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Dissertations / Theses on the topic 'Sérine-protéases – Inhibiteurs'
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Vercaigne, Dominique. "L'[alpha] 1-antiprotéase humaine : étude "in vitro" des interactions avec des sérine-protéases leucocytaires et pancréatiques humaines : intérêt physiopathologique." Lille 1, 1987. http://www.theses.fr/1987LIL10068.
Full text
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Bourgeois, Luc. "Etude de la spécificité des kallicréines prostatiques humaines HK1, HK2 et HK3 à l'aide de substrats fluorescents dérivés de molécules naturelles." Tours, 1998. http://www.theses.fr/1998TOUR4020.
Full textAbstract:
Dans la prostate humaine trois gènes de kallicréines tissulaires codent les protéases HK1, HK2 et HK3, libérées dans le fluide séminal. HK2, récemment purifiée, est étudiée comme marqueur sérique des pathologies prostatiques en remplacement ou en complément du marqueur actuel HK3 (PSA, Prostate specific antigen). HK1 est connue pour son activité productrice de kinine. Dans le tractus génital et les foyers métastatiques. Le rôle de ces protéases est méconnu. L'activité enzymatique de HK1 peut être suivie avec des substrats synthétiques contrairement à celles de HK2 et HK3. Des inhibiteurs de la famille des serpines régulent leur activité ; le PCI (protein C inhibitor) inhibe les trois enzymes. L'#1-Antichymotrypsine (ACT) inhibe HK3 et la Kallistatine HK1. Ces serpines interagissent comme des substrats suicides avec leur protéase cible et sont clivées au niveau de leur boucle réactive. Les séquences entourant ces sites de clivage ont été utilisées pour élaborer des substrats peptidiques fluorogéniques. La même stratégie a été utilisée pour développer des substrats à partir des semenogelines, protéines structurales du coagulum seminal et substrats naturels de HK3. Les peptides dérivés du PCI sont clivés préférentiellement par HK1 et HK2, et après modification permettent d'obtenir des substrats spécifiques pour chacune. Aucun substrat sensible de HK3 n'a pu être développé à partir des serpines ; le clivage d'un peptide dérivé de l'act, inhibiteur physiologique de HK3, obtenu dans des conditions expérimentales optimisées, suggère un mode d'interaction particulier entre ces deux partenaires. Un substrat 100 fois plus sensible que les substrats actuels a été synthétisé pour HK3 à partir d'une séquence entourant un site de clivage post-éjaculatoire de la semenogeline. Les séquences peptidiques de cibles naturelles des Kallicréines ont permis de synthétiser des substrats sensibles et spécifiques ; leur utilisation permettra de mieux comprendre le rôle biologique des enzymesNo summary available
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Bouillon, Anthony. "Etude structurale et sélection d'inhibiteurs de la sérine protéase de Plasmodium SUB1, une cible thérapeutique de nouvelle génération." Paris 6, 2012. http://www.theses.fr/2012PA066325.
Full textAbstract:
La sortie du globule rouge et l’invasion de nouveaux érythrocytes par les mérozoïtes de Plasmodium sont deux étapes du cycle parasitaire au cours desquelles l’activation en cascade de protéases joue un rôle essentiel. Une protéase-clef de ce processus est la subtilisine SUB1, une sérine protéase. Ses propriétés - accessible, essentielle et différente des enzymes de l’hôte - la définissent comme une cible thérapeutique. Les objectifs de notre travail étaient de sélectionner des inhibiteurs de SUB1 et de mieux comprendre le processus d'autoactivation de l'enzyme grâce à la résolution de sa structure tri-dimentionnelle. A l’issue de criblages in silico réalisés sur des modèles structuraux de P. Vivax-SUB1, une première génération d’inhibiteurs a été sélectionnée. Le meilleur de ces composés a été validé sur les enzymes recombinantes Pv/Pf/PbSUB1, la culture in vitro de P. Falciparum et la croissance in vivo de P. Berghei chez la souris. Une étude de structure-activité est en cours afin d’améliorer cet inhibiteur. Ce processus itératif d’optimisation bénéficie des structures tri-dimentionnelles des enzymes Pv et PfSUB1 que nous avons résolues. De plus, ces structures mettent en évidence l’existence d’un domaine nouveau chez les subtilisines. Nous avons montré par des approches biochimiques et génétiques que ce domaine joue un rôle important dans la régulation de l’activité de l’enzyme SUB1 in vitro et in vivo. Ces résultats apportent de nouvelles données fondamentales sur les subtilisines de Plasmodium et sont directement mis à profit pour développer un inhibiteur plus efficace présentant les qualités requises d'un nouveau candidat anti-paludiqueRed blood cell egress and invasion by Plasmodium merozoites are crucial steps of the parasite life cycle, orchestrated by a cascade of proteases. Among these, the subtilisin SUB1, a Plasmodium serine protease, plays a prominent role. Its properties - accessible, essential and different from the host enzymes- qualify it as an interesting drug target. The objectives of this work were to select SUB1 inhibitors and to better understand its auto-activation process thanks to the resolution of its tridimensional structure. Following an in silico screening performed on P. Vivax-SUB1 3D-structural models, a first generation of SUB1s inhibitors has been selected. The best compound has been validated on the Pv/Pf/PbSUB1recombinant enzymes, on in vitro cultures of P. Falciparum and on P. Berghei in vivo growth in mice. A structure-activity relationship study is in progress in order to improve the potency of this inhibitor. To support this optimisation phase, we have resolved the 3D-structure of the Pv and PfSUB1 enzymes. The analysis of the SUB1 3D structures reveals the existence of a new domain, which does not exist in other known subtilisins. Using biochemical and genetic approaches, we have shown that this domain plays an important role in the regulation of SUB1 enzyme activity in vitro and in vivo. These data provide novel important insights into Plasmodium subtilisins. We now capitalize on these results to design an inhibitor with increased potency and complying with the properties of a novel antimalarial candidate
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Gauthier, Alexandre. "Rôle des protéases à sérine du polynucléaire neutrophile dans l'inflammation associée à la mucoviscidose." Thesis, Tours, 2009. http://www.theses.fr/2009TOUR4040.
Full textAbstract:
La mucoviscidose est une maladie génétique caractérisée par une inflammation pulmonairepersistante du poumon résultant d’un recrutement massif de polynucléaires neutrophiles quisécrètent trois protéases à sérine, l’élastase leucocytaire, la protéase 3 et la cathepsine G. Ledéséquilibre de la balance protéases/antiprotéases au site inflammatoire contribue à la protéolyse dutissu pulmonaire et provoque à terme l’insuffisance respiratoire des patients. Les stratégiesthérapeutiques utilisant des inhibiteurs endogènes n’ont pas abouti aux résultats espérés et n’ontciblé que l’élastase soluble. Nous avons étudié l’activité et la régulation des protéases duneutrophile dans les expectorations des patients atteints de mucoviscidose Nous avons démontrél’importance des pièges neutrophiliques extracellulaires (NETs) dans leur séquestration, ce quiexplique leur résistance à l’inhibition et en conséquence leur pouvoir de destruction du tissupulmonaire. Nous avons également démontré qu’un traitement par la DNase facilite l’action desinhibiteurs ce qui ouvre de nouvelles stratégies de thérapie anti-inflammatoireNo summary available
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Mihaila, Alina. "Expression des inhibiteurs de sérine protéases de petits poids moléculaires dans les leucocytes alvéolaires et sanguins." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 2001. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk3/ftp04/MQ57826.pdf.
Full text
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Paquereau, Laurent. "Régulation transcriptionnelle d'une famille multigénique hépatique codant pour des inhibiteurs de protéases à sérine : mécanismes moléculaires." Montpellier 2, 1992. http://www.theses.fr/1992MON20169.
Full textAbstract:
La regulation de trois genes codant pour des inhibiteurs de proteases a serine (spi-2. 1, 2. 2, 2. 3) s'effectue au niveau transcriptionnel sous le controle de l'hormone de croissance, des glucocorticoides et de mediateurs inflammatoires. L'etude fonctionnelle de ces promoteurs a necessite la mise au point d'un systeme homologue de cultures primaires d'hepatocytes et l'obtention de condition de transfection ne modifiant pas l'inductibilite hormonale de ces cellules (anal. Biochem. , 204:147-51, 1992). Les resultats les plus originaux que nous avons obtenus dans ce travail sont les suivants: 1) le promoteur du gene spi-2. 1, qui est entierement dependant de la presence de la gh pour son expression, possede deux sites de reponse a cette hormone. Ces deux sites semblent fonctionner de maniere independante et sont differents du point de vue de leur sequence nucleotidique. 2) pour etre fonctionnel, la presence d'un site c/ebp et peut etre d'un site dbp, est requise pour ce promoteur. 3) lors d'une inflammation aigue, ce promoteur est reprime par le tnf-alpha et le tgf-beta. 4) enfin, le promoteur du gene spi-2. 3 qui est insensible a la gh, trouve l'origine de cette hormono-independante dans une insertion palindromique de 42pb reconnue par le facteur nfkb et qui interrompt le second site de reponse a la gh. L'ensemble de ces resultats est publie dans deux articles: nucleic acid research, 20:1061-1068, 1992 et european journal of biochemistry, sous presse
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Tan, Xiao. "Des inhibiteurs organiques de kallikréines pour un traitement pharmacologique du syndrome de Netherton : découverte de séries originales, mécanismes d'action, relations structure-activité et études cellulaires." Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066445.
