Dissertations / Theses on the topic 'Recolección de muestras de sangre'

La Revisión Crítica Titulada: EFICACIA DE LOS MÉTODOS NO FARMACOLÓGICAS PARA DISMINUIR EL DOLOR OCASIONADO POR VENOPUNCIÓN EN EL PACIENTE PEDIATRICO DE EMERGENCIA, cuyo objetivo fue identificar la eficacia de los métodos no farmacológicos para disminuir el dolor en niños. Dicha investigación se justifica porque los procedimientos invasivos relacionados con agujas, como la venopunción, son una de las principales causas de dolor e intranquilidad en los pacientes pediátricos cuando son atendidos en urgencias. La metodología es Investigación Secundaria, Enfermería Basada en la Evidencia, (búsqueda sistemática de una respuesta, basada en la investigación), en la que se planteó la pregunta ¿Qué estrategias no farmacológicos se pueden emplear para el manejo del dolor pediátrico en venopunción ? y su viabilidad con el esquema de PICOT, la estrategia de búsqueda de datos consultados fue a través de las bases de MEBLINE , DIRECT SCIENCIE, GOOGLE ,BVS SALUD ,Se encontraron 07 artículos de investigación relacionado al tema planteado (revisiones sistemáticas, ensayos aleatorios, investigaciones cuasi experimentales) . Se aplicaron la Guía de Validez y utilidad aparentes de Gálvez Toro a los 07 artículos encontrados. De los cuales se seleccionó 01 artículo y para su evaluación se utilizó la plantilla de ASTETE, la investigación presenta un nivel de evidencia II3 y su grado de recomendación es B. El artículo seleccionado dio respuesta a la pregunta de investigación se puede usar medidas no farmacológicas como dispositivo de vibración más frio y distracción dirigida que ayudan a disminuir el dolor durante la venopunción.

La toma de muestras de sangre es un proceso que se ha quedado relativamente estancado en el aspecto tecnológico en comparación a otros procedimientos médicos tales como para cirugías o procesamientos de imágenes (resonancia magnética, radiografías, entre otras). El éxito de una venopunción recae completamente en la habilidad y experiencia del tecnólogo médico. Incluso los más experimentados pueden fallar resultando en la incomodidad, daño y dolor provocado al paciente. A fin de solventar este problema, se ha diseñado en el presente trabajo una propuesta para una realización precisa y exacta del procedimiento de punción de las venas, mediante el uso de actuadores en sistemas que ofrezcan una resolución adecuada y el uso de sensores que permitan una captura y procesamiento de imágenes adecuada. Además, otro aspecto que se le agrega al diseño será el rotulado de las muestras obtenidas, dado que en la actualidad aún se generan confusiones por intercambio de muestras, lo cual solo perjudica aún más al paciente. El resultado es un robot con múltiples grados de libertad y diversos subsistemas con sus correspondientes actuadores y sensores. Estos subsistemas son: de punción, de almacenamiento de tubos y de rotulado. Esta división en subsistemas se da, ya que se requerirá que el sistema realice varias funciones con el fin de obtener las muestras rotuladas.
Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
La leptospirosis es una zoonosis re-emergente de distribución mundial, producida por bacterias patógenas del genero Leptospira. El cuadro clínico en humanos varía desde asintomático hasta letal. La transmisión de la bacteria a un hospededero susceptible se realiza por contacto directo o indirecto con orina de animales infectados. Dentro de la epidemiología los cursos de agua cumplen un rol significativo, ya que la bacteria es hidrofílica, permaneciendo viable en agua por largos períodos de tiempo. Los animales de vida silvestre son un importante reservorio, siendo los roedores el caso más estudiado, también se ha evidenciado transporte renal y largos periodos de leptospiruria, en mustélidos, zorrillos y mapaches. Al respecto estudios recientes en Francia han revelado 86% de prevalencia de anticuerpos contra Leptospira, y un porte renal de un 23%, por pruebas de PCR, en visón americano (Neovison vison). Con el fin de detectar Leptospiras patógenas en visones americanos de vida libre, introducidos en el sur de Chile, se tomaron muestras de sangre y riñón desde animales capturados en 3 regiones distintas del país (Los Ríos, Los Lagos y Aysén). Se detectaron Leptospiras patógenas mediante PCR en 29 de 57 individuos. Las muestras de riñón presentaron mayores resultados positivos en proporción a la cantidad de muestras analizadas. Las regiones de los Lagos y de Aysén obtuvieron mayores tasas de captura y alto porcentaje de individuos positivos. Neovison vison presentó un alto porcentaje de portación de Leptospira (50%), pudiendo ser un importante agente diseminador de esta bacteria. Debido a su capacidad invasiva de ambientes naturales, y a la interacción con especies domésticas y silvestres nativas se deben realizar estudios que lo confirmen
Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1100139

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
El Virus Distemper Canino (VDC) es el agente causal de una grave enfermedad multisistémica de perros y otras especies del orden Carnívora. Distemper Canino (DC) se presenta como una enfermedad altamente contagiosa, que puede alcanzar una elevada morbilidad y mortalidad. El amplio espectro de signos clínicos dificulta el diagnóstico clínico de la enfermedad y hace necesario la confirmación a través de exámenes de laboratorio. La detección molecular de VDC presenta ventajas en el diagnóstico de la enfermedad. En el presente trabajo se implementó la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa –versión anidada- previa trascripción inversa (n-RT-PCR) para la detección del gen de la fosfoproteína viral (gen P). Como controles positivos se utilizaron RNA proveniente de cepas vacunales y de muestras positivas a otros genes de VDC mediante RT-PCR. Como controles negativos se utilizó RNA de muestras de perros sin signos clínicos de la enfermedad y como control de reactivos agua libre de nucleasas. Posteriormente, se utilizó la técnica en 10 muestras de campo de perros con sospecha clínica de la enfermedad, detectándose el genoma viral en el 100% de las muestras analizadas, generando una banda cercana a los 430 pb, correspondiente a la secuencia blanco buscada del gen de la fosfoproteína de VDC. Los productos de amplificación se caracterizaron por su gran intensidad y nitidez, no observándose bandas de amplificación inespecíficas. Finalmente, se realizó la secuenciación de los productos obtenidos del n-RT-PCR, obteniendo un elevado porcentaje de identidad nucleotídica respecto a las secuencias nucleotídicas del gen P almacenadas en el GenBank®. Esto permitió establecer que el n-RT-PCR implementado en esta Memoria de Título permite la detección de VDC. La implementación de esta técnica permitirá realizar la detección antemortem del virus y, por lo tanto, facilitar el diagnóstico y tratamiento temprano de la enfermedad
Proyecto FIV 121014019102010

En el presente estudio se buscó evaluar el efecto coagulante de la tela de la araña Scytodes longipes aplicados en muestra de sangre humana. MÉTODO: Estudio experimental de controles paralelos. La muestra de sangre fue obtenida de un paciente joven sano. La tela de araña fue producida por un grupo de arañas cazadas y criadas en semicautiverio durante 1 año. La tela se repartió en los grupos: Peso 1 (3-4 mg); Peso 2 (5-6 mg) y Peso 3 (7-8 mg) que fueron desinfectados y esterilizados. Se evaluó el efecto coagulante mediante la medición del Tiempo de Coagulación y el Tiempo de Protrombina. RESULTADOS: El análisis estadístico usado fue la prueba de Bonferroni para determinar entre qué grupos de estudio había diferencias significativas. La tela de la araña Scytodes longipes posee efecto coagulante mostrando una reducción significativa de Tiempo de Coagulación y Tiempo de Protrombina (P < 0.05). En cuanto a la comparación del efecto coagulante entre los grupos de peso, se encontró una diferencia que no fue estadísticamente significativa. Sin embargo en el Tiempo de Protrombina, se halló que a mayor peso, el efecto coagulante mejora significativamente (P < 0.05).
The present study sought to evaluate the coagulant effect of spider silk Scytodes longipes applied in human blood sample. METHODS: Experimental study of parallel controls. The blood sample was obtained from a healthy young patient. The silk was produced by a group of spiders hunted and bred in semi-captivity for 1 year. The fabric is partitioned into groups: Weight 1 (3-4 mg); Weight 2 (5-6 mg) and Weight 3 (7-8 mg), wich were disinfected and sterilized. Coagulant effect was evaluated by measuring the Coagulation Time and Prothrombin Time. RESULTS: The statistical analysis used was the Bonferroni test to determine between study groups had significant difference. The spider silk Scytodes longipes has coagulating effect showing a significant reduction in Coagulation Time and Prothrombin Time (P <0.05). As for the comparison between groups coagulating effect weight, there is a difference that was not found statistically significant. However in the Prothrombin Time, it was found that the higher the weight, the coagulant effect is significantly improved (P <0.05).
