amber stop codon. The coumarin amino acid is a non-canonical amino acid capable of emitting fluorescence at 450 nm when excited at 363 nm, allowing for easy detection of a protein. Three different residues of Vioserpin were chosen for incorporation of the coumarin amino acid: Trp 208, Ile 342 (P4 in RCL) and Val 343 (P3 in RCL). Incorporation at positions Trp 208 and Ile 342 resulted in fluorescent but truncated proteins following amino acid insertion. A complete Vioserpin bearing the coumarin amino acid at the Ile 342 position was possible, although at very low yield. Such a mutant exhibited different inhibition and specificity compared to Vioserpin wild type in enzymatic inhibition assays against trypsin and chymotrypsin, indicating that the coumarin amino acid at P4 appears to cause different interactions during serpin inhibition. To ascertain the best sequences resulting from coumarin amino acid incorporation, a Vioserpin gene library was generated by randomly varying the P4, P2, P1 and P1' positions in RCL, with coumarin amino acid incorporated at the P3 (Val 343) position. The Vioserpin library was exhibited by Phage Display in the M13 phage capsid fused to the PIII protein, using Biopanning against chymotrypsin to select the best sequences with incorporation of the non-canonical amino acid. The phage library generated five sequences with better inhibition than Vioserpin, and pointed to coumarin amino acid insertion appearing to occur more frequently when flanked by hydrophobic or uncharged amino acids. The incorporation of the coumarin amino acid into Vioserpin sequences was successful, and it is possible to evaluate the insertion of such amino acid in the inhibitory capacity of this serpin. The investigation of non-canonical amino acid insertion by Phage Display and Biopanning represents a great step to better understand how the incorporation of such amino acids occurs, and which residues may more naturally occupy their lateral positions
Benchabane, Meriem. "Modifications post-traductionnelles d'une serpine humaine recombinante exprimée chez les plantes." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24868/24868.pdf.
Full textMetcalfe, Sarah. "An investigation of sperm serine proteases and their seminal plasma serpins." Thesis, University of Sheffield, 1997. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.284791.
Full textBenchabane, Meriem. "Modifications post-traductionnelles d’une serpine humaine recombinante exprimée chez les plantes." Rouen, 2007. http://www.theses.fr/2007ROUES020.
Full textPlants represent interesting production platforms for recombinant proteins. Protein post-translational modifications however, may not be adequate, with a possible negative impact on their commercial value. To assess this problem, we expressed human α1-antichymotrypsin (AACT), a glycosylated serine protease inhibitor, in cultured BY2 tobacco cells. The inhibitor was targeted to different subcellular compartments to assess the impact of cellular destination on its stability and glycosylation. Our results showed that AACT entering the secretory pathway was readily processed to lower molecular weight forms resulting from glycan maturation and proteolytic processing. Intriguingly, cytosolic expression generated more stable proteins, although not glycosylated, that accumulated mostly in the nucleus. We further demonstrated that mutation of AACT DNA binding site partially altered the nucleus distribution, thus suggesting a role of this DNA binding in nuclear retention
Oley, Mareke. "Identifizierung von Zielproteasen für das multifunktionelle Serpin-Gen Spn4." [S.l.] : [s.n.], 2006. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=980536359.
Full textRusso, Rodrigo [UNIFESP]. "Freqüência alélica do gene Serpina1 em pacientes com deficiência de alfa 1-antitripsina e com DPOC no Brasil." Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013. http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/23205.
Full textFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Introdução: A defiCiência de alfa 1-antitripsina (DAAT) e um disturbio genetico descoberto ha 50 anos, com diversas implicacoes clinicas, que afeta especialmente pulmao e figado. Esta defiCiência e o fator genetico mais notorio, associado ao aumento do risco do desenvolvimento de doenca pulmonar obstrutiva cronica em fumantes. Seu diagnostico envolve a deteccao de niveis sericos reduzidos e determinacao genotipica. Apesar de sua importancia, nao existem dados epidemiologicos brasileiros a respeito da prevalencia da defiCiência e, ou da frequencia de ocorrencias dos alelos deficientes. Objetivo: Este estudo visa a reconhecer a DAAT, em uma populacao de individuos com DPOC, e a realizar a determinacao dos genotipos encontrados, assim como a frequencia alelica dos alelos envolvidos nesta doenca: Materiais e Metodo: Trata-se de um estudo transversal, envolvendo 1073 pacientes. Destes 926 tinham diagnostico de DPOC, com relacao VEF1/CVF abaixo do limite inferior do normal, em idade superior a 40 anos, de ambos os sexos, pertencentes a cinco estados brasileiros (São Paulo, Pernambuco, Goias, Ceara e Rio Grande do Sul). Caracterizou-se pela dosagem de AAT em eluato de papel filtro, por nefelometria e, nos individuos identificados como possiveis deficientes, pela dosagem de AAT serica. Todos aqueles com dosagem serica de AAT < 113 mg/dL foram submetidos a genotipagem e, nos casos de resultados discordantes, foi realizado o sequenciamento genetico por PCR. Resultados: Dos pacientes incluidos no estudo, 85 tinham dosagem de AAT em eluato de papel filtro ≤ 2,64 mg/dL e 24 (2,8% do total) tinham dosagem serica < 113 mg/dL. Os alelos encontrados neste subgrupo foram: Pi*Z (54,2%), Pi*M (31,3%), Pi*S (12,5%), Pi*M1 (2,1%). Para a populacao total do estudo, a estimativa da defiCiência de AAT intermediaria a grave foi 2,8% e, somente para a defiCiência grave (ZZ) de AAT, a estimativa de prevalencia foi 0,8%. Conclusao: Este e o primeiro estudo destinado a estabelecer a prevalencia da defiCiência de AAT e a frequencia dos alelos envolvidos, em pacientes com DPOC, no Brasil. As frequencias encontradas mostram que a defiCiência de AAT esta presente em pacientes com DOPC, no Brasil, e reforcam as diretrizes mundiais que incentivam sua pesquisa em individuos com doenca pulmonar obstrutiva
BV UNIFESP: Teses e dissertações