Full textAbstract:
La thèse s’inscrit dans le cadre d’un projet ANR ‘GENOPAT’ visant à identifier des inhibiteurs organiques de protéases à sérine impliquées dans le syndrome de Netherton. Le syndrome de Netherton est une maladie génétique cutanée rare due à des mutations au niveau du gène SPINK5 codant pour l’inhibiteur macromoléculaire (LEKTI), celui-ci perd alors sa fonction régulatrice de l’activité de protéases à sérine (les kallikréines tissulaires 5,7 et 14) indispensable à l’homéostasie de la peau. Il n’existe à ce jour aucun traitement curatif, une application topique d’inhibiteurs exogènes permettrait donc de restaurer les fonctions de la barrière épidermique. Trois stratégies ont été suivies pour identifier de nouveaux inhibiteurs organiques de kallikéines, une approche rationnelle et une approche par criblages in silico et in vitro. 1) À partir de la petite collection du laboratoire de dérivés coumariniques (240 molécules), des inhibiteurs de type « substrat suicide » des kallikréines ont été sélectionnés et caractérisés d’un point de vue mécanistique. 2) En parallèle, une approche semi-rationelle basée sur l’exploitation de bases de données de criblages expérimentaux haut débit a permis de révéler de nouveaux composés 1,2,4 triazoles, formant des acyl-enzymes de stabilités variables. 3) Un criblage virtuel de la chimiothèque commerciale Chembridge qui comptait environ 600 000 molécules organiques a permis d’identifier des inhibiteurs non-covalents des kallikréines, ces inhibiteurs présentent une grande diversité structurale. La plupart des inhibiteurs parmi les plus efficaces sont dépourvus de toxicité vis-à-vis de kératinocytes sains. Leur effet sur des cytokines pro-allergiques et inflammatoires a été analysé sur des kératinocytes de patients atteints du syndrome de Netherton. Une inhibition significative de l’expression de ces cytokines a été observéeThe thesis is part of an ANR 'GENOPAT' project aiming to identify organic inhibitors of serine proteases involved in Netherton syndrome. Netherton's syndrome is a rare genetic skin disease caused by mutations in the gene encoding SPINK5 macromolecular inhibitor (LEKTI), it loses its regulating function of the activity of serine proteases (tissue kallikrein 5 , 7 and 14) esential for the skin homeostasis. There is currently no cure, topical application of exogenous inhibitors would therefore restore function of the epidermal barrier. Three strategies have been followed to identify new organic inhibitors of kallikreins, both rational approach and approaches based screening in silico and in vitro. 1) From a small laboratory collection of coumarin derivatives (240 molecules), suicide substrates of kallikreins were selected and characterized from a mechanistic point of view. 2) In parallel, a semi-rational approach based on the use of databases of experimental high throughput screening revealed 1,2,4-triazole compounds, forming acyl-enzyme with varying stabilities. 3) A virtual screening of the Chembridge commercial chemical library with about 600,000 organic molecules identified non-covalent kallikrein inhibitors, these inhibitors have a great structural diversity. Most inhibitors are among the most effective non-toxic with respect to healthy keratinocytes. Their effect on pro-allergic and inflammatory cytokines was analyzed in keratinocytes of patients with Netherton syndrome. A significant inhibition of the expression of these cytokines was observed
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Matias, Sandra-Isabel. "Caractérisation de molécules à visées thérapeutiques chez les hirudinées : les inhibiteurs de protéases à sérine et le système endocannabinoïde." Lille 1, 2000. https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/Th_Num/2000/50376-2000-394.pdf.
Full textAbstract:
L'objectif de ce travail a ete de rechercher des substances anticoagulantes et anti-inflammatoires ainsi que des molecules possedant des proprietes analgesiques et antinociceptives chez les hirudinees. Nous avons purifie par des techniques biochimiques trois nouveaux inhibiteurs de proteases a serine chez theromyzon tessulatum. La cytine (7. 4 kda) et la therine (5. 4 kda) sont des inhibiteurs trypsiques et chymotrypsiques. Chez les vertebres, ce type de proteases est connu pour etre implique dans des processus pathologiques tels que la polyarthrite aigue et la reaction inflammatoire. La theromine (14. 5 kda) est un antithrombique strict inhibant la coagulation du sang au cours du prelevement du repas. Nous avons montre que ces trois inhibiteurs sont capables de mettre en veille le systeme immunitaire de l'hote en diminuant la reponse inflammatoire. Nous nous sommes egalement focalises sur les endocannabinoides dont l'interet va grandissant en therapeutique humaine. Nous avons demontre la presence dans le systeme nerveux central d'hirudo medicinalis de deux cannabinoides endogenes (l'anandamide : 21. 5 0. 7 pmol/g et le 2-arachidonoylglycerol : 147. 4 4207 pmol/g) par spectrometrie de masse et d'une enzyme de degradation, l'anandamide amidase, a l'aide d'un test d'activiteDes etudes immunocytochimiques ont montre une co-localisation partielle des marquages obtenus avec notre immunserum anti-amidase et un anticorps anti-recepteur cb1 humain au niveau des neurones du ganglion supra-sophagien. Les clomocytes et les pores genitaux presentent egalement un marquage faible avec l'immunserum anti-amidase. La stimulation des ganglions nerveux par l'anandamide provoque l'augmentation de no et l'inhibition d'ampc suggerant l'existence de recepteurs de type cb1. Ce systeme endocannabinoide complet serait implique dans l'analgesie, la vasodilatation locale et la diminution de la reponse immunitaire de l'hote. La decouverte de ces nouveaux inhibiteurs de proteases a serine et d'un antithrombique, ainsi que la mise en evidence du systeme endocannabinoide chez les hirudinees, constituent une contribution importante dans la comprehension des relations hotes-parasites lors de la morsure
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Tanga, Annabelle. "Evaluation d'une stratégie thérapeutique dans la broncho-pneumopathie chronique obstructive basée sur l'administration d'anti-protéases par voie aérosol." Thesis, Tours, 2012. http://www.theses.fr/2012TOUR4007/document.
Full textAbstract:
Il est bien établi que l’inflammation joue un rôle central dans la pathogenèse de la broncho-pneumopathie chronique obstructive (BPCO). Celle-ci va entraîner un déséquilibre marqué de la balance protéases-antiprotéases avec comme conséquence une libération massive des protéases à sérine du neutrophile (NSPs) : élastase (HNE), protéase 3 (Pr3) et cathepsine G (CG). Outre la dégradation de la matrice extracellulaire, ces protéases stimulent la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires, contribuant ainsi au maintien d’une inflammation chronique. Dans une optique de ciblage de ces protéases dans la BPCO, nous avons évalué la capacité de la trappine-2 A62L (T2 A62L), un inhibiteur recombinant dérivé de trappine-2 (T2) capable d’inhiber les trois NSPs, à protéger l’épithélium alvéolaire des effets délétères engendrés par les NSPs. Dans notre étude nous avons montré que la T2 A62L inhibe significativement le détachement cellulaire et la dégradation des protéines de jonctions cellulaires (E-cadhérine, ß-caténine et Zonula Occludens-1) des cellules épithéliales alvéolaires (A549), induits par chacune des NSPs ou par des neutrophiles activésInflammation has been demonstrated to play a central role in chronic obstructive pulmonary diseases (COPD). Neutrophil influx leads to a massive release of neutrophil serine proteases elastase (NSPs): elastase (HNE), proteinase 3 (Pr3) and cathepsin (CG) thereby leading to a protease/anti-protease imbalance. Besides the proteolytic damages to the lung extracellular matrix proteins, these proteases stimulate secretion of pro-inflammatory cytokines and therefore contribute to the perpetuation of inflammation. In order to target these proteases in COPD, we have examined the capacity of trappin-2 A62L (A62L T2), a genetically modified inhibitor which is able to inhibit all three serine neutrophil proteinases at the same time to protect the alveolar epithelium of the deleterious effects caused by the NSPS. In our study, we showed that T2 A62L significantly inhibits cell detachment and degradation of cell junction proteins (E-cadherin, ß-catenin and ZO-1, zonula occludens-1) of alveolar epithelial cells (A549) induced by each individual NSPS or by activated neutrophils. In addition to their antiproteolytic action T2 and T2 A62L reduced proinflammatory cytokines IL-6 and IL-8 release by A549 cells, previously stimulated by HNE or Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS)
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Chopin, Vincent. "Caractérisation biochimique et moléculaire d'inhibiteurs de sérine protéases de la sangsue theromyzon tessulatum : détermination de leur activité biologique." Lille 1, 1998. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1998/50376-1998-445.pdf.
Full textAbstract:
La prevention des maladies cardio-vasculaires, premieres causes de mortalite dans les pays industrialises, fait appel a des agents antithrombotiques et/ou thrombolytiques. Les animaux hematophages representent l'une des sources potentielles de ces substances. En effet, leur longue coevolution avec leur hote a conduit a la selection de molecules anticoagulantes particulierement efficaces. Les secretions des glandes salivaires de la sangsue rhynchobdelle niveaux differents pour prevenir la coagulation du sang ingere : la therostasine, inhibiteur du facteur xa, et la theromine, inhibiteur de la thrombine. Cette sangsue produit egalement d'autres inhibiteurs de serine proteases agissant sur la matric extracellulaire : la cytine, inhibiteur de la chymotrypsine, la therine et la tessuline, inhibiteurs de la trypsine. Alors que chez la sangsue l'un de leur role est vraisemblablement de prevenir la degradation du sang ingere en inhibant les proteases leucocutaires, les premiers resultats in vitro montrent qu'ils sont aussi capables de moduler la reaction inflammatoire chez l'hoet. Toutes ces substances ont ete purifiees, leur sequence peptidique etablie et leur activite a ete precisee. Il s'agit dans tous les cas de molecules originales. Le cribalge d'une banque d'adnc realisee a partir de parties anterieures de t. Tessulatum, a conduit a l'isolement de l'adnc de la therostasine et de plusieurs clones susceptibles de contenir l'adnc de la therine et de la cytine.
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Baranger, Kévin. "Développement d'une stratégie thérapeutique anti-inflammatoire en pathologie pulmonaire basée sur l'administration d'anti-protéases." Thesis, Tours, 2008. http://www.theses.fr/2008TOUR4029/document.
Full textAbstract:
Les travaux de cette thèse ont porté sur l’étude des propriétés fonctionnelles d’inhibiteurs recombinants polyvalents ciblant les trois protéases à sérine du neutrophile (élastase, protéase 3, cathepsine G), libérées massivement au cours des inflammations pulmonaires. Ces inhibiteurs, dérivés de molécules naturelles (élafine, trappine-2, SLPI), interagissent fortement avec les trois protéases à sérine, sous forme soluble ou liée aux membranes des neutrophiles et possèdent des propriétés anti-bactériennes indépendantes de leurs capacités inhibitrices. De plus, nous avons montré que ces inhibiteurs peuvent être ancrés à différentes protéines de structure par transglutamination tout en conservant leurs propriétés inhibitrices. Par leurs différentes propriétés, ces inhibiteurs représentent des molécules particulièrement attractives dans le cadre du développement d’une stratégie thérapeutique basée sur l’administration d’anti-protéases par aérosol pour le traitement de maladies pulmonaires inflammatoiresIn this study, we have analysed the properties of recombinant polyvalent inhibitors of the three neutrophil serine proteinases (elastase, proteinase 3, cathepsin G), massively released during inflammatory events in various lung diseases. These inhibitors, derived from natural endogeneous inhibitors (elafin, trappin-2, SLPI), interact tightly with both free and membrane-bound neutrophil serine proteinases and possess antimicrobial properties that are independent from their inhibitory capacity. We have also shown that these polyvalent inhibitors can be covalently bound to the extracellular matrix proteins by a transglutaminase and that they retain their inhibitory properties in these conditions. With their various biological properties, these inhibitors are attractive molecules for the development of an aerosol-based therapeutic strategy for the treatment of inflammatory lung diseases
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Pagès, Gilles. "Clonage et séquençage de trois gènes de la famille des inhibiteurs de protéases à sérine : leur régulation par l'hormone de croissance et les médiateurs de l'inflammation." Nice, 1990. http://www.theses.fr/1990NICE4356.