Tesis

Antecedentes: El glioblastoma (GB) es el glioma maligno más frecuente. Mediante el tratamiento multidisciplinar con cirugía, radio y quimioterapia se consigue una supervivencia mediana de 15 meses. La metilación del promotor del gen O-6-Metilguanina-DNA-metiltransferasa (MGMT) es un conocido factor pronóstico y predictivo de respuesta a temozolomida en estos tumores, pero su análisis de manera repetida es complejo. Las rebiopsias cerebrales comportan un riesgo para el paciente, además, las muestras de tejido obtenidas pueden no representar la heterogeneidad tumoral. Los avances en el uso de biomarcadores en biopsia líquida la están posicionando como una solución a estos inconvenientes. La determinación de la metilación de MGMT se puede llevar a cabo con diversas técnicas, siendo la PCR específica de metilación (MSP) la más utilizada, tanto en ensayos clínicos como en la práctica diaria. La pirosecuenciación es una técnica sencilla y con resultados objetivos que se ha demostrado útil para el análisis de esta alteración epigenética. En este proyecto, hemos determinado el estado de metilación del promotor de MGMT, en muestras de tejido y en ctDNA de muestras sanguíneas, utilizando las técnicas de MSP y pirosecuenciación. Metodología: Se analizó la metilación de MGMT en tejido y sangre de pacientes con GB. 81 muestras de tejido y 83 de sangre, fueron valoradas mediante MSP (CpG 74-78 y 84-87), mientras que 78 de tejido, 56 de suero y 55 de plasma, lo fueron mediante pirosecuenciación (CpG 74-78). Para la pirosecuenciación, se consideraron dos puntos de corte con relevancia clínica: aquel que dividía la cohorte en dos grupos según la máxima diferencia en supervivencia global, llamado “mejor punto de corte”, y el porcentaje mínimo a partir del cual la metilación ya tenía un impacto clínico, llamado “punto de corte mínimo”. Ambos puntos de corte tenían significación estadística. Resultados: El “mejor punto de corte” en tejido fue de 11,4%, mientras que el “punto de corte mínimo” fue de 5%. El 48,6% de casos fueron positivos para la metilación en tejido, mediante MSP y el 55,7% lo fue por pirosecuenciación. Ocho casos no metilados por MSP, se detectaron metilados por pirosecuenciación, mientras que en 3 muestras pasó a la inversa. Asimismo, 4 muestras no valorables por MSP tuvieron resultado por pirosecuenciación. En plasma, el “mejor punto de corte” para la pirosecuenciación fue 3,4%. 14,9% casos fueron metilados por MSP, mientras que el 28,6% lo fue por pirosecuenciación. El “mejor punto de corte” en suero fue de 1,6%, un valor inferior a las muestras de DNA no metilado comercial y sin correlación significativa con la supervivencia global. Por este motivo, el suero se descartó para análisis adicionales. Conclusiones: La MSP y la pirosecuenciación, una vez definido el punto de corte, son dos métodos válidos para la determinación de la metilación del promotor del gen de MGMT, en tejido de pacientes con GB. Aunque la concordancia entre ellos no es perfecta, ambos ofrecen resultados que se correlacionan con la supervivencia y la respuesta al tratamiento con agentes alquilantes. Por lo tanto, ambas técnicas son útiles para detectar pacientes que podrían beneficiarse de dichos tratamiento. Pese a que, en nuestro proyecto, se ha demostrado la presencia de ctDNA en sangre y plasma de pacientes con GB, la sensibilidad para la detección de la metilación de MGMT, con los dos métodos, es baja. El suero no es una buena fuente para la determinación de metilación de MGMT en ctDNA.
Background: Glioblastoma (GB) is the most frequent malignant glioma. Methyl Guanine Methyl Transferase (MGMT) promoter methylation is a known prognostic and predictive factor of response to temozolomide in these tumors. However, repeating MGMT analysis is not always feasible. Brain rebiopsies involve risk to the patient. Moreover, tissue biopsies could not always represent the tumor heterogeneity. Advances in the use of biomarkers in liquid biopsy are positioning it as a solution to these disadvantages. MGMT methylation status analysis can be carried out through several techniques, being the methylation-specific PCR (MSP) the most used. Pyrosequencing is a simple method that has proved useful for this analysis. In this project, we have determined the MGMT promoter methylation status, in tissue samples and in ctDNA from blood samples of GB patients, by MSP and pyrosequencing. Methodology: MGMT methylation was analyzed in tissue and blood from patients diagnosed with GB. We used MSP (CpG 74-78 and 84-87) in 81 tissue samples and 83 blood samples, and pyrosequencing (CpG 74-78) in 78 tissue, 56 serum and 55 plasma samples. For pyrosequencing, two cut-off points with clinical relevance were considered: one that divided the cohort into two groups according to the maximum difference in overall survival, called "best cut-off point", and the minimum percentage from which the methylation had already a clinical impact, called the "minimum cut-off point". Both were statistical significant. Results: The "best cut-off point" in tissue was 11.4%, while the "minimum cut-off point" was 5%. The 48.6% of cases were positive for methylation in tissue, by MSP, and 55.7% by pyrosequencing. Eight unmethylated cases by MSP resulted methylated by pyrosequencing, whereas in 3 samples the results were reversed. Similarly, 4 samples that were not assessed by MSP had a result by pyrosequencing. For plasma samples, the "best cut-off" for pyrosequencing was 3.4%. 14.9% were methylated by MSP, while 28.6% were methylated by pyrosequencing. The "best cut-off" in serum was 1.6%, a value below the commercial unmethylated DNA, and it had no significant correlation with overall survival. For this reason, the serum was discarded for further analysis. Conclusions: MSP and pyrosequencing, once the cut-off point is defined, are two valid methods for the MGMT methylation status assay, in tissue of GB patients. Even thought the agreement between them is not perfect, both results correlate with survival and response to treatment with alkylating agents. Therefore, both techniques are useful. Although our project has shown the presence of ctDNA in blood and plasma of GB patients, the sensitivity to determine MGMT methylation, by either method, is low. The serum does not represent a good source to assess MGMT methytation in ctDNA.