Full textAbstract:
Les séquences d'ADN complémentaires de trois inhibiteurs de protéases à sérine hépatiques de rat, SPI-1, SPI-2 et SPI-3 possèdent, à l'exception du site anti-protéase, une homologie de 70 à 90%. Ces ADN complémentaires codent pour des polypeptides d'environ 45000 daltons. Les protéines SPI-1 et SPI-2 sont fortement régulées par l'hormone de croissance, les glucocorticoïdes potentialisant son action. La production de SPI-3 augmente considérablement au cours de l'inflammation. Les trois gènes correspondant sont organisés en 5 exons et 4 introns. L’analyse des régions 5 montre : 1) une très forte homologie dans la zone proximale du site d'initiation de la transcription couvrant environ 350 nucléotides ; 2) la conservation de l'homologie entre SPI-1 et SPI-2 et une totale divergence avec SPI-3 en amont de ce point. De plus, la région proximale du promoteur SPI-3 possède une insertion de 42 paires de bases contenant un palindrome très similaire à la séquence de reconnaissance du facteur transcriptionnel NFKB. La transfection de plasmides portant des délétions variables de l'extrémité 5 du gène SPI-1 a montré que le fragment d'ADN contenant les 172 nucléotides proches du site d'initiation de la transcription suffisait pour induire une activité maximale du promoteur. Des expériences de transcription en systèmes cellulaire et acellulaire ainsi que des expériences d'empreinte à la DNASE n'ont pas permis d'identifier une région spécifiquement impliquée dans l'action de l'hormone de croissance, dans une zone du promoteur couvrant 850 nucléotides
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Simar-Blanchet, Anne-Emmanuelle. "Régulation transcriptionnelle des gènes codant pour des inhibiteurs de protéases à sérine par l'hormone de croissance et les médiateurs de l'inflammation : Mécanismes moléculaires." Montpellier 2, 1997. http://www.theses.fr/1997MON20168.
Full textAbstract:
Les trois genes spi (serine protease inhibitors) codent pour des inhibiteurs de proteases a serine exprimes dans le foie de rat et regules differemment selon l'etat de l'animal. Les travaux de cette these ont pour objet l'etude des mecanismes moleculaires gouvernant la regulation differentielle de ces genes structuralement homologues. Ils ont permis de dresser un modele de regulation transcriptionnelle des genes spi par l'hormone de croissance (gh), les glucocorticoides et les cytokines inflammatoires. Au cours de la phase aigue de l'inflammation, l'expression du gene spi 2. 3 est induite sous le controle de plusieurs elements de reponse actives par les facteurs transcriptionnels induits par les cytokines (principalement l'il-6) et les glucocorticoides. Ces elements fonctionnent en synergie pour dominer l'effet du represseur transcriptionnel 3'utr (3'untranslated region) qui maintient le gene silencieux en situation physiologique. Une sequence riche en purines, la boite gaga, a ete caracterisee comme un element de reponse a la gh distinct des sites stat5 presents dans le premier element identifie dans le promoteur spi 2. 1. La boite gaga controle l'activite basale et stimulee par la gh des promoteurs spi. Sa fonction est strictement dependante de sa position vis a vis de la boite tata. L'expression des genes spi 2. 1 et 2. 2 in vivo est sous le controle stringent de la gh dont l'action est potentialisee par les glucocorticoides. Le niveau de transcription du gene spi 2. 1 a ete correle a l'occupation de la boite gaga in vivo par des proteines nucleaires non identifiees. Un remodelage de la chromatine dependant de la gh regulant l'accessibiblite des sites du promoteur spi 2. 1 aux facteurs transcriptionnels a ete mis en evidence. La regulation negative des genes spi 2. 1 et 2. 2 au cours de la phase aigue a ete imputee principalement a l'il-1 qui induit un etat de resistance a la gh a un niveau pre-transcriptionnel.
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Dramé, Khady Nani. "Réponses adaptatives de l'arachide aux contraintes environnementales : caractérisation d'un nouvel inhibiteur de sérine protéinase." Paris 12, 2005. https://athena.u-pec.fr/primo-explore/search?query=any,exact,990003942520204611&vid=upec.
Full textAbstract:
Les principales contraintes subies par l'arachide sont la sécheresse et l'infection par Aspergillus flavus. Notre étude a porté sur l'identification de paramètres agro-physiologiques et moléculaires pertinents pour une sélection variétale précoce. L'analyse de quatre génotypes de référence a permis leur classement en fonction de leur tolérance à la sécheresse et de leur résistance à A. Flavus. Par ailleurs, 3 ADNc partiels codant une PLDα (ah-pld), une cystéine protéinase (ah-cp) et une sérine protéinase (ah-sp) ainsi que 2 ADNc complets codants une protéine LEA (ah-lea) et un inhibiteur de sérine protéase (pbbi) ont été identifiés. L'expression de ces gènes est différentielle en fonction de l'intensité du déficit hydrique et du degré de tolérance à la sécheresse du cultivar. De plus, ces résultats sont en accord avec ceux obtenus sur la base de caractères agronomiques et physiologiques permettant. L'étude du rôle adaptatif de pbbi au déficit hydrique a conduit à la production de la protéine recombinante dans Escherichia coli et à la transformation in planta d'Arabidopsis thalianaPeanut often suffers from drought and seed contamination by Aspergillus flavus. To identify relevant agro-physiological and molecular parameters for early selection of varieties, different experimental systems were developed. The analysis of four reference genotypes allowed their ranking according to both their tolerance to drought and resistance to A. Flavus. In addition, 3 partial cDNAs coding a PLDα (ah-pld), a cysteine proteinase (ah-cp), a serine proteinase (ah-sp) and 2 full-length cDNAs coding a LEA protein (ah-lea) and a serine protease inhibitor (pbbi) were identified. Comparison of the cultivars allowed observation of differential gene expressions in relation with the intensity of water deficit and the cultivar's tolerance to drought. Moreover, these results are correlated with the cultivars profiles defines on the basis of agronomic and physiological traits. The study of the possible role of pbbi in adaptation mechanisms to water deficit led to the production of recombinant protein in Escherichia coli and in planta genetic transformation of Arabidopsis thaliana plants
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Bitoun, Emmanuelle. "Functional genetics of netherton syndrome." Toulouse 3, 2003. http://www.theses.fr/2003TOU30169.
Full textAbstract:
Le syndrome de Netherton (SN) est une forme sévère d'ichthyose autosomique récessive caractérisée par une érythrodermie congénitale, une anomalie spécifique du cheveu, et des manifestations atopiques. SPINK5, codant pour l'inhibiteur de sérine protéase LEKTI, a récemment été identifié comme le gène responsable du SN. Le criblage de SPINK5 chez 21 patients a conduit à l'identification de 18 mutations incluant faux-sens, décalages du cadre de lecture et altérations de sites d'épissage. Ces mutations créent des codons prématurés de terminaison qui induisent une dégradation accélérée des transcrits SPINK5 dans les kératinocytes primaires humains (HK), prédisant un défaut d'expression sévère de LEKTI dans l'épiderme de peau de patients. La récurrence de certaines mutations au sein de groupes ethniques donnés nous a permis d'établir les premiers cas de diagnostiques prénataux pour une forme létale du SN par détection directe de mutation. Nous avons aussi utilisé une analyse de liaison au locus SPINK5 pour le conseil génétique dans une famille. Des anticorps monoclonaux et polyclonaux nouvellement générés ont montré que LEKTI est un marqueur de différenciation fortement exprimé dans la couche granuleuse et les couches épineuses supérieures de l'épiderme, et dans les couches différenciées des épithéliums stratifiés. Dans les HK normaux différenciés, LEKTI est exprimé comme une protéine de 145 kDa et une isoforme plus courte de 125 kDa. Les deux protéines sont N-glycosylées et rapidement clivées par la furine dans un compartiment situé en aval du réticulum endoplasmique, générant trois polypeptides C-terminaux de 42, 65 et 68 kDa qui sont ensuite sécrétées par les cellules. .Netherton syndrome (NS) is a severe autosomal recessive ichthyosis characterised by congenital erythroderma, a specific hair shaft defect, and atopic manifestations. SPINK5 (serine protease inhibitor Kazal-type 5), encoding the 15-kazal-type-domain serine protease inhibitor LEKTI (lympho-epithelial Kazal-type related inhibitor), has recently been identified as the defective gene in NS. Screening of SPINK5 in 21 NS patients identified 18 mutations including nonsense, frameshift and splice site defects. These mutations result in premature termination codons which promote nonsense-mediated mRNA decay of SPINK5 transcripts in human primary keratinocytes (HK), predicting severe impairement of LEKTI expression in patients' skin epidermis. Based on the recurrence of particular mutations in specific ethnic groups, we have performed the first cases of prenatal diagnosis for a lethal form of NS by direct mutation detection. In the absence of genetic heterogeneity, we have also used linkage analysis at the SPINK5 locus for genetic counselling in one family. Using newly generated monoclonal and polyclonal antibodies, we have shown that LEKTI is a marker of epithelial differentiation strongly expressed in the granular and uppermost spinous layers of skin epidermis, and in differentiated layers of stratified epithelia. .
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Lavergne, Marion. "Rôle du TFPI-2, un inhibiteur de protéases à sérine, dans la progression des cancers broncho-pulmonaires à petites cellules." Thesis, Tours, 2013. http://www.theses.fr/2013TOUR3307.
Full textAbstract:
Les cancers broncho-pulmonaires à petites cellules (CBPPC), tumeurs endocrines représentant 20% des cancers pulmonaires, sont fortement associés au tabagisme. Ils sont très agressifs en raison de leur progression rapide et de la présence de métastases souvent présentes au moment du diagnostic. Moins de 10% des patients sont opérables et la plupart des échantillons de tumeurs sont recueillis par endoscopie bronchique ou par médiastinoscopie. Dans ce travail de thèse, nous avons montré que l’expression du TFPI-2, un gène suppresseur de tumeur, était diminué dans 65% des cas de CBPPC. Afin d’étudier l’impact du TFPI-2 sur la progression tumorale, nous avons préalablement développé un modèle orthotopique murin de CBPPC qui mime le développement de ce type de cancer pulmonaire. Des cellules NCI-H209, n’exprimant pas le TFPI-2, ont été préalablement transfectées pour exprimer la luciférase et la croissance tumorale a été suivie par imagerie de bioluminescence. L’expression du TFPI-2 a ensuite été restaurée dans ces cellules et nous avons montré que la croissance tumorale était alors réduite. Cet effet peut s’expliquer par une diminution de la prolifération des cellules exprimant le TFPI-2, associée à un arrêt du cycle cellulaire en phase G1/S dû à l’expression de p15 et de p27 et à une induction de l’apoptose. Nous avons aussi démontré que lorsque le TFPI-2 est surexprimé, les transcrits et les protéines MMP-1 et -3 sont diminuées, tout comme la phosphorylation des protéines de la voie des MAP Kinases impliquées dans l’induction des transcrits de ces MMP. Cette corrélation entre l’expression du TFPI-2 et la diminution de celle de la MMP-1 a été retrouvée dans 35% des échantillons de CBPPC humains. Ces résultats suggèrent que l’inactivation du TFPI-2 dans les CBPPC peut favoriser le développement de ce cancer. Enfin, nous avons également démontré, pour la première fois que le TFPI-2 peut aussi inhiber la kallicréine 12, une protéase à sérine potentiellement anti-angiogénique. L’ensemble de ces données suggèrent que le TFPI-2 peut être un potentiel biomédicament capable de limiter la progression des carcinomes pulmonaires à petites cellulesSmall Cell Lung Cancer (SCLC) is the most common neuroendocrine tumour of the lung (15% of cases) and is strongly associated with smoking. It is characterised by tumours that grow rapidly with early metastases. Less than 10% of patients with SCLC have a resectable tumour, thus surgical specimens are scarce and most tumour samples come from small biopsies obtained during bronchial endoscopy or mediastinoscopy. In this study, low levels of TFPI-2 expression were found in 65% of patients with SCLC. To study the impact of TFPI-2 in tumour progression, we first developed a clinically relevant animal model that resembles various stages of human SCLC. NCI-H209 cells, not expressing TFPI-2, were genetically modified to express firefly luciferase and the growth of the tumour was sensitively followed by bioluminescence imaging. TFPI-2 was then overexpressed in these cells and we showed that TFPI-2 inhibited lung tumour growth. Such inhibition could be explained in vitro by a decrease in tumour cell proliferation, blockade of G1/S phase cell cycle transition due to p15 and p27 expression, and an increase in apoptosis shown in NCI-H209 cells expressing TFPI-2. We also demonstrated that TFPI-2 upregulation in NCI-H209 cells decreased MMP expression, particularly by downregulating MMP-1 and MMP-3. Moreover, TFPI-2 inhibited phosphorylation of the MAPK signalling pathway proteins involved in the induction of MMP transcripts, among which MMP-1 was predominant in SCLC tissues and was inversely expressed with TFPI-2 in 35% of cases. These results suggest that downregulation of TFPI-2 expression could favour the development of SCLC. Finally, we also demonstrated for the first time that TFPI-2 could inhibit the kallikrein 12, an anti-angiogenic serine proteinase. Altogether, these results suggest that TFPI-2 could be a new potent therapeutic agent to control SCLC tumour progression in SCLC
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Arama, Patomo Dominique. "Conception et synthèse de nouveaux inhibiteurs de la kallicréine 7." Thesis, Montpellier, 2015. http://www.theses.fr/2015MONT3503/document.
Full textAbstract:
Les kallikréines (KLKs) tissulaires humaines sont des protéases à sérine « (chymo)trypsine-like » impliquées dans divers processus physiologiques. Parmi les 15 isoformes connues dans la littérature, la kallikréine 7 (KLK7) est particulièrement impliquée dans les processus de desquamation. La dérégulation de cette enzyme est associée à diverses atteintes dermatologiques, telles que le psoriasis ou la maladie de Netherton. Il est également admis que cette enzyme participe à l'invasion tumorale et à la progression du cancer de la prostate, des ovaires et du pancréas. L'utilisation d'inhibiteurs de la KLK7 pourrait donc constituer une approche prometteuse pour le traitement de certaines atteintes dermatologiques, et pour lutter contre la dissémination métastatique.Depuis deux décennies, plusieurs inhibiteurs synthétiques de cette isoforme ont été développés. Toutefois, la plupart de ces molécules présentent une sélectivité insuffisante et sont dépourvues de propriétés physicochimiques adaptées à une utilisation in vivo. Ce travail de thèse est consacré à la synthèse d'inhibiteurs réversibles et sélectifs de la KLK7. A ce titre, deux séries de composés ont été explorées. La première est issue d'un criblage de molécules pyrido-imidazodiazépinones, qui a permis d'identifier un inhibiteur réversible et sélectif de la KLK7, le JMV4967 (IC50 = 57,0 µM). Ce composé se caractérise par la présence, en position 2 du cycle diazépinique, d'un noyau phényle substitué en ortho par un groupement méthyle. Sur la base de ces résultats, une étude de relations structure-activité (SAR), a été initiée. Les meilleures inhibitions ont été obtenues avec les analogues du JMV4967 possédant en position 2 du cycle diazépinique, un groupement 3,4,5-triméthoxyphényle ou 3,4-diméthoxyphényle. Cette étude a permis l'identification du composé JMV5046 (IC50 = 33,5 µM). Une étude biochimique du JMV5046, a mis en évidence son caractère réversible et compétitif vis-à-vis du substrat dans le site actif de la KLK7, comme le hit initial. La seconde série a été développée à partir d'une quinazoline substituée par un amino-benzimidazole, et une étude de RSA a également été menée. Finalement, une étude de réactivité chimique, a été également entreprise afin d'accéder à deux nouvelles séries de composés diazépiniques fusionnés avec l'imidazo[1,2-a]pyridine ou l'indole. Cette étude a montré que la 2-amino-imidazopyridine pouvait subir une alkylation en position 3 du cycle, dans le cadre de la réaction de nitro-Michael. Les produits d'addition de Michael ainsi formés peuvent ensuite conduire, après réduction du groupement nitro, aux dérivés diazépiniques correspondants. Par ailleurs, nous avons pu montrer que l'acylation du 2-amino-indole, en présence d'un donneur d'acyle de type ester activé d'acide aminé, conduisait aux dérivés N-acylés correspondants. Ces derniers ont été utilisés par la suite, pour la synthèse de dérivés indolodiazépiniques via la réaction de cyclisation de Pictet-Spengler. La synthèse de ces composés, l'étude de leur activité inhibitrice sur la KLK7 sont décrites. Les expériences de modélisation moléculaire par docking in silico, permettant de préciser les bases structurales de l'inhibition de la KLK7 par le JMV5046, sont également présentéesHuman tissular kallikreins (KLKs) are members of (chymo)trypsin-like serine proteases, involved in various physiological pathways. Among the 15 known isoforms in the literature, kallikrein 7 (KLK7) plays a significant role in physiological and pathophysiological processes of the skin, like psoriasis and the Netherton syndrome. Several studies report also its implication in multiple processes leading to invasive and metastatic tumor growth, especially in prostatic, ovarian and pancreatic cancers. Strategies focused on KLK7 inhibition are a promising alternative for the treatment of such dermatological diseases, and to avoid metastatic dissemination. In the last two decades, many synthetic inhibitors of this KLK isoform have been developed. However, most of these molecules exhibit low selectivity and unsuitable physicochemical properties for in vivo use. This thesis is devoted to the synthesis of selective and reversible inhibitors of KLK7. Two series of compounds have been explored. The first one, derived from a screening of pyrido-imidazodiazepinones compounds, which led to the discovery of a reversible and selective inhibitor of KLK7, JMV4967 (IC50 = 57.0 µM). This compound is characterized by the presence of an ortho methyl substituted phenyl group, at position 2 of the diazepine ring. Based on these results, a structure-activity relationships (SAR) study was initiated. The best inhibitions were obtained with JMV4967analogs bearing a 3,4,5- trimethoxyphenyl group or 3,4- dimethoxyphenyl group, at position 2 of the diazepine ring. This study led to the discovery of one compound, JMV5046 (IC50 = 33.5 µM). A biochemical study of JMV5046, highlighted its reversible and competitive behavior against the substrate in the KLK7 active site, as previously observed for the initial hit. The second series was developed from an amino-benzimidazole substituted quinazoline, and a SAR study was also carried out. A chemical reactivity study was also initiated to access two new series of imidazo[1,2-a]pyridine-fused or indole-fused diazepine compounds. This study showed that 2-amino-imidazopyridine could undergo alkylation at position 3 of the ring, in the nitro-Michael reaction context. The obtained Michael adducts could then give, after reduction of the nitro group, the corresponding diazepine derivatives. We also showed that, in the presence of an acyl donor (as an activated amino acid ester), 2-amino-indole was N-acylated, unlike the 2-amino-imidazopyridine which leads to an exclusive C-acylation in the same conditions. The N-acylated derivatives were then used for the indolodiazepines synthesis, using Pictet-Spengler cyclization reaction.The synthesis of these compounds and their inhibiting activity against KLK7 are described. Molecular modeling experiments by in silico docking, to determine the structural requirements for KLK7 inhibition by JMV5046, are also presented
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Cherqui, Anas. "Etude de la prophénoloxydase de "Locusta migratoria" : purification, caractérisation et contrôle de sa transformation en phénoloxydase." Montpellier 2, 1994. http://www.theses.fr/1994MON20263.