Documento de tesis de licenciatura
Dentro del ámbito forense se han buscado técnicas alternativas a los métodos cromatográficos y espectroscópicos tradicionales para realizar el tamizaje de drogas de abuso en matrices biológicas. Las técnicas que se han seleccionado preferentemente son las pruebas inmunoenzimáticas, que demuestran tener buena sensibilidad, son rápidas, fáciles de realizar, los reactivos que emplean presentan vida media prolongada y son económicos. Algunas de estas técnicas, han sido desarrolladas para el análisis en orina, lo cual genera inconvenientes para el examen toxicológico post-mortem, ya que en su mayoría se obtiene muestra sanguínea. Estas circunstancias han llevado a adaptar los métodos de inmunoensayo, que fueron diseñados principalmente para determinaciones de drogas en orina, a la detección de drogas en otros fluidos y tejidos corporales. El objetivo de esta investigación fue adecuar y validar el inmunoensayo EMIT, desarrollado para la identificación de drogas de abuso (tetrahidrocannabinol, cocaína, benzodiacepinas y anfetamina) en orina, para usarlo en muestras de sangre post-mortem, determinando los parámetros establecidos por las “Directrices para la validación de métodos analíticos y la calibración del equipo utilizado para el análisis de drogas ilícitas en materiales incautados y especímenes biológicos de la Oficina de las Naciones Unidas Contra la Droga y el Delito” (ONUDC). Se realizaron los estudios en muestras sanguíneas que de acuerdo con su historial se encuentran libres de las drogas de interés. Para la determinación de cada parámetro de validación se fortificó la muestra por un periodo de 24 horas en refrigeración, con una solución de la droga de interés de concentración conocida, se obtuvo plasma y se analizó en el equipo EMIT. Los resultados muestran que el método presenta buena selectividad, ya que no se encuentran sustancias que alteren los resultados. Con un límite de detección confiable establecido por el equipo. El método presenta buena repetibilidad y reproducibilidad ya que los valores medidos entre el día 1 y día 2 no presentan diferencias significativas y el Coeficiente de Variación (CV) es menor al 20%. Se evaluó la estabilidad de la muestra, obteniendo que para THC (tetrahidrocannabinol) y benzodiacepinas existe buena estabilidad en un periodo de 7 días en condiciones de refrigeración, mientras que para cocaína y anfetaminas su estabilidad es menor ya que el incremento de variabilidad de resultados se percibe a partir del día 2. En general se cumplen con las directrices establecidas por la UNODC, por lo que se establece que el método de inmunoensayo EMIT es viable para analizar muestras de sangre como alternativa a las muestras de orina.
Fiscalía General de Justicia del Estado de México, Coordinación General de Servicios Periciales, Departamento de Toxicología Forense

Publicación a texto completo no autorizada por el autor
Identifica genéticamente a especies de Plasmodium en base al gen que codifica la subunidad 18S ARNr en muestras de sangre de primates no humanos en cautiverio. El diseño de este estudio es observacional y transversal. Esta investigación es un estudio secundario en el que se usa muestras biológicas e información de un grupo de primates no humanos entre adultos, jóvenes y crías de ambos sexos pertenecientes al género Saimiri y Lagothrix evaluados durante los años 2011 y 2012 en algunas ciudades de Perú. El análisis es realizado mediante el software MEGA v6.0 y el programa Excel. Se realiza análisis descriptivo de las variables de las pruebas ensayadas usando los siguientes métodos: evaluación microscópica por gota gruesa, técnicas moleculares de PCR para confirmar la infección y secuenciamiento del gen 18S ARNr. Se encuentra que el 7.05 % (6/85) de primates no humanos están infectados con Plasmodium spp. En base al secuenciamiento y análisis filogenético molecular del gen 18S ARNr se observa infección por Plasmodium brasilianum en una muestra de primate Lagothrix lagotricha y por Plasmodium malariae en cuatro muestras de primates Saimiri sciureus. Concluye que los parásitos identificados en las muestras de estudio son Plasmodium malariae y Plasmodium brasilianum, este último previamente reportado como especie que infecta a primates no humanos del Nuevo Mundo.
Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
La brucelosis canina es una enfermedad zoonótica causada por Brucella canis, la cual produce signos reproductivos como abortos en hembras e infertilidad en machos, siendo transmitida al hombre a través de contacto con perras que hayan parido o abortado recientemente o por exposición a la bacteria en laboratorios. La enfermedad actualmente presenta tres puntos críticos y que afectan directamente su control y prevención: i) no existen vacunas comerciales, ii) no hay tratamientos antimicrobianos exitosos y iii) existen problemas en el diagnóstico por cultivo tradicional debido a su lento crecimiento e intermitencia en la bacteremia, y problemas en la sensibilidad y especificidad de las técnicas serológicas en el diagnóstico indirecto. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) surge entonces como una opción de diagnóstico por ser altamente sensible y específica, otorgando además una pesquisa rápida. En el presente estudio se estableció la sensibilidad analítica de un protocolo de PCR convencional con partidores diseñados en el país en cultivo puro, muestras de sangre y orina para el diagnóstico de B. canis. La sensibilidad analítica en cultivo puro fue de 22,24 fg/μL de DNA y en muestras de sangre y orina experimentalmente contaminadas de 4,4x100 UFC/mL. La elevada sensibilidad analítica determinada sugiere que este protocolo puede ser utilizado como una alternativa de alto valor para el diagnóstico de B. canis en las muestras mencionadas, siendo importante continuar con esta línea de investigación, orientando estos hacia un estudio más detallado de especificidad y estudios de sensibilidad analítica en otras matrices.
Canine brucellosis is a zoonotic disease caused by Brucella canis, which produces reproductive signs such as abortion in bitches and infertility in dogs. These being transmitted to humans by contact with bitches that have recently given birth or aborted or by exposure to the bacteria in laboratories. Currently, the disease has three critical points that, to date, have not been resolved and that directly affect the control and prevention of this: i) there are no commercial vaccines, ii) no successful antimicrobial treatments and iii) problems in diagnosis; existing both difficulties to isolate the agent because of its slow growth and intermittent bacteremia in bacterial culture, and sensitivity and specificity problems in the numerous serological techniques. The PCR, thus, emerges as a diagnostic option due to its highly sensitive and specific nature, providing a fast diagnosis as a result. In the present study, the analytical sensitivity of conventional PCR protocol with primers designed in the country in pure culture, blood and urine samples for diagnosis of B. canis was established. The analytical sensitivity in pure culture was 22,24 fg/μL of DNA, and in experimentally contaminated blood and urine samples 4,4x100 UFC/mL. Given the high analytical sensitivity suggests that this protocol can be used as a highly valuable alternative for the diagnosis of this disease in the samples mentioned, understanding - consequently -, the major importance to continue this line of research, orienting these to a more detailed study of specificity, and analytical sensitivity studies in other matrices.

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico
No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas
El Servicio Médico Legal (SML) de Santiago es una entidad pública dependiente del Ministerio de Justicia, cuya misión es asesorar a los Tribunales de Justicia y al Ministerio Público, en materias médico-legales, a través de la emisión de informes periciales, tanatológicos, psiquiátricos, clínicos, sexológicos y de laboratorio. El trabajo que a continuación se presenta, nace de la necesidad de la Unidad de Alcoholemia del SML, por identificar y cuantificar alcoholes de putrefacción, ya que es sabido que no todo el alcohol encontrado en una alcoholemia postmortem es de origen exógeno, sino que muchas veces es de origen endógeno. Para ello se realizaron curvas de calibración para n-propanol, alcohol que normalmente no existe en el cuerpo humano y que está asociado a la producción de etanol postmortem. Para el análisis se utilizó un cromatógrafo gaseoso con sistema Head-Space, con autosampler, detector FID y procesador de datos. Las concentraciones seleccionadas para estas curvas están de acuerdo a la bibliografía encontrada y que son: 0.01, 0.02, 0.03, 0.05, 0.08, 0.10 y 0.20 g /L y como estándar interno se utilizó terbutanol. Se realizaron ocho curvas de calibración en duplicado para cada valor de la curva, en las cuales el n-propanol resultó ser lineal y reproducible entre los resultados inter e intradía (con una desviación estándar de 0.1034 y un coeficiente de variación de 1.85 % entre sus pendientes). En una segunda parte se midieron muestras reales de sangre y cerebro de origen tanatológico, con indicios de descomposición, de forma de relacionar la presencia de n-propanol con la producción de etanol postmortem en forma endógena

This thesis mainly deals with the stages of model description and evaluation of Indoor Positioning Systems based on fingerprinting. Its first contribution is a meta-review that addresses the current state of the art and provides a critical assessment of the impact of publications on indoor positioning. The second contribution is two open datasets of WiFi and BLE RSS measurements that encourage experimentation and reproducibility of positioning solutions. The third is a set of guides, tools, and methods to improve the collection of WiFi and BLE samples. The fourth contribution is a method of selecting positions to update the characterization of the environment. The fifth contribution is evaluation guides and a procedure to measure the positioning error where the magnitude of the error is the distance of the route that joins the actual position and the estimated position.
Esta tesis trata principalmente las etapas de descripción del modelo y evaluación de Sistemas de Posicionamiento en Interiores basados en fingerprinting. Su primera aportación es un meta-review que revisa el estado actual del arte, y brinda una evaluación crítica sobre el impacto de las publicaciones sobre posicionamiento en interiores. La segunda aportación es dos datasets abiertos de mediciones de RSS de WiFi y BLE que fomentan la experimentación y la reproducibilidad de soluciones de posicionamiento. La tercera es un conjunto de guías, herramientas y métodos para mejorar la recolección de muestras de WiFi y BLE. La cuarta aportación es un método de selección de posiciones para actualizar la caracterización del entorno. La quinta aportación son guías de evaluación y un procedimiento para medir el error de posicionamiento donde la magnitud del error es la distancia de la ruta que une la posición real y la posición estimada.