Full textAbstract:
Dans ce travail, nous avons entrepris l'etude de la prophenoloxydase (propo) dans l'hemolymphe de l'insecte locusta migratoria. Dans un premier temps, nous avons mis au point un test fiable et reproductible pour detecter l'activite phenoloxydasique. Puis nous avons etudie les conditions de l'activation de la propo par les serines proteases ou apres declenchement du systeme activateur par les polysaccharides microbiens, lipopolysaccharides (lps) ou beta 1-3-glycane. Ces activites ont ete suivies dans les trois compartiments hemolymphatiques, le plasma, les extraits d'hemocytes et le serum. Dans un deuxieme temps, la propo a ete purifiee a partir du plasma et des extraits d'hemocytes a l'aide de methodes de chromatographie. La propo semble se presenter comme une molecule de 250 kda formee de 3 chaines polypeptidiques associees de facon non covalente. D'autres caracteristiques physico-chimiques suggerent que les propo plasmatique et hemocytaire sont identiques. La presence de quantites comparables de propo dans le plasma et dans les extraits d'hemocytes montre qu'il est peu probable que la propo hemocytaire soit une contamination par la pro-enzyme plasmatique. La presence d'inhibiteur regulant l'activation de la propo apres declenchement du systeme activateur a ete mise en evidence dans le plasma du criquet. Des etapes preliminaires de purification de cet inhibiteur ont ete elaborees. Enfin, un facteur inhibiteur a ete detecte dans le surnageant de culture de la bacterie entomopathogene xenorhabdus nematophilus. Cet inhibiteur semble agir au niveau de l'activite phenoloxydasique
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Guibourdenche, Cristel. "Synthèse d'acides aminés neuroexcitateurs : acide quisqualique et analogues de l'acide glutamique." Montpellier 2, 1993. http://www.theses.fr/1993MON20173.
Full textAbstract:
L'objectif de cette these est la synthese de l'acide quisqualique et d'analogues de l'acide glutamique qui sont des acides amines neuroexcitateurs, et, pour les analogues de l'acide glutamique, peuvent etre egalement consideres comme des inhibiteurs enzymatiques. La premiere partir de ce travail comporte une revue bibliographique sur les acides neuroexcitateurs et leurs classifications. Un deuxieme chapitre est consacre aux inhibiteurs enzymatiques et a leurs mecanismes d'action. Le troisieme chapitre fait etat de differentes syntheses envisagees pour l'obtention des analogues de l'acide glutamique. Les deux derniers chapitres concernent la synthese de l'acide quisqualique, dans une premiere partie, un rappel est fait sur les differentes methodes d'obtention de l'acide quisqualique et dans une deuxieme partie, nous exposons nos travaux concernant les differentes voies envisagees et la synthese enantiospecifique conduisant a l'acide quisqualique
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Herrera, Mendez Carlos. "Marqueurs biologiques de la qualité de la viande bovine : purification, caractérisation et quantification de trois serpines musculaires." Clermont-Ferrand 2, 2006. http://www.theses.fr/2006CLF21675.
Full textAbstract:
Ce travail avait pour objectif la purification, la caractérisation et la quantification des inhibiteurs de sérine protéinases dans le muscle de bovin visant à déterminer les meilleurs paramètres pouvant prédire la tendreté de la viande. Cela nous a conduit à purifier trois serpines dont deux qui ont été identifiées comme étant des isoformes de l'endopine 1 Hwang et al. (1999) tandis que la troisième a été identifiée comme étant l'antithrombine III. Le fait le plus marquant de ce travail reste la caractérisation de la famille des endopines au travers de la purification de deux isoformes de l'endopine 1 et de l'identification de huit gènes. Trois enzymes cibles potentielles ont été identifiées. Il s'agit de l'élastase et de deux différentes cystéines peptidases de la famille des caspases. Dans le contexte viande, nous avons suggéré l'introduction d'une nouvelle phase dans le processus de maturation des viandes, phase qui correspondrait à la mise en place du processus de mort cellulaire
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Angelloz-Nicoud, Patricia. "Rôle de l'Insulin-like Growth Factor Binding Protein-3 (IGFBP-3) dans la prolifération autocrine des cellules PC-3 dérivées d'un adénocarcinome prostatique humain : implication de protéases." Compiègne, 1996. http://www.theses.fr/1996COMPD889.
Full textAbstract:
La lignée PC-3 dérivée d'un adénocarcinome prostatique humain a la capacité de proliférer en l'absence de tout facteur ajouté. Cette prolifération autocrine importante est due, au moins en partie, aux Insulin-like Growth Factors sécrétés (essentiellement IGF-II). Outre les IGFs, ces cellules sécrètent plusieurs de leurs protéines de liaison, les IGFBP-2, -3, -4 et -6. Les IGFBPs régulent l'action cellulaire des IGFs le plus souvent en l'inhibant, parfois en la potentialisant. L'IGFBP-3 ajoutée au milieu de culture des cellules PC-3 stimule leur prolifération, et notre objectif a été d'en déterminer le mécanisme. Nous avons montré que cet effet mitogène implique les IGFs de deux façons : - 1) l'IGFBP-3 a la propriété d'adhérer à la surface cellulaire, ce qui lui permet de concentrer l'IGF qui lui est associé à proximité de son récepteur. - 2) elle subit une dégradation limitée sous l'effet de la plasmine générée au contact des cellules. Cette altération structurale favorise la dissociation de l'IGF lié et son accès au récepteur, provoquant ainsi une stimulation de la prolifération. Nous avons pu démontrer la réalité de ce phénomène aussi bien pour l'IGFBP-3 exogène que pour celle sécrétée par les cellules. La reproduction in vitro de la protéolyse limitée de l'IGFBP-3 recombinante par la plasmine, rend compte du phénomène de potentialisation observé. En effet, le principal fragment protéolytique correspondant aux deux-tiers N-terminaux de la protéine n'a qu'une affinité très faible pour les IGFs et stimule la prolifération des cellules PC-3. Un autre fragment encore incomplètement caractérisé et ayant une affinité nulle pour les IGFs, se comporte en inhibiteur de la croissance, ce qui suggère une action intrinsèque. Il résulte de nos données que la modulation par l'IGFBP-3, de l'action mitogène des IGFs sur les cellules PC-3, est en rapport avec sa protéolyse limitée et met en jeu des domaines distincts de la protéine. Compte tenu de la sécrétion accrue de protéases par les cancers prostatiques, les phénomènes observés dans la lignée PC-3 pourraient contribuer in vivo aux processus invasif et métastatique.
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Rossi, Valérie. "Etude de trois gènes codant pour des inhibiteurs de protéases à serine régulés par l'hormone de croissance et les médiateurs de l'inflammation : clonage des gènes, analyse structurale et fonctionnelle des promoteurs." Montpellier 2, 1991. http://www.theses.fr/1991MON20269.
Full textAbstract:
Les trois genes codant pour des inhibiteurs de serine-proteases du rat, spi-2. 1, 2. 2 et 2. 3, ont ete clones et sequences. Ces genes couvrent environ 7. 5 kb et sont organises en 5 exons et 4 introns. Les parties structurales de spi-2. 1 et 2. 2 sont identiques a plus de 90%, et environ a 70% a celle de spi-2. 3. Par contre, les regions 5-flanquantes presentent des divergences susceptibles d'expliquer leurs regulations differentielles. En effet, spi-2. 1 et 2. 2, maximalement exprimes a l'etat sont totalement ou partiellement reprimes apres hypophysectomie ou au cours de l'inflammation. A l'inverse, spi-2. 3, peu exprime chez l'animal normal, est induit par une inflammation aigue. A l'exception d'une insertion de 42 pb specifique de spi-2. 3 les trois promoteurs des genes presentent de fortes homologies dans les 250 pb precedant le site d'initiation de la transcription. L'etude des proteines se fixant sur ces promoteurs indique l'existence de 3 sites de fixations communs sur les regions proximales. Ces sites sont reconnus surtout par des facteurs de la famille c/ebp, mais egalement par d'autres facteurs non-identifies. Le site 3 reconnait un facteur specifique du foie, induit par l'hormone de croissance. La sequence specifique de spi-2. 3 est reconnue par 2 facteurs ubiquitaires, dont un est apparente a nfkb. L'occupation du premier site c/ebp est suffisante pour activer la transcription du promoteur spi-2. 1 de facon quasi-maximale. Mais les aspects de regulation trouves in vivo sont perdus dans le systeme de transcription in vitro. En effet, in vivo, l'activation par la famille c/ebp semble inhibee
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Party, Helene. "Rôle de l'inhibiteur de l'activateur tissulaire du plasminogène de type 1 (PAI-1) dans la dépression majeure chez la souris." Thesis, Normandie, 2017. http://www.theses.fr/2017NORMC411.