El déficit de alfa-1-antitripsina (DAAT) es una enfermedad genética que se caracteriza por la presencia de niveles bajos de la proteína alfa-1-antitripsina (AAT) en suero y causa principalmente desarrollo temprano de enfisema pulmonar y hepatopatía. Se han descrito alrededor de 125 variantes alélicas del gen de la AAT. El alelo normal más común en la población es el M, y las variantes deficitarias más frecuentes son la S y la Z, siendo esta última causante de un déficit severo. Sin embargo, otra variante deficitaria rara, llamada Mmalton, causante de un déficit similar al alelo Z, es considerada la segunda causa de DAAT en España. Esta variante es difícil de caracterizar mediante las técnicas de diagnóstico habituales (cuantificación de AAT en suero y fenotipado). Este hecho, ha contribuido a la clasificación errónea de esta variante y con ello, a la subestimación de su prevalencia real en la población. Por ello, en esta tesis se diseñó una técnica de genotipado alelo-específico para la detección de la variante Mmalton y se testó su aplicabilidad utilizando muestras de sangre total, DBS (gota de sangre seca) y de suero. Los resultados mostraron la utilidad de esta técnica para la caracterización rápida y coste-efectiva de una variante deficitaria de difícil detección. Así mismo, este método puede ser adaptado para la detección de las variantes raras más prevalentes de cada región. Cuando se ha de realizar el genotipado, es necesario ADN procedente de sangre total o DBS. En ocasiones estas muestras no están disponibles en el laboratorio, por lo que se debe realizar una nueva extracción, generando un retraso en el diagnóstico del DAAT. Para evitar esto, se desarrollaron protocolos de genotipado alelo-específico y secuenciación exónica del gen de la AAT utilizando muestra de suero (muestra utilizada en los primeros pasos del diagnóstico). Estas técnicas fueron incorporadas al algoritmo de diagnóstico del laboratorio, permitiendo realizar un diagnóstico completo utilizando un solo tipo de muestra y por tanto, evitando el retraso generado cuando el genotipado era necesario. Por otro lado, con el fin de incrementar los programas de cribado para la identificación de individuos con DAAT, se presentó la muestra de frotis bucal como una alternativa al DBS. Esta muestra es fácil de obtener, almacenar y enviar y permite disponer de gran cantidad de ADN para la realización del genotipado. Los resultados mostraron que las metodologías descritas ayudan a promover la expansión de los programas de detección del DAAT y mejorar la rapidez de su diagnóstico. El algoritmo propuesto en el presente trabajo, permite realizar un diagnóstico completo del DAAT evitando dos problemas principales del diagnóstico de esta enfermedad, como son el significativo retraso producido una vez el clínico realiza la petición de diagnóstico y el infradiagnóstico de las variantes raras de la AAT.
Alpha-1-antitrypsin deficiency (AATD) is a genetic disorder characterized by low serum levels of alpha-1-antitrypsin protein (AAT) and a high risk of developing early onset emphysema and liver disease. About 125 allelic variants of the AAT gene have been described. The most common normal AAT allele is the M variant, and the most frequent deficient variants are Z and S. However, another rare deficient variant, called Mmalton, which causes a deficiency similar to variant Z, is considered to be the second cause of severe AATD in Spain. This variant is difficult to detect with the common diagnostic techniques (serum AAT measurement and phenotype characterization). This fact has contributed to a misclassification of this variant and the subsequent underestimation of its real prevalence in the population. Thus, we designed an allele-specific genotyping technique for the detection of the Mmalton variant and we tested its applicability using whole blood, DBS (dried blood spot) and serum samples. Results showed the utility of this technique for the rapid and cost-effective characterization of a deficiency variant with a difficult detection. Moreover, this method could be adapted for the study of the most prevalent rare variants in each region. When genotyping is required, DNA from whole blood or DBS sample is necessary. Occasionally these kinds of samples are not available in the laboratory and additional new extraction is required, causing a significant delay in AATD diagnosis. To avoid this, we developed allele-specific genotyping and exonic sequencing of AAT gene protocols using DNA present in serum samples (sample used at the first steps of the diagnosis). These techniques were incorporated to the laboratory diagnostic algorithm, allowing the complete diagnosis using an only kind of sample and thus, avoiding the delay generated when genotyping is necessary. With the purpose of promoting the expansion of screening programs for the identification of AATD individuals, buccal swab samples were assessed as an alternative to DBS samples. This kind of sample is easy to collect, store and deliver and it recovers a large amount of DNA, resulting in an easy genotyping. Results showed these methodologies may be useful to expand AATD screening programs and complete the diagnostic without delay. The algorithm proposed in this study allows a complete AATD diagnosis avoiding two main problems: significant delay when the doctor performs the diagnostic request and the underdiagnosis of the rare AAT variants.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor
Compara los métodos de ELISA e IFI para la detección de la Enfermedad de Chagas en muestras seropositivas del Banco de Sangre del Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen en el 2010. Se realizó un estudio descriptivo retrospectivo en 22,589 donantes de Banco de Sangre del Hospital Guillermo Almenara Irigoyen durante el año 2010, para lo cual se realizó el test de ELISA (Chagas biokit). La muestra de estudio estuvo constituida por el total de donantes reactivos e indeterminados para el ELISA (N=183), a los cuales se les realizó un segundo ensayo, y para los casos no concordantes entre el 1er y 2do ELISA se le realizó un tercer ensayo y posteriormente se les realizó inmunofluoresecencia indirecta (IFI) para Chagas. Se recolectaron datos sociodemográficos de los donantes como edad, sexo y procedencia. Los datos fueron registrados en una base de datos y analizados con el programa excel para Macintosch. Se analizaron 183 casos, 134 eran de sexo masculino (73.2%). La proporción de donantes reactivos confirmados para enfermedad de Chagas fue de 2.2 por 10,000 en el Hospital Guillermo Almenara en el año 2010.La edad promedio de los donantes reactivos fue de 35.7 años. El antecedente de donación previa estuvo presente sólo en el 2.2%. La mayoría de los donantes era procedente de la provincia de Lima (157; 85.5%). El 87.4% (160) de los sueros fueron reactivos en el 1er ELISA, 54.6% (100) en el 2do ELISA, 57.4% en el resultado final ELISA y sólo el 2.7% en IFI y el goldstandard. La tasa de concordancia entre el ELISA e IFI fue del 31.1% (57). Todos los casos confirmados con la prueba goldstandard fueron del sexo masculino, y la edad promedio fue de 27.2 años. Sólo el 5% de los sueros reactivos para Chagas con la prueba de ELISA fueron realmente reactivos cuando se utilizó el goldstandard. La prueba de ELISA permite realizar un screening masivo con alta sensibilidad pero baja especificidad, en donantes de Banco de Sangre, y sus resultados deben ser confirmados por IFI y el gold standard (ELISA + IFI) pues sólo el 5% de los sueros reactivos con ELISA, serán realmente reactivos con el gold standard.