Full textAbstract:
La dépression majeure représente l’une des affections les plus lourdes dans le monde, touchant plus de 350 millions depersonnes. La 5e édition du Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-V) est la référence mondiale utiliséepour poser le diagnostic de la pathologie chez l’humain. Bien que très nombreux, les antidépresseurs prescrits à ce jour restentencore malheureusement inefficaces pour 30% des patients. Dans ce contexte, il est fondamental de développer de nouvellesstratégies thérapeutiques pour soigner les patients. Des études récentes suggèrent, sans toutefois le démontrer véritablement,l’implication de l’axe « activateur tissulaire du plasminogène / inhibiteur de l’activateur tissulaire du plasminogène de type 1 »(axe tPA/PAI-1) dans la pathogenèse de la dépression majeure.La première partie de mes travaux a été consacrée à la mise au point d’un nouveau système d’évaluation comportementalede la dépression majeure chez la souris en modélisant de manière exhaustive et standardisée les symptômes cliniques du DSMV.La seconde partie de mes travaux a consisté à étudier les mécanismes d’action potentiels de l’axe tPA/PAI-1 dans ladépression majeure. Pour ce faire, j’ai tout d’abord caractérisé le phénotype comportemental de souris déficientes en tPA (souristPA-/-) et en PAI-1 (souris PAI-1-/-), ainsi que de leurs homologues de type sauvage, grâce au système fonctionnel d’évaluationinitialement mis en place. Par ailleurs, du fait de la forte comorbidité entre anxiété et dépression, les comportements de typeanxieux ont également été analysés chez ces animaux. Mes expériences ont révélé un phénotype de type dépressif, indépendantdu tPA, chez les souris déficientes en PAI-1, associé à des diminutions des concentrations de deux monoamines (sérotonine etdopamine) dans des structures cérébrales connues pour être impliquées dans la dépression majeure (hippocampe et noyau du litde la strie terminale). De surcroît, l’enrichissement modéré de l’environnement n’amenuise pas les symptômes de type dépressifdes souris PAI-1-/- mais conduit cependant à la disparition des troubles anxieux dépendants, quant à eux, de l’axe tPA/PAI-1.La troisième partie de ma thèse a été dédiée à des manipulations pharmacologiques visant à tester l’efficacitéd’antidépresseurs de type inhibiteurs de la recapture de la sérotonine. L’escitalopram produit un effet anxiolytique chez les sourisdéficientes en PAI-1, sans toutefois contrebalancer le phénotype dépressif chez ces mêmes sujets. Qui plus est, la fluoxétine, àla même dose que l’escitalopram, est toxique pour ces souris.Les résultats de ma thèse apportent ainsi la première démonstration de l’implication de PAI-1 dans la dépression majeurepar un mécanisme indépendant de son interaction avec le tPA. Ces travaux démontrent également que la souris PAI-1-/- constitueun outil essentiel et innovant pour étudier les mécanismes cellulaires et moléculaires sous-jacents à la dépression majeure, ainsique pour la recherche de cibles thérapeutiques visant à améliorer l’efficacité des traitementsMajor depressive disorder is one of the heaviest mental disorders in the world, affecting more than 350 people worldwide.It is in the fifth edition of Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-V) that the basis for an internationallyadmitted diagnosis was laid. Albeit diverse, existing antidepressants still remain ineffective for 30% of the patients. Under suchcircumstances, the necessity of developing new therapeutical strategies has arisen. Recent studies tend to suggest, withoutabsolute demonstration, the implication of the axis "Tissue Plasminogen Activator / Plasminogen Activator Inhibitor type-1"(tPA/PAI-1 axis) in the pathogenesis of major depressive disorders.The first section of my works has been devoted to the development of a new system of behavioural assessment in micefor depressive-like disorders, through a comprehensive and standardised modelling of clinical symptoms of DSM-V.The second section of my works has consisted in studying the potential action mechanisms of the tPA/PAI-1 axis in theemergence of depressive-like disorders. To do so, I first had to identify the behavioural phenotype of mice having from a tPA(tPA-/- mice) and PAI-1 (PAI-1-/-mice) deficiency as well as their wild-type counterparts through the system of assessment setup in the beginning of my research. In addition, due to the significant comorbidity between anxiety and depression, anxious-likebehaviours have been analysed as well. Among PAI-1-deficient mice, my experiments have disclosed a depressive-likephenotype, independent of tPA, and correlated with a decrease in the concentration of two monoamines (serotonin and dopamine)in brain structures known to be involved in major depressive disorder (hippocampus and bed nucleus of the stria terminalis).Besides, the moderate enrichment of the environment does not reduce the depressive-like symptoms of PAI-1-/- mice, yet inducesthe dissipation of dependent-tPA/PAI-1 axis anxious disorders.The third section of my PhD has been devoted to pharmacological experiments meant to assess the effectiveness ofantidepressants classified among selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs). Escitalopram produces anxiolytic falloutsamong PAI-1-deficient mice without for all that offsetting the depressive phenotype among these same mice. Moreover,fluoxetine administered in the same concentration as escitalopram has proven to be toxic for these mice.The results of these doctoral experiments have therefore demonstrated for the first time the implication of PAI-1 in theprocess of major depressive disorder through a mechanism independent from its interaction with tPA. These works have alsodemonstrated that PAI-1-/- mice make up a fundamental and cutting edge tool to study the cellular and molecular mechanismsunderlying major depressive disorder as well as to develop competent therapeutical targets intended to improve the efficiency oftreatments
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Joubel, Anita. "Analyse protéomique du suppresseur de tumeur p53 : modifications post-traductionelles et protéines partenaires." Thesis, Lille 1, 2008. http://www.theses.fr/2008LIL10035.
Full textAbstract:
La protéine suppresseur de tumeurs p53, est impliquée dans de nombreuses voies de signalisation cellulaire et est également la protéine la plus mutée dans les cancers. Les mécanismes de régulation de l'activité de p53 impliquent des modifications post-traductionnelles et des protéines partenaires pour lesquelles les données de la littérature sont pléthoriques et fragmentaires. Dans la présente étude, nous avons développé une approche de protéomique basée sur l'immunoprécipitation et la spectrométrie de masse pour étudier les modifications post-traductionnelles de p53 et identifier ses protéines d'interaction. Dans un premier temps nous avons séquencé la totalité de la protéine p53 immunoprécipitée des cellules du modèle Cos-1. Cette expérience nous a permis d'identifier plusieurs sites de phosphorylations déja connus sur les serines: S15, S33, S315 et S392. Nous avons également identifié des acétylations sur les lysines suivantes: K305, K370, K372, K373, K381 et K382. C'est la première fois que des acétylations sont reportées pour la proteine p53 isolée des cellules Cos-1. De plus, il est reporté pour la toute première fois l'existence d'acétylation sur les résidus 319, 357 et 386. Dans un second temps, nous avons recherché les protéines qui se fixent sur p53 dans les cellules épithéliale mammaire non cancéreuse (MCF10A) versus les cellules cancéreuse (MCF7). Nos résultats identifient un certain nombre de partenaires potentiels de p53 et montrent pour la première fois que l'inhibiteur de serine protéase Maspine est capable de former un complexe avec p53. Ce complexe nucléaire est retrouvé exclusivement dans les cellules non cancéreuses MCFlOA et pourrait constituer un nouveau mécanisme de régulation de l'activité de p53The tumor suppressor protein p53 is involved in many signaling pathways and is the most frequently mutated protein in cancers. The mechanisms for the regulation of p53 activity involve post-translational modifications and partner proteins for which literature is phletoric and fragmentary. ln the present study, we have developed a proteomics approach, coupling immunoprecipitation and mass spectrometry, to investigate p53 post-translational modifications and protein partners. First, we sequenced the full p53 protein immunoprecipitated from the Cos-l cells. This lead to the identification and localization of several known phosphorylations on serine residues S 15, S33, S315 and S392 as weIl as several known acetylations on lysine residues: K305, K370, K372, K373, K381 and K382. Acetylation sites are being reported for the tirst time on monkey p53 from Cos-l cells on lysine 319,357 and 386. Second, we looked for partner proteins that can bind to p53 in non cancerous (MCFlOA cells) versus cancerous (MCF7) human breast epithelial cells. Our results report a series of putative interacting partners among which the serine protease inhibitor maspin. The complex between p53 and maspin was validated by westem-blotting, localized in the nucleus and found in the noncancerous MCFlOA cells only. The p53/maspin interaction could represent a new regulatory mechanism for the activity of p53
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Gaud, Guillaume. "Impact d'un inhibiteur de protéases à sérine, le TFPI-2, sur le microenvironnement tumoral pulmonaire." Thesis, Tours, 2009. http://www.theses.fr/2009TOUR4007/document.
Full textAbstract:
Le TFPI-2 (Tissue factor pathway inhibitor 2 est un inhibiteur de la plasmine qui peut limiter la génération de métalloprotéases (MMP) et réduire ainsi le potentiel invasif des cellules tumorales, essentiel à la formation de métastases. Deux clones cellulaires inactivés pour le TFPI-2 par une stratégie d’ARN interférence ont été réalisés (miRNA-1b et -2b). Ces clones ont un pourcentage de migration et d’invasion 2 à 3 fois supérieur au clone contrôle, associé à une plus grande adhérence à la laminine et au collagène IV et à une augmentation de l’expression des MMP-1 et –3. En cocultures directes avec des fibroblastes pulmonaires sains, une augmentation des MMP-3, -7 et–13 a été observée avec les clones miRNA-1b et -2b. En présence des milieux conditionnés des ces clones, une potentialisation de la surexpression des MMP-1, -3, -7 a été observée. Cette étude nous a permis de démontrer que le TFPI-2 a un impact sur les gènes impliqués dans le remodelage de la MEC, notamment lors des interactions entre les cellules tumorales et les cellules stromalesTFPI-2 (Tissue factor pathway inhibitor-2), an inhibitor of serine proteinases, particularly plasmin, can indirectly regulate the activation of MMPs, thus regulating ECM degradation and tumour cell invasion. Our results demonstrated that TFPI-2 silencing was associated with a 2 and 3-fold increase in invasive ability through basement membrane components, for clones NCI-H460 miRNA-1b and -2 respectively, associated with an increased in the relative attachment towards laminin and collagen IV and MMP-1 and MMP–3 overexpression. In direct coculture with fibroblasts, an increase in MMP-3, -7 and -13 transcriptional expression was observed when CCD19-Lu cells were cocultured with both miRNA-1b or -2b clones. In indirect coculture, allowing contact between fibroblasts and NCI-H460 clones conditioned media, an increase in MMP-1, -3 and -7 fibroblastic expression was measured. This study has demonstrated that TFPI-2 can influence ECM remodelling-associated genes and then act as a pericellular proteolysis inhibitor, particularly at the tumour-stroma interface
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Blisnick, Adrien. "Caractérisation de IrSPI, un inhibiteur de sérine protéase impliqué dans la prise du repas sanguin et l’infection bactérienne des tiques Ixodes ricinus." Thesis, Paris, Institut agronomique, vétérinaire et forestier de France, 2019. http://www.theses.fr/2019IAVF0005/document.