Trabajo académico

En el presente trabajo de investigación se realizó la determinación de los niveles de plomo en sangre de una población de 40 adolescentes de 12 a 17 años de edad, quienes cursan educación secundaria en el colegio “Toribio Rodríguez de Mendoza” ubicado en la Urb. La Primavera del Distrito de El Agustino que por la cercanía geográfica a una empresa metalúrgica motivó la realización del presente estudio. Asimismo se cuantificó la hemoglobina para determinar su correlación con la exposición a dicho metal. La cuantificación del plomo se realizó por Espectrofotometría de Absorción Atómica con Horno de Grafito, y el dosaje de Hemoglobina se realizó por el método de la Cianometahemoglobina, encontrándose los siguientes resultados: una media de 2,89 ug de plomo/dL de sangre, este nivel es considerado como normal según la OMS (para adolescentes mayores de 12 años hasta 40ug/dL) y una media de 12,73 g/dL para la concentración de hemoglobina. -- Palabras Clave: Niveles de Plomo en Sangre, Espectrofotometría de Absorción Atómica, Determinación de Hemoglobina, Método de Cianometahemoglobina.
-- In the present study was realized the determination of the levels of lead in blood of a population of 40 teenagers from 12 to 17 years of age, who deal secondary education in the college " Toribio Rodríguez of Mendoza " of the Urb. La Primavera of the District of El Agustino, being this geographical nearness motivate of accomplishment of the study, for being a pollution source of lead. Likewise the hemoglobin was quantified to determine his correlation with the exhibition to the above mentioned metal. The quantification of lead was realized by means of the Atomic Absorption Espectrophotometry with Graphite Furnace, and the Hemoglobin dosage was realized for Cianometahemoglobin Method. The fol owing results were found: average of 2,89 ug of lead/dL of blood, this level is mentioned like normal y according to the WHO (for teenagers 12-year-old major until to 40ug/dL) and a average of 12,73 g/dL for the hemoglobin concentration -- Key Words: Blood Lead Levels, Atomic Absorption Spectrophotometry with Graphite Furnace, Determination of Hemoglobin, Cianometahemoglobin Method.
Tesis

Fundamentos y propósito: Los primeros estudios de hemodinámica cerebral en pacientes con hemorragia subaracnoidea aguda (HSA) demostraron que el consumo metabólico cerebral (CMRO2) estaba más reducido que el flujo sanguíneo cerebral (FSC), indicando un desacoplamiento entre flujo y metabolismo. Además de los efectos de la HSA, la cirugía de los aneurismas intracraneales puede causar por si misma diferentes lesiones isquémicas cerebrales, principalmente por: vasoespasmo, rotura del aneurisma, retracción cerebral, lesión quirúrgica vascular, clipaje, hipocapnia severa e hipotensión. La cateterización unilateral del bulbo de la vena yugular interna es un método aceptado para obtener índices de acoplamiento entre el FSC y el CMRO2, principalmente a través de las diferencias arterioyugulares de oxígeno (AVDO2), de la extracción cerebral de oxígeno (CEO2) y la saturación yugular de oxígeno (SjO2). Esto significa que la oxigenación cerebral global puede ser evaluada de esta forma. El objetivo principal de este estudio fue monitorizar el metabolismo cerebral en las distintas fases de la cirugía para clipaje de aneurismas intracraneales, mediante un catéter de fibra óptica colocado a nivel del bulbo de la yugular interna, para determinar la incidencia, y intentar identificar las causas, de los episodios isquémicos / hiperémicos, y su relación con la aparición de nuevas áreas hipodensas en las tomografías computerizadas (TC) postoperatorias, para valorar la utilidad de esta monitorización en este contexto. Los datos, en términos de hiperemia / normalidad / isquemia, obtenidos en los diferentes índices utilizados en este estudio, fueron comparados para evaluar el grado de correlación entre ellos.