Full textAbstract:
Ixodes ricinus est l’espèce de tique la plus abondante et ayant la plus vaste répartition géographique en Europe. Elle est le vecteur de nombreux agents pathogènes d’importance en santé publique et vétérinaire. Le remplacement des acaricides générant pollution environnementale et apparition croissante de résistances requiert le développement urgent de nouvelles stratégies de lutte efficaces contre les tiques et les agents pathogènes qu’elles transmettent. La découverte de telles stratégies passe nécessairement par une meilleure connaissance des interactions entre les tiques, leurs hôtes et les agents pathogènes transmis. La salive de tique, à l’interface de ces interactions, est un fluide essentiel pour ces arthropodes et possède notamment des propriétés protéolytiques, anticoagulantes, immunomodulatrices, analgésique, et anti-inflammatoires qui permettent à la tique de réaliser ses repas sanguins extrêmement longs. Afin de comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans la transmission des agents pathogènes et pour identifier de possibles candidats vaccinaux contre I. ricinus, une étude transcriptomique comparative entre des glandes salivaires infectées et non infectées par la bactérie Bartonella henselae a été antérieurement réalisée. Le transcrit le plus surexprimé suite à cette infection était IrSPI, un inhibiteur de sérine protéase de la famille des Kunitz. Les analyses fonctionnelles par ARN interférence ont montré l’implication de ce gène dans le gorgement et de l’infection des glandes salivaires par B. henselae. Ainsi, les travaux de thèse présentés ici ont concerné l’analyse structurelle, biochimique et fonctionnelle de IrSPI en tant que molécule impliquée dans les interactions tick-hôte-pathogène. Le premier objectif était de définir la structure et la séquence du gène IrSPI mais, malheureusement, bien que nos résultats aient permit des avancés sur cette question, nous n'avons pu obtenir la totalité de sa séquence. Dans un second temps, la dynamique d’expression d’IrSPI a été évaluée au cours du gorgement et de l’infection des tiques par différents agents pathogènes, montrant que son expression est induite par le repas sanguin, par des agents transmis par la tique mais pas par Escherichia coli, bactérie non transmise. De plus, nos résultats ont montré l’expression de IrSPI dans plusieurs organes de la tique, suggérant son implication dans diverses fonctions au sein de ce vecteur. Parmi elles, la mise en évidence d'une injection, par la salive, de la protéine à l'hôte vertébré nous a permis d'envisager un rôle sur les réponses de l'hôte à la piqûre de tique. Nos résultats n’ont montré aucune implication dans la voie extrinsèque de la coagulation ni dans la fibrinolyse, ni dans l’angiogenèse. En revanche, ils ont démontré que IrSPI inhibe la prolifération des lymphocytes TCD4+ sous stimulation monogénique quand chez des lymphocytes B non stimulés IRSPI, il induit une hausse de la prolifération. De plus IrSPI a montré une action négative significative sur la production de la majorité des cytokines et chimiokines pro-inflammatoires produites par les macrophages et les splénocytes. Ainsi, IrSPI, correspond à un des composants salivaires d’I. ricinus lui permettant de moduler la réponse immune de l’hôte pour lui permettre de prélever son repas sanguin tout en favorisant la transmission des agents pathogènes. Enfin, des résultats préliminaires dans l'identification des interactants de IrSPI à la fois chez la tique et l’hôte vertébré ouvre de nombreuses voies de recherche quant à la compréhension de ses fonctionsIxodes ricinus tick species, the most abundant and widespread tick in Europe, is an important vector of pathogens affecting both animal and human health. To replace the use of acaricides that generate environmental contamination and resistances, new environmentally sustainable approaches providing broad protection against ticks and tick-borne pathogens (TBP) are urgently needed. Such development requires improved understanding of the biology of ticks and more particularly of their interactions with vertebrate hosts and TBP. Tick saliva is an essential biofluid for ticks, as its proteolytic, anticoagulant, immunomodulatory, analgesic and anti-inflammatory activities allow ticks to acquire their blood meal under optimal conditions. Moreover, injection of saliva during blood feeding represents the principal route by which TBP are transmitted to the host. To understand the molecular mechanisms involved in TBP transmission, as well as to identify putative vaccine candidates against I. ricinus, salivary glands from bacteria infected and uninfected ticks were previously compared by high throughput transcriptomics. The most up-regulated transcript following infection was IrSPI, which belongs to the Kunitz/BPTI inhibitor family. Functional analyses via RNAi knockdown experiments revealed that IrSPI enhances both blood feeding and bacterial burden in the salivary glands. This present PhD work concerns then the structural, biochemical and functional characterization of IrSPI as a molecule involved in tick-host-pathogen interactions. Our aim was first to define the structure of IrSPI gene but, unfortunately, while our results have led to progress on this issue, we have not been able to get the full sequence. Then, the dynamic of IrSPI expression was evaluated during both tick feeding and colonization of ticks by pathogens, showing that its expression is induced by blood feeding and TBP but not by Escherichia coli that is not transmitted by I. ricinus. In addition, our results shown the expression of IrSPI in several tick organs, suggesting its implication in several functions in tick physiology. Among them, the discovery of the injection of IrSPI, through the saliva, to the vertebrate host allowed us to consider a role in host responses to tick bite. Evaluation of IrSPI effect on host showed no impact on coagulation through extrinsic pathway, as determined by analysis of thrombin generation time and by fibrinolysis, or in angiogenesis. However, it inhibited the proliferation of mitogen-stimulated CD4+ lymphocytes and increased unstimulated-B cell proliferation. In addition, IrSPI also modulated cytokine production from macrophages and splenocytes, repressing significantly most of proinflammatory cytokines and chemokines. Thus, we demonstrated that IrSPI plays a role in modulating the host immune response during blood feeding. Finally, preliminary results in the identification of the protein’s interactants open many research perspectives for understanding how IrSPI acts in tick physiology and counteracts host responses to tick injury and pathogen transmission
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Bartoli, Michel. "Eléments de physiopathologie et validation d'une technique de mesure par IRM des anévrysmes de l'aorte abdominale dans un modèle expérimental murin." Thesis, Aix-Marseille, 2012. http://www.theses.fr/2012AIXM5011/document.
Full textAbstract:
Les anévrysmes de l'aorte abdominale sont retrouvés chez 5 à 9 % de la population après l'âge de 65 ans, et la rupture de ces anévrysmes cause chaque année au moins 15000 décès. Bien que la plupart soient petits et asymptomatiques, typiquement leur diamètre s'accroît avec le temps et environ 60% finissent par nécessiter une réparation chirurgicale. A ce jour, aucune thérapeutique ne permet de ralentir ou de stopper la croissance des petits anévrysmes. La paroi anévrysmale est caractérisée par une inflammation chronique et un remodelage du tissu conjonctif associant synthèse et destruction qui conduisent à l'appauvrissement de la paroi en élastine. Tous ces éléments sont présents dans le modèle d'anévrysme à l'élastase chez la souris. Alors que de nombreuses données ont été accumulées sur l'implication des metalloprotéinases dans la dégradation de la matrice extracellulaire, le rôle des serines protéases a reçu beaucoup moins d'intérêt. En utilisant le modèle d'anévrysme à l'élastase chez les souris cathepsine S et cathepsine C knockout, nous avons montré que leur présence était indispensable au développement anévrysmal. Nous avons également montré qu'il était possible de bloquer le modèle au moyen d'un inhibiteur des cathepsines, l'E64. L'ensemble de nos travaux semblent montrer que les cathepsines jouent un rôle prépondérant dans la phase d'initiation de la réaction inflammatoire et que les cathepsines sont une voie de recherche potentielle pour le développement de traitements médicamenteux pouvant ralentir la croissance des AAAsAbdominal aortic aneurysms occur in 5-9% of the population over the age of 65, and rupture of these aneurysms cause every year at least 15,000 deaths. Although most AAAs are small and asymptomatic, their diameter typically increases over time and about 60% eventually require surgical repair. To date, no therapy can slow or stop the growth of small aneurysms. The aneurysmal wall is characterized by chronic inflammation and tissue remodeling involving synthesis and destruction that leads to the loss of elastin. All these elements are present in the elastase model of aneurysm in mice. While many data have been accumulated on the involvement of metalloproteinases in the degradation of the extracellular matrix, the role of serine proteases has received much less interest. Using this model in mice cathepsin S and cathepsin C knockout, we have shown that their presence was essential for aneurysmal development. We also showed that it was possible to block the model using E64, an inhibitor of cathepsins. Taken together these data suggest that cathepsins play a role in the initiation of the inflammatory reaction and that cathepsins are a potential way of research for the development of medication which could slow down the AAAs growth. In order to block by pharmacological means the model, we developed the possibility to infuse doxycyline directly on the aneurysm. These studies showed that it was possible to block the model with an infusion of local doxycycline without blood levels of doxycycline. This experimental work opens the way for the development of drug-eluting stent graft, i.e. a stent graft able to infuse an active product which can stabilize the wall of the aneurysm
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Seren, Seda. "Ciblage pharmacologique de la cathepsine C dans une nouvelle approche thérapeutique de la granulomatose avec polyangéite." Thesis, Tours, 2019. http://www.theses.fr/2019TOUR3301.
Full textAbstract:
Les protéases à serine du neutrophile (PSN), maturées par une protéase à cystéine nommée la cathepsine C (CatC), sont des acteurs majeurs dans la dégradation tissulaire et la réponse immunitaire médiées par les polynucléaires neutrophiles (PNN). La protéinase 3 (PR3), l’une des PSN, est l’auto-antigène majeur de la granulomatose avec polyangéite (GPA) qui est une vascularite systémique auto-immune. Le ciblage pharmacologique des PSN par des inhibiteurs est une approche intéressante pour le traitement de la GPA mais également pour toutes les maladies inflammatoires chroniques impliquant les PSN mais reste sans résultat jusqu’à maintenant. L’inactivation génétique de la CatC chez les patients atteints du syndrome de Papillon-Lefèvre est associée à une élimination presque totale des PSN. Au cours de ce travail de thèse, nous avons ciblé la CatC à l’aide d’un inhibiteur de type nitrile dans un modèle de cellules souches différenciées en PNN et nous avons obtenu une élimination presque complète de la PR3 intracellulaire et membranaire. Dans un deuxième temps, nous avons identifié la cathepsine S (CatS) comme la protéase activatrice majeure de la CatC dans les précurseurs neutrophiliques. Nous avons donc ciblé la CatS avec un inhibiteur de type nitrile pendant la différentiation des PNN ce qui a diminué significativement les taux de PSN. L’inhibition pharmacologique de la CatC pourrait donc éliminer l’auto- antigène de la GPA et constituer une nouvelle stratégie thérapeutique innovante pour contrôler l’auto-immunité et l’inflammation associée dans cette pathologie. Une combinaison d’inhibiteurs de CatS et de CatC pourrait s’avérer plus efficace pour éliminer la PR3 ainsi que les PSN pro-inflammatoires dans la GPA et dans d’autres pathologies inflammatoires chroniquesNeutrophil serine proteases (NSP), maturated by cathepsin C (CatC), are the major players in neutrophil-mediated tissue degradation and immune response. Proteinase 3 (PR3) is the main target antigen of anti-neutrophil cytoplasmic auto-antibodies (ANCA) in granulomatosis with polyangiitis (GPA), a systemic small-vessel vasculitis. The pharmacological targeting of NSP by proteinase inhibitors is promising approach for GPA treatment but also for all chronic inflammatory diseases involving NSP but remains unsuccessful until now. The genetic inactivation of CatC in patients with Papillon-Lefèvre syndrome is associated with almost complete elimination of NSP in blood neutrophils. In this work, we targeted CatC using a nitrile inhibitor in neutrophil generated from umbilical cord stem cells and we observed strong reductions in intracellular and membrane- bound PR3. Among the five-proCatC activating proteases, we found CatS in neutrophilic precursor cells and in mature neutrophils. Pharmacological inhibition of CatS in neutrophils generated from stem cells resulted in significant reduction of cellular NSP. The pharmacological inhibition of CatC could help eliminate the auto- antigen of GPA and constitute a novel therapeutic strategy to reduce auto-immune inflammation in this pathology. Pharmacological targeting of both CatS and CatC might help to efficient inhibition and elimination of NSP in GPA and in chronic inflammatory diseases
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Haj, Hassan Maya. "Caractérisation de protéines bovines potentiellement impliquées dans la reproduction : GPA2, GPB5, PDI, PEBP et Ubiquitine." Thesis, Tours, 2011. http://www.theses.fr/2011TOUR4037/document.