Método: A 42 pacientes, sometidos a cirugía para clipaje de aneurismas intracraneales, anestesiados de la misma forma, se les monitorizó la SjO2 de forma continua con un catéter de fibra óptica en el bulbo de la yugular de forma unilateral. Se obtuvieron muestras de sangre yugular y arterial (574 muestras, en total) antes de la craneotomía, inmediatamente antes del clipaje, cada 5 minutos durante el clipaje transitorio -si fue necesario- y durante el periodo de postclipaje intraoperatorio -a los 5 minutos y cada 15 minutos hasta el final de la cirugía-, para la determinación in vitro de: SjO2, AVDO2, índice lactato oxígeno (LOI), diferencias arterioyugulares de lactato (AVDL), diferencias arterioyugulares de presión parcial de dióxido de carbono (AVDPCO2), presión parcial de oxígeno en el bulbo de la yugular interna (PjO2) y CEO2. Para comparar los resultados, se apuntaron los valores de la SjO2 determinada por fibra óptica en el momento de extraer las muestras de sangre para las determinaciones in vitro de la SjO2. Las áreas nuevas de hipodensidad aparecidas en las TC postoperatorias fueron medidas con la fórmula ABC/2 descrita por Kothari et al., donde A es el diámetro mayor del área hipodensa, B es el diámetro perpendicular a A, y C es el número aproximado de cortes con hipodensidad multiplicado por el grosor del corte.
Resultados y conclusiones: Los valores en rango isquémico para las variables evaluadas en este estudio fueron muy raros, manteniendo la paCO2 del paciente entre 32-35 mmHg y su presión arterial media ≥ 80 mmHg. Se estableció una correlación entre los distintos parámetros monitorizados en este estudio, excepto para las AVDL y LOI; aunque no siempre coincidieron en la determinación del mismo estado patológico. Los episodios de hiperemia fueron comunes durante las fases de clipaje transitorio y de postclipaje teniendo un significado fisiopatológico heterogéneo. No fue posible establecer una relación entre un mayor número de episodios isquémicos y / o hiperémicos y la aparición de nuevas áreas hipodensas en las TC postoperatorias.
Background and object: The earliest studies of cerebral hemodynamics in patients with acute SAH demonstrated that cerebral metabolic rate of oxygen (CMRO2) was more reduced than cerebral blood flow (CBF), indicating an uncoupling between flow and metabolism. Moreover, not only SAH but intracranial aneurysm surgery itself may cause different ischemic brain injury, mainly due to: vasospasm, aneurysm rupture, cerebral retraction, vascular surgical injury, clipping, severe hypocapnia and hypotension. Unilateral jugular bulb catheterization is a well-accepted method to obtain indexes of the coupling of CBF to CMRO2, mainly through arterial-jugular venous oxygen difference (AVDO2), cerebral oxygen extraction (CEO2) and jugular venous oxygen saturation (SjO2). This means that global cerebral oxygenation can be evaluated in this way. The main objective of this study was to monitor cerebral metabolism in different phases of microsurgical clipping of intracranial aneurysm, by means of fiberoptic internal jugular bulb catheter, to determine the incidence, and to try to identify the causes, of ischemic / hyperemic episodes, and their relationship with new low-density areas in postoperative computed tomography (CT) scan, to assess the usefulness of that monitoring in this setting. Data, in terms of hyperemia / normality / ischemia, from different indexes used in this study, were compared to evaluate the degree of correlation between them.
Methods: 42 patients, who undergo intracerebral aneurysm clipping, were anesthetized in the same way and SjO2 was continuously monitored with a unilateral jugular bulb fiberoptic catheter. Arterial and jugular venous blood samples (totally 574 samples) were obtained before craniotomy, immediately before clipping, every 5 minutes during temporary cerebral artery occlusion -if necessary- and during de post-clipping intraoperative period -after 5 minutes and then after every 15 minutes until the end of the surgery-, for in vitro determination of: SjO2, AVDO2, lactate oxygen index (LOI), arteriovenous lactate difference (AVDL), Cerebral arteriovenous PCO2 difference (AVDPCO2), internal jugular oxygen tension (PjO2) and CEO2. The results of in vitro determinations of SjO2 were paired with the values of fiberoptic SjO2 at the time of sampling. The new low-density areas in postoperative computed tomography (CT) scan were measured with the formula ABC/2 described by Kothari et al., where A is the greatest hipodense area diameter, B is the diameter 90º to A, and C is the approximate number of CT slices with hipodensity multiplied by the slice thickness.
Results and Conclusions: Ischemic values for the indexes used in this study were very uncommon since paCO2 was kept between 32-35 mmHg and mean arterial pressure ≥ 80 mmHg. It was found correlation between all the monitored parameters in this study, except for AVDL or LOI; although values from different indexes not always determined the same pathological state. Hyperemia is common during temporary cerebral artery occlusion and post-clipping phases and had a heterogeneous pathophysiological significance. It was not possible to establish a relationship between a greater number of ischemic or / and hyperemic episodes and new hypodense areas in postoperative CT scans.