Full textAbstract:
Nous avons caractérisé cinq protéines bovines qui sont potentiellement impliquées dans la reproduction.Un travail de clonage a été initié qui permettra à terme de purifier les GPA2 et GPB5 recombinantes puis naturelles pour étudier leurs structures. GPA2 et GPB5 sont considérés comme les ancêtres moléculaires des sous-unités α et β des hormones glycoprotéiques. Nous avons montré la relative fragilité thermique de la structure quaternaire de la FSH bovine par rapport aux FSH ovine et humaine et nous avons étudié les propriétés enzymatiques de la PDI (Protein Disulfide Isomerase) en préalable à l’étude de l’activité PDI de GPA2/GPB5. Nous avons aussi purifié la phosphatidyl-ethanolamine-binding protein (PEBP) et l’ubiquitine testiculaires par chromatographie hydrophobe à très haute concentration de sulfate d’ammonium. A partir de la PEBP purifiée, on a produit des anticorps spécifiques chez le lapin qui nous ont permis d’être les premiers à développer un dosage ELISA fiable pour cette protéineWe characterized five bovine proteins that are potentially involved in reproduction. We started with the cloning of gpa2 and gpb5 cDNAs in order to eventually purify recombinant and natural GPA2 and GPB5 to study their possible quaternary structure. GPA2 and GPB5 are the evolutionary ancestors of Glycoprotein hormones α and β subunits respectively. Meanwhile, we have shown the relative quaternary structure fragility of bovine FSH compared to human and sheep FSH. We also studied the effect of endocrine disruptors on PDI (Protein Disulfide Isomerase) before addressing GPA2/GPB5 PDI activity of GPA2/GPB5 once purified.We succeeded to purify the phosphatidyl-ethanolamine-binding protein (PEBP) and ubiquitin from bovine testis by hydrophobic interaction chromatography at very high ammonium sulfate concentration and we produced specific antibodies (anti-PEBP) in rabbits that allowed us to be the first to develop a reliable Elisa assay for this protein
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Gravel, Emilie. "Hepsine et matriptase activent l’hémagglutinine des virus influenza A et B et leur inhibition représente une nouvelle stratégie thérapeutique n’entraînant pas le développement de résistance." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2016. http://hdl.handle.net/11143/9464.
Full textAbstract:
Résumé: Chaque année, les épidémies saisonnières d’influenza causent de 3 à 5 millions de cas sévères de maladie, entraînant entre 250 000 et 500 000 décès mondialement. Seulement deux classes d’antiviraux sont actuellement commercialisées pour traiter cette infection respiratoire : les inhibiteurs de la neuraminidase, tels que l’oseltamivir (Tamiflu) et les inhibiteurs du canal ionique M2 (adamantanes). Toutefois, leur utilisation est limitée par l’apparition rapide de résistance virale. Il est donc d’un grand intérêt de développer de nouvelles stratégies thérapeutiques pour le traitement de l’influenza. Le virus influenza dépend de l’activation de sa protéine de surface hémagglutinine (HA) pour être infectieux. L’activation a lieu par clivage protéolytique au sein d’une séquence d’acides aminés conservée. Ce clivage doit être effectué par une enzyme de l’hôte, étant donné que le génome du virus ne code pour aucune protéase. Pour les virus infectant l’humain, plusieurs études ont montré le potentiel de protéases à sérine transmembranaires de type II (TTSP) à promouvoir la réplication virale : TMPRSS2, TMPRSS4, HAT, MSPL, Desc1 et matriptase, identifiée récemment par notre équipe (Beaulieu, Gravel et al., 2013), activent l’HA des virus influenza A (principalement H1N1 et H3N2). Toutefois, il existe peu d’information sur le clivage de l’HA des virus influenza B, et seulement TMPRSS2 et HAT ont été identifiées comme étant capables d’activer ce type de virus. Les travaux de ce projet de maîtrise visaient à identifier d’autres TTSP pouvant activer l’HA de l’influenza B. L’efficacité de clivage par la matriptase, hepsine, HAT et Desc1 a été étudiée et comparée entre ces TTSP. Ces quatre protéases s’avèrent capables de cliver l’HA de l’influenza B in vitro. Cependant, seul le clivage par matriptase, hepsine et HAT promeut la réplication virale. De plus, ces TTSP peuvent aussi supporter la réplication de virus influenza A. Ainsi, l’utilisation d’un inhibiteur de TTSP, développé en collaboration avec notre laboratoire, permet de bloquer significativement la réplication virale dans les cellules épithéliales bronchiques humaines Calu-3. Cet inhibiteur se lie de façon covalente et lentement réversible au site actif de la TTSP par un mécanisme slow tight-binding. Puisque cet inhibiteur cible une composante de la cellule hôte, et non une protéine virale, il n’entraîne pas le développement de résistance après 15 passages des virus en présence de l’inhibiteur dans les cellules Calu-3. L’inhibition des TTSP activatrices d’HA dans le système respiratoire humain représente donc une nouvelle stratégie thérapeutique pouvant mener au développement d’antiviraux efficaces contre l’influenza.Abstract: Seasonal influenza epidemics cause between 3 and 5 millions severe cases of disease, leading to 250 000 to 500 000 deaths worldwide. Only two classes of drugs are currently available to treat influenza infections: neuraminidase inhibitors, such as oseltamivir (Tamiflu) and M2 channel inhibitors (adamantanes). However, the use of these antivirals is restricted by rapid emergence of viral resistance. It is therefore of great interest to develop new therapeutic strategies for the treatment of influenza disease. The influenza virus requires activation of its surface protein hemagglutinin (HA) to become infectious. This activation is achieved by proteolytic cleavage in a highly conserved amino acid sequence of the protein. Host cell proteases are responsible for this cleavage since the viral genome doesn’t encode any protease. For viruses that infect humans, many studies have shown the potential of type II transmembrane serine proteases (TTSP) to promote viral replication: TMPRSS2, TMPRSS4, HAT, MSPL, Desc1 and matriptase, recently identified by our team (Beaulieu, Gravel et al., 2013), activate HA of influenza A viruses (mainly H1N1 and H3N2). However, little is known about cleavage of influenza B virus HA, and only TMPRSS2 and HAT have been identified as being capable of activating this type of virus. This project aimed to identify other TTSPs able to activate influenza B HA. Cleavage efficacies of matriptase, hepsin, HAT and Desc1 were studied and compared. These four proteases were shown to be able to cleave influenza B HA using in vitro assays. However, only cleavage by matriptase, hepsin and HAT promoted viral replication. Moreover, these TTSPs also supported the replication of influenza A viruses. Thus, the use of a slow, tight-binding inhibitor (developed in collaboration with our laboratory) that binds to the TTSP active site, forming a covalent and reversible bond, significantly blocked viral replication in human bronchial epithelial Calu-3 cells. Since this inhibitor targets a host cell component, instead of a viral protein, viruses did not develop resistance after 15 passages in presence of the inhibitor in Calu-3 cells. Thus, inhibition of HA-activating TTSPs in the human respiratory tract represents a novel therapeutic strategy against influenza.
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Soualmia, Feryel. "Modulateurs synthétiques de la kallikréine 6, protéase à sérine impliquée dans les maladies neurodégénératives : identification, mécanisme d’action et validation de concept." Electronic Thesis or Diss., Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066755.
Full textAbstract:
La kallikréine humaine 6 (hK6) ou neurosine est la protéase à sérine la plus abondante du système nerveux central (SNC). Sa dualité de fonction dans les processus neurodégénératifs font d’elle une cible privilégiée pour la conception de modulateurs pharmacologiques de son activité. Cependant, il existe aujourd’hui très peu de composés répondant à cette attente. Aussi, le principal objectif de ces travaux de thèse a consisté à identifier des inhibiteurs et activateurs organiques de faible poids moléculaire (<500 Da) de la hK6, compatibles avec un développement clinique. L’étude de la hK6 sous ses différents aspects a permis d’établir son profil catalytique et dynamique et de mettre en évidence son rôle anti-agrégatif de l’α-synucléine endogène. L’exploration de diverses chimiothèques regroupant près de 1 200 molécules a permis d’identifier des molécules touches (hits) qui ont fait l’objet d’études mécanistiques approfondies. Des évaluations par modélisation moléculaire ont également été réalisées afin d’établir les bases structurales de la modulation et un profil de sélectivité de ces molécules vis-à-vis d’autres protéases à sérine concurrentes a pu être établi. Pour la première fois, un modulateur bimodal ainsi qu’un activateur, tous deux hautement sélectifs de la hK6, ont été identifiés et un modèle de régulation allostérique a pu être proposé. Plusieurs inhibiteurs originaux possédant un bon profil de sélectivité vis-à-vis de la hK6 ont également été sélectionnés. Ces molécules ne présentent pas d’effet cytotoxique sur des cultures primaires de neurones. Les composés identifiés au cours de cette thèse constituent ainsi une excellente base pour le développement d’agents pharmacologiques à visée neuroprotectrice et anti-inflammatoire et ouvre la voie à l’exploration de nouveaux sites allostériques au sein de cette enzyme et des protéases à sérine tryptiquesThe human kallikrein 6 (hK6) or neurosin is the most abundant serine protease of the central nervous system (CNS). Its dual implication in neurodegenerative processes makes it an emerging target for the design of pharmacological modulators of its activity. Yet today there are only very few compounds that meet this expectation. Thus, the main aim of these thesis was to identify organic low molecular weight (<500 Da) inhibitors and activators of hK6 compatible with clinical development. The study ofhK6 through various aspects has established its catalytic and dynamic profile and highlights its anti-aggregative role of endogenous α-synuclein. Exploring the diverse libraries comprising nearly 1 200molecules led to the identification of key compounds (hits) that have been subjected to extensive mechanistic studies. Assessments by molecular modeling were also carried out to establish the structural basis for activity modulation and selectivity profiling toward competing serine proteases has also been established. For the first time, a bimodal modulator as well as an activator, both highly selective to hK6, were identified and an allosteric regulatory model was proposed. Several original inhibitors having a good selectivity profile toward hK6 were also selected. Furthermore, these molecules do not exhibit any cytotoxic effect on primary neuronal cultures. The compounds identified in this thesis provide an excellent basis for the development of pharmacological agents with neuroprotective and anti-inflammatory properties and pave the way for the exploration of new allosteric sites in hK6 and tryptic serine proteases in general